PL214332B1 - Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu - Google Patents
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanuInfo
- Publication number
- PL214332B1 PL214332B1 PL385093A PL38509308A PL214332B1 PL 214332 B1 PL214332 B1 PL 214332B1 PL 385093 A PL385093 A PL 385093A PL 38509308 A PL38509308 A PL 38509308A PL 214332 B1 PL214332 B1 PL 214332B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- parts
- culture
- medium
- inoculum
- weight
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 43
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 title claims description 30
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 29
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 title claims description 10
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 title claims description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 48
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 24
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 16
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 14
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 13
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 13
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 10
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 10
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 claims description 10
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 claims description 10
- 241000235526 Mucor racemosus Species 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 9
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 241000306281 Mucor ambiguus Species 0.000 claims description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 claims description 8
- 238000011049 filling Methods 0.000 claims description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 8
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 6
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 6
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 6
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 6
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 claims description 4
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 claims description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 claims description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 4
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 4
- 241000235395 Mucor Species 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 27
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 21
- 101710136247 Endo-chitosanase Proteins 0.000 description 13
- 108010014701 Exo-beta-D-glucosaminidase Proteins 0.000 description 13
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 10
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 10
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 239000011942 biocatalyst Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000235389 Absidia Species 0.000 description 1
- 241001149952 Amylomyces rouxii Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 239000006091 Macor Substances 0.000 description 1
- 241000207836 Olea <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
(13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 385093 (51) Int.Cl.
C12P 21/00 (2006.01) C12N 9/42 (2006.01) C12R 1/785 (2006.01) (22) Data zgłoszenia: 05.05.2008 C08B 37/08 (2006.01)
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu (73) Uprawniony z patentu:
POLITECHNIKA ŁÓDZKA, Łódź, PL (43) Zgłoszenie ogłoszono:
09.11.2009 BUP 23/09 (45) O udzieleniu patentu ogłoszono:
31.07.2013 WUP 07/13 (72) Twórca(y) wynalazku:
KATARZYNA JADWIGA STRUSZCZYK,
Zgierz, PL
MIROSŁAWA SZCZĘSNA-ANTCZAK, Łódź, PL TADEUSZ ANTCZAK, Łódź, PL STANISŁAW BIELECKI, Łódź, PL (74) Pełnomocnik:
rzecz. pat. Zbigniew Wojciech Bałczewski
PL 214 332 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu.
Z czasopisma Biotechnologia 2 (57), 193-206, (2002) jest znany sposób otrzymywania wewnątrzkomórkowego biokatalizatora, pochodzącego z pleśni Absidia orchidis, stosowanego w postaci rozpuszczonej w procesie hydrolizy chitozanu.
Z czasopisma Food Research International 38, 315-322, (2005) znany jest sposób otrzymywania zewnątrzkomórkowych biokatalizatorów pochodzących z pleśni Aspergillus CJ22, stosowanych w procesie hydrolizy chitozanu.
Z czasopisma FEMS Microbiology Letters vol. 95, 187-194, (1992), jest znany sposób otrzymywania dwóch wewnątrzkomórkowych biokatalizatorów (o aktywności endochitozanolitycznej), pochodzących z pleśni Mucor rouxii, stosowanych w postaci roztworu w procesie hydrolizy chitozanu jak i jego pochodnych.
Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu, w drodze hodowli pleśni z rodzaju Mucor, według wynalazku polega na tym, że wyodrębnione szczepy pleśni Mucor circinelloides CH81 lub Mucor racemosus CH52, po inkubacji na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym składzie w częściach wagowych: 0,001-0,0001 części chitozanu lub chitooligosacharydów, 20-30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 8-9°Be, hoduje się w temperaturze 29-31°C, w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników zmytych z tego podłoża 3 szczepi się wysterylizowane podłoże inokulacyjne w proporcji 1 cm zawiesiny zarodników na 100 cm3 wysterylizowanego podłoża hodowlanego o wyjściowym pH = 4,6-5,0 i prowadzi hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18-26 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 10-20% objętościo-1 wych i szybkości obrotowej wstrząsarki 150-280 minut-1. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepia się, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak podłoże w hodowli inokulum, stosując 3-12% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzi hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 42-72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania z szybkością obrotową 200-650 min-1, doprowadzając powietrze w ilości 0,5-1,5 części objętościowych na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej, poddaje się 2-5-krotnemu przemyciu acetonem o temperaturze od 25°C do -20°C, stosowanym w ilości 10-20 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy i otrzymany nierozpuszczalny preparat enzymatyczny suszy się na powietrzu w temperaturze 10-25°C.
Hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-40 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub rzepakowego, 30-50 części namoku kukurydzianego, 0,2-1 części chityny, N-acetyloglukozoaminy lub chitozanu oraz 1000 części wody destylowanej lub na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-40 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub rzepakowego, 30-50 części namoku kukurydzianego oraz 1000 części wody destylowanej względnie na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-30 części glukozy, 5-20 części bactopeptonu, 0,5-3 części ekstraktu drożdżowego, 3-10 części (NH2)2SO4, 0,52 części K2HPO4, 3-10 części MgSO4 x 7H2O, 0,5-2 części NaCl, 0,01-0,3 części CaCl2 oraz 1000 części wody destylowanej.
Zgodnie z odmianą wynalazku biomasę otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej zamraża się do temperatury od -25°C do -10°C, liofilizuje się do końcowej zawartości wody 3-8% wagowych z zachowaniem końcowej temperatury liofilizacji 10-30°C i otrzymany odwodniony nierozpuszczalny preparat enzymatyczny ekstrahuje się heksanem i suszy nad chlorkiem wapniowym lub na powietrzu w temperaturze 4-25°C.
Sposób według wynalazku zezwala na otrzymanie nierozpuszczalnych preparatów enzymów 3 z wydajnością 10-24 g suchej substancji z 1 dm3 podłoża, wykazujących w reakcji hydrolizy chitozanu, w zależności od rodzaju szczepu oraz składu podłoża hodowlanego, aktywność endochitozanazy równą 267-464 unit/g preparatu oraz aktywność egzochitozanazy równą 0,075-0,518 U/g preparatu. Otrzymane sposobem według wynalazku preparaty charakteryzują się także wysoką trwałością w czasie przechowywania w temperaturze pokojowej.
PL 214 332 B1
Sposób według wynalazku ilustrują bliżej podane niżej przykłady.
P r z y k ł a d I.
Zarodniki pleśni Mucor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego, 0,5 części chitozanu oraz 1000 części wody destylowanej, wyjściowym pH = 4,70 wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121°C stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 minut-1. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli inokulum, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31°C, w czasie 42 godziny, w obecności środków przeciwdziałających pie-1 nieniu, przy mieszaniu z szybkością obrotową 200 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty. Otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, zalewano kolejno 3 porcjami acetonu schłodzonego do temperatury -20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy i mieszano za każdym razem w czasie 5 minut. Przemytą biomasę odsączono na przegrodzie celulozowej i suszono na powietrzu w czasie 18 godzin w temperaturze 20°C.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 23,3 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 380,9 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,189 U/g preparatu.
P r z y k ł a d II.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0001 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie jak w przykładzie I.
Dalej postępowano jak w przykładzie I.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 23,8 g z 1 litra podłoża o aktywności endochitozanazy równej 267,3 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,157 U/g preparatu.
P r z y k ł a d III.
Biomasę Mucor circinelloides CH81, otrzymaną jak w przykładzie I, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, zamrożono do temperatury -25°C i liofilizowano do końcowej zawartości wody 5% wagowych z zachowaniem końcowej temperatury liofilizacji 25°C. Otrzymany odwodniony, nierozpuszczalny preparat enzymatyczny ekstrahowano heksanem i suszono na powietrzu w temperaturze 25°C.
Otrzymano preparat enzymatyczny w ilości 24,4 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 371,5 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,164 U/g preparatu.
P r z y k ł a d IV.
Biomasę Mucor racemosus CH52, otrzymaną jak w przykładzie I, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, zamrożono do temperatury -25°C i liofilizowano do końcowej zawartości wody 5% wagowych z zachowaniem końcowej temperatury liofilizacji 25°C. Otrzymany odwodniony, nierozpuszczalny preparat enzymatyczny ekstrahowano heksanem i suszono na powietrzu w temperaturze 25°C. Otrzymano preparat enzymatyczny w ilości 21,5 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 211,9 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,141 U/g preparatu.
P r z y k ł a d V.
