JPS6234399B2 - - Google Patents
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- JPS6234399B2 JPS6234399B2 JP16707479A JP16707479A JPS6234399B2 JP S6234399 B2 JPS6234399 B2 JP S6234399B2 JP 16707479 A JP16707479 A JP 16707479A JP 16707479 A JP16707479 A JP 16707479A JP S6234399 B2 JPS6234399 B2 JP S6234399B2
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は発酵法によるＬ―トリプトフアンの
製造法に関する。 発酵法によるＬ―トリプトフアンの製造法に関
しては従来、ブレビバクテリウム属、コリネバク
テリウム属等のトリプトフアンアナログに耐性を
有する変異株等がＬ―トリプトフアンを培地中に
生成蓄積する能力を有することが知られている。 本発明者らは、従来知られているＬ―トリプト
フアン生産能を有する微生物に、インドールマイ
シン（以下、IMと記す）又はＮ―デメチル―Ｃ
―デメチル―インドールマイシン（以下、DMと
記す）に耐性を付与した変異株が、その親株即ち
従来知られているＬ―トリプトフアン生産能を有
する変異株より高い収率でＬ―トリプトフアンを
生産することを知つた。更にバチルス属、ブレビ
バクテリウム属、コリネバクテリウム属、アルス
ロバクター属、ミクロバクテリウム属又はエシエ
リヒア属のＬ―トリプトフアン生産能を有しない
ような微生物に、IM又はDM耐性を付与した変異
株の内より多数の高いＬ―トリプトフアン生産能
を有する変異株を見い出した。 即ち、この発明は、バチルス属、ブレビバクテ
リウム属、コリネバクテリウム属、アルスロバク
ター属、ミクロバクテリウム属又はエシエリヒア
属に属し、少くともIM又はDMに耐性を付与した
変異株を液体培地中に好気的に培養し、培地中に
生成蓄積されたＬ―トリプトフアンを採取するこ
とを特徴とするＬ―トリプトフアンの製造法であ
る。 IM又はDMに耐性を有する変異株とは、IM又
はDMによる生育阻害程度がその親株より、少い
ような変異株のことをいう。本発明の変異株は、
IM耐性又はDM耐性のみを有することもあるが、
IM又はDMの両方に耐性を有する変異株も含まれ
る。又、IM又はDM耐性のほかに、トリプトフア
ンアナログ耐性、フエニルアラニンアナログ耐
性、フエニルアラニン要求性、テロシン要求性、
ヒスチジン要求性等の従来Ｌ―トリプトフアン生
産能を付与又は増強することが知られている性質
を有しているような変異株より、より生産能の高
い菌株が得られる場合が多い。 本発明の変異株を具体的に例示すれば以下のも
のがある。 バチルス・ズブチリス AJ 11488
（FERM―Ｐ 5290）（IM耐性） ブレビバクテリウム・フラブム AJ 11490
（FERM―Ｐ 5292）（IM耐性） コリネバクテリウム・グルタミクム AJ
11492 （FERM―Ｐ 5294）（IM耐性） アルスロバクター・グロビホルミス AJ
11494 （FERM―Ｐ 5296）（IM耐性） ミクロバクテリウム・アンモニアフイルム
AJ 11496 （FERM―Ｐ 5298）（IM耐性） エシエリヒア・コリ AJ 11498
（FERM―Ｐ 5300）（IM耐性） バチルス・ズビチリス AJ 11489
（FERM―Ｐ 5291）（DM耐性） ブレビバクテリウム・フラブム AJ 11491
（FERM―Ｐ 5293）（DM耐性） コリネバクテリウム・グルタミクム AJ
11493 （FERM―Ｐ 5295）（DM耐性） アルスロバクター・グロビホルミス AJ
11495 （FERM―Ｐ 5297）（DM耐性） ミクロバクテリウム・アンモニアフイルム
AJ 11497 （FERM―Ｐ 5299）（DM耐性） エシエリヒア・コリ AJ 11500
（FERM―Ｐ 5302）（DM耐性） バチルス・ズブチリス AJ 11483
（FERM―Ｐ 5286） （５―フロロトリプトフアン耐性、IM耐性） バチルズ・ズブチリス AJ 11484
（FERM―Ｐ 5287） （５―フロロトリプトフアン耐性、DM耐性） バチルス・ズブチリス AJ 11486
（FERM―Ｐ 5288） （４―フロロトリプトフアン耐性、IM耐性） バチルス・ズブチリス AJ 11487
（FERM―Ｐ 5289） （４―フロロトリプトフアン耐性、DM耐性） このような変異株を誘導する際に使用される親
株は、バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリ
ネバクテリウム属、アルスロバクター属、ミクロ
バクテリウム又はエシエリヒア属に属する微生物
ならば、効率の優劣はあるが、特定のものを使用
する必要はない。変異誘導方法はＮ―メチル―
N′―ニトロ―Ｎ―ニトロソグアニジンに接触せ
しめる等、通常の方法が適用できる。 このような変異株を培養する培地は、炭素源、
窒素源、無機塩類、更に必要ならばアミノ酸、ビ
タミン等の有機微量栄養素を含有する通常の培地
である。炭素源としてはグルコース、シユクロー
ス、フラクトース、マルトース、あるいはこれら
を含有する澱粉加水分解物、糖蜜等の炭水化物、
酢酸、クエン酸等の有機酸、エタノール等のアル
コールが使用できる。窒素源としては、アンモニ
ウム塩、硝酸塩、アンモニア水、アンモニアガ
ス、尿素等が使用できる。 無機塩類としては、カリ塩、リン酸塩、マグネ
シウム塩等の無機塩が必要により適宜培地に添加
される。 培養は好気的条件がよい。培養の間培地PHを５
ないし９、培養温度を20℃ないし40℃に制御すれ
ばよりよい結果が得られる。PHの調節にはアンモ
ニア水、アンモニアガスの如きアルカリ、又は酸
の他、尿素、炭酸カルシウム等を用いることがで
きる。培養は１日ないし４日間行えば著量のＬ―
トリプトフアンが生成蓄積される。 Ｌ―トリプトフアンの単離は公知のどのような
方法でもよい。例えば培養液より菌体を除いた後
適度に濃縮し、Ｌ―トリプトフアンの等電点にPH
を調節してもよく、又イオン交換樹脂を用いて精
製してもよい。 実施例 １ 〔耐性度試験〕 表―１に示した最少寒天培地を基本培地とし、
これをIM100μｇ／ml、又はDM500μｇ／mlにな
る様に、IM又はDMを添加し、加熱殺菌した後、
シヤーレに分注した。 一方、予め、以下に示した菌株をブイヨン液体
培地で培養し、この菌体をよく洗浄したのち上記
培地にシヤーレ当たり105〜106個になる様に接種
した。 30℃で48時間培養した後の生育度を観察した。 表―１ グルコース 0.5ｇ／dl 硫酸アンモニウム 0.1 〃 KH2PO4 0.865 〃 クエン酸ナトリウム 0.05 〃 KOH 0.218 〃 MgSO4・7H2O 0.02 〃 FeSO4・7H2O 0.001 〃 MnSO4・4H2O 0.001 〃 カザミノ酸 0.02 〃 ｄ―ビオチン 30μｇ／dl サイアミン 10 〃 寒天 ２ｇ／dl （PH7.0） この結果、バチルス・ズブチリスAJ11488、ブ
レビバクテリウム・フラバムAJ11490、コリネバ
クテリウム・グルタミクムAJ11492、アースロバ
クター・グロビホルミスAJ11494、ミクロバクテ
リウム・アンモニアフイラムAJ11496及びエシエ
リヒア・コリAJ11498、は、IMを100μｇ／ml含
む培地で生育する事ができ、バチルス・スブチリ
スAJ11489、ブレビバクテリウム・フラバム
AJ11491、コリネバクテリウム・グルタミクム
AJ11493、アースロバクター・グロビホルミス
AJ11495、ミクロバクテリウム・アンモニアフイ
ラムAJ11497及びエシエリヒア・コリAJ11500は
DMを500μｇ／ml含む培地で生育する事ができ
たのに対し、これらの変異株の親株であるバチル
ス・ズブチリスAJ11481、ブレビバクテリウム・
フラバムATCC14067、コリネバクテリウム・グ
ルタミクムATCC13060、アースロバクター・グ
ロビホルミスATCC8010、ミクロバクテリウム・
アンモニアフイラムATCC15354及びエシエリヒ
ア・コリATCC10798はIM100μｇ／ml又は
DM500μｇ／mlを含有する培地のいずれでも生
育できなかつた。 バチルス・ズブチリスAJ11483は2.0mg／mlの
５―フルオロトリプトフアン、500μｇ／mlのIM
の両方を含有する培地で、バチルス・ズブチリス
AJ11486は2.0mg／mlの４―フルオロトリプトフ
アン、500μｇ／mlのIMの両方を含有する培地で
生育する事ができた。 又、バチルス・ズブチリスAJ11484は2.0mg／
mlの５―フルオロトリプトフアン1000μｇ／mlの
DMの両方を含有する培地で、バチルス・ズブチ
リスAJ11487は、2.0mg／mlの４―フルオロトリ
プトフアン、1000μｇ／mlのDMの両方を含有す
る培地で生育する事ができたが、これらの親株で
あるAJ11481はいずれの培地でも生育できなかつ
た。 〔生産性試験〕 グルコース12ｇ／dl、NH4Cl2ｇ／dl、KCl0.2
ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.04
ｇ／dl、FeSO4・7H2O0.001ｇ／dl、MnSO4・
4H2O0.001ｇ／dl、カザミノ酸0.4ｇ／dl、を含
みPH7.0に合わせた培地20mlを500ml容坂口フラス
コに入れ、115℃、10分間殺菌した。これに別に
殺菌した炭酸カルシウム0.8ｇを加えた後、表―
２に示すバチルス・ズブチリスを１白金耳接種
し、30℃で90時間振盪培養を行なつた。 又、グルコース８ｇ／dl、NH4Cl1ｇ／dl、
KCl0.2ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・
7H2O0.04ｇ／dl、FeSO4・7H2O0.001ｇ／dl、
MnSO4・4H2O0.001ｇ／dl、カザミノ酸0.4ｇ／
dl、ｄ―ビオチン30μｇ／dl、サイアミン10μ
ｇ／dlを含みPH7.0に合わせた培地20mlを500ml容
坂口フラスコに入れ115℃、10分間殺菌した。こ
れに別に殺菌した炭酸カルシウム0.8ｇを加えた
後、表―２に示すバチルス・ズブチリス以外の各
菌株を１白金耳接種し、30℃で72時間振盪培養を
行なつた。Ｌ―トリプトフアンの蓄積量を表―２
に示した。 【表】
製造法に関する。 発酵法によるＬ―トリプトフアンの製造法に関
しては従来、ブレビバクテリウム属、コリネバク
テリウム属等のトリプトフアンアナログに耐性を
有する変異株等がＬ―トリプトフアンを培地中に
生成蓄積する能力を有することが知られている。 本発明者らは、従来知られているＬ―トリプト
フアン生産能を有する微生物に、インドールマイ
シン（以下、IMと記す）又はＮ―デメチル―Ｃ
―デメチル―インドールマイシン（以下、DMと
記す）に耐性を付与した変異株が、その親株即ち
従来知られているＬ―トリプトフアン生産能を有
する変異株より高い収率でＬ―トリプトフアンを
生産することを知つた。更にバチルス属、ブレビ
バクテリウム属、コリネバクテリウム属、アルス
ロバクター属、ミクロバクテリウム属又はエシエ
リヒア属のＬ―トリプトフアン生産能を有しない
ような微生物に、IM又はDM耐性を付与した変異
株の内より多数の高いＬ―トリプトフアン生産能
を有する変異株を見い出した。 即ち、この発明は、バチルス属、ブレビバクテ
リウム属、コリネバクテリウム属、アルスロバク
ター属、ミクロバクテリウム属又はエシエリヒア
属に属し、少くともIM又はDMに耐性を付与した
変異株を液体培地中に好気的に培養し、培地中に
生成蓄積されたＬ―トリプトフアンを採取するこ
とを特徴とするＬ―トリプトフアンの製造法であ
る。 IM又はDMに耐性を有する変異株とは、IM又
はDMによる生育阻害程度がその親株より、少い
ような変異株のことをいう。本発明の変異株は、
IM耐性又はDM耐性のみを有することもあるが、
IM又はDMの両方に耐性を有する変異株も含まれ
る。又、IM又はDM耐性のほかに、トリプトフア
ンアナログ耐性、フエニルアラニンアナログ耐
性、フエニルアラニン要求性、テロシン要求性、
ヒスチジン要求性等の従来Ｌ―トリプトフアン生
産能を付与又は増強することが知られている性質
を有しているような変異株より、より生産能の高
い菌株が得られる場合が多い。 本発明の変異株を具体的に例示すれば以下のも
のがある。 バチルス・ズブチリス AJ 11488
（FERM―Ｐ 5290）（IM耐性） ブレビバクテリウム・フラブム AJ 11490
（FERM―Ｐ 5292）（IM耐性） コリネバクテリウム・グルタミクム AJ
11492 （FERM―Ｐ 5294）（IM耐性） アルスロバクター・グロビホルミス AJ
11494 （FERM―Ｐ 5296）（IM耐性） ミクロバクテリウム・アンモニアフイルム
AJ 11496 （FERM―Ｐ 5298）（IM耐性） エシエリヒア・コリ AJ 11498
（FERM―Ｐ 5300）（IM耐性） バチルス・ズビチリス AJ 11489
（FERM―Ｐ 5291）（DM耐性） ブレビバクテリウム・フラブム AJ 11491
（FERM―Ｐ 5293）（DM耐性） コリネバクテリウム・グルタミクム AJ
11493 （FERM―Ｐ 5295）（DM耐性） アルスロバクター・グロビホルミス AJ
11495 （FERM―Ｐ 5297）（DM耐性） ミクロバクテリウム・アンモニアフイルム
AJ 11497 （FERM―Ｐ 5299）（DM耐性） エシエリヒア・コリ AJ 11500
（FERM―Ｐ 5302）（DM耐性） バチルス・ズブチリス AJ 11483
（FERM―Ｐ 5286） （５―フロロトリプトフアン耐性、IM耐性） バチルズ・ズブチリス AJ 11484
（FERM―Ｐ 5287） （５―フロロトリプトフアン耐性、DM耐性） バチルス・ズブチリス AJ 11486
（FERM―Ｐ 5288） （４―フロロトリプトフアン耐性、IM耐性） バチルス・ズブチリス AJ 11487
（FERM―Ｐ 5289） （４―フロロトリプトフアン耐性、DM耐性） このような変異株を誘導する際に使用される親
株は、バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリ
ネバクテリウム属、アルスロバクター属、ミクロ
バクテリウム又はエシエリヒア属に属する微生物
ならば、効率の優劣はあるが、特定のものを使用
する必要はない。変異誘導方法はＮ―メチル―
N′―ニトロ―Ｎ―ニトロソグアニジンに接触せ
しめる等、通常の方法が適用できる。 このような変異株を培養する培地は、炭素源、
窒素源、無機塩類、更に必要ならばアミノ酸、ビ
タミン等の有機微量栄養素を含有する通常の培地
である。炭素源としてはグルコース、シユクロー
ス、フラクトース、マルトース、あるいはこれら
を含有する澱粉加水分解物、糖蜜等の炭水化物、
酢酸、クエン酸等の有機酸、エタノール等のアル
コールが使用できる。窒素源としては、アンモニ
ウム塩、硝酸塩、アンモニア水、アンモニアガ
ス、尿素等が使用できる。 無機塩類としては、カリ塩、リン酸塩、マグネ
シウム塩等の無機塩が必要により適宜培地に添加
される。 培養は好気的条件がよい。培養の間培地PHを５
ないし９、培養温度を20℃ないし40℃に制御すれ
ばよりよい結果が得られる。PHの調節にはアンモ
ニア水、アンモニアガスの如きアルカリ、又は酸
の他、尿素、炭酸カルシウム等を用いることがで
きる。培養は１日ないし４日間行えば著量のＬ―
トリプトフアンが生成蓄積される。 Ｌ―トリプトフアンの単離は公知のどのような
方法でもよい。例えば培養液より菌体を除いた後
適度に濃縮し、Ｌ―トリプトフアンの等電点にPH
を調節してもよく、又イオン交換樹脂を用いて精
製してもよい。 実施例 １ 〔耐性度試験〕 表―１に示した最少寒天培地を基本培地とし、
これをIM100μｇ／ml、又はDM500μｇ／mlにな
る様に、IM又はDMを添加し、加熱殺菌した後、
シヤーレに分注した。 一方、予め、以下に示した菌株をブイヨン液体
培地で培養し、この菌体をよく洗浄したのち上記
培地にシヤーレ当たり105〜106個になる様に接種
した。 30℃で48時間培養した後の生育度を観察した。 表―１ グルコース 0.5ｇ／dl 硫酸アンモニウム 0.1 〃 KH2PO4 0.865 〃 クエン酸ナトリウム 0.05 〃 KOH 0.218 〃 MgSO4・7H2O 0.02 〃 FeSO4・7H2O 0.001 〃 MnSO4・4H2O 0.001 〃 カザミノ酸 0.02 〃 ｄ―ビオチン 30μｇ／dl サイアミン 10 〃 寒天 ２ｇ／dl （PH7.0） この結果、バチルス・ズブチリスAJ11488、ブ
レビバクテリウム・フラバムAJ11490、コリネバ
クテリウム・グルタミクムAJ11492、アースロバ
クター・グロビホルミスAJ11494、ミクロバクテ
リウム・アンモニアフイラムAJ11496及びエシエ
リヒア・コリAJ11498、は、IMを100μｇ／ml含
む培地で生育する事ができ、バチルス・スブチリ
スAJ11489、ブレビバクテリウム・フラバム
AJ11491、コリネバクテリウム・グルタミクム
AJ11493、アースロバクター・グロビホルミス
AJ11495、ミクロバクテリウム・アンモニアフイ
ラムAJ11497及びエシエリヒア・コリAJ11500は
DMを500μｇ／ml含む培地で生育する事ができ
たのに対し、これらの変異株の親株であるバチル
ス・ズブチリスAJ11481、ブレビバクテリウム・
フラバムATCC14067、コリネバクテリウム・グ
ルタミクムATCC13060、アースロバクター・グ
ロビホルミスATCC8010、ミクロバクテリウム・
アンモニアフイラムATCC15354及びエシエリヒ
ア・コリATCC10798はIM100μｇ／ml又は
DM500μｇ／mlを含有する培地のいずれでも生
育できなかつた。 バチルス・ズブチリスAJ11483は2.0mg／mlの
５―フルオロトリプトフアン、500μｇ／mlのIM
の両方を含有する培地で、バチルス・ズブチリス
AJ11486は2.0mg／mlの４―フルオロトリプトフ
アン、500μｇ／mlのIMの両方を含有する培地で
生育する事ができた。 又、バチルス・ズブチリスAJ11484は2.0mg／
mlの５―フルオロトリプトフアン1000μｇ／mlの
DMの両方を含有する培地で、バチルス・ズブチ
リスAJ11487は、2.0mg／mlの４―フルオロトリ
プトフアン、1000μｇ／mlのDMの両方を含有す
る培地で生育する事ができたが、これらの親株で
あるAJ11481はいずれの培地でも生育できなかつ
た。 〔生産性試験〕 グルコース12ｇ／dl、NH4Cl2ｇ／dl、KCl0.2
ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・7H2O0.04
ｇ／dl、FeSO4・7H2O0.001ｇ／dl、MnSO4・
4H2O0.001ｇ／dl、カザミノ酸0.4ｇ／dl、を含
みPH7.0に合わせた培地20mlを500ml容坂口フラス
コに入れ、115℃、10分間殺菌した。これに別に
殺菌した炭酸カルシウム0.8ｇを加えた後、表―
２に示すバチルス・ズブチリスを１白金耳接種
し、30℃で90時間振盪培養を行なつた。 又、グルコース８ｇ／dl、NH4Cl1ｇ／dl、
KCl0.2ｇ／dl、KH2PO40.1ｇ／dl、MgSO4・
7H2O0.04ｇ／dl、FeSO4・7H2O0.001ｇ／dl、
MnSO4・4H2O0.001ｇ／dl、カザミノ酸0.4ｇ／
dl、ｄ―ビオチン30μｇ／dl、サイアミン10μ
ｇ／dlを含みPH7.0に合わせた培地20mlを500ml容
坂口フラスコに入れ115℃、10分間殺菌した。こ
れに別に殺菌した炭酸カルシウム0.8ｇを加えた
後、表―２に示すバチルス・ズブチリス以外の各
菌株を１白金耳接種し、30℃で72時間振盪培養を
行なつた。Ｌ―トリプトフアンの蓄積量を表―２
に示した。 【表】
Claims (1)
- １ バチルス属、ブレビバクテリウム属、コリネ
バクテリウム属、アルスロバクター属、ミクロバ
クテリウム属又はエシエリヒア属に属し、少くと
もインドールマイシン又はＮ―デメチル―Ｃ―デ
メチル―インドールマイシンに耐性を有する変異
株を液体培地中に好気的に培養し、培地中に生成
蓄積されたＬ―トリプトフアンを採取することを
特徴とするＬ―トリプトフアンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16707479A JPS5692796A (en) | 1979-12-22 | 1979-12-22 | Preparation of l-trypthophan by fermentation method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16707479A JPS5692796A (en) | 1979-12-22 | 1979-12-22 | Preparation of l-trypthophan by fermentation method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5692796A JPS5692796A (en) | 1981-07-27 |
| JPS6234399B2 true JPS6234399B2 (ja) | 1987-07-27 |
Family
ID=15842913
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16707479A Granted JPS5692796A (en) | 1979-12-22 | 1979-12-22 | Preparation of l-trypthophan by fermentation method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5692796A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02213800A (ja) * | 1989-02-14 | 1990-08-24 | Nuclear Fuel Ind Ltd | バーナブルポイズン棒収納容器 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3023615B2 (ja) * | 1990-08-30 | 2000-03-21 | 協和醗酵工業株式会社 | 発酵法によるｌ―トリプトファンの製造法 |
| JP4245746B2 (ja) * | 1999-09-20 | 2009-04-02 | 協和発酵バイオ株式会社 | 発酵法によるアミノ酸の製造法 |
-
1979
- 1979-12-22 JP JP16707479A patent/JPS5692796A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02213800A (ja) * | 1989-02-14 | 1990-08-24 | Nuclear Fuel Ind Ltd | バーナブルポイズン棒収納容器 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5692796A (en) | 1981-07-27 |
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