JPS61234791A - ５−ｏ−マイカミノシルナルボノライドの製造法 - Google Patents
５−ｏ−マイカミノシルナルボノライドの製造法Info
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- JPS61234791A JPS61234791A JP7773285A JP7773285A JPS61234791A JP S61234791 A JPS61234791 A JP S61234791A JP 7773285 A JP7773285 A JP 7773285A JP 7773285 A JP7773285 A JP 7773285A JP S61234791 A JPS61234791 A JP S61234791A
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- Japan
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- mycaminosylnarbonolide
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- nocardiopsis
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は抗生物質Ｓ−〇−マイカミノシルナルポノフィ
ド（！； −０−Ｍｙｃａｍｉｎｏｓｙｌｎａｒｂｏｎ
ｏｌｉｄｅ）の新規な製造法【こ関する。
ド（！； −０−Ｍｙｃａｍｉｎｏｓｙｌｎａｒｂｏｎ
ｏｌｉｄｅ）の新規な製造法【こ関する。
従来の技術
ｊ−０−マイカミノＳ／／ｌ／すμボッライドはダラム
陽性菌に対して抗菌活性を有する既知のｌｔ員・環マク
ロライド抗生物質である。従来、ｌ乙員環、マクロライ
ド抗生物賞プラテノマインン（Ｐｌａｔｅｎｏｍｙｃｉ
ｎ） 生産株テするス）ｔ／７”）Ｙイセス・プラテ
ンシスーサプス・マルビーナス（Ｓｔ ｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ、ｐｌａｔｅｎｓｉｓ、ｓｕｂｓｐ９ｍａｌｖｉ
ｎｕｓ）ＭＣＲＬ−０３１１を用い、その培養途中にア
グリコンであるナルボッワイド（Ｎａ ｒｂｏｎｏ ｌ
ｉ ｄｅ ）を添加して培養するか、または、ストレ
プトマイセス９プラテンシス１サブヌーマルビーナスＭ
ＣＲＬ−０３ｆｇを紫外線処理してデラテノマイシン非
生産株としたストレプトマイセス−プラテンシス・サグ
ス・マルビーナスＵ−２７株を用い培養時の培地中にア
グリコンであるすｐボッライドを添加培養することによ
って抗生物質５−Ｏ−マイカミノシルナルボッライドが
得られることを報告しティる（ Ｊ、 ＡｎＬｉｂｉｏ
ｔ、 ２タ ７２０３〜７２０ｇ＜／９７乙）〕。
陽性菌に対して抗菌活性を有する既知のｌｔ員・環マク
ロライド抗生物質である。従来、ｌ乙員環、マクロライ
ド抗生物賞プラテノマインン（Ｐｌａｔｅｎｏｍｙｃｉ
ｎ） 生産株テするス）ｔ／７”）Ｙイセス・プラテ
ンシスーサプス・マルビーナス（Ｓｔ ｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ、ｐｌａｔｅｎｓｉｓ、ｓｕｂｓｐ９ｍａｌｖｉ
ｎｕｓ）ＭＣＲＬ−０３１１を用い、その培養途中にア
グリコンであるナルボッワイド（Ｎａ ｒｂｏｎｏ ｌ
ｉ ｄｅ ）を添加して培養するか、または、ストレ
プトマイセス９プラテンシス１サブヌーマルビーナスＭ
ＣＲＬ−０３ｆｇを紫外線処理してデラテノマイシン非
生産株としたストレプトマイセス−プラテンシス・サグ
ス・マルビーナスＵ−２７株を用い培養時の培地中にア
グリコンであるすｐボッライドを添加培養することによ
って抗生物質５−Ｏ−マイカミノシルナルボッライドが
得られることを報告しティる（ Ｊ、 ＡｎＬｉｂｉｏ
ｔ、 ２タ ７２０３〜７２０ｇ＜／９７乙）〕。
発明が解決しようとする問題点
従来の抗生物質５−Ｏ−マイカミノシルナルボノライド
の製造法は、ナルボッライドをアグリコンとして添加す
ることによるサルベージ合成によるものであり、抗生物
質５−Ｏ−マイカミノシルナルボノライドを直接微生物
が生産することは知られていなかった。
の製造法は、ナルボッライドをアグリコンとして添加す
ることによるサルベージ合成によるものであり、抗生物
質５−Ｏ−マイカミノシルナルボノライドを直接微生物
が生産することは知られていなかった。
問題点を解決するための手段
本発明者らは、香川県仲多度郡琴平町の畑土壌より分離
した放線菌Ｌ／ざ一／１０菌株が抗生物質５−０−マイ
カミノＳ／／ｌ／すｐボッフィトを産生ずることを見い
出した。
した放線菌Ｌ／ざ一／１０菌株が抗生物質５−０−マイ
カミノＳ／／ｌ／すｐボッフィトを産生ずることを見い
出した。
上記の放線菌Ｌ／ｌｒ−／１０菌株の菌学的諸性状は、
次の通りである。
次の通りである。
（１）形態的性状
千ＣＩＶ７寒天培地（ＩＳＰ 培地７ ） （Ｉｎｔ
ｅｒＪ、Ｓｙｓもｅｍ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、／４ ３
／３〜３’ＩＯ（／り６乙）〕上、３０℃、１０Ｎ２０
日間培養し、観察した所見は次の通りである。
ｅｒＪ、Ｓｙｓもｅｍ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、／４ ３
／３〜３’ＩＯ（／り６乙）〕上、３０℃、１０Ｎ２０
日間培養し、観察した所見は次の通りである。
基生菌糸は直径０．３〜０．３μであり、曲線状をこ分
岐を伴って伸長し、培養時間の経過と共に菌糸は分断す
るが、胞子は着生しない。
岐を伴って伸長し、培養時間の経過と共に菌糸は分断す
るが、胞子は着生しない。
基生菌糸より生じた気菌糸は直径Ｏ８≠〜０．７μであ
り、曲線状に単純分岐して伸長し、気菌糸全体が分断し
て多数連鎖した胞子を形成する。螺旋は形成しないが、
多くの気菌糸は胞子がねじれた形に連鎖し、ジグザグ状
を呈する。
り、曲線状に単純分岐して伸長し、気菌糸全体が分断し
て多数連鎖した胞子を形成する。螺旋は形成しないが、
多くの気菌糸は胞子がねじれた形に連鎖し、ジグザグ状
を呈する。
胞子は形及び大きさが多様で、形は卵形、短円筒形又は
円筒形を呈し、大きさはＯ１ｔ〜０．７×０．１〜／、
Ｓμであり、電子顕微鏡で観察すると、胞子の表面は平
滑であり、鞭毛胞子や胞子のうは形成しない。
円筒形を呈し、大きさはＯ１ｔ〜０．７×０．１〜／、
Ｓμであり、電子顕微鏡で観察すると、胞子の表面は平
滑であり、鞭毛胞子や胞子のうは形成しない。
なおグリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ培地！
； ） （Ｉｎｔｅｒ、 Ｊ、 Ｓｙｓｔｅｍ、 Ｂａ
ａｔｅｒｉｏｌ、 ／乙３／３〜３１４０ （／り６乙
）〕においても、はぼ同様な形態が観察された。
； ） （Ｉｎｔｅｒ、 Ｊ、 Ｓｙｓｔｅｍ、 Ｂａ
ａｔｅｒｉｏｌ、 ／乙３／３〜３１４０ （／り６乙
）〕においても、はぼ同様な形態が観察された。
（ＩＩ）染色性
ダラム染色は陽性で、抗酸性染色は陰性である。
ＣＩ［Ｉ］菌体組成
り、Ｂｅｃｋｅｒ等の方法（Ａｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ、Ｌ主。
ｏｌ、Ｌ主。
≠２／〜ｌｌ−２３（／り乙４））により分析したジア
ミノピメリン酸はメゾ−型が検出され、ＬＬ−異性体は
検出されず、Ｌｅｃｈｅｖａｌｌｅｒの方法（Ｊ。
ミノピメリン酸はメゾ−型が検出され、ＬＬ−異性体は
検出されず、Ｌｅｃｈｅｖａｌｌｅｒの方法（Ｊ。
Ｌａｂ、Ｃｌ１ｎ、Ｍｅｄ、、７ ／ 、 ９３ ’Ｉ
〜り！４Ｚ（／り乙１ｒ））で分析した糖は、リボース
とグルコースが検出され、アラビノース、キシロース、
ガラクトース又はマデュロースは検出されス、Ｍｏｒｄ
ａｒｓｋａ等の方法［Ｊ、 Ｇｅｎ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ、 ７ ／ 、 ７７〜ｇ乙（／り７２）〕による脂
質の分析においてノヵルドミコール酸は検出されなかっ
