JPH0352479B2 - - Google Patents
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Description
本発明は、新規なヒト副甲状腺ホルモン（ｈ−
PTH）誘導体に関する。さらに詳しくは、本発
明は、副甲状腺機能低下症治療剤として、または
PTHが関与する治療剤として、あるいは副甲状
腺機能検査のための標識化合物の原料として有用
な〔Nle8，Nle18，Tyr34〕−ｈ−PTH（１−34）
NH2、即ち式 Ｈ−S1 er−V2al−S3 er−G4 lu−I5 le−G6 lo−L7 eu−N8
is−
A10 so−L11 eu−G12ly−L13 ys−14is−L15eu−A16 so−S1
7 er−N18 le−
G19 lu−A20 rg−V21 al−G22 lu−T23 rp−L24 eu−A25 rg−L
26 ys−L27 ys
−L28 eu−G29 lo−A30 sp−V31 al−H32is−A33 so−T34 yr
−NH2
……〔） （式中、SerはＬ−セリン、ValはＬ−バリン、
GluはＬ−グルタミン酸、IleはＬ−イソロイシ
ン、GlnはＬ−グルタミン、LeuはＬ−ロイシン、
NleはＬ−ノルロイシン、HisはＬ−ヒスチジン、
AsnはＬ−アスパラギン、Glyはグリシン、Lys
はＬ−リジン、ArgはＬ−アルギニン、TrpはＬ
−トリプトフアン、AsPはＬ−アスパラギン酸、
TyrはＬ−チロシンを示す）で表わされるペプチ
ドまたはその塩である。 ｈ−PTHは84個のアミノ酸よりなるペプチド
ホルモンで、その生物学的活性はアミノ酸順位１
−34のＮ末端フラグメント、即ちｈ−PTH（１−
34）に有すると報告されている〔Proc.Nat.
Acad.Sci.U.S.A.，68，63−67（1971）〕。しかしな
がら、ｈ−PTHはＬ−メチオニン（Met）が存
在するため不安定であり、I125で標識するとホル
モン活性が失なわれる〔Recent Prog.Hormone
Res.，18，269〜295（1962）〕。 従来のｈ−PTHの定量法では、ｈ−PTH活性
を有する部分のみを定量するために、ｈ−PTH
（１−34）を抗原とした特異抗体が調製されるよ
うになつた。しかしながら、ｈ−PTH（１−34）
はＬ−メチオニン（Met）が存在するため不安定
であり、I125で標識化する際、８位および18位に
存在するMetが酸化されてホルモン活性が失活す
るという欠点があつた。 そこで、PTH活性を有し、PTHの抗体に対し
て免疫活性を有するのみならず、I125で標識化し
てもホルモン活性が安定であり、且つ安定な放射
活性を有するｈ−PTH誘導体として、８位およ
び18位のMetをＬ−ノルロイシンに換え、34位の
Ｌ−フエニルアラニンをＬ−チロシンに換えた
〔N8 le，N18 le，T34 yr 34〕−ｈ−PTH（１−34）が見い
出された〔特開昭55−113753号〕。 しかしながら、この〔N8 le，N18 le，T34 yr〕−ｈ−
PTH（１−34）は、その分子内にMetが存在しな
いため、I125で標識しても失活しないが、そのホ
ルモン活性は高々天然型ｈ−PTH（１−34）と同
程度の活性を有するに過ぎなかつた。 本目的化合物〔〕はPTHのリセプターに対
し公知のｈ−PTH（１−34）および〔N8 le，N18 le，
T34 yr〕−ｈ−PTH（１−34）よりも強い親和力を有
し、約1.5〜２倍のｈ−PTH活性を有するののみ
なならず、PTHの抗体に対しても免疫活性を有
し、I125で標識してもホルモン活性は低下せず、
〔N8 le，N18 yr，T34yr〕−ｈ−PTH（１−34）より約２
倍の放射活性を有しており、長期の保存において
も生物活性が低下しないため、公知のｈ−PTH
（１−34）、〔N8 le，N18 le，T34 yr〕−ｈ−PTH（１−
34）より極めてて優れた効果を発揮する。このた
め、本目的化合物〔〕は副甲状腺機能低下症治
療剤、PTHが関与する骨の治療剤および副甲状
腺機能検査のための標識化合物の原料として極め
て有用なペプチドである。 本発明のペプチド〔〕は、Ｃ末端チロシル基
のカルボキシル基をアミド基に転化し、式〔〕
で示されるアミノ酸順序に個々の保護されたアミ
ノ酸および（または）保護された低級ペプチドを
液相合成法により縮合し、縮合反応の最終段階で
Ｎ末端のアミノ基の保護基および側鎖の官能基の
保護基を酸分解により脱離することにより得られ
る。縮合反応自体はペプチド合成のための常法手
段に従つて、保護基の着脱、縮合反応を繰り返す
ことにより行われる。即ち、本ペプチド〔〕の
原料ならびにすべての中間体の製造において使用
される各種保護基はペプチド合成で既知なもの、
従つて加水分解、酸水解、還元、アミノリシスま
たはヒドラジノリシスのような既知手段によつて
容易に脱離することのできる保護基が用いられ
る。このような保護基はペプチド合成化学の分野
の文献ならびに参考書に記載されている。 例えば、アミノ基に使用する保護基としては、
ホルミル基、トリフルオロアセチル基、フタロイ
ル基、ｐ−トルエンスルホニル基、ｏ−ニトロフ
エニルスルフエニル基などのアシル基、ベンジル
オキシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−ブロモベン
ジルオキシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−クロロ
ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジ
ルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオ
キシカルボニル基などのベンジルオキシカルボニ
ル基、トリクロロエチルオキシカルボニル基、ｔ
−ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシ
カルボニル基、ジイソプロピルメチルオオキシカ
ルボニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２
−フエニル−イソプロポキシカルボニル基、２−
トリル−イソプロポキシカルボニル基、２−ｐ−
ジフエニル−イソプロポキシカルボニル基などの
アラルキルオキシカルボニル基などがある。また
これらアミノ基をベンゾイルアセトン、アセチル
アセトンなどの１，３−ジケトンと反応させるこ
とによつて得られるエナミンの形成により保護す
ることができる。 カルボキシル基は、アミド形成、ヒドラチド形
成またはエステル化によつて保護される。即ちア
ミド基は、３，４−ジメトキシベンジル基、ビス
−（ｐ−メトキシフエニル）メチル基などによつ
て置換される。ヒドラチド基はベンジルオキシカ
ルボニル基、トリクロロエチルオキシカルボニル
基、トリフルオロアセチル基、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル基、トリチル基、２−ｐ−ジフエニル
−イソプロポキシカルボニル基などによつて置換
される。エステル基はメタノール、エタノール、
ｔ−ブタノール、シアノメチルアルコールなどの
アルカノール、ベンジルアルコール、ｐ−ブロモ
ベンジルアルコール、ｐ−クロロベンジルアルコ
ール、２，６−ジクロロベンジルアルコール、ｐ
−メトキシベンジルアルコール、ｐ−ニトロベン
ジルアルコール、ベンズヒドリルアルコール、ベ
ンゾイルメチルアルコール、ｐ−ブロモベンゾイ
ルメチルアルコール、ｐ−クロロベンゾイルメチ
ルアルコールなどのアラルカノール、２，４，６
−トリクロロフエノール、２，４，５−トリクロ
ロフエノール、ペンタクロロフエノール、ｐ−ニ
トロフエノール、２，４−ジニトロフエノールな
どのフエノール、チオフエノール、ｐ−ニトロチ
オフエノールなどのチオフエノールなどによつて
置換される。 前記セリンおよびチロシンの水酸基は、例えば
エステル化またはエーテル化によつて保護するこ
とができる。このエステル化に適する基として
は、例えばアセチル基、ベンゾイル基、ベンジル
オキシカルボニル基、エチルオキシカルボニル基
などである。またエーテル化に適する基として
は、例えばベンジル基、２，６−ジクロロベンジ
ル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基で
ある。これらの水酸基の保護には２，２，２−ト
リフルオロ−１−ｔ−ブチルオキシカルボニルア
ミノエチル基、２，２，２−トリフルオロ−１−
ベンジルオキシカルボニルアミノ基も適する。し
かしながら、これらの水酸基を必らずしも保護す
る必要はない。 前記アルギニンのグアニジノ基中のアミノ基を
保護するのに使用する基としては、例えばニトロ
基、トシル基、ベンジルオキシカルボニル基、メ
シチレン−２−スルホニル基などであるが、この
グアニジノ基を必ずしも保護する必要はない。 前記ヒスチジンのイミノ基を保護するのに使用
する基としては、例えばベンジル基、トリチル
基、ベンジルオキシカルボニル基、トシル基、
２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブチルオキ
シカボニルアミノエチル基、２，２，２−トリフ
ルオロ−１−−ベンジルオキシカルボニルアミノ
エチル基などであるが、このイミノ基を必ずしも
保護する必要はない。 本発明においては、α−アミノ基の保護にｔ−
ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカ
ルボニル基を用い、側鎖のアミノ基、即ちリジン
のξ−アミノ基の保護にｏ−クロロベンジルオキ
シカルボニル基を用い、α−カルボキシル基の保
護にベンジルエステル基、エチルエステル基、フ
エナシルエステル基を用い、側鎖のカルボキシル
基、即ちグルタミン酸、アスパラギン酸の側鎖カ
ルボキシル基の保護にベンジルエステル基を用い
セリンの水酸基の保護にベンジル基を用い、チロ
シンの水酸基の保護に２，６−ジクロロベンジル
基を用い、アルギニンのグアニジノ基中のアミノ
基の保護にトシル基またはメシチレン−２−スル
ホニル基を用いるのが好ましい。 本目的化合物〔〕の合成においては、個々の
アミノ酸および（または）低級ペプチドの縮合
は、例えば保護されたα−アミノ基および活性化
末端カルボキシル基をもつアミノ酸またはペプチ
ドと遊離のα−アミノ基および保護された末端カ
ルボキシル基をもつアミノ酸またはペプチドとを
反応させるか、あるいは活性化α−アミノ基おお
よび保護された末端カルボキシル基をもつアミノ
酸またはペプチドと遊離の末端カルボキシル基お
よび保護されたα−アミノ基をもつアミノ酸また
はペプチドを反応させることにより、実施するこ
とができる。 この場合、カルボキシル基は、例えば酸アジ
ド、酸無水物、酸イミダゾリドまたは活性エステ
ル、例えばシアノメチルエステル、チオフエニル
エステル、ｐ−ニトロチオフエニルエステル、ｐ
−ニトロフエニルエステル、２，４−ジニトロフ
エニルエステル、２，４，５−トリクロロフエニ
ルエステル、２，４，６−トリクロロフエニルエ
ステル、ペンタクロロフエニルエステル、Ｎ−ヒ
ドロキシコハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロキ
シフタル酸イミドエステルなどに変換することに
よつて活性化することができる。またカルボジイ
ミド、例えばＮ，N′−ジシクロヘキシル−カル
ボジイミド、Ｎ−エチル−N′−３−ジメチルア
ミノプロピル−カルボジイミド、Ｎ，N′−カル
ボニル−ジイミダゾールまたはイソオキゾリウム
塩、例えばウツドワード反応剤などの縮合剤を使
用して反応させることによつて活性化することが
できる。 本発明において好ましい縮合方法は、アジド
法、活性エステル法およびカルボジイミド法であ
る。縮合の各段階ではラセミ化が起らない方法ま
たはラセミ化が最少になる方法を用いるのが望ま
しく好ましくはアジド法、活性エステル法、ビユ
ンシユ法〔Z.Naturforsch.，21b，426（1966）〕ま
たはガイガー法〔Chem Ber.，103，788（1970）〕
とりわけ縮合剤としてＮ−エチル−N′−３−ジ
メチルアミノプロピル−カルボジイミド（WSC）
を用いる変法などを用いるのが適する。 縮合順序は式〔〕で示されるアミノ酸順序で
あれば、如何なる順序からも合成し得るが、Ｃ−
末端側から順次アミノ酸および（または）ペプチ
ドを連結させるのが好ましい。 例えば、29〜34番のアミノ酸順序からなるＣ末
端フラグメントと23〜28番のアミノ酸からなるペ
プチドフラグメントを縮合させるのがよい。この
Ｃ−末端フラグメントとヘキサペプチド23−28を
縮合させるにはWSCを用いるガイガー変法によ
つて行うのが適する。得られたＣ−末端フラグメ
ント23−34の前に18〜22番のアミノ酸順序からな
るペプチドフラグメントを連結させるのである
が、WSCを用いるガイガー変法により行うのが
適する。得られたＣ−末端フラグメント18−34の
前に順次13〜17番のアミノ酸順序からなるペプチ
ドフラグメント、８〜12番のアミノ酸順序からな
るペプチドフラグメント、１〜７番のアミノ酸順
序からなるペプチドフラグメントを連結させるの
が好ましい。 上記の縮合反応におけるα−アミノ基の保護
基、例えばｔ−ブチルオキシカルボニル基、ｔ−
アミルオキシカルボニル基はトリフルオロ酢酸で
脱離される。α−カルボキシル基の保護基、例え
ばエチルエステルはこれを希薄な水酸化ナトリウ
ム溶液で分解し、またはヒドラチドあるいはトリ
クロロエトキシカルボニルヒドラチドのような保
護ヒドラチドに変え、フエナシルエステル基は酢
酸中Zn粉末で分解し、またベンジルエステル基
は無水弗化水素分解、水素添加分解によつて分解
し、またはヒドラチドに変えることができる。 こうして保護されたＮ末端α−アミノ基、ξ−
アミノ基、側鎖カルボキシル基、グアニジノ基お
よび（または）水酸基を有するテトラトリアコン
タペプチドが得られる。これらの保護基は、好ま
しくは酸分解、例えば無水弗化水素またはトリフ
ルオロメタンスルホン酸による方法によつて一段
階で脱離され、式〔〕の目的化合物が得られ
る。 このようにして得られたペプチド〔〕は、ペ
プチドまたは蛋白質を精製する公知の手段によつ
て分離精製することができる。例えば、セフアデ
ツクスＧ−25、セフアデツクスＧ−50、セフアデ
ツクスLH−20などのゲル過剤を用いるゲル
過、カルボキシメチルセルロース、イオン交換樹
脂などを用いるカラムクロマトグラフイー、高速
液体クロマトグラフイーなどにより行うことがで
きる。 本発明のペプチド〔〕は、その方法の条件に
より塩基またはその塩の形で得られる塩として
は、無機酸塩、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリ
コール酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン
酸などの有機酸との塩である。 本ペプチド〔〕はある種の無機物質または有
機物質を付加して錯体を形成し得る。この錯体と
は添加した時に生成し、ペプチドに持続作用を与
える未だ構成不明の化合物を意味する。このよう
な物質としては、例えば、カルシウム、マグネシ
ウム、アルミニウム、コバルトまたは亜鉛のよう
な金属から誘導される無機化合物、特にこれら金
属のリン酸塩、ピロリン酸塩またはポリリン酸塩
のような僅かに可溶性の塩ならびに水酸化合物、
あるいはアルカリ金属のポリリン酸塩を挙げるこ
とができる。 さらに本発明のペプチド〔〕は、好ましくは
RIA用標識試薬として利用される。例えば、一定
量の放射活性を有する125I含有リン酸緩衝液（PH
7.1）に本発明のペプチド〔〕およびクロラミ
ンＴを加えて撹拌し、次いで重亜硫酸ナトリウム
を加え、さらに少量のヨウ化カリウムおよび血清
アルブミンを加えてクロマトグラフイーを行い、
125Iで標識された分画を集めることにより125Iで
標識された放射活性体が得られる。 次に本発明のペプチド〔〕および125Iで標識
された放射活性体の副甲状腺ホルモン（PTH）
活性について述べる。 ＜125I標識体の調製＞ 2mCiの放射活性を有する125I−NaIを含有する
0.5Mリン酸緩衝液（PH7.1）50μlに各々ｈ−PTH
（１−34）、ｈ−PTH（１−34）NH2、〔H8 le，
N18 le，T34 yr〕−ｈ−PTH（１−34）および〔N8 le′，
N18 le，T34 yr〕−ｈ−PTH（１−34）NH2の2μｇ含有
液10μおよびクロラミンＴ（3.5―mg／ml）含有
液20μlを加えて30秒間撹拌した後、これに重亜硫
酸ナトリウム（4.5mg／ml）含有液50μlを加えて
反応を停止した。これに５％ヒト血清アルブミン
含有0.1N酢酸溶液0.5mlを加えた後、セフアデツ
クスＧ−10のカラム（１×50cm）にチヤージし、
上記酢酸溶液で溶出して、125Iで標識した各被検
品の含有分画を得た。 ＜PTH活性測定法＞ (1) PTHレセプターの調製 SD系雄ラツト（体重200〜250ｇ）を断頭、放
血し、開腹の後、腎を摘出し、その表面皮膜を取
り除き、腎皮質部分を切り取り、氷冷する。以下
の操作はできるだけ低温（０〜４℃）下で行う。
上記の腎皮質部分を0.25Mシユクロースおよび
1mMEDTA含有10mMトリス塩酸塩緩衝液（PH
7.5）（以下Ａ液と称す）中に浸し、テフロンペツ
スルを用いたガラス外套管で腎皮質をその湿重量
（ｇ）の３倍容量（ml）のＡ液を加えてホモゲナ
イズする。このホモジネートを150Xｇ、10分間
遠心分離し、その上清をさらに2200Xｇ、15分間
遠心分離する。上清を捨て、沈澱物の上層の浮濁
色の部分をＡ液に懸濁し、この懸濁液を2200X
ｇ、155分間遠心分離により洗浄し、再び懸濁し
て容器に分注し、−70℃で凍結して−20℃で保存
する。 (2) PTHとPTHレセプターの反応 被検品を2μｇ／mlと10μｇ／mlの濃度になるよ
うにATPMg2mM、MgCl210mM、KCl60mM、
GTP20μM、イソブチルメチルキサンチン1mM、
クレアチンホスフエート8mMおよび牛血清アル
ブミン（BSA）0.2％含有100mMトリス塩酸塩緩
衝液（PH7.5）（以下Ｂ液と称す）に溶かし、これ
を標準品牛PTH（１−84）についても行う これら４つの溶液を50μlづつガラス試験管に分
注し、各々８本づつ用意する。試料は氷水中に保
ち、ATPなど他の物質の分解を抑える。−20℃に
保存したPTHレセプター調製品を室温で解凍し、
Ａ液に予め溶かしておいてクレアチンキナーゼを
加え、さらにＡ液でクレアチンキナーゼ0.1mg／
ml、PTHレセプター調製品蛋白量1.4mg／mlにな
るように調製し、氷冷中で保つ。上記の分注され
た試料溶液を37℃の恒温槽に数分間つけた後に、
上記のPTHレセプター−クレアチンキナーゼ液
を50μlづつ加え、37℃で10分間インキユベートす
る。次いで0.1M酢酸緩衝液（PH4.0）100μlを加
え、直ちに氷水中につけた後、すみやかに試験管
を沸騰水で１分間熱し、反応を停止させる。 (3) 生成Ｃ−AMPの測定 上記の反応停止試料を蒸留水で10〜30倍に希釈
し、2000XG、15分間の遠心分離により除蛋白を
行う。その上清のＣ−AMP量をRIAキツト（ヤ
マサ醤油社製）で測定する。 (4) PTH力価の測定 Ｃ−AMPの測定値をPM／mgPTHレセプター
蛋白／分の単位に換算し、これを反応の値とし、
標準品によつて得られた値に対して被検品を平行
線検定２×２点法を用いて検定する。 (5) PTH活性結果（Ｕ／mg）
PTH）誘導体に関する。さらに詳しくは、本発
明は、副甲状腺機能低下症治療剤として、または
PTHが関与する治療剤として、あるいは副甲状
腺機能検査のための標識化合物の原料として有用
な〔Nle8，Nle18，Tyr34〕−ｈ−PTH（１−34）
NH2、即ち式 Ｈ−S1 er−V2al−S3 er−G4 lu−I5 le−G6 lo−L7 eu−N8
is−
A10 so−L11 eu−G12ly−L13 ys−14is−L15eu−A16 so−S1
7 er−N18 le−
G19 lu−A20 rg−V21 al−G22 lu−T23 rp−L24 eu−A25 rg−L
26 ys−L27 ys
−L28 eu−G29 lo−A30 sp−V31 al−H32is−A33 so−T34 yr
−NH2
……〔） （式中、SerはＬ−セリン、ValはＬ−バリン、
GluはＬ−グルタミン酸、IleはＬ−イソロイシ
ン、GlnはＬ−グルタミン、LeuはＬ−ロイシン、
NleはＬ−ノルロイシン、HisはＬ−ヒスチジン、
AsnはＬ−アスパラギン、Glyはグリシン、Lys
はＬ−リジン、ArgはＬ−アルギニン、TrpはＬ
−トリプトフアン、AsPはＬ−アスパラギン酸、
TyrはＬ−チロシンを示す）で表わされるペプチ
ドまたはその塩である。 ｈ−PTHは84個のアミノ酸よりなるペプチド
ホルモンで、その生物学的活性はアミノ酸順位１
−34のＮ末端フラグメント、即ちｈ−PTH（１−
34）に有すると報告されている〔Proc.Nat.
