JPH0380470B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

技術分野 本発明は新規なストレプトミセス属微生物、詳
しくは以下「Ｍ−331物質」と称する新しい抗生
物質の産生能を有するストレプトミセス属微生物
に関する。 発明の構成 本発明者らは、各種グラム陽性及びグラム陰性
病原菌、特にシユードモナス属微生物（Pseudo
−monas sp.）に対して有効な抗菌活性を有する
新しい抗生物質Ｍ−331物質を生産する能力を有
する新規な微生物を見い出し、ここに本発明を完
成するに至つた。 本発明の新規な微生物は、中華人民共和国貴州
省安順縣の土壌から新たに分離されたものであ
り、以下「Ｍ−331」と指称する。該菌株M331は
次のような菌学的性質を有する。 (1) 形態学的性質 ａ 胞子形成菌糸の分枝法：単純分枝 ｂ 胞子形成の形態：鎖状、RF（Rectus−
Flexibilis）−型 ｃ 胞子の数：数10個 ｄ 胞子の表面構造及び大きさ：平滑、1.6〜
2.1×1.3〜1.8μｍ ｅ 鞭毛胞子の有無：認められない ｆ 胞子のうの有無：認められない ｇ 胞子柄の着生位置：気菌糸上 (2) 各種培地上の性状およひ生態学的性質下記表
１に示す。

【表】 表１中発育状態の表示は以下のことを示す。 ＋：貧弱な発育、：中程度な発育、 ：
良好な発育 (3) 生理的諸性質 ａ 生育温度範囲 15〜40℃ ｂ ゼラチンの液化（28℃） 陰性 ｃ スターチの加水分解 陽性 ｄ セルロースの分解 陰性 ｅ 脱脂乳の凝固 陽性 ｆ 脱脂乳のペプトン化 陽性 ｇ 硝酸塩の還元 陽性 ｈ メラニン様色素の形成 陰性 ｉ 硫化水素の産生 陰性 (4) 各炭素源の同化性（プリドハム、ゴードリー
ブ寒天培地上） ａ Ｄ−グルコース ＋ ｂ Ｄ−フルクトース ＋ ｃ Ｌ−ラムノース ＋ ｄ Ｄ−マンニトール − ｅ Ｌ−アラビノース ＋ ｆ イノシトール − ｇ ラフイノース − ｈ Ｄ−キシロース ＋ ｉ シユクロース ＋ ｊ セルロース ＋ （＋：利用する、−：利用しない） (5) 細胞壁組成 細胞水解物全体にＬ、Ｌ−ジアミノピメリン
酸及びグリシンが存在する。 以上のような菌学的性質を有る本菌Ｍ−331に
ついて、ベツカーらのアプリケーシヨンミクロバ
イオロジー〔Application Microbiology、12、
421−128（1964）〕、バージーズ マニユアル オ
ブ デターミネイテイブ バクテリオロジー、第
８版〔Bergey′s Manual of Determinative
Bacteriology、8th edition（1974）〕、シヤーリン
グらのインターナシヨナル・ジヤーナル・システ
イマテイツク・バクテリオロジー
〔International Journal Systematic
Bacteriology 18、69−189（1968）〕、同18、279
−392（1968）、同19、391−512（1969）、同22、265
−394（1972）、野々村のジヤーナル・フエルメン
テーシヨン テクノロジー〔Journal
Fermentation Technology、52、78−92（1974）〕
および黒田らのジヤーナル・アンテイパイオテイ
クス〔Journal Antibiotics、33、259−266
（1980）〕により検索すると、本菌株に特に近縁す
るものとして、ストレプトミセス・レシフエンシ
ス（Streptomyces・recifensis）、アクチノミセ
ス・アツロオリバセウス（Actinomyces・
atroolivaceus）、ストレプトミセス・キサントシ
デイクス（Streptomyces・xanthocidicus）およ
びストレプトミセス・オミヤエンシス
