JPS62164697A - 抗生物質ｆ−００２４−ａ及びｆ−００２４−ｙ並びにその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質Ｆ　−００２４−Ａ及びＦ−００２４
−■並びにその製造法に関するものである。

本発明者らは、新規な抗生物質の探索を目的として多数
の微生物を土壌より分離し、その産生ずる抗生物質を探
索した。

その結果、新潟県南会津郡湯谷村にて採取した土壌より
分離したストレプトミセス属に属する微生物を適宜の培
地で培養すると、グラム陽性細菌に強い抗菌力を示す抗
生物質を培地中に蓄積することを見出した。そこでこの
抗生物質を単離し。

その理化学的性質及び生物学的性質を既知の抗生物質と
比較したところ該当するものがなく、新規抗生物質であ
ることが判明した。

以下に本発明の新規抗生物質Ｆ　−００２４−Ａ及びＦ
　−００２４−Ｙ並びにその製造法について詳述する。

まず本発明において用いる微生物は、抗生物質Ｆ−００
２４−Ａ及びＦ−００２４−１／　（７）生産能を有す
るものであり、ストレプトミセス属に属する菌種である
。

その−例としてストレプトミセスエスピー（ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓｓｐ、）　　Ｆ−００２４号株（微工研
菌寄第８５６１号）と呼称される微生物は１本発明の抗
生物質Ｆ−００２４−Ａ及びＦ−００２４−Ｙを有利に
生産するものであり、本発明方法に有効に利用し得るも
のである。

上記ストレプトミセスエスピーＦ　−００２４号株の自
然的及び人工的変異株は勿論、ストレプトミセス属に属
する菌種で後述の抗生物質Ｆ　−００２４−Ａ及びＦ　
−００２４−Ｙの生産能を有する微生物はすべて本発明
方法において使用することが出来る。

本発明に用いられるストシブ１−ミセスエスピーＦ−０
０２４号株は、分岐する真正の菌糸を有し、空中にのび
る気菌糸は分断して１０個以上の長い胞子の連鎖となり
、らせん状またはループ状で、表面はこぶ状である。全
細胞の加水分解物からは、Ｌｒ、−ジアミノピメリン酸
が検出されるが、マジュロース、ガラクトース、キシロ
ースは検出されない。

これらの点で、ストレプトミセスエスピーＦ−００２４
号株は明らかに放線菌口中のストレプトミセス科、スト
レプトミセス属に属する一菌株としてＪ忍ぬられる。

ストレプトミセスエスピーＦ　−００２４号株は。

下記の菌学的性質を有する。

１、形態学的性質 気菌糸はよく発達し分岐し、基土菌糸の巾は約０．４〜
０．８μｍである。数種の培地１例えば酵母・麦芽エキ
ス寒天培地、イースト・スターチ寒天培地、タートリエ
ン１−寒天培地などで良好に気菌糸を着生する。気菌糸
は分岐し、その先端はらせん状あるいはループ状である
。胞子表面はこぶ状で、形状は球状である。大きさは約
０．８Ｘ０．５μｍで胞子のう、菌核、菌糸束などは１
１察されない。

（培地」―の諸性質） 実験の方法は、イー・ビー・シャーリングらの報告（イ
ンターナショナル・ジャーナル・オブ・システィマチイ
ック・バクテリオロン１１６巻、３１３〜３４０頁１９
６６年）に７（ｈじ、その他付加的に公知の培地及び実
験方法を併用した。

色調の決定には、キセノンランプを光源とする標準光源
下で、標準色票として、カラー・ハーモニー・マニアル
第４版を用い、一致する色票があれば、初めに一般名を
示し、次に括弧内に色票コードを併記した。以下特記し
ない限り２８℃３週口の生育の状態であり寒天平板培養
である。

（１）シュークロース・硝酸塩寒天培地（ディフコ、ツ
アペック・ソリュション・アカ−）生育は痕跡程度。気
菌糸も着生不良でシェル・ピンクにツーグレー５ｈａ）
可溶性色素は認められない。

（２）グルコース・アスパラギン寒天培地生育は不良で
初めサンドにアーグレー３ｃｂ）からのちナチュラル・
ストリングにアーグレー５ｄｃ）になる。可溶性色素は
認められない。

（３）グリセロール・アスパラギン寒天培地（ＴＳＰ−
５、ディフコ） 生育および気菌糸の着生は非常に不良。可溶性色素は認
められない。

（４）スターチ寒天培地（ＩＳＰ−４、ディフコ無桟塩
スターチ・アガー） 生育は不良。気菌糸は、わずかに着生する。

オフホワイト。可溶性色素は認められない。

（５）チロシン寒天培地（ＴＳＰ−７、ディフコ、チロ
シン・アガー） 生育は不良。サンド。気菌糸はわずかに着生する。サン
ド。可溶性色素は認められない。

（６）イースト・マルト寒天培地（ＴＳＰ−２、ディフ
コ、イーストマルトエキストラクト・アガー） 旺盛に生育し、ライト・マスタード・タン（２ｉ　ｅ）
からにアーグレー２４　］／２　ＰＯ）になる。気菌糸
も旺盛に着生し、ライト・グリ−ニッシュ　グレーにア
ーグレー２４１／２　ｄ　ｃ　）から、ライト・レディ
シュグレーにアーグレー５　ｄ　ｒ、　）になる。可溶
性色素は認められない。

（７）オートミールアガー（ＴＳＰ−３）生育は不良で
、オーキトティンにアーグレー１０ｈａ）気菌糸の生育
は良好。クロウドピンクにアーグレー７ｃｂ）可溶性色
素は認められない。

（８）ヌートリエント寒天培地（ディフコ、スートリエ
ントアガー） 生育は良好。ライト・ラボリイ・エフシェル（２ｃａ）
。気菌糸も良好に着生し、オフホワイト。可溶性色素は
認められない。

２、生理生化学的性質 （１）生育温度範［ＪＮ（ベネット培地、滅菌前ｐＨ７
、２温度勾配装置使用、２週日の生育）適温２５〜３２
℃　生育可能温度８．５〜３９℃ （２）ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼラチ
ン培地穿刺培養）陰性 （３）脱脂乳の凝固・ペプトン化（ディフコ、スキムミ
ルク、２８℃および３７℃） ２８℃ペプトン化：陽性　凝固：陰性 ３７°Ｃペプトン化：陽性　凝固：陰性（４）メラニン
の生成 チロシン寒天培地：陰性 メラニン生成培地：陰性（２週間口：踊場性） ペプトン・イースト・鉄寒天培地：陰性トリプトン・イ
ースト・液体培地：陽性（５）アデニン・キサンチン・
ヒポキサンチン・チロシンの溶解 チロシン・ヒポキサンチン：陽性 キサンチン・アデニン：陰性 （６）耐塩性（イースト・スターチ寒天培地十食塩） ４％迄生育（７％では生育しない。） （７）炭素源利用能（ディフコ、カーボン、ユティリイ
ション寒天培地２８°Ｃ２週口）陽性ニゲルコース、フ
ラクトース、イノシトール、ラムノース 踊場性：キシロース、サリシン 陰性：アラビノース、シュークロース、ラフィノース、
マンニトール ストレプトミセスエスピーＦ　−００２４号株はその形
態、培養ヒおよび生理的性質の諸点で既知のストレプト
ミセスの種では、ストレプトミセスグラミノファシェン
ス、チャーニー、フィッシャー、キューラン、マクロウ
イツツ、タイチル（Ｓｔｒｅｐｊｏｍｙｃｅｓ　ｇｒａ
ｍｉｎｏｆａｃｉｅｎｓ　Ｃｈａｒｎｅｙ、　Ｆｉｓｈ
ｅｒ。

Ｃｕｒｒａｎ、　Ｍａｃｈｌｏ％ｌ１ｔｚ　ａｎｄ　Ｔ
ｙｔ、ｅｌｌ）が最も近似していた。しかしグラミノフ
ァシェンスと比較してみると食塩耐性は７％まで耐塩性
があり、糖の資化性はどの糖もよく資化する点などが明
らかに異っている。よってストレプトミセスエスピーＦ
−００２４号株はストレプトミセスグラミノファシェン
スとは異なる種に屈する一菌種と固定された。

従って、本菌株をストレプトミセスエスピーＦ−００２
４と命名した。

本発明により抗生物質Ｆ　−００２４−Ａ及びＦ−００
２４−■を製造するには、ストレプトミセス属に屈する
ストレプトミセスエスピーＦ　−００２４号株を培養す
ることによって行われる。即ちストレプトミセスエスピ
ーＦ　−００２４号株を培養して抗生物質Ｆ−００２４
−Ａ及びＦ　−００２４−Ｙを産生させるためには普通
に知られている放線菌の培養方法、またはその変法を用
いることが出来る。工業的には醗酵槽中で通気撹拌培養
することが有利である。

生産培地としては放線菌の培地に通常用いられる原料が
使用される。

即ち各種の炭素源、窒素源及び無機塩類、〜１ηびに場
合により生長促進剤や消泡剤など適宜に組合せて用いる
ことが出来る。一般に炭素源としてはぶどう糖、多芽糖
、果糖、蔗糖、乳糖、デキストリン、澱粉、糖蜜、大豆
油等、または、その混合物を用いることができる。窒素
源としては、大豆粉、綿実粉、酵母エキス、ペプトン、
胚芽、肉エキス、コーンステイブリカー、またはその混
合物を用いることができる。その他無機塩としては、普
通に用いられるリン酸、塩酸、硫酸等のカリウム塩、ナ
トリウム塩、アンモニア塩、カルシウム塩、マグネシウ
ム塩等が用いられ、単独または二種以上の組合せで使用
することが出来る。

培養温度は２５〜３５℃の範囲でよいが、２７〜３０℃
が好ましい。培養時間は種々の条件で異なってくるが通
常６８〜１１６時間である。

培養物から抗生物質Ｆ−００２４−Ａ及びＦ　−００２
４−Ｖを単離精製するためには、本物質の理化学的性質
を利用し、公知の手段１例えば不純物との溶解度の差を
利用する手段、イオン交換樹脂または各種吸着剤に対す
る吸着力の差を利用する手段。

水と混和しない有機溶媒による抽出手段、あるいは沈澱
、不純物の除去、透析、乾燥、再結晶などの手段を適宜
選択し組合わせて行うことが出来る。

培養物中に生産された抗生物質Ｆ　−０ｏ２４−　Ａ及
びＦ　−００２４−Ｙは１例えば次の様にして採取する
ことが好ましい。培養液に濾過助剤１例えば珪藻土、ラ
ジオライト７００等を加えて培養液をｉ！、！過し、濾
液及び菌体を夫々適当な溶媒１例えば酢酸エチル、アセ
トン等で抽出する。次いで菌体抽出液と濾液抽出液を合
わせ、この抽出液から溶媒を留去すると抗生物質Ｆ　−
００２４−Ａ及びＦ　−００２４−■の混合した粗抽出
物が得られる。

この粗抽出物より抗生物質Ｆ　−００２４−Ａ及びＦ−
００２４−Ｙ　を単離するためには、例えばアルミナ及
びシリカゲルのカラムクロマトグラフィー、セファデッ
クス１（−２０のカラムクロマトグラフィーで精製し、
活性区分を集め、濃縮、乾燥することにより、抗生物質
Ｆ　−００２４−＾及びＦ　−００２／１−Ｎの混合物
を高純度の粉末として得られる。次にこの粉末を、適当
な溶媒、例えば温エタノールに溶解して冷却するとＦ　
−００２４−Ａが結晶として得ることが出来る。その濾
液を濃縮し６次に酢酸エチル−ヘキサン等で結晶化する
ことにより、Ｆ−００２４−Ｙが結晶として得ることが
出来る。こうして得られた抗生物ＩｉＴ、Ｆ−００２４
−＾及びｌ”　−００２４−■の諸性質は次のとおりで
ある。

