JPS62220194A - Ｌ−含硫アミノ酸の製造方法 - Google Patents
Ｌ−含硫アミノ酸の製造方法Info
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- JPS62220194A JPS62220194A JP5956886A JP5956886A JPS62220194A JP S62220194 A JPS62220194 A JP S62220194A JP 5956886 A JP5956886 A JP 5956886A JP 5956886 A JP5956886 A JP 5956886A JP S62220194 A JPS62220194 A JP S62220194A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、トリプトファンシンターゼの存在下にβ−置
換−Ｌ−アラニンを金属硫化物、金属水硫化物、金属多
硫化物、硫化アンモニウム、水硫化アンモニウムまたは
多硫化アンモニウムと反応させ、Ｌ−システィンおよび
／またはＬ−シスチンを製造する方法に間する。
換−Ｌ−アラニンを金属硫化物、金属水硫化物、金属多
硫化物、硫化アンモニウム、水硫化アンモニウムまたは
多硫化アンモニウムと反応させ、Ｌ−システィンおよび
／またはＬ−シスチンを製造する方法に間する。
Ｌ−システィンおよびＬ−シスチンは、輸液の成分など
の医薬用途のほか、化粧品用、食品添加剤などとして広
く使用されている。
の医薬用途のほか、化粧品用、食品添加剤などとして広
く使用されている。
（従来の技術）
従来、Ｌ−システィンおよびＬ−シスチンの代表的製法
としては、（１）毛髪などの 天然物から抽出する方法
、（２）化学合成法（たとえば、特開昭５７−２００３
５６）、（３）ＤＬ−２−７ミノチアゾリンー４−カル
ボン瀦からｉ１素的に合成する方法（特公昭５４−２２
７２）、（４）β−萱換アラニンをシステインデスルフ
ヒドラーゼの存在下、金属硫化物または金属水硫化物と
反応させる方法（特公昭５７−２１３１１）などが知ら
れているが、工業的な製法としては必ずしも有利な方法
とは思われない。
としては、（１）毛髪などの 天然物から抽出する方法
、（２）化学合成法（たとえば、特開昭５７−２００３
５６）、（３）ＤＬ−２−７ミノチアゾリンー４−カル
ボン瀦からｉ１素的に合成する方法（特公昭５４−２２
７２）、（４）β−萱換アラニンをシステインデスルフ
ヒドラーゼの存在下、金属硫化物または金属水硫化物と
反応させる方法（特公昭５７−２１３１１）などが知ら
れているが、工業的な製法としては必ずしも有利な方法
とは思われない。
（発明が解決しようとする問題点）
このような状況のもとで、本発明者らは、安価なＬ−シ
ステインおよび／またはＬ−シスチンの新しい製造法に
関して研究を重ねた結果、トリプトファンシンターゼの
存在下にβ−置換−Ｌ−アラニンを、金属硫化物、金属
水硫化物、金属多硫化物、硫化アンモニウム、水硫化ア
ンモニウムまたは多硫化アンモニウムと反応させること
により、Ｌ−システィンおよび／またはＬ−シスチンが
、生成することを見出し、この知見に基ずいて本発明を
完成した。
ステインおよび／またはＬ−シスチンの新しい製造法に
関して研究を重ねた結果、トリプトファンシンターゼの
存在下にβ−置換−Ｌ−アラニンを、金属硫化物、金属
水硫化物、金属多硫化物、硫化アンモニウム、水硫化ア
ンモニウムまたは多硫化アンモニウムと反応させること
により、Ｌ−システィンおよび／またはＬ−シスチンが
、生成することを見出し、この知見に基ずいて本発明を
完成した。
（問題を解決するための手段）
トリプトファンシンターゼは、微生物、高等植物などに
広く存在していることが知られており（例えば、 Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏ３ｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、 Ｖ
ｏｌ、３９゜Ｎｏ、２．ｐ、８７１２０ （１９７５）
） 、本発明においても酵素源は特に限定されないが、
