JPH0362391B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

発明の背景 技術分野 本発明は、ニトリラーゼ活性を有する微生物
（微生物の菌体破砕物、抽出液、粗酵素液等も含
むものとする。以下同様）の作用によりニトリル
化合物を水和、加水分解して対応する有機酸に転
化させる方法に関する。さらに具体的には、本発
明は、使用する微生物に光を照射することによつ
て収率、空時収率および菌体生産性（単位菌体当
り可能な有機酸生産量のことをいう）よく有機酸
を製造する方法に関する。 近年、微生物またはそれから得られた酵素を用
いて種々の化学反応を実施する技術が開発されつ
つある。一般に、微生物ないし酵素による反応
は、常温常圧下に実施できるのでエネルギー消費
が少なく、しかも目的生成物への選択性が極度に
高いので高純度の製品が得られ易いという特徴が
ある。しかしその反面、この反応は、反応活性お
よび微生物ないし酵素の触媒としての寿命の点で
改善すべき余地がある。特に、目的とする反応の
速度すなわち反応活性が常法通り反応条件、特に
温度および（または）Hzの至適化を行なつたとし
ても低位の場合は、空時収率が低いので反応器の
容量を増大しなければならないばかりでなく、反
応速度が遅いため反応時間が長くなるところか
ら、これがさらに反応活性の低下につながつて、
菌体生産性が悪化する。 従つて、微生物あるいは酵素の反応活性を高位
に発現させることは、基本的に重要なことであ
り、工業生産における経済性を左右するものであ
る。 先行技術 ニトリル化合物を水和、化水分解して対応する
有機酸に転化させる酵素活性、すなわちニトリラ
ーゼおよびアミダーゼ活性、を有する微生物の作
用下にニトリル化合物を水和、化水分解して対応
する有機酸を製造する方法は、特公昭58−15120
号公報が知られている。この反応では微生物が重
量な役割を担うところ、公報には何種類かの微生
物が開示されている。 問題点 これらの微生物のニトリラーゼ活性を利用して
ニトリル化合物の水和、化水分解を工業的規模で
実施すべく容量の大きな金属性反応装置を使用し
たところ、ニトリラーゼ活性の発現が不十分であ
つた。このような現象が微生物自体に起因するの
かあるいは反応装置の材質、構造その他の理由に
よるのかは不明であつたが、この点が解決されな
ければ微生物学的な有機酸類の製造法を工業的に
実施することはできない。 発明の概要 要 旨 本発明は上記の点に解決を与えることを目的と
し、使用微生物に光を照射することによつてこの
目的を達成しようとするものである。 従つて、本発明による微生物による有機酸類の
製造法は、ニトリル化合物をニトリラーゼ活性を
有する微生物の作用によつて水と反応させて対応
する有機酸に転化させる方法において、この反応
を下記の条件下に実施すること、を特徴とするも
のである。 (イ) ニトリラーゼ活性を有する微生物が、グラム
染色性が陽性のものであること。 (ロ) 使用する微生物菌体に、水和反応の終了以前
に少なくとも約２×10^-3μE／ｇ菌体・秒の光
エネルギーを受けさせること。 (ハ) 水和反応を、少なくとも一部が光不透過性材
料からなる容器の中で実施すること。 効 果 このように、本発明ではニトリラーゼ活性を有
する微生物の作用によつてニトリルの水和・加水
分解反応を実施するに当り、この微生物に光を照
射することによつて、光不透過性材料で製作した
反応容器中では光が実質的に存在しないので実質
的に進行しないこの水和反応を進行させることが
でき、また一部を光不透過性材料で製作した反応
容器中では光が存在するのである程度は進行する
この水和反応を光照射によつて著るしく促進する
ことができる。 この光照射によるニトリル化合物よりの有機酸
生成反応の促進は以下のように起るものと考えら
れる。すなわち、本発明の方法による有機酸の生
成はニトリラーゼ活性を有する前記菌属の微生物
が連続的に次の二つの反応を起すことによる。 上の反応において、光照射による促進効果のあ
るところは反応(1)、(2)であり、反応(3)には全くそ
の効果がないことが認められた。反応(1)が光照射
により促進されることは、本発明者らによりすで
に見出されているものであり（特開昭60−19496
号）、本発明はその応用である。本発明者らは、
ニトリル化合物の生化学的加水分解反応による有
機酸類の製造においても、光照射による反応(1)、
(2)の促進が有効でないかと考え種々検討した結
果、ニトリル化合物より対応する有機酸生成の反
応速度を速め生産性の向上がなされること見出し
本発明を完成した。従つて、本発明の方法におい
て使用される微生物は前述の反応(1)、(2)、(3)の全
ての酵素活性をもつているものが極めて有効であ
る。 酵素の利用を含めて微生物学的な方法で有用物
質を生産することは既に多くの事例が知られてい
るのであるが、光のような電磁波を照射して微生
物ないしその酵素の活性を高める例は殆んで知ら
れておらず、むしろ一般には照射は有害であるこ
とが多いとされていることをも考慮すれば、上記
の特定の場合について認められた光照射の効果は
全く思いがけなかつたことといわなければならな
い。 発明の具体的説明 使用微生物 ニトリラーゼおよびアミダーゼ活性を有する微
生物の作用によつてニトリル化合物を対応する有
機酸に転化させることが公知であることは前記し
た通りであるが、本発明者らの見出したところに
よれば、ニトリラーゼ活性を有する微生物はいず
れもアミダーゼ活性を有しており、その多くが本
発明を実施するための微生物として使用できる。
すなわち、特開昭50−53586号、同54−129190号
公報に記載されている属の微生物が一般に光によ
る活性向上があり利用できる。 これらの属の微生物に共通する特徴は、グラム
染色性が陽性であり、一般にリン脂質を有し、細
胞膜が厚く、そのため物質の透過に抵抗があり、
また細胞内酵素を取り出すに当つての膜破砕も容
易ではない、ということである。 そして興味あることは、本発明の光照射効果
は、光照射により基質（ニトリル）および（また
は）生成物（有機酸）の細胞膜透過速度が向上す
ることによる見掛け上のニトリラーゼ活性が増加
すること、および細胞膜の透過とは無関係に酵
素、ニトリラーゼ、の活性そのものが光照射によ
り向上すること、によるということである。 さて、本発明で使用される微生物は、ニトリラ
ーゼ活性を有するグラム陽性菌である。このよう
な微生物の具体例を挙げれば、下記の群から選ん
だ属に属するものがある。 (イ) コリネバクテリウム属 (ロ) ノカルジア属 (ハ) バチルス属 (ニ) バクテリジウム属 (ホ) ミクロコツカス属 (ヘ) ブレビバクテリウム属 これらの属に属する具体的な菌株の例を挙げれ
ば、コリネバクテリウム属のものとしてはＮ−
771株（昭和53年５月30日付微工研菌寄第4445号）
およびＮ−774株（昭和53年５月30日付微工研菌
寄第4446号）、ノカルジア属のものとしてはＮ−
775株（昭和53年５月30日付微工研菌寄第4447号）
があつて特公昭56−17918号および同56−38118号
公報に記載されており、バチルス属以外のものと
しては特公昭58−15120号公報に記載されたもの
があつて、微工研に寄託されていると記載されて
いる。これらの菌株の菌学的性質はこれら諸公報
に記載されていて公知である。 ニトリル化合物および有機酸類 ニトリル化合物は一般に式Ｒ−（CN）ｎで表
わされ、ｎの値によつてモノニトリル（ｎ＝１）
およびポリニトリル（ｎ≧２）があるうえ、Ｒは
種々の炭素数の、直鎖状、分岐鎖状または環状の
飽和または不飽和の炭化水素残基、およびアミノ
基、ヒドロキシル基、ハロゲン基、カルボキシル
基、その他の置換基を有する炭化水素残基であつ
て、広範囲の化合物が包含される。 後記の実施例に示されているように、多くのニ
トリル化合物について実験した結果ではすべて例
外なく光照射でニトリラーゼ活性向上が認められ
ており、本発明はニトリル化合物に対して一般に
成立つ。 水和、加水分解反応生成物は出発ニトリル化合
物のシアノ基が前記反応(1)、(3)および（または）
(2)を経て生成した有機酸である。 生成物の有用性の観点からは、少なくとも現在
の判断基準からすれば、アクリロニトリルからア
クリル酸、各種アミノニトリルからのアミノ酸の