（Streptomyces・omiyaensis）が挙げられるが、
本菌株は上記のうち三種の菌とは、以下の諸点に
おいて明らかな相異が認められる。 (1) ストレプトミセス・レシフエンシス： 基中菌糸の色はイースト麦芽寒天培地上で灰
黄色であり、オートミール寒天培地上、スター
チ無機塩寒天培地上及びグリセロール・アスパ
ラギン寒天培地上では識別できる色素はない。
Ｌ−ラムノースの利用がないか又は少なく、一
方Ｄ−マンニトールおよびラフイノースを利用
する。 (2) アクチノミセス・アツロオリバセウス： 基中菌糸の色はイースト麦芽寒天培地、オー
トミール寒天培地、スターチ無機塩寒天培地お
よびグリセロール・アスパラギン寒天培地上で
は識別できない。シユクロース、イノシトー
ル、Ｄ−マンニトールおよびラフイノースの利
用は一定してない。 (3) ストレプトミセス・キサントシデイスク： メラノイド色素が変化しやすい。Ｌ−ラムノ
ースを利用せず、ラフイノースの利用は少な
い。従つて、本菌株は、これら三菌株とは完全
に異なる菌と同定された。 またストレプトミセス・オミヤエンシスは、本
菌株と最も性質が近似しているが、尚Ｄ−フルク
トースおよびアラビノースの利用が少なく、シユ
クロースは利用しない点で本菌株とは異なつてい
る。従つて本菌株Ｍ−331をストレプトマイセ
ス・オミヤエンシス・変種と認め、ストレプトミ
セス・オミヤエンシス・ヴアリアント・アンシユ
ネンシス（Streptomyces omiyaensis
variantanshunensiss）と命名した。 本菌株Ｍ−331は、工業技術院微生物工業技術
研究所に受託番号 微工研条寄第447号（FERM
BP−447）として寄託されている。 また本菌株Ｍ−331は、抗生物質Ｍ−331物質の
産生能を有する点において特徴付けられる。 本菌株の利用により産生されるＭ−331物質は、
以下の理化学的性質を有する。 (1) 実験式：C₄₀H₄₉N₉O₁₁S（高分解能フアースト
アトミツク ボンバードメント マススペク
トロメトリー法による） (2) 分子量：363（マススペクトロメトリー法によ
る） (3) 元素分析値（％）：C₄₀H₄₉N₉O₁₁S・6H₂Oと
して 実測値 炭素：49.12，水素：5.94，窒素：
13.24 計測値 炭素：49.48，水素：6.32，窒素：
12.97 (4) 比旋光度：〔α〕²⁵ _D＝＋58.9°（ジメチルスルホ
キシド） (5) 赤外線吸収スペクトル： KBr錠としてのチヤートを第１図に示す。
主なν_nax（cm^-1）値は次の通りである。 3875、1660、1590、1535、1460、1385、
1340、1260、1175、1100、1065、960、880、
815、745、700、630、580、545 (6) 紫外線吸収スペクトル： 酸性もしくは中性メタノール中におけるチヤ
ートを第２図に示す。主なν_nax（ｎｍ）は次の
通りである。 290（ε＝4600）、258（ε＝19500）、 221（ε＝41000）、205（ε＝37500） また塩基性メタノール中における主なλ_nax
（ｎｍ）は次の通りである。 290（ε＝7400）、262（ε＝20400）、 245（ε＝25000）、228（ε＝43100） (7) 物質の性質：白色粉末の両性物質 (8) 溶媒に対する溶解性：水、メタノール、ジメ
チルスルホキシドおよびジメチルホルムアミド
等の極性溶媒に可溶。クロロホルムおよびエー
テル等の無極性溶媒には難溶。 (9) 呈色反応：モーリツシユ、塩化第二鉄−フエ
リシアン化カリウム、フオリン、エールリツヒ
およびパウリの各反応はそれぞれ陽性、ビウレ
ツト、アンスロン、坂口、ドラゲンドルフおよ
びニンヒドリンの各反応はそれぞれ陰性。 (10) 融点：204〜209℃ (11) pKa（66％（ｖ／ｖ）水性ジメチルホルム
アミド中）：5.8、7.9、10.8、11.8 (12) 薄層クロマトグラフイー：逆相C₁₈シリー
ル化シリカゲルをけい光指示薬（254nｍ）お
よび0.5Mクエン酸緩衝液（PH＝4.0）：メタノ
ール＝１：１と共に用いた時のRf値がほぼ0.45
である。 上記Ｍ−331物質は以下の生物学的性質を有す
る新規な抗生物質群に属している。 抗菌作用 グラム陽性及びグラム陰性病原菌、特にシユ
ードモナス属の細菌の発育を阻止する。ミクロ
液体希釈法によつて検定したＭ−331物質の各
種グラム陽性及びグラム陰性病原菌に対する最
小発育阻止濃度（MIC）を表２に示した。な
お対照に用いた抗生物質はカルベニシリンであ
る。

【表】 またＭ−331物質は生体内において実験的感染
症に対して、抗菌活性を示す。試験方法は最新
医学・第32巻・1491〜６（1977）に準じた。Ｍ
−331物質を、緑膿菌PSE1を感染させたマウス
に１回投与し、観察された活性をED₅₀値で検
定した（被検動物の50％を防御する有効投与量
をmg／Kgで表わす）。それらの結果を表３に示
した。なお、対照に用いた抗生物質をカルベニ
シリンである。

【表】 急性毒性 Ｍ−331物質のマウスに対する静脈内投与で
のLD₅₀は2400mg／Kgである。 以上のような理化学的性質および生物学的性質
を有する物質は未だ知られておらず、本発明は、
かかる抗菌作用を有し、医薬として有用な新規物
質の製造を可能とする微生物を提供するものであ
る。 本発明微生物Ｍ−331からの上記Ｍ−331物質の
製造は、Ｍ−331を適当な培地で培養し、培養物
からＭ−331物質を分離、採取することにより実
施される。本菌株Ｍ−331の培養方法は、基本的
には一般の微生物の培溶方法に準ずることがで
き、通常は液体培地による撹拌通気培養が有利で
ある。培地としては、本菌株が利用する栄養源を
含有する各種の合成培地、半合成培地あるいは天
然培地を用いることができる。之等培地の組成と
しては、炭素源として例えばグリコース、マンノ
ース、グリセリン、シユクロース、糖蜜、でん
粉、液化でん粉等を、窒素源として肉エキス、カ
ザミノ酸、ペプトン、ダルテンミール、コーンミ
ール、棉実油、大豆粉、コーンスチーブリカー、
乾燥酵母、リン酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、尿素等を、また必要に応じて例えは、リン酸
水素２ナトリウム、リン酸２水素カリウム、炭酸
カルシウム、塩化マグネシウム等の金属のリン酸
塩、炭酸塩、塩化物質等の無機塩等を夫々使用で
きる。培養中発泡の著しい時に例えば大豆油、亜
麻仁油等の植物油、オクタデカノール、テトラデ
カノール、ヘプタデカノール等の高級アルコール
類およびシリコン化合物等の消泡剤を適宜添加す
ればよい。通常本発明のＭ−331菌は、20〜40℃
で生育し、Ｍ−331物質の生産は約25〜40℃の範
囲で行なわれる。本培養の培養時間は50〜100時
間程度が適当であり、培地の濃厚化に従つて、培
養時間を更に延長してもよい。上記培養に当つて
は撹拌通気培養で通常行われるように、培地への
減菌空気の吹き込みを行なうのが好ましく、本発
明菌株の効率的生育のためには、タンク培養に用
いる空気量を１分間あたり、栄養培地１容量部に
対して0.3〜0.6容量部用い、毎分200〜400回転で
撹拌するのが望ましい。 このようにして培養物中にＭ−331物質が生成
蓄積される。これは主に培養液中に含有されてい
るので、遠心分離または過により培養物から菌
体を除去した後、液から一般抗生物質の製造に
用いられる常用の手段によつて分離、精製され
る。 この分離、精製手段としては、具体的には減圧
濃縮；凍結乾燥；溶媒抽出；液性交換例えば強酸
性陽イオン交換樹脂１×３（中国製）、アンバーラ
イトCG−120、弱酸性陽イオン交換樹脂122（中国
製）、アンバーライトIRC−50等の陽イオン交換
樹脂やアンバーライトIRA411、アンバーライト
IRA400等の陰イオン交換樹脂や非イオン交換樹
脂、アンバーライトXAD−２、ダイヤイオンHP
−20等の非イオン性吸着樹脂等による処理；例え
ば活性炭、珪酸、シリカゲル、アルミナ等の吸着
剤による処理；結晶化乃至再結晶等を単独で、又
は任意の順序で組み合せて、また反復して採用す
ることができる。 かくして抗生物質Ｍ−331物質を収得できる。
該Ｍ−331物質は、その抗菌活性を利用した医薬
品として有用である。 次に本発明微生物からのＭ−331物質の製造例
を挙げる。 製造例 グルコース６％（重量％、以下同じ）、デンプ
ン0.5％、ペプトン0.6％、魚粉0.5％、硫酸アンモ
ニウム0.7％、炭酸カルシウム0.4％および消泡剤
としてシリコンＫ−75（信越化学製）0.05％から
成る組成の培地100を200容量の培養タンクに
入れ、115℃で20分間滅菌した。これに上記と同
じ組成の培地で菌株Ｍ−331を培養した培養物を
５％接取し、毎分50の無菌空気を通じ、毎分
200〜250回転のプロペラ撹拌を行ないながら、23
℃で72時間培養した。培養終了後、遠心分離した
後、その上澄液について以下の分離操作を行なつ
た。 培養液をシユウ酸でPH2.0に調製後、水酸化ナ
トリウム水溶液にてPH3.8〜4.0に調製した。沈殿
物を別し、液を強酸性陽イオン交換樹脂１×
３（Na⁺）（中国製）に吸着させて、有効物質を希
水酸化ナトリウム水溶液にて溶出させた。その溶
出液を塩酸溶液にてPH6.5〜7.0に調製し、しばら
く放置後、析出してくる沈殿物を取した。又
液を塩化ナトリウムにて塩析した後、沈殿物を
取し、これを希水酸化ナトリウム水溶液に溶解
後、塩酸水溶液にてPH6.5〜7.0に調製し、しばら
く放置後、析出してくる沈殿物を取し、先の沈
殿物と合わせた。この沈殿物を水に溶解後、陽イ
オン交換樹脂122（Na⁺）（中国製）を充てんした
カラムに通過させ、有効物質を水にて溶出させ
た。溶出液のPHを6.5〜7.0に調製し、析出してく
る沈殿物を取し、乾燥させて、13.3ｇの粉末を
得た。 次に上記で得た粉末13.3ｇを水酸化ナトリウム
水溶液に溶かし、非イオン性吸着樹脂Ｘ−５（中
国製）を充てんしたカラムに通過させ、有効物質
を吸着させた。このカラムから有効物質を20％ア
セトアン水溶液にて溶出さ、活性分画を集め、減
圧濃縮し、さらに凍結乾燥を行なつて白色粉末
4.6ｇを得た。 この白色粉末は、前記理化学的性質及び生物学
的性質を有していた。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質Ｍ−331物質の赤外線吸収ス
ペクトル（KBr錠）分析図であり、第２図は同
物質の中性又は酸性メタノール中での紫外線吸収
スペクトル分析図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ストレプトミセス属に属する微生物であり、
   抗生物質Ｍ−331物質の産生能を有し、炭素源の
   利用性が下記の通りであるストレプトミセス・オ
   ミヤエンシス・ヴアリアント・アンシユネンシ
   ス。 Ｄ−グルコース ＋，イノシトール − Ｄ−フルクトース ＋，ラフイノース − Ｌ−ラムノース ＋，Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−マンニトール −，シユクロース ＋ Ｌ−アラビノース ＋，セルロース ＋ （ただし＋は利用するを、−は利用しないを示
   す）。