JPS6370157A - 電気泳動用媒体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は蛋白等の生体高分子成分、又はその仙の高分子
の分離又は分析のために用いられるポリアクリルアミド
系水性ゲル電気泳動用媒体に閏するものであり、特にゲ
ル媒体の高い分離性能を保持したままゲル媒体の硬さを
増加させ加工性を改善したポリアクリルアミド系水性ゲ
ル電気泳動用媒体の組成に間するものである。

［従来技術］ 近年において、電気泳動分離分析法は生体成分の分な分
析に多用されており、特に蛋白の分離分析は疾病診断の
ための生化学検査において頻繁に用いられている。

膜又はシート状の電気泳動用媒体としては古くから濾紙
が用いられていたが、最近では分離性能の良好なアガロ
ース水性ゲル電気泳動用媒体膜やポリアクリルアミド系
水性ゲル電気泳動用媒体膜（以下、ポリアクリルアミド
ゲル膜又はゲル膜ということがある）が用いられるよう
になり、特に分子篩効果を有するボリアクリルア、ミド
ゲル膜は現在最も多く利用されている。

この目的に用いられるポリアクリルアミドゲル膜は２通
常アクリルアミドのような単量体約とＮ。

Ｎ′−メチレンビスアクリルアミドのような二官能性ま
たは多官能性の架橋剤約の混合物と重合開始剤を含む約
３ｗ％〜約３０ｗ％の水溶液中（液層叉は液膜状！！Ｊ
）で単量体と架橋剤を架橋重合させることにより形成さ
れている。

近年では電気泳動分析が頻繁に利用されるようになって
おり、これに応じてポリアクリルアミドゲル膜のズ要も
飛躍的に高まっている。従って電気泳動の実施に適した
ポリアクリルアミドゲルｌＩりを短時間に多数製造、す
なわち大量生産し、それを電気泳動操作実施者に供給す
るシステムの確立が望まれている。

ポリアクリルアミドゲル膜の大量生産を可能にする一つ
の方法としては、長尺状の有機ポリマーフィルムを一定
速度で連続的に移動させ、そのフィルムの上に架橋重合
しろるポリアクリルアミドゲル形成液（以下、ゲル形成
液という）を不活性ガス雰囲気中（例、窒素ガス中）で
塗布し、塗布層をラジカル架橋重合させる方法が有利で
ある。

長尺状に製造した電気泳動用媒体を実際に使用できる形
態にするためには、裁断、サンプルスロットの付設等の
刃物によるポリアクリルアミドゲル膜の加工が、ゲル膜
の破壊や切断面近傍の形状の変化をともなうことなく、
容易かつ確実に実施できる必要がある。しかし従来のゲ
ル膜ではアクリルアミド濃度を下げるとゲルが柔らかく
なり。

刃物による加工が困難であった。

［発明の目的コ 本発明の目的は蛋白等の生体高分子成分、又はその他の
高分子の分離又は分析のために用いられるポリアクリル
アミド系水性ゲル電気泳動用媒体（以下、ゲル媒体とい
うことがある）において。

高分子に対する高分離能を維持したままゲル媒体の硬さ
を増加させ加工を容易確実に実施できるように改善した
ゲル媒体を提供することである。

［発明の構成］ 本発明は、アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在
下に架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲル電
気泳動用媒体において、さらに水溶性セルロース誘導体
を少量含むポリアクリルアミド系水性ゲル電気泳動用媒
体である。

［発明の構成の詳細な説明コ 本発明においてアクリルアミド系化合１カ（単量体）と
架橋剤は、水溶液または水分散液として水に溶解または
分散させておき、水中で両片を架橋重合させて、架橋重
合した水性ゲル媒体を形成させる。本明細書においては
特にことわらないかぎり、（水に）溶解と（水に）分散
の両者を含めて単に（水に）溶解といい、水溶液と水分
散液の両者を含めて単に水溶液という。溶媒または分散
媒としては、水だけでなく、所望により加えられる有機
溶媒を含む水−有機溶媒混合物をも包含する。