た。
〜り！４Ｚ（／り乙１ｒ））で分析した糖は、リボース
とグルコースが検出され、アラビノース、キシロース、
ガラクトース又はマデュロースは検出されス、Ｍｏｒｄ
ａｒｓｋａ等の方法［Ｊ、 Ｇｅｎ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ、 ７ ／ 、 ７７〜ｇ乙（／り７２）〕による脂
質の分析においてノヵルドミコール酸は検出されなかっ
た。
ＯＶ）培養的性状
各種培地上で、３０℃、２７日間培養し観察した所見は
、第１表に示す通りである。なお色の表示はｃｏｌｏｒ
ｈａｒｍｏｎｙ ｍａｎｕａｌ第を版（／りｓｒ）に
よる色の表示に従った。また可溶性色素の生成は、第１
表に示す各皿培地において、無かった。
、第１表に示す通りである。なお色の表示はｃｏｌｏｒ
ｈａｒｍｏｎｙ ｍａｎｕａｌ第を版（／りｓｒ）に
よる色の表示に従った。また可溶性色素の生成は、第１
表に示す各皿培地において、無かった。
（Ｖ）生理的性状
Ｉ）生育温度範囲：／ど〜≠ｔ℃
２）至適温度：２５〜３５℃
３）ゼラチンの液化：陽性
４）スターチの加水分解：陽性
５）脱脂牛乳：ペプトン化；陽性、凝固；陰性６）メラ
ニン様色素の生成：陰性（チロシン寒天及びペプトン・
イーストエキス鉄寒天培地地上） ７）酸素の要求性：好気性 ８）カタラーゼ：陽性 ９）硝酸塩の還元：陽性 １０）リゾチームをこ対する耐性度：感受性［Ｉｎｔｅ
ｒ。
ニン様色素の生成：陰性（チロシン寒天及びペプトン・
イーストエキス鉄寒天培地地上） ７）酸素の要求性：好気性 ８）カタラーゼ：陽性 ９）硝酸塩の還元：陽性 １０）リゾチームをこ対する耐性度：感受性［Ｉｎｔｅ
ｒ。
Ｊ、Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂａｃｔｅｉｏｌ、 ２ニイ ７
７６〜７７ｇ（／デフ７）に従った］ ■）各種物質の分解能 チロシン、カゼイン、ヒボキサンチン、エスクリン、尿
素、ゼラチン及び馬尿酸：陽性キサンチン及びアデニン
：陰性 １２）炭素源の利用性 ａ）糖類 Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトース、 Ｄ −グルコ
ーヌ、ｉ−イノントール、Ｄ−マンニトール及びツムノ
ース：陽性 シュークロース及びＤ−キシロース： 縦隔性ラフィノ
ース：陰性 ｂ）有機酸 酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム
、リンゴ酸ナトリウム、ピルビン酸ナトリウム、コハク
酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム及びシュウ酸ナトリウ
ム：陽性安息香酸ナトリウム及びプロピオン酸ナトリウ
ム：陰性 ［Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ り３／３〜２７Ｃ／り
Ｓ７）に従った］ ＋ｓ）糖類より酸の生成 アトニド−／Ｌ／、Ｌ−アラビノース、エリスリトール
、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−グルコー
ス、グリセリン、ｉ−イノＮシトール、ラクトース、Ｄ
−マンニトール。
７６〜７７ｇ（／デフ７）に従った］ ■）各種物質の分解能 チロシン、カゼイン、ヒボキサンチン、エスクリン、尿
素、ゼラチン及び馬尿酸：陽性キサンチン及びアデニン
：陰性 １２）炭素源の利用性 ａ）糖類 Ｌ−アラビノース、Ｄ−フラクトース、 Ｄ −グルコ
ーヌ、ｉ−イノントール、Ｄ−マンニトール及びツムノ
ース：陽性 シュークロース及びＤ−キシロース： 縦隔性ラフィノ
ース：陰性 ｂ）有機酸 酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム
、リンゴ酸ナトリウム、ピルビン酸ナトリウム、コハク
酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム及びシュウ酸ナトリウ
ム：陽性安息香酸ナトリウム及びプロピオン酸ナトリウ
