JPS63105687A - Ｌ−トリプトフアン類の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は酵素機能を用いて光学活性体のし−トリプトフ
ァン又はＬ−５−オキシトリプトファンを製造する方法
に関する。

（従来の技術と課題） Ｌ−トリプトファンは、必須アミノ酸の１種で、特に栄
養上生理上重要なアミノ酸である。現在り一トリブトフ
ァンは大量製造が困難なことから、用途は主に医薬用に
限定されている。しかしながら、安価な製造技術が確立
しうれば食品、飼料添加剤、高分子素材等の新規な、規
模の大きい市場が創成されることが期待されている。

Ｌ−５−オキシトリプトファンは、主に生理的作用が注
目されているアミノ酸であるが、現在有効な製法が充分
に確立されてなく、安価に製造可能な工業的製法の開発
が望まれている。

従゛来これら両アミノ酸の製法は、インドール若しくは
、５−オキシインドールに、アンモニムイオン及びピル
ビン酸又はオキザロ酢酸、又はＬ−リンゴ酸を用いる方
法が知られている（特公昭４９−４６９１７号等）。

しかしながら、これらの原料の中で特にピルビン酸、オ
キザロ酢酸又はＬ　−ＩＪンゴ酸は、大変高価であり、
本発明の目的である工業的製造法には通さない。ここに
おいて、本発明者等は鋭意研究の結果、フマル酸とアン
モニウムイオン及びインドールからし一トリプトファン
を、又フマル酸とアンモニウムイオンと５−オキシイン
ドールからＬ−５−オキシトリプトファンを製造するこ
とが可能であることを見出し、本発明を完成した。

（発明の構成と効果） 本発明の要旨は、下記の（１１の方法である。

［１）Ａ：フマル酸からＬ−リンゴ酸を生成し得る酵素
若しくは該酵素を含有する微生物菌体又はその処理物。

Ｂ：Ｌ−ＩＪンゴ酸からオキザロ酢酸を生成しうる酵素
若しくは該酵素を含有する微生物菌体又はその処理物。

Ｃ：トリプトファナーゼ若しくはトリプトファナーゼを
含有する微生物菌体又はその処理物。

上記のＡ、Ｂ及びＣの酵素系の存在下に、フマル酸、ア
ンモニウムイオン及び一般式 で表わされるインドール類から対応するＬ−）リプトラ
アン類を生成することを特徴とするＬ−トリプトファン
類の製造法。

本発明の基本は、フマル酸を原料の１つとし用いること
にあり、該反応系に用いる酵素系の供給源としては、同
一の微生物菌体内に存在する酵素を利用する方法に限定
されず、複数の種類の微生物菌体又はその処理物を利用
する方法も当然対象となる。

同一種の微生物菌体を利用してインドールとフマル酸又
はその塩及びアンモニウムイオンからし−トリプトファ
ンを又インドールの代わりに５−オキシインドールを用
いて同様にＬ−５−オキシトリプトファンを製造する場
合には、複数種類の微生物供役反応に比較して菌体調製
が、単一培養で済む為に培養コストは低い反面、反応に
関与する各酵素活性には制約がある。

一方、複数種類の微生物菌体を利用する場合には、各微
生物毎に菌体を調製する必要がある反面、各反応ステッ
プに於いて最大速度をもって反応せしめることが出来、
結果的にＬ−トリプトファン又はＬ−５−オキシトリプ
トファン°の高い生産速度かえられる。

上記いずれの場合にも、本方法はインドール若は５−オ
キシインドールとフマル酸又はその塩及びアンモニウム
イオンからし一トリプトファン又はＬ−５−オキシトリ
プトファンを製造する新規なプロセスを提供するもので
ある。

本プロセスは、フマル酸からＬ−リンゴ酸を生成しうる
反応■とＬ−リンゴ酸からオキザロ酢酸を生成しうる反
応◎とオキザロ酢酸からピルビン酸を生成しうる反応Ｏ
とトリプトファナーゼ反応＠とからなり、そのうち反応
θは非酵素的な脱炭酸反応であり、水溶液中で容易にピ
ルビン酸に変換される。

上記の各反応に使用される菌株は特に制限されるもので
はないが、例えば、反応■◎■に用いられる菌株として
は、エシェリヒア・コリ　（Ｅｓｃｈｅ−ｒｉｃｈｉａ
　　ｃｏｌｔ）　Ｋ−１２系菌株　ＡＴＣＣ２７３２５
、エシェリヒア・コリ　（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　
ｃｏｌｉ）　Ｋ−１２系菌株（ＦＥＲＭ　　Ｐ−８８４
４およびＦＥＲＭ　　Ｐ−８８４５）　、プロテウス・
モルガニ−（Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍｏｒｇａｎｉｉ）　Ｉ
ＦＯ−３８４８、エルビニア・ヘルビコラ（Ｅｒｗｉｎ
ｉａ　ｈｅｒｂｊｃｏｌａ）　　ＡＴＣＣ−２１４３３
などがある。

前記反応の及び反応◎に用いられる菌株としては、ブレ
ビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖ　ｉ　ｂａｃ　ｔ
ｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ）　Ｍ　Ｊ　−２３３（Ｆ
ＥＲＭ　　Ｐ−３０６８）　。

ブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｊｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）　ＭＪ−２３３−ＡＢ−４１（
ＦＥＲＭ　Ｐ−３８１２）などが挙げられる。

本発明においては、前記反応■及び反応◎に用いられる
菌株は、上記ブレビバクテリウム属に属する微生物の菌
体又はその処理物が好ましく用いられ、特にブレビバク
テリウム・フラバムＭＪ−２３３（ＦＥＲ？Ｉ　　Ｐ−
３０６８）　、ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２
３３−ＡＢ−４１（ＦＥＲＭ　　Ｐ−３８１２）等の菌
体を用いるのが好ましい。

上記ブレビバクテリウム屈に属する微生物を用いると、
特に酵素活性の低下もなく、反応に使用した微生物菌体
の再使用が可能である。

上記Ｃ）ずれの反応も通常の酵素反応と同様に例えばＯ
，１Ｍリン酸緩衝液あるいは水等でｐＨを６〜９に調整
した水溶液中で、約２０〜約５０℃、好ましくは約３０
〜約４０℃の温度で通常約１〜約７２時間行われる。イ
ンドール又は５−オキシインドールの反応時の使用量に
は特に制限はないが、一般には０．１−２０％（ｗｔ／
ｖｏｌ）の濃度範囲で使用するのが適当である。また、
フマル酸又はその塩とアンモニウムイオン濃度は特に制
限されるものではないが、一般には０．１〜２０％（ｗ
　ｔ　／　ｖ　ｏ　ｌ　）が適当に用いられる。該反応
に使用される菌体又はその処理物の使用量は、一般に０
．１〜１０％（ｗｔ／ｖｏｗ）の濃度で使用することが
出来る。

なお、上記菌株の培養は、通常用いられる合成培地或い
は天然培地を用いて行うことが出来る。しかして炭素源
としては、エシェリヒア属、プロテウス属及びエルビニ
ア属の場合には、グルコース、グリセロール、フラクト
ース、シュクロース、糖蜜等の炭水化物が使用できる。

一方プレビバクテリーウム属の場合には、上記の炭水化
物の他にエタノールを炭素源として用いることが出来る
。また、窒素源としての、トリプトン、酵母エキス、コ
ーン・スチープリカー、カゼインの加水分解物等の天然
有機窒素源の多くは窒素源と共に炭素源にもなり得る。

培養は、振盪培養成いは通気攪拌槽培養などの好気的条
件下に行うことが出来る。培養温度は一般に２０〜５０
℃であり、培地中の培地のＩＩ）Ｈは中性または微アル
カリ性付近に維持することが望ましい。培養期間は、通
常約５時間〜約３日である。

上記のような培養方法によって得られた菌体、又はその
処理物を用いて、インドール又は５−オキシインドール
とフマル酸又はその塩とアンモニウムイオンから、イン
ドールを用いた場合はＬ−トリプトファン、５−オキシ
インドールを用いた場合はＬ−５−オキシトリプトファ
ンを生成せしめることが出来る。

なお、本発明において「処理物」とは、菌体を超音波処
理等により破砕した破砕物、更には公知の手法により担
体等に微生物菌体又はその破砕物を固定したものをも包
含する。

反応液中に生成したし一トリプトファン等の分離・精製
は、イオン交換樹脂、活性炭１等による吸着、脱着処理
等の公知の方法により行うことが出来る。

以下、実施例にて本発明を具体的に説明する。

参考例−１：ブレビバクテリウム・フラバム菌体の調製 第１表に示した組成の培地１００ｍｊ１２組を５００ｍ
２容の三角フラスコ２本に別々に分注し、１２０℃で　
１５分間加熱滅菌したちの各々にエタノールを２容量％
無菌的に添加し、これらにブレビバクテリウム・フラバ
ム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ）
Ｍ　Ｊ　−２３３（ＦＥＲＭ　　Ｐ−３０６８）又はブ
レビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ）　Ｍ　Ｊ−２３３−ＡＢ−４
１（ＦＥＲＭ　　Ｐ−３８１２）を−白金耳ずつ植菌し
、３０℃にて２４時間培養した。

これら二組の培養液２０ｍｆｆ１を２１容ジャーファー
メンタ−中の第２表に示した組成の培地１ｐにそれぞれ
別に接種し、３３℃、ｐＨ７，６、通気ｉＪ−１ｖ　ｖ
　ｍの条件にて攪拌し、エタノール濃度が１．０〜１．
５容量％に保たれるようにエタノールを断続的に添加し
た。３０時間の培養後、培養液を遠心分離（６，ＯＯＯ
ｒｐｍ、１５分）して得た菌体それぞれを供試菌体とし
た。

第　　１　　表 尿素　　　　　　　　　　　　　　　　４．０ｇ硫酸ア
ンモニウム　　　　　　　　　１４．０ｇ第１表の続き ＫＨ，ＰＯ４０，５ｇ Ｋ２ＨＰ○、　　　　　　　　　　　　　０．５ｇＭｇ
５Ｏ，−７Ｈ２００，５ｇ Ｆｅ５０．＝ＩＨ２０６，０＋ｎｇ Ｍｎ　Ｓｏｔ　　・４〜６　Ｈ２０６，Ｏｒｑ酵母エキ
ス　　　　　　　　　　　　　１．０ｇカザミノ酸　　
　　　　　　　　　　　　１．０ｇビオチン　　　　　
　　　　　　　　　２００μｇチアミン塩酸塩　　　　
　　　　　　１００μｇ蒸留水　　　　　　　　　　　
　　１０１００Ｏ第　　２　　表 硫酸アンモニウム　　　　　　　　　２３．０ｇＫ　Ｈ
２Ｐ　０４　　　　　　　　　　　　　０　、　５　ｇ
Ｋ２ＨＰＯ，０１５ｇ Ｍｇ　ＳＯ４・７　Ｈ２００，５ｇ ＦｅＳＯ，・ｌＨ２Ｏ２０ｔｒｙ ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２０２０■ 酵母エキス　　　　　　　　　　　　　　３ｇカザミノ
酸　　　　　　　　　　　　　　　３ｇ第２表の続き ビオチン　　　　　　　　　　　　　　２００μｇチア
ミン塩酸塩　　　　　　　　　　　１００　Ｉｔ、　ｇ
蒸留水　　　　　　　　　　　　　１０１００Ｏ参考例
−２＝エシエリヒア・コリ菌体の８ｇ第３表に示した組
成の培地５　Ｑ　ｍ　Ａを５００ｍ１容三角フラスコに
分注し、１２０℃で１５分間滅菌処理したものにエシェ
リヒア・コ’Ｊ　　（Ｅｓｃｈｅ−ｒｉｃｈｉａ　　ｃ
ｏ目）　Ｋ−１２系菌株（ＡＴＣＣ２７３２５及びＦＥ
ＲＭ　　Ｐ−８８４４及びＦＨＲＭ　　Ｐ−８８４５）
を植菌し、３７℃にて１日振盪培養したものを、同様に
滅菌調製したＬ−）リブトファンを２００μｇ　／　ｍ
　１の濃度で含有するし培地１０００ｍｌに２０　ｍ　
ｌ接種し、同じく３７℃にて８時間振盪培養した。培養
終了液を遠心分離（６０００ｒｐｍ、１５分間。

４℃）して得た菌体を供試菌体とした。

第　　３　　表 Ｕ地− トリプトン　　　　　　　　１０ｇ 酵母エキス　　　　　　　　５ｇ Ｎａ　Ｃｊ！　　　　　　　　　　５　ｇグルコース　
　　　　　　　１ｇ 蒸留水　　　　　　　　　　１β （ｐＨ７，２） 参考例−３＝プロテウス・モルガニ−菌体の調製第４表
に示した組成の培地５　Ｑ　ｍ　Ｉｔをｓｏｏｍ！容三
角フラスコに分注し、１２０℃で１５分間滅菌処理した
ものにプロテウス・モルガニ−（Ｐｒｏｔｅｕｓ　＋ａ
ｏｒｇａｎｉｉ）　ＩＦＯ−３８４８を植菌し、３７℃
にて２４時間振盪培養したものを、同様に滅菌したしく
３７℃にて８時間振盪培養した。培養終了液を遠心分離
（６０００ｒｐｍ、１５分間、４℃）して得た菌体を供
試菌体とした。

第　　４　　表 ＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ／Ｉ！ に２ＨＰ０．　　　　　０．５ｇ／ｊ！！Ｍｇ５Ｏ−，
・７Ｈ２００，５ｇ／ｊ！Ｆ　ｅｓＯｔ　’　７Ｈ２０
６ｐｐｍ ＭｎＳＯ４・ｎＨ２Ｃ）　　　　５　ｐ　ｐｍ酵母エキ
ス°　　　　　　　　　　　１０ｇ／ｌカザミノ酸　　
　　　　　　　　　　　　５　ｇ　／　１２（ｐＨ７，
５） 参考例−４：エルビニア・ヘルビコラ菌体の調製菌株と
してエルビニア・ヘルビコラ（Ｅｒｗｉｎｉａｈｅｒｂ
ｉｃｏｌａ）　　ＡＴＣＣ−２１４３３を用いた以外は
参考例−３と同様の培地及び操作にて３７℃で８時間振
盪培養を行った。培養終了液を遠心分離（６００ｏｒｐ
ｍ、ｔｓ骨分間４℃）して得た菌体を供試菌体とした。

実施例−１ 第５表に示した組成の反応液５０ｍＡ！を５００ｍ１容
三角フラスコに分注したのち、該反応液に参考例−１で
調製したブレビバクテリウム・フラバム　（Ｂｒｅｖｉ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ）　ＭＪ　　２３
３　　（ＦＥＲＭ　Ｐ−３０６８）　　の培養液４　Ｑ
ｍ７！から遠心分離（６０００ｒｐｍ、１５分間、４℃
）により得た菌体と、参考例−２で調製したエシェリヒ
ア・コリ（Ｐ、５ｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｔ）　
Ｋ−１２系菌株　八ＴＣＣ２７３２５の培養液４０ｍｊ
＋から遠心分離（６０００ｒｐｍ、１５分間、４℃）に
より得た菌体とを添加し、３７℃にて２４時間振盪反応
を行った。反応終了後、遠心分離（４０００ｒｐｍ、１
５分間、室温）にて菌体を除去し、その上滑液中、のし
−トリプトファンを定量したところ８００■／βの生成
が認められた。

なお、上記反応液にエシェリヒア・コリ　（Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｔ）　Ｋ−１２系菌株　ＡＴＣ
Ｃ２７３２５の培養液４０ｍ１から回収した菌体のみを
添加して、３７℃にて２４時間振盪反応を行った場合に
は、Ｌ−）リプトファンの生成量は４５０ｇ／Ａであっ
た。

第　　５　　表 インドール　　　　　　　　　　　　２０ｍＭフマル酸
ナトリウム　　　　　　　　　　５０ｍＭ塩化アンモニ
ウム　　　　　　　　　３００ｍＭニコチンアミドアデ
ニン ジヌクレオチド（ＮＡＤ）　　　　　２０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐ　Ｈ８，０）　　　　　　１００ｍＭ実施例−
２ 実施例−１と同様の反応液５　Ｑｍｆｆｉに参考例−１
で調製したブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｎ）　ＭＪ−２３３
ＡＢ−４１（ＰＨＩ？Ｍ　　Ｐ−３８１２）の培養液４
　Ｑ　ｍ　Ｉｔから得た菌体と、参考例−２で調製した
エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏ
）ｉ）　Ｌ１２系菌株（ＦＥＲＭ　　Ｐ−８８４４）の
培養液４０ｍｌ１からの菌体とを添加し、３７℃にて１
５時間振盪反応を行い、反応終了後の上清液中のＬ−ト
リプトファンを定量したところ３２００■／ｊ！であっ
た。

反応上清液４０ｍβをアンモニア型強酸性イオン交換樹
脂（ダイヤイオン５Ｋ−ＩＢ、三菱化成製）のカラムを
通してＬ−）リプトファンを吸着させたのち、アルカリ
溶液で溶出後、濃縮しＬ−トリプトファンの粗結晶を析
出させた。これをアセトンで洗冷し乾燥してＬ−）リプ
トファンの結晶を９５■をえた。

なお、実施例−１と同様にエシェリヒア・コリ（Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｔ）　Ｋ−１２系菌株　（
ＦＥＲＭ　　Ｐ−８８４４）の培養液４　Ｑｍｆｆから
得た菌体のみを反応に供した場合には、Ｌ−トリプトフ
ァンの生成量は４６０　ｍ　ｇ　／　Ｒであった。

実施例−３ 実施例−１と同様の反応液５　Ｑ　ｍ　ｊ２に参考例−
１で調製したブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖ
ｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ）　Ｍ　Ｊ　−
２３３Ａ　Ｂ　−４１（ＦＥＲ？Ｉ　　Ｐ’−３８１２
）の培養液４　Ｑ　ｍ　Ｉｔから得た菌Ｇ 体と、参考例−２で調製したエシェリヒア・コリ（Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｉ）　Ｋ−１２系菌株（
ＦＥＲＭ　　Ｐ−８８４５）の培養液４０ｍｊ！から得
た菌体とを添加し、３７°Ｃにて１５時間振盪反応を行
い、反応終了後の上清液中のＬ−トリプトファンを定量
したところ３１００　ｍ　ｇ　／　Ａであった。

反応上清液４０ｍｊ！をアンモニア型強酸性イオン交換
樹脂（ダイヤイオンＳＫ−Ｉ　Ｂ、三ｉ　化成製）のカ
ラムを通してＬ−１−リプトファンを吸着させたのち、
アルカリ溶液で溶出後、濃縮しＬ−トリプトファンの粗
結晶を析出させた。これをアセトンで洗浄し乾燥してＬ
−トリプトファンの結晶を８７ｍｇを得た。

なお、実施例−１と同様にエシェリヒア・コＩＪ（Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｔ）　Ｋ−１２系菌株　
（［’ＥＲＭ　　Ｐ−８８４５）の培養液４９　ｍ　ｊ
！から得た菌体のみを反応に供した場合にはＬ−）リブ
トファンの生成量は４３０　ｍ　ｇ　／　ｊ！であった
。

実施例−４ 実施例−１と同様の反応液５０ｍｊ＋に参考例−１で調
製したブレビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ　　ｆｌａｖｕｍ）　Ｍ　Ｊ　　２３３
　　Ａ　Ｂ　　４１　（ＦＥｌ？Ｍ　　Ｐ−３８１２）
の培養液４０　ｍ　１２から得た菌、体と、参考例−３
で調製したプロテウス・モルガニ−（Ｐｒｏｔｅｕｓ　
ｍｏｒｇａｎｉｉ）　ＩＦＯ−３８４８の培養液８０　
ｍ　Ｉｔから得た菌体とを添加し、３７℃にて２４時間
振盪反応を行い、反応終了後の上清液中のＬ−トリプト
ファンを定量したところ１０５０ｍｇ／ｌであった。

実施例−２と同様の操作で反応上清液４　Ｑｍｊ！から
Ｌ−トリプトファンを回収したところ３２ｍｇの結晶を
得た。

なお、実施例−１と同様にプロテウス・モルガ−１−（
Ｐｒｏｔｅｕｓ　ｍｏｒｇａｎｉｉ）　ＩＦＯ−３８４
８の培養液８０　ｍ　Ｊから得た菌体のみを反応に供し
た場合にはＬ−）リブトファンの生成は４３０ｍｇ／ｊ
！であった。

実施例−５ トリプトファナーゼ保有菌株として、プロテウス・モル
ガニ−の代わりに参考例−４で調製したエルビニア・ヘ
ルビコラ（Ｅｒｗｉｎｉａ　ｈｅｒｂｉｃｏｌａ）ＡＴ
ＣＣ−２１４３３を用いた以外は実施例−４と同様の操
作にて３７℃で２４時間反応を行った。反応終了後の上
清液中のし一トリプトファンを定量したところ７１０ｍ
ｇ／ｊ！の生成が認められた。

なお、実施例−１と同様にエルビニア・ヘルビコラ（Ｅ
ｒｗｉｎｉａ　ｈｅｒｂｉｃｏｌａ）　　ＡＴＣＣ−２
１４３３の培養液８Ｑ　ｍ　１から得た菌体のみを反応
に供した場合にはＬ−トリプトファンの生成量は３２０
ｍｇ／！であった。

実施例−６ 第６表に示した組成の反応液５０　ｍ　Ｉｔを５００ｍ
１２容三角フラスコに分注したのち、実施例−２と同様
の操作にて反応を行い、反応終了後の上滑液中のＬ−５
−オキシトリプトファンを定量したところ２５００　ｍ
　ｇ　／βであった。

反応上清液４　Ｑ　ｍ　ｊ！をアンモニア型強酸性イオ
ン交換樹脂（ダイヤイオンＳＫ−Ｉ　Ｂ、三菱化成製）
のカラムを通してＬ−５−オキシトリプトファンを吸着
させたのち、アルカリ溶液で溶出後、濃縮しＬ−５−オ
キシトリプトファンの粗結晶を析出させた。これをアセ
トンで洗浄し乾燥してＬ−５−オキシトリプトファンの
結晶を７２ｍｇを得た。

なお、実施例−１と同様にエシェリヒア・コリ（Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｉ）　Ｋ−１２系菌株（Ｆ
ＥＲＭ　　Ｐ−８８４４）の培養液４　Ｑ　ｍ　ｊ！か
ら得た菌体のみを反応に供した場合には、Ｌ−５−オキ
シトリプトファンの生成量は４２０　ｍ　ｇ　／　Ｉｔ
であった。

第　　６　　表 ５−オキシインドール　　　　　　　　２０ｍＭフマル
酸ナトリウム　　　　　　　　　５０ｍＭ塩化アンモニ
ウム　　　　　　　　　３００ｍＭニコチンアミドアデ
ニン ジヌクレオチド（ＮＡＤ）　　　　２０ｍＭリン酸Ｇ　
缶液（ｐＨ８，０）　　　　　　１００ｍＭ実施例−７ エシェリヒア・コリ　（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃ
ｏｌｔ）　Ｋ−１２系菌株（ＦＥ［１Ｍ　　Ｐ−８８４
４）の代わりにエシェリヒア・コリ　（Ｅｓｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａ　　ｃｏｌｉ）　Ｋ−１２系菌株（ＦＥＲＭ　
　Ｐ−８８４５）を用いた他は実施例−６と同様の操作
にて反応を行い、　反応終了後の上清液中のし−５−オ
キシトリプトファンを定量したところ２５６０ｍｇ／β
であった。

反応上清液４０　ｍ　Ｉｔをアンモニア型強酸性イオン
交換樹脂（ダイヤイオンＳＫ−Ｉ　Ｂ、三菱化成製）の
カラムを通してＬ−５−オキシトリプトファンを吸着さ
せたのち、アルカリ溶液で溶出後、濃縮しＬ−５−オキ
シトリプトファンの粗結晶を析出さ“せた。゛これをア
セトンで洗浄し乾燥してＬ−５−オキシトリプトファン
の結晶を７　Ｑｍｇを得た。

なお、実施例−１と同様にエシェリヒア・コリ（Ｅｓｃ
ｈｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｔ）　Ｌ１２系菌株（ＦＥ
ＲＭ　　Ｐ−８８４５）の培養液４０　ｍ　ｊ！から得
た菌体のみを反応に供した場合には、Ｌ−５−オキシト
リプトファンの生成量は４２０　ｍ　ｇ　／　ｎであっ
た。

実施例−８ 第６表に示した組成の反応液５０ｍ１を５００ｍＩ！、
容三角フラスコに分注したのち、実施例−４と同様の操
作にて反応を行い、反応終了後の上清液中のＬ−５−オ
キシトリプトファンを定量したところ８５’　Ｏｍ　ｇ
　／　１であった。

反応上清液４０ｍｊ！をアンモニア型強酸性イオン交換
樹脂（ダイヤイオン５Ｋ−Ｉ　Ｂ、三菱化成製）のみラ
ムを通してＬ−５−オキシトリプトファンを吸着させた
のち、アルカリ溶液で溶出後、濃縮しＬ−５−オキシト
リプトファンの粗結晶を析出させた。これをアセトンで
洗浄し乾燥してＬ−５−オキシトリプトファンの結晶を
２７ｍｇを得た。

なお、実施例−１と同様にプロテウス・モルガニ−（Ｐ
ｒｏｔｅｕｓ　ｍｏｒｇａｎｉｉ）　ＩＦＯ−３８４８
の培養液８０　ｍ　ｊ＋から得た菌体のみを反応に供し
た場合には、Ｌ−５−オキシトリプトファンの生成量は
４００ｍｇ／Ｉｔであった。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）Ａ：フマル酸からＬ−リンゴ酸を生成し得る酵素
   若しくは該酵素を含有する微生物菌体又はその処理物。 Ｂ：Ｌ−リンゴ酸からオキザロ酢酸を生成しうる酵素若
   しくは該酵素を含有する微生物菌体又はその処理物。 Ｃ：トリプトファナーゼ若しくはトリプトファナーゼを
   含有する微生物菌体又はその処理物。 上記のＡ、Ｂ及びＣからなる酵素系の存在の下に、フマ
   ル酸、アンモニウムイオン及び一般式▲数式、化学式、
   表等があります▼（但し、Ｒは水素原子又は 水酸基を示す） で表わされるインドール類から対応するＬ−トリプトフ
   ァン類を生成することを特徴とするＬ−トリプトファン
   類の製造法。
2. （２）Ａがブレビバクテリウム属に属する微生物の菌体
   であり、Ｂ及びＣがエシエリヒア属、プロテウス属若し
   くはエルビニア属に属する微生物の菌体又はその処理物
   である特許請求の範囲第１項記載の方法。