JPH0556821B2 - - Google Patents

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JPH0556821B2
JPH0556821B2 JP61090623A JP9062386A JPH0556821B2 JP H0556821 B2 JPH0556821 B2 JP H0556821B2 JP 61090623 A JP61090623 A JP 61090623A JP 9062386 A JP9062386 A JP 9062386A JP H0556821 B2 JPH0556821 B2 JP H0556821B2
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JP61090623A
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Naohiko Sugimoto
Daijiro Nishio
Eiichi Hasegawa
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Fuji Photo Film Co Ltd
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Priority to US07/040,486 priority patent/US4897306A/en
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Description

【発明の詳现な説明】 発明の分野 本発明は、電気泳動甚媒䜓材料に関するもので
あり、さらに詳しくは特に蛋癜質等の生䜓高分子
成分の電気泳動分析に䜿甚するのに適した電気泳
動甚媒䜓材料に関するものである。
発明の背景 電気泳動分析の代衚的な態様ずしおは、ガラス
板支持䜓に寒倩、セルロヌス、セルロヌスアセテ
ヌト、デンプン、シリカゲル、ポリアクリルアミ
ド等の膜圢成材料を塗垃たたは流延しお補造した
電気泳動膜に緩衝液をしみこたせ、この䞊に分析
察象の物質を付着させ、支持䜓の䞡端に電圧をか
け、支持䜓の䞊たたは内郚で展開移動させた
のち、染色し、この染色した詊料の光孊濃床を枬
定しお物質の各成分の定量分析を行なう態様を挙
げるこずができる。
このような電気泳動分析および電気泳動膜の詳
现に぀いおは、電気泳動孊䌚線「電気泳動実隓法
改蚂第版」文光堂、1975幎発行、青本、氞
井線著「最新電気泳動法」広川曞店、1973幎発
行等に蚘茉されおいる。
近幎においお、電気泳動法は生䜓成分の分析に
倚甚されおおり、特に蛋癜分析は病気蚺断のため
の生化孊怜査においお頻繁に甚いられおいる。
電気泳動甚膜たたはシヌトずしおは叀くから濟
玙が甚いられおいたが、䞊述のように性胜䞊の面
から最近はアガロヌス膜やポリアクリルアミドゲ
ル膜が甚いられるようになり、特に分子ふるい効
果を有するポリアクリルアミドゲル膜は珟圚最も
倚く利甚されおいる。
ポリアクリルラミドゲル膜は、アクリルアミド
のような単量䜓を、重合觊媒の存圚䞋、
N′−メチレンビスアクリルアミドのような二官
胜性の架橋剀で酞玠䞍存圚条件䞋で重合架橋させ
るこずによ぀お埗られおいる。
なお、ポリアクリルアミドゲル膜の補造に際し
おは倉性剀ずしお陰むオン界面掻性剀が添加され
るこずが倚いが、蛋癜質分析甚ゲル膜の補造にお
いおは、倉性剀の必芁量が少ないため、湿最ゲル
膜に倉性剀氎溶液を塗垃する方法、ゲル膜を倉性
剀氎溶液に浞挬する方法等によりゲル膜内に倉性
剀を含浞させるこずができる。
䞊蚘の重合反応はラゞカル架橋重合であり、酞
