JPS6129327B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヘパリン及びヘパリン塩の精製法に
関するものであり、また、このような方法によつ
て得られ、従来知られているヘパリン塩に対して
改善された性質を有する生成物に関する。

詳しくは、本発明はシユウ酸塩を含有しないヘ
パリン、特にカルシウム塩の形態のヘパリンの製
剤に関する。このカルシウム塩形態のヘパリン
は、長い貯蔵寿命を有する注射用ヘパリン溶液の
調製に使用可能である。

また、本発明は、適切に調製された量の鉱物塩
の存在下アルコールによる分別沈澱などによつて
ヘパリンからシユウ酸塩を除去する方法に関する
ものであつて、この場合、沈澱したヘパリンのシ
ユウ酸塩含有量は30ppm未満、好ましくは
20ppm未満である。

ヘパリンのナトリウム塩（“ナトリウムヘパリ
ネート”（sodium heparinate）とも称される）
は、従来、注射用ヘパリン溶液の製造に用いられ
ている。最近、混合カルシウム−ナトリウムヘパ
リネートもしくはカルシウム−マグネシウムヘパ
リネート、及び有利にはカルシウムヘパリネート
が、特に注射部における多数の望ましくない血管
反応（ナトリウムイオンに起因する）を除去する
ために使用されるようになつた。

混合ヘパリネート、即ちカルシウム−ナトリウ
ムヘパリネートもしくはカルシウム−マグネシウ
ムヘパリネート及びナトリウムを含有しないヘパ
リネート、特にカルシウムヘパリネートは、英国
特許第1471482号に記載の方法によつて、出発ヘ
パリネート例えばナトリウムヘパリネートから有
利に調製される。この方法は、水性媒体中のヘパ
リンの出発単一塩を、該出発ヘパリン塩中の金属
と少なくとも部分的に置換すべき所望の金属の塩
に接触させて、該所望の金属を含有する混合ヘパ
リン塩中間体を形成させ、このように形成したヘ
パリン塩中間体を、該媒体が含有する遊離金属イ
オンから分離することから成る。置換金属を更に
多く含むヘパリン塩が所望の場合には、上記ヘパ
リン塩中間体を水性媒体中で所望金属の塩と再接
触させることが可能である。所望の場合には、こ
の方法の操作条件は、出発ヘパリン塩が含有して
いた金属を含有しない単一ヘパリネートが置換金
属から得られるように調整することができる。

カルシウムイオンを含有するヘパリン塩溶液の
貯蔵に際して、該溶液中に沈積もしくは沈澱が形
成するか又は混濁が現れることがおりにふれて判
明した。明らかに、沈澱又は混濁が形成されると
いうこの傾向は、上記溶液のヘパリン濃度が大き
くなればそれだけ大きくなりがちであり、治療上
の用途のための注射用ヘパリン溶液の場合には特
に不利である。この注射用ヘパリン溶液は、とり
わけアンプル剤もしくは処方注射剤のように一定
量の形態で前以て工業的に調製されるものであ
り、従つて、数ケ月の貯蔵後においても完全に澄
明のままでなければならない。もちろん、若干の
沈積もしくは光混濁が形成しても、溶液は治療上
の投与には不適当なものとなる。

一方において、粒子もしくは結晶の大きさが約
50μ以下の場合には、もはや可視的でないという
こと、また、他方において、ヒトの毛細血管は１
〜３μ程度の内径を有するということを考慮すれ
ば、このことは特に重要である。更に、注射可能
溶液においては、粒子もしくは結晶が存在する
と、光学的装置を使用しなければもはや可視的で
ないとしても、注射活性成分がヘパリンの場合、
その抗凝固性に鑑みて特に有害となるであろう。
即ち、患者に注射するこのような固体粒子によつ
て誘発される出血的危険は、ヘパリンの別の所望
の本質的活性により高められるであろう。

溶液が透明の状態にあるということは、沈澱が
全く生成しないということを必ずしも意味しな
い。実際、沈澱が非常にゆつくり生ずるような場
合には特に、微小結晶（特に準−可視的であつて
50μ未満のサイズを有する）が合体して非常に僅
かの、例え１個でも、比較的大きい結晶（この結
晶はもちろん溶液の全体に亙る透明性を変化させ
ない）となる傾向が生ずるであろう。従つて、こ
のような溶液を注射することは、少なくとも上記
の場合と同程度に有害であろう。

上述した危険の全ては、注射の形態（皮下注
射、筋肉注射、静脈注射等）によつて変化はする
が、標準医薬溶液中のヘパリン濃度が大きくなる
につれてそれだけ大きくなる。しかしながら、周
知のようにできるだけ高いヘパリン濃度を採用す
ることがしばしば望ましく、このために沈澱の可
能性又は準−可視的粒子の数の増大が非常に重大
な問題となりやすい。

このような困難性を克服するための試みにおい
ては、新しく製造したヘパリン溶液、特に、少な
くとも一部がカルシウムから形成される生理学的
に許容し得る金属のヘパリン塩の溶液をむしろ長
く貯蔵して、次いで溶液を更に処理する前、例え
ば溶液をアンプルもしくは処方注射器に分与する
前に、生じた沈澱を過する。

予備貯蔵時間が長ければ長いほど最終的な医薬
製剤の製造が経済的でなくなることは明らかであ
ろう。

従つて、本発明の目的は、上記困難性の全てを
本質的に克服することであり、即ち、本発明の特
定の目的は、長い貯蔵寿命を有する溶液、特に注
射可能な溶液の調製に使用し得る注射可能な品質
を有するヘパリンを提供することである。本発明
の別の目的は、このようなヘパリンを得るための
方法を提供することであり、この方法では上述し
たようなタイプの予備貯蔵処理を必要としない。

実際、上述した困難性の大部分は、注射可能な
品質を有するヘパリンの溶液中に種々の性質を有
する鉱物塩が様々な量（2.5重量％まで）で存在
するためであるということが判明した。この鉱物
塩の存在は、試験したバツチのオリジン
（origin）、天然の採取源からの抽出方法のオリジ
ン、及び／又は得られる天然ヘパリンを変色（即
ち、白色化）して注射可能な品質を有するヘパリ
ンに通常必要とされる無色標準に合致させるため
の方法のオリジンに依存する。尤も、鉱物塩の上
記の含有量は今日の規制（例えば、フランス
CODEXの標準）によつて許容される範囲内にあ
る。

残留塩の大部分は、夫々が１％までの量の塩素
酸塩及び硫酸塩によつて構成される。他の塩、特
に炭酸塩、亜硫酸塩はより少ない割合で存在す
る。

硫酸カルシウム、亜硫酸カルシウム及び炭酸カ
ルシウムの低い溶解度を考慮すると、例えば上述
した方法によつてヘパリンのナトリウム塩をヘパ
リンのカルシウム含有塩に変換すると、これらの
塩の割合が減るはずである。実際、前記カルシウ
ム塩はヘパリンのカルシウム含有塩の澄明溶液か
ら固体として分離可能である。

しかしながら、最も驚くべきことに、特に上記
方法によるナトリウムヘパリネートのカルシウム
ヘパリネートへの変換の終了時、上記残留鉱物塩
の含量は出発ナトリウムヘパリネートの前記含量
に比して殆ど変化していないということが観察さ
れた。

更に驚くべきことには、少なくとも一部がカル
シウムで形成される金属を含有する塩を包含する
ヘパリンの塩が、少量であるが無視できない量の
シユウ酸イオンを尚も含有しているにもかかわら
ず、透明な水溶液の形態で溶解可能であるという
ことが判明した。このことは、カルシウムのよう
な金属のシユウ酸塩は周知のように非常に水不溶
性であるのであるからとりわけ予想に反すること
であつた。

この挙動の理由は末だに十分に解明されていな
いが、特に塩化カルシウムが過剰に存在する場
合、シユウ酸カルシウムの通常の溶解条件におけ
る変化が確認された。即ち、市販の注射用ヘパリ
ン又はヘパリネートは、1.0乃至2.5重量％の範囲
内で変化する残留塩含量を有し得ることが判明し
た。このような試料に関して多数の試験を行つた
ところ、該試料のシユウ酸塩含有量が一貫して
90ppmより多いことが判明した。ある場合に
は、シユウ酸塩含有量が40ppmであつたが、こ
の結果はむしろ誤りであることが後に判明した。
典型的には、市販の注射用ヘパリンおいては、シ
ユウ酸塩含有量が90乃至300ppmであり、ときに
はそれ以上である。

処理済ヘパリンから鉱物塩、特に微量のシユウ
酸塩を除去すると、カルシウムヘパリネート溶液
の調製後に該溶液中に生じやすい混濁及び沈積が
消失するということが判明した。

更に、シユウ酸イオン含有量が十分に小さくな
つていれば、長期貯蔵に際して、このような溶液
中の準−可視可能な粒子の（２乃至50μの範囲の
大きさを有する粒子の検出用の粒子計数器のよう
な通常の光学装置によつて検出できるような）実
質的増加はないことが判明した。

後記するような本発明の精製方法によつて処理
されるカルシウムもしくは混合カルシウムヘパリ
ネート溶液は、数ケ月の貯蔵後においてさえ澄明
である。即ち、混濁もしくは沈積はみられない。
準−可視可能な粒子含量は長時間の貯蔵に際して
増加することがなく、このために前述した結晶合
体の危険もまた減少する。

本発明のヘパリンもしくはヘパリン塩は、この
ように、残留鉱物塩、特にシユウ酸塩含量が十分
に小さいので、このようなヘパリン−−更に詳し
くは、カルシウムヘパリネート溶液−−から出発
して調製される注射可能溶液は、このタイプの投
与に通常用いられる濃度で数ケ月例えば少なくと
も６ケ月の貯蔵後においてさえも完全に澄明のま
まであり得るようなものである。

30ppm未満、好ましくは20ppm未満又はそれ
以下のシユウ酸イオンを含有する本発明のヘパリ
ン塩は、溶液、特に注射可能溶液の形態にし得、
これらの溶液は澄明であつて、準−可視可能な粒
子の含有量は、あつたとしても、長期に亙る貯蔵
に際して実質的に一定であり、この貯蔵は、２年
間程度、更に、３乃至５年間であつても可能であ
る。この貯蔵は、約20〜25℃の範囲内のような室
温でのものと理解されたい。

