JPS6312879B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は免疫アジユバント活性及び細菌感染予
防・治療効果を有し、かつ優れた制癌効果が認め
られる新規ムラミルジペプチド誘導体、更に詳し
くは、一般式（）で示されるムラミルジペプチ
ド誘導体に関する。 （上記式中ＸはＬ−アラニン、Ｌ−セリン、Ｌ−
バリン、グリシン等のアミノ酸残基を、Ｙは−
OR又は

【式】を意味 し、Ｒは分枝を有することもある低級乃至中級ア
ルキル基又はアラルキル基を、ｎは１〜６の整数
を、A₁及びA₂は各々独立して水素原子、中級乃
至高級ミコロイル基又は分枝及び／又は不飽和結
合を有することもある低級乃至高級脂肪酸残基を
意味し、Acylは低級アシル基を意味する。但し、
A₁が水素原子でＹが低級アルコキシ基である場
合を除く。） 本発明者等は、免疫アジユバント物質として有
用な人型結核菌、BCG、その他ミコバクテリア
ならびに細胞寄生性細菌の細胞壁のアジユバント
活性発現の最小構造単位であるＮ−アセチルムラ
ミルジペプチドの誘導体として、ムラミルジペプ
チド体の糖６位水酸基をミコール酸又は中乃至高
級脂肪酸でエステル化したエステル誘導体を、さ
らにはイソグルタミン部分のカルボキシル基にハ
イドロキシアルキルアミノ又はアルキレンジアミ
ンを介して同様の脂肪酸類を導入した誘導体が、
免疫アジユバント活性及び細菌感染防禦活性又は
抗腫瘍活性を有し、感染症の予防治療効果又は制
癌効果を期待しうることを見出し、先に出願した
（特開昭52−46020号、特開昭52−156812号、特願
昭53−37960号及び特願昭53−91893号参照）。 しかしながら、これ等ムラミルジペプチド誘導
体は治療的、実用的観点からして、細胞性免疫が
主役を演ずると考えられる細胞障害活性及び抗腫
瘍活性が必ずしも満足すべきものでない。 従つて、本発明者等は更に優れた細菌感染防禦
活性、免疫アジユバント活性（細胞障害活性）及
び／又は抗腫瘍活性を有する化合物について鋭意
検討を試みた結果、一般式（）で示される化合
物が強いアジユバント活性及び細菌感染防禦活性
を有し、特に既存のムラミルジペプチド誘導体と
比べ優れた抗腫瘍活性を持つことを見出し本発明
を完成した。 本発明化合物の効果は下記する通り。 (1) 細胞傷害活性 試料は燐酸バツフアー生理食塩水（PBS）
に懸濁し、マストサイトーマP815−X2腫瘍細
胞２×10⁴個とともにC57BL／6Jマウス（１群
10匹）腹腔内に投与し、Brunner等の方法
（Immunology18、501〜515、1970）により測
定した。

【表】 (2) 微生物感染防禦効果 本発明化合物及び対照化合物の感染防禦効果
を以下のごとき方法で求めた。 本発明化合物及び対照化合物は1μmole／ml
のPBS（PH7.4）溶液となるよう調製した。 調製した薬剤液の0.2mlを感染24時間前に皮
下投与した。 感染は表２に示す如くE.coli E77156の２段
階の接種菌量によりSTD−ddYマウス（５週
令、25ｇ）の背部に皮下感染した。 なお、高接種菌量を感染した薬剤無処置対照
群は全例死亡するが、低接種菌量の対照群は大
部分が死亡するが５〜20％程度生在する場合も
あつた。効果判定は感染７日後のマウス生存率
（％）から求めた。 その結果、表２で示される通り本発明化合物
は優れた感染防禦効果を呈した。

【表】 ＊ 生存率は表中記載化合物処置群と無処置
群の差を示した。
(3) 抗腫瘍活性 BALB／Ｃ雌マウスのメチルコラントレン
で誘発した線維肉種細胞（Meth.A）５×10⁴個
と試料をPBSPH7.4に懸濁し、同系のBALB／
Ｃマウスの皮内に投与し、４週間後の線維肉種
の増殖抑制効果を調べた。（表−３）

【表】 ＊ 完全腫瘍増殖抑制マウス数／使
用マウス数
表１〜表３に記した本発明化合物１〜７及び対
照化合物１〜２は下記の通り。 本発明化合物−１：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄ−イソグルタミンオクチルエステ
ル 本発明化合物−２：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄ−イソグルタミンステアリルエス
テル 本発明化合物−３：６−Ｏ−ステアロイル−Ｎ−
アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグ
ルタミンステアリルエステル 本発明化合物−４：６−Ｏ−ステアロイル−Ｎ−
アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグ
ルタミンメチルエステル 本発明化合物−５：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄ−イソグルタミン１−メトキシカ
ルボニル−５−ステアロイルアミノペンチルア
ミド 本発明化合物−６：６−Ｏ−ノカルドミコロイル
−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−セリル−Ｄ−イ
ソグルタミンメチルエステル 本発明化合物−７：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
バリル−Ｄ−イソグルタミン１−メトキシカル
ボニル−５−ノカルドミコロイルアミノペンチ
ルアミド 対照化合物−１：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−ア
ラニル−Ｄ−イソグルタミン 対照化合物−２：Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−バ
リル−Ｄ−イソグルタミン１−カルボキシ−５
−ノカルドミコロイルアミノペンチルアミド 本発明化合物は下記反応工程に従つて製するこ
とができる。 （式中置換基A₁、A₂及びＸ、Ｙ、ｎは前記定義
の通り。） 即ち、本発明化合物（）はアシルムラミン酸
（）に式（）で示される化合物を反応させる
方法（ａ法）を採用してもよく、ムラミルジペプ
チド体（）に式（）で示される化合物を反応
させる方法（ｂ法）を、又、アシルムラミルジペ
プチド体（）はムラミルジペプチド体（）を
ジアゾメタン体（）と反応させる方法（ｃ法）
を採用してもよい。 ａ法を採用する場合に於ける縮合反応即ち、
（）＋（）→（）の反応は一般にペプチド合
成で繁用される縮合方法、カルボジイミド法、ア
イントツプ法、活性エステル法及び酸無水物法等
が採用しうる。 例えば、式（）で示される化合物と式（）
で示される化合物をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド又はテトラヒドロフラン或はこれらの混合物に
溶解し、これにＮ−ヒドロキシコハク酸イミド、
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロ
キシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシ
イミド、ペンタクロロフエノール等の一種とカル
ボジイミド（ジシクロヘキシルカルボジイミド又
は１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）−カルボジイミド或はその塩酸塩）と要すれ
ば、有幾塩基例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチ
ルモルホリン、Ｎ−エチルモルホリンを加え、通
常０〜約60℃程度で数時間〜約２日間反応させる
ことによつて達せられる。 ｂ法を採用する場合に於ける縮合反応、即ち
（）＋（）→（）の反応に際しては（）の
活性体、例えば活性エステル体、酸無水物体、酸
クロライド体等が採用される。 例えば式（）で示される化合物の酸クロリイ
ド体と式（）で示される化合物をテトラヒドロ
フラン又はクロロホルム或はこれらの混合溶媒中
にて反応させる。要すればピリジン等の有機塩基
の存在下、約−15〜60℃程度、好ましくは０〜25
℃で数十分〜約１日間反応させることによつて達
せられる。 ｃ法を採用する場合に於ける縮合反応、即ち
（）＋（）→（）又は（）＋（）→（）
の反応に際しては式（）又は（）で示される
化合物を、エーテル、テトラヒドロフラン、ベン
ゼン、クロロホルム或はこれらの混合溶媒中でジ
アゾメタン体（）、例えばジアゾメタン、フエ
ニルジアゾメタン、ジフエニルジアゾメタンの一
種を加え、約０〜50℃程度、好ましくは約20℃付
近で数分〜約18時間程度反応させることによつて
達せられる。 ａ法及びｂ法を採用するに際して式（）及び
（）で示される化合物の糖１位水酸基を糖の合
成化学で通常使用されるアラルキル基、例えば低
級アルキル基、ハロゲン原子、ニトロ基もしくは
低級アルコキシ基等の一個以上が置換することも
あるベンジル基等で保護したものを採用すれば縮
合反応における副反応を減少させうるので望まし
い。この際、縮合反応後、必要ならば保護基を脱
離し、常法にて処理することにより目的化合物を
得る。 本発明化合物の製造に使用する原料化合物、即
ち式（）で示される化合物は下記の方法に従つ
て製しうる。 即ち、式（）で示される化合物を製するに
は、式 （式中Ｘ、A₂及びｎは前記定義の通り、Ｚは通
常のペプチド合成に繁用されるアミノ基の保護基
が使用される。例えばハロゲン原子、ニトロ基、
低級アルコキシ基等の置換基を有することもある
ベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカル
ボニル基等が挙げられる。）のいずれからも製す
ることができる。 例えば（）又は（）にジアゾメタン体（例
えばジアゾメタン、フエニルジアゾメタン、ジフ
エニルジアゾメタンが挙げられる）を常法に従つ
て反応させる方法を採用してもよく、又式Ｒ−Ｗ
（XII）（式中Ｒは前記定義の通り、Ｗはメタンスル
ホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基又はハロゲ
ン原子等を意味する反応活性体）と式（）又は
（）の金属塩（好ましくは周期律表族で、例
えばナトリウム、カリウム、リチウム、セシウム
等が挙げられる。）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド又はヘキサメチルホスホロアミド等の溶媒中
で室温〜約120℃程度、好ましくは約20〜40℃で
約15分間〜３日間反応し縮合させることができ
る。この縮合反応は反応溶媒としてベンゼン等の
極性の低い溶媒中で18−crown6の存在下約１〜
24時間、室温〜還流させる方法も採用しうる。か
くして得られる式 又は （式中Ｘ、Ｒ、A₂、Ｚ、ｎは前記定義の通り）
で示される化合物を次いで適当な保護基の脱離条
件を採用し、保護基を脱離すれば式（）の化合
物が製される。 例えば、ベンジルオキシカルボニル基の脱離に
は接触還元法又は臭化水素−酢酸処理法が適して
おり、ｔ−ブトキシカルボニル基やｐ−メトキシ
ベンジルオキシカルボニル基の除去にはトリフル
オロ酢酸や又は塩酸／テトラヒドロフラン等で処
理するのが望ましい。 式（）で示される化合物を採用する場合は式
（）及び（）のＲ導入の反応条件がほぼ同様
に採用される。即ち、ジアゾメタン体、Ｒ−Ｗ等
と先に示した方法を適応すればよい。次いで適当
な保護基の脱離条件を採用し、保護基を脱離後、
式Ｚ−Ｘ−OH（）（式中Ｚ及びＸは前記定義
の通り）で示される保護アミノ酸と一般にペプチ
ド合成で繁用される縮合方法（前記記載の方法及
び条件がほぼ同様に採用しうる。）を採用して縮
合する。次いで適当な保護基の脱離条件を採用
し、保護基を脱離すれば式（）の化合物が製さ
れる。 本発明化合物の構成単位の一つであるミコール
酸は各種細菌の全菌体、細胞壁、結合脂質等を加
水分解し、次いで活性アルミナ、硅酸等を用いる
カラムクロマトグラフイーで精製することにより
製しうる。 ミコール酸とは本来アツセリーノによりα−炭
素に長鎖分枝状アルキル基を、β−炭素に水酸基
を有する高級脂肪酸と定義されているが
（Asselineau Ｊ：The Bacterial Lipids、
Hermann Paris1966）、上述の方法で製されるミ
コール酸は一般に数種の混合物として取得される
のが通常である。勿論、更に厳密な精製分離を行
なつて完全な単一化合物或は純粋な合成品を本発
明の目的化合物製造のために供することが可能で
ある。しかしながら、本発明の課題たる生物学的
活性の点からは完全なるミコール酸の純粋化を要
求するものでなく、数種の混合物状態での使用で
十分であると考えられる。 一般にミコール酸のうちで高級のものは、人型
結核菌、牛型結核菌、鳥型結核菌その他のミコバ
クテリア属（例えば、Mycobacterium phlei、
Mycobacterium smegmatis）から得られ、α炭
素に炭素数22〜24の分枝状アルキル基をβ炭素に
水酸基を有する総炭素数約70〜90の高級脂肪酸で
ある（これを以下ミコミコール酸と称する。）。 又、中級のミコール酸としてはノカルドミコー
ル酸、コリノミコール酸、アースロバクターミコ
ール酸等が挙げられ、これ等はα−炭素に炭素数
約８〜16個の分枝状アルキル基を、β炭素に水酸
基を有する総炭素数約28〜70の高級脂肪酸であ
る。 ノカルドミコール酸を得る菌としては、ノカル
デイア属の細菌（例えばNocardia asteroides、
Nocardia ruba、Nocardia polychromogens、
Nocardia brasiliensis等）が、コリノミコール
酸を得る菌としてはコリネバクテリウム属及びア
ースロバクター属の細菌、例えば
Corynebacterium diphteriae、
Corynebacterium pseudotuberculosis、C.
xerosis、C.renale、Arthrobacter simplex、A.
flavescens等が挙げられる。従つて、本明細書に
於て使用されるミコール酸という語はα−炭素に
炭素数８〜24個程度の分枝状アルキル基をβ−炭
素に水酸基を有する総炭素数28〜90程度の高級脂
肪酸の単一もしくは混合物等を意味するものとす
る。 本発明実施のために使用したミコール酸の代表
例を示せば以下の通り。 Γノカルデイア・アステロイデス131菌 （Nocardia asteroides131）の全菌体をア
ルカリ加水分解し、常法によりメチルエステル
とし、次いで硅酸、カラムクロマトグラフイー
で精製後加水分解し、遊離し、中級ミコール酸
を得た。得られた中級ミコール酸の平均分子式
は酸滴定及び元素分析よりC₅₁H₉₇O_3.6であつ
た。 Γミコバクテリウムツベルクロシス菌 Mycobacterium tuberculosis strain
Aoyama Ｂ）のロウ区分をアルカリ加水分解
し、次いで活性アルミナカラムクロマトグラフ
イーに付して得た。得られたミコミコール酸の
平均分子式は酸滴定及び元素分析より
C₈₀H₁₅₈O_3.5であつた。 又、本発明に於て使用される合成高級脂肪酸と
は下記参考例にその代表例を示すが、総炭素数20
〜60の直鎖状高級脂肪酸又はα−炭素に中乃至高
級アルキル基を有する分枝状高級脂肪酸が挙げら
れる。又これ等高級脂肪酸はβ炭素に水酸基等の
置換基を有してもよい。 以下実施例及び参考例を挙げて本発明を説明す
る。 実施例 １ ｔ−ブトキシカルボニル−Ｄ−イソグルタミン
615mgをメタノール15mlに溶解し、氷冷下炭酸セ
シウム815mgの水溶液２mlを加える。次いで減圧
濃縮し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを加えて
共沸脱水する。残留物を25mlのＮ，Ｎ−ジメチル
ホルミアミドに懸濁し、氷冷下オクチルブロミド
530mgを加えて、徐々に室温にもどし、約18時間
撹拌反応する。反応後、減圧濃縮し、残渣に水を
加え、析出する沈殿を濾取する。酢酸エチルに溶
解し水洗後、溶媒留去し得られた残留物を酢酸エ
チル−石油エーテルにて再結晶しｔ−ブトキシカ
ルボニル−Ｄ−イソグルタミンオクチルエステル
717mgを得る。融点108.5〜109℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋5.3゜（Ｃ＝1.7、クロロホルム） 元素分析値 C₁₈H₃₄N₂O₅として 計算値(%) Ｃ 60.31、Ｈ 9.56、Ｎ 7.81 分析値(%) Ｃ 60.68、Ｈ 9.46、Ｎ 7.85 上記化合物717mgをクロロホルム15mlに溶解し、
氷冷下、トリフルオロ酢酸15mlを加える。徐々に
室温にもどし約１時間撹拌後、減圧濃縮乾固す
る。残留物をテトラヒドロフラン50mlに溶解し、
氷冷下トリエチルアミンを加えて約PH７とし、次
いでｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−アラニン350
mg、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド230mg及びジ
シクロヘキシルカルボジイミド410mgを加える。
30分後、室温にもどし約18時間撹拌し、析出した
ジシクロヘキシル尿素を濾去後、減圧濃縮する。
残留物を酢酸エチルに溶解し、５％クエン酸水溶
液、水、５％炭酸水素ナトリウム水溶液、水で順
次先浄後、酢酸エチルを留去する。残留物はシリ
カゲルクロマトグラフイーに付し、クロロホルム
−メタノール（30：１）で溶出する目的画分を集
め、減圧濃縮することにより570mgのｔ−ブトキ
シカルボニル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミ
ンオクチルエステルが得られる。融点89〜90℃
（分解）。 〔α〕²⁵ _D−8.9゜（Ｃ＝0.8、メタノール） 元素分析値 C₂₁H₃₉N₃O₆として 計算値(%) Ｃ 58.72、Ｈ 9.15、Ｎ 9.78 分析値(%) Ｃ 58.89、Ｈ 9.06、Ｎ 9.85 上記化合物2.57ｇに氷冷下トリフルオロ酢酸10
mlを加え徐々に室温にもどし30分間撹拌反応後、
減圧濃縮し、残留物を乾燥エーテルで洗浄後、10
mlのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解、氷冷
下Ｎ−メチルモルホリンで約PH７とする。次いで
１−α−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリデ
ン−Ｎ−アセチルムラミン酸のＮ−ヒドロキシコ
ハク酸イミドエステル（5.4ｍmole相当）のＮ，
Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液30ml、Ｎ−メチル
モルホリン0.59mlを加える。30分後、徐々に室温
にもどし約18時間撹拌反応後、減圧濃縮し、残留
物にエーテルを加えて析出する結晶を濾取、次い
でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド−エーテルから
再結晶し、4.05ｇの１−α−Ｏ−ベンジル−４，
６−Ｏ−ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミル−
Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンオクチルエス
テルを得る。融点229〜231.5℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋73.1゜（Ｃ＝0.7、Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド） 元素分析値 C₄₁H₅₈N₄O₁₁として 計算値(%) Ｃ 62.90、Ｈ 7.47、Ｎ 7.16 分析値(%) Ｃ 62.95、Ｈ 7.45、Ｎ 7.36 上記化合物3.70ｇを60％酢酸水溶液35mlに懸濁
し沸騰水浴上30分間撹拌反応後、減圧濃縮する。
残留物に水を加えて析出する結晶を濾取、これを
メタノール−エーテルから再結晶し2.44ｇの１−
α−Ｏ−ベンジル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−
アラニル−Ｄ−イソグルタミンオクチルエステル
が得られる。融点190〜192℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋83.3゜（Ｃ＝0.6、メタノール） 元素分析値 C₃₃H₅₂N₄O₁₁として 計算値(%) Ｃ 58.22、Ｈ 7.70、Ｎ 8.23 分析値(%) Ｃ 58.32、Ｈ 7.73、Ｎ 7.91 上記化合物680mgを酢酸20mlに溶解しパラジウ
ム炭素の存在下室温で加水素分解に付す。触媒を
濾去後、減圧留去し、得られる残留物をシリカゲ
ルクロマトグラフイーに付す。クロロホルム−メ
タノール（30：１）で溶出する目的画分を集めて
減圧濃縮することにより330mgのＮ−アセチルム
ラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンオク
チルエステルが得られる。融点170〜173℃（分
解）。 〔α〕²⁵ _D＋35.4（Ｃ＝0.5、酢酸−水＝25：１、72
時間後） 元素分析値 C₂₆H₄₄N₄O₁₁として 計算値(%) Ｃ 53.05、Ｈ 7.53、Ｎ 9.52 分析値(%) Ｃ 53.36、Ｈ 7.75、Ｎ 9.25 実施例 ２ 実施例１とほぼ同様の反応条件によりｔ−ブト
キシカルボニル−Ｄ−イソグルタミン615mgにス
テアリルブロミド915mgを反応させて1.07ｇのｔ
−ブトキシカルボニル−Ｄ−イソグルタミンステ
アリルエステルが得られる。融点110〜111℃（分
解）。 〔α〕²⁵ _D＋3.9゜（Ｃ＝1.4、クロロホルム） 元素分析値 C₂₈H₅₄N₂O₅・１／２H₂Oとして 計算値(%) Ｃ 66.23、Ｈ 10.92、Ｎ 5.52 分析値(%) Ｃ 66.13、Ｈ 10.67、Ｎ 4.90 上記化合物998mgを実施例１とほぼ同様の条件
によりｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−アラニン
350mgと縮合させ780mgのｔ−ブトキシカルボニル
−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンステアリル
エステルが得られる。融点87〜88℃（分解）。 上記化合物は、また次の如く製することができ
る。即ちｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−アラニル
−Ｄ−イソグルタミン3.5ｇをテトラヒドロフラ
ンに溶解、メタノール10mlを加えた後、氷冷下、
炭酸セシウム3.94ｇの水溶液５mlを加える。次い
で減圧濃縮し、残留物にＮ，Ｎ−ジメチルホルム
アミドを加えて共沸脱水後、30mlのＮ，Ｎ−ジメ
チルホルムアミドに懸濁し、氷冷下ステアリルブ
ロミド4.03ｇを加える。徐々に室温にもどし約18
時間反応する。反応後、減圧濃縮し、酢酸エチル
に溶解後水洗する。次いで酢酸エチルを留去し、
残留物をシリカゲルクロマトグラフイーに付し、
クロロホルム−メタノール（30：１）で溶出する
目的画分を減圧濃縮乾固することにより3.29ｇが
得られる。融点87〜88℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D−6.7゜（Ｃ＝0.8、メタノール） 元素分析値 C₃₁H₅₉N₃O₆として 計算値(%) Ｃ 65.34、Ｈ 10.44、Ｎ 7.37 分析値(%) Ｃ 65.06、Ｈ 10.24、Ｎ 7.44 上記化合物3.19ｇを実施例１とほぼ同様の反応
条件により１−α−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−
ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミン酸のＮ−ヒ
ドロキシコハク酸イミドエステル（5.09ｍmole
相当）と反応させることにより4.42ｇの１−α−
Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｎ−
アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグル
タミンステアリルエステルが得られる。融点239
〜241.5℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋60.7゜（Ｃ＝0.5、Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド） 元素分析値 C₅₁H₇₈N₄O₁₁・H₂Oとして 計算値(%) Ｃ 65.08、Ｈ 8.57、Ｎ 5.95 分析値(%) Ｃ 64.95、Ｈ 8.28、Ｎ 6.04 上記化合物4.10ｇを60％酢酸溶液800mlに懸濁
し、沸騰水浴上１時間撹拌反応後、減圧濃縮す
る。残留物をシリカゲルクロマトグラフイーに付
し、クロロホルム−メタノール（30：１）で溶出
する目的画分を集めて減圧濃縮乾固することによ
り2.17ｇの１−α−Ｏ−ベンジル−Ｎ−アセチル
ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンス
テアリルエステルが得られる。融点200〜201℃
（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋73.1゜（Ｃ＝0.8、酢酸） 元素分析値 C₄₃H₇₂N₄O₁₁として 計算値(%) Ｃ 62.90、Ｈ 8.84、Ｎ 6.82 分析値(%) Ｃ 62.91、Ｈ 8.74、Ｎ 6.72 上記化合物600mgを実施例１とほぼ同様の条件
で加水素分解に付し313mgのＮ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンステアリ
ルエステルが得られる。融点181〜182℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋31.4゜（Ｃ＝0.7、酢酸−水＝50：２、48
時間後） 元素分析値 C₃₆H₆₆N₄O₁₁・１／２CH₃COOHとし て 計算値(%) Ｃ 58.40、Ｈ 9.01、Ｎ 7.36 分析値(%) Ｃ 58.22、Ｈ 8.85、Ｎ 6.98 実施例 ３ １−α−Ｏ−ベンジル−Ｎ−アセチルムラミル
−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンオクチルエ
ステル1.09ｇをピリジン40mlに溶解し、−10℃に
氷冷下ステアリン酸クロライド1.94ｇのクロロホ
ルム溶液20mlを加える。約１時間10℃に保つたの
ち徐々に室温にもどし30分間反応する。再度−10
℃に冷却下ステアリン酸クロライド1.94ｇのクロ
ロホルム溶液20mlを加える。10℃で２時間撹拌反
応後、氷冷下メタノール20mlを加え、次いで減圧
濃縮して得られた残留物に水を加える。析出した
結晶を濾取、ｎ−ヘキサン洗浄後、シリカゲルク
ロマトグラフイーに付す。クロロホルム−メタノ
ール酢酸（30：１：0.1）で溶出する目的画分を
集め減圧濃縮乾固することにより0.99ｇの１−α
−Ｏ−ベンジル−６−Ｏ−ステアロイル−Ｎ−ア
セチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタ
ミンオクチルエステルが得られる。融点198〜199
℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋65.8（Ｃ＝1.2、酢酸） 元素分析値 C₅₁H₈₈N₄O₁₂として 計算値(%) Ｃ 64.53、Ｈ 9.34、Ｎ 5.90 分析値(%) Ｃ 64.49、Ｈ 8.97、Ｎ 5.94 上記化合物600mgを酢酸50mlに溶解し、パラジ
ウム−炭素存在下、室温で加水素分解反応に付
す。触媒を濾去後、減圧濃縮し、得られる残留物
をシリカゲルクロマトグラフイーに付す。クロロ
ホルム−メタノール（30：１）にて溶出する目的
画分を集めて減圧濃縮乾固し380mgの６−Ｏ−ス
テアロイル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニ
ル−Ｄ−イソグルタミンオクチルエステルが得ら
れる。融点189〜191℃（分解） 〔α〕²⁵ _D＋31.3（Ｃ＝0.6、酢酸−水＝50：２、24
時間後） 元素分析値 C₄₄H₈₂N₄O₁₂として 計算値(%) Ｃ 61.51、Ｈ 9.62、Ｎ 6.52 分析値(%) Ｃ 61.18、Ｈ 9.27、Ｎ 6.44 実施例 ４ １−α−Ｏ−ベンジル−Ｎ−アセチルムラミル
−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンステアリル
エステル1.00ｇを実施例３とほぼ同様の反応条件
によりステアリン酸クロライドと反応させること
により1.17ｇの１−α−Ｏ−ベンジル−６−Ｏ−
ステアロイル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラ
ニル−Ｄ−イソグルタミンステアリルエステルが
得られる。融点192〜194℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋55.6゜（Ｃ＝0.9、酢酸） 元素分析値 C₆₁H₁₀₆N₄O₁₂として 計算値(%) Ｃ 67.24、Ｈ 9.99、Ｎ 5.14 分析値(%) Ｃ 67.42、Ｈ 9.68、Ｎ 5.10 上記化合物763mgを実施例３とほぼ同様の反応
条件により加水素分解反応に付し329mgの６−Ｏ
−ステアロイル−Ｎ−アセチル−Ｌ−アラニル−
Ｄ−イソグルタミンステアリルエステルが得られ
る。融点198.5〜199.5℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋28.0゜（Ｃ＝0.5、酢酸：水＝50：２、48
時間後） 元素分析値 C₅₄H₁₀₂N₄O₁₂・１／２H₂Oとして 計算値(%) Ｃ 64.32、Ｈ 10.30、Ｎ 5.56 分析値(%) Ｃ 64.46、Ｈ 10.12、Ｎ 5.50 実施例 ５ ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−アラニル−Ｄ−
イソグルタミン2.0ｇをテトラヒドロフラン20ml
に溶解し、ジアゾメタンのエーテル溶液を反応液
がわずかに黄色となるまで加えて30分間放置後、
溶媒を留去し、残留物をテトラヒドロフラン−ｎ
−ヘキサンから再結晶することにより1.87ｇのｔ
−ブトキシカルボニル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソ
グルタミンメチルエステルが得られる。融点150
〜152℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D−9.6゜（Ｃ＝0.7、メタノール） 元素分析値 C₁₄H₂₅N₃O₆として 計算値(%) Ｃ 50.74、Ｈ 7.60、Ｎ 12.69 分析値(%) Ｃ 50.55、Ｈ 7.52、Ｎ 12.36 上記化合物1.50ｇをジクロルメタン10mlに溶解
し、氷冷下、トリフルオロ酢酸10mlを加えて５分
間後、徐々に室温にもどし30分間撹拌する。反応
液を減圧濃縮乾固して得られた残留物を乾燥エー
テルで洗浄後、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド10
mlに溶解する。氷冷下Ｎ−メチルモルホリンで約
PH７とする。次いで、１−α−Ｏ−ベンジル−
４，６−Ｏ−ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミ
ン酸のＮ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル
（4.12ｍmole相当）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド溶液30ml、Ｎ−メチルモルホリン0.45mlを加
える。30分後、徐々に室温にもどし約18時間撹拌
反応する。次いで減圧濃縮し、残留物にエーテル
を加え、析出する結晶を濾取、90％エタノールで
洗浄し3.0ｇの粗１−α−Ｏ−ベンジル−４，６
−Ｏ−ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ
−アラニル−Ｄ−イソグルタミンメチルエステル
（融点259〜261℃（分解））が得られる。さらに精
製することなく上記化合物に60％酢酸30mlを加
え、沸騰水浴上１時間撹拌反応後、減圧濃縮し残
留物に水を加え、析出する結晶を濾取する。これ
をメタノール−エーテルから再結晶し1.89ｇの１
−α−Ｏ−ベンジル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ
−アラニル−Ｄ−イソグルタミンメチルエステル
が得られる。融点210.5〜213℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋104.7゜（Ｃ＝0.8、メタノール） 元素分析値 C₂₆H₃₈N₄O₁₁として 計算値(%) Ｃ 53.60、Ｈ 6.57、Ｎ 9.62 分析値(%) Ｃ 53.76、Ｈ 6.68、Ｎ 9.28 上記化合物1.60ｇをピリジン40mlに懸濁し、−
10℃に冷却する。ステアリン酸クロライド3.33ｇ
のクロロホルム溶液30mlを加え、10℃で１時間30
分撹拌反応する。氷冷下、メタノール10mlを加え
た後、減圧濃縮し、得られた残留物に水を加え、
析出する析出を濾取、加温したｎ−ヘキサンで洗
浄後、シリカゲルクロマトグラフイーに付す。ク
ロロホルム−メタノール−酢酸（30：１：0.1）
で溶出する目的画分を集めて減圧濃縮乾固し1.07
ｇの１−α−Ｏ−ベンジル−６−Ｏ−ステアロイ
ル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−
イソグルタミンメチルエステルが得られる。融点
186〜187℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋74.8゜（Ｃ＝0.6、酢酸） 元素分析値 C₄₄H₇₂N₄O₁₂として 計算値(%) Ｃ 62.24、Ｈ 8.55、Ｎ 6.60 分析値(%) Ｃ 62.33、Ｈ 8.51、Ｎ 6.84 上記化合物800mgを実施例３とほぼ同様の反応
条件により加水素分解に付し、660mgの６−Ｏ−
ステアロイル−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラ
ニル−Ｄ−イソグルタミンメチルエステルが得ら
れる。融点180〜182℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋36.6゜（Ｃ＝0.6、酢酸：水＝50：２、24
時間後） 元素分析値 C₃₇H₆₆N₄O₁₂・１／２H₂Oとして 計算値(%) Ｃ 57.88、Ｈ 8.79、Ｎ 7.30 分析値(%) Ｃ 57.87、Ｈ 8.69、Ｎ 7.25 実施例 ６ ６−Ｏ−ノカルドミコロイル−Ｎ−アセチルム
ラミル−Ｌ−セリル−Ｄ−イソグルタミン300mg
をテトラヒドロフラン10mlに溶解し、ジアゾメタ
ンのエーテル溶液を反応液がわずかに黄色となる
まで加え、10分間放置後、酢酸0.2mlを加え、溶
媒を留去する。残留物をシリカゲルクロマトグラ
フイーに付し、クロロホルム−メタノール（20：
１）で溶出する目的画分を集め、減圧濃縮し、テ
トラヒドロフラン−メタノール−水から再結晶し
206mgの６−Ｏ−ノカルドミコロイル−Ｎ−アセ
チルムラミル−Ｌ−セリル−Ｄ−イソグルタミン
メチルエステルを得る。融点148〜150℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋30.7゜（Ｃ＝0.6、テトラヒドロフラン−
水＝50：１、24時間後） 元素分析値 C₇₁H₁₂₉O_14.6N₄として 計算値(%) Ｃ 67.00、Ｈ 10.24、Ｎ 4.40 分析値(%) Ｃ 67.24、Ｈ 10.66、Ｎ 4.28 実施例 ７ Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンベンジルエ
ステル塩酸塩368mgにＮ，Ｎ−ジメチルホルムア
ミド５mlを加え、氷冷下、Ｎ−メチルモルホリン
0.1mlを加える。次いで６−Ｏ−ミコミコロイル
−Ｎ−アセチルムラミン酸1.3ｇのテトラヒドロ
フラン溶液10mlを加え−10℃に冷却する。Ｎ−ヒ
ドロキシコハク酸イミド113mg、ジシクロヘキシ
ルカルボジイミド203mg及びＮ−メチルモルホリ
ン0.1mlを加え、30分後室温にもどし、約18時間
撹拌反応する。反応液を減圧濃縮し、残留物をク
ロロホルムに溶解する。不溶のジシクロヘキシル
尿素を濾去し、クロロホルムを留去する。残留物
をシリカゲルクロマトグラフイーに付し、クロロ
ホルム・アセトン・メタノール（20：２：１）で
溶出する目的画分を集め減圧濃縮する。水を加え
て析出した結晶をベンゼン−アセトン−メタノー
ルから再結晶し778mgの６−Ｏ−ミコミコロイル
−Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イ
ソグルタミンベンジルエステルが得られる。融点
77〜80℃。 〔α〕²⁵ _D＋16.4゜（Ｃ＝0.5、テトラヒドロフラン：
水＝50：１、28時間後） 元素分析値 C₁₀₆H₁₉₄O_13.5N₄・2H₂Oとして 計算値(%) Ｃ 71.64、Ｈ 11.25、Ｎ 3.15 分析値(%) Ｃ 71.60、Ｈ 11.02、Ｎ 3.47 実施例 ８ Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イ
ソグルタミン１−カルボキシ−５−ステアロイル
アミノペンチルアミド300mgをテトラヒドロフラ
ン50mlに懸濁し、ジアゾメタンのエーテル溶液を
わずかに黄色となるまで加える。室温で約18時間
放置後、氷冷下、反応液の黄色が消失するまで酢
酸を加える。減圧濃縮し、残留物をシリカゲルク
ロマトグラフイーに付す。クロロホルム−メタノ
ール（30：１）で溶出する目的画分を集めて減圧
濃縮することにより105mgのＮ−アセチルムラミ
ル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン１−メト
キシカルボニル−５−ステアロイルアミノペンチ
ルアミドが得られる。融点175〜177℃（分解）。 〔α〕²⁵ _D＋16.9゜（Ｃ＝0.5、Ｎ，Ｎ−ジメチルホル
ムアミド−水＝50：２、17時間後） 元素分析値 C₄₄H₈₀N₆O₁₃・2H₂Oとして 計算値(%) Ｃ 56.39、Ｈ 9.03、Ｎ 8.97 分析値(%) Ｃ 56.35、Ｈ 8.72、Ｎ 8.67 実施例 ９ Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−バリル−Ｄ−イソ
グルタミン１−カルボキシ−５−ノカルドミコロ
イルアミノペンチルアミド300mgをテトラヒドロ
フラン８mlに溶解し、ジアゾメタンのエーテル溶
液を反応液がわずかに黄色に着色するまで加え
る。２時間放置後、減圧濃縮し残留物にエーテル
を加えて析出する結晶を濾取する。次いで水、メ
タノール、エーテルで順次洗浄し237mgのＮ−ア
セチルムラミル−Ｌ−バリル−Ｄ−イソグルタミ
ン１−メトキシカルボニル−５−ノカルドミコロ
イルアミノペンチルアミドを得る。融点203〜205
℃（分解）。 元素分析値 C₇₉H₁₄₅O_14.6N₆として 計算値(%) Ｃ 67.15、Ｈ 10.37、Ｎ 5.95 分析値(%) Ｃ 66.99、Ｈ 10.21、Ｎ 6.08 参考例 本発明化合物の構成単位として使用される合成
高級脂肪酸の代表例を示す。 Γトリアコンタン酸 融点97〜99℃ 元素分析値 C₃₀H₆₀O₂として 計算値(%) Ｃ 79.58、Ｈ 13.36 分析値(%) Ｃ 79.35、Ｈ 13.23 Γ２−ドコシルテトラコサン酸 融点87〜89℃ Γ２−テトラデシルヘキサデカン酸 融点79.5〜75℃ 元素分析値 C₃₀H₆₀O₂として 計算値(%) Ｃ 79.57、Ｈ 13.36 分析値(%) Ｃ 79.57、Ｈ 13.35 Γ２−ドコシル−３−ヒドロキシヘキサコサン酸 融点89〜90℃ 元素分析値 C₄₈H₉₆O₃として 計算値(%) Ｃ 79.93、Ｈ 13.42 分析値(%) Ｃ 79.79、Ｈ 13.48 Γ３−ヒドロキシ−２−テトラデシルオクタデカ
ン酸 融点72〜75℃ 元素分析値 C₃₂H₆₄O₃として 計算値(%) Ｃ 77.36、Ｈ 12.98 分析値(%) Ｃ 77.46、Ｈ 13.15

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 で示される新規ムラミルジペプチド誘導体。 （上記式中ＸはＬ−アラニン、Ｌ−セリン、Ｌ−
   バリン、グリシン等のアミノ酸残基を、Ｙは−
   OR又は【式】を意味 し、Ｒは分枝を有することもある低級乃至中級ア
   ルキル基又はアラルキル基を、ｎは１〜６の整数
   を、A₁及びA₂は各々独立して水素原子、中級乃
   至高級ミコロイル基又は分枝及び／又は不飽和結
   合を有することもある低級乃至高級脂肪酸残基を
   意味し、Acylは低級アシル基を意味する。但し、
   A₁が水素原子でありかつＹが低級アルコキシ基
   である場合は除く。）