JPS6128387A - リパ−ゼの製造法 - Google Patents
リパ−ゼの製造法Info
- Publication number
- JPS6128387A JPS6128387A JP14958584A JP14958584A JPS6128387A JP S6128387 A JPS6128387 A JP S6128387A JP 14958584 A JP14958584 A JP 14958584A JP 14958584 A JP14958584 A JP 14958584A JP S6128387 A JPS6128387 A JP S6128387A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lipase
- activity
- medium
- culture
- enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6418—Fatty acids by hydrolysis of fatty acid esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/882—Staphylococcus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は新規リパーゼの製造法に関するものである。さ
らに詳しくは、スタフィロコッカス・±ヤビテイス（５
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｐｉｔｉｓ ）に属
する微生物によるトリグリセリドから灘離脂肪酸および
グリセリンを生じせしめる新規ソノ４−−ゼの製造法に
関するものである。
らに詳しくは、スタフィロコッカス・±ヤビテイス（５
ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｃａｐｉｔｉｓ ）に属
する微生物によるトリグリセリドから灘離脂肪酸および
グリセリンを生じせしめる新規ソノ４−−ゼの製造法に
関するものである。
（従来の技術）
微生物、とくにバクテリアを用いるり／ＩＰ−ゼの製造
法としては、シュードモナス属、クロモバクテリウム属
、アクロモバクテリウム属、コリネバクテリウム属など
に属する菌を利用する方法が知られている。しかし力か
ら、これらの微生物に由来するリパーゼを用いて油脂類
、特にトリグリセリドを分解した場合、脂肪酸及びグリ
セリンのほかにかカリの量のモノグリセリド及びジグリ
セリドが生成する。これは、一旦分解生成した脂肪酸と
グリセリンがジノ４−ゼの作用によシ再度結合するか、
又はリパーゼによる分解がモノグリセリドもしくはジグ
リセリドの段階で停止するためであると考えられる。従
って、このような従来から知られているリノや一ゼを用
いて油脂を分解することによって脂肪酸を製造する方法
には、技術的にも経済的にも難点があった。
法としては、シュードモナス属、クロモバクテリウム属
、アクロモバクテリウム属、コリネバクテリウム属など
に属する菌を利用する方法が知られている。しかし力か
ら、これらの微生物に由来するリパーゼを用いて油脂類
、特にトリグリセリドを分解した場合、脂肪酸及びグリ
セリンのほかにかカリの量のモノグリセリド及びジグリ
セリドが生成する。これは、一旦分解生成した脂肪酸と
グリセリンがジノ４−ゼの作用によシ再度結合するか、
又はリパーゼによる分解がモノグリセリドもしくはジグ
リセリドの段階で停止するためであると考えられる。従
って、このような従来から知られているリノや一ゼを用
いて油脂を分解することによって脂肪酸を製造する方法
には、技術的にも経済的にも難点があった。
（発明が解決しようとする問題点）
発明者等は、トリグリセリドを完全に分解して脂肪酸及
びグリセリンを生成せしめ、モノグリセリド及びジグリ
セリドを実質上生成せしめず、油脂の酵素的分解による
脂肪酸の工業的製造に使用することができるリパーゼを
開発すべく、広範囲上記の能力を有する新規なリパーゼ
を生産することを見出し、このリパーゼを純粋に分離す
ることに成功し、この発明を完成した。
びグリセリンを生成せしめ、モノグリセリド及びジグリ
セリドを実質上生成せしめず、油脂の酵素的分解による
脂肪酸の工業的製造に使用することができるリパーゼを
開発すべく、広範囲上記の能力を有する新規なリパーゼ
を生産することを見出し、このリパーゼを純粋に分離す
ることに成功し、この発明を完成した。
（問題点を解決するだめの手段）
従って、この発明は、スタフィロコッカ乙−−−ｒ−ヤ
ビテイス（５ｔａｐｈｙｌｏｅｏａｃｕａ ｃａｐｉｔ
ｉｇ ）に属し、新規リパーゼ生産能を有する微生物を
栄養培地に培養し、培養液中に該リパーゼを蓄積せしめ
、該培養液から該リパーゼを採取することを特徴とする
新規リフ９−ゼの製造方法を提供するものであシ、この
ジノ９−ゼはトリグリセリドを実質上完全に脂肪酸とグ
リセリンとに分解し、有意量のモノグリセリド及びジグ
リセリドを生成せしめない。
ビテイス（５ｔａｐｈｙｌｏｅｏａｃｕａ ｃａｐｉｔ
ｉｇ ）に属し、新規リパーゼ生産能を有する微生物を
栄養培地に培養し、培養液中に該リパーゼを蓄積せしめ
、該培養液から該リパーゼを採取することを特徴とする
新規リフ９−ゼの製造方法を提供するものであシ、この
ジノ９−ゼはトリグリセリドを実質上完全に脂肪酸とグ
リセリンとに分解し、有意量のモノグリセリド及びジグ
リセリドを生成せしめない。
リパーゼ生産菌
この発明において使用する＋Ｊ ノｅ−ゼ生産菌はスタ
フィロコッカス・キャビテイスに属シ、リノｆ −ゼ生
産能を有する細菌である。このような細菌であればいず
れもこの発明の方法において使用することができ、例え
ばアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａ
ＴＣＣ）に保存されておシ、容易に入手することができ
るスタフィロコッカス・キャビテイスを使用することが
できる。このような菌として例えばスタフィロコッカス
・キャビテイスＡＴＣＣ２７８４０，ＡＴＣＣ２７８４
１、ＡＴＣＣ２７８４２゜及びＡＴＣＣ２７８４３を挙
げることができる。
フィロコッカス・キャビテイスに属シ、リノｆ −ゼ生
産能を有する細菌である。このような細菌であればいず
れもこの発明の方法において使用することができ、例え
ばアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（Ａ
ＴＣＣ）に保存されておシ、容易に入手することができ
るスタフィロコッカス・キャビテイスを使用することが
できる。このような菌として例えばスタフィロコッカス
・キャビテイスＡＴＣＣ２７８４０，ＡＴＣＣ２７８４
１、ＡＴＣＣ２７８４２゜及びＡＴＣＣ２７８４３を挙
げることができる。
さらに、この発明の方法に使用することができる新菌株
として、本発明者等がヒトの頭皮から初めて分離したス
タフィロコッカス・キャビテイスＴ−１−１株を挙げる
ことができる。この菌株は次のような菌学的諸性質を有
する。
として、本発明者等がヒトの頭皮から初めて分離したス
タフィロコッカス・キャビテイスＴ−１−１株を挙げる
ことができる。この菌株は次のような菌学的諸性質を有
する。
（Ａ） 形態
（１）大きさ；直径０．８〜１．２ ａｍの球菌、２〜
４個集って存在。
４個集って存在。
（２）運動性；なし。
（３）胞子形成；観察されず。
（４）ダラム染色性；陽性。
（５）抗酸性；なし。
（Ｂ） 生育状態
（１）肉汁寒天平板培養；やや凸状、円形、表面平滑、
不透明白色のコロニーを形成。コロニーは小さく、径１
〜３％である。
不透明白色のコロニーを形成。コロニーは小さく、径１
〜３％である。
（２）肉汁液体培養；生育良好、液全体が混濁。
（３）肉汁ゼラチン穿刺培養；ゼラチンを液化せず、線
状に生育。
状に生育。
（４）肉汁寒天斜面培養；やや凸状、表面平滑。
不透明白色。生育良好。
（５）リドマスミルク；色調変化せず。凝固又は液化を
認めず。
認めず。
（６） メチルレッド（ＭＲ）テスト；陽性（７）
フォーゲス・プロスカラエル（ｖｐ）テスト；陽性 （８）インドール生成；なし。
フォーゲス・プロスカラエル（ｖｐ）テスト；陽性 （８）インドール生成；なし。
（９）硫化水素生成；なし。
（至）デンプン分解能；なし。
αη クエン酸利用能；ユーザー・クリステンセン反応
陽性 ａ→ 無機窒素源利用能；硝酸塩を利用するが、アンモ
ニウム塩を利用せず。
陽性 ａ→ 無機窒素源利用能；硝酸塩を利用するが、アンモ
ニウム塩を利用せず。
（２）色素産生能；なし。
αゆ ウレアーゼ反応；陰性。
（ト）オキシダーゼ反応；陰性。
α→ カタラーゼ反応；陽性。
α力 生育範囲：ｐＨ５〜９、温度２０℃〜４０℃最適
生育温度３２℃〜３５℃。
生育温度３２℃〜３５℃。
α呻 酸素要求性；通性嫌気性。
（至）糖料用能；
酸生成（＋）；Ｄ−グルコース、Ｄ−フラクトース、Ｄ
−マンノース、シュクロース、クリセリン。
−マンノース、シュクロース、クリセリン。
酸、ガス生成Ｃ−）： Ｄ−ガラクトース、Ｄ−キシロ
ース、Ｌ−アラビノース、マルトース、ラクトース、ト
レハロース、Ｄ−ソルビット、イノジット、デンプン。
ース、Ｌ−アラビノース、マルトース、ラクトース、ト
レハロース、Ｄ−ソルビット、イノジット、デンプン。
Ｄ−グルコースから乳酸を生成。
翰 耐塩性；あシ（１０〜２０チの食塩水中生育）。
（ハ） リパーゼ活性；あシ。
（イ）レシチナーゼ活性；１ｈ
■ コアグラーゼ活性；なし
くハ）フォスファターゼ活性；なし。
に）デオキシリボヌクレアーゼ活性；アシ。
なお、木菌は工業技術院微生物工業技術研究所に微工研
菌寄託受託番号第７７２３号（ＦＥＢＭＰ−７７２３）
として寄託されている。
菌寄託受託番号第７７２３号（ＦＥＢＭＰ−７７２３）
として寄託されている。
培養
本発明を実施するにあたっては、上記のスタフィロコッ
カス・キャビテイスに属するジノ４−ゼ生産菌を培地に
培養する。
カス・キャビテイスに属するジノ４−ゼ生産菌を培地に
培養する。
培地の栄養源としては、本菌が円滑に生育する限シ特に
限定するものではなく、炭素源としてはグルコース、ス
クロース、糖蜜、油脂などをあげることができ、また窒
素源としては、各種ペラトン、大豆粉、コーンステイー
プリカー、酵母エキス等の同化可能なものをひとつある
いは組み合わせて用いることができる。また、Ｍｇ
＋ Ｃａ ＊Ｎａ＋等の塩類や各種ビタミン類、また
培養に即して消泡剤を培地に添加することもできる。
限定するものではなく、炭素源としてはグルコース、ス
クロース、糖蜜、油脂などをあげることができ、また窒
素源としては、各種ペラトン、大豆粉、コーンステイー
プリカー、酵母エキス等の同化可能なものをひとつある
いは組み合わせて用いることができる。また、Ｍｇ
＋ Ｃａ ＊Ｎａ＋等の塩類や各種ビタミン類、また
培養に即して消泡剤を培地に添加することもできる。
本発明において培養の形態は液体培養でも固体培養でも
よいが、通常は液体培養が好ましく、振トウ培養、通気
攪拌培養を行ない、ＩＪ ノ臂−ゼを得ることができる
。本発明における培養条件は使用する菌株、培地組成に
よシ多少異なるが、目的物であるリパーゼの生産に最も
有利な条件を選択設定すればよく、本菌株のうちＴ−１
−１株の場合を記せば、培養温度は２０〜４０℃、とく
に好ましくは３０〜３７℃である。また培地の至適−は
ｐＨ５〜９に６Ｄ、４ＩＫｐＨ６〜７においては円滑な
ジノ４−ゼ生産が行なわれる０ 上述の如く、本発明に従い、スタフィロコッカスキャビ
テイスに属するリパーゼ生産菌を培地に培養して新規り
Ａ’−ゼを生産させる場合、培地にオリーブ油等の油脂
、あるいはレシチン等のりン脂質を添加することによシ
生産性が著しく増加する。これらの脂質の添加量はその
適当量を設定して培地に添加されるが、通常培地に対し
０．０１〜２チ′添加するのが適当である。培養期間は
菌株によシ異方るが１〜３日に、おいてリパ−ゼ活性は
完了する。
よいが、通常は液体培養が好ましく、振トウ培養、通気
攪拌培養を行ない、ＩＪ ノ臂−ゼを得ることができる
。本発明における培養条件は使用する菌株、培地組成に
よシ多少異なるが、目的物であるリパーゼの生産に最も
有利な条件を選択設定すればよく、本菌株のうちＴ−１
−１株の場合を記せば、培養温度は２０〜４０℃、とく
に好ましくは３０〜３７℃である。また培地の至適−は
ｐＨ５〜９に６Ｄ、４ＩＫｐＨ６〜７においては円滑な
ジノ４−ゼ生産が行なわれる０ 上述の如く、本発明に従い、スタフィロコッカスキャビ
テイスに属するリパーゼ生産菌を培地に培養して新規り
Ａ’−ゼを生産させる場合、培地にオリーブ油等の油脂
、あるいはレシチン等のりン脂質を添加することによシ
生産性が著しく増加する。これらの脂質の添加量はその
適当量を設定して培地に添加されるが、通常培地に対し
０．０１〜２チ′添加するのが適当である。培養期間は
菌株によシ異方るが１〜３日に、おいてリパ−ゼ活性は
完了する。
リパーゼの採取・精製
本新規リパーゼは菌体外酵素であるためジノ９−ゼは通
常の遠心法ちるいはテ過法によ）菌体から容易に分離す
ることができる。さらに精製を行なう場合は、酵素の採
取精製に通常用いられる手法、例えば、硫安等を用いる
塩析、エタノール、アセトン等を用いた溶媒沈澱、等電
点沈澱、活性炭、リン酸カルシウム等を用いた物理吸着
、イオン交換クロマトグラフィー、グル沖過法やアフィ
ニティークロマトグラフィーなど酵素精製に用いられて
いる一般的な方法のひとつ、あるいは複数の組み合わせ
によシ各々の使用目的に応じた種々の純度の酵素標品を
得ることができる。
常の遠心法ちるいはテ過法によ）菌体から容易に分離す
ることができる。さらに精製を行なう場合は、酵素の採
取精製に通常用いられる手法、例えば、硫安等を用いる
塩析、エタノール、アセトン等を用いた溶媒沈澱、等電
点沈澱、活性炭、リン酸カルシウム等を用いた物理吸着
、イオン交換クロマトグラフィー、グル沖過法やアフィ
ニティークロマトグラフィーなど酵素精製に用いられて
いる一般的な方法のひとつ、あるいは複数の組み合わせ
によシ各々の使用目的に応じた種々の純度の酵素標品を
得ることができる。
精製方法の具体例を示すと次の如くである。本発明の方
法によシ得られた培養液を濾過または遠心分離すること
によシ、透明な酵素液が得られる。
法によシ得られた培養液を濾過または遠心分離すること
によシ、透明な酵素液が得られる。
この酵素液を濃縮し２０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ緩衝
液（ｐＨ７，０）で透析後、同緩衝液で平衡化したＤＥ
ＡＥ−セルロースに吸着させＮａＣ２でグラジェント溶
出させる。本リパーゼはＮａＣｔ濃度０．４〜０．５Ｍ
付近で溶出される。適宜濃縮後１００ ｍＭ ＮａＣｔ
含有１００ ｍＭ Ｔｒｉ ５−ＨＣｔ緩衝液（ＦＪ（
８，０）で平衡化したウルトログルＡＣＡ ３４ （Ｌ
ＫＢ製）を用いてグル濾過を行うことによシミ党派動的
に単一な標品を得ることができる。また上記培養液を限
外デ過膜によシ濃縮し、その濃縮液を希塩酸を用いて−
３．９〜４．０に調整し、低温（４℃が好ましい）に数
時間保持した後、遠心分離またはｒ遇することによシ沈
澱物を回収し、凍結乾燥することによシ酵素標品を得る
ことができる。
液（ｐＨ７，０）で透析後、同緩衝液で平衡化したＤＥ
ＡＥ−セルロースに吸着させＮａＣ２でグラジェント溶
出させる。本リパーゼはＮａＣｔ濃度０．４〜０．５Ｍ
付近で溶出される。適宜濃縮後１００ ｍＭ ＮａＣｔ
含有１００ ｍＭ Ｔｒｉ ５−ＨＣｔ緩衝液（ＦＪ（
８，０）で平衡化したウルトログルＡＣＡ ３４ （Ｌ
ＫＢ製）を用いてグル濾過を行うことによシミ党派動的
に単一な標品を得ることができる。また上記培養液を限
外デ過膜によシ濃縮し、その濃縮液を希塩酸を用いて−
３．９〜４．０に調整し、低温（４℃が好ましい）に数
時間保持した後、遠心分離またはｒ遇することによシ沈
澱物を回収し、凍結乾燥することによシ酵素標品を得る
ことができる。
リパーゼの性質
こうして精製された本りｚ臂−ゼの諸性質は次の通シで
ある。
ある。
■ 基質特異性
広く油脂を基質とする。オリーブ油、ヤシ油、ヒマシ油
などの植物油、牛脂などの動物油脂およびトリブチリン
等水溶性脂質を分解する。
などの植物油、牛脂などの動物油脂およびトリブチリン
等水溶性脂質を分解する。
油脂およびトリグリセライドを基質とした際の１）Ａ？
−ゼ活性を、オリーブ油およびトリオレインを基質とし
た際の活性を１００％とした相対活性値として、それぞ
れ第１図及び第２図に示す。
−ゼ活性を、オリーブ油およびトリオレインを基質とし
た際の活性を１００％とした相対活性値として、それぞ
れ第１図及び第２図に示す。
■ 至適−および安定−範囲
本りｉ４−ゼは第３図に示す通、９ ｐＨ４，５〜１０
５の範囲で活性を示し、至適−は７．５〜８．０と弱ア
ルカリ側である。
５の範囲で活性を示し、至適−は７．５〜８．０と弱ア
ルカリ側である。
種々の緩衝液中で４℃、２４時間保持したときの残存υ
ノ（−ゼ活性は第４図に示す通シでおる。
ノ（−ゼ活性は第４図に示す通シでおる。
ｐＨ４より酸性側およびｐｉ−１１１以上のアルカリ側
で失活がおこシ、ｐＨ４〜１１の範囲では安定である。
で失活がおこシ、ｐＨ４〜１１の範囲では安定である。
■ 至適温度および安定温度範囲
本ＩＪ ）４−ゼは第５図に示す通シ、２０〜４５℃の
範囲で活性を示し、至適温度は３０〜３５℃である。
範囲で活性を示し、至適温度は３０〜３５℃である。
各温度で３０分間処理したときの残存リパーゼ活性は第
６図に示す通シでおる。３０分間処理では４５℃まで安
