JPH0646948B2 - Ｄ−α−アミノ酸の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明はＮ−カルバモイル−ＤＬ−α−アミノ酸をＤ−
α−アミノ酸に変換する能力を有するキャンディダ・ビ
ナリア（Candid vinaria）を用いることによる、農医薬
の原料となるＤ−α−アミノ酸類の製造方法に関するも
のである。

（従来の技術とその問題点） Ｄ−α−アミノ酸の製造法の一つとして対応するＤＬ−
５−置換ヒダントインを化学的に水解してDL−α−アミ
ノ酸を製造し、これを光学分割してＤ−α−アミノ酸と
する方法が知られている。しかし、この方法は特に光学
分割の工程が煩雑でありその収率も高くない。又Ｄ−α
−アミノ酸の改良製造法としてＮ−カルバモイル−ＤＬ
−α−アミノ酸を酵素法によりＤ−α−アミノ酸とする
方法が知られている。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、この様な従来の製造法に対しより効率の
よい方法を見い出すべく研究した結果、キャンディダ属
に属する微生物にＮ−カルバモイル−ＤＬ−α−アミノ
酸をＤ−α−アミノ酸に変換する能力の有することを見
い出した。

ところで、Ｎ−カルバモイル−ＤＬ−α−アミノ酸を酵
素法によりＤ−α−アミノ酸にする方法において、次の
微生物を用いる事はすでに知られている。特開昭５５−
８８６９７には、シュードモナス属、アースロバクター
属、アルカリゲネス属、アクロモバクター属、モラキセ
ラ属またはパラコッカス属が又、特開昭５５−１０４８
９０にはアエロバクター属、アエロモナス属、ブレビバ
クテリウム属、バチルス属、フラボバクテリウム属、サ
ルシナ属またはセラチア属が示されている。

しかし、キャンディダ属に属する微生物がＮ−カルバモ
イル−ＤＬ−α−アミノ酸をＤ−α−アミノ酸に変換す
る能力を有することは、知られていなかった。この発明
はこの知見に基いて更に研究した結果完成されるに至っ
たものである。

すなわち、本発明は、一般式(1) （式中、Ｒはアルキル基、置換アルキル基、アラルキル
基、置換アラルキル基、フェニル基、置換フェニル基、
フリル基、ピリジル基、チアゾリル基、イミダゾリル基
又はインドリル基を示す。）で表わされるＮ−カルバモ
イル−ＤＬ−α−アミノ酸に、カルバモイル基を除去す
る能力を有するキャンディダ・ビナリア（Ｃandida vin
aria）（FERM P-7845）を作用させてＤ−α−アミノ酸
に変換させることを特徴とする一般式(2) （式中、Ｒは式(1)と同様である。）で表わされるＤ−
α−アミノ酸の製造方法である。

本発明の方法で使用する微生物は土壌から採取、分離さ
れた酵母菌で、以下に示す菌学的性状の所見よりキャン
ディダ・ビナリアと同定した。

1.形 態 １）細胞の形状、大きさ：（１．２〜３．０）μｍ×
（３．０〜６．０）μｍ、楕円形、クリーム色 ２）胞子の形成：− 2.生理学的性質 １）生育の範囲：温度３７℃まで生育する。３９℃で生
育しない。

２）無機窒素源：硝酸塩 −、アンモニウム塩＋ ３）ビタミン要求性：− ４）糖の発酵性：Ｄ−グルコース−、ラクトース− Ｄ−ガラクトース−、ラヒノース− マルトース−、シュークロース− ５）糖類の資化性：Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−ガラクトース ＋ Ｄ−リボース − Ｄ−キシロース − シュークロース − マルトース − メリビオース − ラクトース − エタノール ＋ グリセロール ＋ 本微生物の培養に用いられる培地は、ＤＬ−５−置換ヒ
ダントインを含むほかは通常資化しうる炭素源及び微生
物の生育に必要な栄養素を含有させる通常の培地であ
り、培養は好気的条件下にpH＝４〜８、温度２５〜４０
℃の適当な範囲に制御しつつ行なえばよい。

本発明で用いられる微生物は自然界に存在する野生株か
ら脱カルバモイル反応の能力の有無を調べることによっ
て分離、選択されたものである。

この能力の検定方法としては例えば次の様な方法が用い
られる。検定微生物の培養液５mlを採取し、３５００rp
mで１０分間遠心分離する。この分離された菌体を殺菌
した生理食塩水で洗滌後２mlの０．５重量％濃度のＮ−
カルバモイル−Ｄ−バリンのリン酸バッファ（０．１
Ｍ、pH＝７．５）基質液中に分散させて３５℃、１６時
間反応させる。ついで10,000rpmで１０分間遠心分離し
て上澄液を得て、その上澄液をペーパークロマトグラフ
（展開液Bu−ＯＨ：酢酸：水＝４：１：１）にて分離後
ニンヒドリン発色させ発色後、発色部を切り取り更に７
５％エタノール溶液５mlにて抽出後、波長５７０ｎｍで
比色定量する。上記のようにしてカルバモイル基を除去
する能力を有すると認められた菌株を本発明で使用する
微生物とする。キャンディダ・ビナリアは前記の検定に
合格したものである。