本発明に用いることができるアクリルアミド系化合物（
単量体）の例としては、アクリルアミド。

Ｎ−メチルアクリルアミド、　Ｎ、Ｎ−ジメチルアクリ
ルアミド、Ｎ−（ヒドロキシメチル）アクリルアミド。

ジアセトンアクリルアミド等のアクリルアミドホモログ
がある。これらの化合物は単独で、または２種以上を組
合せて用いることができる。これらの化合物のうちでは
アクリルアミドが好ましく。

またアクリルアミドと他のアクリルアミド系化合物の１
種以上との併用も好ましい。

架橋剤としてはｒ　Ｅ　Ｉｅｃｔｒｏｐｌ＋ｏｒｅｓｉ
ｓＪ２（４）、２１３−２１９（＋９８１）、同誌２（
４）、２２０−２２８（１９８１）等に記載の二官能性
架橋剤化合物、特開昭６１−２０５８等に記載の三官能
性以上の架橋剤化合物を用いることがＣきる。二官能性
架橋剤の具体例として、　Ｎ、Ｎ’−メチレンビスアク
リルアミド（Ｂ　Ｉ　Ｓ）；Ｎ、Ｎ’−プロピレンビス
アクリルアミド（ＰＢＡ）ニジアクリルアミドジメチル
エーテル（Ｄ　Ａ　Ｅ）　；　１，２−ジアクリルアミ
ドエチレングリコール（Ｄ　Ｅ　Ｇ）　；エチレンウレ
アビスアクリルアミド°（Ｅ　Ｕ　Ｂ）　；エチレンジ
アクリレ−）　（Ｅ　Ｄ　Ａ）　Ｓ　Ｎ、Ｎ’−ジアリ
ルタルタルジアミド（Ｄ　Ａ　Ｔ　Ｄ　）；Ｎ、Ｎ’−
ビスアクリリルシスタミン（Ｂ　Ａ　Ｃ）がある。三官
能性架橋剤の具体例として、　１，３．５−トリアクリ
ロイルへキサヒドロ−Ｓ−トリアジン（ＴＡＨＴ）；　
）リアリルシアヌレート（ＴＡＣ）；　）リアリルイソ
シアヌレート（ＴＡＩＣ）等がある。これらの架橋剤の
うちではＢＩＳとＴＡＨＴが好ましい。架橋剤は２種以
上を組合わせて用いることもてきる。

架橋剤の量は、単量体と架橋剤の合計重量に対して約１
ｗ％から約３０ｗ％、好ましくは約２Ｗ％から約１０ｗ
％の範囲で用いられる。

本発明のゲル媒体にはアガロースを添加することができ
る。アガロースとしては、特開昭５５−５７３０　、特
開昭５５−１１０９４６　、特表昭５７−５０２０９８
　、特開昭５９−１２６２３６等に記載の低電気浸透性
アガロース、中電気浸透性アガロース、高電気浸透性ア
ガロースのいずれも用いることができる。アガロースの
添加量は単量体と架橋剤を含む水性ゲルの容積に対して
約０．２讐／ｖ％から約２．０讐／ｖ％、好ましくは約
０．３讐／Ｖ％から約１，２讐／ｖ％の範囲である。

本発明のゲル媒体には水溶性セルロース誘導体以外の水
溶性ポリマーを添加することができる。

水溶性ポリマーとしては特開昭５９−１２６２３６　、
特開昭６０−６０５４８等に記載の分子量約１万から約
１００万の範囲の付加重合型または縮重合型の水溶性の
非イオン性ポリマー、特開昭６１−１８８５２に記載の
ビニルスルホニル基等含有の架橋性アクリルアミド系コ
ポリマーを用いることができる。付加重合型の水溶性の
非イオン性ポリマーの例としてポリアクリルアミド、ポ
リビニルアルコール、ポリビニルピロリドンがある。縮
重合型の水溶性の非イオン性ポリマーの例としてポリエ
チレングリコール、ポリプロピレングリコールがある。

