MC1264A1

MC1264A1 - Procede de preparation de benzylpyrimides et de medicaments contenant ces substances

Info

Publication number: MC1264A1
Application number: MC791383A
Authority: MC
Inventors: J Burchall; S Bushy
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1978-05-24
Filing date: 1979-05-23
Publication date: 1980-03-28
Also published as: IL57375A0; NO791699L; DK214479A; IT1117752B; EP0006987A1; MA18450A1; JPS54154775A; AU4732579A; PT69656A; IT7949150A0; FI791638A7; ZW9979A1

Description

V

La présente invention concerne des 2,4-diamino-5-benzylpyrimidines, des compositions pharmaceutiques contenant ces substances, leur préparation et la préparation de ces compositions et leur emploi pour le traitement d'infections bac-5 tériennes.

Il a été montré que certaines 2,4-diamino-5-benzylpyrimidines avaient d'intéressantes propriétés pharmaceutiques et qu'elles étaient des potentialisateurs de sulfonamides.

C'est ainsi que le brevet britannique 10 N° 875.562 décrit, entre autres, des composés de formule générale I ci-dessous

12 3

15 dans laquelle R , R et R , qui peuvent être identiques ou différents, représentent des groupes alcoxy en à C^. La tri-méthoprime, ou 2,4-diamino-5-(3,4,5-triméthoxybenzyl)pyrimidine, est spécifiquement décrite dans ce brevet, et elle constitue l'agent antibactérien général le plus actif parmi les 2,4-diamino-20 5-benzylpyrimidines connues à ce jour. La triméthoprime a été très largement employée au cours de la dernière décennie en thérapeutique humaine, associée avec divers sulfonamides et en particulier avec le sulfaméthoxazole, pour le traitement d'infections bactériennes, et elle a été recommandée notamment 25 pour le traitement de Neisseria gonorrhaea (Rodin and Seth,

Brit. J. Vener, Dis. 1972, 48, 517).

Des 2,4-diamino-5-benzylpyrimidines avec un groupe hydroxy à la position 4 du cycle phénylique, et qui sont douées d'activité antibactérienne, sont aussi décrites 30 dans le brevet britannique N° 1.128.2 34 et dans le brevet belge N° 846.397.

I

Le brevet britannique N° 1.128.234 revendique, entre autres, les composés de formule II

(II)

4 5

dans laquelle R et R , qui peuvent être identiques ou différents, représentent chacun l'hydrogène, un halogène, ou bien un alkyle ou un alcoxy en C.. à C.. Toutefois, seuls les composés de

4 5

formule II dans lesquels R et R sont des groupes méthoxy

10 sont cités en exemples, et il n'y a aucun exemple de composés

4 5

dans lesquels R et R sont des alkyles en à .

Le brevet belge N° 846.937 revendique les composés de formule III

dans laquelle R est un alkyle en à ou un àtome d'halogène, mais on ne trouve pas mention d'une activité de ces composés contre les bactéries Neisseria.

20 Un autre groupe de 2,4-diamino-5-benzylpyrimidines pour lesquelles il a été trouvé une activité antibactérienne est décrit dans le brevet britannique N° 1.374.162, à savoir les composés de formule IV

(voir formule page suivante)

H

(IV)

7 9

dans laquelle R et R , qui peuvent être identiques ou différents,

g sont des alkyles en C„ à C., et R est un alkyle ou un alcoxy en

8

C1 ^ C12' Les coinPos®s dans lesquels R est un alcoxy peuvent

O s

être préparés (brevets britanniques N 1.375.162 et 1.413.471) par alkylation d'un composé de formule V

Mais bien que les composés de formule V soient décrits dans le brevet britannique N° 1.413.471 comme étant 15 des produits intermédiaires pour la préparation de substances douées d'activité pharmacologique, il ne sont pas signalés comme ayant eux-mêmes une telle activité.

Or la présente Demanderesse a trouvé qu'un

7 9

certain groupe de composes de formule V dans lesquels R et R , 20 indentiques ou différents, sont des alkyles en à , se montraient extrêmement actifs, in vitro et in vivo, contre les bactéries Neisseria gonorrhoeae et Neisseria meningitidis.

Nombre des composés de ce groupe sont plus de deux fois plus actifs in vivo que la triméthoprime contre ces organismes Neisseria, 25 et dans certains cas ils sont plus de 15 fois plus actifs que la triméthoprime in vitro. Cette découverte a des implications extrêmement importantes en thérapeutique humaine si l'on considère

r la récente découverte (New Scientis, 28 avril 1977, pages 202,205) de souches de Neisseria qui sont résistantes aux pénicillines, pénicillines qui ont été très employées antérieurement dans le traitement des Neisseria.

5 Ces composés sont également intéressants et efficaces pour le traitement d'infections de mammifères dues à des micro-organismes anaérobies comme les espèces de Bacteroides, Fusobacterium, Peptococcus, Peptostreptococcus et Clostridium, par exemple Bacteroides fragilis, B. thetaiotaomicron, R. vulgatus, 10 Clostridium perfringens, C. tetani, C. sphenoides et Fusobacterium necrophorum. Les états pathologiques provoqués par ces microorganismes comprennent l'infection septicémique de blessures profondes, par exemple de piqûres profondes, et les infections post-opératoires.

15 La présente invention a ainsi pour objet des compositions pharmaceutiques comprenant un composé de formule VI

20

_ NIi.

(VI)

dans laquelle R^ et R**, qui peuvent être identiques ou différents, sont des alkyles en C2 à C^, ou un sel d'un tel composé acceptable pour des usages pharmaceutiques, avec un véhicule pharmaceutique.

25 Les alkyles R ^ et R11 peuvent être à chaîne droite ou ramifiée, tels que par exemple les groupes éthyle, n-propyle, i-propyle, n-butyle, s-butyle, i-butyle et t-butyle.

Il a été également trouvé que les composés de formule VI dans lesquels R"1"^ et R 1 sont des alkyles en à C^ 30 à chaîne ramifiée étaient moins rapidement métabolisés in vivo que ceux dans lesquels R^ et R11 sont des alkyles à chaîne droite. Ainsi, R"1"^ et R*1 seront de préférence des alkyles ramifiés en à C^, identiques ou différents, mais de préférence

b identiques, c'est-à-dire les groupes i-propyle, s-butyle, i-butyle et t-butyle.

Les composés préférés pour les présentes compositions pharmaceutiques sont donc les suivants :

5 (1) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl)pyri-

midine ;

(2) 2 , 4-Diamino-5- (3 , 5-di-s-butyl-4-hydro.xybenzyl) pyri-midine ;

10 (3) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-i-butyl-4-hydroxybenzyl)pyri-

midine ; et

(4) 2,4-Diamino-(4-hydroxy-3,5-di-i-propylbenzyl)pyri-midine ; ainsi que leurs sels acceptables pour des usages pharmaceutiques.

15 Les composés de formule VI et leurs sels pharma-

ceutiquement acceptables sont utilisables en médecine pour le traitement d'infections microbiennes, en particulier d'infections bactériennes et notamment celles provoquées par Neisseria gonorrhoeae et Neisseria meningitidis, les infections microbiennes

20 à traiter étant de préférences les infections dues à des microorganismes anaérobies.

Certains des composés de formule VI sont nouveaux, à savoir ceux de formule VII

12 13

dans laquelle R * et R , identiques ou différents, sont chacun

12 13

le groupe propyle ou butyle, sauf que R et R ne peuvent être à la fois un groupe i-propyle, ainsi que leurs sels pharmaceuti-30 quement acceptables.

Les composés préférés de formule VII sont ceux 12 13

dans lesquels R et R , identiques ou différents, sont chacun un groupe i-propyle, i-butyle, s-butyle ou t-butyle, sauf que 12 13

R et R ne sont pas a la fois chacun un groupe i-propyle,

5 ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables.

12 13

De preference, R et R seront identiques, c'est-à-dire que les nouveaux composés préférés sont les suivants :

(1) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxy-10 benzyl)pyrimidine ;

(2) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-s-butyl-4-hydroxy-benzyl)pyrimidine ;

(3) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-i-butyl-4-hydroxy-benzyl)pyrimidine ; et leurs sels pharmaceutique

15 ment acceptables.

Des sels d'addition d'acides appropriés des composés de formule VI sont aussi bien des sels d'acides organiques que des sels d'acides minéraux, les sels préférés étant ceux formés avec les acides chlorhydrique, sulfurique, 20 citrique, tartrique, phosphorique, lactique, pyruvique, acétique succinique, fumarique, maléique et oxaloacétique. Les composés de formule VI ayant deux groupes amino libres peuvent être salifiés une ou deux fois, mais les mono sels sont préférables. Les composés de formule VI sont mis dans les présentes composi-25 tions en quantité suffisante pour agir contre l'organisme bactérien in vivo.

Les véhicules pharmaceutiques des présentes compositions sont des matières recommandées pour l'administration de médicaments, qui peuvent être liquides, solides ou 30 gazeuses, et qui sont inertes ou médicalement acceptables et compatibles avec les ingrédients actifs. Dans l'exécution de la présente invention, l'eau non stérile et le dimëthyl-sulfoxyde ne sont pas considérés comme étant des véhicules pharmaceutiquement acceptables.

%

Les compositions pharmaceutiques peuvent être données par la voie parentérale ou orale ou bien en suppositoires, en solutions ophtalmiques ou encore appliquées localement sous forme de pommades, crèmes ou poudre. Toutefois, la voie orale 5 et la voie parentérale sont préférables.

Pour l'administration orale, de fines poudres ou granules peuvent comprendre des agents diluants, dispersants et/ou tensio-actifs et peuvent être présentés sous forme de potions dans de l'eau ou dans un sirop, en capsules ou sachets 10 à l'état sec ou dans une suspension non-aqueuse avec éventuellement des agents de mise en suspension, ou encore en suspension dans de l'eau ou un sirop, et si cela est souhaitable ou nécessaire, on peut ajouter des parfums ou agents aromatisants, des agents de conservation, de mise en suspension, des 15 épaississants ou des émulsionnants, et une suspension aqueuse comprendra l'un au moins de tels agents.

Pour l'administration parentérale, les présents composés actifs peuvent être présentés en solutions aqueuses stériles injectables pouvant contenir des antioxydants ou des 20 tampons.

Comme il a été dit, la base libre ou son sel peuvent être donnés à l'état pur, c'est-à-dire non-associés avec d'autres additifs, auquel cas les capsules ou sachets sont préférables.

25 Les corps actifs peuvent être également présentés

à l'état pur sous forme d'unités de prise, par exemple de comprimés ou autres.

Il peut être avantageux de présenter les composés de formule VI dans des compositions pouvant comprendre d'autres 30 ingrédients actifs, par exemple des antimétabolites ou compétiteurs de l'acide p-amino benzoïque tels que les sulfonamides.

Parmi les compétiteurs connus de l'acide p-amino benzoïque, sont intéressants les sulfonamides suivants, ainsi que leurs sels pharmaceutiquement acceptables : sulfanilamide, 35 sulfadiazine, sulfaméthisazole, sulfapyridine, sulfathiazole, sulfamérazine, sulfaméthazine, suifisoxazole, sulforméthoxine,

5

2-(p-aminobenzène)sulfonamido-3-méthoxypyrazine (kelfizina) , p,p '-diaminodiphénylsulfone, a-amino-p-toluène-sulfonamide, 5-sulfanilamido-2,4-diméthyl-pyrimidine, 4-(N1-acétyl-sulfanil-amido)-5,6-diméthoxy-pyrimidine, 3-sulfanilamido-4,5-diméthyl-5 isoxazole, 4-sulfanilamido-5-méthoxy-6-décyloxy-pyrimidine, sulfamonométhoxine, 4-p-(8-hydroxy-quinoléinyl-4-azo)-phényl-sulfanilamido-5, 6-diméthoxy-pyrimidine, suifadiméthoxine, sulfadimidine, sulfamoxole, sulfadoxine, sulfaguanidine, sulfathiodiméthoxine, sulfaméthoxazole, sulfaquinoxaline et 10 p-(2-méthyl-8-hydroxy-quinoléinyl-(5)-azo)-phényl-sulfanilamido-5,6-diméthoxy-pyrimidine.

Toutefois, les associations préférées sont celles comprenant de la sulfadiazine, du sulfaméthoxazole,

de la sulfadoxine, de la sulfaquinoxaline, de la sulfadimidine, 15 du sulfamazole ou de la sulfaguanidine.

D'autres matières pouvant être incluses sont par exemple des ingrédients médicalement inertes comme des diluants solides ou liquides tels que le lactose, le glucose, l'amidon ou le phosphate de calcium pour des comprimés ou des 20 capsules ; de l'huile d'olive ou de l'oléate d'éthyle pour des capsules molles ; et de l'eau ou une huile végétale pour des suspensions ou des émulsions ; des lubrifiants comme le talc et le stéarate de magnésium ; des agents gélifiants comme les argiles colloïdales, des épaississants comme la gomme adragante 25 et l'alginate de sodium ; ainsi que d'autres ingrédients auxiliaires thérapeutiquement acceptables tels que des agents humidifiants, des agents de conservation, des tampons et des antioxydants, qui sont d'intéressants véhicules dans de telles formulations.

30 Les comprimés ou autres formes de présentation en unités séparées peuvent avantageusement contenir une quantité du composé de formule VI efficace à une telle dose ou en une dose multiple, par exemple de 2,5 à 150 mg, et en général voisine de 30 à 100 mg.

35 Pour le traitement d'infections par des micro organismes anaérobies, les composés de formule VI ou de leurs sels peuvent être administrés par la voie orale, parentérale ou en

10

suppositoires, dans les formulations pharmaceutiques appropriées et aux doses ci-dessus indiquées, et ces composés ou leurs sels peuvent être donnés seuls ou associés avec des sulfonamides,

comme il a été dit plus haut.

5 Les présentes compositions pharmaceutiques sont préparées par mélange d'un composé dé formule VI avec un véhicule pharmaceutique, et l'on peut ajouter le cas échéant, si cela est nécessaire, d'autres ingrédients actifs, par exemple un sulfonamide, ou d'autres excipients pharmaceutiques. 10 Les présents composés permettent de traiter des infections bactériennes de mammifères par administration d '.une dose efficace: non toxique du corps actif.

Comme il a été dit, les composés de formule VI sont en général intéressants pour traiter de telles infections 15 par des applications locales ou bien par administration orale ou par injections, et ils sont normalement donnés à des doses quotidiennes adulte étant 50 à 300 mg.

20

peuvent être

1)

décrite dans faire réagir

25

de 1 à 30 mg/kg, la dose quotidienne pour l'homme en général de 25 à 1000 mg, de préférence de

Les composés de formule VII et leurs sels préparés par diverses méthodes.

On peut par exemple appliquer la méthode le brevet britannique N° 1.413.471, consistant à un composé de formule VIII

dans laquelle L représente un groupe devant s'éliminer, avec 30 le phénol à substituants voulus de formule IX

R] 2

o >- (IX)

,k13

H

Des groupes ou atomes L appropriés sont par exemple le groupe hydroxy ou un atome d'halogène comme le brome ou le chlore, ou l'anion d'un acide carboxylique ou sulfonique, par exemple de l'acide méthane sulfonique ou 5 p-toluène-sulfonique. D'autres groupes appropriés qui s'éliminent, non cités en exemples dans le brevet britannique N° 1.413.471, sont des groupes amino, de préférence des groupes dialkylamino à alkyles en à Cg. Cette réaction est normalement conduite en présence d'un acide fort comme catalyseur, 10 par exemple un acide minéral fort tel que l'acide chlorhydrique, ou un acide carboxylique ou sulfonique.

2) On peut appliquer une méthode semblable à celle

O Ci décrite dans les brevets britanniques N 1.128.234 et 1.401.612, consistant à faire réagir un composé de formule X

20

dans laquelle Z représente un groupe hydroxy ou un groupe amino disubstitué ou encore un atome d'halogène, avec un composé de formule XI

NIJ.

CXI)

25

30

dans laquelle Y est un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe alkylthio, aralkylthio ou mercapto, puis, si Y est un groupe alkylthio ou aralkylthio, on l'élimine ensuite par hydrogénolyse.

Avantageusement Z pourra être un groupe dialkylamino ou un groupe amino cyclique pouvant avoir jusqu'à 10 atomes de carbone, le groupe diméthylamino convenant

10

15

particulièrement bien. La réaction est exécutée en présence d'une base dans les conditions bien connues des spécialistes des réactions de Mannich, et on a trouvé qu'elle pouvait être favorablement effectuée en présence d'un ion alcoolate, par exemple méthylate, à chaud, avantageusement entre 100 et 200°C, dans un solvant ayant un point d'ébullition approprié, par exemple un glycol comme 1'éthylène-glycol. La déthiation se fait avantageusement par hydrogénolyse en présence d'un catalyseur à base d'un métal de transition, le nickel Raney convenant particulièrement bien. Cette réaction est effectuée dans un solvant polaire, par exemple un alcanol en C -C^ comme le métha-nol ou l'éthanol.

14

3) On peut éliminer un groupe protecteur R d'un composé de formule XII

(XII)

Cil 2 A— OR14

On entend ici par groupes- protecteurs ceux qui sont 20 couramment employés pour bloquer un groupe hydroxy libre, par exemple un groupe acyle en C^ à C_, tel qu'acétyle ou benzoyle, un groupe acétal ou cétal, tétrahydropyrranyle, 2-méthoxyéthoxy-méthyle ou méthoxyméthyle, ou un groupe aralkyle, par exemple benzyle, phényléthyle ou naphtylméthyle, ainsi que des groupes 25 protecteurs, inhabituels tels que des alkyles en C^^ à C^, qui peuvent être enlevés des composés de formule XII. Les conditions de réaction sont celles couramment appliquées pour éliminer des groupes protecteurs de groupes hydroxy, c'est-à-dire hydrolyse douce en milieu acide ou hydrogénolyse pour éliminer des 30 groupes aralkyles, hydrolyse basique pour enlever les groupes acyles et hydrolyse acide pour enlever les groupes alkyles.

«

1*

C'est ainsi que le brevet britannique N° 1.261.455 décrit l'élimination du groupe benzyle de la 2,4-diamino-5-(p-benzyloxy-benzyl)pyrimidine par hydrogénolyse, et le brevet des E.U.A. N° 3.684.810 l'élimination d'un méthyle de la position 4 du cycle benzylique de la 2,4-diamino-5-(3,4,5-triméthoxybenzyl)pyrimidine par hydrolyse en milieu acide.

4) On peut encore faire réagir un composé de formule XIII

(XIII)

15

R étant un groupe qui s'élimine ou un groupe amino mais les 15

deux groupes R ne pouvant être à la fois un groupe amino

15 chacun, et R1^ est un atome d'hydrogène ou d'halogène, avec

16

un agent d'amination comme l'ammoniac, puis, si R est un

15

halogène, on l'élimine par hydrogénolyse catalytique. R pourra être avantageusement un atome d'halogène comme le chlore ou le brome, et R est un atome de chlore ou de brome. 20 L'agent aminant sera avantageusement l'ammoniac et la réaction se fait dans les conditions décrites dans les brevets britanniques NOS 957.797 et 1.132.082. Si R1^ est un halogène, sa réduction se fera avantageusement par hydrogénolyse dans les conditions qui sont indiquées dans le brevet belge N° 798.724.

2 5

5) On peut enfin faire reagir la guanidine ou un sel de guanidine avec un composé de formule XIV ou XV

(voir formules page suivante)

M

i if

110 —

t:uv — c;

'CN

Cil-U

(XV)

] H

ou un isomère benzylidénique correspondant d'un tel composé,

IV 18

formules dans lesquelles R est un alkyle inférieur, R un

10 groupe amino pouvant être monosubstitué ou disubstitué ou un

19

groupe alcoxy, et R est l'hydrogène ou un groupe formyle ou

17

alcoxycarbonyle. Avantageusement R sera un alkyle en C a C.

18

et R un alcoxy en à ou un groupe amino, alkylamino en benzylamino, dialkylamino en C^-C^, naphtylamino,

15 ou un groupe morpholino, pipéridino ou anilino éventuellement

18

substitué, mais R étant de préférence un groupe méthoxy,

19

éthoxy, anilino ou morpholino. Si R est l'hydrogène, la guanidine

19

sera sous la forme d'un sel, tandis que si R est un groupe formyle ou alcoxycarbonyle, elle ne sera pas salifiée.

20 Les produits intermédiaires de formules X, XII,

XIV et XV, ainsi que certains intermédiaires de formule XIII,

sont des composés nouveaux. Ne sont pas nouveaux les composés de

12 13

formule XIII dans lesquels R et R sont chacun à la fois un groupe éthyle, n-propyle, iso-propyle ou t-butyle. 25 Les composés de formule XII peuvent être préparés par l'une .quelconque des méthodes qui sont décrites dans le brevet britannique N° 1.375.162, et ceux de formules XIV et XV peuvent être commodément obtenus par élimination d'un groupe

20

protecteur R des composes correspondants de formules XVI et XVII.

17

•CHv

:-Pio

CI!2 C--U

OR

■OR17

(XVI)

CN

10

(XVII)

ou d'un isomère■benzylidénique correspondant, formules dans lesquelles R1^, R11, R17, R1 et R*^ ont les significations précédentes et R20 désigne un groupe protecteur. Des groupes R20 appropriés sont ceux indiqués dans l'ouvrage "Protective Groups in 15 Organic Chemistry", Ed. J.F.W.McOmine, Plénum Press, Londres, 1973, et qui sont stables en milieu alcalin, par exemple ceux pouvant être enlevés par hydrolyse acide, comme un groupe acétal ou cétal, ainsi que ceux pouvant être éliminés par hydrogénolyse comme les groupes aralkyles. Ainsi, R20 sera au mieux 20 un groupe benzyle, naphtylméthyle ou phényléthyle, ou un groupe tétrahydropyrranyle, méthoxyméthyle ou 2-méthoxyéthoxyméthyle, et de préférence un groupe benzyle, méthoxyméthyle, ou 2-méthoxyéthoxyméthyle. L'hydrogénolyse est favorablement conduite dans un solvant tel qu'un alcanol , par exemple le méthanol ou

lê

l'éthanol, en présence d'un métal de transition comme catalyseur, le palladium convenant particulièrement bien, en particulier le palladium sur charbon, à une température pouvant être comprise entre 0 et 80°C, avantageusement à la température ordinaire.

5 Les composés de formules XVI et XVII peuvent être commodément préparés à partir d'un benzaldéhyde substitué de formule XVIII

dans les conditions de réaction qui sont décrites pour l'obtention de composés ayant une structure chimique analogue dans les

0e?

brevets britanniques N 957.797, 1.142.654, 1.133.766,

1.261.455 et 1.375.162 .

15 Les composés connus de formule VI peuvent être obtenus par des méthodes analogues à celles qui sont appliquées pour préparer les nouveaux composés de formule VII.

Les exemples qui suivent sont donnés pour illustrer la préparation des présents composés et leurs proprié-20 tés pharmacologiques.

Activité antigonococcique de 2,4-diamino-(3,5-di-alkyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidines

L'activité antigonococcique de la 2,4-diamino-(3,5-diéthyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidine (composé 1), de la 2,4-diamino-25 (4-hydroxy-3,5-di-n-propylbenzyl)pyrimidine (composé 2), de la 2,4-ûiamino-(3-éthyl-4-hydroxy-5-n-propylbenzyl)pyrimidine (composé 3), de la 2,4-diamino-(4-hydroxy-3,5-di-i-propylbenzyl) pyrimidine (composé 4) et de la 2,4-diamino-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidine (composé 5), ainsi que l'activité 30 antiméningococcique des composés 2, 3 et 4, ont été déterminées sur la souris par les méthodes suivantes. Les activités sont mesurées contre 17 souches de Neisseria gonorrhoeae et 5 souches de

rf

Neisseria meningitidis dans le milieu de gélose "Wellcotest Sensitivity Test Agar" avec un complément de 5 % de sang de cheval chauffé et de 5 % de sang de cheval lysé non-chauffé. On ajoute 5 % de sang à des quantités du milieu de 500 ml à .

5 56°C et après avoir laissé le milieu pendant 15 minutes dans un bain-marie à 80°C puis l'avoir refroidi à 56°C, on lui ajoute le sang lysé et les composés à étudier, et le milieu est ensuite aussitôt versé dans des plaques, les composés essayés étant dissous à l'état d'isothionates.

10 Dans l'examen de screening, qui consiste en six essais séparés, les concentrations inhibitrices minimales (CIM) sont déterminées dans des dilutions de tiers en tiers,

puis réexaminées à la dilution moitié.

15 d'une culture de sang chauffé Mueller-Hinton de 18 heures,

et il est appliqué avec une anse de 1 mm, que l'on passe sur 1 cm. Comme le degré de multiplication donné par les souches est variable, les inoculums ne sont pas constants dans ces essais, et dans l'examen répété ils sont normalisés pour donner le 20 développement juste confluent. Les CIM sont les concentrations qui produisent une inhibition du développement de 90 % ou plus par rapport aux témoins de référence comparés macroscopiquement. La période d'incubation est de 2 4 heures pour l'examen de screening et de 48 heures pour l'examen répété. 2 5 Comme étalons de référence, chaque essai comprend

Escherichia coli (CN 314) et la triméthoprime (TMP). Les résultats obtenus sont donnés au tableau I.

composé V sont mesurées contre les mêmes 17 souches de Neisseria 30 gonorrhoeae et les 5 souches de Neisseria meningitidis dans le milieu Difco G.C. Agar.

Le tableau I donne aussi la concentration de chaque composé dans le sang, l'urine et les tissus des souris après administration par la voie orale, concentrations qui 35 sont déterminées de la manière décrite ci-après. Les composés

Dans l'examen de screening, 1'inoculum provient

Par la méthode ci-dessus, les activités du

n sont mis en suspension dans de la méthylcellulose à 0,1 %

et ils sont donnés au moyen d'un tube stomacal à des groupes de trois souris, à la dose de 2 mg pour 20 g du poids des souris, et le sang est recueilli du sinus orbital 1 heure, 5 2 heures et 4 heures après. L'urine est recueillie directement de chaque animal à la quatrième heure, après quoi les animaux sont sacrifiés. Le foie, les poumons, la cervelle et les muscles sont prélevés sur chaque animal et homogénéisés dans un égal volume (p/v) d'eau dans un homogénéiseur Polytron.

10 Les suspensions sont prélevées en extraits des tissus 1:2.

minées par voie microbiologique avec Bacillus pumilus, et dans l'urine elles sont déterminées à la fois avant et après une incubation de 18 heures avec de la Glusalase (glucuronidase 15 et sulfatase).

Les concentrations des médicaments sont déter-

(voir tableau I page suivante)

TABLEAU I

Activité antigonococcique et concentrations de 2,4—diamino-(3,5—di-alkyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidines dans le sang, l'urine et les tissus de souris

TMP

COMPOSE 1

COMPOSE 2

COMPOSE 3

COMPOSE 4

COMPOSE 5

Jy=>

W.S.T.A. : Milieu Wellcotest Sensitivity Test Agar G.C.A. : Milieu Difco G.C. Agar

Activité par rapport à celle de la TMP ** „ - - -

Examen répété

!

Activité antigonococcique

Résultats pharmacocinëtiques, 2 mg/souris P.O.

N.gonorrhaeae

N.meningitidis

E.coli (CN314)

Conc. dans le sang

Concentrations yg/ml à 4 heures dans :

w.S.T.A.

G • C • A •

1 h

»/ml à 2 h

4 h

Cervelle

Poumons

Foie

Muscles

Urine direcfc

Après glacolase

1

2,15

0,28

<0,02

<0,04

1,08

<0,04

200 (50%)

400

j 7

-

«

i

1,11

0,41

0,40

0,34

1,75

1,94

<0,03

56 (7%)

790

1 21

17**

- | 11 | 0,03

: i

1,36

0,50

0,44

0,5

1,8

3,75

^0,03

16 (2,5%)

650

21

18**

7 ! >0,1

1

0,88

0,9

0,8

0,44

3,6

5,0

0,21

39 (2,2%)

1800 |

!

; 18

17**

13

7

0,03

1,38

1,08

0,65

0,46

2,6

8,3

<0,03

95 (50%)

190

!-

-

7

-

4,25

4,0

3,0

i

4,4

11,2

6,0

i i *

C0,26

i

100 (42%)

240

/

w

EXEMPLE 1 :

2,4-Diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl) pyrimidine

On chauffe au reflux pendant 11 heures 7 g 5 (0,05 mole) de 2,4-diamino-5-hydroxyméthylpyrimidine avec

10,3 g (0,05 mole) de 2,6-di-t-butylphénol, 225 ml d'acide acétique cristallisable et 6,7 ml d'acide chlorhydrique concentré puis on élimine le solvant et on reprend la matière huileuse jaune restante dans un mélange de chloroforme et d'une solution 10 0,5M de bicarbonate de sodium. On ajuste la couche aqueuse à pH 8,5 et on extrait plusieurs fois avec du chloroforme, on sèche sur du sulfate de sodium les extraits chloroformiques réunis et on évapore à siccité. En faisant ensuite passer la matière restante sur une colonne de gel de silice, en éluant 15 avec un mélange de chloroforme et de méthanol d'abord dans le rapport 30:1 puis dans un rapport 18:1 et dans un rapport 9:1, on obtient deux produits, le second produit sortant de la colonne étant identifié par le spectre RMN comme étant le composé indiqué ci-dessus dans le titre, que l'on obtient avec 20 un rendement de 10,3 %, PF 208,5-210,5° après cristallisation dans le méthanol.

EXEMPLE 2 :

2,4-Diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidine

On chauffe au reflux pendant 6 heures un mélange de 7,1 g (0,05 mole) de 5-hydroxyméthyluracile (R.E.

Cline et al. J. Am. Chem. Soc. 81, 2521 (1959),-10,3 g (0,05 mole) de 2,6-di-t-butylphénol, 200 ml d'acide acétique cristallisable et 5 ml d'acide chlorhydrique concentré puis on élimine le solvant, ce qui laisse une matière solide blanche à laquelle on ajoute 100 ml d'eau et on ajuste le pH à 6,8. On sépare par filtration le précipité lourd formé, on le chauffe dans 250 ml d'éthanol absolu et on sépare par filtration 3,7 g d'un précipité blanc (récolte A). Le filtrat est dilué avec 250 ml d'eau puis refroidi, et on sépare alors par filtration 2,63 g d'un précipité jaune clair (récolte B). Ces deux précipités constituent le produit cherché, c'est-à-dire le 5-(3,5-di-t-

•s butyl-4-hydroxybenzyl)uracile, qui est identifié par chroma-tographie en couche mince et spectroscopie de RMN. Le rendement en ce produit est de 38,4 %.

<h?

25

30

35

■24>

On chauffe 3,3 g de la récolte A dans 40 ml d'oxychlorure de phosphore, le composé se dissolvant en une demi-heure, puis on continue à chauffer pendant encore 2 heures. On élimine ensuite le solvant, ce qui laisse une matière hui-5 leuse jaune que l'on met en suspension dans 100 ml d'eau glacée et on règle le pH à 6,8 avec du carbonate de sodium. En séparant par filtration le précipité qui se forme on obtient 2,60 g d'un précipité blanc, le rendement étant de 70,9 % en produit brut, pour lequel la spectroscopie RMN et la chromatographie 10 en couche mince montrent des traces d'impuretés, mais le composé principal est la 2,4-dichloro-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl) pyrimidine.

On chauffe dans 60 ml d'oxychlorure de phosphore 6,6 g de la récolte B (provenant de deux préparations) 15 puis on traite comme ci-dessus. Le précipité qui est filtré est huileux, on le dissout dans du chloroforme et on extrait deux fois avec chaque fois 50 ml d'eau (pH 5). Après avoir évaporé le chloroforme on obtient par recristallisation dans de l'éthanol absolu 2,21 g du composé dichloré en deux récoltes, 20 soit un rendement de 30,2 %, P.F. 145,5-146,5°. La liqueur-mère en contient encore 2,6 3 g et montre deux taches par chromatographie en couche mince.

On aminé 1 g (2,7 mmoles) de la 2,4-dichloro-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidine résultant de la 25 réaction ci-dessus, avec 35 ml d'une solution saturée d'ammoniac dans de l'éthanol absolu, pendant 7 heures dans une bombe à 140°. On évapore ensuite le solvant puis on reprend la matière restante dans un mélange 3:1 de chloroforme et de méthanol et 50 ml d'une solution 0,5M de NaHCO^ à pH 8,5, puis on évapore 30 la couche de chloroforme et de méthanol et on fait passer le produit sur une colonne de gel de silice en éluant avec un mélange chloroforme/méthanol (d'abord 30:1 puis 18:1). On récupère ainsi 0,15 g du composé cherché, c'est-à-dire de la 2,4-diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidine, soit 35 un rendement de 17 %. D'autres produits ont également été isolés. Les spectres de RMN et de masse confirment la structure du produit ainsi obtenu.

21)

EXEMPLE 3 :

2,4-Diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidine

On dissout 103 g (0,5 mole) de 2,6-di-t-butyl-phénol dans 500 ml d'éthanol, on ajoute 310 g de diméthylamine 5 à 20 % dans de l'éthanol absolu, à la température ordinaire et tout en agitant, puis on refroidit la solution à 5° et on lui ajoute 75 g de formaldéhyde à 37 %, soit 0,93 mole. On laisse ensuite la solution revenir à la température ordinaire et on agite pendant la nuit puis on chauffe au reflux pendant 3 heures, 10 on refroidit et on verse dans 2 litres d'eau glacée. Après un moment de repos il s'est formé un précipité que l'on sépare par filtration et que l'on recristallise dans de l'hexane,

ce qui donne le 2,6-di-t-butyl-4-N,N-diméthylaminométhylphénol avec un rendement de 90 %.

15 On dissout dans 65 ml d'éthylène-glycol

13,15 g (0,05 mole) de ce composé phénolique et 5,6 g (0,05 mole) d'uracile, puis on ajoute 2,7 g (0,05 mole) de méthylate de sodium, on chauffe pendant 6 heures tout en faisant passer un courant d'azote, on recueille la diméthylamine libérée et on 20 neutralise dans une quantité équivalente de solution aqueuse de E^SO^. Après refroidissement on ajoute 250 ml d'eau puis 5,7 ml d'acide acétique glacial à pH 4,5, on sépare le précipité par filtration et on le lave avec de l'eau et de l'éther, ce qui donne 12,98 g (rendement 78,7 %) de 5-(3,5-di-t-butyl-4-25 hydroxybenzyl)uracile dont la structure est confirmée par la chromatographie en couche mince et la spectroscopie de RMN.

On chlore 11,6 g (0,03 mole) de ce composé avec 130 ml d'oxychlorure de phosphore, en chauffant pendant 3 heures 1/2, puis on laisse refroidir. On élimine ensuite 30 le solvant et on ajoute 300 ml d'eau glacée, puis du carbonate de sodium jusqu'à pH 7,2, et en séparant par filtration le précipité formé on obtient 8,04 g, soit un rendement de 62,5 %, de 2,4-dichloro-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidine dont la spectroscopie RMN confirme la structure, et la chro-35 matographie en couche mince montre la présence de légères impuretés .

L'amination de ce produit se fait en deux réactions séparées dans des bombes. Pour la première on opère avec 4 g (0,011 mole) du produit ci-dessus et 50 ml d'éthanol saturé d'ammoniac, à 140° pendant quelques heures dans une bombe, 5 puis on élimine le solvant, on ajoute 100 ml d'une solution 0,05M de NaHC03 et on ajuste le pH à 8,5. On extrait la couche aqueuse quatre fois avec chaque fois 100 ml de chloroforme puis on évapore le chloroforme.

Pour la seconde amination on opère avec 3,77 g 10 (0,010 mole) de la dichloropyrimidine, de l'éthanol absolu et 30 ml d'éthanol saturé d'ammoniac, l'éthanol supplémentaire étant ajouté pour dissoudre le composé au début avant la réaction, mais celui-ci n'est pas très soluble dans l'éthanol. On chauffe la bombe à 165° pendant 8 heures puis on traite comme dans l'exemple 2. Les deux 15 fractions solubles dans le chloroforme sont purifiées sur une colonne de gel de silice avec élution au chloroforme puis avec un mélange chloroforme/méthanol 50:1 et ensuite 25:1. En réunissant les fractions qui correspondent à la 2,4-diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidine on obtient 1,72 g de produit 20 brut, soit un rendement de 24,7 %, puis en recristallisant dans du méthanol on obtient 1,25 g de produit. L'analyse élémentaire, la CCM et la RMN confirment l'identité de ce produit. Calculé : C 69,48 ; H 8,59 ; N 17,06 % - Trouvé : C 69,39 ; H 8,69 ; N 17,06 %. P.F. 208-210°C. D'autres produits sont également isolés 25 de la colonne. Une élévation de la température dans la bombe au cours de la réaction augmente la quantité du produit diaminé cherché.

EXEMPLE 4 :

2,4-Diamino-5-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzyl)pyrimidine

30 On chauffe au reflux pendant 4 heures un mélange de 23,4 g de 3,5-di-tert-butyl-5-hydroxybenzaldéhyde, 82,7 g . d'orthoformiate de triméthyle, 1 g de chlorure d'ammonium et 60 ml d'éthanol puis on refroidit rapidement le mélange en le versant dans 200 ml de NH^OH 3N et on concentre sous vide. On extrait 35 avec du chlorure de méthylène le mélange aqueux restant, on sèche l'extrait sur du carbonate de sodium, puis 1'évaporation du solvant

2 if-

donne l'acétal diraéthylique du 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzaldéhyde avec un rendement d'environ 95 %.

Tout en refroidissant, on ajoute ensuite 2,64 g d'hydrure de sodium à un mélange de 25,2 g de cet acétal 5 diméthylique et de 230 ml de N,N-diméthylformamide, et après avoir ajouté 16,2 g de bromure de benzyle on agite le mélange pendant 18 heures à la température ordinaire. On le refroidit ensuite brusquement en le versant dans 1 litre d'acide chlorhydrique normal puis on extrait le mélange avec du chlorure de méthylène 10 on lave l'extrait à l'eau, on le sèche sur MgSO^, on filtre et en éliminant le solvant on obtient le 4-benzyloxy-3,5-di-tert-butyl-benzaldéhyde avec un rendement d'environ 90 %.

On ajoute une solution de 24,8 g de ce benzaldéhyde dans 50 ml de DMSO à un mélange de 14 g de 3-morpholino-propioni-15 trile et de 4,32 g de méthylate de sodium dans 15 ml de DMSO à 75°C, et au bout de 15 minutes on refroidit le mélange et on lui ajoute 200 ml d'eau. On extrait ensuite avec du chlorure de méthylène, on lave l'extrait à l'eau et on le sèche sur du sulfate de magnésium puis en éliminant le solvant on obtient le 2-(4-benzyl-20 oxy-3,5-di-tert-butylbenzyl)-3-morpholino-acrylonitrile avec un rendement d'environ 70 %.

On chauffe au reflux pendant 1 heure un mélange de 25 g de ce morpholino-acrylonitrile, 5,6 g d'aniline, 5 ml d'acide chlorhydrique concentré et 200 ml d'éthanol puis on ajoute 2 5 12,8 g de chlorhydrate de guanidine et 8,6 g de méthylate de sodium et on poursuit le chauffage au reflux pendant encore une heure et demie. On élimine ensuite une partie du solvant et on continue à chauffer au reflux pendant encore une heure et demie puis on refroidit le mélange pendant une nuit entre 0 et 5°C, on sépare 30 par filtration le précipité formé et on le lave deux fois avec chaque fois 30 ml d'alcool froid. On remet ensuite le précipité en suspension dans 75 ml de NaOH à 2 %, on sépare la matière solide par filtration, on la lave à l'eau froide et on la sèche sous vide à 50°C, ce qui donne la 2,4-diamino-5-(4-benzyloxy-3,5-35 di-tert-butylbenzyl)pyrimidine avec un rendement de 50 % environ.

On soumet à une hydrogénation dans un appareil de Parr, à 40°C, un mélange de 11,3 g de cette pyrimidine, 1,1 g de charbon palladié à 5 % de palladium et 80 ml d'acide acétique cristallisable jusqu'à ce que la quantité théorique 5 d'hydrogène ait été absorbée, puis on sépare le catalyseur par filtration, on concentre la solution acétique et on refroidit. On libère ensuite la pyrimidine de son acétate en ajoutant de l'hydroxyde d'ammonium aqueux, on sépare par filtration la matière solide formée, on la lave à l'eau et on la sèche sous vide à 50°C, 10 ce qui donne la 2,4-diamino-5-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzyl)-pyrimidine avec un rendement d'environ 50 %, point de fusion 208,5-210,5°C.

EXEMPLE 5 :

Préparation de comprimés

15 2,4-Diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-

hydroxybenzyl)pyrimidine 100,0 mg

Lactose 85,0 mg

Fécule de pomme deterre séchée 14,3 mg

Stéarate de magnésium 0,7 mg

20 200,0 mg.

La pyrimidine, le lactose et la fécule sont mélangés et le mélange est granulé à l'eau, puis les granules sont sé'chés, mélangés avec le stéarate de magnésium et le mélange est comprimé de la manière habituelle.

2$

Claims

REVENDICATIONS

1.- Procédé de préparation d'une composition pharmaceutique consistant à mélanger un composé de formule ci-dessous

.10

JNJlo

=\

(VI)

dans laquelle Ri0 et R11, qui peuvent être identiques ou différents, sont des alkyles en C^ à C^, ou un sel d'un tel composé acceptable pour des usages pharmaceutiques, avec un véhicule 10 pharmaceutique.

2.- Procédé selon la revendication 1, dans lequel le composé de formule VI est la 2,4-diamino-5-(4-hydroxy-3,5-diisopropylbenzy1)pyrimidine.

3.- Procédé selon la revendication 1 ou 2, 15 dans lequel le composé de formule VI est sous la forme d'un sel formé avec l'acide chlorhydrique, sulfurique, citrique, tartrique, phosphorique, lactique, pyruvique, acétique, succinique, fumarique, maléique ou oxaloacétique.

4.- Procédé de préparation des composés de 20 formule générale ci-dessous

(VII)

12 13

dans laquelle R et R , qui peuvent être identiques ou différents, 25 sont chacun un groupe propyle ou butyle mais ne peuvent être à la fois chacun un groupe isopropyle, procédé selon lequel :

(I) On fait réagir un composé de formule VIII

(voir formule page suivante)

n oui.

/ 2

(VIII)

5 dans laquelle L est un groupe ou un atome devant s'éliminer, avec le phénol ayant les substituants voulus, de formule IX

10 ou bien

(II)

(IX)

on fait réagir un composé de formule X

110.

CII0 Z

(X)

15 dans laquelle Z représente un groupe hydroxy, un groupe amino disubstitué ou un atome d'halogène, avec un composé de formule XI

NII2

'a

(XI)

NII

'N Y

2

20 dans laquelle Y représente un atome d'hydrogène ou d'halogène ou un groupe alkylthio, aralkylthio ou mercapto, puis, si Y est un groupe alkylthio ou aralkylthio, on l'élimine par hydrogénolyse, ou bien

2%

14

(III) on élimine un groupe protecteur R défini d'un composé de formule XII

(XII)

ou bien

(IV) on fait réagir un composé de formule XIII

l15

10 nlS/ VciL — ( "OU CXI II)

15

dans laquelle R est un groupe ou un atome qui s'élimine ou un groupe amino mais les deux groupes r15 ne peuvent pas être tous deux des

16

15 groupes amino, et R est un atome d'hydrogène ou d'halogène,

avec un agent d'amination, puis, si R1 est un atome d'halogène, on l'élimine par une hydrogénolyse catalytique, ou bien

(V) on fait réagir la guanidine ou un sel de guanidine avec un composé de formule XIV ou XV

(voir formule XV page suivante)

21

ou avec son isomère benzvlidénique correspondant, formules dans

17 18

lesquelles R est un alkyle inférieur, R un groupe amino libre ou bien monosubstitué ou disubstitué ou encore un groupe alcoxy, 19

et R est un atome d'hydrogène ou un groupe formyle ou alcoxycarbonyle.

Original en 29 pages sans renvoi, ni mot nul , ni surcharge. Monte-Carlo, 23 mai 1979.