玠の圱響により反応が阻害されるため、ポリアク
リルアミドゲル膜は酞玠を遮断した状態で調補す
る必芁がある。この理由から、珟圚では䞀般に、
ポリアクリルアミドゲル膜は枚のガラス板で圢
成されたセル䞀定の空間、たずえば玄0.3〜
mm厚の空間を有するものの䞭にゲル圢成液を泚
入し、酞玠を遮断した状態で架橋重合させおゲル
膜を圢成させおいる。しかし、この方法は二枚の
ガラス板の間でゲル膜を圢成するために、取り扱
い性が悪く、か぀ゲル膜の量産化が困難であるず
い぀た倧きな欠点を有しおいる。
以䞊のようにしお圢成したポリアクリルアミド
ゲル膜を電気泳動媒䜓ずしお甚いる電気泳動操䜜
は、たずえば、次のようにしお実斜される。
サンプルスロツトが䞊端郚に蚭けられたポリア
クリルアミドゲル膜をガラス板に挟んだたたの状
態で垂盎に配眮し、たず前電気泳動操䜜を行な぀
たのち、サンプルスロツト䞭に詊料を䞀定量泚入
し、次いで電気泳動操䜜を行なう。そしお䞀定時
間の電気泳動を行な぀た埌、片面のガラス板を泚
意深く陀去し、染色液䞭に浞挬しお、泳動分離し
た蛋癜質もしくはその誘導䜓、分解物などを染色
しお、泳動パタヌンを画像化する。
埓来のアクリルアミドゲル膜を甚いた電気泳動
媒䜓材料は䞊蚘のようにガラス板を甚いるために
取り扱い性に問題があり、しばしばガラスを割぀
たりしお実隓を倱敗するこずがある。この様な欠
点を改良した取り扱い性の良奜な電気泳動甚媒䜓
材料の開発は既にすすめられ、支持䜓ずしおポリ
゚チレンテレフタレヌトなどのプラスチツク材料
からなる支持䜓を甚い、その䞊にアクリルアミド
系化合物ず架橋剀ずを含む氎溶液を塗垃しお塗垃
局を圢成し、次いで窒玠雰囲気のような酞玠を遮
断した状態で高圧氎銀灯などを甚いおその塗垃局
衚面に玫倖線を照射し、架橋重合させポリアクリ
ルアミドゲル膜を生成させる方法が既に提案され
おいる。
䞊蚘のプラスチツク材料補の支持䜓を甚いた電
気泳動媒䜓材料は、その補造が容易で、取り扱い
性も良いずの利点を有する。そしお、蛋癜質など
の電気泳動も、その電気泳動媒䜓材料を甚いお行
なうこずができるが、本発明者が詳现に怜蚎した
ずころによるず、支持䜓ずしおガラス板を甚いお
補造した埓来の電気泳動媒䜓材料に比范するず、
その解像力が若干䜎䞋する傟向があるこずがわか
぀た。
発明の芁旚 本発明の目的は、新芏なプラスチツク補フむル
ムあるいはシヌトを支持䜓ずしお甚いたポリ
アクリルアミドゲル膜系電気泳動媒䜓材料を提䟛
するこずにある。
本発明の目的は、特にプラスチツク補フむルム
あるいはシヌトを支持䜓ずしお甚いたポリア
クリルアミドゲル膜系電気泳動媒䜓材料であ぀
お、支持䜓ずしおガラス板を甚いお補造した電気
泳動媒䜓材料ず同等もしくはそれ以䞊の解像力を
瀺す電気泳動媒䜓材料を提䟛するこずにある。
本発明は、アクリルアミド系化合物ず架橋剀ず
が氎の存圚䞋で架橋重合しおなるポリアクリルア
ミド系氎性ゲルからなり、陰むオン界面掻性剀を
含む電気泳動甚媒䜓局およびプラスチツク材料補
支持䜓を含む電気泳動甚媒䜓材料であ぀お、該電
気泳動甚媒䜓局ず支持䜓局ずの間に、該支持䜓材
料よりも酞玠透過係数が䜎い暹脂材料からなる局
厚が〜20Όの暹脂䞭間局が備えられおおり、
か぀該暹脂䞭間局ず支持䜓ずが圢成する積局䜓の
酞玠透過量が、10c.c.m2・atm・day以䞋である
こずを特城ずする電気泳動甚媒䜓材料にある。
発明の効果 本発明の電気泳動甚媒䜓材料は、䞊蚘のように
プラスチツク補支持䜓からの電気泳動媒䜓局ぞの
酞玠の透過、拡散を䜎䞋させるこずのできる暹脂
䞭間局が蚭けられおいるため、電気泳動甚媒䜓局
ポリアクリルアミドゲル膜の圢成のための架
橋重合反応が非垞に円滑に進行し、高床に均質な
電気泳動甚媒䜓局が圢成される。埓぀お、そのよ
