PL214332B1 - method of obtaining insoluble preparations of the chitosan hydrolysis katalyzing enzymes - Google Patents
method of obtaining insoluble preparations of the chitosan hydrolysis katalyzing enzymesInfo
- Publication number
- PL214332B1 PL214332B1 PL385093A PL38509308A PL214332B1 PL 214332 B1 PL214332 B1 PL 214332B1 PL 385093 A PL385093 A PL 385093A PL 38509308 A PL38509308 A PL 38509308A PL 214332 B1 PL214332 B1 PL 214332B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- culture
- medium
- inoculum
- weight
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 43
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 title claims description 30
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 29
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 title claims description 10
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 title claims description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 48
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 24
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 16
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 14
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 13
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 13
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 10
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 claims description 10
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 claims description 10
- 241000235526 Mucor racemosus Species 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 9
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 8
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 8
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 6
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 6
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 6
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 claims description 4
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 claims description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 claims description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 4
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 4
- 241000235395 Mucor Species 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 27
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 21
- 101710136247 Endo-chitosanase Proteins 0.000 description 13
- 108010014701 Exo-beta-D-glucosaminidase Proteins 0.000 description 13
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 10
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 10
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000235389 Absidia Species 0.000 description 1
- 241001149952 Amylomyces rouxii Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 239000006091 Macor Substances 0.000 description 1
- 241000207836 Olea <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 385093 (51) Int.Cl. (13) B1 (21) Application Number: 385093 (51) Int.Cl.
C12P 21/00 (2006.01) C12N 9/42 (2006.01) C12R 1/785 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 05.05.2008 C08B 37/08 (2006.01)C12P 21/00 (2006.01) C12N 9/42 (2006.01) C12R 1/785 (2006.01) (22) Filing date: 05.05.2008 C08B 37/08 (2006.01)
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu (73) Uprawniony z patentu:The method of obtaining insoluble preparations of enzymes catalyzing the hydrolysis of chitosan (73) The holder of the patent:
POLITECHNIKA ŁÓDZKA, Łódź, PL (43) Zgłoszenie ogłoszono:University of Lodz, Łódź, PL (43) Application was announced:
09.11.2009 BUP 23/09 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono:09.11.2009 BUP 23/09 (45) The grant of the patent was announced:
31.07.2013 WUP 07/13 (72) Twórca(y) wynalazku:31.07.2013 WUP 07/13 (72) Inventor (s):
KATARZYNA JADWIGA STRUSZCZYK,KATARZYNA JADWIGA STRUSZCZYK,
Zgierz, PLZgierz, PL
MIROSŁAWA SZCZĘSNA-ANTCZAK, Łódź, PL TADEUSZ ANTCZAK, Łódź, PL STANISŁAW BIELECKI, Łódź, PL (74) Pełnomocnik:MIROSŁAWA SZCZĘSNA-ANTCZAK, Łódź, PL TADEUSZ ANTCZAK, Łódź, PL STANISŁAW BIELECKI, Łódź, PL (74) Plenipotentiary:
rzecz. pat. Zbigniew Wojciech Bałczewskiitem. stalemate. Zbigniew Wojciech Bałczewski
PL 214 332 B1PL 214 332 B1
Opis wynalazkuDescription of the invention
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu.The subject of the invention is a method of obtaining insoluble preparations of enzymes that catalyze the hydrolysis of chitosan.
Z czasopisma Biotechnologia 2 (57), 193-206, (2002) jest znany sposób otrzymywania wewnątrzkomórkowego biokatalizatora, pochodzącego z pleśni Absidia orchidis, stosowanego w postaci rozpuszczonej w procesie hydrolizy chitozanu.From the journal Biotechnologia 2 (57), 193-206, (2002) there is a known method of obtaining intracellular biocatalyst derived from Absidia orchidis mold, used in dissolved form in the process of chitosan hydrolysis.
Z czasopisma Food Research International 38, 315-322, (2005) znany jest sposób otrzymywania zewnątrzkomórkowych biokatalizatorów pochodzących z pleśni Aspergillus CJ22, stosowanych w procesie hydrolizy chitozanu.From the Food Research International 38, 315-322, (2005) journal, there is known a method of obtaining extracellular biocatalysts derived from Aspergillus CJ22 mold, used in the chitosan hydrolysis process.