更に、本発明のヘパリン塩は、0.5％未満、好
ましくは0.3％未満の残留鉱物塩含量を有する。

“鉱物塩”という表現は、硫酸もしくは塩酸の
ような鉱酸の塩に限定されるものではなく、シユ
ウ酸もしくは炭酸のような酸の塩又は酢酸のよう
な低分子量有機酸の塩でさえも包含する。このよ
うな塩は全てヘパリン塩ではないと考えられる。

このようなヘパリン塩は、ヘパリン塩の金属の
少なくとも一部がカルシウムのように水溶性でな
いシユウ酸塩を形成するものであつても、長期に
亙つて貯蔵又は保存される注射可能溶液の製造に
使用できることが判明した。

本発明は、また、通常の変色法、特に酸化法
（これらの方法は、この方法で処理したヘパリン
のシユウ酸塩含有量を増加させやすいことが判明
した）によつて得られるようなひどく変色したヘ
パリン製品を含めた市販の製品から本発明の精製
ヘパリンを得るための方法をも提供する。

精製すべき出発ヘパリン調製品もしくは更に一
般的には、ヘパリンと他の塩（特に鉱物塩）との
混合物に適用可能な本発明の方法は、ヘパリン塩
と残留鉱物塩との間の溶解度差を用いる選択的沈
澱を利用する。本発明の方法は、ヘパリン−鉱物
塩混合物を含有する水溶液にアルコール（例えば
エタノール）のような非イオン性沈澱剤の一定量
を添加して、ヘパリンもしくはヘパリン塩を選択
的に沈澱させ、一方、鉱物塩を水溶液中に残存さ
せ、ヘパリンを回収し、必要に応じて、最終ヘパ
リン中のシユウ酸塩の濃度が、多くの場合多くと
も70ppmであるが、好ましくは30ppm程度で、
更に好ましくは20ppm未満（長い貯蔵時間（例
えば、２年間又は３乃至５年間であつても）が必
要であり且つ、沈澱が生じないという点に関して
全面的安全性がその期間に要求される場合）とな
るまで、前記のように回収したヘパリンの新しい
水溶液に対して前記選択的分離を繰り返すことか
ら成る。本発明においては、（現在使用し得る技
術によつて検出した場合）シユウ酸塩を痕跡だけ
で有するヘパリンを得ることさえも意図されてい
る。

本発明の方法の好ましい具体例によれば、用い
るヘパリンは金属（例えば、ナトリウム、リチウ
ム、カリウム）の塩の形態であつて、そのシユウ
酸塩はそれ自体水溶性である。その後、実質的に
シユウ酸塩が存在しない最終精製ヘパリンの金属
の代わりに、他の金属、特にカルシウム（そのシ
ユウ酸塩は水に不溶性である）のようなもので少
なくとも部分的に置換することができ、又はマグ
ネシウムで置換することもできる。

このような処理に使用されるヘパリン溶液の濃
度は大きく変化させることができる。用いるエタ
ノールの容量は処理溶液の容量に比例するので、
溶液を希釈しすぎないようにすることが実用上の
理由から好ましい。等量のヘパリンに対しては、
溶液を希釈すればするほど必要とされるエタノー
ルの量が大きくなる。反対に、ヘパリン溶液は、
粘度が急速に増加するのである濃度を超えてはな
らず、また、このような溶液を用いると生ずるヘ
パリンの沈澱中には、分離すべき出発不純物が大
量に混入してしまうであろう。

これらの条件を考慮して、本発明の方法は、濃
度が注射に通常用いられる溶液の濃度程度であ
る、即ち、約40乃至約250ｇ/（約5000乃至
30000IU/mlに相当）のナトリウムヘパリネート
を含有する溶液に対して適用するのが有利であ
る。

溶液のPHは精製の結果に影響を及ぼす。酸溶液
は、溶液中に鉱物塩、特にシユウ酸塩をむしろ保
持するものであり、従つて、分離を改善する。

また、ヘパリンは強酸により影響を受け得る。
PHが3.5より大きい溶液、好ましくは５乃至７の
PHの溶液が有利に用いられる。

このように調製したヘパリン溶液に十分な量の
エタノールを添加すると、実際上全てのヘパリン
が沈澱し、一方、鉱物塩は水性アルコール溶液中
に残存する。１容量のヘパリン溶液に対しては、
0.5乃至1.5容量のエタノールを用いることが好ま
しい。

好ましくは、実際上純粋な中性アルコール（99
乃至100゜GL）が採用される。

ヘパリンの沈澱を、上澄液から分離し、次いで
混練し、残存する溶液を全て除去するために洗浄
する。洗浄は無水アルコールで行うのが好まし
い。次いで、ヘパリンを過して乾燥する。

これらの最初の分離が不完全の場合には、上記
要求に合致するヘパリン塩が得られるまで、ヘパ
リンの沈澱に対してこの処理を繰り返すとよい。

出発ヘパリンの大部分が上記の沈澱中に回収さ
れ、残余が水性アルコール溶液中に残存する。新
しいヘパリンの沈澱を得るために、後者のものを
別のアルコールで処理してもよい。

