JPS61177992A - Ｄ−α−アミノ酸の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はＮ−カルバモイル−α−アミノ酸なり一α−ア
ミノ酸に変換する能力χ有するキャンディダ・ビナリア
（Ｃａｎｄｉｄ　ｖｉｎａｒｉａ　）を用いること−に
よる、膿医薬の原料、となるＤ−α−アミノ酸類の製造
法に関するものである。

（従来の技術とその問題点） Ｄ−α−アミノ酸の製造法の一つとして対応する５−置
換ヒダントインを化学的に水解してＤＬ−α−アミノｍ
ｆｆ：ｓ造し、これを光学分割してＤ−α−アミノ酸と
する方法が知られている。しかし、この方法は特に光学
分割の工程が煩雑でありその収率も高くない。又り一α
−アミノ酸の改良製造法としてＮ−カルバモイル−α−
アミノ酸を酵素法によりＤ−α−アミノ酸とする方法が
知られている。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、この様な従来の製造法に対しより効率の
よい方−法を見い出すべく研究した結果、キャンディダ
属に属する微生物にＮ−カルノ（モイル−α−アミノ！
Ｉ２をＤ−α−アミノ酸に変換する能力の有することを
見い出した。

しかしＮ−カルバモイル−α−アミノ酸を酵素法により
Ｄ−α−アミノｆｉＫする方法において、次の微生物を
用いる事は丁でに知られている。特開昭５５−８８６９
７には、シェードモナス属、アースロバフタ−属、アル
カリ土類金属、アクロモバクタ−属、モラキセラ属また
はバラコツカス属が又、特開昭５５−１０４８９０には
アエロバクタ−属、アエロモナス属、ブレビバクテリウ
ム属、バチルス属、フラボバクテリウム属、サルシナ属
またはセラシナ属が示されている。

しかし、キャンディダ属に属する微生物がＮ−カルバモ
イル−α−アミノ酸をＤ−α−アミン醸に変換する能力
を有することは、知られていなかった。この発明はこの
知見に基いて更に研究した結果完成されるに至ったもの
である。

丁なわち本発明は一般式 （式中Ｒはアルキル基、置換アルキル基、アラルキル基
、置侠アラルキル基、フェニル基、置換フェニル基、ピ
リジル基、チアゾリル基、イミダジン リル基またはイ令ドリル基を示″ｊ） で表わされるＮ−カルバモイル−α−アミノ酸にカルバ
モイル基を不斉的に除去する能力を有するキャンディダ
ビナリア（Ｃａｎｄｉｄａ　ｖｉｎａｒｉａ）（ＦＥＲ
ＭＰ−７８４５）ｙ作用せしめてＤ−α−アミノ酸に変
換せしめることを特徴とするＤ−α−アミノ酸の製造方
法である。

本発明の方法で使用する微生物は土壌から採取、分離さ
れた酵母菌で、以下に示す菌学的性状の所見よりキャン
ディダ・ビナリアと同定した。

１、形　態 １）細胞の形状、大きさ：１．２〜３．　ＯＸ　３．　
Ｏ〜６．０、楕円形、クリーム色 ２）胞子の形成二　− ２、生理学的性質 １）生育の範囲：温度３７℃まで生育する。３９℃で生
育しない。

２）無機窒素源：硝酸塩　−、アンモニウム塩十３）ヒ
ダミン要求性二　　− ４）糖の発酵性：Ｄ−グルコース　−、ラクトース　−
Ｄ−ガラクトース　−、ラヒノースー マルトース　−、シェークロース　− ５）循類の資化性：Ｄ−グルコース　　　＋Ｄ−ガラク
トース　　＋ Ｄ−リボース　　　　− Ｄ−キシロース　　　− シュークロース　　　− マルトース　　　　　− メリビオース　　　　− ラクトース　　　　　− エタノール　　　　　＋ グリセロール　　　　＋ 本微生物の培養に用いられる培地は、５−置換ヒダント
インを含むほがは通常資化しうる炭素源及び微生物の生
育に必要な栄養素を含有させる通常の培地であり、培養
は好気的条件下Ｋ　ｐＨ＝　４〜Ｂ、温度２５〜４０’
Ｃの適当な範囲に制御しつつ行なえばよい。

本発明で用いられる微生物は自然界に存在する野生株か
ら脱カルバモイル反応の能力の有無を調べることによっ
て分離、選択されたものである。

この能力の検定方法としては例えば次の様な方法が用い
られる。検定微生物の培養液５ｒＲｔヲ採取し、３５０
０ｒｐｍで１０分間遠心分離する。この分離された菌体
を殺菌した生理食塩水で洗滌後２ＷＩｔの０．５１量％
濃度のＮ−カルバモイル−Ｄ−バリンのリン酸バッファ
（Ｑ、１ＭｐＨ＝７．５）基質液中に分散させて３５℃
、１６時間反応させる。ついでｉ　ｏ、ｏ　ｏ　。

ｒｐｍで１０分間遠心分離して上置液を得て、その上澄
液をペーパークロマトグラフ（展開液Ｂｕ　−ＯＨ：酢
酸：水＝４：１：１）にて分離後ニンヒドリン発色させ
発色後、発色部を切り取り更に７５％エタノール溶液５
ｄＫて抽出後、波長５７０％で比色定量する。上記のよ
うにしてカルバモイル基を除去する能力を有すると認め
られた菌株を本発明で使用する微生物とする。キャンデ
ィダ・ビナリアは前記の検定に合格したものである。

Ｎ−カルバモイル−α−アミノ酸に本発明のキャンデゴ
ダ・ビナリアを作用せしめる方法には、本微生物の菌体
または菌体処理物を水溶液中でＮ−カルパモイルーα−
アミノ酸と接触させる方法があり、各種のＤ−α−アミ
ノ酸の製造に利用出来る。

本発明に使用される基質である各種Ｎ−カルバモイル−
α−アミノ酸は具体的に例示するとＮ−カルバモイル−
アラニン、Ｎ−カルバモイル−バリン、Ｎ−カルバモイ
ル−ロイシン、Ｎ−カルバモイル−イソロイシン、Ｎ−
カルバモイル−メチオニン、Ｎ−カルバモイル−フェニ
ルグリシン、Ｎ−カルバモイル−（バラヒドロキシ）フ
ェニルグリシン、Ｎ−カルバモイル−フェニルアラニン
、Ｎ−カルバモイル−チロシン、Ｎ−カルバモイル−ト
リプトファンなどがある。反応基質の反応液中での濃度
は０．１〜１０重量％の濃度まで用いることができる。

反応温度は２０〜６０℃の範囲にあり、反応ｐＨはｐＨ
＝５、Ｏ〜９．０の範囲にあり、特に好ましくは温度３
０〜４０℃、ｐＨ＝７．０〜８．０である。前述したよ
うな脱カルバモイル反応によって生成したＤ−α−アミ
ノ酸の単離は、濃縮、中和、イオン交換樹脂処理などの
公知の方法を利用することにより目的物であるＤ−α−
アミノ酸を取得することができる。

本発明の実施においては、技術常識に従い適宜界面活性
剤を併用することができる。

（発明の作用および効果） 本発明は、キャディダ・ビナリアの微生物由来のカルバ
モイル基を除去する能力によりＮ−カルバモイル−α−
アミノ酸から容易に高収率でＤ−α−アミノ酸を取得で
きるのでＤ−α−アミノ酸の製造に際し極めて有利な方
法である。

（実施例） 以下の例により本発明を具体的に説明するが本発明はこ
れらの例のみに限定されるものではない。

実施例−１ 表−１に示した培地を２５０−三角フラスコに２０−入
れ１２０℃、１５分間殺菌した。

金耳接種し２８℃、２４時間培養した。この培養液乞遠
心分離により菌体を分離後、培養液と同量の０．１Ｍリ
ン酸カリウムバッファ溶液にて１回洗滌し、この菌体を
表−２に示す。

メＮ−力ルパモイルーα−アミノ酸のいずれか−ｍ’１
ｔ１０ｆ／を含む０．１Ｍリン酸カリウムバッファ溶液
（ｐＨ＝７．５　）　（終末５ｄ）Ｋ　３０ｙ／ｌｒｃ
なるｍＫ添加し、５６°Ｃ１２４時間反応した。生成す
る各種果生成するアミノ酸は全ての場合り一体であるこ
とを確認した。結果を使用したＮ−カルバモイル−α−
アミノ酸毎に表−２に示す。

表−１ 表−２ 特許出願人　三井東圧化学株式会社 手　　続　　補　　正　　書 昭和６０年　３月１２　日 特許庁長官　　　　　　　　　殿 １、事件の表示 昭和６０年特許願第１８６６１号 ２、発明の名称 り一α−アミノ酸の製造方法 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 住　所　　　東京都千代田区霞が関三丁目２番５号４、
補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ５、補正の内容 明細書の第６頁下から第６行のｒｍ／ｍＪを［ｎｍＪに
訂正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（１） （式中Ｒはアルキル基、置換アルキル基、アラルキル基
   、置換アラルキル基、フェニル基、置換フェニル基、フ
   リル基、ピリジル基、チアゾリル基、イミダゾリル基ま
   たはインドリル基を示す。）で表わされるＮ−カルバモ
   イル−α−アミノ酸にカルバモイル基を除去する能力を
   有するキャンディダ・ビナリア（Ｃａｎｄｉｄａ　ｖｉ
   ｎａｒｉａ）（ＦＥＲＭ　Ｐ−７８４５）を作用せしめ
   てＤ−α−アミノ酸に変換せしめることを特徴とするＤ
   −α−アミノ酸の製造法。