JPH0359891B2 - - Google Patents
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- JPH0359891B2 JPH0359891B2 JP59215578A JP21557884A JPH0359891B2 JP H0359891 B2 JPH0359891 B2 JP H0359891B2 JP 59215578 A JP59215578 A JP 59215578A JP 21557884 A JP21557884 A JP 21557884A JP H0359891 B2 JPH0359891 B2 JP H0359891B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
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- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
産業上の利用分野
本発明はストレプトミセス属に属する微生物が
産生する新規な生理活性物質およびその製造法に
関する。 従来の技術 有用な新規生理活性物質を提供するという目的
のもとに、天然界より入手した数多くの微生物の
生産物について研究を行つた結果、新たに分離し
た微生物の培養物中に血管拡張作用を有する生理
活性物質が生産される事実を見い出した。つい
で、該培養物から該物質を単離，精製し、その理
化学的性質を調べたところ新規生理活性物質であ
ることが判明した。以下、該物質をKS−619−１
と称する。 発明が解決しようとする問題点 有用な医薬品となる新規生理活性物質を提供す
ることにある。 問題点を解決するための手段 KS−619−１の理化学的性質は以下に示す通り
である。 性状：橙色粉末 融点：198〜200℃（分解）。198℃付近から褐変し
始め、明瞭な融点を示さない。 比旋光度：〔α〕20 DはKS−619−１の強い可視部吸
収がナトリウム−Ｄ線と重なるため測定でき
なかつた。 溶解性：酢酸に易溶、メタノール，エタノール，
アセトン，酢酸エチル，ブタノールに可溶、
クロロホルム，水に難溶。 呈色反応：塩化第二鉄，ヨウ素およびアニスアル
デヒドの各反応に陽性。 可視部吸収スペクトル：第１図 λmax（Ｅ％）は83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水
中（中性）で470（339）nm、 0.08N HCl−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水中
で450−475（330）nm、 0.08N NaOH−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水
中で390−410（250），515（340）nm 紫外線吸収スペクトル：第２図 λmax（Ｅ％）は83％メタノール水中（中性）
で225（816），302（587），317（542）nm、 0.08N HCl−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水中
で240（761），265（491），300（681），345（236）
nm、 0.08N NaOH−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水
中で242（877），298（540），330（721）nm 赤外部吸収スペクトル（KBr） 3380，2960，2900，2840，1697，1664，1618，
1594，1490，1476，1428，1401，1390，1358，
1340，1319，1260，1216，1168，1105，1065，
1029，1021，998，980，921，860，823，772，
757，643，592，575cm-1 マススペクトル：本物質のマススペクトルは次
のようなイオンを与える。 547（M+−17，ベース・ピーク），431，388 分子量：474 元素分析：（実測値）Ｈ：3.68，Ｃ：65.52，Ｎ：
０％ （計算値）C26H18O9として Ｈ：3.79，Ｃ：65.82， Ｏ：30.38，Ｎ：０％1 H−NMRスペクトル（400MHz，DMSD−d6，
δ） 12.51（1H，br.s），12.17（1H，br.s），9.08（1H，
ｓ），7.15（1H，ｄ，Ｊ＝2.2），6.58（1H，ｄ，
Ｊ＝2.2），6.38（1H，ｓ），4.01（2H，ｓ），ca，
2.8（2H，ｍ），ca.2.7（2H，ｍ），2.14（3H，ｓ）13 C−NMRスペクトル（100MHz，DMSO−d6，
δc） 189.4，181.6，172.3，165.6，164.7，164.4，
157.8，142.1，141.4，140.5，135.4，131.4，
130.0，120.1，119.9，118.3，116.5，112.4，
109.0，108.7，107.7，49.9，29.8，28.2，20.2 以上のデータよりKS−619−１は新規化合物で
あり、下記の構造式で表わされる物質であること
が判明した。 次に各種展開剤によるKS−619−１の薄層クロ
マトグラフイーのRf値を第１表に示す。検出は
ヨウ素反応により行つた。
産生する新規な生理活性物質およびその製造法に
関する。 従来の技術 有用な新規生理活性物質を提供するという目的
のもとに、天然界より入手した数多くの微生物の
生産物について研究を行つた結果、新たに分離し
た微生物の培養物中に血管拡張作用を有する生理
活性物質が生産される事実を見い出した。つい
で、該培養物から該物質を単離，精製し、その理
化学的性質を調べたところ新規生理活性物質であ
ることが判明した。以下、該物質をKS−619−１
と称する。 発明が解決しようとする問題点 有用な医薬品となる新規生理活性物質を提供す
ることにある。 問題点を解決するための手段 KS−619−１の理化学的性質は以下に示す通り
である。 性状：橙色粉末 融点：198〜200℃（分解）。198℃付近から褐変し
始め、明瞭な融点を示さない。 比旋光度：〔α〕20 DはKS−619−１の強い可視部吸
収がナトリウム−Ｄ線と重なるため測定でき
なかつた。 溶解性：酢酸に易溶、メタノール，エタノール，
アセトン，酢酸エチル，ブタノールに可溶、
クロロホルム，水に難溶。 呈色反応：塩化第二鉄，ヨウ素およびアニスアル
デヒドの各反応に陽性。 可視部吸収スペクトル：第１図 λmax（Ｅ％）は83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水
中（中性）で470（339）nm、 0.08N HCl−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水中
で450−475（330）nm、 0.08N NaOH−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水
中で390−410（250），515（340）nm 紫外線吸収スペクトル：第２図 λmax（Ｅ％）は83％メタノール水中（中性）
で225（816），302（587），317（542）nm、 0.08N HCl−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水中
で240（761），265（491），300（681），345（236）
nm、 0.08N NaOH−83％（Ｖ／Ｖ）メタノール水
中で242（877），298（540），330（721）nm 赤外部吸収スペクトル（KBr） 3380，2960，2900，2840，1697，1664，1618，
1594，1490，1476，1428，1401，1390，1358，
1340，1319，1260，1216，1168，1105，1065，
1029，1021，998，980，921，860，823，772，
757，643，592，575cm-1 マススペクトル：本物質のマススペクトルは次
のようなイオンを与える。 547（M+−17，ベース・ピーク），431，388 分子量：474 元素分析：（実測値）Ｈ：3.68，Ｃ：65.52，Ｎ：
０％ （計算値）C26H18O9として Ｈ：3.79，Ｃ：65.82， Ｏ：30.38，Ｎ：０％1 H−NMRスペクトル（400MHz，DMSD−d6，
δ） 12.51（1H，br.s），12.17（1H，br.s），9.08（1H，
ｓ），7.15（1H，ｄ，Ｊ＝2.2），6.58（1H，ｄ，
Ｊ＝2.2），6.38（1H，ｓ），4.01（2H，ｓ），ca，
2.8（2H，ｍ），ca.2.7（2H，ｍ），2.14（3H，ｓ）13 C−NMRスペクトル（100MHz，DMSO−d6，
δc） 189.4，181.6，172.3，165.6，164.7，164.4，
157.8，142.1，141.4，140.5，135.4，131.4，
130.0，120.1，119.9，118.3，116.5，112.4，
109.0，108.7，107.7，49.9，29.8，28.2，20.2 以上のデータよりKS−619−１は新規化合物で
あり、下記の構造式で表わされる物質であること
が判明した。 次に各種展開剤によるKS−619−１の薄層クロ
マトグラフイーのRf値を第１表に示す。検出は
ヨウ素反応により行つた。
【表】
展開：室温、上昇法、１時間
KS−619−1は血管拡張作用を有する。
次にKS−619−１の製造法について説明する。 KS−619−１はストレプトミセス属に属し、
KS−619−１生産能を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にKS−619−１を生成蓄積させ、該
培養物からKS−619−１を採取することによつて
製造される。 KS−619−１生産性微生物としてはストレプト
ミセス属に属し、KS−619−１生産能を有するも
のであればいずれの微生物でも用いることができ
る。具体的に好適な例は、ストレプトミセス・カ
リフオルニカスATCC3312株である。該菌株の形
態的特徴および生理的性質は Waksman，S.A.and R.E.Curtis（1916） Soil Science １巻99〜134頁および Waksman，S.A.and A.T.Henrici（1948in Breed.R.S.，E.G.D.Murray and A.P.
Hitchenseds.） Bergey's Mannual of Determinative
Bacteriology6巻（The williams and
wilkins Cc.，Baltimore）929〜980頁 に記載されている。 微生物の培養に際しては放線菌の培養に用いら
れる通常の培養方法が適用される。用いられる培
地は菌の資化しうる炭素源，窒素源，無機物等を
程よく含有する培地であれば天然培地，合成培地
いずれでも用いうる。 炭素源としてはグルコース、フラクトース、シ
ユクロース、スタビロース、澱粉、デキストリ
ン、マンノース、マルトース、糖蜜等の炭水化
物、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸など
の有機酸、メタノール、エタノール等のアルコー
ル、メタン、エタン、プロパン、ｎ−パラフイン
等の炭化水素、グルタミン酸等のアミノ酸あるい
はグリセロール等が用いられる。 窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
等のアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミ
ン、シスチン、アラニン等のアミノ酸、尿素、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コー
ン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実粕、大豆カ
ゼイン、カザミノ酸、フアーマメデイア等が用い
られる。 無機物としてはリン酸二水素カリウム、リン酸
水素二ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一
鉄、硫酸マンガン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パ
ントテン酸カルシウム、モリブデン酸アンモニウ
ム、硫酸アルミニウムカリウム、炭酸バリウム、
炭酸カルシウム、塩化コバルト、食塩等が用いら
れる。 その他必要に応じて培地にビタミン、サイアミ
ン等菌体の増殖あるいはKS−619−１の生産を促
進する物質を加えることができる。 用いられる微生物が特定の物質を要求する場合
は勿論生育に必要な物を加えることが必要であ
る。 培養は振盪培養法、通気撹拌培養法等により、
20〜40℃の温度で中性付近のPHで行われる。 ３〜15日の培養によつてKS−619−１の蓄積が
最大に達し、培養は完了する。 培養物中に、蓄積したKS−619−１を培養液か
ら単離採取するに際しては、通常は生理活性物質
の培養液から採取する方法が適用される。 即ち、濾過、遠心分離等による菌体除去、吸着
樹脂、シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、ア
ルミニウム、セルロース、珪藻土、珪酸マグネシ
ウム、ゲル濾過剤等を用いるカラムクロマトグラ
フイーもしくは薄層クロマトグラフイーによる活
性物質の吸脱着処理等によつてKS−619−１は単
離される。 培養液からKS−619−１を単離する１例は次の
通りである。 培養液を濾過もしくは遠心分離することによつ
て菌体を除去する。得られた濾液もしくは上澄液
を吸着樹脂、ダイヤイオンHP−10（三菱化成工
業(株)製）で処理して活性物質を樹脂に吸着する。
ついで、メタノール等の適当な溶剤にて溶出し、
溶出液を減圧濃縮することにより溶剤をとばし水
溶液とする。ついで、この水溶液に水と混和しな
い溶媒たとえば酢酸エチル、酢酸ブチル等を添加
して抽出する。 抽出液を減圧下濃縮し、シリカゲルカラムクロ
マトグラフイーをくり返し行うことによつて精製
する。展開溶媒としては最初はクロロホルム：メ
タノール＝９：１（Ｖ／Ｖ）を用いて溶出し、次
回のクロマトグラフイーの溶媒としてはブタノー
ル：エタノール：クロロホルム：濃アンモニア水
＝４：５：２：２（Ｖ／Ｖ）を用いて溶出する。
更に３番目のシリカゲルカラムクロマトグラフイ
ーの溶媒としてはクロロホルム：メタノール：エ
タノール：水＝10：４：４：２（Ｖ／Ｖ）を用い
て溶出する。KS−619−１を含有する区分を減圧
下濃縮し、メタノールを展開溶媒として用いる
LH−20（フアルマシア社製）カラムクロマトグ
ラフイーを行う。KS−619−１を含む画分を集め
減圧下で濃縮し、KS−619−１の橙色粉末を得
る。 上記精製工程中のKS−619−１の検出は、シリ
カゲル薄層クロマトグラフイー、ついでヨウ素反
応により行つた。 以下に実施例を示す。 実施例 種菌として、ストレプトミセス・カリフオルニ
カスATCC3312、第１種培地として、グルコース
1.0ｇ／dl，溶性デンプン1.0ｇ／dl，肉エキス0.3
ｇ／dl，酵母エキス0.5ｇ／dl，バクトトリプト
ン（デイフコ社製）0.5ｇ／dl，炭酸カルシウム
0.2ｇ／dl，PH7.2〜7.4の組成を有する培地を用い
る。種菌１白金耳を50ml太型試験管に入れた上記
種培地14mlに種菌し、30℃で１日間振盪培養す
る。 この種培養液４mlを300ml容エルレンマイヤー
フラスコに入つて40mlの第２種培地に植菌する。
第２種培地の組成は第１種培地の組成と同じであ
る。第２種培養は30℃で１日間行う。この種培養
液40mlを２容バツフル付きエルレンマイヤーフ
ラスコに入つた300mlの第３種培地に植菌する。
第３種培地の組成は第１種培地の組成と同じであ
る。第３種培養は30℃で１日間行う。この第３種
培養液900mlを30ml容のステンレス製ジヤーフア
ーメンター中の主醗酵培地18に植菌する。主醗
酵培地としては、デキストリン3.0ｇ／dl，ソイ
ビーンミール2.0ｇ／dl，コーンスチープリカー
0.25ｇ／dl，リン酸２カリウム0.05ｇ／dl，硫酸
マグネシウム・７水塩0.05ｇ／dl，塩化カリウム
0.03ｇ／dl，炭酸カルシウム0.3ｇ／dl，PH7.8の
組成を有するものを用いた。 培養は28℃，３日間通気撹拌下に行う。培養後
の培養液中に0.32μg／mlのKS−619−１が蓄積す
る。培養終了後、培養液を遠心分離（15000rpm）
する。上澄液36をダイヤイオンHP−10を充填
した２カラムに通塔し、KS−619−１を吸着さ
せた後、30％（Ｖ／Ｖ）メタノール６で洗浄
し、メタノール６で溶出する。溶出液全てを集
めて濃縮して500mlとし、酢酸エチル1.5で抽出
する。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで脱水
後、濃縮乾固すると、2.0ｇの油状物が得られる。
これをクロロホルムを用いて充填した150mlのシ
リカゲルカラム（ワコーゲル：和光純薬社製）の
上端に供給する。クロロホルム750mlで洗浄後、
クロロホルム：メタノール＝９：１（Ｖ／Ｖ）450
mlの溶媒を用いて溶出する。溶出液全てを集めて
減圧下で濃縮乾固すると122.8mgの油状物質が得
られる。この油状物をブタノール：エタノール：
クロロホルム：濃アンモニア水＝４：５：２：２
（Ｖ／Ｖ）を用いて充填した100mlのシリカゲルカ
ラム（ワコーゲル）の上端に供給し、展開溶媒と
して充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて溶出す
る。溶出画分を７ｇずつ分取するとフラクシヨン