通常は微生物起源のものが用いられる。トリプトファン
シンターゼを生産する菌株としては、たとえば、エシェ
リヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）
ｉ’１Ｔ−１０２３２（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９）、エシ
ェリヒア・コリＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭ ＢＰ−２
０）、ノイロスポラΦクラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ
ｃｒａｓｓａ）ＡＴＣＣ−１４６９２、サツカロミセ
ス・セレビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒ
ｅｖｉｓｉａｅ） ＡＴＣＣ−２６７８７などがある。
広く存在していることが知られており（例えば、 Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏ３ｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ、 Ｖ
ｏｌ、３９゜Ｎｏ、２．ｐ、８７１２０ （１９７５）
） 、本発明においても酵素源は特に限定されないが、
通常は微生物起源のものが用いられる。トリプトファン
シンターゼを生産する菌株としては、たとえば、エシェ
リヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）
ｉ’１Ｔ−１０２３２（ＦＥＲＭ ＢＰ−１９）、エシ
ェリヒア・コリＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭ ＢＰ−２
０）、ノイロスポラΦクラッサ（Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ
ｃｒａｓｓａ）ＡＴＣＣ−１４６９２、サツカロミセ
ス・セレビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒ
ｅｖｉｓｉａｅ） ＡＴＣＣ−２６７８７などがある。
エシェリヒア・コリの培養面体からの上りブトファ
ンシンターゼの抽出法については、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎ
ａ！ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、Ｖｏｌ、２４９゜ＮＯ，２４，ｐ、７７５６−７７
６３ （１９７４年）、ノイロスポラ・クラッサの培ｌ
Ｉ面体からの抽出法については、同Ｖｏ１．２５０．Ｎ
ｏ、８．１）、２９４１−２９４６ （１９７５年）、
サツカロミセス・セレビシェの培！ＩＭ体からの抽出法
については、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ。
ンシンターゼの抽出法については、Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎ
ａ！ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ、Ｖｏｌ、２４９゜ＮＯ，２４，ｐ、７７５６−７７
６３ （１９７４年）、ノイロスポラ・クラッサの培ｌ
Ｉ面体からの抽出法については、同Ｖｏ１．２５０．Ｎ
ｏ、８．１）、２９４１−２９４６ （１９７５年）、
サツカロミセス・セレビシェの培！ＩＭ体からの抽出法
については、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ。
１０２、ｐ、１５９−１６５ （１９７９年）に記載さ
れ知られている。
れ知られている。
しかし、本発明に使用されるトリプトファンシンターゼ
は、必ずしも抽出された純粋な物である必要はない、す
なわち、トリプトファンシンターゼ生産面の培養物、培
養物から遠心分離などの方法によって採取した生菌体、
その乾燥面体あるいは面体を冴砕、自己消化、超音波処
理などをすることによって得られる面体処理物、更には