本発明の精製方法は、市販のヘパリン（出所起
源の如何にかかわらず）が含有する遊離のシユウ
酸塩を除去するあらゆる場合に適用可能であるこ
とが判明した。

しかしながら、この方法によると、相当するシ
ユウ酸塩が水溶性であるナトリウムのような金属
のヘパリン塩に適用した場合には、30ppm未
満、更には20ppm未満を含有するヘパリンが得
られるまで、どんな測定可能な遊離のシユウ酸塩
をも確かに除去できるが、ある場合には、このよ
うなヘパリン塩を少なくとも部分的にカルシウム
（そのシユウ酸塩は不溶性である）のような金属
の１つに変換すると、得られる生成物が多量の遊
離シユウ酸塩を含有するということが最終的に判
明した。

この段階においては、これらの現象を解明する
ために何らの科学的説明も提供されないが、ある
起源の市販ヘパリンに含有されるシユウ酸塩の一
部が、あたかもヘパリン分子に吸収もしくは固定
されるように機能して、次いでこの分子が明らか
に陰イオン交換体として作用するものと推定され
る。従つて、これらの現象の結果として、最終の
ヘパリン塩は、長期間に亙る貯蔵が可能なヘパリ
ンの注射可能溶液の製造にはもはや適当ではない
ものとなる。

しかしながら、この困難性は本発明の更に改良
された方法の場合には克服され得ることが判明し
た。この方法は、上記精製工程における非イオン
性ヘパリン沈澱剤を、精製すべき出発ヘパリン水
溶液（又はヘパリン−鉱物塩混合物の水溶液：こ
れは、明らかに最初に固定もしくは吸収されたシ
ユウ酸塩を含めて、シユウ酸塩以外の水溶性鉱物
塩を、シユウ酸塩の分離を促進するのに十分な濃
度で含有する）と接触させることから成る。上記
固定もしくは吸収されたシユウ酸塩は、次いで遊
離されて、ヘパリン塩の次の沈澱に際して水溶液
中に残存しヘパリン塩の次の沈澱に供される。

このように、精製すべきヘパリン溶液中に存在
する他の塩のあるものは、溶液中のそれ自身の濃
度を適当に調整すると、適切であれば、シユウ酸
イオンの更に完全な抽出を可能とする。

即ち、本発明方法の好ましい具体例に於いて
は、ヘパリンの出発水溶液と上記した非イオン性
ヘパリン沈澱剤とを接触させる前に、当該ヘパリ
ンの出発水溶液中の前記水溶性鉱物塩の濃度を予
め調整することが通常要求される。

事実、十分な濃度特に二価アニオンから成る塩
及び好ましくは一価アニオンから成る塩の十分な
濃度は、あたかもそれらがヘパリンに吸着又は固
定されたシユウ酸塩の置換を惹起するかの如く挙
動を示すことが知見されている。

必要であれば、最終ヘパリン中の全シユウ酸塩
濃度が30ppm未満、好ましくは20ppm未満にま
でなるように、上記の定義の如く調整された濃度
のシユウ酸塩以外の水溶性鉱物塩及び前記のよう
に回収されたヘパリンから成る溶液を再接触させ
る沈澱段階を繰り返すことが適当である。

好ましくは、シユウ酸塩以外の二価アニオンを
有する塩の金属は、出発ヘパリン溶液中に含まれ
ているか又は該溶液に添加され得るものであり、
そのシユウ酸塩が水溶性であるような金属を含む
群から選択されるものである。炭酸塩、特に炭酸
ナトリウムが、本発明方法において最も効果的な
塩であることが判明した。

また、上記溶液中のヘパリンも鉱物塩の金属と
同じ金属のヘパリン塩の形態にあることが好まし
い。そうすると、ヘパリン塩の金属が鉱物塩中に
含まれる金属で交換される可能性が避けられるの
で、精製ヘパリン塩の金属含量は閉鎖制御
（closecontrol）下に保持されることになる。

アルコールの如き非イオン性沈澱剤と接触させ
られる溶液中の前記鉱物塩の濃度を、ヘパリンの
重量に対し、0.3乃至2.5％、例えば約0.5％の値に
調整すると有利である。

出発溶液もまた同様に、そのシユウ酸塩が水溶
性である少なくとも１つの金属の１価アニオンを
有する塩を含有すると有利である。塩化ナトリウ
ムはそのような塩の代表例である。本発明方法の
好ましい態様においては、前記一価塩の濃度は、
溶液中１乃至７重量／容量％の範囲、例えば約
2.5重量／容量％であるか、又はこの濃度に調整
する。

必須ではないが、非イオン性沈澱剤と接触させ
られる溶液のPHが７乃至10、例えば約8.5である
と有利であることが判明した。これは、使用され
る二価アニオンを有する塩が炭酸ナトリウムであ
る場合、自発的に達成されるPHに他ならない。

