JPS6188886A - 酵素法リン脂質長鎖アルコ−ル誘導体の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、従来酵素法により製造できることの全く知ら
れていなかった、リン脂質長鎖アルコール誘導体の酵素
法による製法に関し、該誘導体は例えばリポソーム形成
基材、乳化剤及び生理活性物質などの分野に有用な、酵
素法リン脂質長稙アルコール誘導体の製法に関する。更
に詳しくは従来酵素法で使用されたキャベツ由来のホス
ホリパーゼＤ（至適温度４０°Ｃ以下、至適ｐ　Ｈ５，
４〜５．６）とは異なって、至適温度６０〜７０℃、至
４ｐＨ’ｌ付近のホスホリパーゼＤＭの存在下で、リン
脂質とアルコールとを反応させるリン脂質アルコール誘
導体の製法に関する。

尚、本発明に於て、リン脂質アルコール誘導体とは、出
発物質であるリン脂質のリン酸構造部分と該リン脂質の
（塩基もしくハ）アルコール構造部分とのエステル結合
を、ホスホリパーゼＤＭの作用で加水分解すると同時に
、上記反応に用いるアルコールへ転移させて銹導した、
出発物質とは異なる新しいリン脂質を意味する。

特に、本発明に、下記式（１ ％式％（１） 但し式中Ａは下記に）又は（ｊｌ） を示し、ここでＲ８及びＲ，［、それぞれ、同一もしく
は異なっていてもよく、基−〇−ＣＯＲ１１及び基−０
−Ｒ１，よυえらばれｆｃ基を示し、そして式（ｉの場
合には、Ｒ２はさらにＯＨであることができ、更にＲ８
とＲｌｎは１１〜１９の整数を示す〕を表わすこともで
きる、 上記に於て、ＲＩＩ及びＲＩ！け同一でも異っていても
よく、それぞれ飽和もしくは不飽和のＣ８〜Ｃ１、の脂
肪族炭化水素を示し、Ａ′はオキシドアニオン又は水酸
基を示し、Ｂは−ｃ　ＣＨ，）、　＃＜　ｃＨｌｌ）い
　−（Ｃ１ｉ、）！ＮＨ，、−ＣＨ，ＣＨＣＮＥ、）Ｃ
ＯＯＨ，−（ＣＢ、）、ＮＥＣＣＨ，）、−（ｃＨ，）
、＃（ＣＢ、）、　、−ＣＢ、・ＣＢ−ＯＢ−ＣＭ、Ｏ
Ｈ。

〔ここでｍは１〜５の整数を示す。〕を示す、で表わさ
れるリン脂質と下記（１）又は（２）、（１）　　Ｃｔ
ｒ以上の飽和もしくは不飽和の脂肪族又は芳香族炭化水
素残基、ここで状炭化水素残基はハロゲノ、アミノ、ア
セチル及び水酸基よシ選ばれた置換基で置換されていて
もよい、又は 分子内にエーテル、エステル、アミン及びアミド結合よ
りなる群からえらばれた結合を有する上記炭化水累残基
、 からなる−級アルコール化合物、 （２）ハロゲノ、アミン、アセチル、水酸基、Ｃａ以下
の七ノーもしくはジ−アルキルアミノ及びフェニルより
成る群からえらばれた置換基で置換されていてもよいＣ
１１以上の直鎖もしくは分岐アルキル残基、但し該アル
キル残基分子内にエステル結合を有していてもよい、又
は飽和もしくは不飽和のＣ，、Ｃ，６の脂肪族カルボン
酸とのエステルである多価アルコール残基； からなる二級アルコール化合物、 とをホスホリパーゼＤＭの存在下に反応させることを特
徴とする下記式Ｃ１１） Ａ−０−Ｐ−ＱＣ・・・　（Ｉ［） 夏 Ａ′ 但し式中Ａ及びＡ′は上記したと同義であシＣは上記（
１）〜（２）における残基を示す、で表わされるリン脂
質長鎖アルコール成分体の製法に関する。

従来、ホスホリパーゼＤが、リン脂質たとえばホスファ
チジルコリンのコリン塩基−リン酸エステルを加水分解
し、遊離塩基とホスファチジン酸を生ずる反応を触媒す
ることが知られているＣＭ。

Ｋａｔｇｓ　Ｃａｎ、　　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｓｍ、　　
Ｐｈｙｓｉｏｌ、３２５７１（１９５４）］。

更に、リン脂質たとえばレシチンとエチルアルコールト
ラホスホリパーゼＤの存在下に反応させると、リン脂質
のリン酸構造部分と該リン脂質のアルコール構造部分と
のエステル結合が加水分解されると同時にホスファチジ
ル基転移作用により、ホスファチジルエタノールを生成
することが報告されているＣ　Ｅ、　Ｍ、　Ｄａｗｓｏ
ｎ＋　Ｂｉｏｃｈｔｎｎ、　Ｊ、　。

１０２　、２０５（１９６７）］　ｉ　〔Ｓ、Ｆ、　Ｙ
ａｎ（ＢＪ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈ、ｇｍ、、２４２，４７７
（１９６７））。

上述のようなホスホリパーゼＤのホスファチジル基転移
作用が知られて以来、この分野における研究が進められ
、英国特許Ａ　１．５８１．８１０　（対応西ドイツ国
公開Ａ２７１７５４７）の提案が知られている。この提
案によれば、この提案の一般式で示されたリン脂質と、
水酸基、ハロゲノ、アミンその他のｔ挨基で置換されて
いてもよいＣ６までの直鎖もしくは分枝のアルキル基を
有する一級アルコールとの前記キャベツ由来のホスホリ
ノソ−ゼＤの酵素作用を利用した一級アルコール転移反
応について開示されている。そして、該反応は、５を超
える炭素原子を含有しない一級アルコールでのみ起り、
若し、５を超える炭素原子を含有する該アルコールの場
合には、反応の主生成物は対応するホスファチジン酸で
あると記載されている。

更に、該提案にはアルコール成分の選択は、上記の要求
を滴した一級アルコールである限りとくべつな制約のな
いことも記載されている。

又、上記提案の発明者等であるＳ、　Ｋαταｔｃｈ、
ｇｖ及びＨ，Ｅｉｂｌ等は、Ａｄｖ、Ｅｚｐ、　　Ｍｇ
ｄ、Ｂｉｏｌ、。

Ｖｏｌ、　　１０１　、２２１　（１９７Ｂ　）に於て
、ホスホリパーゼＤの酵素作用を利用した一級アルコー
ル転移反応について、Ｃ亡Ｃ１６のアルカノールでは転
移反応が認められないがＣ６のヘキサノールについてＶ
１２０％の転移反応が生じたと報告している。一方、Ｒ
ｏｋｈｉｍｏｖ、　Ｍ、Ｍは、Ｕｚｂ、　Ｂｉｏｌ。

Ｚｈ、、　Ｖｏｌ、　３　、６−１＜　１９７９　）に
於て、０１以上のアルコール例えばＣ゛６のヘキサノー
ルについては転移反応は起らなかったと報告している。

上述のように、従来ホスホソノ９−ゼＤによるリン脂質
とアルコールとの間の転移反応は、−級アルコールとく
に炭素数Ｃｓ以下の単純な構造からなる鎖状の一級アル
コールの場合にのみ生起することが知られていたにすぎ
な込。

本発明者等は、従来公知のキャベツ由来ホスホリパーゼ
Ｄとは、その至適温度、至ＪｐＨ等で異なるホスホリパ
ーゼＤ生産能を有する微生物の存在を発見して、既に、
特開昭５８−６３３８８号、特開昭５８−６７１８３号
に提案した。この提案の中では、核ホスホリパーゼＤ生
産菌より得られる該ホスホリパーゼＤ〔本発明において
はホスホリパーゼＤＭと呼ぶ〕はＣｓ以下の一級アルコ
ール化合物を包含し従来全く言及されたことのない広範
囲なアルコール化合物に対してリン脂質を転移させる作
用を持つことが、記載されている。そして転移反応の起
るアルコールとして、−級アルコールでは、Ｃ（＝Ｃｕ
’１での脂肪族アルコール、ペントース、ヘキソース、
糖アルコール及ヒ多価アルコール、三糖類、芳香族アル
コール、脂環式アルコール、炭素多環式アルコール、フ
ラン環などの複素環アルコールが記載され、又二級アル
コールとして、Ｃ３〜Ｃ１０までの脂肪族アルコール、
芳香族アルコール、脂環式アルコールが記載されている
。

本発明者等は、鋭意、研究を重ねた結果、該ホスホリ・
ぐ−ゼＤＭは上記特開昭に記載されていない前記ｍ及び
（２）よりなる群からえらばれたアルコールとリン脂質
との転移反応を可能とする酵素的触媒作用を示すという
、篤＜べき事実を発見した。

本発明者等の研究によれば、リン脂質として例えば−級
アルコールである分子址１０００のポリエチレングリコ
ールとの間におけるリン脂質アルコール誘導体の形成を
触媒する本発明に於いて新たにホスホＩＪＩ？−ゼＤＭ
と呼称する酵素が存在し、このホスホリパーゼＤｈｉの
存在下に前記式（１）で表わされるリン脂質と前記ｆｌ
）又は（２）で示されるアルコールとを反応させること
により、従来製造できる事が全く知られでいなかったり
脂質アルコール誘導体を酵素法により製造できることが
発見された。

本発明に於て用いられるアルコールとして例えばポリエ
チレングリコールやその誘導体である各種界面活性剤が
挙げられ、これらのアルコールから導かれるリン脂質誘
導体は新規化合物であり、従来にない化学的、物理的性
質をそなえている。

父、特開昭５８−４９３９３ではリン脂質の一種である
ホスファチヅルエタノールアミンとポリエチレングリコ
ールを化学的にアξ゛ド結合させリン脂質高分子訪導体
を合成しているが、本発明によれば煩雑且つ不利益な化
学的合成手段を要することなしに、温和な条件及び容易
な手段で、副反応を伴うおそれもなしに、レシチンなど
の天然に多く存在し且つ安価で容易に得られるリン脂質
を用いて、酵素法によって容易に新しいリン脂質アルコ
ール誘導体たとえばリン脂冥ポリエチレングリコール訪
導体などを好収率で製造することができる。

従って、本発明の目的は新しい酵素法リン脂質長鎖アル
コール誘導体の１μ法を提供する【ある。

本発明の上記目的及び更に多くの他の目的ならろう。

本発明方法で利用する原料リン脂質は下記式（１）％式
％ 但し式中Ａは下記（１）又は（１１） を示し、ここで８１及びＲ，ｄ、それぞれ、同一もしく
は異なっていてもよく、基−０−ＣＯＲ１１及び基−Ｑ
−Ｒ，，よりえらばれた基を示し、そして、式（１）の
場合には、Ｒ，ｄさらにＯＲであることができ、更にＲ
３とＲ。

ルは１１−１９の整数を示す〕を表わすこともできる、 上記に於て、Ｒ１，及びＲ１！は同一でも異っていても
よく、それぞれ飽和もしくは不飽和のＣｒｃｔｘの脂肪
族炭化水素を示し、Ａ′はオキシドアニオン又は水酸基
を示し、＋ Ｂは−ＣＣへ）鵞ＮＣＣＭ、）、　、　　−（ＣＨ雪）
、ＮＨ，。

−ＣＨ，−ＣＨ（ＮＨ，”）ＣＯＯＨ，−ＣＣＨ，）、
ＮＨＣＣＨ，）、−（Ｃ烏）Ｂ　〔ここでｍは１〜５の
整数を示ｍ。

す。〕を示す。

上記式（１）の原料リン脂質は公知化合物であって、ジ
アシルエステル型、モノアシル型（リゾ型）、モノアル
ケニルエーテルモノアシル型（フラスマローグン型）、
モノアルキルエーテル型、モノアルキルエーテルモノア
シル型、ジアルキルエーテル型、シクロアルキリデン型
のグリセロリン脂負ヲすべて包含し、これらのリン脂質
は公知の方法によって天然物より抽出採取又は合成して
得ることができるが、市場で入手することもできる。例
えば、Ｍｉｌｋ物組織から公知の手段で抽出して得られ
るものとしてはレシチン、ケファリン、ホスファチジル
セリン、ホスファチツルグリセロール、ホスファチツル
イノシトール、ホスファチソルコリンプラスマローケ゛
ン等がある。これ等は単独或は混合物をその１ま使用し
てもよいし、又、精製して用いることもできる。リゾ型
リン脂質は上記リン脂質にホスホリパーゼＡ、を作用さ
せて調製することもできる。又、Ｌ−α−ホス７アチジ
ルコリンソパルミチルエーテル、Ｌ−α−レシチン、β
、γ−ヘキサデシリデン、アルキルリゾホスファチツル
エタノールアミン、１−ｏ−アルキル−２−アセチル−
８ｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン、β−型リン脂
質等については公知合成方法によって得ることができる
が、市場よシ簡単に入手できるのでこれを利用すること
ができる。

本発明方法に於て、上記式（１）原料リン脂質とホスホ
リパーゼＤＭの存在下に反応せしめるアルコールは、下
記＋１１〜（２）で表わされる群から選択膜炭化水素残
基、ここで該炭化水素残基はハロケ゛ン、アミン、アセ
チル及び水酸基より選ばれた置換基で置換されていても
よい、又は 分子内にエーテル、エステル、アミン及びアミド結合よ
りなる群からえらばれた結合を有する上記炭化水素残基
、 からなる−級アルコール化合物、 （２）　　ハロダン、アミノ、アセチル、水酸基、Ｃ１
以下のモノ−もしくはジ−アルキルアミノ及びフェニル
より成る群からえらばれｆｃ置換基で置換されていても
よい”１１以上の直鎖もしくは分岐アルキル残基、但し
該アルキル残基分子内にエステル結合を有していてもよ
い、又は飽和もしくは不飽和の０１０　””　Ｃｕ２の
脂肪族カルボン酸と多価アルコールとのエステルである
多価アルコール残基；からなる二級アルコール化合物。

上記（１）において該炭化水素残基としてＦｉＣ，、〜
Ｃ（資）の脂肪族もしくは芳香族炭化水素残基が好まし
く、更に該脂肪族もしくは芳香族炭化水素残基カ分子内
にエーテル、エステル、アミン、アミド結合を有する場
合けこｉｌ、らの結合を一個り上布するものが好ましく
、該脂肪族もしくけ芳香族炭化水素の置換基として水酸
基があげられる。

上記（１）の群に属する一級アルコールの具体例として
下記の化合物があげられる。脂肪族アルコールの例とし
てはソラネオールＣＣｎ）、デカブレニルアルコール（
Ｃ力）、ウンデカプレニルアルコール（Ｃ１６）、ドリ
コール（Ｃｏｓ）などがあげられる。分子内にエーテル
結合を有する脂肪族も゛しくけ芳香族アルコールの例と
してはポリオキシエチレングリコール〔例えば和光純薬
工業社製分子敏６００（約Ｃ１，）、分子量１０００（
約Ｃ１，〕、分子ｊ１２０００（約Ｃｗ、）〕、ポリオ
キシエチレングリコールモノメチルエーテル〔例えばア
ルドリッチ社製、分子ｉ７５０　（約Ｃａｔ　）　、分
子量１９００　（約Ｇａ５））、４リオキシエチレング
リコールモノラウリルエーテル〔例えば花王石鹸社製ｘ
−ｒルｒンー１０９ｐ（約Ｃｓｏ〕、エマルダン−１２
０（約Ｃ３６）、エマルグン−１４７（約０５０）〕、
〕ポリオキシエチレングリコールーモノセチルエーテル
例えば花王石鹸社製エマルグン−２２０（約Ｃ４ｔ））
１．＋？リオキシエチレングリコールーモノステアリル
エーテル〔例えば花王石鹸社製ｘ−ｒｋｆ７−３０６　
ｐ　（約Ｃ３０〕、ｊｌ−ｆｆ　Ａ／社裂エマルケ９ン
ー４２０Ｃ約Ｃ鱒’）、エマルダン−４３０（約Ｃ８，
）〕、〕ポリオキシエチレングリコールーモノオクチル
フェノールエーテル〔例えば日本油脂社製ノニオンＢ５
−２２０Ｃ約Ｃ□〕、花王石鹸社製エマルｒンー８１０
（約Ｃ３，）　、工１ルｌ”　ン−８４０８（約ＣＨ）
　３、Ｍ　ｉ　オ＊ジエチレングリコール−モノ−ノニ
ルフェノールエーテル〔例えば花王石鹸社製エマルｒン
−９１０（約Ｃｓｉ　）、ｘ−ｒｈｙン−９２０（約ｃ
４１）、エマルｆン−９５０（約Ｃｕｓ　）、ｘ−ｑル
’ｙ’ン−９８５（約Ｃｓｓｓ　）コ、ポリオキシエチ
レン−プロピレン重合体〔例えば花王石鹸社製エマルｒ
ンＸ　ｐｐｔｓ。

（約Ｇ、）、エマル？ンｐ　ｐ　２３０　（約Ｃ０，）
、エマルケ°ンｇ２５０（約Ｃ８４，）〕、ポリオキシ
エチレングリコールービヌフェノールエーテル〔伝えば
日本油脂社類ユニオール７１Ａ−７００（約Ｃ２，）’
：ｌ　。

ポリオキシエチレングリコール−グリセリンエーテル〔
例えば日本油脂社製ユニオツクスＧ−７５０（約Ｃａ５
）］、ポリグリセリン〔例えば板本薬品工業社製デカグ
リセリン＄７５０（約Ｃ３０〕〕などがあげられる。

