JPS63122686A - Ｙｌ−０３５８ｍ−ｂ物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、抗腫瘍作用および抗菌作用を有するＹＬ−０
３５８Ｍ−Ａ物質（特願昭６１−１８９１１．４号）の
製造中間体として有用なＹＬ　−０３５８Ｍ−、Ｂ物質
およびその製造法に関する。

（発明が解決しようとする問題点、解決するための手段
） 本発明に係るＹＬ−０３５８Ｍ　−Ｂ物質は、つぎの化
学構造式並びに理化学的性状によって特定される新規化
合物である。

化学構造式： ％式％： （１）　　紫外線吸収スペクトル：メタノール紫外線吸
収スペクトルを第１図に示す。

（２）　　赤外線吸収スペクトル：臭化カリウム錠剤法
による赤外線吸収スペクトルを第２図に示す。

（３）　　水素核磁気共鳴スペクトル二重クロロポルム
中での５００ＭＨｚのＩＨ核磁気共鳴スペクトルを第３
図に示す。

（４）　　炭素−１３−核磁気共鳴スペクトル二重クロ
ロホルム中での１２５ＭＨｚの１３（＋核磁気共鳴スペ
クトルを第４図に示す。

（５）　　質量分析：ＦＡＢ−ＭＳに於て３９２　（Ｍ
Ｈ”　）及Ｄ　４１４　（Ｍ　＋　Ｎａｊ　）にシグナ
ルが検出される。

（６）分子量：３９１ （力　分子式：Ｃ２□Ｈ１，Ｎｏ。

（８）　　外　観：無色結晶 （９）　　塩基性・中性・酸性の区別：塩基性物質ＯＱ
溶解性：メタノール、エターノル、７セトン酢酸エチル
およびクロロホルムに可溶 αυ　薄層クロマトグラフィーのＲｆ値ニジリカケル６
０　Ｆ２５４　（メルク社製）を使用。検出はＴＪＶ２
５４　ｎ　ｍ表１ （発明の効果） 本発明で得られるＹＬ　−０３５８Ｍ　−Ｂ物質は。

先に本発明者等が見出した下式で示されるＹＬ　−０３
５８Ｍ　−Ａ物質（ＦＴ）を製造するための中間体とし
て有用である。

すなわち１本発明のＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質は。

これを酵素的にあるいは化学的に酸化することにより、
容易に抗＠瘍剤および抗菌剤として有用なＹＬ−’０３
５８　Ｍ　−Ａ物質に導くことができる。

（製造法） ＹＬ　−０３５８Ｍ　−Ｂ物質は、サツカロポリスポラ
属に属するＹＬ　−０３５８Ｍ　−Ｂ物質生産菌を培養
し、培養物からＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質を採取するこ
とにより製造することができる。

この製造法で使用するＹＬ　−０３５８Ｍ　−Ｂ物質生
産菌の一例としては、沖縄県鳩間島の土壌より分離した
サツ力ロポリスボラグリセオプルプレア（５ａｃｃｈａ
ｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　ｇｒｉｓｅｏｐｕｒｐｕｒｅ
ａ　）　ＹＬ　　０３５８Ｍ株（微工研菌寄第８８６２
号）を挙げることができる。この菌株の菌学的性状を以
下に記す。

１、形態 本菌株は、各種寒天培地上で比較的長く分枝した基中菌
糸を形成し、そこから分枝した短かし・胞子柄の末端に
は１通常１個の基中胞子が観察される。基中菌糸はチロ
シン寒天培地・　イー′ト麦芽寒天培地・７タ一チ無機
塩　Δ寒天培地上で灰味紫または紫味灰色を呈す。　　
Ｉ！培養が進むと基中菌糸は桿菌状に断裂する。　　・
ン寒天培地上などで形成される気菌糸は、白（・粉状で
、その先端には胞子鎖が認められる。

電子顕微鏡下では胞子はほぼ長だ円形で０．４μｍ〜０
．６μｍ　Ｘ　０．７μｍ〜０．９μｍの大きさで、成
熟した場合１０個以上の連鎖が観察される。また胞子表
面は毛様構造をもつさやにおおわれている。

２、各種寒天培地上の性状 各釉寒天培地上の性状は、以下に示すとおりである。特
に記載しないかぎり、２８℃で２１日間培養し、常法に
従って観察したものである。色調の記載については色の
標準（日本色彩研究所）によった 表２ ＹＬ　−０３５８株 Ｇ　中程度、灰味紫 役物（１％） Ａ　着生せず ）イ母エキス（０，２％） （Ｋ’：ｒ　Ｍ　４ｉｌ、　　　　　　　　Ｒ灰味紫（
注）Ｇ：生育及び集落表面の菌叢色　Ａ：気菌糸の着生
及びその色相Ｒ：裏面の色相　　　Ｓ：可溶性色素 ３、生理的性質 表３ （注）生育温度は各温度（５，１０，１５，２０，２５
，２８，３０゜３３．３７，４０，４５．５０℃）で、
　　７−２１日までの観察結果。ミルクに対する作用は
３７°Ｃで３−２１日までの観察結果。それ以外は、特
に指摘のな−・かぎり、２８℃で２週間後の観察結果を
示す。

４、炭素源の資化性 （プリドハム・ゴドリーグ寒天地培地、２８°Ｃ培養）
表・１ ５、細胞壁及び全細胞加水分解抽出物などの分析ＬＥＣ
ＨＶＡＬ　Ｉ　ＥＲらの方法（ＬＥＣＨＶＡＬＩＥＲ，
ＭＰ。

ｅｔａｌ；ＰＰ２７７　２８３　１ｎＤＪＥＴＺ、Ａｅ
ｔａｌｅｄ、。

Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ　Ｔａｘｏｎｏｍｙ、　ＳＩ
Ｍ　５ｐｅｃｉａｌ　ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ　Ａ６．
１９８０　）に従い分析を行った結果メン−ジアミノピ
メリン酸（ｍｅｓｏ　−ＤＡＰ　）が検出された。また
、糖成分としてアラビノースとガラクトースを含むこと
が認められたが、ミコール酸は検出されなかった。

以上の性状を要約すると、　　ＹＬ−０３５８Ｍ株は。

基生菌糸がチロシン寒天培地上などで灰味紫〜紫味灰色
を呈し、培養が進むと桿菌状に断裂し。

基生菌糸から分枝した短かい胞子柄の末端には通常１個
の基土胞子が観察される。白色粉状の気菌糸は先端に１
０個以上の胞子鎖を形成し、胞子表面は毛様構造をもつ
さやにおおわれている。

グリセリン・アスパラギン寒天培地、スターチ・無機塩
寒天培地、イースト麦芽寒天培地などで茶色の可溶性色
素を産生ずる。細胞壁の分析で。

特徴的アミノ酸としてメン−ジアミノピメリン酸（ｍｅ
ｓｏ　−ＤＡＰ　）が、糖成分としてアラビノース。

ガラクトースが検出された。

これらの結果より、　　ＹＬ−０３５８Ｍ株はサツカロ
ポリスボラ（５ａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐｏｒａ　）
属（Ｊ、　Ｌａｃｅｙｓ’。

ジャーナル・オブ・ゼネラルマイクロバイオロジー８８
巻、７５頁、　　１９７５年）に属する菌株と考えらね
た。そこでサツカロポリスボラ　ヒルスタ（Ｓ、　ｈｉ
ｒｓｕｔａ　）　ＫＣＣＡ　−０１７０株と実際に比較
し。

また参考のためサツカロポリスボラ　ヒルスタサブエス
ピー　コーベエンシス（Ｓ、ｈｉｒｓｕｔａ　５ｕｂｓ
ｐ。

ｋｏｂｅｎｓｉｓ　）　ＫＣ−６６０６株と文献上で比
較した（Ｔ、　Ｄｅｕｓｈｉｅｔ　ａ＋、ジャーナル・
オブ・アンティバイオティクス、３２巻、１７３頁、　
　１９７８年）。その結果を下表５に記す。

表５ 表に示すように　ＹＬ　−０３５８Ｍ株は、　ＫＣＣＡ
−０１７０株、　　ＫＣ−６６０６株と一致する点が多
く認められるものの、生育温度範囲が低（・こと、及び
入味紫色を呈する発育の色調にお−・て両菌株と大きく
異なって（・る。また、メラニン様色素の生成が弱陽性
であること、牛乳の凝固が陽性であることなど生理的性
質において既知菌種と相違がみられる。以上のことがら
ＹＬ−０３５８Ｍ株はサツカロポリスポラ属に属する既
知の菌種とは各種の性状が異なっているため、サツカロ
ポリスボラ属の新種と考えられる。そこで、特徴的な発
育の色に基づきサツカロポリスボラ　グリセオプルプレ
ア　ニス・ビー　ノブ（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓｐ
ｏｒａｇｒｉｓｅｏｐｕｒｐｕｒｅａ　５ＵＺＵＫＩＩ
ＮＡＧＡＩ　ａｎｄ　ＳＡＩ↑ｏＨｇｐ、　ｎｏｖ）　
　と命名し、タイプストレインとしてＹＬ−０３５８Ｍ
株が工業技術院微生物工業技術研究所に受託番号微工研
菌寄第８８６２号として受託されている。

（培養法） 本発明の製造法で用いられる微生物は天然の土壌より分
離して取得したものであるが、前記微生物工業技術研究
所に寄託した菌株の凍結乾燥品を復元することによって
容易に取得することができる。この微生物は１人工的に
また自然に変異をオにしやすいが２本発明のい５ＹＬ−
０３５８Ｍ株は天然から分離された放線菌、ある（・は
これを紫外線、Ｘ線、化学薬剤などで人工的に変異させ
た菌株及びそれらの自然変異株をも包含するものである
。ＹＬ　−０３５８Ｍ−Ｂ物質生産菌の培養は一般微生
物の培養方法に準じておこなわれるが通常は液体培地に
よる深部培養法が有利である。培養に用いられる培地と
しては、該生産菌が利用する栄養源を含有する培地であ
ればよい。すなわち合成培地、半合成培地あるいは天然
培地が用いられ、培地の組成は、たとえば炭素源として
は　Ｄ−キシロース、グルコース、Ｄ−フラクトース、
Ｌ−ラムノース、マンニトール、グリセリン、デキスト
リン、殿粉、植物油などが、窒素源としては肉エキス、
ペグトン。

グルテンミール、綿実粕、大豆粉、落花生粉。

魚粉、コーンスチーブリカー、乾燥酵母、酵母エキス、
硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウム。

尿素その他の有機または無機の窒素源が用いられる。ま
た金属としてＮａ、　Ｋ、　Ｃａ、　Ｚａ、　Ｆｅなと
の硫酸塩、硝酸塩、塩化物、炭酸塩、燐酸塩などが必要
に応じて添加される。さらに必要に応じて、メチオニン
、システィン、シスチン、オレイン酸メチル、ラード油
、シリコン油、界面活性剤などの抗生物質生成促進物質
又は消泡剤が適宜使用される。

培養条件としては好気的条件下に培養するのが一般的に
有利で、培養温度は約１５〜３７℃の範囲が望ましく、
好ましくは約２８°Ｃ附近が用いられ、培地のｐＨは約
５〜１０．好ましくは約６〜８の範囲に保持すると好結
果が得られる。

培養期間は培地の組成、温度などによって変動するが、
一般にｌ〜５日程日程上く、培養終了時に目的物質が選
択的に蓄積される。

培養物より本発明の目的物を単離採取するには通常の微
生物の培養物より抗生物質な単離する方法が適用される
。ＹＭ−０３５８ＭＢ物質は培養液中に含有されるので
、遠心分離または濾過により菌体を除去した後、濾過液
から有効物質の抽出をおこなう。すなわち適当な溶剤に
対する溶解性および溶解度の差、溶液からの析出性およ
び析出速度の差９種々の吸着剤に対する吸着親和性の差
、２種の液相間における分配の差などを利用する一般の
抗生物質の製造に用いられる手段によって９分離、採取
、精製される。

この方法は必要に応じて単独で用いられ、あるいは任意
の順序に組合せ、また反覆して適用できる。つぎに２実
施例により本発明をさらに詳細に説明する。

実施例 白色デキストリン２．０％、グルコース０５％、ポリベ
フトン０．５％、酵母エキス０５％、コーン・ステイー
プ・リカー０．５％、プレイン・ハード・インツー−ジ
ョンｏ、５２％及び炭酸カルシウム０．２％を含む培地
（ｐＨ８，０）を作製し、これを５００ｍ１三角フラス
コに各６０ｒｎｌずツ分注シ、１２０°Ｃで２０分間滅
菌したものに、　ＹＳ寒天培地上に生育させたサツカロ
ポリスボラ・グリセオプルプレアの菌糸をかき取って接
種し、２８℃で４８時間振盪培養を行ない種培養液とす
る。つぎにポテト・スターチ３．０％、小麦胚芽１．０
％、コプラ・ミール１．０％、フェザ−・ミール０２％
及び炭酸カルシウム０．１５％を含む培地（ｐ■ｒ　７
．０　）を４５を作製し。

これを５００ｍ４三角フラスコに各６０ｍｔずつ分注し
。

１２０℃で２０分間滅菌したものに種培養液を３．０％
の割合で植菌した。２８℃で６５時間振盪培養を続ける
。

このようにして得られた培養液にラジオライト＃６００
（昭和化学工業裂）を加えて攪拌の後、濾過するとＦ液
３８ｔが得られる。このＦ液に０．１規定水酸化ナトリ
ウム溶液を加えてｐＨ８，５に調整した後。

３８ｔの酢酸エチルを加えてよ（攪拌する。酢酸エチル
層を分離した後、これにｐＨ３０に調整した塩酸水８ｔ
を加えてよく攪拌する。塩酸水層を分離した後９重曹を
添加しＣｐｎ　８．５に調整した後、酢酸エチル８１を
加えてよく攪拌する。酢酸エチル層を分離して、これに
無水硫酸ナトリウムを加えて脱水する。つぎに硫酸ナト
リウム濾別した後、酢酸エチル層を減圧濃縮すると不溶
物が生成するので戸別し、Ｆ液を濃縮乾固すると茶色粉
末４．５ｇが得られる。得られた茶色粉末４５ｇを少量
のクロロポルムに溶解させ、ワコー・ゲルＣ−２００（
和光紬薬’ＪＪ　）　９０　ｇをクロロホルムにて充填
したカラムに乗せ、クロロホルム：メタノール（５０：
　１　）ヲ展開溶剤とするカラム・クロマトグラフィー
を行なう。ＹＬ　−０３５８Ｍ−ｆ３物質の検出には簡
便なシリカゲル薄層クロマト・グラフィーを利用した。

すなわちＢ出液の各分画なシリカゲル６０Ｆ２ｓ＜　（
メルク社製）にスポットして、クロロホルム：メタノー
ル（５：１）の混合溶媒で展開し、紫外線ランプ下でＲ
ｆｏ、３５を示すＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質を検出する
。

ＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質の存在する両分を集めて減圧
濃縮すると淡黄色物質２．５ｇが得られる。淡黄色物質
２．５ｇを酢酸エチルｌｏｍｔに溶解させて２，５°Ｃ
に放置すると結晶が生成する。つぎに生成した結晶を戸
数して減圧下乾燥すると純粋なＹＬ−０３５８Ｍ　−Ｂ
物質が無色結晶として１．９ｇ得られた。

ＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質の化学構造式および理化学的
性状は、前述の通りである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、　　ＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質の紫外線吸収
スペクトルを示す。 第２図は、　　ＹＬ　　０３５８　Ｍ　−Ｂ物質の赤外
線吸収スペクトルを示す。 第３図は、　　ＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質の’Ｈ核磁気
共鳴スペクトルを示す。 第４図は、　ＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質の’Ｈ核磁気共
鳴スペクトルを示す。 特許出顯人　山之内製薬株式会社 代理人　弁理士　藤　野　清　也 ・・長井省三 第１　図 第２図 第３図 第４図

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示されるＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質。
2. （２）ＹＬ−０３５８Ｍ−Ｂ物質生産能を有するサッカ
   ロポリスポラ属に属する菌株を培養し、培養液よりＹＬ
   −０３５８Ｍ−Ｂ物質を採取することを特徴とするＹＬ
   −０３５８Ｍ−Ｂ物質の製造法。
3. （３）サッカロポリスポラ属に属する菌株がサッカロポ
   リスポラ・グリセオプルプレアＹＬ−０３５８Ｍ（微工
   研菌寄第８８６２号）である特許請求の範囲第２項記載
   の製造法。