二価及び／又は一価アニオンを有するこれらの
塩は、本発明方法の最終段階、例えばヘパリン溶
液と非イオン性沈澱剤との最終接触段階で容易に
除去され得る。例えば塩化水素酸を用いて、炭酸
塩を分解するのに十分な若干酸性値、特に３乃至
７の範囲にPHを調整すると有利である。最終ヘパ
リン塩が沈澱すると、塩素イオンは水溶液中に残
存する。

実質的にシユウ酸塩を含有しないヘパリン組成
物、特にヘパリン塩がこのようにして得られる。
このヘパリン組成物（塩）は、該ヘパリン塩の金
属カチオンの少なくとも一部分がカルシウムのよ
うな金属（そのシユウ酸塩は非常に不溶性であ
る）で形成されている場合でさえも、薬剤組成物
特に長期の貯蔵寿命を有する注射可能な又は潅注
可能な溶液の製造にそのままで適するか、又は有
利には前記英国特許第1471482号の方法に従つて
（勿論必ずしも該方法に従う必要はない）このヘ
パリン組成物が含有している金属カチオンの少な
くとも一部を置換して、実質的にシユウ酸塩を含
有しない他のヘパリン塩を得るための出発ヘパリ
ン塩として適しており、次いでこの他のヘパリン
塩から長期の貯蔵寿命を有する薬剤組成物が得ら
れる。

即ち本発明は、シユウ酸塩非含有のヘパリン製
剤のうち、特に、ヘパリンの金属塩、即ちヘパリ
ンのナトリウム、カリウム、カルシウムもしくは
マグネシウム塩の如きヘパリンの単一塩、又は任
意の相対比で上記金属カチオンの少なくとも２つ
を含有するヘパリンの混合塩に係る。本発明のこ
れらのヘパリン塩は全て実質的にシユウ酸塩を含
有しないものであり、即ち、全シユウ酸塩含量
は、多くの場合70ppm未満であるが30ppm程度
に低く、好ましくは20ppm未満である（以後、
シユウ酸塩非含有ヘパリンと称す）。前記混合塩
のうち、ナトリウム及びカルシウムを含む好まし
い一連の混合物塩を選択し得る。

本発明は、又、シユウ酸塩非含有ヘパリンを薬
剤賦形剤と共に含有する医薬製剤に係り、特に、
少なくとも120国際単位(IU)/mg、好ましくは150I
Ｕ／mgより高い活性を有し、発熱物質を含有せず
且つシユウ酸塩非含有の好ましくは無色のヘパリ
ン製剤に係り、更に、血液凝固の治療に有用な高
濃度ヘパリン溶液、特に5000乃至35000IU/ml、
好ましくは20000乃至30000IU/ml、例えば25000I
Ｕ／mlのヘパリンを含有する皮下注射に適するシ
ユウ酸塩非含有の好ましくは無色の溶液、又は、
1000乃至10000IU/ml、例えば5000IU/mlのヘパリ
ンを含有する静脈注射に適するシユウ酸塩非含有
溶液等に係るものである。

前記製剤のヘパリンは、１種又は数種の金属カ
チオンを含むヘパリンの生理的に許容し得る金属
塩の形態にあると有利である。好ましくは、該金
属は少なくとも一部がカルシウムである。カルシ
ウムが該ヘパリン塩の唯一の金属であると有利で
ある。医薬製剤が、随時使用し得るように処方済
使い捨て注射器（dispensable syringe）として
提供されると有利である。

本発明はまた、ヒトの血液凝固の制御方法に係
る。該方法は、本発明のシユウ酸塩非含有ヘパリ
ンの有効量をヒトに投与することから成り、例え
ば、患者のトロンビンの状態（thrombolic
state）に応じて１日２回皮下注射により13500乃
至50000IUを投与する。又は１日に亙り均等に静
脈経路（調整した潅注が有利である）を介して24
時間当たり20000乃至50000IUを投与する。或い
は又、筋肉内経路を介して１週間３回5000乃至
10000IU投与することも有利である。

本発明の精製ヘパリンは、通常の投与量及び濃
度条件下での注射可能溶液の調製に直接使用され
得る。また、例えば英国特許第1471482号に開示
の方法に従つて、カルシウムヘパリネート又はカ
ルシウム−マグネシウム、カルシウム−ナトリウ
ム混合塩の如き他の塩の調製用出発材料として使
用することもできる。

ヘパリンの好ましい精製方法の第１例 注射可能ナトリウムヘパリネートの好ましいア
ルコール分別精製方法に於いて、注射可能な品質
を有するウシ又はブタ由来のナトリウムヘパリン
を使用する。このヘパリネートを鉱物除去水
（300000乃至800000Ω/cm、好ましくは500000Ω/
cmの比抵抗を有する）中に溶解させる。

ヘパリネート溶液の濃度を5000乃至30000IU/
ml、好ましくは25000IU/mlに調整する。0.3％メ
タクレゾールを加えて汚染を防止する。試薬級
5Nナトリウム溶液又は試薬級5N塩化水素酸溶液
を添加して、溶液のPHを５乃至７好ましくは6.5
に維持する。溶液の電気伝導率を7000乃至15000
μMhos−cmに保持する。

0.7容量の中性エチルアルコール（99乃至100゜
GL）を上記のように調製したヘパリネート溶液
に加える。沈澱を生起させ、必要なら少量の塩化
ナトリウムを加えてもよい。

沈澱物を上澄液から分離する。この沈澱物を前
記鉱物除去水に再溶解し、約12500IU/ml濃度の
溶液を得る。必要に応じ、5N NaOH又は5NHCl
溶液を使用して、PHを5.5に調整する。溶液を0.3
μのミリポアフイルタで過する。１容量の溶液
に対し1.2容量の中性エチルアルコール（99−100
゜GL）を撹拌しながら加える。沈澱を生起さ
せ、必要に応じ少量の塩化ナトリウムを加える。

このようにして得られたヘパリン沈澱物を、無
水エチルアルコール中で粉砕することにより脱水
し、工業用ブフナーで真空下に過し、無水アル
コールで洗浄後、温度35／40℃、1Torrの減圧下
で乾燥する。

更に沈澱を必要とする場合は、第２の沈澱段階
即ち、ヘパリン濃度12500IU/ml、PH5.5及び１容
量の溶液に対し1.2容量の無水アルコールの添加
の条件下で前記と同様の沈澱を繰り返せばよい。

一般に好ましい方法の第２例 第１アルコール分別 ウシ又はブタ由来の注射可能品質を有するヘパ
リンのナトリウム塩を300000乃至800000ohms、
好ましくは500000ohmsの抵抗を有する鉱物除去
水に溶解し、5000乃至30000IU/ml、好ましくは
25000IU/mlのヘパリン濃度の溶液を得る。メタ
クレゾールを３／1000濃度になるように加える。
炭酸ナトリウム溶液（最初のヘパリン重量に対し
て0.5％の割合の無水炭酸ナトリウム）を加え、
溶液のPHを７乃至10好ましくは8.5に調整する。

この時点で、溶液の電気伝導度は7000乃至
15000μMhos/cmの範囲になる。次いで、塩化ナ
トリウムの結晶を2.5％（重量／容量）の割合で
溶液に加える。次に、ヘパリン溶液の容量に対
し、0.7容量の中性エチルアルコール（99乃至100
゜Gay Lussac degreesと滴定される）を撹拌し
ながら加える。６時間静置の後、ヘパリン沈澱物
を集める。

第２アルコール分別 このようにして得られたヘパリン沈澱物を再び
前記鉱物除去水に溶解し、約12500IU/mlの濃度
の溶液を得る。この時点でPHは約8.5である。次
いで、溶液に対し2.5％（重量／容量）の割合で
塩化ナトリウム結晶を加える。撹拌しながら、99
乃至100゜GLの中性エチルアルコールの１容量を
加える。

この媒質を12時間放置し、新しく沈澱したヘパ
リンを集める。

上記した「第２アルコール分別」を上記条件下
で３回繰り返す。即ち、前記第２アルコール分別
を全部で４回実施する。第４回目のアルコール分
別から得られる沈澱物を、前記鉱物除去水に再度
溶解し、約12500IU/mlの濃度の溶液を得る。激
しく撹拌しながら、塩化水素酸を使用してPHを３
に調整する。次いでこの撹拌を更に15分間続け
る。更に、5N水酸化ナトリウムを使用してPHを
5.5に調整する。塩化ナトリウム結晶を2.5％（重
量／容量）の割合で加え、得られた溶液を0.3μ
ミリポアメンブランで過する。99乃至100゜GL
の中性エチルアルコール１重量／容量を撹拌しな
がら液に加える。

この媒質を12時間静置する。

得られたヘパリン沈澱物を、無水エチルアルコ
ール中で粉砕することにより脱水し、真空下に
過する。最後に無水アルコールで洗浄し、温度
35／40℃及び1Torrの減圧下で乾燥する。このよ
うにして注射可能ヘパリンのナトリウム塩が得ら
れ、当該ヘパリン中の全鉱物塩の割合は0.5％未
満であり、全シユウ酸塩の割合は最大20ppmに
等しいか又はそれよりも少ない。

実施例 １ 本実施例に於いては、市販の160IU/mgナトリ
ウムヘパリネートを使用する。

鉱物塩の全含量は2.5％であり、シユウ酸塩含
量は約220ppm（即ち、0.022％）である。

300のスチール−非酸化反応器（Steel−
inoxreactor）中で、このヘパリネート10000ｇを
500000Ω/cmの比抵抗を有する50の鉱物除去水
に溶解する。この水は、予めミリポアメンブラン
0.22μで過されたものである。

１時間撹拌を行つて、溶解を完全にする。PHを
測定し、5NのNaOH又は5NのHClを加えて6.5に
調整する。上記と同じ鉱物除去水を加えて、容積
を64にする。電気伝導率を測定すると、15000
μMhos/cmである。温度を15乃至30℃に保持して
おく。

最初の溶液１容量に対し、新たに蒸留したメタ
クレゾール192mlと中性エチルアルコール（99／
100゜GL）0.7容量即ち44.8とを加える。溶液
を沈澱が生ずるまで放置する。この際、必要に応
じ少量の塩化ナトリウムを添加する。上澄液及び
沈澱したナトリウムヘパリネートをそれぞれ分離
回収する。回収ナトリウムヘパリネート中の鉱物
塩含量は0.5％未満であるが、約200ppmのシユウ
酸イオンが依然として存在している。

