JPS6317078B2 - - Google Patents
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- JPS6317078B2 JPS6317078B2 JP54021201A JP2120179A JPS6317078B2 JP S6317078 B2 JPS6317078 B2 JP S6317078B2 JP 54021201 A JP54021201 A JP 54021201A JP 2120179 A JP2120179 A JP 2120179A JP S6317078 B2 JPS6317078 B2 JP S6317078B2
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/26—Psychostimulants, e.g. nicotine, cocaine
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
本発明は新規物質ネプラノシンＢおよびその製
造法に関する。さらに詳しくは、新規物質ネプラ
ノシンＢ生産菌であるアンピユラリエラ・エス・
ピー・A11079（Ampullariella sp.A11079）を培
地に培養し、その培養物から新規物質ネプラノシ
ンＢを採取する新規物質ネプラノシンＢの製造法
ならびに該物質に関するものである。 本発明の新規物質ネプラノシンＢは下記の物理
化学的性質を有する弱塩基性化合物である。 (1) 元素分析：Ｃ＝47.44，Ｈ＝4.63， Ｎ＝25.07 (2) 分子量（マススペクトルよりの値）：279 (3) 分子式：C11H13N5O4 (4) 融点：269〜272℃（分解） (5) 旋光度：〔α〕24℃D＝−3.5（Ｃ＝1.0％、ジメチ
ルスルホキサイド） (6) 紫外部吸収スペクトル： λmax＝2.62mμ（Ｅ1% 1cm＝530.4）（水中）（第
１図に示す通り） λmax＝259mμ（Ｅ1% 1cm＝506.7）（酸性水中：
0.1NHCl―滴） λmax＝263mμ（Ｅ1% 1cm＝522.2）（アルカリ性
水中：0.1NNaOH―滴） (7) 赤外部吸収スペクトル（KBr法）：3380、
3280、3100、2920、2880、2740、1700、1610、
1570、1520、1480、1420、1380、1350、1300、
1250、1220、1170、1160、1100、1080、1030、
1020、980、970、870、840、790、730、710-1cm
付近の各波長に吸収帯を有する（第２図に示す
通り）。 (8) 核磁気共鳴スペクトル：重ジメチルスルホキ
サイド中100MHzにおけるネプラノシンＢの核
磁気共鳴スペクトルは第３図に示す通りであ
る。（内部基準DSS） (9) 溶解性： 水、ジメチルスルホキサイドに可溶。 酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼン、エチ
ルエーテルに不溶。 (10) 呈色反応： 過マンガン酸カリウム脱色反応は擬陽性。 塩化第二鉄反応、ニンヒドリン反応、モーリ
ツシユ反応、アニスアルデヒド反応は陰性。 (11) 酸塩基の区別：弱塩基性 (12) 色性状：白金（白色板状結晶） (13) Rf値（東京化成社製シリカゲルｆを使用） ｎ―ブタノール：酢酸：水（６：１：１）
Rf＝0.42 ｎ―ブタノール：濃アンモニア水：水（10：
0.5：２） Rf＝0.27 ｎ―プロパノール：濃アンモニア水：水
（10：１：１） Rf＝0.41 アセトン：水（10：１） Rf＝0.48 これらの物理化学的性質より本物質ネプラノ
シンＢの平面構造として次式が与えられた。 次に、新規物質ネプラノシンＢの生物学的性質
について述べる。 急性毒性 ネプラノシンＢをマウス腹腔内に100mg／Kg投
与した結果死亡例はなく、全例生存が認められ
た。 細胞増殖阻害活性 ネプラノシンＢは0.8γ／mlの各濃度で、マウス
リンパ腫培養細胞L5178Yの増殖を抑制した。 マウス白血病のL1210腫瘍細胞の106個をBDF1
マウスに腹腔内投与し、翌日から１日１回５日間
ネプラノシンＢ（生理食塩水に溶解、100mg／Kg、
50mg／Kgを投与）を腹腔内投与した。対照群Ｃを
８匹、ネプラノシンＢ投与群Ｔを５匹として行な
つた。その結果、そのＴ／Ｃは次の通りであつ
た。 ネプラノシンＢ投与量 Ｔ／Ｃ 100mg／Kg 178％ 50mg／Kg 136％ なお対照群Ｃは全例８日にて死亡したものであ
つた。 その他の活性 ネプラノシンＢは抗うつ作用を有する。 本発明の新規な物質ネプラノシンＢ産生放線菌
は、新潟県中頚城群妙高高原町のネギ畑の土壌よ
り分離した放線菌で、アンピユラリエラ