番号12〜18にKS−619−１が溶出される。この画
分を集め減圧下で濃縮乾固すると約70.7mgの油状
物質が得られる。この油状物をクロロホルム：メ
タノール：エタノール：水＝10：４：４：２
（Ｖ／Ｖ）を用いて充填した90mlのシリカゲルカ
ラム（ワコーゲル）の上端に供給し、展開溶媒と
して充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて溶出す
る。溶出画分を７ｇずつ分取するとフラクシヨン
番号２〜22にKS−619−１が溶出される。この画
分を集め減圧下で濃縮乾固すると約60mgの油状物
質が得られる。この油状物を約５mlのメタノール
に溶解し、メタノールを用いて充填した300mlの
セフアデツクスLH−20（フアルマシア社製）カ
ラムの上端に供給する。メタノールを用いて展開
を行い５ｇずつ分取すると、フラクシヨン番号24
〜57にKS−619−１が溶出される。この画分を集
め減圧下濃縮乾固すると9.7mgのKS−619−１で
ある橙色粉末が得られる。なお上記工程中のKS
−619−１の検出はシリカゲル薄層クロマトグラ
フイー、ついでヨウ素反応により行つた。 次にKS−619−１の血管拡張作用を摘出血管標
本を用いる収縮抑制実験例で説明する。 実験例 １ 表面灌流摘出腸間膜動脈標本 白色雑系ウサギ（雄、２〜３Kg）の腹部正中線
を切開し、上腸間膜動脈を腹部大動脈分岐部から
約２〜2.5cmの長さで切り出し、巾３〜４mmのラ
セン状条片を作成した。両端を絹糸で結紮し、下
端は固定棒、上端は強力トランスデユーサー（日
本光電製、SB−1T）につなぎ、初期張力1.5ｇで
懸垂した。標本はペリスタポンプ（Peristaltic
pump）（Harbard 1210）を用いて、37±１℃に
保ち、95％O2、５％CO2ガスを通じた。クレブ
ス・ハンゼライト（Krebs−Henseleit）液〔組
成（ｇ／）、NaCl6.92，KCl0.35，MgSO4・
7H2O0.29，CaCl20.28，KH2PO40.16，
NaHCO32.1，グルコース2.0〕を用い10ml／min
の速度で表面灌流を行つた。標本は１〜２時間安
定化させた後、実験に供した。血管収縮物質とし
て塩化カリウムを終濃度20mMになるように標本
の直前に留置したカニユーレから、灌流路内に注
入した。惹起された収縮反応は、張力トランスデ
ユーサーを介して等尺性にポリグラフ（日本光
電；RM−45）に記録した。KS−619−１をエタ
ノールに20mg／mlになるように溶解し、栄養液で
適宜希釈したものを、収縮薬適用の10分前から収
縮反応の終了時まで持続灌流した。 ２ 実験成績
KS−619−1は血管拡張作用を有する。
次にKS−619−１の製造法について説明する。 KS−619−１はストレプトミセス属に属し、
KS−619−１生産能を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にKS−619−１を生成蓄積させ、該
培養物からKS−619−１を採取することによつて
製造される。 KS−619−１生産性微生物としてはストレプト
ミセス属に属し、KS−619−１生産能を有するも
のであればいずれの微生物でも用いることができ
る。具体的に好適な例は、ストレプトミセス・カ
リフオルニカスATCC3312株である。該菌株の形
態的特徴および生理的性質は Waksman，S.A.and R.E.Curtis（1916） Soil Science １巻99〜134頁および Waksman，S.A.and A.T.Henrici（1948in Breed.R.S.，E.G.D.Murray and A.P.