Ｎ−カルバモイル−ＤＬ−α−アミノ酸に本発明のキャ
ンディダ・ビナリアを作用せしめる方法には、本微生物
の菌体または菌体処理物を水溶液中でＮ−カルバモイル
−ＤＬ−α−アミノ酸と接触させる方法があり、各種の
Ｄ−α−アミノ酸の製造に利用出来る。

本発明に使用される基質であるＮ−カルバモイル−ＤＬ
−α−アミノ酸には、具体例として、Ｎ−カルバモイル
−ＤＬ−アラニン、Ｎ−カルバモイル−ＤＬ−バリン、
Ｎ−カルバモイル−ＤＬ−ロイシン、Ｎ−カルバモイル
−ＤＬ−イソロイシン、Ｎ−カルバモイル−ＤＬ−メチ
オニン、Ｎ−カルバモイル−ＤＬ−フェニルグリシン、
Ｎ−カルバモイル−ＤＬ−ｐ−ヒドロキシ−フェニルグ
リシン、Ｎ−カルバモイル−ＤＬ−フェニルアラニン、
Ｎ−カルバモイル−ＤＬ−チロシン、Ｎ−カルバモイル
−ＤＬ−トリプトファン等が挙げられる。反応基質の反
応液中での濃度は０．１〜１０重量％の濃度まで用いる
ことができる。反応温度は２０〜６０℃の範囲にあり、
反応pHはpH＝５．０〜９．０の範囲にあり、特に好まし
くは温度３０〜４０℃、pH＝７．０〜８．０である。前
述したような脱カルバモイル反応によって生成したＤ−
α−アミノ酸の単離は、濃縮、中和、イオン交換樹脂処
理などの公知の方法を利用することにより目的物である
Ｄ−α−アミノ酸を取得することができる。

本発明の実施においては、技術常識に従い適宜界面活性
剤を併用することができる。

（発明の作用および効果） 本発明は、キャンディダ・ビナリアの微生物由来のカル
バモイル基を除去する能力によりＮ−カルバモイル−Ｄ
Ｌ−α−アミノ酸から容易に高収率でＤ−α−アミノ酸
を取得できるのでＤ−α−アミノ酸の製造に際し極めて
有利な方法である。

（実施例） 以下の例により本発明を具体的に説明するが本発明はこ
れらの例のみに限定されるものではない。

実施例−１ 表−１に示した培地を２５０ml三角フラスコに20ml入れ
１２０℃、１５分間殺菌した。

これに酵母ＹＭ培地で２８℃、４０時間培養したキャン
ディダ・ビナリア（Candida vinaria）（CMT-1012）を
１白金耳接種し２８℃、２４時間培養した。この培養液
を遠心分離して菌体を採取し、培養液と同量の 0.1Ｍリ
ン酸カリウムバッファ溶液にて１回洗浄し、菌体を集め
た。この菌体を、表−２に示すＮ−カルバモイル−ＤＬ
−α−アミノ酸のいずれか一種を10ｇ／含む 0.1Ｍリ
ン酸カリウムバッファ溶液（ｐＨ＝７．５）に30ｇ／
になるように添加し、その５mlを36℃で24時間反応し
た。生成する各種アミノ酸は前記の方法にて定量し、ま
た、これらのアミノ酸を分離・精製し、その旋光度を測
定した。その結果、生成するアミノ酸は、全ての場合、
Ｄ−体であることを確認した。それらの結果を表−２に
示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式(1) （式中、Ｒはアルキル基、置換アルキル基、アラルキル
   基、置換アラルキル基、フェニル基、置換フェニル基、
   フリル基、ピリジル基、チアゾリル基、イミダゾリル基
   又はインドリル基を示す。）で表わされるＮ−カルバモ
   イル−ＤＬ−α−アミノ酸に、カルバモイル基を除去す
   る能力を有するキャンディダ・ビナリア（Ｃandida vin
   aria）（FERM P-7845）を作用させてＤ−α−アミノ酸
   に変換させることを特徴とする一般式(2) （式中、Ｒは式(1)と同様である。）で表わされるＤ−
   α−アミノ酸の製造方法。