（Ampullariella）属に属し、アンピユラリエラ・
エス・ピー・A11079と称する微生物受託番号微
工研菌寄第4494号、FERM―ＰNo.4494）のもの
である。以下その菌学的諸性状について述べる。 〔〕 形態的性状 スターチ・無機塩寒天培地上で、30℃、10〜15
日間培養し、観察した所見は次の通りである。 基生菌糸は曲線状で分枝をもつて伸長し、直径
0.5〜0.8μであり、未発育の気菌糸をわずかに形
成する。 基生菌糸より生じた胞子のう柄に胞子のうを着
生し、胞子のうの形は円柱状ないしビン状で、大
きさ５〜15×10〜25μであり、中に多数の胞子の
う胞子がたてに平行に連鎖して配列されている。 胞子のう胞子は水中で運動性を有する遊走子で
あり、形は棒状で、大きさは0.5〜1.0×1.0〜20μ
であり、極性でふさ状の鞭毛を有している。 〔〕 ジアミノピメリン酸組成 全菌体分析によるジアミノピメリン酸はメゾー
及びヒドロキシ型が検出された。 〔〕 各種培地上における生育状態 各種培地上で、30℃、20日間培養し、観察した
所見は第１表に示した通りである。スターチ・無
機塩寒天培地およびオート・ミル寒天培地上で未
発育の気菌子がわずかに形成される以外は、気菌
子の形成は認められない。色の表示はカラー・ハ
ーモニー・マニアル（Color Harmony
Manual）第４版、1958年（Container
Corporation of America）による色の分類に従
つたものである。
造法に関する。さらに詳しくは、新規物質ネプラ
ノシンＢ生産菌であるアンピユラリエラ・エス・
ピー・A11079（Ampullariella sp.A11079）を培
地に培養し、その培養物から新規物質ネプラノシ
ンＢを採取する新規物質ネプラノシンＢの製造法
ならびに該物質に関するものである。 本発明の新規物質ネプラノシンＢは下記の物理
化学的性質を有する弱塩基性化合物である。 (1) 元素分析：Ｃ＝47.44，Ｈ＝4.63， Ｎ＝25.07 (2) 分子量（マススペクトルよりの値）：279 (3) 分子式：C11H13N5O4 (4) 融点：269〜272℃（分解） (5) 旋光度：〔α〕24℃D＝−3.5（Ｃ＝1.0％、ジメチ
ルスルホキサイド） (6) 紫外部吸収スペクトル： λmax＝2.62mμ（Ｅ1% 1cm＝530.4）（水中）（第
１図に示す通り） λmax＝259mμ（Ｅ1% 1cm＝506.7）（酸性水中：
0.1NHCl―滴） λmax＝263mμ（Ｅ1% 1cm＝522.2）（アルカリ性
水中：0.1NNaOH―滴） (7) 赤外部吸収スペクトル（KBr法）：3380、
3280、3100、2920、2880、2740、1700、1610、
1570、1520、1480、1420、1380、1350、1300、
1250、1220、1170、1160、1100、1080、1030、
1020、980、970、870、840、790、730、710-1cm
付近の各波長に吸収帯を有する（第２図に示す
通り）。 (8) 核磁気共鳴スペクトル：重ジメチルスルホキ
サイド中100MHzにおけるネプラノシンＢの核
磁気共鳴スペクトルは第３図に示す通りであ
る。（内部基準DSS） (9) 溶解性： 水、ジメチルスルホキサイドに可溶。 酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼン、エチ
ルエーテルに不溶。 (10) 呈色反応： 過マンガン酸カリウム脱色反応は擬陽性。 塩化第二鉄反応、ニンヒドリン反応、モーリ
ツシユ反応、アニスアルデヒド反応は陰性。 (11) 酸塩基の区別：弱塩基性 (12) 色性状：白金（白色板状結晶） (13) Rf値（東京化成社製シリカゲルｆを使用） ｎ―ブタノール：酢酸：水（６：１：１）
Rf＝0.42 ｎ―ブタノール：濃アンモニア水：水（10：
0.5：２） Rf＝0.27 ｎ―プロパノール：濃アンモニア水：水
（10：１：１） Rf＝0.41 アセトン：水（10：１） Rf＝0.48 これらの物理化学的性質より本物質ネプラノ
シンＢの平面構造として次式が与えられた。 次に、新規物質ネプラノシンＢの生物学的性質
について述べる。 急性毒性 ネプラノシンＢをマウス腹腔内に100mg／Kg投
与した結果死亡例はなく、全例生存が認められ
た。 細胞増殖阻害活性 ネプラノシンＢは0.8γ／mlの各濃度で、マウス
リンパ腫培養細胞L5178Yの増殖を抑制した。 マウス白血病のL1210腫瘍細胞の106個をBDF1
マウスに腹腔内投与し、翌日から１日１回５日間
ネプラノシンＢ（生理食塩水に溶解、100mg／Kg、
50mg／Kgを投与）を腹腔内投与した。対照群Ｃを
８匹、ネプラノシンＢ投与群Ｔを５匹として行な
つた。その結果、そのＴ／Ｃは次の通りであつ