又、分子内にエステル結合を有する脂肪族アルコールの
例としてペンタエリスリトールヅステアレイト（Ｃ５６
’ｊなどがあげられる。又、分子内にエーテル、エステ
ル結合を有する脂肪族アルコールのタリトしてポリオキ
シエチレングリコール−モノラウリン酸エステル〔例え
ば化工石鹸社製エマノーン１１１２（約Ｃ５，〕〕、ポ
リオキシエチレングリコール−モノステアリン酸エステ
ル〔例工ば化工石鹸社央エマノーン３１１５（約に’４
１＋））、ポリオキシエチレンダリコールーモノオレイ
ン酸エステル〔例えば化工石鹸社製エマノーン４１１０
（約Ｃ，）〕、〕ポリオキシエチレングリコールーソル
ビタンラウロイルエステル例えば化工石鹸社製レオドー
ルＴＷ−Ｌ１０６（約Ｃ９）、レオドールＴＷ−Ｌ１２
０Ｃ約Ｃ４）〕、〕ポリオキシエチレングリコールーソ
ルビタン／ｅルミトイルエステル例えば花玉石畷社製レ
オドールＴＷ−Ｐ１２０（約Ｃ６□）〕、〕ポリオキシ
エチレングリコールーソルビタンステアリン酸エステル
〔例工は化工石り社製レオドールＴＷ−８１０６（約Ｃ
８６）、レオドール’ｌ’Ｗ−８１２０（約（：’８４
）　〕、ポリオや キシエチレングリコールソルビタン−オレイン酸エステ
ル〔例えば化工石鹸社製レオドールＴＷ−Ｑｔ０６（約
Ｃ３６）、レオドールＴＷ−０１２０（約（ｓ、）３．
４リオキシエチレングリコールーソルピタンートリオレ
イン酸エステル〔例えば化工石鹸社製レオドール２’Ｗ
−０３２０（約Ｃ８０）〕、テトラオレイン酸ポリオキ
シエチレンンルピット〔例えば化工石鹸社製レオドール
４３０（約Ｃｌ３４）、レオドール４４０（約Ｃ１５４
）、レオドール４６０（約Ｃｌ９４）〕、ポリグリセリ
ンモノラウリン酸エステル〔例えば版本薬品工業社ｐＭ
Ｌ−５００（約Ｃ３ｏ）、ＭＬ−７５０Ｃ約Ｃ４ｔ））
、ポリグリセリンモノステアリン酸エステル〔例えば版
本薬品工業社製ＭＳ−３１０（約Ｃｙ））、ｔ’ｓ　−
５００（約ＣＪ６）〕、ポリグリセリンモノオレイン戯
エステル〔例えば版本薬品工業社製Ａ１０−３１０（約
Ｃ５゜）、ＭＯ−５００（約Ｃ３６）、ＭＯ−１５０（
約Ｃ４ｔ））などがあげられる。父、分子内にエステル
、アミド結合を有する脂肪族アルコールの例としてポリ
オキシエチレングリコール−モノステアリルアマイド〔
例えばライオンアクゾ社製エソマイトＩｉＴ／ＩＳＣ約
Ｃ２ｇ　〕、エソマイトＨＴ／６０（約Ｃ１１，）〕な
どがあげられる。更に分子内にエーテル、アミン結合を
有する脂肪族アルコールの例トしてポリオキシエチレン
グリコール−モノステアリルアミン〔例えば化工石隙社
製アミ−１３０８（約Ｃ３，〕、アミート３２０（約Ｃ
ｓ５））、ポリオキシエチレングリコールーモノステア
リルジアミン〔例えばライオンアクゾ社製エソデュオミ
ンＴ／２０Ｃ約Ｃ４）、エソデュオミンＴ／２５１Ｇ’
ｔｓ）］、ポポリオキシエンレンダリコール−ステアリ
ル４４アンモニウム〔例えばライオンアクゾ社製エソカ
ード１８／２５　（約Ｃ４ｍ））、ポリオキシエチレン
グリコール−オレイル第４級アンモニウム〔例えばライ
オンアクゾ社製エソカード０／２５（約Ｃ＋ａ）］など
があげられる。

上記（２）において、該アルキル残基からなる二級アル
コール化合物では、分子内にエステル結合を有しない二
級アルコールとしてＣ１１〜Ｃ２ｏが好ましく例として
２−ウンデカノール（Ｃ１１）、２−ドデカノール（Ｃ
，、）、２−トリデカノール（Ｃ４）、２−テトラデカ
ノール（ＣＩ４）などがめげられる。

分子内にエステル結合を有する二級アルコールとしてＣ
、−ＣＭのりシルイン酸エステルなどが好ましく例とし
てリシルイン酸メチルエステル（Ｃ１゜）、リシルイン
酸エチルエステル（Ｃ２゜入りシルイン酸イソプロピル
エステル（Ｃ２Ｉ）、リシルイン酸ヘキサデシルエステ
ル（Ｃ３４）、ワシルイン酸オクタデシルエステル（Ｃ
ｗ）、リシルイン酸オレイルエステル（Ｃお）などがあ
げられる。父、該多価アルコール残基からなる二級アル
コール化合物では、該多価アルコール残基としてソルビ
タン残基が好ましく例としてソルビタントリオレイト（
ＣＩａ）、ソルビタンモノステアレイト（Ｃｕ）、ソル
ビタンモノステアレイト（Ｃｕ）、ソルビタントリオレ
イト（Ｃｕ）、ソルビタントリオレイト（ｃ’、）など
があげられる。尚本発明において上述した例示アルコー
ル以外で、上記（１１、＋２＋の範囲に含まれるアルコ
ールであれば如何なるアルコールをも用いることができ
る。

上記例示の如き１１）　、　＋２１からえらばれたアル
コールは１天然物、合成品いずれでも利用できるが、目
的とするアルコール以外のアルコールを含まないように
予め適当な公知手段を用い精製して利用するのが好まし
い。このような精製手段の例としては、たとえば、蒸留
、再結晶、アルミナ、シリカゲル、活性炭、イオン交換
樹脂などを用いたカラムクロマトグラフィー、薄ノ脅ク
ロマトグラフィー及びこれらの適当な組み合わせ精製手
段を例示できる。

本発明方法によれば、前記例示の如き式（１）リン脂質
と上記例示の如きｍ、＋２１からえらばれたアルコール
とをホスホリパーゼＤＭの存在下に反応させる。

この際利用するホスホリパーゼＤＭＯ例として特開昭５
８−６３３８８に開示されたノカルディオプシス属に属
するホスホリ・蓼−ゼＤ生産菌例えばノカルディオプシ
ス１１％扁７７９株〔做工研条寄第５１２号＜ＦＥＲＭ
　　ＥＰ−ｓ１２）Ｅ、特開昭５８−６７１８３に開示
されたアクチノマデューラ篇に属するホスホリ・ンーゼ
Ｄ生産酌例えばアクチノマデューラ属Ａ３６２株〔微工
研灸を第５１１号（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−ｓｔｔ））の生
産するホスホリパーゼＤをあげることができるが、前記
式（１’）のリン脂質を原料として前記ｔｌ）　、　１
２＋のアルコールの転移反応を起す作用を有するホスホ
リパーゼＤであれば如何なる起源のホスホリパーゼＤで
もホスホリパーゼＤＭとして朋いることが出来る。

本発明方法によれば、前記例示の如き式（１）リン脂質
と前記例示の如き＋１１　、　＋２＋からえらばれたア
ルコールとを、上記に詳しく述べたホスホリパーゼＤＭ
の存在下に反応させることにより“、下記式Ｃ１１） Ｉ Ａ−０−Ｐ−０−Ｃ・・・　（Ｉ＋） Ａ′ 但し式中、Ａ、Ａ’及びＣは前記したと同義である、 で表わされるリン脂質アルコール誘導体を製造すること
ができる。この際、ホスホリパーゼＤＭはｆｌ製品とし
て使用する必要はなく粗製品であってもよい。更に、適
当な固定化担体たとえばポリプロピレン膜、セライト粒
、ガラスピーズなどの如き各種の重合体樹脂類や無紐材
料の粒状物やフィルム状物に担持固定化して利用するこ
ともできる。

反応は、ホスホリパーゼＤＭの存在下で、好ましくは溶
媒の存在下に、式（１）　ＩＪン脂質と（１）。

（２）からえらばれたアルコールとを＠触せしめること
により行うことができる。利用する溶媒の例としては、
水性溶媒及び水性溶媒と有機溶媒との混合溶媒を例示す
ることができる。ｆｌ）　、　（２＋からえらばれたア
ルコールそれ自体に溶媒の役目を兼ねさせることもでき
る。また、ホスホリパーゼＤＭの酵累学的触媒作用を阻
害しない任意の他のｔ；テ加剤を含む溶媒も一利用でき
、たとえば該作用を促進したシ、酵素の安定化に役立つ
適当な巾加剤を含有した溶媒であることができる。例え
ば、アルブミン、カゼイン等の蛋白質や酢（袈、クエン
瞼、リン酸などの嶽伽剤を含有したり、塩化カルシウム
その他の中性塩を含有したり父、タウロコール酸ソーダ
等の胆汁酸塩類を含有した水性溶媒であることができる
。史に、有機溶媒の例としては、（１）、（２）からえ
らばれたアルコールそれ自体を包含して、例えば、ルー
へブタン、ルーヘキサンイソオクタンなどの如き脂肪族
炭化水素類ニジクロペンタン、シクロヘキサン、シクロ
ブタンなどの如き脂壌族炭化水ＸＬＴｚベンゼン、トル
エン、キシレンナトの如＊−ｙｆｖ族炭化水素類；アセ
トン、メチルイソプロピルケトンなどの如きケトン類；
ツメチルエーテル、ヅエチルエーテル、ヅイソプロビル
エーテルなどの如きエーテル類；酢酸メチル、酢酸エチ
ルなどの如きエステルク；四塩化炭素、クロロホルム、
塩化メチレンなどの如きハロゲン化炭化水素類；ツメチ
ルホルムアミドの如きアミド俗媒類；ツメチルスルホキ
シドの如きスルホキシド溶媒類などを例示することがで
きる。

水性溶媒を有機溶媒との混合＠煤の形でオｉ」用する場
合の両者の混合比は適当に選択できるが、９１ｊえは水
性溶媒：有機溶媒（ｖ　／　ｖ比）の比でｉｏ。

：０〜ｌ：９９の如き混合比を例示することができる。

反応モル比、ホスホ１ルぞ一ゼＤＭの便用廿、溶媒の使
用量などは、適宜に選択できるが、例えば、式（夏）リ
ン脂質１モルに対してアルコール約１：０．１〜約１　
！　１００モルの反応モル比？例示することができる。

また、ホスホリパーゼＤＭの使用量としては、例えば、
式（りリン脂質１ｇ当り約１０〜約１００．０００単位
好着しくは約１００〜約１０００単位の使用量を例示す
ることができる。さらに、溶媒の使用量としては、例え
ば、式（１）　ＩＪン脂質に対して約２倍〜約１００倍
（容量）程度の使用量を例示できる。

反応は、室温で進行するので、とくに冷却或は加熱の必
要はないが、所望によシ適宜に冷却もしくは加温条件を
採用することができる。例えば、約り℃〜約９０℃、好
ましくは約り０℃〜約６゜°Ｃの如き反応温度を例示す
ることができる。また反応時間も適宜に選択できるが、
例えば約１分〜約１０日好ましくは約１時間〜約７２時
間の如き反応時間を例示することができる。所望により
、たとえばＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）などの手
法を利用して反応経過を追跡し、所望の目的物の形成を
確認することにより反応時間を適宜に変更することがで
きる。

ホス＊　ＩＪ　バー　セＤ　Ｍの存在下で式（ｉｌＪ７
脂貝と（１＋　、　＋２１からえらばれたアルコールと
を接触せしめる態様は適宜に選択できるが、攪拌もしく
は振盪条件下で行うのが普通である。又、酸化分解を受
は易い基質又はアルコールを用いて反応する場合には窒
素気流中等で行う事が望ましい。父、前記のように適当
な粒状物やフィルム状物担体に担持固定化した固定化酵
素の形でホスホリパーゼＤＭを利用する場合には、例え
ば、同定化酵素膜もしくは固定化酵素粒子層を介して反
応組成ｌλを循環ポンプを用いて透１させる態様で行う
ことができる。

上述のようにして反応を行った後、形成された式（ＩＩ
　）　ＩＪン脂質アルコール訪導体は、そのま＼又は塩
の形で沈澱させて分離し利用することができる。尚、こ
こで式（ＩＩ）リン脂質長鎖アルコール江９導体の塩と
しては、例えば塩酸、臭化水素ｊ４：：ｓ慨酸、燐酸等
の無メ戊酸との塩、シュウｊ収、マレイン酸、乳酸、酒
石酸、フマール酸、メタンスル；ン酸、ベンゼンスルホ
ン酸、トルエンスルホン酸等の有機酸との塩、アルギニ
ン、アスパラギン酸、グルタミン酸等のアミノ酸との塩
、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属との塩、マ
グネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属トの塩及
？、ｌ”アンモニウム塩等があげられる。更に、該誘導
体及びその塩はケイ酸カラムクロマト、アルミナカラム
クロマト、イオン交換クロマト、高速液体クロマト、向
流分配、ｒル涙過、吸着クロマト等の適轟な公知の方法
を利用して分離精製することができる。

本発明方法によれば、上述したようにして、式（りリン
脂質と＋１１　、　（２＋からえらばれたアルコールと
を、ホスホリンぞ−ゼＤＭの存在下に反応させて式（Ｉ
ｔ　）　ＩＪン脂質アルコール誘導体を製造することが
できる。

得られる式（ｎ　）　ＩＪン脂質アルコール銹導体は、
その分子中に界面活性剤としての作用を持つ高分子アル
コールを含有しているため、今プで知られているリン脂
質及びその誘導体とはかなり異った物理的性質をそなえ
ている。特に医薬、農薬、食品、化粧品等の分野におい
て用いられるリポソーム基材、リポソーム表面修飾基材
として有用であシ、単独或は天然リン脂質例えばレシチ
ン等と混合使用して利用できる。

更に該リン脂質アルコールＬｇ導体が、レシチンとポリ
エチレングリコールとから導かれたホスファチツルポリ
オキシエチレングリコールである場合、ポリオキシエチ
レングリコールは非免疫原性であり（Ａｂｃｈｏｗｓｋ
ｉ等Ｊ、Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｇｍｉ、　２５２ｐ３５７８
〜３５８１（１９７７）］、又ホスファチヅン酸は天然
化合物であるため、該ホスファチツルポリオキシエチレ
ングリコールは投薬手段として経口又は注射のいずれか
で投与することができ、薬物をカプセル化する際きわめ
て有用な基剤となる。

又、化粧品の例えばクリーム、乳液に配合して皮膚生理
に役立つ乳化剤として、脂肪系薬剤の乳化剤として、更
に殺虫剤、除草剤などの如き農薬の乳化剤として又食品
における広範囲の乳化剤としても有用である。又、該リ
ン脂質アルコール誘導体は強い界面活性剤としての性質
のため、これを添加することによって脂溶性物質を水溶
液中に溶かすことができ、透明化：吐水などに利用する
ことが可能であり、更に動植物の培養基に添加すること
により有用物ｆｌの産生を８導又は促進する効果も期待
できる。

又、該リン脂質アルコール誘導体が１−０−ア一γ」 ルキルー２−アセチルー８ｎ−グリセロ−ホスホリルコ
リン等から導かれた誘導体は、血小板活性化作用、血圧
降下作用などの生理活性やアナフィラキシ−などの炎症
作用に関与すると考えられ、抗血小板剤、血圧降下剤、
抗炎症剤などの薬剤としての利用も期待できる。

以下、実施例により本発明方法実施の数態様について、
更に詳しく例示する。

参考例１．　ホスホリルコリンＤＭの調製きな粉３．０
％コーンスターチープリカー１．０％、ペプトン０．５
％、粉末酵母エキス０．１％、グルコース１．０％、Ｎ
Ｈ，Ｎｏ３０．２５％、Ｋ、ＨＰＯ４０，４係、Ｍｇ５
Ｏ，・７＃、００．０１　％、ツウイｙ　（Ｔｗｇｅｎ
）−８５０１チからなる培地（ｐＨ６，０）約１５ｉｉ
３０Ｊジャーファーメンタ−に入れ、１２０℃で１５分
間滅菌よ、シード培養液１．５１を植菌し、２７℃で４
０時間培養を行った。尚、上記シード培養液は、澱粉１
チ、ＣＮＨ４’）Ｈ，ＰＯ，０，２５％、ペプトン０．
２５係、Ｋ、ＨＰＯ，０，２係、ＭｇＳＯ４・７Ｈ，Ｏ
Ｏ，（１１係を含む水溶液培地（ｐＨ６，８）１００ゴ
を５００ＷＬｌ坂ロフラスコに入れ、蒸気殺菌後、ノカ
ルディオプシス属Ｎ０７７９株〔ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１
２］又はアクチノマデューラ属ＮＯ３６２株［：ＦＥＲ
Ｍ−ＢＰ−５１１］の胞子を一白金耳接種し、培養温度
３０℃、１２０回転／分の条件で２日間撮盪培養して謂
製した。

培養後、菌体固形物を遠心分離により除去し、遠心上清
１３１（ノカルディオプシス鴇ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１２
株を用いた場合は０．５４ｕ／禦ｌＩアクチノマデユ一
ラ践ＦＥＲＭ−ＢＰ−５１１株を用いた場合はＬ’ｉｕ
／プでめった。）を得念。

この遠心上清を５℃に冷却したＬ　−２０℃のアセトン
を加えてアセトン両度３０〜７０％画分に相当するホス
ホリパーゼＤ　ＩＷを含む沈澱物を遠心分離により集め
た。この沈澱物を、ノカルディオプシス属ＦＥＲＭ−Ｂ
Ｐ−ｓ　１２株を用いた場合にはｐＨ６，０，７クチノ
マテユ一ラ属ＦＥＲＭ−ＥＰ−５１１株を用いた場合は
ｐＨ６，５のトリス−マレイン酸に溶解し、０．０２Ａ
ｆの同緩衝液て対して透析した後、同緩衝液で平衝化し
たＤＥＡＥ−セルロースに通塔し、通過区分を集めた。

次に堀内等の方法［Ｊ、　　Ｂｉｏｃｈｇｍ、　８１　
、＋６３９（１９７７）〕で調整したノｅルミトイルガ
ーゼをカラムに充填し、充分に水洗してから上記ＤＥＡ
Ｅ−セルロース通過液を注入し、活性を吸着した。

これを０．０５　Ｍ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，２）
で洗浄後、０２％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ　−１００を含む同
緩衝液を加え活性を溶出した。活性区分を集めてバイオ
エンジニアリング社製の限外Ｐ３ｍＨＣＴｙｐｇＧ−１
０７’）を用いて癲縮した匈、グル濾過担体としてトヨ
パール＃Ｗ−’ｓｓＦ［東洋曹達（抹）製］充填カラム
に注入し、蒸留水を用いて通塔し、活性区分を集めて凍
結乾燥を行った。

この乾燥粉末を、ノカルディオプシス属ホスホリ／ｅ−
ゼＤＭの場合には０．０２５Ｍイミダゾール−塩酸（７
）Ｂ７．４）に溶解後、アクチノマデューラ属ホスホリ
・ぞ−ゼＤｈｉの場合にｌ’ｍＯ，０２５Ａｆ）リス−
酢酸（ｐＨ８，３’）に溶解後、ファルマシア・ファイ
ンケミカルス社製のポリバッファ交換体７′７ｖ ＰＢＥ　　　９４（２（Ｍｌ充填カラムに通塔して活性
を吸着後、同社製の溶出用ポリバッファ（４５，０）を
用いてｐＨ勾配により溶出した。溶出したホスホリスや
−ゼＤＭの活性区分を集めて限外ν過膜にて濃縮し、セ
ファデックスＧ−７５充ｊＪ（カラム圧通塔し、ホスホ
リパーゼＤＭ活性区分を集めて凍結乾燥した。

斯くて、ノカルディオプシス鵜ホスホリパーゼＤＭの場
合には、約４０％の活性Ｌ（ロ）収率で、比活性１７８
．３１Ｌ／〜蛋白質として、アクチノマデューラ属ホス
ホリパーゼＤＭの場合には約４３係の活性回収率で、比
活性２１８．３ｕ／１ｒＮｉ蛋白質として、ホスホリパ
ーゼＤＭが回収された。

実施例Ｌ（Ｒｕ、ｎ　Ａ１〜５７　） 後掲用１表に示した下記リン脂質 Ｎ質１＋Ｌ−α−レシチン（卵黄、シグマ−社）基質Ｔ
ｉ；Ｌ−α−レシチン、β、γ−ノへキサデシル（カル
ピオケムーベーリング社） （１，２−ソヘキサデシルーｓｎ−グリセロール−３−
ホスホリルコリン） 基質Ｔ１；Ｌ−α−レシチン、β、ｒ−ヘキサデシＩＪ
ジンＣＦｉ上）（１，２−シクロヘキサデシリデンーｓ
ｎ−グリセロール−３−ホスホリルコリン） 基質■；ホスファチソルコリンプラスマローグン（ウシ
の心臓、フナコシ薬品社） ｉｉ　Ｖ　ｉ　１　”’　Ｏ−アルキル−２−アセトイ
ル−８ｎ−グリセロール−３−ホスホリルコリン（ウシ
の心臓、フナコシ薬品社） と後掲第１表に示した多数種の一級及び二級アルコール
とを、後記ＴＬＣによる転移生成物の生成確認方法に従
ってホスホリパーゼＤＭの存在下で反応させて、転移生
成物の形成を確認した。そのＲｆ値を後掲第１表に示し
た。

Ｔ　Ｌ　Ｃによる転移生成物の生成確認方法ｒ　−下記
組成 １％リン脂質乳化液　　　　　　　　０．１−〇、４Ｍ
酢■（緩衝液（ｐＨ５，７）　　　０．１ゴ０．１Ｍ塩
化カルシウム水溶液　　　０．０５ａｄ２０チ　アルコ
ール溶液　　　　　０．１１を蒸留水　　　　　　　　
　　　　　　０．１　ｍエーテル　　　　　　　　　　
　　　０．２紅の反応液にホスホリパーゼＤＭの水溶ｉ
ｏ、ｏｔｙ（０，１〜ＩＫ）を加え３０°０１日振盪反
応させた。

尚上記１壬リン脂質乳化液１ｒｉＩＪン脂質１００■に
蒸留水１０μを加え水冷条件下で６０（１’、２０ＫＨ
ｚの条件で１〜５分間超音波処理して調整した。また上
記２０％アルコール浴液でｐＨがアルカリ側のものはＩ
Ｎ　　ＨＣＩでｐ　Ｈ５，７〜６．５に調整し、水に溶
けないものけ固体で加にた。上記反応後１／１０Ｎ−Ｈ
Ｃｌ　Ｏ，５ｔｔｌを加え更にクロロホルム−メタノー
ル溶液（２ｚ１容鍛比）５ｄを加え激しく攪拌し脂質を
抽出した。下層のクロロホルム層を分取し３０℃で減圧
乾固しｆｃ−ｉ＆、クロロホルム−メタノール溶液（２
工１容量比）７０μＩＶｃ＠解し１０μｌをシリカゲル
薄層（メルク社製シリカゲル６０ＴＬＣプレート２０×
２０　ｅｘ　）にスポットしアセトンを展開溶媒として
展開し未反応のアルコールを上層に展開し乾ふｈした後
、ソイツブチルケトン−酢酸−水（４５：２５＋５容Ｊ
ｌ比）、クロロホルム−メタノール−水（６０！３０＋
５容量比）、クロロホルム−メタノール−水−ナンモニ
ア（５０１２０＋１＋２容廿比）を展開溶媒として展開
した。スポットのイ芙出には下記の試薬を用いた。検出
されたスポットで未分解の基質及びその加水分解物（ホ
スファチジン酸とその類縁体）以外のスポットが検出さ
れた都合これを転移生成物と認めた。展開溶媒シイツブ
チルケトン−酢酸−水のＥｆ値を第１表に示した。

検出試薬 り７　ｆｉの呈色；　Ｚｉｎｚａｄｓの試薬（Ｂｇｉｓ
ｔｔ、　Ｖ。

Ｊ、Ｃんｒｏｍａｔｏｇ　１３　１０４　、１９６４　
）有機化合物の呈色；５０係Ｈ，Ｓｏ。

実施例２．　　（Ｒｕｒｌｆｘ　１〜３０　）Ｌ−α−
レシチンＣ卵黄、シグマ−社〕を基質として用い下記の
方法に従って転移物を生成し、分離精製しそのＪＲスペ
クトルを測定した１下記組成 １０％リン脂質乳化液　　　　　　　　０．２μ０．４
Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５，７）　　　　　０．２ｄ１Ｍ塩
化カルシウム水溶液　　　　　　０．１ｄの反応液にホ
スホリパーゼＤＭ水溶液０．２ｆｆｌｊ（５〜１０ｕ）
を加え３０°０２日間振盪反応させた。

尚上記１０係リン脂買乳化液は実施例（１）と同様に調
製した。反応後ｘＮ　　ＨＣｌｏ、ｓｍｔを加え反応全
停止し、クロロホルム−メタノール（２：１容址比）１
０１を加え激しく混合しリン脂質を抽出した。この混合
液を２０００Ｘ、！９．５分間遠心分離し下層のクロロ
ホルム層を分取した。分取した抽出液を蒸留水１（ｉｔ
／で洗い上記と同様に遠心分離しクロロホルム層を分取
し減圧乾固した後、クロロホルム−アセトンＣＩ＋２容
量比）２１１７Ｋｉ解した。この試料浴液１０μｌを３
枚の前記シリカダル薄層にスポットし、アセトンを展開
溶媒として展開し未反応のトリデシルエチレングリコー
ル−モノ−セチル−エーテルを上層に展開し乾燥した後
、ジイソブチルケトン−酢酸−水〔４０：２５：５容歓
比〕、クロロホルム−メタノール−水（６０：３０１５
）、クロロホルム−メタノール−水−アンモニア（５０
１２０１１１２容量比）を展開溶媒として展開したとこ
ろ、３種類のリン脂質が検出されこのうち２つけ基質と
基質の加水分解物（ホスファチジン酸）とＲｆ値が一致
した。

上記試料溶液をアセトンで平衡化した１０ｇのケイ酸カ
ラム（イアトロヒース、６Ｒ８−８０１００゜ヤトロン
社製）に通しリン脂質を吸着させた後アセトンをカラム
に通し未反応のトリデシルエチレングリコール−モノ−
セチル−エーテルを洗い出した恢、クロロホルム−メタ
ノール（９：１容量比）及びクロロホルム−メタノール
（２＋１容量比）を溶出液として溶出しホスファチジン
酸のトリデシルエチレングリコール−モノ−セチル−エ
ーテル−エステルを約５ｍｇ得た。この化合物のＩＲ−
スペクトルは日本分光Ａ−２０２型赤外分光光度計を用
い液膜法で測定した。その結果を第２表に示した。（Ｒ
ｕｎ　Ａ５　）　第２我に示した他のアルコールは上記
と同様に行なった。但し上記ケイ酸カラムで単一に分離
精製できなかったものについては更に高速液体クロマト
グラフィーによって精製した。すなわち上記ケイ配力ラ
ムで分離した試料浴液を７底圧段、固した後、ルーへキ
サン−２−プロパノ−ルー水（６０：　８０　：目贈比
）に溶解し、カラムラジアルパックカートリッジシリカ
８１１ＩＩ×１０ｃｒｒＬ（ウオターズ社製）、溶媒ル
ーへキサン−２−プロパノ−ルー水（６０＋　８０　ｊ
６及び６（Ｍ８０１１６容量比）、流速２ｍｅ／ｍｉｎ
で、又ピークの検出には４４１型紫外線吸収検出器（ウ
オターズ社！Ｍ）による２１ｔｎｘの吸収及びＲ−４０
２型示差屈折計（ウォーターズ社製）を用い分離精製し
た。上記薄層クロマトグラフィーで単一物質に分離され
たことを確認した後、上記した方法でＩＲ−スペクトル
を測定した。

