JPS63258595A - インターロイキン−１に対する抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、インターロイキン−１（ＩＬ−１＞に対する
抗体、詳しくはＩＬ−１の免疫学的精製、測定等を可能
とする新しいヒトＩＬ−１に対する抗体に関する。

従来の技術 ヒトＩＬ−１は、マクロファージ・単球のみならず、多
くの細胞から産生され、多様な分子形態と生物活性とを
示すことが知られている。現在、該ヒトＩＬ−１には等
電点が異なる２種のもの、即ちＩＬ−１α及びＩＬ−１
βが知られており、それらはそれぞれ−次構造も明らか
にされている（Ｎａｔｕｒｅ、３１５．　ｐ６４１　（
１９８５）　：　Ｊ、　Ｅｘｐ。

Ｍｅｄ、、１６４．　Ｄ２３７　（１９８Ｂ）　Ｗ）。

上記ＩＬ−１は、医薬品としての応用が種々研究されて
いると共に、例えば各種の免疫欠損病や異常免疫応答の
研究並びに之等の臨床上の診断のために、殊に臨床サン
プルにおけるその測定か着目されている。

しかして、現在法ＩＬ−１の測定技術としては、バイオ
アッセイ（生物学的検定法）が知られており、この方法
においてＩＬ−１は被検サンプルの活性間として測定さ
れている。しかしながらこの方法は、操作性及び精度に
劣り、常に測定値を干渉する成分の存在を考慮する必要
がおる。しかも上記方法では、ＩＬ−１α及びＩ−Ｌ−
１βが同一活性を示すことから、之等を区別して測定で
きないという大きな欠点があった。

発明が解決しようとする問題点 本発明の目的は、上記ヒトＩＬ−１α及びヒトＩＬＩ−
１βに対する抗体を提供することにおる。

また、本発明の目的はヒトＩＬ−１α及びヒトＩＬ−１
βを各々区別して測定できる新しい免疫学的測定手法に
利用できるヒトＩＬ−１に対する抗体を提供することに
ある。

また、本発明の目的は、ＩＬ−１の異常産生を伴う各種
疾患において、上記ＩＬ−１の作用の抑制（中和）に利
用できるヒトＩＬ−１に対する抗体を提供することにお
る。

本発明の他の目的は、上記抗体の製造技術を提供するこ
とにある。

問題点を解決するための手段 本発明によれば、ヒトＩＬ−１α又はヒトＩＬ−１βに
特異反応性を有することを特徴とするヒ１−ＩＬ−１に
対するモノクローナル抗体及びその製造法が提供される
。

本発明抗体の利用によれば、ヒトＩＬ−１α及びヒトＩ
Ｌ−１βの各々をそれぞれ区別して高感度、高精度でし
かも簡便に測定可能な新しい免疫検定法（イムノアッセ
イ法）が提供される。

また、本発明抗体はヒトＩＬ−１α又はヒｌ−ＩＬ−１
βにそれぞれ特異的であるため、その利用によれば、例
えばアフィニティークロマトグラフィー等の手法による
、それらの特異的精製手段ら提供される。

更に本発明抗体には、ヒトＩＬ−１の生物活性に対して
中和活性を有するタイプの抗体が包含され、かかる抗体
は、１ｍ−１の異常産生を伴う各種の疾患、例えば慢性
関節リウマチ、甲状腺炎、肝炎、腎炎等の慢性炎症性疾
患、動脈硬化、川崎病等の血管炎、汎発性血管向凝固症
候群、血液ガン等において、その異常産生に基づく六進
されたＩＬ−１の生物活性を、抑制乃至中和するために
有用であり、かかる各種疾患の治療上極めて価値ある医
薬が提供される。

本発明抗体は、ヒトＩＬ−１α又はヒトＩＬ−１βを免
疫抗原として利用して製造することができる。より具体
的には、例えば上記免疫抗原で免疫した哺乳動物の形質
細胞（免疫細胞）と哺乳動物の形質細胞腫細胞との融合
細胞（ｈｙｂｒｉｄＯｍａ　）を作成し、これよりヒト
ＩＬ−１α又はヒトＩＬ−１βを認識する所望抗体を産
生するクローンを選択し、該クローンの培養により製造
できる。

上記方法において用いられる免疫抗原としてのヒトＩＬ
−１α又はヒトＩＬ−１βとしては、特に限定はなく、
既に公知のインビトロで誘導されたヒトＩＬ−１α及び
／又はヒトＩＬ−’ｌβを含有する培養上清乃至その精
製標品、遺伝子組換え技術に従い製造されたヒトＩＬ−
１α又はヒト■Ｌ−１β及びそれらの一部のアミノ酸配
列を有する合成ペプチド等のいずれでもよい。

また、上記方法において免疫抗原で免疫される哺乳動物
としては、特に制限はないが、細胞融合に使用する形質
細胞腫細胞との適合性を考慮して選択するのが好ましく
、一般にはマウス、ラット等が有利に用いられる。

免疫は一般的方法により、例えば上記、免疫抗原を哺乳
動物に静脈内、皮内、皮下、腹腔内注銅等により投与す
ることにより実施できる。より具体的には、免疫抗原を
、所望により通常のアジュバントと併用して、供試動物
に２〜１４日毎に数回投与し、総投与量か約１００〜５
００μｇ／マウス程度になるようにするのが好ましい。

免疫抗原としては、上記最終投与の約３日後に摘出した
牌臓細胞を使用するのが好ましい。

更に、上記免疫細胞と融合される使方の親細胞としての
哺乳動物の形質細胞腫細胞としては、既に公知の種々の
もの、例えばｐ３　（ｐ３／Ｘ６３−Ａｇ８）（Ｎａｔ
ｕｒｅ　、２５６，４９５−４９７（１９７５）　）　
、ｐ３−ｕ　１　（Ｃｕｒｒｅｎｔ　　Ｔｏｐｉｃｓ　
ｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　　Ｉ　ｍｍｕ
ｎｏｌｏ（ＪＶ　、　　８ユ、１−７（１９７Ｂ＞　）
　、ＮＳ　−１（Ｅｕｒ、　Ｊ、　　１　ｍｍｕｎｏｌ
、、５゜５１１−５１９　（１９７Ｂ、））、ＭＰＣ−
１１（Ｃｅｌｌ　、　８．４０５−４　’ｌ　５　（１
９７６）　）　、５Ｐ２１０　（Ｎａｔｕｒｅ　、２７
６．２６９−２７０（１９７８）　）　、ＦＯ（Ｊ、　
　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、、　　３５゜’１−２
１　　（１９８０））、Ｘ６３．６．５．３．（Ｊ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１２３．　１５４８−１５５０　
（１９７９＞　）、３１９４　（Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、
、１４８，３１３−３２３　（１９７８）　）等や、ラ
ットにおけるＲ２１０（Ｎａｔｕｒｅ、２７７．１３１
−１３３　（１９７９）　）等の骨髄腫細胞等を使用で
きる。

上記免疫細胞と形質細胞腫細胞との融合反応は、公知の
方法、例えばＭ　ｉ　１ｓｔＱｉｎらの方法（Ｍｅｔｈ
ｏｄ　ｉｎ　　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｃ＋ｙ、Ｖｏｌ、　７
３．　ｐｐａ（１９８１）　）等に準じて行なうことが
できる。より具体的には、上記融合反応は、通常の融合
促進剤、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ＞　、
センダイウィルス（＋−Ｉ　Ｖ　Ｊ　）等の存在下に、
通常の培地中で実施され、培地には更に融合効率を高め
るためにジメチルスルホキシド等の補助剤を必要に応じ
て添加することもできる。免疫細胞と形質細胞腫細胞と
の使用比は、通常の方法と変りはなく、例えば形質細胞
腫細胞に対して免疫ｍ胞を約１〜１０倍程度用いるのが
普通である。融合反応時の培地としては、形質細胞腫細
胞の増殖に通帛使用される各種のもの、例えばＲＰＭＩ
−１６４０培地、ＭＥＭ培地、その他のこの種細胞培養
に一般に利用されるものを例示でき、通常２等培地は牛
胎児血清（ＦＯ３）等の血清補液を扱いておくのがよい
。融合は上記免疫細胞と形質細胞腫細胞との所定量を、
上記培地内でよく混合し、予め３７°Ｃ程度に加温した
ＰＥＧ溶液、例えば平均分子量１０００〜６０００程度
のものを、通常培地に約３０〜６０Ｗ／Ｖ％の濃度で加
えて混ぜ合せることにより行なわれる。以後、適当な培
地を逐次添加して遠心し、上清を除去する操作を繰返す
ことにより所望のハイブリドーマが形成される。

