JPS6370156A - 電気泳動用媒体 - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
[産業上の利用分野]
本発明は核酸(DNA、 RNA)塩基配列決定のため
に用いられるポリアクリルアミド系水性ゲル電気泳動用
媒体に関するものであり、特にゲル媒体の核酸塩基フラ
グメントの高い分離性能を保持し・たままゲル媒体の硬
さを増加させ加工性を改善したポリアクリルアミド系水
性ゲル電気泳動用媒体の組成に関するものである。
に用いられるポリアクリルアミド系水性ゲル電気泳動用
媒体に関するものであり、特にゲル媒体の核酸塩基フラ
グメントの高い分離性能を保持し・たままゲル媒体の硬
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性ゲル電気泳動用媒体の組成に関するものである。
[従来技術]
化学分解法、ジデオキシ法等による核酸(DNA。
RNA)の塩基配列決定法においてはポリアクリルアミ
ド系水性ゲル電気泳動用媒体膜(以下、ポリアクリルア
ミドゲル膜又はゲル膜ということがある)を用いたスラ
ブ電気泳動が必須の操作になっている。この目的に用い
られるポリアクリルアミドゲル膜は1過密アクリルアミ
ドのような単撓体約95重量部とN、N’−メチレンビ
スアクリルアミドのような二官能性または多官能性の架
橋剤約5重量部の混合物と重合開始剤を含む約3w%〜
約30w%の水溶液中(液層又は液膜状態)で単量体と
架橋剤を架橋重合させることにより形成しており、核酸
フラグメントの分離能を向上させるためにゲル膜のlj
N化が行われている。
ド系水性ゲル電気泳動用媒体膜(以下、ポリアクリルア
ミドゲル膜又はゲル膜ということがある)を用いたスラ
ブ電気泳動が必須の操作になっている。この目的に用い
られるポリアクリルアミドゲル膜は1過密アクリルアミ
ドのような単撓体約95重量部とN、N’−メチレンビ
スアクリルアミドのような二官能性または多官能性の架
橋剤約5重量部の混合物と重合開始剤を含む約3w%〜
約30w%の水溶液中(液層又は液膜状態)で単量体と
架橋剤を架橋重合させることにより形成しており、核酸
フラグメントの分離能を向上させるためにゲル膜のlj
N化が行われている。
近年では電気泳動分析が頻繁に利用されるようになって
おり、これに応じてポリアクリルアミドゲル膜の需要も
飛躍的に高まっている。従って電気泳動の実施に適した
ポリアクリルアミドゲル膜を短時間に多数製造、すなわ
ち大量生産し、それを電気泳動操作実施者に供給するシ
ステムの確立が望まれている。
おり、これに応じてポリアクリルアミドゲル膜の需要も
飛躍的に高まっている。従って電気泳動の実施に適した
ポリアクリルアミドゲル膜を短時間に多数製造、すなわ
ち大量生産し、それを電気泳動操作実施者に供給するシ
ステムの確立が望まれている。
ポリアクリルアミドゲル膜の大量生産を可能にする一つ
の方法としては、長尺状の有機ポリマーフィルムを一定
速度で連続的に移動させ、そのフィルムの上に架橋重合
しろるポリアクリルアミドゲル形成液(以下、ゲル形成
液という)を不活性ガス雰囲気中(例、窒素ガス中)で
塗布し、塗布層をラジカル架橋重合させる方法が有利で
ある。
の方法としては、長尺状の有機ポリマーフィルムを一定
速度で連続的に移動させ、そのフィルムの上に架橋重合
しろるポリアクリルアミドゲル形成液(以下、ゲル形成
液という)を不活性ガス雰囲気中(例、窒素ガス中)で
塗布し、塗布層をラジカル架橋重合させる方法が有利で
ある。
一方ジデオキシ法の発達により、核酸(DNA、RNA
)フラグメントの高分子量部分まで精度よく分なできる
ポリアクリルアミドゲル膜の要請が高まってきた。
)フラグメントの高分子量部分まで精度よく分なできる
ポリアクリルアミドゲル膜の要請が高まってきた。
長尺状に製造した電気泳動用媒体を実際に使用できる形
態にするためには、裁断、サンプルスロットの付設等の
刃物によるポリアクリルアミドケル膜の加工が、ゲル膜
の破壊や切断面近傍の形状の変化をともなうことなく、
容易かつ確実に実施できる必要がある。しかし従来のゲ
ル膜ではアクリルアミド濃度を下げるとゲルが柔らかく
なり。
態にするためには、裁断、サンプルスロットの付設等の
刃物によるポリアクリルアミドケル膜の加工が、ゲル膜
の破壊や切断面近傍の形状の変化をともなうことなく、
容易かつ確実に実施できる必要がある。しかし従来のゲ
ル膜ではアクリルアミド濃度を下げるとゲルが柔らかく
なり。
刃物による加工が困難であった。
[発明の目的]
本発明の目的は核酸(DNA、 RNA)の塩基配列決
定のために用いられるポリアクリルアミド系水性ゲル電
気泳動用媒体(以下、ゲル媒体ということがある)にお
いて、核酸フラグメントの電気泳動による高分離能を維
持したままゲル媒体の硬さを増加させ加工を容易確実に
実施できるようここ改善したゲル媒体を提供することで
ある。
定のために用いられるポリアクリルアミド系水性ゲル電
気泳動用媒体(以下、ゲル媒体ということがある)にお
いて、核酸フラグメントの電気泳動による高分離能を維
持したままゲル媒体の硬さを増加させ加工を容易確実に
実施できるようここ改善したゲル媒体を提供することで
ある。
[発明の構成]
本発明は、アクリルアミド系1ヒ合物と架橋剤が水の存
在下に架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲル
、および変性剤として少なくとも1個のカルバモイル基
をもつ化合物を含む電気泳動用媒体において、さらに水
溶性セルロース誘導体を少量含むポリアクリルアミド系
水性ゲル電気泳動用媒体である。
在下に架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲル
、および変性剤として少なくとも1個のカルバモイル基
をもつ化合物を含む電気泳動用媒体において、さらに水
溶性セルロース誘導体を少量含むポリアクリルアミド系
水性ゲル電気泳動用媒体である。
[発明の構成の詳細な説明コ
本発明においてアクリルアミド系化合物(単量体)と架
(3剤は、水溶液または水分散)夜として水に溶解また
は分散させておき、水中で両者を架橋重合させて、架橋
重合した水性ゲル媒体を形成させる。本明細書において
は特にことわらないかぎり、(水に)溶解とく水に)分
散の両者を含めて単に(水に)溶解といい、水溶液と水
分散液の両者を含めて単に水溶液という。溶媒または分
散媒としては、水だけでなく、所望により加えられる有
機溶媒を含む水−有機溶媒混合物をも包含する。
(3剤は、水溶液または水分散)夜として水に溶解また
は分散させておき、水中で両者を架橋重合させて、架橋
重合した水性ゲル媒体を形成させる。本明細書において
は特にことわらないかぎり、(水に)溶解とく水に)分
散の両者を含めて単に(水に)溶解といい、水溶液と水
分散液の両者を含めて単に水溶液という。溶媒または分
散媒としては、水だけでなく、所望により加えられる有
機溶媒を含む水−有機溶媒混合物をも包含する。
本発明に用いることができるアクリルアミド系化合物(
単量体)の例としては、アクリルアミド。
単量体)の例としては、アクリルアミド。
N−メチルアクリルアミド、 N、N−ジメチルアクリ
ルアミド、N−(ヒドロキシメチル)アクリルアミド。
ルアミド、N−(ヒドロキシメチル)アクリルアミド。
ジアセトンアクリルアミド等のアクリルアミ1ζホモロ
グがある。これらの化合物は単独で、または2種以上を
組合せて用いることができる。これらの化合物のうぢで
はアクリルアミドが好ましく。
グがある。これらの化合物は単独で、または2種以上を
組合せて用いることができる。これらの化合物のうぢで
はアクリルアミドが好ましく。
またアクリルアミドと他のアクリルアミド系化合物の1
種以上との併用も好ましい。
種以上との併用も好ましい。
架橋剤としてはr E I ectrophores
i 5J2(4) 、 213−219(1981)、
同誌2(4)、220−228(+981)等に記載の
二官能性架橋剤化合物、特開昭[3! −2058等に
記載の三官能性以上の架橋剤化合物を用いることができ
る。二官能性架橋剤の具体例として、 N、N’−メチ
レンビスアクリルアミド(B I S) ; N、N”
−プロピレンビスアクリルアミド(PBA);ジアクリ
ルアミドジメチルエーテル(DAE);1,2−ジアク
リルアミドエチレングリコール(D E C) ;エチ
レンウレアビスアクリルアミド(E U B) ;エチ
レンジアクリレート(EDA);N、N’−ジアリルタ
ルタルジアミド(D A T D );N、N’−ビス
アクリリルシスタミン(B A C)がある。三官能性
架橋剤の具体例として、 1,3.5−トリアクリロイ
ルへキサヒトローS−トリアジン(TAHT); )リ
アリルシアヌレート(TAC); )リアリルイソシア
スレート(T A、 TC)等がある。これらの架橋剤
のうちてはBISとTAHTが好ましい。架橋剤は2種
以上を組合わせて用いることもてきる。
i 5J2(4) 、 213−219(1981)、
同誌2(4)、220−228(+981)等に記載の
二官能性架橋剤化合物、特開昭[3! −2058等に
記載の三官能性以上の架橋剤化合物を用いることができ
る。二官能性架橋剤の具体例として、 N、N’−メチ
レンビスアクリルアミド(B I S) ; N、N”
−プロピレンビスアクリルアミド(PBA);ジアクリ
ルアミドジメチルエーテル(DAE);1,2−ジアク
リルアミドエチレングリコール(D E C) ;エチ
レンウレアビスアクリルアミド(E U B) ;エチ
レンジアクリレート(EDA);N、N’−ジアリルタ
ルタルジアミド(D A T D );N、N’−ビス
アクリリルシスタミン(B A C)がある。三官能性
架橋剤の具体例として、 1,3.5−トリアクリロイ
ルへキサヒトローS−トリアジン(TAHT); )リ
アリルシアヌレート(TAC); )リアリルイソシア
スレート(T A、 TC)等がある。これらの架橋剤
のうちてはBISとTAHTが好ましい。架橋剤は2種
以上を組合わせて用いることもてきる。
架橋剤の量は、単量体と架橋剤の合計重量に対して約1
w%から約30w%、好ましくは約2w%から約10w
%の範囲で用いられる。
w%から約30w%、好ましくは約2w%から約10w
%の範囲で用いられる。
本発明のゲル媒体にはアガロースを添加することができ
る。アガロースとしては、特開昭55−5730 、特
開昭55−110946 、特表昭57−502098
、特開昭59−126236等に記載の低電気浸透性
アガロース、中電気浸透性アガロース、高電気浸透性ア
ガロースのいずれも用いることができる。アガロースの
添加量は単量体と架橋剤を含む水性ゲルの容積に対して
約0.2v/v%から約2.0v/v%、好ましくは約
0.3v/v%から約1.2v/v%の範囲である。
る。アガロースとしては、特開昭55−5730 、特
開昭55−110946 、特表昭57−502098
、特開昭59−126236等に記載の低電気浸透性
アガロース、中電気浸透性アガロース、高電気浸透性ア
ガロースのいずれも用いることができる。アガロースの
添加量は単量体と架橋剤を含む水性ゲルの容積に対して
約0.2v/v%から約2.0v/v%、好ましくは約
0.3v/v%から約1.2v/v%の範囲である。
本発明のゲル媒体には水溶性セルロース誘導体以外の水
溶性ポリマーを添加することができろ。
溶性ポリマーを添加することができろ。
水溶性ポリマーとしては特開昭59−126236 、
特開昭60−60548等に記載の分子量約1万から約
100万の範囲の付加重合型または縮重合型の水溶性の
非イオン性ポリマー、特開昭61−18852に記載の
ビニルスルホニル基等含有の架橋性アクリルアミド系プ
ボリマーを用いることができる。付加重合型の水溶性の
非イオン性ポリマーの例としてポリアクリルアミド、ポ
リビニルアルコール、ポリビニルピロリドンがある。縮
重合型の水溶性の非イオン性ポリマーの例としてポリエ
チレングリコール、ポリプロピレングリコールがある。
特開昭60−60548等に記載の分子量約1万から約
100万の範囲の付加重合型または縮重合型の水溶性の
非イオン性ポリマー、特開昭61−18852に記載の
ビニルスルホニル基等含有の架橋性アクリルアミド系プ
ボリマーを用いることができる。付加重合型の水溶性の
非イオン性ポリマーの例としてポリアクリルアミド、ポ
リビニルアルコール、ポリビニルピロリドンがある。縮
重合型の水溶性の非イオン性ポリマーの例としてポリエ
チレングリコール、ポリプロピレングリコールがある。
架橋性アクリルアミド系コポリマーの例として、 N−
[[3−(ビニルスルホニル)プロパンアミドコメチル
コアクリルアミド−アクリルアミドコポリマー; N−
[[3−(2−クロロエチルスルホニル)プロパンアミ
ドコメチルコアクリルアミド−アクリルアミド−N−(
1,1−ジメチル−3−オキソブチル)アクリルアミド
コポリマーがある。これらの水溶性ポリマーのうちでは
ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、 N−
[[3−(ビニルスルホニル)プロパンアミドコメチル
コアクリルアミド−アクリルアミドコポリマーが好まし
い。水溶性ポリマー〇添加量は、付加重合型または縮重
合型の水溶性の非イオン性ポリマーの場合、単量体と架
橋剤の合計重量に対して約2ν%から約10九%、好ま
しくは約5w%から約50w%の範囲、架橋性アクリル
アミド系コポリマーの場合。
[[3−(ビニルスルホニル)プロパンアミドコメチル
コアクリルアミド−アクリルアミドコポリマー; N−
[[3−(2−クロロエチルスルホニル)プロパンアミ
ドコメチルコアクリルアミド−アクリルアミド−N−(
1,1−ジメチル−3−オキソブチル)アクリルアミド
コポリマーがある。これらの水溶性ポリマーのうちでは
ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、 N−
[[3−(ビニルスルホニル)プロパンアミドコメチル
コアクリルアミド−アクリルアミドコポリマーが好まし
い。水溶性ポリマー〇添加量は、付加重合型または縮重
合型の水溶性の非イオン性ポリマーの場合、単量体と架
橋剤の合計重量に対して約2ν%から約10九%、好ま
しくは約5w%から約50w%の範囲、架橋性アクリル
アミド系コポリマーの場合。
アクリルアミド系化合物の重量に対して約1w%から約
50w%、好ましくは約5ν%から約40w%の範囲で
ある。
50w%、好ましくは約5ν%から約40w%の範囲で
ある。
アガロースおよび/または水溶性ポリマーをゲル媒体に
添加する時期は通常単量体と架橋剤を水に溶解する時か
らポリアクリルアミド系水性ゲルの形成時までの間が好
ましい。
添加する時期は通常単量体と架橋剤を水に溶解する時か
らポリアクリルアミド系水性ゲルの形成時までの間が好
ましい。
ゲル媒体にはノニオン性、アニオン性又は両性界面活性
剤を添加することができろ。界面活性剤の例として。
剤を添加することができろ。界面活性剤の例として。
C8F、7S O2N −(CトI2CH2O)1
.I H等のノニオン性W面活性剤。
.I H等のノニオン性W面活性剤。
Na03S −CHCOOCH2CH(E t)C4H
9CH2C00CH2CH(Et)C4H9等のアニオ
ン性界面活性剤。
9CH2C00CH2CH(Et)C4H9等のアニオ
ン性界面活性剤。
e
C1l H23CON H−(CH2)3−N” −C
H2COO−e 等の両性界面活性剤がある。界面活性剤の添加量は、単
量体と架橋剤を含む水性ゲルの容積に対して、ノニオン
性又はカチオン性界面活性剤の場合。
H2COO−e 等の両性界面活性剤がある。界面活性剤の添加量は、単
量体と架橋剤を含む水性ゲルの容積に対して、ノニオン
性又はカチオン性界面活性剤の場合。
約lXl0−4から約5XIO”w/v%、好ましくは
約lXl0−3から約I X 10−”w/v%の範囲
、アニオン性界面活性剤の場合、約lXl0−4から約
5X]0−2v/v%、好ましくは約lXl0−3から
約5 X to−2v/v%の範囲である。
約lXl0−3から約I X 10−”w/v%の範囲
、アニオン性界面活性剤の場合、約lXl0−4から約
5X]0−2v/v%、好ましくは約lXl0−3から
約5 X to−2v/v%の範囲である。
変性剤としては少なくとも1個のカルバモイル基をもつ
化合物が用いられる。その具体例として尿素、ホルムア
ミド等がある。変性剤の添加量は単量体と架橋剤を含む
水性ゲルの容積に対して約40w/v%から約60ν/
V%の範囲である。変性剤として尿素を用いる場合には
、単量体と架橋剤を含む水性ゲル10100Oに対し約
6モル(約360g)から飽和溶解敬(約420g)ま
で、好ましくは約7モルから飽和溶IW、flまての範
囲で用いられる。変性剤は添加量が多いので、その添加
時期は通常単量体と架橋剤を含む諸成分を水に溶解する
時が好ましい。
化合物が用いられる。その具体例として尿素、ホルムア
ミド等がある。変性剤の添加量は単量体と架橋剤を含む
水性ゲルの容積に対して約40w/v%から約60ν/
V%の範囲である。変性剤として尿素を用いる場合には
、単量体と架橋剤を含む水性ゲル10100Oに対し約
6モル(約360g)から飽和溶解敬(約420g)ま
で、好ましくは約7モルから飽和溶IW、flまての範
囲で用いられる。変性剤は添加量が多いので、その添加
時期は通常単量体と架橋剤を含む諸成分を水に溶解する
時が好ましい。
本発明のゲル媒体の成分の特徴をなす水溶性セルロース
誘導体は、炭素原子数1から3のアルキル基、又は炭素
原子数1から4のヒドロキシアルキル基によりヒドロキ
シル基の一部又は実質的に全部がエーテル化された水溶
性セルロースエーテル類である。セルロースエーテルの
例として、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒド
ロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロースがあり、
これらのうちでメチルセルロースが好ましい。水溶性セ
ルロースエーテルは、一般に分子量約8千から約100
万、好ましくは約1万から約30万の範囲のものを用い
ることができる。水溶性セルロース誘導体の添加量は単
量体と架橋剤を含む水性ゲル媒体の容積に刻して約1.
Ow/v%以下、好ましくは約0.05讐/V%から約
帆5冒八%までの範囲である。水溶性セルロース誘導体
の添加時期は単量体と架橋剤を水に溶解する時からポリ
アクリルアミド系水性ゲルの形成時までの間が好ましい
。
誘導体は、炭素原子数1から3のアルキル基、又は炭素
原子数1から4のヒドロキシアルキル基によりヒドロキ
シル基の一部又は実質的に全部がエーテル化された水溶
性セルロースエーテル類である。セルロースエーテルの
例として、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒド
ロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセ
ルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロースがあり、
これらのうちでメチルセルロースが好ましい。水溶性セ
ルロースエーテルは、一般に分子量約8千から約100
万、好ましくは約1万から約30万の範囲のものを用い
ることができる。水溶性セルロース誘導体の添加量は単
量体と架橋剤を含む水性ゲル媒体の容積に刻して約1.
Ow/v%以下、好ましくは約0.05讐/V%から約
帆5冒八%までの範囲である。水溶性セルロース誘導体
の添加時期は単量体と架橋剤を水に溶解する時からポリ
アクリルアミド系水性ゲルの形成時までの間が好ましい
。
本発明のゲルTF、気泳動用媒体には公知のρ)1緩衝
剤を含有させて電気泳動実施時のpal値を8.0から
9.0の範囲に調節することができる。用いうる緩衝剤
としては9日本化学会編「化学便覧 基礎編」(東京、
丸善■、 1966年発行) 1312−1320頁、
RoM、 C、Dawson et a1編r Dat
a for B iochemicalResearc
hJ第2版(Oxford at the C1are
ndonP ress、 1969年発行)476−5
08頁、r B iochemistryJ5、467
頁以降(1966年)、 rAnalytical
Biochem−istryJ 104.300−31
0頁(1980年)等に記載のplim衝剤系がある。
剤を含有させて電気泳動実施時のpal値を8.0から
9.0の範囲に調節することができる。用いうる緩衝剤
としては9日本化学会編「化学便覧 基礎編」(東京、
丸善■、 1966年発行) 1312−1320頁、
RoM、 C、Dawson et a1編r Dat
a for B iochemicalResearc
hJ第2版(Oxford at the C1are
ndonP ress、 1969年発行)476−5
08頁、r B iochemistryJ5、467
頁以降(1966年)、 rAnalytical
Biochem−istryJ 104.300−31
0頁(1980年)等に記載のplim衝剤系がある。
p)l緩衝剤の具体例として、トリス(ヒドロキシメチ
ル)アミノメタン(Tris)、 N、N−ビス(2−
ヒドロキシエチル)グリシン(Bicine)、 N−
2−ヒドロキシピペラジン−N′−2−ヒドロキシプロ
パン−3−スルホン酸Na塩またはに塩等、N−2−ヒ
ドロキシエチルピペラジン−N’〜3−スルホン酸Na
塩またはI(塩等、N−[)リス(ヒドロキシメチル)
メチル]−3−アミノプロパンスルホン酸Na塩または
に塩等、およびこれらのいずれかと必要により組合せら
れる酸。
ル)アミノメタン(Tris)、 N、N−ビス(2−
ヒドロキシエチル)グリシン(Bicine)、 N−
2−ヒドロキシピペラジン−N′−2−ヒドロキシプロ
パン−3−スルホン酸Na塩またはに塩等、N−2−ヒ
ドロキシエチルピペラジン−N’〜3−スルホン酸Na
塩またはI(塩等、N−[)リス(ヒドロキシメチル)
メチル]−3−アミノプロパンスルホン酸Na塩または
に塩等、およびこれらのいずれかと必要により組合せら
れる酸。
アルカリまたは塩がある。好ましいp++緩南剤系の例
としてTris−硼M−EDTA−2Na塩(pl+8
.2〜8.3用組成)がある。
としてTris−硼M−EDTA−2Na塩(pl+8
.2〜8.3用組成)がある。
本発明のゲル媒体は実質的に無色透明であることが泳動
像の検出または読取りに一般的に好ましい。
像の検出または読取りに一般的に好ましい。
本発明のゲル媒体をゲル膜として用いる場合には、実質
的に電気不伝導性て水不浸透性の平滑な表面のシート状
(フィルム状、または平板状)支持体の上に設けるのが
好ましい。実質的に電気不伝導性で水不浸透性の平滑な
表面のシート状支持体としては公知のガラス板、有機ポ
リマーシート等を用いることができる。有機ポリマーシ
ートの具体例としてポリエチレンテレフタレート、ビス
フェノールノ\のポリカルボネート、ポリスチレン。
的に電気不伝導性て水不浸透性の平滑な表面のシート状
(フィルム状、または平板状)支持体の上に設けるのが
好ましい。実質的に電気不伝導性で水不浸透性の平滑な
表面のシート状支持体としては公知のガラス板、有機ポ
リマーシート等を用いることができる。有機ポリマーシ
ートの具体例としてポリエチレンテレフタレート、ビス
フェノールノ\のポリカルボネート、ポリスチレン。
セルロースエステル(例、セルロースジアセテート。
セルローストリアセテート、セルロースアセテートプロ
ピオネート等)等のポリマーからなる厚さ約50−から
約2mm、好ましくは約80−から約500umの範囲
の透明な、すなわち波長約200nmから約90OnI
+1の範囲内の少なくとも一部の範囲の波長の電磁輻射
線を透過させる平滑な表面を有するシート状または平板
状の支持体がある。有機ポリマー支持体を用いる場合に
はその表面を親水化しゲル膜との接着を良好にするため
に、紫外線照射、グロー放電処理、コロナ放電処理、火
焔処理、電子線照射、ケミカルエツチング、電解エツチ
ング等の公知の表面処理方法を適用することがてきる。
ピオネート等)等のポリマーからなる厚さ約50−から
約2mm、好ましくは約80−から約500umの範囲
の透明な、すなわち波長約200nmから約90OnI
+1の範囲内の少なくとも一部の範囲の波長の電磁輻射
線を透過させる平滑な表面を有するシート状または平板
状の支持体がある。有機ポリマー支持体を用いる場合に
はその表面を親水化しゲル膜との接着を良好にするため
に、紫外線照射、グロー放電処理、コロナ放電処理、火
焔処理、電子線照射、ケミカルエツチング、電解エツチ
ング等の公知の表面処理方法を適用することがてきる。
何機ポリマー支持体の表面には必要に応じて特開昭59
−IG4950.特開昭59−212752 、特開昭
60−194349 。
−IG4950.特開昭59−212752 、特開昭
60−194349 。
特開昭60−239658 、特開昭60−24485
0 、特開昭61−14557等に記載の下塗層または
接着層を設けて支持体の上に設けられるゲル膜と支持体
との1妾着を強固にすることができろ。
0 、特開昭61−14557等に記載の下塗層または
接着層を設けて支持体の上に設けられるゲル膜と支持体
との1妾着を強固にすることができろ。
本発明のゲル媒体は前述の諸成分とラジカル重合開始剤
組成物を含む水溶液(以下、ゲル形成液ということがあ
る)を平面状支持体の上に層状ζご流延または塗布し9
分子状酸素の不存在下で、必要により紫外線又は可視光
の!Ig的および/または加熱して、単量体(アクリル
アミド系化合物)と架橋剤とが架橋重合したポリアクリ
ルアミド系水性ゲル媒体膜として製造され用いられる。
組成物を含む水溶液(以下、ゲル形成液ということがあ
る)を平面状支持体の上に層状ζご流延または塗布し9
分子状酸素の不存在下で、必要により紫外線又は可視光
の!Ig的および/または加熱して、単量体(アクリル
アミド系化合物)と架橋剤とが架橋重合したポリアクリ
ルアミド系水性ゲル媒体膜として製造され用いられる。
ラジカル重合開始剤組成物としてはr E 1ectr
o−phores 1sJ2(4) 、 2+3−21
9(1981) 、同誌2(4)、220−228(1
981)、特開昭59−12G236 、青水、永井編
「最新電気泳動法J(1973年発行)等に記載の低温
ラジカル重合開始剤組成物のうちから適宜に選択して用
いることができる。ラジカル重合開始剤組成物の例とし
て、β−(ジメチルアミノ)プロピオニトリル(DMD
PN)−ペルオクソニ硫酸アンモニウム混合物; N、
N、N’、N’−テトラメチルエチレンジアミン(TE
MED)−ペルオクソニ硫酸アンモニウム混合物;TE
MED−リボフラビン混合物;TEMED−リボフラビ
ン−過酸化水素混合物;リボフラビンーベルオクソニ硫
酸アンモニウム混合物:リボフラビン−過酸化水素混合
物(リボフラビン等の光増感剤併用の場合には紫外線又
は可視光の照射を併用する)等がある。ラジカル重合剤
NH成物の添加量は単量体と架橋剤の合計重量に対して
約0.3v%から約5.0w%、好ましくは約0.5−
%から約3.0v%の範囲である。
o−phores 1sJ2(4) 、 2+3−21
9(1981) 、同誌2(4)、220−228(1
981)、特開昭59−12G236 、青水、永井編
「最新電気泳動法J(1973年発行)等に記載の低温
ラジカル重合開始剤組成物のうちから適宜に選択して用
いることができる。ラジカル重合開始剤組成物の例とし
て、β−(ジメチルアミノ)プロピオニトリル(DMD
PN)−ペルオクソニ硫酸アンモニウム混合物; N、
N、N’、N’−テトラメチルエチレンジアミン(TE
MED)−ペルオクソニ硫酸アンモニウム混合物;TE
MED−リボフラビン混合物;TEMED−リボフラビ
ン−過酸化水素混合物;リボフラビンーベルオクソニ硫
酸アンモニウム混合物:リボフラビン−過酸化水素混合
物(リボフラビン等の光増感剤併用の場合には紫外線又
は可視光の照射を併用する)等がある。ラジカル重合剤
NH成物の添加量は単量体と架橋剤の合計重量に対して
約0.3v%から約5.0w%、好ましくは約0.5−
%から約3.0v%の範囲である。
本発明の電気泳動用媒体はゲル濃度としてS。
Hjerten 二 rArchives of
B 1oche*1stry andB 1o
physicsJ 11(5upp1.)、147−1
51(1962)に記載の定義に従って表示して、単量
体、架橋剤および水からなるゲル媒体の容積に刻して、
単量体と架橋剤の合計量が約3w/v%から約30w/
v%の範囲で用いられる。
B 1oche*1stry andB 1o
physicsJ 11(5upp1.)、147−1
51(1962)に記載の定義に従って表示して、単量
体、架橋剤および水からなるゲル媒体の容積に刻して、
単量体と架橋剤の合計量が約3w/v%から約30w/
v%の範囲で用いられる。
本発明のゲル媒体を膜状て用いる場合には、ゲル膜の厚
さは約50…から約5mm 、好ましくは8’180−
から約500umの範囲である。本発明のゲル膜は薄層
化しても分離能が良好なので、ゲル膜の厚さを約50u
mから約300umのmfMにして泳動像の解像度を高
めることができる。
さは約50…から約5mm 、好ましくは8’180−
から約500umの範囲である。本発明のゲル膜は薄層
化しても分離能が良好なので、ゲル膜の厚さを約50u
mから約300umのmfMにして泳動像の解像度を高
めることができる。
ゲル形成液を平面状の支持体の表面−ヒで架IP 1合
させろ場合には、ゲル形成液の流延塗布とその後の架橋
重合を窒素ガス雰囲気中等の分子状酸素の不存在下で実
施するか、あるいは流延塗布したゲル形成液の表面上に
直ちにカバー用フィルム。
させろ場合には、ゲル形成液の流延塗布とその後の架橋
重合を窒素ガス雰囲気中等の分子状酸素の不存在下で実
施するか、あるいは流延塗布したゲル形成液の表面上に
直ちにカバー用フィルム。
シートまたは板等の被覆材料で覆い架橋重合させること
が好ましい。この目的に使用されろ被覆材↑:Iとして
は前述の平面状支持体と同様な素材からなるものを用い
ることができる。カバーフィルムが有機ポリマーフィル
ムである場合、その厚さは約300−以下であり、実用
的な範囲としては約41+mから約200−、好ましく
は約約4IJrnから約100μmである。被覆材料が
ガラス板の場合、その厚さは平面状ガラス板と同様な厚
さであればよい。
が好ましい。この目的に使用されろ被覆材↑:Iとして
は前述の平面状支持体と同様な素材からなるものを用い
ることができる。カバーフィルムが有機ポリマーフィル
ムである場合、その厚さは約300−以下であり、実用
的な範囲としては約41+mから約200−、好ましく
は約約4IJrnから約100μmである。被覆材料が
ガラス板の場合、その厚さは平面状ガラス板と同様な厚
さであればよい。
本発明のゲル媒体は公知のポリアクリルアミド系水性ゲ
ル媒体と同様にして調製することができる。また1本発
明のゲル媒体はゲル膜にして前述の諸文献や特許明細書
等に記載の公知の方法に従って、水平型および垂直型ス
ラブ電気泳動法等ここ用いることができる。
ル媒体と同様にして調製することができる。また1本発
明のゲル媒体はゲル膜にして前述の諸文献や特許明細書
等に記載の公知の方法に従って、水平型および垂直型ス
ラブ電気泳動法等ここ用いることができる。
眠工I亘
実施例1及び比較例1
平滑表面の厚さ2mm、サイズ20cm X 40cm
の長方の平面状ガラス板2枚を、縁辺部に厚さ400u
m+幅10mmのスペーサー板を固定して対向させてカ
ラスモールドを形成し、ガラスモールド゛の中に第1表
記載のアクリルアミドゲル形成用水溶;夜を流し込んだ
。周囲温度25℃で各ゲル形成液に100〜V高圧水銀
灯をlocmの距離から照射しつつ10分静置し・2枚
のガラス板の間で架橋重合させて厚さ4001Jmのポ
リアクリルアミド水性ゲル電気泳動用媒体膜を形成した
。
の長方の平面状ガラス板2枚を、縁辺部に厚さ400u
m+幅10mmのスペーサー板を固定して対向させてカ
ラスモールドを形成し、ガラスモールド゛の中に第1表
記載のアクリルアミドゲル形成用水溶;夜を流し込んだ
。周囲温度25℃で各ゲル形成液に100〜V高圧水銀
灯をlocmの距離から照射しつつ10分静置し・2枚
のガラス板の間で架橋重合させて厚さ4001Jmのポ
リアクリルアミド水性ゲル電気泳動用媒体膜を形成した
。
得られた4種のゲル膜の弾性率を測定したところ、第1
表に記載のとおりであった。
表に記載のとおりであった。
これらの電気泳動用ゲル媒体膜を用いてl) N A塩
基配列解析の実験をM+3−mp8DN、□〜に対して
ジデオキシ法により調製されたDNAフラグメントサン
プルを用いて常法に従い実権したところ。
基配列解析の実験をM+3−mp8DN、□〜に対して
ジデオキシ法により調製されたDNAフラグメントサン
プルを用いて常法に従い実権したところ。
正常な電気泳動パターンを示し、精度の高いDNA塩基
配列解析を行うことができた。
配列解析を行うことができた。
このように本発明のゲル膜は硬さが増加し、ザンブル注
入スロットの打抜き処理がしやすい、ゲル膜の切断面が
滑らかであるという加工性の改善が明らかであり、また
、DNA塩基配列解析用に適した電気泳動特性を維持し
ていることが明らかである。
入スロットの打抜き処理がしやすい、ゲル膜の切断面が
滑らかであるという加工性の改善が明らかであり、また
、DNA塩基配列解析用に適した電気泳動特性を維持し
ていることが明らかである。
瞠]ヨ「部
第 1 表
1!I BiS :NIN’−メチレンビスアクリ
ルアミドTris : )リス(ヒドロキシメチル)ア
ミノメタンTEMED:N、N、N’ 、N’−テトラ
メチルエチレンジアミン実施例2及び比較例2 特開昭Go −239658実施例1に記載の方法によ
り表面を紫外線照射処理後、厚さ約0.5umのジアセ
チルセルロース下塗層を設けた厚さ1801ffnの無
色透明ポリエチレンテレフタレート(P E T)シー
トを支持体として用意した。20cm X 40cmの
長方形に裁断されたこのPETシートの紳辺部に厚さ5
001J]Tl。
ルアミドTris : )リス(ヒドロキシメチル)ア
ミノメタンTEMED:N、N、N’ 、N’−テトラ
メチルエチレンジアミン実施例2及び比較例2 特開昭Go −239658実施例1に記載の方法によ
り表面を紫外線照射処理後、厚さ約0.5umのジアセ
チルセルロース下塗層を設けた厚さ1801ffnの無
色透明ポリエチレンテレフタレート(P E T)シー
トを支持体として用意した。20cm X 40cmの
長方形に裁断されたこのPETシートの紳辺部に厚さ5
001J]Tl。
幅10mmのスペーサー板を固定した。架橋剤を1,3
゜5−トリアクリロイルへキサヒドロ−5−)リアジン
にかえたほかは実施例1及び比較例1と同じ組成のアク
リルアミドゲル形成用水溶液4種をそれぞれこのPET
支持体の上に窒素雰囲気中周囲温度25°Cて流延し、
各ゲル形成液に100W高圧水銀灯を10cmの距離か
ら!′1.!躬しつつ10分静置し架橋重合させ、つい
てその膜の上に厚さ631.lIr1の無色透明PET
フィルムをカバーフィルムとして密着1ffF’して4
種の電気泳動用ゲル媒体膜を形成した。
゜5−トリアクリロイルへキサヒドロ−5−)リアジン
にかえたほかは実施例1及び比較例1と同じ組成のアク
リルアミドゲル形成用水溶液4種をそれぞれこのPET
支持体の上に窒素雰囲気中周囲温度25°Cて流延し、
各ゲル形成液に100W高圧水銀灯を10cmの距離か
ら!′1.!躬しつつ10分静置し架橋重合させ、つい
てその膜の上に厚さ631.lIr1の無色透明PET
フィルムをカバーフィルムとして密着1ffF’して4
種の電気泳動用ゲル媒体膜を形成した。
得られた電気泳動用ゲル媒体膜について実施例1と同様
にしてDNA塩基配列解析の実験を行なったところ、実
施例1及び比較例1と同様な結果が得られた。
にしてDNA塩基配列解析の実験を行なったところ、実
施例1及び比較例1と同様な結果が得られた。
実施例3
紫外線照射処理で表面を親水性にした厚さ180μm、
サイズ20cm X 40cmの平滑表面の無色透明P
ETフィルムの嶽辺部に厚さ300μmのスペーサー板
を固定した支持体を用意した。このPET支持体の上に
第2表に記載の組成のゲル形成液を流延塗布し9周囲温
度25℃で500Wキセノン放電灯照射下窒素雰囲気中
で架橋重合させ、ついてその膜の上に厚さ631皿の無
色透明PETフィルムをカバーフィルムとして密着積層
してポリアクリルアミ!・水性ゲル膜を形成した。
サイズ20cm X 40cmの平滑表面の無色透明P
ETフィルムの嶽辺部に厚さ300μmのスペーサー板
を固定した支持体を用意した。このPET支持体の上に
第2表に記載の組成のゲル形成液を流延塗布し9周囲温
度25℃で500Wキセノン放電灯照射下窒素雰囲気中
で架橋重合させ、ついてその膜の上に厚さ631皿の無
色透明PETフィルムをカバーフィルムとして密着積層
してポリアクリルアミ!・水性ゲル膜を形成した。
得られたゲル膜に刃物を用いて裁断してシャークスティ
ース状のサンプル注入スロットを設けたところ、その切
口断面は滑らかでゲル膜の破壊は見られなかった。
ース状のサンプル注入スロットを設けたところ、その切
口断面は滑らかでゲル膜の破壊は見られなかった。
このゲル膜を用いて実施例1と同様にしてDNA塩基配
列解析の実験を行なったところ、実施例1と同様な結果
が11)られた。
列解析の実験を行なったところ、実施例1と同様な結果
が11)られた。
本発明のポリアクリルアミド水性ゲル膜は高分解能を維
持したまま、硬さが増加し、サンプル注入スロットの打
抜き処理がしやすい、ゲル膜の切断面が滑らかであると
いう加工性の改善が明らかである。
持したまま、硬さが増加し、サンプル注入スロットの打
抜き処理がしやすい、ゲル膜の切断面が滑らかであると
いう加工性の改善が明らかである。
口]ワ[口
第 2 表
ゲル形成液の成分
Claims (4)
- (1)アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在下に
架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲル、およ
び変性剤として少なくとも1個のカルバモイル基をもつ
化合物を含む電気泳動用媒体において、さらに水溶性セ
ルロース誘導体を少量含むことを特徴とする電気泳動用
媒体。 - (2)水溶性セルロース誘導体の含有量がゲル媒体の容
積に対して1.0w/v%以下である特許請求の範囲第
1項に記載の電気泳動用媒体。 - (3)水溶性セルロース誘導体がメチルセルロースであ
る特許請求の範囲第2項に記載の電気泳動用媒体。 - (4)前記変性剤が尿素である特許請求の範囲第1項な
いし第3項に記載の電気泳動用媒体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61214878A JPS6370156A (ja) | 1986-09-11 | 1986-09-11 | 電気泳動用媒体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61214878A JPS6370156A (ja) | 1986-09-11 | 1986-09-11 | 電気泳動用媒体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6370156A true JPS6370156A (ja) | 1988-03-30 |
Family
ID=16663063
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61214878A Pending JPS6370156A (ja) | 1986-09-11 | 1986-09-11 | 電気泳動用媒体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6370156A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL1005027C2 (nl) * | 1997-01-17 | 1998-07-20 | Franciscus Matheus Everaerts | Werkwijze voor het wijzigen van de viscositeit of doorlaatbaarheid van een medium. |
-
1986
- 1986-09-11 JP JP61214878A patent/JPS6370156A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL1005027C2 (nl) * | 1997-01-17 | 1998-07-20 | Franciscus Matheus Everaerts | Werkwijze voor het wijzigen van de viscositeit of doorlaatbaarheid van een medium. |
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