架橋性アクリルアミド系コポリマーの例として、　Ｎ−
［［３−（ビニルスルホニル）プロパンアミドコメチル
コアクリルアミド−アクリルアミドコポリマー；　Ｎ−
［［３−（２−クロロエチルスルホニル）プロパンアミ
ドコメチルコアクリルアミド−アクリルアミド−Ｎ−（
１、Ｉ−ジメチル−３−オキソブチル）アクリルアミド
コポリマーがある。これらの水溶性ポリマーのうちでは
ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、　Ｎ−
［［３−（ビニルスルホニル）プロパンアミドコメチル
コアクリルアミド−アクリルアミドコポリマーが好まし
い。水溶性ポリマーの添加量は、付加重合型または縮重
合型の水溶性の非イオン性ポリマーの場合、単量体と架
橋剤の合計Ｍ量に対して約２−％から約１００−％、好
ましくは約５ν％から約５０ｗ％の範囲、架橋性アクリ
ルアミド系コポリマーの場合。

アクリルアミド系化合物の重量に対して約１ｗ％から約
５０−Ｊ％、好ましくは約５−％から約４０讐％の範囲
である。

アガロースおよび／または水溶性ポリマーをゲル媒体に
添加する時期は通常単量体と架橋剤を水に溶解する時か
らポリアクリルアミド系水性ゲルの形成時までの間が好
ましい。

本発明のゲル媒体の成分の特徴をなす水溶性セルロース
誘導体は、炭素原子数１から３のアルキル基、又は炭素
原子数１から４のヒドロキシアルキル基によりヒドロキ
シル基の一部又は実質的に全部がエーテル１ヒされた水
溶性セルロースエーテル類である。セルロースエーテル
の例として、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒ
ドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル
セルロース、ヒドロキシブチルメチルセルロースがあり
、これらのうちでメチルセルロースが好ましい。水溶性
セルロースエーテルは、一般に分７−ｆｉ約８千から約
１００万、好ましくは約１万から約３０万の範囲のもの
を用いることができる。水溶性セルロース誘導体の添加
量は単量体と架橋剤を含む水性ゲル媒体の容積に対して
約１．０讐／ｖ％以下、好ましくは約０．０５讐／Ｖ％
から約０．５讐／ｖ％までの範囲である。水溶性セルロ
ース誘導体の添加時期は単量体と架橋剤を水に溶解する
時からポリアクリルアミド系水性ゲルの形成時までの間
が好ましい。

本発明の電気泳動用媒体を蛋白質または複合蛋白質（例
えば、リボプロティン、グリコプロティン等）の分前ま
たは分析に用いる場合には、変性剤として陰イオン性界
面活性剤を含有させることが好ましいか、または必須で
あることが多い。陰イオン性界面活性剤を電気泳動媒体
に含有させることにより蛋白質または複合蛋白質の効率
的な分離とそれらの分子型測定が可能になる。？ｔｉ気
泳動媒体を核酸フラグメントの分離または分取の目的に
用いる場合には陰イオン性界面活性剤の添加は不要であ
る。

陰イオン性界面活性剤の例としてはアルキル硫酸塩をあ
げることができ、殊に炭素原子数１０以上の長鎖アルキ
ル基を有するアルキル硫酸塩が好ましく用いられる。塩
を形成する陽イオンとしては。

ナトリウムイオン、カリウムイオン、リチウムイオン等
のアルカリ金属イオンが一般的であり、これらのうちで
はナトリウムイオンが用いやすい。

アルキル硫酸塩のうちではＦデシル硫酸塩（ナトリウム
塩、カリウム塩、リチウム塩等）が好ましく、なかでも
ドデシル硫酸ナトリウム（Ｓ　Ｄ　Ｓ）が最も好ましい
。

変性剤としての陰イオン性界面活性剤の添加量は単量体
と架橋剤を含む水性ゲルの容積に対して約２．０豐／■
％以下、好ましくは約０．１豐／■％から約１．５豐／
■％の範囲である。変性剤の添加時期は通常単量体と架
橋剤を含む諸成分を水に溶解する時から水性ゲルの形成
時までの間が好ましい。

