PT664121E

PT664121E - Inibicao da oxidacao de ldl e aterosclerose

Info

Publication number: PT664121E
Application number: PT94309461T
Authority: PT
Inventors: Steven Harold Zuckerman
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1993-12-21
Filing date: 1994-12-19
Publication date: 2002-03-28
Also published as: AU698389B2; EP0664121A1; CN1095663C; DE69433348D1; EP1095654A3; DE69433578D1; EP0963756A2; TW427902B; CZ320494A3; IL112034A; ES2163425T3; ES2210089T3; EP1095654B1; EP0664121B1; RU2127592C1; PT1095654E; ES2215270T3; DE69433578T2; ZA9410091B; DK0664121T3

Description

-1 - L- % 3X ’·'Λ DESCRIÇÃO "INIBIÇÃO DA OXIDAÇÃO DE LDL E ATEROSCLEROSE" A aterosclerose, tal como se manifesta na sua maior complicação clínica, a doença isquémica do coração, continua a ser uma das maiores causas de morte nos países industrializados. É agora bem aceite que a aterosclerose pode começar com um dano local no endotélio arterial seguido pela proliferação de células do músculo liso arterial partindo da camada intermédia para a camada íntima com, ao mesmo tempo, deposição de lípidos e acumulação de células espumosasderivadas de macrófagos na lesão. À medida que a placa ateros-clerótica se desenvolve, inclui progressivamente mais e mais do vaso sanguíneo afectado e pode acabar por conduzir a isquémia ou a enfarte. Portanto, é desejável fornecer métodos de inibir a progressão de aterosclerose em pacientes que deles necessitem. Há provas, baseadas em descobertas laboratoriais e sobre animais, que a peroxidação do lípido LDL, tal como as porções de ácidos gordos insaturados dos ésteres de colesterilo e fosfolípidos de LDL, facilita a acumulação do colesterol em monócitos/macrófagos que acabam por se transformar em células espumosas e se depositam no espaço sub-endotelial da parede do vaso. A acumulação de células espumosas na parede do vaso é reconhecida como um acontecimento precoce na formação de uma placa aterosclerótica. Assim, crê-se que a peroxidação do lípido LDL é um importante requisito prévio para a acumulação facilitada de colesterol na parede do vaso e para a formação subsequente de uma placa aterosclerótica. Por exemplo, foi -2-

demonstrado que os monócito/macrófagos absorvem e degradam o LDL nativo a velocidades relativamente baixas e sem marcada acumulação de colesterol. Por contraste, o LDL oxidado é absorvido por estes monócito/macrófagos a velocidades muito mais elevadas e com marcada acumulação de colesterol [Parthasarathy et al., J. Clin Invest. 77, 641 (1986)]. É, portanto, desejável fornecer métodos que inibam a peroxidação do lípido LDL num paciente que deles necessite.

Foi demonstrado que o 2,2'-bis(3,5-di-butil terciário-4-hidroxife-niltio)propano (também conhecido como probucol), que é um anti-oxidante conhecido, pode prevenir a progressão da aterosclerose numa forma que é independente do seu efeito sobre a redução dos níveis de colesterol no plasma [Ver Kita et al. Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84, 5928 (1987); Carew et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84, 7725, (1987)]. Crê-se que os antioxidantes, como o probucol, podem evitar ou inibir o desenvolvimento da aterosclerose pela inibição da peroxidação de LDL e evitar, assim, a facilitada acumulação de colesterol em monócito/macrófagos que acabariam por se transformar em células espumosas e se depositarem no espaço sub-endotelial da parede do vaso [Ver Parthasarathy et al., J. Clin Invest. 77, 641 (1986)]. Em conformidade, é desejável fornecer um método de inibir a peroxidação do LDL. A presente invenção refere-se a certos compostos que são úteis como inibidores da oxidação do lípido LDL, aterosclerose, produtos finais de glicosilação avançada (AGE) ou glicação de proteínas de AGE, e aniões de superóxido e outros intermediários de oxigénio reactivo. A invenção proporciona o uso de um composto da fórmula -3-

ou Ο -Ar, onde Ar é tènilo opcionalmente substituído; R2é

/ I \ ou

—N

e seus sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos, na preparação de um medicamento para inibir a aterosclerose. A invenção fornece ainda o uso de um composto de fórmula I como atrás definida, na preparação de um medicamento para inibir a doença isquémica do coração. A presente invenção diz respeito à descoberta de que um grupo selecto de compostos, os de fórmula I, são úteis para inibir a oxidação de LDL, aterosclerose, AGE, e aniões de superóxido e outros intermediários de oxigénio reactivo. O uso proporcionado por esta invenção permite a administração a um ser humano ou outro mamífero que necessite de uma dose de um composto de -4-

L

i fórmula I ou de um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato do mesmo, que seja eficaz para inibir o que precede. O termo inibir é definido como incluindo o seu significado geralmente aceite de que inclui o tratar profilaticamente um ser humano sujeito a incorrer numa das situações que precedem e a detê-la e/ou a tratar um problema existente como atrás referido. Nessa qualidade, o presente uso inclui uma terapêutica médica e/ou tratamento profilático, consoante for apropriado.

Geralmente, o composto é formulado com excipientes comuns, solventes ou suportes, e prensado em comprimidos, ou formulado como elixires ou soluções para conveniente administração oral, ou é administrado pelas vias intramuscular ou intravenosa. Os compostos podem ser administrados transder-micamente, e podem ser formulados como formas de doseamento de libertação sustentada e afins.

Os compostos de fórmula I usados na presente invenção podem ser fabricados de acordo com procedimentos estabelecidos, como os descritos nas Patentes U.S. No. 4.133.814, 4.418.068 e 4.380.635. Em geral, o processo inicia-se como um benzo[b]tiofeno tendo um grupo 6-hidroxilo e um grupo 2-(4-hidroxifenil). O composto de partida é protegido, acilado, e desprotegido para formar os compostos de fórmula I. Exemplos da preparação desses compostos são fornecidos nas patentes U.S. atrás indicadas. O fenilo opcionalmente substituído inclui fenilo e fenilo substituído uma ou duas vezes com alquilo Cp Cô, alcoxi C1-C4, hidroxi, nitro, cloro, fluoro, ou tr(cloro ou fluorojmetilo.

Está incluído na invenção o uso do composto que se segue, conhecido como raloxifeno: -5-

Η

. HCl Ο (ΙΑ)

Os compostos usados na invenção formam sais de adição de ácido e de base farmaceuticamente aceitáveis com uma grande variedade de ácidos e bases, orgânicos e inorgânicos, e incluem os sais físiologicamente aceitáveis que são frequentemente usados em química farmacêutica. Esses sais também fazem parte desta invenção. Entre os ácidos inorgânicos típicos usados para formar esses sais incluem-se os ácidos clorídrico, bromídrico, iodídrico, nítrico, sulfúrico, fosfórico, hipofosfórico e afins. Também podem ser usados os sais derivados de ácidos orgânicos como os ácidos alifáticos mono e dicarboxílicos, ácidos alcanóicos fenil-substituídos, ácidos hidroxi-alcanóicos e hidroxi-alcandióicos, ácidos aromáticos, ácidos sulfónicos alifáticos e aromáticos. Esses sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, assim, acetato, fenilacetato, trifluoroacetato, acrilato, ascorbato, benzoato, clorobenzoato, dinitrobenzoato, hidroxibenzoato, metoxibenzoato, metilbenzoato, o-acetoxibenzoato, naftaleno-2-benzoato, brometo, isobutirato, fenilbutirato, β-hidroxibutirato, butino-1,4-dioato, hexino-l,4-dioato, caprato, caprilato, cloreto, cinamato, citrato, formato, fumarato, glicolato, heptanoato, hipurato, lactato, malato, maleato, hidroxi-maleato, malonato, mandelato, mesilato, nicotinato, isonicotinato, nitrato, oxalato, ftalato, teraftalato, fosfato, mono-hidrogenofosfato, di-hidrogenofosfato, metafosfato, pirofosfato, propiolato, propionato, fenilpropionato, salicilato, sebacato, succinato, suberato, sulfato, bissulfato, pirossulfato, sulfito, bissulfito, sulfonato, benzeno-sulfonato, p-bromofenilsulfonato, clorobenzeno-sulfonato, etano-sulfonato, 2-hidroxi-etano-sulfonato, metano-sulfonato, naftaleno-1-sulfonato, naftaleno-2-sulfonato, p-tolueno-sulfonato, xileno-sulfonato e tartarato. Um sal preferível é o sal hidrocloreto. -6-

{,

Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis são tipicamente formados pela reacção de um composto de fórmula I com uma quantidade equimolar ou excessiva de ácido. Os reagentes são, geralmente, combinados num solvente mútuo como éter dietílico ou benzeno. Normalmente, o sal precipita da solução dentro de cerca de uma hora a 10 dias e pode ser isolado por filtração ou o solvente pode ser extraído por meios convencionais.

Entre as bases comummente usadas para a formação de sais incluem-se hidróxido de amónio e hidróxidos, carbonatos e bicarbonatos de metais alcalinos e alcalino-terrosos, bem como aminas alifáticas e aromáticas, diaminas alifáticas e hidroxialquilaminas. Entre as bases especialmente úteis na preparação de sais de adição incluem-se hidróxido de amónio, carbonato de potássio, bicarbonato de sódio, hidróxido de cálcio, metilamina, dietilamina, etileno-diamina, ciclo-hexilamina e etanolamina.

Os sais farmaceuticamente aceitáveis têm, geralmente, caracterís-ticas de solubilidade potenciada comparados com o composto a partir do qual derivam e, assim, são ffequentemente mais acessíveis a formulação como líquidos ou emulsões.

As formulações farmacêuticas podem ser preparadas por processos conhecidos na técnica. Por exemplo, os compostos podem ser formulados com excipientes comuns, diluentes ou suportes, e formados em comprimidos, cápsulas, suspensões e pós. Exemplos de excipientes, diluentes e suportes que são adequados a essas formulações incluem o seguinte: enchimentos e ampliadores como amido, açúcares, manitol e derivados silícicos; agentes de ligação como caboximetil-celulose e outros derivados de celulose, alginatos, gelatina e polivi-nil-pirrolidona; agentes de humidificação como glicerol; agentes de desintegração como agar-agar, carbonato de cálcio e bicarbonato de sódio; agentes para -7- Άβ > i;flr ΙΛ\, is f 5 .1 «-Ί retardar a dissolução como parafina; aceleradores da resorção como compostos de amónio quaternário; agentes tensoactivos como álcool cetílico, monostearato de glicerol; suportes adsorventes como caolino e bentonite; e lubrificantes como talco, estearato de cálcio e de magnésio e polietilglicóis sólidos.

Os compostos podem também ser formulados como elixires ou soluções para conveniente administração oral ou como soluções apropriadas para administração parentérica, por exemplo, por vias intramuscular, subcutânea ou intravenosa. Adicionalmente, os compostos são bem adequados a formulação como formas de doseamento de libertação sustentada e afins. As formulações podem ser constituídas de maneira a apenas libertarem o ingrediente activo ou, preferivelmente, numa particular porção do tracto intestinal, possivelmente ao longo de certo tempo. Os revestimentos, invólucros e matrizes protectoras podem ser fabricados, por exemplo, a partir de substâncias poliméricas ou ceras. A aterosclerose é um estado de doença caracterizado pelo aparecimento e desenvolvimento de lesões ou placa aterosclerótica. A identificação dos pacientes que necessitam de tratamento para a aterosclerose está bem dentro da capacidade e conhecimentos dos especialistas na técnica. Por exemplo, indivíduos que sofrem quer de aterosclerose clínica significativa ou que estão em risco de desenvolver aterosclerose clínica significativa são pacientes que necessitam de tratamento para a aterosclerose. Um médico especializado na técnica pode determinar prontamente, pelo uso de testes clínicos, exame físico e história médico-familiar, se um indivíduo é um paciente que necessita de tratamento para a aterosclerose.

Uma quantidade anti-aterosclerótica eficaz de um composto de fórmula (1) é uma quantidade que é eficaz para inibir o aparecimento ou o desenvolvimento de aterosclerose num paciente que dele necessite. Como tal, entende-se que o tratamento bem sucedido de um paciente de aterosclerose inclui -8- -8- \ /i J' u t- /<5>. ‘ o retardamento, a interrupção, a confmação ou a detenção do aparecimento ou desenvolvimento da lesão ou placa aterosclerótica e não indica necessariamente uma eliminação total da aterosclerose. Os especialistas na técnica entendem e consideram ainda que o tratamento bem sucedido da aterosclerose pode incluir profilaxia na prevenção da formação da lesão ou placa aterosclerótica. A invenção abrange também a inibição de aniões de superóxido, e os níveis/quantidade de outros intermediários de oxigénio reactivo (IOR). Crê-se que, devido às suas capacidades de eliminar os radicais livres, os compostos sejam úteis em instâncias como a inibição do Síndrome de Aflição Repiratória Aguda, a resposta inflamatória sistémica que é frequentemente observada depois da cirurgia de "bypass" cardiopulmonar, pancreatite e problemas de terapia respiratória a longo prazo associados a elevados níveis de oxigénio. A peroxidação do lípido LDL, como as porções de ácido gordo insaturado dos ésteres colesterílícos de LDL e de fosfolípidos, é conhecida por facilitar a deposição de colesterol em macrófagos que, subsequentemente, são depositados na parede do vaso e são transformados em células espumosas. A identificação desses pacientes que necessitam da inibição da peroxidação do lípido LDL está bem dentro da capacidade e do conhecimento dos especialistas na técnica. Por exemplo, os indivíduos que necessitam de tratamento à aterosclerose como atrás definimos, são também pacientes que necessitam da inibição da peroxidação do lípido LDL. Uma quantidade anti-oxidante eficaz de um composto de fórmula (1) é uma quantidade que é eficaz para inibir a peroxidação de lípido LDL no sangue do paciente.

Uma dose eficaz dos compostos descritos para as complicações enunciadas pode ser determinada pelo uso de técnicas convencionais e pela observação dos resultados obtidos em circunstâncias análogas. Na determinação da dose eficaz, são considerados alguns factores incluindo, mas não se limitando -9- bA··? a: a espécie do paciente; o seu tamanho, idade e estado geral de saúde; a doença específica em causa; o grau de, ou envolvimento ou gravidade da doença; a resposta do paciente individual; o particular composto administrado; o modo de administração; as características de biodisponibilidade da preparação administrada; o regime de dose seleccionado; e o uso de medicação concomitante.

As doses diárias eficazes e geralmente aceites serão de 0,1 a 1000 mg/dia e, mais tipicamente, entre 50 e 200 mg/dia. Essas doses serão administradas a um sujeito que necessite de tratamento entre uma e cerca de três vezes todos os dias, ou mais frequentemente se necessário, para inibir eficazmente um dos problemas enunciados.

Usualmente, é preferido administrar um composto de fórmula I na forma de um sal de adição de ácido, tal como é habitual na administração de produtos farmacêuticos que exibem um grupo básico, tal como o anel de piperidino. Também é vantajoso administrar um desses compostos pela via oral. Para esses fins, estão disponíveis as formas de doseamento oral que se seguem.

Formulações

Nas formulações que se seguem, "Ingrediente activo" significa um composto de fórmula I.

Formulação 1 Cápsulas de gelatina São preparadas cápsulas de gelatina dura usando o seguinte: -10- f\J· Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Ingrediente activo 0,1 - 1000 Amido, NF 0 - 650 Amido em pó fluível 0 - 650 Fluido de silicone 350 mm2/s (centistokes) 0 - 15 Os ingredientes são misturados, passados por um crivo de 0,3 mm (malha U.S. No. 45) e introduzidos em cápsulas de gelatina dura. Exemplos de formulações específicas para cápsulas do composto de fórmula 1 onde o composto é raloxifeno, incluem as que se indicam a seguir: Formulação 2 Cápsula de raloxifeno Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Raloxifeno 1 Amido, NF 112 Amido em pó fluível 225,3 Fluido de silicone 350 mm2/s (centistokes) 1,7 Formulação 3 Cápsula de raloxifeno ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Raloxifeno 5 Amido, NF 108 Amido em pó fluível 225,3 Fluido de silicone 350 mm2/s (centistokes) 1,7 -π- J&t

Formulação 4 Cápsula de raloxifeno

Ingrediente Quantidade (mg/cápsulal Raloxifeno 10 Amido, NF 103 Amido em pó fluível 225,3 Fluido de silicone 350 mm2/s (centistokes) 1,7

Formulação 5 Cápsula dc raloxifeno Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Raloxifeno 50 Amido, NF 150 Amido em pó fluível 397 Fluido de silicone 350 mm2/s (centistokes) 3,0

As formulações específicas atrás referidas podem ser modificadas de acordo com as razoáveis variações fornecidas.

Prepara-se uma formulação para comprimidos usando os ingredientes que se seguem:

Formulação 6 Comprimidos

Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Ingrediente activo 0,1 - 1000 Celulose, microcristalina 0 - 650 Dióxido de silício, fumado 0 - 650 Acido de estearato 0 - 15 Os componentes são misturados e prensados para formar comprimidos. Altemativamente, comprimidos contendo, cada, 0,1 - 1000 mg de ingrediente activo são fabricados como segue: Formulação 7 Comprimidos Ingrediente Quantidade (mg/cápsula) Ingrediente activo 0,1 - 1000 Amido 45 Celulose, microcristalina 35 Polivinilpirrolidona 4 (como solução a 10% cm água) Carboximetil-celulose de sódio 4,5 Estearato de magnésio 0,5 Talco 1

Os ingredientes activos, amido e celulose são passados através de um crivo de 0,3 mm (malha U.S. No. 45) e muito bem misturados. A solução de polivilpirrolidona é misturada com os pós resultantes que são, então, passados através de um crivo de 1,5 mm (malha U.S. No. 14). Os grânulos assim produzidos são secos a 50°-60°C e passados através de um crivo de 1,0 mm (malha U.S. No. 18). O carboximetil-amido de sódio, o estearato de magnésio e o talco, previamente passados através de um crivo de 0,2 mm (malha U.S. No. 60), são então adicionados aos grânulos que, depois de misturados, são prensados numa máquina de comprimidos para produzir comprimidos. Suspensões contendo, cada, 0,1 - 1000 mg de medicamento, por dose de 5 mL, são fabricadas como segue:

Formulação 8 Suspensões

Ingrediente

Quantidade (mg/cápsula)

Ingrediente activo Carboximetil-celulose de sódio Xarope de açúcar Solução de ácido benzóico 0,1 - 1000 mg 50 mg 1,25 mg 0,10 m

L

Aroma Cor q. b. q. b. Água purificada até 5 m - 14- O medicamento é passado através de um crivo de 0,3 mm (malha U.S. No. 45) e misturado com a carboximetil-celulose de sódio e o xarope de açúcar para formar uma pasta lisa. A solução de ácido benzóico, o aroma e a cor são diluídos com alguma da água e são adicionados, com agitação. Adiciona-se, então, água suficiente para produzir o volume necessário.

PROCEDIMENTOS DE TESTE

Ensaio 1 O ensaio do ácido tiobarbitúrico como descrito por Schuh et al., CPNAS 75: 3173, 1978) e modificado por Morei et al., ILab Invest 55: 419, 1986) foi usado para determinar o grau de inibição da peroxidação de LDL pelo estradiol e Composto A da invenção. Uma solução de 1 ml contendo 250 microgramas (pg) de LDL, com estradiol ou com Composto A da invenção, em quantidades variando entre 1 e 30 μΜ, é incubada durante 5-18 horas a 37 graus C na presença de 5 μΜ de CuS04. Depois da incubação, adiciona-se 1 ml de 25% de ácido tricloroacético e 1 ml de ácido tiobarbitúrico a 1%. Todas as amostras são submetidas a ebulição durante 45 minutos e a fluorescência é medida a 515 om de excitação e a 553 nm de emissão de comprimentos de onda. (O composto A é um composto de fórmula 1 onde Rj e R3 são hidrogénio, e R2 é 1-pirrolidino).

UNIDADES TBAR

Condições 25 μΜ 5 μΜ 1 μΜ OuM Composto A 78 109 142 356 Estradiol 160 153 259 356 Controlo (sem cobre) 90 90 90 90 -15-

Ensaio 2

Macrófagos residentes extraídos da cavidade peritoneal do ratinho foram colocados numa placa a 1 x IO6 células por cavidade em meio FIO sem soro. Adicionou-se a cada cavidade LDL previamente dializado e filtrado através de um filtro de 0,2 microns, numa concentração final de 1 mg/ml (500 pg adicionados por cavidade) e os macrófagos foram tratados com 1-5 μΜ de Composto A ou controlo durante 24 horas. As cavidades designadas apenas meio representam o LDL incubado durante a noite na mesma placa com meio FIO sem células. Este valor foi subtraído aos valores de TB AR obtidos na presença de macrófagos residentes e reflecte a extensão da modificação celular do LDL.

Condições Controlo

Unidades TBAR 130

Composto A 5 μΜ Composto A 2,5 μΜ Composto A 1 μΜ Estradiol 25 μΜ 30 75 129 30

Lisboa, 20 de Dezembro de 2001

ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 USBOA

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. O uso de um composto tendo a fórmula

O onde Ri e R3 são, independentemente, hidrogénio, -CH3, —<ϋ)—(alquil Ci-C6), O ou —C—Ar, onde Ar é fenilo opcionalmente substituído; R2 é seleccionado a partir de pirrolidino e piperidino; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato dos mesmos, na preparação de um medicamento para inibir a aterosclerose.
2. O uso de Reivindicação 1 onde o referido composto é

ou o seu sal hidrocloreto. -2-
3. O uso de um composto tendo a fórmula

ou —C—Ar, onde Ar é fenilo opcionalmente substituído; R2 é seleccionado a partir de pirrolidino e piperidino; ou um sal farmaceuticamente aceitável ou solvato dos mesmos, na preparação de um medicamento para inibir a doença isquémica de coração.
4. O uso de Reivindicação 3 onde o referido composto é

ou o seu sal hidrocloreto. Lisboa, 20 de Dezembro de 2001 jlQXiu ta ^ ALBERTO CANELAS Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA