JPS6267095A - 抗生物質ａｍ−３６０３ａ−３及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、新規抗生物質ＡＭ　−３６０３Ａ−３及びそ
の製法に関する。

従来の技術 先に本発明者は、ストレプトミセス・エスピー　（８ｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、）　ＡＭ−３６０３株（
倣工研菌寄第５６１９号）が抗生物＊　ＡＭ　−３６０
３（別名、イルママイシン）を生産する能力を有するこ
とを見出し、抗生物質ＡＭ　−３６０３およびその製造
方法の発明を開示した（％公昭５８−２３０７７号）。

本発明は上記菌株がＡＭ−３６０３’ｔ９！ｌ買の脱カ
ルバモイル誘導体に相当するＩＴ規物′ＪＸを生産する
能力を有するとの知見に基〈ものでろる。

発明が解決しようとする間組点 本発明の目的は、新規抗生物質ＡＭ−３６０３Ａ−３及
び七の製法を提供することにりる。

問題点を解決するための手段 本発明によって省供される抗生物質（ＡＭ−３６０３Ａ
−３と・命名）は、稍製された状態において安定な白色
粉末であって、次の理化学的性質を有している。

（１）臆　点ニア８〜８０゛Ｃ （２）比旋光度：〔α）ｐ＋１３．５°（Ｃ＝１．クロ
ロホルム）（；３）　　元素分析（ｑｂｒ：　Ｃ６６，
６，）（８，７７、０２４，９（４）分子式：　Ｃ４０
Ｈ６４０１１ （５）紫外緑吸収スはクトル（メタノール中）：末端吸
収（（ｊ）赤外柑吸収ス啄りトル（ＫＢｒ法）：第１図
の通り・ｆ７）　　”Ｈ核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣ
ｈ中）：第２図の通り＋　６１　１３　ｃ核磁気共鳴ス
ペクトル（ＣＤＣｔ３中）：第３図の通り＋９１　浴Ｍ
性：メタノール、エタノール、アセトン、酢【伎エチル
、クロロホルム、ベンゼン等ニｏＪ浴であるが、石油エ
ーテル、ノルマル−ヘキサン及び水にｗｙ＊シない。

０Ｉ　その他：中性物質である。

以上の理化学的性状から抗生物質ｈＭ　−３６０３Ａ−
３は、次式＋１）で示される構造を有すると認められる
。

すなわち本物質は、先に本発明者らが見出した抗生物質
ＡＭ−３６０３（特公昭５８−２３０７７　）の脱カル
バモイルＵｎ体に相当する。

従って、本発明による抗生物質ＡＭ−３６０３Ａ−３こ
とができる。

次に、ＡＭ−３６０３Ａ−３の生物学的性質を示す。

実施例において得られたＡＭ　−３ｂｏ３Ａ　−３の試
料を用いた場合の最小発有困止Ｇ度（ＭＩＣ）は、第１
表の通りである。なお試験菌の生育用にポテト−グルコ
ース寒天培地（［）ｌ−１６）を用い、４°Ｃでの生付
の有無を４４ｎ後３日目に判定した。

第　　１　　表 アルタナリア　キクナアナ　　ＫＦ−１８５１００（Ａ
ｌｔｅｒｎａｒｉａ　　ｋｉｋｕｃｈｉａｎａ　）ボト
リチス　シネレア　　　　ＫＦ−１８４５０（Ｂｏｔｒ
ｙｔｉｓ　　ｃｉｎｅｒｅａ　）ビリキュラリア　オリ
セ　　　　ＫＦ−１８００，４（Ｐｉｒｉｃｕｌａｒｉ
ａ　　ｏｒｙｚａｅ　）ベリキュラリア　ササキ　　　
ＫＦ−２１９１００（Ｐｅ１ｌｉｃｕｌａｒｉａ　　５
ａａａｋｉｉ　）スフレロチニア　シネレア　　　ＫＦ
−１８１０，４（Ｂｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ　　ｃｉｎｅ
ｒｅａ　）アスペルギルス　ニガー　　　　　ＫＦ−１
０２２５（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕ日ｎｉｇｅｒ　）キャ
ンディダ　アルビカンス　　　　　ＫＦ−１＞１００上
記の通り抗生物質Ａ’　−３６０３Ａ　−３は、植物病
原菌に強い抗菌活性を示す。

本杭生物’Ｅｗマウスに腹腔的投与した場合のＬＤ５ｏ
は３００■／ｋｌ？以上である。従って抗生物質ＡＭ−
３６０３Ａ−３は、農業用として有用であることが期待
される。

上記の理化学的性質及び生物学的性質を既知抗生物質の
性質と比較したところ抗生物）ｌＡＭ−３６０３Ａ−３
の諸性質と合致するものは見出せない。従って本物質は
新規抗生物質でめると判断される。

本発明による抗生物質ＡＭ　−３６（）３　Ａ　−３は
、ストレプトミセス属に属しかつ抗生＠　１１３４　Ａ
Ｍ　−３６０３Ａ−３生産能力を有する微生物を培地に
好気的に培養し、画体内外に抗生物質ＡＭ　−３６（１
３Ａ　−３を蓄積させ、これを回収することによって製
造される。

抗生物質ＡＭ　−３６０３Ａ　−３を生産する為に使用
する微生物の実用的な例は、本発明者が先にＡＭ　−３
６０３の製造に過した菌として用いたストレプトミセス
・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｐ、）ＡＭ
　−３６０３株（微工研菌寄第５６１９号）があげられ
る。本菌の詐細な菌学的性質および培養法は、特公昭５
８−２３０７７に記載されて公知である。

上記菌株の変異株も本発明の方法に使用することができ
る。

抗生物／ＲＡＭ−３６０３Ａ−３生産菌株を培養する為
の￥地としては、ストレプトミセス裸の微生物の培養に
適する炭素源、１素源、無機物、会費にＩｅ、じてその
他の栄養物を柱良く含有する合成培地または天然培地を
便用することができる。

培地に使用される炭素源、窒素源は、使用菌株の利用可
能なものならいずれの種類でも良い。

すなわち炭素源としては、例えばグルコース、クリセロ
ール、フラクトース、マルトース、マンニット、キシロ
ース、ガラクトース、ラクトース、リボース、澱粉また
はその加水分解物等の抛々の炭水化物が使用できる。そ
の濃度は通常、培地に対して０６１〜５％（グルコース
換算）が好′ましい。

またグルコン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各穐有機
酸、グリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミノ
酸、さらにはメタノール、エタノール等のアルコール類
やノルマルノ々ラフイン等各稲の非芳香族系炭化水素、
あるいは植物性もしくは動物性の各種油脂等も使用可能
である。

窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、燐酸
アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム等
の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニウム塩類、尿
素、啄プトン、ＮＺ−アミン、肉エキス、酵母エキス、
乾燥酵母、コー゛ンスチープリカー、カゼイン加水分解
物、フィツシュミールおるいにその消化物、大豆粉ある
いはその消化物、脱脂大豆あるいはその消化物、輛加水
分解物等の含窒素有機物質、さらにはグリシン、グルタ
ミン酸、アラニン吟の各攬アミノ酸が使用可能である。

無機物としては各ａ燐ｒｇ塩、硫酸マグネシウム、食塩
等、さらに微量の重金Ｊ！１４塩が使用される。

また栄養要求性を示す変異株を用いる場合には、当然そ
の栄養要求を満足させる物質を培地に加えなければなら
ないが、この棟の栄養素は天然物を含む培地を使用する
場合にＦｉ＋に添加を必要としない場合がある。

発酵は振盪培養、または通気攪拌深部培養等の好気的条
件下で、例えば、≠１５〜８で行なう。

培養源には通常、２０〜４０　”Ｃである。培養期間は
通常１〜８日で、菌体内外に抗生物ＪＡＭ−３６０３Ａ
−３が生成蓄積する。

培養終了後に培養物より抗生物質ＡＭ　−３６０３Ａ−
３を例えは次の方法で採取する。

培養物を遠心分離によりＦ液と沈殿物とに分離する。Ｆ
液からは活性炭、多孔性合成高分子樹脂等に吸着させ、
溶出させることにより抽出する。沈殿物からは酢酸エチ
ル普たはノルマルブタノールや含水アセトン等の有機溶
媒で抽出する。抽出物を適宜、濃縮乾固することにより
ＡＭ−３６０３Ａ−３の粗粉末を得る。粗粉末はさらに
、脂溶性物質の鞘シにおいて通常用いられる公知の方法
、例えばシリカゲルカラムクロマトグラフィー等の分離
法、濃縮法、塩析法などを適宜組み合わせることにより
精製される。これらの精製方法で得られる活性画分をＩ
Ｉ権乾固することにより抗生物質ＡＭ−３６０３Ａ−３
の粉末を得ることができる。

本発明において、ＡＭ−３６０３Ａ−３の検出定量は、
ＡＭ−３６０３Ａ−３に感受性を示す微生物（例えばビ
リキュラリア・オリゼ；スクレロチニア・シネレア）を
被検菌として用いる生物学的方法または、呈色反応（例
えば硫酸発色）を利用する化学的方法によって行なった
。この種の方法は公知である。

実施例 ストレプトミセス・エスピー（８ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
θｓｐ、）　ＡＭ　−３６０３株（微工研菌寄第５６１
９号、ＮＲＲｒ、−１２ｓ１ｓ　）の斜面培養から１白
金耳を１００−０種培地（グリセリン１．０％、グルコ
ース０．２チ、大豆粉１．０％、食塩０．３％、ｐｔｉ
７．ｏ）を入れた５００＊を容の取口フラスコに接穐し
、ｎ°Ｃで２日間振盪培養して種培養液を得た。この極
培譬液１ｔ１に：１００ｔの発酵培地（グリセリン２チ
、グルコ−ス０．４　’％、大豆粉１．０％、ＮａＣ２
０５３％、ｐＨ７，０）を入れた２００を容ファーメン
タ−に接種し、υ°Ｃで３日間通気攪拌培養を行なった
。なお通気量は５０　ｔ／　””　、攪拌Ｖｉ２００ｒ
、　ｐ、　ｍ、の条件で行なった。培養［１００ｔをカ
セイソーダで−７付近Ｋ１１ｌ’！節し１．３６１の酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を合わせ減圧下
でＸｔまで鎖網し濃縮液を２度、２００ｄの水で洗浄し
、次に無水硫酸ナトリウム１５０ｔを加えて脱水し酢酸
エチル層を４００　ｍｌまで濃縮した。

濃縮液に８倍量のノルマルヘキサンを加えることにより
沈殿させ粉末２６．１１−得た。この粉末の１０９を２
５％アセトン水溶液（ＩＯ２）に溶解させ、ダイヤイオ
ンＨｐ−２＋）（旭化成社製）のカラム（５σｘ４０６
ｎ）に連部し、吸着させ方ラムを水洗（１ｔ）後、順次
に４０％アセトン水（３Ｌ）へ）慢アセトン水（２ｔ）
で溶出し、この際約父ｍｌずつ分画した。ｗＪ３５〜８
５番の一分を果めて減圧下で濃縮、乾固し１．５Ｓｌの
粉末を得た。この粉末１ｆを２５％アセトンの水溶液（
１ｔ）に溶解させダイヤイオンＢＰ−２０（旭化成社製
）のカラム（１，６ｃｍ　ｘ　３ｏｃｍ　）　Ｋ通塔し
、吸着させ、水洗（１００ｉ１）後、３５チアセトン水
（６００Ｉｔ　）で溶出した。その際２〜３１ずつ分画
した。第１２１〜１８５番の山分を集めて減圧下で濃縮
乾固し、粗粉末４３０■を得た。この粉末４２０■をベ
ンゼン（２０Ｗ１１）に溶解し、この溶液にシリカゲル
（メルク社製、階７７３４　）　０．５　？を加え、次
にこの懸濁液を減圧下で濃縮乾固した。ベンゼン（３０
１１７）Ｋ懸濁させたシリカゲル（メルク社製、Ｆｋ１
７７３４．１０Ｆ）で調整し九カラム（２３１１ｊ　）
の上端に上記の濃縮残漬を最少量のノルマルヘキサン（
約１１）に懸濁して添加した。カラムを順次、ベンゼン
／アセトン（１０：　１．４０紅）、ベンゼン／アセト
ン（６：１．４０１１Ｌｔ）、ベンゼン／アセトン（３
：１．１２０就）で浴出しＩＩＩＩｌずつ分画した。

活性画分（第１３１〜１９０＠）を集めて減圧下で濃縮
乾固し、粉末７９■を得た。この粉末７５＋１９を０．
４１のベンゼンに溶解させ、これを［１１１整用シリ力
ゲル薄層（メルク社製、醜５７１５．０．２５顛）３枚
に負荷し、ベンゼン／アセトン（３：１）で二回展開し
た。Ｒｆｏ、４付近のバンドをかきとり、その粉末から
ベンゼン１００ｍＪで活性物質を溶出させ、ベンゼンを
濃縮乾固した。残漬を少量の酢酸エチル（約１　ｔｎｅ
　）に溶解し、ここにノルマルヘキサン（約９ｍ１）を
滴下し、生成した沈殿を集めることにより白色のＡＭ−
３６０３Ａ−３の精製粉末を４０■を得た。

本臥料の理化学的および住物字的性負は前記の辿りでめ
った。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗生物質ＡＭ−３６０３Ａ−３の精製試料の赤
外線吸収スはクトル（ＫＢｒ法）を示し、第２図及び第
３図はそれぞれ抗生物質ＡＭ−３６０３Ａ−３の１Ｈ及
びｉ３ｃ核磁気共鳴ス啄クトルを示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式（ I ）で表わされる抗生物質ＡＭ−３６０３
   Ａ−３ ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） ２、ストレプトミセス属に属し、かつ式（ I ）で示さ
   れる抗生物質ＡＭ−３６０３Ａ−３生産能を有する微生
   物を培地に好気的に培養することにより、抗生物質ＡＭ
   −３６０３Ａ−３を菌体内外に蓄積させ、これを回収す
   ることを特徴とする、抗生物質ＡＭ−３６０３Ａ−３の
   製造方法。 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ）