JPS61204197A - ステロ−ル脂肪酸エステルの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 星１１ｋＯ目Ｌｌ且Ｉ一 本発明は、ステロール類と脂肪酸とのエステルの新しい
製造方法に関する。

従　　来　　の　　技　　ｉ ステロールと脂肪酸とのエステルは、従来より、例えば
コレステリック液晶（特開昭５２−２４９９２号公報参
照）や医薬化粧用親水性基材（特開昭５２−４１２１５
号公報、特開昭５２−７９０３０号公報参照）等として
、各種分野で広く用いられている。

従来かかるステロール脂肪酸エステルは、専ら有機合成
法により製造されてきている。しかしながら一般に有機
合成法では苛酷な反応条件が採用され、しかも副反応等
が惹起する弊害は避けられず、反応及び引続く目的物の
単離精製に繁雑な操作、工程等を特徴とする特にステ０
−ル類の水酸基はセカンダリ−であり、しかもこれはス
テロイド骨格に近接しているために、通常の脂肪族セカ
ンダリ−アルコールと比較しても反応性が低下しており
、そのためにこれに脂肪酸を反応させ、脂肪酸エステル
を製造する場合、酸触媒を用いて高温で長時間反応させ
るか、脂肪酸を一旦酸無水物、酸ハライド等に変換させ
た後、エステル化反応を行なう必要がある。またステロ
イド骨格の４位に２個のメチル基を持ち、３位に水酸基
を持つトリメチルステロール等を原料とする場合、該化
合物はその４位の２個のメチル基の立体障害のために更
に反応性は低く、酸ハライドとしなければ脂肪酸とのエ
ステル化反応は困難である。しかるに各種用途に有用な
ものとして所望されるステロ−ルエステルは、一般に長
鎖脂肪酸のエステルであり、かかるエステル合成のため
に原料とする長鎖脂肪酸のハライドは、その入手が一般
に困難であり１、通常繁雑な工程を要して別途合成せね
ばならず、非常に高価なものとなる不利がある。加えて
かかる脂肪酸のハライドは、概して湿気により分解し易
く不安定であり、しかも反応時に刺激性、腐蝕性の生成
物を副生ずるおそれがあり、特殊な反応装置等を要する
不利もある。

発明が解決しようとする問題点 本発明者らは上記苛酷な反応条件を要し、高価で且つ不
安定な反応試薬等を必要とする有機合成によることなく
、所望のステロール脂肪酸エステルをより温和な条件下
に有利に収率よく製造できる方法を提供することを目的
として鋭意研究を重ねてきた。その結果、特定の酵素を
利用して上記目的に合致する新しいステロールエステル
類の製造技術を開発するに成功し、ここに本発明を完成
するに至った。

を解決するための　段 即ち本発明はリパーゼもしくはコレステロールエステラ
ーゼを用いて、分子内にステロイド骨格及び水酸基を有
する化合物と脂肪酸とを接触反応させることを特徴とす
るステロール脂肪酸エステルの製造方法に係わる。

本発明方法によれば、酵素作用を利用することによって
、従来の有機合成法に見られるごとき苛酷な反応条件を
採用したり、繁雑な操作等を要して原料を別途合成した
り、特殊な反応装置等を必要とすることなく、非常に温
和な条件下、通常常温常圧下に、容易にしかも収率よく
目的とするステロール脂肪酸エステルを製造でき、その
反応系からの分離精製等も容易に行ない得る。更に本発
明方法では、従来反応性に劣っており収率よく製造する
ことが困難であったエステルも容易に高収率で製造可能
である。

本発明方法においては、酵素としてリパーゼもしくはコ
レステロールエステラーゼを用いることが重要である。

ここでリパーゼとは、トリグリセライドを段階的にグリ
セリンと脂肪酸に加水分解する反応を触媒する酵素であ
り、コレステロールエステラーゼとは、コレステリンと
脂肪酸とのエステル結合を加水分解する酵素である。本
発明者らは、上記リパーゼ及びコレステロールエステラ
ーゼが各種ステロール類と脂肪酸とのエステル合成反応
を触媒することを始めて見出し、この反応を利用してス
テロール脂肪酸エステルを、容易に収率よく且つ工業的
規模で合成するに成功したものである。

本発明に用いられる上記リパーゼ及びコレステロールエ
ステラーゼは、その起源に特に制限はなく、各種微生物
、動物、植物起源のいずれでもよい。リパーゼの起源微
生物としては、例えばアクロモバクタ−イオファーガス
（Ａ　ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ＋ｏｒｕｒｇｕｓ）　
、アクロモバクタ−リボリテイカム（Ａｃｈｒｏｍｏｂ
ａｃｔｅｒ　　Ｉｉｐｏｌｙｔｉｃｕｍ　）　、クロモ
バクテリウム　ビスコサム（Ｃｈｒｏｍｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍｖｉｓｃｏｓｕｓ）　、コリネバクテリウム　ア
クネス（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ａｃｎｅ
ｓ　）　、シュードモナスエアルギノーサ（ｐ　５ｅｕ
ｄｏ鳳ｏｎａｓ　　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、シュード
モナス　フルオレスセンス （Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ
　）　、シュードモナス　フライ（Ｐｓｅｕｄｏｓ＋ｏ
ｎａｓ　　ｆｒａａｉ　）　、スタフイＯＤ’／カス　
アウレウス（Ｓ　ｔａｐｈｙ＋ｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅ
ｕｓ）　、アスペルギルス　ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ　　ｎ１ａｅｒ　）　、キャンディダ　シリント
ラシア（Ｃａｎｄｉｄａ　　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ　
）　、７ミコーラ　ランギノーサ（Ｈｕｍｉｃｏｒａ　
　Ｉａｎｕａｉｎｏｓａ）、ペニシリウム　力セイコラ
ム（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｃａｓｅｉｃｏｌｕｌ）　
、ペニシリウム　クルストサム（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍ　　ｃｒｕｓｔｏｓｕｍ　）　、ベニシリウムシクロ
ビウム（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕａ＋　　ｃｙｃｌｏｐｉ
ｕｍ　）　、ペニシリウム　ロキュフオーテイ（ｐｅｎ
ｉｃｉｌｌｉｕｌｒＯＱｔｌｅｆｏｒｔｉ）　、ｔ’ル
ロプシス　エノビ（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ　　ｅｒｎｏ
ｂｉｉ　）　、バシラス　ズブチルレス（Ｂａｃｉｌｌ
ｕｓ　　５ｕｂｔｉｌｌｓ）　、アルカリゲネス５Ｄ（
ＡＩＣａｌｉＯｅｎｅＳ　　Ｓｐ）　、サーモマイセス
　イバダネンシス（Ｔｈｅｒｍｏｕｃｅｓ　　Ｉｂａｄ
ａｎｅｎｓｉｓ　）等を例示できる。

またコレステロールエステラーゼの起源微生物としでは
シュードモナス属、例えばシュードモナス　エアルギノ
サ（Ｐ　ｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　　ａｅｒｕｇｉｎｏｓ
ａ）、シュードモナス　フルオレスセンス （ＰＳｅｕｄＯｍＯｎａＳ　　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ
　）　、シュードモナス　ノブエスピー、シュードモナ
ス　ディスモリティ力等、アクロモバクタ−属、例えば
アクロモバクタ−デリカチュラス（Ａ　ｃｈｒｏｍｏｂ
ａｃｔｅｒｄｅｌｉｃａｔｕｌｕｓ　）等、フザリウム
属、ノカルジア属、プサイトモナス属、ストレプトミセ
ス戊、キャンデイダ属、例えばキャンディダ　リボリテ
イ力、キャンディダ　トＯとカリス、キャンデイダ　イ
ンターメディア、キャンディダ　シリントラシア等をそ
れぞれ例示できる。

上記各酵素の大部分は、精製された酵素として市販され
ており、本発明ではこれらの市販品をそのまま用いるこ
とができるが、特にＩＩ製された市販品を用いる必要は
なく、例えば目的とする酵素の生産能を有する微生物菌
体そのもの、その培養液、該培養液を処理して得られる
粗酵素液や酵素を含む組成物等を利用することもでき、
また上記各酵素を常法に従い適当な担体等に固定化した
固定化酵素を用いることもできる。

本発明において上記リパーゼ又はコレステロールエステ
ラーゼを用いて合成反応される一方の原料としてのステ
ロール類とは、分子内にステロイド骨格と水酸基とを有
する化合物をいう。ここでステロイド骨格とは、式 で表わされる骨格であり、水酸基は上記骨格に直接結合
しているのが一般的である。本発明に用いられる上記ス
テ０−ル類の具体例としては、例えばコレステロール、
７−デハイドロコレステロール、β−コレスタノール、
コレステロール、ラドステロール、チモステロール、チ
モステノール、デスモスチロール、ブラシカステロール
、エルゴステロール、カンペステロール、β−シトステ
ロール、γ−シトステロール、α−スピナステＯ−ル、
スティグマステロール、ラノステＯ−ル、ジヒドａラノ
ステロール、アグノステロール、ジヒドＯアグノステロ
ール及び之等の混合物としての羊毛ロウより分離ｍ製し
て得られるイソコレステロール等を例示できる。

本発明において他方の原料とする脂肪酸は、炭素数が２
〜３２の飽和もしくは不飽和の脂肪酸のいずれでもよく
、之等は直鎖でも分岐鎖でもよい。

飽和の直談脂肪酸としては、例えば酢酸、酪酸、カプロ
ン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチ
ン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘ
ン酸、リグノセリン酸、セロチン酸、モンタン酸、メリ
シン酸、ｎ−トドリアコンタン酸等の炭素数が偶数であ
る飽和直鎖脂肪酸、及び例えばプロピオン酸、ｎ−吉草
酸、エナント酸、ペラルゴン酸、ヘンデカン酸、トリデ
カン酸、ペンタデカン酸、ヘプタデカン酸、ノナデカン
酸、ヘンエイコサン酸、トリコサン酸、ベンタフサン酸
、ヘプタコサン酸等の炭素数が奇数である飽和直鎖脂肪
酸を例示できる。

飽和の分岐鎖脂肪酸としては、例えばイソ酪酸、イソカ
プロン酸、イソカプリル酸、イソカプリン酸、インラウ
リン酸、１１−メチル−ドデカン酸、イソミリスチン酸
、１３−メチル−テトラデカン酸、イソパルミチン酸、
１５−メチル−ヘキサデカン酸、イソステアリン酸、１
７−メチル−オクタデカン酸、イソアラキン酸、１９−
メチル−エイコサン酸、α−エチル−ヘキサン酸、α−
ヘキシルデカン酸、α−ヘプチルウンデカン酸、２−デ
シルテトラデカン酸、２−ウンデシルテトラデカン酸、
２−デシルペンタデカン酸、２−ウンデシルペンタデカ
ン酸、式 ％式％ で表わされるファインオキソコール１８０１（日産化学
社製〕等を例示できる。また上記飽和の奇数分枝鎖脂肪
酸には、例えば６−メチル−オクタン酸、８−メチル−
デカン酸、１０−メチル−ドデカン酸、１２−メチル−
テトラデカン酸、１４−メチル−ヘキサデカン酸、１６
−メチル−オクタデカン酸、１８−メチル−エイコサン
酸、２０−メチル−トコサン酸、２２−メチル−テトラ
コサン酸、２４−メチル−ヘキサコサン酸、２６−メチ
ル−オクタコサン酸等の末端がイソブチル基であるアン
チイソ系の脂肪酸が包含される。

不飽和の脂肪酸としては、例えばトウハク酸、カプロレ
イン酸、リンデル酸、ラウロレイン酸、ツヅ酸、フイセ
トレイン酸、ミリストレイン酸、パルミトオレイン酸、
ペトロセリン酸、オレイン酸、エライジン酸、バクセン
酸、カドレイン酸、シス−１１−エイコセン酸、セトレ
イン酸、エルカ酸、セラコレイン酸、１７−へキサコセ
ン酸、６．９．１２．１５−へキサデカテトラエン酸、
リノール酸、リルン酸、α−エレオステアリン酸、β−
エレオステアリン酸、ブニカ酸、６，９゜１２．１５−
オクタデカテトラエン酸、パリナリン酸、アラキドン酸
、５．８．１１．１４．１７−ニイコサペンクエン酸、
７，１０．１３，１６゜１９−ドコサペンタエン酸、４
，７．１０，１３゜１６．１９−ドコサヘキサエン酸等
を例示できる。