Z czasopisma FEMS Microbiology Letters vol. 95, 187-194, (1992), jest znany sposób otrzymywania dwóch wewnątrzkomórkowych biokatalizatorów (o aktywności endochitozanolitycznej), pochodzących z pleśni Mucor rouxii, stosowanych w postaci roztworu w procesie hydrolizy chitozanu jak i jego pochodnych.From the journal FEMS Microbiology Letters vol. 95, 187-194, (1992), there is a known method of obtaining two intracellular biocatalysts (with endochitosanolytic activity) derived from Mucor rouxii mold, used in the form of a solution in the hydrolysis of chitosan and its derivatives.
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu, w drodze hodowli pleśni z rodzaju Mucor, według wynalazku polega na tym, że wyodrębnione szczepy pleśni Mucor circinelloides CH81 lub Mucor racemosus CH52, po inkubacji na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym składzie w częściach wagowych: 0,001-0,0001 części chitozanu lub chitooligosacharydów, 20-30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 8-9°Be, hoduje się w temperaturze 29-31°C, w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników zmytych z tego podłoża 3 szczepi się wysterylizowane podłoże inokulacyjne w proporcji 1 cm zawiesiny zarodników na 100 cm3 wysterylizowanego podłoża hodowlanego o wyjściowym pH = 4,6-5,0 i prowadzi hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18-26 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 10-20% objętościo-1 wych i szybkości obrotowej wstrząsarki 150-280 minut-1. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepia się, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak podłoże w hodowli inokulum, stosując 3-12% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzi hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 42-72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania z szybkością obrotową 200-650 min-1, doprowadzając powietrze w ilości 0,5-1,5 części objętościowych na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej, poddaje się 2-5-krotnemu przemyciu acetonem o temperaturze od 25°C do -20°C, stosowanym w ilości 10-20 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy i otrzymany nierozpuszczalny preparat enzymatyczny suszy się na powietrzu w temperaturze 10-25°C.The method of obtaining insoluble preparations of enzymes catalyzing the hydrolysis of chitosan by culturing molds of the genus Mucor, according to the invention, consists in isolating the mold strains Mucor circinelloides CH81 or Mucor racemosus CH52, after incubation on a sterilized and cooled solid medium in parts by weight: 0.001- 0.0001 parts of chitosan or chitooligosaccharides, 20-30 parts of agar, 1000 parts of brewing wort, 8-9 ° Be, cultivated at 29-31 ° C for 3-5 days and with a suspension of spores washed from this medium 3, the sterilized inoculum is inoculated in the proportion of 1 cm of the spore suspension per 100 cm 3 of the sterilized culture medium with an initial pH = 4.6-5.0 and the shake culture is carried out at 28-31 ° C for 18-26 hours at flask filling degree of 10-20% by volume and shaker rotational speed 150-280 minutes -1 . The inoculum obtained as a result of this culture is inoculated, previously sterilized and pre-aerated with sterile air, into a culture medium with a composition similar to that in the inoculum culture, using 3-12% by volume of the inoculum in relation to the volume of the medium, and the production culture is carried out in submerged conditions at the temperature of 29-31 ° C, for 42-72 hours in the presence of anti-foaming agents, while stirring at a rotational speed of 200-650 min -1 , supplying air in the amount of 0.5-1.5 parts by volume per 1 part by volume of substrate in time 1 minute, the biomass obtained as a result of the production culture, after separation from the post-culture liquid, is washed 2-5 times with acetone at a temperature of 25 ° C to -20 ° C, used in the amount of 10-20 parts by weight per 1 part by weight of the filtered off biomass and the obtained insoluble enzyme preparation is air-dried at 10-25 ° C.
Hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-40 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub rzepakowego, 30-50 części namoku kukurydzianego, 0,2-1 części chityny, N-acetyloglukozoaminy lub chitozanu oraz 1000 części wody destylowanej lub na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-40 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub rzepakowego, 30-50 części namoku kukurydzianego oraz 1000 części wody destylowanej względnie na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-30 części glukozy, 5-20 części bactopeptonu, 0,5-3 części ekstraktu drożdżowego, 3-10 części (NH2)2SO4, 0,52 części K2HPO4, 3-10 części MgSO4 x 7H2O, 0,5-2 części NaCl, 0,01-0,3 części CaCl2 oraz 1000 części wody destylowanej.The inoculum and production culture are carried out on a medium composed of 10-40 parts by weight of olive oil or oil, preferably soybean, sunflower or rapeseed oil, 30-50 parts corn steep, 0.2-1 part chitin, N-acetylglucosamine or chitosan and 1000 parts distilled water or on a medium with the composition in parts by weight 10-40 parts olive oil or oil, preferably soybean, sunflower or rapeseed oil, 30-50 parts corn steep and 1000 parts distilled water or on a medium with the composition in parts by weight 10-30 parts of glucose, 5-20 parts of bactopeptone, 0.5-3 parts of yeast extract, 3-10 parts of (NH2) 2SO4, 0.52 parts of K2HPO4, 3-10 parts of MgSO4 x 7H2O, 0.5-2 parts NaCl, 0.01-0.3 parts of CaCl2 and 1000 parts of distilled water.
Zgodnie z odmianą wynalazku biomasę otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej zamraża się do temperatury od -25°C do -10°C, liofilizuje się do końcowej zawartości wody 3-8% wagowych z zachowaniem końcowej temperatury liofilizacji 10-30°C i otrzymany odwodniony nierozpuszczalny preparat enzymatyczny ekstrahuje się heksanem i suszy nad chlorkiem wapniowym lub na powietrzu w temperaturze 4-25°C.According to a variant of the invention, the biomass obtained as a result of the production culture is frozen to a temperature of -25 ° C to -10 ° C, lyophilized to a final water content of 3-8% by weight, maintaining the final lyophilization temperature of 10-30 ° C and the obtained dehydrated insoluble the enzyme preparation is extracted with hexane and dried over calcium chloride or in air at 4-25 ° C.
Sposób według wynalazku zezwala na otrzymanie nierozpuszczalnych preparatów enzymów 3 z wydajnością 10-24 g suchej substancji z 1 dm3 podłoża, wykazujących w reakcji hydrolizy chitozanu, w zależności od rodzaju szczepu oraz składu podłoża hodowlanego, aktywność endochitozanazy równą 267-464 unit/g preparatu oraz aktywność egzochitozanazy równą 0,075-0,518 U/g preparatu. Otrzymane sposobem według wynalazku preparaty charakteryzują się także wysoką trwałością w czasie przechowywania w temperaturze pokojowej.The method according to the invention allows for obtaining insoluble enzyme preparations 3 with the yield of 10-24 g of dry substance from 1 dm 3 of substrate, showing in the chitosan hydrolysis reaction, depending on the type of strain and the composition of the culture medium, endochitosanase activity equal to 267-464 unit / g of preparation and an exochitosanase activity equal to 0.075-0.518 U / g of the preparation. The preparations obtained by the method according to the invention are also characterized by high stability during storage at room temperature.
PL 214 332 B1PL 214 332 B1
Sposób według wynalazku ilustrują bliżej podane niżej przykłady.The process according to the invention is illustrated in the following examples.
P r z y k ł a d I.P r z x l a d I.