ム：陰性 ［Ｊ、 Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ り３／３〜２７Ｃ／り
Ｓ７）に従った］ ＋ｓ）糖類より酸の生成 アトニド−／Ｌ／、Ｌ−アラビノース、エリスリトール
、Ｄ−フラクトース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−グルコー
ス、グリセリン、ｉ−イノＮシトール、ラクトース、Ｄ
−マンニトール。
Ｄ−マンノース、Ｌ−ラムノース、サリシン。
Ｄ−リポーヌ、セロビオーヌ及びスターチ；陽性
マルト−７及びトレハロース： 疑ｉ性ズルシトール、
α−メリビオーヌ、α−メチル−Ｄ−クリフシド、ヲフ
イノース、Ｄ−ソルビ） −／し、Ｄ−キシローヌ、メ
レジトース。
α−メリビオーヌ、α−メチル−Ｄ−クリフシド、ヲフ
イノース、Ｄ−ソルビ） −／し、Ｄ−キシローヌ、メ
レジトース。
ンユークロース、Ｌ−ソルボース及びセルロース：陰性
（Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、 Ａ ９ 、 ／ Ｉ
ｆ ’：／〜／ ！； ０ （／り！；３ ）ｔこ従っ
た〕 上記の通り、本菌Ｌｉｔ −１１０菌株の特徴としては
、形態において分断性のある真性の基土菌糸より気巳糸
を生じ、気菌糸は全体が分断して胞子の連鎖を形成し、
胞子連鎖がジグザグ状を呈し、胞子の大きさや形が多様
で表面は平滑であり、菌体組成において、ジアミノピメ
リン酸がメゾ−型で特徴的な糖を含有せず、又、ノカル
ドミコール酸を含有せず、染色性において、ダラム染色
は陽性で、抗酸性染色は陰性であり、生理的性状ｆこお
いて、カタラーゼは陽性で、リゾチームに感受性であり
、好気性であることにある。
ｆ ’：／〜／ ！； ０ （／り！；３ ）ｔこ従っ
た〕 上記の通り、本菌Ｌｉｔ −１１０菌株の特徴としては
、形態において分断性のある真性の基土菌糸より気巳糸
を生じ、気菌糸は全体が分断して胞子の連鎖を形成し、
胞子連鎖がジグザグ状を呈し、胞子の大きさや形が多様
で表面は平滑であり、菌体組成において、ジアミノピメ
リン酸がメゾ−型で特徴的な糖を含有せず、又、ノカル
ドミコール酸を含有せず、染色性において、ダラム染色
は陽性で、抗酸性染色は陰性であり、生理的性状ｆこお
いて、カタラーゼは陽性で、リゾチームに感受性であり
、好気性であることにある。
これらの特徴により判断すると、Ｌ／ｆ−／１０菌株は
、ノカルディオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ）属
（Ｉｎｔｅｒ、Ｊ、Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌ ２１ｓ 、 ’Ａ Ｉ ７〜≠ヂ３（／デ
フ乙）〕に属するものと同定され、ノカルディオプシス
・ニスヘビー・Ｌ／ざ一／１０ （Ｎｏｃａｒｄｉｏｐ
ｓｉｓ、 ＳＰ、 Ｌ ／ ｌｒ−／ ／ ０ ） （
工業技術院微生物工業技術研究所、（受託番号）微工研
菌寄第８１７６号、Ｆ ＥＢＭＰ−８１７６）と命名し
た。
、ノカルディオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ）属
（Ｉｎｔｅｒ、Ｊ、Ｓｙｓｔｅｍ、Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌ ２１ｓ 、 ’Ａ Ｉ ７〜≠ヂ３（／デ
フ乙）〕に属するものと同定され、ノカルディオプシス
・ニスヘビー・Ｌ／ざ一／１０ （Ｎｏｃａｒｄｉｏｐ
ｓｉｓ、 ＳＰ、 Ｌ ／ ｌｒ−／ ／ ０ ） （
工業技術院微生物工業技術研究所、（受託番号）微工研
菌寄第８１７６号、Ｆ ＥＢＭＰ−８１７６）と命名し
た。
本発明は上記の知見をこ基いて完成されたもので、ノカ
ルディオプシス属に属する抗生物質５−Ｏ−マイカミノ
シルナルボノライド生産菌を培地に培養し、その培養物
より抗生物質５−〇−マイカミノシ〜すμボッフィトを
採取することを特徴とする抗生物質５−Ｏ−マイカミノ