ゲル媒体にはノニオン性、アニオン性又は両性界面活性
剤を添加することができる。界面活性剤の例として。

ＣＢＦ１７Ｓ０２Ｎ　　（ＣＨ２ＣＨ２０）＋４−ＨＥ
ｔ 等のノニオン性界面活性剤。

Ｎａ０３Ｓ　　ＣＨＣＯＯＣＨ２ＣＨ（Ｅｔ）Ｃ４Ｈ９
■ ＣＨ２Ｃ００ＣＨ２ＣＨ（Ｅｔ）Ｃ４Ｈ９等のアニオン
性界面活性剤。

ｌ工１１１ ｅ Ｃ，、Ｈ２３ＣＯＮ　　Ｈ−（ＣＨ２＞、　　Ｎ＋　’
−ＣＨ２ＣＯＯ−ｅ 等の両性界面活性剤がある。界面活性剤の添加量は、単
量体と架橋剤を含む水性ゲルの容積に対しで、ノニオン
性又はカチオン性界面活性剤の場合。

約Ｉ　Ｘ　１０−４から約５Ｘ１０−’ｗ／ｖ％、好ま
シくハ約ｌＸｌ０〜３から約Ｉ　Ｘ　１０−２豐／■％
の範囲、アニオン性界面活性剤の場合、約Ｉ　Ｘ　１０
−４から約５ＸｌＯ−”ｗ／Ｖ％、好ましくは約ｌＸｌ
０−３から約５　Ｘ　１０−２豐／■％の範囲である。

本発明の電気泳動用ゲル媒体には湿潤剤としてグリセロ
ール、エチレングリコール等のポリオール化合物を添加
することができる。その添加量は水性ゲル媒体の容積に
対して約１ｗ％から約４０ｗ％の範囲である。

本発明の電テ）（泳動用ゲル媒体には電気泳動される試
料に応して電気泳動実施時のｐ］１（直を２．５から１
Ｏ９０の範囲内の所望の値に緩衝できる公知の緩衝剤か
ら適宜選択して含有させることができる。電気泳動ゲル
媒体を核酸フラグメントの分離または分取に用いる場合
には８．０から１０．０．好ましくは８．０から９．０
の範囲内の所望の値に緩衝できる公知の緩衝剤から適宜
選択して含有させることができる。

用いうろ緩衝剤としては２日本化学会編「化学便覧　基
礎編」（東京、丸善件初、　１９６６年発行）　１３１
２−１３２０頁、　Ｒ，Ｍ、Ｃ，Ｄａｗｓｏｎ　ｅｔ　
ａｌ［ｒＤａｔａ　ｆｏｒＢ　ｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　
Ｒｅ５ｅａｒｃｈＪ第５ｅａｒｃｈＪｏｒｄ　ａｔ　ｔ
ｈｅＣＩａｒｅｎｄｏｎ　Ｐ　ｒｅｓｓ、　１９６９年
発行）　４７６　５０８頁。

ｒＢ　ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　５．４６７頁以降（
１９６６年）＋　ｒＡｎａ−ｌｙｔｉｃａｌ　　Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙＪ　１ｊ１３−、３００−３１０頁
（１９８０年）等に記載のｐＨ緩衝剤系がある。

