JPS6293664A - 抗原又は抗体濃度の測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、抗原又は抗体濃度の測定方法に関する。

（従来の技術及び発明が解決しようとする問題点）従来
、不溶性担体粒子に物理吸着あるいは共有結合の形成に
より抗体又は抗原を固定化し、該担体粒子に固定化され
た抗体又は抗原に抗原又は抗体を反応させ、その反応の
進行に伴う反応混合物の吸光度の増加すなわち透過率の
減少からその抗原抗体反応の速度を測定し、あるいは反
応の終結時点の反応混合物の吸光度又は透過率と、反応
開始前の抗原又は抗体の吸光度又は透過率との差を測定
し、さらにその速度あるいは反応開始前と反応終結時点
との吸光度又は透過率の差から被検体中の抗原又は抗体
の濃度を定量する方法が知られている。

そして、この方法によれば、抗原又は抗体の濃度を高い
精度で、迅速に定量しうる利点を有する。しかし、以下
のような欠点が存在する。例えば、不溶性担体粒子に抗
体を固定化した場合、抗原分子数が抗体分子数に比較し
て少な℃・領域では、抗原抗体反応物が抗原分子数のり
増加に比例して増加（−１抗原分子数が抗体分子数より
過剰の領域では、余剰の抗原が本来ならば凝集に寄与し
つる抗体分子を中和し、抗原分子数の増加に対して、逆
に抗原抗体反応物が減少する。前者は一般に抗原（抗体
）過少領域と呼ばれ、後者は一般に抗原（抗体）過剰領
域と呼ばれる。この現象により、一般に一つの抗原抗体
反応物濃度に対して、複数の抗原又は抗体濃度が対応す
る。

ここで抗体と抗原を入れ替えても同一現象がみられる。

臨床険査に於ては、上記抗原過剰領域に属する被検液は
一般にその出現頻度は小さいが抗原過剰領域に属する被
検液を誤まって抗原過少領域のものと評価した場合は、
臨床上重大な過失となる。さらには、このような誤まり
が発生する測定方法は臨床上の有意性が乏しいものとな
る。

従来、このような誤まりの発生を防ぐために、同一被検
液に対して希釈率を変えた２以上の希釈液について測定
を行う方法、又は測定終了後さらに抗原又は抗体を添加
し、抗原抗体反応物濃度を測定し、抗原又は抗体の添加
により抗原抗体反応物濃度が変化しない場合に被検液が
抗原過剰領域又は抗体過剰領域に属すると判断する方法
等が提案されている。

いずれの方法に於ても同一被検液に対して複数回の測定
が必要である。

しかるＫ、短時間に多数の被検液を測定しうる自動測定
機が近年出現するに及び、単−測定操作内に抗原過剰領
域又は抗体過剰領域に属するか否か判別しうる測定方法
の開発が望まれてきた。

（問題を解決するための手段） 本発明者らは、自動測定機による短時間に多数の被検液
を測定し５るに好適な測定方法を確立する目的で鋭意研
究してきた。

その結果、本発明者らは、例えば第１図に示す如く、抗
体を固定化したポリスチレンラテックス懸濁液に抗原過
少領域に属する抗原濃度を持つ血清及び抗原過剰領域に
属する抗原濃度を持つ血清の２種の被検液を各々添加し
、２秒攪拌の後、５秒後と６０秒後との一定時間に対す
る吸光度の差を測定したところ両波検液の示す吸光度の
差が一致した。すなわちこの現象は一つの抗原抗体反応
物濃度に対し複数の抗原濃度が対応していることを示す
。従って、上記同様の測定方法を利用した未知濃度の被
検液中の抗原又は抗体濃度が１回の測定で抗原（抗体）
過剰領域か抗原（抗体）過少領域かを決定し得す、実用
上問題があることを示す。本発明者らは、上記被検液添
加後、経時時間に対する吸光度の変化を詳細に検討した
ところ、被検液添加後、５秒と１０秒後、１０秒と１５
秒後の２ケの特定時間に対する吸光度の差の比を求める
と、両波検液の該層の比の値が大きく異なることを見出
した。さらに種々の抗原濃度を示す血清につき各々複数
回測定し、該吸光度の差の比の再現性を検討したところ
、前記吸光度の差の比を利用することＫより、極めて容
易に被検液中の抗原又は抗体濃度の定量が出来ることを
確認し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、不溶性担体粒子に抗体又は抗原を
固定化し、該担体粒子に固定化された抗体又は抗原に既
知濃度の抗原又は抗体を反応させ、反応開始後の経時的
変化した時点で光を照射し、上記反応に於ける２以上の
特定時間に対する光の吸光度又は透過率の差の比を求め
、抜止と抗原又は抗体濃度との間の対応曲線を求め、次
（・で未知濃度の試料について２以上の特定時間に対す
る光の吸光度又は透過率の差の比を求め、上記対応曲線
により抜止に相当する濃度を決定することを特徴とする
抗原又は抗体濃度の測定方法である。

本発明で用いる不溶性担体粒子は、使用東件下に実質的
に不溶性であれば有機高分子体。

無機化合物の区別なく使用出来る。また七の形状も特に
限定されるものではないが、一般に好適に使用されるも
のを例示すると、平均粒子径が１．０μｍ程度以下、好
ましくは０．０５〜０．４μｍの不溶性担体粒子である
。該不溶性担体粒子に抗体又は抗原を固定化し、次いで
被検液中の抗原又は抗体を反応させ、例えば４００〜１
０００ｎ、好ましくは５００〜９５０１１１の範囲の波
長の光線を用いて、反応開始後の２以上の特定時間に対
する上記反応物の吸光度又は透過率の差を測定し、この
差の比を求めることにより被検液中の抗原又は抗体の濃
度を測定することができる。

上記方法に於ける被検液中の抗原又は抗体は、そのいず
れかが含まれる場合が一般的であるが、該抗原と抗体と
の混合物であっても十分に対応田来る。

上記測定に用いる光線は、反応の進行に対する吸光度又
は透過率が比較的大きく感度に優れ、かつ、被検液中に
通常共存する乳ビ。

ヘモグロビン、ビリルビン等の干渉が比較的少ない上記
ｖ長域が好適である。

不溶性担体粒子の粒子径につ〜・ては、粒子径が大きい
場合、凝集にともなう粒子径の変化量は大きいが凝集反
応速度が遅くなる傾向があり、粒子径が小さいとブラウ
ン運動性が活発で凝集反応速度は速いが、−次粒子径が
小さいために凝集反応にともなう粒子径の変化量は小さ
くなる傾向がある。

上記理由により、上記粒子径と測定波長とを適宜組み合
せて実施すると好適である。

不溶性担体粒子としては、前記の如く、画定を行う時に
用いられる液体媒体に実質的に不溶性で、例えば上記平
均粒子径を有するポリスチレン、スチレン−ブタンエン
共ｎ合体。

スチレン−メタクリル酸共迫合体、ポリグリシジルメタ
クリレート、アクロレイン−二チレングリコールジメタ
クリレート共重合体のような乳化重合により得られる有
機高分子ラテックス等の有機高分子物賞の微粒子あるい
はシリカ、シリカ−アルミナ、アルミナのよ５な無機酸
化物又は無機醗化物等にシランカップリング６理等の操
作で官能基を導入した・無機粒子等が用いられる。

本発明に於いて、抗体又は抗原は特に限定的でなく公知
のものが使用できる。一般に好適に使用されろものの代
表的なものを例示すれば、例えば、変性ガンマグロブリ
ン、抗核因子、ヒトフルプミン、抗ヒトアルブミン抗体
、イムノグロブリンＧ（ＩｇＧ）、抗ヒトＩｇＧ抗体、
イムノグロブリンＡ　（ｒｇＡ）。

抗ヒトＩｇＡ抗体、イムノグロブリンＭ（ＩｇＭ　）　
、抗ヒトＩｇＭ抗体、抗ヒトＩｇＥ抗体、ストレプトリ
ジン０．ストレプトキナーゼ、ヒアルロニターゼ、Ｃ−
反応性蛋白（ＣＲＰ）、抗ヒトＣＲＰ抗体、アルファー
フェトプロティン（ＡＦＰ）、抗ＡＦＰ抗体、癌胎児性
抗原（ＣＩＡ）、抗ヒトＩｇＧ抗体。

ヒト絨毛性ゴナドトロピンＣＩ（ＣＧ）、抗ＨＣＧ抗体
、抗エストｐゲン抗体、抗インシュリン抗体、Ｂｍ肝炎
表面抗原（ＨＢｓ）、抗ＨＢｓ　抗体、梅毒トレポネマ
抗原、風疹抗原。

インフルエンザ抗原、補体Ｃ１ｑ　　、抗Ｃ１ｑ抗体、
抗Ｃ８抗体、抗Ｃ６抗体、抗トランスフェリン抗体９等
である。

本発明に於いては、このような不溶性担体粒子に測定対
象の被検液中の抗原又は抗体と反応し５る抗体又は抗原
を固定化する。この場合の固定化方法は物理的吸着、化
学的共有結合の形成のいずれでも良いが、物理的吸着能
の高い蛋白例えば抗体や高分子量蛋白の固定には物理的
吸着が好適であり、物理的吸着能の低いホルモン類、ハ
プテン類の固定化には化学的共有結合の形成が好適に用
いられる。

固定化方法についてはすでに多くの方法が提案されてお
り、固定化する抗体又は抗原の特性に合わせて適宜固定
化方法を選択すると良い。例えば分散媒体中で抗体又は
抗原を必要に応じて緩衝液又は架橋剤の存在下に不溶性
担体粒子を混合すればよ−・。

上記抗体又は抗原を固定化した不浴性担体粒子の分散媒
は特に限定されないが、不溶性担体粒子の保存中の安定
性と、凝集反応時の反応の再現性の観点からみて、グリ
シン−水酸化す）　ＩＪウム緩衡液、トリス−塩酸緩衝
液。

リン酸緩衡液等の緩衝液が好適に使用される。

上記抗体又は抗原を固定化した不溶性担体粒子濃度が反
応時にｏ、　ｏ　ｏ　ｓ重量％以上、好ましくは０．０
２〜０．２０重量％となるように上記分散媒中に１！！
濁し、抗体又は抗原を固定化した不溶性担体粒子懸濁液
を得ろ。

該懸濁液を用℃・た被検液中の抗原又は抗体濃度の測定
方法は、例えば以下の如（実施しつる。

まず、一定の平均粒子径を有する不溶性担体粒子にある
一定の抗体又は抗原を固定化し該ｌｌ＋！濁液を調製す
る。次いで被検液中に含まれる抗原又は抗体と同−又は
ほぼ則−の抗原又は抗体を、被検液の媒体と同−又はほ
ぼ同一の媒体を用いて希釈し、あるいは−１１１ａＬ、
種々の既知濃度の標準被検液を真裏する。欠いで一定条
件下に於いて該懸濁液と該標準被検液とを混合し、反応
開始後の２以上の特定時間に対する吸光度又は透過率を
測定し、その間の変化量すなわち差の比を算出する。次
に該層の比の値を例えば縦軸に、標準被検液中の抗原又
は抗体濃度を例えば横軸としたグラフにプロントすると
、例えば第３図に示す被検液中の抗原又は抗体一度と該
層の比の値との対応曲線が得られる。次いで標準被検液
中の抗原又は抗体と同−又ははｔま同一の抗原又は抗体
を含む一度未知の被検液につき、上記対応曲線を得た条
件と同一条件下で、かつ同様の方法で吸光度又は透過率
の差を測定して、その比の値を得、上記対応曲線と対比
することにより被検液中に含まれる抗原又は抗体量を検
知しうる。

不発明による方法によれば、同一ぬ度の被検液に対する
不溶性担体粒子に固定化した抗体又は抗原濃度が、従来
技術に比して１／１０以下に低減することが可能となる
。逆に従来技術に於いて被検液をあらかじめ希釈操作等
を行い、被検液中の抗原又は抗体濃度を低下させる必要
のある測定項目に於いては、本発明による方法によれば
希釈倍数を１／１０以下に低減でき、さらに場合によれ
ば希釈操作を行わず被検液中の抗原又は抗体濃度の測定
が可能となる。前者の場合は測定に用いる抗体又は抗原
量及び不溶性担体粒子の使用量が低減でき、後者の場合
は希釈操作による測定誤差の低減又は排除できる。

本発明に於ける前記特定時間の設定については以下の点
を考慮して実施するのが好ましい。すなわち、不溶性担
体粒子に固定化した抗体又は抗原の懸濁液に被検液を加
え反応を開始した後、好ましくは該懸濁液と被検液とを
一定条件下で攪拌し、混合した後、さらに２〜３秒経過
し、実質的に反応系が安定化した後の２以上の特定時間
に対して、反応物の吸光度又は透過率の変化量を測定す
るのが好適である。

ここに於いて特定時間のうち少なくとも一方は、実質的
に反応系が安定化した時点すなわち攪拌後２〜３秒経過
した時点か６とする場合に、該被検液に於ける吸光度又
は透過率の差の比の値が該被検液中の抗原又は抗体濃度
に対し鋭敏に対応する傾向がある。従って特定時間のう
ち少なくとも一方は測光可能な限り反応の初期に設定す
ることが好ましい。

なお、特定時間の間隔及び他の特定時間の設定について
は、吸光度又は透過率の変化量を勘案して、測定する抗
原又は抗体ごとに好適な条件を選択すれば良い。一般に
好適に採用される代表的な態様を説明すると下記のとお
りである。例えば、上記反応が開始後の基準経過時（ａ
秒後）から更に一定時間経過後（ｂ秒後）のそれぞれの
吸光度又は透過率を測定し、その差（ΔＥ１）を算出し
、更に上記とは別の基準経過時（０秒後）を設定し、こ
れより一定時間経過後（ｄ秒後）のそれぞれの吸光度又
は透過率を測定し、該基準時（Ｃ秒後）との差（ΔＥ２
）を算出する。この両者の比すなわちΔＥ、／△Ｅ、を
算出し、各既知濃度に於ける核化の対応曲線を作成する
。上記基準経過時（０秒後）の設定は先きに吸光度又は
透過率を測定したｂ秒後とすることも出来、この場合は
最低３点の吸光度又は透過率の測定で前記２つの特定時
間に対する吸光度又は透過率の差の比を求めることが出
来る。

このようにして求めた上記比の値は、抗体又は抗原ぬ度
に応じた特定のものとなり、例えば第３図に示すような
検量線とすることが出来る。

次いで、未知濃度の被検液中の抗体又は抗原濃度につい
て、前記同様の２以上の特定時間に対する吸光度又は透
過率の差の比を求めることにより、上記検量線から被検
液中の抗体又は抗原の濃度を決定できる。

（発明の効果） 本発明による抗原又は抗体ぬ度の測定方法は、従来技術
に於いて抗Ｎ過剰又は抗体過剰か否かの判別が必要であ
った被検液中の抗原又は抗体濃度範囲に対し、抗原過剰
又は抗体過剰か否かの繁雑な判定操作を用いず被検液中
の抗原又は抗体会度を一義的に決定でき、再検査の必要
もない。

また、同一被検液に対する不溶性担体粒子に固定化した
抗体又は抗原濃度を従来技術に比較して低下でき及び／
または同−該固定化した抗原又は抗体６度に対し被検液
の希釈操作にともなう測定ｔＡ差の低減または排除が可
能となる。

さらに、本発明による測定方法に於いては吸光度又は透
過率の測定は最低３回で実施できる。

従って、本発明による抗原又は抗体濃度のカ１１定方法
は、短時間に多数の被検欣を処理する自動測定の場合に
特に有用であり、かつ、自動測定機に対する制約も少な
く、広（一般の自動測定機への実施ができる。

（実施例） 以下、実施例により、さらに本発明の詳細な説明する。

実施例　１ （１１Ｃ−反応性蛋白質測定試薬の調製平均直径０．１
２３μｍのポリスチレンラテックス粒子をトリス−塩酸
緩衝液（ＰＨ＝７．５）で希釈し、ラテックス濃度が１
重量％の懸濁液を調製する。次いでＣ−反応性蛋白質（
以下、ＣＲＰと略す）をヤギに免疫して得た抗ＣＲＰ血
清より塩析処理により分画した抗ＣＲＰヤギＩｇＧ分画
をトリス−塩酸緩衝液（Ｐ　Ｈ＝　７．５　＞で希釈し
、蛋白濃度２８９　／　ｄの溶液を調製する。上記ラテ
ックス懸濁液１容に抗ＣＲＰヤギＩｇＧ分画の溶液１容
を加え３７℃で２時間反応させる。さらにウシ血ｍアル
グミンを最終ぬ度で０．０５重量％添加した後遠心分離
し、上清を除去した径比でんをトリス−塩酸緩＃液（Ｐ
Ｈ＝７．５）に再分散し、ラテックスぬ度を０．０８ｍ
ｆ％に調製し、ＣＲＰ測定試薬を得た。

（２）測定方法 日立製作新製Ｕ−３２００型自記分光分析計の測光部Ｋ
、温度調節器及びマグネット式攪拌装置を取り付けた装
置により吸光度を測定した。

光路長ＩＱｍｉのガラス製光学セルに円筒状の攪拌子を
入れ、次いで（１１で得たＣＲＰ測定用試薬２４５０μ
ｔを分注し、測光部に挿入し、３７℃に保温した。

次いで該攪拌装置によりＣＲＰ測定用試薬を攪拌しつつ
、被検液５０μｔを添加した。

添加と同時に吸光度の測定を開始した。

吸光度の測定は、５８０ｍｍの波長の光線を用いて行っ
た。なお、攪拌は被検液添加後３秒で停止した。

（３）既知試料の測定 ＣＲＰ濃度２２．４叩／ｄｉの血清をトリス−塩酸緩衝
液（ＰＨ＝７．５）で希釈し、ＣＲＰ濃度が０．４１，
１．２４，３．７３，５．６０゜７．４６，１１．２，
１６．８１４９／ｄｌの被検液を得た。一方、上記血清
を濃縮し、ＣＲＰｉｄ度が４４．８　、８９．６１１９
／ｄｌの被検液を得た。

（２）の測定条件下で、上記９種の被検液及びＣＲＰａ
度２２．４　ｍｇｌｄｌｌ）血清、サラニドリス−塩酸
緩衝ｆｆ（Ｐ）Ｉ＝７．５）につき吸光度を各５回測定
した。

得られた吸光度のうち、被検液添加後６秒後と１２秒後
、１８秒後、６０秒後の吸光度より、２特定時間の差の
比として、被検液添加１２秒後と６秒後の吸光度差を、
被検液添加１８秒後と１２秒後の吸光度差で除した値を
得た。一方、被検液添加６０秒後の吸光度より６秒後の
吸光度を減じた値より一定時間に対する吸光度の差を得
た。この結果を第１表に示した。

Ｌ、１　　　・　　　Ｃ−白 次に、第１表に示した一定時間に対する吸光度の差の平
均値を縦軸とし、添加被検液中のＣＲＰｉＱ度を横軸と
して第２図に示す対応曲線を得た。一方、２特定時間に
対する吸光度の差の比の平均値を縦軸とし、添加被検液
中のＣＨＦ２度を横軸として第３図に示す本発明による
対応曲線を得た。

ここに於いて、収差の比の値をＸとし、該ＣＲＰ儂度を
ｙとすると、ＣＲＰａ度３．７３ｍｇ／ｄｌから８９．
６η／ｄ７！の範囲に於ける収差の比の対応曲線は ｙ＝ｅｘＰ（４，０５９Ｘｔｏｇｘ＋２．６９７　）（
式１） でよ（近似できた。一方、収差の対応曲線においてＣＲ
Ｐｉｆｉ度５．６０　ｍｇ　／ｄ７！以下の濃度範囲に
ついては、収差の値をＸ、該ＣＲＰａ度をｙとすると ｙ＝ｅｘＰ（０，９５５３Ｘ２ｏ、ＩＦ　Ｘ＋２．５８
５）（式２） でよく近似できた。（式１）、（式２）に於けるｌｏ９
　　は自然対数である。

一般にＣＲＰ強陽性患者血清中のＣＲＰ濃度は４０１１
９／ｄ７！以下であり、既知濃度被検液のうちＣＲＰ最
高濃度である８　９．６　ｍｇ　／　ｄ／！は臨床上測
定必要な範囲の上限と考えられ、本発明による収差の比
の対応曲線を用いれば。

ＣＲＰ一度３．７３即／ｄｉからｓ　９．６　ｍｙ／ｄ
ｌの濃度範囲にわたる従来法では一義的に抗ｗ濃度の決
定が不能であり抗原、過剰領域に団するか否牟の判別が
必要であった濃度範囲に於いて一義的に抗原濃度の決定
ができる。なお、ＣＲＰ濃度３．７３　真ｇ　／ｄｐ禾
満の濃度範囲について従来法による該差の対応曲線を適
用すれば、ＣＲＰ低濃度域の測定も実施できる。

すなわち、ＣＲＰａ度未知の被検液を測定するに当たっ
ては、（２）の測定方法に従って測定し、ＣＲＰｉａ度
未知の被検液による収差の値及び収差の比の値を得る。

次にｃ　ｒｔ　ｐ　ａ度３、７３１１ｇ／ｄｌに於ける
収差の値０．２６５１と上記被検液の収差の値を比較し
、上記被検液の収差の値が０．２６５１以上であれば、
該差の比の値を（式１）に代入してＣＲＰａ度を得る。

逆に上記被検液の収差の値が０．２６５１未満であれば
、収差の値を（式２）Ｋ代入してＣＲＰａ度を得る。

（４）未知試料の測定 ＣＲＰａ度未知の血清を（２）の測定方法で測定したと
ころ、収差の値０．５３０７と収差の比の値１．１９６
を得た。ＣＲＰ濃度３．７３８９／ｄ７！に於ける収差
の値０．２６５１より上記収差の値が大であるので、収
差の比の値を（式１）に適応してＣＲＰ濃度３０．７翼
９　／　ｄｉを得た。

次いで、上記血清をトリス−塩酸緩衝液（ＰＨ＝７．５
）で５倍及び１０倍に希釈し、（２）の測定方法で測定
したところ、５倍希釈液については収差の値０．４３８
１と収差の比の値０．８０１を得、（式１）によりＣＲ
Ｐ濃度は６．０３ｍ９／ｄｌと求まった。１０倍希釈液
につい【は収差の値０．２１３７と該差の比の値０．７
１１を得、（式２）によりＣＲＰｒＱ度は３、０４　ｍ
ｔｉ／　ｄｉと求まった。

さらに、５倍希釈液をヘキスト社製−元免疫拡散法によ
るＣＲＰ定量試薬であるＬＣＲルチゲンＣＲＰによりＣ
ＲＰ一度を測定したところ６．０肩ｇ／　ｄ７！を示し
、本発明による方法により血清中の濃度が広範囲に分布
するＣＲＰの測定に於いて、従来法では一義的にＣＲＰ
濃度の決定が不能であり、抗原過剰領域に属するか否か
の判別が必要であったＣＲＰの濃度範囲に於いて一義的
にｃＲｐ濃度の決定が可能となった、さらに、ＣＲＰ低
濃度域に従来法を実施することにより、ＣＲＰＩＯ度０
、４１　ｍｙ／ｄ７１！すなわちＣＲＰａ度の正常域付
近からＣＲＰａ度ｓ　９．　ｅ　ｍｇ／ｄｉすなりちｃ
ＲＰぬ度の異常高値にかけて、単一の測定操作でＣＲＰ
ｉｌｎ度の測定が可能となった。

【図面の簡単な説明】

第１図は抗体を固定化した不溶性粒子担体の懸濁液に、
対応する抗原を添加し、添加後の時間に対する吸光度の
変化量を示すグラフである。 図中、実線は抗原過少領域に属する被検液の場合で、点
線は抗原過剰領域に属する被検液の場合の結果を示す。 第２図は、横軸を被検液中の抗原政変とし縦軸を一定時
間に対する吸光度の差としてプロットした対応曲線を示
す。 第３図は、横軸を被検数中の抗原濃度とし縦軸を２特定
時間に対する吸光度の差の比としてプロットした本発明
による対応曲線を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 不溶性担体粒子に抗体又は抗原を固定化し 該担体粒子に固定化された抗体又は抗原に既知濃度の抗
   原又は抗体を反応させ、反応開始後の経時的変化した時
   点で光を照射し、上記反応に於ける２以上の特定時間に
   対する光の吸光度又は透過率の差の比を求め、該比と抗
   原又は抗体濃度との間の反応曲線を求め、次いで未知濃
   度の試料について２以上の特定時間に対する光の吸光度
   又は透過率の差の比を求め、上記対応曲線により該比に
   相当する濃度を決定することを特徴とする抗原又は抗体
   濃度の測定方法。