JPS6224146A - プロスタグランジンｉ↓２誘導体の酵素免疫測定法 - Google Patents
プロスタグランジンｉ↓２誘導体の酵素免疫測定法Info
- Publication number
- JPS6224146A JPS6224146A JP13281485A JP13281485A JPS6224146A JP S6224146 A JPS6224146 A JP S6224146A JP 13281485 A JP13281485 A JP 13281485A JP 13281485 A JP13281485 A JP 13281485A JP S6224146 A JPS6224146 A JP S6224146A
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- JP
- Japan
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- derivative
- pgi2
- antibody
- reaction
- enzyme
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Furan Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は酵素免疫測定法によるプロスタグランジンＩ２
誘導体の定量法に関するものである。
誘導体の定量法に関するものである。
プロスタグランジン（ＰＧ） 、トロンボキサン、ロイ
コトリエンなど一群の化合物（ＰＧ類）はいずれもアラ
キドン酸を前駆体とし、身体のいたるところで産生きれ
生体の恒常性を保つために機能する物質である。生体内
で生成し、その産生量が微量であるにもかかわらず強い
生理活性を有するが、作用部位で生理作用に関与し失活
していくという特徴がある。このような物質であるため
、生体内での挙動を正確に把握することは種々の分析技
術が発展した今日においても非常に困難とされている。
コトリエンなど一群の化合物（ＰＧ類）はいずれもアラ
キドン酸を前駆体とし、身体のいたるところで産生きれ
生体の恒常性を保つために機能する物質である。生体内
で生成し、その産生量が微量であるにもかかわらず強い
生理活性を有するが、作用部位で生理作用に関与し失活
していくという特徴がある。このような物質であるため
、生体内での挙動を正確に把握することは種々の分析技
術が発展した今日においても非常に困難とされている。
一゛方、組織や血液中のＰＧ類の量を知ることは、その
生理作用や疾患との関係を考えるうえで極めて重要とな
る。ある疾患において、生体内のＰＧｆｆｌの増減を知
ることは疾患とＰＧとの相関を議論するうえで必要欠く
べからざるものであリ、またＰＧを治療薬として使用す
る際にも投与後の生体内における挙動を知ることは、臨
床基礎データとしての重要性は高い。したがって生体中
のＰＧ類の量を測定する方法はこれまで多くの人々によ
り研究されてきた。測定の際問題となる点は、（１）Ｐ
Ｇ類は生体の局所に微量存在する、（２）代謝が早い、
（３）類似構造で全く異なる活性を有する、などがある
。したがってＰＧ類を測定するには、まずそれらを分別
して１０−’（ｎＥ）レベル以上の測定感度を有する技
術が要求される。
生理作用や疾患との関係を考えるうえで極めて重要とな
る。ある疾患において、生体内のＰＧｆｆｌの増減を知
ることは疾患とＰＧとの相関を議論するうえで必要欠く
べからざるものであリ、またＰＧを治療薬として使用す
る際にも投与後の生体内における挙動を知ることは、臨
床基礎データとしての重要性は高い。したがって生体中
のＰＧ類の量を測定する方法はこれまで多くの人々によ
り研究されてきた。測定の際問題となる点は、（１）Ｐ
Ｇ類は生体の局所に微量存在する、（２）代謝が早い、
（３）類似構造で全く異なる活性を有する、などがある
。したがってＰＧ類を測定するには、まずそれらを分別
して１０−’（ｎＥ）レベル以上の測定感度を有する技
術が要求される。
式＜Ｉ）のプロスタグランジン１２ ＜ＰＧＩ２）誘
導体は、 υｎ 強力な血小板凝集抑制作用および末梢血管の拡張作用を
有する物質として注目され、該化合物の血中濃度測定法
の開発が急がれている。
導体は、 υｎ 強力な血小板凝集抑制作用および末梢血管の拡張作用を
有する物質として注目され、該化合物の血中濃度測定法
の開発が急がれている。
従来、血清、尿、その他の生体試料に含まれるＡＰＧ類
を測定する方法としては、ガスクロマトグラフィー（Ｇ
Ｃ）と質量分析１１（ＭＳ）を連結したＧＣ−ＭＳ法お
よびラジオイムノアッセイ法（Ｒ１△）が中心をなす。
を測定する方法としては、ガスクロマトグラフィー（Ｇ
Ｃ）と質量分析１１（ＭＳ）を連結したＧＣ−ＭＳ法お
よびラジオイムノアッセイ法（Ｒ１△）が中心をなす。
これらの方法は研究レベルでのＰＧの定量法としては有
効であるが、汎用性の面で問題が多い。すなわちＧＣ−
ＭＳ法においては（１）大型装置が必要、（２）試料の
前処理、誘導体化を必要とする、ｊく３）多量の試料の
測定が困難、（４）感度が１０−” ｇレベルで低い、
等の問題点がある。また、Ｒｒ Ａ法ニｔｔｉ’ｒＧ、
ｔ、（１）”Ｈ１Ｉ１６Ｉノようなラジオアイソトープ
標識化合物を必要とする、（２）特別の施設や装置を必
要とする、（３）使用に厳しい制約がある点において、
どこでも誰でも手軽に利用することが困難である、等の
問題点がある。
効であるが、汎用性の面で問題が多い。すなわちＧＣ−
ＭＳ法においては（１）大型装置が必要、（２）試料の
前処理、誘導体化を必要とする、ｊく３）多量の試料の
測定が困難、（４）感度が１０−” ｇレベルで低い、
等の問題点がある。また、Ｒｒ Ａ法ニｔｔｉ’ｒＧ、
ｔ、（１）”Ｈ１Ｉ１６Ｉノようなラジオアイソトープ
標識化合物を必要とする、（２）特別の施設や装置を必
要とする、（３）使用に厳しい制約がある点において、
どこでも誰でも手軽に利用することが困難である、等の
問題点がある。
〔発明が解決しようとする問題点］
本発明は、これら従来法の問題点を解決し、生体試料中
の微量ＰＧ１２誘導体を高感度で測定でき、かつ特別な
装置および煩雑な操作を不要とする簡便な測定法を提供
することを目的とする。
の微量ＰＧ１２誘導体を高感度で測定でき、かつ特別な
装置および煩雑な操作を不要とする簡便な測定法を提供
することを目的とする。
上記目的は、以下の本発明により達成される。
すなわち本発明は、式（Ｉ）で表わされるＰＧＩ２誘導
体に対する抗体を固定化し、該固定化抗体に式（Ｉ＞の
化合物を含む検体および酵素で標識された式（Ｉ）の化
合物とを競合的に反応させ、固定化抗体に結合した酵素
標識化合物を検出することを特徴とするＰ Ｇ Ｉ ２
誘導体の酵素免疫測定法に関する。
体に対する抗体を固定化し、該固定化抗体に式（Ｉ＞の
化合物を含む検体および酵素で標識された式（Ｉ）の化
合物とを競合的に反応させ、固定化抗体に結合した酵素
標識化合物を検出することを特徴とするＰ Ｇ Ｉ ２
誘導体の酵素免疫測定法に関する。
本発明の式（Ｉ）ＰＧＩ２誘導体に対する抗体は、高感
度の測定をするためには該誘導体に対する結合力の強い
抗体であることが好ましく、これらの高い結合定数を有
する抗体は以下に述べる方法で作製・精製できる。ＰＧ
Ｉ２誘導体＜Ｉ）はそれ自体では免疫源性を有さない化
合物であるため、ＰＧＩ２１を導体のカルボキシル基と
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のアミノ基をカルボニル
ジイミダゾール（ＣＤ Ｉ ） 、水溶性カルボジイミ
ド等の縮合剤を用いて結合し、これを抗原とする。この
抗原を数回にわけてウサギに免疫をくり返し、充分に抗
体価の上昇した時点で採血を行ない、ＰＧ １２誘導体
（Ｉ）に対する抗血清を得る。これを硫安分画、Ｐ ｒ
ｏｔｅｉｎ Ａ Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅｋ：よる精