生産が重要であろう。 水和、加水分解反応 ニトリラーゼおよびアミダーゼ活性を有する微
生物の作用下にニトリル化合物の水和、加水分解
を行なう方法は公知であつて、本発明でもその主
旨が損なわれない限り任意の態様でこの反応を実
施することができる（光照射によつて水和、加水
分解反応そのものには変化が認められない）。 この方法は、一般に微生物菌体と原料ニトリル
化合物とを水性媒体中で所定時間接触させること
からなる。 微生物菌体は、培養液の形で、培養液から分離
した生菌体、菌体破砕物、抽出液、粗酵素液、あ
るいはこれらを適当な担体に担持ないし固定化し
た形で、あることができる。好ましい形態は、生
菌体および生菌体を水性重合体ゲル（たとえば架
橋ポリアクリルアミドゲルあるいは架橋ポリビニ
ルアルコール）中に固定化したもの、である。 水性媒体中の基質（ニトリル）濃度および菌体
濃度も上記のように適当に選択することができる
が、一般的には基質濃度約0.01〜約10％程度、菌
体濃度約0.01〜約５％程度（以上いずれも重量
％）である。反応温度、反応Hzその他の反応条件
も使用微生物の種類に応じて適当に定めればよい
が、反応温度は氷点〜20℃程度、Hzは７前後であ
る。Hz値を所定値に保つため適当なバツフアーを
使用することができることはいうまでもない。な
お、反応を効率的に行なうため反応の初期〔反応
(1)〕はHzを8.0〜8.5に保つことが有効である。 なお、反応に供すべき菌体の調製は、所与の微
生物をそれに適した条件で培養すればよいことは
いうまでもない。培養液からは分離されて水和、
加水分解反応に供される菌体は非増殖条件下にあ
るということができる。 光照射 (1) 光 光照射は、水和、加水分解反応終了以前の菌
体に対して行なう。ここで、水和、加水分解反
応終了以前とは反応の数量（必ずしも転化率
100％を意味しない）以前の任意の時点を意味
する。光照射は菌対に対して行なうのであるか
ら反応終了以前とは菌体をニトリル化合物と接
触させる前の時点をも意味する。すなわち、光
照射は、菌体をニトリル化合物に接触させる前
および（または）接触させた後に行なうことが
できる。 このように、光照射は菌体をニトリル化合物
と接触させる前のみに行なうことができる。し
かし、特に、菌体使用の場合は、光照射した菌
体を光不存在下にニトリル化合物と接触させた
場合は、光照射による活性向上効果は認められ
るけれども、その持続が十分でない（ただし、
光照射をすれば回復する）。従つて、本発明の
好ましい実施態様では、菌体をニトリル化合物
と接触させた後に光照射を行なう。具体的に
は、たとえば、ニトリル化合物と接触させる前
にも接触後の水和、加水分解反応中にも行な
う。 本発明で照射する「光」は、その効果が認め
られる限り任意の波長のものでありうる。しか
し、電磁波の一部領域として光を捉えたときに
容易に想像できるように、より低エネルギーの
原子過程から生じるよう高波長域では効果が少
なく、一方低波長に過ぎればそのエネルギーが
過大であるところより菌体あるいは酵素の分子
（配列）が破壊されて酵素活性を失なつて、遂
には所謂殺菌へと進むであろう。事実、本発明
者らが広い波長域を検討した結果では、800n
ｍを越える長波長の光は菌体に異常を与えない
が酵素活性向上効果は顕著ではなく、一方、
200nｍ未満の短波長では短時間に活性向上効
果を発現することができるが回復しえない活性
低下をもたらす。従つて、本発明で好ましい光
は波長が約100〜約1000nｍのものであり、さ
らに好ましくは約300〜約450nｍの波長域のも
のである。具体的には太陽光などの自然光およ
び人工光源（波長200〜300nｍの範囲の殺菌用
ライト類、300〜400nｍの範囲のブラツクライ
ト類、400〜800nｍの範囲の一般照射用ライト
類）からの光が例示される。 光の照射は、それによつて活性向上効果が実
現される限り任意の強度ないし量で行なえばよ
い。具体的には、菌体が少なくとも約２×
10^-3μE／ｇ菌体・秒、好ましくは少なくとも
約５×10^-3μE／ｇ菌体・秒の光エネルギーを
受けるように照射を行なうべきである。なお、
固定化菌体を使用する場合はこれと同一濃度の
生菌体使用の場合にくらべて反応速度が約1/2
〜1/3に低下することがあるが、その場合は上
記値より約２〜３倍の光エネルギー量が必要で
ある。ここで、「μE」は１モル分子数に等しい
数の光量子のもつエネルギー（Ｅ（アインシユ
タイン））×10^-6で表わした光エネルギー量であ
り、「ｇ菌体」は菌体またはその処理物の乾燥
重量をｇで表わしたものである。秒は照射時間
を秒で表わしたものである。 この光エネルギー量は、通常の工業的生産規
模での反応容器その他の反応装置の環境の光
（すなわち、室内の照明および（または）一部
室内への散乱（太陽光）によつて与えられるも
のより大きい。すなわち、本発明者らの実験に
よれば、通常工業的生産現場での照度は100ル
ツクス程度であるが、この明るさでは、仮に菌
体濃度が100ppmと低く、且つ上部が全部光開
放された反応容器を使用したとしても、反応容
器が約250リツトル以上ともなると得られる光
エネルギー量は上記２×10^-3μE／ｇ菌体・秒
の値に満たなくなる。 このように、かなり光を受け入れ易い条件に
あつても工業的生産現場においては所要光エネ
ルギー量は満たし難いが、本発明で少なくとも
約２×10^-3μE／ｇ菌体・秒の光エネルギーを
受けさせるというときは光の照射態様（詳細後
記）によつて室内光の寄与があるときはそれを
も含めるものとする。 また、本発明で必要とする反応速度を得るた
めには、たとえば本発明の最低の光エネルギー
量すなわち２×10^-3μE／ｇ菌体・秒では約１
時間の照射を行なえばよい。 (2) 照射 ニトリル化合物と接触する前の菌体あるいは
ニトリル化合物と接触している菌体が、それを
照射対象とする光源から所定量の光エネルギー
を連続的にあるいは非連続に受けることができ
る限り、任意の態様で照射を行なうことができ
る。 ここで、「菌体を照射対象とする光源」とは、
菌体を照射すべく反応装置内または外に設けら
れた光源を意味し、反応装置を取りまく環境が
散乱太陽光および（または）室内照明光として
反応装置内に入射させることあるべき光を包含
するという趣旨である。なお、反応装置の在る
室内を不必要ないし不自然に明るくしてその光
により反応装置内への有意の光エネルギーの入
射が認められるときは、そのような光源は本発
明でいう光源と解すべきものとする。 光の照射は、具体的には、たとえば、菌体の
存在する容器の上部空間（すなわち、菌体ある
いはそれが懸濁する水性媒体液面上の空間）に
光源を設置して照射を行なう方法、容器の上
部、側部または底部に窓を設けてそこから外部
光源から照射を行なう方法、および一般に光化
学反応器として多用されるように液中浸漬ラン
プにより照射する方法、その他の方法、によつ
て行なうことができる。また、必要ならば、あ
るいは可能ならば、菌体の存在する容器（特に
反応容器）から反応液を抜出して、それについ
て別の容器で上記のような照射を行なうことも
できる（この場合の「別の容器」は、透明ガラ
ス管の一本または複数本からなるものであつて
もよい）。 なお、光照射による本発明の効果は、ふつう
の室内光の入射によつては光エネルギー量が不
足するような工業的生産規模での反応容器を使
用する場合に特に顕著である。このような反応
容器は光不透過性材料、特に金属によつてその
実質的部分が製作されていることがふつうであ
り、このような光不透過性の反応容器では例え
ば視き窓あるいは蓋部から得られる一般照明に
よる光エネルギーでは極めて不十分で積極的な
光の照射が不可欠である。なお、ここで「反応
容器」とは、水和、加水分解反応の少なくとも
大部分が実施される反応装置部分をいう。 実験例 実施例 １ グルコース１％、ペプトン0.5％、酵母エキス
0.3％、麦芽エキス0.3％および硫酸第一鉄・７水
塩0.05％を含む培地（Hz7.2）により好気的に培
養して調製したＮ−774株（コレネバクテリウム
属）の洗浄菌体を得た。この菌体を暗所にて
0.05Mリン酸バツフアー（Hz7.7）に分散させて、
17.3ｇ乾燥菌体／リツトルの濃度の菌体分散液を
調製した。この菌液を二分し、一方は300wの水
銀灯（東芝製）を用いて５×10^-1μE／ｇ菌体・
秒の光エネルギー照射下に０℃で１時間処理し
（以後、このサンプルを「明放置」という）、もう
一方は、暗所にて０℃で２日間放置した（以後、
このサンプルを「暗放置」という。）この菌液を
用いてそれぞれについて、以下の処方にて、アク
リロニトリルからアクリル酸を生成させ、アクリ
ル酸の生成量の差により反応速度を比較検討し
た。 すなわち、明放置にては、菌体0.1部（乾燥菌
体重（以後この重量で示す））、アクリロニトリル
2.5部および0.05Mリン酸バツフアー（Hz7.7）
97.4部を混合し、ガラス製50ミリリツトル反応器
中で上記と同じ光照射条件で撹拌下に０℃で120
分間反応させた（以後、この反応を「光照射反
応」という）。一方、暗放置は、光を照射しない
こと以外は、同条件で反応（以後、この反応を
「暗反応」という）を行なつた。それぞれの反応
終了液中のアクリル酸を高速液体クロマトグラフ
イーにより定量分析した。その結果、単位菌体当
りのアクリル酸（Aa）の生成能で比較すると、
明放置光照射反応では1950μモルAa／ｇ菌体・時
間であり、暗放置反応では127μモルAa／ｇ菌
体・時間であつた。また、この生成能を比較する
と、明放置光照射反応／暗放置暗反応＝15.4であ
つた。 以下の実施例については、本実施例中の明放置
光照射反応の1950μモルAa／ｇ菌体・時間を
100Uとした相対値で示す。従つて、本例での暗
放置反応は、換算すると6.5Uとなる。 なお、この反応を基質としてアクリロニトリル
の代りにアクリルアミドを用いた以外は全く前述
の方法、条件により光照射および暗反応を行なつ
た。その結果、両者ともアクリル酸生成の反応速
度に殆んど差が認められなかつた。 実施例 ２〜14 実施例１と同様にして得た明放置と暗放置の菌
体それぞれについて、種々のニトリル化合物を用
いて実施例１と同様の組成の反応液をつくり、実
施例１と同様に反応させて、それぞれの反応終了
液を得た。これらの反応終了液中の対応各有機酸
類を高速液体クロマトグラフイーにより定量分析
して、表−１の結果を得た。

【表】 ニトリル

【表】 プロピオニトリル アラニン

14 α−アミノメチルチ DL−メチオニ
45.5 2.8 16.3
オブチロニトリル ン

実施例 15〜19 実施例１と同様にして調製した各種の属の菌
株、すなわち、バチルス属（CBS−494）、バク
テリジウム属（CBS−496）、ミクロコツカス属
（CBS−497）、ブレビバクテリウム属（CBS−
717）、およびノカルジア属（Ｎ−775）の洗浄菌
体を得て、実施例１と同様にして明放置と暗放置
の菌体を得た。この菌体をそれぞれ以下の処方に
てアクリロニトリルからアクリル酸を生成させ、
アクリル酸の生成量の差により反応速度を比較検
討した。 すなわち、それぞれの菌株の明放置と暗放置に
ついて、菌体0.1部、アクリロニトリル2.5部、
0.05Mリン酸バツフアー（Hz7.7）97.4部を混合
し、撹拌下に０℃で、120分間反応（光照射反応）
させ、また、暗放置では光を照射しないこと以外
は同条件で反応（暗反応）を行なつて、反応終了
液を得た。それぞれの反応終了液中のアクリル酸
を高速液体クロマトグラフイーにより定量分析し
て表−２の結果を得た。

【表】 実施例 20〜24 実施例１で得たＮ−774株の暗放置菌体懸濁液
５ｍリツトル、0.05Mリン酸バツフアー（Hz7.7）
20ｍリツトルを鋼製の50ｍリツトル容器に採取
し、ブラツクライト（東芝FL−4BL−Ｇ型）を
用いて容器上部からの受光量を受光面積の異なる
フイルターを用いることにより、表−３に示す光
エネルギーとなるように調整して、０℃、撹拌下
光照射を１時間行なつた。 これらの光照射菌液に、それぞれ同じ光照射条
件下に５％アクリロニトリル溶液（0.05Mリン酸
バツフアー（Hz7.7）溶液）を25ｍリツトル加え、
０℃で120分間反応を行ない、反応液を得た。 これらの反応液中のアクリル酸の生成量を高速
液体クロマトグラフイーにより定量分析し反応速
度を求めた。結果を表−３に示した。 なお、Ｎ−774菌体を常法によりフレンチプレ
スにて処理して得た菌体抽出液についても同様の
実験を行ない表−３に併記した。

【表】 (注) 各実施例中下段は菌体抽出液についての
ものである。
実施例 25〜29 実施例１で得たＮ−774株の暗放置菌体懸濁液
５ｍリツトル、0.05Mリン酸バツフアー（Hz7.7）
20ｍリツトルを鋼製の50ｍリツトル容器に採取
し、陽光ランプ（東芝製）と、色ガラスフイルタ
ー（東芝色ガラスフイルターY45）を用いて、
430nｍ以下の波長を除去した光を容器上部から
受光面を一定とし、照射時間をかえて照射し、表
−４に示す光エネルギーとなるように調整して、
０℃、撹拌下光照射した。 これらの照射液に、それぞれ同じ光照射条件下
に５％アクリロニトリル溶液（0.05Mリン酸バツ
フアー（Hz7.7）溶液）を25ｍリツトル加え、０
℃で120分間反応を行ない、反応液を得た。 これらの反応液中のアクリル酸の生成量を高速
液体クロマトグラフイーにより定量分析し反応速
度を求めた。結果を表−４に示した。

【表】 実施例 30 実施例１と同様の方法で培養して得たＮ−774
株の洗浄菌体を生理食塩水に分散させて菌体濃度
２％の懸濁液を調製した。この菌体800ｍリツト
ルをガラス製のセパラブルフラスコに入れ、苛性
ソーダでHzコントロールしつつ、10℃で撹拌下に
ブラツクライト（東芝FL−4BL−Ｇ型）を用い、
光エネルギー量約500μE／ｇ・菌体・秒を与えつ
つ、反応系内のアクリロニトリル濃度を２％以上
にあげないようにしながらアクリロニトリル65ｇ
を逐次添加して反応を行なつた。なお、反応中の
Hzは、はじめの２時間はHz8.0で、その後Hzを6.5
〜7.0に下げて５時間反応させアクリロニトリル
よりアクリル酸の生成反応を行なつた。反応終了
液は10％（Ｗ／Ｗ）のアクリル酸を含み、ニトリ
ルは殆んど酸に転化していた。 なお、比較例として、暗放置菌体を用い暗反応
で本実施例を行なつた。その結果、反応時間10時
間目でアクリル酸濃度は１％（Ｗ／Ｗ）以下であ
つた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ニトリル化合物をニトリラーゼ活性を有する
   微生物の作用によつて水と反応させて対応する有
   機酸類に転化させる方法において、この反応を下
   記の条件下に実施することを特徴とする、微生物
   による有機酸類の製造法。 (イ) ニトリラーゼ活性を有する微生物が、グラム
   染色性が陽性のものであること。 (ロ) 使用する微生物菌体に、水和反応終了以前に
   少なくとも約２×10^-3μE／ｇ菌体・秒の光エ
   ネルギーを受けさせること。 (ハ) 水和反応を、少なくとも一部が光不透過性材
   料からなる容器の中で実施すること。 ２ 光が、約100〜約1000nｍの波長のものであ
   る、特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３ 光エネルギーが、少なくとも約５×
   10^-3μE／ｇ菌体・秒である、特許請求の範囲第
   １〜２項のいずれかに記載の方法。 ４ 光の照射を、微生物菌体をニトリル化合物に
   接触させる前および（または）接触させた後に実
   施する、特許請求の範囲第１〜３項のいずれか１
   項に記載の方法。 ５ 微生物が、コリネバクテリウム属、ノカルジ
   ア属、バチルス属、バクテリジウム属、ミクロコ
   ツカス属およびブレビバクテリウム属からなる群
   から選ばれた属に属するものである、特許請求の
   範囲第１〜４項のいずれか１項に記載の方法。 ６ ニトリル化合物が、アセトニトリル、プロピ
   オニトリル、ｎ−ブチロニトリル、ｉ−ブチロニ
   トリル、アクリロニトリル、メタクリロニトリ
   ル、ベンゾニトリル、シアノピリジン、マロノニ
   トリル、サクシノニトリル、フマロニトリル、ラ
   クトニトリル、β−ヒドロキシプロピオニトリ
   ル、アミノアセトニトリル、α−アミノプロピオ
   ニトリル、β−アミノプロピオニトリル、α−ア
   ミノフエニルプロピオニトリルおよびα−アミノ
   メチルチオブチロニトリルからなる群から選ばれ
   たものである、特許請求の範囲第１〜５項のいず
   れか１項に記載の方法。