た。 ネプラノシンＢ投与量 Ｔ／Ｃ 100mg／Kg 178％ 50mg／Kg 136％ なお対照群Ｃは全例８日にて死亡したものであ
つた。 その他の活性 ネプラノシンＢは抗うつ作用を有する。 本発明の新規な物質ネプラノシンＢ産生放線菌
は、新潟県中頚城群妙高高原町のネギ畑の土壌よ
り分離した放線菌で、アンピユラリエラ
（Ampullariella）属に属し、アンピユラリエラ・
エス・ピー・A11079と称する微生物受託番号微
工研菌寄第4494号、FERM―ＰNo.4494）のもの
である。以下その菌学的諸性状について述べる。 〔〕 形態的性状 スターチ・無機塩寒天培地上で、30℃、10〜15
日間培養し、観察した所見は次の通りである。 基生菌糸は曲線状で分枝をもつて伸長し、直径
0.5〜0.8μであり、未発育の気菌糸をわずかに形
成する。 基生菌糸より生じた胞子のう柄に胞子のうを着
生し、胞子のうの形は円柱状ないしビン状で、大
きさ５〜15×10〜25μであり、中に多数の胞子の
う胞子がたてに平行に連鎖して配列されている。 胞子のう胞子は水中で運動性を有する遊走子で
あり、形は棒状で、大きさは0.5〜1.0×1.0〜20μ
であり、極性でふさ状の鞭毛を有している。 〔〕 ジアミノピメリン酸組成 全菌体分析によるジアミノピメリン酸はメゾー
及びヒドロキシ型が検出された。 〔〕 各種培地上における生育状態 各種培地上で、30℃、20日間培養し、観察した
所見は第１表に示した通りである。スターチ・無
機塩寒天培地およびオート・ミル寒天培地上で未
発育の気菌子がわずかに形成される以外は、気菌
子の形成は認められない。色の表示はカラー・ハ
ーモニー・マニアル（Color Harmony
Manual）第４版、1958年（Container
Corporation of America）による色の分類に従
つたものである。
【表】
【表】
〔〕 生理学的性質
生理学的諸性状は以下に示す通りである。
１ 炭素源の資化性
【表】
２ 生育温度範囲：10〜45℃
３ 脱脂牛乳：ペプトン化及び凝固とも陽性
４ メラニン様色素の生成：
チロシン寒天培地；陰性
ペプトン・イースト・鉄寒天培地；陽性
５ 澱粉の加水分解：陽性
６ セルロースの加水分解：陰性
７ カゼインの加水分解：陽性
８ ゼラチンの液化：陽性
９ チロシンの分解：陰性
10 キサンチンの分解：陰性
11 ヒポキサンチンの分解：陰性
12 硫化水素の生成：陰性
13 硝酸塩の還元：陰性
上述の本菌A11079株の性状をバージーズ・マ
ニユアル・オブ・デイタミネイテイブ・バクテリ
オロジー（Bergey's Manual of Determinative
Bacteriology）第８版1974年第707〜708頁のア
クチノプラナセア（Actinoplanaceae）の検索表
にて検索した結果、アンピユラリエラ属に属する
ものと同定され、本菌をアンピユラリエラ・エ
ス・ピー・A11079と命名した。 本発明の新規な物質ネプラノシンＢは下記の如
くして得られる。即ち例えば、上記のアンピユラ
リエラ・エス・ピーA11079株を培地に培養する。
この場合用いられる培地は人工培地でも天然培地
でもよく、また固体培地または液体培地でもよい
が、特に大量生産のためには液体培地が適当であ
る。培地成分としてはネプラノシンＢ生産菌が同
化しうる炭素源、窒素源、無機塩類、その他が用
いられる。例えば炭素源としてはグルコース、グ
リセリン、可溶性スターチ、糖蜜などがあげら
れ、また窒素源としてはペプトン、コーンスチー
プリカー、大豆粉、肉エキス、米ヌカ、カゼイン
水解物、硝酸塩、アンモニア塩などがあげられ、
その他の無機塩類としては食塩、リン酸塩、カル
シウム、マグネシウム、鉄、マンガンなどの微量
栄養物を適宜に添加してもよい。また必要な場合
には消泡剤としてシリコーン油、大豆油などの動
植物鉱物油などを添加してもよい。これら栄養物
質を含有する培地に生産菌株を培養するには固体
培養法でもよいが液体培養法でもよい。液体培養
法を行なう場合には、通気撹拌培養するのが有利
であり、この場合の培養温度は使用する菌の最適
の温度25〜30℃付近、また培養日数は条件によつ
て多少異なるが通常２〜４日程度であり、さらに
培地のPHは中性ないし弱酸性のほぼ中性付近に保
つのがよい。 このようにして得られた培養物には、ネプラノ
シンＢが含有されている。この培養物から目的と
する本物質を採取するには、微生物の代謝産物を
培養物から採取するのに通常とられる分離手段が
適宜利用される。本物質ネプラノシンＢは水溶性
弱塩基性の物質であるから、例えばその培養液
を適当な吸収剤に接触せしめて有効成分を吸着さ
せ、次いで適当な溶媒で溶出せしめて分別採取す
ることができる。吸収剤としては活性炭、陽イオ
ン交換樹脂、活性アルミナ、シリカゲルなどが用
いられ、溶出溶媒は使用する吸着剤によつて異な
るが水溶性有機溶媒の含水溶液、例えば、含水メ
タノール、含水アセトン、含水ジオキサンなどや
酸、アルカリもしくは塩の水溶液などが適宜用い
られる。さらに、本物質の弱塩基性物質の性質を
利用して分離精製することができる。例えばアン
バーライトIRC―50（商品名：ローム・アンド・
ハース社製）、アンバーライトIR―120（商品名）
あるいはダウエツクス50（商品名：ダウケミカル
社製）などの陽イオン交換樹脂に吸着させ、これ
を適当な酸、アルカルもしくは塩の水溶液を用い
て有効成分を溶出することができる。 また吸着剤とイオン交換樹脂と組合せて分離、
採取、精製してもよい。例えば培養液を陽イオ
ン交換樹脂アンバーライトIR―120（商品名）に
チヤージして有効成分を吸着させ、これをアルカ
ル水溶液、例えば3.7Nアンモニア水にて溶出し
て、その活性画分を得、これを中性ないし弱塩基
性にPH調整した後、活性炭に吸着し、70％メタノ
ールなどの溶出溶媒にて溶出し、さらにこれを陰
イオン交換樹脂アンバーライトIRA―410（商品
名）にチヤージして、水にて溶出せしめ、有効成
分を含む区分を集めて濃縮し、粗製物を得、これ
をシリカゲルの吸着クロマトグラフイーにて精製
する。 以上のような各方法で分離、精製された結晶
は、再結晶法にて純化される。得られた本物質ネ
プラノシンＢが単一物質であることは、再結晶よ
り単一の融点を示し、各種溶媒系でのペーパーク
ロマトグラフイー、薄層クロマトグラフイー、
紙電気泳動などで単一スポツトを示すことにより
明らかである。 本発明のネプラノシンＢは有用なる新規物質で
あり、また該酸関連化合物のうち生化学的活性を
有する化合物は、種々知られており、ネプラノシ
ンＢも、他のプリン化合物と同様にその薬理的効
果が期待されるばかりでなく、薬理作用を有する
プリン化合物の中間体としても期待されるもので
ある。 次に実施例をあげて本発明を説明するが、これ
に限定するものではない。 実施例 １ グルコース２％、スターチ２％、イーストエキ
ス１％、カゼイン水解物１％、炭酸カルシウム
0.2％を含有する培地（PH6.5）100mlを500ml容三
角フラスコに分注し、120℃、15分間蒸気殺菌し、
本培地２本に、アンピユラリエラ・エス・ピー・
A11079株の斜面培養よりの―白金耳を接種し、
30℃、４日間振盪培養を行なつた。次いでこれ
を、上記と同一の組成の蒸気殺菌した培地20を
含有する30容ジヤーフアーメンターに移植し、
30℃、48時間、300rpm、毎分20の無菌空気の
条件下通気撹拌培養し、さらにこの培養物は種母
として、グリコース４％、大豆粉１％、肉エキス
0.4％、ペプトン0.4％、イーストエキス0.1％、食
塩0.25％、炭酸カルシウム0.1％の液体培地200
（PH6.5）に移植し、180rpm、毎分130の通気量
の条件下30℃、40時間通気撹拌培養を行なつた。 次いで得られた培養物約200を過し、液
および水洗液を合して約140を得た（培養力価
約50mcｇ／ml）。 さらにこの溶液を、陽イオン交換樹脂アンバー
ライトIR―120（H+型）20のカラムにチヤージ
せしめて有効成分を吸着せしめた後、約100の
水で洗浄し、次いで3.7Nアンモニア水で溶出を
行ない、最初の30を捨て、次の90を回収し、
これを6N塩酸にてPH8.0に調整し、この溶液を、
活性炭４のカラムにチヤージし、水洗した後、
70％メタノール水溶液90にて溶出し、得られた
溶出液を約500mlまで濃縮し、これを低温放置し
て沈澱物を析出せしめ、これを回収し、乾燥して
ネプラノシンＢの粗粉末5.1ｇ（純度約60％、収
率約44％）を得た。このネプラノシンＢは、後述
如くして精製される。 実施例 ２ 上記実施例１のネプラノシンＢの粗粉末5.1ｇ
を、アセトン：水（10：0.5）にて充填したシリ
カゲルカラム（径8.3×40cm）約２にチヤージ
し、上記と同一の溶媒を用いて溶出し、１フラク
シヨン80ｇづつ分画して、フラクシヨンNo.16〜24
を回収し、併合した後濃縮し、これを低温にて放
置してネプラノシンＢの白色板状結晶を析出せし
め、これを取してネプラノシンＢの結晶257ｇ
（収率約37％）を得た。 次いでこれを、約800mlの熱水に溶解し、これ
を室温下放置して、ネプラノシンＢの白色波状結
晶が析出し、これを取してネプラノシンＢの結
晶23ｇ（収率約32.8％）を得た。
ニユアル・オブ・デイタミネイテイブ・バクテリ
オロジー（Bergey's Manual of Determinative
Bacteriology）第８版1974年第707〜708頁のア
クチノプラナセア（Actinoplanaceae）の検索表
にて検索した結果、アンピユラリエラ属に属する
ものと同定され、本菌をアンピユラリエラ・エ
ス・ピー・A11079と命名した。 本発明の新規な物質ネプラノシンＢは下記の如
くして得られる。即ち例えば、上記のアンピユラ
リエラ・エス・ピーA11079株を培地に培養する。
この場合用いられる培地は人工培地でも天然培地
でもよく、また固体培地または液体培地でもよい
が、特に大量生産のためには液体培地が適当であ
る。培地成分としてはネプラノシンＢ生産菌が同
化しうる炭素源、窒素源、無機塩類、その他が用
いられる。例えば炭素源としてはグルコース、グ
リセリン、可溶性スターチ、糖蜜などがあげら
れ、また窒素源としてはペプトン、コーンスチー
プリカー、大豆粉、肉エキス、米ヌカ、カゼイン
水解物、硝酸塩、アンモニア塩などがあげられ、
その他の無機塩類としては食塩、リン酸塩、カル
シウム、マグネシウム、鉄、マンガンなどの微量
栄養物を適宜に添加してもよい。また必要な場合
には消泡剤としてシリコーン油、大豆油などの動
植物鉱物油などを添加してもよい。これら栄養物
質を含有する培地に生産菌株を培養するには固体
培養法でもよいが液体培養法でもよい。液体培養
法を行なう場合には、通気撹拌培養するのが有利
であり、この場合の培養温度は使用する菌の最適
の温度25〜30℃付近、また培養日数は条件によつ
て多少異なるが通常２〜４日程度であり、さらに
培地のPHは中性ないし弱酸性のほぼ中性付近に保
つのがよい。 このようにして得られた培養物には、ネプラノ
シンＢが含有されている。この培養物から目的と
する本物質を採取するには、微生物の代謝産物を
培養物から採取するのに通常とられる分離手段が
適宜利用される。本物質ネプラノシンＢは水溶性
弱塩基性の物質であるから、例えばその培養液
を適当な吸収剤に接触せしめて有効成分を吸着さ
せ、次いで適当な溶媒で溶出せしめて分別採取す
ることができる。吸収剤としては活性炭、陽イオ
ン交換樹脂、活性アルミナ、シリカゲルなどが用
いられ、溶出溶媒は使用する吸着剤によつて異な
るが水溶性有機溶媒の含水溶液、例えば、含水メ
タノール、含水アセトン、含水ジオキサンなどや
酸、アルカリもしくは塩の水溶液などが適宜用い
られる。さらに、本物質の弱塩基性物質の性質を
利用して分離精製することができる。例えばアン
バーライトIRC―50（商品名：ローム・アンド・
ハース社製）、アンバーライトIR―120（商品名）
あるいはダウエツクス50（商品名：ダウケミカル
社製）などの陽イオン交換樹脂に吸着させ、これ
を適当な酸、アルカルもしくは塩の水溶液を用い
て有効成分を溶出することができる。 また吸着剤とイオン交換樹脂と組合せて分離、
採取、精製してもよい。例えば培養液を陽イオ
ン交換樹脂アンバーライトIR―120（商品名）に
チヤージして有効成分を吸着させ、これをアルカ
ル水溶液、例えば3.7Nアンモニア水にて溶出し
て、その活性画分を得、これを中性ないし弱塩基
性にPH調整した後、活性炭に吸着し、70％メタノ
ールなどの溶出溶媒にて溶出し、さらにこれを陰
イオン交換樹脂アンバーライトIRA―410（商品
名）にチヤージして、水にて溶出せしめ、有効成
分を含む区分を集めて濃縮し、粗製物を得、これ
をシリカゲルの吸着クロマトグラフイーにて精製
する。 以上のような各方法で分離、精製された結晶
は、再結晶法にて純化される。得られた本物質ネ
プラノシンＢが単一物質であることは、再結晶よ
り単一の融点を示し、各種溶媒系でのペーパーク
ロマトグラフイー、薄層クロマトグラフイー、
紙電気泳動などで単一スポツトを示すことにより
明らかである。 本発明のネプラノシンＢは有用なる新規物質で
あり、また該酸関連化合物のうち生化学的活性を
有する化合物は、種々知られており、ネプラノシ
ンＢも、他のプリン化合物と同様にその薬理的効
果が期待されるばかりでなく、薬理作用を有する
プリン化合物の中間体としても期待されるもので
ある。 次に実施例をあげて本発明を説明するが、これ
に限定するものではない。 実施例 １ グルコース２％、スターチ２％、イーストエキ
ス１％、カゼイン水解物１％、炭酸カルシウム
0.2％を含有する培地（PH6.5）100mlを500ml容三
角フラスコに分注し、120℃、15分間蒸気殺菌し、
本培地２本に、アンピユラリエラ・エス・ピー・
A11079株の斜面培養よりの―白金耳を接種し、
30℃、４日間振盪培養を行なつた。次いでこれ
を、上記と同一の組成の蒸気殺菌した培地20を
含有する30容ジヤーフアーメンターに移植し、
30℃、48時間、300rpm、毎分20の無菌空気の
条件下通気撹拌培養し、さらにこの培養物は種母
として、グリコース４％、大豆粉１％、肉エキス
0.4％、ペプトン0.4％、イーストエキス0.1％、食
塩0.25％、炭酸カルシウム0.1％の液体培地200
（PH6.5）に移植し、180rpm、毎分130の通気量
の条件下30℃、40時間通気撹拌培養を行なつた。 次いで得られた培養物約200を過し、液
および水洗液を合して約140を得た（培養力価
約50mcｇ／ml）。 さらにこの溶液を、陽イオン交換樹脂アンバー
ライトIR―120（H+型）20のカラムにチヤージ
せしめて有効成分を吸着せしめた後、約100の
水で洗浄し、次いで3.7Nアンモニア水で溶出を
行ない、最初の30を捨て、次の90を回収し、
これを6N塩酸にてPH8.0に調整し、この溶液を、
活性炭４のカラムにチヤージし、水洗した後、
70％メタノール水溶液90にて溶出し、得られた
溶出液を約500mlまで濃縮し、これを低温放置し
て沈澱物を析出せしめ、これを回収し、乾燥して
ネプラノシンＢの粗粉末5.1ｇ（純度約60％、収
率約44％）を得た。このネプラノシンＢは、後述
如くして精製される。 実施例 ２ 上記実施例１のネプラノシンＢの粗粉末5.1ｇ
を、アセトン：水（10：0.5）にて充填したシリ
カゲルカラム（径8.3×40cm）約２にチヤージ
し、上記と同一の溶媒を用いて溶出し、１フラク
シヨン80ｇづつ分画して、フラクシヨンNo.16〜24
を回収し、併合した後濃縮し、これを低温にて放
置してネプラノシンＢの白色板状結晶を析出せし
め、これを取してネプラノシンＢの結晶257ｇ
（収率約37％）を得た。 次いでこれを、約800mlの熱水に溶解し、これ
を室温下放置して、ネプラノシンＢの白色波状結
晶が析出し、これを取してネプラノシンＢの結
晶23ｇ（収率約32.8％）を得た。
第１図はネプラノシンＢの紫外部吸収スペクト
ルを示し、第２図はネプラノシンＢの赤外部吸収
スペクトルを示し、第３図はネプラノシンＢの核
磁気共鳴スペクトルを示す。
ルを示し、第２図はネプラノシンＢの赤外部吸収
スペクトルを示し、第３図はネプラノシンＢの核
磁気共鳴スペクトルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 下記構造を有するネプラノシンＢ ２ 資化性の炭素源および窒素源ならびに無機物
質を含む培地にアンピユラリエラ属に属するネプ
ラノシンＢを産生する菌を接種し、培養後、その
培養物より新規物質ネプラノシンＢを採取するこ
とを特徴とする新規物質ネプラノシンＢの製造
法。 ３ アンピユラリエラ属に属する菌がアンピユラ
リエラ・エス・ピー・A11079である特許請求の
範囲第２項記載の製造法。
Priority Applications (16)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2120179A JPS55113786A (en) | 1979-02-23 | 1979-02-23 | Novel substance, nepranosin b or f and its preparation |
| HU79TO1102A HU192741B (en) | 1978-05-25 | 1979-04-12 | Process for producing new neplanocin antibiotics |
| DE2954197A DE2954197C2 (ja) | 1978-05-25 | 1979-04-26 | |
| DE2917000A DE2917000C2 (de) | 1978-05-25 | 1979-04-26 | 1β-(6-Amino-9H-purin-9-yl)-4-hydroxymethyl-4-cyclopenten-2α,3α-diol (Neplanocin A), Verfahren zu dessen Herstellung und diese Verbindung enthaltende Arzneimittel |
| NLAANVRAGE7903318,A NL182231C (nl) | 1978-05-25 | 1979-04-26 | Neplanocine-antibiotica en een werkwijze voor de bereiding daarvan. |
| SE7903672A SE443576B (sv) | 1978-05-25 | 1979-04-26 | Antibiotiska neplanociner och forfarande for framstellning av dem genom odling av ampullariella sp a 11079 nrrl 11451 |
| DK177079A DK149313C (da) | 1978-05-25 | 1979-04-30 | Fremgangsmaade til fremstilling af a,b,c,d og f neplanocin |
| FR7911578A FR2426688A1 (fr) | 1978-05-25 | 1979-05-08 | Nouvelles neplanocines antibiotiques |
| ES480384A ES480384A1 (es) | 1978-05-25 | 1979-05-09 | Procedimiento de produccion de nuevas neplanocinas antibioticas. |
| SU792763801A SU906388A3 (ru) | 1978-05-25 | 1979-05-17 | Способ получени антибиотического комплекса,включающего непланоцины а,в,с,д и F |
| GB7917481A GB2021582B (en) | 1978-05-25 | 1979-05-18 | Antibiotics |
| MX797996U MX5788E (es) | 1978-05-25 | 1979-05-23 | Procedimiento microbiologico para la preparacion de neplanocinas |
| CA328,113A CA1128882A (en) | 1978-05-25 | 1979-05-23 | Antibiotic neplanocins |
| IT7922957A IT1115245B (it) | 1978-05-25 | 1979-05-24 | Antibiotici del tipo neplanocine |
| CH490879A CH641804A5 (de) | 1978-05-25 | 1979-05-25 | Antibiotische neplanocine. |
| US06/101,126 US4321376A (en) | 1979-02-23 | 1979-12-07 | Neplanocin-B and -F |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2120179A JPS55113786A (en) | 1979-02-23 | 1979-02-23 | Novel substance, nepranosin b or f and its preparation |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25439287A Division JPS63218677A (ja) | 1987-10-08 | 1987-10-08 | 新規物質ネプラノシンｆ、およびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55113786A JPS55113786A (en) | 1980-09-02 |
| JPS6317078B2 true JPS6317078B2 (ja) | 1988-04-12 |
Family
ID=12048355
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2120179A Granted JPS55113786A (en) | 1978-05-25 | 1979-02-23 | Novel substance, nepranosin b or f and its preparation |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4321376A (ja) |
| JP (1) | JPS55113786A (ja) |
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| US4457919A (en) * | 1980-03-14 | 1984-07-03 | Newport Pharmaceutical International, Inc. | Method of imparting immunomodulating, antiviral or antitumor activity |
| US4340726A (en) * | 1980-03-14 | 1982-07-20 | Newport Pharmaceuticals International, Inc. | Esters |
| US4362729A (en) * | 1980-06-23 | 1982-12-07 | The Regents Of The University Of Minnesota | Alkoxyalkanoate esters of cyclaradine |
| DE3028272A1 (de) * | 1980-07-25 | 1982-02-25 | Fa. Dr. Willmar Schwabe, 7500 Karlsruhe | Durch purinbasen substituierte alkylamino-desoxy-1.4;3.6-dianhydro-hexit-nitrate, verfahren zu ihrer herstellung und pharmazeutische zubereitung |
| DE3028273A1 (de) * | 1980-07-25 | 1982-02-25 | Fa. Dr. Willmar Schwabe, 7500 Karlsruhe | Durch purinbasen substituierte 1.4;3.6-dianhydro-hexit-nitrate |
| DE3148363A1 (de) * | 1980-12-12 | 1982-09-16 | Toyo Jozo K.K., Shizuoka | Neplanocin a-derivate |
| US4743689A (en) * | 1984-11-20 | 1988-05-10 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Antibiotic derivative of adenine |
| US4605659A (en) * | 1985-04-30 | 1986-08-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Purinyl or pyrimidinyl substituted hydroxycyclopentane compounds useful as antivirals |
| US4942165A (en) * | 1986-02-11 | 1990-07-17 | Advanced Biologics, Inc. | Treatment for Alzheimer's disease |
| US4814339A (en) * | 1986-02-11 | 1989-03-21 | Advanced Biologics, Inc. | Treatment for Alzheimer's disease |
| US4859677A (en) * | 1987-04-17 | 1989-08-22 | University Of Kansas | Nucleoside analogues having antiviral activity |
| US5521162A (en) * | 1987-08-26 | 1996-05-28 | Merrell Pharmaceuticals Inc. | Aristeromycin analogues of 4',5'-didehydro-5'-fluoro-adenosine and methods of treating neoplastic and viral disease conditions |
| KR940015148A (ko) * | 1992-12-10 | 1994-07-20 | 전진모 | 지하천공기의 시멘트소일(cement soil)장치 |
| KR960001663Y1 (ko) * | 1993-06-01 | 1996-02-22 | 유영생 | 지하천공기의 물공급장치 |
| EP3177296B1 (en) | 2014-08-04 | 2019-12-18 | Auburn University | Enantiomers of the 1',6'-isomer of neplanocin a |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4138562A (en) * | 1977-02-09 | 1979-02-06 | The Regents Of The University Of Minnesota | Adenosine deaminase resistant antiviral purine nucleosides and method of preparation |
-
1979
- 1979-02-23 JP JP2120179A patent/JPS55113786A/ja active Granted
- 1979-12-07 US US06/101,126 patent/US4321376A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4321376A (en) | 1982-03-23 |
| JPS55113786A (en) | 1980-09-02 |
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