Zarodniki pleśni Mucor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001 części chitooligosacharydów, 20 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego, 0,5 części N-acetyloglukozaminy oraz 1000 części wody destylowanej, o wyjściowym pH=4,70, wyste33 rylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121 °C, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża
PL 214 332 B1 hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C w czasie 18 godzin przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 min-1. Otrzymanym w wyniku hodowli wstrząsanej inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli wstrząsanej, stosując 10 % objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31°C, w czasie 72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, mieszając zawartość fermentora z szybkością obrotową
650 min-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty i otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, 3-krotnie przemywano acetonem o temperaturze 20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy. Uzyskany preparat enzymatyczny suszono na powietrzu w temperaturze 20°C.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 20,5 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 456,5 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,106 U/g preparatu.
P r z y k ł a d VI.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0001 części chitooligosacharydów, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie jak w przykładzie V. Dalej postępowano jak w przykładzie V.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 14,3 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 324,1 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,071 U/g preparatu.
P r z y k ł a d VII.
Zarodniki pleśni Macor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0005 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego, 0,5 części chityny 1000 części wody destylowanej i wyjściowym pH=4,70 wysterylizowane w czasie 30 minut w tem33 peraturze 121 °C, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31 °C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objęto-1 ściowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 minut-1. Otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli wstrząsanej, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 42-72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania z szybkością obrotową 200 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, a otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, poddano 3-krotnemu przemyciu acetonem o temperaturze 20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy. Uzyskany preparat enzymatyczny suszono na powietrzu w temperaturze 20°C.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 20,9 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 463,4 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,115 U/g preparatu.
P r z y k ł a d VIII.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0005 części chitooligosacharydów, 30 części agam, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych jak w przykładzie VII.
Dalej postępowano jak w przykładzie VII.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymów w ilości 15,2 g z 1 I podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 313,5 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,075 U/g preparatu.
P r z y k ł a d IX.
Zarodniki pleśni Mucor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki
PL 214 332 B1 piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 27 części oliwy z oliwek, 37 części namoku kukurydzianego, 1000 części wody destylowanej i wyjściowym pH= 4,70 wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121 °C, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 minut-1. Otrzymanym w wyniku hodowli wstrząsanej inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli wstrząsanej, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 42-72 godzin, w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania z szybkością obrotową 650 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, a otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, poddano 3-krotnemu przemyciu acetonem o temperaturze 20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy. Uzyskany preparat suszono na powietrzu w temperaturze 20°C.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymatyczny w ilości 22,4 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 449,0 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,081 U/g preparatu.
P r z y k ł a d X.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001 części chitooligosacharydów, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych jak w przykładzie IX.
Dalej postępowano jak w przykładzie IX.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymatyczny w ilości 22,4 g z 1 I podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 355,3 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,053 U/g preparatu.
P r z y k ł a d XI.
Zarodniki pleśni Mucor circinelloides CH81, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0006 części chitooligosacharydów, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych: 20 części glukozy, 10 części bactopeptonu, 1 część ekstraktu drożdżowego, 5 części (NH4)2SO4, 1 część K2HPO4, 5 części MgSO4 x 7H2O, 1 część NaCl, 0,1 część CaCl2 oraz 1000 części wody destylowanej i wyjściowym pH=4,70 wysterylizowane w czasie 30 minut w temperaturze 121 °C, stosując 1 cm3 zarodników na 100 cm3 podłoża hodowlanego i prowadzono hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31 °C, w czasie 18 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 20% objętościowych i szybkości obrotowej wstrząsarki 280 minut-1. Otrzymanym w wyniku hodowli wstrząsanej inokulum zaszczepiono, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak w hodowli wstrząsanej, stosując 10% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzono hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 42-72 godzin, w obecności środków przeciwdziałają-1 cych pienieniu, w trakcie mieszania z szybkością obrotową 200 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 1 część objętościowa na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, a otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej na drodze filtracji, poddano 3-krotnemu przemyciu acetonem o temperaturze 20°C, stosowanym w ilości 15 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy. Uzyskany preparat suszono na powietrzu w temperaturze 20°C. Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymatyczny w ilości 9,6 g z 1 litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 311,8 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,518 U/g preparatu.
P r z y k ł a d XII.
Zarodniki pleśni Mucor racemosus CH52, otrzymane w wyniku inkubacji na podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,0005 części chitozanu, 30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej o stężeniu 8,5°Be, w temperaturze 30°C w czasie 3 dni, zmywano 0,01% sterylnym
PL 214 332 B1 roztworem Tritonu X-100 i otrzymaną zawiesiną zarodników szczepiono podłoże inokulacyjne o składzie w częściach wagowych jak w przykładzie XI.
