JPS61162191A - 微生物による有機酸類の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 日の背景 韮用 本発明は、ニトリラーゼ活性を有する微生物（微生物の
菌体破砕物、抽出液、粗酵素液等も含むものとする。以
下同様）の作用によりニトリル化合物を水和、加水分解
して対応する有機酸に転化させる方法に関する。さらに
具体的には、本発明は、使用する微生物に光を照射する
ことによって収率、空時収率および菌体生産性（単位菌
体当り可能な有機酸生産量のことをいう）よく有機酸を
製造する方法に関する。

近年、微生物またはそれから得られた酵素を用いて種々
の化学反応を実施する技術が開発されつつある。一般に
、微生物ないし酵素による反応は、常温常圧下に実施で
きるのでエネルギー消費が少なく、しかも目的生成物へ
の選択性が極度に高いので高純度の製品が得られ易いと
いう特徴がある。

しかしその反面、この反応は、反応活性および微生物な
いし酵素の触媒としての寿命の点で改善すべき余地があ
る。特に、目的とする反応の速度すなわち反応活性が常
法通り反応条件、特に温度および（または）　ＰＨの至
適化を行なったとしても低位の場合は、空時収率が低い
ので反応器の容量を増大しなければならないばかりでな
く、反応速度が遅いため”反応時間が長くなるところか
ら、これがさらに反応活性の低下につながって、笛体生
産性が悪化する。

従って、微生物あるいは酵素の反応活性を高位に発現さ
せることは、基本的に重要なことであり、工業生産にお
ける経済性を左右するものである。

友且ｌ土 ニトリル化合物を水和、加水分解して対応する有機酸に
転化させる酵素活性、すなわちニトリラーゼおよびアミ
ダーゼ活性、を有する微生物の作用下にニトリル化合物
を水和、加水分解して対応する有機酸を製造する方法は
、特公昭５Ｂ　−１５１２０号公報が知られている。こ
の反応では微生物が重要な役割を担うところ、公報には
何種類かの微生物が開示されている。

１］Ｌ張 これらの微生物のニトリラーゼ活性を利用してニトリル
化合物の水和、加水分解を工業的規模で実施すべく容量
の大きな金属性反応装置を使用したところ、ニトリラー
ゼ活性の発現が不十分であった。このような現象が微生
物自体に起因するのかあるいは反応装置の材質、構造そ
の他の理由によるのかは不明であったが、この点が解決
されなければこの微生物学的な有機酸類の製造法を工業
的に実施することはできない。

Ｈの　　擾 し、使用微生物に光を照射することによってこの目的を
達成しようとするものである。

従って、本発明による微生物による有機酸類の製造法は
、ニトリル化合物をニトリラーゼ活性を存する微生物の
作用によって水と反応させて対応する有機酸に転化させ
る方法において、この反応を下記の条件下に実施するこ
と、を特徴とするものである。

（イ）ニトリラーゼ活性を有する微生物が、グラム染色
性が陽性のものであること。

（ロ）使用する微生物菌体に、水和反応の終了以前に少
なくとも約２ＸｌＯ−’μＥ／ｇ菌体・秒の光エネルギ
ーを受けさせること。

（ハ）水和反応を、少なくとも一部が光不透過性材料か
らなる容器の中で実施すること。

効　　果 このように、本発明ではニトリラーゼ活性を有する微生
物の作用によってニトリルの水和・加水バ＆ｎ；？＋す
一中抜小７Ｉマ嵐ｈ　マ＾鴬ル井−２ず卑尤［ｎ射する
ことによって、光不透過性材料で製作した反応容器中で
は光が実質的に存在しないので実質的に進行しないこの
水和反応を進行させることができ、また一部を光不透過
性材料で製作した反応容器中では光が存在するのである
程度は進行するこの水和反応を光照射によって著るしく
促進することができる。

この光照射によるニトリル化合物よりの有機酸生成反応
の促進は以下のように起るものと考えられる。すなわち
、本発明の方法による有機酸の生成はニトリラーゼ活性
を有する前記菌属の微生物が連続的に次の二つの反応を
起すことによる。

ニトリラーゼ 上の反応において、光照射による促進効果のあるところ
は反応ｉｌｌ、（２）であり、反応（５）には全くその
効果がないことが認められた。反応＋１１が光照射によ
り促進されることは、本発明者らによりすでに見出され
ているものであり（特願昭５８−１２５５８８号）、本
発明はその応用である。本発明者らは、ニトリル化合物
の生化学的加水分解反応による有機酸類の製造において
も、光照射による反応（１１、（２）の促進が有効でな
いかと考え種々検討した結果、２；、トリル化合物より
対応する有機酸生成の反応速を速め生産性の向上がなさ
れること見出し本発明を完成した。従って、本発明の方
法において使用される微生物は前述の反応（１）、（２
）、（３）の全ての酵素活性をもっているものが極めて
有効である。

酵素の利用を含めて微生物学的な方法で有用物質を生産
することは既に多くの事例が知られてい鴨のであるが、
光のような電磁波を照射して微生物ないしその酵素の活
性を高める例は殆んど知られておらず、むしろ一般には
照射は有害であることが多いとされていることをも考慮
すれば、上記の特定の場合について認められた光照射の
効果は全く思いがけなかったことといわなければならな
い。

発明の具体的説 ｌ亙監生１ ニトリラーゼおよびアミダーゼ活性を有する微生物の作
用によってニトリル化合物を対応する有機酸に転化させ
ることが公知であることは前記した通りであるが、本発
明者らの見出したところに′４れば、ニトリラーゼ活性
を有する微生物はいずれもアミダーゼ活性を有しており
、その多くが本発明を実施するための微生物として使用
できる。

すなわち、特開昭５０−５３５８６号、同５４−１２９
１９０号公報に記載されている属の微生物が一般に光に
よる活性向上があり利用できる。

これらの属の微生物に共通する特徴は、グラム染色性が
陽性であり、一般にリン脂質を有し、細胞膜が厚く、そ
のため物質の透過に抵抗があり、また細胞内酵素を取り
出すに当っての膜破砕も容易ではない、ということであ
る。

そして興味あることは、本発明の光照射効果は、光照射
により基質にトリル）および（または）生成物（有機酸
）の細胞膜透過速度が向上することによる見掛は上のニ
トリラーゼ活性が増加すること、および細胞膜の透過と
は無関係に酵素、ニトリラーゼ、の活性そのものが光照
射に、より向上すること、によるということである。

さて、本発明で使用される微生物は、ニトリラーゼ活性
を有するグラム陽性菌である。このような微生物の具体
例を挙げれば、下記の群から選んだ属に属するものがあ
る。

（イ）　コリネバクテリウム属 （ロ）　ノカルジア属 （ハ）　バチルス属 （ニ）　バクテリジウム属 （ホ）　　ミクロコツカス属 （へ）　ブレビバクテリウム属 これらの属に属する具体的な菌株の例を挙げれば、コリ
ネバクテリウム属のものとしてはＮ　−７７１株（昭和
５３年５月３０日付微工研菌寄第４４４５号）およびＮ
−７７４株（昭和５３年５月３０日付微工研菌寄第４４
４６号）、ノカルジア属のものとしてはＮ−７７５株（
昭和５３年５月３０日付微工研菌寄第４４４７号）があ
って特公昭５６−１７９１８号および同５６−３８１１
８号公報に記載されており、バチルス属以外のものとし
ては特公昭５Ｂ−１５１２０号公報に記載されたものが
あって、微工研に寄託されてし）ると記載されている。

これらの菌株の菌学的性質はこれら諸公報に記載されて
いて公知である。

ニトリル化合物および有　酸 ニトリル化合物は一般に式Ｒ−（ＣＮ）ｎで表わされ、
ｎの値によって七ノニトリル（ｎ＝１）およびポリニト
リル（ｎ≧２）があるうえ、Ｒは種々の炭素数の、直鎖
状、分岐鎖状または環状の飽和または不飽和の炭化水素
残基、およびアミノ基、少ドロキシル基、ハロゲン基、
カルボキシル基、その他の置換基を有する炭化水素残基
であって、広範囲の化合物が包含される。

後記の実施例に示されているように〜多くのニトリル化
合物について実験した結果ではすべて例外なく光照射で
ニトリラーゼ活性向上が認められており、本発明はニト
リル化合物に対して一般に成立つ。

水和、加水分解反応生成物は出発ニトリル化合物のシア
ノ基が前記反応（１１、（３）および（またＧよ）（２
）を経て生成した有機酸である。

生成物の有用性の観点からは、少なくとも現在の判断基
準からすれば、アクリロニトリルからアクリル酸、各種
アミノニトリルからのアミノ酸の生産が重要であろう。

、水和、加水　”　応 ニトリラーゼおよびアミダーゼ活性を有する微径物の作
用下にニトリル化合物の水和、加水分解を行なう方法は
公知であって、本発明でもその主旨が損なわれない限り
任意の態様でこの反応を実施することができる（光照射
によって水和、加水分解反応そのものには変化が認めら
れない）。

この方法は、−ａに微生物菌体と原料ニトリル化合物と
を水性媒体中で所定時間接触させることからなる。

微生物菌体は、培養液の形で、培養液から分離した生菌
体、菌体破砕物、抽出液、粗酵素液、あるいはこれらを
適当な担体に担持ないし固定化した形で、あることがで
きる。好ましい形態は、生菌体および生菌体を水性重合
体ゲル（たとえば架橋ポリアクリルアミドゲルあるいは
架橋ポリビニルアルコール）中に固定化したもの、であ
る。

水性媒体中の基質にトリル）濃度および菌体濃度も上記
のように適当に選択することができるが、一般的には基
質濃度約０．０１〜約１０％程度、菌体温度約０．０１
〜′Ｉｈ５％程度（以上いずれも重量％）である。反応
温度、反応ＰＨその他の反応条件も使用微生物の種類に
応じて適当に定めればよいが、反応温度は氷点〜２０℃
程度、ＰＩ（は７前後である。ＰＩＩ（＋！Ｉを所定値
に保つため適当なバッファーを使用することができるこ
とはいうまでもない、なお、反応を効率的に行なうため
反応の初期〔反応（１）〕はＰＨを８．０〜８．５に保
つことが有効である。

なお、反応に供すべき菌体の調製は、所与の微生物をそ
れに通した条件で培養すればよいことはいうまでもない
。培養液から分離されて水和、加水分解反応に供される
菌体は非増殖条件下にある還Ｊｌ （１）光 光照射は、水和、加水分解反応終了以前の菌体に対して
行なう、ここで、水和、加水分解反応終了以前とは反応
の終了（必ずしも転化率１００％を意味しない）以前の
任意の時点を意味する。光照射は菌体に対して行なうの
であるから反応終了以前とは菌体をニトリル化合物と接
触させる前の時点をも意味する。すなわち、光照射は、
菌体をニトリル化合物に接触させる前および（または）
接触させた後に行なうことができる。

このように、光照射は菌体をニトリル化合物と接触させ
る前のみに行なうことができる。しかし、特に、菌体使
用の場合は、光照射した菌体を光子存在下にニトリル化
合物と接触させた場合は、光照射による活性向上効果は
認められるけれども、その持続が十分でない（ただし、
光照射をすれば回復する）。従って、本発明の好ましい
実施態様では、菌体をニトリル化合物と接触させた後に
光昭射を行なう。具体的には、たとえば、ニトリル化合
物と接触させる前にも接触後の水和、加水分解反応中に
も行なう。

本発明で照射する「光」は、その効果が認められる限り
任意の波長のものでありうる。しかし、電磁波の一部領
域として光を捉えたときに容易に想像できるように、よ
り低エネルギーの原子過程から生じるより高波長域では
効果が少なく、一方低波長に過ぎればそのエネルギーが
過大であるとるより菌体あるいは酵素の分子（配列）が
破壊されて酵素活性を失なって、遂には所謂殺菌へと進
むであろう。事実、本発明者らが広い波長域を検討した
結果では、８００ｎ＋ａを越える長波長の光は菌体に異
常を与えないが酵素活性向上効果は顕著ではなく、一方
、２００ｎｍ未溝の短波長では短時間に活性向上効果を
発現することができるが回復しえない活性低下をもたら
す。従って、本発明で好ましい光は波長が約１００〜約
１０１０００ｎものであり、さらに好ましくは約３００
〜約４５０ｎ＋＊の波長域のものである。具体的には太
陽光などの自然光および人工光源（波長２００〜３００
ｎｍの範囲の殺菌用ライト類、３００〜４００ｎｍの範
囲のブランクライト類、４００〜８００ｎｍの範囲の一
般照射用ライト類）からの光が例示される。

光の照射は、それによって活性向上効果が実現される限
り任意の強度ないし量で行なえばよい。

具体的には、菌体が少なくとも約２Ｘ１０−’μＥ／ｇ
菌体・秒、好ましくは少なくとも約５Ｘ１０−’μＥ／
ｇ菌体・秒の光エネルギーを受けるように照射を行なう
べきである。なお、固定化菌体を使用する場合はこれと
同一濃度の生菌体使用の場合にくらべて反応速度が約１
／２〜１／３に低下することがあるが、その場合は上記
値より約２〜３倍の光エネルギー量が必要である。ここ
で、「μＥ」は１モル分子数に等しい数の光量子のもつ
エネルギー（Ｅ　　。

（アインシュタイン＞　＞　ｘｉｏ−”で表わした光エ
ネルギー量であり、「ｇ菌体」は菌体またはその処理物
の乾燥重量をｇで表わしたものである。秒は照射時間を
秒で表わしたものである。

この光エネルギー量は、通常の工業的生産規模での反応
容器その他の反応装置の環境の光（すなわち、室内の照
明および（または）一部室内への散乱（太陽光）によっ
て与えられるものより太きい。すなわち、本発明者らの
実験によれば、通常工業的生産現場での照度は１００ル
ツクス程度であるが、この明るさでは、仮に菌体濃度が
１００ｐｐａ＋と低く、且つ上部が全部光開放された反
応容器を使用したとしても、反応容器が約２５０１７・
ノトル以上ともなると得られる光エネルギー量は上記２
Ｘ１０−３μＥ／ｇ菌体・秒の値に満たなくなる。

このように、かなり光を受は入れ易い条件にあっても工
業的生産現場においては所要光エネルギー量は満たし難
いが、本発明で少なくとも約２ＸＩＯ−’μＥ／ｇ菌体
・秒の光エネルギーを受けさせるというときは光の照射
態様（詳細後記）によって室内光の寄与があるときはそ
れをも含めるものとする。

また、本発明で必要とする反応速度を得るためには、た
とえば本発明の最低の光エネルギー量すなわち２Ｘ１０
−’μＥ／ｇ菌体・秒では約１時間の照射庵４千だ優ぼ
上い− （２）　　　照　　　　射 ニトリル化合物と接触する前の菌体あるレーよニトリル
化合物と接触している菌体が、それを照射対象とする光
源から所定量の光エネルギーを連続的にあるいは非連続
に受けることができる限り、任意の態様で照射を行なう
ことができる。

ここで、「菌体を照射対象とする光源」とは、菌体を照
射すべく反応装置内または外に設けられた光源を意味し
、反応装置を取りまく環境が散乱太陽光および（または
）室内照明光として反応装置内に入射させることあるべ
き光を包含するとし）う趣旨である。なお、反応装置の
在る室内を不必要ないし不自然に明るくしてその光によ
り反応装置内への有意の光エネルギーの入射が認められ
るときは、そのような光源は本発明でいう光源と解すべ
きものとする。

光の照射は、具体的には、たとえば、菌体の存在する容
器の上部空間（すなわち、菌体あるいはそれが懸濁する
水性媒体液面上の空間）に光源を設置して照射を行なう
方法、容器の上部、側部または底部に窓を設けてそこか
ら外部光源から照射を行なう方法、および一般に光化学
反応器として多用されるように液中浸漬ランプにより照
射する方法、その他の方法、によって行なうことができ
る。また、必要ならば、あるいは可能ならば、菌体の存
在する容器（特に反応容器）から反応液を抜出して、そ
れについて別の容器で上記のような照射を行なうことも
できる（この場合の「別の容器」は、透明ガラス管の一
本または複数本からなるものであってもよい）。

なお、光照射による本発明の効果は、ふつうの室内光の
入射によっては光エネルギー量が不足するような工業的
生産規模での反応容器を使用する場合に特に顕著である
。このような反応容器は光不透過性材料、特に金属によ
ってその実質的部分が製作されていることがふつうであ
り、このよう□　　な光不透過性の反応容器では例えば
視き窓あるいは蓋部から得られる一般照明による光エネ
ルギーでは極めて不十分で積極的な光の照射が不可欠で
ある。なお、ここで「反応容器」とは、水和、加　・水
分解反応の少なくとも大部分が実施される反応装置部分
をいう。

グルコース１％、ペプトン０．５％、酵母エキス０．３
％、麦芽エキス０．３％および硫酸第−銖・７水塩０．
０５％を含む培地（Ｐ　Ｈ７，２）により好気的に培養
して調製したＮ−７７４株（コレネバクテリウム属）の
洗浄菌体を得た。この菌体を暗所にて０．０５　Ｍリン
酸バッファー（Ｐ　Ｈ７，７）に分散させて、１７．３
　ｇ乾燥菌体／リットルの濃度の菌体分散液を調製した
。この菌液を部分し、一方は３００Ｗの水銀灯（東芝製
）を用いて５Ｘ１０−’μＥ／ｇ菌体・秒の光エネルギ
ー照射下に０℃で１時間処理しく以後、このサンプルを
「明装置」という）、　　゛もう一方は、暗所にて０℃
で２日間放置した（以後、このサンプルを「暗放置」と
いう。）この菌液を用いてそれぞれについて、以下の処
方にて、アクリロニトリルからアクリル酸を生成させ、
アクリル酸の生成量の差により反応速度を比較検討した
。

すなわち、明装置にては、菌体０．１部（乾燥菌体重（
以後この重量で示す））、アクリロニトリル２．５部お
よび０．０５　Ｍ　ＩＪン酸バッファー（ＰＨ７，７）
　９７゜４部を混合し、ガラス製５０ミリリツトル反応
器中で上記と同じ光照射条件で攪拌下に０℃で１２０分
間反応させた（以後、この反応を「光照射反応」という
）。一方、暗放置は、光を照射しないこと以外は、同条
件で反応（以後、この反応を「暗反応」という）を行な
った。それぞれの反応終了液中のアクリル酸を高速液体
クロマトグラフィーにより定量分析した。その結果、単
位菌体当りのアクリル酸（Ａａ）の生成能で比較すると
、明放開光照射反応では１９５０μモルＡａ／ｇ菌体・
時間であり、暗放置反応では１２７μモル＾ａ／ｇ菌体
時間であった。また、この生成能を比較すると、明放置
光照射反応／暗放置暗反応−１５，４であった。

以下の実施例については、本実施例中の明放開光照射反
応の１９５０μモルＡａ／ｇ菌体・時間を１００Ｕとし
た相対値で示す。従って、本例での暗放置反応は、換算
すると６．５Ｕとなる。

なお、この反応を基質としてアクリロニトリルの代りに
アクリルアミドを用いた以外は全く前述の方法、条件に
より光照射および暗反応を行なった。その結果、両者と
もアクリル酸生成の反応速度に殆んど差が認められなが
った。

ｌ皇豆主二上土 実施例１と同様にして得た明装置と暗放置の菌体それぞ
れについて、種々のニトリル化合物を用いて実施例１と
同様の組成の反応液をつくり、実施例１と同様に反応さ
せて、それぞれの反応終了液を得た。これらの反応終了
液中の対応各有機酸類を高速液体クロマトグラフィーに
より定量分析して、表−１の結果を得た。

実施例１５〜１９ 実施例１と同様にして調製した各種の属の菌株、すなわ
ち、バチルス属＜　ｃｓｓ−４９４）　、バクテリジウ
ム属（ＣＢ５−４９６）　、ミクロコツカス属（ＣＢ５
−４９７）　、ブレビバクテリウム属（ＣＢ５−７１７
）　、およびノカルジア属（Ｎ−７７５）の洗浄菌体を
得て、実施例１と同様にして明放置と暗放置の菌体を得
た。この菌体をそれぞれ以下の処方にてアクリロニトリ
ルからアクリル酸を生成させ、アクリル酸の生成量の差
により反応速度を比較検討した。

すなわち、それぞれの菌株の明放置と暗放置について、
菌体０．１部、アクリロニトリル２．５部、０、０５　
Ｍリン酸バッファー（ＰＨ７，７）９７．４部を混合し
、攪拌下に０℃で１２０分間反応（光照射反応）させ、
また、暗放置では光を照射しないこと以外は同条件で反
応（暗反応）を行なって、反応終了液を得た。それぞれ
の反応終了液中のアクリル酸を高速液体クロマトグラフ
ィーにより定量例２０〜２４ 実施例１で得たＮ−７７４株の暗装置菌体懸濁液５ｍリ
ットル、０．０５Ｍリン酸バッフｙ　−（ＰＨ７，７）
２０ｍリットルを鋼製の５０ｍリットル容器に採取し、
ブランクライト（東芝ＦＬ−４ＢＬ−Ｇ型）を用いて容
器上部からの受光量を受光面積の異なるフィルターを用
いることにより、表−３に示す光エネルギーとなるよう
に調整して、０℃、攪拌上光照射を１時間行なった。

これらの光照射菌液に、それぞれ同じ光照射条件下に５
％アクリロニトリル溶液（０，０５ＭＩＪン酸バッファ
ー（ＰＨ７，７）溶液）を２５ｍリットル加え、０℃で
１２０分間反応を行ない、反応液を得た。

これらの反応液中のアクリル酸の生成量を高速液体クロ
マトグラフィーにより定量分析し反応速度を求めた。結
果を表−３に示した。

なお、Ｎ−７７４菌体を常法によりフレンチプレスにて
処理して得た菌体抽出液についても同様の実験を行ない
表−３に併記した。

表−３ （注）各実施例中下段は菌体抽出液についてのものであ
る。

２５〜２９ 実施例１で得たＮ−７７４株の暗装置菌体懸濁液５ｍリ
ットル、０．０５ＭＩＪン酸バッファ　−（ＰＨ７，７
）２０ｒｎリツトルを鋼製の５０ｍリットル容器に採取
し、陽光ランプ（東芝製）と、色ガラスフィルター（東
芝色ガラスフィルターＹ４５）を用いて、４３０ｎｍ以
下の波長を除去した光を容器上部から受光面も一定とし
、照射時間をかえて照射し、表−４に示す光エネルギー
となるように調整して、０℃、攪拌上光照射した。

これらの照射液に、それぞれ同じ光照射条件下に５％ア
クリロニトリル溶液（０，０５Ｍ＋Ｊン酸ツマ、７）？
　−（ＰＨ７，７）溶液）を２５ｍリットル加え、０℃
で１２０分間反応を行ない、反応液を得た。

これらの反応液中のアクリル酸の生成量を高速液体クロ
マトグラフィーにより定量分析し反応速度を求めた。結
果を表−４に示した。

表−４ ＩＬ±」−更 実施例１と同様の方法で培養して得たＮ　−７７４株の
洗浄菌体を生理食塩水に分散させて菌体濃度２％の懸濁
液を調製した。この菌体８００ｍ１Ｊソトルをガラス製
のセパラブルフラスコに入れ、苛性ソーダでＰＨコント
ロールしつつ、１０℃で攪拌下にプランクライト（東芝
ＰＬ　−４ＢＬ　−Ｇ型）を用い、光エネルギー量約５
００μＥ／ｇ　　・菌体・秒を与えつつ、反応系内のア
クリロニトリル濃度を２％以上にあげないようにしなが
らアクリロニトリル６５ｇを逐次添加して反応を行なっ
た。なお、反応中のＰＨは、はじめの２時間はＰ　Ｈ８
，０で、その後ＰＨを６．５〜７．０に下げて５時間反
応させアクリロニトリルよりアクリル酸の生成反応を行
なった。反応終了液は１０χ（Ｗ／Ｗ）のアクリル酸を
含み、ニトリルは殆んど酸に転化していた。

なお、比較例として、暗装置菌体を用い暗反応で本実施
例を行なった。その結果、反応時間１０時間目でアクリ
ル酸濃度はＩ　Ｘ（Ｗ／Ｗ）以下であった。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ニトリル化合物をニトリラーゼ活性を有する微生物
   の作用によって水と反応させて対応する有機酸類に転化
   させる方法において、この反応を下記の条件下に実施す
   ることを特徴とする、微生物による有機酸類の製造法。 （イ）ニトリラーゼ活性を有する微生物が、グラム染色
   性が陽性のものであること。 （ロ）使用する微生物菌体に、水和反応終了以前に少な
   くとも約２×１０＾−＾３μＥ／ｇ菌体・秒の光エネル
   ギーを受けさせること。 （ハ）水和反応を、少なくとも一部が光不透過性材料か
   らなる容器の中で実施すること。 ２、光が、約１００〜約１０００ｎｍの波長のものであ
   る、特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３、光エネルギーが、少なくとも約５×１０＾−＾３μ
   Ｅ／ｇ菌体・秒である、特許請求の範囲第１〜２項のい
   ずれかに記載の方法。 ４、光の照射を、微生物菌体をニトリル化合物に接触さ
   せる前および（または）接触させた後に実施する、特許
   請求の範囲第１〜３項のいずれか１項に記載の方法。 ５、微生物が、コリネバクテリウム属、ノカルジア属、
   バチルス属、バクテリジウム属、ミクロコッカス属およ
   びブレビバクテリウム属からなる群から選ばれた属に属
   するものである、特許請求の範囲第１〜４項のいずれか
   １項に記載の方法。 ６、ニトリル化合物が、アセトニトリル、プロビオニト
   リル、ｎ−ブチロニトリル、ｉ−ブチロニトリル、アク
   リロニトリル、メタクリロニトリル、ベンゾニトリル、
   シアノピリジン、マロノニトリル、サクシノニトリル、
   フマロニトリル、ラクトニトリル、β−ヒドロキシプロ
   ピオニトリル、アミノアセトニトリル、α−アミノプロ
   ピオニトリル、β−アミノプロピオニトリル、α−アミ
   ノフェニルプロピオニトリルおよびα−アミノメチルチ
   オブチロニトリルからなる群から選ばれたものである、
   特許請求の範囲第１〜５項のいずれか１項に記載の方法
   。