得られる所望のハイブリドーマの分離は、通常の選別用
培地、例えばＨＡＴ培地（ヒポキサンチン、アミノプテ
リン及びチミジンを含む培地）で培養することにより行
なわれる。該ＨＡＴ培地での培養は、目的とするハイブ
リドーマ以外の細胞（未融合細胞等）が死滅するのに充
分な時間、通常数日〜数週間行なえばよい。かくして得
られるハイブリドーマは、通常の限界希釈法により目的
とする抗体の検索及び単一クローン化に供される。

目的抗体産生株の検索は、例えばＥＬＩＳＡ法（Ｅｎｇ
ｖａｌｌ、　Ｅ、、Ｍｅｔｈ、Ｅｎｚｙｍｏｌ、、　７
０．４１９−４３９　（１９８０）　）　、プラーク法
、スポット法、凝集反応法、オクテロニ−（Ｑｕｃｈｔ
ｅｒｌｏｎｙ）法、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）法
等の一般に抗体の検出に用いられている種々の方法〔「
ハイブリドーマ法とモノクローナル抗体」、株式会社Ｒ
＆Ｄプラニング発行、第３０−５３頁、昭和５７年３月
５日〕に従い実施することができ、この検索には前記免
疫抗原が利用できる。

かくして得られるヒトＩＬ−１α又はヒトＩＬ−１βを
認識する所望のモノクローナル抗体を産生するハイブリ
ドーマは、通常の培地で継代培養することができ、また
液体窒素中で長期間保存することができる。

上記ハイブリドーマからの所望抗体の採取は、該ハイブ
リドーマを、常法に従って培養してその培養上清として
得る方法やハイブリドーマをこれと適合性のある哺乳動
物に投与して増殖させ、その腹水としで得る方法等が採
用される。前者の方法は、高純度の抗体を得るのに適し
てあり、後者の方法は、抗体の大量生産に適している。

また上記のごとくして得られる抗体は、更に塩析、ゲル
濾過法、アフイニテイクロマトグラフイー等の通常の手
段により精製することができる。

かくして得られる本発明のモノクローナル抗体は、ヒト
ＩＬ−１α又はヒトＩＬ−１βに特異反応性を有するも
のでおる。

また本発明抗体中には、ヒ１−ＩＬ−１の生物活性に対
して、中和活性を有するタイプの抗体が包含される。か
かる抗体は生物活性のめるヒトＩＬ−１を特異的に測定
するのに好適である。またかかる中和活性を有するタイ
プの抗体、殊にＩＬ−１分子上のＩＬ−１受容体との結
合に関与する部位を認識するタイプの抗体は、前記した
ＩＬ−１の異常産生を伴う各種疾患への適用に好適であ
る。

更に本発明抗体中には、ヒトＩＬ−１分子の異なる部位
を認識し、抗体相互の立体障害がなく、同時にヒトＩＬ
−１分子に結合することができるタイプの抗体も包含さ
れており、かかる抗体は、例えばサンドイツチ法等によ
る免疫検定に利用するのに極めて有用である。

更に加えて、本発明抗体中には、液相系又は固相系での
反応性が特に優れたタイプの抗体が包含されている。そ
れらは液相系及び同相系免疫検定法に適用するのに極め
て好ましい。

発明の効果 本発明によれば、ヒトＩＬ−１α又はヒトＩＬ−１βに
特異的なモノクローナル抗体が提供され、この本発明抗
体の採用によれば、測定感度が極めて高く、特異性に優
れ、従って、例えば臨床ザンプル等の極めて低濃度のヒ
トＩＬ−１α又はヒトＩＬ−１βを含有する検体中の該
ヒトＩＬ−１α又はヒトＩＬ−１βを正確に測定可能な
免疫検定法による測定手法が提供される。

実　　施　　例 以下、本発明をより詳しく説明するため実施例を挙げる
が、本発明は之等に限定されない。

実施例１ ヒトＩＬ−１βに対する抗体の製造 遺伝子組換え技術に従い製造したヒトＩＬ−１β（生化
学、呈旦、８号、ｐ８４０　（１９８６）：ＥＰ０１８
７９９１号）の１０μｑを、ＢＡＬＢ／Ｃマウスに、完
全フロインドアジュバントと共に腹腔内投与した。３〜
４週間おきに同量を不完全アジュバントと共に２回追加
投与して免疫した。

３〜４週間後に最終免疫として３０μｑのヒトＩＬ　−
１βの生食溶液を静脈内投与した。最終免疫の３〜４日
後に、常法に準じて、細胞融合を行なった（Ｍｅｔｈｏ
ｄ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏ＋ｏｇｙ、　　７３　、　ｐｐ
３　（１９８１）等参照〕。即ち、該細胞融合は、上記
免疫された牌細胞と骨髄腫細胞（ｐ　３　Ｕ’ｌ　、Ｃ
ｕｒｒｅｎｔ　Ｔｏｐｉｃｓｉｎ　）ｌｉｃｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　８ユ、１
−７（１９７８）　）とを１０：１の割合で用い、ポリ
エチレングリコール（ＰＥＧ−４０００＞を用いて行な
った。

ハイブリドーマを、ＨＡＴ培地で選別俊、その上清を上
記ヒトＩＬ−１βをコートした９６穴マイクロプレート
及びパーオキシダーゼｅｆ、識ヤギ抗マウスグロブリン
抗体〔イー、ライ。ラブ（Ｅ。

Ｙ、　Ｌａｂ、　）社製〕を用いた酵素免疫測定法によ
り試験して、目的のヒトＩＬ−１βに対する抗体産生株
を検出した。

限界希釈法によりクローニングを繰返して、所望の抗体
産生クローン７株を得た。

各クローンから得られたそれぞれの抗体の特性を以下の
方法に従い求めた。

■　抗体のザブクラス マウス抗体サブクラス検出キット（バイオ・ラッド（Ｂ
ｉｏ−Ｒａｄ）社製）を用いて決定した。

■抗体産生レベル ハイブリドーマが最大細胞密度になった時の培養上清中
のＩＱ（Ｊｔ（μｇ／　＋ｎＱ＞により示した。

■力価 下記に従い、それぞれ求めた。

ＲＩＡ：ヨードケン法（Ｂ、Ｂ、Ｒ，Ｃ，，８０゜８４
９−８５７　（’１９７８））に従い１２５■で標識し
たヒトＩＬ−１βの１００μＱ（約１００００ｃｐｍ）
、ハイブリドーマの培養上清の希釈液１００ｔｌＱ並び
に０．０１％ＮａＮ３．５ｍＭ　　ＥＤＴＡ及び０．１
％ＢＳＡを含むＰＢＳの１００μＱを混合して反応（４
°Ｃ）させ、これにキャリヤー蛋白として正常ヤギ血清
５０ｕＱを加え、更に２０％ＰＥＧのＰＢＳ溶液６００
μＱを加えて混合し、水浴中で２０分放置した後、遠心
分離して沈渣の放射能をγ−カウンターで測定した。　
　■標識ＩＬ−１βか１５％沈漬にくる培養上清の希釈
率をＲＩＡ力価とした。

ＥＩＡ：９６穴マイクロプレートに２０μｑ／ｒ１１２
に調製したヒトＩＬ−１βを分注（１００μＱ／ウエル
）し、１時間室温で放置した。ＰＢＳで洗浄後、非特異
吸着を防ぐためにＢＳＡでブロックし、ＰＢＳ−トウィ
ーン２０で洗浄した。

希釈したハイブリドーマの培養上清を分注（１００μＱ
／ウエル）し、３７°Ｃで２時間反応させた後、洗浄し
、更にパーオキシダービ標識抗マウス免疫グロブリン（
カペル社製、Ｘ５０００）を１００μＱ／ウェル加えて
、同様に反応させた。洗浄後、結合した酵素活性を比色
分析し、０Ｄ４９２　＝　１　、０をとる培養上清の希
釈倍率をもってＥＩＡ力価とした。

ＲＩＡ／ＩｇＧ及びＥＩＡ／ＩＣＩＧ：之等は、上記Ｒ
ＩＡ力価及びＥＩＡ力価を、抗体産生レベルでそれぞれ
除した値である。

また、ＲＩＡ／ＩＣＩＧは液相系での反応性（１２５Ｉ
−標識ヒトＩＬ−１βと本発明抗体との反応性〕を、Ｅ
、ＩＡ／ＩＣＩＧは固相系での反応性（同相化したヒト
ＩＬ−１βと本発明抗体との反応性）を示している。

■　分子量 ハイブリドーマをマウスの腹腔内で培養した後、ＩｇＧ
精製キット（ＭＯＰＳ　　Ｋｉｔ、バイオ・ラット社製
）により、ＩｇＧ＋に精製したものの分子■を示す（Ｓ
ＤＳ−ＰＡＧＥによる重鎮と軽鎖の分子量の和を抗体の
分子量とする〕。

■　交叉反応性 遺伝子組換え技術により製造された被検蛋白（いずれも
ヒト）を用い、ウェスタン・プロッティング（Ｗｅｓｔ
ｅｒｎ　ｂｌｏ℃ｔｉｎｃ］；ｐｒＯｃ、Ｎａｔｌ、Ａ
ｃａｄ。

Ｓｃｉ、、ＵＳＡ、７６．４３５０　（１９７９）：Ａ
ｎａｌ、Ｂ！ＯＣｈｅｍ、、１１２．１９５　（１９８
１）　）により求めた。“−″は交叉反応性がないこと
を示している。

■　結合定数（ｋｄ） スキャナ【７−ド・プロット・アナリシス（３ｃａｔｃ
ｈａｒｄ　ｐｌｏｔ　ａｎａｌｙｓｙｓ＞により求めた
。

■　中和活性 ＬＡＦ活性（Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、、　１１６．１
４６６（１９７６））により求めた結果であり、Ｉｔ　
＋Ｉｔは中和活性があることを示している。

上記各特性を求めた結果を下記第１表に示す。

■　結合部位の決定 ヒトＩＬ　　１βの装造（ＥＰＯ１８７９９１号〕に準
じて、下記に示すヒトＩＬ−１βの各７ラグメントを製
造した。

〈フラグメント〉 Ｎ−１０：ヒトＩＬ−１βのアミノ酸番号１１〜１５３
からなるポリペプチド Ｎ−１６：ヒトＩＬ−１βのアミノ酸番号１７〜１５３
からなるポリペプチド Ｎ−２３：ヒトＩＬ−１βのアミノ酸番＠２４〜］５３
かうなるポリペプチド Ｃ−８２：ヒトＩＬ−１βのアミノ酸番号１〜８２から
なるポリペプチド Ｃ−１０２：ヒトＩＬ−１βのアミノ酸番号１〜１．０
２からなるポリペプチド Ｃ−１２０：ヒトＩＬ−１βのアミノ酸番号１〜１２０
からなるポリペプチド Ｃ−１４０：ヒトｌ−１βのアミノ酸番号１〜１４０か
らなるポリペプチド Ｃ−１４４：ヒトＩＬ−１βのアミノ酸番号１〜１４４
からなるポリペプチド Ｃ−１４８：ヒトＩＬ−１βのアミノ酸番号１〜１４８
からなるポリペプチド ヒトＩＬ−１β及び上記各フラグメントを発現している
それぞれの大腸菌に、６．２５ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ
６，８，２％ＳＤＳ、５％２Ｍ’Ｅ、１０％グリセロー
ル、０．００１％ＢＰＢを含む〉１００ｔｌＱを加えて
溶解し、１００’Ｃで２分間煮沸して電気泳動用サンプ
ルとし、ウェスタン・プロッティングにより、本発明抗
体との反応性を試験した。

得られた結果を下記第２表に示す。

上記第２表より、抗体ＡＮＯＣ２０１、同２０６及び同
２０７は、いずれもヒトＩＬ−１βのアミノ酸番号１２
１から１４０の配列中に、抗体ＡＮＯＣ２０２及び同２
０４は、同２４から８２の配列中に、抗体ＡＮＯＣ２０
３は、同８３から１０２の配列中に、抗体ＡＮＯＣ２０
５は、同１４５から１４８の配列中に、それぞれ認識部
位を有することが判る。

■　本発明抗体の立体障害試験 本発明抗体を、ヨードケン法により１２５Ｉで標識して
標識抗体を得た。

また、本発明抗体を、物理的吸着法（ＣＩｉｎ。

Ｃｈｅｍ、Ａｃｔａ、、　１３５．２６３　（１９８３
）　）　ニ従い、ポリスチレンビーズ（６，４ｍｍ＞に
吸着ざぜて不溶化抗体を得た。

上記で得られた不溶化抗体と２０ｎ（］のヒトＩＬ−’
Ｈ３とを０．１％ＢＳＡ及び０．０１％チメロザールを
含む０．５１１１１２のＰＢＳ溶液中で、３７℃で２時
間反応させ、ビーズを洗浄後、上記で）すた標識抗体の
約１１０００００ｃｐの上記ＰＢＳ溶液０．５ｍ１２を
加えて、３７℃で２時間振盪下に反応させた。

ビーズを洗浄後、ビーズに結合した放射能をカウントし
て、各抗体間での反応性（不溶化抗体−ヒ１〜ＩＬ−１
β−標識抗体のサンドインチが形成されるか否か）を試
験した。

その結果、抗体ＡＮＯＣ２０１、同２０６及び同２０７
の各抗体間では、サンドインチが形成されず、それら抗
体は、ＩＬ−１βのほぼ同一の部位を認識する抗体であ
ることが推定された。

上記以外の試験されだすべての抗体間（同一抗体を除く
）では、いずれもその反応に障害が認められなかった。

［株］　線維芽細胞上ＩＬ−１受容体への結合阻害試験
工 ６ウエルプレート上で、−面にほぼ均一にまで増殖させ
たＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３線維芽細胞（ＡＴＣＣＣＣＬ−１
６３，１Ｘ１０６細胞／ウェル〉に、　　■で標識した
ＩＬ−１β（ポルトン−ハンター法（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　Ｊ、、　１３３゜５２９　（１９７３）　）による、
比活性２５０μＣｉ／μｑ蛋白以上）の８５００ｃｐｍ
／ウェルと共に、予め１０％ＦＣ３添加Ｄ−ＭＥＭ中で
３７°Ｃ下にインキュベートした本発明抗体（抗ＩＬ−
１βモノクローナル抗体）の所定量を加え、３７°Ｃ下
に４時間反応させた。次いで、反応液にラット血清５０
μＱ及び２０％ＰＥＧ２５０μＱを加え、４°Ｃ下に２
０分間反応させ、遠心分離（１２００Ｏｒｐｍ１５分間
）して沈澱（結合物）と上清（非結合物〉とを分離した
後、放射能（結合放射能）をγ−カウンターにて測定し
た。

本発明抗体を使用しない対照にあける上記放射能測定値
を（Ａ）、プレートへの非特異的吸着放射能値を（Ｂ）
、本発明抗体の所定量使用による上記測定値を（Ｃ）と
して、下式により、本発明抗体による線維芽細胞上工し
一１受容体へのＩＬ−１βの結合の阻害能、（％）を算
出した。

尚、上記試験におりるＡ値は３８９５ｃｐｍ／ウェルで
あり、上記Ｃ値は３０１　ｃｐｍであった。

本発明抗体としてＡＮＯＣ２０３及びＡＮＯＣ２０５を
用いて得られた結果を、第３表に示す。

第３表 上記第３表より、本発明抗体ＡＮＯＣ２０３は、ＩＬ−
１受容体への１２”Ｉ−ＩＬ−１βの結合を阻害し、従
ってＩＬ−１βのＩＬ−１受容体結合部位を認識するも
のであることが判る。また本発明抗体ＡＮＯＣ２０５は
上記阻害能を実質的に有してあらず、従ってこれはＩＬ
−１βのＩＬ−１受容体結合部位とは異なる部位を認識
するものでおることが判る。

■　線維芽細胞上’ＩＬ−１受容体への結合阻害試験■ 上記結合阻害試験■と同様にして線維芽細胞を増殖させ
た各ウェルに、　　　■で標識したＩＬ〜１αと共にＩ
Ｌ−１βの１０ｒｌ（］／ｍＱ及び所定量の本発明抗体
を加えて反応させ、次いで、同様にして遠心分離後、各
ウェルの放射能を測定し、本発明抗体による線帷芽細胞
上ＩＬ−１受容体へのＩＬ−１βの結合の阻害能（％）
を算出した。

尚、上記試験におけるＡ値は８２７８Ｃｐｍ／ウェルで
あり、上記Ｃ値は４１　Ｑｃｐｍでおった。

本発明抗体として八Ｎ０Ｃ２０３及びＡＮＯＣ２０５を
用いて得られた結果を、第４表に示す。

上記第４表より、　　Ｉ−ＩＬ−１αのＩＬ−１受容体
への結合はＩＬ−１βによって阻害されるが、本発明抗
体ＡＮＯＣ２０３はＩＬ−１βのＩＬ−１受容体結合部
位を認識し、該ＩＬ−１βのＩＬ−１受容体への結合を
阻害するため、結合阻害能の回復が認められる。本発明
抗体ＡＮＯＣ２０５はＩＬ−１βのＩＬ−１受容体結合
部位を認識するものではないため、その利用では結合阻
害能の回復は認められないことが明らかで必る。

実施例２ ヒトＩＬ−１αに対する抗体の製造 前記したヒトＩＬ−１βの製造に準じて製造したヒトＩ
　Ｌ−１（ｘ　（Ｎａｔｕｒｅ、３１５．　ｐ６４１（
１９８５））を免疫抗原として利用し、実施例１と同様
にして、所望のヒトＩＬ−１αに対する抗体産生クロー
ンを得、これより本発明のヒトＩＬ−１αに対する抗体
へＮ０Ｃ３０１を得た。このものの特性は次の通りであ
った。

シブクラス：ＩｇＧ２ａ 抗体産生レベルニア５μｑ／舶 力　価：ＲＩＡ　　ｘ３２００、 ＥＩＡ　　ｘ２０００ 交叉反応性：ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＧＭ−Ｃ８Ｆ及び
ＴＮＦとは交叉反応を示さない。

結合定数（ｋｄ）：　３．６ｘ１０−８Ｍ／Ｌ中和活性
：あり。

尚、上記各実施例で得られたハイブリドーマの代表例と
して、下記４種のものが通産省工業技術院微生物工業研
究所（微工研）に寄託されており、それらの表示及び寄
託番号は次の通りで必る。

０抗体ＡＮＯＣ２０３産生ハイブリドーマ表示：ＫＯＣ
Ｏ２０３ 微工研条奇第１５５１　Ｍ（ＦＥＲ）Ｉ　１３Ｐ−１５
５１）Ｏ抗体ＡＮＯＣ２０５産生ハイブリドーマ表示：
ＫＯＣＯ２０５ 微工研条奇第１５５２号（ＦＥＲＮ　ＢＰ−１５５２）
０抗体ＡＮＯＣ２０６産生ハイブリドーマ表示：ＫＯＣ
Ｏ２０６ 微工研条奇第１５５３号（ＦＥＲＮ　ＢＰ−１５５３）
Ｏ抗体ＡＮＯＣ３０１産生ハイブリドーマ表示：ＫＯＣ
Ｏ３０１ 微工研条奇第１５５４号（ＦＥＲＮ　ＢＰ−１５５４）
（以　上）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒトインターロイキン−１α又はヒトインターロ
   イキン−１βに特異反応性を有することを特徴とするヒ
   トインターロイキン−１に対するモノクローナル抗体。