シルナルボノライドの製造法である。
ルディオプシス属に属する抗生物質５−Ｏ−マイカミノ
シルナルボノライド生産菌を培地に培養し、その培養物
より抗生物質５−〇−マイカミノシ〜すμボッフィトを
採取することを特徴とする抗生物質５−Ｏ−マイカミノ
シルナルボノライドの製造法である。
まず、本発明を実施するに当り使用されるノカルディオ
プシス属に属する抗生物質５−Ｏ−マイカミノシルナル
ボッライドの生産菌としては、上記のノカルディオプシ
ス・ニスヘビー Ｌ／、Ｓ’−Ｉ１０菌株がその一例と
して挙られるが、本発明の使用菌はこれに限定されるも
のではなく、ノカルディオプシス属に属する抗生物質５
−Ｏ−マイカミノシルナルボノライド生産菌であればよ
く、天然または変異株も使用し得る。
プシス属に属する抗生物質５−Ｏ−マイカミノシルナル
ボッライドの生産菌としては、上記のノカルディオプシ
ス・ニスヘビー Ｌ／、Ｓ’−Ｉ１０菌株がその一例と
して挙られるが、本発明の使用菌はこれに限定されるも
のではなく、ノカルディオプシス属に属する抗生物質５
−Ｏ−マイカミノシルナルボノライド生産菌であればよ
く、天然または変異株も使用し得る。
次いで、本発明の抗生物質ｊ−Ｏ−マイカミノシルナル
ボノライド ば、上記のノカルディオプシス属に属する３−Ｏ−マイ
カミノシルナルボノライド生産菌を通常の放線菌の培養
に使用する培地成分を含む培地にて好気的に培養するこ
とによって得られる。培地としては、固型培地または液
体培地が用いられるが特に大量生産のためには液体培地
、特に水性培地を用いる通気攪拌培養が適当である。
ボノライド ば、上記のノカルディオプシス属に属する３−Ｏ−マイ
カミノシルナルボノライド生産菌を通常の放線菌の培養
に使用する培地成分を含む培地にて好気的に培養するこ
とによって得られる。培地としては、固型培地または液
体培地が用いられるが特に大量生産のためには液体培地
、特に水性培地を用いる通気攪拌培養が適当である。
培地の栄養源としては、微生物の培養に通常用いられる
ものが広く使用され得る。炭素源としては利用可能な炭
素化合物であればよく、例えばグルコース、水あめ，澱
粉，グリセリン、糖蜜，デキストリン、フラクトース、
大豆油、などが使用される。窒素源としては利用可能な
窓素化合物であればよく、例えば大豆粉、小麦胚芽、コ
ーン・スチープ・リカー、肉エキヌ、ペプトン、酵母エ
キス、硫酸アンモニウムなどが使用される。その他、リ
ン酸塩、マグネシウム、カリウム、カルシウム、ナトリ
ウム、コバルト、鉄、マンガンなどの塩類が必要に応じ
て使用される。
ものが広く使用され得る。炭素源としては利用可能な炭
素化合物であればよく、例えばグルコース、水あめ，澱
粉，グリセリン、糖蜜，デキストリン、フラクトース、
大豆油、などが使用される。窒素源としては利用可能な
窓素化合物であればよく、例えば大豆粉、小麦胚芽、コ
ーン・スチープ・リカー、肉エキヌ、ペプトン、酵母エ
キス、硫酸アンモニウムなどが使用される。その他、リ
ン酸塩、マグネシウム、カリウム、カルシウム、ナトリ
ウム、コバルト、鉄、マンガンなどの塩類が必要に応じ
て使用される。
培養温度は菌が発育し、抗生物質１−Ｏ−マイカミノシ
ルナルボノライドを生産する範囲内で適宜変更し得るが
、特に好ましくは２０〜３５℃である。培養時間は、条
件によって多少異なるが、通常１００〜／３０時間程度
であって、抗生物質３−Ｏ−マイカミノシルナルボノラ
イドが最高力価に達する時期を見計って適当な時期ｔこ
培養を終了すればよい。
ルナルボノライドを生産する範囲内で適宜変更し得るが
、特に好ましくは２０〜３５℃である。培養時間は、条
件によって多少異なるが、通常１００〜／３０時間程度
であって、抗生物質３−Ｏ−マイカミノシルナルボノラ
イドが最高力価に達する時期を見計って適当な時期ｔこ
培養を終了すればよい。
このようにして培養物中に生産された抗生物質、５−−
０−マイカミノシルナルボノライドヲ培養物から採取す
るためには、後記する本抗生物質の理化学的性質を利用
することによって有利に行なわれる。すなわち本抗生物