（Ａ）抗生物質Ｆ　−００２４　−Ａの理化学的性質及
び生物学的性質 性状：白色針状結晶 融点＝２７４〜２７６℃ 元素分析値（％）　　：　Ｃ５２，３８，Ｉｆ　６．２
４．　Ｎ　１５．８９０２３．７０．５１．４９ 比旋光度：　〔α）”、’＝−１９，０”　（ｃ＝１．
メタノール）紫外線吸収スペクトル：メタノール中で２
５５ｎｍと３ＱＯｒｉｍに極大吸収を示す（第１図参照
）赤外線吸収スペクトル：第２図の通り 酸性、中性、塩基性の別：中性 溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、温メタ
ノール、温エタノールに可溶、水、ヘキサン、ジメチル
スルフオシドに難溶である。

含有するアミノ酸：セリン、スレオニン、バリン、メチ
オニン、イソロイシンを含有する。

Ｒｆ値：メルク社製シリカゲルＧ　（Ａｒｔ５７ｔ５）
を使用したときのＲｆ値は次の通りである。

展開溶媒　　　　　　　　　　　Ｒｒ値クロロホルム−
メタノール（９５：５）　　　０．４ベンゼン−アセト
ン　　　（１０：　３）　　　０．５６抗菌スペクトル
（寒天希釈法による）：供　試　菌　　　　　　　　最
小阻止濃度（μｇ／＋ｓ　Ｑ　）スタフィロコッ力スア
ウレアスＦＯＡ２０Ｇ−ＰＪＣ−Ｉ　　Ｑ、３９スタフ
イロコツカスアウレアステラシマ　　　　０．３９スタ
フィロコツ力スアウレアスＭＳ　３５３　　　　　＜　
０．２ミクロコツカスルテアスＡＴＣＣ９４３１０，７
８バチルスズブチルスＡＴＣＣ６６３３＜　０．２エシ
ェリヒアコリＮＩＩＩＪ−ＪＣ−２＞　１００クレブシ
エラニユモニアＰＣＩ−６０２＞　１００シユウドモナ
スエルギノオサＴＡＮ　１１８４　　　　＞　１００プ
ロテウスミラビリスＩＦ０３Ｂ４９　　　　　　）　１
００エントロバクタークロアカニ９６３　　　　　　＞
　１００コクリオボラスミヤビアナス　　　　　　　〉
１００アルタナリアマリ　　　　　　　　　　　　　＞
　ｉｏ。

ピリキュラリアオリゼ　　　　　　　　　　　＞　１０
０上記の通り抗生物質Ｆ−００２４−Ａは、ダラム陽性
菌に対して非常に強い活性を示している。

（Ｂ）抗生物質Ｆ　−００２４−Ｙの理化学的性質及び
生物学的性質 性状：白色針状結晶 融点＝１７３〜１７５℃ 元素分析値（％）　　：　Ｃ５３，１４，Ｉｆ　７．５
６．Ｎ　１２．９５０２６．３５ 比旋光度：　［α］”：’＝＋１４°（ｃ＝１．メタノ
ール）紫外線吸収スペクトル：特異的な吸収は示さない
。

赤外線吸収スペクトル：第３図の通り 酸性、中性、塩基性の別：中性 溶解性：クロロホルム、メタノール、エタノール、アセ
トン、ジメチルスルフオシドシドに可溶、水、ヘキサン
に難溶である。

含有アミノ酸：グリシン、アラニン、未確認アミノ酸を
含有する。

Ｒｆ値：メルク社製シリカゲルＧ　（Ａｒｔ５７１５）
を使用したときのＲｆ値は次の通りである。

展開溶媒　　　　　　　　　　　　Ｒｆ値クロロホルム
−メタノール（９５：５）　　　０．３５ベンゼン−ア
セトン　　　（１０：３）　　　０．５８抗菌スペクト
ル（寒天希釈法による）：供　試　菌　　　　　　　　
最小阻止濃度（μｇ／ｍＱ）スタフィロコツ力スアウレ
アスＦＩＦＡ２０９−ＰＪＣ−１＜　０．２スタフイロ
コツカスアウレアステラシマ　　　　＜０．２スタフィ
ロコツ力スアウレアスＭＳ　３５３　　　　　　＜　０
．２ストレプトコツ力スフイオゲネスＣ００Ｋ　　　　
　　＜　０．２ミクロコツカスルテアスＡＴＣＣ９４３
１＜　０．２バチルスズブチルスＡＴＣＣ６６３３＜　
０．２ニジエリシアコリＮＴＩＩＪ−ＪＣ−２）　＋０
０クレブシエラニユモニアＰＣＴ−６０２＞　１００シ
ユウドモナスエルギノオサ！ＡＭ　１１８／Ｉ　　　　
　）　１００プロテウスミラビリスＩＦＯ３８４９＞　
１００エントロバクタークロアカニ９６３　　　　　　
　）　１００コクリオボラスミヤビアナス　　　　　　
　　＞　１００アルタナリアマリ　　　　　　　　　　
　　　　　＞　１００ピリキユラリアオリゼ　　　　　
　　　　　　　〉１００上記の通り抗生物質Ｆ　−００
２４−Ｙはダラム陽性菌に対して非常に強い活性を示し
ている。

以上の抗生物質Ｆ　−００２４−Ａ及びＦ　−００２４
−”／の理化学的性質並びに生物学的性質を従来の抗生
物質と比較すると融点、比旋光度、含有アミノ酸。

元素分析値等、既知抗生物質に該当するものはなく、文
献未記載の新規抗生物質であると結論された。

さらに、本抗生物質の抗ガン試験では、マウスを用いて
腫瘍Ｐ−３８８で試験した結果、Ｆ　−００２４−Ａは
、　５　Ｂ／ｋｇではＴ／Ｃ％は１２１％、２．５ｍｇ
では１２６％、］、２５ｍｇでは１２３％であった。ま
た、　Ｆ−００２４−Ｙは、　０　、５　ｍｇ／ｋｇで
ｌ１４％、０　、２５　ｍｇ／ｋｇでは１２３％の活性
を示した。（Ｔ／Ｃ％は、無処置群の生存日数に対する
投与群の生存日数の比）。上記の結果、本発明の抗生物
質は、ダラム陽性菌に対して強い活性を示し、人および
動物に対する抗菌剤および抗ガン剤として有用である。

以下に本発明の抗生物質の製造法を実施例によって詳述
するが、本発明の方法はこれに何ら限定されるものでは
ない。

実施例１ 麦芽糖３．０％、ぶどう糖２，０％、大豆粉１゜５％、
小麦胚芽２．０％、肉エキス０．５％、イーストエキス
０．５％、炭酸カルシウム０．３％の組成を有する液体
培地を水酸化ナトリウム水溶液にてｐ　Ｈ７、’ｌとし
て、５００ｍＱフラスコに７０ｍＱ分注して加熱殺菌す
る。これにストレプトミセスエスピーＦ　−００２４号
菌を接種して、温度２８℃で２日間振盪培養して前培養
液を作成する。

別に前記と同組成の液体培地をステンレス製ジャー型醗
酵槽に１５Ｑ仕込み、加熱殺菌及び冷却後、前培養液１
６０ｍＱを接種して、温度２８℃通気歌毎分１６Ｑ、撹
拌回転数４０Ｏｒｐｍで通気撹拌培養を行う。９０時間
後、抗菌活性は最大となるので培養を終了する。

培養液１５Ｑを遠心濾過により菌体と濾液とに分離し、
菌体を８０％アセトン１０Ｑで２回抽出する。抽出液の
アセトンを減圧黒潮で除去し、培養濾液と合わせ、酢酸
エチルｌＯＱで抽出する。

抽出液を減圧黒潮でＩＱにまで濃縮する。この濃縮液を
酢酸エチルで調製したアルミナカラム（２００ｇ）に付
し、酢酸エチル２，５Ｑ　酢酸エチル−メタノール（１
：　ｌ）混液３Ｑ、メタノール１．５Ｑで順次溶出する
と、活性区分は酢酸エチル−メタノール（１，：１）両
分に溶出される。活性区分を減圧濃縮するとオイル状物
質８ｇを得る。