定である。
６図に示す通シでおる。３０分間処理では４５℃まで安
定である。
■ 阻害および活性化
２価金属イオン、ＳＨ試薬、界面活性剤のリパーゼ活性
に及ぼす影響を、処理後の残存リパーゼ活性を測定して
求めた阻害度によシ調べた。１０−〇Ｃａ” 、Ｍｎ
”、Ｍｇ”、Ｃｕ”、Ｚｎ”’ Ｆｅ２”（１ｍＭ ）
などではいずれも阻害はみられない。
に及ぼす影響を、処理後の残存リパーゼ活性を測定して
求めた阻害度によシ調べた。１０−〇Ｃａ” 、Ｍｎ
”、Ｍｇ”、Ｃｕ”、Ｚｎ”’ Ｆｅ２”（１ｍＭ ）
などではいずれも阻害はみられない。
とくにＣａ２＋の存在によシリパーゼ活性は３〜５倍程
度活性化される。
度活性化される。
また、２ｍＭラウリル硫酸ナトリウム（５ＤＳ）、ヨー
ドアセトアミド、０．１％のツウィーン２０、ツウィー
ン８０、トライトンＸ −１００によシ活性は９０チ以
上阻害される。
ドアセトアミド、０．１％のツウィーン２０、ツウィー
ン８０、トライトンＸ −１００によシ活性は９０チ以
上阻害される。
■ 分子量
５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法およびグル
ヂ過法によシ求めた分子量は約１２８，０００である。
ヂ過法によシ求めた分子量は約１２８，０００である。
■ 等電点
キャリアーアンホライン（ＬＫＢ製）を用いた等電点電
気泳動法によシ求めた等電点は３．９±０．１である。
気泳動法によシ求めた等電点は３．９±０．１である。
■ アミノ酸組成
アミノ酸 モル比 残基数
Ａａｐ １３．３ １５５Ｔｈｒ
６．６ ７７Ｓｓｒ ８．０
９３Ｇｌｕ １２．５ １４
６Ｇｌｙ ７．５ ８８Ａｌａ
７．３ ８５Ｖａｌ ８．
２ ９６Ｍｅｔ １．８
２１１１ｕ ７．７ ９０Ｌｅｕ
４．６ ５４Ｔｙｒ １
．１ １３Ｐｈａ ４．８
５６Ｌｙｓ １１．６ １３５Ｈ１ｓ
１．２ １４Ａｒｇ １
．５ １７Ｐｒｏ ２．０
２３１１２Ｃｙｓ Ｏ，４５ ■ リポプロテインリノや−ゼ活性 ＩＪ ｉＲ−ゼ活性を有すると同時にＩＪ ７プロテイ
ンリパーゼ活性をも有する。
６．６ ７７Ｓｓｒ ８．０
９３Ｇｌｕ １２．５ １４
６Ｇｌｙ ７．５ ８８Ａｌａ
７．３ ８５Ｖａｌ ８．
２ ９６Ｍｅｔ １．８
２１１１ｕ ７．７ ９０Ｌｅｕ
４．６ ５４Ｔｙｒ １
．１ １３Ｐｈａ ４．８
５６Ｌｙｓ １１．６ １３５Ｈ１ｓ
１．２ １４Ａｒｇ １
．５ １７Ｐｒｏ ２．０
２３１１２Ｃｙｓ Ｏ，４５ ■ リポプロテインリノや−ゼ活性 ＩＪ ｉＲ−ゼ活性を有すると同時にＩＪ ７プロテイ
ンリパーゼ活性をも有する。
リノぐ−ゼ活性の測定法
次ＫＩＪパーゼ活性の測定法は次の通シである。
大型試験管（φ２３’Ｘ２００ｙｎｍ）に２５ｙｎＭＴ
ｒ ｉ ａ−ＨＣ２緩衝液（ｐＨ８，０） ／ １０
ｍＭＣａＣ４２５ｍＡ’を含む反応液にオリーブ油１ｍ
ｌを添加し、ミキサーで激しく攪拌した後、酵素液０．
５ ｍｌを加え、毎分３００回転の速度で往復振トウし
ながら３０℃にて３０分間反応させる。その後、２０Ｔ
Ｌｌのエタノールを加えて反応を止め、生成脂肪酸を０
０５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で滴定する。盲検値は上
記組成の反応液にエタノールを加えた後に酵素液を加え
たものをアルカリ滴定して求める。
ｒ ｉ ａ−ＨＣ２緩衝液（ｐＨ８，０） ／ １０
ｍＭＣａＣ４２５ｍＡ’を含む反応液にオリーブ油１ｍ
ｌを添加し、ミキサーで激しく攪拌した後、酵素液０．
５ ｍｌを加え、毎分３００回転の速度で往復振トウし
ながら３０℃にて３０分間反応させる。その後、２０Ｔ
Ｌｌのエタノールを加えて反応を止め、生成脂肪酸を０
０５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液で滴定する。盲検値は上
記組成の反応液にエタノールを加えた後に酵素液を加え
たものをアルカリ滴定して求める。
ソノ４−ゼ活性の単位（Ｕｎｉｔ）は、国際生化学連合
（１，Ｕ、Ｂ。）の酵素委員会の提案に従い、上記の反
応条件で１分間に１μｍｏｌｅの脂肪酸を遊離する活性
をＩＵｎｉｔと定める。
（１，Ｕ、Ｂ。）の酵素委員会の提案に従い、上記の反
応条件で１分間に１μｍｏｌｅの脂肪酸を遊離する活性
をＩＵｎｉｔと定める。
次に、本発明を実施例によシさらに具体的に説明する。
実施例１゜
グルコース０．５％、ポリペプトン１チ及びＮａＣＬｏ
、５％から成る液体培地（ｐＨ７，０）にスタフィロコ
ッカス・キャビディスＴ−１−１株（ＦＥＢＭ Ｐ −
７７２３）を接種し、３０℃にて１８時間振とり培養し
て種菌とした。
、５％から成る液体培地（ｐＨ７，０）にスタフィロコ
ッカス・キャビディスＴ−１−１株（ＦＥＢＭ Ｐ −
７７２３）を接種し、３０℃にて１８時間振とり培養し
て種菌とした。
ＡＦＦペプトン（大豆蛋白加水分解物；味の素に、に、
製）１０％及びＮａＣＬ Ｏ，５％から成る液体培地（
ｐＨ６，３）１００ｍＡ！を５００ｍＡｆ容坂ロフラス
コに分注し、滅菌し、この培地（１０チに下ペゾトン培
地）に・ １容量−の前記種菌を接種し、３０℃にて３
００回／分の往復振とう機を用いて２日間振とう培養し
た。
製）１０％及びＮａＣＬ Ｏ，５％から成る液体培地（
ｐＨ６，３）１００ｍＡ！を５００ｍＡｆ容坂ロフラス
コに分注し、滅菌し、この培地（１０チに下ペゾトン培
地）に・ １容量−の前記種菌を接種し、３０℃にて３
００回／分の往復振とう機を用いて２日間振とう培養し
た。
培養液を集め、遠心分離によって菌体を除去し、上澄液
を得た。この上澄液のリパーゼ活性を測定したところ］
、 ０．３ ＵＡＬｌであった。この酵素液１３６０７
ｄについて硫安塩析を行い生じた沈澱区分を遠心分離す
ることによシ集め、２０ ｍＭＴｒｉ ａ−ＨＣ１緩衝
液（ｐＨ７，０）中で一夜透析を行った後、同緩衝液で
