JPS63243760A - 抗ヒト肺腺癌単クロ−ン性抗体 - Google Patents
抗ヒト肺腺癌単クロ−ン性抗体Info
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- JPS63243760A JPS63243760A JP62078186A JP7818687A JPS63243760A JP S63243760 A JPS63243760 A JP S63243760A JP 62078186 A JP62078186 A JP 62078186A JP 7818687 A JP7818687 A JP 7818687A JP S63243760 A JPS63243760 A JP S63243760A
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- cells
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3023—Lung
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、ＩｇＧクラスに属し、ヒト肺腺癌に対して反
応性を有する単クローン性抗体ＡＬＣ−３９０およびこ
れを用いる肺腺癌の検出および治療方法に関する。本発
明は肺腺癌の病理診断、肺腺癌の治療に使用することが
でき、診断薬、医薬の分野で利用可能である。
応性を有する単クローン性抗体ＡＬＣ−３９０およびこ
れを用いる肺腺癌の検出および治療方法に関する。本発
明は肺腺癌の病理診断、肺腺癌の治療に使用することが
でき、診断薬、医薬の分野で利用可能である。
従来技術
従来、肺癌については、良い腫瘍マーカーがないとされ
ていたが、本発明者は、ヒト正常肺トレラントマウスを
用いる効率的な抗−ヒト肺癌単りローン性抗体の作製法
（特開昭６０−１９０７２１）により、肺癌の血清診断
に有効な抗−ヒト肺癌単りローン性抗体５ＬＣ−１（特
願昭６Ｏ−７６０４５） 、ＡＬＣ−１（特願昭６Ｏ−
７６０４６） 、ＡＬＣ−１８６（特願昭６０−２２０
８６１＞ 、ＡＬＣ−４５４（特願昭６ｌ−１６３４１
５）などを確立した。しかし、これらの単クローン性抗
体は、肺癌患者の血清中に放出される抗原を認識するた
め、血清診断には有用でも、細胞診、組織診、更には治
療には、必ずしも適しているとはいえなかった。
ていたが、本発明者は、ヒト正常肺トレラントマウスを
用いる効率的な抗−ヒト肺癌単りローン性抗体の作製法
（特開昭６０−１９０７２１）により、肺癌の血清診断
に有効な抗−ヒト肺癌単りローン性抗体５ＬＣ−１（特
願昭６Ｏ−７６０４５） 、ＡＬＣ−１（特願昭６Ｏ−
７６０４６） 、ＡＬＣ−１８６（特願昭６０−２２０
８６１＞ 、ＡＬＣ−４５４（特願昭６ｌ−１６３４１
５）などを確立した。しかし、これらの単クローン性抗
体は、肺癌患者の血清中に放出される抗原を認識するた
め、血清診断には有用でも、細胞診、組織診、更には治
療には、必ずしも適しているとはいえなかった。
これらの目的の為には、放出抗原でなく、癌細泡膜表面
抗原を認識する単クローン性抗体が望ましい。
抗原を認識する単クローン性抗体が望ましい。
発明が解決すべき問題点
上述のごとく、現在のところ肺腺癌細胞膜と特異性が高
（、かつ高率に反応するような単クローン性抗体は知ら
れていない。一方、元来欧米型の癌といわれた肺癌は、
日本でも急激に増加しつつあり、肺癌細胞膜に特異性の
高い単クローン性抗体があれば、診断、治療上非常に有
益である。
（、かつ高率に反応するような単クローン性抗体は知ら
れていない。一方、元来欧米型の癌といわれた肺癌は、
日本でも急激に増加しつつあり、肺癌細胞膜に特異性の
高い単クローン性抗体があれば、診断、治療上非常に有
益である。
問題点を解決するための手段
本発明者は、ヒト肺腺癌膜成分を免疫源として樹立した
ハイブリドーマが生産する単クローン性抗体ＡＬＣ−３
９０が、肺腺癌細胞膜に高い特異性を示し、肺腺癌の病
理診断および治療に極めて有用であることを見出し本発
明を完成した。
ハイブリドーマが生産する単クローン性抗体ＡＬＣ−３
９０が、肺腺癌細胞膜に高い特異性を示し、肺腺癌の病
理診断および治療に極めて有用であることを見出し本発
明を完成した。
以下本発明について詳細に説明する。
本発明は、ヒト肺腺癌組織膜成分で免疫したマウスの肺
細胞とマウス骨髄腫細胞とを融合させてハイブリドーマ
を作製し、ヒト肺腺癌細胞膜に反応性を有する単クロー
ン性抗体を選択し、該ハイブリドーマを培地中に培養す
るかマウスに投与して該マウスで腹水化し、該培養物ま
たは腹水より採取することにより得られる抗ヒト肺腺癌
反応性単りローン性抗体を提供する。
細胞とマウス骨髄腫細胞とを融合させてハイブリドーマ
を作製し、ヒト肺腺癌細胞膜に反応性を有する単クロー
ン性抗体を選択し、該ハイブリドーマを培地中に培養す
るかマウスに投与して該マウスで腹水化し、該培養物ま
たは腹水より採取することにより得られる抗ヒト肺腺癌
反応性単りローン性抗体を提供する。
本発明の単りローン住抗体は、ＩｇＧクラスに属し、肺
腺癌細胞膜に反応し、蛋白質を抗原として言忍工哉する
。
腺癌細胞膜に反応し、蛋白質を抗原として言忍工哉する
。
本発明単クローン性抗体の具体例としては、ハイブリド
ーマ細胞株ＡＬＣ−３９０（昭和６２年３月２６日付で
英国のＢｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎｏｆ
Ａｎｉｍａｌ Ｃｅ１ｌ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ にＥ Ｃ
Ａ ＣＣＮ。
ーマ細胞株ＡＬＣ−３９０（昭和６２年３月２６日付で