Acad.Sci.U.S.A.，68，63−67（1971）〕。しかしな
がら、ｈ−PTHはＬ−メチオニン（Met）が存
在するため不安定であり、I125で標識するとホル
モン活性が失なわれる〔Recent Prog.Hormone
Res.，18，269〜295（1962）〕。 従来のｈ−PTHの定量法では、ｈ−PTH活性
を有する部分のみを定量するために、ｈ−PTH
（１−34）を抗原とした特異抗体が調製されるよ
うになつた。しかしながら、ｈ−PTH（１−34）
はＬ−メチオニン（Met）が存在するため不安定
であり、I125で標識化する際、８位および18位に
存在するMetが酸化されてホルモン活性が失活す
るという欠点があつた。 そこで、PTH活性を有し、PTHの抗体に対し
て免疫活性を有するのみならず、I125で標識化し
てもホルモン活性が安定であり、且つ安定な放射
活性を有するｈ−PTH誘導体として、８位およ
び18位のMetをＬ−ノルロイシンに換え、34位の
Ｌ−フエニルアラニンをＬ−チロシンに換えた
〔N8 le，N18 le，T34 yr 34〕−ｈ−PTH（１−34）が見い
出された〔特開昭55−113753号〕。 しかしながら、この〔N8 le，N18 le，T34 yr〕−ｈ−
PTH（１−34）は、その分子内にMetが存在しな
いため、I125で標識しても失活しないが、そのホ
ルモン活性は高々天然型ｈ−PTH（１−34）と同
程度の活性を有するに過ぎなかつた。 本目的化合物〔〕はPTHのリセプターに対
し公知のｈ−PTH（１−34）および〔N8 le，N18 le，
T34 yr〕−ｈ−PTH（１−34）よりも強い親和力を有
し、約1.5〜２倍のｈ−PTH活性を有するののみ
なならず、PTHの抗体に対しても免疫活性を有
し、I125で標識してもホルモン活性は低下せず、
〔N8 le，N18 yr，T34yr〕−ｈ−PTH（１−34）より約２
倍の放射活性を有しており、長期の保存において
も生物活性が低下しないため、公知のｈ−PTH
（１−34）、〔N8 le，N18 le，T34 yr〕−ｈ−PTH（１−
34）より極めてて優れた効果を発揮する。このた
め、本目的化合物〔〕は副甲状腺機能低下症治
療剤、PTHが関与する骨の治療剤および副甲状
腺機能検査のための標識化合物の原料として極め
て有用なペプチドである。 本発明のペプチド〔〕は、Ｃ末端チロシル基
のカルボキシル基をアミド基に転化し、式〔〕
で示されるアミノ酸順序に個々の保護されたアミ
ノ酸および（または）保護された低級ペプチドを
液相合成法により縮合し、縮合反応の最終段階で
Ｎ末端のアミノ基の保護基および側鎖の官能基の
保護基を酸分解により脱離することにより得られ
る。縮合反応自体はペプチド合成のための常法手
段に従つて、保護基の着脱、縮合反応を繰り返す
ことにより行われる。即ち、本ペプチド〔〕の
原料ならびにすべての中間体の製造において使用
される各種保護基はペプチド合成で既知なもの、
従つて加水分解、酸水解、還元、アミノリシスま
たはヒドラジノリシスのような既知手段によつて
容易に脱離することのできる保護基が用いられ
る。このような保護基はペプチド合成化学の分野
の文献ならびに参考書に記載されている。 例えば、アミノ基に使用する保護基としては、
ホルミル基、トリフルオロアセチル基、フタロイ
ル基、ｐ−トルエンスルホニル基、ｏ−ニトロフ
エニルスルフエニル基などのアシル基、ベンジル
オキシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−ブロモベン
ジルオキシカルボニル基、ｏ（またはｐ）−クロロ
ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−ニトロベンジ
ルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオ
キシカルボニル基などのベンジルオキシカルボニ
ル基、トリクロロエチルオキシカルボニル基、ｔ
−ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシ
カルボニル基、ジイソプロピルメチルオオキシカ
ルボニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２
−フエニル−イソプロポキシカルボニル基、２−
トリル−イソプロポキシカルボニル基、２−ｐ−
ジフエニル−イソプロポキシカルボニル基などの
アラルキルオキシカルボニル基などがある。また
これらアミノ基をベンゾイルアセトン、アセチル
アセトンなどの１，３−ジケトンと反応させるこ
とによつて得られるエナミンの形成により保護す
ることができる。 カルボキシル基は、アミド形成、ヒドラチド形
成またはエステル化によつて保護される。即ちア
ミド基は、３，４−ジメトキシベンジル基、ビス
−（ｐ−メトキシフエニル）メチル基などによつ
て置換される。ヒドラチド基はベンジルオキシカ
ルボニル基、トリクロロエチルオキシカルボニル
基、トリフルオロアセチル基、ｔ−ブチルオキシ
カルボニル基、トリチル基、２−ｐ−ジフエニル
−イソプロポキシカルボニル基などによつて置換
される。エステル基はメタノール、エタノール、
ｔ−ブタノール、シアノメチルアルコールなどの
アルカノール、ベンジルアルコール、ｐ−ブロモ
ベンジルアルコール、ｐ−クロロベンジルアルコ
ール、２，６−ジクロロベンジルアルコール、ｐ
−メトキシベンジルアルコール、ｐ−ニトロベン
ジルアルコール、ベンズヒドリルアルコール、ベ
ンゾイルメチルアルコール、ｐ−ブロモベンゾイ
ルメチルアルコール、ｐ−クロロベンゾイルメチ
ルアルコールなどのアラルカノール、２，４，６
−トリクロロフエノール、２，４，５−トリクロ
ロフエノール、ペンタクロロフエノール、ｐ−ニ
トロフエノール、２，４−ジニトロフエノールな
どのフエノール、チオフエノール、ｐ−ニトロチ
オフエノールなどのチオフエノールなどによつて
置換される。 前記セリンおよびチロシンの水酸基は、例えば
エステル化またはエーテル化によつて保護するこ
とができる。このエステル化に適する基として
は、例えばアセチル基、ベンゾイル基、ベンジル
オキシカルボニル基、エチルオキシカルボニル基
などである。またエーテル化に適する基として
は、例えばベンジル基、２，６−ジクロロベンジ
ル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル基で
ある。これらの水酸基の保護には２，２，２−ト
リフルオロ−１−ｔ−ブチルオキシカルボニルア
ミノエチル基、２，２，２−トリフルオロ−１−
ベンジルオキシカルボニルアミノ基も適する。し
かしながら、これらの水酸基を必らずしも保護す
る必要はない。 前記アルギニンのグアニジノ基中のアミノ基を
保護するのに使用する基としては、例えばニトロ
基、トシル基、ベンジルオキシカルボニル基、メ
シチレン−２−スルホニル基などであるが、この
グアニジノ基を必ずしも保護する必要はない。 前記ヒスチジンのイミノ基を保護するのに使用
する基としては、例えばベンジル基、トリチル
基、ベンジルオキシカルボニル基、トシル基、
２，２，２−トリフルオロ−１−ｔ−ブチルオキ
シカボニルアミノエチル基、２，２，２−トリフ
ルオロ−１−−ベンジルオキシカルボニルアミノ
エチル基などであるが、このイミノ基を必ずしも
保護する必要はない。 本発明においては、α−アミノ基の保護にｔ−
ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオキシカ
ルボニル基を用い、側鎖のアミノ基、即ちリジン
のξ−アミノ基の保護にｏ−クロロベンジルオキ
シカルボニル基を用い、α−カルボキシル基の保
護にベンジルエステル基、エチルエステル基、フ
エナシルエステル基を用い、側鎖のカルボキシル
基、即ちグルタミン酸、アスパラギン酸の側鎖カ
ルボキシル基の保護にベンジルエステル基を用い
セリンの水酸基の保護にベンジル基を用い、チロ
シンの水酸基の保護に２，６−ジクロロベンジル
基を用い、アルギニンのグアニジノ基中のアミノ
基の保護にトシル基またはメシチレン−２−スル
ホニル基を用いるのが好ましい。 本目的化合物〔〕の合成においては、個々の
アミノ酸および（または）低級ペプチドの縮合
は、例えば保護されたα−アミノ基および活性化
末端カルボキシル基をもつアミノ酸またはペプチ
ドと遊離のα−アミノ基および保護された末端カ
ルボキシル基をもつアミノ酸またはペプチドとを
反応させるか、あるいは活性化α−アミノ基おお
よび保護された末端カルボキシル基をもつアミノ
酸またはペプチドと遊離の末端カルボキシル基お
よび保護されたα−アミノ基をもつアミノ酸また
はペプチドを反応させることにより、実施するこ
とができる。 この場合、カルボキシル基は、例えば酸アジ
ド、酸無水物、酸イミダゾリドまたは活性エステ
ル、例えばシアノメチルエステル、チオフエニル
エステル、ｐ−ニトロチオフエニルエステル、ｐ
−ニトロフエニルエステル、２，４−ジニトロフ
エニルエステル、２，４，５−トリクロロフエニ
ルエステル、２，４，６−トリクロロフエニルエ
ステル、ペンタクロロフエニルエステル、Ｎ−ヒ
ドロキシコハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロキ
シフタル酸イミドエステルなどに変換することに
よつて活性化することができる。またカルボジイ
ミド、例えばＮ，N′−ジシクロヘキシル−カル
ボジイミド、Ｎ−エチル−N′−３−ジメチルア
ミノプロピル−カルボジイミド、Ｎ，N′−カル
ボニル−ジイミダゾールまたはイソオキゾリウム
塩、例えばウツドワード反応剤などの縮合剤を使
用して反応させることによつて活性化することが
できる。 本発明において好ましい縮合方法は、アジド
法、活性エステル法およびカルボジイミド法であ
る。縮合の各段階ではラセミ化が起らない方法ま
たはラセミ化が最少になる方法を用いるのが望ま
しく好ましくはアジド法、活性エステル法、ビユ
ンシユ法〔Z.Naturforsch.，21b，426（1966）〕ま
たはガイガー法〔Chem Ber.，103，788（1970）〕
とりわけ縮合剤としてＮ−エチル−N′−３−ジ
メチルアミノプロピル−カルボジイミド（WSC）
を用いる変法などを用いるのが適する。 縮合順序は式〔〕で示されるアミノ酸順序で
あれば、如何なる順序からも合成し得るが、Ｃ−
末端側から順次アミノ酸および（または）ペプチ
ドを連結させるのが好ましい。 例えば、29〜34番のアミノ酸順序からなるＣ末
端フラグメントと23〜28番のアミノ酸からなるペ
プチドフラグメントを縮合させるのがよい。この
Ｃ−末端フラグメントとヘキサペプチド23−28を
縮合させるにはWSCを用いるガイガー変法によ
つて行うのが適する。得られたＣ−末端フラグメ
ント23−34の前に18〜22番のアミノ酸順序からな
るペプチドフラグメントを連結させるのである
が、WSCを用いるガイガー変法により行うのが
適する。得られたＣ−末端フラグメント18−34の
前に順次13〜17番のアミノ酸順序からなるペプチ
ドフラグメント、８〜12番のアミノ酸順序からな
るペプチドフラグメント、１〜７番のアミノ酸順
序からなるペプチドフラグメントを連結させるの
が好ましい。 上記の縮合反応におけるα−アミノ基の保護
基、例えばｔ−ブチルオキシカルボニル基、ｔ−
アミルオキシカルボニル基はトリフルオロ酢酸で
脱離される。α−カルボキシル基の保護基、例え
ばエチルエステルはこれを希薄な水酸化ナトリウ
ム溶液で分解し、またはヒドラチドあるいはトリ
クロロエトキシカルボニルヒドラチドのような保
護ヒドラチドに変え、フエナシルエステル基は酢
酸中Zn粉末で分解し、またベンジルエステル基
は無水弗化水素分解、水素添加分解によつて分解
し、またはヒドラチドに変えることができる。 こうして保護されたＮ末端α−アミノ基、ξ−
アミノ基、側鎖カルボキシル基、グアニジノ基お
よび（または）水酸基を有するテトラトリアコン
タペプチドが得られる。これらの保護基は、好ま
しくは酸分解、例えば無水弗化水素またはトリフ
ルオロメタンスルホン酸による方法によつて一段
階で脱離され、式〔〕の目的化合物が得られ
る。 このようにして得られたペプチド〔〕は、ペ
プチドまたは蛋白質を精製する公知の手段によつ
て分離精製することができる。例えば、セフアデ
ツクスＧ−25、セフアデツクスＧ−50、セフアデ
ツクスLH−20などのゲル過剤を用いるゲル
過、カルボキシメチルセルロース、イオン交換樹
脂などを用いるカラムクロマトグラフイー、高速
液体クロマトグラフイーなどにより行うことがで
きる。 本発明のペプチド〔〕は、その方法の条件に
より塩基またはその塩の形で得られる塩として
は、無機酸塩、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリ
コール酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン
酸などの有機酸との塩である。 本ペプチド〔〕はある種の無機物質または有
機物質を付加して錯体を形成し得る。この錯体と
は添加した時に生成し、ペプチドに持続作用を与
える未だ構成不明の化合物を意味する。このよう
な物質としては、例えば、カルシウム、マグネシ
ウム、アルミニウム、コバルトまたは亜鉛のよう
な金属から誘導される無機化合物、特にこれら金
属のリン酸塩、ピロリン酸塩またはポリリン酸塩
のような僅かに可溶性の塩ならびに水酸化合物、
あるいはアルカリ金属のポリリン酸塩を挙げるこ
とができる。 さらに本発明のペプチド〔〕は、好ましくは
RIA用標識試薬として利用される。例えば、一定
量の放射活性を有する125I含有リン酸緩衝液（PH
7.1）に本発明のペプチド〔〕およびクロラミ
ンＴを加えて撹拌し、次いで重亜硫酸ナトリウム
を加え、さらに少量のヨウ化カリウムおよび血清
アルブミンを加えてクロマトグラフイーを行い、
125Iで標識された分画を集めることにより125Iで
標識された放射活性体が得られる。 次に本発明のペプチド〔〕および125Iで標識
された放射活性体の副甲状腺ホルモン（PTH）
活性について述べる。 ＜125I標識体の調製＞ 2mCiの放射活性を有する125I−NaIを含有する
0.5Mリン酸緩衝液（PH7.1）50μlに各々ｈ−PTH
（１−34）、ｈ−PTH（１−34）NH2、〔H8 le，
N18 le，T34 yr〕−ｈ−PTH（１−34）および〔N8 le′，
N18 le，T34 yr〕−ｈ−PTH（１−34）NH2の2μｇ含有
液10μおよびクロラミンＴ（3.5―mg／ml）含有
液20μlを加えて30秒間撹拌した後、これに重亜硫
酸ナトリウム（4.5mg／ml）含有液50μlを加えて
反応を停止した。これに５％ヒト血清アルブミン
含有0.1N酢酸溶液0.5mlを加えた後、セフアデツ
クスＧ−10のカラム（１×50cm）にチヤージし、
上記酢酸溶液で溶出して、125Iで標識した各被検
品の含有分画を得た。 ＜PTH活性測定法＞ (1) PTHレセプターの調製 SD系雄ラツト（体重200〜250ｇ）を断頭、放
血し、開腹の後、腎を摘出し、その表面皮膜を取
り除き、腎皮質部分を切り取り、氷冷する。以下
の操作はできるだけ低温（０〜４℃）下で行う。
上記の腎皮質部分を0.25Mシユクロースおよび
1mMEDTA含有10mMトリス塩酸塩緩衝液（PH
7.5）（以下Ａ液と称す）中に浸し、テフロンペツ
スルを用いたガラス外套管で腎皮質をその湿重量
（ｇ）の３倍容量（ml）のＡ液を加えてホモゲナ
イズする。このホモジネートを150Xｇ、10分間
遠心分離し、その上清をさらに2200Xｇ、15分間
遠心分離する。上清を捨て、沈澱物の上層の浮濁
色の部分をＡ液に懸濁し、この懸濁液を2200X
ｇ、155分間遠心分離により洗浄し、再び懸濁し
て容器に分注し、−70℃で凍結して−20℃で保存
する。 (2) PTHとPTHレセプターの反応 被検品を2μｇ／mlと10μｇ／mlの濃度になるよ
うにATPMg2mM、MgCl210mM、KCl60mM、
GTP20μM、イソブチルメチルキサンチン1mM、
クレアチンホスフエート8mMおよび牛血清アル
ブミン（BSA）0.2％含有100mMトリス塩酸塩緩
衝液（PH7.5）（以下Ｂ液と称す）に溶かし、これ
を標準品牛PTH（１−84）についても行う これら４つの溶液を50μlづつガラス試験管に分
注し、各々８本づつ用意する。試料は氷水中に保
ち、ATPなど他の物質の分解を抑える。−20℃に
保存したPTHレセプター調製品を室温で解凍し、
Ａ液に予め溶かしておいてクレアチンキナーゼを
加え、さらにＡ液でクレアチンキナーゼ0.1mg／
ml、PTHレセプター調製品蛋白量1.4mg／mlにな
るように調製し、氷冷中で保つ。上記の分注され
た試料溶液を37℃の恒温槽に数分間つけた後に、
上記のPTHレセプター−クレアチンキナーゼ液
を50μlづつ加え、37℃で10分間インキユベートす
る。次いで0.1M酢酸緩衝液（PH4.0）100μlを加
え、直ちに氷水中につけた後、すみやかに試験管
を沸騰水で１分間熱し、反応を停止させる。 (3) 生成Ｃ−AMPの測定 上記の反応停止試料を蒸留水で10〜30倍に希釈
し、2000XG、15分間の遠心分離により除蛋白を
行う。その上清のＣ−AMP量をRIAキツト（ヤ
マサ醤油社製）で測定する。 (4) PTH力価の測定 Ｃ−AMPの測定値をPM／mgPTHレセプター
蛋白／分の単位に換算し、これを反応の値とし、
標準品によつて得られた値に対して被検品を平行
線検定２×２点法を用いて検定する。 (5) PTH活性結果（Ｕ／mg）
【表】
本明細書中に記載の略記号は次の意味を有す
る。 Ser；Ｌ−セリン Val；Ｌ−バリン Glu；Ｌ−グルタミン酸 Ile；Ｌ−イソロイシン Gln；Ｌ−グルタミン Leｕ；Ｌ−ロイシン Nlｅ；Ｌ−ノルロイシン His；Ｌ−ヒスチジン Asn；Ｌ−アスパラギン Gly；グリシン Lys；Ｌ−リジン Arg；Ｌ−アルギニン Trp；Ｌ−トリプトフアン Asp；Ｌ−アスパラギン酸 Tyr；Ｌ−チロシン Boc；ｔ−ブチルオキシカルボニル Aoc；ｔ−アミルオキシカルボニル Ｚ−Cl；ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル Bzl；ベンジル Bzl−Cl2；２，６−ジクロロベンジル Tos；トシル OEt；エチルエステル OBzl；ベンジルエステル ONP；ｐ−ニトロフエニルエステル OPAC；フエナシルエステル TFA；トリフルオロ酢酸 TosOH；ｐ−トルエンスルホン酸 Et3N；トリエチルアミン NMM；Ｎ−メチルモルホリン TBA；ｔ−ブチルアミン DCHA；ジシクロヘキシルアミン NaOH；水酸化ナトリウム THF；テトラヒドロフラン DMF；ジメチルホルムアミド DMSO；ジメチルスルホキシド エーテル；ジエチルエーテル DCC；Ｎ，N′−ジシクロヘキシルカルボジジ
イミド WSC；Ｎ−エチル，N′−３−ジメチルアミノ
プロピル−カルボジイミド HOBt；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール PEE（ ）；PFは保護されたアミノ酸またはペ
プチドフラグメントを意味し、（）内の数字は式
〔〕のアミノ酸の順序を示す。 次に実施例を挙げて本発明の製造例を具体的に
説明する。 尚、実施例で使用した薄層クロマトグラフイー
（TLC）の担体および展開溶媒系ならびにアミノ
酸分析の条件は次の通りである。 ＜TLC＞ 担体；シリカゲルＧ 展開溶媒系； １ クロロホルム−メタノール−酢酸（95：５：
３）、 ２ クロロホルム−メタノール−酢酸（85：15：
５）、 ３ クロロホルム−メタノール−酢酸（80：25：
２）、 ４ クロロホルム−エタノール−酢酸エチル
（５：２：５）、 ５ ヘキサン−酢酸エチル（１：１） 担体；セルロース（メルク社製，DC−
Alufolien） 展開溶媒系； ６ ブタノール−ピリジン−酢酸−水（５：３：
0.1：11）の上層 ＜アミノ酸分析＞ 特記しない限り、試料は6N塩酸で110℃、24〜
48時間封管中で加水分解した。 実施例 １ 〔Nle8，Nle18，Tyr34〕−ｈ−PTH（１−34）
NH2の製造 １） PF（34）；Boc−Tyr（Bzl−Cl2）−NH2
〔〕 Boc−Tyr（Bzl−Cl2）−OH52.84ｇ（0.12M）
とｐ−ニトロフエノール16.69ｇ（0.12M）を乾
燥TH下に溶かし、これに−５℃で冷却下
DCC24.76ｇ（0.12M）の乾燥THF溶液を滴下し
た後、一夜撹拌した。反応後、析出物を去し、
液にNH3ガスを飽和し、５時間撹拌した。沈
澱物が生じるが、DMFを加えて溶解した後、減
圧濃縮した。残渣をエーテルから結晶化した後、
取、乾燥して目的物〔１〕を得た。 収量；44.77ｇ（収率84.9％） 融点；214〜216℃ TLC；Rf1＝0.62 元素分析〔C21H24O4N2Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 57.41 5.51 ６，38 測定値 57.42 5.59 6.51 〔α〕25 D−5.54゜（Ｃ＝１，DMF） ２） PF（33−34）；Boc−Asn−Tyr（Bzl−Cl2）
−NH2〔２〕 化合物〔１〕26.36ｇ（60mM）を塩化メチレ
ンに溶かし、これに氷冷下TFA100mlを加えた
後、室温で30分間撹拌した。反応後、塩化メチレ
ンとTFAを減圧下留去し、残渣をエーテルで結
晶化した後、取、乾燥した。得られた結晶、
Boc−Asn−OH13.93ｇ（60mM）および
HOBt8.1ｇ（60mM）をDMFに溶かし、これに
−15℃で冷却下WSC10.98ml（60mM）を加えた
後、一夜撹拌した。反応後、沈澱物を取し、５
％重曹水（１回）、水（２回）、メタノール（１
回）の順で洗浄し、乾燥して目的物〔２〕の結晶
を得た。母液は減圧下DMFを留去し、得られた
結晶を水、メタノールの順で洗浄し、乾燥して化
合物〔２〕を得、先の目的物〔２〕と合せた。 収量；28.64ｇ（収率86.25％） 融点；240〜242℃ 〔α〕25 D−24.06゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C24H30O6N4Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 54.25 5.46 10.13 測定値 54.46 5.38 10.31 ３） PF（32−34）；Boc−His（Tos）−Asn−
Tyr（Bzl−Cl2）−NH2〔３〕 化合物〔２〕22.14ｇ（40mM）を少量の塩化
メチレンに溶かし、これに氷冷下TFA100mlを加
え、室温で30分間撹拌した後、TFAを減圧下留
去して脱Boc化物を得た。 一方、Boc−His（Tos）−OH・DCHA28.36ｇ
（48mM）を酢酸エチル500mlに懸濁し、1N硫酸
で２回、水で２回の順に洗浄し、無水芒硝で乾燥
した後、減圧下酢酸エチルを留去した。残渣を乾
燥DMFに溶かし、これに前記脱Boc化物の乾
DMF溶液およびNOBt6.48ｇ（48mM）を加え、
次いで、−15℃で冷却下WSC8.78ml（48mM）を
加えた後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧下
DMFを留去し、残渣を５％重曹水で１回、水で
２回の順に洗浄した後、乾燥して粗生成物を得
た。これをメタノール−エーテルから結晶化して
目的物〔３〕を得た。結晶母液を減圧濃縮し、残
渣をメタノール−ヘキサンから結晶化して化合物
〔３〕を得、先の目的物〔３〕と合せた。 収量；28.81ｇ（収率85.1％） 融点；170〜175℃ TLC；Rf3＝0.68、0.42 一部Tosが脱離したものが得られた。 元素分析〔C38H44O9N7Cl2Sとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 53.96 5.24 11.59 測定値 53.03 5.65 12.04 ４） PF（31−34）；Boc−Val−His−Asn−
Tyr（Bzl−Cl2）−NH2〔４〕 化合物〔３〕28.81ｇ（34.06mM）を少量の塩
化メチレンに溶かし、これに氷冷下TFA120mlを
加え、室温で30分撹拌した後、TFAを減圧下留
去した。残渣にエーテルを加え、析出した結晶を
取、乾燥後、DMF140mlに溶解した。この溶液
をNMMで中和し、これにBoc−Val−OH8.14ｇ
（37.47mM）およびHOBt5.06ｇ（37.47mM）を
乾燥DMF60mlに溶解した溶液を加え、次いで−
15℃で冷却下WSC6.86ml（37.47mM）を加え、
室温で一夜撹拌した。反応後、減圧下DMFを留
去し、残渣を５％重曹水で１回、水で３回洗浄
し、乾燥して目的物〔４〕を得た。 収量27.76ｇ（収率103.2％） 融点；164〜166℃ TLC；Rf3＝0.65 〔α〕25 D−28.38゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C36H46O8Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 54.75 5.87 14.19 測定値 53.37 5.87 13.43 ５） PF（30−34）；Boc−Asp（OBzl）−Val−
His−Asn−Tyr（Bzl−Cl2）−NH2〔５〕 化合物〔４〕27.76ｇ（35.15mM）を少量の塩
化メチレンに懸濁し、これに氷冷下TFA110mlを
加え、室温で30分間撹拌した後、TFAを減圧下
留去した。残渣にエーテルを加え、析出した結晶
を取、乾燥後、DMF120mlに溶解した。この溶
液をNMM10mlを加えて中和し、これにBoc−
Asp（OBzl）−OH12.5ｇ（38.67mM）および
HOBt5.22ｇ（38.67mmM）を乾燥DMF80mlに溶
解した溶液を加え、次いで−15℃で冷却下
WSC7.08ml（38.67mM）を加えた後、室温で一
夜撹拌した。反応後、減圧下DMFを留去し、残
渣を５％重曹水で１回、水で２回洗浄した後、メ
タノールに懸濁しエーテテルを加えて再結晶化し
て目的物〔５〕を得た。 収量；31.42ｇ（収率89.8％） 融点；214〜215℃ TLC；Rf3＝0.6 〔α〕25 D−23.28゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C47H57O11N9Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 56.74 5.78 12.67 測定値 56.19 5.79 12.07 ６） PF（29−34）；Boc−Gln−Asp（OBzl）−
Val−His−Asn−Tyr（Bzl−Cl2）−NH2〔６〕 化合物〔５〕31.11ｇ（31.27mM）を塩化メチ
レンに懸濁し、これに氷冷下TFA120mlを加え、
室温で30分間撹拌した後、TFA、塩化メチレン
を減圧下留去した。残渣エーテルを加え、析出し
た結晶を取、乾燥後、乾燥DMF100mlに溶解し
た。この溶液をNMM8mlで中和し、これにBoc
−Gln−ONP12.64ｇ（34.4mM）および
HOBt0.42ｇ（3.13mM）を乾燥DMF100mlに溶
解した溶液を加え、次いで氷冷下NMM3.78mlを
加えた後、一夜撹拌した。反応後、減圧下DMF
を留去し、残渣を５％重曹水で１回、水で２回洗
浄した後、メタノールに懸濁し、エーテルで再結
晶化して目的物〔６〕を得た。 収量；33.19ｇ（収率94.5％） 融点；81〜83℃ TLC；Rf3＝0.47 〔α〕24 D−23.98゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C52H65O13N11Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 55.61 5.83 13.72 測定値 54.81 5.96 13.07 アミノ酸分析；Asp2.19(2)、Glu1.05(1)、Val／
(1)、Tyr0.73(1)、His0.85(1) ７） PF（27−28）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−
OEt〔７〕 Boc−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA97.6ｇ
（0.2M）を酢酸エチル500mlに懸濁し、これを1N
塩酸、水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥した後、
減圧濃縮して油状物を得た。これを乾燥THF500
mlに溶かし、これにＨ−Leu−OEt・HCl39.14ｇ
（0.2M）およびHOBt27.0ｇ（0.2M）を加え、次
いで−15℃に冷却下WSC36.6ml（0.2M）を加え
た後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧THF
を留去した。残残渣を酢酸エチル600mlに溶かし、
５％重曹水、水、1N塩酸、水の順で洗浄し、無
水芒硝で乾燥後、減圧濃縮した。残渣を冷所で放
置して結晶化させた。ヘキサンを加えて取して
目的物〔７〕を得た。 収量；110.62ｇ（収率99.5％） 融点；77〜80℃ TLC；Rf5＝0.48 〔α〕29 D−19.08゜（Ｃ＝１，DMF） ８） PF（26−28）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−Lys
（Ｚ−Cl）−Leu−OEt〔８〕 化合物〔７〕110.62ｇ（0.199M）を塩化メチ
レン50mlに加え、これに氷冷下TFA250mlを加え
た後、室温で１時間撹拌した。反応後、減圧下
TFA、塩化メチレンを留去して油状の脱Boc化
物を得た。 一方、Boc−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA97.1ｇ
（0.199M）を酢酸エチル500mlに懸濁し、1N塩酸
300ml、水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減
圧濃縮して油状物を得る。これを乾燥THF150ml
に溶かし、これに前記の脱Boc化物および
HOBt26.9ｇ（0.199M）を乾燥THF250mlに溶解
した溶液を加え、次いで−15℃に冷却下
WSC36.4ml（0.199M）を滴下した後、室温で一
夜撹拌した。反応後、THFを減圧留去すると寒
天状結晶が析出した。これを酢酸エチルに溶か
し、５％重曹水、水、1N塩酸、水の順に洗浄し、
無水芒硝で乾燥後、減圧濃縮した。生じた沈澱物
をヘキサンで処理した後、取した。これを酢酸
エチル、エーテル、ヘキサンから再結晶して目的
物〔８〕を得た。 収量；156.52ｇ（収率92.2％） 融点；114〜116℃ TLC；Rf2＝0.78 〔α〕28 D−20.72゜（Ｃ＝１，DMF） ９） PF（25−28）；Aoc−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−OEt
る。 Ser；Ｌ−セリン Val；Ｌ−バリン Glu；Ｌ−グルタミン酸 Ile；Ｌ−イソロイシン Gln；Ｌ−グルタミン Leｕ；Ｌ−ロイシン Nlｅ；Ｌ−ノルロイシン His；Ｌ−ヒスチジン Asn；Ｌ−アスパラギン Gly；グリシン Lys；Ｌ−リジン Arg；Ｌ−アルギニン Trp；Ｌ−トリプトフアン Asp；Ｌ−アスパラギン酸 Tyr；Ｌ−チロシン Boc；ｔ−ブチルオキシカルボニル Aoc；ｔ−アミルオキシカルボニル Ｚ−Cl；ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル Bzl；ベンジル Bzl−Cl2；２，６−ジクロロベンジル Tos；トシル OEt；エチルエステル OBzl；ベンジルエステル ONP；ｐ−ニトロフエニルエステル OPAC；フエナシルエステル TFA；トリフルオロ酢酸 TosOH；ｐ−トルエンスルホン酸 Et3N；トリエチルアミン NMM；Ｎ−メチルモルホリン TBA；ｔ−ブチルアミン DCHA；ジシクロヘキシルアミン NaOH；水酸化ナトリウム THF；テトラヒドロフラン DMF；ジメチルホルムアミド DMSO；ジメチルスルホキシド エーテル；ジエチルエーテル DCC；Ｎ，N′−ジシクロヘキシルカルボジジ
イミド WSC；Ｎ−エチル，N′−３−ジメチルアミノ
プロピル−カルボジイミド HOBt；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール PEE（ ）；PFは保護されたアミノ酸またはペ
プチドフラグメントを意味し、（）内の数字は式
〔〕のアミノ酸の順序を示す。 次に実施例を挙げて本発明の製造例を具体的に
説明する。 尚、実施例で使用した薄層クロマトグラフイー
（TLC）の担体および展開溶媒系ならびにアミノ
酸分析の条件は次の通りである。 ＜TLC＞ 担体；シリカゲルＧ 展開溶媒系； １ クロロホルム−メタノール−酢酸（95：５：
３）、 ２ クロロホルム−メタノール−酢酸（85：15：
５）、 ３ クロロホルム−メタノール−酢酸（80：25：
２）、 ４ クロロホルム−エタノール−酢酸エチル
（５：２：５）、 ５ ヘキサン−酢酸エチル（１：１） 担体；セルロース（メルク社製，DC−
Alufolien） 展開溶媒系； ６ ブタノール−ピリジン−酢酸−水（５：３：
0.1：11）の上層 ＜アミノ酸分析＞ 特記しない限り、試料は6N塩酸で110℃、24〜
48時間封管中で加水分解した。 実施例 １ 〔Nle8，Nle18，Tyr34〕−ｈ−PTH（１−34）
NH2の製造 １） PF（34）；Boc−Tyr（Bzl−Cl2）−NH2
〔〕 Boc−Tyr（Bzl−Cl2）−OH52.84ｇ（0.12M）
とｐ−ニトロフエノール16.69ｇ（0.12M）を乾
燥TH下に溶かし、これに−５℃で冷却下
DCC24.76ｇ（0.12M）の乾燥THF溶液を滴下し
た後、一夜撹拌した。反応後、析出物を去し、
液にNH3ガスを飽和し、５時間撹拌した。沈
澱物が生じるが、DMFを加えて溶解した後、減
圧濃縮した。残渣をエーテルから結晶化した後、
取、乾燥して目的物〔１〕を得た。 収量；44.77ｇ（収率84.9％） 融点；214〜216℃ TLC；Rf1＝0.62 元素分析〔C21H24O4N2Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 57.41 5.51 ６，38 測定値 57.42 5.59 6.51 〔α〕25 D−5.54゜（Ｃ＝１，DMF） ２） PF（33−34）；Boc−Asn−Tyr（Bzl−Cl2）
−NH2〔２〕 化合物〔１〕26.36ｇ（60mM）を塩化メチレ
ンに溶かし、これに氷冷下TFA100mlを加えた
後、室温で30分間撹拌した。反応後、塩化メチレ
ンとTFAを減圧下留去し、残渣をエーテルで結
晶化した後、取、乾燥した。得られた結晶、
Boc−Asn−OH13.93ｇ（60mM）および
HOBt8.1ｇ（60mM）をDMFに溶かし、これに
−15℃で冷却下WSC10.98ml（60mM）を加えた
後、一夜撹拌した。反応後、沈澱物を取し、５
％重曹水（１回）、水（２回）、メタノール（１
回）の順で洗浄し、乾燥して目的物〔２〕の結晶
を得た。母液は減圧下DMFを留去し、得られた
結晶を水、メタノールの順で洗浄し、乾燥して化
合物〔２〕を得、先の目的物〔２〕と合せた。 収量；28.64ｇ（収率86.25％） 融点；240〜242℃ 〔α〕25 D−24.06゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C24H30O6N4Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 54.25 5.46 10.13 測定値 54.46 5.38 10.31 ３） PF（32−34）；Boc−His（Tos）−Asn−
Tyr（Bzl−Cl2）−NH2〔３〕 化合物〔２〕22.14ｇ（40mM）を少量の塩化
メチレンに溶かし、これに氷冷下TFA100mlを加
え、室温で30分間撹拌した後、TFAを減圧下留
去して脱Boc化物を得た。 一方、Boc−His（Tos）−OH・DCHA28.36ｇ
（48mM）を酢酸エチル500mlに懸濁し、1N硫酸
で２回、水で２回の順に洗浄し、無水芒硝で乾燥
した後、減圧下酢酸エチルを留去した。残渣を乾
燥DMFに溶かし、これに前記脱Boc化物の乾
DMF溶液およびNOBt6.48ｇ（48mM）を加え、
次いで、−15℃で冷却下WSC8.78ml（48mM）を
加えた後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧下
DMFを留去し、残渣を５％重曹水で１回、水で
２回の順に洗浄した後、乾燥して粗生成物を得
た。これをメタノール−エーテルから結晶化して
目的物〔３〕を得た。結晶母液を減圧濃縮し、残
渣をメタノール−ヘキサンから結晶化して化合物
〔３〕を得、先の目的物〔３〕と合せた。 収量；28.81ｇ（収率85.1％） 融点；170〜175℃ TLC；Rf3＝0.68、0.42 一部Tosが脱離したものが得られた。 元素分析〔C38H44O9N7Cl2Sとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 53.96 5.24 11.59 測定値 53.03 5.65 12.04 ４） PF（31−34）；Boc−Val−His−Asn−
Tyr（Bzl−Cl2）−NH2〔４〕 化合物〔３〕28.81ｇ（34.06mM）を少量の塩
化メチレンに溶かし、これに氷冷下TFA120mlを
加え、室温で30分撹拌した後、TFAを減圧下留
去した。残渣にエーテルを加え、析出した結晶を
取、乾燥後、DMF140mlに溶解した。この溶液
をNMMで中和し、これにBoc−Val−OH8.14ｇ
（37.47mM）およびHOBt5.06ｇ（37.47mM）を
乾燥DMF60mlに溶解した溶液を加え、次いで−
15℃で冷却下WSC6.86ml（37.47mM）を加え、
室温で一夜撹拌した。反応後、減圧下DMFを留
去し、残渣を５％重曹水で１回、水で３回洗浄
し、乾燥して目的物〔４〕を得た。 収量27.76ｇ（収率103.2％） 融点；164〜166℃ TLC；Rf3＝0.65 〔α〕25 D−28.38゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C36H46O8Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 54.75 5.87 14.19 測定値 53.37 5.87 13.43 ５） PF（30−34）；Boc−Asp（OBzl）−Val−
His−Asn−Tyr（Bzl−Cl2）−NH2〔５〕 化合物〔４〕27.76ｇ（35.15mM）を少量の塩
化メチレンに懸濁し、これに氷冷下TFA110mlを
加え、室温で30分間撹拌した後、TFAを減圧下
留去した。残渣にエーテルを加え、析出した結晶
を取、乾燥後、DMF120mlに溶解した。この溶
液をNMM10mlを加えて中和し、これにBoc−
Asp（OBzl）−OH12.5ｇ（38.67mM）および
HOBt5.22ｇ（38.67mmM）を乾燥DMF80mlに溶
解した溶液を加え、次いで−15℃で冷却下
WSC7.08ml（38.67mM）を加えた後、室温で一
夜撹拌した。反応後、減圧下DMFを留去し、残
渣を５％重曹水で１回、水で２回洗浄した後、メ
タノールに懸濁しエーテテルを加えて再結晶化し
て目的物〔５〕を得た。 収量；31.42ｇ（収率89.8％） 融点；214〜215℃ TLC；Rf3＝0.6 〔α〕25 D−23.28゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C47H57O11N9Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 56.74 5.78 12.67 測定値 56.19 5.79 12.07 ６） PF（29−34）；Boc−Gln−Asp（OBzl）−
Val−His−Asn−Tyr（Bzl−Cl2）−NH2〔６〕 化合物〔５〕31.11ｇ（31.27mM）を塩化メチ
レンに懸濁し、これに氷冷下TFA120mlを加え、
室温で30分間撹拌した後、TFA、塩化メチレン
を減圧下留去した。残渣エーテルを加え、析出し
た結晶を取、乾燥後、乾燥DMF100mlに溶解し
た。この溶液をNMM8mlで中和し、これにBoc
−Gln−ONP12.64ｇ（34.4mM）および
HOBt0.42ｇ（3.13mM）を乾燥DMF100mlに溶
解した溶液を加え、次いで氷冷下NMM3.78mlを
加えた後、一夜撹拌した。反応後、減圧下DMF
を留去し、残渣を５％重曹水で１回、水で２回洗
浄した後、メタノールに懸濁し、エーテルで再結
晶化して目的物〔６〕を得た。 収量；33.19ｇ（収率94.5％） 融点；81〜83℃ TLC；Rf3＝0.47 〔α〕24 D−23.98゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C52H65O13N11Cl2として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 55.61 5.83 13.72 測定値 54.81 5.96 13.07 アミノ酸分析；Asp2.19(2)、Glu1.05(1)、Val／
(1)、Tyr0.73(1)、His0.85(1) ７） PF（27−28）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−
OEt〔７〕 Boc−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA97.6ｇ
（0.2M）を酢酸エチル500mlに懸濁し、これを1N
塩酸、水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥した後、
減圧濃縮して油状物を得た。これを乾燥THF500
mlに溶かし、これにＨ−Leu−OEt・HCl39.14ｇ
（0.2M）およびHOBt27.0ｇ（0.2M）を加え、次
いで−15℃に冷却下WSC36.6ml（0.2M）を加え
た後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧THF
を留去した。残残渣を酢酸エチル600mlに溶かし、
５％重曹水、水、1N塩酸、水の順で洗浄し、無
水芒硝で乾燥後、減圧濃縮した。残渣を冷所で放
置して結晶化させた。ヘキサンを加えて取して
目的物〔７〕を得た。 収量；110.62ｇ（収率99.5％） 融点；77〜80℃ TLC；Rf5＝0.48 〔α〕29 D−19.08゜（Ｃ＝１，DMF） ８） PF（26−28）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−Lys
（Ｚ−Cl）−Leu−OEt〔８〕 化合物〔７〕110.62ｇ（0.199M）を塩化メチ
レン50mlに加え、これに氷冷下TFA250mlを加え
た後、室温で１時間撹拌した。反応後、減圧下
TFA、塩化メチレンを留去して油状の脱Boc化
物を得た。 一方、Boc−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA97.1ｇ
（0.199M）を酢酸エチル500mlに懸濁し、1N塩酸
300ml、水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減
圧濃縮して油状物を得る。これを乾燥THF150ml
に溶かし、これに前記の脱Boc化物および
HOBt26.9ｇ（0.199M）を乾燥THF250mlに溶解
した溶液を加え、次いで−15℃に冷却下
WSC36.4ml（0.199M）を滴下した後、室温で一
夜撹拌した。反応後、THFを減圧留去すると寒
天状結晶が析出した。これを酢酸エチルに溶か
し、５％重曹水、水、1N塩酸、水の順に洗浄し、
無水芒硝で乾燥後、減圧濃縮した。生じた沈澱物
をヘキサンで処理した後、取した。これを酢酸
エチル、エーテル、ヘキサンから再結晶して目的
物〔８〕を得た。 収量；156.52ｇ（収率92.2％） 融点；114〜116℃ TLC；Rf2＝0.78 〔α〕28 D−20.72゜（Ｃ＝１，DMF） ９） PF（25−28）；Aoc−Arg（Tos）−Lys（Ｚ
−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−OEt
〔９〕
化合物〔８〕156.5ｇ（184mM）を塩化メチレ
ン50mlに加え、これに氷冷下TFA250mlを加えた
後、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣を乾燥DMF300mlに溶かした後、NMM
で中和した。これにAoc−Arg（Tos）−OH86.0ｇ
（202mM）を乾燥DMF100mlに溶解した溶液およ
びHOBt27.3ｇ（202mM）を加え、次いで−15℃
に冷却下WSC37.0ml（202mM）を滴下した後、
室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧留去
し、残渣を酢酸エチル1lに溶解した。この溶液を
５％重曹水で２回、飽和食塩水、1N塩酸で２回、
飽和食塩水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減
圧濃縮した。残渣にエーテルを加え、取し目的
物
ン50mlに加え、これに氷冷下TFA250mlを加えた
後、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣を乾燥DMF300mlに溶かした後、NMM
で中和した。これにAoc−Arg（Tos）−OH86.0ｇ
（202mM）を乾燥DMF100mlに溶解した溶液およ
びHOBt27.3ｇ（202mM）を加え、次いで−15℃
に冷却下WSC37.0ml（202mM）を滴下した後、
室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧留去
し、残渣を酢酸エチル1lに溶解した。この溶液を
５％重曹水で２回、飽和食塩水、1N塩酸で２回、
飽和食塩水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減
圧濃縮した。残渣にエーテルを加え、取し目的
物
〔９〕を得た。
収量；217.91ｇ（収率100.6％）
TLC；Rf1＝0.09、Rf2＝0.67
融点；75〜78℃
〔α〕D 28−14.02゜（Ｃ＝１，DMF）
10） PF（24−28）；Boc−Leu−Arg（Tos）−
Lys（Ｚ−Cl）−Lys：（Ｚ−Cl）−Leu−OEt〔10〕 化合物
Lys（Ｚ−Cl）−Lys：（Ｚ−Cl）−Leu−OEt〔10〕 化合物
〔９〕217.9ｇ（0.185M）に塩化メチレ
ン100mlおよびTFA250mlを加え、室温で80分間
撹権拌した後、減圧下塩化メチレンおよびTFA
を留去した。得られた油状物を乾燥DMF300mlに
溶かし、NMMを加えて中和した。この溶液に
Boc−Leu−OH・H2O50.9ｇ（0.204M）および
HOBt27.6ｇ（0.204M）を乾燥DMF100mlに溶解
した溶液を加え次いで−15℃で冷却下WSC37.3
ml（0.204M）を滴下した後、室温で一夜撹拌し
た。反応後、減圧下DMFを留去し、残渣を水に
加え、析出した生成物を取した。メタノール−
エーテル−ヘキサンから２回結晶化して目的物
〔10〕を得た。 収量；213.63ｇ（収率90.5％） 融点；157〜160℃ TLC；Rf1＝0.28、Rf2＝0.77 〔α〕27 D−18.68゜（Ｃ＝１，DMF） 11） PF（23−28）；Boc−TrP−Leu−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys：（Ｚ−Cl）−Leu−
OEt〔11〕 化合物〔10〕153.17ｇ（0.12M）に塩化メチレ
ン100mlおよびTFFA250mlを加え、室温で80分間
撹拌した後、減圧下塩化メチレンおよびTFAを
留去した。残渣を乾燥DMF250mlに溶かし、
NMMでPH７に中和した。この溶液にHOBt17.84
ｇ（0.132M）とBoc−Trp−OH40.17ｇ
（0.132M）を加え、次いで−15℃で冷却下、
WSC24.2ml（0.1321M）を滴下した後、室温で一
夜撹拌した。反応後、減圧後、減圧下DMFを留
去し、残渣を５％重曹水５に注ぎ、析出した生
成物を取した。これを水に懸濁して取した
後、メタノール−エーテルから２回再結晶して目
的物〔11〕を得た。 収量；142.57ｇ（収率81.2％） 融点；168〜170℃ TLC；Rf1＝0.31、Rf2＝0.82 〔α〕28 D−18.64゜（Ｃ＝１，DMF） 12） PF（23−28）；Boc−Trp−Leu−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−
OH〔12〕 化合物〔11〕140.64ｇ（96.16mM）を熱エタノ
ール1200mlに溶解し、冷却後、少量の析出物を
別した後、1N−NaOH水溶液288ml（３倍Ｍ）を
加え、室温で１時間撹拌した。反応液に1N−
TosOH水溶液192ml（22倍Ｍ）を加えた後、別
し、エタノールを減圧下留去した。濃縮液に1N
−TosOH96ml（等Ｍ）を加え、次いで水２を
加えた後、生じた沈澱物を取した。水で２回洗
浄した後、乾燥して目的物〔12〕を得た。 収量；142.98ｇ（収率101.1％） TLC；Rf2＝0.71 融点；125〜130℃ 〔α〕27 D−37.24゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C69H94O15N12SCl2・2H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 56.35 6.72 11.43 測定値 56.03 6.62 11.85 アミノ酸分析；Leu2(2)、Lys2.08(2)、Arg1.10
(1)、Trp0.83(1) 13） PF（23−34）；Boc−Trp−Leu−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−
Gln−Asp（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr（Bzl
−Cl2）−NH2〔13〕 化合物〔６〕1.68ｇ（1.5mM）を少量の塩化メ
チレンに懸濁し、次いで氷冷下TFA7mlを加えた
後、室温で30分間撹拌した。反応後、減圧下
TFAを留去し、残渣にエーテルを加え、析出し
た結晶を取、乾燥した。この結晶を乾燥
DMF30mlに溶かし、少量のNMMで中和した。
この溶液に化合物〔12〕2.43ｇ（1.65mM）、
HOB；0.22ｇ（1.65mM）および乾燥DMF20ml
を加え、次いで−15℃で冷却下WSC0.3ml（1.1倍
Ｍ）を加えた後、室温で一夜撹拌した。反応後、
減圧下DMFを留去し、残渣を５％重曹水で１回、
水で２回洗浄した後、メタノールに懸濁し、エー
テルを加え、取、乾燥して目的物〔13〕を得
た。 収量；3.62ｇ（収率99.1％） 融点；260〜270℃ 〔α〕25 D−4.66゜（Ｃ＝0.3，DMF） アミノ酸分析；Asp1.94(2)、GGlu0.96(1)、
Val0.71(1)、Leu2.00(2)、Tyr0.98(1)、Lys2.09(2)、
His0.58(1)、rg0.91(1)、Trp0.78(1) 114） PF（22）；Boc−Glu（OBzl）−OPAC〔14〕 Boc−Glu（OBzl）−OH128.2ｇ（0.38M）を
DMF600mlに溶かし、これに氷冷下フエナシル
ブロマイド113.5ｇ（0.57M）を加えた後、
Et3N79.3ml（0.57M）を滴下した。滴下後、30
℃で４時間撹拌し、次いで酢酸カリウム30ｇを
加え、45分間撹拌した後、減圧下DMFを留去
した。残渣に酢酸エチル600mlを加え、５％重
曹水で２回、水で２回洗浄し、酢酸エチル層を
無水芒硝で乾燥後、減圧下溶媒を留去すると、
結晶が析出した、これにヘキサンを加え、取
して目的物〔14〕を得た。 収量；156.19ｇ（収率90.2％） TLC；Rf5＝0.73 15） PF（21−22）；Boc−Val−Glu（OBzl）−
OPAC〔15〕 化合物〔14〕147.88ｇ（0.325M）に塩化メチ
レン50mlを加え、これに氷冷下TFA300mlを加
え、室温で１時間撹拌した後、減圧下で塩化メチ
レンおよびTFAを留去した。残渣にエーテルを
加え、析出した結晶を取、乾燥した。この結晶
を乾燥DMF300mlに溶解し、NMMでPH７に中和
した。この溶液にHHOBt35.14ｇ（0.26M）およ
びBoc−Val−OH56.49ｇ（0.26M）を加え、−15
℃で冷却下WSC47.6ml（0.26M）を滴下した後、
室温で２日間撹拌した。反応後、減圧下でDMF
を留去し、残渣をクロロホルム500mlに溶かし、
５％重曹水、水、1N塩酸、水の順で洗浄した。
クロロホルム層を無水芒硝で乾燥し、減圧下溶媒
を留去し、得られた結晶にヘキサンを加えて取
した後、酢酸エチル−エーテルより再結晶化して
目的物〔15〕を得た。 収量；106.97ｇ（収率74.2％） TLC；Rf3＝0.63 融点；139〜141℃ 〔α〕29 D−18.92゜（Ｃ＝１，DMF） 16） PF（20−22）；Aoc−Ars（Tos）−Val−
Glu（OBzl）−OPAC〔16〕 化合物〔15〕99.83ｇ（0.18M）に塩化メチレ
ン50mlを加え、これに氷冷下TFA200mlを加え、
室温で１時間撹拌した後、減圧下で塩化メチレン
およびTFAを留去した。残渣にヘキサンを加え
て処理し、傾斜法によりヘキサンを除去した後、
エーテルを加えて処理した後、減圧下でエーテル
を留去した。得られた油状物を乾燥DMF200mlに
溶かし、NMMで中和した。この溶液に
HOBt24.33ｇ（0.18M）、Aoc−Arg（Tos）−
OH76.60ｇ（0.18M）および乾燥DMF200mlを加
え、これに−15℃で冷却下WSC32.94ml（0.18M）
を滴下した後、室温で一夜撹拌した。反応後、減
圧下DMFを留去し、残渣を酢酸エチル１に溶
解した。この溶液を５％重曹水、水、1N塩酸、
水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減圧下酢酸
エチルを留去した。得られた油状物を酢酸エチル
−エーテルより結晶化し、得られた結晶をエーテ
ルに懸濁して取する工程を３回行つて目的物
〔16〕を得た。 収量；149.75ｇ（収率94.6％） TLC；Rf1＝0.74、Rf4＝0.81 融点；110〜114℃ 〔α〕29 D−11.5゜（Ｃ＝１，DMF） 17） PF（19−22）；Boc−Glu（OBzl）−Arg
（Tos）−Val−Glu（OBzl）−OPAC〔17〕 化合物〔16〕149.40ｇ（0.170M）に塩化メチ
レン50mlを加え、これに氷冷下TFA300mlを加
え、室温で１時間撹拌した後、減圧下で塩化メチ
レンおよびTFAを留去した。残渣にエーテルを
加えて処理し、減圧下でエーテルを留去した後、
得られた油状物を乾燥DMF200mlに溶かした。こ
れにHOBt25.27ｇ（0.187M）およびBoc−Glu
（OBzl）−OH63.09ｇ（0.187M）を加え、乾燥
DMF100mlを追加し、−15℃で冷却下WSC34.22ml
（0.187M）を加え、室温で一夜撹拌した。反応
後、溶媒を留去し、残渣を水6l中に投ぎ込み、析
出した結晶を取した。この結晶をメタノールお
よびエーテルを加えて懸濁してて取し、熱メタ
ノールに溶かして、冷時に析出化して取し、さ
らにメタノールに懸濁して取する工程を３回行
つて化合物〔17〕を得た。結晶母液から溶媒を留
去し、メタノール−エーテルから結晶化して目的
物〔25.02ｇを得た。 収量；141.44ｇ（収率76.7％） TLC；Rf1＝0.56、Rf4＝0.82 融点；119〜121℃ 〔α〕29 D−129゜（Ｃ＝１，DMF） 18） PF（18−22）；Boc−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Tos）−Val.Glu（OBzl）−OPAC〔18〕 化合物〔17〕6.51ｇ（6mM）氷冷下塩化メチ
レンおよびTFA24mlを加え、室温で40分間撹拌
した後、減圧下塩化メチレンおよびTFAを留去
した。残渣にエーテルを加えて結晶化し、乾燥し
た。この結晶を乾燥DMFに溶かし、氷冷下
NMMでPH７に中和した。この溶液にBoc−Nle
−OH1.67ｇ（7.2mM）およびHOBt0.97ｇ
（7.2mM）を乾燥DMF40mlに溶解した溶液を加
え、−15℃に冷却下WSC1.3ml（7.2mM）を加え
た後、一夜撹拌した。反応後、減圧下DMFを留
去し、残渣に水を加え、生じた沈澱物を取し、
５％重曹水、水（３回）、1N塩酸水（３回）、メ
タノールの順で洗浄した。次いでメタノール−エ
ーテルから再沈澱を行ない、目的物〔18〕を得
た。 収量；5.61ｇ（収率78％） TLC；Rf1＝0.56 19） PF（18−22）；Boc−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Toc）−Val−Glu（OBzl）−OH〔19〕 化合物〔18〕5.03ｇ（4.2mM）を酢酸30mlに溶
かし、これに亜鉛末８ｇを加え、室温で5.5時間
撹拌した。反応後、亜鉛末を去し、減圧下酢酸
を留去した。析出した結晶にエーテルを加えて
取して目的物〔19〕を得た。 収量；4.42ｇ TLC；Rf1＝0.18、Rf2＝0.67 融点；210℃（分解） アミノ酸分析；Nle1.01(1)、Glu2.05(2)、
Arg0.98(1)、Val／(1) 20） PF（18−34）；Boc−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Tos）−Val−Glu（OBzl）−Trp−Len−
Arg（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu
−Gln−Asp（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr
（Bzl−Cl2）−NH2〔20〕 化合物〔13〕8.9ｇ（3.5mM）にスカトール0.5
ｇ（3.5mM）、ジメチルスルフイド25ml、エタン
ジチオール2.5mlおよびTFA25mlを加え、０℃で
10分間、室温で45分間撹拌した後、反応液を減圧
濃縮した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を取、乾燥した後、乾燥DMF100mlに溶かし、
NMMでPH７に中和した。この溶液にHOBt0.54
ｇ（4mM）および化合物〔19〕4.3ｇ（4mM）
を加え、−15℃に冷却下WSC0.73mlを加えた後、
室温で２日間撹拌した。反応後、減圧下DMFを
留去し、残渣に５％重曹水を加え、生じた沈澱物
を取した後、水で充分に洗浄した。この生成物
をエタノールに溶かし、エーテルを加えて沈澱化
させる工程を２回行つて目的物〔20〕を得た。 収量；11.12ｇ（収率94％） TLC；Rf3＝0.72 融点；250℃（分解） 〔α〕28 D−4.73゜（Ｃ＝0.53、DMF） アミノ酸分析；Asp1.98(2)、Glu3.04(3)、
Val1.69(2)、Len2(2)、Tyr1.07(1)、Lys1.93(2)、
His0.59(1)、Arg1.97(2)、Trp0.35(1)、Nle1.07(1) 21） PF（17）；Boc−Ser（Bzl）−OPAC〔21〕 Boc−Ser（Bzl）−OH88.6ｇ（0.3M）を
DMF400mlに溶解し、これにフエナシルブロマイ
ド89.6ｇ（0.45M）を加え、これに氷冷下
Et3N62.6ml（0.45M）を滴下した後、30℃で3.5
時間撹拌した。次いでこの反応液に酢酸カリウム
22.1ｇ（0.225M）を加え、室温で１時間間撹拌
した。反応後、減圧下DMFを留去し、残渣を酢
酸エチル500mlに溶かし、５％重曹水、水の順で
洗浄した。酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥した
後、減圧下溶媒を留去した。残渣を冷蔵庫に放置
して結晶化させ、ヘキサンをを加えて取して目
的物〔21〕を得た。 収量；122.97ｇ（収率99.1％） TLC；Rf5＝0.82 〔α〕29.5 D−11.88゜（Ｃ＝1.0，DMF） 融点；45〜47℃ 22） PF（16−17）；Boc−Asn−Ser（Bzl）−
OPAC〔22〕 化合物〔21〕119.9ｇ（0.29M）に塩化メチレ
ン50mlを加え、これに氷冷下TFA250mlを加えた
後、室温で１時間撹拌した。反応後、減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、析出した結晶を
取、乾燥した。この結晶を乾燥DMF400mlに溶か
し、NMMでPH７に中和した。この溶液に
HOBt31.35ｇ（0.232M）およびBoc−Asn−
OH53.88g（0.232M）を加え、これに−15℃に冷
却下WSC42.46ml（0.232M）を滴下した後、室温
で一夜撹拌した。反応後、減圧下DMFを留去し、
残渣を酢酸エチル500mlに溶かし、５％重曹水で
洗浄した。分液の際、結晶が析出したので、その
結晶を取して水洗し、次いでエーテルで洗浄し
て目的物〔22〕の結晶41.79ｇを得た。液の
酢酸エチル層は、これを減圧濃縮し、残渣の油状
物を酢酸エチル−エーテルより結晶して目的物
〔22〕の結晶6.22ｇを得た。 収量；48.01ｇ（収率39.2％） TLC；Rf2＝0.61、Rf4＝0.62 融点；174〜176℃ 〔α〕29.5 D−5.54゜（Ｃ＝1.0，DMF） アミノ酸分析；Asp1.22(1)、Ser1.00(1) 23） PF（15〜17）；Boc−Leu−Asu−Ser（Bzl）
−OPAC〔23〕 化合物〔22〕80.91ｇ（0.153M）に塩化メチレ
ン50mlを加え、次いで氷冷下TFA150mlを加えた
後、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、生じた油状物を傾斜
法により分離した後、乾燥DMF150mlに溶かし、
NMMでPH７に中和した。この溶液HOBt22.7ｇ
（0.168M）、Boc−Leu−OH・H2O41.9ｇ
（0.168M）およびDMF100mlを加え、−15℃に冷
却下WSC30.7ml（0.168M）を滴下した後、室温
で撹拌した反応液がゲル化したので、氷室に３日
間静置した後、水を加え、生じた沈澱物を取
し、５％重曹水、水の順で洗浄、乾燥して目的物
〔23〕を得た。 収量；88.52ｇ（収率90.3％） TLC；Rf2＝0.80、Rf3＝0.88 融点；192〜193℃ 元素分析〔C33H44O9N4として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 61.86 6.92 8.75 測定値 61.81 7.05 8.56 24） PF（14−17）；Boc−His（Tos）−Leu−
Asn−Ser（Bzl）−OPAC〔24〕 化合物〔28〕87.55ｇ（0.137M）に塩化メチレ
ン100mlを加え、次いで氷冷下TFA200mlを加え
た後、室温で70分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF200mlに溶かし、
NMMでPH７に中和して脱Boc溶液を得た。 一方、Boc−His（Tos）−OH・DCHA89.2ｇ
（0.151M）を酢酸エチル１に懸濁し、1N硫酸
500mlで洗浄し、析出した結晶を別した。酢酸
エチル層を水洗し、無水芒硝で乾燥した後、減圧
下溶媒を留去した。得られた油状物を乾燥
DMF150mlに溶解した溶液とHOBt20.4ｇ
（0.151M）を前記の脱Boc溶液に加え、これに−
15℃に冷却下WSC27.6ml（0.151M）を滴下した
後、室温で３日間撹拌した。反応後、減圧下溶媒
を留去し、残渣を水に加え、生じた沈澱物を取
した後、５％重曹水、水の順で洗浄し、乾燥して
目的物〔24〕を得た。 収量；108.63ｇ（収率85.51％） TLC；Rf2＝0.20、0.79 Rf＝0.55、0.87 一部Tosが脱離したものが得られた。 融点；154〜156℃ 〔α〕29.5 D−18.58゜（Ｃ＝1.0，DMF） 25） PF（13〜17）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−His−
Leu−Asn−Ser（Bzl）−OPAC〔25〕 化合物〔24〕107.96ｇ（0.1161M）に塩化メチ
レン100mlを加え、次いで氷冷下TFA200mlを加
えた後、室温で70分間撹拌した。反応液を減圧濃
縮し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取、乾燥後、乾燥DMF200mlに溶かし、NMMで
PH７に中和して脱Boc溶液を得た。 一方、Boc−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA62.46ｇ
（0.128M）を酢酸エチル600mlに懸濁し、1N塩
酸、水の順に洗浄し、酢酸エチル層を無水芒硝で
乾燥後、減圧下溶媒を留去した。得られた油状物
とHOBt17.30ｇ（0.128M）を乾燥DMF100mlに
溶かした溶液を前記の脱Boc溶液に加え、これに
−15℃に冷却下WSC24.42ml（0.128M）を滴下し
た後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧下溶媒
を留去し残渣を３％重曹水５中に加え、析出し
た結晶を充分に水洗した後、乾燥した。この結果
をメタノールに溶かし、エーテルを加えて沈澱化
させた。得られた沈澱物を酢酸エチルに懸濁し、
取する工程を３回行つて目的物〔25〕を得た。 収量；114.42ｇ（収率91.8％） TLC；Rf2＝0.34、Rf3＝0.68 融点；200〜202℃ 〔α〕28 D−26.94゜（Ｃ＝1.0，DMF） 26） PF（13−17）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−His−
Leu−Asn−Ser（Bzl）−OH〔26〕 化合物〔25〕86.0ｇ（80mM）を酢酸500mlに
溶かし、これに亜鉛末150ｇを加え、室温で５時
間撹拌した後、反応液を過して亜鉛末を除去し
た。反応液を減圧濃縮し、残渣にエーテルを加
え、析出した結晶を取して目的物〔26〕を得
た。 収量；84.70ｇ（収率95.2％） TLC；Rf2＝0.47 融点；240〜250℃ 〔α〕30 D−19.16゜（Ｃ＝1.0，DMF） 元素分析〔C45H52O12N9Cl・2CH3COOH・
2H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 53.76 6.63 11.52 測定値 52.83 6.36 11.35 アミノ酸分析；Asp1.01(1)、Ser0.83(1)、Leu／
(1)、Lys0.93(1)、His0.97(1) 27） PF（13−34）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−His−
Leu−Asn−Ser（Bzl）−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Tos）−Val−Glu（OBzl）−TrP−Leu−
Arg（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu
−Gln−Asp（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr
（Bzl−Cl2）−NH2〔27〕 化合物〔20〕10.77ｇ（3.2mM）にスカトール
0.46ｇ（3.2mM）、ジメチルスルフイド25ml、エ
タンジチオール2.5mlおよびTFA25mlを加え、０
℃で10分間、室温で60分間撹拌した後、反応液を
減圧濃縮した。残渣にエーテルを加え、生じた沈
澱物を取、乾燥した後、乾燥DMF100mlに溶か
し、NMMでPH７に中和した。次いでこれに
HOBt0.51ｇ（3.8mM）および化合物〔26〕4.23
ｇ（3.8mM）を加え、−15℃に冷却下WSC0.70ml
を加えた後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧
下DMFを留去し、残渣に水を加え、生じた沈澱
物を取し、水洗、乾燥して目的物〔27〕を得
た。 収量；13.60ｇ（収率100％） 融点；138〜160.5℃ 〔α〕28 D−19.6゜（Ｃ＝0.56，DMF） アミノ酸分析；Asp2.96(3)、Ser0.62(1)、
Glu3.02(3)、Val1.72(2)、Leu3(3)、Tyr1.06(1)、
Lys3.01(3)、His1.43(2)、Arg1.98(2)、Trp0.60(1)、
Nle1.06(1)、 28） PF（11−12）；Boc−Leu−Gly−OBzl〔28〕 Boc−Leu−OH・H2O4.99ｇ（20mM）を乾燥
THF30mlに溶かし、これに乾燥ベンゼン50mlを
加え、溶媒を共弗により留去した。得られた油状
物を乾燥THF70mlに溶かし、これにＨ−Gly−
OBzl・TosOH（20mM）およびHOBt2.7ｇ
（20mM）を加え、次いで一５℃に冷却下WSC5
mlを加えた後、室温で一夜撹拌した。反応後、減
圧下溶媒を留去し、残渣を酢酸エチル100mlに溶
かした後、1N塩酸で２回、５％重曹水で２回、
水で２回の順で洗浄した。酢酸エチル層を無水芒
硝で乾燥した後、減圧濃縮して油状の目的物
〔28〕を得た。 29） PF（10−12）；Boc−Asn−Leu−Gly−
OBzl〔29〕 前記で得た油状物〔28〕に−15℃に冷却下
4.39N塩化水素／ジオキサン溶液40mlを加え、90
分間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣にエーテル
を加え、生じた沈澱物を取、乾燥した後、乾燥
DMF30mlに溶かした。これに−５℃に冷却下
Et3Nを加えてPH７に調節し、次いでHOBt0.3ｇ
（2.2mM）およびBoc−Asn−ONP7.77ｇ
（22mM）を加え、室温で３日間撹拌した。反応
液に水を加え、析出した沈澱物をクロロホルム
200mlで抽出した。クロロホルム層を1N塩酸、５
％重曹水、水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥後、
減圧下溶媒を留去した、残渣を酢酸エチル−ヘキ
サンから結晶化して目的物〔29〕を得た。 収量；8.0ｇ（収率73.8％） 融点；152−156℃ 〔α〕24 D−36.1゜（Ｃ＝1.0，DMF） 30） PF（９−12）；Boc−His−Asn−Leu−
Gly−OBzl〔30〕 化合物〔29〕7.36ｇ（15.5mM）に塩化メチレ
ン５mlを加え、次いで氷冷下TFA32mlを加えた
後、室温で60分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、析出した沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF40mlに溶かし、
NMMでPH７に調節して脱Boc溶液を得た。 一方、Boc−His（Tos）−OH・DCHA10.99ｇ
（18.6mM）に酢酸エチル150mlおよび0.5N硫酸90
mlを加えて振とうし、酢酸エチル層を水で３回洗
浄し、無水芒硝で乾燥後、酢酸エチルを減圧下留
去して油状物を得た。この油状物とHOBt2.5ｇ
（18.6mM）を乾燥DMF60mlに溶かし、その溶液
を前記の脱Boc溶液に加え、次いで−15℃に冷却
下WSC3.4ml（18.6mM）を加えた後、室温で一
夜撹拌した。反応後、減圧下溶媒を留去し、残渣
を酢酸エチルに溶かし、５％重曹水で３回、水で
２回洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減圧下溶媒を留
去した。残渣にエーテルを加え、析出した結晶を
取した。この結晶はHisのTosが一部脱離され
ているが、完全に脱離するために、この結晶を
DMF100mlに溶解し、これにHOBt7.05ｇを加え、
室温で３日間撹拌した。反応後、減圧下DMFを
留去し、残渣を酢酸エチルに溶かし、５％重曹水
で２回、水の順に洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減
圧下溶媒を留去した。析出した結晶にエーテルを
加えて取して目的物〔30〕を得た。 収量；7.32ｇ（収率74.8％） TLC；Rf2＝0.1 31） PF（８−12）；Boc−Nle−His−Asn−
Leu−Gly−OBzl〔31〕 化合物〔30〕7.32ｇ（11.6mM）に塩化メチレ
ン５mlを加え、次いで氷冷下TFA30mlを加えた
後、室温で40分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、析出した沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF40mlに溶かし、
NMMでPH７に調節した。これにHOBt1.9ｇ
（13.92mM）およびBoc−Hle−OH3.23ｇ
（13.92mM）を乾燥DMFに溶かした溶液を加え、
−15℃に冷却下WSC2.5ml（13.92mM）を加えた
後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧下溶媒を
留去し、残渣に水を加え、析出した沈澱物を取
し、５％重曹水で２回、1N塩酸で２回、水で３
回の順で洗浄し、乾燥して目的物〔31〕を得た。 収量；3.70ｇ（収率42.9％） TLC；Rf2＝0.20 32） PF（８−12）；Boc−Nle−His−Asn−
Leu−Gly−OH〔32〕 化合物〔31〕2.8ｇ（3.8mM）をエタノール100
mlに溶かし、これに10％Pd／C300mgを加え、室
温で水素ガスを３時間通じた。反応液中に不溶物
が析出したので、過し、DMFで洗浄した後、
液を減圧濃縮した。残渣にエタノール−エーテ
ルを加えて沈澱物を取、乾燥して目的物〔32〕
を得た。 収量；1.76ｇ（収率71.1％） 融点；112.5℃ TLC；Rf2＝0.05 アミノ酸分析；Asp0.96(1)、Gly0.98(1)、Leu／
(1)、His0.95(1)、Nle0.94(1) 33） PF（８−34）；Boc−Nle−His−Asn−
Leu−Gly−Lys（Ｚ−Cl）−His−Leu−Asn−
Ser（Bzl）−Nle−Glu（OBzl）−Arg（Tos）−
Val−Glu（OBzl）−TrP−Leu−−Arg（Tos）−
Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−Gln−AsP
（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr（Bzl−Cl2）−
NH2〔33〕 化合物〔27〕10.60ｇ（2.5mM）のスカトール
0.33ｇ（2.5mM）、ジメチルスルフイド25ml、エ
タンジチオール2.5mlおよびTFA25mlを加え、０
℃で10分、室温で50分間撹拌した後、反応液を減
圧濃縮した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物を取、乾燥した後、乾燥DMF100mlに溶か
し、これに氷冷下NMMを加えてPH７に調節し
た。この溶液にHOBt0.36ｇ（2.7mM）および化
合物〔32〕1.76ｇ（2.7mM）を加え、−15℃に冷
却下WSC0.5mlを加えた後、室温で一夜撹拌し
た。析出した沈澱物を取し、水で洗浄、乾燥し
た後、エタノール−エーテルから再沈澱して目的
物〔33〕を得た。 収量；10.94ｇへ（収率91.7％） 融点；140.5〜162℃ 〔α〕28 D−1.94゜（Ｃ＝0.52，DMF） アミノ酸分析；Asp3.87(4)、Ser0.76(1)、
Glu3.34(3)、Gly0.77(1)、Val1.84(2)、Leu4(4)、
Tyr1.04(1)、Lys3.28(3)、His2.37(3)、Ars2.14(2)、
Trp0.73(1)、Nle2.07(2) 34）） PF(7)；Boc−Leu−OPAC〔34〕Boc−
Leu−OH・H2O15.0ｇ（60mM）とフエナシ
ルブロマイド17.9ｇ（90mM）をDMF100mlに
溶かし、これに氷冷下Et3N12.5ml（90mM）を
滴下した後、30℃で２時間撹拌した。次いで酢
酸カリウム4.42ｇ（45mM）を加え、室温で45
分間撹拌した後、減圧下DMFを留去した。残
渣を酢酸エチルに溶かし、５％重曹水で２回、
水で２回洗浄し、酢酸エチル層を無水芒硝で乾
燥後、減圧下溶媒を留去した。残渣を氷室に放
置し、析出した結晶を乾燥して目的物〔34〕を
得た。 収量；21.23ｇ（収率100％） TLC；Rf1＝0.89 35） PF（６−７）；Boc−Gln−Leu−OPAC
（35〕 化合物〔34〕20.96ｇ（60mM）に塩化メチレ
ン20mlを加え、次いで氷冷下TFA80mlを加え、
室温で40分間撹拌した後、反応液を減圧濃縮し
た。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取；乾燥した後、乾燥DMF70mlに溶かし、氷冷
下NMMを加えてPH７に調節した。この溶液に
HOBt8.1ｇ（60mM）およびBoc−Gln−
OH14.78ｇ（60mM）を乾燥DMF90mlに溶かし
た溶液を加え、−15℃に冷却下WSC10.9ml
（60mM）を滴下した後、室温で一夜撹拌した。
反応後、DMFを減圧留去し、残渣を酢酸エチル
に溶かした後、５％重曹水で２回、1N塩酸で２
回、水で３回の順で洗浄した。酢酸エチル層を無
水芒硝で乾燥し、減圧下溶媒を留去した後、析出
した結晶にヘキサンを加えて取、乾燥して目的
物（35〕を得た。 収量；17.25ｇ（収率60.2％） TLC；Rf1＝0.38 36） PF（５−７）；Boc−Ile−Gln−Leu−
OPAC〔36〕 化合物〔35〕17.19ｇ（36mM）に塩化メチレ
ン10mlを加え、次いで氷冷下TFA70mlを加え、
室温で60分間撹拌した後、反応液を減圧濃縮し
た。残渣を減圧乾燥後、乾燥DMF130mlに溶か
し、氷冷下NMMでPH７に調節した。この溶液に
HOBt5.3ｇ（39.6mM）およびBoc−Ile−OH・
１／２H2O9.5ｇ（39.6mM）を乾燥DMF70mlに溶か
した溶液を加え、−15℃に冷却下WSC7.2ml
（39.6mM）を滴下した後、室温で一夜撹拌した。
反応後、DMFを減圧留去し、残渣に５％重曹水
を加え、生じた沈澱物を取した後、５％重曹
水、1N塩酸で２回、水で３回の順で洗浄し、乾
燥した。この沈澱物をエタノール−エーテルから
再沈澱化して目的物〔36〕を得た。 収量；16.35ｇ（収率76.9％） TLC；Rf1＝0.41、Rf2＝0.68 37） PF（４−７）；Boc−Glu（OBzl）−Ile−Gln
−Leu−OPAC〔37〕 化合物〔36〕16.24ｇ（27.5mM）を塩化メチレ
ン10mlを加え、次いで氷冷下TFA70mlを加え、
次いで氷冷下TFA70mlを加え、室温で60分間撹
拌した後、反応液を減圧濃縮した。残渣にエーテ
ルを加え、生じた沈澱物を取、乾燥した後、乾
燥DMF100mlに溶かし、次いで氷冷下NMMを加
えてPH７に調節した。この溶液にHOBt4.09ｇ
（30.25mM）およびBoc−Glu（OBzl）−OH10.2ｇ
（30.25mM）を乾燥DMF50mlに溶かした溶液を
加え、−15℃に冷却下WSC5.5mlを滴下した後、
室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧留去
し、残渣に５％重曹水を加えて生じた沈澱物を
取した後、５％重曹水、1N塩酸で２回、水で４
回の順で洗浄、乾燥した。エタノール−エーテル
から再沈澱して目的物〔37〕を得た。 収量；21.68ｇ（収率97.1％） TLC；Rf＝0.52 38） PF（３−７）；Boc−Ser（Bzl）−Glu
（OBzl）−Ile−Gln−Leu−OPAC〔38〕 化合物〔37〕21.46ｇ（26.5mM）に塩化メチレ
ン10mlを加え、次いで氷冷下TFA90mlを加え、
室温で１時間撹拌した後、反応液を減圧濃縮し
た。残渣にエーテルを加えて、生じた沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF150mlに溶解し、次い
で氷冷下NMMを加えてPH７に調節した。この溶
液にHOBt3.9ｇ（29.15mM）およびBoc−Ser
（Bzl）−OH8.6ｇ（29.15mM）を乾燥DMF50ml
に溶かした溶液を加え、−15℃に冷却下WSC5.3
ml（29.15mM）を加えた後、室温で一夜撹拌し
た。反応後、DMFを減圧留去し、残渣に５％重
曹水を加え、析出した沈澱物を取した。これを
５％重曹水、1N塩酸で２回、水で４回の順で洗
浄した後、エーテルに懸濁、取して目的物
〔38〕を得た。 収量；24.8ｇ（収率94.7％） TLC；Rf1＝0.53 39） PF（２−７）；Boc−Val−Ser（Bzl）−Glu
（OBzl）−Ile−Gln−Leu−OPAC〔39〕 化合物〔38〕24.68ｇ（25mM）に塩化メチレ
ン20mlを加え、次いで氷冷TFA100mlを加えた
後、室温で50分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF120mlに溶かし、次い
で氷冷下NMMを加えてPH７に調節した。この溶
液にHOBt4.05ｇ（30mM）およびBoc−Val−
OH6.5ｇ（30mM）を乾燥DMF80mlに溶かした
溶液を加え、−15℃に冷却下WSC5.5ml（30mM）
を滴下した後、室温で一夜撹拌した。反応液に沈
澱物が析出したので、水を加えて取し、５％重
曹水で２回、1N塩酸で２回、水で４回の順で洗
浄した後、エーテルに懸濁、取して目的物
〔39〕を得た。 収量；26.32ｇ（収率96.8％） TLC；Rf1＝0.49 40） PF（１−７）；Boc−Ser（Bzl）−Val−Ser
（Bzl）−Glu（OBzl）−Ile−Gln−Leu−OPAC
〔40〕 化合物〔39〕26.07ｇ（24mM）に塩化メチレ
ン20mlを加え、次いで氷冷下TFA100mlを加えた
後、室温で40分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF100mlに溶かし、次い
で氷冷下NMMを加えてPH７に調節した。この溶
液にHOBt3.9ｇ（28.8mM）およびBoc−Ser
（Bzl）−OH8.5ｇ（28.8mM）を乾燥DMF50mlに
溶かした溶液を加え、−15℃に冷却下WSC5.3ml
（28.8mM）を添加した後、室温で一夜撹拌した。
反応液に沈澱物が析出したので、水を加えて取
し、５％重曹水、1N塩酸、水の順で洗浄した後、
エーテルに懸濁し、取する工程を２回行つて目
的物〔40〕を得た。 収量；28.0ｇ（収率92.3％） TLC；Rf1＝0.53 41） PF（１−７）；Boc−Ser（Bzl）−Val−Ser
（Bzl）−Glu（OBzl）−Ile−Gln−Leu−OH〔41〕 化合物〔40〕12.6ｇ（10mM）を酢酸300mlに
溶かし、これに亜鉛末15ｇを加え、50℃で４時間
撹拌した後、亜鉛末を別した。酢酸を減圧留去
し、残渣にエーテルを加え、析出した結晶を
取、洗浄して目的物〔41〕を得た。 収量；11.15ｇ（収率97.4％） 融点；260℃（分解） TLC；Rf1＝0.14、Rf2＝0.64 アミノ酸分析；Ser1.81(2)、Glu2.02(2)、
Val0.95(1)、Leu1(1)、Ile0.92(1) 42） 保護−〔Nle8，Nle18，Tyr34〕−ｈ−PTH
（１−34）NH2；Boc−Ser（Bzl）−Val−Ser
（Bzl）−Glu（OBzl）−Ile−Gln−Leu−Nls−
His−Asn−Leu−Gly−Lys（Ｚ−Cl）−His−
Leu−Asn−Ser（Bzl）−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Tos）−Val−Glu（OBzl）−Trp−Leu−
Arg（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu
−Gln−Asp（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr
（Bzl）−Cl2）−NH2〔42〕 化合物〔33〕10.86ｇ（2.28mM）に氷冷下スカ
トール0.30ｇ（2.28mM）、ジメチルスルフイド25
ml、エタンジチオール2.5mlおよびTFA25mlを加
え、室温で60分間撹拌した後、減圧濃縮した。残
渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を取、乾燥
した後、乾燥DMF100ml＋DMSO10mlの混液に
溶かし、次いで氷冷下NMMを加えてPH７に調節
した。この溶液にHOBt0.37ｇ（2.74mM）およ
び化合物〔41〕3.14ｇ（2.74mM）を加え、次い
で−15℃に冷却下WSC0.50ml（2.74mM）を加え
た後、室温で一夜撹拌した。反応液に水を加え、
生じた沈澱物を取し、充分に水洗した後、エタ
ノール−エーテルで洗浄して目的物〔42〕を得
た。 収量；12.87ｇ（収率97.3％） 融点；139.5〜175℃ 〔α〕28 D−1.97゜（Ｃ＝0.51，DMF） アミノ酸分析；Asp3.72(4)、Ser2.76(3)、
Glu5.58(5)、Gly0.69(1)、Val2.86(3)、Ile1.11(1)、
Leu5(5)、Tyr0.99(1)、Lys2.87(3)、His2.19(3)、
Arg2.06(2)、Trp0.65(1)、Nle1.96(2) 43） 〔Nle8，Nle18，Tyr34〕−ｈ−PTH（１−
34）NH2 化合物〔42〕2.9ｇ（0.5mM）に０℃に冷却下
アニソール3.5ml、エタンジチオール0.35ml、ジ
メチルスルフイド3.5mlおよび無水HF35mlを加
え、60分間撹拌した。反応後、HFを減圧下留去
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め
た後、0.1N酢酸に溶解した。この溶液をダウエ
ツクス×１（アセテート型）のカラム（3.5×12
cm）に通し、ニンヒドリン陽性のフラクシヨンの
みを集めて凍結乾燥して粗生成物1.87ｇを得た。
これを0.1N酢酸50mlに溶かし、CM−セルロース
のカラム（２×33cm）にチヤージし、0.05M酢酸
アンモニウム（PH5.1）１〜0.4M酢酸アンモニ
ウム（PH6.0）１の直線型濃度勾配による溶出
を行つた。各フラクシヨンは9.0mlづつ分画し、
TLCによりRf6＝0.30付近にスポツトを有する74
〜84本目のフラクシヨンを集め凍結乾燥した。こ
れを出来るだけ少量の0.1N塩酸に溶かし、この
溶液をセフアデツクスＧ−25のカラム（３×115
cm）にチヤージし、0.1N酢酸で溶出した。各フ
ラクシヨンはUV280nmにおける吸光度を測定
し、１つの大きなピークを有するフラクシヨンの
みを集めて凍結乾燥して〔Nle8，Nle18，Tyr34〕
−ｈ−PTH（１−34）NH2を得た。 収量；140mg TLC；Rf6＝0.30 アミノ酸分析（３％チオグリコール酸含有6N
塩酸で加水分解）；Asp3.98(4)、Ser2.10(3)、
Glu4.93(5)、Gly0.97(1)、Val2.66(3)、Ile0.87(1)、
Leu5.00(5)、Tyr1.11(1)、Lys3.26(3)、His2.30(3)、
Arg2.03(2)、Trp0.62(1)、Nle2.22(2) 高速液体クロマトグラフイー； カラム；Nucleosil5C18（4nmID×150mm） 緩衝液；0.1Mリン酸含有0.1％酢酸−アセトニ
トリル（アセトニトリルの比率は最初の５分間は
20％、その後の20分間は20％〜40％の直線型濃度
勾配による） 流速；１ml／分 検出；225nm 測定結果；19.07分にのみピーク検出。
ン100mlおよびTFA250mlを加え、室温で80分間
撹権拌した後、減圧下塩化メチレンおよびTFA
を留去した。得られた油状物を乾燥DMF300mlに
溶かし、NMMを加えて中和した。この溶液に
Boc−Leu−OH・H2O50.9ｇ（0.204M）および
HOBt27.6ｇ（0.204M）を乾燥DMF100mlに溶解
した溶液を加え次いで−15℃で冷却下WSC37.3
ml（0.204M）を滴下した後、室温で一夜撹拌し
た。反応後、減圧下DMFを留去し、残渣を水に
加え、析出した生成物を取した。メタノール−
エーテル−ヘキサンから２回結晶化して目的物
〔10〕を得た。 収量；213.63ｇ（収率90.5％） 融点；157〜160℃ TLC；Rf1＝0.28、Rf2＝0.77 〔α〕27 D−18.68゜（Ｃ＝１，DMF） 11） PF（23−28）；Boc−TrP−Leu−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys：（Ｚ−Cl）−Leu−
OEt〔11〕 化合物〔10〕153.17ｇ（0.12M）に塩化メチレ
ン100mlおよびTFFA250mlを加え、室温で80分間
撹拌した後、減圧下塩化メチレンおよびTFAを
留去した。残渣を乾燥DMF250mlに溶かし、
NMMでPH７に中和した。この溶液にHOBt17.84
ｇ（0.132M）とBoc−Trp−OH40.17ｇ
（0.132M）を加え、次いで−15℃で冷却下、
WSC24.2ml（0.1321M）を滴下した後、室温で一
夜撹拌した。反応後、減圧後、減圧下DMFを留
去し、残渣を５％重曹水５に注ぎ、析出した生
成物を取した。これを水に懸濁して取した
後、メタノール−エーテルから２回再結晶して目
的物〔11〕を得た。 収量；142.57ｇ（収率81.2％） 融点；168〜170℃ TLC；Rf1＝0.31、Rf2＝0.82 〔α〕28 D−18.64゜（Ｃ＝１，DMF） 12） PF（23−28）；Boc−Trp−Leu−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−
OH〔12〕 化合物〔11〕140.64ｇ（96.16mM）を熱エタノ
ール1200mlに溶解し、冷却後、少量の析出物を
別した後、1N−NaOH水溶液288ml（３倍Ｍ）を
加え、室温で１時間撹拌した。反応液に1N−
TosOH水溶液192ml（22倍Ｍ）を加えた後、別
し、エタノールを減圧下留去した。濃縮液に1N
−TosOH96ml（等Ｍ）を加え、次いで水２を
加えた後、生じた沈澱物を取した。水で２回洗
浄した後、乾燥して目的物〔12〕を得た。 収量；142.98ｇ（収率101.1％） TLC；Rf2＝0.71 融点；125〜130℃ 〔α〕27 D−37.24゜（Ｃ＝１，DMF） 元素分析〔C69H94O15N12SCl2・2H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 56.35 6.72 11.43 測定値 56.03 6.62 11.85 アミノ酸分析；Leu2(2)、Lys2.08(2)、Arg1.10
(1)、Trp0.83(1) 13） PF（23−34）；Boc−Trp−Leu−Arg
（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−
Gln−Asp（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr（Bzl
−Cl2）−NH2〔13〕 化合物〔６〕1.68ｇ（1.5mM）を少量の塩化メ
チレンに懸濁し、次いで氷冷下TFA7mlを加えた
後、室温で30分間撹拌した。反応後、減圧下
TFAを留去し、残渣にエーテルを加え、析出し
た結晶を取、乾燥した。この結晶を乾燥
DMF30mlに溶かし、少量のNMMで中和した。
この溶液に化合物〔12〕2.43ｇ（1.65mM）、
HOB；0.22ｇ（1.65mM）および乾燥DMF20ml
を加え、次いで−15℃で冷却下WSC0.3ml（1.1倍
Ｍ）を加えた後、室温で一夜撹拌した。反応後、
減圧下DMFを留去し、残渣を５％重曹水で１回、
水で２回洗浄した後、メタノールに懸濁し、エー
テルを加え、取、乾燥して目的物〔13〕を得
た。 収量；3.62ｇ（収率99.1％） 融点；260〜270℃ 〔α〕25 D−4.66゜（Ｃ＝0.3，DMF） アミノ酸分析；Asp1.94(2)、GGlu0.96(1)、
Val0.71(1)、Leu2.00(2)、Tyr0.98(1)、Lys2.09(2)、
His0.58(1)、rg0.91(1)、Trp0.78(1) 114） PF（22）；Boc−Glu（OBzl）−OPAC〔14〕 Boc−Glu（OBzl）−OH128.2ｇ（0.38M）を
DMF600mlに溶かし、これに氷冷下フエナシル
ブロマイド113.5ｇ（0.57M）を加えた後、
Et3N79.3ml（0.57M）を滴下した。滴下後、30
℃で４時間撹拌し、次いで酢酸カリウム30ｇを
加え、45分間撹拌した後、減圧下DMFを留去
した。残渣に酢酸エチル600mlを加え、５％重
曹水で２回、水で２回洗浄し、酢酸エチル層を
無水芒硝で乾燥後、減圧下溶媒を留去すると、
結晶が析出した、これにヘキサンを加え、取
して目的物〔14〕を得た。 収量；156.19ｇ（収率90.2％） TLC；Rf5＝0.73 15） PF（21−22）；Boc−Val−Glu（OBzl）−
OPAC〔15〕 化合物〔14〕147.88ｇ（0.325M）に塩化メチ
レン50mlを加え、これに氷冷下TFA300mlを加
え、室温で１時間撹拌した後、減圧下で塩化メチ
レンおよびTFAを留去した。残渣にエーテルを
加え、析出した結晶を取、乾燥した。この結晶
を乾燥DMF300mlに溶解し、NMMでPH７に中和
した。この溶液にHHOBt35.14ｇ（0.26M）およ
びBoc−Val−OH56.49ｇ（0.26M）を加え、−15
℃で冷却下WSC47.6ml（0.26M）を滴下した後、
室温で２日間撹拌した。反応後、減圧下でDMF
を留去し、残渣をクロロホルム500mlに溶かし、
５％重曹水、水、1N塩酸、水の順で洗浄した。
クロロホルム層を無水芒硝で乾燥し、減圧下溶媒
を留去し、得られた結晶にヘキサンを加えて取
した後、酢酸エチル−エーテルより再結晶化して
目的物〔15〕を得た。 収量；106.97ｇ（収率74.2％） TLC；Rf3＝0.63 融点；139〜141℃ 〔α〕29 D−18.92゜（Ｃ＝１，DMF） 16） PF（20−22）；Aoc−Ars（Tos）−Val−
Glu（OBzl）−OPAC〔16〕 化合物〔15〕99.83ｇ（0.18M）に塩化メチレ
ン50mlを加え、これに氷冷下TFA200mlを加え、
室温で１時間撹拌した後、減圧下で塩化メチレン
およびTFAを留去した。残渣にヘキサンを加え
て処理し、傾斜法によりヘキサンを除去した後、
エーテルを加えて処理した後、減圧下でエーテル
を留去した。得られた油状物を乾燥DMF200mlに
溶かし、NMMで中和した。この溶液に
HOBt24.33ｇ（0.18M）、Aoc−Arg（Tos）−
OH76.60ｇ（0.18M）および乾燥DMF200mlを加
え、これに−15℃で冷却下WSC32.94ml（0.18M）
を滴下した後、室温で一夜撹拌した。反応後、減
圧下DMFを留去し、残渣を酢酸エチル１に溶
解した。この溶液を５％重曹水、水、1N塩酸、
水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減圧下酢酸
エチルを留去した。得られた油状物を酢酸エチル
−エーテルより結晶化し、得られた結晶をエーテ
ルに懸濁して取する工程を３回行つて目的物
〔16〕を得た。 収量；149.75ｇ（収率94.6％） TLC；Rf1＝0.74、Rf4＝0.81 融点；110〜114℃ 〔α〕29 D−11.5゜（Ｃ＝１，DMF） 17） PF（19−22）；Boc−Glu（OBzl）−Arg
（Tos）−Val−Glu（OBzl）−OPAC〔17〕 化合物〔16〕149.40ｇ（0.170M）に塩化メチ
レン50mlを加え、これに氷冷下TFA300mlを加
え、室温で１時間撹拌した後、減圧下で塩化メチ
レンおよびTFAを留去した。残渣にエーテルを
加えて処理し、減圧下でエーテルを留去した後、
得られた油状物を乾燥DMF200mlに溶かした。こ
れにHOBt25.27ｇ（0.187M）およびBoc−Glu
（OBzl）−OH63.09ｇ（0.187M）を加え、乾燥
DMF100mlを追加し、−15℃で冷却下WSC34.22ml
（0.187M）を加え、室温で一夜撹拌した。反応
後、溶媒を留去し、残渣を水6l中に投ぎ込み、析
出した結晶を取した。この結晶をメタノールお
よびエーテルを加えて懸濁してて取し、熱メタ
ノールに溶かして、冷時に析出化して取し、さ
らにメタノールに懸濁して取する工程を３回行
つて化合物〔17〕を得た。結晶母液から溶媒を留
去し、メタノール−エーテルから結晶化して目的
物〔25.02ｇを得た。 収量；141.44ｇ（収率76.7％） TLC；Rf1＝0.56、Rf4＝0.82 融点；119〜121℃ 〔α〕29 D−129゜（Ｃ＝１，DMF） 18） PF（18−22）；Boc−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Tos）−Val.Glu（OBzl）−OPAC〔18〕 化合物〔17〕6.51ｇ（6mM）氷冷下塩化メチ
レンおよびTFA24mlを加え、室温で40分間撹拌
した後、減圧下塩化メチレンおよびTFAを留去
した。残渣にエーテルを加えて結晶化し、乾燥し
た。この結晶を乾燥DMFに溶かし、氷冷下
NMMでPH７に中和した。この溶液にBoc−Nle
−OH1.67ｇ（7.2mM）およびHOBt0.97ｇ
（7.2mM）を乾燥DMF40mlに溶解した溶液を加
え、−15℃に冷却下WSC1.3ml（7.2mM）を加え
た後、一夜撹拌した。反応後、減圧下DMFを留
去し、残渣に水を加え、生じた沈澱物を取し、
５％重曹水、水（３回）、1N塩酸水（３回）、メ
タノールの順で洗浄した。次いでメタノール−エ
ーテルから再沈澱を行ない、目的物〔18〕を得
た。 収量；5.61ｇ（収率78％） TLC；Rf1＝0.56 19） PF（18−22）；Boc−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Toc）−Val−Glu（OBzl）−OH〔19〕 化合物〔18〕5.03ｇ（4.2mM）を酢酸30mlに溶
かし、これに亜鉛末８ｇを加え、室温で5.5時間
撹拌した。反応後、亜鉛末を去し、減圧下酢酸
を留去した。析出した結晶にエーテルを加えて
取して目的物〔19〕を得た。 収量；4.42ｇ TLC；Rf1＝0.18、Rf2＝0.67 融点；210℃（分解） アミノ酸分析；Nle1.01(1)、Glu2.05(2)、
Arg0.98(1)、Val／(1) 20） PF（18−34）；Boc−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Tos）−Val−Glu（OBzl）−Trp−Len−
Arg（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu
−Gln−Asp（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr
（Bzl−Cl2）−NH2〔20〕 化合物〔13〕8.9ｇ（3.5mM）にスカトール0.5
ｇ（3.5mM）、ジメチルスルフイド25ml、エタン
ジチオール2.5mlおよびTFA25mlを加え、０℃で
10分間、室温で45分間撹拌した後、反応液を減圧
濃縮した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物
を取、乾燥した後、乾燥DMF100mlに溶かし、
NMMでPH７に中和した。この溶液にHOBt0.54
ｇ（4mM）および化合物〔19〕4.3ｇ（4mM）
を加え、−15℃に冷却下WSC0.73mlを加えた後、
室温で２日間撹拌した。反応後、減圧下DMFを
留去し、残渣に５％重曹水を加え、生じた沈澱物
を取した後、水で充分に洗浄した。この生成物
をエタノールに溶かし、エーテルを加えて沈澱化
させる工程を２回行つて目的物〔20〕を得た。 収量；11.12ｇ（収率94％） TLC；Rf3＝0.72 融点；250℃（分解） 〔α〕28 D−4.73゜（Ｃ＝0.53、DMF） アミノ酸分析；Asp1.98(2)、Glu3.04(3)、
Val1.69(2)、Len2(2)、Tyr1.07(1)、Lys1.93(2)、
His0.59(1)、Arg1.97(2)、Trp0.35(1)、Nle1.07(1) 21） PF（17）；Boc−Ser（Bzl）−OPAC〔21〕 Boc−Ser（Bzl）−OH88.6ｇ（0.3M）を
DMF400mlに溶解し、これにフエナシルブロマイ
ド89.6ｇ（0.45M）を加え、これに氷冷下
Et3N62.6ml（0.45M）を滴下した後、30℃で3.5
時間撹拌した。次いでこの反応液に酢酸カリウム
22.1ｇ（0.225M）を加え、室温で１時間間撹拌
した。反応後、減圧下DMFを留去し、残渣を酢
酸エチル500mlに溶かし、５％重曹水、水の順で
洗浄した。酢酸エチル層を無水芒硝で乾燥した
後、減圧下溶媒を留去した。残渣を冷蔵庫に放置
して結晶化させ、ヘキサンをを加えて取して目
的物〔21〕を得た。 収量；122.97ｇ（収率99.1％） TLC；Rf5＝0.82 〔α〕29.5 D−11.88゜（Ｃ＝1.0，DMF） 融点；45〜47℃ 22） PF（16−17）；Boc−Asn−Ser（Bzl）−
OPAC〔22〕 化合物〔21〕119.9ｇ（0.29M）に塩化メチレ
ン50mlを加え、これに氷冷下TFA250mlを加えた
後、室温で１時間撹拌した。反応後、減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、析出した結晶を
取、乾燥した。この結晶を乾燥DMF400mlに溶か
し、NMMでPH７に中和した。この溶液に
HOBt31.35ｇ（0.232M）およびBoc−Asn−
OH53.88g（0.232M）を加え、これに−15℃に冷
却下WSC42.46ml（0.232M）を滴下した後、室温
で一夜撹拌した。反応後、減圧下DMFを留去し、
残渣を酢酸エチル500mlに溶かし、５％重曹水で
洗浄した。分液の際、結晶が析出したので、その
結晶を取して水洗し、次いでエーテルで洗浄し
て目的物〔22〕の結晶41.79ｇを得た。液の
酢酸エチル層は、これを減圧濃縮し、残渣の油状
物を酢酸エチル−エーテルより結晶して目的物
〔22〕の結晶6.22ｇを得た。 収量；48.01ｇ（収率39.2％） TLC；Rf2＝0.61、Rf4＝0.62 融点；174〜176℃ 〔α〕29.5 D−5.54゜（Ｃ＝1.0，DMF） アミノ酸分析；Asp1.22(1)、Ser1.00(1) 23） PF（15〜17）；Boc−Leu−Asu−Ser（Bzl）
−OPAC〔23〕 化合物〔22〕80.91ｇ（0.153M）に塩化メチレ
ン50mlを加え、次いで氷冷下TFA150mlを加えた
後、室温で１時間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、生じた油状物を傾斜
法により分離した後、乾燥DMF150mlに溶かし、
NMMでPH７に中和した。この溶液HOBt22.7ｇ
（0.168M）、Boc−Leu−OH・H2O41.9ｇ
（0.168M）およびDMF100mlを加え、−15℃に冷
却下WSC30.7ml（0.168M）を滴下した後、室温
で撹拌した反応液がゲル化したので、氷室に３日
間静置した後、水を加え、生じた沈澱物を取
し、５％重曹水、水の順で洗浄、乾燥して目的物
〔23〕を得た。 収量；88.52ｇ（収率90.3％） TLC；Rf2＝0.80、Rf3＝0.88 融点；192〜193℃ 元素分析〔C33H44O9N4として〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 61.86 6.92 8.75 測定値 61.81 7.05 8.56 24） PF（14−17）；Boc−His（Tos）−Leu−
Asn−Ser（Bzl）−OPAC〔24〕 化合物〔28〕87.55ｇ（0.137M）に塩化メチレ
ン100mlを加え、次いで氷冷下TFA200mlを加え
た後、室温で70分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF200mlに溶かし、
NMMでPH７に中和して脱Boc溶液を得た。 一方、Boc−His（Tos）−OH・DCHA89.2ｇ
（0.151M）を酢酸エチル１に懸濁し、1N硫酸
500mlで洗浄し、析出した結晶を別した。酢酸
エチル層を水洗し、無水芒硝で乾燥した後、減圧
下溶媒を留去した。得られた油状物を乾燥
DMF150mlに溶解した溶液とHOBt20.4ｇ
（0.151M）を前記の脱Boc溶液に加え、これに−
15℃に冷却下WSC27.6ml（0.151M）を滴下した
後、室温で３日間撹拌した。反応後、減圧下溶媒
を留去し、残渣を水に加え、生じた沈澱物を取
した後、５％重曹水、水の順で洗浄し、乾燥して
目的物〔24〕を得た。 収量；108.63ｇ（収率85.51％） TLC；Rf2＝0.20、0.79 Rf＝0.55、0.87 一部Tosが脱離したものが得られた。 融点；154〜156℃ 〔α〕29.5 D−18.58゜（Ｃ＝1.0，DMF） 25） PF（13〜17）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−His−
Leu−Asn−Ser（Bzl）−OPAC〔25〕 化合物〔24〕107.96ｇ（0.1161M）に塩化メチ
レン100mlを加え、次いで氷冷下TFA200mlを加
えた後、室温で70分間撹拌した。反応液を減圧濃
縮し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取、乾燥後、乾燥DMF200mlに溶かし、NMMで
PH７に中和して脱Boc溶液を得た。 一方、Boc−Lys（Ｚ−Cl）−OH・TBA62.46ｇ
（0.128M）を酢酸エチル600mlに懸濁し、1N塩
酸、水の順に洗浄し、酢酸エチル層を無水芒硝で
乾燥後、減圧下溶媒を留去した。得られた油状物
とHOBt17.30ｇ（0.128M）を乾燥DMF100mlに
溶かした溶液を前記の脱Boc溶液に加え、これに
−15℃に冷却下WSC24.42ml（0.128M）を滴下し
た後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧下溶媒
を留去し残渣を３％重曹水５中に加え、析出し
た結晶を充分に水洗した後、乾燥した。この結果
をメタノールに溶かし、エーテルを加えて沈澱化
させた。得られた沈澱物を酢酸エチルに懸濁し、
取する工程を３回行つて目的物〔25〕を得た。 収量；114.42ｇ（収率91.8％） TLC；Rf2＝0.34、Rf3＝0.68 融点；200〜202℃ 〔α〕28 D−26.94゜（Ｃ＝1.0，DMF） 26） PF（13−17）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−His−
Leu−Asn−Ser（Bzl）−OH〔26〕 化合物〔25〕86.0ｇ（80mM）を酢酸500mlに
溶かし、これに亜鉛末150ｇを加え、室温で５時
間撹拌した後、反応液を過して亜鉛末を除去し
た。反応液を減圧濃縮し、残渣にエーテルを加
え、析出した結晶を取して目的物〔26〕を得
た。 収量；84.70ｇ（収率95.2％） TLC；Rf2＝0.47 融点；240〜250℃ 〔α〕30 D−19.16゜（Ｃ＝1.0，DMF） 元素分析〔C45H52O12N9Cl・2CH3COOH・
2H2Oとして〕 Ｃ％ Ｈ％ Ｎ％ 計算値 53.76 6.63 11.52 測定値 52.83 6.36 11.35 アミノ酸分析；Asp1.01(1)、Ser0.83(1)、Leu／
(1)、Lys0.93(1)、His0.97(1) 27） PF（13−34）；Boc−Lys（Ｚ−Cl）−His−
Leu−Asn−Ser（Bzl）−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Tos）−Val−Glu（OBzl）−TrP−Leu−
Arg（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu
−Gln−Asp（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr
（Bzl−Cl2）−NH2〔27〕 化合物〔20〕10.77ｇ（3.2mM）にスカトール
0.46ｇ（3.2mM）、ジメチルスルフイド25ml、エ
タンジチオール2.5mlおよびTFA25mlを加え、０
℃で10分間、室温で60分間撹拌した後、反応液を
減圧濃縮した。残渣にエーテルを加え、生じた沈
澱物を取、乾燥した後、乾燥DMF100mlに溶か
し、NMMでPH７に中和した。次いでこれに
HOBt0.51ｇ（3.8mM）および化合物〔26〕4.23
ｇ（3.8mM）を加え、−15℃に冷却下WSC0.70ml
を加えた後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧
下DMFを留去し、残渣に水を加え、生じた沈澱
物を取し、水洗、乾燥して目的物〔27〕を得
た。 収量；13.60ｇ（収率100％） 融点；138〜160.5℃ 〔α〕28 D−19.6゜（Ｃ＝0.56，DMF） アミノ酸分析；Asp2.96(3)、Ser0.62(1)、
Glu3.02(3)、Val1.72(2)、Leu3(3)、Tyr1.06(1)、
Lys3.01(3)、His1.43(2)、Arg1.98(2)、Trp0.60(1)、
Nle1.06(1)、 28） PF（11−12）；Boc−Leu−Gly−OBzl〔28〕 Boc−Leu−OH・H2O4.99ｇ（20mM）を乾燥
THF30mlに溶かし、これに乾燥ベンゼン50mlを
加え、溶媒を共弗により留去した。得られた油状
物を乾燥THF70mlに溶かし、これにＨ−Gly−
OBzl・TosOH（20mM）およびHOBt2.7ｇ
（20mM）を加え、次いで一５℃に冷却下WSC5
mlを加えた後、室温で一夜撹拌した。反応後、減
圧下溶媒を留去し、残渣を酢酸エチル100mlに溶
かした後、1N塩酸で２回、５％重曹水で２回、
水で２回の順で洗浄した。酢酸エチル層を無水芒
硝で乾燥した後、減圧濃縮して油状の目的物
〔28〕を得た。 29） PF（10−12）；Boc−Asn−Leu−Gly−
OBzl〔29〕 前記で得た油状物〔28〕に−15℃に冷却下
4.39N塩化水素／ジオキサン溶液40mlを加え、90
分間撹拌した後、減圧濃縮した。残渣にエーテル
を加え、生じた沈澱物を取、乾燥した後、乾燥
DMF30mlに溶かした。これに−５℃に冷却下
Et3Nを加えてPH７に調節し、次いでHOBt0.3ｇ
（2.2mM）およびBoc−Asn−ONP7.77ｇ
（22mM）を加え、室温で３日間撹拌した。反応
液に水を加え、析出した沈澱物をクロロホルム
200mlで抽出した。クロロホルム層を1N塩酸、５
％重曹水、水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥後、
減圧下溶媒を留去した、残渣を酢酸エチル−ヘキ
サンから結晶化して目的物〔29〕を得た。 収量；8.0ｇ（収率73.8％） 融点；152−156℃ 〔α〕24 D−36.1゜（Ｃ＝1.0，DMF） 30） PF（９−12）；Boc−His−Asn−Leu−
Gly−OBzl〔30〕 化合物〔29〕7.36ｇ（15.5mM）に塩化メチレ
ン５mlを加え、次いで氷冷下TFA32mlを加えた
後、室温で60分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、析出した沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF40mlに溶かし、
NMMでPH７に調節して脱Boc溶液を得た。 一方、Boc−His（Tos）−OH・DCHA10.99ｇ
（18.6mM）に酢酸エチル150mlおよび0.5N硫酸90
mlを加えて振とうし、酢酸エチル層を水で３回洗
浄し、無水芒硝で乾燥後、酢酸エチルを減圧下留
去して油状物を得た。この油状物とHOBt2.5ｇ
（18.6mM）を乾燥DMF60mlに溶かし、その溶液
を前記の脱Boc溶液に加え、次いで−15℃に冷却
下WSC3.4ml（18.6mM）を加えた後、室温で一
夜撹拌した。反応後、減圧下溶媒を留去し、残渣
を酢酸エチルに溶かし、５％重曹水で３回、水で
２回洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減圧下溶媒を留
去した。残渣にエーテルを加え、析出した結晶を
取した。この結晶はHisのTosが一部脱離され
ているが、完全に脱離するために、この結晶を
DMF100mlに溶解し、これにHOBt7.05ｇを加え、
室温で３日間撹拌した。反応後、減圧下DMFを
留去し、残渣を酢酸エチルに溶かし、５％重曹水
で２回、水の順に洗浄し、無水芒硝で乾燥後、減
圧下溶媒を留去した。析出した結晶にエーテルを
加えて取して目的物〔30〕を得た。 収量；7.32ｇ（収率74.8％） TLC；Rf2＝0.1 31） PF（８−12）；Boc−Nle−His−Asn−
Leu−Gly−OBzl〔31〕 化合物〔30〕7.32ｇ（11.6mM）に塩化メチレ
ン５mlを加え、次いで氷冷下TFA30mlを加えた
後、室温で40分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、析出した沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF40mlに溶かし、
NMMでPH７に調節した。これにHOBt1.9ｇ
（13.92mM）およびBoc−Hle−OH3.23ｇ
（13.92mM）を乾燥DMFに溶かした溶液を加え、
−15℃に冷却下WSC2.5ml（13.92mM）を加えた
後、室温で一夜撹拌した。反応後、減圧下溶媒を
留去し、残渣に水を加え、析出した沈澱物を取
し、５％重曹水で２回、1N塩酸で２回、水で３
回の順で洗浄し、乾燥して目的物〔31〕を得た。 収量；3.70ｇ（収率42.9％） TLC；Rf2＝0.20 32） PF（８−12）；Boc−Nle−His−Asn−
Leu−Gly−OH〔32〕 化合物〔31〕2.8ｇ（3.8mM）をエタノール100
mlに溶かし、これに10％Pd／C300mgを加え、室
温で水素ガスを３時間通じた。反応液中に不溶物
が析出したので、過し、DMFで洗浄した後、
液を減圧濃縮した。残渣にエタノール−エーテ
ルを加えて沈澱物を取、乾燥して目的物〔32〕
を得た。 収量；1.76ｇ（収率71.1％） 融点；112.5℃ TLC；Rf2＝0.05 アミノ酸分析；Asp0.96(1)、Gly0.98(1)、Leu／
(1)、His0.95(1)、Nle0.94(1) 33） PF（８−34）；Boc−Nle−His−Asn−
Leu−Gly−Lys（Ｚ−Cl）−His−Leu−Asn−
Ser（Bzl）−Nle−Glu（OBzl）−Arg（Tos）−
Val−Glu（OBzl）−TrP−Leu−−Arg（Tos）−
Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu−Gln−AsP
（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr（Bzl−Cl2）−
NH2〔33〕 化合物〔27〕10.60ｇ（2.5mM）のスカトール
0.33ｇ（2.5mM）、ジメチルスルフイド25ml、エ
タンジチオール2.5mlおよびTFA25mlを加え、０
℃で10分、室温で50分間撹拌した後、反応液を減
圧濃縮した。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱
物を取、乾燥した後、乾燥DMF100mlに溶か
し、これに氷冷下NMMを加えてPH７に調節し
た。この溶液にHOBt0.36ｇ（2.7mM）および化
合物〔32〕1.76ｇ（2.7mM）を加え、−15℃に冷
却下WSC0.5mlを加えた後、室温で一夜撹拌し
た。析出した沈澱物を取し、水で洗浄、乾燥し
た後、エタノール−エーテルから再沈澱して目的
物〔33〕を得た。 収量；10.94ｇへ（収率91.7％） 融点；140.5〜162℃ 〔α〕28 D−1.94゜（Ｃ＝0.52，DMF） アミノ酸分析；Asp3.87(4)、Ser0.76(1)、
Glu3.34(3)、Gly0.77(1)、Val1.84(2)、Leu4(4)、
Tyr1.04(1)、Lys3.28(3)、His2.37(3)、Ars2.14(2)、
Trp0.73(1)、Nle2.07(2) 34）） PF(7)；Boc−Leu−OPAC〔34〕Boc−
Leu−OH・H2O15.0ｇ（60mM）とフエナシ
ルブロマイド17.9ｇ（90mM）をDMF100mlに
溶かし、これに氷冷下Et3N12.5ml（90mM）を
滴下した後、30℃で２時間撹拌した。次いで酢
酸カリウム4.42ｇ（45mM）を加え、室温で45
分間撹拌した後、減圧下DMFを留去した。残
渣を酢酸エチルに溶かし、５％重曹水で２回、
水で２回洗浄し、酢酸エチル層を無水芒硝で乾
燥後、減圧下溶媒を留去した。残渣を氷室に放
置し、析出した結晶を乾燥して目的物〔34〕を
得た。 収量；21.23ｇ（収率100％） TLC；Rf1＝0.89 35） PF（６−７）；Boc−Gln−Leu−OPAC
（35〕 化合物〔34〕20.96ｇ（60mM）に塩化メチレ
ン20mlを加え、次いで氷冷下TFA80mlを加え、
室温で40分間撹拌した後、反応液を減圧濃縮し
た。残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取；乾燥した後、乾燥DMF70mlに溶かし、氷冷
下NMMを加えてPH７に調節した。この溶液に
HOBt8.1ｇ（60mM）およびBoc−Gln−
OH14.78ｇ（60mM）を乾燥DMF90mlに溶かし
た溶液を加え、−15℃に冷却下WSC10.9ml
（60mM）を滴下した後、室温で一夜撹拌した。
反応後、DMFを減圧留去し、残渣を酢酸エチル
に溶かした後、５％重曹水で２回、1N塩酸で２
回、水で３回の順で洗浄した。酢酸エチル層を無
水芒硝で乾燥し、減圧下溶媒を留去した後、析出
した結晶にヘキサンを加えて取、乾燥して目的
物（35〕を得た。 収量；17.25ｇ（収率60.2％） TLC；Rf1＝0.38 36） PF（５−７）；Boc−Ile−Gln−Leu−
OPAC〔36〕 化合物〔35〕17.19ｇ（36mM）に塩化メチレ
ン10mlを加え、次いで氷冷下TFA70mlを加え、
室温で60分間撹拌した後、反応液を減圧濃縮し
た。残渣を減圧乾燥後、乾燥DMF130mlに溶か
し、氷冷下NMMでPH７に調節した。この溶液に
HOBt5.3ｇ（39.6mM）およびBoc−Ile−OH・
１／２H2O9.5ｇ（39.6mM）を乾燥DMF70mlに溶か
した溶液を加え、−15℃に冷却下WSC7.2ml
（39.6mM）を滴下した後、室温で一夜撹拌した。
反応後、DMFを減圧留去し、残渣に５％重曹水
を加え、生じた沈澱物を取した後、５％重曹
水、1N塩酸で２回、水で３回の順で洗浄し、乾
燥した。この沈澱物をエタノール−エーテルから
再沈澱化して目的物〔36〕を得た。 収量；16.35ｇ（収率76.9％） TLC；Rf1＝0.41、Rf2＝0.68 37） PF（４−７）；Boc−Glu（OBzl）−Ile−Gln
−Leu−OPAC〔37〕 化合物〔36〕16.24ｇ（27.5mM）を塩化メチレ
ン10mlを加え、次いで氷冷下TFA70mlを加え、
次いで氷冷下TFA70mlを加え、室温で60分間撹
拌した後、反応液を減圧濃縮した。残渣にエーテ
ルを加え、生じた沈澱物を取、乾燥した後、乾
燥DMF100mlに溶かし、次いで氷冷下NMMを加
えてPH７に調節した。この溶液にHOBt4.09ｇ
（30.25mM）およびBoc−Glu（OBzl）−OH10.2ｇ
（30.25mM）を乾燥DMF50mlに溶かした溶液を
加え、−15℃に冷却下WSC5.5mlを滴下した後、
室温で一夜撹拌した。反応後、DMFを減圧留去
し、残渣に５％重曹水を加えて生じた沈澱物を
取した後、５％重曹水、1N塩酸で２回、水で４
回の順で洗浄、乾燥した。エタノール−エーテル
から再沈澱して目的物〔37〕を得た。 収量；21.68ｇ（収率97.1％） TLC；Rf＝0.52 38） PF（３−７）；Boc−Ser（Bzl）−Glu
（OBzl）−Ile−Gln−Leu−OPAC〔38〕 化合物〔37〕21.46ｇ（26.5mM）に塩化メチレ
ン10mlを加え、次いで氷冷下TFA90mlを加え、
室温で１時間撹拌した後、反応液を減圧濃縮し
た。残渣にエーテルを加えて、生じた沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF150mlに溶解し、次い
で氷冷下NMMを加えてPH７に調節した。この溶
液にHOBt3.9ｇ（29.15mM）およびBoc−Ser
（Bzl）−OH8.6ｇ（29.15mM）を乾燥DMF50ml
に溶かした溶液を加え、−15℃に冷却下WSC5.3
ml（29.15mM）を加えた後、室温で一夜撹拌し
た。反応後、DMFを減圧留去し、残渣に５％重
曹水を加え、析出した沈澱物を取した。これを
５％重曹水、1N塩酸で２回、水で４回の順で洗
浄した後、エーテルに懸濁、取して目的物
〔38〕を得た。 収量；24.8ｇ（収率94.7％） TLC；Rf1＝0.53 39） PF（２−７）；Boc−Val−Ser（Bzl）−Glu
（OBzl）−Ile−Gln−Leu−OPAC〔39〕 化合物〔38〕24.68ｇ（25mM）に塩化メチレ
ン20mlを加え、次いで氷冷TFA100mlを加えた
後、室温で50分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF120mlに溶かし、次い
で氷冷下NMMを加えてPH７に調節した。この溶
液にHOBt4.05ｇ（30mM）およびBoc−Val−
OH6.5ｇ（30mM）を乾燥DMF80mlに溶かした
溶液を加え、−15℃に冷却下WSC5.5ml（30mM）
を滴下した後、室温で一夜撹拌した。反応液に沈
澱物が析出したので、水を加えて取し、５％重
曹水で２回、1N塩酸で２回、水で４回の順で洗
浄した後、エーテルに懸濁、取して目的物
〔39〕を得た。 収量；26.32ｇ（収率96.8％） TLC；Rf1＝0.49 40） PF（１−７）；Boc−Ser（Bzl）−Val−Ser
（Bzl）−Glu（OBzl）−Ile−Gln−Leu−OPAC
〔40〕 化合物〔39〕26.07ｇ（24mM）に塩化メチレ
ン20mlを加え、次いで氷冷下TFA100mlを加えた
後、室温で40分間撹拌した。反応液を減圧濃縮
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を
取、乾燥した後、乾燥DMF100mlに溶かし、次い
で氷冷下NMMを加えてPH７に調節した。この溶
液にHOBt3.9ｇ（28.8mM）およびBoc−Ser
（Bzl）−OH8.5ｇ（28.8mM）を乾燥DMF50mlに
溶かした溶液を加え、−15℃に冷却下WSC5.3ml
（28.8mM）を添加した後、室温で一夜撹拌した。
反応液に沈澱物が析出したので、水を加えて取
し、５％重曹水、1N塩酸、水の順で洗浄した後、
エーテルに懸濁し、取する工程を２回行つて目
的物〔40〕を得た。 収量；28.0ｇ（収率92.3％） TLC；Rf1＝0.53 41） PF（１−７）；Boc−Ser（Bzl）−Val−Ser
（Bzl）−Glu（OBzl）−Ile−Gln−Leu−OH〔41〕 化合物〔40〕12.6ｇ（10mM）を酢酸300mlに
溶かし、これに亜鉛末15ｇを加え、50℃で４時間
撹拌した後、亜鉛末を別した。酢酸を減圧留去
し、残渣にエーテルを加え、析出した結晶を
取、洗浄して目的物〔41〕を得た。 収量；11.15ｇ（収率97.4％） 融点；260℃（分解） TLC；Rf1＝0.14、Rf2＝0.64 アミノ酸分析；Ser1.81(2)、Glu2.02(2)、
Val0.95(1)、Leu1(1)、Ile0.92(1) 42） 保護−〔Nle8，Nle18，Tyr34〕−ｈ−PTH
（１−34）NH2；Boc−Ser（Bzl）−Val−Ser
（Bzl）−Glu（OBzl）−Ile−Gln−Leu−Nls−
His−Asn−Leu−Gly−Lys（Ｚ−Cl）−His−
Leu−Asn−Ser（Bzl）−Nle−Glu（OBzl）−
Arg（Tos）−Val−Glu（OBzl）−Trp−Leu−
Arg（Tos）−Lys（Ｚ−Cl）−Lys（Ｚ−Cl）−Leu
−Gln−Asp（OBzl）−Val−His−Asn−Tyr
（Bzl）−Cl2）−NH2〔42〕 化合物〔33〕10.86ｇ（2.28mM）に氷冷下スカ
トール0.30ｇ（2.28mM）、ジメチルスルフイド25
ml、エタンジチオール2.5mlおよびTFA25mlを加
え、室温で60分間撹拌した後、減圧濃縮した。残
渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を取、乾燥
した後、乾燥DMF100ml＋DMSO10mlの混液に
溶かし、次いで氷冷下NMMを加えてPH７に調節
した。この溶液にHOBt0.37ｇ（2.74mM）およ
び化合物〔41〕3.14ｇ（2.74mM）を加え、次い
で−15℃に冷却下WSC0.50ml（2.74mM）を加え
た後、室温で一夜撹拌した。反応液に水を加え、
生じた沈澱物を取し、充分に水洗した後、エタ
ノール−エーテルで洗浄して目的物〔42〕を得
た。 収量；12.87ｇ（収率97.3％） 融点；139.5〜175℃ 〔α〕28 D−1.97゜（Ｃ＝0.51，DMF） アミノ酸分析；Asp3.72(4)、Ser2.76(3)、
Glu5.58(5)、Gly0.69(1)、Val2.86(3)、Ile1.11(1)、
Leu5(5)、Tyr0.99(1)、Lys2.87(3)、His2.19(3)、
Arg2.06(2)、Trp0.65(1)、Nle1.96(2) 43） 〔Nle8，Nle18，Tyr34〕−ｈ−PTH（１−
34）NH2 化合物〔42〕2.9ｇ（0.5mM）に０℃に冷却下
アニソール3.5ml、エタンジチオール0.35ml、ジ
メチルスルフイド3.5mlおよび無水HF35mlを加
え、60分間撹拌した。反応後、HFを減圧下留去
し、残渣にエーテルを加え、生じた沈澱物を集め
た後、0.1N酢酸に溶解した。この溶液をダウエ
ツクス×１（アセテート型）のカラム（3.5×12
cm）に通し、ニンヒドリン陽性のフラクシヨンの
みを集めて凍結乾燥して粗生成物1.87ｇを得た。
これを0.1N酢酸50mlに溶かし、CM−セルロース
のカラム（２×33cm）にチヤージし、0.05M酢酸
アンモニウム（PH5.1）１〜0.4M酢酸アンモニ
ウム（PH6.0）１の直線型濃度勾配による溶出
を行つた。各フラクシヨンは9.0mlづつ分画し、
TLCによりRf6＝0.30付近にスポツトを有する74
〜84本目のフラクシヨンを集め凍結乾燥した。こ
れを出来るだけ少量の0.1N塩酸に溶かし、この
溶液をセフアデツクスＧ−25のカラム（３×115
cm）にチヤージし、0.1N酢酸で溶出した。各フ
ラクシヨンはUV280nmにおける吸光度を測定
し、１つの大きなピークを有するフラクシヨンの
みを集めて凍結乾燥して〔Nle8，Nle18，Tyr34〕
−ｈ−PTH（１−34）NH2を得た。 収量；140mg TLC；Rf6＝0.30 アミノ酸分析（３％チオグリコール酸含有6N
塩酸で加水分解）；Asp3.98(4)、Ser2.10(3)、
Glu4.93(5)、Gly0.97(1)、Val2.66(3)、Ile0.87(1)、
Leu5.00(5)、Tyr1.11(1)、Lys3.26(3)、His2.30(3)、
Arg2.03(2)、Trp0.62(1)、Nle2.22(2) 高速液体クロマトグラフイー； カラム；Nucleosil5C18（4nmID×150mm） 緩衝液；0.1Mリン酸含有0.1％酢酸−アセトニ
トリル（アセトニトリルの比率は最初の５分間は
20％、その後の20分間は20％〜40％の直線型濃度
勾配による） 流速；１ml／分 検出；225nm 測定結果；19.07分にのみピーク検出。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式 Ｈ−Ser−Val−Ser−Glu−Ile−Gln−Leu−
Nle−His−Asn−Leu−Gly−Lys−His−Leu−
Asn−Ser−Nle−Glu−Arg−Val−Glu−Trp−
Leu−Arg−Lys−Lys−Leu−Gln−Asp−Val−
His−Asn−Tyr−NH2 で表されるペプチドまたはその塩。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58144016A JPS6034996A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | 〔Νｌｅ↑８，Νｌｅ↑１↑８，Ｔｙｒ↑３↑４〕−ｈ−ＰＴＨ（１−３４）ΝＨ↓２ |
| FR8412303A FR2550204B1 (fr) | 1983-08-05 | 1984-08-03 | Derives peptidiques de (nle8,nle1b, tyr34)-h-pth |
| US06/637,735 US4656250A (en) | 1983-08-05 | 1984-08-06 | [Nle8, Nle18, Tyr34 or Phe34 ]-h-PTH peptide derivatives |
| DE3428942A DE3428942C2 (de) | 1983-08-05 | 1984-08-06 | (h-pth)-peptidderivate |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58144016A JPS6034996A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | 〔Νｌｅ↑８，Νｌｅ↑１↑８，Ｔｙｒ↑３↑４〕−ｈ−ＰＴＨ（１−３４）ΝＨ↓２ |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3013849A Division JPH0592995A (ja) | 1991-01-10 | 1991-01-10 | 〔Ｎｌｅ８ ，Ｎｌｅ１８， Ｔｙｒ３４〕−ｈ−ＰＴＨ（１−３４）ＮＨ２ の１２５ Ｉ標識放射活性体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6034996A JPS6034996A (ja) | 1985-02-22 |
| JPH0352479B2 true JPH0352479B2 (ja) | 1991-08-12 |
Family
ID=15352358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58144016A Granted JPS6034996A (ja) | 1983-08-05 | 1983-08-05 | 〔Νｌｅ↑８，Νｌｅ↑１↑８，Ｔｙｒ↑３↑４〕−ｈ−ＰＴＨ（１−３４）ΝＨ↓２ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6034996A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4847478B2 (ja) | 2006-08-18 | 2011-12-28 | 株式会社日立製作所 | ガスタービン発電設備の軸受装置及びガスタービン発電設備 |
-
1983
- 1983-08-05 JP JP58144016A patent/JPS6034996A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6034996A (ja) | 1985-02-22 |
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