１）Ｈ２，５〜１０．０の範囲のｐＨ緩衝剤の具体例と
して。

バルビツールを含む緩衝剤；トリス（ヒドロキシメチル
）アミノメタン（Ｔ　ｒｉｓ）を含む緩衝剤；燐酸塩を
含む緩衝剤硼酸塩を含む緩衝剤：酢酸または酢酸塩を含
む緩衝剤；杓１１酸または杓斗酸塩を含む緩衝剤；乳酸
または乳酸塩を含む緩ｔ？ｊ剤；グリシンを含む緩衝剤
；　Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（
Ｂｉｃｉｎｅ）　：　Ｎ−２−ヒドロキシピペラジン−
Ｎ’−２・ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸Ｎａ塩
またはＩ（均等；Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン
−Ｎ’−３−スルホン酸Ｎａ塩またはＩ（塩等；　Ｎ−
［）リス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミノプ
ロパンスルホン酸Ｎａ塩またはに塩等；およびこれらの
いずれかと必要により組合せられる酸、アルカリまたは
塩がある。好ましい緩衝剤の具体例として、燐酸二水素
カリウム−燐酸水素二ナトリウム；Ｔｒｉｓ−硼酸ナト
リウム；Ｔｒｉｓ−硼酸ナトリウム−ＥＤＴＡ・２Ｎａ
塩；’［’ｒｉｓ−杓ｉｗｉ；パルビタールナトリウム
−酢酸ナトリウム；パルビタールナトリウム−塩酸；パ
ルビタールーバルビタールナトリウム；酢酸−酢酸ナト
リウム；乳酸−乳酸ナトリウム；拘（Ｒ酸−燐酸二水素
ナトリウム；　Ｂｉｃｉｎｅ　；　１（ＥＰＰＳＯ；１
１　Ｅ　Ｐ　Ｐ　Ｓ　Ｏナトリウム塩；　ＥＰＰＳ　；
　ＥＰＰＳナトリウム塩；ＴＡＰＰＳ　；　ＴＡＰＰＳ
ナトリウム塩等がある。

ｐ　Ｉ＋　８　、０〜１０．０の範囲のｐＨ緩衝剤の具
体例として。

Ｔｒｉｓ　；　Ｂｉｃｉｎｅ　；　Ｎ−２−ヒドロキシ
ピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパン−３−スル
ホン酸Ｎａ塩またはに塩等；Ｎ・２−ヒドロキシエチル
ピペラジン−Ｎ′−３−スルホン酸Ｎａ塩またはに塩等
；Ｎ（）リス（ヒドロキシメチル）メチル］−３−アミ
ノプロパンスルホン酸Ｎａ塩またはに塩等；およびこれ
らのいずれがと必要により組合せられる酸、アルカリま
たは塩がある。好ましいｐＨ緩衝剤系の例としてＴｒｉ
ｓ−硼酸−ＥＤＴＡ・２Ｎａ塩（ｐＨ８，２〜８．３用
組成）がある。

本発明の電気泳動用ゲル媒体は実質的に無色透明である
ことが泳動像の検出または読取りに一般的に好ましい。

本発明のゲル媒体をゲル膜として用いる場合には、実質
的に電気不伝導性で水不浸透性の平滑な表面のシート状
（フィルム状、または平板状）支持体の上に設けるのが
好ましい。実質的に電気不伝導性で水不浸透性の平滑な
表面のシート状支持体としては公知のガラス板、有機ポ
リマーシート等を用いることができる。有機ポリマーシ
ートの具体例としてポリエチレンテレフタレート、ビス
フェノールＡのポリカルボネート、ポリスチレン。

セルロースエステル（例、セルロースジアセテート。

セルローストリアセテート、セルロースアセテートプロ
ピオネート等）等のポリマーからなる厚さ約５０１ｍか
ら約２ｍｍ、好ましくは約８０１ｍから約５００Ｌｆｆ
１１の範囲の透明な、すなわち波長約２００ｎｍから約
９００ｎｍの範囲内の少なくとも一部の範囲の波長の電
磁輻射線を透過させる平滑な表面を有するシート状また
は平板状の支持体がある。有機ポリマー支持体を用いる
場合にはその表面を親水化しゲル膜との接着を良好にす
るために、紫外線Ｖ！射、グロー放電処理、コロナ放電
処理、火焔処理、電子ｙＡ照射、ケミカルエツチング、
電解エツチング等の公知の表面処理方法を適用すること
ができる。有機ポリマー支持体の表面には必要に応じて
特開昭５９−１６４９５０　、特開昭５９−２１２７５
２　、特開昭６０−１９４３４９゜特開昭６０−２３９
６５９　、特開昭６０−２４４８５０　、特開昭６１−
１４５５７等に記載の下塗層または接着層を設けて支持
体の上に設けられるゲル膜と支持体との接着を強固にす
ることができる。

本発明のゲル媒体は前述の諸成分とラジカル重合開始剤
組成物を含む水溶液（以下、ゲル形成液ということがあ
る）を平面状支持体の上に層状に流延または塗布し９分
子状酸素の不存在下で、必要により紫外線又は可視光の
照射および／または加熱して、単量体くアクリルアミド
系化合物）と架橋剤とが架橋重合したポリアクリルアミ
ド系水性ゲル媒体膜として製造され用いられる。

ラジカル重合開始剤組成物としてはｒ　Ｅ　Ｉｅｃｔｒ
ｏ−ｐｈｏｒｅｓｉｓＪＫ（４）、２１３−２１９（１
９８１）、同誌２（４）、２２０−２２８（１９８１）
、特開昭５９−１２６２３６　、青米、永井編「最新電
気泳動法Ｊ（１９７３年発行）等に記載の低温ラジカル
重合開始剤組成物のうちから適宜に選沢して用いること
ができる。ラジカル重合開始剤組成物の例として、β−
（ジメチルアミノ）プロピオニトリル（ＤＭＤＰＮ）−
ペルオクソニ硫酸アンモニウム混合物；　Ｎ、Ｎ、Ｎ’
、Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）
−ペルオクソニ硫酸アンモニウム混合物；ＴＥＭＥＤ−
リボフラビン混合物；ＴＥｈｉＥＤ−リボフラビン−過
酸化水素混合物；リボフラビンーペルオクソニ硫酸アン
モニウム混合物；リボフラビン−過酸化水素混合物（リ
ボフラビン等の光増感剤併用の場合には紫外線又は可視
光の照射を併用する）等がある。ラジカル重合剤組成物
の添加量は単量体と架橋剤の合計重量に対して約０．３
ν％から約５．０ν％、好ましくは約０．５−％から約
３．０ν％の範囲である。

本発明の電気泳動用媒体はゲル濃度としてＳ。

Ｈｊｅｒｔｅｎ　：　　ｒＡｒｃｈｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｂ
　ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄＢ　１ｏｐｈｙｓｔ
ｃｓ」１１（Ｓ　ｕｐｐｌ、）＋　１４７−１５１（１
９６２）に記載の定義に従って表示して、単量体、架橋
剤および水からなるゲル媒体の容積に対して、単量体と
架橋剤の合計量が約３　ｗ／ｖ％から約３０ν／Ｖ％の
範囲で用いられる。

本発明のゲル媒体を膜状で用いる場合には、ゲル膜の厚
さは約５０ｕｍから約５ｎｕａ　、好ましくは約８０−
から約５００ｕｍの範囲である。ＤＮＡ等の核酸フラグ
メント分取に用いる場合には約３００１１１Ｔｌから約
３ｍｍの範囲が好ましい。本発明のゲル膜はＫＮ化して
も分１１ｉｌｔｒＱが良好なので、ゲル膜の厚さを約５
０−から約３００−の薄層にして泳動像の解像度を高め
ることができろ。

ゲル形成液を平面状の支持体の表面上で架橋重合させる
場合には、ゲル形成液の流延塗布とその後の架橋重合を
窒素ガス雰囲気中等の分子状故素の不存在下で実施する
か、あるいは流通塗布したゲル形成液の表面上に直ちに
カバー用フィルム。