Hitchenseds.） Bergey's Mannual of Determinative
Bacteriology6巻（The williams and
wilkins Cc.，Baltimore）929〜980頁 に記載されている。 微生物の培養に際しては放線菌の培養に用いら
れる通常の培養方法が適用される。用いられる培
地は菌の資化しうる炭素源，窒素源，無機物等を
程よく含有する培地であれば天然培地，合成培地
いずれでも用いうる。 炭素源としてはグルコース、フラクトース、シ
ユクロース、スタビロース、澱粉、デキストリ
ン、マンノース、マルトース、糖蜜等の炭水化
物、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸など
の有機酸、メタノール、エタノール等のアルコー
ル、メタン、エタン、プロパン、ｎ−パラフイン
等の炭化水素、グルタミン酸等のアミノ酸あるい
はグリセロール等が用いられる。 窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモ
ニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
等のアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミ
ン、シスチン、アラニン等のアミノ酸、尿素、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コー
ン・スチープ・リカー、大豆粉、綿実粕、大豆カ
ゼイン、カザミノ酸、フアーマメデイア等が用い
られる。 無機物としてはリン酸二水素カリウム、リン酸
水素二ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一
鉄、硫酸マンガン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パ
ントテン酸カルシウム、モリブデン酸アンモニウ
ム、硫酸アルミニウムカリウム、炭酸バリウム、
炭酸カルシウム、塩化コバルト、食塩等が用いら
れる。 その他必要に応じて培地にビタミン、サイアミ
ン等菌体の増殖あるいはKS−619−１の生産を促
進する物質を加えることができる。 用いられる微生物が特定の物質を要求する場合
は勿論生育に必要な物を加えることが必要であ
る。 培養は振盪培養法、通気撹拌培養法等により、
20〜40℃の温度で中性付近のPHで行われる。 ３〜15日の培養によつてKS−619−１の蓄積が
最大に達し、培養は完了する。 培養物中に、蓄積したKS−619−１を培養液か
ら単離採取するに際しては、通常は生理活性物質
の培養液から採取する方法が適用される。 即ち、濾過、遠心分離等による菌体除去、吸着
樹脂、シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、ア
ルミニウム、セルロース、珪藻土、珪酸マグネシ
ウム、ゲル濾過剤等を用いるカラムクロマトグラ
フイーもしくは薄層クロマトグラフイーによる活
性物質の吸脱着処理等によつてKS−619−１は単
離される。 培養液からKS−619−１を単離する１例は次の
通りである。 培養液を濾過もしくは遠心分離することによつ
て菌体を除去する。得られた濾液もしくは上澄液
を吸着樹脂、ダイヤイオンHP−10（三菱化成工
業(株)製）で処理して活性物質を樹脂に吸着する。
ついで、メタノール等の適当な溶剤にて溶出し、
溶出液を減圧濃縮することにより溶剤をとばし水
溶液とする。ついで、この水溶液に水と混和しな
い溶媒たとえば酢酸エチル、酢酸ブチル等を添加
して抽出する。 抽出液を減圧下濃縮し、シリカゲルカラムクロ
マトグラフイーをくり返し行うことによつて精製
する。展開溶媒としては最初はクロロホルム：メ
タノール＝９：１（Ｖ／Ｖ）を用いて溶出し、次
回のクロマトグラフイーの溶媒としてはブタノー
ル：エタノール：クロロホルム：濃アンモニア水
＝４：５：２：２（Ｖ／Ｖ）を用いて溶出する。
更に３番目のシリカゲルカラムクロマトグラフイ
ーの溶媒としてはクロロホルム：メタノール：エ
タノール：水＝10：４：４：２（Ｖ／Ｖ）を用い
て溶出する。KS−619−１を含有する区分を減圧
下濃縮し、メタノールを展開溶媒として用いる
LH−20（フアルマシア社製）カラムクロマトグ
ラフイーを行う。KS−619−１を含む画分を集め
減圧下で濃縮し、KS−619−１の橙色粉末を得
る。 上記精製工程中のKS−619−１の検出は、シリ
カゲル薄層クロマトグラフイー、ついでヨウ素反
応により行つた。 以下に実施例を示す。 実施例 種菌として、ストレプトミセス・カリフオルニ
カスATCC3312、第１種培地として、グルコース
1.0ｇ／dl，溶性デンプン1.0ｇ／dl，肉エキス0.3
ｇ／dl，酵母エキス0.5ｇ／dl，バクトトリプト
ン（デイフコ社製）0.5ｇ／dl，炭酸カルシウム
0.2ｇ／dl，PH7.2〜7.4の組成を有する培地を用い
る。種菌１白金耳を50ml太型試験管に入れた上記