Zarodniki pleśni Mucor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego, 0,5 części chitozanu oraz 1000 części wody destylowanej, wyjściowym pH = 4,70 wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 minut-1. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli inokulum, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31°C, w czasie 42 godziny, w obecności środków przeciwdziałających pie-1 nieniu, przy mieszaniu z szybkością obrotową 200 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty. Otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, zalewano kolejno 3 porcjami acetonu schłodzonego do temperatury -20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy i mieszano za każdym razem w czasie 5 minut. Przemytą biomasę odsączono na przegrodzie celulozowej i suszono na powietrzu w czasie 18 godzin w temperaturze 20°C.Mucor circinelloides CH81 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.001 parts of chitosan, 30 parts of agar, 1000 parts of brewing broth at a concentration of 8.5 ° Be, at 30 ° C for 3 days, washed 0.01% sterile solution of Triton X-100 and the obtained spore suspension, the inoculum was inoculated in parts by weight: 27 parts olive oil, 37 parts corn steep, 0.5 part chitosan and 1000 parts distilled water, initial pH = 4, 70 sterilized for 30 minutes at 121 ° C with 1 cm 3 of spores per 100 cm 3 of culture medium, and a shake culture was carried out at 28-31 ° C for 18 hours with a flask filling degree of 20% by volume and a shaker rotational speed 280 minutes -1 . The inoculum obtained as a result of this culture was inoculated, previously sterilized and pre-aerated with sterile air, in a culture medium with a composition similar to that in the inoculum culture, using 10% of the inoculum volume in relation to the volume of the medium, and the production culture was carried out under deep conditions at the temperature of 29-31 ° C. C, during 42 hours, in the presence of anti-foaming agents, with agitation at a rotation speed of 200 minutes -1 , with 1 part by volume air per 1 part by volume medium of air for 1 minute. The biomass obtained as a result of the production culture, after separation from the culture liquid by filtration, was successively poured with 3 portions of acetone cooled to -20 ° C, used in the amount of 15 parts by weight per 1 part by weight of filtered biomass, and mixed each time for 5 minutes. . The washed biomass was filtered through a cellulose barrier and air dried for 18 hours at 20 ° C.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 23,3 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 380,9 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,189 U/g preparatu.An insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 23.3 g from 1 liter of medium, with an endochitosanase activity equal to 380.9 unit / g and an exochitosanase activity equal to 0.189 U / g of the preparation.
P r z y k ł a d II.P r z x l a d II.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0001 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie jak w przykładzie I.Mucor racemosus CH52 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.0001 parts of chitosan, 30 parts of agar, 1000 parts of brewing broth at a concentration of 8.5 ° Be, at a temperature of 30 ° C for 3 days , washed with 0.01% sterile solution of Triton X-100 and the obtained spore suspension inoculated with the composition as in Example 1.
Dalej postępowano jak w przykładzie I.The next step was as in example 1.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 23,8 g z 1 litra podłoża o aktywności endochitozanazy równej 267,3 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,157 U/g preparatu.An insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 23.8 g from 1 liter of medium with the endochitosanase activity equal to 267.3 unit / g and the exochitosanase activity equal to 0.157 U / g preparation.
P r z y k ł a d III.P r x l a d III.
Biomasę Mucor circinelloides CH81, otrzymaną jak w przykładzie I, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, zamrożono do temperatury -25°C i liofilizowano do końcowej zawartości wody 5% wagowych z zachowaniem końcowej temperatury liofilizacji 25°C. Otrzymany odwodniony, nierozpuszczalny preparat enzymatyczny ekstrahowano heksanem i suszono na powietrzu w temperaturze 25°C.Mucor circinelloides CH81 biomass, obtained as in Example 1, after separation from the culture liquid by filtration, was frozen to -25 ° C and lyophilized to a final water content of 5% by weight with a final lyophilization temperature of 25 ° C. The resulting dehydrated, insoluble enzyme preparation was extracted with hexane and air dried at 25 ° C.
Otrzymano preparat enzymatyczny w ilości 24,4 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 371,5 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,164 U/g preparatu.The enzyme preparation was obtained in the amount of 24.4 g from 1 liter of medium, with the endochitosanase activity equal to 371.5 unit / g and the exochitosanase activity equal to 0.164 U / g of the preparation.
P r z y k ł a d IV.P r x l a d IV.
Biomasę Mucor racemosus CH52, otrzymaną jak w przykładzie I, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, zamrożono do temperatury -25°C i liofilizowano do końcowej zawartości wody 5% wagowych z zachowaniem końcowej temperatury liofilizacji 25°C. Otrzymany odwodniony, nierozpuszczalny preparat enzymatyczny ekstrahowano heksanem i suszono na powietrzu w temperaturze 25°C. Otrzymano preparat enzymatyczny w ilości 21,5 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 211,9 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,141 U/g preparatu.Mucor racemosus CH52 biomass, obtained as in Example 1, after separation from the culture liquid by filtration, was frozen to -25 ° C and lyophilized to a final water content of 5% by weight with the final lyophilization temperature being 25 ° C. The resulting dehydrated, insoluble enzyme preparation was extracted with hexane and air dried at 25 ° C. The enzyme preparation was obtained in the amount of 21.5 g from 1 liter of medium, with the endochitosanase activity equal to 211.9 unit / g and the exochitosanase activity equal to 0.141 U / g of the preparation.
P r z y k ł a d V.P r z k ł a d V.
Zarodniki pleśni Mucor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001 części chitooligosacharydów, 20 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego, 0,5 części N-acetyloglukozaminy oraz 1000 części wody destylowanej, o wyjściowym pH=4,70, wyste33 rylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121 °C, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłożaMucor circinelloides CH81 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.001 parts of chitooligosaccharides, 20 parts of agar, 1000 parts of brewing broth at a concentration of 8.5 ° Be, at 30 ° C for 3 days, washed A 0.01% sterile solution of Triton X-100 and the obtained spore suspension were inoculated into an inoculum with the composition in parts by weight: 27 parts olive oil, 37 parts corn steep, 0.5 part N-acetylglucosamine and 1000 parts distilled water, at the initial pH = 4.70, wyste33 rylizowane for 30 minutes at 121 ° C using a 1 cm 3 100 spores per cm 3 of the substrate
PL 214 332 B1 hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C w czasie 18 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 min-1. Otrzymanym w wyniku hodowli wstrząsanej inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli wstrząsanej, stosując 10 % objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31°C, w czasie 72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, mieszając zawartość fermentora z szybkością obrotowąAnd the shake culture was carried out at 28-31 ° C for 18 hours with a flask filling degree of 20% by volume and a shaker rotation speed of 280 min- 1 . The inoculum obtained as a result of the shake culture was inoculated, previously sterilized and pre-aerated with sterile air, in a culture medium with a composition similar to that in the shake culture, using 10% by volume of the inoculum in relation to the volume of the medium, and the production culture was carried out under submerged conditions at 29-31 ° C. C, during 72 hours, in the presence of anti-foaming agents, stirring the contents of the fermenter at a speed of rotation
650 min-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty i otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, 3-krotnie przemywano acetonem o temperaturze 20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy. Uzyskany preparat enzymatyczny suszono na powietrzu w temperaturze 20°C.650 min -1 , supplying air in the amount of 1 part by volume to 1 part by volume of substrate for 1 minute and the biomass obtained as a result of production culture, after separation from the culture liquid by filtration, washed 3 times with acetone at a temperature of 20 ° C, used in an amount of 15 parts by weight per 1 part by weight of filtered biomass. The obtained enzyme preparation was air dried at 20 ° C.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 20,5 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 456,5 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,106 U/g preparatu.An insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 20.5 g from 1 liter of medium, with endochitosanase activity equal to 456.5 unit / g and exochitosanase activity equal to 0.106 U / g preparation.
P r z y k ł a d VI.P r x l a d VI.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0001 części chitooligosacharydów, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie jak w przykładzie V. Dalej postępowano jak w przykładzie V.Mucor racemosus CH52 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.0001 parts of chitooligosaccharides, 30 parts of agar, 1000 parts of brewing broth at a concentration of 8.5 ° Be at 30 ° C for 3 days , was washed with 0.01% sterile solution of Triton X-100 and the obtained spore suspension was inoculated with the inoculation medium with the composition as in Example V. The next procedure was as in Example 5.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 14,3 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 324,1 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,071 U/g preparatu.An insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 14.3 g from 1 liter of medium, with an endochitosanase activity equal to 324.1 unit / g and an exochitosanase activity equal to 0.071 U / g of the preparation.
P r z y k ł a d VII.P r o x l a d VII.
Zarodniki pleśni Macor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0005 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego, 0,5 części chityny 1000 części wody destylowanej i wyjściowym pH=4,70 wysterylizowane w czasie 30 minut w tem33 peraturze 121 °C, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31 °C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objęto-1 ściowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 minut-1. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli wstrząsanej, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 42-72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania z szybkością obrotową 200 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, a otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, poddano 3-krotnemu przemyciu acetonem o temperaturze 20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy. Uzyskany preparat enzymatyczny suszono na powietrzu w temperaturze 20°C.Macor circinelloides CH81 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.0005 parts of chitosan, 30 parts of agar, 1000 parts of brewing broth at a concentration of 8.5 ° Be at 30 ° C for 3 days , washed with 0.01% sterile solution of Triton X-100 and the obtained spore suspension was inoculated into the inoculum with the composition in parts by weight: 27 parts olive oil, 37 parts corn steep, 0.5 part chitin 1000 parts distilled water and starting pH = 4 , 70 sterilized for 30 minutes at 121 ° C with 1 cm 3 of spores per 100 cm 3 of culture medium, and a shake culture was carried out at 28-31 ° C for 18 hours with a flask filling degree of 20% by volume. Single stage and shaker rotational speed 280 minutes -1 . The inoculum obtained as a result of this culture was inoculated, previously sterilized and pre-aerated with sterile air, in a culture medium with a composition similar to that in the shake culture, using 10% of the inoculum volume in relation to the volume of the medium, and the production culture was carried out in submerged conditions at 29-31 ° C. C, during 42-72 hours, in the presence of anti-foaming agents, while mixing at a rotational speed of 200 minutes -1 , supplying air in the amount of 1 part by volume to 1 part by volume of medium for 1 minute, and the biomass obtained as a result of the production culture After separation from the culture liquid by filtration, it was washed 3 times with acetone at 20 ° C, used in the amount of 15 parts by weight per 1 part by weight of filtered biomass. The obtained enzyme preparation was air dried at 20 ° C.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 20,9 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 463,4 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,115 U/g preparatu.An insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 20.9 g from 1 liter of medium, with endochitosanase activity equal to 463.4 unit / g and exochitosanase activity equal to 0.115 U / g preparation.
P r z y k ł a d VIII.P r x l a d VIII.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0005 części chitooligosacharydów, 30 części agam, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych jak w przykładzie VII.Mucor racemosus CH52 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.0005 parts of chitooligosaccharides, 30 parts of agam, 1000 parts of brewing broth at a concentration of 8.5 ° Be, at a temperature of 30 ° C for 3 days , washed with 0.01% sterile solution of Triton X-100, and the obtained spore suspension was inoculated into an inoculum with the composition in parts by weight as in Example 7.
Dalej postępowano jak w przykładzie VII.The next step was as in Example VII.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 15,2 g z 1 I podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 313,5 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,075 U/g preparatu.An insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 15.2 g from 1 I of medium, with the endochitosanase activity equal to 313.5 unit / g and the exochitosanase activity equal to 0.075 U / g of the preparation.
P r z y k ł a d IX.P r x l a d IX.
Zarodniki pleśni Mucor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczkiMucor circinelloides CH81 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.001 parts of chitosan, 30 parts of agar, 1000 parts of wort
PL 214 332 B1 piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody destylowanej i wyjściowym pH= 4,70 wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121 °C, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 minut-1. Otrzymanym w wyniku hodowli wstrząsanej inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli wstrząsanej, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 42-72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania z szybkością obrotową 650 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, a otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, poddano 3-krotnemu przemyciu acetonem o temperaturze 20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy. Uzyskany preparat suszono na powietrzu w temperaturze 20°C.In the brewing industry with a concentration of 8.5 ° Be, at the temperature of 30 ° C for 3 days, washed with 0.01% sterile solution of Triton X-100 and the obtained spore suspension inoculated with the composition in parts by weight: 27 parts of olive oil from olives, 37 parts of corn steep, 1000 parts of distilled water and starting pH = 4.70 sterilized for 30 minutes at 121 ° C, using 1 cm 3 of spores per 100 cm 3 of culture medium, and shaking culture was carried out at 28-31 ° C, during 18 hours, with a flask filling of 20% by volume and a shaker rotation speed of 280 minutes -1 . The inoculum obtained as a result of the shake culture was inoculated, previously sterilized and pre-aerated with sterile air, in a culture medium with a composition similar to that in the shake culture, using 10% by volume of the inoculum in relation to the volume of the medium, and the production culture was carried out under submerged conditions at 29-31 ° C. C, during 42-72 hours, in the presence of anti-foaming agents, while mixing at a rotational speed of 650 minutes -1 , supplying air in the amount of 1 part by volume to 1 part by volume of medium for 1 minute, and the biomass obtained as a result of the production culture After separation from the culture liquid by filtration, it was washed 3 times with acetone at 20 ° C, used in the amount of 15 parts by weight per 1 part by weight of filtered biomass. The obtained preparation was air-dried at 20 ° C.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymatyczny w ilości 22,4 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 449,0 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,081 U/g preparatu.An insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 22.4 g from 1 liter of medium, with the endochitosanase activity equal to 449.0 unit / g and the exochitosanase activity equal to 0.081 U / g of the preparation.
P r z y k ł a d X.P r z k ł a d X.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001 części chitooligosacharydów, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych jak w przykładzie IX.Mucor racemosus CH52 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.001 parts of chitooligosaccharides, 30 parts of agar, 1000 parts of brewing broth at a concentration of 8.5 ° Be, at 30 ° C for 3 days, washed A 0.01% sterile solution of Triton X-100 and the obtained spore suspension were inoculated into an inoculum with the composition in parts by weight as in Example 9.
Dalej postępowano jak w przykładzie IX.The next step was as in Example 9.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymatyczny w ilości 22,4 g z 1 I podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 355,3 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,053 U/g preparatu.The obtained insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 22.4 g from 1 I of medium, with endochitosanase activity equal to 355.3 unit / g and exochitosanase activity equal to 0.053 U / g preparation.
P r z y k ł a d XI.P r z x l a d XI.
Zarodniki pleśni Mucor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0006 części chitooligosacharydów, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 20 części glukozy, 10 części bactopeptonu, 1 część ekstraktu drożdżowego, 5 części (NH4)2SO4, 1 część K2HPO4, 5 części MgSO4 x 7H2O, 1 część NaCl, 0,1 część CaCl2 oraz 1000 części wody destylowanej i wyjściowym pH=4,70 wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121 °C, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31 °C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 minut-1. Otrzymanym w wyniku hodowli wstrząsanej inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli wstrząsanej, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 42-72 godzin, w obecności środków przeciwdziałają-1 cych pienieniu, w trakcie mieszania z szybkością obrotową 200 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, a otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, poddano 3-krotnemu przemyciu acetonem o temperaturze 20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy. Uzyskany preparat suszono na powietrzu w temperaturze 20°C. Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymatyczny w ilości 9,6 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 311,8 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,518 U/g preparatu.Mucor circinelloides CH81 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.0006 parts chitooligosaccharides, 30 parts agar, 1000 parts brewing broth at a concentration of 8.5 ° Be at 30 ° C for 3 days , washed with 0.01% sterile solution of Triton X-100 and the obtained spore suspension was inoculated inoculum with the composition in parts by weight: 20 parts of glucose, 10 parts of bactopeptone, 1 part of yeast extract, 5 parts of (NH4) 2SO4, 1 part of K2HPO4, 5 parts of MgSO4 x 7H2O, 1 part of NaCl, 0.1 part of CaCl2 and 1000 parts of distilled water and starting pH = 4.70 sterilized for 30 minutes at 121 ° C, using 1 cm 3 of spores per 100 cm 3 of culture medium, and the shake culture at 28-31 ° C for 18 hours, the flask filling was 20% by volume, and the shaker was rotating at 280 minutes -1 . The inoculum obtained as a result of the shake culture was inoculated, previously sterilized and pre-aerated with sterile air, in a culture medium with a composition similar to that in the shake culture, using 10% by volume of the inoculum in relation to the volume of the medium, and the production culture was carried out under submerged conditions at 29-31 ° C. C, during 42-72 hours, in the presence of anti-foaming agents, while stirring at a rotational speed of 200 minutes -1 , introducing air in the amount of 1 part by volume per 1 part by volume of substrate for 1 minute, and the resulting of the production culture, the biomass, after separation from the culture liquid by filtration, was washed 3 times with acetone at a temperature of 20 ° C, used in the amount of 15 parts by weight per 1 part by weight of filtered biomass. The obtained preparation was air-dried at 20 ° C. An insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 9.6 g per 1 liter of substrate, with the endochitosanase activity equal to 311.8 unit / g and the exochitosanase activity equal to 0.518 U / g of the preparation.
P r z y k ł a d XII.P r x l a d XII.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0005 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnymMucor racemosus CH52 mold spores, obtained by incubation on a solid medium with the composition in parts by weight: 0.0005 parts of chitosan, 30 parts of agar, 1000 parts of brewing broth at a concentration of 8.5 ° Be, at a temperature of 30 ° C for 3 days washed with 0.01% sterile
PL 214 332 B1 roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych jak w przykładzie XI.With the Triton X-100 solution and the obtained spore suspension the inoculum was inoculated in parts by weight as in Example 11.
Dalej postępowano jak w przykładzie XI.The next step was as in Example 11.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymatyczny w ilości 15,1 g z I litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 188,5 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,449 U/g preparatu.An insoluble enzyme preparation was obtained in the amount of 15.1 g from 1 liter of medium, with an endochitosanase activity equal to 188.5 unit / g and an exochitosanase activity equal to 0.449 U / g of the preparation.
Claims (8)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL385093A PL214332B1 (en) | 2008-05-05 | 2008-05-05 | method of obtaining insoluble preparations of the chitosan hydrolysis katalyzing enzymes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL385093A PL214332B1 (en) | 2008-05-05 | 2008-05-05 | method of obtaining insoluble preparations of the chitosan hydrolysis katalyzing enzymes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL385093A1 PL385093A1 (en) | 2009-11-09 |
| PL214332B1 true PL214332B1 (en) | 2013-07-31 |
Family
ID=42987205
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL385093A PL214332B1 (en) | 2008-05-05 | 2008-05-05 | method of obtaining insoluble preparations of the chitosan hydrolysis katalyzing enzymes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL214332B1 (en) |
-
2008
- 2008-05-05 PL PL385093A patent/PL214332B1/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL385093A1 (en) | 2009-11-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gern et al. | Alternative medium for production of Pleurotus ostreatus biomass and potential antitumor polysaccharides | |
| US9708634B2 (en) | Process for making chitin derivatives | |
| US8617857B2 (en) | Thraustochytrid-based microalgae, and method for preparing bio-oil by using same | |
| EP2360238B1 (en) | A yellow pigments generation deficient sphingomonas strain and its application in the production of gellan gum | |
| CN105018544B (en) | With the carrageenan oligosaccharide and its preparation method and application for promoting sea cucumber growth and degeneration-resistant effect | |
| US20130344576A1 (en) | Extraction of scenedesmus cell components | |
| KR20160048393A (en) | Mutant strain Aureobasidium pullulans YK1 produced by ultraviolet irradiation and production method of? -Glucan using the same | |
| GB2385330A (en) | Crude gellan gel | |
| Arifin et al. | Profile of microorganisms and amylose content of white corn flours of two local varieties as affected by fermentation process | |
| Singh et al. | Chitinase production by Serratia marcescens GG5 | |
| WO2012089843A2 (en) | Extraction of scenedesmus cell components | |
| CN102618468A (en) | Temperature-resistant alcaligenes and application thereof in welan gum production | |
| KR100462904B1 (en) | Manufacturing process for producing Alginate lyase using Xanthomonas sp. BH-1, newly isolated marine bacterium | |
| RU2295563C1 (en) | Bacterium strain lactococcus lactis subcpecies lactis b-8558 useful in dairy product preparation and method for production of starter culture of strain lactococcus lactis subcpecies lactis b-8558 | |
| JP2002159290A (en) | Novel lipase and method for producing the same | |
| PL217339B1 (en) | Method for obtaining insoluble preparations of the enzyme catalyzing the hydrolysis of chitosan | |
| PL217332B1 (en) | Method for obtaining insoluble preparations of the enzyme catalyzing the hydrolysis of chitosan | |
| Delbarre-Ladrat et al. | Diversity of Exopolysaccharides from Marine Bacteria and their Gelling Properties | |
| PL222382B1 (en) | Method for preparing the formulation aid of enzymes environmental bioremediation of hydrocarbon contaminated heavy crude oil and a method for bioremediation of contaminated environment heavy crude oil | |
| JP4969178B2 (en) | Method for producing macrohomopsis gum | |
| PL217361B1 (en) | Method for preparing an insoluble product of Mucor racemosus lipase | |
| PL217358B1 (en) | Method for preparing an insoluble product of Mucor racemosus lipase | |
| PL217360B1 (en) | Method for preparing an insoluble product of Mucor circinelloides lipase | |
| PL227786B1 (en) | Method for obtaining preparation of oxidoreductive enzymes | |
| PL217686B1 (en) | Method for obtaining an insoluble preparation of the Mucor circinelloides lipase |