JPS6143032B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPS6143032B2 JPS6143032B2 JP4988978A JP4988978A JPS6143032B2 JP S6143032 B2 JPS6143032 B2 JP S6143032B2 JP 4988978 A JP4988978 A JP 4988978A JP 4988978 A JP4988978 A JP 4988978A JP S6143032 B2 JPS6143032 B2 JP S6143032B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- freeze
- medium
- culture
- drying
- cysteine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Landscapes
- Bakery Products And Manufacturing Methods Therefor (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は微生物とくにラクトバチルス・サンフ
ランシスコの培養法および凍結乾燥菌体の保存法
に関する。 ラクトバチルス・サンフランシスコ
（Lactobacillus sanfrancisco）はサワードウ
（Sour dough）菌種として知られている。サワー
ドウ菌種はサワードウフランスパンの製造に使用
される有用な微生物であり、その培養技術、凍結
乾燥保存技術についてはアメリカ特許第3734743
号、同第3891773、同第4021581号各公報に開示さ
れている。 従来法によれば、サワードウ菌の培養に際して
は培地に新鮮な酵母エキス、すなわち新鮮な酵母
菌体の熱水抽出液を添加することが必須であり、
これは市販の酵母エキスなどで代替しえない。サ
ワードウ菌の培養液10すなわち乾燥菌体として
30〜50ｇを得る場合には新鮮な酵母菌体（パツク
重量）２Kgが必要である。新鮮酵母エキスの供給
を常時行うことは困難であるため新鮮酵母エキス
に代替でき常時供給することができる物質があれ
ば工業的に有利である。 本発明者らは、Ｌ−システインが新鮮酵母エキ
スに代替できることを見出した。Ｌ−システイン
は工業的に安価に供給できるアミノ酸である。 またサワードウ菌は常時供給するためには凍結
乾燥保存法を利用することが便利である。 従来微生物菌体の凍結乾燥には保護物質として
脱脂乳や血清などの高分子物質やグルタミン酸な
どのアミノ酸、グルコース、シユークロースなど
の糖類を用いることは知られている。サワードウ
菌についてはアメリカ特許4021581号公報にグリ
セロール、脱脂乳、シユークロース、不飽和脂肪
酸、グルタミン酸モノナトリウムなどを用いる凍
結方法が開示されている。 本発明者らはサワードウ菌の凍結乾燥保存に際
する保存性をさらに高めるために種々研究を行つ
た結果、従来の脱脂乳とグルタミン酸モノナトリ
ウムの他にマルトーズを加えて用いれば保存性が
顕著に高められることを見出した。 以下本発明を詳細に説明する。 本発明における微生物の培養はラクトバチル
ス・サンフランシスコに属する菌株を炭素源、窒
素源、無機栄養素その他の栄養素にさらにＬ−シ
ステインあるいはＬ−システイン含有物を存在さ
せて培養することによつて行なわれる。 使用する菌株はラクトバチルス・サンフランシ
スコに属する菌株であればいかなる菌株をも用い
ることができる。具体的にはラクトバチルス・サ
ンフランシスコKY3689（微工研菌寄第4466号）
があげられる。ラクトバチルス・サンフランシス
コの菌学的性質についてはApplied
Microbiology Vol.21、No.3、p.459−465、1971
に記載がある。 培地の炭素源としてはマルトーズなどが、窒素
源としては、ペプトン、酵母エキス、コーンスチ
ープリカー、カゼイン加水分解物などの有機窒素
源が、無機栄養素としては硫酸マグネシウム、硫
酸マンガン、第一リン酸ナトリウム、第二リン酸
ナトリウム、硫酸第一鉄などが用いられる。ラク
トバチルス・サンフランシスコは生育に不飽和脂
肪酸を要求するので培地にはオレイン酸、リノー
ル酸、リノレン酸、リシノール酸またはそれらの
ナトリウム塩あるいはカルシウム塩またはオリー
ブ油、綿実油、アマニ油、大豆油、ベニバナ油、
とうもろこし油などを加える。その他不飽和脂肪
酸と糖または多価アルコールの部分エステルたと
えばシヨ糖モノオレエート、シヨ糖ジオレエー
ト、グリセリンモノオレエート、エチレングリコ
ールモノオレエート、ペンタエリトリツトモノリ
ノレエート、マンニツトモノオレエート、ソルビ
タンモノオレエート、ソルビタンポリオキシエチ
レンモノオレエート、ポリオキシエチレンモノオ
レエートなどが使用できる。 培地中のＬ−システインあるいはＬ−システイ
ン含有物の含量はＬ−システインとして100〜500
mg/で良い培養結果が得られる。 Ｌ−システイン含有物としてはカザミノ酸など
があげられる。 培養は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ア
ンモニア水などによつて培地のPHを5.0以上に調
整しつつ25〜35℃、好ましくは約28〜32℃で定常
期の初期まで行う。 培養後培養物を遠心分離処理して菌体を集め、
次の凍結乾燥処理に供する。 本発明における凍結乾燥処理は次のごとく行
う。 上記のごとく集めた菌体を生理食塩水にて洗浄
するかせずして脱脂乳10〜30％、グルタミン酸モ
ノナトリウム１〜３％、マルトーズ0.5〜９％か
らなる分散媒に109〜1011細胞／mlの濃度で懸濁
させる。懸濁液を−25℃〜−70℃で凍結後、室温
にて乾燥を行い、品温25〜30℃に仕上げる。 かくして得られる乾燥菌体はビニール製の袋な
どに入れ、真空包装機で熔封して０〜10℃で保存
を行うとよい。 本発明方法で得られた凍結乾燥菌体の凍結乾燥
時の生残率は70％以上、５℃に６ケ月保存を行な
つた後の生残率は貯蔵開始時の60％以上であつ
た。マルトーズを用いない場合の数値はそれぞれ
20％、25％であつた。 本発明によりラクトバチルス・サンフランシス
コの生産コストは著しく軽減され、また保存も容
易になつたのでサワードウパンの製造が工業的に
非常に有利になつた。 実施例 １ ラクトバチルス・サンフランシスコKY3689を
マルトーズ40ｇ/、ペプトン10ｇ/、酵母エキ
ス15ｇ/、MgSO4・7H2O200mg/、MnSO4・
4H2O40mg/、ツイーン80（界面活性剤ソルビタ
ンモノオレートの商品名、関東化学社製）300mg/
、Ｌ−システイン300mg/、寒天20ｇ/から
なる斜面培地（殺菌前PH5.6）に30℃で24時間培
養する。この菌体−白金耳を、上記培地から寒天
を除いた液体培地（種培地）150mlを含む300ml容
エルレンマイヤーフラスコに植菌し、30℃、
70rpmで15時間往復振盪培養を行つた。この種培
養液を種培地と同じ組成の培地３を含む５ジ
ヤーフアーメンターに移し培養を行つた。培養は
300rpmで撹拌し、3NKOHでPHを５付近に調整し
ながら30℃で15時間行つた。培養終了時の菌体濃
度は乾燥菌体として3.8ｇ/であつた。 この培養液１を5000rpmで、20分間遠心分離
処理して得られる菌体を脱脂乳10ｇ/dl、グルタ
ミン酸モノナトリウム１ｇ/dl、マルトーズ１ｇ/
dlを含む分散媒300mlに懸濁し、−30℃で凍結後、
16時間乾燥し、最終品温30℃で仕上げ凍結乾燥菌
体36ｇを得た。生残率は凍結乾燥前の生菌数に対
し72％であつた。 この凍結乾燥菌体をビニール袋に分入し、真空
包装機で熔封後５℃で保存した。保存６ケ月後の
生残率は凍結乾燥開始時に比べて80％であつた。 実施例 ２ 実施例１において、培地中のＬ−システインの
量を０〜800mg/にするか、またはＬ−システイ
ンに代えて新鮮酵母エキスを添加して培養する以
外は実施例１と同様に行い第１表の結果を得た。
なお新鮮酵母エキスは、パン酵母を常法で培養し
て得られる新鮮パン酵母を200ｇ/の濃度で水に
懸濁し、120℃で30分間オートクレーブにかけ、
５℃に12時間放置後5000rpmで20分間遠心分離を
行い、その上清液を用いて培地成分を溶解した。
ランシスコの培養法および凍結乾燥菌体の保存法
に関する。 ラクトバチルス・サンフランシスコ
（Lactobacillus sanfrancisco）はサワードウ
（Sour dough）菌種として知られている。サワー
ドウ菌種はサワードウフランスパンの製造に使用
される有用な微生物であり、その培養技術、凍結
乾燥保存技術についてはアメリカ特許第3734743
号、同第3891773、同第4021581号各公報に開示さ
れている。 従来法によれば、サワードウ菌の培養に際して
は培地に新鮮な酵母エキス、すなわち新鮮な酵母
菌体の熱水抽出液を添加することが必須であり、
これは市販の酵母エキスなどで代替しえない。サ
ワードウ菌の培養液10すなわち乾燥菌体として
30〜50ｇを得る場合には新鮮な酵母菌体（パツク
重量）２Kgが必要である。新鮮酵母エキスの供給
を常時行うことは困難であるため新鮮酵母エキス
に代替でき常時供給することができる物質があれ
ば工業的に有利である。 本発明者らは、Ｌ−システインが新鮮酵母エキ
スに代替できることを見出した。Ｌ−システイン
は工業的に安価に供給できるアミノ酸である。 またサワードウ菌は常時供給するためには凍結
乾燥保存法を利用することが便利である。 従来微生物菌体の凍結乾燥には保護物質として
脱脂乳や血清などの高分子物質やグルタミン酸な
どのアミノ酸、グルコース、シユークロースなど
の糖類を用いることは知られている。サワードウ
菌についてはアメリカ特許4021581号公報にグリ
セロール、脱脂乳、シユークロース、不飽和脂肪
酸、グルタミン酸モノナトリウムなどを用いる凍
結方法が開示されている。 本発明者らはサワードウ菌の凍結乾燥保存に際
する保存性をさらに高めるために種々研究を行つ
た結果、従来の脱脂乳とグルタミン酸モノナトリ
ウムの他にマルトーズを加えて用いれば保存性が
顕著に高められることを見出した。 以下本発明を詳細に説明する。 本発明における微生物の培養はラクトバチル
ス・サンフランシスコに属する菌株を炭素源、窒
素源、無機栄養素その他の栄養素にさらにＬ−シ
ステインあるいはＬ−システイン含有物を存在さ
せて培養することによつて行なわれる。 使用する菌株はラクトバチルス・サンフランシ
スコに属する菌株であればいかなる菌株をも用い
ることができる。具体的にはラクトバチルス・サ
ンフランシスコKY3689（微工研菌寄第4466号）
があげられる。ラクトバチルス・サンフランシス
コの菌学的性質についてはApplied
Microbiology Vol.21、No.3、p.459−465、1971
に記載がある。 培地の炭素源としてはマルトーズなどが、窒素
源としては、ペプトン、酵母エキス、コーンスチ
ープリカー、カゼイン加水分解物などの有機窒素
源が、無機栄養素としては硫酸マグネシウム、硫
酸マンガン、第一リン酸ナトリウム、第二リン酸
ナトリウム、硫酸第一鉄などが用いられる。ラク
トバチルス・サンフランシスコは生育に不飽和脂
肪酸を要求するので培地にはオレイン酸、リノー
ル酸、リノレン酸、リシノール酸またはそれらの
ナトリウム塩あるいはカルシウム塩またはオリー
ブ油、綿実油、アマニ油、大豆油、ベニバナ油、
とうもろこし油などを加える。その他不飽和脂肪
酸と糖または多価アルコールの部分エステルたと
えばシヨ糖モノオレエート、シヨ糖ジオレエー
ト、グリセリンモノオレエート、エチレングリコ
ールモノオレエート、ペンタエリトリツトモノリ
ノレエート、マンニツトモノオレエート、ソルビ
タンモノオレエート、ソルビタンポリオキシエチ
レンモノオレエート、ポリオキシエチレンモノオ
レエートなどが使用できる。 培地中のＬ−システインあるいはＬ−システイ
ン含有物の含量はＬ−システインとして100〜500
mg/で良い培養結果が得られる。 Ｌ−システイン含有物としてはカザミノ酸など
があげられる。 培養は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、ア
ンモニア水などによつて培地のPHを5.0以上に調
整しつつ25〜35℃、好ましくは約28〜32℃で定常
期の初期まで行う。 培養後培養物を遠心分離処理して菌体を集め、
次の凍結乾燥処理に供する。 本発明における凍結乾燥処理は次のごとく行
う。 上記のごとく集めた菌体を生理食塩水にて洗浄
するかせずして脱脂乳10〜30％、グルタミン酸モ
ノナトリウム１〜３％、マルトーズ0.5〜９％か
らなる分散媒に109〜1011細胞／mlの濃度で懸濁
させる。懸濁液を−25℃〜−70℃で凍結後、室温
にて乾燥を行い、品温25〜30℃に仕上げる。 かくして得られる乾燥菌体はビニール製の袋な
どに入れ、真空包装機で熔封して０〜10℃で保存
を行うとよい。 本発明方法で得られた凍結乾燥菌体の凍結乾燥
時の生残率は70％以上、５℃に６ケ月保存を行な
つた後の生残率は貯蔵開始時の60％以上であつ
た。マルトーズを用いない場合の数値はそれぞれ
20％、25％であつた。 本発明によりラクトバチルス・サンフランシス
コの生産コストは著しく軽減され、また保存も容
易になつたのでサワードウパンの製造が工業的に
非常に有利になつた。 実施例 １ ラクトバチルス・サンフランシスコKY3689を
マルトーズ40ｇ/、ペプトン10ｇ/、酵母エキ
ス15ｇ/、MgSO4・7H2O200mg/、MnSO4・
4H2O40mg/、ツイーン80（界面活性剤ソルビタ
ンモノオレートの商品名、関東化学社製）300mg/
、Ｌ−システイン300mg/、寒天20ｇ/から
なる斜面培地（殺菌前PH5.6）に30℃で24時間培
養する。この菌体−白金耳を、上記培地から寒天
を除いた液体培地（種培地）150mlを含む300ml容
エルレンマイヤーフラスコに植菌し、30℃、
70rpmで15時間往復振盪培養を行つた。この種培
養液を種培地と同じ組成の培地３を含む５ジ
ヤーフアーメンターに移し培養を行つた。培養は
300rpmで撹拌し、3NKOHでPHを５付近に調整し
ながら30℃で15時間行つた。培養終了時の菌体濃
度は乾燥菌体として3.8ｇ/であつた。 この培養液１を5000rpmで、20分間遠心分離
処理して得られる菌体を脱脂乳10ｇ/dl、グルタ
ミン酸モノナトリウム１ｇ/dl、マルトーズ１ｇ/
dlを含む分散媒300mlに懸濁し、−30℃で凍結後、
16時間乾燥し、最終品温30℃で仕上げ凍結乾燥菌
体36ｇを得た。生残率は凍結乾燥前の生菌数に対
し72％であつた。 この凍結乾燥菌体をビニール袋に分入し、真空
包装機で熔封後５℃で保存した。保存６ケ月後の
生残率は凍結乾燥開始時に比べて80％であつた。 実施例 ２ 実施例１において、培地中のＬ−システインの
量を０〜800mg/にするか、またはＬ−システイ
ンに代えて新鮮酵母エキスを添加して培養する以
外は実施例１と同様に行い第１表の結果を得た。
なお新鮮酵母エキスは、パン酵母を常法で培養し
て得られる新鮮パン酵母を200ｇ/の濃度で水に
懸濁し、120℃で30分間オートクレーブにかけ、
５℃に12時間放置後5000rpmで20分間遠心分離を
行い、その上清液を用いて培地成分を溶解した。
【表】
実施例 ３
実施例１において、凍結乾燥時のマルトーズを
下記第２表の糖に代えて行い、凍結乾燥品の保存
を真空デシケーター中５℃で行う以外は実施例１
と同様に行い、１ケ月、３ケ月、６ケ月後にサン
プリングして、生残率を調べた。結果を第２表に
示す。
下記第２表の糖に代えて行い、凍結乾燥品の保存
を真空デシケーター中５℃で行う以外は実施例１
と同様に行い、１ケ月、３ケ月、６ケ月後にサン
プリングして、生残率を調べた。結果を第２表に
示す。
Claims (1)
- １ ラクトバチルス・サンフランシスコの培養菌
体を凍結乾燥保存するに際し、保護剤として脱脂
乳、グルタミン酸モノナトリウムおよび該脱脂乳
重量当り５〜20重量％のマルトーズを使用するこ
とを特徴とする凍結乾燥菌体の保存法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4988978A JPS54143585A (en) | 1978-04-28 | 1978-04-28 | Culturing of microbials and storing of freeze-dried microbial cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4988978A JPS54143585A (en) | 1978-04-28 | 1978-04-28 | Culturing of microbials and storing of freeze-dried microbial cells |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61022721A Division JPS61282071A (ja) | 1986-02-03 | 1986-02-03 | 微生物の培養法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS54143585A JPS54143585A (en) | 1979-11-08 |
| JPS6143032B2 true JPS6143032B2 (ja) | 1986-09-25 |
Family
ID=12843592
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4988978A Granted JPS54143585A (en) | 1978-04-28 | 1978-04-28 | Culturing of microbials and storing of freeze-dried microbial cells |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS54143585A (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3038229A1 (de) * | 1980-10-07 | 1982-05-06 | Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen | Waessriges naehrmedium zur anzucht von mikroorganismen |
| JP2005229808A (ja) * | 2001-06-05 | 2005-09-02 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | サワーブレッドの製造方法 |
| CN108486019B (zh) * | 2018-05-09 | 2020-05-12 | 浙江省农业科学院 | 亚硝化菌的保藏方法 |
-
1978
- 1978-04-28 JP JP4988978A patent/JPS54143585A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS54143585A (en) | 1979-11-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Linders et al. | Effect of added carbohydrates on membrane phase behavior and survival of DriedLactobacillus plantarum | |
| US20160075991A1 (en) | Process for Preparing Starter Cultures of Lactic Acid Bacteria | |
| GB1469218A (en) | Stabilized dry cultures of lactic acid-producing bacteria | |
| JPH0757179B2 (ja) | 支持細菌組成物とその製造方法及び使用方法 | |
| Bibal et al. | Influence of pH, lactose and lactic acid on the growth of Streptococcus cremoris: a kinetic study | |
| JP3434820B2 (ja) | ストレプトコッカス ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）のクローンの培養法 | |
| JPS61231994A (ja) | 酸産生バクテリアの保存方法及びそれによつて製造される組成物 | |
| DE2313546A1 (de) | Mikrobielle protease und verfahren zu ihrer herstellung | |
| JPS6143032B2 (ja) | ||
| KR101665888B1 (ko) | 동결보호제로서 찹쌀풀을 이용하는 생존율이 증진된 식품 발효용 미생물 첨가제 조성물 및 이의 제조방법 | |
| JPS6231907B2 (ja) | ||
| NL1014166C2 (nl) | Kweekmedium voor kweken van Lactobacillus clearans en werkwijze voor conserveren van genoemde stam. | |
| CN110724639A (zh) | 一种海洋发光细菌冻干制剂及其制备方法 | |
| RU94046071A (ru) | Способ получения не содержащих красителя полигидроксиалканоатов | |
| Morichi | Preservation of lactic acid bacteria by freeze-drying | |
| JPS61265085A (ja) | 生菌保存安定性の良好なビフイズス菌培養物粉末の製造法 | |
| McCurdy et al. | Studies on Stigmatella brunnea | |
| CN115261263A (zh) | 一种产细菌素的鼠李糖乳杆菌冻干粉的制备方法 | |
| US3763010A (en) | Stabilized microbial rennet | |
| JPH0416145B2 (ja) | ||
| CH683187A5 (fr) | Procédé pour la préparation d'un vaccin antityphoique vivant oral. | |
| US3997397A (en) | Production of proteic materials from yeast cells | |
| JP2518218B2 (ja) | 微生物菌体の製造方法 | |
| CN113930356B (zh) | 一种发酵生产白喉毒素无毒形式crm197蛋白菌种的冻干方法 | |
| Blakley | Citrate formation in Mycobacterium phlei |