種培地14mlに種菌し、30℃で１日間振盪培養す
る。 この種培養液４mlを300ml容エルレンマイヤー
フラスコに入つて40mlの第２種培地に植菌する。
第２種培地の組成は第１種培地の組成と同じであ
る。第２種培養は30℃で１日間行う。この種培養
液40mlを２容バツフル付きエルレンマイヤーフ
ラスコに入つた300mlの第３種培地に植菌する。
第３種培地の組成は第１種培地の組成と同じであ
る。第３種培養は30℃で１日間行う。この第３種
培養液900mlを30ml容のステンレス製ジヤーフア
ーメンター中の主醗酵培地18に植菌する。主醗
酵培地としては、デキストリン3.0ｇ／dl，ソイ
ビーンミール2.0ｇ／dl，コーンスチープリカー
0.25ｇ／dl，リン酸２カリウム0.05ｇ／dl，硫酸
マグネシウム・７水塩0.05ｇ／dl，塩化カリウム
0.03ｇ／dl，炭酸カルシウム0.3ｇ／dl，PH7.8の
組成を有するものを用いた。 培養は28℃，３日間通気撹拌下に行う。培養後
の培養液中に0.32μg／mlのKS−619−１が蓄積す
る。培養終了後、培養液を遠心分離（15000rpm）
する。上澄液36をダイヤイオンHP−10を充填
した２カラムに通塔し、KS−619−１を吸着さ
せた後、30％（Ｖ／Ｖ）メタノール６で洗浄
し、メタノール６で溶出する。溶出液全てを集
めて濃縮して500mlとし、酢酸エチル1.5で抽出
する。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで脱水
後、濃縮乾固すると、2.0ｇの油状物が得られる。
これをクロロホルムを用いて充填した150mlのシ
リカゲルカラム（ワコーゲル：和光純薬社製）の
上端に供給する。クロロホルム750mlで洗浄後、
クロロホルム：メタノール＝９：１（Ｖ／Ｖ）450
mlの溶媒を用いて溶出する。溶出液全てを集めて
減圧下で濃縮乾固すると122.8mgの油状物質が得
られる。この油状物をブタノール：エタノール：
クロロホルム：濃アンモニア水＝４：５：２：２
（Ｖ／Ｖ）を用いて充填した100mlのシリカゲルカ
ラム（ワコーゲル）の上端に供給し、展開溶媒と
して充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて溶出す
る。溶出画分を７ｇずつ分取するとフラクシヨン
番号12〜18にKS−619−１が溶出される。この画
分を集め減圧下で濃縮乾固すると約70.7mgの油状
物質が得られる。この油状物をクロロホルム：メ
タノール：エタノール：水＝10：４：４：２
（Ｖ／Ｖ）を用いて充填した90mlのシリカゲルカ
ラム（ワコーゲル）の上端に供給し、展開溶媒と
して充填溶媒と同一組成の溶媒を用いて溶出す
る。溶出画分を７ｇずつ分取するとフラクシヨン
番号２〜22にKS−619−１が溶出される。この画
分を集め減圧下で濃縮乾固すると約60mgの油状物
質が得られる。この油状物を約５mlのメタノール
に溶解し、メタノールを用いて充填した300mlの
セフアデツクスLH−20（フアルマシア社製）カ
ラムの上端に供給する。メタノールを用いて展開
を行い５ｇずつ分取すると、フラクシヨン番号24
〜57にKS−619−１が溶出される。この画分を集
め減圧下濃縮乾固すると9.7mgのKS−619−１で
ある橙色粉末が得られる。なお上記工程中のKS
−619−１の検出はシリカゲル薄層クロマトグラ
フイー、ついでヨウ素反応により行つた。 次にKS−619−１の血管拡張作用を摘出血管標
本を用いる収縮抑制実験例で説明する。 実験例 １ 表面灌流摘出腸間膜動脈標本 白色雑系ウサギ（雄、２〜３Kg）の腹部正中線
を切開し、上腸間膜動脈を腹部大動脈分岐部から
約２〜2.5cmの長さで切り出し、巾３〜４mmのラ
セン状条片を作成した。両端を絹糸で結紮し、下
端は固定棒、上端は強力トランスデユーサー（日
本光電製、SB−1T）につなぎ、初期張力1.5ｇで
懸垂した。標本はペリスタポンプ（Peristaltic
pump）（Harbard 1210）を用いて、37±１℃に
保ち、95％O2、５％CO2ガスを通じた。クレブ
ス・ハンゼライト（Krebs−Henseleit）液〔組
成（ｇ／）、NaCl6.92，KCl0.35，MgSO4・
7H2O0.29，CaCl20.28，KH2PO40.16，
NaHCO32.1，グルコース2.0〕を用い10ml／min
の速度で表面灌流を行つた。標本は１〜２時間安
定化させた後、実験に供した。血管収縮物質とし
て塩化カリウムを終濃度20mMになるように標本
の直前に留置したカニユーレから、灌流路内に注
入した。惹起された収縮反応は、張力トランスデ
ユーサーを介して等尺性にポリグラフ（日本光
電；RM−45）に記録した。KS−619−１をエタ
ノールに20mg／mlになるように溶解し、栄養液で
適宜希釈したものを、収縮薬適用の10分前から収
縮反応の終了時まで持続灌流した。 ２ 実験成績
【表】
〓 薬物存在下〓
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記の構造式 で表わされる新規物質KS−619−１。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59215578A JPS6196987A (ja) | 1984-10-15 | 1984-10-15 | 新規物質ｋｓ―６１９―１ |
| EP85307411A EP0178902B1 (en) | 1984-10-15 | 1985-10-15 | Novel vasodilator compounds, process for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing same |
| DE8585307411T DE3581259D1 (de) | 1984-10-15 | 1985-10-15 | Vasodilatationsverbindungen, deren verfahren zur herstellung und deren pharmazeutische zusammensetzungen. |
| US07/235,654 US4962125A (en) | 1984-10-15 | 1988-08-24 | Novel substance KS-619-1, preparation process and pharmaceutical composition |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59215578A JPS6196987A (ja) | 1984-10-15 | 1984-10-15 | 新規物質ｋｓ―６１９―１ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6196987A JPS6196987A (ja) | 1986-05-15 |
| JPH0359891B2 true JPH0359891B2 (ja) | 1991-09-12 |
Family
ID=16674755
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59215578A Granted JPS6196987A (ja) | 1984-10-15 | 1984-10-15 | 新規物質ｋｓ―６１９―１ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4962125A (ja) |
| EP (1) | EP0178902B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6196987A (ja) |
| DE (1) | DE3581259D1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3862602D1 (de) * | 1987-04-15 | 1991-06-06 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Substanzen ks-504a, ks-504b, ks-504d und ks-504e und verfahren zu ihrer herstellung. |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2323699A1 (fr) * | 1975-09-15 | 1977-04-08 | Ishihara Mining & Chemical Co | Nouvel antibiotique et procede de sa preparation |
-
1984
- 1984-10-15 JP JP59215578A patent/JPS6196987A/ja active Granted
-
1985
- 1985-10-15 EP EP85307411A patent/EP0178902B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-15 DE DE8585307411T patent/DE3581259D1/de not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-08-24 US US07/235,654 patent/US4962125A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0178902A2 (en) | 1986-04-23 |
| DE3581259D1 (de) | 1991-02-14 |
| JPS6196987A (ja) | 1986-05-15 |
| US4962125A (en) | 1990-10-09 |
| EP0178902A3 (en) | 1987-10-14 |
| EP0178902B1 (en) | 1991-01-09 |
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