製をくり返してイムノグロブリンＧ（ＩｇＧ）分画とす
る。
度の測定をするためには該誘導体に対する結合力の強い
抗体であることが好ましく、これらの高い結合定数を有
する抗体は以下に述べる方法で作製・精製できる。ＰＧ
Ｉ２誘導体＜Ｉ）はそれ自体では免疫源性を有さない化
合物であるため、ＰＧＩ２１を導体のカルボキシル基と
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のアミノ基をカルボニル
ジイミダゾール（ＣＤ Ｉ ） 、水溶性カルボジイミ
ド等の縮合剤を用いて結合し、これを抗原とする。この
抗原を数回にわけてウサギに免疫をくり返し、充分に抗
体価の上昇した時点で採血を行ない、ＰＧ １２誘導体
（Ｉ）に対する抗血清を得る。これを硫安分画、Ｐ ｒ
ｏｔｅｉｎ Ａ Ｓ ｅｐｈａｒｏｓｅｋ：よる精
製をくり返してイムノグロブリンＧ（ＩｇＧ）分画とす
る。
Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体のキャリアータンパク質としては
、その他広く使用されているゼラチンやヘモシアニン等
も用いることができ、また抗体産生細胞とミニローマ細
胞を融合して得られるハイブリドーマが産生ずるいわゆ
るモノクロナール抗体も同様に使用することができる。
、その他広く使用されているゼラチンやヘモシアニン等
も用いることができ、また抗体産生細胞とミニローマ細
胞を融合して得られるハイブリドーマが産生ずるいわゆ
るモノクロナール抗体も同様に使用することができる。
本発明においては酵素免疫測定法（ＥＩＡ）のなかでも
競合法を用いているため、Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体（１）
を酵素で標識しなければならない。
競合法を用いているため、Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体（１）
を酵素で標識しなければならない。
酵素としてはアルカリホスファターゼ、ウレア−ヒ、β
−Ｄ−ガラクトシダーゼ、パーオキシダーゼ等を用いる
が、これらに限定されるものではない。特に好ましい酵
素としてパーオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ
が挙げられる。
−Ｄ−ガラクトシダーゼ、パーオキシダーゼ等を用いる
が、これらに限定されるものではない。特に好ましい酵
素としてパーオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ
が挙げられる。
ＰＧＩ２誘導体（Ｉ）に酵素を結合させるには、ＣＤＩ
、水溶性のカルボジイミド等の縮合剤を用い、Ｐ Ｇ
Ｉ ２誘導体のカルボキシル基と酵素のアミン基を反応
させることにより容易に結合させることができる。
、水溶性のカルボジイミド等の縮合剤を用い、Ｐ Ｇ
Ｉ ２誘導体のカルボキシル基と酵素のアミン基を反応
させることにより容易に結合させることができる。
本発明による測定の実施は容易で、以下の手順で行なわ
れる。すなわち、まず抗体である■（ＩＧ分画を固相と
してのイムノプレート・粒子・試験管等に固定化する。
れる。すなわち、まず抗体である■（ＩＧ分画を固相と
してのイムノプレート・粒子・試験管等に固定化する。
抗体は物理的な吸着力で固相に容易に固定化される。洗
浄後、固相の非特異的タンパク質吸着を防止するために
、未吸着部位を保護することが望ましい。この目的のた
め１％ＢＳＡを含むＰＢＳ （０，１５ＭＮａ Ｃ１を
含むリン酸緩衝液）を加え、非特異的吸着を防止するこ
とができる。この目的に適した物質であればこれはＢＳ
Ａに限定されるものではない。固相化された抗体はＢＳ
Ａを入れた状態で長期間保存することができる。使用に
際して固相を洗浄し、ＰＧ［２誘導体（丁）を含む試料
および標準のＰＧＩ２誘導体（Ｉ）を加え、あらかじめ
３０秒ないし３０分、好ましくは１０分間抗抗原体反応
を進める。続いて酵素標識ＰＧ Ｉｚ誘導体を加え、先
に加えたＰＧＩ２誘導体との競合反応を行なう。ここで
ＰＧＩ２誘導体と酵素標識Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体を同時
に加えて、競合反応を行なってもよいが、始めにＰ Ｇ
Ｉ ２誘導体のみを加え、一定時間後に酵素標識Ｐ
Ｇ Ｉ ２誘導体を加えた方が、精度、感度の面で優れ
る。
浄後、固相の非特異的タンパク質吸着を防止するために
、未吸着部位を保護することが望ましい。この目的のた
め１％ＢＳＡを含むＰＢＳ （０，１５ＭＮａ Ｃ１を
含むリン酸緩衝液）を加え、非特異的吸着を防止するこ
とができる。この目的に適した物質であればこれはＢＳ
Ａに限定されるものではない。固相化された抗体はＢＳ
Ａを入れた状態で長期間保存することができる。使用に
際して固相を洗浄し、ＰＧ［２誘導体（丁）を含む試料
および標準のＰＧＩ２誘導体（Ｉ）を加え、あらかじめ
３０秒ないし３０分、好ましくは１０分間抗抗原体反応
を進める。続いて酵素標識ＰＧ Ｉｚ誘導体を加え、先
に加えたＰＧＩ２誘導体との競合反応を行なう。ここで
ＰＧＩ２誘導体と酵素標識Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体を同時
に加えて、競合反応を行なってもよいが、始めにＰ Ｇ
Ｉ ２誘導体のみを加え、一定時間後に酵素標識Ｐ
Ｇ Ｉ ２誘導体を加えた方が、精度、感度の面で優れ
る。
競合反応終了後、充分洗浄して酵素基質を加え酵素反応
を進める。一定反応時間後の基質分解による吸光度変化
を分光学的に測定すると、抗体に結合した酵素量に対応
した発色が起きるため、吸光度の値よりＰＧＬ誘導体の
槍が測定される。宝船は標準のＰ Ｇ Ｉ ２誘導体を
用いた検量線より、試料中のＰＧＩ２誘導体の借を測定
する。
を進める。一定反応時間後の基質分解による吸光度変化
を分光学的に測定すると、抗体に結合した酵素量に対応
した発色が起きるため、吸光度の値よりＰＧＬ誘導体の
槍が測定される。宝船は標準のＰ Ｇ Ｉ ２誘導体を
用いた検量線より、試料中のＰＧＩ２誘導体の借を測定
する。
本発明方法は、生体試料中の微ｆｆｉ Ｐ Ｇ Ｉ ｚ
誘導体を、競合法のＥＩＡとして最高感度である約１０
−１２ｇまで検出できるという優れた測定法であり、ま
たＲＩＡの持つ装置的・時間的あるいは法規的規制がな
く、汎用性を持つ簡便で迅速な測定法である。
誘導体を、競合法のＥＩＡとして最高感度である約１０
−１２ｇまで検出できるという優れた測定法であり、ま
たＲＩＡの持つ装置的・時間的あるいは法規的規制がな
く、汎用性を持つ簡便で迅速な測定法である。
加えて、後述の実施例からも明らかな様に、本発明で用
いた抗体は、式（Ｉ）のＰＧＩ２Ｍ導体に対して強い結
合力と高い特異性を有し、類縁構造を持つ化合物群、特
にＰＧ群との交叉結合能を欠如するという優れた抗体で
ある。
いた抗体は、式（Ｉ）のＰＧＩ２Ｍ導体に対して強い結
合力と高い特異性を有し、類縁構造を持つ化合物群、特
にＰＧ群との交叉結合能を欠如するという優れた抗体で
ある。
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。
。
実施例１
式（Ｉ）のＰＧＩ２ｍ導体に対するウサギ抗体を以下の
方法により調製した。
方法により調製した。
無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１．５−中にてＰ
ＧＩｚＭ導体（■）５０ｍｇとＣＤＩ７５１Ｒｇを１時
間反応させ、反応終了後、蒸留水６戒に５０■のＢＳＡ
を溶解したＢＳＡ水溶液中にゆっくりと滴下し、室温で
１晩反応させた。
ＧＩｚＭ導体（■）５０ｍｇとＣＤＩ７５１Ｒｇを１時
間反応させ、反応終了後、蒸留水６戒に５０■のＢＳＡ
を溶解したＢＳＡ水溶液中にゆっくりと滴下し、室温で
１晩反応させた。
この反応によりＰＧＩ２誘導体のカルボキシル基とＢＳ
Ａのアミノ基が結合し、Ｂ５Ａ１分子に対し約２０分子
のＰ Ｇ Ｉ ２誘導体が結合した抗原が得られた。反
応生成物は３ ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ −２５によるゲル
口過および透析により、未反応のＰＧ １２誘導体およ
びＣＤＩを完全に除去した。
Ａのアミノ基が結合し、Ｂ５Ａ１分子に対し約２０分子
のＰ Ｇ Ｉ ２誘導体が結合した抗原が得られた。反
応生成物は３ ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ −２５によるゲル
口過および透析により、未反応のＰＧ １２誘導体およ
びＣＤＩを完全に除去した。
次に、ニューシーラントホワイト種ウサギ（メス）２羽
に対し、１回につき約５■／羽の抗原をＦｒｅｕｎｄ完
全アジュバントと共に皮下注射する。３０日、４５日、
６２日後にｂｏｏｓｔをくり返し、その直前に採血して
抗体価を測定した。抗体価はＰＧＩｚｇ導体（Ｉ）の血
小板凝集抑制能を、Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体（Ｉ＞抗血清
の添加による阻害反応で測定した。抗体価の充分上昇し
た７１１回転全採血を行ない、１羽当り約１００戒の抗
血清を得た。
に対し、１回につき約５■／羽の抗原をＦｒｅｕｎｄ完
全アジュバントと共に皮下注射する。３０日、４５日、
６２日後にｂｏｏｓｔをくり返し、その直前に採血して
抗体価を測定した。抗体価はＰＧＩｚｇ導体（Ｉ）の血
小板凝集抑制能を、Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体（Ｉ＞抗血清
の添加による阻害反応で測定した。抗体価の充分上昇し
た７１１回転全採血を行ない、１羽当り約１００戒の抗
血清を得た。
ＰＧ［ｚ誘導体（Ｉ ＞ 〕抗１ｊｌ清約１０７ヲ５０
％の飽和硫安により分画し、透析後Ｐ ｒｏｔｅｉｎ
Ａ ３ ｅｐｈａｒｏｓｅｌｉ製によりＩＩＪＧ分
画とした。
％の飽和硫安により分画し、透析後Ｐ ｒｏｔｅｉｎ
Ａ ３ ｅｐｈａｒｏｓｅｌｉ製によりＩＩＪＧ分
画とした。
このようにして精製されたＰＧＩ２誘導体に対するウサ
ギ抗体をＰＢＳで２８０ ｎｍの吸光度値（ＯＤ２８０
ｎｍ）が０．０１〜０．１となるように希釈し、その０
．１ｄずつを市販のＥＩＡ用ポリスチレン製９６穴マイ
クロプレートの各ウェルに入れ、４℃で一晩コーティン
グした。
ギ抗体をＰＢＳで２８０ ｎｍの吸光度値（ＯＤ２８０
ｎｍ）が０．０１〜０．１となるように希釈し、その０
．１ｄずつを市販のＥＩＡ用ポリスチレン製９６穴マイ
クロプレートの各ウェルに入れ、４℃で一晩コーティン
グした。
翌日０．０５％” ７ ｗｅｅｎ２０ ”を含むＰＢＳ
（Ｔ−ＰＢＳ）、ＰＢＳで各々１回ずつ洗浄した。次に
１％ＢＳＡを含むＰＢＳをウェル当り０．３ｄ加え、未
吸着部位をブロックした。プレートはこの状態で４℃に
おいて長期間保存可能である（抗体吸着済プレート）。
（Ｔ−ＰＢＳ）、ＰＢＳで各々１回ずつ洗浄した。次に
１％ＢＳＡを含むＰＢＳをウェル当り０．３ｄ加え、未
吸着部位をブロックした。プレートはこの状態で４℃に
おいて長期間保存可能である（抗体吸着済プレート）。
使用に当たってＢＳＡを除去し、前と同様にＴ−ＰＢＳ
、ＰＢＳでウェル内を洗浄した。Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体
および検ｍ線作成用の標準ＰＧＩ２誘導体をウェル当り
０．０５１ｎＩ２加え、あらかじめＷ４で１０分間抗抗
原体反応を進めた後、０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで希
釈したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識ｐａＩ２＝導体を
０．０５ｄ加え、先に加えたＰＧＩ２誘導体との競合反
応を、室温Ｃ２時間行なった。反応終了後Ｔ−ＰＢＳ、
ＰＢＳで２回ずつ洗浄し、抗体と結合したβ−Ｄ−ガラ
クトシダーゼ活性をｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシドを基質として、０．１ＭＮａ Ｃ１，１
ｍ ＭＭＣｌ Ｃ１２を含むリン酸緩衝液ｐＨ７，２，
０，２ｄ中にて３０℃で２時間反応させた。反応により
生じた４０５ｎｎ＋の吸光度変化をコロナ電気製ＭＴＰ
−２２形マイクロプレート光度計を用いて測定した。
、ＰＢＳでウェル内を洗浄した。Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体
および検ｍ線作成用の標準ＰＧＩ２誘導体をウェル当り
０．０５１ｎＩ２加え、あらかじめＷ４で１０分間抗抗
原体反応を進めた後、０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで希
釈したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識ｐａＩ２＝導体を
０．０５ｄ加え、先に加えたＰＧＩ２誘導体との競合反
応を、室温Ｃ２時間行なった。反応終了後Ｔ−ＰＢＳ、
ＰＢＳで２回ずつ洗浄し、抗体と結合したβ−Ｄ−ガラ
クトシダーゼ活性をｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシドを基質として、０．１ＭＮａ Ｃ１，１
ｍ ＭＭＣｌ Ｃ１２を含むリン酸緩衝液ｐＨ７，２，
０，２ｄ中にて３０℃で２時間反応させた。反応により
生じた４０５ｎｎ＋の吸光度変化をコロナ電気製ＭＴＰ
−２２形マイクロプレート光度計を用いて測定した。
ＰＧ １２誘導体（Ｉ＞と、天然型ＰＧのうち構造゛の
類似したＰＧＩ２とＰ Ｇ Ｆ２．の測定結果を表１に
示す。Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体（Ｉ）は、１０” ／ １
０−” ９の広い範囲にわたって測定可能となった。こ
の測定系においてＰＧＩ２、Ｆ２ｃｔのような天然型Ｐ
Ｇとの交叉反応は全く認めらない。このことは一般に天
然型のＰＧのイムノアッセイにおいては、それぞれ構造
上の類似性が高いため、抗原抗体反応において他のＰＧ
との交叉反応が問題となるが、水沫では全く問題となら
なかった。これは本発明のＥＩＡ系が、血清や尿中のよ
うな天然型ＰＧ存在下においても、ＰＧ １２誘導体の
特異的測定を可能とすることを意味する。
類似したＰＧＩ２とＰ Ｇ Ｆ２．の測定結果を表１に
示す。Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体（Ｉ）は、１０” ／ １
０−” ９の広い範囲にわたって測定可能となった。こ
の測定系においてＰＧＩ２、Ｆ２ｃｔのような天然型Ｐ
Ｇとの交叉反応は全く認めらない。このことは一般に天
然型のＰＧのイムノアッセイにおいては、それぞれ構造
上の類似性が高いため、抗原抗体反応において他のＰＧ
との交叉反応が問題となるが、水沫では全く問題となら
なかった。これは本発明のＥＩＡ系が、血清や尿中のよ
うな天然型ＰＧ存在下においても、ＰＧ １２誘導体の
特異的測定を可能とすることを意味する。
表１ β−Ｄ−ガラクトシダーゼを標識酵素としたＰ
Ｇ Ｉ ２誘導体（Ｉ）および天然型ＰＧのＥＩＡ結果 実施例２ 実施例１と同様の抗体を用い、抗体吸着済みプレートを
調製した。使用に際して８ＳＡを除去しウェルを洗浄し
た。次いで以下の操作をずべて４℃で行なった。すなわ
ち、ＰＧ １２誘導体（Ｉ）を含む試料および検請線作
成用のＰＧＩ２誘導体（Ｉ）をウェル当り０．０５ｍ１
加え、あらかじめ１０分間抗抗原体反応を進めた後、０
．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで希釈したパーオキシダーゼ
標識ＰＧＩ２誘導体を０．０５ｒＩｄｌ加え、先に加え
たＰＧＩ２誘導体との競合反応をｔ行なった。反応終了
後４℃に冷却した脱イオン水で２回洗浄し、抗体と結合
したパーオキシダーゼ活性をＨ２０□、０−フェニレン
ジアミンを基質として、０．１Ｍリン酸クエン酸緩衝液
ｐＨ５，０，０，２ｍｉ中にて２５℃で３０分間反応さ
せた。反応は２ＭＨ２ＳＯ４０，１ｔｉ！を加えて終了
し、反応により生じた４９２ｎｍの吸光度変化をコロナ
電気製ＭＶＰ−２２形マイクロプレート光度計を用いて
測定した。
Ｇ Ｉ ２誘導体（Ｉ）および天然型ＰＧのＥＩＡ結果 実施例２ 実施例１と同様の抗体を用い、抗体吸着済みプレートを
調製した。使用に際して８ＳＡを除去しウェルを洗浄し
た。次いで以下の操作をずべて４℃で行なった。すなわ
ち、ＰＧ １２誘導体（Ｉ）を含む試料および検請線作
成用のＰＧＩ２誘導体（Ｉ）をウェル当り０．０５ｍ１
加え、あらかじめ１０分間抗抗原体反応を進めた後、０
．１％ＢＳＡを含むＰＢＳで希釈したパーオキシダーゼ
標識ＰＧＩ２誘導体を０．０５ｒＩｄｌ加え、先に加え
たＰＧＩ２誘導体との競合反応をｔ行なった。反応終了
後４℃に冷却した脱イオン水で２回洗浄し、抗体と結合
したパーオキシダーゼ活性をＨ２０□、０−フェニレン
ジアミンを基質として、０．１Ｍリン酸クエン酸緩衝液
ｐＨ５，０，０，２ｍｉ中にて２５℃で３０分間反応さ
せた。反応は２ＭＨ２ＳＯ４０，１ｔｉ！を加えて終了
し、反応により生じた４９２ｎｍの吸光度変化をコロナ
電気製ＭＶＰ−２２形マイクロプレート光度計を用いて
測定した。
Ｐ Ｇ Ｉ ２誘導体のＥＩＡによる測定結果を表２に
示す。ＰＧＩ２誘導体（１）は１０−９〜１０−” ｇ
の範囲で測定可能となった。
示す。ＰＧＩ２誘導体（１）は１０−９〜１０−” ｇ
の範囲で測定可能となった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で表わされるプロスタグランジンＩ＿２誘導体に対する
抗体を固定化し、該固定化抗体に式（ I ）の化合物を
含む検体および酵素で標識された式（ I ）の化合物と
を競合的に反応させ、固定化抗体に結合した酵素標識化
合物を検出することを特徴とするプロスタグランジンＩ
＿２誘導体の酵素免疫測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13281485A JPS6224146A (ja) | 1985-06-18 | 1985-06-18 | プロスタグランジンｉ↓２誘導体の酵素免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13281485A JPS6224146A (ja) | 1985-06-18 | 1985-06-18 | プロスタグランジンｉ↓２誘導体の酵素免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6224146A true JPS6224146A (ja) | 1987-02-02 |
Family
ID=15090195
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13281485A Pending JPS6224146A (ja) | 1985-06-18 | 1985-06-18 | プロスタグランジンｉ↓２誘導体の酵素免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6224146A (ja) |
-
1985
- 1985-06-18 JP JP13281485A patent/JPS6224146A/ja active Pending
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| AM.J.OBSTET.GYNECOL.=1982 * |
| AM.J.PATHOL.=1982 * |
| BIOCHIM.BIOPHYS.ACTA.=1980 * |
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