JPS6236677B2 - - Google Patents
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- JPS6236677B2 JPS6236677B2 JP9439580A JP9439580A JPS6236677B2 JP S6236677 B2 JPS6236677 B2 JP S6236677B2 JP 9439580 A JP9439580 A JP 9439580A JP 9439580 A JP9439580 A JP 9439580A JP S6236677 B2 JPS6236677 B2 JP S6236677B2
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
この発明は発酵法によるＬ−グルタミン酸の製
造法に関する。 Ｌ−グルタミン酸は、ブレビバクテリウム属、
又はコリネバクテリウム属に属する微生物を使用
して発酵法により製造されている。 本発明者らは、従来知られているコリネバクテ
リウム属のＬ−グルタミン酸生産菌に酢酸要求性
を付与した変異株を誘導したところ、特に炭素源
として脂肪族アルコール又は脂肪酸と糖質とを併
用する場合において、この変異株が従来知られて
いるＬ−グルタミン酸生産菌より、高い収率でＬ
−グルタミン酸を生成蓄積することを知った。 本発明に使用する変異株はコリネバクテリウム
属に属し、酢酸要求性を有する変異株であり、例
えば、以下の菌株が挙げられる。 コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム AJ 11601（FERM−Ｐ 5626）（酢酸要求性
株） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム AJ 11602（FERM−Ｐ 5627）（酢酸要求性
株、イソクエン酸リアーゼ欠失株） コリネバクテリウム・グルタミクム AJ 11603（FERM−Ｐ 5628）（酢酸要求性
株） AJ 11601及びAJ 11602は、ATCC 13870を、
AJ 11603は、ATCC 13032をそれぞれ親株とし
て誘導された。他に親株としては、コリネバクテ
リウム・アセトグルタミカムATCC 15806等のＬ
−グルタミン酸生産菌も親株として使用すること
ができる。 上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照
射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通常の方法
が用いられ、例えば200μｇ／mlのＮ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで０℃で
20分間処理する方法等がある。 上記例示の菌株の酢酸添加濃度に対する生育度
を次の第１表に示す。各菌株の生育度は、次のよ
うにして検定した。 グルコース0.5ｇ／dl、尿素0.15ｇ／dl、硫安
0.15ｇ／dl、KH2PO10.3ｇ／dl、K2HPO10.1ｇ／
dl、MgSO4・7H2O0.01ｇ／dl、ＣａＣｌ・2H2O0.1
mg/dl、サイアミン塩酸塩10μｇ／dl、ビオチン
３μｇ／dl、Na2B4O7・10H2O0.44mg／dl、
FeCl2・6H2O4.85mg／dl、CuSO4・５ＨＯ1.95mg／
dl、（NH4)6Mo7O24・4H2O0.185mg／dl、
ZnSO4・7H2O44mg／dl、MnCl2・4H2O0.36mg／
dlおよび表に示す量の酢酸を含み、pH7.0に調節
した培地に、天然培地（ペプトン１ｇ／dl、酵母
エキス１ｇ／dl、NaCl0.5ｇ／dl、pH7.0）スラン
ト24時間培養した菌を無菌水で懸濁して接種
し、24時間培養して生育値を濁度で測定した。
造法に関する。 Ｌ−グルタミン酸は、ブレビバクテリウム属、
又はコリネバクテリウム属に属する微生物を使用
して発酵法により製造されている。 本発明者らは、従来知られているコリネバクテ
リウム属のＬ−グルタミン酸生産菌に酢酸要求性
を付与した変異株を誘導したところ、特に炭素源
として脂肪族アルコール又は脂肪酸と糖質とを併
用する場合において、この変異株が従来知られて
いるＬ−グルタミン酸生産菌より、高い収率でＬ
−グルタミン酸を生成蓄積することを知った。 本発明に使用する変異株はコリネバクテリウム
属に属し、酢酸要求性を有する変異株であり、例
えば、以下の菌株が挙げられる。 コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム AJ 11601（FERM−Ｐ 5626）（酢酸要求性
株） コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム AJ 11602（FERM−Ｐ 5627）（酢酸要求性
株、イソクエン酸リアーゼ欠失株） コリネバクテリウム・グルタミクム AJ 11603（FERM−Ｐ 5628）（酢酸要求性
株） AJ 11601及びAJ 11602は、ATCC 13870を、
AJ 11603は、ATCC 13032をそれぞれ親株とし
て誘導された。他に親株としては、コリネバクテ
リウム・アセトグルタミカムATCC 15806等のＬ
−グルタミン酸生産菌も親株として使用すること
ができる。 上記変異株の変異誘導方法としては、紫外線照
射、放射線照射、変異誘起剤処理等の通常の方法
が用いられ、例えば200μｇ／mlのＮ−メチル−
Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで０℃で
20分間処理する方法等がある。 上記例示の菌株の酢酸添加濃度に対する生育度
を次の第１表に示す。各菌株の生育度は、次のよ
うにして検定した。 グルコース0.5ｇ／dl、尿素0.15ｇ／dl、硫安
0.15ｇ／dl、KH2PO10.3ｇ／dl、K2HPO10.1ｇ／
dl、MgSO4・7H2O0.01ｇ／dl、ＣａＣｌ・2H2O0.1
mg/dl、サイアミン塩酸塩10μｇ／dl、ビオチン
３μｇ／dl、Na2B4O7・10H2O0.44mg／dl、
FeCl2・6H2O4.85mg／dl、CuSO4・５ＨＯ1.95mg／
dl、（NH4)6Mo7O24・4H2O0.185mg／dl、
ZnSO4・7H2O44mg／dl、MnCl2・4H2O0.36mg／
dlおよび表に示す量の酢酸を含み、pH7.0に調節
した培地に、天然培地（ペプトン１ｇ／dl、酵母
エキス１ｇ／dl、NaCl0.5ｇ／dl、pH7.0）スラン
ト24時間培養した菌を無菌水で懸濁して接種
し、24時間培養して生育値を濁度で測定した。
【表】
又、上記例示のイソクエン酸リアーゼ（以下
ICLと略記する）低下株のICL活性を第２表に示
す。 ＩＣＬ活性は次の様にして検定した。
ICLと略記する）低下株のICL活性を第２表に示
す。 ＩＣＬ活性は次の様にして検定した。
【表】
【表】
グルコーズ2.5ｇ／dl、酢酸アンモニウム0.8
ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1
ｇ／dl、FeSO4・7H2O0.1ｇ／dl、FeSO4・
7H2O1mg／dl、MnSO4・4H2O1mg／dl、尿素0.4
ｇ／dl、ビオチン0.3μｇ／dl、サイアミン・塩
酸塩20μｇ／dl、および大豆分解濃縮液（Ｔ−Ｎ
として）48mg/dl（pH7.0）を含有する培地を調
整し、その20mlずつを500ml容振盪フラスコに入
れ、115℃で10分間加熱殺菌した。この培地に試
験菌株を接種し、往復振盪培養機により、31.5℃
で、対数増殖初期（10〜16時間）まで培養した。
培養液より菌体を分離し、洗浄後超音波破砕し、
「セフアデラクスＧ−10」で処理したものを酸素
標品として用いた。 酵素活性の測定は、椎尾らの方法に準じて行つ
た。 （ジャーナル・オブ・バイオケミストリー49巻
262頁1961年） これらの変異株を培養する培地は、酢酸要求性
を満足せしめるべき物質を含有するほかは、炭素
源、窒素源、無機イオン、更に必要に応じ有機微
量栄養素を含有する通常の培地である。 酢酸要求性を満足せしめるべき栄養素としては
酢酸、プロピオン酸等の低級脂肪酸、パルミチン
酸、ステアリン酸等の高級脂肪酸、エタノール、
プロパノール等の脂肪族アルコールがある。 炭素源として、糖質のほかに上記酢酸要求性を
満足せしめるべき物質も使用できる。特に糖質と
上記酸素要求性を満足せしめるべき物質が炭素源
として併用された場合により好ましい結果が得ら
れる。併用する場合の糖質と酢酸要求性を満足せ
しめるべき物質の使用量は、炭素源の種類によつ
て異なるが、通常重量にて前者が３〜２に対し、
後者が２〜１の割合が望ましい。糖質としては、
グルコース、フラクトース、ジユクロース等の単
糖又はオリゴ糖およびこれらを含有する澱粉、セ
ルロース等の加水分解物、果汁、甘蔗廃糖蜜、甜
菜廃糖蜜、大豆ホエイ等が使用できる。 窒素源としては例えば通常のＬ−グルタミン酸
発酵に用いられるアンモニウム塩、アンモニア水
アンモニアガス、尿素等が用いられ、その他必要
に応じて、りん酸塩、マグネシウム塩等の無機イ
オンが適宜培地に添加される。また必要に応じて
サイアミン、ビオチン等の微量栄養素が適宜使用
される。さらに、ビチオンが過剰に存在する培地
には、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テート、ペニシリン等のビチオン作用抑制物質が
常法により培地に添加される。培養は好気的条件
下で行うのがよく、培養温度は24〜37℃、培養中
pHは６〜９に制御するのがよく、pHの調整には無
機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物質、
さらには尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス
等を使用することができる。発酵液からのＬ−グ
ルタミン酸の採取はイオン交換樹脂法、その他の
公知の方法を適宜組合せることにより行われる。 実施例 １ グルコース2.3ｇ／dl、酢酸アンモニウム１
ｇ／dl、酢酸ナトリウム１ｇ／dl、KH2PO40.1
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、サイアミン・
塩酸塩20μｇ／dl、尿素0.6ｇ／dl、FeSO41mg／
dl、MnSO4・4H2O1mg／dl、大豆分解濃縮液
（Ｔ−Ｎとして）36mg／dlおよびビオチン２μ
ｇ／ｌ（pH7.0）を含有する培地を調製し、その
20mlずつを500ml容振盪フラスコに入れ115℃で10
分加熱殺菌した。この培地にそれぞれ下記の表の
菌を接種し往復振盪培養液により31.5℃で培養を
行つた。 なお、培養中は培養液をpH6.5〜8.0に保つた
め、45ｇ／dl尿素又は2NH2SO4を用いて調整し
た。 36時間で培養を終了し、培養液中に蓄積したＬ
−グルタミン酸の対基質収率を求めた。その結果
を、次の第３表に示す。
ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1
ｇ／dl、FeSO4・7H2O0.1ｇ／dl、FeSO4・
7H2O1mg／dl、MnSO4・4H2O1mg／dl、尿素0.4
ｇ／dl、ビオチン0.3μｇ／dl、サイアミン・塩
酸塩20μｇ／dl、および大豆分解濃縮液（Ｔ−Ｎ
として）48mg/dl（pH7.0）を含有する培地を調
整し、その20mlずつを500ml容振盪フラスコに入
れ、115℃で10分間加熱殺菌した。この培地に試
験菌株を接種し、往復振盪培養機により、31.5℃
で、対数増殖初期（10〜16時間）まで培養した。
培養液より菌体を分離し、洗浄後超音波破砕し、
「セフアデラクスＧ−10」で処理したものを酸素
標品として用いた。 酵素活性の測定は、椎尾らの方法に準じて行つ
た。 （ジャーナル・オブ・バイオケミストリー49巻
262頁1961年） これらの変異株を培養する培地は、酢酸要求性
を満足せしめるべき物質を含有するほかは、炭素
源、窒素源、無機イオン、更に必要に応じ有機微
量栄養素を含有する通常の培地である。 酢酸要求性を満足せしめるべき栄養素としては
酢酸、プロピオン酸等の低級脂肪酸、パルミチン
酸、ステアリン酸等の高級脂肪酸、エタノール、
プロパノール等の脂肪族アルコールがある。 炭素源として、糖質のほかに上記酢酸要求性を
満足せしめるべき物質も使用できる。特に糖質と
上記酸素要求性を満足せしめるべき物質が炭素源
として併用された場合により好ましい結果が得ら
れる。併用する場合の糖質と酢酸要求性を満足せ
しめるべき物質の使用量は、炭素源の種類によつ
て異なるが、通常重量にて前者が３〜２に対し、
後者が２〜１の割合が望ましい。糖質としては、
グルコース、フラクトース、ジユクロース等の単
糖又はオリゴ糖およびこれらを含有する澱粉、セ
ルロース等の加水分解物、果汁、甘蔗廃糖蜜、甜
菜廃糖蜜、大豆ホエイ等が使用できる。 窒素源としては例えば通常のＬ−グルタミン酸
発酵に用いられるアンモニウム塩、アンモニア水
アンモニアガス、尿素等が用いられ、その他必要
に応じて、りん酸塩、マグネシウム塩等の無機イ
オンが適宜培地に添加される。また必要に応じて
サイアミン、ビオチン等の微量栄養素が適宜使用
される。さらに、ビチオンが過剰に存在する培地
には、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミ
テート、ペニシリン等のビチオン作用抑制物質が
常法により培地に添加される。培養は好気的条件
下で行うのがよく、培養温度は24〜37℃、培養中
pHは６〜９に制御するのがよく、pHの調整には無
機あるいは有機の酸性あるいはアルカリ性物質、
さらには尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス
等を使用することができる。発酵液からのＬ−グ
ルタミン酸の採取はイオン交換樹脂法、その他の
公知の方法を適宜組合せることにより行われる。 実施例 １ グルコース2.3ｇ／dl、酢酸アンモニウム１
ｇ／dl、酢酸ナトリウム１ｇ／dl、KH2PO40.1
ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、サイアミン・
塩酸塩20μｇ／dl、尿素0.6ｇ／dl、FeSO41mg／
dl、MnSO4・4H2O1mg／dl、大豆分解濃縮液
（Ｔ−Ｎとして）36mg／dlおよびビオチン２μ
ｇ／ｌ（pH7.0）を含有する培地を調製し、その
20mlずつを500ml容振盪フラスコに入れ115℃で10
分加熱殺菌した。この培地にそれぞれ下記の表の
菌を接種し往復振盪培養液により31.5℃で培養を
行つた。 なお、培養中は培養液をpH6.5〜8.0に保つた
め、45ｇ／dl尿素又は2NH2SO4を用いて調整し
た。 36時間で培養を終了し、培養液中に蓄積したＬ
−グルタミン酸の対基質収率を求めた。その結果
を、次の第３表に示す。
【表】
【表】
実施例 ２
コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム
ATCC13870およびＡＪ11602を用いてＬ−グルタ
ミン酸発酵を行つた。甘蔗廃糖蜜（全糖として）
5.6ｇ／dl、酢酸1.4ｇ／dl、KH2PO40.2ｇ／dl、
MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、硫酸アンモニウム0.05
ｇ／dl、MnSO4・4H2O1mg／dl、FeSO4・7H2O1
mg／dl、ビオチン３μｇ／、大豆加水分解濃縮
液（全窒素として）36mg／dl、およびサイアミン
塩酸塩200μｇ／を含有する培地300mlを、1.5
ｌ容ジャーフアーメンターに張込み120℃で15分
間滅菌した。 この培地に前培養した菌を接種し、31.5℃でpH
を7.8に保ちつつ振盪培養した。 培養開始後、培養液の26培希釈液の562nｍに
おける吸光度が、0.3に到達した時にポリオキシ
エチレンソルビタンモノパルミテイトを添加し
た。 又、培養液中の残存酢酸が0.1ｇ／dl以下にな
つた時点で、あらかじめ調整したフイード液（甘
蔗廃糖蜜、17ｇ／dl、酢酸アンモニウム（酢酸分
として15ｇ／dl、酢酸15ｇ／dl、酢酸ナトリウ
ム（酢酸分として）13ｇ／dlを含む）を残存酢酸
濃度が常に0.1〜0.5ｇ／dlの範囲にとどまるよう
に、フイード液を連続的に補結した。 以上の結果培養48時間後第４表に示す量のＬ−
グルタミン酸が培養液中に生成蓄積した。
ATCC13870およびＡＪ11602を用いてＬ−グルタ
ミン酸発酵を行つた。甘蔗廃糖蜜（全糖として）
5.6ｇ／dl、酢酸1.4ｇ／dl、KH2PO40.2ｇ／dl、
MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、硫酸アンモニウム0.05
ｇ／dl、MnSO4・4H2O1mg／dl、FeSO4・7H2O1
mg／dl、ビオチン３μｇ／、大豆加水分解濃縮
液（全窒素として）36mg／dl、およびサイアミン
塩酸塩200μｇ／を含有する培地300mlを、1.5
ｌ容ジャーフアーメンターに張込み120℃で15分
間滅菌した。 この培地に前培養した菌を接種し、31.5℃でpH
を7.8に保ちつつ振盪培養した。 培養開始後、培養液の26培希釈液の562nｍに
おける吸光度が、0.3に到達した時にポリオキシ
エチレンソルビタンモノパルミテイトを添加し
た。 又、培養液中の残存酢酸が0.1ｇ／dl以下にな
つた時点で、あらかじめ調整したフイード液（甘
蔗廃糖蜜、17ｇ／dl、酢酸アンモニウム（酢酸分
として15ｇ／dl、酢酸15ｇ／dl、酢酸ナトリウ
ム（酢酸分として）13ｇ／dlを含む）を残存酢酸
濃度が常に0.1〜0.5ｇ／dlの範囲にとどまるよう
に、フイード液を連続的に補結した。 以上の結果培養48時間後第４表に示す量のＬ−
グルタミン酸が培養液中に生成蓄積した。
【表】
実施例 ３
グルコース１ｇ／dl、エタノール0.5ｇ／dl、
KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、
MnSO4・4H2O1mg／dl、FeSO4・7H2O1mg／dl、
ビオチン３μｇ／、硫酸アンモニウム1.0ｇ／
dl、大豆加水分解濃縮液（全窒素として）96mg／
dl、サイアミン・塩酸塩200μｇ／を含有する
培地を調製し、その30mlを、500ml容振盪フラス
コに分注し、115℃で10分間加熱殺菌した。 コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム
ATCC13870又はＡＪ11602を、接種し、往復振盪
培養機により31.5℃で培養を行つた。 初発培地中のエタノールが、消費された時点か
らフイード液（グルコース30ｇ／dl、エタノール
15ｇ／dl、硫安15ｇ／dlを含有する）の14ｇ／dl
量を２回添加し、36時間で培養を終了した。 第５表に、発酵液中に蓄積したＬ−グルタミン
酸の使用炭素源に対する収率を示す。
KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.1ｇ／dl、
MnSO4・4H2O1mg／dl、FeSO4・7H2O1mg／dl、
ビオチン３μｇ／、硫酸アンモニウム1.0ｇ／
dl、大豆加水分解濃縮液（全窒素として）96mg／
dl、サイアミン・塩酸塩200μｇ／を含有する
培地を調製し、その30mlを、500ml容振盪フラス
コに分注し、115℃で10分間加熱殺菌した。 コリネバクテリウム・アセトアシドフイラム
ATCC13870又はＡＪ11602を、接種し、往復振盪
培養機により31.5℃で培養を行つた。 初発培地中のエタノールが、消費された時点か
らフイード液（グルコース30ｇ／dl、エタノール
15ｇ／dl、硫安15ｇ／dlを含有する）の14ｇ／dl
量を２回添加し、36時間で培養を終了した。 第５表に、発酵液中に蓄積したＬ−グルタミン
酸の使用炭素源に対する収率を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ コリネバクテリウム属に属し、酢酸要求性を
有し、かつＬ−グルタミン酸生産能を有する微生
物を液体培地中に好気的に培養し、培地中に生成
蓄積されたＬ−グルタミン酸を採取することを特
徴とする発酵法によるＬ−グルタミン酸の製造
法。 ２ 液体培地が炭素源として脂肪族アルコール又
は脂肪酸および糖質を含有するものである特許請
求の範囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9439580A JPS5718990A (en) | 1980-07-10 | 1980-07-10 | Production of l-glutamic acid through fermentation |
| US06/218,071 US4368266A (en) | 1979-12-27 | 1980-12-19 | Method for producing L-glutamic acid by fermentation |
| FR8027549A FR2472610A1 (fr) | 1979-12-27 | 1980-12-24 | Mutants et procede pour produire de l'acide l-glutamique par fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9439580A JPS5718990A (en) | 1980-07-10 | 1980-07-10 | Production of l-glutamic acid through fermentation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5718990A JPS5718990A (en) | 1982-01-30 |
| JPS6236677B2 true JPS6236677B2 (ja) | 1987-08-07 |
Family
ID=14109074
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9439580A Granted JPS5718990A (en) | 1979-12-27 | 1980-07-10 | Production of l-glutamic acid through fermentation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5718990A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61159282A (ja) * | 1984-12-29 | 1986-07-18 | Matsumoto Kikai Kk | 溶接装置 |
| WO2009093703A1 (ja) | 2008-01-23 | 2009-07-30 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ-アミノ酸の製造法 |
-
1980
- 1980-07-10 JP JP9439580A patent/JPS5718990A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5718990A (en) | 1982-01-30 |
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