うな暹脂䞭間局を備えおいないプラスチツク支持
䜓䞊に圢成された電気泳動甚媒䜓局に比范しお、
本発明の電気泳動甚媒䜓材料の電気泳動甚媒䜓局
は、曎に高い解像性を瀺す。
本発明においお、電気泳動媒䜓材料の電気泳動
局ず支持䜓偎ずの間に酞玠透過防止性の暹脂䞭間
局を付蚭するこずにより支持䜓ず暹脂䞭間局ずの
積局䜓の酞玠透過性を䜎䞋させた電気泳動媒䜓材
料の電気泳動特性特に解像力が向䞊する理由
は次のように掚定される。
電気泳動媒䜓材料のポリアクリルアミドゲル膜
は前述のように、アクリルアミド系化合物ず架橋
剀ずを含む氎溶液を支持䜓䞊に塗垃しお塗垃局を
圢成し、次いで窒玠雰囲気䞋のような無酞玠雰囲
気䞋で高圧氎銀灯などを甚いおその塗垃局衚面に
玫倖線を照射し、架橋重合させる方法により補造
される。この堎合、支持䜓ずその衚面䞊のアクリ
ルアミド系化合物ず架橋剀ずを含む氎溶液の塗垃
局ずは窒玠雰囲気に囲たれおいる。しかし、通垞
のプラスチツク補支持䜓は酞玠透過性を有しおお
り、埓぀お倧気雰囲気䞋に保持しおいたプラスチ
ツク補支持䜓はその内郚に少量の酞玠を保持しお
いるこずになる。このプラスチツク補支持䜓䞭の
酞玠は玫倖線の照射による加熱により、支持䜓か
ら遊離し、その䞀郚が反応䞭にアクリルアミド系
化合物ず架橋剀ずを含む塗垃局に溶け蟌み円滑な
架橋重合反応を阻害する。すなわち、塗垃膜での
架橋反応の進行䞭に支持䜓偎より酞玠が䟵入する
こずにより支持䜓偎の架橋反応が阻害され、その
結果、生成するゲル膜電気泳動甚媒䜓局の衚
面偎ず支持䜓偎ずで架橋重合床に差が発生するこ
ずになり、架橋重合床が䞍均䞀ずなるものず掚定
される。この掚定は、酞玠透過性胜の䜎いガラス
板を支持䜓ずしお甚いお同様な方法によりポリア
クリルアミドゲル膜を補造するず、埌述の参考䟋
に芋られるように高い解像力を瀺す電気泳動媒
䜓材料が埗られるこずからも裏付けられる。
すなわち、本発明の電気泳動媒䜓材料に蚭けた
䜎酞玠透過性の暹脂䞭間局は、そのようなプラス
チツク支持䜓からの遊離酞玠が、架橋反応に䟛せ
られるアクリルアミドを含む塗垃局に䟵入するの
を防ぐ圹目即ち、障壁ずしおの機胜を果すも
のず考えられる。
発明の詳现な蚘述 本発明の電気泳動甚媒䜓材料の支持䜓は、プラ
スチツク材料から圢成されるシヌト状物フむル
ム状物も含むである。このプラスチツク補シヌ
トずしおは、任意のプラスチツク材料から圢成し
たものを甚いるこずができる。奜たしいプラスチ
ツク材料の䟋ずしおは、ポリ゚チレンテレフタレ
ヌト、ビスプノヌルのポリカルボネヌト、ポ
リ塩化ビニル、ポリメチルメタクリレヌト、ポリ
゚チレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、セル
ロヌスアセテヌト、およびセルロヌスアセテヌト
プロピオネヌトをあげるこずができる。
プラスチツク材料補支持䜓は公知の衚面掻性化
凊理により衚面を芪氎化したものであるこずが奜
たしい。衚面芪氎化凊理のためには玫倖線照射、
グロヌ攟電凊理、コロナ攟電凊理、火焔凊理、電
子線照射、ケミカル゚ツチング、電解゚ツチング
等の公知の方法を適甚するこずができる。
支持䜓は、䞀般に厚さが玄50〜500Ό、奜た
しくは玄70〜300Όのものが甚いられる。
これたでに提案されおいるプラスチツク補支持
䜓を甚いた電気泳動甚媒䜓においおは、プラスチ
ツク補支持䜓䞊に、盎接あるいは接着剀局を介し
おポリアクリルアミドゲル圢成甚塗垃液が塗垃さ
れ、次いで窒玠雰囲気䞋にお架橋重合反応が行な
われおいる。
本発明の電気泳動甚媒䜓においおは、プラスチ
ツク補支持䜓䞊に酞玠透過係数が䜎い暹脂材料か
らなる暹脂䞭間局が蚭けられる。
䞊蚘の暹脂䞭間局は、局厚20Όに圢成したフ
むルムの状態における酞玠透過量が15c.c.m2・
atm・day以䞋の暹脂材料よりなるこずが奜たし
く、特に局厚20Όに圢成したフむルムの状態に
おける酞玠透過量が10c.c.m2・atm・day以䞋の
暹脂材料よりなるこずが奜たしい。奜たしい暹脂
材料の䟋ずしおは、塩化ビニリデン・塩化ビニル
共重合䜓、ポリビニルアルコヌル、ポリアクリロ
ニトリル、ポリ塩化ビニリデン、ビニルアルコヌ
ル・゚チレン共重合䜓、塩化ビニリデン・アクリ
ロニトリル共重合䜓、アクリロニトリル・メチル
アクリレヌト・ブタゞ゚ン共重合䜓などを挙げる
こずができる。なお、䞊蚘の酞玠透過量は、酞玠
透過量の枬定方法ずしお䞀般的に利甚されおいる
mocon法による枬定倀である。
䞊蚘暹脂䞭間局は、その局厚が〜20Όの範
囲にあるように調補する。
暹脂䞭間局ず䞊蚘支持䜓ずからなる積局䜓の酞
玠透過量は10c.c.m2・atm・day以䞋であり、さ
らにc.c.m2・atm・day以䞋であるこずが特に
奜たしい。
䞊蚘の暹脂䞭間局の䞊に盎接、あるいは接着剀
局などの他の䞭間局を介しお電気泳動甚媒䜓局が
蚭けられる。
次に電気泳動甚媒䜓局以䞋においお、ゲル媒
䜓局、ポリアクリルアミドゲル膜あるいは単にゲ
ル膜ずもいうに぀いお説明する。
ポリアクリルアミドゲル膜は、アクリルアミド
系化合物ず架橋剀ずを、氎溶液たたは氎分散液ず
しお氎䞭に溶解たたは分散させおゲル圢成液を調
補したのち、液䞭で䞡者を架橋重合させお架橋重
合した氎性ゲル膜ずしお圢成するこずにより埗る
こずができる。本明现曞においおは、特にこずわ
らない限り、氎䞭に溶解ず氎䞭に分散の
䞡者を含めお単に氎䞭に溶解ずいい、氎溶液
ず氎分散液の䞡者を含めお単に氎溶液ずいう。た
た、溶媒たたは分散媒ずしお、所望により加えら
れる有機溶媒ず氎の混合物をも包含する。
ポリアクリルアミドゲル膜の圢成に甚いるこず
ができるアクリルアミド系化合物の䟋ずしおは、
アクリルアミド、−メチルアクリルアミド、
−ゞメチルアクリルアミド、−ヒドロ
キシメチルアクリルアミド、ゞアセトンアクリ
ルアミド等のアクリルアミド系化合物やメタクリ
ルアミド等のメタクリルアミド系化合物が挙げら
れ、これらの化合物は単独で、あるいは二皮以䞊
を䜵甚しお甚いるこずができる。これらのアクリ
ルアミド系化合物のうちではアクリルアミドが最
も奜たしく、たたアクリルアミドず他のアクリル
アミド系化合物、メタクリルアミド系化合物の䞀
皮以䞊の䜵甚も奜たしい。
架橋剀ずしおは「Electrophoresis」1981、、
220−228等に蚘茉の公知の化合物䞀皮たたは二
皮以䞊の組合せを甚いるこずができる。架橋剀
の具䜓䟋ずしおは、N′−メチレンビスアク
リルアミドBISN′−プロピレンビスア
クリルアミドPBAゞアクリルアミドゞメ
チル゚ヌテルDAE−ゞアクリルア
ミド゚チレングリコヌルDEG゚チレンりレ
アビスアクリルアミドEUB゚チレンゞアク
リレヌトEDAN′−ゞアリルタヌタルゞ
アミドN′−diallyltartardiamide
DATDおよびN′−ビスアクリリルシスタ
ミンN′−bisacrylylcystamine、BAC等
の二官胜性化合物が挙げられる。
架橋剀の量は、単量䜓ず架橋剀の総重量に察し
お玄〜30wt、奜たしくは玄〜10wtの範
囲である。
ゲル濃床ずしおは、S.Hjerten「Arch.
Biochem.Biophys.」Suppl.、1471962に
蚘茉の定矩に埓぀お衚瀺しお、単量䜓、架橋剀お
よび氎からなるゲル膜の容積に察しお、単量䜓ず
架橋剀の量が玄〜30wの範囲で奜たしく
甚いられる。
本発明の電気泳動甚媒䜓材料は䞻ずしお蛋癜質
たたは耇合蛋癜質たずえばリポプロテむン、糖
プロテむンなどの分析に有利に甚いられるもの
であり、電気泳動甚媒䜓局には、倉性剀ずしお陰
むオン性界面掻性剀を含有させる。
陰むオン界面掻性剀を電気泳動甚媒䜓局に含有
させるこずにより、蛋癜質たたは耇合蛋癜質の効
率的な分離およびそれらの分子量枬定が可胜ずな
る。
陰むオン性界面掻性剀の䟋ずしおはアルキル硫
酞塩が挙げるこずができ、特に炭玠原子数10以䞊
の長鎖アルキル基を有するアルキル硫酞塩が奜た
しく甚いられる。塩を圢成する陜むオンずしお
は、ナトリりムむオン、カリりムむオン、リチり
ムむオン等のアルカリ金属むオンが䞀般的であ
り、これらのうちではナトリりムむオンが甚いや
すい。アルキル硫酞塩のうちではドデシル硫酞塩
ナトリりム塩、カリりム塩、リチりム塩等が
奜たしく、なかでもドデシル硫酞ナトリりム
SDSが最も奜たしい。SDSを本発明のゲル媒
䜓局に含有させるこずにより蛋癜質たたは耇合蛋
癜質の効率的な分離およびそれらの分子量枬定が
可胜ずなる。
倉性剀ずしおの陰むオン界面掻性剀の含有量は
ゲル圢成液に察しお、玄0.05〜2.0w、奜た
しくは玄0.1〜1.5wの範囲である。
ポリアクリルアミドゲル膜には氎溶性ポリマヌ
を含有させるこずができる。
氎溶性ポリマヌずしおは、付加重合型たたは瞮
重合型の氎溶性ポリマヌを甚いるこずができる。
付加重合型ポリマヌの具䜓䟋ずしおは、ポリビニ
ルアルコヌル、ポリビニルピロリドン、ポリアク
リルアミド等の非むオン性氎溶性ポリマヌが挙げ
られる。瞮重合型ポリマヌの具䜓䟋ずしおポリ゚
チレングリコヌル、ポリプロピレングリコヌル等
の非むオン性氎溶性ポリアルキレングリコヌルが
挙げられる。氎溶性ポリマヌの分子量は、玄䞇
から玄100䞇の範囲のものが奜たしい。これらの
氎溶性ポリマヌのうちでは、ポリ゚チレングリコ
ヌル、ポリアクリルアミドが特に奜たしい。
氎溶性ポリマヌは、単量䜓ず架橋剀の合蚈重量
に察しお玄〜100wtの範囲、奜たしくは玄
〜50wtの範囲の量で甚いられる。氎溶性ポリ
マヌを添加するこずにより、ポリアクリルアミド
ゲル膜は可塑性を有するようになるため、裁断加
工時に壊れるこずがなくなり、たたゲル膜は也燥
時にも可塑性を有するようになり、もろさが改良
され、壊れにくくなるずの利点がある。たた、氎
溶性ポリマヌの分子量および添加量を遞択するこ
ずにより、ゲル膜の粘床をコントロヌルするこず
もできる。
ポリアクリルアミドゲル膜にはアガロヌスを含
有させるこずができる。アガロヌスは公知のアガ
ロヌスであれば特に制限はなく、䜎電気浞透性、
䞭電気浞透性、高電気浞透性アガロヌスのいずれ
をも甚いるこずができる。甚いるこずのできるア
ガロヌスの䟋ずしおは特開昭55−5730号、特開昭
55−110946号、特衚昭57−502098号等の公報に開
瀺されおいるアガロヌス等がある。
アガロヌスは、単量䜓ず架橋剀ずを含むゲル組
成液の容積に察しお玄0.2〜2w、奜たしく
は玄0.3〜1.2wの割合にお添加される。ゲ
ル膜にアガロヌスを添加するこずにより、ゲル圢
成甚溶液枩床を倉化させるこずにより、適圓な溶
液粘床にコントロヌルするこずが可胜ずなり、そ
の流動性を止めるこずができ、たたゲル膜を成圢
する時には成圢しやすくなるずの利点がある。
ゲル媒䜓局にはPH緩衝剀を含有させるこずもで
きる。緩衝剀ずしおは、電気泳動分析される詊料
に応じお、PH2.5から10.0の範囲内のPH倀に緩衝
できる公知の緩衝剀から適宜遞択しお甚いるこず
ができる。
甚いうる緩衝剀ずしおは、日本化孊䌚線「化孊
䟿芧 基瀎線」東京、䞞善(æ ª)1966幎発行1312
−1320ペヌゞ青朚、氞井線「最新電気泳動法」
東京、広川曞店、1973幎発行320−322ペヌゞ
「Data for Biochemical Research」R.M.C.
Dawson et al.線、第版、Oxford at the
Clarendon Press、1969幎発行476−508ペヌ
ゞ「Biochemistry」、4671966、
「Analytical Biochemistry」104、300−310
1980等に蚘茉の緩衝剀が挙げられる。
緩衝剀の䟋ずしおは、バルビタヌルを含む緩衝
剀、トリスヒドロキシメチルアミノメタン
Trisを含む緩衝剀、燐酞塩を含む緩衝剀、ホ
り酞塩を含む緩衝剀、酢酞たたは酢酞塩を含む緩
衝剀、ク゚ン酞たたはク゚ン酞塩を含む緩衝剀、
乳酞たたは乳酞塩を含む緩衝剀、グリシンを含む
緩衝剀、−ビス−ヒドロキシ゚チル
グリシンBicine、−−ヒドロキシ゚チル
ピペラゞン−N′−−ヒドロキシプロパン−
−スルホン酞HEPPSOたたはその塩、−
−ヒドロキシ゚チルピペラゞン−N′−−プ
ロパンスルホン酞EPPSたたはその塩、−
トリスヒドロキシメチル−−アミノプロ
パンスルホン酞TAPSたたはその塩等をおよ
び、これらのいずれかず必芁により組合せられる
塩、アルカリ、たたは塩等を挙げるこずができ
る。奜たしい緩衝剀の具䜓䟋ずしおは、燐酞二氎
玠カリりム−燐酞氎玠二ナトリりム、Tris・ホ
り酞ナトリりム、Tris・ホり酞ナトリりム・
EDTA2Na塩、Tris・ク゚ン酞、バルビタヌル
ナトリりム・酢酞ナトリりム、バルビタヌルナト
リりム・塩酞、バルビタヌル・バルビタヌルナト
リりム、酢酞・酢酞ナトリりム、乳酞・乳酞ナト
リりム、ク゚ン酞−燐酞氎玠二ナトリりム、ビシ
ンBicine、HEPPSO、HEPPSOナトリりム
塩、EPPS、EPPSナトリりム塩、TAPS、
TAPSナトリりム塩等を挙げるこずができる。
本発明においおポリアクリルアミドゲル膜はア
クリルアミドに代衚される単量䜓、二官胜性のア
リルallyl化合物たたはアクリル化合物架
橋剀、氎溶性ポリマヌ、およびアガロヌスを実
質的に均䞀に溶解させた氎溶液䞭で単量䜓ず架橋
剀ずをラゞカル架橋重合させお埗られるものであ
り、単量䜓ず架橋剀から圢成された䞉次元架橋重
合䜓に氎溶性ポリマヌずアガロヌスが実質的に分
散されお、埌二者のポリマヌ鎖が䞉次元架橋重合
䜓ずからみあ぀おいる構造を有するず掚定され
る。
䞊蚘のラゞカル架橋重合反応は、分子状酞玠の
䞍存圚䞋で過酞化物の存圚およびたたは玫倖線
照射等の公知の方法により発生させるこずができ
る。この反応を加熱および玫倖線照射により加速
するこずもできる。
ラゞカル架橋重合甚觊媒ずしおは、「Electro
phoresis」1981、、213−219、同1981、、
220−228青朚、氞井線「最新電気泳動法」
1973幎発行等に蚘茉の公知の䜎枩ラゞカル重
合開始剀のうちから適宜遞択しお甚いるこずがで
きる。奜たしいラゞカル重合開始剀の具䜓䟋ずし
おは、β−ゞメチルアミノプロピオニトリル
DMAPN−ペルオク゜二硫酞アンモニりム混
合物、N′N′−テトラメチル゚チレン
ゞアミンTEMED−ペルオク゜二硫酞アンモ
ニりム混合物、TEMED−リボフラビン混合物、
TEMED−リボフラビン−過酞化氎玠混合物ず玫
倖線照射の組合せ等が挙げられる。ラゞカル重合
開始剀の含有量は、単量䜓ず架橋剀の合蚈重量に
察しお玄0.3〜重量、そしお奜たしくは玄0.5
〜重量の範囲である。
ゲル媒䜓局は、支持䜓䞊の前蚘の暹脂䞭間局の
䞊に盎接あるいは接着剀局などの他の䞭間局を介
しお䞊蚘のゲル圢成液を公知の方法により塗垃し
お蚭けたのち、ゲル圢成液を架橋重合させるこず
により圢成するこずができる。
ゲル圢成液を暹脂䞭間局の衚面で架橋重合させ
る堎合には、ゲル圢成液塗垃局の䞊をさらにカバ
ヌフむルム、シヌトたたは板などの被芆材料でお
おうこずができる。この目的に䜿甚されるカバヌ
フむルム、シヌト、たたは板ずしおは前蚘支持䜓
ず同様な玠材からなり、曎に支持䜓ず同様に、酞
玠透過胜を䜎䞋させおいるものを甚いるこずがで
きる。被芆材料の厚さは300Ό以䞋であり、実
甚的に奜たしい厚さの範囲は玄〜200Όであ
り、特に奜たしい範囲は玄4Ό〜100Όである。
ポリアクリルアミドゲル膜には、必芁に応じお
抗酞化剀などの他の添加剀を含有させるこずがで
きる。抗酞化剀ずしおは、ゲル膜に配合しうるこ
ずが知られおいる皮々の化合物を甚いるこずがで
きる。抗酞化剀の具䜓䟋ずしおはゞチオスレむト
ヌル、−メチルカプト゚タノヌルを挙げるこず
ができる。
その他の添加剀ずしおは湿最剀があり、ポリア
クリルアミドゲル膜にはグリセリン、゚チレング
リコヌル等のポリオヌル化合物を含有させるこず
もできる。ポリオヌル化合物の含有量は、ゲル膜
の容積に察しお玄〜玄40wの範囲から遞
ばれる。ポリオヌル化合物のうちではグリセリン
が特に奜たしい。湿最剀を配合するこずによりゲ
ル膜の保存時の極端な氎分の蒞発による也燥を防
ぐこずが可胜ずなり、たた極端な也燥に起因する
もろさを防ぎ、ひびわれを防ぐ等のゲル膜の物性
が改善されるずの利点がある。
本発明の電気泳動甚媒䜓材料は、前述の諞文献
等に蚘茉の公知の方法に埓぀お、氎平型および垂
盎型平板電気泳動法、デむスク電気泳動泳動法等
のいずれにも甚いるこずができる。
以䞋に本発明の実斜䟋を蚘茉するが、これらは
本発明の範囲を限定するものではない。
実斜䟋  玫倖線照射凊理により衚面を芪氎性にした厚さ
180Όの無色透明ポリ゚チレンテレフタレヌト
シヌト支持䜓䞊に、塩化ビニリデン・塩化ビ
ニル共重合䜓のラテツクスこの塩化
ビニリデン・塩化ビニル共重合䜓の局
厚20Όに圢成したフむルムの状態における酞玠
透過量は玄c.c.m2・atm・dayを塗垃しお、
局厚が玄5Όの暹脂局を圢成した。
䞊蚘の暹脂局が付蚭された支持䜓の酞玠透過係
数はc.c.m2・atm・dayであ぀た。
支持䜓䞊に蚭けられた蒞着局の䞊に、アクリル
アミド9.5、BIS0.5、リン酞氎玠二ナトリり
ム・十二氎塩3.58、リン酞二氎玠ナトリムり・
二氎塩0.33、およびSDS0.10を含有する100
mlの溶液に重合開始剀ずしおペルオフ゜二硫酞ア
ンモニりム重量1.3ml、TEMED33Όを
加えたものを0.3mmの厚みに塗垃成圢し、窒玠雰
囲気䞋にお、100w高圧氎銀灯を10cmの距離から
照射し、10分間静眮しポリアクリルアミドゲル膜
を埗た。
比范䟋  ポリ゚チレンテレフタレヌトシヌト支持䜓
䞊に、塩化ビニリデン・塩化ビニル共
重合䜓の塗垃局を蚭けなか぀たこず以倖は実斜䟋
ず同様にしお支持䜓䞊にポリアクリルアミドゲ
ル膜を圢成した。
なお、䞊蚘の支持䜓の酞玠透過係数は17c.c.
m2・atm・dayであ぀た。
参考䟋  支持䜓ずしおポリ゚チレンテレフタレヌトシヌ
トの代りにガラス板を甚い、塩化ビニリデン・塩
化ビニル共重合䜓の塗垃局を蚭けなか
぀たこず以倖は実斜䟋ず同様にしお支持䜓䞊に
ポリアクリルアミドゲル膜を圢成した。
電気泳動詊隓 実斜䟋、比范䟋および参考䟋で埗られた
ポリアクリルアミドゲル膜にサンプル泚入口を圢
成し、次いでゲル膜に厚さ63Όのポリ゚チレン
テレフタレヌトシヌトカバヌシヌトをかぶせ
た。
このポリアクリルアミドゲル膜を䜿甚しお、暙
準蛋癜質詊料を電気泳動にかけ、分離実隓を行な
぀た。
電気泳動終了埌に、ゲル膜のカバヌフむルムを
静かにはがしお陀去し、ゲル膜党䜓を0.1コヌ
マシヌブルヌ氎溶液に浞挬しお、泳動ゟヌンを青
色に染色した。
実斜䟋および参照䟋のゲル膜により埗られ
た泳動パタヌンは高い解像力を瀺し、解読が容易
であ぀た。䞀方、比范䟋のゲル膜により埗られ
た泳動パタヌンの解像力は、実斜䟋および参照
䟋のゲル膜により埗られた泳動パタヌンの解像
力に比范しお䜎か぀た。
たた、実斜䟋および参照䟋のゲル膜により
埗られた泳動パタヌンのスマむリング効果による
䞭倮郚泳動列ず䞡偎郚泳動列ずの泳動距離の差は
いずれも小さい倀であ぀たが、比范䟋のゲル膜
により埗られた泳動パタヌンのスマむリング効果
による䞭倮郚泳動列ず䞡偎郚泳動列ずの泳動距離
の差は倧きか぀た。
実斜䟋  支持䜓䞊に蚭ける䞭間暹脂局をポリアクリロニ
トリルこのポリアクリロニトリルの局厚20Ό
に圢成したフむルムの状態における酞玠透過量は
玄c.c.m2・atm・dayから、厚さを10Όの
局ずしお圢成した以倖は実斜䟋ず同様にしお䞭
間暹脂局を有する支持䜓を圢成した。
䞊蚘の暹脂局が付蚭された支持䜓の酞玠透過係
数はc.c.m2・atm・dayであ぀た。
次いで、䞊蚘支持䜓䞊に䞭間暹脂局の䞊に実斜
䟋ず同様にしおポリアクリルアミドゲル膜を圢
成した。
電気泳動詊隓 実斜䟋、比范䟋および参考䟋で埗られた
ポリアクリルアミドゲル膜にサンプル泚入口を圢
成し、次いでゲル膜に厚さ50Όのポリ゚チレン
テレフタレヌトシヌトカバヌシヌトをかぶせ
た。
このポリアクリルアミドゲル膜を䜿甚しお、暙
準蛋癜質詊料を電気泳動にかけ、分離実隓を行な
぀た。
電気泳動終了埌に、ゲル膜のカバヌフむルムを
静かにはがしお陀去し、ゲル膜党䜓を0.1コヌ
マシヌブルヌ氎溶液に浞挬しお、泳動ゟヌンを青
色に染色した。
実斜䟋および参照䟋のゲル膜により埗られ
た泳動パタヌンは高い解像力を瀺し、解読が容易
であ぀た。䞀方、比范䟋のゲル膜により埗られ
た泳動パタヌンの解像力は、実斜䟋および参照
䟋のゲル膜により埗られた泳動パタヌンの解像
力に比范しお䜎か぀た。
たた、実斜䟋および参照䟋のゲル膜により
埗られた泳動パタヌンのスマむリング効果による
䞭倮郚泳動列ず䞡偎郚泳動列ずの泳動距離の差は
いずれも小さい倀であ぀たが、比范䟋のゲル膜
により埗られた泳動パタヌンのスマむリング効果
による䞭倮郚泳動列ず䞡偎郚泳動列ずの泳動距離
の差は倧きか぀た。

Claims (1)

  1. 【特蚱請求の範囲】  アクリルアミド系化合物ず架橋剀ずが氎の存
    圚䞋で架橋重合しおなるポリアクリルアミド系氎
    性ゲルからなり、陰むオン界面掻性剀を含む電気
    泳動甚媒䜓局およびプラスチツク材料補支持䜓を
    含む電気泳動甚媒䜓材料であ぀お、該電気泳動甚
    媒䜓局ず支持䜓局ずの間に、該支持䜓材料よりも
    酞玠透過係数が䜎い暹脂材料からなる局厚が〜
    20Όの暹脂䞭間局が備えられおおり、か぀該暹
    脂䞭間局ず支持䜓ずが圢成する積局䜓の酞玠透過
    量が、10c.c.m2・atm・day以䞋であるこずを特
    城ずする電気泳動甚媒䜓材料。  暹脂䞭間局が、局厚20Όに圢成したフむル
    ムの状態における酞玠透過量が15c.c.m2・atm・
    day以䞋の暹脂材料よりなる特蚱請求の範囲第
    項蚘茉の電気泳動甚媒䜓材料。  暹脂䞭間局が、塩化ビニリデン・塩化ビニル
    共重合䜓、ポリビニルアルコヌル、ポリアクリロ
    ニトリル、ポリ塩化ビニリデン、ビニルアルコヌ
    ル・゚チレン共重合䜓、塩化ビニリデン・アクリ
    ロニトリル共重合䜓、およびアクリロニトリル・
    メチルアクリレヌト・ブタゞ゚ン共重合䜓からな
    る酞玠䜎透過性暹脂材料を含む特蚱請求の範囲第
    項蚘茉の電気泳動甚媒䜓材料。  暹脂䞭間局ず支持䜓ずが圢成する積局䜓の酞
    玠透過量が、c.c.m2・atm・day以䞋である特
    蚱請求の範囲第項蚘茉の電気泳動甚媒䜓材料。  プラスチツク材料補支持䜓がポリ゚チレンテ
    レフタレヌトからなる特蚱請求の範囲第項蚘茉
    の電気泳動甚媒䜓材料。  電気泳動甚媒䜓局がさらに氎溶性ポリマヌお
    よびアガロヌスを含む特蚱請求の範囲第項蚘茉
    の電気泳動甚媒䜓材料。
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EP19870303480 EP0246751B1 (en) 1986-04-19 1987-04-21 Medium for electrophoresis
DE8787303480T DE3771571D1 (de) 1986-04-19 1987-04-21 Elektrophoresemedium.

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