また本発明に用いられる脂肪酸は、分子内に水酸基を有
するオキシ脂肪酸であってもよい。このオキシ脂肪酸と
しては、例えばα−ヒドロキシラウリル酸、α−ヒドロ
キシミリスチン酸、α−ヒドロキシパルミチン酸、α−
ヒドロキシステアリン酸、ω−とドロキシラウリル酸、
α−ヒドロキシアラキン酸、９−ヒドロキシ−１２−オ
クタデセン酸、リシノール酸、α−ヒドロキシベヘニン
酸、９−ヒドロキシ−トランス−１０，１２−オクタデ
カジエン酸、カモレン酸、イブロリル酸、９．１０−ジ
ヒドロキシステアリン酸、１２−ヒドロキシステアリン
酸等を例示できる。

更に上記脂肪酸は、例えばシュウ酸、マロン酸、コハク
酸、ゲルタール酸、アジピン酸、ピメリン酸、セベリン
酸、アゼライン酸、セバシン酸、Ｄ。

し−リンゴ酸等のポリカルボン酸であってもよい。

上記脂肪酸は、その一種を単独で本発明の反応に利用し
てもよく、上記例示の同一群又は異なる群に属する二種
以上を混合して本発明に用いることもできる。二種以上
を併用する場合には、脂肪酸原料として、例えば飽和の
直鎖及び分岐脂肪酸並びにオキシ脂肪酸の混合物である
ラノリン脂肪酸等を有利に用いることができる。

本発明反応は、上記ステロール類と脂肪酸とを基質とし
て、之等をリパーゼ又はコレステロールエステラーゼの
存在下に接触させることにより進行する。上記接触は、
両基質と酵素の水溶液とを単に混合するのみで行なうこ
とができ、従って反応系は通常水系であるが、他の適当
な有機溶媒、例えばｎ−ヘキサン、ローへブタン、ｎ−
オクタン、イソオクタン、シクロヘキサン、ｎ−デカン
、ｎ−トリデカン、ｎ−テトラデカン、ｎ−ヘキサデカ
ン、ポリブテン、ジイソブチレン、流動パラフィン、ス
クワラン、スクワレン、プリスタ等の炭化水素系溶媒を
用いた有機溶媒系とすることもできる。かかる有機溶媒
の利用によれば、反応系の物理的性状が改善され、上記
接触がより良好となる場合があり、また得られるエステ
ル類や用いた酵素の反応系からの分離回収がより効率よ
く行える場合がある。また上記混合は反応系をより均一
なものとするため通常撹拌により行なわれるのが望まし
い。反応条件は、用いられる酵素の失活がないかこれが
最小限に抑制される条件であればよく、通常酵素の最適
１１Ｈ及び最適温度条件が採用される。一般に上記温度
としては、約１０〜６０℃の範囲が好適である。ｐＨは
、用いる酵素に応じてアルカリ性、中性及び酸性のいず
れかが採用され、このｐＨを調節するために適当な酸や
アルカリ、例えば塩酸、硫酸等や水酸化ナトリウム、水
酸化カリウム等及び例えばリン酸ａｍ液等の適当な緩衝
液を、必要に応じて、反応系内に添加することもできる
。

また上記反応系内には、両基質と酵素との接触性を高め
るために、例えば「ツイーン８０」　（正正アトラス社
製）、［トリトンＸ−１００４（ローム　アンド　ハー
ス社製）等の酵素阻害のない適当な界面活性剤等を加え
ることもできる。更に用いる酵素の賦活因子として知ら
れている例えばカゼイン、アルブミン、カルシウムイオ
ン、胆汁酸及びその塩等を添加することもできる。

反応系内に存在させる酵素及び両基質の比率は、それら
の種類、反応条件等に応じて適宜選択され特に制限はな
いが、通常酵素は原料ステロール１０当り、リパーゼに
ついては、約１〜１０万単位、好ましくは５０００〜５
万単位程度、コレステロールエステラーゼについては約
１〜１０万単位、好ましくは５００〜５万単位程度とす
るのがよい。

両基質の使用比率も任意に決定でき、特に制限はないが
、通常ステロールに対して脂肪酸を約１〜２０倍モル量
、好ましくは約３〜６倍モル農用いるのがよい。反応は
水媒系でも有機溶媒系でも行なうことができるが、反応
系内には、原料ステロール１ｇに対して少なくとも約０
．１１１２、通常的１−以上の水が存在することが好ま
しい。一般に水媒系ではステロールに対して水を約５〜
５００倍重量用いるのがよく、これにより反応は有利に
進行する。また有機溶媒系を採用する場合、溶媒の使用
量は、該溶媒の種類によっても若干異なるが、例えばイ
ソオクタンでは、通常イソオクタン／水が約ｏ、ｏｏｉ
〜１００重量比、好ましくは０．０１〜１０重量比とな
る範囲で使用され、この場合も全溶媒（有様溶媒＋水）
の使用量はステロールに対して約５〜５００倍重量とす
るのが望ましい。他の有機溶媒も上記イソオクタンと略
々同様の範囲で用いることができる。

本発明反応は、反応条件、用いられる酵素の種類、使用
量、基質の種類、使用比率等により異なるが、通常約３
０分〜１２０時間で終了する。

本発明では上記反応終了後、目的物を常法に従い反応系
より分離し、必要により精製する。反応系からの目的物
の単離精製操作としては、例えば反応液をエーテル等の
適当な溶剤を用いて抽出し、未反応の脂肪ＷＩ原料をア
ルカリ脱酸により除去し、溶剤層を脱水乾燥した後、溶
剤を除去する方法を例示できる。かくして得られる粗ス
テロール脂肪酸エステルのｍ製は、常法に従い例えばカ
ラムクロマトグラフィー等により行ない得る。

かくして得られるステロール脂肪酸エステル、は、この
種ステロール脂肪酸エステルが従来利用されている各種
の広範な用途に利用できる。

衷−ｍｍよ 以下、本発明を更に詳しく説明するため実験例及び実施
例を挙げる。

尚、各側において酵素量の表示は、以下に示す方法によ
り求められた国際単位を用いた。

くリパーゼの活性測定〉 ポリビニルアルコールの溶液（「ポバール＃１１７Ｊ（
倉敷レーヨン社製）１８ｇと［ポバール＃２０５Ｊ　（
同上社製）２ｇとを水８０〇−に懸濁し、７５〜８０℃
に加温撹拌して完全に溶かした後、冷即し、これに水を
加えて１０００ｍとしたもの）７５−に、オリーブ油２
２．９りをホモジナイザーにて乳化して！！製したオリ
ーブ油乳化液５舗とＯ，ＩＭリンＷＩ榎衝液４−との混
液に、試料酵素液１鵬を加え、マグネチツクスタラーで
５００　ｒｐｍで撹拌しつつ３７℃で２０分間反応させ
、次いでこれにエチルアルコール４０−を注加して、０
．０５Ｍ水酸化カリウム溶液で遊離脂肪酸を滴定する。

この条件で１分間に１μモル当量の脂肪酸を遊離する酵
素量を１ｒＢ際単位（ｔＪ）とする。

くコレステロールエステラーゼの活性測定〉コレステロ
ールエステラーゼの１単位（１Ｕ）とは、子牛血清を基
質として３７℃で１分間に１μモルのコレステロールを
遊離させる活性であり、以下の反応液、酵素溶液を用い
て遊離コレステロールをコレステロールオキシダーゼで
酸化し、生成する過酸化水素をパーオキシダーゼで比色
定ｌすることにより求められる。

反応液組成 ００．２Ｍリン酸緩衝液（１）　８６．５）　　０．６
＋＋＋ＧＯパーオキシダーゼ〔シグマケミカル 社製、タイプＩ［ＮＯ，Ｐ−８２５０：ｌ　　　　０．
３ＩＩ１２００．３５％４−アミノアンチピリン 水溶液　　　　　　　　　　　　　　０．３１１Ｇｏ０
．２ｗ／ｗ％フェノール水溶液　　０．３１１１２０コ
レステロールオキシダーゼ水溶液 〔東洋醸造社製、プロダクトＮ　Ｏ，Ｔ　−０４を０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０，０，０５ｗ／ｖ％のト
リトンＸ−１００を含む）で１０Ｕ／−とする〕　　　
０．６鵬０子牛血清〔グランド　アイランド バイオロシカ／Ｌ、（ＵＳＡ）社製）　　　０．３ｍ１
２０蒸−留　　　　　水　　　　　　　　　　　　　　
０．３−試料酵素溶液としては、酵素をＩＯＩＭリン酸
！ｌ衝液（ｐＨ７，５，０，１％アルブミンを含む）に
溶かして約１Ｕ／−に調製して用いる。上記反応液３１
！Ｉｌｌを比色用セルに入れ、３７℃で１０分間インキ
ュベートし、０．０５−の試料酵素溶液を加え、静かに
転ｌＩ混合し、４９３　ｒｖで経時測定を行ない、吸収
の増加率（ΔＡＳ／分）を測定する。

同じことを試料酵素溶液の代りに、希釈用緩衝液を用い
て行ない増加率（ΔＡｂ／分）を求める。

上記吸収増加率の差（ΔＡ／分−ΔＡｓ−ΔＡｂ＞が０
．０５以下の時は、これが０．０５以上になるまで試料
酵素溶液の濃度を高くして操作を繰返す。酵素活性（Ｕ
／ｌ１ｌ（Ｉｆ）は、次式により算出される。

酵素活性（Ｕ／Ｉｌ＋（１）− また目的エステルの合成率は、次の方法により算出した
。即ち、反応終了後、反応液を酸性とし、ジエチルエー
テルにて４回抽出し、水洗後、脱水乾燥してジエチルエ
ーテルを留去し、全脂買弁を得、これに既知量の内部標
準物質（ｎ−トドリアコンタン）を加えて定ｌ用試料と
する。この試料をクロマロッド（石英ロッドにシリカゲ
ルを溶着したもの、ヤトロン社製、クロマロッドＳｎ）
にチャージし、展開して、イアトロスキャンＴＨ−１０
（ヤトロン社製）及びＦＩＤ（水素炎イオン化方式）検
出器にかけて、合成されたエステルの量を求め、これを
反応液の仕込み量より算出されるステロール基準の理論
合成エステル量で除して合成率とする。

各実験例では、特に断わらない限り、反応液の撹拌混合
は、２０　ｗａｘ　３００　Ｃ１）ｌの試験管振盪培！
ｌ１ｌ（いわしや生物科学社製、ＲＭＲ−３−２０）に
て行なった。また実験例１〜８では、酵素としてキャン
ディダ　シリントラシア（Ｃａｎｄｉｄａｃｙｌｉｎｄ
ｒａｃｅａ　）由来のリパーゼ（「リパーゼＭＹＪ名糖
産業社製）を用いた。他の例では各個毎に示す。

実験例１ この例は、エステル合成率と基質量の関係を明らかにす
るものであり、ステロール類としてコレステロールを用
い、その一定量（０，１＋１１　）に対して脂肪酸とし
てのオレイン酸を種々変化させさせた量で用い、一定濃
度のリパーゼ０．５ｍＱ（５００Ｕ）の存在下に、両者
を、３７℃で１８時間撹拌混合して反応させた。結果を
下記第１表に示す。

第　　１　　表 試験例　オレイン酸量　エステル合成率Ｎｏ、　　　　
（ｇ）　　　　　　　（％）１　　　０．０７　　　　
５８．５ ２　　　０．１　　　　　７７．９ ３　　　０．１５　　　　８３．０ ４　　　０．２２　　　　８７．７ ５　　　０．２９　　　　８８．６ ６　　　０．３７　　　　８９．７ ７　　　０．４４　　　　９１．８ ８　　　０．６６　　　　９２．０ 上記第１表より、コレステロール１重量に対してオレイ
ン酸を約１〜６倍重量用いることにより、はぼ８０％以
上の合成率をもって目的とするコレステロールのオレイ
ン酸エステルを合成できることが判る。またオレイン酸
を２〜６倍重！（３〜９倍モル）を用いる場合に速やか
に、最も高い合成率をもって目的エステルが合成できる
ことが判る。

実験例２ この例は、反応系の水量が目的エステルの合成率にいか
なる影響を与えるかを調べるために行なったものである
。実験は、コレステロール０．１Ω及びオレイン酸０．
２２ｇを用いて、これにリパーゼ０．５鵬（５００Ｕ）
を作用させる時、水０．５−１１．０ｎＩｉ２．２．０
ＩＱ、４．Ｑｍｌ及び６．０−を添加してそれぞれ反応
させることにより行なった。各反応による合成率を求め
た結果を下記第２表に示す。

第　　２　　表 試験例　　水　量　　　エステル合成率ＮＯ９（絨）　
　　　　　（％） １　　　０　　　　　　　８７．５ ２　　　０．５　　　　　９７．６ ３　　　１．０　　　　　９７．４ ４　　　２．０　　　　　９８．２ ５　　　４．０　　　　　９７．４ ６　　　６．０　　　　　９６．９ 上記第２表より、水の添加ｌは約１〜３ｍＱ（コレステ
ロールに対して約１０〜３ｏｍｅ倍）とするのが好まし
いことが判る。

実験例３ この例は、反応系を有ｔｉ溶媒系とした場合のエステル
合成率を求めたものである。実験は、実験例２において
水の代りに、水で飽和させたイソオクタン、ｎ−オクタ
ン又はｎ−ヘキサンのそれぞれ所定量を用いて、同様に
した。結果を下記第３表に示す。

第　　３　　表 ２　　インオクタン　（１）　　　９６．２３　　　　
　　　　　　（２＞　　　９６．７４　　　　　〃　　
　　（４）　　　９１．４５　　　　　　　　　　（６
）　　　８３．４６　　　　　　　　　　（８）　　　
７８．８７　　　　　＃（１０６７，６゛ 延１１ＮＯ＝　　　　　　　　　　　媒　　Ｗｌ１２　
　　　金」１ｍニー８　０−オクタン　（１）　　　８
３．５９　　　　　　　　　　　　　　＜２）　　　　
　７８．１１０　　　　　　　　　　　　　　（４）　
　　　　２９．８１１　　　　　　　　　　　　　　　
（６）　　　　　１３．９１２　　　　　　　　　　　
　　　（８）　　　　　　８．５１３　　　　　　　　
　　　　　（１０）　　　　　　７．７１４　　　ｎ−
ヘキサン　（１）　　　７６．４１５　　　　　　　　
　　　　　　　（２）　　　　　６８．８１６　　　　
　　　　　　　　　　　（４）　　　　　２９．６１７
　　　　　　　　　　　　　　　（６）　　　　　１１
．０１８　　　　　　　　　　　　　　　（８）　　　
　　　９．５１９　　　　　　　〃　　　　　（１０６
，６第３表より、上記系ではイソオクタンが最も酵素の
失活が少ないことが判る。該イソオクタンは、０．５〜
３ＷｆＪの添加により目的とするエステルの合成率を顕
著に向上できた。

実験例４ この例は、水とイソオクタンとの系での目的エステルの
合成率を調べたものであり、実験例２に示した反応系に
イソオクタン２．０ＩＱを加え、これに更に水の所定温
を添加して、同条件下に反応を繰返した。結果を下記第
４表に示す。

第　　４　　表 試験Ｎｏ、　　水の添加量　　金」＆」Ｌ」！翫」−１
０（無添加’）　　　７３．０ ２　　　　　１　　　　　９２、７ ３　　　　　２　　　　　９４、６ ４　　　　　４　　　　　９６、６ ５　　　　　６　　　　　９６、８ ６　　　　　７　　　　　９６、５ ７　　　　　８　　　　　９７．５ ８　　　　　９　　　　　９４、９ ９　　　　１０　　　　　９５、５ 実験例５ この例は実験例４と同様に水とインオクタンとの混合溶
媒系での反応において水の量を２．０ＩＱに固定し、イ
ソオクタンの添加量を変化させたときの目的エステルの
合成率の変化を調べたものである。条件は実験例４に同
じである。結果を下記第５表に示す。

第　　５　　表 １１又Ｌ　イソオクタン添加量　合成率（％）１　　０
（無添加）　　　　　８７．９２　　　　０、５　　　
　　　９４．９３　　　　１．０　　　　　　９５．１
４　　　　１、５　　　　　　９６．４５　　　　３、
０　　　　　　９４．０６　　　　４、０　　　　　　
９０．４７　　　　６、０　　　　　　８３．４８　　
　　８、０　　　　　　７１．５第５表より、水２ＩＱ
とイソオクタン０．５〜３．０ｍ（ステロールの５〜３
０倍）との併用が合成率を顕著に向上させることが判る
。

実験例に の例は、脂肪酸が固体の場合に有機溶媒を用いた系での
反応と水系での反応とを対比したちのである。条件は実
験例１と同様とした。但し有機溶媒系の反応の場合は、
反応液に更にｎ−オクタン２．０１１２及び水７．５１
１１Ｇを加え、水系の反応の場合は水２．０１１１２を
加えた。固体の脂肪酸としてはバルミチン酸及びステア
リン酸を用いた。結果を第６表に示す。第６表には参考
のため常温液状のオレイン酸を用いた場合の結果を併記
する。

第　　６　　表 １　　パルミチン酸　９９．０　９１．６２　　ステア
リン酸　９８．５　５１．６３　　オレイン？ｍ　　　
９６．５　９１．６上記第６表より、特にステアリン酸
の場合には、有機溶媒の使用が合成率向上に顕著な効果
を発揮することが判る。

実験例７ この例は、コレステロール０．１ｇ、オレイン酸０．２
２ａ、ｎ−オクタン２．０−及び水８．０−の反応液系
内に、種々の濃度のリパーゼ溶液０．５！１１２を加え
、酵素の濃度とエステル合成率との関係を求めたもので
ある。反応条件は実験例１と同じく３７℃、２０ｕｘ３
００ｃｐｍ　、１８時間）である。結果を第１図に示す
。第１図は、縦軸にエステル合成率（％）を、横軸に酵
素単位（国際単位、Ｕ）をとり、各酵素単位で酵素を利
用した時の合成率をプロットしたものである。

第１図より、コレステロール１ｇに対して、約５０００
Ｕの酵素があれば、反応は速やかに進行し、高収率で目
的エステルの合成が行ない得ることが判る。

実験例８ この例は、実験例７において、１８時間の反応で約３０
〜４０％の合成率を示す醇素量（約１００ＬＪ）のリパ
ーゼを用いた場合、作用時間を更に延長してその反応時
間とエステル合成率との関連を求めたものである。

結果を下記第７表に示す。

第　　７　　表 実ＪＩＩＮｏ０反応時間（ｈｒ、）　　合成率（％）１
　　　　　１６　　　　　４５．６ ２　　　　　２４　　　　　５７、７ ３　　　　　４０　　　　　６５、８ ４　　　　　４８　　　　　７０、０ ５　　　　　６４　　　　　７４、４ ６　　　　　７２　　　　　７４、９ ７　　　　　９６　　　　　７８、０ ８　　　　１２０　　　　　７９．８ 第７表より、酵素を１００Ｕ用いる場合でも、反応時間
を１２０時間に延長すると、目的エステルの合成率を約
８０％にできることが判る。