このナトリウムヘパリネートを再び500000Ω/
cm比抵抗の前記鉱物除去50中に溶かす。必要に
応じ、5NのNaOH又は5NのHClを添加してPHを
5.5に調整する。電気伝導率を測定すると、15000
μMhos/cmである。前記鉱物除去水を加えて、容
積を128にする。新たに蒸留したメタクレゾー
ル384ｇを加え、室温で24時間放置する。ヘパリ
ン溶液を0.3μのCWSSミリポアフイルタで過
し、液を回収する。30即ち1.2容量の中性エ
チルアルコール（99／100゜GL）を、前記液25
に撹拌しながらゆつくり加える。次いで、沈澱
物が得られるまで放置する。必要に応じ、少量の
塩化ナトリウムを添加する。

上澄液及びナトリウムヘパリネート沈澱物をそ
れぞれ分離回収する。次いで回収ナトリウムヘパ
リネートを、無水アルコールで脱水し、粉砕し、
真空条件下ブフナー漏斗で過し、最後に乾燥
し、凍結乾燥する。このようにして9400ｇのナト
リウムヘパリネートを得る。収率は94％である。
このヘパリネートは160IU/mgであると滴定され
る。鉱物塩の含量は0.15％であり、30ppmのシユ
ウ酸イオンを含有している。

水−アルコール上澄液中に含有されているヘパ
リネートを回収するために、以下の処理を施す。

撹拌下に最初のアルコール沈澱の上澄液１容量
に対し、中性のエチルアルコール（99／100゜
GL）１容量を加える。24時間放置した後、清澄
又は若干乳白色の上澄液を残渣アルコールに移し
かえる。

沈澱物を分離し、無水エチルアルコール中で回
収し、脱水し、粉砕し乾燥する。

中性のエチルアルコール（99／100゜GL）を、
該上澄液１容量に対し0.5容量の割合で、撹拌し
ながら第２の調製の上澄液に加える。次いで24時
間放置する。

ナトリウムヘパリネートを第１上澄液の場合と
同様の条件下で回収する。

このようにして得られたナトリウムヘパリネー
トを、カルシウム塩の調製に使用する。

この調製を英国特許第1471482号に開示の方法
で実施する。

要約すると、この調製方法は、カルシウムに富
むヘパリネートを得るべく、ナトリウムヘパリネ
ート溶液に塩化カルシウムを加え、次いで、遊離
したナトリウムイオンを除去し、カルシウムイオ
ンに富むヘパリネートを得るべく再びカルシウム
イオンを加えることから成る。

上記した方法により、ヘパリンのカルシウム塩
を得る。このヘパリンのカルシウム塩は、160I
Ｕ／mgであると滴定され、10.3％のカルシウムと
0.2％のナトリウムと20ppmのシユウ酸イオンと
を含有している。

実施例 ２ カルシウム−ナトリウムヘパリネートを調整す
るために、実施例１と同様に調整されて約
30ppmのシユウ酸塩を含有する160IU/mgのナト
リウムヘパリネートを、英国特許第1471482号に
開示の方法に従つて処理する。この実施例では、
塩化カルシウムをナトリウムヘパリネート溶液に
１度だけ添加する。次いで、遊離したナトリウム
イオンを除去する。

このようにして、約７％のカルシウムを含有す
る160IU/mgのカルシウムヘパリネートを調製す
る。このヘパリネート塩中のシユウ酸イオン含量
は18ppmである。

25000IU/mlと滴定されるこのカルシウム−ナ
トリウムヘパリネートの溶液を数ケ月アンプル中
に貯蔵しておいても、何ら沈澱物は認められなか
つた。

実施例 ３ 実施例２を繰り返すが、しかしながら本実施例
に於いては、英国特許第1471482号に開示の方法
に従つて、ナトリウムヘパリネートを完全にカル
シウムヘパリネートに変換する。

このようにして得られるカルシウムヘパリネー
トは、160IU/mgであると滴定され、約10.4％のカ
ルシウム含量と0.1％未満のナトリウム含量とを
有する。鉱物塩の含量は0.4％であり、20ppmの
シユウ酸イオンを含有している。このようにして
得られる溶液は、25000IU/mlであり、実施例２
と同様の性質即ち貯蔵安定能を有する。

実施例 ４ 本実施例では、160IU/mgの市販の注射可能な
ヘパリンのナトリウム塩を使用する。

その鉱物塩の含量は2.5％であり、シユウ酸塩
含量は1000ppm（0.1％）である。300ステンレ
ススチール反応器中で、このヘパリン10000ｇを
500000ohmsの抵抗を有する50の鉱物除去水に
溶解させる。この水は、予め0.22μのミリポアメ
ンブランで過されたものである。

撹拌下にこの溶液を15分間放置し、鉱物除去水
を添加して容量を64にする。濃度は25000IU/
mlである。次いで、192mlの新たに蒸留したメタ
クレゾールを、次に水溶液形態にある50ｇの炭酸
ナトリウムを、最後に1600ｇの塩化ナトリウム結
晶を加える。再び溶液を撹拌下に15分間放置す
る。必要に応じ、炭酸ナトリウム溶液を添加し
て、PHを8.5に調整する。99乃至100゜GLと滴定
される中性のエチルアルコール44を撹拌下に加
える（溶液の初期容量１につき0.7容量のアルコ
ール）。この媒質を６時間静置し、沈澱したヘパ
リンを収集する。

このヘパリン沈澱物を、上記の特性を有する鉱
物除去水110中に再溶解させた後、第２アルコ
ール分別処理を実施する。そうすると、約12500I
Ｕ／mlの濃度を有する溶液を得る。この溶液を15
分間撹拌下に放置し、鉱物除去水に加えて128
にする。384mlの新たに蒸留したメタクレゾール
を添加する。炭酸ナトリウム溶液でPHを8.5に調
整する。3200ｇの塩化ナトリウムを添加する。次
いで撹拌下に15分間溶液を放置する。99乃至100
゜GLに滴定される中性エチルアルコールを、ヘ
パリン溶液１容量に対し１容量の割合で撹拌しな
がら加える。得られた媒質を12時間静置する。上
澄液を除去した後、生成したヘパリン沈澱物を回
収する。

アルコール分別を、第２分別と同様の条件下で
逐次的に３回繰り返す。この際、前回の分別処理
で得られたヘパリン沈澱に対して次の分別処理を
する。

次いで、最終ヘパリン沈澱物を鉱物除去水に再
溶解させ、約12500IU/mlの濃度を得る。溶液は
128である。激しく撹拌しながら塩化水素酸を
加えてPHを３に調整する。溶液を15分間撹拌す
る。5Nの水酸化ナトリウムでPHを5.5に調整す
る。384mlの新たに蒸留したメタクレゾール及び
次いで3200ｇの塩化ナトリウム結晶を加える。得
られた溶液を0.3μのミリポアメンブランで過
する。これら全ての操作を15乃至30℃の温度範囲
で実施する。99乃至100゜GLと滴定される１容量
の中性エチルアルコールを撹拌下に液に添加す
る。溶液を12時間放置する。

このようにして得られた最終ヘパリン沈澱物
を、無水エチルアルコール中で粉砕することによ
り脱水し、真空下に過し、無水アルコールで洗
浄を繰り返し、次いで1Torrの減圧下35／40℃で
24時間乾燥する。微量の溶剤を除去すべく、粉末
を粉砕し、再び1Torrの減圧下40℃で24時間乾燥
する。9100ｇのヘパリンのナトリウム塩が得ら
れ、その鉱物塩含量は0.5％未満であり、シユウ
酸塩含量は20ppm未満である。この分別で得ら
れる収率は、90.43％である。回収されたナトリ
ウムヘパリンのIU/mg滴下は157である。

精製ヘパリン中のシユウ酸イオンの測定は、J.
R.HELBERT及びM.A.MARINI（Biochem.J.
（1963）２（５）pp.1101−６）の方法による該
イオンの抽出後行なつた。但し、該方法は、ヘパ
リン中に存在するシユウ酸イオンをIRA400アニ
オン樹脂で吸着する前に、過剰の炭酸ナトリウム
の存在下で抽出するように変更した。IRA400ア
ニオン樹脂の使用は、前記著者等により推奨され
ている。該樹脂からの溶出後、シユウ酸イオンを
P.M.ZAREMBSKI及びA.HODGKINSON
（Biochem.J.（1965）96，717−721）のフルオロ
メトリツク法に従つて決定した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 少なくとも一部がヘパリンのカルシウム塩で
   あるヘパリンの金属塩から成り、シユウ酸塩含有
   量が６カ月の貯蔵期間内にヘパリンのカルシウム
   塩の溶液中で結晶又は沈澱の生起し得る閾値より
   低い、注射可能品質のヘパリン製剤の製造方法で
   あつて、 そのシユウ酸塩が水溶性であるような金属の塩
   である出発ヘパリン塩であつて、カルシウムを含
   有せず、前記閾値より高い水溶性シユウ酸塩を含
   む鉱物塩を含有するヘパリン調製物から出発し、 ヘパリン塩を選択的に沈澱せしめる一方シユウ
   酸塩を含む鉱物塩を溶液中に残存せしめるのに有
   効な量の非イオン性沈澱剤を、前記カルシウムを
   含有しない出発ヘパリン塩と水溶液中で混合し、
   沈澱したヘパリンの塩を回収する段階を、シユウ
   酸塩含有量が前記閾値より低い値になるまで繰り
   返し、 このようにして精製したヘパリン塩をカルシウ
   ム塩と接触せしめて精製ヘパリン塩中に含まれる
   金属の少なくとも一部をカルシウムで置換し、少
   なくとも一部分がカルシウムであるような金属の
   ヘパリン塩を得る、 ことを特徴とする前記ヘパリン製剤の製造方法。 ２ 前記閾値が70ppmである特許請求の範囲第
   １項に記載の製造方法。