、これらの面体よりの抽出物並びに該抽出物より得られ
る酵素の粗製物であっても利用できる。もちろん・これ
らの固定化物でもよい。
は、必ずしも抽出された純粋な物である必要はない、す
なわち、トリプトファンシンターゼ生産面の培養物、培
養物から遠心分離などの方法によって採取した生菌体、
その乾燥面体あるいは面体を冴砕、自己消化、超音波処
理などをすることによって得られる面体処理物、更には
、これらの面体よりの抽出物並びに該抽出物より得られ
る酵素の粗製物であっても利用できる。もちろん・これ
らの固定化物でもよい。
トリプトファンシンターゼ生産面を培養するための培地
としては、炭素源、窒素源、無機物および必要に応じて
少量の微量栄養素を含むものであれば、合成培地または
天然培地の何れも使用可能である。培地へ微量のトリプ
トファンまたはインドールを添加することが有効なこと
もある。また、培地へ微量のインドールアクリル酸を添
加することによりトリプトファンシンターゼ生産量が高
まることもある。
としては、炭素源、窒素源、無機物および必要に応じて
少量の微量栄養素を含むものであれば、合成培地または
天然培地の何れも使用可能である。培地へ微量のトリプ
トファンまたはインドールを添加することが有効なこと
もある。また、培地へ微量のインドールアクリル酸を添
加することによりトリプトファンシンターゼ生産量が高
まることもある。
培養は、振盪培養あるいは通気撹拌培養などの好気的条
件下で行う。培養温度は２０−４０℃、通常は２５−３
７℃の範囲である。培養液のｐＨは５−８である。
件下で行う。培養温度は２０−４０℃、通常は２５−３
７℃の範囲である。培養液のｐＨは５−８である。
トリプトファンシンターゼは、インドール−３−グリセ
ロ燐酸とＬ−セリンからＬ−）リブトファンを合成する
反応の他に種々の反応を触媒する多機能酵素であること
は良く知られている。（例えば、 Ａｄｖａｎｃｅｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｒｅ１ａｔｅ
ｄＡｒｅａｓ ６ｆ Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙ、Ｖｏｌ、４９．ｐ、（２７−１８５（１９７９）
） Ｌ／かじながら、トリプトファンシンターゼによ
る本発明の反応は、本発明者らが初めて見出したもので
ある。
ロ燐酸とＬ−セリンからＬ−）リブトファンを合成する
反応の他に種々の反応を触媒する多機能酵素であること
は良く知られている。（例えば、 Ａｄｖａｎｃｅｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｒｅ１ａｔｅ
ｄＡｒｅａｓ ６ｆ Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏ
ｇｙ、Ｖｏｌ、４９．ｐ、（２７−１８５（１９７９）
） Ｌ／かじながら、トリプトファンシンターゼによ
る本発明の反応は、本発明者らが初めて見出したもので
ある。
反応基質であるβ−置換−Ｌ−アラニンとしては、例え
ばβ−クロロ−し−アラニン、β−ブロモ−し−アラニ
ンなとのβ−ハロゲノ−Ｌ−アラニン、 ０−メチル−
Ｌ−セリン、０−エチル−Ｌ−セリンなとの０−アルキ
ル−し−セリン、Ｓ−メチル−Ｌ−システィン、Ｓ−エ
チル−Ｌ−システィンなとのＳ−アルキル−Ｌ−システ
ィン、０−アセチル−し−セリン、０−ベンジル−し−
セリン、Ｓ−ベンジル−し−システィンし一セリン ０
−サルフェート、Ｌ−セリンなどを用いることができる
。
ばβ−クロロ−し−アラニン、β−ブロモ−し−アラニ
ンなとのβ−ハロゲノ−Ｌ−アラニン、 ０−メチル−
Ｌ−セリン、０−エチル−Ｌ−セリンなとの０−アルキ
ル−し−セリン、Ｓ−メチル−Ｌ−システィン、Ｓ−エ
チル−Ｌ−システィンなとのＳ−アルキル−Ｌ−システ
ィン、０−アセチル−し−セリン、０−ベンジル−し−
セリン、Ｓ−ベンジル−し−システィンし一セリン ０
−サルフェート、Ｌ−セリンなどを用いることができる
。
もう一方の基質である硫化物、水硫化物などとしては、
例えば硫化ナトリウム、硫化カリウム、硫化リチウムな
どの金属硫化物、水硫化ナトリウム、水硫化カリウム、
水硫化リチウムなどの金属水硫化物、多硫化ナトリウム
、多硫化カリウムなどの金属多硫化物、硫化アンモニウ
ム、水硫化アンモニウム、多硫化アンモニウムなどを用
いることができる。また、これらの硫化物、水硫化物な
どは反応液中において金属水酸化物または水酸化アンモ
ニウムと硫化水素より生成したものでもよい。
例えば硫化ナトリウム、硫化カリウム、硫化リチウムな
どの金属硫化物、水硫化ナトリウム、水硫化カリウム、
水硫化リチウムなどの金属水硫化物、多硫化ナトリウム
、多硫化カリウムなどの金属多硫化物、硫化アンモニウ
ム、水硫化アンモニウム、多硫化アンモニウムなどを用
いることができる。また、これらの硫化物、水硫化物な
どは反応液中において金属水酸化物または水酸化アンモ
ニウムと硫化水素より生成したものでもよい。
本発明においては、トリプトファンシンターゼの存在下
、通常ｐＨ６−１０の水性媒質中で、β−置換−Ｌ−ア
ラニンと硫化物、水硫化物または多硫化物とを反応させ
る。反応温度は２０−６０℃が適当である。 反応時間
は、酵素力価、基質濃度、その他の条件により異なるが
、回分反応では通常１−１００時間である。反応は、静
置またはゆるやかな撹拌下に行われる。基質であるβ−
置換−Ｌ−アラニンと硫化物、水硫化物または多硫化物
の濃度は特に制限はないが、通常は０．１−３０重量％
程度である。基質は反応開始時に全量を反応液に添加し
ても良いし、反応の進行にともない分割添加することも
可能である０反応液中には硫化物、水硫化物または多硫
化物がβ−置換−Ｌ−アラニンに対して当モル以上存在
することが望ましい。反応に際しては、基質の他に補酵
素であるピリドキサール酸を微量添加することが望まし
い。
、通常ｐＨ６−１０の水性媒質中で、β−置換−Ｌ−ア
ラニンと硫化物、水硫化物または多硫化物とを反応させ
る。反応温度は２０−６０℃が適当である。 反応時間
は、酵素力価、基質濃度、その他の条件により異なるが
、回分反応では通常１−１００時間である。反応は、静
置またはゆるやかな撹拌下に行われる。基質であるβ−
置換−Ｌ−アラニンと硫化物、水硫化物または多硫化物
の濃度は特に制限はないが、通常は０．１−３０重量％
程度である。基質は反応開始時に全量を反応液に添加し
ても良いし、反応の進行にともない分割添加することも
可能である０反応液中には硫化物、水硫化物または多硫
化物がβ−置換−Ｌ−アラニンに対して当モル以上存在
することが望ましい。反応に際しては、基質の他に補酵
素であるピリドキサール酸を微量添加することが望まし
い。
このようにして反応を行うと、反応液中にはＬ−システ
ィンが生成するが、Ｌ−システィンは酸化されてＬ−シ
スチンに変化しやすいので、反応の進行とともに反応液
中には通常、Ｌ−システィンとＬ−シスチンが共存し、
徐々にＬ−シスチンの量が増大する。しかしながら、反
応条件を制御することによりＬ−システィンとＬ−シス
チンの濃度比を変えることも可能である。
ィンが生成するが、Ｌ−システィンは酸化されてＬ−シ
スチンに変化しやすいので、反応の進行とともに反応液
中には通常、Ｌ−システィンとＬ−シスチンが共存し、
徐々にＬ−シスチンの量が増大する。しかしながら、反
応条件を制御することによりＬ−システィンとＬ−シス
チンの濃度比を変えることも可能である。
反応液からＬ−システィンまたはＬ−シスチンを採取す
るには通常の方法を用いることができる。
るには通常の方法を用いることができる。
例えば、反応終了後反応液に通気して大部分のＬ−シス
ティンをＬ−シスチンに酸化すれば、Ｌ−シスチンは水
にｊｌ溶なので容易に単離できる。またこのようにして
得られたし一シスチンを電解還元すればＬ−システィン
を得ることができる。
ティンをＬ−シスチンに酸化すれば、Ｌ−シスチンは水
にｊｌ溶なので容易に単離できる。またこのようにして
得られたし一シスチンを電解還元すればＬ−システィン
を得ることができる。
Ｌ−システィンとＬ−シスチンの定量は、液体クロマト
グラフィーで行った。生成したシスティンとシスチンが
Ｌ一体であることは、光学異性体分離用カラムを用いた
液体クロマトグラフィーにより確認した。
グラフィーで行った。生成したシスティンとシスチンが