実験例９ 第８表に示すステロール類（使用１０．ｉｏ　）、脂肪
酸及び酵素のそれぞれ所定量を用い、同表に示す反応系
（水及び有機溶媒）を採用して、実験例１と同様にして
目的エステルを合成し、その合成率を調べた。結果を第
８表に併記する。

但し、第８表中ステロール類、脂肪酸、酵素及び有機溶
媒における記号は次のものを示す。

くステロール類〉 Ａ−１・・・・・・コレステロール Ａ−２・・・・・・β−シトステロールＡ−３・・・・
・・スティグマステロールＡ−４・・・・・・β−コレ
スタノールＡ−５・・・・・・エルゴステロール Ａ−６・・・・・・イソコレステロール〈脂　　肪　　
酸〉 Ｂ−１・・・・・・オレイン酸 ８−２・・・・・・バルミチン酸 Ｂ−３・・・・・・ステアリン酸 Ｂ−４・・・・・・リノール酸 Ｂ−５・・・・・・α−ヒトＯキシバルミチン酸８−６
・・・・・・ラノリン脂肪酸 く醇　　　素〉 Ｅ−１・・・・・・リパーゼＭＹ（名糖産業社製、キャ
ンディダ　シリントラシア由来） Ｅ−２・・・・・・リパーゼＴ−０１（東洋醸造社製、
クロモバクテリウム　ビスコサム由来） Ｅ−３・・・・・・リパーゼ「アマノＪＡ（大野製薬社
製、アスベリギルス属由来） Ｅ−４・・・・・・リパーゼ［アマノＪＰ（同上社製、
シュードモナス属由来） Ｅ−５・・・・・・コレステロールエステラーゼＴ−１
８（東洋醸造社製） Ｅ−６・・・・・・コレステロールエステラーゼ（キャ
ンディダ　シリントラシア由来） く有機宕媒〉 Ｓ−１・・・・・・ｎ−オクタン Ｓ−２・・・・・・イソオクタン 第　　８　　表 試験　　　　　　　　ステ　　脂　肪　酸　　水　有機
溶媒　　　合成率Ｎｏ、酵　素（Ｕ）Ｏ−（対ステロ　
（舗）　　　　（１１１０）　　　　（％）ル　　　−
ル、モル） １　　Ｅ−１（５（Ｘ））　　Ａ−Ｉ　　Ｂ−１（３）
　　８　　Ｓ−１（２＞　　９６．５２　　Ｅ−１（５
００）　　Ａ−２Ｂ−１（３）　　８　　Ｓ−１（２）
　　９５．５３　　Ｅ−１（５００）　　Ａ−３Ｂ−１
（３）　　８　８−１　　（２）　　６９．０４　　Ｅ
−１（５００）　　Ａ−４Ｂ−１（３）　　８　　Ｓ−
１（２）　　９２．８５　　Ｅ−１（５００）　　　Ａ
−５Ｂ−１（３）　　　８　　Ｓ−１（２）　　　５５
．０６　　Ｅ−１（５００）　　Ａ−６Ｂ−１（１，４
）　　ＯＳ−２（４，３＞　　７０．４７　　Ｅ−１（
５００）　　Ａ−Ｉ　　Ｂ−１（３）　　８　３−１　
　（２）　　９６．５８　　Ｅ−１（５００）　　Ａ−
Ｉ　　Ｂ−２（３）　　８　　Ｓ−１（２）　　９９．
０９　　Ｅ−１（５００）　　Ａ−Ｉ　　Ｂ−３（３）
　　８　　Ｓ−１（２）　　９８．５１０　６−１（５
００）　　Ａ−Ｉ　　Ｂ−４（３）　　８　　Ｓ−１（
２）　　９６．５１１　２−１（５００）　　Ａ−Ｉ　
　Ｂ−５（３）　　８　　Ｓ−１（２）　　３５．０１
２　２−２（１０００）　　Ａ−Ｉ　　Ｂ−６（３）　
　２　−　　（０）　　５５．０１３　　Ｅ−２（１０
００）　　Ａ−Ｉ　　Ｂ−１（３）　　８　　Ｓ−２（
２）　　８５．３１４　　Ｅ−３（１０００）　　Ａ−
Ｉ　　Ｂ−１（３）　　２　８−２（０，５）　　５５
．２１５　６−４（１０００）　　Ａ−Ｉ　　Ｂ−１（
３）　　８　８−２　　（２）　　５２．４１６　　Ｅ
−５（５００）　　Ａ−Ｉ　　Ｂ−１（３）　　８　　
Ｓ−１（２）　　９７．７１７　６−５（５００）　　
Ａ−２Ｂ−１（３）　　８　　Ｓ−１（２）　　８８．
３１８　６−６（５００）　　Ａ−Ｉ　　Ｂ−１（３）
　　８　　Ｓ−２（２）　　９５．０実施例１ コレステロール１０Ｑ、オレイン！１２２ｇ、イソオク
タン５０ｍＧ、リパーゼＭＹ（名糖産業社製）５０１１
１１１　（５００００ＬＪ）を含む反応液を、２０Ｏｒ
ｐｍの速度で撹拌しながら、３７℃で１８時間反応させ
た。この反応液にエーテルを加え、重曹水で洗浄しなが
ら水層を除去し、この処理を数回繰返した後、エーテル
層を無水１ａ酸ナトリウムで脱水乾燥した。次いでエー
テルを留去し、白色半透明の粗コレステロールオレイン
酸エステルを得た。

この粗コレステロールオレイン酸エステルの純度は９６
．３％であり、収量は１６．０（Ｊ（収率９５．０％）
であった。

上記で得た粗生成物６ｇをシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（ワコーゲルＣ２００、和光純薬社製、１６０
（１）にチャージし、ベンゼン２０００ｍ１２で溶出し
て、コレステロールオレイン酸エステル５．３ｇを得た
。このものの赤外線吸収スペクトル（ＩＲＥ、融点、薄
層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）上での発色、Ｒｆ値は
、標準品のコレステロールオレイン酸エステルのそれと
完全に一致した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、酵素の使用量と目的エステルの合成率との関
係を示すグラフである。 （以　上） 代理人　弁理士　三　枝　英　二　　・ｉ、、：：Ｈ１
′　−１・ 手続補正書（自制 昭和６０年８月９日 １　事件の表示 昭和６０年特許願第４５１２８号 ２　発明の名称 ステロール脂肪酸エステルの製造方法 ３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 古川製油株式会社 ４代理人 大阪市東区平野町２の１０　沢の鶴ビル（６５２１）弁
理士　三枝英二 ５　補正命令の日付 自発 ６　補正の対象 明細書中「発明の詳細な説明」の項 ７　補正の内容 別紙添付の通り 補正の内容 ］）　明細書第６真下から第３行に「等を」とあるを次
の通り訂正する。 「等のアクロモバクタ−属、クロ七バクテリウム属、コ
リネバクテリウム属、シュード−しナス属、スタフィロ
コッカス属、アスペルギルス属、キャンデイダ属、フミ
］−ラ属、ペニシリウム居、トルロプシス属、パシラス
屈、アルカリ土類金属、サーモマイセス属等に属する各
種微生物」 ２）　明細書第８頁第４行に「合成反応」とあるを「合
成」と訂正する。 ３）　明細書第９頁第２行に「スティグマステロール、
」とあるを「スティグマステロール等、トリメチルステ
ロールとして」と訂正する。 ４）　明細書第９頁第６行に「ロール等」とあるを「ロ
ール、シクロアルテノール等」と訂正する。 ５）　明細円筒１３真下から第３行に「プリスタ」とあ
るを「プリスタン」と訂正する。 ６〉　明細書第１４頁第１０行に「好適である。」とあ
るを次の通り訂正する。 ［好適であるが、耐熱性リパーゼ等を用いる場合には、
該酵素に応じてより高温を採用することもできる。］ ７）　明細書第１４真下から第１行に「等の」とあるを
１等の非イオン系界面活性剤等の」と訂正する。 ８）　明細書第１５頁第１２行に「決定でき、」とある
を「決定でき、いずれを過剰としてもよく」と訂正する
。 ９）　明細書第２０頁下から第５行に「社製）及びＦＩ
Ｄ（水素」とあるを「社製、ＦＩＤ水素」と訂正する。 １０）　　明細書第２０頁下から第２行に「ステロール
基準の」とあるを削除する。 １１）　明細書第２１真下から第４行に「リパーゼ」と
あるを１リパーゼ水溶液」と訂正する。 １２）　明細書第２３頁第８行に「反応」とあるを「反
応（条件は実施例１に同じ。）」と訂正する。 １３）　明到書第３３頁に記載の第８表中、「試験ＮＯ
，１８Ｊの項の後に下記「試験Ｎｏ、１９」及び［試験
ＮＯ，２０ｊを追加補充する。 ｒ１９　　Ｅ−３（１０００）　Ａ−６Ｂ−１（３）　
　８　　Ｓ−２（２）　　６３．０２０　　Ｅ−１（１
０００）　Ａ−４Ｂ−３（３）　　８　　Ｓ−２（２）
　　９９．２Ｊ１４）　明細書第３４頁第１行に「実施
例１」と必るを次の通り訂正する。 「実験例１０ コレステロール０．１ｃ＋に対して、３７°Ｃにて、第
９表に示す脂肪酸（対ステロール３モル）及び酵素（１
０００Ｕ）をそれぞれ用い、イソオクタン１０．０５Ｍ
リン酸バッファＤ）Ｈ７）＝３ｍ１２／７ｍｆ２の反応
系を採用して同表に示す反不時間での目的エステルの合
成率を調べた。その結果を第９表に併記する。但し、第
９表中の酵素にお（プる記号は、第８表と同じでおり、
脂肪酸におりる記号は第８表と同じであるか又は次のも
のを示す。 〈脂肪酸〉 Ｂ−７・・・プロピオン酸 Ｂ−８・・・カプリン酸 Ｂ　−９・・・リグノセリン酸 Ｂ−１０・・・コハク酸 Ｂ−１１・・・セバシン酸 第　　９　　表 実験例１１ コレステロール０．１ｑ、オレイン酸 ０．２２にｌ、’）パーｔＭＹ１０００Ｕ、　イ’＃ク
タン１０．０５Ｍリン酸バッファ（ｐＨ７）＝２＋ｎＱ
／８ｍ１２よりなる反応系を採用し、３７℃にて反応を
行ない合成率の経時変化を調べた。 その結果を第１０表にイガ記する。 第１０表 実験例１２ この例は、コレステロール０．１Ｃ］、オレイン酸０．
２２Ω、リパーゼＭＹ５００ｔＪ及び有機溶Ｗ１０．０
５Ｍリン酸バッファ（ｐＨ７、０＞　＝　２ｍ（？／８
ｍＧからなる反応系を用イテ３７°Ｃで６時間反応させ
て有機溶媒の種類によるコレステロールオレイン酸エス
テル合成率の変化を調べたものである。 有機溶媒としては、以下のものを用いた。 Ｓ−２・・・イソオクタン Ｓ−３・・・シクロヘキサン Ｓ−４・・・ｎ−ヘキサデカン Ｓ−５・・・［アイビーソルベント１０１６Ｊ（出光石
油化学■社製、Ｃａ：６３ ％、Ｃ９：３０％を主成分とするイ ソパラフィン系有機溶媒混合物 Ｓ−６・・・［アイソパーＥｌ　　（エクソン化学社製
、Ｃａ：２５〜３５％、Ｃ９ニ ア５〜６０％を主成分とするイソパ ラフィン系有機溶媒混合物 結果を下記第１１表に示す。 試験ＮＯ，有機溶媒　　合成率（％） １　　　　　　　Ｓ−２９７，０ ２３−３９６，８ ３３−４９６，７ ４３−５９６，０ ５３−６９６，０ 実施例１」 １５）　明細書第３４頁第３〜４行に「リパーゼ・・・
（５００００ｔＪ）Ｊとあるを「リパーゼＭＹ（８糖産