質は主として培養す液中ｔこ存在するので、菌体を除去
したろ液な、アルカリ性とし、非親水性有機溶媒、例え
ば酢酸エチル、酢酸ブチｌし、ブタノ−Ｉし、クロロホ
ルム、ベンゼンなどで抽出−１その抽出物を酸性ｐＨで
水に転溶し、更にアルカリｐＨで非親水性有機溶媒で逆
転溶し、その抽出物を濃縮する事により組成物が得られ
る。更に精製する場合には、シリカゲｐ。
０−マイカミノシルナルボノライドヲ培養物から採取す
るためには、後記する本抗生物質の理化学的性質を利用
することによって有利に行なわれる。すなわち本抗生物
質は主として培養す液中ｔこ存在するので、菌体を除去
したろ液な、アルカリ性とし、非親水性有機溶媒、例え
ば酢酸エチル、酢酸ブチｌし、ブタノ−Ｉし、クロロホ
ルム、ベンゼンなどで抽出−１その抽出物を酸性ｐＨで
水に転溶し、更にアルカリｐＨで非親水性有機溶媒で逆
転溶し、その抽出物を濃縮する事により組成物が得られ
る。更に精製する場合には、シリカゲｐ。
活性アルミナ、活性炭、合成吸着樹脂例えば、ダ■
イヤイオンＨＰ−２０，アンバーライトＸＡＤ−２等の
担体を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製でき
る。溶出剤としては、クロロホルム：メタノール モニア水．酢酸エチｌｖ：メタノール，水性アセトン、
水性アルコ−ｐなどの混合溶媒を用いて溶出せしめ、そ
の活性画分を得、これを減圧濃縮し、凍結乾燥すること
により抗生物質Ｓ−Ｏ−マイカミノシルナルボノライド
の精製白色粉末が得られる。またこのようにして得られ
る抗生物質Ｓー〇ーマイ゛カミノＶＩＶすｐボッライド
は薄層クロマトグラフィーにて単一スポットを示すもの
であることが簡便になし得る。
担体を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製でき
る。溶出剤としては、クロロホルム：メタノール モニア水．酢酸エチｌｖ：メタノール，水性アセトン、
水性アルコ−ｐなどの混合溶媒を用いて溶出せしめ、そ
の活性画分を得、これを減圧濃縮し、凍結乾燥すること
により抗生物質Ｓ−Ｏ−マイカミノシルナルボノライド
の精製白色粉末が得られる。またこのようにして得られ
る抗生物質Ｓー〇ーマイ゛カミノＶＩＶすｐボッライド
は薄層クロマトグラフィーにて単一スポットを示すもの
であることが簡便になし得る。
次いでこのようにして得られた本発明の抗生物ｙｓーｏ
ーマイカミノシルナｐボッライドの物理化学的性状を挙
げれば次の通りである。
ーマイカミノシルナｐボッライドの物理化学的性状を挙
げれば次の通りである。
色性状
白色粉末
融点
！ｒ５〜ｌｒ！ｒ℃
元素分析
Ｃ：乙ｔＡ７２％． Ｈ：９．００％，Ｎ：、２．
乙Ｓ％分子量 ３２３Ｃマススペクトルより） 分子式 ％式％ 薄層クロマトグラフィー〔シリカゲｔｖｆＣ東京化成株
式会社製）〕 クロロホルム：メタノ−／Ｌ／（１０：ｌ）Ｒ ｆ ＝
Ｑ， ３乙 クロロホルム：アセトン：ａアンモニアＣ１０：２−、
０．／） Ｒｆ＝０．２／呈色反応 陽性： モーリッシュ 硫酸反応 陰性：ニンヒドリン反応 浴解性 アルコール、酢酸エチル、クロロホルム、アセトン等の
有機溶媒に可溶であり、水に微溶である。
乙Ｓ％分子量 ３２３Ｃマススペクトルより） 分子式 ％式％ 薄層クロマトグラフィー〔シリカゲｔｖｆＣ東京化成株
式会社製）〕 クロロホルム：メタノ−／Ｌ／（１０：ｌ）Ｒ ｆ ＝
Ｑ， ３乙 クロロホルム：アセトン：ａアンモニアＣ１０：２−、
０．／） Ｒｆ＝０．２／呈色反応 陽性： モーリッシュ 硫酸反応 陰性：ニンヒドリン反応 浴解性 アルコール、酢酸エチル、クロロホルム、アセトン等の
有機溶媒に可溶であり、水に微溶である。
紫外部吸収スペク） ／Ｉ／λ□ （ｎｍ ） （ ｌ
ｏｇ．ε）２２乙（ｔＡＯｑ）、、２ｇ／（、２．／ｌ
）赤外部吸収スペク）／しく Ｋ Ｂ ｒ銑中）３グア
０． ２９７３． ２タグ５． ２ｇ？！
；， ２ざ００。
ｏｇ．ε）２２乙（ｔＡＯｑ）、、２ｇ／（、２．／ｌ
）赤外部吸収スペク）／しく Ｋ Ｂ ｒ銑中）３グア
０． ２９７３． ２タグ５． ２ｇ？！
；， ２ざ００。
／７μＯ， ／７１０． ／乙９！；， ／乙３
０， ／グ乙Ｏ。
０， ／グ乙Ｏ。
／３１０， ／３３０． ／２７０． ／
／り！；， ／／７０。
／り！；， ／／７０。
ＩＯＩＯ， １０乙Ｏｃｍ である。
核磁気共鳴スペク）／ｖ（重クロロホルム中、１００Ｍ
Ｈｚ）；第１図の通り、 上記力性状、さらにマススペクトルの各ピーク等により
、本発明により得られる化合物が、前記の文献記載の下
記の式（１）で示される抗生物ｊｌー０ーマイカミノシ
ルナルボッライドと同一物質であると同定された。
Ｈｚ）；第１図の通り、 上記力性状、さらにマススペクトルの各ピーク等により
、本発明により得られる化合物が、前記の文献記載の下
記の式（１）で示される抗生物ｊｌー０ーマイカミノシ
ルナルボッライドと同一物質であると同定された。
実施例
次に本発明の実施例を挙げて具体的に説明するが、本発
明はこれＱこより何んら限定されるものではない。
明はこれＱこより何んら限定されるものではない。
実施例／ （培養．分離）
グルコーヌ２％、ヌターチ２％、大豆粉２％、塩化ナト
リウム０．２！；％、酵母エキスＯ．Ｓ％、炭酸カルシ
ウム０．３！％、硫酸銅Ｓ水和物ｏ．ｏｏｏｓ％、塩化
マンガン・７水和物ｏ．ｏｏｏｓ％、硫酸亜鉛・７水和
物ｏ−ｏｏｓ％を含有する培地（ｐＨ，４。
リウム０．２！；％、酵母エキスＯ．Ｓ％、炭酸カルシ
ウム０．３！％、硫酸銅Ｓ水和物ｏ．ｏｏｏｓ％、塩化
マンガン・７水和物ｏ．ｏｏｏｓ％、硫酸亜鉛・７水和
物ｏ−ｏｏｓ％を含有する培地（ｐＨ，４。
！； ）１００ｍ１４ｔ！；ＯＯｍｌ容三角フラスコに
分取し、１２０℃、２０分間加熱殺菌した。本培地グ本
（こ、各々ノカルディオプシス・ニス・ピー・Ｌ／Ｉ−
／１０１００斜面培養液よりの一白金耳を接種し、２ｇ
℃、７２時間振盪培養した。次いでスターチ３％、大豆
粉２％、酵母エキス０．５％、炭酸カルシウム０．３％
、塩化コバルト・６水和物ｏ、ｏｏｉ％を含有する加熱
殺菌した培地（ＰＨ６１）ｉｏ。
分取し、１２０℃、２０分間加熱殺菌した。本培地グ本
（こ、各々ノカルディオプシス・ニス・ピー・Ｌ／Ｉ−
／１０１００斜面培養液よりの一白金耳を接種し、２ｇ
℃、７２時間振盪培養した。次いでスターチ３％、大豆
粉２％、酵母エキス０．５％、炭酸カルシウム０．３％
、塩化コバルト・６水和物ｏ、ｏｏｉ％を含有する加熱
殺菌した培地（ＰＨ６１）ｉｏ。
ｄを含む５ｏｏｒｒｔｌ容三角フラスコ７００本に上記
種培養液を接種し、２１ｒ℃、７２時間振盪培養した。
種培養液を接種し、２１ｒ℃、７２時間振盪培養した。
培養終了後、遠心分離操作により、培養上清液ｑｔと菌
体ともに分離した。
体ともに分離した。
次いで、本抗生物質３−ｏ−マイカミノシμナルボツラ
イドの大部分は、上清液中に存在し、よってその上清液
中より、実施例２の如くして、Ｓ−〇−マイカミノシル
ナルボノフイドを精製するものである。
イドの大部分は、上清液中に存在し、よってその上清液
中より、実施例２の如くして、Ｓ−〇−マイカミノシル
ナルボノフイドを精製するものである。
実施例２ （精製）
実施例／で得られた培養上清液りｔに、Ｓｔの酢酸エチ
ルを加え、攪拌しながら、３Ｎアンモニア水にてｐＨり
に調整し、酢酸エチル抽出を行ない、こ゛の酢酸エチル
層に水３ｔを加え、７２Ｎ硫酸水溶液にてｐ Ｈ２＆こ
調整し、攪拌した後水層を分離する。この水層にクロロ
ホルム２ｔを加え、３Ｎ−アンモニア水でｐＨりに調整
し、攪拌抽出をし、このクロロホルム層を分取し、無水
硫酸ナトリウムを添加して脱水後、減圧濃縮し、淡黄色
オイル状の粗抗生物ｔｒ−ｏ−マイカミノシルナルボッ
ライドが≠２０１１１？純度約５０％で得られた。
ルを加え、攪拌しながら、３Ｎアンモニア水にてｐＨり
に調整し、酢酸エチル抽出を行ない、こ゛の酢酸エチル
層に水３ｔを加え、７２Ｎ硫酸水溶液にてｐ Ｈ２＆こ
調整し、攪拌した後水層を分離する。この水層にクロロ
ホルム２ｔを加え、３Ｎ−アンモニア水でｐＨりに調整
し、攪拌抽出をし、このクロロホルム層を分取し、無水
硫酸ナトリウムを添加して脱水後、減圧濃縮し、淡黄色