英国のＢｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎｏｆ
Ａｎｉｍａｌ Ｃｅ１ｌ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ にＥ Ｃ
Ａ ＣＣＮ。
８７０３２６０１として寄託しである）が生産するＡＬ
Ｃ−３９０があげられる。
Ｃ−３９０があげられる。
以下に本発明単クローン性抗体の製造法を詳細に説明す
る。
る。
（１）動物の免疫と抗体産生細胞の調製３〜１０週令、
連合しくは８連合のマウスに、ヒト肺腺癌の細胞１組織
あるいはそれらの膜成分を免疫して、その動物の牌、リ
ンパ節、末梢血中の抗体産生細胞を調製する。免疫する
マウスはヒト正常肺細胞で前処理して免疫寛容にしたマ
ウスを用いるのが好ましい。
連合しくは８連合のマウスに、ヒト肺腺癌の細胞１組織
あるいはそれらの膜成分を免疫して、その動物の牌、リ
ンパ節、末梢血中の抗体産生細胞を調製する。免疫する
マウスはヒト正常肺細胞で前処理して免疫寛容にしたマ
ウスを用いるのが好ましい。
免疫の方法は、動物の皮下あるいは静脈内あるいは腹腔
内に、適当なアジュバント〔例えば、フロイントの完全
アジュバント（ＣｏｍｐｌｅｔｅＦｒｅｕｎｄ’ｓ Ａ
ｃ１ｊｕｖａｎｔ）または、水酸化アルミニウムゲルと
百日咳菌ワクチンなど〕とともにヒト肺腺癌細胞（１０
６〜１０７細胞／匹）。
内に、適当なアジュバント〔例えば、フロイントの完全
アジュバント（ＣｏｍｐｌｅｔｅＦｒｅｕｎｄ’ｓ Ａ
ｃ１ｊｕｖａｎｔ）または、水酸化アルミニウムゲルと
百日咳菌ワクチンなど〕とともにヒト肺腺癌細胞（１０
６〜１０７細胞／匹）。
ヒト肺腺癌組織もしくはそれらの膜成分（膜断片） （
１０〜５００Ｍｇ／匹）を投与する。
１０〜５００Ｍｇ／匹）を投与する。
以後、１〜２週問おきに抗原を２〜５回投与する。各免
疫後３〜７日目に眼底静脈叢より採血し、その血清がヒ
ト肺腺癌と反応することを以下に示す酵素免疫測定法〔
酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）：医学書腕利１９７６年
〕などで調べる。
疫後３〜７日目に眼底静脈叢より採血し、その血清がヒ
ト肺腺癌と反応することを以下に示す酵素免疫測定法〔
酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）：医学書腕利１９７６年
〕などで調べる。
酵素免疫測定法：
９６大のＥＩＡ用プレート〔フロー・ラボラトリーズ（
Ｆｌｏｗ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社製〕に、正常
あるいは１Ｉｆｆｉ瘍細抱１組織の膜成分（蛋白量とし
て１０〜１．０００Ｍｇ／１Ｔｌｌ含有する膜断片）を
１００〜２００μｌ／穴ずつ分注し、４℃で１〜２晩放
置して、上清を抜き去った後、レジン水あるいは、ＰＢ
Ｓ （リン酸二ナトリウム１．８３ｇ、 リン酸−カ
リウム０．２１ｇ１ 食塩７．６５ｇ、蒸溜水ＩＩｌ、
ｐＨ７，２）でよく洗浄後、１％ＢＳＡ （牛血清アル
ブミン）−ＰＢＳを１００〜２００μｌ／穴分注し、４
℃で１〜２晩放置して、プレート上に残った蛋白質との
結合残基をブロック（ブロッキング）した。その後、Ｂ
ＳＡ−ＰＢＳを捨て、レジン水あるいはＰＢＳでよく洗
浄した後、第１抗体として、ＢＳＡ−ＰＢＳで希釈した
試料（マウス血清、ハイブリドーマ培養上清、粗精製モ
ノクローナル抗体）を１００μＩｌ／穴分注し、４℃で
１晩放置する。レジン水で１回、２Ｍ ＮａＣ１溶液
で６回洗浄した後、第２抗体としてウサギの抗マウスイ
ムノグロプリンＩｇＧ−ベルオキシダーセ結合物〔ダコ
（ＤＡＫＯ）社製、販売元協和メデックス〕の１００倍
希釈液を１００μＱ／穴分注し、室温で２時間放置する
。
Ｆｌｏｗ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）社製〕に、正常
あるいは１Ｉｆｆｉ瘍細抱１組織の膜成分（蛋白量とし
て１０〜１．０００Ｍｇ／１Ｔｌｌ含有する膜断片）を
１００〜２００μｌ／穴ずつ分注し、４℃で１〜２晩放
置して、上清を抜き去った後、レジン水あるいは、ＰＢ
Ｓ （リン酸二ナトリウム１．８３ｇ、 リン酸−カ
リウム０．２１ｇ１ 食塩７．６５ｇ、蒸溜水ＩＩｌ、
ｐＨ７，２）でよく洗浄後、１％ＢＳＡ （牛血清アル
ブミン）−ＰＢＳを１００〜２００μｌ／穴分注し、４
℃で１〜２晩放置して、プレート上に残った蛋白質との
結合残基をブロック（ブロッキング）した。その後、Ｂ
ＳＡ−ＰＢＳを捨て、レジン水あるいはＰＢＳでよく洗
浄した後、第１抗体として、ＢＳＡ−ＰＢＳで希釈した
試料（マウス血清、ハイブリドーマ培養上清、粗精製モ
ノクローナル抗体）を１００μＩｌ／穴分注し、４℃で
１晩放置する。レジン水で１回、２Ｍ ＮａＣ１溶液
で６回洗浄した後、第２抗体としてウサギの抗マウスイ
ムノグロプリンＩｇＧ−ベルオキシダーセ結合物〔ダコ
（ＤＡＫＯ）社製、販売元協和メデックス〕の１００倍
希釈液を１００μＱ／穴分注し、室温で２時間放置する
。
ＰＢＳでよく洗浄後、ＡＢＴＳ基質液（２゜２′−アジ
ノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸
）ニアンモニウム５５０ｍｇを０．１Ｍクエン酸緩衝液
（ｐＨ４，２）ｉｆに溶かした溶液に、使用直前に過酸
化水素ＩＩＪｆｌ／ ｍ ｌを加えた溶液〕を用い、発
色をＯＤ４１５１１１１の吸光度で測定する。このとき
、肺腺癌細胞、組織あるいはそれらの膜成分に対して強
く反応するマウスをヒト肺腺癌免疫マウスとしてハイブ
リドーマ作製のための抗体産生細胞の供給源として用い
る。
ノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸
）ニアンモニウム５５０ｍｇを０．１Ｍクエン酸緩衝液
（ｐＨ４，２）ｉｆに溶かした溶液に、使用直前に過酸
化水素ＩＩＪｆｌ／ ｍ ｌを加えた溶液〕を用い、発
色をＯＤ４１５１１１１の吸光度で測定する。このとき
、肺腺癌細胞、組織あるいはそれらの膜成分に対して強
く反応するマウスをヒト肺腺癌免疫マウスとしてハイブ
リドーマ作製のための抗体産生細胞の供給源として用い
る。
酵素免疫測定法を行うにあたって、抗原として、細胞そ
のものを用いる場合は、フアシヨン（Ｆａｌｃｏｎ）
３０７２プレート中で、標的細胞を培養し、０．２５％
ゲルタールアルデヒド−ＰＢＳを加え、室温に１〜２時
間放置し、ＰＢＳでよく洗浄後、１％ＢＳＡ−ＰＢＳ１
００〜２００μｇを加え、２時間放置し、レジン水また
はＰＢＳでよく洗浄し、そのプレートを用いて、一般の
抗原コートプレートを用いるのと同様の方法にて、抗体
価の測定を行った。
のものを用いる場合は、フアシヨン（Ｆａｌｃｏｎ）
３０７２プレート中で、標的細胞を培養し、０．２５％
ゲルタールアルデヒド−ＰＢＳを加え、室温に１〜２時
間放置し、ＰＢＳでよく洗浄後、１％ＢＳＡ−ＰＢＳ１
００〜２００μｇを加え、２時間放置し、レジン水また
はＰＢＳでよく洗浄し、そのプレートを用いて、一般の
抗原コートプレートを用いるのと同様の方法にて、抗体
価の測定を行った。
細胞融合に供するにあたって、免疫化マウスに融合処理
の３〜４日前に、ヒト肺腺癌細胞９紐織あるいはその膜
成分を２〜５ Ｘ １０’細胞／匹あるいは２０〜４０
０μｇ／匹腹腔内に投与し、肺臓細胞を摘出し、肺細胞
を調製する。肺臓をＭＥＭ （日永製薬社製）中で細断
し、ビンセットでほぐし、１２０Ｏｒｐｍ。
の３〜４日前に、ヒト肺腺癌細胞９紐織あるいはその膜
成分を２〜５ Ｘ １０’細胞／匹あるいは２０〜４０
０μｇ／匹腹腔内に投与し、肺臓細胞を摘出し、肺細胞
を調製する。肺臓をＭＥＭ （日永製薬社製）中で細断
し、ビンセットでほぐし、１２０Ｏｒｐｍ。
５分間遠心分離にかけ、上清を捨て、トリス−塩化アン
モニウム緩衝液（ｐＨ７，６５）で１〜２分間処理し赤
血球を除去し、ＭＥＭで３回洗浄して融合用肺細胞とし
て提供する。
モニウム緩衝液（ｐＨ７，６５）で１〜２分間処理し赤
血球を除去し、ＭＥＭで３回洗浄して融合用肺細胞とし
て提供する。
ヒト肺腺癌組織の膜成分の調製は下記のとおり行う。
すなわち−８０℃に凍結保存しておいた組織片を融解後
、鋏で細切りし、旧ｔｒａ−Ｄｉｓｐｅｒｓｅｒ（Ｙａ
ｍａｔｏ）で機械的に破砕後、グラステフロンホモジナ
イザーでホモジナイズしたものを４℃ｔｏｏ、 ０００
ｘ ｇ 、 ２０分間遠心分離し、その上清をさらに
４℃１００．０ＯＯＧ、 １時間遠心分離し得た沈殿を
０．０１Ｍ リン酸バッファー（ｐＨ７，２）に懸濁し
、これを膜成分として使う。
、鋏で細切りし、旧ｔｒａ−Ｄｉｓｐｅｒｓｅｒ（Ｙａ
ｍａｔｏ）で機械的に破砕後、グラステフロンホモジナ
イザーでホモジナイズしたものを４℃ｔｏｏ、 ０００
ｘ ｇ 、 ２０分間遠心分離し、その上清をさらに
４℃１００．０ＯＯＧ、 １時間遠心分離し得た沈殿を
０．０１Ｍ リン酸バッファー（ｐＨ７，２）に懸濁し
、これを膜成分として使う。
（２）骨髄腫細胞の調製
骨髄腫細胞としては、マウスから得られた株化細胞を使
用す、る。たとえば、８−アザグアニン耐性マウス（Ｂ
ＡＬＢ／ｃ由来）骨髄腫細胞株Ｐ３−Ｘ６３Ａｇ８−０
１ （Ｐ３−Ｕｌ）〔カレント・トピックス・イン・
ミクロバイオロジイ・アンド・イムノロシイ−１（Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｙ ａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ −１） ）
Ｃヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロシイ（
Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ。
用す、る。たとえば、８−アザグアニン耐性マウス（Ｂ
ＡＬＢ／ｃ由来）骨髄腫細胞株Ｐ３−Ｘ６３Ａｇ８−０
１ （Ｐ３−Ｕｌ）〔カレント・トピックス・イン・
ミクロバイオロジイ・アンド・イムノロシイ−１（Ｃｕ
ｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｙ ａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ −１） ）
Ｃヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イムノロシイ（
Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ。
１ｍｍｕｎｏｌｏｇＹ） ６．５１１−５１９ （１
９７６）） 、ＳＰ ２１０−Ａｇ１４ （ＳＰ−２
） （ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ） ２７６、２６
９−２７０ （１９７８）） 、Ｐ ３−Ｘ ６３−
Ａ ｇ８６５３ （６５３） ［：ジャーナル・オブ・
イムノロシイ（Ｊ、１ｍ＋ｒ＋ｕｎｏｌｏｇｙ） １２
３．１５４８−１５５０ （１９７９） Ｌ Ｐ３−
Ｘ６３−Ａｇ８（Ｘ６３） ［：ネイチャー （Ｎａ
ｔｕｒｅ） ２５６．４９５−４９７ （１９７５））
などが用いられる。これらの細胞株は、８−アザグアニ
ン培地（ＲＰＭＩ−１６４０培地にグルタミン（１，５
ｍＭ）。
９７６）） 、ＳＰ ２１０−Ａｇ１４ （ＳＰ−２
） （ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ） ２７６、２６
９−２７０ （１９７８）） 、Ｐ ３−Ｘ ６３−
Ａ ｇ８６５３ （６５３） ［：ジャーナル・オブ・
イムノロシイ（Ｊ、１ｍ＋ｒ＋ｕｎｏｌｏｇｙ） １２
３．１５４８−１５５０ （１９７９） Ｌ Ｐ３−
Ｘ６３−Ａｇ８（Ｘ６３） ［：ネイチャー （Ｎａ
ｔｕｒｅ） ２５６．４９５−４９７ （１９７５））
などが用いられる。これらの細胞株は、８−アザグアニ
ン培地（ＲＰＭＩ−１６４０培地にグルタミン（１，５
ｍＭ）。
２メルカプトエタノール（５Ｘ １０−５Ｍ） 。
ジェンタマイシン（１０Ｍｇ／ｍ＋）および牛胎児血清
（Ｆ ＣＳ） （ＣＳ Ｌ社製）（１０％）を加えた
正常培地に、さらに８−アザグアニン（１５Ｍｇ／ｍｌ
）を加えた培地〕て継代するが、細胞融合の３〜４日前
に正常培地に継代し、融合当日２Ｘ１０’以上の細胞数
を確保する。
（Ｆ ＣＳ） （ＣＳ Ｌ社製）（１０％）を加えた
正常培地に、さらに８−アザグアニン（１５Ｍｇ／ｍｌ
）を加えた培地〕て継代するが、細胞融合の３〜４日前
に正常培地に継代し、融合当日２Ｘ１０’以上の細胞数
を確保する。
（３）細胞融合
（１）で免疫した抗体産生細胞と（２）で得られた骨髄
腫細胞をＭＥＭ培地またはＰＢＳでよく洗浄し、細胞数
が、抗体産生細胞：骨髄腫細胞−５〜１０；１になるよ
う混合し、遠心分離（１，，２０Ｏｒｐｍ ５分）シタ
後、上Ｆｆ ヲ捨Ｔ−１沈殿した細り色群をよくほぐし
た後、撹拌しながら、３７℃で、ポリエチレングライコ
ール１、Ｏ’ＯＯ（ＰＥＧ−１，０００） ２ ｇ、
ＭＥＭ２ｍｌおよびジメチルスルホキシド０．７ｍｌ
の混液０．２〜１ｍｌ／１０３抗体産生細胞を加え、１
〜２分間毎にＭＥＭ１〜２ｍｌを数回加えた後、Ｍ Ｅ
Ｍを加えて全量が５０ｍ１になるようにする。遠心分
子１ｉｆｔ （９０Ｏｒｐｍ ５分）後、上清を捨て、
ゆるやかに細胞をほぐした後、正常培地（ＲＰＭｔ−１
６４０，ＦＣ３ＩＯ％）１００ｍｌを加え、メスピペッ
トによる吸込み、吹出しでゆるやかに細胞を懸濁する。
腫細胞をＭＥＭ培地またはＰＢＳでよく洗浄し、細胞数
が、抗体産生細胞：骨髄腫細胞−５〜１０；１になるよ
う混合し、遠心分離（１，，２０Ｏｒｐｍ ５分）シタ
後、上Ｆｆ ヲ捨Ｔ−１沈殿した細り色群をよくほぐし
た後、撹拌しながら、３７℃で、ポリエチレングライコ
ール１、Ｏ’ＯＯ（ＰＥＧ−１，０００） ２ ｇ、
ＭＥＭ２ｍｌおよびジメチルスルホキシド０．７ｍｌ
の混液０．２〜１ｍｌ／１０３抗体産生細胞を加え、１
〜２分間毎にＭＥＭ１〜２ｍｌを数回加えた後、Ｍ Ｅ
Ｍを加えて全量が５０ｍ１になるようにする。遠心分
子１ｉｆｔ （９０Ｏｒｐｍ ５分）後、上清を捨て、
ゆるやかに細胞をほぐした後、正常培地（ＲＰＭｔ−１
６４０，ＦＣ３ＩＯ％）１００ｍｌを加え、メスピペッ
トによる吸込み、吹出しでゆるやかに細胞を懸濁する。
この懸濁液を２４穴培養用プレートに１ｍ１Ｚ穴ずつ分
注し、５％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で２４時
間培養する。培養プレートにｌａ＋ｌ／穴のＨＡＴ培地
〔正常培地にヒボキサンチン（１０−’Ｍ＞ 、チミジ
ン（１，５Ｘ １０−’Ｍ）およびアミノプテリン（４
×１０−’Ｍ）を加えた培地〕を加え、さらに２４時間
培養する。以後２日間、２４時間毎に、培養上清１ｍｌ
を捨て、新たに同量のＨＡＴ培地を加え、ＣＯ２インキ
ユベーター中、３７℃で１０〜１４日間培養する。
注し、５％ＣＯ２インキュベーター中、３７℃で２４時
間培養する。培養プレートにｌａ＋ｌ／穴のＨＡＴ培地
〔正常培地にヒボキサンチン（１０−’Ｍ＞ 、チミジ
ン（１，５Ｘ １０−’Ｍ）およびアミノプテリン（４
×１０−’Ｍ）を加えた培地〕を加え、さらに２４時間
培養する。以後２日間、２４時間毎に、培養上清１ｍｌ
を捨て、新たに同量のＨＡＴ培地を加え、ＣＯ２インキ
ユベーター中、３７℃で１０〜１４日間培養する。
コロニー状に生育してきた融合細胞の認められる穴につ
いて、上清１ｍｌを捨て、ＨＴ培地（ＨＡＴ培地からア
ミノプテリンを除いた培地）を同量加え、以後２日間２
４時間毎にＨＴ培地への変換を行う。
いて、上清１ｍｌを捨て、ＨＴ培地（ＨＡＴ培地からア
ミノプテリンを除いた培地）を同量加え、以後２日間２
４時間毎にＨＴ培地への変換を行う。
ＨＴ培地で３〜４日間培養後、培養上清の一部をとり上
記の酵素免疫測定法により、ヒト肺腺癌に対する抗体価
を測定する。このとき、同様の方法で、ヒト正常細胞９
紐織あるいはその膜成分などとの反応性も測定し、ヒト
肺腺癌細胞１紐織あるいはその膜成分に特異的に反応す
るものを選択する。ヒト肺腺癌細胞９姐織あるいはその
膜成分に強く反応し、ヒト正常細胞９紐織あるいはその
膜成分などに反応しない穴について、限界希釈法により
クローニングを２回繰り返し、安定してヒト肺腺癌細胞
９姐織あるいはその膜成分に強い抗体価の認められたも
のを抗ヒト肺腺癌単りローン性抗体産生ハイブリドーマ
株として選択する。
記の酵素免疫測定法により、ヒト肺腺癌に対する抗体価
を測定する。このとき、同様の方法で、ヒト正常細胞９
紐織あるいはその膜成分などとの反応性も測定し、ヒト
肺腺癌細胞１紐織あるいはその膜成分に特異的に反応す
るものを選択する。ヒト肺腺癌細胞９姐織あるいはその
膜成分に強く反応し、ヒト正常細胞９紐織あるいはその
膜成分などに反応しない穴について、限界希釈法により
クローニングを２回繰り返し、安定してヒト肺腺癌細胞
９姐織あるいはその膜成分に強い抗体価の認められたも
のを抗ヒト肺腺癌単りローン性抗体産生ハイブリドーマ
株として選択する。
（４）単クローン性抗体の調製
プリスタン処理Ｃ２，６，１０，１４−テトラメチルペ
ンタデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ） ０．５ｍｌを腹腔
内投与し、２週間飼育する〕した８〜１０週令の連合ド
雌マウスに、（３）で得られた抗ヒト肺腺癌単りローン
性抗体産生ハイブリドーマ細胞２〜４Ｘ１０６細胞／匹
を腹腔内注射する。１０〜２１日でハイブリドーマは復
水癌化する。このマウスから腹水を採取し、遠心分離（
３，００Ｏｒｐｍ、 ５分）して固形分を除去後、５
０％硫酸アンモニウムにて塩析し、０．０’４Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ８，０，０，０３Ｍ Ｎａ（Ｊ！を含む
）で透析後、Ｄ Ｅ ５２ （Ｗｈａｔｍａｎ社製）の
カラムに通塔し、ＩｇＧ画分を集め、ｍｓ単単口ローン
性抗体する。
ンタデカン（Ｐｒｉｓｔａｎｅ） ０．５ｍｌを腹腔
内投与し、２週間飼育する〕した８〜１０週令の連合ド
雌マウスに、（３）で得られた抗ヒト肺腺癌単りローン
性抗体産生ハイブリドーマ細胞２〜４Ｘ１０６細胞／匹
を腹腔内注射する。１０〜２１日でハイブリドーマは復
水癌化する。このマウスから腹水を採取し、遠心分離（
３，００Ｏｒｐｍ、 ５分）して固形分を除去後、５
０％硫酸アンモニウムにて塩析し、０．０’４Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ８，０，０，０３Ｍ Ｎａ（Ｊ！を含む
）で透析後、Ｄ Ｅ ５２ （Ｗｈａｔｍａｎ社製）の
カラムに通塔し、ＩｇＧ画分を集め、ｍｓ単単口ローン
性抗体する。
抗体のインタイブの決定は、オクタロニイ（ｏｕｃｈｔ
ｅｒ＋ｏｎｙ）法（二重免疫拡散法）（免疫学実験入門
、生物化学実験法１５、学会出版センター刊、Ｐ、７４
．１９８１年）によって行う。
ｅｒ＋ｏｎｙ）法（二重免疫拡散法）（免疫学実験入門
、生物化学実験法１５、学会出版センター刊、Ｐ、７４
．１９８１年）によって行う。
蛋白量の定量は、フォーリン法および２８０ｎｍでの吸
光度（１，４（ＯＤ２１Ｇ ） ＃イム／グロブリン１
ｍｇ／１Ｔｌｌ〕より算出する。
光度（１，４（ＯＤ２１Ｇ ） ＃イム／グロブリン１
ｍｇ／１Ｔｌｌ〕より算出する。
得られた単クローン性抗体の特異性の決定は複数の検体
から得られたヒトの各種の臓器由来の正常あるいは腫瘍
組織あるいはその膜成分との反応性、各種ヒト正常ある
いは腫瘍細胞培養株またはヒト胎児細胞培養株もしくは
それらの膜成分との反応性、従来から知られている癌胎
児性抗原（例えばＣＥＡ）との反応性を酵素免疫測定法
、免疫組織学的判定法（ＰＡＰ法）などにより行い、い
ずれの測定法においてもヒト腺癌以外とは５、なるべく
反応しないものを選択する。
から得られたヒトの各種の臓器由来の正常あるいは腫瘍
組織あるいはその膜成分との反応性、各種ヒト正常ある
いは腫瘍細胞培養株またはヒト胎児細胞培養株もしくは
それらの膜成分との反応性、従来から知られている癌胎
児性抗原（例えばＣＥＡ）との反応性を酵素免疫測定法
、免疫組織学的判定法（ＰＡＰ法）などにより行い、い
ずれの測定法においてもヒト腺癌以外とは５、なるべく
反応しないものを選択する。
（５）抗原解析
前述の酵素免疫抗体法、免疫組織化学的染色決の実施に
際して、抗原（肺腺癌膜成分、肺腺癌培養細胞株、肺腺
癌組織）をノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａ
ｓｅ）、 プロテアーゼ（ｐｒｏｔｅａｓｅ）などの
酵素や過ヨウ素酸などの試薬で前処理した後、単クロー
ン性抗体と反応させ、それらの処理をしていない元の抗
原と単クローン性抗体の反応性との差より、抗原の化学
的性状（単クローン性抗体の認識する抗原部位の化学的
性状）を明らかにした。
際して、抗原（肺腺癌膜成分、肺腺癌培養細胞株、肺腺
癌組織）をノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａ
ｓｅ）、 プロテアーゼ（ｐｒｏｔｅａｓｅ）などの
酵素や過ヨウ素酸などの試薬で前処理した後、単クロー
ン性抗体と反応させ、それらの処理をしていない元の抗
原と単クローン性抗体の反応性との差より、抗原の化学
的性状（単クローン性抗体の認識する抗原部位の化学的
性状）を明らかにした。
すなわち、ノイラミニダーゼ処理により抗原性が消失す
ればシアル酸が、プロテアーゼ処理により消失すれば蛋
白質が、また過ヨウ素酸処理により消失すれば糖鎖が、
抗原決定基に関与していると推定される。
ればシアル酸が、プロテアーゼ処理により消失すれば蛋
白質が、また過ヨウ素酸処理により消失すれば糖鎖が、
抗原決定基に関与していると推定される。
以下本発明の実施例を示す。
実施例１゜
（１）抗体産生細胞の調製
ヒト正常肺腺成分（１００ＪＬｇ蛋白質／匹）を、生後
２４時間以内の新生仔ＢＡＬＢ／Ｃマウス（静岡実験動
物製）に静脈内投与した。
２４時間以内の新生仔ＢＡＬＢ／Ｃマウス（静岡実験動
物製）に静脈内投与した。
８週間経過後のマウスにヒト肺腺隔膜断片１０Ｌｃｇ（
蛋白質換算）７匹を水酸化アルミニウムゲル２ｍｇ／匹
、百日咳菌死菌ワクチンｌＸｌ０’／匹とともに腹腔内
投与した。以後１〜２週おきに、同一抗原１００μｇ〈
蛋白質換算）７匹で３〜５回免疫した。これら免疫処理
したマウスのうち、その抗血清が、ヒト肺腺癌細胞また
は組織あるいはそれらの膜断片と強く反応したマウスを
免疫マウスとして、そのマウスより、脛細胞を調製して
、細胞融合に供した。
蛋白質換算）７匹を水酸化アルミニウムゲル２ｍｇ／匹
、百日咳菌死菌ワクチンｌＸｌ０’／匹とともに腹腔内
投与した。以後１〜２週おきに、同一抗原１００μｇ〈
蛋白質換算）７匹で３〜５回免疫した。これら免疫処理
したマウスのうち、その抗血清が、ヒト肺腺癌細胞また
は組織あるいはそれらの膜断片と強く反応したマウスを
免疫マウスとして、そのマウスより、脛細胞を調製して
、細胞融合に供した。
（２）マウス骨髄腫細胞の調製
８−アザグアニン耐性マウス骨髄腫細胞株Ｐ３−Ｕｌを
正常培地で培養し、細胞融合時に２ Ｘ １０’以上の
細胞を得、細胞融合に親株として供した。
正常培地で培養し、細胞融合時に２ Ｘ １０’以上の
細胞を得、細胞融合に親株として供した。
（３）ハイブリドーマの作製
（１）と（２）で得られた肺細胞と骨髄腫細胞とを５＝
１の割合で用い、前述した方式で融合させ、ＨＡＴ培地
で３７℃、１４日間ＣＯ２５％下で培養して、融合細胞
を選択し、ＨＴ培地に変えてさらに培養し、抗ヒト肺腺
癌に対する抗体価の測定をして、活性な穴を選び、さら
に正常培地に変え、２回クローニングを繰り返して、種
々の測定法により、ヒト正常細胞や組織に全く反応せず
、ヒト肺腺癌に反応する単クローン性抗体を産生ずるハ
イプリドーマ株ＡＬＣ−３９０を選択した。
１の割合で用い、前述した方式で融合させ、ＨＡＴ培地
で３７℃、１４日間ＣＯ２５％下で培養して、融合細胞
を選択し、ＨＴ培地に変えてさらに培養し、抗ヒト肺腺
癌に対する抗体価の測定をして、活性な穴を選び、さら
に正常培地に変え、２回クローニングを繰り返して、種
々の測定法により、ヒト正常細胞や組織に全く反応せず
、ヒト肺腺癌に反応する単クローン性抗体を産生ずるハ
イプリドーマ株ＡＬＣ−３９０を選択した。
（４）単クローン性抗体の精製
ブリスタン処理した８連合ヌード雌マウスに（３）で得
られたハイブリドーマ株ＡＬＣ−３９０を４Ｘ１０６細
胞／匹腹腔内注射した。
られたハイブリドーマ株ＡＬＣ−３９０を４Ｘ１０６細
胞／匹腹腔内注射した。
１０〜２１日後に、ハイブリドーマは腹水癌化する。腹
水のたまったマウスから、腹水を採取（５〜Ｉ Ｑｍｌ
／匹）し、遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ、 ５分）して
固形分を除去した。４０％硫酸アンモニウムにて塩析し
、０．０４ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ８，０，０，０３Ｍ
Ｎａ（ｌを含む）で透析後、ＤＥ ５２ （Ｗｈａ
ｔｍａｎ社製）（ベントボリューム５０ｍ１）のカラム
に流速２０〜３０ｍｌ／ｈｒで通塔しＩｇＧ画分を集め
、精製単クローン性抗体とする。
水のたまったマウスから、腹水を採取（５〜Ｉ Ｑｍｌ
／匹）し、遠心分離（３，００Ｏｒｐｍ、 ５分）して
固形分を除去した。４０％硫酸アンモニウムにて塩析し
、０．０４ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ８，０，０，０３Ｍ
Ｎａ（ｌを含む）で透析後、ＤＥ ５２ （Ｗｈａ
ｔｍａｎ社製）（ベントボリューム５０ｍ１）のカラム
に流速２０〜３０ｍｌ／ｈｒで通塔しＩｇＧ画分を集め
、精製単クローン性抗体とする。
（５）ＡＬＣ−３９０の特異性
このようにして得られた抗ヒト肺腺癌反応性単りローン
性抗体ＡＬＣ−３９０の反応特異性を第１表に示した。
性抗体ＡＬＣ−３９０の反応特異性を第１表に示した。
測定は、酵素結合免疫分析（ＥＬＩＳＡ）により以下の
とおり行った。
とおり行った。
組織（膜成分）を標的とする場合；
酵素免疫分析用９６穴プレー） （Ｌｉｎｂｒｏ社製）
に０．１ ｍｇ／ｍｌの組織（膜成分）液を５０４／穴
入れ、３７℃で２時間または４℃で１晩放置して組織（
膜成分）を固定した。ＰＢＳで洗浄後、１０％牛脂児血
清含をＰＢＳを１００ρ／穴分注し、固定組織（膜成分
）の活性残基を保護した。ＰＢＳで洗浄後、第１抗体（
ＡＬＣ−３９０）５０ρ／穴を入れ、３７℃で１〜２時
間または４℃で１晩放置して標的と抗体を反応させた。
に０．１ ｍｇ／ｍｌの組織（膜成分）液を５０４／穴
入れ、３７℃で２時間または４℃で１晩放置して組織（
膜成分）を固定した。ＰＢＳで洗浄後、１０％牛脂児血
清含をＰＢＳを１００ρ／穴分注し、固定組織（膜成分
）の活性残基を保護した。ＰＢＳで洗浄後、第１抗体（
ＡＬＣ−３９０）５０ρ／穴を入れ、３７℃で１〜２時
間または４℃で１晩放置して標的と抗体を反応させた。
０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（和光純薬工業社製）含有
ＰＢＳで５回洗浄して未反応の抗体を除去した。第２抗
体としてパーオキンダーゼ結合ウサギ抗マウス免疫グロ
ブリン（Ｍｉｌｅｓ−Ｙｅｃｌａ社：２００倍希釈）５
０μ２／穴を入れ、３７℃で１時間反応させた。０，０
５％Ｔｗｅｅｎ＝２０含有ＰＢＳで５回洗浄後、レジン
水で３回洗浄した。
ＰＢＳで５回洗浄して未反応の抗体を除去した。第２抗
体としてパーオキンダーゼ結合ウサギ抗マウス免疫グロ
ブリン（Ｍｉｌｅｓ−Ｙｅｃｌａ社：２００倍希釈）５
０μ２／穴を入れ、３７℃で１時間反応させた。０，０
５％Ｔｗｅｅｎ＝２０含有ＰＢＳで５回洗浄後、レジン
水で３回洗浄した。
、へＢＴＳ ５０ｄ／穴を加えて反応を開始し、５％ラ
ウリル硫酸ナトリウム水溶液５０μｇ／穴を加えて反応
を停止させた。
ウリル硫酸ナトリウム水溶液５０μｇ／穴を加えて反応
を停止させた。
培養株細胞を標的とする場合：
細胞を培養用９６穴プレー） （Ｌｉｎｂｒｏ社製）で
培養し、コンフルエントになった時点で上記の組織（膜
成分）の場合と同様に反応させた。ただし第１抗体、第
２抗体とも反応条件は室温で３０分間とし、発色後に反
応液を分析用９６穴プレートに移すことにより反応を停
止させた。
培養し、コンフルエントになった時点で上記の組織（膜
成分）の場合と同様に反応させた。ただし第１抗体、第
２抗体とも反応条件は室温で３０分間とし、発色後に反
応液を分析用９６穴プレートに移すことにより反応を停
止させた。
抗原ＣＥＡの場合は組織（膜成分）に替えてＣＥＡを用
いる以外は組織の場合と同様に行った。いずれの場合も
、４９０ｎｍを対照第１表に示すごとく、ＡＬＣ−３９
０は、腺癌細胞に高い特異性を有していた。しかし、Ｃ
ＥＡと反応しないことから、抗−ＣＥＡ抗体とは異なる
ことがわかる。
いる以外は組織の場合と同様に行った。いずれの場合も
、４９０ｎｍを対照第１表に示すごとく、ＡＬＣ−３９
０は、腺癌細胞に高い特異性を有していた。しかし、Ｃ
ＥＡと反応しないことから、抗−ＣＥＡ抗体とは異なる
ことがわかる。
実施例２゜
ミクロトームで５部ｍにスライスした各種正常成人、胎
児臓器および癌組織のホルマリン固定パラフィン包埋組
織切片を、卵白アルブミンでコートしたスライドグラス
に固定し、キシレンで脱パラフイン後、アルコール−水
で段階的に親水化した。レジン水で５分間すすぎ、０．
３％Ｈ２Ｏ２を含むメタノール中で室温３０分間静置し
、内因性ペルオキシダーゼをブロックした。
児臓器および癌組織のホルマリン固定パラフィン包埋組
織切片を、卵白アルブミンでコートしたスライドグラス
に固定し、キシレンで脱パラフイン後、アルコール−水
で段階的に親水化した。レジン水で５分間すすぎ、０．
３％Ｈ２Ｏ２を含むメタノール中で室温３０分間静置し
、内因性ペルオキシダーゼをブロックした。
次に切片を２０分間ＰＢＳで洗浄後、希釈したウマ正常
血清中で室温２０分間静置した。切片から過剰の血清を
吸い取り、第１抗体（抗−ヒト肺腺癌単クローン性抗体
ＡＬＣ−３９０゜１０■／ｍ ｌ ）と３００分間反応
せた。洗浄後、希釈ビオチン化抗体（ビオチン化ウサギ
抗ＩｇＧ抗体）を３００分間反応せ、さらに洗浄後、ア
ビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体（ベクター
社製）を３００分間反応せた。よく洗浄後、ペルオキシ
ダーゼ基質［：０．０２％Ｈ２０゜を含む０．１ Ｍ
）リスー塩酸バッファー（ｐＨ７，２）で調整した０、
１％ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド（ｄｉ
ａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃ
ｌｏｒｉｄｅ ） ）を２分間反応させ、氷冷中で反応
を停止した。ヘマトキシレン染色後、アルコール−水お
よびキシレンで脱水後、カナダバルサムで固定し、検鏡
した。その結果を第２表に示す。
血清中で室温２０分間静置した。切片から過剰の血清を
吸い取り、第１抗体（抗−ヒト肺腺癌単クローン性抗体
ＡＬＣ−３９０゜１０■／ｍ ｌ ）と３００分間反応
せた。洗浄後、希釈ビオチン化抗体（ビオチン化ウサギ
抗ＩｇＧ抗体）を３００分間反応せ、さらに洗浄後、ア
ビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体（ベクター
社製）を３００分間反応せた。よく洗浄後、ペルオキシ
ダーゼ基質［：０．０２％Ｈ２０゜を含む０．１ Ｍ
）リスー塩酸バッファー（ｐＨ７，２）で調整した０、
１％ジアミノベンジジンテトラヒドロクロライド（ｄｉ
ａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｃ
ｌｏｒｉｄｅ ） ）を２分間反応させ、氷冷中で反応
を停止した。ヘマトキシレン染色後、アルコール−水お
よびキシレンで脱水後、カナダバルサムで固定し、検鏡
した。その結果を第２表に示す。
第 ２ 表
組 織 陽性例数／検体数 陽性率（％）肺 腺
ｆｔｆｔ ７／９” ７７
１３肺扁平上皮癌 ２ ／１１” １８．
２肺大細胞癌 ３／６リ ５０．０肺小細胞癌
０ ／ ７ ０．０第２表に示すようにＡＬ
Ｃ−３９０は、肺扁平上皮癌、肺大細胞癌組織でも１部
の癌細胞に弱く反応したが、肺腺癌とは高率に強く反応
した。正常・胎児組織（心、膵、胃、大腸、腎。
ｆｔｆｔ ７／９” ７７
１３肺扁平上皮癌 ２ ／１１” １８．
２肺大細胞癌 ３／６リ ５０．０肺小細胞癌
０ ／ ７ ０．０第２表に示すようにＡＬ
Ｃ−３９０は、肺扁平上皮癌、肺大細胞癌組織でも１部
の癌細胞に弱く反応したが、肺腺癌とは高率に強く反応
した。正常・胎児組織（心、膵、胃、大腸、腎。
甲状腺、脳、牌、肝、小腸など）では、一部の細胞と極
めて弱く反応するものがみられたが、その他の組織とは
全く反応しなかった。
めて弱く反応するものがみられたが、その他の組織とは
全く反応しなかった。
発明の効果
本発明によれば肺腺癌の病理診断、さらに、肺腺癌の治
療に有用な単クローン性抗体が供給される。
療に有用な単クローン性抗体が供給される。
Claims (2)
- （１）ＩｇＧクラスに属し、ヒト肺腺癌細胞膜に対して
反応性を有する抗ヒト肺腺癌単クローン性抗体ＡＬＣ−
３９０。 - （２）抗ヒト肺腺癌単クローン性抗体ＡＬＣ−３９０を
生産する能力を有するハイブリドーマを培地中に培養す
るかマウスに投与して腹水化し、培養物または腹水中に
抗ヒト肺腺癌単クローン性抗体ＡＬＣ−３９０を蓄積さ
せ、該培養物または腹水からこれを採取することによる
抗ヒト肺腺癌単クローン性抗体ＡＬＣ−３９０の製造法
。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62078186A JPH0813840B2 (ja) | 1987-03-31 | 1987-03-31 | 抗ヒト肺腺癌単クロ−ン性抗体 |
| CA 562828 CA1287811C (en) | 1987-03-31 | 1988-03-29 | Antihuman pulmonary adenocarcinoma monoclonal antibody |
| DE19883882066 DE3882066T2 (de) | 1987-03-31 | 1988-03-30 | Monoclonaler Antikörper gegen menschliches Lungenadenokarzinom. |
| EP19880105199 EP0285143B1 (en) | 1987-03-31 | 1988-03-30 | Antihuman pulmonary adenocarcinoma monoclonal antibody |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62078186A JPH0813840B2 (ja) | 1987-03-31 | 1987-03-31 | 抗ヒト肺腺癌単クロ−ン性抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63243760A true JPS63243760A (ja) | 1988-10-11 |
| JPH0813840B2 JPH0813840B2 (ja) | 1996-02-14 |
Family
ID=13654946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62078186A Expired - Lifetime JPH0813840B2 (ja) | 1987-03-31 | 1987-03-31 | 抗ヒト肺腺癌単クロ−ン性抗体 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0285143B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0813840B2 (ja) |
| CA (1) | CA1287811C (ja) |
| DE (1) | DE3882066T2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5081032A (en) * | 1988-06-30 | 1992-01-14 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Anti-human pulmonary adenocarcinoma monoclonal antibody |
| EP4428158A1 (en) * | 2023-03-10 | 2024-09-11 | Istituto Romagnolo per lo Studio dei Tumori "Dino Amadori" - IRST S.r.l. | Lung cancer targeting human antibodies and therapeutic uses thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60199830A (ja) * | 1984-03-23 | 1985-10-09 | Sanetoshi Akiyama | モノクロ−ナル抗体 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6283898A (ja) * | 1985-10-09 | 1987-04-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト肺腺癌特異的単クロ−ン性抗体 |
| US5185432A (en) * | 1986-02-26 | 1993-02-09 | Oncogen | Monoclonal antibodies and antigen for human non-small cell lung carcinoma and other certain human carcinomas |
| JPS6319561A (ja) * | 1986-07-11 | 1988-01-27 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 抗ヒト肺癌単クロ−ン性抗体 |
-
1987
- 1987-03-31 JP JP62078186A patent/JPH0813840B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-03-29 CA CA 562828 patent/CA1287811C/en not_active Expired
- 1988-03-30 DE DE19883882066 patent/DE3882066T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-03-30 EP EP19880105199 patent/EP0285143B1/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60199830A (ja) * | 1984-03-23 | 1985-10-09 | Sanetoshi Akiyama | モノクロ−ナル抗体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3882066D1 (de) | 1993-08-05 |
| JPH0813840B2 (ja) | 1996-02-14 |
| EP0285143A3 (en) | 1990-03-14 |
| CA1287811C (en) | 1991-08-20 |
| DE3882066T2 (de) | 1994-03-24 |
| EP0285143B1 (en) | 1993-06-30 |
| EP0285143A2 (en) | 1988-10-05 |
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