業社製）水溶液２００ｍＱ（５００００Ｕ）Ｊと訂正す
る。 １６）　明細書第３５頁第２行に「・・・一致した。」
とあるを次の通り訂正する。 ［・・・・・・一致した。 実施例２ コレステロール１ｑ、イソステアリン酸（エメリーイン
ダストリイー社製＞２．２ｃｘ、リパーゼＭＹ０．３３
３ｇ（１００００ＬＩ）、イソオクタン３０ｍＧ及び０
．０５Ｍリン酸バッファ８０ｍ（１を含む反応液を、２
０　Ｏｒｐｍの速度で撹拌しながら、３７℃で４５時間
に亘って、反応させた。この反応液を反応途中で逐次サ
ンプリングして、目的エステルの合成率を調べたところ
、３時間で２８．５％、２３時間で８５．９％及び４５
時間で ９１．０％であった。 反応開始４５時間で、反応を停止させ、メタノール水溶
液抽出を行ない、抽出液よりイソオクタン層を留去して
、未反応コレステロール０．０９Ｑ、未反応イソステア
リン酸１．５３ＣＩ及び目的とするイソステアリン酸エ
ステル１．５４ＣＩを得た。 得られたイソステアリン酸エステルは、ＴＬＣにて単一
スポットを与え、イアトロスキャン分析では純度１００
％でめった。」（以　上） 手　　続　　補　　正　　書　（自発）昭和６１年６月
２日 １　事件の表示 昭和６０年特許願第４５１２８号 ２　発明の名称 ステロール脂肪酸エステルの製造方法 ３　補正をづる者 、パ 事件との関係　特許出願人　　　　　　（。 ゝ・、−二 古川製油株式会社 ４　　代　　理　　人 大阪市東区平野町２の１０　沢の鶴ビル６　補正の対象 明細書中ｆ発明の詳細な説明」の項 ７　補正の内容 ２フベ ５１１１組添付の通り 補　　正　　の　　内　　容 １　明細書第４頁第１９〜２０行に［トリグリセライド
を段階的に」とあるを「グリセライドを」と訂正する。 ２　明細書６頁最下行に「起源微生物」とあるを「起源
としては、哺乳動物の各種組織、例えば膵臓、肝臓、脳
、副腎、翠丸、卵巣等の他、微生物」と訂正する。 ３　明ａｍ第７頁第９行に［プサイトモナス属、］とあ
るを削除する。 ４　明細書第２０頁最下行に「とする。」とあるを次の
通り訂正する。 「とする。但し実験例１０〜１３及び実施例２及び３に
おける合成率は、以下の方法により求めた。即ち、反応
終了後、反応液を水−有機溶媒２相系とし、有機溶媒相
を分ｍ後、その濃度を適当に調整し、り０マロツドに脂
買弁として２０〜４０μ９程度チャージし、目的エステ
ルと未反応基質が分離する適当な条件（例えばヘキサン
／エーテル／蟻酸＝５６／１４１０．３）で展開し、そ
の後数分間乾燥し、展開溶媒を除去したクロマロッドを
イア１−ロスキャンＴ　Ｉ−１−１０検出器にかけて、
反応液中の脂質成分のビーク面積を求め、該面積をもと
にして、目的エステルの合成率（％）を次式により算出
した。 但し第１成分とは、反応基質として仕込んだ両基質の内
の小モル数の成分を意味する。」５　明細書第３１頁第
１９行に「由来）」とあるを［由来、３０Ｕ／ｍｇ）Ｊ
と訂正する。 ６　明細用第３２頁第１行に「由来）」とあるを［由来
、２８０１Ｊ／ｍｇ）Ｊと訂正する。 ７　明細書第３２頁第３行に「由来）」とあるを「由来
、４Ｕ／ｌ１１（＋）Ｊと訂正する。 ８　明ｌＩＩ書第３２頁第５行に「由来）」とあるを「
由来、３０ｔＪ／ｍ（１）Ｊと訂正する。 ９　明細書第３２頁第７行に「社製）」とあるを「社製
、１０５　Ｌｌ／＋ｎｏ）　Ｊと訂正する。 １０　明細書第３２頁第９行に「由来）」とあるを「由
来、２０ＬＪ／ｍｇ蛋白、生化学工業社製）Ｊと訂正す
る。 １１　明細書第３５頁第３行に「図面の」とあるを次の
通り訂正する。 ［実験例１３ 第１２表に示す酵素、ステロール類及び脂肪酸の所定量
を用い、イソオクタン１ ０．０５Ｍリン酸バッファ（ＤＩ−１７）＝３ｍＱ／８
−の系で所定時間反応を行なった。結果を反応時間と共
に第１２表に併記する。 尚、第１２表における略号は、前記したものであるか又
は次のものを示す。 〈酵　　　素〉 Ｅ−７・・・コレスプロールエステラーゼ（シュードモ
ナス属由来、１００Ｕ／ＩＩＩ（］、フナコシ薬品社製
） Ｅ−８・・・リパーゼＯＦ（キャンディダ　シリントラ
シア由来、３６０Ｕ／ｍａ、８糖産業社製） 〈脂　　肪　　酸〉 Ｂ−１２・・・イソステアリン酸（エメリーインダスト
リーズ社製） Ｂ−１３・・・リルンＭ（東京化成工業社製）第　　１
２　　表 Ｉ　Ｅ−７（６６，７）　Ａ−１（１００）　Ｂ−１（
１４７）　３９６．６２　Ｅ−６（６，７）　Ａ−１（
１００）　Ｂ−１２（１４７）　２４８６．７３　Ｅ−
７（６６，７）　Ａ−１（１００）　Ｂ−１２（１４７
）　５９０．８４　Ｅ−１（１０００）　Ａ−１（１０
０）　Ｂ−１３（２１６＞　１．５９３．２５　Ｅ−６
（６，７＞　Ａ−１（１００）　Ｂ−６（１５９）　４
８７２，８６　Ｅ−６（６，７）　Ａ−６（１００）　
Ｂ−１（１４６）　１２２９２．１７　Ｅ−８（１００
０）　Ａ−１（１００）　Ｂ−１（１４７）　１８９６
．５実施例３ ジヒドロコレステロール１０ｇ、オレイン酸１１ｇ、リ
パーゼＭＹ３３３ｗ＋。 （１００００Ｕ）及びシクロヘキサン５−の混合物を２
００　ｃｐｍで６４時間撹拌して反応させた。反応開始
後４０時間後の合成率は７３．１％であり、６４時間後
のそれは８３．１％であった。 上記反応後、反応混合物をメタノール水溶液で抽出して
未反応のジヒドロコレステロール及びオレイン酸を除去
し、シクロヘキサン層からシクロヘキサンを留去して目
的とするジヒドロコレステロールオレイン酸エステルの
１２．４０ｇを得た。 図面の」 （以　上）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）リパーゼもしくはコレステロールエステラーゼを
   用いて、分子内にステロイド骨格及び水酸基を有する化
   合物と脂肪酸とを接触反応させることを特徴とするスチ
   ロール脂肪酸エステルの製造方法。