シートまたは板等の被覆材料で覆い架Ｉａ重合させるこ
とが好ましい。この目的に使用される被覆材料としては
前述の平面状支持体と同様な素材からなるものを用いる
ことができる。カバーフィルムが有機ポリマーフィルム
である場合、その厚さは約３００ＬＦ以下であり、実用
的な範囲としては約４１１Ｔｌから約２００ｕｍ＋好ま
しくは約約４１ｍから約１００１１１Ｔ＋である。被覆
材料がガラス板の場合、その厚さは平面状ガラス板と同
様な厚さであればよい。

本発明のゲル媒体は公知のポリアクリルアミド系水性ゲ
ル媒体と同様にして調製することができる。また９本発
明のゲル媒体はゲル膜にして前述の諸文献や特許明細書
等に記載の公知の方法に従って、水平型および垂直型ス
ラブ電気泳動法等に用いることができる。

■ＴＩ］Ｉｔ 実施例１及び比較例１ 平滑表面の厚さ２ｍｍ、サイズ２０ｃｍ　Ｘ　４０ｃｍ
の長方の平面状ガラス板２枚を、縁辺部に厚さ４００１
．１１ｒ＋、幅１０ａ＋ｍのスペーサー板を固定して対
向させてガラスモールドを形成し、ガラスモールドの中
に第１表記載のアクリルアミドゲル形成用水溶液を流し
込んだ。周囲温度２５℃で各ゲル形成液に１００Ｗ高圧
水銀灯を１０ｃｍの距離から照射しつつ１０分静置し２
枚のガラス板の間で架橋重合させて厚さ４００１ＪＩＴ
ｌのポリアクリルアミド水性ゲル電気泳動用ゲル媒体膜
を形成した。

得られた４種のゲル膜の弾性率を測定したところ、第１
表に記載のとおりであった。

これらの電気泳動用ゲル媒体膜を用いて下記４種の標準
蛋白質の電気泳動による分離分析の実験を常法に従い実
施したところ、いずれの蛋白質についても正常な電気泳
動パターンで優れた分離を示し、精度の高い分離分析を
行うことができた。

標準蛋白質 チトクロームＣ（分子ｆｆｉ１２４００）キモトリプシ
ノーゲンＡ（分子１１２５０００）オボアルブミン　　
　　（分子量４５０００）ウシ血清アルブミン　　（分
子ｆ１６７０００）染色は０．１％コーマ−シーブルー
（Ｃｏｏｍａｓｓ　ｉｅＢ　１ｕｅ）　Ｒ−２５０水溶
液にゲル膜を浸漬して行なった。

このように本発明のゲル膜は硬さが増加し、サンプル注
入スロットの打抜き処理がし・やすい、ゲル膜の切断面
が滑らかであるという加工性の改善が明らかであり、ま
た、蛋白等の高分子物質の分離分析用に適した電気泳動
特性を維持していることが明らかである。

圓工至亘 第　　１　　表 ［ｉｌ　　Ｂｉｓ　　：Ｎ、Ｎ’・メチレンビスアクリ
ルアミドＳＯＳ　　＋ドデシル硫酸ナトリウム ＴＥＭＥＤ：Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラメチルエチレ
ンジアミン実施例２及び比較例２ 特開昭６０−２３９６５９実施例１に記載の方法により
表面を紫外線照射処理後、厚さ約０．５ｕｍのジアセチ
ルセルロース下塗層を設けた厚さ１８０ｕｍの無色透明
ポリエチレンテレフタレート（Ｐ　Ｅ　Ｔ）シートを支
持体として用意した。２０ｃｍ　Ｘ　４０ｃｍの長方形
に裁断されたこのＰＥＴシートの縁辺部に厚さ５００１
ｍ。