Dalej postępowano jak w przykładzie XI.
Otrzymano nierozpuszczalny preparat enzymatyczny w ilości 15,1 g z I litra podłoża, o aktywności endochitozanazy równej 188,5 unit/g oraz aktywności egzochitozanazy równej 0,449 U/g preparatu.
Claims (8)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu, w drodze hodowli pleśni z rodzaju Mucor, znamienny tym, że wyodrębnione szczepy pleśni Mucor circinelloides CH81 lub Mucor racemosus CH52, po inkubacji na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001-0,0001 części chitozanu lub chitooligosacharydów, 20-30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 8-9°Be, hoduje się w temperaturze 29-31 °C, w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników zmytych z tego podłoża szczepi się wysterylizowane podłoże inokulacyjne stosując 1 cm3 zawiesiny zarodników na 100 cm3 wysterylizowanego podłoża hodowlanego o wyjściowym pH = 4,6-5,0 i prowadzi się hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31°C, w czasie 18-26 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 10-20% objętościo-1 wych i szybkości obrotowej wstrząsarki 150-280 minut-1, otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepia się, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak podłoże w hodowli inokulum, stosując 3-12% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzi hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31°C, w czasie 42-72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu, w trakcie mieszania z szybkością obrotową 200-650 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 0,5-1,5 części objętościowych na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę, po oddzieleniu od cieczy pohodowlanej, poddaje się 2-5-krotnemu przemyciu acetonem o temperaturze od 25°C do -20°C, stosowanym w ilości 10-20 części wagowych na 1 część wagową odfiltrowanej biomasy i otrzymany nierozpuszczalny preparat enzymatyczny suszy się na powietrzu w temperaturze 10-25°C.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-40 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub rzepakowego, 30-50 części namoku kukurydzianego, 0,2-1 części chityny, N-acetyloglukozoaminy lub chitozanu oraz 1000 części wody destylowanej.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-40 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub rzepakowego, 30-50 części namoku kukurydzianego oraz 1000 części wody destylowanej.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-30 części glukozy, 5-20 części bactopeptonu, 0,5-3 części ekstraktu drożdżowego, 3-10 części (NH4)2SO4, 0,52 części K2HPO4, 3-10 części MgSO4 x 7H2O, 0,5-2 części NaCl, 0,01-0,3 części CaCl2 oraz 1000 części wody destylowanej.
- 5. Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu, w drodze hodowli pleśni z rodzaju Mucor, znamienny tym, że wyodrębnione szczepy pleśni Mucor circinelloides CH81 lub Mucor racemosus CH52, po inkubacji na wysterylizowanym i wychłodzonym podłożu stałym o składzie w częściach wagowych: 0,001-0,0001 części chitozanu lub chitooligosacharydów, 20-30 części agaru, 1000 części brzeczki piwowarskiej, o stężeniu 8-9°Be, hoduje się w temperaturze 29-31 °C, w czasie 3-5 dni i zawiesiną zarodników zmytych z tego podłoża szczepi się wysterylizowane podłoże inokulacyjne stosując 1 cm3 zawiesiny zarodników na 100 cm3 wysterylizowanego podłoża hodowlanego o wyjściowym pH = 4,6-5,0 i prowadzi się hodowlę wstrząsaną w temperaturze 28-31 °C, w czasie 18-26 godzin, przy stopniu napełnienia kolb 10-20% objętościo-1 wych i szybkości obrotowej wstrząsarki 150-280 minut-1, otrzymanym w wyniku tej hodowli inokulum zaszczepia się, uprzednio wysterylizowane i wstępnie napowietrzone sterylnym powietrzem, podłoże hodowlane o składzie analogicznym jak podłoże w hodowli inokulum, stosując 3-12% objętościowych inokulum w stosunku do objętości podłoża i prowadzi hodowlę produkcyjną w warunkach wgłębnych, w temperaturze 29-31 °C, w czasie 42-72 godzin w obecności środków przeciwdziałających pienieniu,PL 214 332 B1 w trakcie mieszania z szybkością obrotową 200-650 minut-1, doprowadzając powietrze w ilości 0,5-1,5 części objętościowych na 1 część objętościową podłoża w czasie 1 minuty, otrzymaną w wyniku hodowli produkcyjnej biomasę zamraża się do temperatury od -25°C do -10°C, liofilizuje się do końcowej zawartości wody 3-8% wagowych z zachowaniem końcowej temperatury liofilizacji 10-30°C i otrzymany odwodniony nierozpuszczalny preparat enzymatyczny ekstrahuje się heksanem i suszy nad chlorkiem wapniowym lub na powietrzu w temperaturze 4-2 5°C.
- 6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi się na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-40 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub rzepakowego, 30-50 części namoku kukurydzianego, 0,2-1 części chityny, N-acetyloglukozoaminy lub chitozanu oraz 1000 części wody destylowanej.
- 7. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-40 części oliwy z oliwek lub oleju, korzystnie sojowego, słonecznikowego lub rzepakowego, 30-50 części namoku kukurydzianego oraz 1000 części wody destylowanej.
- 8. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że hodowlę inokulum i hodowlę produkcyjną prowadzi na podłożu o składzie w częściach wagowych 10-30 części glukozy, 5-20 części bactopeptonu, 0,5-3 części ekstraktu drożdżowego, 3-10 części (NH4)2SO4, 0,52 części K2HPO4, 3-10 części MgSO4 x 7H2O, 0,5-2 części NaCl, 0,01-0,3 części CaCl2 oraz 1000 części wody destylowanej.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL385093A PL214332B1 (pl) | 2008-05-05 | 2008-05-05 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL385093A PL214332B1 (pl) | 2008-05-05 | 2008-05-05 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL385093A1 PL385093A1 (pl) | 2009-11-09 |
| PL214332B1 true PL214332B1 (pl) | 2013-07-31 |
Family
ID=42987205
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL385093A PL214332B1 (pl) | 2008-05-05 | 2008-05-05 | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL214332B1 (pl) |
-
2008
- 2008-05-05 PL PL385093A patent/PL214332B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL385093A1 (pl) | 2009-11-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gern et al. | Alternative medium for production of Pleurotus ostreatus biomass and potential antitumor polysaccharides | |
| US9708634B2 (en) | Process for making chitin derivatives | |
| US8617857B2 (en) | Thraustochytrid-based microalgae, and method for preparing bio-oil by using same | |
| EP2360238B1 (en) | A yellow pigments generation deficient sphingomonas strain and its application in the production of gellan gum | |
| CN105018544B (zh) | 具有促进海参生长和抗逆作用的卡拉胶寡糖及其制法和应用 | |
| US20130344576A1 (en) | Extraction of scenedesmus cell components | |
| KR20160048393A (ko) | 자외선 조사를 이용하여 제조된 변이균주 아우레오바시디움 풀루란스 YK1 및 이를 이용한 β-글루칸 생산 방법 | |
| PL214332B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| Arifin et al. | Profile of microorganisms and amylose content of white corn flours of two local varieties as affected by fermentation process | |
| Singh et al. | Chitinase production by Serratia marcescens GG5 | |
| WO2012089843A2 (en) | Extraction of scenedesmus cell components | |
| CN102618468A (zh) | 一种耐温型产碱杆菌及其在威兰胶生产中的应用 | |
| KR100462904B1 (ko) | 신규한 해양 미생물 잔토모나스 에스피. 비에이치-1을이용한 알긴산 분해효소의 제조방법 | |
| RU2295563C1 (ru) | Штамм бактерий lactococcus lactis subspecies lactis вкпм в-8558, используемый в производстве молочных продуктов, и способ получения стартерной культуры штамма lactococcus lactis subspecies lactis вкпм в-8558 | |
| JP2002159290A (ja) | 新規リパーゼおよびその製造方法 | |
| PL217339B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| PL217332B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnych preparatów enzymów katalizujących hydrolizę chitozanu | |
| PL222382B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów wspomagającego bioremediację środowiska zanieczyszczonego węglowodorami ciężkiej frakcji ropy naftowej oraz sposób bioremediacji środowiska zanieczyszczonego ciężką frakcją ropy naftowej | |
| JPH0124121B2 (pl) | ||
| PL217361B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217358B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor racemosus | |
| PL217360B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| PL227786B1 (pl) | Sposób otrzymywania preparatu enzymów oksydoredukcyjnych | |
| PL217359B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides | |
| PL217686B1 (pl) | Sposób otrzymywania nierozpuszczalnego preparatu lipazy Mucor circinelloides |