平衡化したＤＥＡＥ−セルロースカラムを用いてクロマ
トグラフィー（ワットマン製：φ３６Ｘ２１０＋ｍｎ）
Ｋ付し０ →１． Ｍ ＮａＣｔグラジェント溶出を行
ったところ０．４〜０．５ Ｍ ＮａＣ１で太リパーゼ
が溶出された。適当に濃縮後、１００ｍＭ Ｔ ｒ ｉ
５−ＨＣ２緩衝液（ｐＨｓ、ｏ ）／ｌ ｏ ｏ ｍ
ＭＮａＣｔで平衡化したＵｌｔｒｏｇｅｌ ＡｅＡ３４
カラムクロマトグラフィー（ＬＫＢ製；φ２５Ｘ４４０
瓢）に付し適宜再クロマトグラフィーを行うことによシ
ミ党派動的に単一々酵素標品を得ることができた。
を得た。この上澄液のリパーゼ活性を測定したところ］
、 ０．３ ＵＡＬｌであった。この酵素液１３６０７
ｄについて硫安塩析を行い生じた沈澱区分を遠心分離す
ることによシ集め、２０ ｍＭＴｒｉ ａ−ＨＣ１緩衝
液（ｐＨ７，０）中で一夜透析を行った後、同緩衝液で
平衡化したＤＥＡＥ−セルロースカラムを用いてクロマ
トグラフィー（ワットマン製：φ３６Ｘ２１０＋ｍｎ）
Ｋ付し０ →１． Ｍ ＮａＣｔグラジェント溶出を行
ったところ０．４〜０．５ Ｍ ＮａＣ１で太リパーゼ
が溶出された。適当に濃縮後、１００ｍＭ Ｔ ｒ ｉ
５−ＨＣ２緩衝液（ｐＨｓ、ｏ ）／ｌ ｏ ｏ ｍ
ＭＮａＣｔで平衡化したＵｌｔｒｏｇｅｌ ＡｅＡ３４
カラムクロマトグラフィー（ＬＫＢ製；φ２５Ｘ４４０
瓢）に付し適宜再クロマトグラフィーを行うことによシ
ミ党派動的に単一々酵素標品を得ることができた。
上記精製過程での比活性（■蛋白質当シの活性）、回収
率はそれぞれ１３６．２ＵＡｎ９．３４チであった。
率はそれぞれ１３６．２ＵＡｎ９．３４チであった。
実施例２
実施例１に示したのと同様の培養上澄液について限外テ
過（日本ミリボア製、ベリコンラボカセット；分子量１
０，０００限外濾過膜ＰＴＧＣ０ＬＣ０５）により濃縮
した後、２０ ｍＭ Ｔｒ ｉ ５−ＨＣＬ緩衝液（ｐ
Ｈ７，０）で平衡化したＤＥＡＥ−セルロースカラムを
用いるクロマトグラフィーに付し、以下実施例１に示し
た方法で精製を行い電気泳動的に単一な酵素標品を得る
ことができた。
過（日本ミリボア製、ベリコンラボカセット；分子量１
０，０００限外濾過膜ＰＴＧＣ０ＬＣ０５）により濃縮
した後、２０ ｍＭ Ｔｒ ｉ ５−ＨＣＬ緩衝液（ｐ
Ｈ７，０）で平衡化したＤＥＡＥ−セルロースカラムを
用いるクロマトグラフィーに付し、以下実施例１に示し
た方法で精製を行い電気泳動的に単一な酵素標品を得る
ことができた。
実施例３゜
ＡＦＦ−１！プトン（大豆蛋白加水分解物）５％、Ｎａ
Ｃｔｏ、 ５ ％から成る液体培地（ＰＨ６，３）７／
を１４１容ジャーファーメンタ−（ＮＥＷ ＢＲＵＮＳ
ＷＩ ＣＫＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）に入れて殺菌し
、培地を調製した。
Ｃｔｏ、 ５ ％から成る液体培地（ＰＨ６，３）７／
を１４１容ジャーファーメンタ−（ＮＥＷ ＢＲＵＮＳ
ＷＩ ＣＫＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社製）に入れて殺菌し
、培地を調製した。
実施例１の場合と同様にして培養した種菌〔スタフィロ
コッカス・キャビテイス’ｒ−１−１（ＦＥＢＭＰ−７
７２３）１２００ｍＪを上記の培地に接種し、培養温度
３０℃、攪拌数３００ ｒ、ｐ、ｍ、、通気量２．Ｏｖ
、ｖ、ｍにて２４時間培養を行った。培養ＥＮを遠心分
離して菌体を除き、限外涙過（日本ミリボア製・４リコ
ンラボ力セツト分子量１０，０００限外濾過膜、ＰＴＧ
ＣＯＬＣ０５）により４倍濃縮し、この濃縮液を塩酸を
用いてｐＨ３，９に調整し、低温（４℃が好ましい）に
２時間放置した後、生じた沈澱物を遠心分離または沖過
によシ回収し溶解した後凍結乾燥することによ）精製酵
素標品を得た。上記精製過程での比活性（■蛋白質当シ
の活性）、回収率はそれぞれ８７． ＯＵ／ｍ９．２８
チであった。
コッカス・キャビテイス’ｒ−１−１（ＦＥＢＭＰ−７
７２３）１２００ｍＪを上記の培地に接種し、培養温度
３０℃、攪拌数３００ ｒ、ｐ、ｍ、、通気量２．Ｏｖ
、ｖ、ｍにて２４時間培養を行った。培養ＥＮを遠心分
離して菌体を除き、限外涙過（日本ミリボア製・４リコ
ンラボ力セツト分子量１０，０００限外濾過膜、ＰＴＧ
ＣＯＬＣ０５）により４倍濃縮し、この濃縮液を塩酸を
用いてｐＨ３，９に調整し、低温（４℃が好ましい）に
２時間放置した後、生じた沈澱物を遠心分離または沖過
によシ回収し溶解した後凍結乾燥することによ）精製酵
素標品を得た。上記精製過程での比活性（■蛋白質当シ
の活性）、回収率はそれぞれ８７． ＯＵ／ｍ９．２８
チであった。
実施例４゜
実施例１で得られた酵素標品を用いて、トリオレイン（
９９チ純度、牛丼化学）を基質として酵素反応を行い、
その反応生成物をシリカゲル薄層クロマトグラフィーで
同定した。すなわち２５ｍＭ Ｔｒｉ ａ−ＨＣＩ緩衝
液（ｐＨｓ、 ｏ ） ／ １０ 、ｍＦ）ｆｃａｃｔ
２２ｄにトリオレイン１０μ！を加え、これに酵素を総
活性として３Ｕとなるよう添加し３０℃で反応を行った
。
９９チ純度、牛丼化学）を基質として酵素反応を行い、
その反応生成物をシリカゲル薄層クロマトグラフィーで
同定した。すなわち２５ｍＭ Ｔｒｉ ａ−ＨＣＩ緩衝
液（ｐＨｓ、 ｏ ） ／ １０ 、ｍＦ）ｆｃａｃｔ
２２ｄにトリオレイン１０μ！を加え、これに酵素を総
活性として３Ｕとなるよう添加し３０℃で反応を行った
。
また、比較のため、市販のリゾプス・アルビダス（Ｒｈ
１ｚｏｐｕｓ ａｒｒｈｉｚｕａ ）由来のリパーゼ、
キャンディダ・シリンドラセ−（Ｃａｎｄｉｄａｅｙｌ
ｉｎｄｒａｃｅａ ）由来のリパーゼ、及びシュート１
カフ Ｈ咥（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａ、ｐ、 ）由
来のリパーゼを用いて同様の反応を行っｔ０ 反応中１０分、３０分、６０分、及び１．２０分目にサ
ンプルを採取し、クロロホルムによシ生成物を抽出し、
そして抽出液１μｌを薄層クロマトグラフィーによシ分
析した。
１ｚｏｐｕｓ ａｒｒｈｉｚｕａ ）由来のリパーゼ、
キャンディダ・シリンドラセ−（Ｃａｎｄｉｄａｅｙｌ
ｉｎｄｒａｃｅａ ）由来のリパーゼ、及びシュート１
カフ Ｈ咥（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａ、ｐ、 ）由
来のリパーゼを用いて同様の反応を行っｔ０ 反応中１０分、３０分、６０分、及び１．２０分目にサ
ンプルを採取し、クロロホルムによシ生成物を抽出し、
そして抽出液１μｌを薄層クロマトグラフィーによシ分
析した。
この薄層クロマトグラフ系は次の通シとした。
溶媒系：クロロホルム／アセトン（９６：４）。
発 色： １ ％ ｃｅ（ｓｏ４）２／１０ ％ＨｚＳ
Ｏ４加熱。
Ｏ４加熱。
薄層板ニジリカグルＫｉｅｓｓ１ｇｅｌ ６０ Ｆ２５
４ （Ｍｅｒｋ社製）。
４ （Ｍｅｒｋ社製）。
この結果を第７図に示す。この図から明らかな通シ、リ
ゾシス（糸状菌）由来のリノヤーゼ、キャンディ〆（酵
母）由来のリパーゼ、及びシュードモナス（細菌）由来
のＩＪ ノｆ−ゼを用いた場合には、いずれの反応時間
においてもジグリセリドでおる１、３−ジオレイン及び
１．２−（２，３）−ジオレイン、並びにモノグリセリ
ドであるモノオレインが生成し、これらは反応時間の経
過と共にむしろ増加する傾向を示したが、本発明のリパ
ーゼを用いた場合には、全反応時間にわたってモノオレ
イン及びジオレインは検出されず、オレイン酸のみが生
、成した。
ゾシス（糸状菌）由来のリノヤーゼ、キャンディ〆（酵
母）由来のリパーゼ、及びシュードモナス（細菌）由来
のＩＪ ノｆ−ゼを用いた場合には、いずれの反応時間
においてもジグリセリドでおる１、３−ジオレイン及び
１．２−（２，３）−ジオレイン、並びにモノグリセリ
ドであるモノオレインが生成し、これらは反応時間の経
過と共にむしろ増加する傾向を示したが、本発明のリパ
ーゼを用いた場合には、全反応時間にわたってモノオレ
イン及びジオレインは検出されず、オレイン酸のみが生
、成した。
実施例５゜
実施例１で得られた酵素標品を用いてトリオレイン、ジ
オレイン及びモノオレインを基質として酵素反応を行い
、その反応生成物をシリカゲル薄層クロマトグラフィー
て同定した。すなわち２５ｍＭ Ｔｒｉ ５−ＨＣ４緩
衝液ＣＰ！（８，０）／１ ｏ ｍＭＣａＣ／！２１−
にトリオレイン（９９チ純度）７．５μｌ：同緩衝液１
ｄにディオレイン（９９チ純度）５μｌ；同緩衝液１ゴ
にもモノオレイン（９９％純度）３μノを加え、各々酵
素液を総活性として３Ｕとなるよう添加し、３０℃にて
６０分間同条件で反応させた後、クロロホルムによシ抽
出し、この抽出液を、実施例４の場合と同様にしてシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーに付した。この結果を第
８図に示す。図から明らかな通シ、いずれの基質からも
オレイン酸のみが生じた。
オレイン及びモノオレインを基質として酵素反応を行い
、その反応生成物をシリカゲル薄層クロマトグラフィー
て同定した。すなわち２５ｍＭ Ｔｒｉ ５−ＨＣ４緩
衝液ＣＰ！（８，０）／１ ｏ ｍＭＣａＣ／！２１−
にトリオレイン（９９チ純度）７．５μｌ：同緩衝液１
ｄにディオレイン（９９チ純度）５μｌ；同緩衝液１ゴ
にもモノオレイン（９９％純度）３μノを加え、各々酵
素液を総活性として３Ｕとなるよう添加し、３０℃にて
６０分間同条件で反応させた後、クロロホルムによシ抽
出し、この抽出液を、実施例４の場合と同様にしてシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーに付した。この結果を第
８図に示す。図から明らかな通シ、いずれの基質からも
オレイン酸のみが生じた。
実施例６゜
１０＊ＡＦＦペプトン培地（実施例１参照のこと）に１
％のオリーブ油を加え、次の菌株を接種して３０℃にて
、３日間振とり培養した。
％のオリーブ油を加え、次の菌株を接種して３０℃にて
、３日間振とり培養した。
（１） スタフィロコッカス（Ｓｔ−）・キャビテイ
ス（２） Ｓ’ｔ、キャビテイス ＡＴＣＣ２７８４
１（３） ｓｔ、キャビテイス ＡＴＣＣ２７８４２
（４） Ｓｔ、キャビテイス ＡＴＣＣ２７８４３（
５） Ｓｔ、キャビテイスＴ−１−１（ＦＥＢＭ Ｐ
−７７２３）培養後、遠心分離によシ菌体を除去し、上
清液を得、これを酵素液として使用した。この酵素液の
りノ４−ゼカ価は次の通シであった。
ス（２） Ｓ’ｔ、キャビテイス ＡＴＣＣ２７８４
１（３） ｓｔ、キャビテイス ＡＴＣＣ２７８４２
（４） Ｓｔ、キャビテイス ＡＴＣＣ２７８４３（
５） Ｓｔ、キャビテイスＴ−１−１（ＦＥＢＭ Ｐ
−７７２３）培養後、遠心分離によシ菌体を除去し、上
清液を得、これを酵素液として使用した。この酵素液の
りノ４−ゼカ価は次の通シであった。
この酵素液を、Ｔｒｉｍ−ＨＣ４緩衝液（ＰＨｓ、 ｏ
、１０ ｍＭ ＣａＣＡ２）によシ、リノクーゼカ価が
３Ｔ、Ｕ／プとなるように稀釈し、と九にトリオレイン
１０分、３０分、６０分、及び１２０分目にサンプリン
グし、これをクロロホルムで抽出し、クロロホルム相２
μノを例３に記載した薄層クロマトグラフィーによシ分
析した。この結果を第９図に示す。
、１０ ｍＭ ＣａＣＡ２）によシ、リノクーゼカ価が
３Ｔ、Ｕ／プとなるように稀釈し、と九にトリオレイン
１０分、３０分、６０分、及び１２０分目にサンプリン
グし、これをクロロホルムで抽出し、クロロホルム相２
μノを例３に記載した薄層クロマトグラフィーによシ分
析した。この結果を第９図に示す。
図から明らかな通シ、いずれの菌株に由来する酵素液を
使用した場合にも、反応液中にモノオレイン及びジオレ
インは検出されなかった。
使用した場合にも、反応液中にモノオレイン及びジオレ
インは検出されなかった。
第１図はオリーブ油を基質とした場合の活性を１００と
して、この発明のリパーゼの各種基質に対する相対活性
を示し、第２図はトリオレインを基質とした場合の活性
を１００とし、この発明のリパーゼの各種基質に対する
相対活性を示し、第３図はこの発明のリパーゼの活性に
対する−の影響を示し、第４図はこの発明のリパーゼの
−に対する安定性を示し、第５図はこの発明のリパーゼ
の活性に対する温度の影響を示し、第６図はこの発明の
す１？−ゼの温度に対する安定性を示し、第７図はこの
発明のリパーゼと従来技術のリパーゼとを反応生成物に
関して比較した薄層クロマトグラムでアシ、第８図は各
種のオレイン酸グリセリドに対するこの発明のＩＪ ノ
Ｊ？−ゼの反応性を示す薄層クロマトグラムであシ、そ
して第９図はこの発明の種々の酵素液（菌株を異にする
）によｊ５ トリオレインを分解した場合の生成物を示
す薄層クロマトグラムである。 第３図及び第４図中＋は０．１Ｍ酢酸緩衝液を使用して
測定した活性を示し、−〇−は０．１ Ｍ燐酸緩衝液を
使用して測定した活性を示し、そして−口−は０．１Ｍ
グリシン−ＮａＯＨ緩衝液を使用して測定した活性を示
す。
して、この発明のリパーゼの各種基質に対する相対活性
を示し、第２図はトリオレインを基質とした場合の活性
を１００とし、この発明のリパーゼの各種基質に対する
相対活性を示し、第３図はこの発明のリパーゼの活性に
対する−の影響を示し、第４図はこの発明のリパーゼの
−に対する安定性を示し、第５図はこの発明のリパーゼ
の活性に対する温度の影響を示し、第６図はこの発明の
す１？−ゼの温度に対する安定性を示し、第７図はこの
発明のリパーゼと従来技術のリパーゼとを反応生成物に
関して比較した薄層クロマトグラムでアシ、第８図は各
種のオレイン酸グリセリドに対するこの発明のＩＪ ノ
Ｊ？−ゼの反応性を示す薄層クロマトグラムであシ、そ
して第９図はこの発明の種々の酵素液（菌株を異にする
）によｊ５ トリオレインを分解した場合の生成物を示
す薄層クロマトグラムである。 第３図及び第４図中＋は０．１Ｍ酢酸緩衝液を使用して
測定した活性を示し、−〇−は０．１ Ｍ燐酸緩衝液を
使用して測定した活性を示し、そして−口−は０．１Ｍ
グリシン−ＮａＯＨ緩衝液を使用して測定した活性を示
す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、スタフィロコッカス・キャピティス （￥Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ￥￥ｃａｐｉｔｉｓ
￥）に属し、リパーゼ生産能を有する微生物を栄養培地
に培養し、培地中に該リパーゼを蓄積せしめ、該培地か
ら該リパーゼを採取することを特徴とする新規リパーゼ
の製造方法。 ２、前記リパーゼが微アルカリ域に至適ｐＨを有し、ト
リグリセリドを脂肪酸およびグリセリンに変換する酵素
である特許請求の範囲第１項記載の製造方法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14958584A JPS6128387A (ja) | 1984-07-20 | 1984-07-20 | リパ−ゼの製造法 |
| PCT/JP1985/000409 WO1986000925A1 (fr) | 1984-07-20 | 1985-07-19 | Procede de preparation de lipase |
| US06/844,389 US4791059A (en) | 1984-07-20 | 1985-07-19 | Process for preparing lipase |
| EP19850903698 EP0187869A4 (en) | 1984-07-20 | 1985-07-19 | PROCESS FOR THE PREPARATION OF LIPASE. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14958584A JPS6128387A (ja) | 1984-07-20 | 1984-07-20 | リパ−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6128387A true JPS6128387A (ja) | 1986-02-08 |
| JPH0480676B2 JPH0480676B2 (ja) | 1992-12-21 |
Family
ID=15478413
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14958584A Granted JPS6128387A (ja) | 1984-07-20 | 1984-07-20 | リパ−ゼの製造法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4791059A (ja) |
| EP (1) | EP0187869A4 (ja) |
| JP (1) | JPS6128387A (ja) |
| WO (1) | WO1986000925A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5128264A (en) * | 1990-08-13 | 1992-07-07 | Suntory Limited | Process for preparing optically active 3-hydroxybutane derivatives using lipase |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5542532A (en) * | 1978-09-19 | 1980-03-25 | Maruho Kk | Novel monoglyceride-lipase |
| JPS56140887A (en) * | 1980-04-04 | 1981-11-04 | Maruho Kk | Novel lipase |
| JPS58225006A (ja) * | 1982-06-25 | 1983-12-27 | Suntory Ltd | 養毛化粧料 |
| JPS59134710A (ja) * | 1983-01-21 | 1984-08-02 | Suntory Ltd | 発酵養毛化粧料 |
| JPS6067409A (ja) * | 1983-09-22 | 1985-04-17 | Suntory Ltd | 頭髪用化粧料 |
-
1984
- 1984-07-20 JP JP14958584A patent/JPS6128387A/ja active Granted
-
1985
- 1985-07-19 WO PCT/JP1985/000409 patent/WO1986000925A1/ja not_active Ceased
- 1985-07-19 US US06/844,389 patent/US4791059A/en not_active Expired - Fee Related
- 1985-07-19 EP EP19850903698 patent/EP0187869A4/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1986000925A1 (fr) | 1986-02-13 |
| EP0187869A4 (en) | 1988-07-14 |
| US4791059A (en) | 1988-12-13 |
| EP0187869A1 (en) | 1986-07-23 |
| JPH0480676B2 (ja) | 1992-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SU1190992A3 (ru) | Способ получени 2,5-дикето- @ -глюконовой кислоты | |
| DE3880585T2 (de) | Acylaminosaeure-racemase, herstellung und verwendung. | |
| US4226941A (en) | Process for the optical resolution of d,l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid | |
| US4283494A (en) | Microbial lipase, process for its preparation and microbiologically pure culture therefor | |
| DE2614114B2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Kreatininamidohydrolase | |
| AU615661B2 (en) | Acid urease and production thereof | |
| CA1329161C (en) | Process for the preparation of difructose dianhydride iii | |
| JPH06217769A (ja) | 糖分解酵素の製造法 | |
| DE3600563A1 (de) | Waermebestaendige sarcosinoxidase n und verfahren zu deren herstellung | |
| US5281527A (en) | Process for producing pullalanase | |
| JP3761236B2 (ja) | 新規なβ−グルコシダーゼ、その製造法および用途 | |
| JP2763551B2 (ja) | ピラノースオキシダーゼおよびその製造法 | |
| DE2164018A1 (de) | Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Uricase | |
| US4791059A (en) | Process for preparing lipase | |
| JPH0669381B2 (ja) | カルニチンの製造法 | |
| US3767530A (en) | Process for producing halophilic alpha-amylase | |
| CA1159783A (en) | Process for producing 6-aminopenicillanic acid and 6-aminopenicillanic acid s-oxide | |
| JPS6339579A (ja) | リパ−ゼａｍｌの製造法 | |
| JPS5840466B2 (ja) | アシル−ＣｏＡ・オキシダ−ゼの製造法 | |
| JPH0248231B2 (ja) | Shinkikishiranaazeoyobisonoseizoho | |
| GB1571877A (en) | Microbial lipase and its preparation | |
| DK148360B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af uricase | |
| KR960007741B1 (ko) | 신규 α-1, 6-글루코시다제 및 그의 제조방법 | |
| EP0188628A1 (en) | Process for producing fatty acids by fermentation | |
| JPH05123170A (ja) | 新規リパーゼ |