オイル状の粗抗生物ｔｒ−ｏ−マイカミノシルナルボッ
ライドが≠２０１１１？純度約５０％で得られた。
次いで、この粗抗生物質５−Ｏ−マイカミノシルナルボ
ノライドＩｌｏｏｍｙをクロロホルム２−に溶解させ、
予めクロロホルム：メタノール；濃アンモニア水＜３０
０”、３０”、乙）の組成よりなる混合溶媒にて作成し
たシリカゲルカラム（２１０ｄ）にチャージし、同溶媒
で溶出せしめ、／３ｔずつ分画ヲ行った。サルンナルテ
イアｌｉ （Ｓａｒｃｉｎａｌｕｔｅａ ）を用いたペ
ーパーディスクヘアツセイ法にて活性を示す分画を確認
した。その結果、第１ｊり画分より２０／両分を回収、
合せて減圧濃縮、次いで真空乾燥すると抗生物質５−Ｏ
−マイカミノシルナルボノライド％ｔ≠ｔ〜を遊離塩基
型で得た。
ノライドＩｌｏｏｍｙをクロロホルム２−に溶解させ、
予めクロロホルム：メタノール；濃アンモニア水＜３０
０”、３０”、乙）の組成よりなる混合溶媒にて作成し
たシリカゲルカラム（２１０ｄ）にチャージし、同溶媒
で溶出せしめ、／３ｔずつ分画ヲ行った。サルンナルテ
イアｌｉ （Ｓａｒｃｉｎａｌｕｔｅａ ）を用いたペ
ーパーディスクヘアツセイ法にて活性を示す分画を確認
した。その結果、第１ｊり画分より２０／両分を回収、
合せて減圧濃縮、次いで真空乾燥すると抗生物質５−Ｏ
−マイカミノシルナルボノライド％ｔ≠ｔ〜を遊離塩基
型で得た。
発明の効果
本発明は、抗生物ｗ５−〇−マイカミノシ）Ｖナルポノ
ツイドを直接微生物より生産せしめたことである。
ツイドを直接微生物より生産せしめたことである。
第１図は抗生物質５−Ｏ−マイカミノシルナルボノライ
ドの核磁気共鳴スペクトルを示す。
ドの核磁気共鳴スペクトルを示す。
Claims (2)
- （１）ノカルデイオプシス属に属する抗生物質５−Ｏ−
マイカミノシルナルボノライド生産菌を培地に培養し、
その培養物より抗生物質５−Ｏ−マイカミノシルナルボ
ノライドを採取することを特徴とする抗生物質５−Ｏ−
マイカミノシルナルボノライドの製造法。 - （２）ノカルデイオプシス属に属する抗生物質５−Ｏ−
マイカミノシルナルボノライド生産菌が、ノカルデイオ
プシス・エスピー・Ｌ／８−１１０である特許請求の範
囲第１項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7773285A JPS61234791A (ja) | 1985-04-12 | 1985-04-12 | ５−ｏ−マイカミノシルナルボノライドの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7773285A JPS61234791A (ja) | 1985-04-12 | 1985-04-12 | ５−ｏ−マイカミノシルナルボノライドの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61234791A true JPS61234791A (ja) | 1986-10-20 |
| JPH043195B2 JPH043195B2 (ja) | 1992-01-22 |
Family
ID=13642075
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7773285A Granted JPS61234791A (ja) | 1985-04-12 | 1985-04-12 | ５−ｏ−マイカミノシルナルボノライドの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61234791A (ja) |
-
1985
- 1985-04-12 JP JP7773285A patent/JPS61234791A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH043195B2 (ja) | 1992-01-22 |
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