幅１０＋ｎｍのスペーサー板を固定した。架橋剤を１，
３゜５−トリ７クリロイルへキサヒドロ−８−トリアジ
ンにかえたほかは実施例１及び比較例１と同じ組成のア
クリルアミドゲル形成用水溶液４種をそれぞれこのＰＥ
Ｔ支持体の上に窒素雰囲気中周囲温度２５℃で流延し、
各ゲル形成液に１００Ｗ高圧水銀灯を１０ｃｍの距離か
ら照射しつつ１０分静置し架橋重合させ、ついてその膜
の上に厚さ６３１．ｎの無色透明ＰＥＴフィルムをカバ
ーフィルムとして密着積層して４種の電気泳動用ゲル媒
体膜を形成した。

得られた電気泳動用ゲル媒体膜について実施例１と同様
にして４種の標準蛋白質の分離分析の実験を行なったと
ころ、実施例１及び比較例１と同様な結果が得られた。

実施例３ 紫外線照射処理で表面を親水性にした厚さ１８０…、サ
イズ２０ｃｍ　Ｘ　４０ｃｍの平滑表面の無色透明ＰＥ
Ｔフィルムの縁辺部に厚さ２１Ｔｖ＋のスペーサー板を
固定した支持体を用意した。このＩ）　Ｅ　Ｔ支持体の
上に第２表に記載の組成のゲル形成）夜を流延塗布し９
周囲温度２５℃で５００Ｗキセノン放電灯照射下窒素雰
囲気中で架橋重合させ、ついでその膜の上に厚さ１００
−の無色透明ＰＥＴフィルムをカバーフィルムとして密
着積層してポリアクリルアミド水性ゲル膜を形成した。

得られたゲル膜に刃物を用いて裁断してシャークスティ
ース状のサンプル注入スロットを設けたところ、その切
口断面は滑らかでゲル膜の破壊は見られなかった。

このゲル膜を用いて大腸菌のプラスミド’ｐＢＲ−３２
２を制限酵素Ａｓｕ　Ｉで処理したＤＮＡフラグメント
試料を常法に従い電気泳動させ９次いて電気泳動後のゲ
ル膜のカバーフィルムを静かに剥して除去し、エチジウ
ムプロミド染色してＯＮ　、Ａの分解パターンの泳動像
を観察したところ正常な染色パターンを示した。ついで
、ＤＮＡフラグメントをゲル膜から切り出す操作を実施
したところ容易であった。

本発明のポリアクリルアミド水性ゲル膜は高分解能を維
持したまま、硬さが増加し、サンプル注入スロットの打
抜き処理がしやすい、ゲル膜の切断面が滑らかであると
いう加工性の改善が明らかである。

圓］コ１囲 第　　２　　表 ゲル形成液の成分

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）アクリルアミド系化合物と架橋剤が水の存在下に
   架橋重合してなるポリアクリルアミド系水性ゲル電気泳
   動用媒体において、さらに水溶性セルロース誘導体を少
   量含むことを特徴とする電気泳動用媒体。
2. （２）水溶性セルロース誘導体の含有量がゲル媒体の容
   積に対して１．０ｗ／ｖ％以下である特許請求の範囲第
   １項に記載の電気泳動用媒体。
3. （３）水溶性セルロース誘導体がメチルセルロースであ
   る特許請求の範囲第２項に記載の電気泳動用媒体。
4. （４）前記ゲル媒体がさらに変性剤として陰イオン界面
   活性剤を含む特許請求の範囲第１項ないし第３項に記載
   の電気泳動用媒体。
5. （５）前記陰イオン界面活性剤がアルキル硫酸塩である
   特許請求の範囲第４項に記載の電気泳動用媒体。
6. （６）前記アルキル硫酸塩がドデシル硫酸のアルカリ金
   属塩またはアンモニウム塩である特許請求の範囲第５項
   に記載の電気泳動用媒体。
7. （７）上記アルキル硫酸塩がドデシル硫酸のナトリウム
   塩またはカリウム塩である特許請求の範囲第６項に記載
   の電気泳動用媒体。