Ｌ一体であることは、光学異性体分離用カラムを用いた
液体クロマトグラフィーにより確認した。
（実施例）
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
実施例１
肉エキス１％、ペプトン０．５％、酵母エキス０．１％
、ＫＨ２ＰＯ４０，２％、ｐＨ７，０ノ液体培地にエシ
ェリヒア争コリＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭ ＢＰ−２
０）を接種し、３０℃にて２０時間振盪培養した。培養
終了後、遠心分離して面体を集め、０．Ａｄａｃｈｉら
の方法（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。
、ＫＨ２ＰＯ４０，２％、ｐＨ７，０ノ液体培地にエシ
ェリヒア争コリＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭ ＢＰ−２
０）を接種し、３０℃にて２０時間振盪培養した。培養
終了後、遠心分離して面体を集め、０．Ａｄａｃｈｉら
の方法（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。
Ｖｏｌ、 ２４９．ＮＯ，２４，ｐ、７７５６−７７６
３ （１９７４年乃に従って精製操作を行い、比活性が
９．２単位／ Ｈｇの力価のトリプトファンシンターゼ
を取得し、この酵素を用いて以下の反応を行った。
トリプトファンシンターゼの活性は、Ｃ，Ｙａｎｏｆｓ
ｋｙらの方法 （Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ、Ｖｏｌ、５．ｐ、８０１−８０７（１９６２
））により測定し、ｐＨ７，８，３７℃において１ μ
ｍｏｌ ／ｎ＋ｉｎのトリプトファンをＬ−セリンとイ
ンドールから合成する酵素量を１単位とした。
３ （１９７４年乃に従って精製操作を行い、比活性が
９．２単位／ Ｈｇの力価のトリプトファンシンターゼ
を取得し、この酵素を用いて以下の反応を行った。
トリプトファンシンターゼの活性は、Ｃ，Ｙａｎｏｆｓ
ｋｙらの方法 （Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏ
ｌｏｇｙ、Ｖｏｌ、５．ｐ、８０１−８０７（１９６２
））により測定し、ｐＨ７，８，３７℃において１ μ
ｍｏｌ ／ｎ＋ｉｎのトリプトファンをＬ−セリンとイ
ンドールから合成する酵素量を１単位とした。
Ｌ−セリン５０ｍＭ、第１表に示した硫化物、水硫化物
または多硫化’Ｉｌｌ １００ｍＭ、ピリドキサール燐
酸０．１ｍＭを含みｌＮ−ＨＣｌにより ｐＨ８，５に
調整した反応液１０１にトリプトファンシンターゼを０
．５ｍｇ添加し、３５℃で１０時間ゆるやかに振盪した
。
または多硫化’Ｉｌｌ １００ｍＭ、ピリドキサール燐
酸０．１ｍＭを含みｌＮ−ＨＣｌにより ｐＨ８，５に
調整した反応液１０１にトリプトファンシンターゼを０
．５ｍｇ添加し、３５℃で１０時間ゆるやかに振盪した
。
生成したＬ−システインおよびＬ−シスチンの濃度と両
方の和のＬ−セリンに対する収率を第１表に示した。
方の和のＬ−セリンに対する収率を第１表に示した。
第１表
硫化物等の種類 Ｌ−システィン し−シスチン
文ｌリシ収率（ｍＭ） （ｍＭ）
（Ｍｏｌ：）硫化ナトリウム １８ ６．５
６２水硫化ナトリウム １６ ５ ５２硫化
カリウム １１ ３．５ ３６硫化アンモニ
ウム ８ Ｌ、Ｓ ２２水硫化アンモニウ
ム ６ ２ ２〇三硫化アンモニウム ６ １．
５ １８二硫化ナトリウム １１ ３ ３
４実施例２ ノイロスポラ・クラツサ ＡＴＣＣ−１４６９２を用い
、讐、Ｈ、Ｍａｔｃｈｅｔｔらの方法 （Ｔｈｅ Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｎ＋１
ｓｔｒｙ、 Ｖｏｌ、２５０． Ｎｏ、８． ｐ、２９
４１−２９ｑａ （１９７５年））に従い、培養および
酵素Ｉｌｔ製を行い、比活性が１．３凰位／ｍｇの力価
めトリプトファンシンターゼを取得し、この酵素液を用
いて以下の反応を行った。
文ｌリシ収率（ｍＭ） （ｍＭ）
（Ｍｏｌ：）硫化ナトリウム １８ ６．５