実施例３．　（Ｒｕｎ　Ａｌ〜１８） 後掲第３表に示した下記リン脂質 ｉ質１；Ｌ−α−レシチン、β、γ−ジヘキサデシ／Ｌ
；（カルビオケムーベーリング社）（１，２−）へキサ
デシル−８ｎ−グリセロール−３−ホスホリルコリン） Ｊ５ｉｎ＋Ｌ−α−レシチン、β、γ−ヘキサデシリジ
ン（同上）（１１２−シクロヘキサデシリデンー８ｎ−
グリセロール−３−ホスホリルコリン） 基質ｙｘホスファチジルコリンプラスマローｒン（ウシ
心臓、フナコシ薬品） Ｎ％　ＰＩ　Ｈ１−０−アルキル−２−アセトイル−ａ
　ｎ　−／’　ＩＪセロ−ルー３−ホスホリルコリン（
ウシの心臓、フナコシ薬品） を用いて実施例２と同様に、第３表に示したアルコール
とを反応させ転移物を分離精製し、そのＩＲブイ々ＬＬ
か州１１９１吋箇幼旭ル印ｑ士ｆ壬１奇実施例４　　（
Ｒｕｎ＆　１〜６　） 後掲第４表に示した下記リン脂質 基質！；β−レシチン、α、β−ソバルミトイル（カル
ビオケムーベーリング社）（１゜３−ジノぞルミトイル
ーグリセロール−２−ホスホリルコリン） Ｍ’ＸｎｔＬ−α−リゾレシチン（卵黄、シダマー社） を用いて実施例２と同様に、第３表に示したアルコール
とを反応させ転移物を分離精製し、そのＪＲスペクトル
を測定しその結果を第４表に示した。

実施例５．　　（Ｒｕｎ１６１〜５） 下記基質 基質１＋Ｚ／−α−ホスファチツルコリン−β、γ−ノ
ミリストイル（カルピオケムーベーリング社製） 基質ｘＬ−α−ホスファチツルエタノ−ルア電ンーβ、
ｒ−シミリストイル（同上） 基質■ＩＬ−α−ホスファチジルＮ−メチルエタノール
アミン−β、ｒ−ノミリストイル（同上） 基質ｗＩＬ−α−ホスファチツルーＤＬ−グリセロール
−β、γ−シミリストイル（同上）基ｉＶ；Ｌ−α−ホ
スファチノルセリン（牛脳由来シグマ−社製） 基質■；Ｌ−α−ホスファチツルエタノール−β。

γ−シミリストイル〔Ｓ、Ｆ、Ｙａｎｇら（Ｊ、　　Ｂ
ｉｏｌ、Ｃｈｇｍ、　　　２　４　２　．４　７　７１
９６７１の方法に従って基質ｌより調製した〕 を用いて実施例（２）と同様にして、アルコールとして
２０％ポリエチレングリコール（分子１１１０００）を
用い、又エーテルの替りに塩化メチレン０．５　Ｒ／を
用い反応させ、転移生成物のＩＲスペクトルを（ａｌｌ
定した。結果を第５表に示した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（ I ） 但し式中Ａは下記（ｉ）又は（ｉｉ） ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（ｉ）又は▲
   数式、化学式、表等があります▼・・・（ｉｉ）を示し
   、ここでＲ＿１及びＲ＿２は、それぞれ、同一もしくは
   異なつていてもよく、基−Ｏ−ＣＯＲ＿１＿１及び−Ｏ
   −Ｒ＿１＿２よりえらばれた基を示し、そして、式（ｉ
   ）の場合には、Ｒ＿２はさらにＯＨであることができ、
   更にＲ＿１とＲ＿２が一緒になつて▲数式、化学式、表
   等があります▼〔ここで、 ｎは１１〜１９の整数を示す〕を表わすこともできる、 上記に於て、Ｒ＿１＿１及びＲ＿１＿２は同一でも異つ
   ていてもよく、それぞれ、飽和もしくは不飽和のＣ＿１
   〜Ｃ＿２＿１の脂肪族炭化水素を示し、Ａ′はオキシド
   アニオン又は水酸基を示し、Ｂは−（ＣＨ＿２）＿２Ｎ
   ＾＋（ＣＨ＿３）＿３、−（ＣＨ＿２）＿２ＮＨ＿２、
   −ＣＨ＿２ＣＨ（ＮＨ＿２）ＣＯＯＨ、−（ＣＨ＿２）
   ＿２ＮＨ（ＣＨ＿３）、−（ＣＨ＿２）＿２Ｎ（ＣＨ＿
   ３）＿２、−ＣＨ＿２ＣＨ・ＯＨ・ＣＨ＿２ＯＨ、▲数
   式、化学式、表等があります▼（イノシトール基）もし
   くは −（ＣＨ＿２）＿ｍＨ〔ここでｍは１〜５の整数を示す
   。〕を示す、 で表わされるリン脂質と下記（１）又は（２）、（１）
   Ｃ＿２＿７以上の飽和もしくは不飽和の脂肪族又は芳香
   族炭化水素残基、ここで該炭化水素残基はハロゲン、ア
   ミノ、アセチル及び水酸基より選ばれた置換基で置換さ
   れていてもよい、又は 分子内にエーテル、エステル、アミン及びアミド結合よ
   りなる群からえらばれた結合を有する上記炭化水素残基
   、 からなる一級アルコール化合物、 （２）ハロゲン、アミノ、アセチル、水酸基、Ｃ＿３以
   下のモノ−もしくはジ−アルキルアミノ及びフエニルよ
   り成る群からえらばれた置換基で置換されていてもよい
   Ｃ＿１＿１以上の直鎖もしくは分岐アルキル残基、但し
   該アルキル残基分子内にエステル結合を有していてもよ
   い、又は飽和もしくは不飽和のＣ＿１＿０〜Ｃ＿２＿６
   の脂肪族カルボン酸と多価アルコールとのエステルであ
   る多価アルコール残基； からなる二級アルコール化合物、 とをホスホリパーゼＤＭの存在下に反応させることを特
   徴とする下記式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼・・・（II） 但し式中Ａ及びＡ′は上記したと同義であり、Ｃは上記
   （１）〜（２）における残基を示す、で表わされるリン
   脂質長鎖アルコール誘導体の製法。