更にクロロホルムで調製したシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（６Ｘ４０ｃｍ）に付しクロロホルム−メタ
ノール（９５：５）混液で溶出を行い、溶出液を１５　
ｍ　Ｑづつ分取する。次に活性区分を減圧濃縮すると粗
物質として１．８ｇが得られる。

この粗物質を温エタノール１００＋ｎＱに溶解し、冷所
に放置すると抗生物質ｖ　−ｏｏ２４−　Ａの白色針状
結晶が３２０ｍｇ得られた。

Ｆ　−００２４−Ａの結晶を濾別した濾液を濃縮し、酢
酸エチル５０ｍＱに溶解し、ヘキサン２０　ｒｎ　Ｑを
加えて冷所に放置すると、抗生物質Ｆ　−００２４−■
の白色針状結晶が４２０ｍｇ得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗生物質Ｆ　−００２４−Ａの紫外線吸収ス
ペクトルを示し、第２図は、抗生物質Ｆ　−００２４−
Ａの赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ法）を示す。 第３図は、抗生物質Ｆ　−００２４−Ｙの赤外線吸収ス
ペクトルを示す。 特許出願人　　科研製薬株式会社 手続補正書（白側 昭和６１年４月２４日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　次の理化学的性質を有する抗生物質 Ｆ−００２４−Ａ （１）性状：白色針状結晶 （２）融点：２７４〜２７６℃ （３）元素分析値（％）：Ｃ５２．３８、Ｈ６．２４、
   Ｎ１５．８９、Ｏ２３．７０、Ｓ１．４９ （４）比旋光度：〔α〕＾２＾１＿Ｄ＝−１９．０°（
   ｃ＝１，メタノール） （５）紫外線吸収スペクトル：メタノール中で２５５ｎ
   ｍと３００ｎｍに極大吸収を示す。 （６）赤外線吸収スペクトル：第２図の通り（７）酸性
   、中性、塩基性の別：中性 （８）溶解性：クロロホルム、酢酸エチル、アセトン、
   温メタノール、温エチルアルコー ルに可溶、水、ヘキサン、ジメチルスルフォキシドに難
   溶である。 （９）含有アミノ酸：セリン、スレオニン、バリン、メ
   チオニン、イソロイシンを含有す る。 ２　次の理化学的性質を有する抗生物質 Ｆ−００２４−Ｙ （１）性状：白色針状結晶 （２）融点：１７３〜１７５℃ （３）元素分析値（％）：Ｃ５３．１４、Ｈ７．５６、
   Ｎ１２．９５、Ｏ２６．３５ （４）比旋光度：〔α〕＾２＾１＿Ｄ＝＋１４°（ｃ＝
   １，メタノール） （５）紫外線吸収スペクトル：特異的な吸収は示さない
   。 （６）赤外線吸収スペクトル：第３図の通り（７）酸性
   、中性、塩基性の別：中性 （８）溶解性：クロロホルム、アセトン、ジメチルスル
   フォキシド、メタノール、エタノ ールに可溶、水、ヘキサンに難溶である。 （９）含有アミノ酸：グリシン、アラニン、未確認アミ
   ノ酸を含有する。 ３　ストレプトミセス属に属し、かつ抗生物質Ｆ−００
   ２４−Ａ及びＦ−００２４−Ｙを生産する能力を有する
   微生物を培養し培養物から抗生物質Ｆ−００２４−Ａ及
   びＦ−００２４−Ｙを分離採取することを特徴とする抗
   生物質Ｆ−００２４−Ａ及びＦ−００２４−Ｙの製造法
   。 ４　抗生物質Ｆ−００２４−Ａ及びＦ−００２４−Ｙの
   生産菌が、ストレプトミセス　エスピーＦ−００２号株
   であることを特徴とする特許請求の範囲第３項記載の抗
   生物質Ｆ−００２４−Ａ及びＦ−００２４−Ｙの製造法
   。