６２水硫化ナトリウム １６ ５ ５２硫化
カリウム １１ ３．５ ３６硫化アンモニ
ウム ８ Ｌ、Ｓ ２２水硫化アンモニウ
ム ６ ２ ２〇三硫化アンモニウム ６ １．
５ １８二硫化ナトリウム １１ ３ ３
４実施例２ ノイロスポラ・クラツサ ＡＴＣＣ−１４６９２を用い
、讐、Ｈ、Ｍａｔｃｈｅｔｔらの方法 （Ｔｈｅ Ｊｏ
ｕｒｎａｌ ｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｎ＋１
ｓｔｒｙ、 Ｖｏｌ、２５０． Ｎｏ、８． ｐ、２９
４１−２９ｑａ （１９７５年））に従い、培養および
酵素Ｉｌｔ製を行い、比活性が１．３凰位／ｍｇの力価
めトリプトファンシンターゼを取得し、この酵素液を用
いて以下の反応を行った。
Ｌ−セリン５０ｍＭ、水硫化ナトリウム１００ｍＭ、ピ
リドキサール燐１！Ｉ Ｏ，１ｍＭ、およびトリプトフ
ァンシンターゼ１．３ｊ１位を含むｐＨ８，５の反応液
１０１を、３５℃で１０時間ゆるやかに振盪した０反応
液中には、１２ｍＭのＬ−システインと４ｍＭのし一シ
スチンが生成した。
リドキサール燐１！Ｉ Ｏ，１ｍＭ、およびトリプトフ
ァンシンターゼ１．３ｊ１位を含むｐＨ８，５の反応液
１０１を、３５℃で１０時間ゆるやかに振盪した０反応
液中には、１２ｍＭのＬ−システインと４ｍＭのし一シ
スチンが生成した。
実施例３
ペプトン１％、酵母エキス０．５％、グルコース２％、
インドールアクリル酸０．０１％、ｐＨ６，０の液体培
地にサツカロミセス・セレビシェ ＡＴＣＣ−２６７８
７を接種し、３０℃にて２０時間振盪培養した。
インドールアクリル酸０．０１％、ｐＨ６，０の液体培
地にサツカロミセス・セレビシェ ＡＴＣＣ−２６７８
７を接種し、３０℃にて２０時間振盪培養した。
培養終了後、遠心分離して菌体を集め、Ｍ、Ｄｅｔｔｖ
ｉｌｅｒらの方法（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ、１０２．ｐ
、１５９−１６５ （１９７９年））に従い酵素精製を
行い、比活性が１．２単位／ｍｇＯ力価のトリプトファ
ンシンターゼを取得し、この酵素液を用いて以下の反応
を行った。
ｉｌｅｒらの方法（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｖｏｌ、１０２．ｐ
、１５９−１６５ （１９７９年））に従い酵素精製を
行い、比活性が１．２単位／ｍｇＯ力価のトリプトファ
ンシンターゼを取得し、この酵素液を用いて以下の反応
を行った。
Ｌ−セリン５０ｍＭ、水硫化ナトリウム１００ｍＭ、゛
ピリドキサール燐Ｉｇ！０．１ｍＭ、およびトリプ
トファンシンターゼ１．２ｊ１位を含むｐＨ８，５の反
応液１０１を、３５℃で１０時間ゆるやかにｇｅｔ、、
たΦ反応液中には、１１ｍＭのＬ−システインと３１１
ＩＭのし一シスチンが生成した。
ピリドキサール燐Ｉｇ！０．１ｍＭ、およびトリプ
トファンシンターゼ１．２ｊ１位を含むｐＨ８，５の反
応液１０１を、３５℃で１０時間ゆるやかにｇｅｔ、、
たΦ反応液中には、１１ｍＭのＬ−システインと３１１
ＩＭのし一シスチンが生成した。
実施例４
肉エキス １％、ペプトン０．５％、酵母エキス０．１
％、ＫＨ２ＰＯ４０，２％、ｐ）１７．０の液体培地に
エシェリヒア・コリＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭ ＢＰ
−２０）を接種し、３０℃にて２０時間振盪培養した。
％、ＫＨ２ＰＯ４０，２％、ｐ）１７．０の液体培地に
エシェリヒア・コリＭＴ−１０２４２（ＦＥＲＭ ＢＰ
−２０）を接種し、３０℃にて２０時間振盪培養した。
培ａ終了後、遠心分離して面体を集め、これをトリプト
ファンシンターゼの酵素源として用いた。この湿菌体１
呂当たりのトリプトファンシンターゼ活性は、１２０単
位であった。
ファンシンターゼの酵素源として用いた。この湿菌体１
呂当たりのトリプトファンシンターゼ活性は、１２０単
位であった。
Ｌ−セリン２００ｍＭ、 ＠化ナトリウム３００ｍＭ、
ピリＦ キサ−Ａ’） ンＨＯ，Ｉｎ＋Ｍ、湿菌体５８
を含ムｐＨ８，５（ＩＣＩＣｍ ヨｔ） ｌ！Ｉ！ｉ）
（Ｄ反応Ｗ１１００＋ｗｌヲ、３５℃で２４時間振盪
した０反応終了後、ジチオスレイトールにより反応液中
のし一シスチンをＬ−システィンに還元してから、Ｌ−
システィンの生成量を測定したところ、９８ｍＭであっ
た。
ピリＦ キサ−Ａ’） ンＨＯ，Ｉｎ＋Ｍ、湿菌体５８
を含ムｐＨ８，５（ＩＣＩＣｍ ヨｔ） ｌ！Ｉ！ｉ）
（Ｄ反応Ｗ１１００＋ｗｌヲ、３５℃で２４時間振盪
した０反応終了後、ジチオスレイトールにより反応液中
のし一シスチンをＬ−システィンに還元してから、Ｌ−
システィンの生成量を測定したところ、９８ｍＭであっ
た。
実施例５
実施例１で取得したトリプトファンシンターゼを用いて
以下の反応を行った。
以下の反応を行った。
第２表に示したβ−置換−Ｌ−アラニン３００ｍＭ、水
硫化ナトリウム６００ｍＭ、ピリドキサール燐酸１ｍＭ
を含む４８ｈ＋Ｍ ）リスアミノメタン−ＨＣ１１ｉ衝
液（ｐ）１８．５） １００ｍ１にトリプトファンシン
ターゼを５００単位添加し、３５℃で１時間ゆるやかに
振盪した０反応終了後、ジチオスレイトールにより反応
液中のし一シスチンをＬ−システィンに還元してから、
Ｌ−システィンの生成量を測定した。結果を第２表に示
した。
硫化ナトリウム６００ｍＭ、ピリドキサール燐酸１ｍＭ
を含む４８ｈ＋Ｍ ）リスアミノメタン−ＨＣ１１ｉ衝
液（ｐ）１８．５） １００ｍ１にトリプトファンシン
ターゼを５００単位添加し、３５℃で１時間ゆるやかに
振盪した０反応終了後、ジチオスレイトールにより反応
液中のし一シスチンをＬ−システィンに還元してから、
Ｌ−システィンの生成量を測定した。結果を第２表に示
した。
第２表
β−置換−Ｌ−アラニン し−システィン（ｍＭ）β
−クロロ−し−アラニン ８２０−メチル−Ｌ
−セリン １１６０−アセチル−し−セリン
９５０−ベンジル−し−セリン ２４
Ｓ−メチル−し−システィン ２７Ｓ−エチル−
Ｌ−システィン １８Ｓ−ベンジル−し−システ
ィン ５Ｌ−セリン ０−サルフェート ３
７Ｌ−セリン １２３実施例６ 肉エキス１％、ペプトン０．５％、計母エキス０．１％
、ＫＨ２ＰＯ４０，２％、ｐＨ７，０（Ｄ液体培地Ｃエ
シェリヒア・コリＭＴ−１０２３２（ＦＥＲＭ ＢＰ−
１９）を接種し、３０℃にて２０時間振盪培養した。培
養終了後、遠心分離して面体を集め、−２０℃にて凍結
保存したものをトリプトファンシンターゼの酵素源とし
て用いた。この湿菌体１ｇ当たりのトリプトファンシン
ターゼ活性は、８９単位であフた。
−クロロ−し−アラニン ８２０−メチル−Ｌ
−セリン １１６０−アセチル−し−セリン
９５０−ベンジル−し−セリン ２４
Ｓ−メチル−し−システィン ２７Ｓ−エチル−
Ｌ−システィン １８Ｓ−ベンジル−し−システ
ィン ５Ｌ−セリン ０−サルフェート ３
７Ｌ−セリン １２３実施例６ 肉エキス１％、ペプトン０．５％、計母エキス０．１％
、ＫＨ２ＰＯ４０，２％、ｐＨ７，０（Ｄ液体培地Ｃエ
シェリヒア・コリＭＴ−１０２３２（ＦＥＲＭ ＢＰ−
１９）を接種し、３０℃にて２０時間振盪培養した。培
養終了後、遠心分離して面体を集め、−２０℃にて凍結
保存したものをトリプトファンシンターゼの酵素源とし
て用いた。この湿菌体１ｇ当たりのトリプトファンシン
ターゼ活性は、８９単位であフた。
Ｌ−セリン２００ｍＭ、硫化ナトリウム３００ｍＭ、ピ
リドキサールリン１！！０．ｌｌＩＩＭおよび湿菌体５
８を含む１００ｍＭ ）リスアミノメタン−ＨＣＩＩＩ
衝液（ｐ）Ｉ８．５） ｌｏｏｍｌを、３５℃で１０時
間ゆるやかに振盪した０反応終了後、ジチオスレイトー
ルにより反応液中のし一シスチンをＬ−システィンに還
元してから、し−システィンの生成量を測定したところ
１１４ｍＭであった。
リドキサールリン１！！０．ｌｌＩＩＭおよび湿菌体５
８を含む１００ｍＭ ）リスアミノメタン−ＨＣＩＩＩ
衝液（ｐ）Ｉ８．５） ｌｏｏｍｌを、３５℃で１０時
間ゆるやかに振盪した０反応終了後、ジチオスレイトー
ルにより反応液中のし一シスチンをＬ−システィンに還
元してから、し−システィンの生成量を測定したところ
１１４ｍＭであった。
実施例７
実施例６で取得した湿菌体を用いて以下の反応を行った
。
。
Ｌ−セリン２００ｍＭ （２，１ｇ） 、水硫化ナトリ
ウム１０００ｎ＋Ｍ、ピリドキサールリン酸０．１＋ａ
Ｍ、湿菌体５ｇを含むｐＨ８，０の反応液１００１を、
３５℃で１０時間ゆるやかに撹拌した０反応開始後、２
時間目と５時間目にＬ−セリンを２．１ｇずつ反応液に
添加した０反応中は、６規定のリン酸を添加することに
より反応液のｐＨを８．０に維持した０反応終了後の反
応液中には、４．３ｇのＬ−システインと１．１ｇのし
一シスチンが蓄積していた。
ウム１０００ｎ＋Ｍ、ピリドキサールリン酸０．１＋ａ
Ｍ、湿菌体５ｇを含むｐＨ８，０の反応液１００１を、
３５℃で１０時間ゆるやかに撹拌した０反応開始後、２
時間目と５時間目にＬ−セリンを２．１ｇずつ反応液に
添加した０反応中は、６規定のリン酸を添加することに
より反応液のｐＨを８．０に維持した０反応終了後の反
応液中には、４．３ｇのＬ−システインと１．１ｇのし
一シスチンが蓄積していた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 トリプトファンシンターゼの存在下に一般式［ I ］で
表されるβ−置換−Ｌ−アラニンを、金属硫化物、金属
水硫化物、金属多硫化物、硫化アンモニウム、水硫化ア
ンモニウムまたは多硫化アンモニウムと反応させること
を特徴とするＬ−システインおよび／またはＬ−シスチ
ンの製造法。 ▲数式、化学式、表等があります▼ 一般式［ I ］ （但し、Ｘはハロゲン原子、−ＯＲ基または−ＳＲ基を
示す。（Ｒは水素原子、アルキル基、アセチル基、ベン
ジル基またはスルホン酸基を示す。））
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5956886A JPH0611232B2 (ja) | 1986-03-19 | 1986-03-19 | Ｌ−含硫アミノ酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5956886A JPH0611232B2 (ja) | 1986-03-19 | 1986-03-19 | Ｌ−含硫アミノ酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62220194A true JPS62220194A (ja) | 1987-09-28 |
| JPH0611232B2 JPH0611232B2 (ja) | 1994-02-16 |
Family
ID=13116973
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5956886A Expired - Fee Related JPH0611232B2 (ja) | 1986-03-19 | 1986-03-19 | Ｌ−含硫アミノ酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0611232B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117230050A (zh) * | 2023-11-10 | 2023-12-15 | 北京量维生物科技研究院有限公司 | 色氨酸合酶及其突变体在生产半胱氨酸和胱氨酸中的应用 |
-
1986
- 1986-03-19 JP JP5956886A patent/JPH0611232B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117230050A (zh) * | 2023-11-10 | 2023-12-15 | 北京量维生物科技研究院有限公司 | 色氨酸合酶及其突变体在生产半胱氨酸和胱氨酸中的应用 |
| CN117230050B (zh) * | 2023-11-10 | 2024-01-26 | 北京量维生物科技研究院有限公司 | 色氨酸合酶及其突变体在生产半胱氨酸和胱氨酸中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0611232B2 (ja) | 1994-02-16 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |