JPS6332150B2 - - Google Patents
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- JPS6332150B2 JPS6332150B2 JP20987181A JP20987181A JPS6332150B2 JP S6332150 B2 JPS6332150 B2 JP S6332150B2 JP 20987181 A JP20987181 A JP 20987181A JP 20987181 A JP20987181 A JP 20987181A JP S6332150 B2 JPS6332150 B2 JP S6332150B2
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/548—Carbohydrates, e.g. dextran
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- G—PHYSICS
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- G03C—PHOTOSENSITIVE MATERIALS FOR PHOTOGRAPHIC PURPOSES; PHOTOGRAPHIC PROCESSES, e.g. CINE, X-RAY, COLOUR, STEREO-PHOTOGRAPHIC PROCESSES; AUXILIARY PROCESSES IN PHOTOGRAPHY
- G03C1/00—Photosensitive materials
- G03C1/005—Silver halide emulsions; Preparation thereof; Physical treatment thereof; Incorporation of additives therein
- G03C1/04—Silver halide emulsions; Preparation thereof; Physical treatment thereof; Incorporation of additives therein with macromolecular additives; with layer-forming substances
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は抗原とか抗体の感作あるいは酵素の固
定などに広く利用しうる新規な人工担体の製法の
改良に関する。抗原、抗体反応を利用する臨床検
査等の分野において、抗原または抗体をある適当
な大きさの粒子を担体としてそれに吸着もしくは
結合させ、それぞれに対応する抗体または抗原の
存在によつてこの感作された担体の凝集を起させ
る方法は間接受身凝集反応と呼ばれている。そし
て、この間接受身凝集反応は被検液中の抗体や抗
原を高感度に検出できるので、いろいろの疾患の
血清学的診断や血液学的診断に広く用いれてい
る。 この反応に用いられる担体としては、ポリスチ
レンラテツクス、カオリン、炭末などの非生物学
的粒子と、動物赤血球、細菌菌体のような生物学
的粒子とがある。一般に非生物学的粒子の担体
は、化学的に安定で、それ自身抗原活性を有しな
いなどの利点はあるが、抗原あるいは抗体が密に
吸着されにくいという欠点がある。たとえば、保
存のために凍結乾燥すると抗原や抗体が担体から
遊離してしまうのである。そのために、やむなく
液体中で冷暗所に保存するという手段がとられて
いるが、その結果長期間保存することができな
い。また、非生物学的担体のうち、炭末とカオリ
ンは一定の大きさの粒子を選出することが困難で
あり、ポリスチレンラテツクスは反応の媒質とし
て望ましい中性域では非特異凝集である自然凝集
をおこす危険がある。 一方、生物学的担体である動物赤血球や細菌菌
体はそれぞれの大きさが一定であるという利点は
あるものの、生物の種類によつて粒子の大きさは
定まつており、目的に応じた任意の大きさの粒子
を得ることはできない。たとえば、動物赤血球は
大きさの一定した最も入手しやすい担体である
が、血球表面に固有の抗原を有しており、抗体と
の間で非特異凝集反応である交差反応を起こして
目的とする凝集反応に誤まりを与える可能性があ
る。さらに、赤血球の生物学的、化学的および物
理的特性値が動物の個体間でばらついてしまつて
常に一定品質の血球を入手することが難しいとい
う欠点がある。 本発明者らはこれらの欠点のないすぐれた担体
を開発すべく種々検討の結果、ゼラチン、水溶性
多糖類、およびポリメタリン酸ナトリウムを含
み、水とアルコール等の混合物を溶媒とする溶液
を撹拌下でPH調整することによつて粒子を析出さ
せ、この粒子をアルデヒド系架橋剤で処理して不
溶化すれば、従来の欠点を尽く解消したすぐれた
担体が得られることを見出し、この内容を既に特
許出願した（特開昭57−153658号）。そして、そ
の後アルコール等の親水性有機溶媒を用いなくと
も人工担体が好収率で得られることを見出してこ
の内容も特許出願した（特開昭57−160465号）。
しかしなが、いずれの方法においても生成した粒
子の凝集を防止するために界面活性剤を添加して
いた。本発明者らはさらに研究を進めた結果、溶
媒が水のみで親水性有機溶媒を用いない場合であ
つても酸の添加によつて粒子が生成したのちに速
かに冷却すれば界面活性剤を添加しなくとも界面
活性剤を添加した場合に匹敵する好収率で担体粒
子が得られることを見出し、これに基づいて本発
明を完成するに到つた。 すなわち本発明は、ゼラチン、水溶性多糖類、
およびポリメタリン酸ナトリウムを含み、温度が
ゼラチンのゲル化温度以上である水溶液を撹拌し
つつ酸を加えてPH2.5〜6.0に調整し、その後アル
デヒド系架橋剤を作用せしめて不溶化する人工担
体の生産法において、前記酸の添加によつて粒子
が生成したのちこの粒子分散液を10℃以下に冷却
し、10℃以下の温度で前記架橋剤を作用せしめる
ことを特徴とする人工担体の生産法に関するもの
である。 本発明に使用するゼラチンは通常は市販品をそ
のまま用いればよい。市販品のなかでは酸性ゼラ
チンが好ましい。 水溶性多糖類は増粘剤または糊料として使用し
うるものであり、多糖類の誘導体および塩も含ま
れる。例としては、アラビアゴム、カルボキシメ
チルセルロース、アルギン酸ナトリウム、寒天、
カラゲーナンなどを挙げることができるが、特に
アルビアゴムが好適である。 ポリメタリン酸ナトリウムは化学式（NaPO3）
oで表わされる物質であり、たとえば四メタリン
酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸ナトリウムの如
きものである。 そのほかのものとしては、担体を着色する場合
には、着色剤を粒子形成前に溶液に加えておくの
がよい。着色を必要とする例としては、本発明品
を間接受身凝集反応の担体として用いる場合を挙
げることができる。すなわち、本発明品は通常は
無色不透明であるところから、これを着色するこ
とによつて凝集像の判定を容易にすることができ
る。着色剤としては、たとえば食用赤色３号、ロ
ーダミン、ローズベンガル、ポンソー3R、ボル
ドーＳ、フクシン、エオシン、およびニユートラ
ルレツドなどの赤色色素、あるいはクリスタルバ
イオレツト、トルイジンブルーおよびメチレンブ
ルーなどの青色色素等を用いうる。しかしなら
が、リアクテイブレツド、ダイレクト・ブルーな
どの反応性染料で着色すれば色落ちしないことか
ら、反応性染料が特に好適である着色剤以外にも
目的に応じ種々の物質を添加してもよいことはい
うまでもない。 PH調整前の溶液におけるこれら各物質の濃度と
しては、ゼラチン0.01〜２％程度、好ましくは
0.05〜1.0％程度、そして水溶性多糖類0.01〜２％
程度、好ましくは0.05〜1.0％程度である。ポリ
メタリン酸ナトリウムはゼラチン乾燥重量の0.5
〜20％程度を含有させるようにするのがよい。各
物質はこれらの濃度範囲において、所望の粒子の
粒径および物性に応じて適宜定めればよい。着色
剤を添加する場合には、通常は0.005〜0.5％程度
であるが、反応性染料を用いればゼラチン乾燥重
量の１〜５％程度で足りる。 このような溶液を調整する過程は問うところで
はなく、例えば各々を温水に溶解してから混合し
てもよく、各々を一緒に溶解してもよい。しかし
ながら、各物質の溶解を容易にするために親水性
有機溶媒はあとから加えるのがよく、また水溶性
多糖類には不溶成分も少量含まれていることが多
いところから、別途に溶解して添加するのがよ
い。一方、ゼラチンは等電点以下のPHでは水溶性
多糖類と反応して白濁を生ずるので酸性ゼラチン
を用いる場合にはアルカリを加えて溶液のPHを少
なくともその付近にまで高めておくのがよい。し
かしながら、この白濁は生じた後でもアルカリを
添加することによつて消すことができる。いずれ
にせよ、溶液は酸の添加を開始するまえには白濁
のない状態にしておかなければならない。 溶液の温度はゼラチンのゲル化温度以上でなけ
ればならない。この温度はゼラチンの濃度等によ
つて異なるが通例25〜30℃程度である。良好な粒
子形成の観点から特に35〜50℃程度がよい。 次に、この溶液を撹拌しながら酸を加えてPH
2.5〜6.0に調整する。この工程は粒子を生成させ
るところである。均一な粒子を形成させるため
に、35〜50℃に加温を続け、適度に撹拌しながら
酸を滴下していくのがよい。PH2.5〜6.0の範囲に
おける至適のPHは原料溶液の組成および目的とす
る粒径によつて異なるので予め実験を行なつて定
めるのがよい。たとえば得られた粒子を抗原感作
用担体に用いる場合には２〜10μ程度の粒径にす
るのがよく、その場合至適のPHは4.0〜5.5の範囲
にある。このPH調整に使用する酸は特に限定され
るものではなく無機酸でも有機酸でもよいが、な
るべくおだやかなものがよく、たとえば酢酸など
が好適である。 本工程で生成した粒子は系の温度をゼラチンの
ゲル化温度以下に下げても消失しないので母液と
の平衡関係はない。また、粒子はほとんどの場合
負に帯電しており、その表面には溶液中の陽イオ
ンが配向していていわゆる電気二重層を形成して
いる。そして、このことが粒子の安定な分散を促
しているのである。 本発明においては酸を添加して粒子を生成させ
たのちに粒子生成液をゲル化温度以下に冷却し、
そのことによつて界面活性剤の添加を不要にした
ところに特徴がある。冷却は酸の添加終了後速か
に行なうのがよい。添加終了後室温に放置してお
くと粒子が互いに衝突して凝集がはじまつてしま
う。温度はゲル化温度以下であるが、５℃以下に
することが好ましい。粒子生成後は粒子をアルデ
ヒド系架橋剤で不溶化するのであるが、その間も
粒子分散液をゲル化温度以下に保つ必要がある。
但し、粒子の再分散が容易になる程度に不溶化が
進行するまでこの温度に保てばよい。アルデヒド
系架橋剤の添加量はゼラチン乾燥重量の0.1〜200
％程度であり、添加後は一夜程度放置して架橋反
応を充分に行なわせる。架橋剤の例としては、グ
ルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、グリオキ
ザール、クロトンアルデヒド、アクロレイン、ア
セトアルデヒドなどを挙げることができるが、特
にグルタルアルデヒドが好適である。 アルデヒド系架橋剤で処理後は粒子を遠心分離
等で回収して洗浄する。洗浄は0.001〜0.01％程
度の陰イオン系界面活性剤水溶液または0.01〜
0.1％の非イオン系界面活性剤水溶液を用いて２
〜３回行なえばよい。 このようにして得られた担体を種々の用途に供
すればよいが、架橋が不充分な場合には塩類溶液
中で膨潤することがある。そこでこのような用途
に用いる場合にはアルデヒド系架橋剤で処理して
膨潤を防止するのがよい。例えば、抗原を感作す
る場合にはリン酸緩衝液中で行なうので、赤血球
を固定化する条件でホルマリン処理する。この処
理によつて膨潤を防止するとともにホルマリンの
殺菌効果によつて長期間の保存に耐える担体が得
られる。 本発明の担体は抗原、抗体、酵素などを巾広く
固定することができる。たとえば、抗原とか抗体
を感作する場合には動物赤血球を担体として行な
う常法に準じて行えばよい。 本発明の担体は間接受身凝集反応の担体として
従来最もすぐれているとされていた動物赤血球と
同等の性能を有し、さらに化学的、物理的に均質
かつ安定であり、抗原活性がなく任意の粒径のも
のを容易かつ安価に大量生産できるなど動物赤血
球にない幾多の利点を有するものである。そして
本発明は先願発明に対し有機溶剤と界面活性剤の
２つの使用を排除したものであり、本発明によつ
てこのようにすぐれた性質を有する人工担体を容
易にかつ簡便に製造することができる。有機溶剤
を不要にすることによつて製造設備を簡略化しか
つ操作を容易にしており、また、この方法で得ら
れた担体は例えば界面活性剤の存在を嫌うような
用途にも使用できる。 以下、実施例及び担体の使用例を示す。なお、
本明細書において特に記載がなければ％は重量％
を表わしている。 実施例 １ 等電点がPH９であるゼラチン4gを40℃の温水
に100mlになるように溶解し、10％の水酸化ナト
リウム溶液でPH９に調整した。アラビアゴム4g
を100mlになるように水に溶解し、不溶物を別
した後40℃に加温した。 ゼラチン溶液50mlとアラビアゴム溶液50mlを混
合し、これに40℃の蒸溜水300ml、10％ヘキサメ
タリン酸ナトリウム溶液1.6ml、および１％ダイ
レクトブルー溶液６mlを加えた。 次いで、この溶液を40℃に保ち、撹拌しながら
10容量％酢酸溶液を滴下してPH4.8に調整し、粒
子を生成させた。 粒子分散液を氷冷して５℃にしてからグルター
ルアルデヒド1.3gを加え、よく撹拌後この温度で
一夜静置した。それからこの粒子分散液を
2000rpmで10分間遠心分離して粒子をペレツトと
して回収した。この粒子を粒子濃度が５％になる
ように４容量％のホルマリン溶液に分散し、５℃
で１週間静置した。 本例で得られた粒子は7.5gであり、その75％が
２〜3.2μの範囲にあつた。 実施例 ２ 下記の点を除いて実施例１と同様にして担体粒
子を調製した。 すなわち、アラビアゴム4gのかわりにカルボ
キシメチルセルロース1gを用い、ゼラチン、10
％ヘキサメタリン酸ナトリウム溶液、１％ダイレ
クトブルー溶液、およびグルタルアルデヒドの添
加量をいずれも４分の１にした。また、PHも4.8
から4.2にした。 このようにして得られた担体粒子は5.6gであ
り、その90％が１〜2μの範囲にあつた。 実施例 ３ 下記の点を除いて実施例１と同様にして担体粒
子を調製した。 すなわち、ゼラチン溶液を50mlから40mlにし、
アラビアゴム溶液を50mlから60mlに変えた。それ
から、10％ヘキサメタリン酸ナトリウム溶液を
1.6mlから1.2mlに、１％ダイレクトブルー６mlを
4.8mlに、そしてグルタルアルデヒドを1.3gから
1.0gにそれぞれ変えた。また、酢酸の滴下終了PH
を4.2とした。 このようにして得られた担体粒子は10.4gであ
り、その90％が１〜2μの範囲にあつた。 実施例 ４ 下記の点を除いて実施例１と同様にして担体粒
子を調製した。 すなわち、ゼラチン溶液を50mlから60mlにし、
アラビアゴム溶液を50mlから40mlに変えた。それ
から、10％ヘキサメタリン酸ナトリウム溶液を
1.6mlから２mlに、１％ダイレクトブルー６mlを
7.2mlに、そしてグルタルアルデヒドを1.3gから
1.8gにそれぞれ変えた。また、酢酸の滴下終了PH
を4.7とした。 このようにして得られた担体粒子は11.2gであ
り、その70％が６〜9μの範囲にあつた。 使用例 実施例１で得られた担体粒子を濃度が５％にな
るようにPH7.2のリン酸塩緩衝生理食塩水（以下、
PBSと略記する。）に分散し、その20mlを5ppm
のタンニン酸を含むPH7.2のPBS20mlと混合した。 混合液を37℃で15分間加温後遠心分離して生理
食塩水で充分洗浄してから５％になるようにPH
6.4のPBSに分散し全量を20mlとした。一方、PH
6.4のPBS中に浮遊させた梅毒病原体トレポネー
マ・パリーダムを超音波処理して破壊し、抗原液
とした。 タンニン酸処理粒子分散液20mlと抗原液20mlと
を混合して37℃で40分間加温した。こうして得ら
れた抗原感作粒子をPH6.4のPBSで充分に洗浄し、
粒子濃度が５％になるように19mlの分散用メデイ
ウムに分散して凍結乾燥した。 この凍結乾燥品に蒸溜水を加えて凍結乾燥前と
同容量になるように復元し、梅毒陽性血清につい
てマイクロタイタープレート法で力価を測定した
結果を下表に示す。なお、ヒツジ赤血球を担体と
した市販のTPHAキツト（富士臓品製薬(株)製）
を用いて同様に測定した結果も併せて示す。 【表】
定などに広く利用しうる新規な人工担体の製法の
改良に関する。抗原、抗体反応を利用する臨床検
査等の分野において、抗原または抗体をある適当
な大きさの粒子を担体としてそれに吸着もしくは
結合させ、それぞれに対応する抗体または抗原の
存在によつてこの感作された担体の凝集を起させ
る方法は間接受身凝集反応と呼ばれている。そし
て、この間接受身凝集反応は被検液中の抗体や抗
原を高感度に検出できるので、いろいろの疾患の
血清学的診断や血液学的診断に広く用いれてい
る。 この反応に用いられる担体としては、ポリスチ
レンラテツクス、カオリン、炭末などの非生物学
的粒子と、動物赤血球、細菌菌体のような生物学
的粒子とがある。一般に非生物学的粒子の担体
は、化学的に安定で、それ自身抗原活性を有しな
いなどの利点はあるが、抗原あるいは抗体が密に
吸着されにくいという欠点がある。たとえば、保
存のために凍結乾燥すると抗原や抗体が担体から
遊離してしまうのである。そのために、やむなく
液体中で冷暗所に保存するという手段がとられて
いるが、その結果長期間保存することができな
い。また、非生物学的担体のうち、炭末とカオリ
ンは一定の大きさの粒子を選出することが困難で
あり、ポリスチレンラテツクスは反応の媒質とし
て望ましい中性域では非特異凝集である自然凝集
をおこす危険がある。 一方、生物学的担体である動物赤血球や細菌菌
体はそれぞれの大きさが一定であるという利点は
あるものの、生物の種類によつて粒子の大きさは
定まつており、目的に応じた任意の大きさの粒子
を得ることはできない。たとえば、動物赤血球は
大きさの一定した最も入手しやすい担体である
が、血球表面に固有の抗原を有しており、抗体と
の間で非特異凝集反応である交差反応を起こして
目的とする凝集反応に誤まりを与える可能性があ
る。さらに、赤血球の生物学的、化学的および物
理的特性値が動物の個体間でばらついてしまつて
常に一定品質の血球を入手することが難しいとい
う欠点がある。 本発明者らはこれらの欠点のないすぐれた担体
を開発すべく種々検討の結果、ゼラチン、水溶性
多糖類、およびポリメタリン酸ナトリウムを含
み、水とアルコール等の混合物を溶媒とする溶液
を撹拌下でPH調整することによつて粒子を析出さ
せ、この粒子をアルデヒド系架橋剤で処理して不
溶化すれば、従来の欠点を尽く解消したすぐれた
担体が得られることを見出し、この内容を既に特
許出願した（特開昭57−153658号）。そして、そ
の後アルコール等の親水性有機溶媒を用いなくと
も人工担体が好収率で得られることを見出してこ
の内容も特許出願した（特開昭57−160465号）。
しかしなが、いずれの方法においても生成した粒
子の凝集を防止するために界面活性剤を添加して
いた。本発明者らはさらに研究を進めた結果、溶
媒が水のみで親水性有機溶媒を用いない場合であ
つても酸の添加によつて粒子が生成したのちに速
かに冷却すれば界面活性剤を添加しなくとも界面
活性剤を添加した場合に匹敵する好収率で担体粒
子が得られることを見出し、これに基づいて本発
明を完成するに到つた。 すなわち本発明は、ゼラチン、水溶性多糖類、
およびポリメタリン酸ナトリウムを含み、温度が
ゼラチンのゲル化温度以上である水溶液を撹拌し
つつ酸を加えてPH2.5〜6.0に調整し、その後アル
デヒド系架橋剤を作用せしめて不溶化する人工担
体の生産法において、前記酸の添加によつて粒子
が生成したのちこの粒子分散液を10℃以下に冷却
し、10℃以下の温度で前記架橋剤を作用せしめる
ことを特徴とする人工担体の生産法に関するもの
である。 本発明に使用するゼラチンは通常は市販品をそ
のまま用いればよい。市販品のなかでは酸性ゼラ
チンが好ましい。 水溶性多糖類は増粘剤または糊料として使用し
うるものであり、多糖類の誘導体および塩も含ま
れる。例としては、アラビアゴム、カルボキシメ
チルセルロース、アルギン酸ナトリウム、寒天、
カラゲーナンなどを挙げることができるが、特に
アルビアゴムが好適である。 ポリメタリン酸ナトリウムは化学式（NaPO3）
oで表わされる物質であり、たとえば四メタリン
酸ナトリウム、ヘキサメタリン酸ナトリウムの如
きものである。 そのほかのものとしては、担体を着色する場合
には、着色剤を粒子形成前に溶液に加えておくの
がよい。着色を必要とする例としては、本発明品
を間接受身凝集反応の担体として用いる場合を挙
げることができる。すなわち、本発明品は通常は
無色不透明であるところから、これを着色するこ
とによつて凝集像の判定を容易にすることができ
る。着色剤としては、たとえば食用赤色３号、ロ
ーダミン、ローズベンガル、ポンソー3R、ボル
ドーＳ、フクシン、エオシン、およびニユートラ
ルレツドなどの赤色色素、あるいはクリスタルバ
イオレツト、トルイジンブルーおよびメチレンブ
ルーなどの青色色素等を用いうる。しかしなら
が、リアクテイブレツド、ダイレクト・ブルーな
どの反応性染料で着色すれば色落ちしないことか
ら、反応性染料が特に好適である着色剤以外にも
目的に応じ種々の物質を添加してもよいことはい
うまでもない。 PH調整前の溶液におけるこれら各物質の濃度と
しては、ゼラチン0.01〜２％程度、好ましくは
0.05〜1.0％程度、そして水溶性多糖類0.01〜２％
程度、好ましくは0.05〜1.0％程度である。ポリ
メタリン酸ナトリウムはゼラチン乾燥重量の0.5
〜20％程度を含有させるようにするのがよい。各
物質はこれらの濃度範囲において、所望の粒子の
粒径および物性に応じて適宜定めればよい。着色
剤を添加する場合には、通常は0.005〜0.5％程度
であるが、反応性染料を用いればゼラチン乾燥重
量の１〜５％程度で足りる。 このような溶液を調整する過程は問うところで
はなく、例えば各々を温水に溶解してから混合し
てもよく、各々を一緒に溶解してもよい。しかし
ながら、各物質の溶解を容易にするために親水性
有機溶媒はあとから加えるのがよく、また水溶性
多糖類には不溶成分も少量含まれていることが多
いところから、別途に溶解して添加するのがよ
い。一方、ゼラチンは等電点以下のPHでは水溶性
多糖類と反応して白濁を生ずるので酸性ゼラチン
を用いる場合にはアルカリを加えて溶液のPHを少
なくともその付近にまで高めておくのがよい。し
かしながら、この白濁は生じた後でもアルカリを
添加することによつて消すことができる。いずれ
にせよ、溶液は酸の添加を開始するまえには白濁
のない状態にしておかなければならない。 溶液の温度はゼラチンのゲル化温度以上でなけ
ればならない。この温度はゼラチンの濃度等によ
つて異なるが通例25〜30℃程度である。良好な粒
子形成の観点から特に35〜50℃程度がよい。 次に、この溶液を撹拌しながら酸を加えてPH
2.5〜6.0に調整する。この工程は粒子を生成させ
るところである。均一な粒子を形成させるため
に、35〜50℃に加温を続け、適度に撹拌しながら
酸を滴下していくのがよい。PH2.5〜6.0の範囲に
おける至適のPHは原料溶液の組成および目的とす
る粒径によつて異なるので予め実験を行なつて定
めるのがよい。たとえば得られた粒子を抗原感作
用担体に用いる場合には２〜10μ程度の粒径にす
るのがよく、その場合至適のPHは4.0〜5.5の範囲
にある。このPH調整に使用する酸は特に限定され
るものではなく無機酸でも有機酸でもよいが、な
るべくおだやかなものがよく、たとえば酢酸など
が好適である。 本工程で生成した粒子は系の温度をゼラチンの
ゲル化温度以下に下げても消失しないので母液と
の平衡関係はない。また、粒子はほとんどの場合
負に帯電しており、その表面には溶液中の陽イオ
ンが配向していていわゆる電気二重層を形成して
いる。そして、このことが粒子の安定な分散を促
しているのである。 本発明においては酸を添加して粒子を生成させ
たのちに粒子生成液をゲル化温度以下に冷却し、
そのことによつて界面活性剤の添加を不要にした
ところに特徴がある。冷却は酸の添加終了後速か
に行なうのがよい。添加終了後室温に放置してお
くと粒子が互いに衝突して凝集がはじまつてしま
う。温度はゲル化温度以下であるが、５℃以下に
することが好ましい。粒子生成後は粒子をアルデ
ヒド系架橋剤で不溶化するのであるが、その間も
粒子分散液をゲル化温度以下に保つ必要がある。
但し、粒子の再分散が容易になる程度に不溶化が
進行するまでこの温度に保てばよい。アルデヒド
系架橋剤の添加量はゼラチン乾燥重量の0.1〜200
％程度であり、添加後は一夜程度放置して架橋反
応を充分に行なわせる。架橋剤の例としては、グ
ルタルアルデヒド、ホルムアルデヒド、グリオキ
ザール、クロトンアルデヒド、アクロレイン、ア
セトアルデヒドなどを挙げることができるが、特
にグルタルアルデヒドが好適である。 アルデヒド系架橋剤で処理後は粒子を遠心分離
等で回収して洗浄する。洗浄は0.001〜0.01％程
度の陰イオン系界面活性剤水溶液または0.01〜
0.1％の非イオン系界面活性剤水溶液を用いて２
〜３回行なえばよい。 このようにして得られた担体を種々の用途に供
すればよいが、架橋が不充分な場合には塩類溶液
中で膨潤することがある。そこでこのような用途
に用いる場合にはアルデヒド系架橋剤で処理して
膨潤を防止するのがよい。例えば、抗原を感作す
る場合にはリン酸緩衝液中で行なうので、赤血球
を固定化する条件でホルマリン処理する。この処
理によつて膨潤を防止するとともにホルマリンの
殺菌効果によつて長期間の保存に耐える担体が得
られる。 本発明の担体は抗原、抗体、酵素などを巾広く
固定することができる。たとえば、抗原とか抗体
を感作する場合には動物赤血球を担体として行な
う常法に準じて行えばよい。 本発明の担体は間接受身凝集反応の担体として
従来最もすぐれているとされていた動物赤血球と
同等の性能を有し、さらに化学的、物理的に均質
かつ安定であり、抗原活性がなく任意の粒径のも
のを容易かつ安価に大量生産できるなど動物赤血
球にない幾多の利点を有するものである。そして
本発明は先願発明に対し有機溶剤と界面活性剤の
２つの使用を排除したものであり、本発明によつ
てこのようにすぐれた性質を有する人工担体を容
易にかつ簡便に製造することができる。有機溶剤
を不要にすることによつて製造設備を簡略化しか
つ操作を容易にしており、また、この方法で得ら
れた担体は例えば界面活性剤の存在を嫌うような
用途にも使用できる。 以下、実施例及び担体の使用例を示す。なお、
本明細書において特に記載がなければ％は重量％
を表わしている。 実施例 １ 等電点がPH９であるゼラチン4gを40℃の温水
に100mlになるように溶解し、10％の水酸化ナト
リウム溶液でPH９に調整した。アラビアゴム4g
を100mlになるように水に溶解し、不溶物を別
した後40℃に加温した。 ゼラチン溶液50mlとアラビアゴム溶液50mlを混
合し、これに40℃の蒸溜水300ml、10％ヘキサメ
タリン酸ナトリウム溶液1.6ml、および１％ダイ
レクトブルー溶液６mlを加えた。 次いで、この溶液を40℃に保ち、撹拌しながら
10容量％酢酸溶液を滴下してPH4.8に調整し、粒
子を生成させた。 粒子分散液を氷冷して５℃にしてからグルター
ルアルデヒド1.3gを加え、よく撹拌後この温度で
一夜静置した。それからこの粒子分散液を
2000rpmで10分間遠心分離して粒子をペレツトと
して回収した。この粒子を粒子濃度が５％になる
ように４容量％のホルマリン溶液に分散し、５℃
で１週間静置した。 本例で得られた粒子は7.5gであり、その75％が
２〜3.2μの範囲にあつた。 実施例 ２ 下記の点を除いて実施例１と同様にして担体粒
子を調製した。 すなわち、アラビアゴム4gのかわりにカルボ
キシメチルセルロース1gを用い、ゼラチン、10
％ヘキサメタリン酸ナトリウム溶液、１％ダイレ
クトブルー溶液、およびグルタルアルデヒドの添
加量をいずれも４分の１にした。また、PHも4.8
から4.2にした。 このようにして得られた担体粒子は5.6gであ
り、その90％が１〜2μの範囲にあつた。 実施例 ３ 下記の点を除いて実施例１と同様にして担体粒
子を調製した。 すなわち、ゼラチン溶液を50mlから40mlにし、
アラビアゴム溶液を50mlから60mlに変えた。それ
から、10％ヘキサメタリン酸ナトリウム溶液を
1.6mlから1.2mlに、１％ダイレクトブルー６mlを
4.8mlに、そしてグルタルアルデヒドを1.3gから
1.0gにそれぞれ変えた。また、酢酸の滴下終了PH
を4.2とした。 このようにして得られた担体粒子は10.4gであ
り、その90％が１〜2μの範囲にあつた。 実施例 ４ 下記の点を除いて実施例１と同様にして担体粒
子を調製した。 すなわち、ゼラチン溶液を50mlから60mlにし、
アラビアゴム溶液を50mlから40mlに変えた。それ
から、10％ヘキサメタリン酸ナトリウム溶液を
1.6mlから２mlに、１％ダイレクトブルー６mlを
7.2mlに、そしてグルタルアルデヒドを1.3gから
1.8gにそれぞれ変えた。また、酢酸の滴下終了PH
を4.7とした。 このようにして得られた担体粒子は11.2gであ
り、その70％が６〜9μの範囲にあつた。 使用例 実施例１で得られた担体粒子を濃度が５％にな
るようにPH7.2のリン酸塩緩衝生理食塩水（以下、
PBSと略記する。）に分散し、その20mlを5ppm
のタンニン酸を含むPH7.2のPBS20mlと混合した。 混合液を37℃で15分間加温後遠心分離して生理
食塩水で充分洗浄してから５％になるようにPH
6.4のPBSに分散し全量を20mlとした。一方、PH
6.4のPBS中に浮遊させた梅毒病原体トレポネー
マ・パリーダムを超音波処理して破壊し、抗原液
とした。 タンニン酸処理粒子分散液20mlと抗原液20mlと
を混合して37℃で40分間加温した。こうして得ら
れた抗原感作粒子をPH6.4のPBSで充分に洗浄し、
粒子濃度が５％になるように19mlの分散用メデイ
ウムに分散して凍結乾燥した。 この凍結乾燥品に蒸溜水を加えて凍結乾燥前と
同容量になるように復元し、梅毒陽性血清につい
てマイクロタイタープレート法で力価を測定した
結果を下表に示す。なお、ヒツジ赤血球を担体と
した市販のTPHAキツト（富士臓品製薬(株)製）
を用いて同様に測定した結果も併せて示す。 【表】
Claims (1)
- １ ゼラチン、水溶性多糖類、およびポリメタリ
ン酸ナトリウムを含み、温度がゼラチンのゲル化
温度以上である水溶液を、撹拌しつつ酸を加えて
PH2.5〜6.0に調整し、その後アルデヒド系架橋剤
を作用せしめて不溶化する人工担体の生産法にお
いて、前記酸の添加によつて粒子が生成したのち
この粒子分散液をゲル化温度以下に冷却し、ゲル
化温度以下の温度で前記架橋剤を作用せしめるこ
とを特徴とする人工担体の生産法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20987181A JPS58113757A (ja) | 1981-12-28 | 1981-12-28 | 人工担体の生産法 |
| EP19820301235 EP0062968B2 (en) | 1981-03-18 | 1982-03-11 | Support material for use in serological testing and process for the production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20987181A JPS58113757A (ja) | 1981-12-28 | 1981-12-28 | 人工担体の生産法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58113757A JPS58113757A (ja) | 1983-07-06 |
| JPS6332150B2 true JPS6332150B2 (ja) | 1988-06-28 |
Family
ID=16580013
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20987181A Granted JPS58113757A (ja) | 1981-03-18 | 1981-12-28 | 人工担体の生産法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58113757A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2020067548A1 (ja) * | 2018-09-28 | 2021-09-24 | Ｓｐｉｂｅｒ株式会社 | 難燃性タンパク質成形体及びその製造方法 |
-
1981
- 1981-12-28 JP JP20987181A patent/JPS58113757A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58113757A (ja) | 1983-07-06 |
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