RS55287B1 - Angiogeneza korišćenjem matičnih ćelija iz placente - Google Patents

Angiogeneza korišćenjem matičnih ćelija iz placente

Info

Publication number
RS55287B1
RS55287B1 RS20160885A RSP20160885A RS55287B1 RS 55287 B1 RS55287 B1 RS 55287B1 RS 20160885 A RS20160885 A RS 20160885A RS P20160885 A RSP20160885 A RS P20160885A RS 55287 B1 RS55287 B1 RS 55287B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
cells
placenta
isolated
placental
cell
Prior art date
Application number
RS20160885A
Other languages
English (en)
Inventor
Stewart Abbot
James Edinger
Aleksander Francki
Robert J Hariri
Vladimir Jankovic
Aleksandr Kaplunovsky
Kristen Labazzo
Eric Law
Neerav Padliya
Jennifer Paredes
Jia-Lun Wang
Original Assignee
Anthrogenesis Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=44761079&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS55287(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Anthrogenesis Corp filed Critical Anthrogenesis Corp
Publication of RS55287B1 publication Critical patent/RS55287B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0085—Brain, e.g. brain implants; Spinal cord
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3633—Extracellular matrix [ECM]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3808—Endothelial cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
    • A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3886—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells comprising two or more cell types
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
    • A61L27/3895—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells using specific culture conditions, e.g. stimulating differentiation of stem cells, pulsatile flow conditions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
    • C12N5/0605—Cells from extra-embryonic tissues, e.g. placenta, amnion, yolk sac, Wharton's jelly
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)

Description

1. POUE
[0001]Ovde su obezbeđene ćelije iz placente adherentne na plastiku za kulturu tkiva,npr.matične ćelije iz placente, ovde označene kao PDAC, za primenu u postupcima za promovisanje angiogeneze, i za tretiranje bolesti ili poremećaja krvnog sistema,npr.,bolesti ili poremećaja koji su povezani ili koji proizilaze iz, neodgovarajuće vaskularizacije ili cirkulacije krvi, ili koji su izlečivi poboljšanjem angiogeneze.
2. POZADINA
[0002]Placenta je posebno privlačan izvor matičnih ćelija. Budući da su placente sisara u izobilju i da se obično odbacuju kao medicinski otpad, one predstavljaju jedinstveni izvor medicinski korisnih matičnih ćelija. Ovde su obezbeđene takve izolovane matične ćelije iz placente, populacije matičnih ćelija iz placente, i postupci korišćenja istih za promovisanje angiogeneze, i za tretiranje bolesti ili poremećaja krvnog sistema,npr.,bolesti ili poremećaja izlečivih promovisanjem angiogeneze. WO 2010/021715 Al opisuje postupke primene izolovanih ćelija iz placente u tretiranju pojedinca koji ima hipoksičnu povredu ili prekid protoka krvi u ili oko mozga. On ne opisuje primenu ćelija iz placente u tretiranju periferne vaskularne bolesti, periferne arterijske bolesti, dijabetesne ulceracije ili kritične ishemije ekstremiteta. Prather Williamet al(2009) odnosi se na ispitivanje terapeutske primene adherentnih stromalnih ćelija izvedenih iz placente (ASC), koje ne eksprimiraju CD200, u životinjskom modelu standardne kritične ishemije ekstremiteta (CLI). WO 2009/037690 Al odnosi se na postupke tretiranja ishemije i/ili medicinskih stanja koja zahtevaju regeneraciju vezivnog tkiva ili popravku korišćenjem adherentnih ćelija iz adipoznih ili placentnih tkiva, koje ne eksprimiraju CD200.
3. SAŽETAK
[0003]U jednom aspektu, ovde su obezbeđene ćelije iz placente adherentne na plastiku za kulturu tkiva,npr.,matične ćelije iz placente, takođe označene ovde kao PDAC (adherentne ćelije izvedene iz placente,npr.,adherentne ćelije izvedene iz placente opisane u Odeljku 5.2, dole) pri čemu su ćelije CD10+, CD34-, CD105+ i CD200+, za primenu u postupcima tretiranja kod pojedinca koji ima bolest ili poremećaj krvnog sistema pri čemu je bolest ili poremećaj krvnog sistema periferna vaskularna bolest, periferna arterijska bolest, dijabetesna ulceracija ili kritična ishemija ekstremiteta. Za potrebe ove prijave, PDAC opisane gore biće označene kao "PDAC ovog pronalaska", "ćelije ovog pronalaska, "ćelije iz placente ovog pronalaska". PDAC opisane ovde nisu, međutim, adherentne ćelije izvedene iz amniona opisane u U.S. Objavi patenta u ispitivanju Br. 2010/0124569, čiji je naslov "Amnion Derived Angiogenic Cells." U određenim ostvarenjima, postupak obuhvata davanje PDAC pomenutom pojedincu u količini i za vreme koje je dovoljno za detektovanje poboljšanja jedne ili više indicija pomenute bolest ili poremećaja. Pomenute indicije srčane funkcije su grudni srčani izlaz (CO), srčani indeks (Cl), plućni arterijski udarni pritisak (PAWP), srčani indeks (Cl), % frakciono skraćenje (%FS), ejekciona frakcija (EF), ejekcijska frakcija leve komore (LVEF); end-dijastolni prečnik leve komore (LVEDD), end-sistolni prečnik leve komore (LVESD), kontraktilnost (dP/dt), smanjenje atrijalnog ili ventrikularnog funkcionisanja, povećanje efikasnosti pumpanja, smanjenje brzine gubitka efikasnosti pumpanja, smanjenje gubitka hemodinamskog funkcionisanja, ili smanjenje komplikacija povezanih sa kardiomiopatijom, u odnosu na pojedinca pre davanja pomenutog PDAC.
[0004]Bolest ili poremećaj krvnog sistema može da bude infarkt miokarda ili kardiomiopatija. Bolest ili poremećaj ovog krvnog sistema može da bude aneurizma, angina, aortalna stenoza, aortitis, aritmije, arterioskleroza, arteritis, asimetrična septalna hipertrofija (ASH), ateroskleroza, atrijalna fibrilacija i flater, bakterijski endokarditis, Barlow-ov sindrom (prolaps dvolistnog zaliska), bradikardija, Buerger-ova bolest (thromboangiitis obliterans), kardiomegalija, karditis, bolest karotidnih arterija, koarktacija aorte, urođene srčane mane, kongestivno zatajenje srca, koronarna arterijska bolest, Eisenmenger-ov sindrom, embolija, endokarditis, eritromelalgija, fibrilacija, fibromuskularna displazija, srčani blok, srčani šum, hipertenzija, hipotenzija, idiopatska dečija kalcifikacija arterija, Kavasakijeva bolest (mukokutani sindrom limfnih čvorova, mukokutana bolest limfnih čvorova, infantile poliarteritis), metabolički sindrom, mikrovaskularna angina, miokarditis, paroksizmalna atrijalna tahikardija (PAT), periarteritis nodosa (poliarteritis, poliarteritis nodosa), perikarditis, flebitis, plućna valvularna stenoza ( plućna stenoza), Raynaud-ova bolest, stenoza bubrežne arterije, renovaskularna hipertenzija, reumatska bolest srca, dijabetesna vaskulopatija, defekti septuma, tiha ishemija, sindrom X, tahikardija, Takayasu-ov arteritis, Fallot-ova tetralogija, transpozicija velikih krvnih sudova, trikuspidalna atrezija, truncus arteriosus, bolest srčanih zalisaka, venski čirevi, proširene vene, vaskulitis, ventrikularni septalni defekt, Wolff-Parkinson-White-ov sindrom, defekt endokardijalnih jastučića, akutna reumatska groznica, akutni reumatski perikarditis, akutni reumatski endokarditis, akutni reumatski miokarditis, hronične reumatske bolesti srca, bolesti mitralnog zaliska, mitralna stenoza, reumatska mitralna insuficijencija, bolesti aortnog zaliska, bolesti drugih endokardijalnih struktura, ishemijska bolest srca (akutna i subakutna), angina pektoris, akutna pulmonarna bolest srca, pulmonarna embolija, hronična pulmonarna bolest srca, kifoskoliotična bolest srca, miokarditis, endokarditis, endomiokardna fibroza, endokardna fibroelastoza, atrioventrikularni blok, kardijalna disritmija, miokardijalna degeneracija, cerebrovaskularna bolest, bolest arterija, arteriola i kapilara, ili bolest vena i limfnih sudova.
[0005]Bolest ili poremećaj ovog krvnog sistema može da bude okluzija ili stenoza predcerebralnih arterija, ili okluzija cerebralnih arterija. Ovde je tako opisan postupak tretiranja pojedinca koji ima poremećaj protoka krvi u ili oko njegovog mozga,npr.,onog koji ima simptom ili neurološki deficit koji se može pripisati prekidu protoka krvi u ili oko mozga ili centralnog nervnog sistema (CNS) pojedinca, a koji obuhvata davanje pomenutom pojedincu terapeutski efektivne količine izolovanih ćelija iz placente( npr.,PDAC). Prekid protoka krvi može da dovede do anoksične povrede ili hipoksične povrede mozga ili CNS pojedinca.
[0006]Prema ovom pronalasku pomenuta bolest ili poremećaj ovog krvnog sistema odnosi se na okluziju ili stenozu perifernih arterija. Prema tome, ovaj pronalazak odnosi se na tretiranje pojedinca koji ima prekid protoka krvi u ili oko ekstremiteta, npr., onog koji ima simptom ili vaskularni deficit koji se može pripisati prekidu protoka krvi u ili oko perifernog vaskularnog sistema pojedinca, primenom izolovanih PDAC ovog pronalaska. U određenim ostvarenjima, prekid protoka krvi dovodi do anoksične povrede ili hipoksične povreda ekstremiteta i ili udova pojedinca.
[0007]U drugom posebnom ostvarenju ovog pronalaska, ćelije ovog pronalaska se daju pomenutom pojedincu injekcijom. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute ćelije se daju pomenutom pojedincu intravenoznom infuzijom. U drugom posebnom ostvarenju postupka tretiranja, pomenute ćelije, ili populacija pomenutih ćelija, ili populacija ćelija koja obuhvata pomenute ćelije, se daju pomenutom pojedincu implantacijom u pomenutog pojedinca matriksa ili skafolda koji obuhvataju adherentne ćelije izvedene iz placente, kao što je opisano gore.
[0008]U određenim ostvarenjima, ćelije iz placente ovog pronalaska se daju pomenutom pojedincu primenom ovog pronalaska intravenozno. U drugim ostvarenjima, primena ovog pronalaska obuhvata davanje najmanje oko 1 x 107, 5 x 107,1 x IO8, 5 x IO8,1 x IO9, 5 x IO9 ili 1 x 1010 ćelija iz placente pomenutom pojedincu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute ćelije iz placente, opisane ovde, proliferišu sein vitroza ne više od 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12,13, 14,15,16, 17, 18,19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46,47, 48, 49 ili 50 dupliranja populacije. U drugom posebnom ostvarenju, bilo koja od ćelija iz placente opisanih ovde je iz kulture pomenutih ćelija koja je presejana najmanje 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8,9,10,11,12,13,14,15,16,17, 18,19 ili 20 puta, ili više. U drugom ostvarenju bilo kog od ostvarenja ovde, pomenute ćelije iz placente se krioprezervišu i odmrzavaju pre pomenutog davanja.
[0009]U drugim ostvarenjima, pomenute ćelije iz placente se krioprezervišu i odmrzavaju pre pomenutog kontakta.
[0010]Prema ovom pronalasku ćelije iz placente prijanjaju na plastiku za kulturu tkiva i predstavljaju CD34", CD10<+>, CD105<+>i CD200<+>kao što je detektovano protočnom citometrijom. U određenim ostvarenjima, ćelije iz placente imaju kapacitet da se diferenciraju u osteogene ili hondrogene ćelije. U drugom ostvarenju, pomenute ćelije iz placente prijanjaju na plastiku za kulturu tkiva; CD34", CD10<+>, CD105<+>i CD200<+>kao što su detektovani protočnom citometrijom; i imaju kapacitet da se diferenciraju u ćelije koje imaju jednu ili više karakteristika osteogenih ili hondrogenih ćelija, npr., karakteristike osteocita ili hondrocita. U drugim ostvarenjima, ćelije iz placente dodatno imaju spodobnost da se diferenciraju u ćelije koje imaju jednu ili više karakteristika neuronskih ćelija ili neurogenskih ćelija, npr., karakteristike neurona; jednu ili više karakteristika glijalnih ćelija, npr., karakteristike glije ili astrocita; jednu ili više karakteristika adipocitnih ćelija,npr.,karakteristike adipocita; jednu ili više karakteristika ćelija pankreasa; i/ili jednu ili više karakteristika ćelija srca.
[0011]U drugom ostvarenju, pomenute ćelije iz placente su CD34", CD10<+>, CD105<+>i CD200<+>, i jedna ili više od CD38", CD45", CD80", CD86", CD133", HLA-DR,DP,DQ~, SSEA3", SSEA4", CD29<+>, CD44<+>, CD73<+>, CD90<+>, CD105<+>, HLA-A,B,C<+>, PDL1<+>, ABC-p<+>i/ili OCT-4<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom i/ili pomoću RT-PCR. U drugom ostvarenju, pomenute ćelije iz placente su CD34, CD45", CD10<+>, CD90<+>, CD105<+>i CD200<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom ostvarenju, pomenute ćelije iz placente su CD34", CD45", CD10<+>, CD80, CD86", CD90<+>, CD105<+>i CD200<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom ostvarenju, pomenute ćelije iz placente su CD34", CD45", CD10<+>, CD80", CD86", CD90<+>, CD105<+>i CD200<+>, i dodatno jedna ili više od CD29<+>, CD38", CD44<+>, CD54<+>, SH3<+>ili SH4<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom ostvarenju, pomenute ćelije iz placente su CD34", CD38", CD45", CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD54<+>, CD73\ CD80", CD86", CD90<+>, CD105<+>i CD200<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom.
[0012]U drugom ostvarenju, pomenute CD34", CD10<+>, CD105<+>i CD200<+>ćelije iz placente su dodatno jedna ili više od CD117", CD133", KDR" (VEGFR2), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", ili liganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+>, ili bilo koja njihova kombinacija. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute ćelije iz placente su CD34", CD38", CD45", CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD54<+>, CD73<+>, CD80", CD86", CD90\ CD105<+>, CD117", CD133", CD200<+>, KDR~(VEGFR2-), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", ili liganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom.
[0013]U drugom ostvarenju, bilo koje od ćelija iz placente opisanih ovde su dodatno ABC-p<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom, ili OCT-4<+>(P0U5F1<+>),npr.,kao što je određeno pomoću RT-PCR, pri čemu ABC-p je specifičan protein ABC transporter u placenti (takođe poznat kao protein otpornosti raka dojke (BCRP) i kao protein otpornosti na mitoksantron (MXR)). U drugom ostvarenju, bilo koje od ćelija iz placente opisanih ovde su dodatno SSEA3" ili SSEA4",npr.,kao što je određeno protočnom citometrijom, pri čemu SSEA3 je fazno specifičan embrionalni antigen 3, a SSEA4 je fazno specifičan embrionalni antigen 4. U drugom ostvarenju, bilo koje od ćelija iz placente opisanih ovde su dodatno SSEA3" i SSEA4".
[0014]U drugom ostvarenju postupaka opisanih ovde, bilo koje od ćelija iz placente opisanih ovde su dodatno jedna ili više od MHC-I<+>( npr.,HLA-A,B,C<+>), MHC-II( npr.,HLA-DP,DQ,DR) ili HLA-G . U drugom ostvarenju, bilo koje od ćelija iz placente opisanih ovde su dodatno svaka odMHC-1+ ( npr.,HLA-A,B,C<+>), MHC-M"( npr.,HLA-DP,DQ,DR") i HLA-G".
[0015]U drugom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije su dodatno jedna ili više od CD29<+>, CD38", CD44<+>, CD54<+>, CD80", CD86", SH3<+>ili SH4<+>. U drugom ostvarenju, ćelije su dodatno CD44<+.>U drugom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente su dodatno jedna ili više od CD13<+>, CD29<+>, CD33<+>, CD38", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD62E", CD62L", CD62P", SH3<+>(CD73<+>), SH4<+>(CD73<+>), CD80", CD86", CD90<+>, SH2<+>(CD105<+>), CD106/VCAM<+>, CD117", CD144/VE-cadherin<low>, CD184/CXCR4", CD133", OCT-4<+>, SSEA3", SSEA4", ABC-p<+>, KDR" (VEGF2 ), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", HLA-G" ili Liganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+>, ili bilo koje njihove kombinacije. U drugom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente su dodatno CD13<+>, CD29<+>, CD33<+>, CD38", CD44<+>, CD45", CD54/ICAM<+>, CD62E", CD62L", CD62P", SH3<+>(CD73<+>), SH4<+>(CD73<+>), CD80", CD86", CD90<+>, SH2<+>(CD105<+>), CD106/VCAM<+>, CD117", CD144/VE-cadherin<dim>, CD184/CXCR4"CD133", OCT-4<+>, SSEA3", SSEA4", ABC-p<+>, KDR" (VEGFR2 ), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", HLA-G" i Uganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+.>
[0016]U drugim ostvarenjima postupaka opisanih ovde, izolovane ćelije iz placente su CD200<+>i HLA-G";
CD73<+>, CD105<+>i CD200<+>; CD200<+>i 0CT-4<+>; CD73<+>, CD105<+>i HLA-G"; CD73<+>i CD105<+>; ili 0CT-4<+>; ili bilo koje njihove kombinacije.
[0017]U određenim ostvarenjima postupaka opisanih ovde, izolovane ćelije iz placente su jedna ili više od CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3", SSEA4", OCT-4<+>, MHC-T ili ABC-p<+>, gde je ABC-p specifičan protein ABC transporter u placenti (takođe poznat kao protein otpornosti raka dojke (BCRP) i kao protein otpornosti na mitoksantron (MXR)). U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD44<+>, CD45",CD54<+>, CD90<+>, SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3", SSEA4" i OCT-4<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD45", CD54<+>, SH2<+>, SH3<+>i SH4<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD45", CD54<+>, SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>i OCT-4<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, MHC-1<+>, SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>i ABC-p<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>i OCT-4<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>, CD34" , SSEA3" i SSEA4". U posebnom ostvarenju, pomenute OCT-4<+>, CD34", SSEA3" i SSEA4- ćelije su dodatno CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SH2<+>, SH3<+>i SH4<+.>U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>i CD34", i ili SH3<+>ili SH4<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD34" i ili CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD54<+>, CD90<+>ili OCT-4<+.>U određenim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD34", CD105<+>i CD200<+>.
[0018]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima opisanim ovde su jedna ili više od CD10<+>, CD29", CD44<+>, CD45", CD54/ICAM", CD62-E", CD62-L", CD62-P", CD80", CD86", CD103", CD104", CD105<+>, CD106/VCAM<+>, CD144/VE-cadherin<d>im,CD184/CXCR4", 3-mikroglobulin<dim>, MHC-I<dim>, MHC-II", HLA-G<dim>i/ili PDLl<dim>. U određenim ostvarenjima, takve ćelije iz placente su najmanje CD29" i CD54". U drugom ostvarenju, takve izolovane ćelije iz placente su najmanje CD44<+>i CD106<+>. U drugom ostvarenju, takve izolovane ćelije iz placente su najmanje CD29<+.>
[0019]U određenim ostvarenjima bilo koje od prethodnih karakteristika, ekspresija ćelijskog markera (npr., grozda diferenciranja ili imunogenetskog markera) je određena protočnom citometrijom. U određenim drugim ostvarenjima, ekspresija ćelijskog markera je određena pomoću RT-PCR.
[0020]U drugom ostvarenju, pomenute ćelije iz placente korisne u postupcima opisanim ovde,npr.,pomenute CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200<+>ćelije, eksprimiraju jedan ili više gena na detektabilnom višem nivou nego ekvivalentan broj mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži, pri čemu su pomenuti jedan ili više gena jedan ili više od ACTG2, ADARB1, AMIG02, ARTS-1, B4GALT6, BCHE, Cllorf9, CD200, COL4A1, COL4A2, CPA4, DMD, DSC3, DSG2, ELOVL2, F2RL1, FU10781, GATA6, GPR126, GPRC5B, ICAM1, IER3, IGFBP7, IL1A, IL6, IL18, KRT18, KRT8, LIPG, LRAP, MATN2, MEST, NFE2L3, NUAK1, PCDH7, PDLIM3, PKP2, RTN1, SERPINB9, ST3GAL6, ST6GALNAC5, SLC12A8, TCF21, TGFB2, VTN i ZC3H12A, i pri čemu su pomenute mezenhimalne matične ćelije izvedene iz koštane srži podvrgnute broju presejavanja u kulturi koji je ekvivalentan broju presejavanja kojem su podvrgnute pomenute izolovane ćelije iz placente. U određenim ostvarenjima, pomenuta ekspresija pomenutih jednog ili više gena određena je,npr.,pomoću RT-PCR ili ispitivanjem mikročipom,npr.,korišćenjem U133-A mikročima (Affymetrix). U drugom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente eksprimiraju pomenutih jedan ili više gena kada se kultivišu za, npr., bilo gde u opsegu od oko 3 do oko 35 dupliranja populacije, u medijumu koji obuhvata 60% DMEM-LG (npr., od Gibco) i 40% MCDB-201( npr.,od Sigma); 2% fetalnog telećeg seruma( npr.,od Hvclone Labs.); lx insulin-transferin-selenijum (ITS); lx linolna kiselina-goveđi serum albumin (LA-BSA); IO"<9>M deksametazon( npr.,od Sigma); IO"<4>M askorbinske kiseline 2-fosfata( npr.,od Sigma); epidermalni faktor rasta 10 ng/mL (npr., od R&D Svstems); i faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF-BB) 10 ng/mL( npr.,od R&D Svstems). U drugom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente eksprimiraju pomenutih jedan ili više gena kada se kultivišu za od oko 3 do oko 35 dupliranja populacije u medijumu koji obuhvata 60% DMEM-LG (npr., od Gibco) i 40% MCDB-201( npr.,od Sigma); 2% fetalnog telećeg seruma( npr.,od Hvclone Labs.); lx insulin-transferin-selenijum (ITS); lx linolna kiselina-goveđi serum albumin (LA-BSA); IO"<9>M deksametazon( npr.,od Sigma); IO"<4>M askorbinske kiseline 2-fosfata (Sigma); epidermalni faktor rasta 10 ng/mL( npr.,od R&D Svstems); i faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF-BB) 10 ng/mL( npr.,od R&D Svstems).
[0021]U određenim ostvarenjima, ćelije iz placente eksprimiraju CD200 i ARTS1 (aminopeptidaza regulator faktora nekroze tumora tipa 1); ARTS-1 i LRAP (arginin aminopeptidaza izvedena iz leukocita); IL6 (interleukin-6) i TGFB2 (transformišući faktor rasta, beta 2); IL6 i KRT18 (keratin 18); IER3 (neposredni rani odgovor 3), MEST (mezodermalni specifični transkripcioni homolog) i TGFB2; CD200 i IER3; CD200 i IL6; CD200 i KRT18; CD200 i LRAP; CD200 i MEST; CD200 i NFE2L3 (nuklearni faktor (eritroidno-izveden 2)-slično 3); ili CD200 i TGFB2 na detektabilno višem nivou nego ekvivalentan broj mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži (BM-MSC) pri čemu su pomenute mezenhimalne matične ćelije izvedene iz koštane srži podvrgnute broju presejavanja u kulturi koji je ekvivalentan broju presejavanja kojem su podvrgnute pomenute izolovane ćelije iz placente. U drugim ostvarenjima, ćelije iz placente eksprimiraju ARTS-1, CD200, IL6 i LRAP; ARTS-1, IL6, TGFB2, IER3, KRT18 i MEST; CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3, i TGFB2; ARTS-1, CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3, i TGFB2; ili IER3, MEST i TGFB2 na detektabilno višem nivou nego ekvivalentan broj mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži BM-MSC, pri čemu su pomenute mezenhimalne matične ćelije izvedene iz koštane srži podvrgnute broju presejavanja u kulturi koji je ekvivalentan broju presejavanja kojem su podvrgnute pomenute izolovane ćelije iz placente.
[0022]Kada se koriste humane ćelije, oznake gena sasvim se odnose na humane sekvence, a, kao što je dobro poznato stručnjacima iz ove oblasti, reprezentativne sekvence mogu se pronaći u literaturi, ili u GenBank. Probe na sekvencama mogu da budu određene sekvencama koje su dostupne javnosti, ili preko komercijalnih izvora, npr., specifične TAQMAN<®>probe ili TAQMAN<®>Angiogenesis Array (Applied Biosvstems, deo br. 4378710).
[0023]U različitim ostvarenjima, pomenute izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima opisanim ovde, npr., matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente, sadržane su u populaciji ćelija, pri čemu je najmanje 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% ćelija od kojih su pomenute izolovane ćelije iz placente. U određenim drugim ostvarenjima, ćelije iz placente u pomenutoj populaciji ćelija su suštinski bez ćelija koje imaju materinski genotip; npr., najmanje 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% ćelija iz placente u pomenutoj populaciji imaju fetalni genotip,tj.,fetalnog su porekla. U određenim drugim ostvarenjima, populacija ćelija koje obuhvataju pomenute ćelije iz placente su suštinski bez ćelija koje imaju materinski genotip; npr., najmanje 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% ćelija u pomenutoj populaciji imaju fetalni genotip,tj.,fetalnog su porekla. U određenim drugim ostvarenjima, populacija ćelija koje obuhvataju pomenute ćelije iz placente obuhvataju ćelije koje imaju materinski genotip;npr.,najmanje 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% ćelija u pomenutoj populaciji imaju materinski genotip,tj.,materinskog su porekla.
[0024]U jednom ostvarenju bilo kojeg od ostvarenja ćelija iz placente (npr., PDAC) ovde, ćelije iz placente olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente koja obuhvata pomenute izolovane ćelije iz placente kada se pomenuta populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašca sličnih embrioidu npr., kultura u uslovima proliferacije).
[0025]U određenim ostvarenjima, ćelije iz placente( npr.,PDAC) korisne u postupcima ovde obezbeđenim, ne eksprimiraju CD34, kao što je detektovano imunolokalizacijom, nakon što su izložene 1 do 100 ng/mL VEGF u toku 4 do 21 dana. U posebnom ostvarenju, pomenute adherentne ćelije iz placente adherentne su na plastiku za kulturu tkiva. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta populacija ćelija formira strukture nalik klicama ili cevčicama kada se kultivišu u prisustvu angiogenog faktora kao što su vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), epitelijalni faktor rasta (EGF), faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF) ili bazični fibroblastni faktor rasta (bFGF),npr.,na supstratu kao što je
MATRIGE™.
[0026]U drugom aspektu, PDAC ovog pronalaska, populacija ćelija,npr.,populacija PDAC, ili populacija ćelija pri čemu najmanje oko 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ili 98% ćelija u pomenutoj izolovanoj populaciji ćelija su PDAC, koje luče jedan ili više, ili sve, od VEGF, HGF, IL-8, MCP-3, FGF2, folistatin, G-CSF, EGF, ENA-78, GRO, IL-6, MCP-1, PDGF-BB, TIMP-2, uPAR ili galektin-1,npr.,u medijumu za kultivisanje u kojem ćelija, ili ćelije, se uzgajaju. U drugom ostvarenju, PDAC eksprimiraju uvećane nivoe CD202b, IL-8 i/ili VEGF u hipoksičnim uslovima( npr.,manje od oko 5% 02) u odnosu na normoksične uslove( npr.,oko 20% ili oko 21% 02).
[0027]U drugom ostvarenju, bilo koje od PDAC ili populacija ćelija koje obuhvataju PDAC opisane ovde mogu da izazovu formiranje strukture nalik klicama ili cevčicama u populaciji endotelijalnih ćelija u kontaktu sa pomenutim adherentnim ćelijama izvedenim iz placente. U posebnom ostvarenju, angiogenetske ćelije izvedene iz placente su ko-kultivisane sa humanim endotelijalnim ćelijama, formirajući strukture nalik klicama ili cevčicama, ili noseće klice endotelijalnih ćelija,npr.,kada se kultivišu u prisustvu proteina vanćelijskog matriksa kao što su kolagen tipa I i IV, i/ili angiogenih faktora kao što su vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), epitelijalni faktor rasta (EGF), faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF) ili bazični fibroblastni faktor rasta (bFGF),npr.,u ili na supstratu kao što je placentni kolagen ili MATRIGEL™ u toku najmanje 4 dana.
[0028]U određenim ostvarenjima bilo kojih od ćelija iz placente opisanim ovde, ćelije su humane.
[0029]U određenim ostvarenjima, bilo koje od ćelija iz placente,npr.,matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente opisane ovde, su autologne za primaoca. U određenim drugim ostvarenjima, bilo koje od ćelija iz placente,npr.,matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente opisane ovde, su heterologne za primaoca.
[0030]U određenim ostvarenjima, ćelije iz placente su krioprezervisane pre pomenutog davanja. U drugom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente se dobijaju iz banke ćelija iz placente( npr.,PDAC banke).
[0031]U bilo kom od pomenutih ostvarenja izolovanih ćelija iz placente, izolovane ćelije iz placente uopšteno se ne diferenciraju tokom kultivisanja u podlozi za uzgajanje,tj.,medijumu formulisanom za promovisanje proliferacije,npr.,tokom proliferacije u podlozi za uzgajanje. U drugom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ne zahtevaju hranljivi sloj radi proliferacije. U drugom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ne diferenciraju se u kulturi potpuno kao rezultat kulture u odsustvu hranljivog sloja ćelija .
[0032]U određenim ostvarenjima, pomenute izolovane ćelije iz placente dobijaju se perfuzijom postporođajne placente koja je drenirana od krvi i perfundovana radi uklanjanja ostataka krvi; drenirana od krvi ali ne perfundovana radi uklanjanja ostataka krvi; ili nije ni drenirana od krvi niti je perfundovana radi uklanjanja ostataka krvi. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente dobijaju se fizičkom i/ili enzimskom razgradnjom tkiva placente.
[0033]Površina ćelije, molekularni i genetički markeri ćelija iz placente, korisni u postupcima obezbeđenim ovde, opisani su detaljnije u Odeljku 5.2, dole.
[0034]U drugom posebnom ostvarenju postupaka opisanim ovde, pomenute izolovane ćelije iz placente se daju bolusnom injekcijom. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente se daju intravenoznom infuzijom. U posebnom ostvarenju, pomenuta intravenozna infuzija je intravenozna infuzija od oko 1 do oko 8 sata. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente se daju intrakranijalno. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente daju se intraperitonealno. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente daju se intraarterijalno. U drugom posebnom ostvarenju postupka tretiranja, pomenute izolovane ćelije iz placente daju se intramuskularno, intradermalno, subkutano, intratekalno ili intraokularno.
[0035]U drugom ostvarenju postupaka opisanim ovde, pomenute izolovane ćelije iz placente daju se hirurškom implementacijom u pomenutom pojedincu kompozicije od značaja koja obuhvata pomenute izolovane ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju, pomenuta kompozicija od značaja je matriks ili skafold. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuti matriks ili skafold je hidrogel. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuti matriks ili skafold je decelularizovano tkivo. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuti matriks ili skafold je sintetička biorazgradiva kompozicija. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuti matriks ili skafold je pena.
[0036]U drugom posebnom ostvarenju postupaka opisanim ovde, pomenute izolovane ćelije iz placente daju se jedanput pomenutom pojedincu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente daju se pomenutom pojedincu u dva ili više odvojena davanja. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 1 x 10<4>i 1 x IO<5>izolovanih ćelija iz placente,npr.,ćelije iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 1 x IO<5>i 1 x IO<6>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 1 x 10<6>i 1 x IO<7>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 1 x IO<7>i 1 x IO<8>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca. U drugim određenim ostvarenjima, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 1 x IO<6>i oko 2 x IO<6>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca; između oko 2 x IO<6>i oko 3 x IO<6>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca; između oko 3 x IO<6>i oko 4 x IO<6>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca; između oko 4 x IO<6>i oko 5 x IO<6>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca; između oko 5 x IO<6>i oko 6 x IO<6>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca; između oko 6 x IO<6>i oko 7 x 10<6>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca; između oko 7 x IO<6>i oko 8 x 10<6>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca; između oko 8 x 10<6>i oko 9 x 10<6>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca; ili između oko 9 x IO<6>i oko 1 x 10<7>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 1 x 10<7>i oko 2 x IO<7>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca pomenutom pojedincu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 1,3 x IO<7>i oko 1,5 x IO<7>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca pomenutom pojedincu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje do oko 3 x IO<7>izolovanih ćelija iz placente po kilogramu pomenutog pojedinca pomenutom pojedincu. U posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 5 x IO<6>i oko 2 x 10<7>izolovanih ćelija iz placente pomenutom pojedincu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje oko 150 x IO<6>izolovanih ćelija iz placente u oko 20 mililitara rastvora pomenutom pojedincu.
[0037]U posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 5 x IO<6>i oko 2 x IO<7>izolovanih ćelija iz placente pomenutom pojedincu, pri čemu su pomenute ćelije sadržane u rastvoru koji obuhvata 10% dekstrana,npr.,dekstran-40, 5% humanog seruma albumina, i opciono imunosupresant.
[0038]U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 5 x IO<7>i 3 x
IO<9>izolovanih ćelija iz placente intravenozno. U posebnim ostvarenjima, pomenuto davanje obuhvata davanje oko 9 x IO<8>izolovanih ćelija iz placente ili oko 1,8 x IO<9>izolovanih ćelija iz placente intravenozno. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje između oko 5 x IO<7>i 1 x IO<8>izolovanih ćelija iz placente intralezionalno. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuto davanje obuhvata davanje oko 9 x IO<7>izolovanih ćelija iz placente intralezionalno.
[0039]Ćelije iz placente korišćenje u postupcima obezbeđenim ovde mogu, u određenim ostvarenjima, da se podvrgnu genetičkom inženjeringu radi proizvodnje jednog ili više proteina koji olakšavaju angiogenezu. U određenim ostvarenjima, pomenuti proteini koji olakšavaju angiogenezu su jedan ili više od faktora rasta hepatocita (HGF), vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF)( npr.,VEGFD), faktora rasta fibroblasta (FGF)( npr.,FGF2), angiogenina (ANG), epidermalnog faktora rasta (EGF), epitelno-neutrofilno-aktivirajućeg proteina 78 (ENA-78), folistatina, faktora stimulacije kolonija granulocita (G-CSF), onkogen proteina regulacije rasta (GRO), interleukina-6 (IL-6), IL-8, leptina, monocitnog hemotaksnog proteina-1 (MCP-1), MCP-3, subjedinice faktora rasta izvedenog iz trombocita B (PDGFB), rantes, transformišućeg faktora rasta beta 1 (TGF-31), trombopoietina (Tpo), tkivni inhibitor metaloproteinaza 1 (TIMP1), TIMP2, i/ili receptora za urokinaza plazminogen aktivator (uPAR).
3.1Definicije
[0040]Kao što se ovde koristi, izraz "oko," kada se odnosi na navedenu numeričku vrednost, označava vrednost sa plus ili minus 10% navedene numeričke vrednosti.
[0041]Kao što se ovde koristi, izraz "angiogenetski," u vezi sa adherentnim ćelijama izvedenim iz placente koje su opisane ovde, znači da ćelije mogu da formiraju sudove ili klice nalik sudovima, ili da ćelije mogu da promovišu angiogenezu( npr.,formiranje sudova ili struktura nalik sudovima) u drugoj populaciji ćelija,npr.,endotelijalnih ćelija.
[0042]Kao što se ovde koristi, izraz "angiogeneza" odnosi se na postupak formiranja krvnih sudova koji uključuje, ali nije ograničen na, aktivaciju endotelijalnih ćelija, migraciju, proliferaciju, remodelovanje matriksa i stabilizaciju ćelija.
[0043]Kao što se ovde koristi, izraz "izveden" znači izolovan iz ili drugačije prečišćen. Na primer, adherentne ćelije izvedene iz placente su izolovane iz placente. Izraz "izveden" obuhvata ćelije koje se kultivišu od ćelija izolovanih direktno iz tkiva,npr.,placente, i ćelije koje se kultivišu ili šire iz primarnih izolata.
[0044]Kao što se ovde koristi, "imunolokalizacija" znači detekciju jedinjenja,npr.,ćelijski marker, korišćenjem imunološkog proteina,npr.,antitela ili njegovog fragmenta u, na primer, protočnoj citometriji, ćelijskom sortiranju aktiviranom fluorescencijom, magnetskom ćelijskom sortiranju,in situhibridizaciji, imunohistohemiji, ili slično.
[0045]Kao što se ovde koristi, izraz "SH2" odnosi se na antitelo koje vezuje epitop na ćelijskom markeru CD105. Prema tome, ćelije koje se odnose kao SH2<+>su CD105<+>.
[0046]Kao što se ovde koristi, izrazi "SH3" i SH4" odnose se na antitela koja vezuju epitope prisutne na ćelijskom markeru CD73. Prema tome, ćelije koje se odnose kao SH3<+>i/ili SH4<+>su CD73<+.>
[0047]Placenta ima genotip fetusa u kojem se razvija, ali je takođe u bliskom fizičkom kontaktu sa materinskim tkivima tokom rađanja. Kao takav, kao što se ovde koristi, izraz "fetalni genotip" znači genotip fetusa,npr.,genotip fetusa povezan sa placentom iz koje su dobijene posebno izolovane ćelije iz placente, kao što je ovde opisano, nasuprot genotipu majke koja je nosila fetus. Kao što se ovde koristi, izraz "materinski genotip" znači genotip majke koja je nosila fetus,npr.,fetus povezan sa placentom iz koje su dobijene posebno izolovane ćelije iz placente, kao što je opisano ovde.
[0048]Kao što se ovde koristi, izraz "izolovana ćelija,"npr.,"izolovana ćelija iz placente," "izolovana matična ćelija iz placente," i slično, znači ćelija koja je suštinski odvojena od drugih, drugačijih ćelija tkiva,npr.,placente, iz kojeg je matična ćelija izvedena. Ćelija je "izolovana" ako se najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, ili najmanje 99% ćelija,npr.,ne-matičnih ćelija, sa kojima je matična ćelija prirodno povezana, ili matičnih ćelija koje pokazuju drugačiji marker profil, ukloni od matične ćelije,npr.,tokom prikupljanja i/ili kultivisanja matične ćelije.
[0049]Kao što se ovde koristi, "multipotentna," kada se odnosi na ćeliju, znači da ćelija ima sposobnost da se diferencira u nekom, ali ne nužno u svim, tipovima ćelija tela, ili u ćelije koje imaju karakteristike nekih, ali ne svih, tipova ćelija tela, ili u ćelije jednog ili više od tri germinativna sloja. U određenim ostvarenjima, na primer, izolovana ćelija iz placente (PDAC), kao što je opisana u Odeljku 5.2, dole, koja ima kapacitet da se diferencira u ćeliju koja ima karakteristike neurogenskih, hondrogenskih i/ili osteogenskih ćelija je multipotentna ćelija.
[0050]Kao što se ovde koristi, izraz "populacija izolovanih ćelija" znači populaciju ćelija koja je suštinski odvojena od drugih ćelija tkiva,npr.,placente, iz koje je izvedena populacija ćelija.
[0051]Kao što se ovde koristi, izraz "ćelija iz placente" odnosi se na matičnu ćeliju ili progenitornu ćeliju koja je izolovana iz placente sisaranpr,kao što je opisano u Odeljku 5.2, dole, ili kultivisana od ćelije izolovane iz placente sisara, koja se takođe označava ovde kao "PDAC," ili kao primarni izolat ili kultivisana ćelija, bez obzira na broj presejavanja nakon primarne kulture. U određenim ostvarenjima, izraz "ćelije iz placente" kao što se ovde koristi ne odnosi se na, međutim i ćelije iz placente korišćene u postupcima obezbeđenim ovde nisu, trofoblasti, citotrofoblasti, sincitiotrofoblasti, angioblasti, hemangioblasti, embrionske germinativne ćelije, embrionske matične ćelije, ćelije dobijene iz unutrašnje ćelijske mase blastocista, ili ćelije dobijene iz gonadalnog nabora kasnog embriona,npr.,embrionska germinativna ćelija. Ćelije iz placente,npr.,PDAC, opisane ovde nisu adherentne ćelije izvedene iz amniona opisane u U.S. Objavi patenta u ispitivanju Br. 2010/0124569 sa naslovom "Amnion Derived Angiogenic Cells." Ćelija se razmatra kao "matična ćelija" ako ćelija pokazuje osobine matične ćelije,npr.,profil ekspresije markera ili gena povezan sa jednim ili više tipova matičnih ćelija; sposobnost da se replicira najmanje 10-40 puta u kulturi, i sposobnost da se diferencira u ćelije koje pokazuju karakteristike diferenciranih ćelija jednog ili više od tri germinativna sloja. Ukoliko nije drugačije naznačeno ovde, izraz "placentni" uključuje pupčanu vrpcu. Izolovane ćelije iz placente opisane ovde, u određenim ostvarenjima, diferenciraju sein.Mitrou uslovima diferenciranja, diferenciraju sein mimo,ili i jedno i drugo.
[0052]Kao što se ovde koristi, ćelija iz placente je "pozitivna" za određen marker kada je taj marker detektibilan iznad pozadine. Detekcija određenog markera može, na primer, da se postigne ili upotrebom antitela, ili oligonukleotidnim probama ili prajmerima baziranim na sekvenci gena ili mRNA koji kodira marker. Na primer, ćelija iz placente je pozitivna za,npr.,CD73 jer je CD73 detektibilan na ćelijama iz placente u količini detektabilno većoj od pozadine (u poređenju sa,npr.,izotipskom kontrolom). Ćelija je takođe pozitivna za marker kada taj marker može da se koristi za razlikovanje ćelije od najmanje jednog drugog ćelijskog tipa, ili može da se koristi za odabir ili izolovanje ćelije kada je prisutna ili eksprimirana ćelijom. U kontekstu,npr.,antitelo-posredovane detekcije, "pozitivna," kao indikacija da je određeni ćelijski površinski marker prisutan, znači da je marker detektibilan korišćenjem antitela,npr.,fluorescentno označenog antitela, specifičnog za taj marker; "pozitivna" se takođe odnosi na ćeliju koja izlaže marker u količini koja stvara signal,npr.,u citometru, koji je detektabilan iznad pozadine. Na primer, ćelija je "CD200<+>" gde je ćelija detektabilno označena sa antitelom specifičnim za CD200, a signal od antitela je detektabilno viši nego onaj kontrole( npr.,pozadine ili izotipske kontrole). Obrnuto, "negativna" u istom kontekstu znači da se ćelijski površinski marker ne može detektovati korišćenjem antitela specifičnog za taj marker u poređenju sa kontrolom( npr.,pozadinom ili izotipskom kontrolom). Na primer, ćelija je "CD34 " gde ćelija nije reproduktivno detektabilno označena sa antitelom specifičnim za CD34 do više stepena nego kontrola( npr.,pozadina ili izotipska kontrola). Markeri se ne detektuju, ili nisu detektibilni, korišćenjem antitela određuju se da li su pozitivni ili negativni na sličan način, korišćenjem odgovarajuće kontrole. Na primer, ćelija ili populacija ćelija može da se odredi da je OCT-4<+>ako je količina OCT-4 RNA detektovanog u RNA iz ćelije ili populacije ćelija, detektabilno viša nego pozadine kao što je određeno,npr.,postupkom detektovanja RNA poput RT-PCR, slot blots,itd.Ukoliko nije drugačije naznačeno, markeri grozda diferenciranja ("CD") detektuju se korišćenjem antitela. U određenim ostvarenjima, OCT-4 je određen da je prisutan, a ćelija je "OCT-4<+>" ako je OCT-4 detektibilan korišćenjem RT-PCR.
[0053]Kao što se ovde koristi, oznaka "nizak," kada se odnosi na ekspresiju markera koji se može detektovati u protočnoj citometriji, znači da je marker eksprimiran sa manje od 10% od testiranih ćelija, ili da je fluorescencija koja se može pripisati markeru u,npr.,protočnoj citometriji, manja od 1 log iznad pozadine.
[0054]Kao što se ovde koristi, "tretirati" obuhvata remedijaciju, poboljšanje, smanjivanje ozbiljnosti, ili smanjenje u toku vremena, bolesti, poremećaja ili stanja, ili bilo kog parametra ili njegovog simptoma.
4. KRATAK OPIS SLIKA
[0055]FIG. 1 prikazuje sekreciju izabranih angiogenetskih proteina od strane adherentnih ćelija izvedenih iz placente. FIG. 2 prikazuje angiogenetski efekat kondicioniranog medijuma za adherentne ćelije izvedene iz placente na formiranje cevi humanih endotelijalnih ćelija (HUVEC). FIG. 3 prikazuje angiogenetski efekat kondicioniranog medijuma za adherentne ćelije izvedene iz placente na migraciju humanih endotelijalnih ćelija. FIG. 4 prikazuje efekat kondicioniranog medijuma za adherentne ćelije izvedene iz placente na proliferaciju humanih endotelijalnih ćelija.
FIG. 5 prikazuje formiranje cevi HUVEC i adherentnih ćelija izvedenih iz placente.
FIG. 6 prikazuje sekreciju VEGF i IL-8 od strane adherentnih ćelija izvedenih iz placente u hipoksičnim i normoksični uslovima. FIG. 7 prikazuje pozitivan efekat PDAC na angiogenezu u pilećem horioalantoičnom modelu angiogeneze. bFGF: bazični fibroblastni faktor rasta (pozitivna kontrola). MDAMB231: Angiogenetska ćelijska linija raka dojke (pozitivna kontrola). Yosa: Stepen formacije krvnih sudova. FIG. 8 prikazuje pozitivan efekat PDAC-kondicioniranog medijuma (supernatanti) na angiogenezu u pilećem horioalantoičnom modelu angiogeneze. bFGF: bazični fibroblastni faktor rasta (pozitivna kontrola). MDAMB231: Angiogenetska ćelijska linija raka dojke (pozitivna kontrola). Y osa: Stepen formacije krvnih sudova. FIG. 9: Reaktivne vrste kiseonika proizvedene iz vodonik peroksida prisutne u kulturama astrocita, ili ko-kulturama astrocita i PDAC. RFU ROS aktivnost: Relativne jedinice fluorescencije za reaktivne vrste kiseonika.
5. DETALJAN OPIS
[0056]Ovaj pronalazak obezbeđuje populaciju adherentnih ćelija izvedenih iz placente koje su CD10+, CD34-, CD05+ i CD200+, kao što je određeno protočnom citometrijom, za primenu u postupku za tretiranje pojedinca koji ima bolest ili poremećaj krvnog sistema, pri čemu je pomenuta bolest ili poremećaj krvnog sistema periferna vaskularna bolest, periferna arterijska bolest, dijabetesna ulceracija ili kritična ishemija ekstremiteta.
[0057]Prema ovom pronalasku, simptom pomenute periferne vaskularne bolesti je hladna stopala, peckanje u stopalima koja postanu crvena kada se olabave; bol; ili slabost i umor u nogama. Dalje, prema ovom pronalasku, simptom pomenute kritične ishemije ekstremiteta je ishemijska bol u stanju odmora; jak bol u nogama i stopalima dok se pojedinac ne kreće; ne zarastanje rana na stopalima ili nogama; bol ili utrnulost u stopalima; sjajna, glatka, suva koža na nogama ili stopalima; zadebljanje noktiju; odsustvo ili smanjeni puls u nogama ili stopalima; otvorene rane; infekcije kože ili čirevi koji ne zarastaju; ili suva gangrena nogu ili stopala.
[0058]Prema ovom pronalasku, adherentne ćelije izvedene iz placente su dodatno jedna ili više od CD45- ili CD90+, kao što se može detektovati protočnom citometrijom. Dalje, prema ovom pronalasku, adherentne ćelije izvedene iz placente su dodatno 0CT-4+, kao što je detektovano pomoću RT-PCR.
[0059]Prema ovom pronalasku, adherentne ćelije izvedene iz placente daju se intravenozno, intraarterijalno, intramuskularno, intradermalno ili subkutano. Takođe, prema ovom pronalasku, daje se oko 1 x IO5, 5 x IO5,1 x IO6, 5 x IO5,1 x IO7, 5 x IO7,1 x IO8, 5 x IO8,1 x IO9, 5 x IO9 ili 1 x IO10 pomenutih adherentnih ćelija izvedenih iz placente.
5.1 ANGIOGENEZA I TRETIRANJE BOLESTI ILI STANJA POVEZANIH SA ILI KOJ PROIZILAZE IZ LOŠE
CIRKULACIJE KRVI
[0060]Ovde su obezbeđene ćelije iz placente adherentne na plastiku za kulturu tkiva, npr., PDAC, kao što je opisano u Odeljku 5.2 dole, za primenu u postupcima tretiranja bolesti ili poremećaji krvnog sistema. U određenim ostvarenjima, PDAC su angiogenske. PDAC mogu da podpomognu rast endotelijalne ćelije i populacija endotelijalne ćelije, i epitelijalnih ćelija i populacija epitelijalnih ćelija , iin vitroiin vivo.
5.1.1Bolesti krvnog sistema
[0061]PDAC, populacije takvih ćelija i populacije ćelija koje obuhvataju PDAC, obezbeđene ovde mogu da se koriste za tretiranje pojedinaca koji pokazuju različite oblike bolesti ili stanja koje bi imale koristi od povećanja angiogeneza. Primeri takvih oblika bolest ili stanja uključuju infarkt miokarda, kongestivno zatajenje srca, perifernu arterijsku bolest, sindrom hipoplastičnog levogsrca, dijabetesna ulceracija, dekubitus čir, venski čir, arterijski čir, prelom kuka, nejedinstveni prelom, osteoartritis i maksilofacijalna popravka kosti. PDAC, i populacije takvih ćelija mogu, u određenim ostvarenjima, da se koriste za promovisanje angiogeneze kod pojedinaca koji pokazuju traumatičan gubitak tkiva, ili za sprečavanje formiranje ožiljka, ili kod pojedinaca koji imaju potpunu zamenu zgloba ili zubnu prostetiku.
[0062]Preciznije, PDAC, i populacije takvih ćelija, obezbeđene ovde, mogu da se koriste za tretiranje pojedinca koji ima insuficijenciju krvnog sistema,npr.,i pojedinca koji ima perifernu vaskularnu bolest ili koronarnu arterijsku bolest. Prema ovom pronalasku, PDAC koriste se za tretiranje periferne vaskularne ili arterijske bolesti, dijabetesne ulceracije ili kritične ishemije ekstremiteta.
[0063]Ovde su opisani postupci za tretiranje pacijenta sa srčanom bolešću ili povredom koji obuhvataju davanje terapeutske ćelijske kompozicije pacijentu sa bolešću ili povredom srca ili krvnog sistema, i kod pacijenta procenjivanje poboljšanja u srčanim funkcijama, pri čemu pomenuta ćelijska kompozicija obuhvata PDAC kao što su opisane ovde. Srčana bolest može da bude kardiomiopatija. Kardiomiopatija može da bude ili idiopatska ili kardiomiopatija sa poznatim uzrokom. Kardiomiopatija može da bude ili ishemijska ili neishemijska u prirodi. Bolest srca ili krvnog sistema može da obuhvata jedan ili više od angioplastike, aneurizme, angine (angina pektoris), aortalne stenoze, aortitisa, aritmija, arterioskleroza, arteritis, asimetrična septalna hipertrofija (ASH), ateroskleroza, atrijalna fibrilacija i flater, bakterijski endokarditis, Barlow-ov sindrom (prolaps dvolistnog zaliska), bradikardija, Buerger-ova bolest (thromboangiitis obliterans), kardiomegalija, kardiomiopatija, karditis, bolest karotidnih arterija, koarktacija aorte, kongenitalne srčane bolesti (urođene srčane mane), kongestivno zatajenje srca (zatajenje srca), koronarna arterijska bolest, Eisenmenger-ov sindrom, embolija, endokarditis, eritromelalgija, fibrilacija, fibromuskularna displazija, srčani blok, srčani šum, hipertenzija, hipotenzija, idiopatska dečija kalcifikacija arterija, Kavasakijeva bolest (mukokutani sindrom limfnih čvorova, mukokutana bolest limfnih čvorova, dečiji poliarteritis), metabolički sindrom, mikrovaskularna angina, infarkt miokarda (srčani napadi), miokarditis, paroksizmalna atrijalna tahikardija (PAT), periarteritis nodosa (poliarteritis, poliarteritis nodosa), perikarditis, periferna vaskularna bolest, kritična ishemija ekstremiteta, dijabetesna vaskulopatija, flebitis, plućna valvularna stenoza (plućna stenoza), Ravnaud-ova bolest, stenoza bubrežne arterije, renovaskularna hipertenzija, reumatska bolest srca, defekti septuma, silent ishemija, sindrom X, tahikardija, Takayasu-ov arteritis, Fallot-ova tetralogija, transpozicija velikih krvnih sudova, trikuspidalna atrezija, truncus arteriosus, bolest srčanih zalisaka, venski čirevi, proširene vene, vaskulitis, ventrikularni septalni defekt, Wolff-Parkinson-White-ov sindrom, ili defekt endokardijalnih jastučića.
[0064]Dalje, bolest srca ili krvnog sistema obuhvata jedno ili više od akutne reumatske groznice, akutnog reumatskog perikarditisa, akutnog reumatskog endokarditisa, akutnog reumatskog miokarditisa, hroničnih reumatskih bolesti srca, bolesti mitralnog zaliska, mitralne stenoze, reumatske mitralne insuficijencije, bolesti aortnog zaliska, bolesti drugih endokardijalnih struktura, ishemijske bolesti srca (akutna i subakutna), angine pektoris, bolesti pulmonarne cirkulacije (akutna pulmonarna bolest srca, pulmonarna embolija, hronična pulmonarna bolest srca), kifoskoliotične bolesti srca, miokarditisa, endokarditisa, endomiokardne fibroze, endokardne fibroelastoze, atrioventrikularnog bloka, kardijalne disritmije, miokardijalne degeneracije, bolesti krvnog sistema uključujući cerebrovaskularnu bolest, okluziju ili stenozu predcerebralnih arterija, okluzije cerebralnih arterija, bolesti arterija, arteriola i kapilara (ateroskleroza, aneurizma), ili bolesti vena i limfnih sudova.
[0065]Tretiranje pojedinca sa kardiomiopatijom terapeutskom ćelijskom kompozicijom koja obuhvata PDAC, može da bude ili sa ili bez drugog ćelijskog tipa. Pojedinac koji ima koristi od terapije, na primer od sposobnosti ćelija da potpomažu rast drugih ćelija, uključujući matične ćelije ili progenitorne ćelije prisutne u srcu, iz urastanja tkiva ili vaskularizacije tkiva, i od prisustva korisnih ćelijskih faktora, hemokina, citokina i slično, ali ćelije se ne integrišu ili multipliciraju u pojedincu. Alternativno, pacijent ima koristi od terapeutskog tretiranja ćelijama, ali ćelije ne preživljavaju tokom dužeg vremenskog perioda u pacijentu. Može postepeno da opada broj ćelija, vijabilnost ili biohemijska aktivnost. Ovom opadanju kod ćelija može da prethodi period aktivnosti, na primer rast, deoba ili biohemijska aktivnost. Stare, nevijabilne ili čak mrtve ćelije mogu da imaju koristan terapeutski efekat.
[0066]Poboljšanje kod pojedinca koji ima bolest ili poremećaj krvnog sistema, gde se pojedincu daju PDAC ili terapeutske kompozicije ovog pronalaska, može da se oceni ili demonstrira detektabilnim poboljšanjem jednog ili više simptoma bolesti ili poremećaja krvnog sistema.
[0067]Poboljšanje kod pojedinca koji ima bolest ili poremećaj krvnog sistema, pri čemu se pojedinac daju PDAC ili terapeutske kompozicije koje obuhvataju PDAC, može da se oceni ili demonstrira detektabilnim poboljšanjem jedne ili više u indikacija srčane funkcije, na primer, demonstriranje detektabilnog poboljšanja jednog ili više od grudnog srčanog izlaza (CO), srčanog indeksa (Cl), plućnih arterijskih udarnih pritisaka (PAWP), i srčanog indeksa (Cl), % frakcionog skraćenja (%FS), ejekcione frakcije (EF), ejekcione frakcije leve komore (LVEF); end-dijastolnog prečnika leve komore (LVEDD), end-sistolnog prečnika leve komore (LVESD), kontraktilnosti( npr.dP/dt), pritisak-zapremina krivulja, merenja rada srca, povećanja atrijalnih ili ventrikularnih funkcija; povećanja efikasnosti pumpanja, smanjenja brzine efikasnosti pumpanja, smanjenja hemodinamskog funkcionisanja; i smanjenja komplikacija povezanih sa kardiomiopatijom, u poređenju sa pojedincom pre davanja PDAC.
[0068]Poboljšanje kod pojedinca koji prima PDAC ili terapeutske kompozicije koje obuhvataju PDAC, obezbeđene ovde, može takođe da se oceni ličnim metrikama, npr., samo procenjivanjem pojedinca o njegovom ili njenom zdravstvenom stanju nakon davanja.
[0069]Uspešnost davanja ćelija, u određenim ostvarenjima, ne zasniva se na opstanku datih PDAC u pojedincu. Umesto toga, uspešnost se zasniva na jednoj ili više metrika poboljšanja zdravlja srca ili cirkulacije, kao što je naznačeno gore. Prema tome, ćelije ne treba da se integrišu i da kucaju sa srcem pacijenta, ili u krvne sudove.
[0070]PDAC mogu da se uvedu radi diferencijacije duž mezenhimnog porekla,npr.,ka kardiomiogenetskom, angiogenetskom ili vaskulogenetskom fenotipu, ili u ćelijama kao što su miociti, kardiomiociti, endotelijalne ćelije, miokardijalne ćelije, epikardijalne ćelije, vaskularne endotelijalne ćelije, ćelije glatkih mišića (npr. vaskularne ćelije glatkih mišića).
[0071]Davanje PDAC ili terapeutskih kompozicija koje obuhvataju takve ćelije, pojedincu kojem je to potrebno, može da se postigne,npr.,transplatacijom, implantacijom( npr.,samih ćelija ili ćelija kao deo kombinacije matriks-ćelija), injekcijom( npr.,direktno na mašto bolesti ili stanja, na primer, direktno na ishemijsko mesto u srcu pojedinca koji je imao infarkt miokarda), infuzijom, dostavom putem katetra, ili bilo kojim drugim sredstvom koje je poznato u ovoj oblasti za obezbeđivanje ćelijske terapije.
[0072]U jednom ostvarenju, terapeutske ćelijske kompozicije obezbeđene su pojedincu kojem su potrebne, na primer, injekcijom na jednom ili više mesta kod pojedinca. Na primer, terapeutske ćelijske kompozicije mogu dase obezbede intrakardijalnom injekcijom, npr., u ishemijsku oblast u srcu. Alternativno, ćelije mogu da se injektiraju na površinu srca, u susednu oblast, ili čak u udaljeniju oblast. U poželjnim ostvarenjima, ćelije mogu da se nastane u bolesnoj ili povređenoj oblasti.
[0073]Pojedincu koji ima bolest ili stanje koronarnog ili vaskularnog sistema mogu da se daju PDAC u bilo koje vreme i ćelije će biti terapeutski korisne. U određenim ostvarenjima, na primer, PDAC ili terapeutske kompozicije ovog pronalaska daju se u roku od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10,11,12,13,14,15, 16,17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 il 24 sata, ili 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,13,14,15,16,17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ili 30 dana od infarkta miokarda. Davanje približno u vreme infarkta miokarda, npr., u roku od 1-3 ili 1-7 dana, poželjno je da se daje distalno u vreme, npr., nakon 3 ili 7 dana nakon infarkta miokarda. U drugim ostvarenjima, ćelije ili terapeutske kompozicije ovog pronalaska daju se u roku od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19, 20, 21, 22, 23 ili 24 sata, ili 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9,10,11, 12, 13,14,15,16,17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ili 30 dana od početka dijagnoze bolesti ili stanja.
[0074]Takođe su ovde opisani kitovi za upotrebu u tretiranju infarkta miokarda. Kitovi obezbeđuju terapeutsku ćelijsku kompoziciju koja obuhvata PDAC, koja se može pripremiti u farmaceutskom prihvatljivom obliku, na primer umešavanjem sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, i aplikatorom, zajedno sa uputstvom za primenu. Idealno, kit može da se primeni u oblasti, na primer u doktorskoj ordinaciji, ili da se primeni od strane hitne pomoći na pacijenta kom je dijagnostikovano da je imao infarkt miokarda ili sličan srčani događaj.
[0075]U posebnim ostvarenjima postupaka tretiranja unutar konteksta ovog pronalaska, PDAC se daju sa matičnim ćelijama (to sa matičnim ćelijama koje nisu PDAC), mioblastima, miocitima, kardiomioblastima, kardiomiocitima, ili progenitorima mioblasta, miocita, kardiomioblasta i/ili kardiomiocita.
[0076]PDAC,npr.,terapeutska kompozicija koja obuhvata ćelije, mogu da se daju pacijentu sa bolešću srca ili krvnog sistema; i procenjivanjem kod pacijenta poboljšanja u srčanim funkcijama, pri čemu se terapeutska ćelijska kompozicija daje kao matriks-ćelija kompleks. U određenim ostvarenjima, matriks je skafold, poželjno bioapsorbilni, koji obuhvata najmanje ćelije.
[0077]Radi ovog cilja, populacije PDAC mogu da budu u kontaktu sa,npr.,inkubirane ili kultivisane u prisustvu, jednim ili više faktora koji stimulišu diferencijaciju matičnih ili progenitornih ćelija duž
kardiogenetskog, angiogenetskog, hemangiogenetskog ili vaskulogenetskog puta. Takvi faktori uključuju, ali nisu ograničeni na faktore, kao što su faktori rasta, hemokini, citokini, ćelijski proizvodi, demetilirajući agensi, i drugi faktori koji su poznati ili kasnije određeni za stimulaciju diferencijacije, na primer matičnih ćelija, duž kardiogenetskih, angiogenetskih, hemangiogenetskih ili vaskulogenetskih puteva ili porekla.
[0078]PDAC mogu da se diferenciraju duž kardiogenetskih, angiogenetskih, hemangiogenetskih ili vaskulogenetskih puteva ili poreklain vitrokultivisanjem ćelija u prisustvu faktora koji obuhvataju najmanje jedan od demetilirajućeg agensa, BMP (koštani morfogenetski protein), FGF (faktor rasta fibroblasta), Wnt faktor protein, Hedgehog protein i/ili anti-Wnt faktor.
[0079]Uključivanje demetilirajućih agenasa treba da promoviše diferencijaciju PDAC duž mesenhimalnih linija, ka kardiomiogenetskoj stazi. Diferencijacija može da se odredi, na primer, ekspresijom najmanje jednog od kardiomiozina, skeletnog miozina ili GATA4, npr., kao što je određeno imunobojenjem ili pomoću RT-PCR; ili akvizicijom ritma kucanja, spontano ili drugačije indukovanim; ili sposobnošću da se integriše najmanje delimično u srčani mišić pojedinca bez izazivanja aritmija. Demetilirajući agensi koji mogu da se koriste da iniciraju takvu diferencijaciju uključuju, ali nisu ograničeni na, 5-azacitidin, 5-aza-2'-deoksicitidin, dimetilsulfoksid, heleritrin hlorid, retinoinsku kiselinu ili njene soli, 2-amino-4-(etiltio)buternu kiselinu, prokainamid i/ili prokain.
[0080]PDAC koje su u kontaktu sa jednim ili više faktora koji su identifikovani gore mog uda postanu kardiomiogenske, angiogenetske, hemangiogene ili vaskulogene ćelije, ili progenitori. Poželjno najmanje neka od ćelija integriše se najmanje delimično u kardiovaskularni sistem primaoca, uključujući ali ne ograničavajući se na srčani mišić, vaskularne i druge strukture srca, srčane ili periferne krvne sudove i slično. U određenim ostvarenjima, diferencirane PDAC diferenciraju se u ćelijama koje pokazuju dve ili više karakteristika kardiomiogenskih ćelija ili njihovih progenitora, i mogu da se delimično ili potpuno integrišu u srce ili krvne sudove primaoca. U posebnim ostvarenjima, ćelije, kada se daju pojedincu, ne dovode do povećanja aritmija, srčanih mana, defekata krvnih sudova ili drugih anomalija krvnog sistema ili zdravlja pojedinca. U određenim ostvarenjima, PDAC deluju tako da promovišu diferencijaciju matičnih ćelija koje su prirodno prisutne kod pojedinca u srčanom mišiću, krvnim sudovima, krvi ili sličnom, da se one same diferenciraju u, na primer, kardiomiocite, ili najmanje duž kardiomiogenetskih, angiogenetskih, hemangiogenetskih ili vaskulogenetskih linija.
[0081]PDAC i populacije takvih ćelija mogu da se daju terapeutski ili profilaktički pojedincu,npr.,pojedincu koji ima bolest, poremećaj ili stanje, ili dejstvo na, srca ili krvnog sistema. Takve bolesti, poremećaji ili stanja mogu da uključuju kongestivno zatajenje srca usled ateroskleroze, kardiomiopatije, ili povrede srca,npr.,ishemijske povrede, kao što je od infarkta miokarda ili rana (akutna ili hronična).
[0082]U određenim ostvarenjima, pojedinuc se daje terapeutski efektivna količina PDAC,npr.,u populaciji ćelija koje obuhvataju PDAC. U posebnom ostvarenju, populacija obuhvata oko 50% PDAC. U drugom posebnom ostvarenju, populacija je u suštini homogena populacija PDAC. U drugim ostvarenjima populacija obuhvata najmanje oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% 90%, 95%, 98% ili 99% PDAC.
[0083]PDAC mogu da se daju pojedincu u obliku terapeutske kompozicije koja obuhvata ćelije i drugi terapeutski agens, kao što je insulinu sličan faktor rasta (IGF), faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF), epidermalni faktor rasta (EGF), faktor rasta fibroblasta (FGF), vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), faktor rasta hepatocita (HGF), interleukin 18 (IL-8), antitrombogeni agens( npr.,heparin, derivati heparina, urokinaza, ili PPack (dekstrofenilalanin prolin arginin hlorometilketon), antitrombin jedinjenje, antagonist trombocitnih receptora, antitrombin antitelo, antitelo antitrombocitnog receptora, aspirin, dipiridamol, protamin, hirudin, inhibitor prostaglandina i/ili trombocitni inhibitor), antiapoptotični agens( npr.,eritropoietin (Epo), Epo derivat ili analog, ili njegove soli, trombopoietin (Tpo), IGF-I, IGF-II, faktor rasta hepatocita (HGF), ili inhibitor kaspaze), antiinflamatorni agens( npr.,inhibitor p38 MAP kinaze, statin, IL-6 inhibitor, IL-1 inhibitor, Pemirolast, Tranilast, Remicade, Sirolimus i/ili nesteroidno antiinflamatorno jedinjenje( npr.,acetilsalicilna kiselina, ibuprofen, Tepoksalin, Tolmetin ili Suprofen)), imunosupresivni ili imunomodulatorni agens( npr.,inhibitor kalcineurina, na primer ciklosporin, Takrolimus, mTOR inhibitor kao što je Sirolimus ili Everolimus; antiproliferativ kao što je azatioprin i/ili mikofenolat mofetil; kortikosteroid,npr.,prednizolon ili hidrokortizon; antitelo kao što je monoklonsko anti-IL-2Ra receptor antitelo, Basiliksimab, Daklizuma, poliklonalno anti-T-ćelijksa antitela kao što su antitimocitni globulin (ATG), antilimfocitni globulin (ALG) i/ili monoklonalno anti-T ćelijsko antitelo OKT3, ili adherentne matične ćelije iz placente kao što je opisano u U.S. Patentu Br. 7,468,276, i U.S. Objavi prijave patenta Br. 2007/0275362), i/ili antioksidans( npr.,probukol; vitamini A, C i/ili E, koenzim Q-10, glutation, L cistein, N-acetilcistein, ili derivat antioksidansa, analog ili so bilo kojeg od prethodnih). U određenim ostvarenjima, terapeutske kompozicije koje obuhvataju PDAC dalje obuhvataju jedan ili više dodatnih tipova ćelija,npr.,zrele ćelije (na primer, fibroblaste ili endodermalne ćelije), matične ćelije i/ili progenitorne ćelije. Takvi terapeutski agensi i/ili jedan ili više dodatnih tipova ćelija mogu da se daju pojedincu kojem je potrebno pojedinačno ili u kombinaciji ili sa dva ili više takvih jedinjenja ili agenasa.
[0084]U određenim ostvarenjima, pojedinac koji će se tretirati je sisar. U posebnom ostvarenju, pojedinac koji će se tretirati je čovek. U posebnim ostvarenjima, pojedinac je životinja koja pripada stoci ili domaća životinja. U drugim određenim ostvarenjima, pojedinac koji će se tretirati je konj, ovca, krava ili goveče, svinja, pas ili mačka.
5.1.2Tretiranje ishemijske bolest
[0085]Ovde su obezbeđene PDAC ovog pronalaska za primenu u postupku tretiranja pojedinca koji ima prekid cirkulacije krvi, npr., u perifernim krvnim sudovima, koji obuhvataju davanje pojedincu terapeutski-efektivne količine PDAC. U određenim drugim ostvarenjima, ishemija je periferna arterijska bolest (PAD),npr.,je kritična ishemija ekstremiteta (CU). U određenim drugim ostvarenjima, ishemija je periferna vaskularna bolest (PVD).
[0086]U posebnom ostvarenju, pomenuti prekid protoka krvi je kritična ishemija ekstremiteta. U drugom određenijem ostvarenju, pomenuti CLI je ozbiljna blokada u arterijama donjih udova, koja značajno smanjuje protok krvi. U drugom određenijem ostvarenju, pomenuti CLI je okarakterisan ishemijskim bolom u stanju odmora, jakim bolom u nogama i stopalima dok se pojedinac ne kreće, ne zarastanjem rana na stopalima ili nogama, bolom u stopalima ili utrnulošću, sjajnom, glatkom, suvom kožom na nogama ili stopalima, zadebljanjem noktiju, odsustvom ili smanjenim pulsom u nogama ili stopalima, otvorenim ranama, infekcijom kože ili čirevima koji ne zarastaju, i/ili suvom gangrenom (suva, crna koža) nogu ili stopala. U drugom posebnom ostvarenju, pojedinac koji ima CLI doživljava gubitak najmanje jednog prsta i/ili celog ekstremiteta. U drugom posebnom ostvarenju postupka, pomenuta terapeutska efektivna količina je broj PDAC koji dovodi do eliminacije, detektibilnog poboljšanja u, smanjivanja ozbiljnosti, ili usporavanja napredovanja jednog ili više simptoma, gubitka funkcije ekstremiteta i/ili oduzimanja kiseonika (hipoksija/anoksija) koji se mogu pripisati prekidu protoka krvi u perifernim krvnim sudovima pojedinca. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta terapeutski efektivna količina izolovanih PDAC daje se pomenutom pojedincu profilaktički,npr.,da smanji ili eliminiše oštećenje tkiva uzrokovano drugim ili naknadnim prekidom protoka krvi u ili oko ekstremiteta nakon pomenutog prekida protoka krvi.
[0087]PDAC mogu takođe da se koriste u tretiranju šloga,npr.,ishemijskog šloga,npr.,tretiranja šloga promovisanjem angiogeneze u ishemijskoj oblasti CNS. U jednom aspektu, pojedinac koji ima prekid protoka krvi u ili oko mozga pojedinca,npr.,koji ima simptom ili neurološki deficit koji se može pripisati prekidu protoka krvi u ili oko mozga ili centralnog nervnog sistema (CNS) pojedinca, može da se tretira davanjem pomenutom pojedincu terapeutski efektivne količine izolovanih humanih ćelija iz placente adherentnih na plastiku za kulturu tkiva, pri čemu pomenute izolovane ćelije iz placente imaju karakteristike multipotentnih ćelija ili matičnih ćelija. Prekid protoka krvi može da dovede do anoksične povrede ili hipoksične povrede mozga ili CNS pojedinca. Kao što je navedeno ovde, tretiranje simptoma ili neurološkog deficita kod pojedinca koji se mogu pripisati prekidu protoka krvi u ili oko mozga pojedinca uključuje tretiranje simptoma ili neuroloških deficita koji se mogu pripisati reperfuzionoj povredi koja može da prati takav prekid protoka krvi u ili oko mozga pojedinca.
[0088]Pored toga što su angiogene, ćelije iz placente( npr.,PDAC, kao što su opisane dole) obezbeđene ovde su i neuroprotektivne. U određenim ostvarenjima, ćelije iz placente su neuroprotektivne u sredini sa malo kiseonika,npr.,u hipoksičnim uslovima( npr.,manje od oko 5% 02). U određenim ostvarenjima, matične ćelije iz placente, kada su u kontaktu sa neuronima ili drugim nervnim ćelijama, ili astrocitima, povećavaju zdravlje neurona, nervnih ćelija, ili astrocita,npr.,kao što se vidi povećenjem dužine neuritain vitrou ko-kulturi PDAC i neurona. U određenim drugim ostvarenjima, PDAC smanjuju koncentraciju jedne ili više reaktivnih vrsta kiseonika u hipoksičnoj sredini. Dalje, u određenom ostvarenju, ćelije iz placente( npr.,PDAC) koje luče jedan ili više neurotrofnih citokina BDNF, VEGF, HGF, G-CSF, faktora rasta nerva (NGF) i/ili neurotrofin-3 (NTF3). Kao takve, PDAC korisne su u tretiranju ishemijske povrede, oba i CNS i PNS,npr.,ishemijske povrede nervnog sistema u CNS do koje dolazi usled šloga, ili ishemijske povrede nervnog sistema u PNS do koje dolazi usled kritične ishemije ekstremiteta ili periferne vaskularne bolesti. PDAC mogu da se koriste za tretiranje, npr., multipla skleroze, amiotrofične lateralne skleroze, Parkinsonove bolesti, Alchajmerove bolesti i/ili perifernih neuropatija, npr., dijabetične neuropatije.
5.2 IZOLOVANE ĆELIJE IZ PLACENTE I POPULACIJE IZOLOVANIH ĆELIJA IZ PLACENTE
[0089]izolovane ćelije iz placente,npr.,PDAC, korisne u tretiranju pojedinaca koji imaju bolest ili poremećaj cirkulacije, su ćelije koje se mogu dobiti iz placente ili njenog dela, koje prijanjaju na supstrat kulture tkiva i imaju karakteristike multipotentnih ćelija ili matičnih ćelija, ali nisu trofoblasti. U određenim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima opisanim ovde imaju kapacitet da se diferenciraju u tipove ćelija koje nisu iz placente.
[0090]Izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima opisanim ovde mogu da budu ili fetalnog ili materinskog porekla (to jest, mogu da imaju genotip ili fetusa ili majke, respektivno). Poželjno, izolovane ćelije iz placente i populacije izolovanih ćelija iz placente fetalnog su porekla. Kao što se ovde koristi, izraz "fetalno poreklo" ili "nematerinsko poreklo" označava da se izolovane ćelije iz placente ili populacije izolovanih ćelija iz placente dobijaju iz pupčane vrpce ili placentnih struktura povezanih sa fetusom,tj.,da imaju fetalni genotip. Kao što se ovde koristi, izraz "materinsko poreklo" označava da se ćelije ili populacije ćelija dobijaju iz placentnih struktura vezanih za majku,npr.,koje imaju materinski genotip. Izolovane ćelije iz placente,npr.,PDAC, ili populacije ćelija koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente, mogu da obuhvataju izolovane ćelije iz placente koje su isključivo fetalnog ili materinskog porekla, ili mogu da obuhvataju mešanu populaciju izolovanih ćelija iz placente i fetalnog i materinskog porekla. Izolovane ćelije iz placente i populacije ćelija koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente, mogu da se identifikuju i odaberu prema morfološkim karakteristikama, karakteristikama markera i kulture opisanim dole. U određenim ostvarenjima, bilo koje od ćelija iz placente,npr.,matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente opisane ovde, su autologne za primaoca,npr.,pojedinca koji ima bolest ili poremećaj krvnog sistema. U određenim drugim ostvarenjima, bilo koje od ćelija iz placente, npr., matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente opisane ovde, su heterologne za primaoca,npr.,pojedinca koji ima bolest ili poremećaj krvnog sistema.
5.2.1Fizičke i Morfološke Karakteristike
[0091]Izolovane ćelije iz placente opisane ovde (PDAC), kada se kultivišu u primarnim kulturama ili u ćelijskoj kulturi, prijanjaju na supstrat kulture tkiva,npr.,na površinu kontejnera za kulturu tkiva( npr.,plastika za kulturu tkiva), ili na površinu kulture tkiva prevučenu sa vanćelijskim matriksom ili ligandima kao što su laminin, kolagen( npr.,prirodni ili denaturisani), želatin, fibronektin, ornitin, vitronektin i vanćelijski membranski protein( npr.,MATRIGEL<®>(BD Discoverv Labware, Bedford, Mass.))- Izolovane ćelije iz placente u kulturi pretpostavljaju opšti fibroblastoidni, steltni izgled, sa brojnim citoplazmatičnim procesima koji se pružaju od centralnog ćelijskog tela. Ćelije se, međutim, morfološki razlikuju od fibroblasta koji se kultivišu u istim uslovima, jer izolovane ćelije iz placente pokazuju veći broj takvih procesa nego što čine fibroblasti. Morfološki, izolovane ćelije iz placente se takođe razlikuju od hematopoetskih matičnih ćelija, za koje se uopšteno pretpostavlja da su više zaobljene, ili imaju morfologiju sličnu kaldrmi u kulturi.
[0092]U određenim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima opisanim ovde, kada se kultivišu u podlozi za rast, razvijaju telašca nalik embrioidu. Telašca nalik embrioidu su nesusedne skupine ćelija koje mogu da rastu na vrhu adherentnog sloja proliferativnih izolovanih ćelija iz placente. Izraz "nalik embroidu" koristi se zbog toga što skupine ćelija podsećaju na embrioidna telašca, skupine ćelija koje izrastaju od kultura embrionskih matičnih ćelija. Podloga za rast u kojoj telašca nalik embrioidu mogu da se razvijaju u proliferativnoj kulturi izolovanih ćelija iz placente uključuju podlogu koja obuhvata,npr.,DMEM-LG( npr.,od Gibco); 2% fetalnog telećeg seruma( npr.,od Hvclone Labs.); 1 x insulin-transferin-selenijum (ITS); 1 x linolna kiselina-goveđi serum albumin (LA-BSA); IO"<9>M deksametazona( npr.,od Sigma); IO"<4>M askorbinske kiseline 2-fosfata( npr.,od Sigma); epidermalni faktor rasta 10 ng/mL( npr.,od R&D Svstems); i faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF-BB) 10 ng/mL( npr.,od R&D Svstems).
5.2.2Površina ćelije, molekularni i genetički markeri
[0093]Izolovane ćelije iz placente,npr.,izolovane multipotentne ćelije iz placente ili izolovane matične ćelije iz placente i populacije takvih izolovanih ćelija iz placente, korisne u postupcima oopisanim ovde,npr.,postupcima tretiranja bolesti ili poremećaja krvnog sistema, su humane ćelije iz placente adherentne na plastiku za kulturu tkiva koje imaju karakteristike multipotentnih ćelija ili matičnih ćelija, a eksprimiraju veći broj markera koji mogu da se koriste za identifikaciju i/ili izolaciju ćelija ili populacija ćelija koje obuhvataju matične ćelije. U određenim ostvarenjima, PDAC su angiogenske,npr., in vitroiliin vivo.Izolovane ćelije iz placente, i populacije ćelija iz placente opisane ovde (to jest, dve ili više izolovanih ćelija iz placente) uključuju ćelije iz placente i populacije ćelija iz placente dobijene direktno iz placente, ili nekog njenog dela( npr.,horion, placentni kotiledoni ili slično). Populacije izolovanih ćelija iz placente takođe uključuju populacije (to jest, dve ili više) izolovanih ćelija iz placente u kulturi, i populaciju u kontejneru,npr.,kesi. Izolovane ćelije iz placente opisane ovde nisu mezenhimalne ćelije izvedene iz koštane srži, mezenhimalne matične ćelije izvedene iz masnog tkiva, ili mezenhimalne ćelije dobijene iz krvi pupčane vrpce, placentne krvi ili periferne krvi. Ćelije iz placente, npr., multipotentne ćelije iz placente i ćelije iz placente, korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde opisane su ovde i,npr.,u U.S. Patentu Br. 7,311,904; 7,311,905; i 7,468,276; i u U.S. Objavi prijave patenta Br. 2007/0275362.
[0094]PDAC ovog pronalaska su CD10<+>, CD34<+>,CD105<+>i CD200<+>, kao što je određeno protočnom citometrijom. U određenim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente su izolovane matične ćelije iz placente. U određenim drugim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente su izolovane multipotentne ćelije iz placente. U jednom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente,npr,PDAC, su CD34", CD10<+>i CD105<+>kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente imaju mogućnost da se diferenciraju u ćelije nervnog fenotipa, ćelije osteogenog fenotipa i/ili ćelije hondrogenog fenotipa. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD45" ili CD90<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD45" i CD90<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente su dodatno CD90<+>ili CD45", kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente su dodatno CD90<+>i CD45", kao što je detektovano protočnom citometrijom,tj.,ćelije su CD34", CD10<+>, CD45", CD90<+>, CD105<+>i CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute CD34", CD10<+>, CD45", CD90<+>, CD105<+>, CD200+ ćelije su dodatno CD80" i CD86".
[0095]U određenim ostvarenjima, pomenute ćelije iz placente su CD34", CD10<+>, CD105<+>i CD200<+>, i jedna ili više od CD38", CD45", CD80", CD86, CD133", HLA-DR,DP,DQ", SSEA3", SSEA4", CD29<+>, CD44<+>, CD73<+>, CD90<+>, CD105<+>, HLA-A,B,C<+>, PDL1<+>, ABC-p<+>i/ili OCT-4<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugim ostvarenjima, bilo koje od CD34", CD10<+>, CD105+ ćelija opisanih gore su dodatno jedna ili više od CD29<+>, CD38", CD44<+>, CD54<+>, SH3<+>ili SH4<+.>U drugom posebnom ostvarenju, ćelije su dodatno CD44<+>. U drugom posebnom ostvarenju bilo kojih od izolovanih CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelija iz placente gore, ćelije su dodatno jedna ili više od CD117", CD133", KDR" (VEGFR2 ), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", ili liganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+>, ili bilo koje njihove kombinacije.
[0096]U drugom ostvarenju, CD34", CD10\ CD105<+>ćelije su dodatno jedna ili više od CD13<+>, CD29<+>, CD33<+>, CD38", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD62E", CD62L", CD62P", SH3<+>(CD73<+>), SH4<+>(CD73<+>), CD80", CD86", CD90<+>, SH2<+>(CD105<+>), CD106/VCAM<+>, CD117", CD144/VE-cadherin<low>, CD184/CXCR4", CD200<+>, CD133", OCT-4<+>, SSEA3", SSEA4", ABC-p<+>, KDR" (VEGFR2 ), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", HLA-G", ili liganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+>, ili bilo koje njihove kombinacije. U drugom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije su dodatno CD13\ CD29<+>, CD33<+>, CD38", CD44<+>, CD45", CD54/ICAM<+>, CD62E", CD62L" , CD62P, SH3<+>(CD73<+>), SH4<+>(CD73<+>), CD80, CD86, CD90<+>, SH2<+>(CD105<+>), CD106/VCAM<+>, CD117, CD144/VE-cadherin<l0W>, CD184/CXCR4", CD200<+>, CD133", OCT-4<+>, SSEA3", SSEA4", ABC-p<+>, KDR" (VEGFR2 ), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", HLA-G" i liganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+.>
[0097]U drugom posebnom ostvarenju, bilo koje od ćelija iz placente opisane ovde su dodatno ABC-p<+>, kao što je detektovano protočnom citometrijom, ili OCT-4<+>(P0U5F1<+>), kao što je određeno pomoću RT-PCR, gde je ABC-p specifičan protein ABC transporter u placenti (takođe poznat kao protein otpornosti raka dojke (BCRP) i kao protein otpornosti na mitoksantron (MXR)), a OCT-4 je Oktamer-4 protein (POU5F1). U drugom posebnom ostvarenju, bilo koje od ćelija iz placente opisane ovde su dodatno SSEA3" ili SSEA4", kao što je određeno protočnom citometrijom, pri čemz je SSEA3 fazno specifičan embrionalni antigen 3, a SSEA4 je fazno specifičan embrionalni antigen 4. U drugom posebnom ostvarenju, bilo koje od ćelija iz placente opisane ovde su dodatno SSEA3" i SSEA4".
[0098]U drugom posebnom ostvarenju, bilo koje od ćelija iz placente opisane ovde su dodatno jedna ili više od MHC-I<+>( npr.,HLA-A,B,C<+>), MHC-II"( npr.,HLA-DP,DQ,DR") ili HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, bilo koje od ćelija iz placente opisane ovde su dodatno jedna ili više od MHC-I<+>( npr.,HLA-A,B,C<+>), MHC-II"( npr.,HLA-DP,DQ,DR") i HLA-G".
[0099]Takođe ovde su obezbeđene populacije izolovanih ćelija iz placente, ili populacije ćelija,npr.,populacije ćelija iz placente, koje obuhvataju,npr.,koje su obogaćene, izolovane ćelije iz placente, koje su korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde. Poželjne populacije ćelija koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente, pri čemu populacije ćelija obuhvataju, npr., najmanje 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 98% izolovanih CD10<+>, CD105<+>i CD34" ćelija iz placente; odnosno, najmanje 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 98% ćelija u pomenutoj populaciji su izolovane CD10<+>, CD105<+>i CD34" ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente su dodatno CD90<+>ili CD45", kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente su dodatno CD90<+>i CD45", kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, bilo koje od izolovanih CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelija iz placente opisane ovde su dodatno jedna ili više od CD29<+>, CD38" , CD44<+>, CD54<+>, SH3<+>ili SH4<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente, ili izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente, su dodatno CD44<+>. U posebnom ostvarenju bilo kojih od populacija ćelija koje obuhvataju izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente gore, izolovane ćelije iz placente su dodatno jedna ili više od CD13<+>, CD29<+>, CD33<+>, CD38, CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD62E", CD62L", CD62P", SH3<+>(CD73<+>), SH4<+>(CD73<+>), CD80", CD86", CD90<+>, SH2<+>
(CD105<+>), CD106/VCAM<+>, CD117", CD144/VE-cadherin<low>, CD184/CXCR4", CD200<+>, CD133, OCT4<+>, SSEA3", SSEA4", ABC-p<+>, KDR" (VEGFR2), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", HLA-G" ili liganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+>, ili bilo koje njihove kombinacije. U drugom posebnom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije su dodatno CD13<+>, CD29<+>, CD33<+>, CD38", CD44<+>, CD45", CD54/ICAM<+>, CD62E", CD62L", CD62P", SH3<+>
(CD73<+>), SH4<+>(CD73<+>), CD80", CD86", CD90<+>, SH2<+>(CD105<+>), CD106/VCAM<+>, CD117", CD144/VE-cadherin<low>, CD184/CXCR4", CD200<+>, CD133", OCT-4<+>, SSEA3", SSEA4", ABC-p<+>, KDR"(VEGFR2"), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", HLA-G" i ligand programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+>.
[0100]U određenim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su jedna ili više, ili sve, od CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3", SSEA4", OCT-4<+>i ABC-p<+>, pri čemu se pomenute izolovane ćelije iz placente dobijaju fizičkom i/ili enzimskom razgradnjom tkiva placente. U posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>i ABC-p<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>i CD34", pri čemu pomenute izolovane ćelije iz placente imaju najmanje jednu od sledećih karakteristika: CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3" i SSEA4". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>, CD34", CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3" i SSEA4". U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>, CD34", SSEA3" i SSEA4". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>i CD34", i ili je SH2<+>ili SH3<+.>U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>, CD34", SH2<+>i SH3<+.>U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>, CD34", SSEA3" i SSEA4", i ili su SH2<+>ili SH3<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>i CD34", i ili SH2<+>ili SH3<+>, i najmanje je jedna od CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SSEA3" ili SSEA4". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>, CD34", CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SSEA3" i SSEA4", i ili SH2<+>ili SH3<+>.
[0101]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisane ovde su SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>i OCT-4<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD54<+>, CD90<+>, CD34", CD45", SSEA3" ili SSEA4". U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3" i SSEA4". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3" i SSEA4", CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD54<+>, CD90<+>, OCT-4<+>, CD34" ili CD45".
[0102]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su CD10<+>, CD29<+>, CD34, CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SH2<+>, SH3<+>i SH4<+>; pri čemu pomenute izolovane ćelije iz placente su dodatno jedna ili više od OCT-4<+>, SSEA3" ili SSEA4".
[0103]U određenim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su CD200+ ili HLA-G". U posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD200<+>i HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su dodatno CD73<+>i CD105<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su dodatno CD34, CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute matične ćelije su CD34", CD38", CD45", CD73<+>i CD105<+.>U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>ili HLA-G ćelije iz placente olakšavaju formiranje telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente, u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje nisu matične ili multipotentne ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0104]U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata,npr.,koja je obogaćena, CD200<+>, HLA-G" matične ćelije. U posebnom
ostvarenju, pomenuta populacija je populacija ćelija iz placente. U različitim ostvarenjima, najmanje oko 10%, najmanje oko 20%, najmanje oko 30%, najmanje oko 40%, najmanje oko 50%, ili najmanje oko 60% ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su izolovane CD200<+>, HLA-G" ćelije iz placente. Poželjno, najmanje oko 70% ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su izolovane CD200<+>, HLA-G" ćelije iz placente. Poželjnije, najmanje oko 90%, 95%, ili 99% pomenutih ćelija su izolovane CD200<+>, HLA-G" ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju ćelijskih populacija, pomenute izolovane CD200<+>, HLA-G" ćelije iz placente su takođe CD73<+>i CD105<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, HLA-G"ćelije iz placente su takođe CD34", CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, HLA-G" ćelije iz placente su takođe CD34", CD38", CD45", CD73<+>i CD105<+>. U drugom ostvarenju,
pomenuta ćelijska populacija proizvodi jedno ili više telašaca nalik embrioidu kada se kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta ćelijska populacija je izolovana dalje od ćelija iz placente koje nisu matične ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, HLA-G" ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0105]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su CD73<+>, CD105<+>i CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD34", CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD34", CD38", CD45" i HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD73<+>, CD105<+>i CD200<+>ćelije iz placente olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente koja obuhvata izolovane ćelije iz placente, kada se populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje nisu izolovane ćelije iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0106]U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata, npr., koja je obogaćena, izolovane CD73<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente. U različitim ostvarenjima, najmanje oko 10%, najmanje oko 20%, najmanje oko 30%, najmanje oko 40%, najmanje oko 50%, ili najmanje oko 60% ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su izolovane CD73<+>, CD105<+>, CD200+ ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 70% pomenutih ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su izolovane CD73<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 90%, 95% ili 99% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su izolovane CD73<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju pomenutih populacija, izolovane ćelije iz placente su HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38"i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38", CD45" i HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta populacija ćelija proizvodi jedno ili više telašaca nalik embrioidu kada se kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta populacija ćelija iz placente je izolovana dalje od ćelija iz placente koje nisu matične ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta populacija ćelija iz placente je izolovana dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove karakteristike.
[0107]U određenim drugim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente su jedna ili više od CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3", SSEA4", OCT-4<+>, HLA-G" ili ABC-p<+>. U posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3", SSEA4" i OCT-4<+.>U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD45", CD54<+>, SH2<+>, SH3<+>i SH4<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD45", CD54<+>, SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>i OCT-4<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD10<+>, CD29<+>, CD34, CD38, CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, HLA-G", SH2<+>, SH3<+>, SH4<+.>U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>i ABC-p<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>i OCT-4<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>, CD34", SSEA3" i SSEA4". U posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4<+>, CD34", SSEA3" i SSEA4" ćelije iz placente su dodatno CD10<+>, CD29<+>, CD34", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD90<+>, SH2<+>, SH3<+>i SH4<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>i CD34", i ili SH3<+>ili SH4<+>. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD34" i ili CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD54<+>, CD90<+>ili OCT-4<+>.
[0108]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su CD200<+>i OCT-4<+>. U posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD73<+>i CD105<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente su HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente su CD34", CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente su CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente su CD34", CD38", CD45", CD73<+>, CD105<+>i HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente olakšavaju proizvodnju jednog ili više telašaca nalik embrioidu od strane populacije ćelija iz placente koja obuhvata izolovane ćelije, kada se populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje nisu matične ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove karakteristike.
[0109]U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata, npr., koja je obogaćena, CD200<+>, OCT-4+ ćelije iz placente. U različitim ostvarenjima, najmanje oko 10%, najmanje oko 20%, najmanje oko 30%, najmanje oko 40%, najmanje oko 50%, ili najmanje oko 60% ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 70% pomenutih ćelija su pomenute izolovane CD200<+>, 0CT-4+ ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 80%, 90%, 95%, ili 99% ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju izolovanih populacija, pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD73<+>i CD105<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38", CD45", CD73<+>, CD105<+>i HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi jedno ili više telašaca nalik embrioidu kada se kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta ćelijska populacija je izolovana dalje od ćelija iz placente koje nisu izolovane CD200<+>, OCT-4<+>ćelije iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta ćelijska populacija je izolovana dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0110]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su CD73<+>, CD105<+>i HLA-G". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD73<+>, CD105<+>i HLA-G" ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente su dodatno OCT-4<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente su dodatno CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G"ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38", CD45", OCT-4<+>i CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente olakšavaju formiranje telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente koja obuhvata pomenute ćelije, kada se populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje nisu izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G"ćelije iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G"ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0111]U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata, npr., koja je obogaćena, izolovane CD73<+>, CD105<+>i HLA-G" ćelije iz placente. U različitim ostvarenjima, najmanje oko 10%, najmanje oko 20%, najmanje oko 30%, najmanje oko 40%, najmanje oko 50%, ili najmanje oko 60% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 70% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 90%, 95% ili 99% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju gore pomenutih populacija, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G"ćelije iz placente su dodatno 0CT-4<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente su dodatno CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38", CD45", OCT-4<+>i CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta ćelijska populacija je izolovana dalje od ćelija iz placente koje nisu CD73<+>, CD105<+>, HLA-G ćelije iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta ćelijska populacija je izolovana dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0112]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su CD73<+>i CD105<+>i olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji izolovanih ćelija iz placente koje obuhvataju pomenute CD73<+>, CD105<+>ćelije kada se pomenuta populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno OCT-4<+.>U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno OCT-4<+>, CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje nisu pomenute ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105+ ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove karakteristike.
[0113]U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata, npr., koja je obogaćena, izolovane ćelije iz placente koje su CD73<+>, CD105<+>i olakšava formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji izolovanih ćelija iz placente koja obuhvata pomenute ćelije kada se pomenuta populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U različitim ostvarenjima, najmanje oko 10%, najmanje oko 20%, najmanje oko 30%, najmanje oko 40%, najmanje oko 50%, ili najmanje oko 60% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 70% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 90%, 95% ili 99% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju gore pomenutih populacija, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno OCT-4<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38", CD45", OCT-4<+>i CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta ćelijska populacija je izolovana dalje od ćelija iz placente koje nisu pomenute izolovane CD73<+>, CD105<+>ćelije iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta ćelijska populacija je izolovana dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0114]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su OCT-4<+>i olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji izolovanih ćelija iz placente koja obuhvata pomenute ćelije kada se kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD73<+>i CD105<+.>U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD73<+>, CD105<+>, CD200<+>, CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje nisu OCT-4+ ćelije iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4+ ćelije iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove karakteristike.
[0115]U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata,npr.,koja je obogaćena, izolovane ćelije iz placente koje su OCT-4<+>i olakšava formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji izolovanih ćelija iz placente koja obuhvata pomenute ćelije kada se pomenuta populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U različitim ostvarenjima, najmanje oko 10%, najmanje oko 20%, najmanje oko 30%, najmanje oko 40%, najmanje oko 50%, ili najmanje oko 60% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 70% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su pomenute izolovane OCT-4+ ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, najmanje oko 80%, 90%, 95% ili 99% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju gore pomenutih populacija, pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38 ili CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4+ ćelije iz placente su dodatno CD73+ i CD105<+.>U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD200<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane OCT-4<+>ćelije iz placente su dodatno CD73<+>, CD105<+>, CD200<+>, CD34", CD38" i CD45". U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta ćelijska populacija je izolovana dalje od ćelija iz placente koje nisu pomenute ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta ćelijska populacija je izolovana dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0116]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su izolovane HLA-A,B,C<+>, CD45", CD133" i CD34"ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata izolovane ćelije iz placente, pri čemu najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95% ili najmanje oko 99% ćelija u pomenutoj izolovanoj populaciji ćelija su izolovane HLA-A,B,C<+>, CD45, CD133" i CD34" ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju, pomenuta izolovana ćelija iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente je izolovana dalje od ćelija iz placente koje nisu HLA-A,B,C<+>, CD45", CD133" i CD34" ćelije iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente su nematerinskog porekla. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta izolovana populacija ćelija iz placente je suštinski bez materinskih komponenta;npr.,najmanje oko 40%, 45%, 5-0%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% pomenutih ćelija u pomenutoj izolovanoj populaciji ćelija iz placente su nematerinskog porekla.
[0117]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su izolovane CD10<+>, CD13<+>, CD33<+>, CD45", CD117" i CD133" ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata izolovane ćelije iz placente, pri čemu najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95% ili najmanje oko 99% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su izolovane CD10<+>, CD13<+>, CD33<+>, CD45", CD117" i CD133" ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente je izolovana dalje od ćelija iz placente koje nisu pomenute izolovane ćelije iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane CD10<+>, CD13\ CD33<+>, CD45", CD117" i CD133" ćelije iz placente su nematerinskog porekla, tj., imaju fetalni genotip. U drugom posebnom ostvarenju, najmanje oko 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% pomenutih ćelija in pomenutoj izolovanoj populaciji ćelija iz placente, su nematerinskog porekla. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove karakteristike.
[0118]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su izolovane CD10", CD33", CD44<+>, CD45" i CD117" ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata, npr., obogaćena, izolovane ćelije iz placente, pri čemu najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95% ili najmanje oko 99% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija su izolovane CD10", CD33", CD44<+>, CD45" i CD117" ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju, pomenuta izolovana ćelija iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente je izolovana dalje od ćelija iz placente koje nisu pomenute ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente su nematerinskog porekla. U drugom posebnom ostvarenju, najmanje oko 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% pomenutih ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su neaterinskog porekla. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta izolovana ćelija iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente je izolovana dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0119]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su izolovane CD10", CD13", CD33", CD45" i CD117" ćelije iz placente. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata, npr., obogaćena je, izolovane CD10", CD13", CD33", CD45" i CD117" ćelije iz placente, pri čemu najmanje oko 70%, najmanje oko 80%, najmanje oko 90%, najmanje oko 95% ili najmanje oko 99% ćelija u pomenutoj populaciji su CD10", CD13", CD33", CD45" i CD117" ćelije iz placente. U posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje nisu pomenute ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente su nematerinskog porekla. U drugom posebnom ostvarenju, najmanje oko 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% pomenutih ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su nematerinskog porekla. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente je izolovana dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove karakteristike.
[0120]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su HLA A,B,C<+>, CD45", CD34" i CD133", i dodatno su CD10<+>, CD13<+>, CD38<+>, CD44<+>, CD90<+>, CD105<+>, CD200<+>i/ili HLA-G", i/ili negativne za CD117. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima opisanim ovde je populacija ćelija koja obuhvata izolovane ćelije iz placente, pri čemu najmanje oko 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%; 90%, 95%, 98% ili oko 99% ćelija u pomenutoj populaciji su izolovane ćelije iz placente koje su HLA A,B,C", CD45", CD34", CD133", i koje su dodatno pozitivne za CD10, CD13, CD38, CD44, CD90, CD105, CD200, i/ili negativne za CD117 i/ili HLA-G. U posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje nisu pomenute ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente su nematerinskog porekla. U drugom posebnom ostvarenju, najmanje oko 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% pomenute ćelije u pomenutoj ćelijskoj populaciji su nematerinskog porekla. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente su izolovane dalje od ćelija iz placente koje ne prikazuju ove markere.
[0121]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su izolovane ćelije iz placente koje su CD200<+>i CD10<+>, kao što je određeno vezivanjem antitelo, i CD117", kao što je određeno i vezivanjem antitela i pomoću RT-PCR. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su izolovane ćelije iz placente,npr.,matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente, koje su CD10<+>, CD29", CD54<+>, CD200<+>, HLA-G", MHC klasa l<+>i B-2-mikroglobulin<+.>U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su ćelije iz placente pri čemu je ekspresija najmanje jednog ćelijskog markera najmanje dvostruko veća nego za mezenhimalnu matičnu ćeliju( npr.,mezenhimalna matična ćelija izvedena iz koštane srži). U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente su nematerinskog porekla. U drugom posebnom ostvarenju, najmanje oko 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% pomenutih ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su nematerinskog porekla.
[0122]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su izolovane ćelije iz placente,npr.,matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente, koje su jedna ili više od CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD45", CD54/ICAM<+>, CD62E", CD62L", CD62P", CD80", CD86", CD103", CD104", CD105<+>, CD106/VCAM<+>, CD144/VE-cadherin<low>, CD184/<C>XCR4", B2-mikroglobulin<low>, MHC-l<lov>", MHC-II", HLA-G<low>, i/ili PDL1|<0W.>U posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su najmanje CD29<+>i CD54<+.>U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su najmanje CD44<+>i CD106<+.>U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su najmanje CD29<+>.
[0123]U drugom ostvarenju, ćelijska populacija korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde obuhvata izolovane ćelije iz placente, a najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% ili 99% ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su izolovane ćelije iz placente koje su jedna ili više od CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD45", CD54/ICAM<+>, CD62-E", CD62-L", CD62-P", CD80", CD86", CD103", CD104", CD105<+>, CD106/VCAM<+>, CD144/VE-cadherind<dim>, CD184/CXCR4", 132-mikroglobulindim, HLA-I<dim>, HLA-M", HLA-G<dim>, i/ili PDLl<dim.>U drugom<p>osebnom ostvarenju, najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% ili 99% ćelija u pomenutoj ćelijskoj populaciji su CD10<+>, CD29<+>, CD44<+>, CD45", CD54/ICAM<+>, CD62-E", CD62-L", CD62-P", CD80", CD86, CD103, CD 104", CD105<+>, CD106/VCAM<+>, CD144/VE-cadherin<dim>, CD184/CXCR4", p2-mikroglobulin<dim>, MHC-I<din>, MHC-II", HLA-G<dim>, i PDLl<dim>.
[0124]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su izolovane ćelije iz placente koje su jedna ili više, ili sve, od CDIO<+>, CD29<+>, CD34", CD38", CD44<+>, CD4S", CD54<+>, CD90<+>, SH2<+>, SH3<+>, SH4<+>, SSEA3", SSEA4", OCT-4<+>i ABC-p<+>, gde je ABC-p specifičan protein ABC transporter u placenti (takođe poznat kao protein otpornosti raka dojke (BCRP) i kao protein otpornosti na mitoksantron (MXR)), pri čemu se pomenute izolovane ćelije iz placente dobijaju perfuzijom placente sisara,npr.,humane, koja je drenirana od krivi pupčane vrpce i perfundovana radi uklanjanja ostataka krvi.
[0125]U drugom posebnom ostvarenju bilo kojih od gore navedenih karakteristika, ekspresija ćelijskog markera( npr.,diferenciranje grozda ili imunogenetski marker) određuje se protočnom citometrijom,; u drugom posebnom ostvarenju, ekspresija markera određuje se pomoću RT-PCR.
[0126]Profilisanje gena potvrđuje da se izolovane ćelije iz placente, i populacije izolovanih ćelija iz placente, razlikuju od drugih ćelija,npr.,mezenhimalnih matičnih ćelija,npr.,mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži. Izolovane ćelije iz placente opisane ovde mogu da se razlikuju od,npr.,mezenhimalnih matičnih ćelija na osnovu ekspresije jednog ili više gena, pri čemu je njihova ekspresija suštinski veća u izolovanim ćelijama iz placente, ili u određenim matičnim ćelijama izolovanim iz pupčane vrpce, u poređenju sa mezenhimalnim matičnim ćelijama izvedenim iz koštane srži. Naročito, izolovane ćelije iz placente, korisne u postupcima tretiranja obezbeđenim ovde, mogu da se razlikuju od mezenhimalnih matičnih ćelija na osnovu ekspresije jednog ili više gena, gde je njegova ekspresija u suštini veća (to jest, najmanje dvostruko veća) u izolovanim ćelijama iz placente nego u ekvivalentnom broju mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži, pri čemu su jedan ili više gena ACTG2, ADARB1, AMIG02, ARTS-1, B4GALT6, BCHE, Cllorf9, CD200, COL4A1, COL4A2, CPA4, DMD, DSC3, DSG2, ELOVL2, F2RL1, FU10781, GATA6, GPR126, GPRC5B, HLA-G, ICAM1, IER3,1GFBP7, IL1A, IL6, IL18, KRT18, KRT8, LIPG, LRAP, MATN2, MEST, NFE2L3, NUAK1, PCDH7, PDLIM3, PKP2, RTN1, SERPINB9, ST3GAL6, ST6GALNAC5, SLC12A8, TCF21, TGFB2, VTN, ZC3H12A, ili kombinacija bilo kojih od prethodnih, kada ćelije rastu u istim uslovima.Videti, npr.,U.S. Objava prijave patenta Br. 2007/0275362. U određenim drugim ostvarenjima, pomenuta ekspresija pomenutog jednog ili više gena se određuje,npr.,pomoću RT-PCR ili ispitivanjem mikročipom,npr,korišćenjem U133-A mikročipa (Affymetrix). U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente eksprimiraju pomenute jedan ili više gena kada se kultivišu za pluralitet dupliranja populacije,npr.,bilo gde u opsegu od oko 3 do oko 35 dupliranja populacije, u podlozi koji obuhvata DMEM-LG( npr.,od Gibco); 2% fetalnog telećeg seruma( npr.,od Hvclone Labs.); lx insulin-transferin-selenijum (ITS); lx linolna kiselina-goveđi serum albumin (LA-BSA); IO"<9>M deksametazon( npr.,od Sigma); IO"<4>M askorbinsku kiselinu 2-fosfat( npr.,od Sigma); epidermalni faktor rasta 10 ng/mL( npr.,od R&D Svstems); i faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF-BB) 10 ng/mL( npr.,od R&D Svstems). U drugom posebnom ostvarenju, specifičan gen izolovane ćelija iz placente ili ćelije izolovane iz pupčane vrpce je CD200.
[0127]Specifične sekvence za ove gene mogu se naći u GenBank pristupnom Br. NM_001615 (ACTG2), BC065545 (ADARB1), (NM_181847 (AMIG02), AY358590 (ARTS-1), BC074884 (B4GALT6), BC008396 (BCHE), BC020196 (Cllorf9), BC031103 (CD200), NM_001845 (COL4A1), NM_001846 (COL4A2), BC052289 (CPA4), BC094758 (DMD), AF293359 (DSC3), NM_001943 (DSG2), AF338241 (ELOVL2), AY336105 (F2RLI) NM_018215 (FU10781), AY416799 (GATA6), BC075798 (GPR126), NM-016235 (GPRC5B), AF340038 (ICAM1), BC000844 (IER3), BC066339 (IGFBP7), BC013142 (IL1A), BT019749 (IL6), BC007461 (IL18), (BC072017) KRT18, BC075839 (KRT8), BC060825 (LIPG), BC065240 (LRAP), BC010444 (MATN2), BC011908 (MEST), BC068455 (NFE2L3), NM_014840 (NUAK1), AB006755 (PCDH7), NM_014476 (PDLIM3), BC126199 (PKP-2), BC090862 (RTN1), BC002538 (SERPINB9), BC023312 (ST3GAL6), BC001201 (ST6GALNAC5), BC126160 ili BC065328 (SLC12A8), BC025697 (TCF21), BC096235 (TGFB2), BC005046 (VTN), i BC005001 (ZC3H12A) od Marta 2008.
[0128]U određenim drugim ostvarenjima, pomenute izolovane ćelije iz placente eksprimiraju svaki od ACTG2, ADARB1, AMIG02, ARTS-1, B4GALT6, BCHE, Cllorf9, CD200, C0L4A1, COL4A2, CPA4, DMD, DSC3, DSG2, ELOVL2, F2RL1, FU10781, GATA6, GPR126, GPRC5B, HLA-G, ICAM1, IER3, IGFBP7, IL1A, IL6, IL18, KRT18, KRT8, LIPG, LRAP, MATN2, MEST, NFE2L3, NUAK1, PCDH7, PDLIM3, PKP2, RTN1, SERPINB9, ST3GAL6, ST6GALNAC5, SLC12A8, TCF21, TGFB2, VTN i ZC3H12A na detektabilno višem nivou nego ekvivalentan broj mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži, kada ćelija raste u istim uslovima.
[0129]U posebnim ostvarenjima, ćelije iz placente eksprimiraju CD200 i ARTS1 (aminopeptidaza
regulator faktora nekroze tumora tipa 1); ARTS-1 i LRAP (arginin aminopeptidaza izvedena iz leukocita); IL6 (interleukin-6) i TGFB2 (transformišući faktor rasta, beta 2); IL6 i KRT18 (keratin 18); IER3 (neposredni rani odgovor 3), MEST (mezodermalni specifični transkripcioni homolog) i TGFB2; CD200 i IER3; CD200 i IL6; CD200 i KRT18; CD200 i LRAP; CD200 i MEST; CD200 i NFE2L3 (nuklearni faktor (eritroidno-izveden 2)-sličan 3); ili CD200 i TGFB2 na detektabilno višem nivou nego ekvivalentan broj mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži (BM-MSC) pri čemu su pomenute mezenhimalne matične ćelije izvedene iz koštane srži podvrgnute broju presejavanja u kulturi koji je ekvivalentan broju presejavanja kojem su podvrgnute pomenute izolovane ćelije iz placente. U drugim određenim ostvarenjima, ćelije iz placente eksprimiraju ARTS-1, CD200, IL6 i LRAP; ARTS-1,IL6, TGFB2, IER3, KRT18 i MEST; CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3, i TGFB2; ARTS-1, CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3, i TGFB2; ili IER3, MEST i TGFB2 na detektabilno višem nivou nego ekvivalentan broj mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži BM-MSC, pri čemu su pomenute mezenhimalne matične ćelije izvedene iz koštane srži podvrgnute broju presejavanja u kulturi koji je ekvivalentan broju presejavanja kojem su podvrgnute pomenute izolovane ćelije iz placente.
[0130]Ekspresija gore naznačenih gena može se oceniti standardnim postupcima. Na primer, probe bazirane na sekvenci gena(a) mogu se pojedinačno odabrati i konstruisati konvencionalnim postupcima. Ekspresija gena može se oceniti, npr., na mikročipu obuhvatajući probe jednog ili više gena, npr., Affymetrix GENECHIP<®>Human Genome U133A 2.0 array, ili Affymetrix GENECHIP<®>Human Genome U133 Plus 2.0 (Santa Clara, California). Ekspresija ovih gena može se oceniti čak i ako je sekvenca za određeni GenBank pristupni broj izmenjena jer probe specifične za izmenjenu sekvencu lako mogu da se generišu korišćenjem dobro poznatih standardnih postupaka.
[0131]Nivo ekspresije ovih gena može da se koristi za potvrdu identiteta populacije izolovanih ćelija iz placente, za identifikaciju populacije ćelija koja obihvata najmanje većinu izolovanih ćelija iz placente, ili slično. Populacije izolovanih ćelija iz placente, čiji je identitet potvrđen, može da se klonira,npr.,populacije izolovanih ćelija iz placente koje su se razvile od jedne izolovane ćelije iz placente, ili mešovita populacija matičnih ćelija, npr., populacija ćelija koja obuhvata isključivo izolovane ćelije iz placente koje se razvijaju od višestruko izolovanih ćelija iz placente, ili populacije ćelija koja obuhvata izolovane ćelije iz placente, kao što je opisano ovde, i najmanje jedan drugi tip ćelije.
[0132]Nivo ekspresije ovih gena može da se koristi da se odaberu populacije izolovanih ćelija iz placente. Na primer, populacija ćelija,npr.,ćelije koje se šire kloniranjem, mogu da se odaberu ako ekspresija jednog ili više gena navedenih gore je značajno veća u uzorku iz populacije ćelija nego u ekvivalentnoj populaciji mezenhimalnih matičnih ćelija. Takav odabir može da bude od populacije iz mnoštva izolovanih ćelija iz placente populacije, iz mnoštva ćelijske populacije, čiji identitet nije poznat,
itd.
[0133]Izolovane ćelije iz placente mogu da se odaberu na osnovu nivoa ekspresije jednog ili više takvih gena u poređenju sa nivom ekspresije u pomenutom jednom ili više gena u,npr.,kontroli mezenhimalnih matičnih ćelija, na primer, nivo ekspresije u pomenutom jednom ili više gena u istom broju mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži. U jednom ostvarenju, nivo ekspresije pomenutog jednog ili više gena u uzorku koji obuhvata ekvivalentan broj mezenhimalnih matičnih ćelija koristi se kao kontrola. U drugom ostvarenju, kontrola, za izolovane ćelije iz placente ispitivane pod određenim uslovima, je brojčana vrednost koja predstavlja nivo ekspresije pomenutog jednog ili više gena u mezenhimalnim matičnim ćelijama pod pomenutim uslovima.
[0134]U određenim ostvarenjima, ćelije iz placente( npr.,PDAC) korisne u ovde obezbeđenim postupcima, ne eksprimiraju CD34, kao što je detektovano imunolokalizacijom, nakon što su izložene 1 do 100 ng/mL VEGF u toku 4 do 21 dana. U posebnom ostvarenju, pomenute adherentne ćelije iz placente adherentne su na plastiku za kulturu tkiva. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta populacija ćelija indukuje endotelijalne ćelije da formiraju strukture nalik klicama ili cevčicama kada se kultivišu u prisustvu angiogenog faktora kao što su vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), epitelijalni faktor rasta (EGF), faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF) ili bazični fibroblastni faktor rasta (bFGF),npr.,na supstratu kao što je MATRIGEL™.
[0135]U drugom aspektu, PDAC obezbeđene ovde, populacija ćelija,npr.,populacija PDAC, ili populacija ćelija gde najmanje oko 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ili 98% ćelija u pomenutoj izolovanoj populaciji ćelija su PDAC, koje luče jedan ili više, ili sve, od VEGF, HGF, IL-8, MCP-3, FGF2, folistatina, G-CSF, EGF, ENA-78, GRO, IL-6, MCP-1, PDGF-BB, TIMP-2, uPAR, ili galektina-1, npr., u podlogu za kultivisanje u kojoj čelija, ili ćelije, rastu. U drugom ostvarenju, PDAC eksprimiraju povećane nivoe CD202b, IL-8 i/ili VEGF u hipoksičnim uslovima (npr., manje od oko 5% 02) u porećenju sa normoksičnim uslovi( npr.,oko 20% ili oko 21% 02).
[0136]U drugom ostvarenju, bilo koja od PDAC ili populacije ćelija koje obuhvataju PDAC opisane ovde mogu da izazovu formiranje struktura nalik klicama ili cevčicama u populaciji endotelijalnih ćelija u kontaktu sa pomenutim adherentnim ćelijama izvedenim iz placente. U posebnom ostvarenju, PDAC se ko-kultivišu sa humanim endotelijalnim ćelijama, koje formiraju strukture nalik klicama ili cevčicama, ili podpomažu formiranje klica endotelijalnih ćelija,npr.,kada se kultivišu u prisustvu proteina vanćelijskog matriksa kao što su kolagen tipa I i IV, i/ili angiogenih faktora kao što su vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), epitelijalni faktor rasta (EGF), faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF) ili bazični fibroblastni faktor rasta (bFGF),npr.,u ili na supstratu kao što je placentni kolagen ili MATRIGEL™ za najmanje 4 dana. U drugom ostvarenju, bilo koje od populacija ćelija koje obuhvataju adherentne ćelije izvedene iz placente, opisane ovde, luče angiogene faktore kao što su vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), faktor rasta hepatocita (HGF), faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF), bazični fibroblastni faktor rasta (bFGF) ili lnterleukin-8 (IL-8) i prema tome mogu da indukuju humane endotelijalne ćelije da formiraju strukture nalik klicama ili cevčicama kada se kultivišu u prisustvu proteina vanćelijskog matriksa kao što su kolagen tipa I i IVnpr.,u ili na supstratu kao što je placentni kolagen ili MATRIGEL™.
[0137]U drugom ostvarenju, bilo koja od gore navedenih populacije ćelija koje obuhvataju adherentne ćelije izvedene iz placente (PDAC) luče angiogene faktore. U posebnim ostvarenjima, populacija ćelija luči vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), faktor rasta hepatocita (HGF), faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF), bazični fibroblastni faktor rasta (bFGF) i/ili interleukin-8 (IL-8). U drugim određenim ostvarenjima, populacija ćelija koja obuhvata PDAC luči jedan ili više angiogenih faktora i prema tome indukuje humane endotelijalne ćelije da migriraju uin vitrotest zarastanja rane. U drugim određenim ostvarenjima, populacija ćelija koja obuhvata adherentne ćelije izvedene iz placente indukuje sazrevanje, diferencijaciju ili proliferaciju humanih endotelijalnih ćelija, endotelijalnih progenitora, miocita ili mioblasta.
[0138]Izolovane ćelije iz placente opisane ovde prikazuju gore navedene karakteristike( npr.,kombinacije ćelijskih površinskih markera i/ili profila ekspresije gena) u primarnoj kulturi, ili tokom proliferacije u podlozi koja obuhvata,npr.,DMEM-LG (Gibco), 2% fetalnog telećeg seruma (FCS)
(Hvclone Laboratories), lx insulin-transferrin-selenium (ITS), lx linolna kiselina-goveđi serum-albumin (LA-BSA), 10"<9>M deksametazon (Sigma), 10"<4>M askorbinsku kiselinu 2-fosfat (Sigma), epidermalni faktor rasta (EGF)10ng/ml (R&D Svstems), faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF-BB) lOng/ml (R&D Svstems), i 100U penicilin/lOOOU streptomicin.
[0139]U određenim ostvarenjima bilo kojih od ćelija iz placente opisanih ovde, ćelije su humane. U određenim ostvarenjima bilo kojih od ćelija iz placente opisanih ovde, karakteristike ćelijskog markera ili karakteristike ekspresija gena su humani markeri ili humani geni.
[0140]U drugom posebnom ostvarenju pomenute izolovane ćelije iz placente ili populacije ćelija koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente, pomenute ćelije ili populacija koja se razvila, na primer, presejane najmanje, oko, ili ne više od, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,11,12,13,14, 15, 16,17, 18,19, ili 20 puta, ili više, ili umnožena najmanje, oko, ili ne više od, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10,11,12,13,14,15, 16, 17,18,19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39,40, 41, 42, 43, 44,
45,46, 47,48, 49 ili 50 dupliranja populacije. U drugom posebnom ostvarenju pomenute izolovane ćelije iz placente ili populacije ćelija koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente, pomenute ćelije ili populacija su primarni izolati. U drugom posebnom ostvarenju izolovanih ćelija iz placente, ili populacije ćelija koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente, koje su opisane ovde, pri čemu su pomenute izolovane ćelije iz placente fetalnog porekla (to jest, imaju fetalni genotip).
[0141]U određenim ostvarenjima, pomenute izolovane ćelije iz placente ne diferenciraju se tokom kultivisanja u podlozi za uzgajanje,tj.,medijumu formulisanom za promovisanje proliferacije,npr.,tokom proliferacije u podlozi za uzgajanje. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ne zahtevaju hranljivi sloj radi proliferacije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente ne diferenciraju se u kulturi u odsustvu hranljivog sloja, isključivo zbog nedostatka hranljivog sloja ćelija .
[0142]U drugom ostvarenju, ćelije korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde su izolovane ćelije iz placente, pri čemu je većina pomenutih izolovanih ćelija iz placente pozitivna za aldehid dehidrogenazu (ALDH), kao što je ocenjeno testiranjem aktivnosti aldehid dehidrogenaze. Takvi testovi poznati su stručnjacima iz ove oblasti( videti, npr.,Bostian i Betts, Biochem. J., 173, 787, (1978)). U posebnom ostvarenju, pomenuti ALDH test koristi ALDEFLUOR<®>(Aldagen, Inc., Ashland, Oregon) kao marker aktivnosti aldehid dehidrogenaze. U posebnom ostvarenju, pomenuta većina je između oko 3% i oko 25% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija. U drugom ostvarenju, ovde je obezbeđena populacija ćelija izolovanih iz pupčane vrpce,npr.,multipotentne ćelije izolovane iz pupčane vrpce, pri čemu većina pomenutih ćelija izolovanih iz pupčane vrpce su pozitivne za aldehid dehidrogenazu, kao što je ocenjeno testiranjem aktivnosti aldehid dehidrogenaze koripćenjem ALDEFLUOR<®>kao indikatora aktivnosti aldehid dehidrogenaze. U posebnom ostvarenju, pomenuta većina je između oko 3% i oko 25% ćelija u pomenutoj populaciji ćelija. U drugom ostvarenju, pomenuta populacija izolovanih ćelija iz placente ili ćelije izolovane iz pupčane vrpce prikazuje najmanje trostruko, ili najmanje petostruko, veću ALDH aktivnost nego populacija mezenhimalnih matičnih ćelija izvedenih iz koštane srži koje imaju otprilike ekvivalentan broj ćelija i koje su kultivisane pod istim uslovima.
[0143]U određenim ostvarenjima bilo kojih populacija ćelija koje obuhataju izolovane ćelije iz placente opisane ovde, ćelije iz placente u pomenutim populacijama ćelija su u suštini bez ćelija koje imaju materinski genotip;npr.,najmanje 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% ćelija iz placente u pomenutoj populaciji ima fetalni genotip. U određenim drugim ostvarenjima bilo kojih populacija ćelija koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente opisane ovde, populacije ćelija koje obuhvataju pomenute ćelije iz placente su u suštini bez ćelija koje imaju materinski genotip; npr., najmanje 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% ćelija u pomenutoj populaciji ima fetalni genotip.
[0144]U posebnom ostvarenju bilo kojih gore pomenutih izolovanih ćelija iz placente ili ćelijskih populacija izolovanih ćelija iz placente, kariotip ćelija, ili najmanje oko 95% ili oko 99% ćelija u pomenutoj populaciji, je normalan. U drugom posebnom ostvarenju bilo kojih gore pomenutih ćelija iz placente ili ćelijskih populacija, ćelije, ili ćelije u populaciji ćelija, su nematerinskog porekla.
[0145]Izolovane ćelije iz placente, ili populacije izolovanih ćelija iz placente, koje nose bilo koje gore pomenute kombinacije markera, mogu da se kombinuju u bilo kom odnosu. Bilo koje dve ili više od gore pomenutih populacija izolovanih ćelija iz placente mogu da se kombinuju radi formiranja populacije izolovanih ćelija iz placente. Na primer, populacije izolovanih ćelija iz placente mogu da obuhvataju prvu populaciju izolovanih ćelija iz placente određenu jednom od kombinacija markera opisanih gore, i drugu populacija izolovanih ćelija iz placente određenu nekom drugom od kombinacija markera opisanih gore, pri čemu se pomenuta prva i druga populacija kombinuju u odnosu od oko 1:99, 2:98, 3:97, 4:96, 5:95, 10:90, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 70:30, 80:20, 90:10, 95:5, 96:4, 97:3, 98:2 ili oko 99:1. Na sličan način mogu da se kombinuju bilo koje tri, četiri, pet ili više od gore pomenutih izolovanih ćelija iz placente ili populacija izolovanih ćelija iz placente.
[0146]Izolovane ćelije iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde mogu da se dobiju,npr.,razgradnjom placentnog tkivo, sa ili bez enzimske digestije( videtiOdeljak 5.3.3) ili perfuzije( videtiOdeljak 5.3.4). Na primer, populacije izolovanih ćelija iz placente mogu da se proizvedu prema postupku koji obuhvata perfuziju placente sisara koja je drenirana od krvi i perfundovana radi uklanjanja ostataka krvi; perfundovanje pomenute placente sa perfuzionim rastvorom; i prikupljanje pomenutog perfuzionog rastvora, pri čemu pomenuti perfuzioni rastvor nakon perfuzije obuhvata populaciju ćelija iz placente koja obuhvata izolovane ćelije iz placente; i izolovanje većine pomenutih izolovanih ćelija iz placente iz pomenute populacije ćelija. U posebnom ostvarenju, perfuzioni rastvor prolazi i kroz pupčanu venu i kroz pupčane arterije i prikuplja se nakon što izlazi iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, perfuzioni rastvor prolazi kroz pupčanu venu i prikuplja se iz pupčanih arterija, ili prolazi kroz pupčane arterije i prikuplja se iz pupčane vene.
[0147]U različitim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente, sadržane u populaciji ćelija dobijenoj od perfuzije placente, su najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% ili najmanje 99,5% od populacije ćelija iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente prikupljene perfuzijom obuhvataju fetalne i materinske ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente prikupljene perfuzijom su najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% ili najmanje 99,5% fetalne ćelije.
[0148]U drugom posebnom ostvarenju, ovde je obezbeđena kompozicija koja obuhvata populaciju izolovanih ćelija iz placente, kao što je opisano ovde, prikupljene perfuzijom, pri čemu pomenuta kompozicija obuhvata najmanje deo perfuzionog rastvora korišćenog za prikupljanje izolovanih ćelija iz placente.
[0149]Izolovane populacije izolovanih ćelija iz placente opisane ovde mogu da se proizvedu razgradnjom placentnog tkiva sa enzimom za razgradnju tkiva radi dobijanja populacije ćelija iz placente koja obuhvata ćelije, i izolovanja, ili suštinskog izolovanja, većine ćelija iz placente iz ostatka pomenutih ćelija iz placente. Cela, ili bilo koji deo, placente može da se razgradi radi dobijanja izolovanih ćelija iz placente opisanih ovde. U posebnim ostvarenjima, na primer, pomenuto placentno tkivo može da bude cela placenta, amnionska membrana, horion, kombinacija amniona i horiona, ili kombinacija bilo kojih od gore navedenih. U drugom posebnom ostvarenju, enzim za razgradnju tkiva je tripsin ili kolagenaza. U različitim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente, sadržane u populaciji ćelija dobijenoj od digestije placente, su najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% ili najmanje 99,5% od pomenute populacije ćelija iz placente.
[0150]Izolovane populacije ćelija iz placente opisane ovde, i populacije izolovanih ćelija iz placente uopšteno, mogu da obuhvataju oko, najmanje, ili ne više od, 1 x 10<5>, 5 x IO<5>,1 x IO6, 5 x IO<6>,1 x 107, 5 x IO7,1 x IO8, 5 x IO8,1 x 109, 5 x IO9,1 x 1010, 5 x 1010,1 x 1011 ili više izolovanih ćelija iz placente. Populacije izolovanih ćelija iz placente korisne u postupcima tretiranja opisanim ovde obuhvataju najmanje 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ili 99% vijabilnih izolovanih ćelija iz placente,npr.,kao što je određeno,npr.,test izlučivanja tripanskog plavog.
5.2.3Rast u kulturi
[0151]Rast izolovanih ćelije iz placente opisan ovde u Odeljku 5.4.2, kao za bilo koju ćeliju sisara, zavisi delom od određene podloge odabrane za rast. U optimalnim uslovima, izolovane ćelije iz placente obično se udvostruče u toku oko 1 dana. Tokom kultivisanja, izolovane ćelije iz placente opisane ovde prijanjaju na supstrat u kulturi,npr.na površinu kontejnera za kulturu tkiva( npr.,plastična posuda za kulturu tkiva, plastika obložena fibronektinom i slično) i formiraju monosloj.
[0152]Populacije ćelija iz placente koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente opisane ovde, kada se kultivišu u odgovarajućim uslovima, mogu da formiraju telašca nalik embrioidu, to jest, trodimenzionalne klastere ćelija koje rastu na vrhu sloja adherentnih ćelija. Ćelije unutar telašaca nalik embrioidu mogu da eksprimiraju markere povezane sa veoma ranim matičnim ćelijama,npr.,OCT-4, Nanog, SSEA3 i SSEA4. Ćelije unutar telašaca nalik embrioidu obično nisu adherentne na supstrat za kultivisanje, kao što su izolovane ćelije iz placente opisane ovde, ali su sklone tome da ostanu pričvršćene za adherentne ćelije tokom kultivisanja. Ćelije telašca nalik embrioidu zavise od adherentnih izolovanih ćelija iz placente za vijabilnost, jer se telašca nalik embrioidu ne formiraju u odsustvu adherentnih izolovanih ćelija iz placente. Adherentne izolovane ćelije iz placente prema tome olakšavaju rast jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente koje obuhvataju adherentne izolovane ćelije iz placente. Bez vezivanja za teoriju, smatra se da ćelije telašaca nalik embrioidu rastu na adherentim izolovanim ćelijama iz placente koliko i embrionske matične ćelije rastu na hranljivom sloju ćelija.
5.3 POSTUPCI DOBIJANJA IZOLOVANIH ĆELIJA IZ PLACENTE
5.3.1Kompozicija za prikupljanje matičnih ćelija
[0153]Ovde su dalje obezbeđeni postupci prikupljanja i izolovanja ćelija iz placente,npr.,izolovanih ćelija iz placente opisanih u Odeljku 5.2.2, gore. Uopšteno, takve ćelije dobijaju se iz placente sisara korišćenjem fiziološki-prihvatljivog rastvora,npr.,kompozicije za prikupljanje ćelija. Primer kompozicije za prikupljanje ćelija opisan je detaljnije u povezanoj U.S. Objavi prijave patenta Br. 2007/0190042, čiji je naslov "Improved Medium for Collecting Placental Stem Cells and Preserving Organs,".
[0154]Kompozicija za prikupljanje ćelija može da obuhvata bilo koji fiziološki-prihvatljiv rastvor odgovarajući za prikupljanje i/ili kultivisanje ćelija,npr.,izolovanih ćelija iz placente opisanih ovde, na primer, slani rastvor( npr.,fosfatni puferski slani rastvor, Krebov rastvor, modifikovani Krebov rastvor, Eagle-ov rastvor, 0,9% NaCI.itd.),podlogu za kultivisanje( npr.,DMEM, H.DMEM,itd.)i slično.
[0155]Kompozicija za prikupljanje ćelija može da obuhvata jednu ili više komponenata koje mogu da očuvaju izolovane ćelije iz placente, to jest, da spreče da izumru izolovane ćelije iz placente, ili da odlože smrt izolovanih ćelija iz placente, da smanje broj izolovanih ćelija iz placente u populaciji ćelija koje umiru, ili slično, od vremena prikupljanja do vremena kultivisanja. Takve komponente mogu da budu,npr.,inhibitor apoptoze( npr.,inhibitor kaspaze ili JNK inhibitor); vazodilator( npr.,magnezijum sulfat, antihipertenzivni lek, atrijalni natriuretski peptid (ANP), adrenokortikotropin, kortikotropin-oslobađajući hormon, natrijum nitroprusid, hidralazin, adenozin trifosfat, adenozin, indometacin ili magnezijum sulfat, inhibitor fosfodiesteraze,itd.) ;inhibitor nekroze( npr.,2-(lH-lndol-3-il)-3-pentilamino-maleimid, pirolidin ditiokarbamat ili klonazepam); TNF-a inhibitor; i/ili perfluorougljenik koji nosi kiseonik( npr.,perfluorooctil bromid, perfluorodecil bromid,itd.).
[0156]Kompozicija za prikupljanje ćelija mmože da obuhvata jedan ili više enzima za razgradnju tkiva,npr.,metaloproteazu, serin proteazu, prirodnu proteazu, RNazu, ili DNazu, ili slično. Takvi enzimi uključuju, ali nisu ograničeni na, kolagenaze( npr.,kolagenaza I, II, III ili IV, kolagenaza izClostridium histolyticum, itd.) ;dispazu, termolizin, elastazu, tripsin, LIBERASE, hialuronidasu, i slično.
[0157]Kompozicija za prikupljanje ćelija može da obuhvata bakteriocidnu ili bakteriostatsku efektivnu količinu antibiotika. U određenim neograničavajućim ostvarenjima, antibiotik je makrolid( npr.,tobramicin), cefalosporin( npr.,cefaleksin, cefradin, cefuroksim, cefprozil, cefaklor, cefiksim ili cefadroksil), klaritromicin, eritromicin, penicilin( npr.,penicilin V) ili hinolon( npr.,ofloksacin, ciprofloksacin ili norfloksacin), tetraciklin, streptomicin,itd.U određenom ostvarenju, antibiotik je aktivan protiv Gram(+) i/ili Gram(-) bakterija,npr., Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus,i slično. U jednom ostvarenju, antibiotik je gentamicin,npr.,oko 0,005% do oko 0,01% (w/v) u podlozi za kultivisanje.
[0158]Kompozicija za prikupljanje ćelija može da obuhvata jedno ili više od sledećih jedinjenja: adenozin (oko 1 mM do oko 50 mM); D-glukoza (oko 20 mM do oko 100 mM); jone magnezijuma (oko 1 mM do oko 50 mM); makromolekul molekularne mase veće od 20.000 daltona, u jednom ostvarenju, prisutan u dovoljnoj količini za održavanje celovitosti endotela i ćelijske vijabilnosti( npr.,sintetički ili prirodni koloid, polisaharid kao što je dekstran ili polietilen glikol prisutan od oko 25 g/l do oko 100 g/l, ili oko 40 g/l do oko 60 g/l); antioksidans( npr.,butilovani hidroksianizol, butilovani hidroksitoluen, glutation, vitamin C ili vitamin E prisutan od oko 25U.M do oko 1,00U.M); redukujući agens( npr.,N-acetilcistein prisutan od oko 0,1 mM do oko 5 mM); agens koji sprečava da kalcijum uđe u ćelije( npr.,verapamil prisutan od oko 2 u.M do oko 25U.M); nitroglicerin( npr.,oko 0,05 g/L do oko 0,2 g/L); antikoagulant, u jednom ostvarenju, prisutan u količini koja je dovoljna da pomogne da se spreči zgrušavanje ostatka krvi( npr.,heparin ili hirudin prisutan u koncentraciji od oko 1000 jedinica/l do oko 100.000 jedinica/l); ili jedinjenje koje sadrži amilorid( npr.,amilorid, etil izopropil amilorid, heksametilen amilorid, dimetil amilorid ili izobutil amilorid prisutan od oko 1,0U.M do oko 5U.M).
5.3.2Prikupljanje i Rukovanje Placentom
[0159]Uopšteno, humana placenta se izoluje ubrzo nakon svog izbacivanja nakon porođaja. U poželjnom ostvarenju, placenta se izoluje iz pacijenta nakon dobijenog pristanka i nakon uzimanja kompletne anamneze pacijenta vezane za placentu. Poželjno, anamneza se nastavlja nakon porođaja. Takva anamneza može da se koristi radi kordinacije kasnije primene placente ili izolovanih ćelija sakupljenih iz te placente. Na primer, izolovane humane ćelije iz placente mogu da se koriste, obzirom na anamnezu, u personalizovanoj medicini za odojče vezano za placentu, ili za roditelje, braću i sestre ili druge rođake odojčeta.
[0160]Pre izolovanja izolovanih ćelija iz placente, poželjno je da se uklone krv pupčane vrpce i krv placente. U određenim ostvarenjima, nakon porođaja, krv pupčane vrpce u placenti se izoluje. Placenta može da se podvrgne konvencionalnom postupku za izolovanje krvi pupčane vrpce. Obično se koristi igla ili kanila, uz pomoć gravitacije, da bi se izvukla krv iz placente( videti, npr.,Anderson, U.S. Patent Br. 5,372,581; Hessel et al., U.S. Patent Br. 5,415,665). Igla ili kanila se obično postavlja u pupčanu venu a placenta može nežno da se masira da bi se podpomoglo dreniranje krvi pupčane vrpce iz placenta. Takvo izolovanje krvi pupčane vrpce može se izvesti komercijalno,npr.,LifeBank USA, Cedar Knolls, NJ. Poželjno, placenta se gravitaciono drenira bez dalje manipulacije tako da minimizira razgradnju tkiva tokom izolovanja krvi pupčane vrpce.
[0161]Obično, placenta se prenosi od prostorije za porođaj do druge lokacije,npr.,laboratorije, radi izolovanja krvi pupčane vrpce i prikupljanja matičnih ćelija,npr.,perfuzijom ili odvajanjem tkiva. Placenta se poželjno prenosi u sterilnom, toplotno izolovanom transportnom uređaju (koji održava temperaturu placente između 20-28°C), na primer, stavljanjem placente, sa proksimalno stegnutom pupčanom vrpcom, u sterilnoj plastičnoj kesi sa zip zatvaračem, a koje se potom stavljaju u izolovani kontejner. U drugom ostvarenju, placenta prenosi se u kitu za prikupljanje krvi pupčane vrpce u suštini opisanom u U.S. Objavi patenta u ispitivanju Br. 7,147,626. Poželjno, placenta se dostavlja u laboratoriju 4 do dvadesetčetiri sata nakon porođaja. U određenim ostvarenjima, pupčana vrpca se proksimalno steže, poželjno sa 4-5 cm (centimetara) umetanja u placentni disk pre izolovanja krvi pupčane vrpce. U drugim ostvarenjima, pupčana vrpca se proksimalno steže nakon izolovanja krvi pupčane vrpce ali pre daljeg postupanja sa placentom.
[0162]Placenta, pre prikupljanja ćelija, može da se čuva u sterilnim uslovima i ili na sobnoj temperaturi ili na temperaturi od 5°C do 25°C. Placenta može da se čuva u periodu od četiri do dvadesetčetiri sata, do četrdesetosam sati, ili duže od četrdesetosam sati, pre perfundovanja placente radi uklanjanja bilo kakve zaostale krvi pupčane vrpce. U jednom ostvarenju, placenta se sakuplja od između oko nultog sata do oko drugog sata nakon izbacivanja. Placenta se poželjno čuva u rastvoru antikoagulanta na temperaturi od 5°C do 25°C. Odgovarajući rastvori antikoagulanta dobro su poznati u ovoj oblasti. Na primer, može da se koristi rastvor heparina ili varfarin natrijuma. U poželjnom ostvarenju, rastvor antikoagulanta obuhvata rastvor heparina( npr.,1 mas.% u 1:1000 rastvora). Placenta iz koje je izvučenakrvi poželjno se čuva za ne više od 36 sati pre nego što se prikupljaju ćelije iz placente.
[0163]Placenta sisara ili njen deo, jednom prikupljena i pripremljena uopšteno kao što je gore navedeno, može da se tretira na bilo koji način poznat u ovoj oblasti,npr.,može da bude perfundovana ili razgrađena,npr.,razgračena sa jednim ili više enzima za razgradnju tkiva, da bi se dobile izolovane ćelije iz placente.
5.3.3Fizička razgradnja i enzimska digestija placentnog tkiva
[0164]U jednom ostvarenju, matične ćelije se prikupljaju iz placente sisara fizičkom razgradnjom dela celog organa. Na primer, placenta, ili njen deo, može da se,npr.,zdrobi, iseče, samelje, iseče na kocke, usitni, omekša ili slično. Potom, tkivo može da se kultiviše radi dobijanja populacije izolovanih ćelija iz placente. Obično, placentno tkivo se razgrađuje korišćenjem,npr.,podloge za kultivisanje, slanog rastvora, ili kompozicije za prikupljanje matičnih ćelija( videti Odeljak5.5.1 i dole).
[0165]Placenta može da se secira u komponente pre fizičke razgradnje i/ili enzimska digestije i izolovanja matičnih ćelija. Izolovane ćelije iz placente mogu se dobiti iz cele ili dela amnionske membrane, horiona, pupčane vrpce, placentnih kotiledona, ili bilo koje njihove kombinacije, uključujući i iz cele placente. Poželjno, izolovane ćelije iz placente dobijaju se iz placentnog tkiva koje obuhvata amnion i horion. Obično, izolovane ćelije iz placente mogu da se dobiju razgradnjom malog bloka placentno tkiva,npr.,blok placentnog tkiva koji je zapremine oko 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90,100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 ili oko 1000 kubnih milimetara. Bilo koji postupak fizičke razgradnje može da se koristi, pri čemu je obezbeđeno da postupak razgradnje ostavlja veći broj, poželjnije većinu, a poželjnije najmanje 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, ili 99% ćelija u pomenutom organu vijabilano, kao što se određuje,npr.,testom izlučivanja tripanskog plavog.
[0166]Izolovane adherentne ćelije iz placente mogu uopšteno da se prikupe iz placente, ili njenog dela, u bilo koje vreme u oko prva tri dana nakon njenog izbacivanja, ali poželjno između oko 8 sati i oko 18 sati nakon njenog izbacivanja.
[0167]U posebnom ostvarenju, razgrađeno tkivo kultiviše se u podlozi za kulturu tkiva odgovarajućoj za proliferaciju izolovanih ćelija iz placente( videti, npr.,Odeljak 5.6, dole, u kom se opisuje kultivisanje ćelija iz placente,npr.,PDAC).
[0168]U drugom posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente prikupljaju se fizičkom razgradnjom placentnog tkiva, pri čemu fizička razgradnja uključuje enzimsku digestiju, koja može da se postigne upotrebom jednog ili više enzima za razgradnju tkiva. Placenta, ili njen deo, može takođe da se fizički razgradi i podvrgne digestiji pomoću jednog ili više enzima, i dobijeni materijal se potom uranja u, ili umešava u, kompoziciju za prikupljanje ćelija.
[0169]Poželjna kompozicija za prikupljanje ćelija obuhvata jedan ili više enzima(a) za razgradnju tkiva. Enzimi koji se koriste za razgradnju placentnog tkiva uključuju papain, deoksiribonukleaze, serin proteaze, kao što su tripsin, himotripsin, kolagenaza, dispaza ili elastaza. Serin proteaze mogu da se inhibiraju alfa 2 mikroglobulinom u serumu i stoga podloga korišćena za digestiju je obično bez seruma. EDTA i DNaza se obično koriste u postupcima enzimske digestije radi povećanja efikasnosti izolovanja ćelija. Digestat se poželjno razblažuje tako da se izbegne da ćelija budu zarobljene unutar viskoznog digesta.
[0170]Bilo koja kombinacija enzima za razgradnju tkiva može da se koristi. Uobičajne koncentracije za digestiju korišćenjem tripsina uključuju, 0,1% do oko 2% tripsina,npr.,oko 0,25% tripsina. Proteaze mogu da se koriste u kombinaciji, to jest, dve ili više proteaza u istoj reakciji digestije, ili mogu da se koriste uzastopno da bi liberate ćelije iz placente,npr.,matične ćelije iz placente i multipotentne ćelije iz placente. Na primer, u jednom ostvarenju, placenta, ili njen deo, razgrađuje se prvo sa odgovarajućom količinom kolagenaze I na oko 1 do oko 2 mg/ml za,npr.,30 minuta, praćeno digestijom sa tripsinom, na koncentracija od oko 0,25%, za,npr.,10 minuta, na 37°C. Serin proteaze se poželjno koriste sukcesivno nakon upotrebe drugih enzima.
[0171]U drugom ostvarenju, tkivo dalje može da se prekine dodavanjem helatora,npr.,etilen glikol bis(2-aminoetil etar)-N,N,N'N'-tetrasirćetne kiseline (EGTA) ili etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) kompoziciji za prikupljanje matičnih ćelija koja obuhvata matične ćelije, ili rastvoru u kojem se tkivo razgrađuje i/ili digestuje pre izolovanja matičnih ćelija sa kompozicijom za prikupljanje matičnih ćelija.
[0172]Nakon digestija, digestat se ispira, na primer, triput sa podlogom za kultivisanje, a isprane ćelije zasejavaju se u boce za kultivisanje. Ćelije se potom izoluju diferencijalnom adherencijom, i karakterišu se za,npr.,vijabilnost, ćelijske površinske markere, diferencijaciju i slično.
[0173]Podrazumeva se da gde je cela placenta, ili deo placente koji obuhvata i fetalne i materinske ćelije (na primer, gde deo placente obuhvata horion ili kotiledone), izolovane ćelije iz placente mogu da obuhvataju mešano ćelije iz placente izvedene i iz fetalih i materinskih izvora. Gde je deo placente koji ne obuhvata, ili obuhvata zanemarljiv broj, materinskih ćelija (na primer, amnion), ćelije iz placente izolovane odatle obuhvataće skoro isključivo fetalne ćelije iz placente (to jest, ćelije iz placente koje imaju genotip fetusa).
[0174]Ćelije iz placente,npr.,ćelije iz placente opisane u Odeljku 5.2.2, gore, mogu da se izoluju iz razgrađenog placentnog tkiva diferencijalnom tripsinizacijom( videti Odeljak5.3.5, dole) praćeno kultivizacijom u jednom ili više novih kontejnera za kulturu u svežoj podlozi za proliferaciju, opciono praćeno drugom fazom diferencijalne tripsinizacije.
5.3.4Perfuzija placente
[0175]Ćelije iz placente,npr.,ćelije iz placente opisane u Odeljku 5.2.2, gore, takođe se mogu dobiti perfuzijom placente sisara. Postupci perfundovanja placente sisara radi dobijanja ćelija iz placente opisani su,npr.,u Hariri, U.S. Patentu Br. 7,045,148 i 7,255,729, u U.S. Patentnoj objavi prijave Br. 2007/0275362 i 2007/0190042.
[0176]Ćelije iz placente mogu da se prikupe perfuzijom,npr.,kroz krvne sudove placente, korišćenjem,npr.,kompozicija za prikupljanje ćelija kao perfuzioni rastvor. U jednom ostvarenju, placenta sisara se perfundira prolaskom perfuzionog rastvora kroz jedan ili i kroz pupčanu arteriju i pupčanu venu. Protok perfuzionog rastvora kroz placentu može da se postigne korišćenjem,npr.,gravitacionog protoka u placenti. Poželjno, perfuzioni rastvor se forsira kroz placentu korišćenjem pumpe,npr.,peristaltičke pumpe. Pupčana vena može,npr.,da se kanulira kanilom,npr.,TEFLON* ili plastična kanila, koja je povezana sa sterilnim uređajem za povezivanje, kao što je sterilno cevi. Sterilni uređaj za povezivanje povezan je sa perfuzionim cevovodom.
[0177]U pripremanju za perfuziju, placenta se poželjno orjentiše( npr.,suspenduje) na takav način da se pupčana arterija i pupčana vena smeštaju na najvišu tačku placente. Placenta može da se prefundira prolaskom perfuzionog fluida kroz krvne sudove placente i okolno tkivo. Placenta može da se perfundira prolaskom perfuzionog fluida u pupčanu venu i prikupljanjem iz pupčanih arterija, ili prolaskom perfuzionog fluida u pupčane arterije i prikupljanjem iz pupčane vene.
[0178]U jednom ostvarenju, na primer, pupčana arterija i pupčana vena povezuju se istovremeno,npr.,za pipetu koja je povezana preko fleksibilnog konektora za rezervoar perfuzionog rastvora. Perfuzioni rastvor prolazi u pupčanoj veni i arteriji. Perfuzioni rastvor izlazi iz i/ili prolazi kroz zidove krvnih sudova u okolna tkiva placente, i prikuplja se u odgovarajući otvoreni sud sa površine placente koji je pričvršćen za matericu majke tokom rađanja. Perfuzioni rastvor takođe može da se uvede kroz otvor pupčane vrpce i da omogući protok ili ceđenje iz otvora u zidu placente koji je spregnut sa materinskim zidom materice. Ćelije iz placente koje se prikupljaju ovim postupkom, koji može da se naznači kao "pan" postupak, su obično mešavina fetalih i materinskih ćelija.
[0179]U drugom ostvarenju, perfuzioni rastvor prolazi kroz pupčane vene i prikuplja se iz pupčane arterije, ili prolazi kroz pupčanu arteriju i prikuplja se iz pupčanih vena. Ćelije iz placente prikupljene ovim postupkom, koji se može naznačiti kao "zatvoreno kolo" postupak, su obično skoro isključivo fetalne.
[0180]Podrazumeva se da perfuzija primenom pan postupak, to jest, gde se perfuzat prikuplja nakon što izlazi sa materinske strane placente, rezultira mešanim fetalnim i materinskim ćelijama. Kao rezultat, ćelije prikupljene ovim postupkom mogu da obuhvataju mešovitu populaciju ćelija iz placente,npr.,matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente, i fetalnog i materinskog porekla. Naprotiv, perfuzija isključivo kroz krvne sudove placente u postupku zatvorenog kola, gde perfuzioni fluid prolazi kroz jedan ili dva krvna suda placente i prikuplja se isključivo kroz ostale sud(ove), rezultira prikupljanjem populacije ćelija iz placente koje su skoro isključivo fetalnog porekla.
[0181]Postupak perfuzija zatvorenog kola može se, u jednom ostvarenju, izvesti kao što sledi. Postporođajna placenta dobija se unutar oko 48 sati nakon rođenja. Pupčana vrpca se stegne i preseče iznad stega. Pupčana vrpca može da se odbaci, ili može da se obradi da se obnovi,npr.,matične ćelije pupčane vrpce, i/ili da se obradi membrana pupčane vrpce membrane za proizvodnju biomaterijala. Amnionska membrana može da se zadrži tokom perfuzije, ili može da se odvoji od horiona,npr.,primenom tupe disekcije prstima. Ako se amnionska membrana odvoji od horiona pre perfuzije, može,npr.,da se odbaci, ili da se obradi,npr.,da bi se dobile matične ćelije enzimskom digestijom, ili da bi se proizveo,npr.,biomaterijal amnionske membrane,npr.,biomaterijal opisan u U.S. Objavi prijave patenta Br. 2004/0048796.
[0182]Nakon čišćenja placente od svih vidljivih ugrušaka krvi i ostatka krvi,npr.,korišćenjem sterilne gaze, krvni sudovi pupčane vrpce izlažu se,npr.,delimičnom sečenju membrane pupčane vrpce za izvođenja poprečnog preseka vrpce. Krvni sudovi su identifikovani, i otvoreni,npr.,napredovanjem zatvorene alligator spone do kraja reza svakog suda. Uređaj,npr.,plastična cevčica povezana sa uređajem za perfuziju ili peristaltičnu pumpu, onda se umeće u svaku od arterija placente. Pumpa može da bude bilo koja pumpa koja odgovara ovoj svrsi,npr.,peristaltička pumpa. Plastična cevčica, povezana sa rezervoarom za sterilno prikupljanje,npr.,kesom za krv kao što je kesa za prikupljanje od 250 mL, onda se umeće u venu placente. Alternativno, cevčica povezana sa pumpom umeće se u venu placente, a cevčice od rezervoara(a) za prikupljanje umeću se u jednu ili obe arterije placente. Placenta se onda perfund zapreminom perfuzionog rastvora,npr.,oko 750 ml perfuzionog rastvora. Ćelije u perfuzatu se onda prikupljaju,npr.,centrifugiranjem. U određenim ostvarenjima, placenta se perfundira perfuzionim rastvorom,npr.,100-300 mL perfuzionog rastvora, radi uklanjanja ostataka krvi pre perfuzije radi prikupljanja ćelija iz placente,npr.,matičnih ćelija iz placente i/ili multipotentnih ćelija iz placente. U drugom ostvarenju, placenta se ne perfundira perfuzionim rastvorom radi uklanjanja ostataka krvi pre perfuzije za prikupljanje ćelija iz placente.
[0183]U jednom ostvarenju, proksimalna pupčana vrpca se stegne tokom perfuzije, a poželjnije, stegne se unutar 4-5 cm (centimetara) umetanja vrpce u placentni disk.
[0184]Prvo prikupljanje perfuzionog fluida iz placente sisara tokom postupka izvlačenja krvi je uopšteno obojeno sa ostatkom ćelija crvene krvi od krvi pupčane vrpce i/ili placentne krvi. Perfuzioni fluid postaje obezbojeniji kako napreduje perfuzija i ostatak ćelija krvi pupčane vrpce ispran je od placente. Uopšteno od 30 do 100 ml (mililitara) perfuzionog fluida je dovoljan da izvuče krv iz placente, ali više ili manje perfuzionog fluida može da se koristi u zavisnosti od primećenih rezultata.
[0185]Zapremina perfuzione tečnosti korišćena za izolovanje ćelija iz placente može veoma da zavisi od broja ćelija koje će se prikupiti, veličine placente, broja prikupljanja koji će se izvesti iz placente,itd.U različitim ostvarenjima, zapremina perfuzione tečnosti može da bude od 50 mL do 5000 mL, 50 mL do 4000 mL, 50 mL do 3000 mL, 100 mL do 2000 mL, 250 mL do 2000 mL, 500 mL do 2000 mL, ili 750 mL do 2000 mL. Obično, placenta se perfundira sa 700-800 mL perfuzione tečnosti nakon izvlačenja krvi.
[0186]Placenta može da bude perfundovana više puta tokom nekoliko satiilinekoliko dana. Tamo gde će placenta biti perfundovana više puta, može da se održava ili kultiviše u aseptičkim uslovima u kontejneru ili drugom odgovarajućem sudu, i da bude perfundovana kompozicijom za prikupljanje ćelija, ili standardnim perfuzionim rastvorom (npr., normalnim slanim rastvorom kao što je fosfatni puferski slani rastvor ("PBS")) sa ili bez antikoagulanta( npr.,heparin, varfarin natrijum, koumarin, bishidroksikoumarin), i/ili sa ili bez antimikrobnog agensa( npr.,B-merkaptoetanola (0,1 mM); antibiotika kao što su streptomicin( npr.,sa 40-100 u.g/ml), penicilin( npr.,sa 40U/ml), amfotericin B( npr.,sa 0,5 u.g/ml). U jednom ostvarenju, izolovana placenta održava se ili kultiviše tokom vremenskog perioda bez prikupljanja perfuzata, tako se placenta održava ili kultiviše tokom 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11,12,13,14,15,16,17,18,19, 20, 21, 22, 23, ili 24 sata, ili 2 ili 3 ili više dana pre perfuzije i prikupljanja perfuzata. Perfundovana placenta može da se održava tokom dodatnih jednog ili više vremena, npr.,1, 2, 3,4, 5, 6,7, 8, 9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20, 21, 22, 23, 24 ili više sati, i da bude perfundovana drugi put sa, npr., 700-800 mL perfuzionog fluida. Placenta može da bude perfundovana 1, 2, 3,4, 5 ili više puta, na primer, jedanput svakih 1, 2, 3,4, 5 ili 6 sati. U poželjnom ostvarenju, perfuzija placente i prikupljanje perfuzionog rastvora,npr.,kompozicije za prikupljanje ćelija, ponavlja se sve dok broj izolovanih nukleotidna ćelija padne ispod 100 ćelija/ml. Perfuzati na različitim vremenskim tačkama dalje se mogu obrađivati pojedinačno radi izolovanja vremenski zavisnih populacija ćelija,npr.,matičnih ćelija. Perfuzati iz različitih vremenskih tačaka takođe se mogu izvući. U poželjnom ostvarenju, ćelije iz placente prikupljaju se za vreme od između oko 8 sati i oko 18 sati nakon izbacivanja.
[0187]Perfuzija poželjno rezultira prikupljanjem značajno više ćelija iz placente nego što se dobija iz placente sisara koja nije perfundovana pomenutim rastvorom, i ne tretira se drugačije radi dobijanja ćelija iz placente( npr.,razgradnjom tkiva,npr.,enzimskom digestijom). U ovom kontekstu, "značajno više" znači najmanje 10% više. Perfuzija daje značajno više ćelija iz placente nego,npr.,broj ćelija iz placente koje se mogu izolovati iz podloge za kultivisanje u kojoj se placenta, ili njen deo, kultiviše.
[0188]Ćelije iz placente mogu da se izoluju iz placente perfuzijom rastvorom koji obuhvata jednu ili više proteaza ili druge enzime za razgradnju tkiva. U posebnom ostvarenju, placenta ili njen deo( npr.,amnionska membrana, amnion i horion, placentne lobule ili kotiledon, pupčanu vrpcu, ili kombinaciju bilo kojih prethodno navedenih) dovodi se na 25-37°C, i inkubira se sa jednim ili više enzima za razgradnju tkiva u 200 mL podloge za kultivisanje za 30 minuta. Ćelije iz perfuzata se prikupljaju, dovedene na 4°C, i ispiraju hladnom mešavinom inhibitora koja obuhvata 5 mM EDTA, 2 mM ditiotreitola i 2 mM beta-merkaptoetanola. Ćelije iz placente ispiraju se posle nekoliko minuta hladnom( npr.,4°C) kompozicijom za prikupljanje matičnih ćelija.
5.3.5Izolovanje, sortiranje i karakterizacija ćelija iz placente
[0189]Izolovane ćelije iz placente,npr.,ćelije opisane u Odeljku 5.2.2, gore, dobijene ili perfuzijom ili fizičkom razgradnjom,npr.,enzimskom digestijom, mogu se inicajalno prečistiti od( tj.,da budu
izolovane od) drugih ćelija Ficoll gradijentnim centrifugiranjem. Takvo centrifugiranje može da prati bilo koji standardni protokol za brzinu centrifugiranja,itd.U jednom ostvarenju, na primer, ćelije prikupljene iz placente izoluju se iz perfuzata centrifugiranjem pri 5000 x g za 15 minuta na sobnoj temperaturi, koje odvaja ćelije od,npr.,kontaminirajućih ostataka i trombocita. U drugom ostvarenju, placentni perfuzat koncentruje se do oko 200 ml, pažljivo prevlači preko Ficoll, i centrifugira pri oko 1100 x g za 20 minuta na 22°C, i površinski sloj ćelija koji je male gustine prikuplja se za dalju obradu.
[0190]Ćelijske granule mogu da se ponovo suspenduju u svežoj kompoziciji za prikupljanje matičnih ćelija, ili podlozi odgovarajućoj za održavanje ćelija,npr.,održavanje matičnih ćelija, na primer, IMDM podloga bez seruma koja sadrži 2U/ml heparina i 2 mM EDTA (GibcoBRL, NY). Ukupan mononuklearni ćelijski deo može da se izoluje,npr.,korišćenjem Lvmphoprep (Nvcomed Pharma, Oslo, Norvvav) prema preporučenom postupku proizvođača.
[0191]Ćelije iz placente dobijene perfuzijom ili digestijom mogu da budu, na primer, dalje, ili inicijalno, izolovane diferencijalom tripsinizacijom korišćenjem,npr.,rastvora 0,05% tripsina sa 0,2% EDTA (Sigma, St. Louis MO). Diferencijalna tripsinizacija moguća je jer se izolovane ćelije iz placente, koje su adherentne na plastiku za kulturu tkiva, obično odvajaju od plastičnih površina za oko pet minuta pri čemu je za druge adherentne populacije obično potrebno više od 20-30 minuta inkubacije. Odvojene ćelije iz placente can mogu da se prikupe nakon tripsinizacije i tripsin neutralizacije, korišćenjem,npr.,tripsin neutrališućeg astvora (TNS, Cambrex). U jednom ostvarenju izolovanja adherentnih ćelija, alikvoti od, na primer, oko 5-10 x IO<6>ćelija postavljaju se u svaku od nekoliko T-75 boca, poželjno T75 boce obložene fibronektinom. U takvom ostvarenju, ćelije mogu da se kultivišu sa komercijalno dostupnom podlogom za rast mezenhimalnih matičnih ćelija (MSCGM) (Cambrex), i da se postave u inkubator za kulturu tkiva (37°C, 5% C02). Nakon 10 do 15 dana, neadherentne ćelije se uklanjaju iz boca ispiranjem sa PBS. PBS se potom zameni sa MSCGM. Poželjno, vrči se ispitivanje boca svakog dana na prisustvo različitih adherentnih ćelijskih tipova a naročito, radi identifikacije i na razvoj klastera fibroblastoidnih ćelija.
[0192]Broj i tip ćelija prikupljenih iz placente sisara može da se prati, na primer, merenjem promena u morfologiji i ćelijskim površinskim markerima korišćenjem standardnih postupaka za detekciju ćelija kao što su protočna citometrija, ćelijsko sortiranje, imunocitohemija( npr.,bojenjem sa antitelom koje je specifično za tkivo ili specifično za ćelijski marker) fluoroscencijom aktivirano sortiranje ćelija (FACS), magnetski aktivirano sortiranje ćelija (MACS), ispitivanjem morfologije ćelija korišćenjem svetlosnog ili konfokalnog mikroskopa, i/ili merenjem promena u ekspresiji gena korišćenjem postupaka koji su dobro poznati u ovoj oblasti, poput PCR i prfilisanja ekspresije gena. Ovi postupci mogu da se koriste, takođe, da se identifikuju ćelije koje su pozitivne za jedan ili više određenih markera. Na primer, korišćenjem antitela za CD34, jedan može da odredi, korišćenjem gore navedenog postupka, da li ćelija obuhvata detektabilnu količinu CD34; ako je tako, ćelija je CD34<+>. Slično, ako ćelija proizvodi dovoljno OCT-4 RNA što se detektuje pomoću RT-PCR, ili značajno više OCT-4 RNA nego zrela ćelija, ćelija je OCT-4<+>. Antitela za ćelijske površinske markere (npr., CD markere poput CD34) i sekvenca gena specifičnih za matične ćelije, poput OCT-4, dobro su poznati u ovoj oblasti.
[0193]Ćelije iz placente, posebno ćelije koje se izoluju Ficoll separacijom, diferencijalnom adherencijom, ili njihovom kombinacijom, mogu da se sortiraju korišćenjem sortera za fluoroscencijom aktivirano sortiranje ćelija (FACS). Fluoroscencijom aktivirano sortiranje ćelija (FACS) je dobro poznat postupak za odvajanje čestica, uključujući ćelije, baziran na fluorescentnim svojstvima čestica (Kamarch, 1987, Methods Enzvmol, 151:150-165). Lasersko pobuđivanje fluorescentnih grupa u pojedinim česticama rezultira malim električnim punjenjem omogućavajući elektromagnetsku separaciju pozitivnih i negativnih čestica iz mešavine. U jednom ostvarenju, antitela ili ligandi specifični za ćelijski površinski marker označavaju se sa posebnim fluorescentnim obeležjima. Ćelije se obrađuju kroz ćelijski sorter, omogućavajući razdvajanje ćelija zasnovano na njihovoj sposobnosti da se vežu za korišćeno antitela. FACS sortirane čestice mogu da se direktno deponuju u pojedinim bazenčićima ploča sa 96-bazenčića ili 384-bazenčića da bi se olakšalo razdvajanje i kloniranje.
[0194]U jednoj šemi sortiranja, ćelije iz placente,npr.,PDAC se sortiraju na bazi ekspresije jednog ili više markera CD34, CD38, CD44, CD45, CD73, CD105, OCT-4 i/ili HLA-G. Ovo može da se postigne u vezi sa postupcima za odabir takvih ćelija na osnovu njihovih svojstva adherencije u kulturi. Na primer, odabir na osnovu adherencije na plastiku za kulturu tkiva može da se postigne pre ili posle sortiranja na osnovu ekspresije markera. U jednom ostvarenju, na primer, ćelije se sortiraju prvo na osnovu njihove ekspresije CD34; CD34" ćelije se zadržavaju, i CD34" ćelije koje su dodatno CD200<+>i HLA-G" odvajaju se od svih drugih CD34 ćelija. U drugom ostvarenju, ćelije iz placente sortiraju se na osnovu njihove ekspresije markera CD200 i/ili HLA-G; na primer, ćelije koje pokazuju CD200 i nemaju HLA-G su izolovane za dalju upotrebu. Ćelije koje eksprimiraju,npr.,CD200 i/ili nedostatak,npr.,HLA-G, u posebnom ostvarenju, mogu dalje da se sortiraju na osnovu njihove ekspresija CD73 i/ili CD105, ili epitopa prepoznatih antitelima SH2, SH3 ili SH4, ili nedostatka ekspresije CD34, CD38 ili CD45. Na primer, u drugom ostvarenju, ćelije iz placente sortiraju se ekspresijom, ili njegovim nedostatkom, CD200, HLA-G, CD73, CD105, CD34, CD38 i CD45, i ćelije iz placente koje su CD200<+>, BLA-G", CD73<+>, CD105<+>, CD34", CD38" i CD45" izoluju se od drugih ćelija iz placente radi dalje upotrebe.
[0195]U posebnim ostvarenjima bilo kojih od gore navedenih ostvarenja sortiranja ćelija iz placente, najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili 95% ćelija u ćelijskoj populaciji koje ostaju nakon sortiranja su pomenute izolovane ćelije iz placente. Ćelije iz placente mogu da se sortiraju pomoću jednog ili više bilo kojih od markera opisanih u Odeljku 5.2.2, gore.
[0196]U posebnom ostvarenju, na primer, ćelije iz placente koje su (1) adherentne na plastiku za kulturu tkiva, i (2) CD10<+>, CD34" i CD105<+>sortiraju se od( tj.,izoluju se od) drugih ćelija iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, ćelije iz placente kojesu (1) prijanjaju na plastiku za kulturu tkiva, i (2) CD10<+>, CD34", CD105<+>i CD200<+>sortiraju se od( tj.,izoluju se od) drugih ćelija iz placente. U drugom posebnom ostvarenju, ćelije iz placente koje su (1) adherentne na plastiku za kulturu tkiva, i (2) CD10<+>, CD34", CD45", CD90<+>, CD10<5+>i CD200<+>sortiraju se od( tj.,izoluju se od) drugih ćelija iz placente.
[0197]Uzimajući u obzir detektovanje ćelija iz placente na osnovu sekvence nukleotida, sekvence za markere navedene ovde lako su dostupne u javno dostupnim bazama poput GenBank ili EMBL.
[0198]Uzimajući u obzir antitelom posredovano detektovanje i sortiranje ćelija iz placente, npr., matičnih ćelija iz placente ili multipotentnih ćelija iz placente, bilo koje antitelo, specifično za određeni marker, može da se koristi, u kombinaciji sa bilo kojim fluoroforom ili drugim obeležjem pogodnom za detektovanje ili sortiranje ćelija( npr.,fluorescencijom aktivirano ćelijsko sortiranje). Antitelo/fluorfor kombinacije za specifične markere uključuju, ali nisu ograničene na, fluorescein izotiocijanat (FITC) sjedinjen sa monoklonalim antitelima protiv HLA-G (dostupno od Serotec, Raleigh, North Carolina), CD10 (dostupno od BD Immunocvtometrv Svstems, San Jose, California), CD44 (dostupno od BD Biosciences Pharmingen, San Jose, California), i CD105 (dostupno od R&D Svstems Inc., Minneapolis, Minnesota); fikoeritrin (PE) sjedinjen sa monoklonalim antitelima protiv CD44, CD200, Codll7, i CD13 (BD Biosciences) Pharmingen); fikoeritrin-Cy7 (PE Cy7) sjedinjen sa monoklonalim antitelima protiv CD33 i CD10 (BD Biosciences Pharmingen); alofikocijanin (APC) sjedinjen sa streptavidinom i monoklonalim antitelima protiv CD38 (BD Biosciences Pharmingen); i Biotinilovani CD90 (BD Biosciences Pharmingen). Druga antitela koja mogu da se primene uključuju, ali ne ograničavaju se na, CD133-APC (Miltenyi), KDR-Biotin (CD309, Abcam), CitokeratinK-Fitc (Sigma ili Dako), HLA ABC-Fitc (BD), HLA DR,DQ,DP-PE (BD), B-2-mikroglobulin-PE (BD), CD80-PE (BD) i CD86-APC (BD). Druge antitelo/obeležje kombinacije koje mogu da se koriste uključuju, ali nisu ograničene na, CD45-PerCP (peridin hlorofil protein); CD44-PE; CD19-PE; CD10-F (fluorescein); HLA-G-F i 7-amino-aktinomicin-D (7-AAD); HLA-ABC-F; i slično. Ova lista je neiscrpna, i druga antitela od drugih dobavljača takođe su komercijalno dostupna.
[0199]Izolovane ćelije iz placente obezbeđene ovde mogu da se ispituju za CD117 ili CD133 korišćenjem, na primer, pfikoeritrina-Cy5 (PE Cy5) sjedinjenog sa streptavidinom i biotina sjedinjenog sa monoklonalim antitelima protiv CD117 ili CD133; međutim, korišćenjem ovog sistema, ćelije mogu da se pojave da su pozitivne za CD117 ili CD133, respektivno, zbog relativno visoke pozadine.
[0200]Izolovane ćelije iz placente mogu da se označe antitelom za jedinstven marker i detektuju i/sortiraju. Ćelije iz placente mogu takođe da se istovremeno označe sa više antitela za različite markere.
[0201]U drugom ostvarenju, magnetne perle mogu da se koriste za odvajanje ćelija. Ćelije mogu da se sortiraju korišćenjem postupka magnetski aktiviranog sortiranja ćelija (MACS), postupak za razdvajanje čestica na osnovu njihove sposobnosti da vezuju magnetne perle (0,5-100 u.m prečnik). Mnoštvo korisnih modifikacija može da se izvede na magnetnim mikrosferama, uključujući kovalentno dodavanje antitela koje posebno prepoznaje određenu površinu ćelijskog molekula ili haptena. Perle se onda mešaju sa ćelijama da bi se omogućilo vezivanje. Ćelije potom prolaze kroz magnetno polje da bi se izdvojile ćelije koje imaju specifičan ćelijski površinski marker. U jednom ostvarenju, ove ćelije mogu se onda izolovati i ponovo umešati sa magnetnim perlama spojenim sa antitelom protiv dodatnih ćelijski površinskih markera. Ćelije ponovo prolaze kroz magnetno polje, pri čemu se izoluju ćelije koje vezuju oba antitela. Takve ćelije mogu da se razblaže u odvojene posude, kao štosu mikrotitar ploče za klonsko izolovanje.
[0202]Izolovane ćelije iz placente mogu se okarakterisati i/ili sortirati na osnovu ćelijske morfologije i karakteristika rasta. Na primer, izolovane ćelije iz placente mogu se okarakterisati kao da imaju i/ili odabrati na osnovu,npr.,izgleda fibroblastoida u kulturi. Izolovane ćelije iz placente mogu se okarakterisati kao da imaju, i/ili odabrati, na osnovu njihove sposobnosti da formiraju telašca nalik embrioidu. U jednom ostvarenju, na primer, ćelije iz placente koje su oblika fibroblastoida, eksprimiraju CD73 i CD105, i proizvode jedan ili više telašaca nalik embrioidu u kulturi izolovane su od drugih ćelija iz placente. U drugom ostvarenju, OCT-4+ ćelije iz placente koje proizvode jedan ili više telašaca nalik embrioidu u kulturi izolovane su od drugih ćelija iz placente.
[0203]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente mogu da se identifikuju ili okarakterišu pomoću testa jedinice formiranja kolonije. Testovi jedinice formiranja kolonije obično su poznate stučnjacima iz ove oblasti, kao što je MESENCULT™ podloga (Stem cell Technologies, Inc., Vancouver British Columbia).
[0204]Izolovane ćelije iz placente mogu da se ocene za vijabilnost, proliferacioni potencijal i dugovečnost korišćenjem standardnih postupaka poznatim u ovoj oblasti, kao što su test izlučivanja tripanskog plavog, test preuzimanja fluorescein diacetata, test preuzimanja propidijum jodida (za ocenu vijabilnosti); i test preuzimanja timidina, MTT (3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium bromid) test ćelijske proliferacije (za ocenu proliferacije). Dugovečnost može da se odredi postupcima dobro poznatim u ovoj oblasti, kao što je određivanje maksimalnog broja dupliranja populacije u produženoj kulturi.
[0205]Izolovane ćelije iz placente,npr.,izolovane ćelije iz placente opisane u Odeljku 5.2.2, gore, mogu takođe da se odvoje od drugih ćelija iz placente korišćenjem drugih postupaka koji su poznati u ovoj oblasti,npr.,selektivni rast poželjnih ćelija (pozitivna selekcija), selektivno uništavanje neželjenih ćelija (negativna selekcija); separacija koja se zasniva na diferencijalnoj ćelijskoj aglutinabilnosti u mešovitoj populaciji kao, na primer, sa aglutininom iz soje; postupcima smrzavanja-odmrzavanja; filtracijom; konvencionalnim i zonskim centrifugiranjem; centrifugalnom elutrijacijom (brojač-striming centrifugiranje); jediničnom gravitacionom separacijom; protivstrujnom distribucijom; elektroforezom; i slično.
5.4 KULTURA IZOLOVANIH ĆELIJA IZ PLACENTE
5.4.1Podloga za kultivisanje
[0206]Izolovane ćelije iz placente, ili populacije izolovanih ćelija iz placente, ili ćelije ili placentno tkivo iz kojih su izrasle ćelije iz placente, mogu da se koriste za inicijaciju, ili zasejavanje, ćelijskih kultura. Ćelije se uopšteno prenose na sterilne posude za kulturu tkiva koje su ili neobložene ili obložene vanćelijskim matriksom ili ligandima kao što su laminin, kolagen( npr.,prirodni ili denaturisani), želatin, fibronektin, ornitin, vitronektin, polilizin, CELLSTART™, i/ili vanćelijski membranski protein( npr.,MATRIGEL<®>(BD Discoverv Labware, Bedford, Mass.)), ili drugi odgovarajući biomolekul ili sintetički mimetičan agens.
[0207]Izolovane ćelije iz placente mogu da se kultivišu u bilo kojoj podlozi, u bilo kojim uslovima, zakoje se zna u ovoj oblasti da su prihvatljivi za kultivisanje ćelija,npr.,matičnih ćelija. Poželjno, podloga za kultivisanje obuhvata serum. Izolovane ćelije iz placente mogu da se kultivišu, na primer, DMEM-LG (Dulbecco-ova modifikovana esencijalna podloga, nizak sadržaj glukoze)/MCDB 201 (podloga bazirana na pilećem fibroblastu) sadržavajući ITS (insulin-transferin-selenijum), LA+BSA (linolna kiselina-goveđi serum albumin), deksametazon L-askorbinsku kiselinu, PDGF, EGF, IGF-1, i penicilin/streptomicin; DMEM-HG (visok sadržaj glukoze) koja obuhvata 10% fetalni goveđi serum (FBS); DMEM-HG koja obuhvata 15% FBS; IMDM (Iscove-ova modifikovana Dulbecco-ova podloga) koja obuhvata 10% FBS, 10% konjskog seruma, i hidrokortizon; M199 koja obuhvata 1% do 20% FBS, EGF, i heparin; a-MEM (minimal essential podloga) comprising 10% FBS, GLUTAMAX™ i gentamicin; DMEM koja obuhvata 10% FBS, GLUTAMAX™ i gentamicin,itd.
[0208]Druge podloge koje mogu da se koriste za kultivisanje ćelija iz placente uključuju DMEM (visokog ili malog sadržaja glukoze), Eagle-ovu osnovnu podlogu, Ham-ovu F10 podlogu (F10), Ham-ovu F-12 podlogu (F12), Iscove-ovu modifikovanu Dulbecco-ovu podlogu, podlogu za rast mezenhimalnih matičnih ćelija (MSCGM), Liebovitz-ovu L-15 podlogu, MCDB, DMEM/F12, RPMI1640, unapređenu DMEM (Gibco), DMEM/MCDB201 (Sigma), i CELL-GRO FREE.
[0209]Podlozi za kultivisanje može da se doda jedna ili više komponenta uključujući, na primer, serum
( npr.,fetalni goveđi serum (FBS), poželjno oko 2-15% (v/v); konjski (konj) serum (ES); humani serum (HS)); beta-merkaptoetanol (BME), poželjno oko 0,001% (v/v); jedan ili više faktora rasta, na primer, faktor rasta izveden iz trombocita (PDGF), epidermalni faktor rasta (EGF), bazični fibroblastni faktor rasta (bFGF), insulinu sličan faktor rasta-1 (IGF-1), inhibitorni faktor leukemije (LIF), vaskularni endotelni faktor rasta (VEGF), i eritropoietin (EPO); aminokiseline, uključujući L-valin; i jedan ili više antibiotika i/ili antimikotičke agense za kontrolisanje mikrobne kontaminacije, kao što su, na primer, penicilin G, streptomicin sulfat, amfotericin B, gentamicin, i nistatin, ili sam ili u kombinaciji.
[0210]Izolovane ćelije iz placente mogu da se kultivišu u standardnim uslovima za kulturu tkiva,npr.,u posudama za kulturu tkiva ili pločama sa više bazenčića. Izolovane ćelije iz placente mogu takođe da se kultivišu korišćenjem postupka viseće kapi. U ovom postupku, izolovane ćelije iz placente suspenduju se pri oko 1 x IO<4>ćelija po mL u oko 5 mL podloge, i jedna ili više kapi podloge stavlja se na unutrašnju stranu poklopca kontejnera za kulturu tkiva,npr.,Petrijeve šolje od 100 mL. Kapi mogu da budu,npr.,pojedinačne kapi, ili višestruke kapi iz,npr.,multikanalne pipete. Poklopac se pažljivo okrene i i postavi na na vrh dna šolje, koji sadrži zapreminu tečnog,npr.,sterilnog PBS dovoljnu za održavanje vlažnog sadržaja u atmosferi posude, i matične ćelije se kultivišu.
[0211]U jednom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente kultivišu se u prisustvu jedinjenja koja deluju tako da održe neizdiferenciran fenotip u izolovanim ćelijama iz placente. U posebnom ostvarenju, jedinjenje je supstituisani 3,4-dihidropiridimol[4,5-d]pirimidin. U drugom posebnom ostvarenju, jedinjenje je jedinjenje koje ima sledeću hemijsku strukturu:
Jedinjenje može da bude u kontaktu sa izolovanim ćelijama iz placente, ili populacijom izolovanih ćelija iz placente, na koncentraciji od, na primer, između oko 1 U.M do oko 10U.M.
5.4.2Razvoj i proliferaciia ćelija iz placente
[0212]Jednom kada se dobije izolovana ćelija iz placente, ili populacija izolovanih ćelija iz placente( npr.,ćelija iz placente ili populacija ćelija iz placente odvojena od najmanje 50% ćelija iz placente sa kojima je matična ćelija ili populacija matičnih ćelija normalno u veziin vivo),ćelija ili populacija ćelija može da proliferiše i razvijain vitro.Na primer, populacija izolovanih ćelija iz placente može da se kultiviše u kontejneru za kulturu tkiva,npr.,šoljama, bocama, pločama sa više bunarčića, ili slično, u toku vremena dovoljnog da ćelije proliferišu do 70-90% konfluencije, to jest, sve dok ćelije i njihovo potomstvo ne okupira 70-90% površine za uzgajanje kontejnera za kulturu tkiva.
[0213]Izolovane ćelije iz placente mogu da se zaseju u posudama za kulturu u gustini koja omogućava ćelijski rast. Na primer, ćelije mogu da se zaseju sa malom gustinom( npr.,oko 1000 do oko 5000 ćelija/cm<2>) do velike gustine( npr.,oko 50.000 ili više ćelija/cm<2>). U poželjnom ostvarenju, ćelije se kultivišu u prisustvu od oko 0 do oko 5 zapreminskih procenata C02u vazduhu. U nekim poželjnim ostvarenjima, ćelije se kultivišu sa oko 2 do oko 25 procenta 02u vazduhu, poželjno oko 5 do oko 20 procenta 02u vazduhu. Poželjno, ćelije se kultivišu na oko 25°C do oko 40°C, poželjno 37°C. Ćelije se poželjno kultivišu u inkubatoru. Podloga za kultivisanje može da bude statička ili izmešana, na primer, korišćenjem bioreactor. Ćelije iz placente,npr.,matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente, poželjno rastu pod niskim oksidativnim stresom( npr.,sa dodatkom glutationa, askorbinske kiseline, katalaze, tokoferola, N-acetilcisteina ili slično).
[0214]Jednom kada se dobije konfluencija manja od 100%, na primer, 70% do 90%, ćelije mogu da se preseju. Na primer, ćelije mogu enzimski da se tretiraju,npr.,da se tripsinizuju, korišćenjem postupaka koji su dobro poznati u ovoj oblasti, da bi se odvojile od površine za kultivisanje tkiva. Nakon uklanjanja ćelija pipetiranjem i brojanja ćelija, oko 10.000-100.000 ćelija/cm<2>se preseju u nov kontejner za kultivisanje koji sadrži svežu podlogu za kultivisanje. Obično, nova podloga istog je tipa kao podloga sa koje su izolovane ćelije iz placente uklonjene. Izolovane ćelije iz placente mogu da se presejavaju oko, najmanje, ili ne više od 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9,10,12,14,16,18 ili 20 puta, ili više.
5.4.3Populacije izolovanih ćelija iz placente
[0215]Takođe ovde su obezbeđene populacije izolovanih ćelija iz placente,npr.,izolovane ćelije iz placente opisane u Odeljku 5.2.2, gore, korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde. Populacije izolovanih ćelija iz placente mogu da se izoluju direktno iz jedne ili više placenti; to jest, ćelijska populacija može da bude populacija ćelija iz placente koja obuhvata izolovane ćelije iz placente, pri čemu se izolovane ćelije iz placente dobijaju iz, ili sadržane su u, perfuzata, ili se dobijaju iz, ili sadržane su u, razgrađenog placentnog tkiva, npr., digestata placentnog tkiva (to jest, prikupljanje ćelija dobijenih enzimskom digestijom placente ili njenog dela). Izolovane ćelije iz placente opisane ovde takođe mogu da se kultivišu i razvijaju kako bi proizvodile populacije izolovanih ćelija iz placente. Populacije ćelija iz placente koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente mogu takođe da se kultivišu i razvijaju radi proizvodnje populacija ćelija iz placente.
[0216]Populacije ćelija iz placente korisne u postupcima tretiranja obezbeđenim ovde obuhvataju izolovane ćelije iz placente, na primer, izolovane ćelije iz placente kao što je opisano u Odeljku 5.4.2 ovde. U različitim ostvarenjima, najmanje 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ili 99% ćelija u populaciji ćelija iz placente su izolovane ćelije iz placente. To jest, populacija izolovanih ćelija iz placente može da obuhvata,npr.,koliko 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ćelija koje nisu izolovane ćelije iz placente.
[0217]Populacije Izolovanih ćelija iz placente korisne u postupcima i kompozicijama opisanim ovde mogu da se proizvedu,npr.,selekcijom izolovanih ćelija iz placente, dobijenih ili enzimskom digestijom ili perfuzijom, koje eksprimiraju određene markere i/ili određene karakteristike kulture ili morfološke karakteristike. U jednom ostvarenju, na primer, ovde je obezbeđen postupak proizvodnje ćelijske populacije selekcijom ćelija iz placente koje (a) prijanjaju na supstrat, i (b) eksprimiraju CD200 i ne eksprimiraju HLA-G; i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija rai formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje eksprimiraju CD200 i ne eksprimiraju HLA-G, i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje (a) prijanjaju na supstrat, i (b) eksprimiraju CD73, CD105 i CD200; i izolovanje pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se identifikacijom ćelija iz placente koje eksprimiraju CD73, CD105 i CD200, i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje (a) prijanjaju na supstrat i (b) eksprimiraju CD200 i OCT-4; i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje eksprimiraju CD200 i OCT-4, i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje (a) prijanjaju na supstrat, (b) eksprimiraju CD73
i CD 105, i (c) olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente obuhvatajući pomenutu matičnu ćeliju kada se pomenuta populacija kultiviše u uslovima koji
omogućavaju formiranje telašca nalik embroidu; i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje eksprimiraju CD73 i CD105, i olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente obuhvatajući pomenutu matičnu ćeliju kada se pomenuta populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašca nalik embroidu, i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje (a) prijanjaju na supstrat, i (b) eksprimiraju CD73 i CD105, i ne
eksprimiraju HLA-G; i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje eksprimiraju CD73 i CD105 i ne eksprimiraju HLA-G, i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, postupak proizvodnje ćelijske populacije obuhvata selekciju ćelija iz placente koje (a) prijanjaju na supstrat, (b) eksprimiraju OCT-4, i (c) olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente obuhvatajući pomenutu matičnu ćeliju kada se pomenuta populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašca nalik embroidu; i izolovanje pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje eksprimiraju OCT-4, i olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente obuhvatajući pomenutu matičnu ćeliju kada se pomenuta populacija kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašca nalik embroidu, i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije.
[0218]U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje (a) prijanjaju na supstrat, i (b) eksprimiraju CD10 i CD105, i ne eksprimiraju CD34; i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje eksprimiraju CD10 i CD105, i ne eksprimiraju CD34, i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje (a) prijanjaju na supstrat, i (b) eksprimiraju CD10, CD105 i CD200, i ne eksprimiraju CD34; i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje eksprimiraju CD10, CD105 i CD200, i ne eksprimiraju CD34, i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom posebnom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje (a) prijanjaju na supstrat, i (b) eksprimiraju CD10, CD90, CD105 i CD200, i ne eksprimiraju CD34 i CD45; i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije. U drugom posebnom ostvarenju, ćelijska populacija proizvodi se selekcijom ćelija iz placente koje eksprimiraju CD10, CD90, CD105 i CD200, i ne eksprimiraju CD34 i CD45, i izolovanjem pomenutih ćelija od drugih ćelija radi formiranja ćelijske populacije.
[0219]Selekcija ćelijskih populacija koje obuhvataju ćelije iz placente koje imaju bilo koju od kombinacija markera opisanih u Odeljku 5.2.2, gore, može se izolovati ili dobiti nasličan način.
[0220]U bilo kom od pomenutih ostvarenja, selekcija izolovanih ćelijskih populacija može dodatno da obuhvata selekciju ćelija iz placente koje eksprimiraju ABC-p (specifičan protein ABC transporter u placenti;videti, npr.,Allikmets et al., Cancer Res. 58(23):5337-9 (1998)). Postupak može takođe da obuhvata selekciju ćelija koje pokazuju najmanje jednu karakteristiku specifičnu za,npr.,mezenhimalnu matičnu ćeliju, na primer, ekspresiju CD44, ekspresiju CD90, ili ekspresiju kombinacije prethodnih.
[0221]U gore navedenim ostvarenjima, supstrat može da bude bilo koja površina na kojoj može da se postigne kultivisanje i/ili selekcija ćelija,npr.,izolovanih ćelija iz placente. Obično, supstrat je plastika,npr.,posuda za kulturu tkiva ili plastična ploča sa više bazenčića. Plastika za kulturu tkiva može da se obloži biomolekulom,npr.,lamininom ili fibronektinom.
[0222]Ćelije,npr.,izolovane ćelije iz placente, mogu da se odaberu za populaciju ćelija iz placente pomoću bilo kog sredstva poznatog u oblasti ćelijske selekcije. Na primer, ćelije mogu da se odaberu korišćenjem antitela ili antitela za jedan ili više ćelijskih površinskih markera, na primer, u protočnoj citometriji ili FACS. Selekcija može da se postigne korišćenjem antitela u spoju sa magnetnim perlama. Antitela koja su specifična za određene markere povezane sa matičnim ćelijama poznata su u ovoj oblasti. Na primer, antitela za OCT-4 (Abcam, Cambridge, MA), CD200 (Abcam), HLA-G (Abcam), CD73 (BD Biosciences Pharmingen, San Diego, CA), CD105 (Abcam; BioDesign International, Saco, ME),itd.Antitela za druge markere takođe su komercijalno dostupna,npr.,CD34, CD38 i CD45 dostupni su iz,npr.,StemCell Technologies ili BioDesign International.
[0223]Populacije izolovanih ćelija iz placente mogu da obuhvataju ćelije iz placente koje nisu matične ćelije, ili ćelije koje nisu ćelije iz placente.
[0224]Izolovane ćelijske populacije koje obuhvataju adherentne ćelije izvedene iz placente opisane ovde mogu da obuhvataju drugi ćelijski tip,npr.,ćelije iz placente koje nisu adherentne ćelije izvedene iz placente, ili,npr.,ćelije koje nisu ćelije iz placente. Na primer, izolovana populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente može da obuhvata,npr.,može da bude kombinovana sa, populaciju drugog tipa ćelija, pri čemu su ćelije drugog tipa,npr.,embrionske matične ćelije, krvne ćelije( npr.,placentna krv, ćelije placentne krvi, krv pupčane vrpce, ćelije krvi pupčane vrpce, periferna krv, ćelije periferne krvi, nukleotidne ćelije iz placentne krvi, krvi pupčane vrpce, ili periferne krvi i slično), matične ćelije izolovane iz krvi( npr.,matične ćelije izolovane iz placentne krvi, krvi pupčane vrpce ili periferne krvi), nukleotidne ćelije iz placentnog perfuzata,npr.,ukupne nukleotidne ćelije iz placentnog perfuzata; matične ćelije pupčane vrpce, populacije nukleotidne ćelije izvedenih iz krvi, mezenhimalne stromalne ćelije izvedene iz koštane srži, mezenhimalne matične ćelije izvedene iz koštane srži, hematopoetske matične ćelije izvedene iz koštane srži, sirova koštana srž, zrele (somatske) matične ćelije, populacije matičnih ćelija sadržane u tkivo, kultivisane ćelije,npr.,kultivisane matične ćelije, populacije potpuno diferenciranih ćelija( npr.,hondrociti, fibroblasti, amniotičke ćelije, osteoblasti, mišićne ćelije, ćelije srca,itd. Ipericiti i slično. U posebnom ostvarenju, populacija ćelija koja obuhvata adherentne ćelije izvedene iz placente obuhvata matične ćelije iz placente ili matične ćelije iz pupčane vrpce. U određenim ostvarenjima u kojima se drugi tip ćelija krvi ili krvne ćelije, eritrociti uklanjaju se iz populacije ćelija.
[0225]U posebnom ostvarenju, drugi tip ćelije je hematopoetska matična ćelija. Takve hematopoetske matične ćelije mogu da budu, na primer, sadržane u neobrađenoj placenti, krvi pupčana vrpca ili perifernoj krvi; u ukupnim nukleotidne ćelije iz placentne krvi, krvi pupčane vrpce ili periferne krvi; u izolovanoj populaciji CD34+ ćelija iz placentne krvi, krvi pupčane vrpce ili perifernoj krvi; u neobrađenoj koštanoj srži; u ukupnim nukleotidne ćelije iz koštane srži; u izolovanoj populaciji CD34+ ćelija iz koštane srži, ili slično.
[0226]U drugom ostvarenju, izolovana populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente kombinobvana je sa većim brojem zrelih ili progenitornih ćelija iz vaskularnog sistema. U različitim ostvarenjima, ćelije su endotelijalne ćelije, endotelijalne progenitorne ćelije, miociti, kardiomiociti, periciti, angioblasti, mioblasti ili kardiomioblasti.
[0227]U drugom ostvarenju, drugi ćelijski tip je neembrionski ćelijski tip koji je u kulturi radi ekspresije markera pluripotentnosti i funkcija povezanih sa embrionskim matičnim ćelijama.
[0228]U posebnim ostvarenjima gore izolovanih populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente, jedna od ili i adherentne ćelije izvedene iz placente i ćelije drugog tipa su autologne, ili su alogene, za namerenog primaoca ćelija.
[0229]U drugom posebnom ostvarenju, kompozicija obuhvata adherentne ćelije izvedene iz placente, i embrionske matične ćelije. U drugom posebnom ostvarenju, kompozicija obuhvata adherentne ćelije izvedene iz placente i mezenhimalne stromalne ili matične ćelije,npr.,mezenhimalne stromalne ili matične ćelije izvedene iz koštane srži. U drugom posebnom ostvarenju, kompozicija obuhvata hematopoetske matične ćelije izvedene iz koštane srži. U drugom posebnom ostvarenju, kompozicija obuhvata adherentne ćelije izvedene iz placente i hematopoetske progenitorne ćelije,npr.,hematopoetske progenitorne ćelije iz koštane srži, fetalne krvi, krvi pupčane vrpce, placentne krvi, i/ili periferne krvi. U drugom posebnom ostvarenju, kompozicija obuhvata adherentne ćelije izvedene iz placente i somatske matične ćelije. U posebnijem ostvarenju, pomenuta somatska matična ćelija je nervna matična ćelija, hepatična matična ćelija, pankreasna matična ćelija, endotelijalna matična ćelija, srčana matična ćelija, ili mišićna matična ćelija.
[0230]U drugim određenim ostvarenjima, drugi tip ćelija obuhvata oko, najmanje, ili ne više od, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, ili 50% ćelija u pomenutoj populaciji. U drugim određenim ostvarenjima, PDAC u pomenutoj kompoziciji obuhvataju najmanje 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ili 90% ćelija u pomenutoj kompoziciji. U drugim određenim ostvarenjima, adherentne ćelije izvedene iz placente obuhvataju oko, najmanje, ili ne više od, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, ili 45% ćelija u pomenutoj populaciji.
[0231]Ćelije u izolovanoj populaciji adherentnih ćelija izvedenih iz placente mogu da se kombinuje sa većim brojem ćelija drugog tipa, npr., sa populacijom matičnih ćelija, u odnosu od oko 100.000.000:1,
50.000.000:1, 20.000.000:1, 10.000.000:1, 5.000.000:1, 2.000.000:1,1.000.000:1, 500.000:1, 200.000:1, 100.000:1, 50.000:1, 20.000:1, 10.000:1, 5.000:1, 2.000:1, 1.000:1, 500:1, 200:1, 100:1, 50:1, 20:1, 10:1, 5:1, 2:1, 1:1; 1:2; 1:5; 1:10; 1:100; 1:200; 1:500; 1:1.000; 1:2.000; 1:5.000; 1:10.000; 1:20.000; 1:50.000; 1:100.000; 1:500.000; 1:1.000.000; 1:2.000.000; 1:5.000.000; 1:10.000.000; 1:20.000.000; 1:50.000.000; ili oko 1:100.000.000, poredeći brojeve ukupnih nukleotidne ćelije u svakoj populaciji. Ćelije u izolovanoj populaciji adherentnih ćelija izvedenih iz placente mogu da se kombinuju sa većim brojem ćelija većeg broja ćelijskih tipova, takođe.
[0232]U drugim ostvarenjima, populacija ćelija iz placente opisanih ovde,npr.,PDAC opisane gore, kombinuju se sa osteogenim adherentnim ćelijama iz placente (OPAC), npr., OPAC opisane u Objavi patenta Br.2010/0047214, pod nazivom " Methods and Compositions forTreatmentof Bone Defects With Placental Stem Cells," ili kombinovanjem sa angiogenetskim ćelijama izvedenim iz amniona
(AMDAC),npr.,AMDAC opisane u U.S. Objavi patenta Br. 2010/0124569, pod nazivom "Amnion Derived Angiogenic Cells".
5.5 PROIZVODNJA BANKE ĆELIJA IZ PLACENTE
[0233]Izolovane ćelije iz postpoođajnih placenti, npr., izolovane ćelije iz placente opisane u Odeljku 5.2.2, gore, mogu da se kultivišu brojnim različitim načinima da bi se proizveo set lotova, npr., gde je lot set pojedinačnih administrativnih doza, izolovanih ćelija iz placente. Takvi lotovi mogu, na primer, da se dobiju od ćelija iz placentnog perfuzata ili od ćelija iz enzimski razgrađenog placentnog tkiva. Setovi lotova ćelija iz placente, dobijenih iz većeg broja placenti, mogu se organizovati u banci izolovanih ćelija iz placente za,npr.,dugoročno čuvanje. Uopšteno, ćelije iz placente adherentne na plastiku za kulturu tkiva dobijaju se od inicijalne kulture placentnog materijala da se formira klica kulture, koja se razvija u kontrolisanim uslovima radi formiranja populacija ćelija iz približno ekvivalentnih brojeva dupliranja. Lotovi se poželjno izvode iz tkiva jedne placente, ali mogu da se izvedu iz tkiva većeg broja placenti.
[0234]Lotovi ćelija iz placente mogu da se dobiju kako sledi. Placentno tkivo se prvo razgrađuje,npr.,veštačkom, razgradnjom sa odgovarajućim enzimom,npr.,tripsinom ili kolagenazom( videti Odeljak5.3.3, gore). Poželjno, placentno tkivo obuhvata,npr.,ceo amnion, ceo horion, ili oba, iz jedne placente, ali može da obuhvata samo deo ili amniona ili horiona. Razgrađeno tkivo se kultiviše,npr.,za oko 1-3 nedelja, poželjno oko 2 nedelje. Nakon uklanjanja neadherentnih ćelija, kolonije velike gustine koje se formiraju prikupljaju se, npr., tripsinizacijom. Ove ćelije prikupljaju se i resuspenduju u odgovarajućoj zapremini podloge za kultivisanje, a potom se koriste za zasejavanje razvojih kultura. Razvojne kulture mogu da budu bilo kog rasporeda aparata odvojenih ćelijskih kultura, npr., fabrika ćelija od NUNC™. Ćelije mogu da se dele do bilo kog stepena tako da za zasejavanje razvojnih kultura sa, npr., 1 x IO<3>, 2 x 10<3>, 3 x IO3, 4 x IO3, 5 x IO3, 6 x IO3, 7 x 103, 8 x IO3, 9 x IO3,1 x IO4,1 x 104, 2 x IO4, 3 x IO4, 4 x IO4, 5 x 104, 6 x 104, 7 x IO4, 8 x 104, 9 x IO4, ili 10 x 104 ćelija/cm2. Poželjno, od oko 1 x IO3 do oko 1 x IO4 ćelija/cm<2>koristi se za zasejavanje svake razvojne kultura. Broj razvojnih kultura može da bude brojno veći ili manji u zavisnosti od određene placente(i) iz koje se dbijaju ćelije.
[0235]Razvojne kulture rastu dokgustina ćelija u kulturi ne dostigne određenu vrednost, npr., oko 1 x IO<5>ćelija/cm<2>. Ćelije mogu da se ili prikupljaju i krioprezervišu u ovoj tački, ili da budu presejane u nove razvojne kulture kao što je opisano gore. Ćelije mogu da budu presejane,npr.,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10,
11,12,13,14,15,16,17,18,19 ili 20 puta pre upotrebe. Zapis kumulativnog broja dupliranja populacije poželjno se vodi tokom razvoja kulture(a). Ćelije iz kulture mogu da se šire 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12,14, 16,18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38 ili 40 dupliranja, ili do 60 dupliranja. Poželjno, međutim, broj
dupliranja populacije, pre deljenja populacije ćelija u pojedinačne doze, je od oko 15 do oko 30. Ćelije mogu da se kultivišu kontinualno tokom postupka razmnožavanja, ili mogu da se zalede u jednoj ili više tačaka tokom razmnožavanja.
[0236]Ćelije koje se koriste za pojedinačne doze mogu da se zalede,npr.,da se krioprezervišu za kasniju upotrebu. Pojedinačne doze mogu da obuhvataju,npr.,oko 1 milion do oko 50 miliona ćelija po ml, i mogu da obuhvataju između oko IO<6>i oko 10<10>ćelija ukupno.
[0237]Stoga, banka ćelija iz placente može da bude napravljena postupkom koji obuhvata: razvoj primarne kulture ćelija iz placente iz humane postporođajne placente za prvi pluralitet dupliranja populacije; krioprezervacija pomenutih ćelija iz placente radi formiranja glavne banke ćelija; razvoj mnoštva ćelija iz placente iz glavne banke ćelija za drugi pluralitet dupliranja populacije; krioprezervacija pomenutih ćelija iz placente radi formiranja radne banke ćelija; razvoj mnoštva ćelija iz placente iz radne banke ćelija za treći pluralitet dupliranja populacije; i krioprezervacija pomenutih ćelija iz placente u pojedinačnim dozama, pri čemu pomenute pojedinčne doze kolektivno obuhvataju banku ćelija iz placente. Opciono, mnoštvo ćelija iz placente iz pomenutog trećeg pluraliteta dupliranja populacije može da se razvija za četvrti pluralitet dupliranja populacije i da se krioprezerviše u pojedinačne doze, pri čemu pomenute pojedinčne doze kolektivno obuhvataju banku ćelija iz placente.
[0238]Pomenuta primarna kultura ćelija iz placente može da obuhvata ćelije iz placente iz placentnog perfuzata. Alternativno pomenuta primarna kultura ćelija iz placente može da obuhvata ćelije iz placente iz razgrađenog placentnog tkiva. Pomenuta primarna kultura ćelija iz placente može da obuhvata ćelije iz placente iz placentnog perfuzata i iz razgrađenog placentnog tkiva. Sve pomenute ćelije iz placente u pomenutoj primarnoj kulturi ćelija iz placente mogu da budu iz iste placentd. Postupak može dalje da obuhvata fazu selekcije CD200<+>ili HLA-G- ćelija iz placente iz pomenutog mnoštva pomenutih ćelija iz placente iz pomenute radne banke ćelija radi formiranja pojedinčnih doza. Pomenute pojedinačne doze mogu da obuhvataju od oko IO<4>do oko IO<5>ćelija iz placente; pomenute pojedinačne doze mogu da obuhvataju od oko IO<5>do oko IO<6>ćelija iz placente; pomenute pojedinačne doze obuhvataju od oko IO<6>do oko IO<7>ćelija iz placente. Pomenute pojedinačne doze mogu da obuhvataju od oko IO<7>do oko IO<8>ćelija iz placente; pomenute pojedinačne doze mogu da obuhvataju od oko IO<8>do oko IO<9>ćelija iz placente pomenute pojedinačne doze mogu da obuhvataju od oko IO<9>do oko IO<10>ćelija iz placente.
[0239]Poželjno, donor od kog je dobijena placenta (npr., majka) testira se za najmanje jedan patogen.
Ako su ovi testovi pozitivni za testirani patogen, ceo lot iz placente se odbacuje. Takvo testiranje može da se izvede u bilo koje vreme tokom proizvodnje lotova ćelija iz placente, npr., tokom razvoja kulture. Patogeni čije se prisustvo testira mogu da uključuju, bez ograničenja, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, hepatitis E, humani imunodeficijentni virus (tipa I i II), citomegalovirus, herpesvirus, i slično.
5.6 ČUVANJE ĆELIJA IZ PLACENTE
[0240]Izolovane ćelije iz placente,npr.,izolovane ćelije iz placente opisane u Odeljku 5.3.2, gore, mogu da se čuvaju, to jest, stave u uslove koji omogućavaju dugoročno čuvanje, ili uslove koji inhibiraju ćelijsku smrt,npr.,apoptozom ili nekrozom.
[0241]Ćelije iz placente mogu da se čuvaju korišćenjem,npr.,kompozicije koja obuhvata inhibitor apoptoze, inhibitor nekroze i/ili perfluorougljenik koji nosi kiseonik, kao što je opisano u srodnoj U.S. Objavi prijave patenta Br. 2007/0190042. Postupak čuvanja populacije ćelija, koristan u postupcima i kompozicijama opisanim ovde, obuhvata dovođenje u kontakt populacije ćelija sa kompozicijom za prikupljanje ćelija koja obuhvata inhibitor apoptoze i perfluorougljenik koji nosi kiseonik, pri čemu je pomenuti inhibitor apoptoze prisutan u količini i za vreme dovoljno za smanjenje ili sprečavanje apoptoze u populaciji ćelija, u poređenju sa populacijom ćelija koje nisu u kontaktu sa inhibitorom apoptoze. Na primer, pomenuti inhibitor apoptoze je inhibitor kaspaze. Alternativno, pomenuti inhibitor apoptoze je JNK inhibitor. Naročito pomenuti JNK inhibitor ne podešava diferencijaciju ili proliferaciju pomenutih ćelija. Pomenuta kompozicija za prikupljanje ćelija može da obuhvata pomenuti inhibitor apoptoze i pomenuti perfluorougljenik koji nosi kiseonik u odvojenim fazama. Alternativno, pomenuta kompozicija za prikupljanje ćelija može da obuhvata pomenuti inhibitor apoptoze i pomenuti perfluorougljenik koji nosi kiseonik u emulziji. Kompozicija za prikupljanje ćelija može dodatno da sadrži emulgator,npr.,lecitin. Pomenuti inhibitor apoptoze i pomenuti perperfluorougljenik mogu da budu između oko 0°C i oko 25°C u vreme kontakta ćelija. Pomenuti inhibitor apoptoze i pomenuti perperfluorougljenik mogu da budu između oko 2°C i 10°C, ili između oko 2°C i oko 5°C, u vreme kontakta ćelija. Pomenuti kontakt može da se izvede tokom transporta pomenute populacije ćelija. Alternativno, pomenuti kontakt može da se izvede tokom zamrzavanja i odmrzavanja pomenute populacije ćelija.
[0242]Populacije ćelija iz placente mogu da se čuvaju,npr.,postupkom koji obuhvata dovođenje u kontakt pomenute populacije ćelija sa inhibitorom apoptoze i jedinjenje za očuvanje organa, pri čemu pomenuti inhibitor apoptoze prisutan je u količini i za vreme dovoljno da smanji ili spreči apoptozu u populaciji ćelija, u poređenju sa populacijom ćelija koja nije u kontaktu sa inhibitorom apoptoze. Na primer, jedinjenje za očuvanje organa je UW rastvor (opisan u U.S. Patentu Br. 4,798,824; takođe poznat kao ViaSpan;videtitakođe Southard et al., Transplantation 49(2):251-257 (1990)) ili rastvor opisan u Stem et al., U.S. Patentu Br. 5,552,267. Alternativno, pomenuto jedinjenje za očuvanje organa može da bude hidroksietil škrob, laktobionska kiselina, rafinoza ili njihova kombinacija. Kompozicija za prikupljanje ćelija može dodatno da obuhvata perfluorougljenik koji nosi kiseonik, ili u dve faze ili kao emulzija.
[0243]Ćelije iz placente mogu da budu u kontaktu sa kompozicijom za prikupljanje ćelija koja obuhvata inhibitor apoptoze i perfluorougljenik koji nosi kiseonik, jedinjenje za očuvanje organa ili njihovu kombinaciju, tokom perfuzije. Alternativno pomenute ćelije mogu da budu u kontaktu tokom postupka razgradnje tkiva,npr.,enzimska digestija. Ćelije iz placente mogu da budu u kontaktu sa pomenutim jedinjenjem za prikupljanje ćelija nakon prikupljanja perfuzijom, ili nakon prikupljanja razgradnjom tkiva,npr.,enzimskom digestijom.
[0244]Obično, tokom prikupljanja, obogaćenja i izolovanja ćelija iz placente, poželjno je da se minimizira ili eliminiše ćelijski stres usled hipoksičnog i mehaničkog streca. Stoga, ćelija, ili populacija ćelija, može da bude izložena hipoksičnom uslovu tokom prikupljanja, obogaćenja i izolovanja za manje od šest sati tokom pomenutog čuvanja, pri čemu je hipoksični uslov koncentracija kiseonika koja je manja od koncentracije kiseonika normalne krvi. Pomenuta populacija ćelija može da se izloži pomenutom hipoksičnom uslovu u toku manje od dva sata tokom pomenutog čuvanja. Alternativno, pomenuta populacija ćelija može da se izloži hipoksičnom uslovu tokom manje od jednog sata, ili manje od trideset minuta, ili se ne izlaže hipoksičnom uslovu, tokom prikupljanja, obogaćenja ili izolovanja. Pomenuta populacija ćelija može da ne bude izložena stresu usled smicanja tokom prikupljanja, obogaćenja ili izolovanja.
[0245]Ćelije iz placente mogu da budu krioprezervisane,npr.,u podlozi za krioprezervisanje u malim kontejnerima,npr.,ampulama. Odgovarajuća podloga za krioprezervisanje uključuje, ali nije ograničena na, podlogu za kultivisanje uključujući,npr.,podlogu za rast, ili podlogu za zamrzavanje ćelija, na primer komercijalno dostupna podloga za zamrzavanje ćelija,npr.,C2695, C2639 ili C6039 (Sigma). Podloga za krioprezervisanje poželjno obuhvata DMSO (dimetilsulfoksid), u koncentraciji od oko 2 % do oko 15 %
(v/v),npr.,oko 10 % (v/v). Podloga za krioprezervisanje može da obuhvata dodatne agense, na primer, metilcelulozu i/ili glicerol. Ćelije iz placente se poželjno hlade na oko l°C/min tokom krioprezervacije.
Poželjna temperatura krioprezervacije je oko -80°C do oko -180°C, poželjno oko -125°C do oko -140°C. Krioprezervisane ćelije mogu da se prenesu do tečnog azota pre odmrzavanja za upotrebu. Na primer, jednom kad ampule dostignu oko -90°C, prenose se do mesta čuvanja tečnog azota. Krioprezervacija može takođe da se završi korišćenjem zamrzivača kojim se kontroliše brzina. Krioprezervisane ćelije poželjno odmrzavaju se na temperaturi od oko 25°C do oko 40°C, poželjno do temperature od oko 37°C.
5.7 KOMPOZICIJE KOJE OBUHVATAJU IZOLOVANE ĆELIJE IZ PLACENTE
[0246]Ćelije iz placente opisane ovde,npr.,u Odeljku 5.4.2, mogu da se kombinuju sa bilo kojim fiziološki prihvatljivim ili medicinski prihvatljivim jedinjenjem, kompozicijom ili uređajem za primenu u postupcima i kompozicijama opisanim ovde. Kompozicije korisne u postupcima tretiranja obezbeđenim ovde mogu da obuhvataju bilo koju jednu ili više od ćelija iz placente opisane ovde( videti Odeljak5.4.2, gore). U određenim ostvarenjima, kompozicija je farmaceutski prihvatljiva kompozicija,npr.,kompozicija koja obuhvata ćelije iz placente u farmaceutski prihvatljivom nasaču.Videti Odeljak5.9.2, dole.
[0247]Kompozicija koja obuhvata izolovane ćelije iz placente može dodatno da sadrži matriks,npr.,decelularizovani matriks ili sintetički matriks. Pomenuti matriks može da bude trodimenzionalni skafold. Naročito, pomenuti matriks obuhvata kolagen, želatin, laminin, fibronektin, pektin, ornitin ili vitronektin. Alternativno, matriks je amnionska membrana ili biomaterijal izveden iz amnionske membrane. Pomenuti matriks može da obuhvata vanćelijski membranski protein. Dalje, pomenuti matriks može da obuhvata sintetičko jedinjenje ili bioaktivno jedinjenje. Pomenuto bioaktivno jedinjenje može da bude faktor rasta, citokin, antitelo, ili organski molekul manje od 5.000 daltona.
[0248]Kompozicija korisna u postupcima tretiranja unutar konteksta ovog pronalaska može da obuhvata medijum kondicioniran bilo kojima od prethodnih ćelija iz placente, ili bilo kojih od prethodnih populacija ćelija iz placente.
5.7.1Krioprezervisane Izolovane ćelije iz placente
[0249]Populacija izolovanih ćelija iz placente korisna u postupcima i kompozicijama opisanim ovde može da se čuva, na primer, krioprezervisanjem radi kasnije upotrebe. Postupci za krioprezervisanje ćelija, kao što su matične ćelije, dobro su poznati u ovoj oblasti. Populacija izolovanih ćelija iz placente može da se pripremi u obliku koji se lako može dati pojedincu,npr.,populacija izolovanih ćelija iz placente koja je sadržana u kontejneru koji je pogodan za medicinsku primenu. Takav kontejner može da bude, na primer, špric, sterilna plastična kesa, boca, tegla, ili drugi kontejner iz kojeg populacija izolovanih ćelija iz placente može lako da se istoči. Na primer, kontejner može da bude kesa za krv ili druga plastična, medicinski prihvatljiva kesa pogodna za intravenozno davanje tečnosti primaocu. Kontejner, u određenim ostvarenjima, je jedan koji omogućava krioprezervaciju kombinovane ćelijske populacije.
[0250]Krioprezervisana populacija izolovanih ćelija iz placente može da obuhvata izolovanu ćeliju iz placente izvedenu iz jednog donora, ili iz više donora. Populacija izolovanih ćelija iz placente može da se potpuno HLA-odgovara namerenom primaocu, ili delimično ili potpuno HLA-neodgovara.
[0251]Prema tome, u jednom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente mogu da se koriste u postupcima opisanim ovde u obliku kompozicije koja obuhvata populaciju ćelija iz placente adherentih na plastiku za kulturu tkviva u kontejneru. U posebnom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su krioprezervisane. U drugom posebnom ostvarenju, kontejner je kesa, boca ili tegla. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta kesa je sterilna plastična kesa. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta kesa je pogodna za, omogućava ili olakšava intravenozno davanje pomenute populacije izolovanih ćelija iz placente,npr.,intravenoznom infuzijom. Kesa može da sadrži višestruke lumene ili pregrade koje su međusobno povezane da omoguće mešanje izolovanih ćelija iz placente i jednog ili više drugih rastvora,npr.,leka, pre, ili tokom, davanja. U drugom posebnom ostvarenju, kompozicija obuhvata jedno ili više jedinjenja koja olakšavaju kriprezervisanje kombinovanih ćelijskih populacija. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta populacija izolovanih ćelija iz placente je sadržana u fiziološki prihvatljivom vodenom rastvoru. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuti fiziološki prihvatljivi vodeni rastvor je 0,9% rastvor NaCI. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta populacija izolovanih ćelija iz placente obuhvata ćelije iz placente koje su HLA-odgovarajuće primaocu pomenute ćelijske populacije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenuta kombinovana ćelijska populacija obuhvata ćelije iz placente koje su najmanje delimično HLA-neodgovarajuće primaocu pomenute ćelijske populacije. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute izolovane ćelije iz placente izvedene su iz više donora.
[0252]U određenim ostvarenjima, izolovane ćelije iz placente u kontejneru su izolovane CD10<+>, CD34", CD105<+>i CD200<+>ćelije iz placente, pri čemu su pomenute ćelije krioprezervisane, i sadržane su u kontejneru. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200+ ćelije iz placente takođe su CD45" ili CD90<+>. U drugom posebnom ostvarenju, pomenute CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente takođe su CD45" i CD90<+.>U drugom posebnom ostvarenju, CD34", CD10\ CD105<+>i CD200+ ćelije iz placente su dodatno jedna ili više od CD13<+>, CD29<+>, CD33<+>, CD38", CD44<+>, CD45", CD54<+>, CD62E", CD62L", CD62P", SH3<+>(CD73<+>), SH4<+>(CD73<+>), CD80", CD86", CD90<+>, SH2<+>(CD105<+>);CD106/VCAM<+>, CD117", CD144/VE-cadherin<dim>, CD184/CXCR4", CD133", OCT-4<+>, SSEA3", SSEA4", ABC-p<+>, KDR" (VEGFR2), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", HLA-G", ili liganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+>, ili anv njihova kombinacija. U drugom posebnom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>i CD200<+>ćelije iz placente su dodatno CD13<+>, CD29<+>, CD33<+>, CD38", CD44<+>, CD45", CD54/ICAM<+>, CD62E", CD62L", CD62P", SH3<+>(CD73<+>), SH4<+>(CD73<+>), CD80", CD86", CD90<+>, SH2<+>(CD105<+>), CD106/VCAM<+>, CD117", CD144/VE-cadherin<dim>, CD184/CXCR4, CD133 , OCT-4<+>, SSEA3, SSEA4, ABC-p<+>, KDR (VEGFR2 ), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR, HLA-G", i liganda programirane ćelijske smrti-1 (PDL1)<+>.
[0253]U određenim drugim ostvarenjima, gore naznačene izolovane ćelije iz placente su izolovane CD200<+>, HLA-G- ćelije iz placente, pri čemu su pomenute ćelije krioprezervisane, i sadržane su u kontejneru. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD73<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije koje su krioprezervisane, i sadržane u kontejneru. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD200<+>, OCT-4<+>matične ćelije koje su krioprezervisane, i sadržane u kontejneru. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD73<+>, CD105<+>ćelije koje su krioprezervisane, i sadržane u kontejneru, i pri čemu pomenute izolovane ćelije iz placente olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu kada se kultivišu sa populacijom ćelija iz placente u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su CD73<+>, CD105<+>, HLA-G" ćelije koje su krioprezervisane, i sadržane u kontejneru. U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente su OCT-4<+>ćelije iz placente koje su krioprezervisane, i sadržane u kontejneru, i pri čemu pomenute ćelije olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu kada se kultivišu sa populacijama ćelija iz placente u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca nalik embrioidu.
[0254]Gore naznačene izolovane ćelije iz placente su matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente koje su CD34", CD10<+>i CD105<+>kao što je detektovano protočnom citometrijom(npr.,PDAC). U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente imaju potencijal da se diferenciraju u ćelije nervnog fenotipa, ćelije osteogenog fenotipa, ili ćelije hondrogenog fenotipa. Prema ovom pronalasku, izolovane CD34", CD10<+>, CD105+ ćelije iz placente su dodatno CD200<+.>U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD90<+>ili CD45", kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, izolovane CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije iz placente su dodatno CD90<+>ili CD45", kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200+ ćelije iz placente su dodatno CD90<+>ili CD45", kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>ćelije su dodatno CD90<+>i CD45", kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>, CD90<+>, CD45" ćelije su dodatno CD80" i CD86", kao što je detektovano protočnom citometrijom. U drugom posebnom ostvarenju, CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelije su dodatno jedna ili više od CD29<+>, CD38", CD44<+>, CD54<+>, CD80", CD86", SH3<+>ili SH4<+>. U drugom posebnom ostvarenju, ćelije su dodatno CD44<+>. U posebnom ostvarenju bilo kojih od izolovanih CD34", CD10<+>, CD105<+>ćelija iz placente gore, ćelije su dodatno jedna ili više od CD117", CD133", KDR" (VEGFR2 ), HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR", i/ili PDL1<+>.
[0255]U posebnom ostvarenju bilo kojih od prethodno krioprezervisanih izolovanih ćelija iz placente, pomenuti kontejner je kesa. U raznim određenim ostvarenjima, pomenuti kontejner obuhvata oko, najmanje, ili najviše 1 x IO<6>pomenutih izolovanih ćelija iz placente, 5 x IO<6>pomenutih izolovanih ćelija iz placente, 1 x IO<7>pomenutih izolovanih ćelija iz placente, 5 x IO<7>pomenutih izolovanih ćelija iz placente, 1 x 10<8>pomenutih izolovanih ćelija iz placente, 5 x IO<8>pomenutih izolovanih ćelija iz placente, 1 x IO<9>pomenutih izolovanih ćelija iz placente, 5 x IO<9>pomenutih izolovanih ćelija iz placente, 1 x IO<10>pomenutih izolovanih ćelija iz placente, ili 1 x IO<10>pomenutih izolovanih ćelija iz placente. U drugim određenim ostvarenjima bilo kojih od prethodnih krioprezervisanih populacija, pomenute izolovane ćelije iz placente presejane su oko, najmanje, ili ne više od 5 puta, ne više od 10 puta, ne više od 15 puta, ili ne više od 20 puta. U drugom posebnom ostvarenju bilo kojih od prethodnih krioprezervisanih izolovanih ćelija iz placente, pomenute izolovane ćelije iz placente razvijaju se unutar pomenutog kontejnera.
[0256]U određenim ostvarenjima, jedna jedinična doza adherentnih ćelija izvedenih iz placente može da obuhvata, u različitim ostvarenjima, oko, najmanje, ili ne više od 1 x IO<5>, 5 x IO<5>,1 x IO<6>, 5 x 10<6>,1 x IO7, 5 x IO7,1 x IO8, 5 x IO8,1 x IO9, 5 x IO9,1 x IO10, 5 x IO10,1 x IO11 ili više adherentnih ćelija izvedenih iz placente. U određenim ostvarenjima, farmaceutske kompozicije obezbeđene ovde obuhvataju populacije adherentnih ćelija izvedenih iz placente, koje obuhvataju 50% vijabilnih ćelija ili više (to jest, najmanje 50% ćelija u populaciji su funkcionalne ili žive). Poželjno, najmanje 60% ćelija u populaciji su vijabilne. Poželjnije, najmanje 70%, 80%, 90%, 95%, ili 99% ćelija u populaciji u farmaceutskoj kompoziciji su vijabilne.
5.7.2Genetički modifikovane ćelije iz placente
[0257]Ovde su dalje obezbeđene ćelije iz placente,npr.,bilo koje od multipotentnih ćelija iz placente ili ćelije iz placente opisane u Odeljku 5.2.2, gore, ili farmaceutske kompozicije koje obuhvataju takve ćelije iz placente, pri čemu su ćelije iz placente genetički modifikovane radi proizvodnje rekombinantnih ili egzogenih citokina povezanih sa, ili koji promovišu, angiogenezom. U određenim ostvarenjima, pomenuti proteini koji olakšavaju angiogenezu su jedan ili više od faktora rasta hepatocita (HGF), vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF)( npr.,VEGFD), faktora rasta fibroblasta (FGF)( npr.,FGF2), angiogenina (ANG), epidermalnog faktora rasta (EGF), epitelno-neutrofilno-aktivirajućeg proteina 78 (ENA-78), folistatina, faktora stimulacije kolonija granulocita (G-CSF), onkogen proteina regulacije rasta (GRO), interleukina-6 (IL-6), IL-8, leptina, monocitnog hemotaksnog proteina-1 (MCP-1), MCP-3, subjedinice faktora rasta izvedenog iz trombocita B (PDGFB), rantesa, transformišućeg faktora rasta beta 1 (TGF-Bl), trombopoietina (Tpo), tkivnog inhibitora metaloproteinaza 1 (TIMP1), TIMP2, i/ili receptora za urokinaza plazminogen aktivator (uPAR).
[0258]Mogu da se koriste postupci genetičkog inženjeringa ćelija, na primer sa retroviralnim vektorima, adenoviralnim vetorima, adeno-povezanih viralnih vektora, polietilen glikolom, ili drugim postupcima poznatim stručnjacima iz ove oblasti. Oni uključuju upotrebu ekspresionih vektora koji prenose i eksprimiraju molekule nukleinskih kiselina u ćelijama. (Videti Geoddel; Gene Expression Technologv: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)). Vektor DNA može da se uvede u prokariotske ili eukaritske ćelije preko konvencionalni h postupaka transformiranja ili transfekcije. Odgovarajući postupci za transformisanje ili transfekciju ćelija domaćina mogu se naći u Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory press (1989), i drugim laboratorijskim udžbenicima.
[0259]Ćelije iz placente,npr.,PDAC opisane u Odeljku 5.2, gore, mogu se genetski modifikovati uvođenjem DNA ili RNA u ćeliju,npr.,DNA ili RNA koje kodiraju protein od interesa, postupcima koji uključuju viralni transfer, uključujući upotrebu DNA ili RNA viralnih vektora, kao što su retrovirusi (uključujući lentiviruse), Simian virus 40 (SV40), adenovirus, Sindbis virus, i goveđi papilomavirus na primer; hemijski transfer, uključujući postupke kalcijum fosfat transfekcije i DEAE dekstran transfekcije; membranski transfer fuzijom, korišćenjem DNA-napunjene membranskih vezikula kao što su lipozomi, duhovi ćelija crvenih krvnih zrnaca, i protoplasti, na primer; ili postupci fizičkog transfera, kao što su mikroinjektiranje, elektroporacija, ili goli DNA transfer. Ćelije iz placente mogu da budu genetski izmenjene umetanjem egzogene DNA, ili supstitucijom segmenta ćelijskog genoma egzogenom DNA. Umetanje egzogene DNA sekvence(a) može da se postigne,npr.,homologom rekombinacijom ili viralnom integracijom u genom ćelije domaćina, ili ili inkorporiranjem DNA u ćeliju, naročito u njen nukleus, korišćenjem plazmidnog ekspresionog vektora i sekvence nuklearne lokalizacije. DNA može da obuhvata jedan ili više promotera koji omogućavaju pozitivnu ili negativnu indukciju ekspresije proteina od interesa korišćenjem određenih hemikalija/lekova,npr.,tetraciklin; promoteri mogu, u drugim ostvarenjima, da budu konstitutivni.
[0260]Kalcijum fosfat transfekcija može da se koristi da se uvede,npr.,plazmidna DNA koja sadrži polinukleotidnu sekvencu koja kodira protein od interesa, u ćeliju. U određenim ostvarenjima, DNA se kombinuje sa rastvorom kalcijum hlorida, onda se dodaje fosfatnom puferiskom rastvoru. Jednom kad se formira talog, rastvor se dodaje direktno kultivisanim ćelijama. Tretiranje sa DMSO ili glicerolom može da se koristi za poboljšanje efikasnosti transfekcije, a nivoi odgovarajućih transfektanata mogu da se poboljšaju korišćenjem bis-hidroksietilamino etansulfonata (BES). Kalcijum fosfat transfekcioni sistemi komercijalno su dostupni( npr.,PROFECTION<®>, Promega Corp., Madison, Wis.). DEAE-dekstran transfekcija takođe može da se koristi.
[0261]Izolovane ćelije iz placente mogu takođe da se podvrgnu genetičkom inženjeringu mikroinjekcijom. U određenim ostvarenjima, staklena mikropipeta uvodi se u nukleus ćelija pod svetlosnim mikroskopom da se ubrizga DNA ili RNA.
[0262]Ćelije iz placente mogu takođe da se podvrgnu genetičkom inženjeringu korišćenjem elektroporacije. U određenim ostvarenjima, DNA ili RNA dodaju se suspenziji kultivisanih ćelija, i DNA/RNA-ćelijska suspenzija stavlja se između dve elektrode i podvrgava se električnom pulsu, uzrokujući prolaznu permeabilnost u ćelijskoj spoljnoj membrani koja se manifestuje izgledom pora na membrani.
[0263]Lipozomalna dostava DNA ili RNA za genetsko modifikovanje ćelija može se izvesti korišćenjem katoničnih lipozoma, opciono uključujući dioleoil fosfatidiletanolamin (DOPE) ili dioleoil fosfatidilholin (DOPC),npr.,LIPOFECTIN<®>(Life Technologies, Inc.). Drugi komercijalno dostupni sistemi za dostavljanje uključuju EFFECTENE™ (Qiagen), DOTAP (Roche-Molecular Biochemicals), FUGENE 6™. (Roche Molecular Biochemicals), i TRANSFECTAM<®>(Promega).
[0264]Viralni vektori mogu da se koriste za genetičku izmenu ćelija iz placente dostavljanjem,npr.,ciljnog gena, polinukleotida, antisens molekula, ili sekvenci ribozoma u ćelije. Retroviralni vektori efektivni su za transdukciju brzog deljenja ćelija, iako je broj retroviralnih vektora razvijen za efektivniji transfer DNA u nedeljive ćelije takođe. Pakovanja ćelijskih linija za retroviralne vektore poznata su stručnjacima iz ove oblasti. U određenim ostvarenjima, retroviralni DNA vektor sadrži dva retroviralna LTR tako da je prvi LTR na položaju 5' za SV40 promoter, koji je radno vezan za metu sekvence gena kloniranu u multiple mesto za kloniranje, praćeno 3' drugim LTR. Jednom formiran, retroviralni DNA vektor se prenosi u pakovanje ćelijskih linija korišćenjem kalcijum fosfat-posredovane transfekcije, kao što je prethodno opisano. Nakon približno 48 sati proizvodnje virusa, prikuplja se viralni vektor, sad sadržavajući metu sekvence gena. Postupci transfekcije ćelija korišćenjem lentiviralnih vektora, rekombinantnih herpes virusa, adenoviralnih vektora ili vektora alfavirusa poznati su u ovoj oblasti.
[0265]Uspešna transfekcija ili transdukcija ciljne ćelija može da se demonstrira korišćenjem genetičkih markera, u postupku koji je poznat stručnjacima iz ove oblasti. Za zeleni fluorescentni protein od Aequorea victoria, na primer, pokazalo se da je efektivan marker za identifikaciju i praćenje genetički modifikovanih hematopoetskih ćelija. Alternativni selektibilni markeri uključuju B-Gal gen, skraćeni receptor faktora rasta nerava, ili markere za selekciju lekova (uključujući ali ne ograničavajući se na NEO, MTX, ili higromicin).
5.7.3Farmaceutske kompozicije
[0266]Populacije izolovanih ćelija iz placente, npr., PDAC, ili populacije ćelija koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente, mogu da se formulišu u farmaceutske kompozicije za upotrebuin vivo, npr.,u postupcima tretiranja unutar konteksta ovog pronalaska. Takve farmaceutske kompozicije obuhvataju populaciju izolovanih ćelija iz placente, ili populaciju ćelija koja obuhvata izolovane ćelije iz placente, u farmaceutski prihvatljivom nosaču,npr.,slanom rastvoru ili drugom prihvaćenom fiziološki-prihvatljivom rastvoru zain vivodavanje. Farmaceutske kompozicije koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente opisane ovde mogu da obuhvataju bilo koje, ili bilo koju kombinaciju, populacija izolovanih ćelija iz placente, ili izolovane ćelije iz placente, opisane bilo gde ovde. Farmaceutske kompozicije mogu da obuhvataju fetalne, materinske, ili i fetalne i materinske izolovane ćelije iz placente. Farmaceutske kompozicije obezbeđene ovde mogu dalje da obuhvataju izolovane ćelije iz placente dobijene iz jednog pojedinca ili placente, ili iz više pojedinaca ili placenti.
[0267]Farmaceutske kompozicije obezbeđene ovde mogu da obuhvataju bilo koji broj izolovanih ćelija iz placente. Na primer, jedna jedinična doza izolovanih ćelija iz placente može da obuhvata, u različitim ostvarenjima, oko, najmanje, ili ne više od 1 x IO5, 5 x IO5,1 x IO6, 5 x 106,1 x IO7, 5 x IO7,1 x IO8, 5 xIO<8>,1 x IO<9>, 5 x 10<9>,1 x IO<10>, 5 x IO<10>,1 x 10<11>ili više izolovanih ćelija iz placente.
[0268]Farmaceutske kompozicije mogu da obuhvataju populacije ćelija koje obuhvataju 50% vijabilnih ćelija ili više (to jest, najmanje 50% ćelija u populaciji su funkcionalne ili žive). Poželjno, najmanje 60% ćelija u populaciji su vijabilne. Poželjnije, najmanje 70%, 80%, 90%, 95% ili 99% ćelija u populaciji u farmaceutskoj kompoziciji su vijabilne.
[0269]Farmaceutske kompozicije mogu da obuhvataju jedno ili više jedinjenja koja,npr.,olakšavaju engraftment( npr.,anti-T-ćelijskog receptora antitela, imunosupresant, ili slično); stabilizatore kao što su albumin, dekstran 40, želatin, hidroksietil škrob, plazmalit, i slično.
[0270]Kada se formuliše kao injektibilan rastvor, u jednom ostvarenju, farmaceutska kompozicija obuhvata oko 1% do 1,5% HSA i oko 2,5% dekstrana. Poželjno, farmaceutska kompozicija obuhvata od oko 5 x IO<6>ćelija po mililitru do oko 2 x 10<7>ćelije po mililitru u rastvoru koji obuhvata 5% HSA i 10% dekstrana, opciono koji obuhvata imunosupresant,npr.,ciklosporin A od,npr.,10 mg/kg.
[0271]Farmaceutska kompozicija,npr.,rastvor može da obuhvata veći broj ćelija, npr., izolovane ćelije iz placente, na primer, matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente, pri čemu pomenuta farmaceutska kompozicija obuhvata između oko 1,0 ±0,3 x IO<6>ćelija po mililitru do oko 5,0 ± 1,5 x IO<6>ćelija po mililitru. Alternativno, farmaceutska kompozicija može da obuhvata između oko 1,5 x 10 ćelija po mililitru do oko 3,75 x IO<6>ćelija po mililitru. Farmaceutska kompozicija može da obuhvata između oko 1 x IO<6>ćelija/mL do oko 50 x IO<6>ćelija/mL, oko 1 x IO<6>ćelija/mL do oko 40 x 10<6>ćelija/mL, oko 1 xIO<6>ćelija/mL do oko 30 x IO<6>Ćelija/mL, oko 1 xIO<6>Ćelija/mL do oko 20 x 10<s>Ćelija/mL, oko 1 x IO<6>ćelija/mL do oko 15 x IO<6>Ćelija/mL, ili oko 1 x IO<6>Ćelija/mL do oko 10 x IO<6>Ćelija/mL. Farmaceutska kompozicija može da obuhvata skupine ćelija koje se ne vide( tj.,skupine ćelija koje nisu makroćelije), ili suštinski ne tako vidljive skupine. Kao što se ovde koristi," skupine makroćelija" znači agregaciju ćelija vidljivu bez uveličavanja, npr., vidljivu golim okom, i uopšteno odnosi se na ćelijsku agregaciju veću od oko 150 mikrona. Farmaceutska kompozicija može da obuhvata oko 2,5%, 3,0%, 3,5%, 4,0%, 4,5%, 5,0%, 5,5%, 6,0%, 6,5%, 7,0%, 7,5% 8,0%, 8,5%, 9,0%, 9,5% ili 10% dekstrana, npr., dekstran-40. Pomenuta kompozicija može da obuhavta oko 7,5% do oko 9% dekstrana-40. Pomenuta kompozicija može da obuhvata oko 5,5 % dekstrana-40. Farmaceutska kompozicija može da obuhvata od oko 1% do oko 15% humanog seruma albumina (HSA). Farmaceutska kompozicija može da obuhvata oko 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 65, 75, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% ili 15% HSA. Naročito, pomenute ćelije su krioprezervisane i odmrznute. Dodatno, pomenute ćelije se filtriraju kroz 70U.M do 100 u.M filter. Naročito, pomenuta kompozicija obuhvata skupine ćelija koje se ne vide. Naročito, pomenuta kompozicija obuhvata manje od oko 200 skupina ćelija po IO<6>ćeliji, pri čemu su pomenute skupine ćelija vidljive samo pod mikroskopom,npr.,svetlosni mikroskop. Pomenuta kompozicija može da obuhvata manje od oko 150 skupina ćelija po 10<s>ćelija, pri čemu su pomenute skupine ćelija vidljive samo pod mikroskopom,npr.,svetlosni mikroskop. Pomenuta kompozicija može da obuhvata manje od oko 100 skupina ćelija po IO<6>ćelija, pri čemu pomenute su skupine ćelija vidljive samo pod mikroskopom,npr.,svetlosni mikroskop.
[0272]Naročito, farmaceutska kompozicija obuhvata oko 1,0 ±0,3 x 10<6>ćelija po mililitru, oko 5,5% dekstrana-40 (w/v), oko 10% HSA (w/v), i oko 5% DMSO (v/v).
[0273]Farmaceutska kompozicija može da obuhvata mnoštvo ćelija,npr.,mnoštvo izolovanih ćelija iz placente u rastvoru koji obuhvata 10% dekstrana-40, pri čemu farmaceutska kompozicija obuhvata između oko 1,0 ± 0,3 x IO<6>ćelija po mililitru do oko 5,0 ±1,5 x IO<6>ćelija po mililitru, i gde pomenuta kompozicija ne obuhvata skupine ćelija vidljive golim okom( tj.,ne obuhvata skupine makroćelija). Farmaceutska kompozicija može da obuhvata između oko 1,5 x IO<6>ćelija po mililitru do oko 3,75 x IO<6>ćelija po mililitru. Na primer, pomenute ćelije su krioprezervisane i odmrznute. Pomenute ćelije mogu da se filtriraju kroz 70 U.M do 100 U.M filter. Pomenuta kompozicija može da obuhvata manje od oko 200 skupina mikroćelija (to jest, skupine ćelija koje su vidljive samo uveličane) po IO<6>ćelija. Farmaceutska kompozicija može da obuhvata manje od oko 150 skupina mikroćelija po 10<6>ćelija. Farmaceutska kompozicija obuhvata manje od oko 100 skupina mikroćelija po IO6 ćelija. Farmaceutska kompozicija može da obuhvata manje od 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, ili 2% DMSO, ili manje od 1%, 0,9%, 0,8%, 0,7%, 0,6%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, ili 0,1% DMSO.
[0274]Pomenute kompozicije mogu da se proizvedu jednim od postupaka opisanim ovde. Na primer, farmaceutska kompozicija obuhvata ćelije, pri čemu se farmaceutska kompozicija proizvodi postupkom koji obuhvata filtriranje rastvora koji obuhvata ćelije iz placente,npr.,matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente, radi formiranja filtriranog rastvora koji sadrži ćelije; razblaživanje rastvora koji sadrži ćelije prvim rastvorom do oko 1 do 50 x IO<6>,1 do 40 x IO<6>,1 do 30 x IO<6>,1 do 20 x 10<6>,1 do 15 x IO<6>, ili 1 do 10 x IO<6>ćelija po mililitru,npr.,pre krioprezervacije; i razblaživanje dobijenog filtriranog rastvora koji sadrži ćelije drugim rastvorom koji obuhvata dekstran, ali ne obuhvata humani serum albumin (HSA) radi proizvodnje pomenute kompozicije. Na primer, pomenuto razblaživanje je do ne više od oko 15 x IO<6>ćelija po mililitru. Na primer, pomenuto razblaživanje je do ne više od oko 10 ± 3 x IO<6>ćelija po mililitru. Na primer, pomenuto razblaživanje je do ne više od oko 7,5 x IO<6>ćelija po mililitru. Ako filtrirani rastvor koji sadrži ćelije, pre razblaženja, obuhvata manje od oko 15 x IO<6>ćelija po mililitru, filtracija može da bude opcionalna. Ako filtrirani rastvor koji sadrži ćelije, pre razblaženja, obuhvata manje od oko 10 ± 3 x IO<6>ćelija po mililitru, filtracija može da bude opcionalna. Ako filtrirani rastvor koji sadrži ćelije, pre razblaženja, obuhvata manje od oko 7,5 x IO<6>ćelija po mililitru, filtracija može da bude opcionalna.
[0275]Ćelije mogu da budu krioprezervisane između pomenutog razblaživanja prvim rastvorom za razblaženje i pomenutog razblaživanja drugim rastvorom za razblaženje. Prvi rastvor za razblaženje može da obuhvata dekstran i HSA. Dekstran u prvom rastvoru za razblaženje ili drugom rastvoru za razblaženje može da bude dekstran bilo koje molekularne mase,npr.,dekstran koji ima molekularnu masu od oko 10 kDa do oko 150 kDa. Pomenuti dekstran u pomenutom prvom rastvoru za razblaženje ili pomenutom drugom rastvoru za razblaženje može da bude oko 2,5%, 3,0%, 3,5%, 4,0%, 4,5%, 5,0%, 5,5%, 6,0%, 6,5%, 7,0%, 7,5% 8,0%, 8,5%, 9,0%, 9,5% ili 10% dekstrana. Dekstran u pomenutom prvom rastvoru za razblaženje ili pomenutom drugom rastvoru za razblaženje može da bude dekstran-40. Dekstran u pomenutom prvom rastvoru za razblaženje ili pomenutom drugom rastvoru za razblaženje može da bude dekstran-40. Pomenuti dekstran-40 u pomenutom prvom rastvoru za razblaženje može da bude 5,0% dekstrana-40. Pomenuti dekstran-40 u pomenutom prvom rastvoru za razblaženje može da bude 5,5% dekstrana-40. Pomenuti dekstran-40 u pomenutom drugom rastvoru za razblaženje može da bude 10% dekstrana-40. Pomenuti HSA u pomenutom rastvoru koji obuhvata HSA može da bude 1 do 15 % HSA. Pomenuti HSA u pomenutom rastvoru koji obuhvata HSA može da bude oko 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% ili 15 % HSA. Pomenuti HSA u pomenutom rastvoru koji obuhvata HSA može da bude 10% HSA. Pomenuti prvi rastvor za razblaženje može da obuhvata HSA. Pomenuti HSA u pomenutom prvom rastvoru za razblaženje može da bude 10% HSA. Pomenuti prvi rastvor za razblaženje može da obuhvata krioprotektant. Pomenuti krioprotektant može da bude DMSO. Pomenuti dekstran-40 u pomenutom drugom rastvoru za razblaženje može da bude oko 10% dekstrana-40. Pomenuta kompozicija koja obuhvata ćelije obuhvata oko 7,5% do oko 9% dekstrana. Farmaceutska kompozicija može da obuhvata od oko 1,0 ±0,3 x 10<6>ćelija po mililitru do oko 5,0 ±1,5 x IO<6>ćelija po mililitru. Farmaceutska kompozicija može da obuhvata od oko 1,5 x IO6 ćelija po mililitru do oko 3,75 x IO6 ćelija po mililitru.
[0276]Farmaceutska kompozicija može da se proizvede postupkom koji obuhvata (a) filtriranje rastvora koji sadrži ćelije koji obuhvata ćelije iz placente, npr., matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente, pre krioprezervacije radi proizvodnje filtriranog rastvora koji sadrži ćelije; (b) krioprezervacija ćelija u filtriranom rastvoru koji sadrži ćelije na oko 1 do 50 x 10<6>,1 do 40 x IO<6>,1 do 30 x IO<6>,1 do 20 x 10<6>,1 do 15 x IO<6>, ili 1 do 10 x IO<6>ćelija po mililitru; (c) odmrzavanje ćelija; i (d) razblaživanje filtriranog rastvora koji sadrži ćelije oko 1:1 do oko 1:11 (v/v) sa rastvorom dekstrana-40. Na primer, ako je broj ćelija manji od oko 10 ± 3 x IO<6>ćelija po mililitru pre faze (a), filtracija je opciona. Ćelije u fazi (b) mogu da budu krioprezervisane na oko 10 ± 3 x IO<6>ćelija po mililitru. Ćelije u fazi (b) mogu da budu krioprezervisane u rastvoru koji obuhvata oko 5% do oko 10% dekstrana-40 i HSA. Po,enuto razblaživanje u fazi (b) može da bude do ne više od oko 15 x 10<6>ćelija po mililitru.
[0277]Alternativno, farmaceutska kompozicija može da se proizvede u postupku koji obuhvata: (a) suspendovanje ćelija iz placente, npr., matičnih ćelija iz placente ili multipotentnih ćelija iz placente, u 5,5% rastvora dekstrana-40 koji obuhvata 10% HSA radi formiranja rastvora koji sadrži ćelije; (b) filtriranje rastvora koji sadrži ćelije kroz 70U.M filter; (c) razblaživanje rastvora koji sadrži ćelije rastvorom koji obuhvata 5,5% dekstrana-40, 10% HSA, i 5% DMSO do oko 1 do 50 x 10<6>,1 do 40 x 10<6>, 1 do 30 x IO<6>, 1 do 20 x IO<6>; 1 do 15 x IO<6>, ili 1 do 10 x 10<5>ćelija po mililitru; (d) krioprezervacija ćelija; (e) odmrzavanje ćelija; i (f) razblaživanje rastvora koji sadrži ćelije 1:1 do 1:11 (v/v) sa 10% dekstranom-40. Pomenuto razblaživanje u fazi (c) može da bude do ne više od oko 15 x IO<6>ćelija po mililitru. U određenim ostvarenjima, pomenuto razblaživanje u fazi (c) može da bude do ne više od oko 10 ± 3 x 10<6>ćelija/mL. Pomenuto razblaživanje u fazi (c) može da bude do ne više od oko 7,5 x 10<s>ćelija/mL.
[0278]Kompozicija koja obuhvata ćelije može takođe da se proizvede u postupku koji obuhvata: (a) centrifugiranje mnoštva ćelija radi prikupljanja ćelija; (b) resuspendovanje ćelija u 5,5% dekstrana-40; (c) centrifugiranje ćelija radi prikupljanja ćelija; (d) resuspendovanje ćelija u 5,5% rastvora dekstrana-40 koji obuhvata 10% HSA; (e) filtriranje ćelija kroz 70U.M filter; (f) razblaživanje ćelija u 5,5% dekstrana-40, 10% HSA, i 5% DMSO do oko 1 do 50 x IO6,1 do 40 x IO6,1 do 30 x IO6,1 do 20 x IO6,1 do 15 x IO6, ili 1 do 10 x IO<6>ćelija po mililitru; (g) krioprezervacija ćelija; (h) odmrzavanje ćelija; i (i) razblaživanje ćelija 1:1 do 1:11 (v/v) 10% dekstranom-40. U određenim ostvarenjima, pomenuto razblaživanje u fazi (f) je do ne više od oko 15 x IO<6>ćelija po mililitru. Pomenuto razblaživanje u fazi (f) može da bude do ne više od oko 10 ± 3 x IO<6>ćelija/mL. Pomenuto razblaživanje u fazi (f) može da bude do ne više od oko 7,5 x IO<5>ćelija/mL. Ako je broj ćelija manji od oko 10 ± 3 x IO<6>ćelija po mililitru, filtracija može da bude opciona.
[0279]Kompozicije, npr., farmaceutske kompozicije koje obuhvataju izolovane ćelije iz placente, opisane ovde mogu da obuhvataju bilo koje od izolovanih ćelija iz placente opisanih ovde.
[0280]Mogu da se koriste druge injektibilne formulacije, pogodne za davanje ćelijskih proizvoda.
[0281]Farmaceutska kompozicija može da obuhvata izolovane ćelije iz placente koje su suštinski, ili potpuno, nematerinskog porekla, to jest, imaju fetalni genotip; npr., najmanje oko 90%, 95%, 98%, 99% ili oko 100% su nematerinskog porekla. Na primer, farmaceutska kompozicija obuhvata populaciju izolovanih ćelija iz placente koje su CD200<+>i HLA-G"; CD73<+>, CD105<+>, i CD200<+>; CD200<+>i OCT-4<+>; CD73<+>, CD105<+>i HLA-G"; CD73<+>i CD105<+>i olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente koja obuhvata pomenutu populaciju izolovanih ćelija iz placente kada se pomenuta populacija ćelija iz placente kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca sličnih embrioidu; ili OCT-4<+>i olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente koja obuhvata pomenutu populaciju izolovanih ćelija iz placente kada se pomenuta populacija ćelija iz placente kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca sličnih embrioidu; ili kombinacija prethodnih, pri čemu najmanje 70%, 80%, 90%, 95% ili 99% pomenutih izolovanih ćelija iz placente nisu materinskog porekla. Farmaceutska kompozicija može da obuhvata populaciju izolovanih ćelija iz placente koje su CD10<+>, CD105<+>i CD34"; CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>i CD34"; CD10<+>, CD105<+>, CD200<+>, CD34" i najmanje jednu od CD90<+>ili CD45"; CD10<+>, CD90<+>, CD105<+>, CD200<+>, CD34" i CD45"; CD10<+>, CD90<+>, CD105<+>, CD200<+>, CD34" i CD45"; CD200<+>i HLA-G"; CD73<+>, CD105<+>, i CD200<+>; CD200<+>i OCT-4<+>; CD73<+>, CD105<+>i HLA-G"; CD73<+>i CD105<+>i olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente koja obuhvata pomenute izolovane ćelije iz placente kada se pomenuta populacija ćelija iz placente kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca sličnih embrioidu; OCT-4+ + i olakšavaju formiranje jednog ili više telašaca nalik embrioidu u populaciji ćelija iz placente koja obuhvata pomenute izolovane ćelije iz placente kada se pomenuta populacija ćelija iz placente kultiviše u uslovima koji omogućavaju formiranje telašaca sličnih embrioidu; ili jednu ili više od CD117", CD133", KDR", CD80", CD86", HLA-A,B,C<+>, HLA-DP,DQ,DR" i/ili PDL1<+>; ili kombinaciju prethodnih, pri čemu najmanje 70%, 80%, 90%, 95% ili 99% pomenutih izolovanih ćelija iz placente su nematerinskog porekla. U posebnom ostvarenju, farmaceutska kompozicija dodatno obuhvata matičnu ćeliju koja nije dobijena iz placente.
[0282]Izolovane ćelije iz placente u kompoziciji, npr., farmaceutskim kompozicijama, obezbeđenim ovde, mogu da obuhvataju ćelije iz placente izvedene iz jednog donora, ili iz više donora. Izolovane ćelije iz placente mogu da budu potpuno HLA-odgovarajuće namerenom primaocu, ili delimično ili potpuno HLA-neodgovarajuće.
5.7.4Matriksi koji obuhvataju izolovane ćelije iz placente
[0283]Dalje su opisane ovde kompozicije koje sadrže matrikse, hidrogelove, skafolde, i slično koji obuhvataju ćeliju iz placente, ili populaciju izolovanih ćelija iz placente. Takve kompozicije mogu da se koriste umesto, ili kao dodatak, ćelija u tečnoj suspenziji.
[0284]Izolovane ćelije iz placente opisane ovde mogu da se zaseju na prirodni matriks, npr., placentni biomaterijal kao što je materijal iz amnionske membrane. Takav materijal iz amnionske membrane može da bude, npr., amnionska membrana secirana direktno iz placente sisara; fiksirana ili toplotno tretirana amnionska membrana, suštinski suva( tj.,<20% H20) amnionska membrana, horionska membrana, suštinski suva horionska membrana, suštinski suva amnionska i horionska membrana, i slično. Poželjan placentni biomaterijali na koje mogu da se izolovane ćelije iz placente zaseju opisani su u Hariri, U.S. Objavi prijave patenta Br.2004/0048796.
[0285]Izolovane ćelije iz placente opisane ovde mogu da se supenduju u rastvoru hidrogela pogodnom za, npr., injekciju. Pogodni hidrogelovi za takve kompozicije uključuju samo-skopive peptide, kao što je RAD16. U jednom ostvarenju, rastvor hidrogela koji sadrži ćelije može da očvrsne, na primer u kalupu, radi formiranja matriksa koji ima ćelije dispergovane u njemu za implantaciju. Izolovane ćelije iz placente u takvom matriksu takođe se mogu kultivisati tako da se ćelije mitotički razmnožavaju pre implantacije. Hidrogel je,npr.,organski polimer (prirodni ili sintetički) koji je umrežen kovalentnim, jonskim ili vodoničnim vezama radi stvaranja trodimenzionalne strukture otvorene rešetke koja zadržava molekule vode radi formiranja gela. Hidrogel-formirajući materijali uključuju polisaharide kao što su alginat i njegove soli, peptidi, polifosfazini, i poliakrilati, koji se umrežavaju jonski, ili blok polimeri kao što su polietilen oksid-polipropilen glikol blok kopolimeri koji se umrežavaju temperaturom ili pH, respektivno. U nekim ostvarenjima, hidrogel ili matriks je biodegradibilan.
[0286]Formulacija može da obuhvatain situpolimerizujući gel( videti.,npr., U.S. Objavu prijave patenta 2002/0022676; Anseth et al., J. Control Release, 78(l-3):199-209 (2002); Wang et al., Biomaterials, 24(22):3969-80 (2003).
[0287]Polimeri mogu da budu najmanje delimično rastvorljivi u vodenim rastvorima, kao što u voda, puferski slani rastvori ili vodeni alkoholni rastvori, koji imaju naelektrisane bočne grupe, ili njihova monovalentna jonska so. Primeri polimera koji imaju kisele bočne grupe koje mogu da reaguju sa katjonima su poli(fosfazeni), poli(akrilne kiseline), poli(metakrilne kiseline), kopolimeri akrilne kiseline i metakrilne kiseline, poli(vinil acetat), i sulfonovani polimeri, kao što je sulfonovani polistiren. Takođe mogu da se koriste kopolimeri koji imaju kisele bočne grupe formirani u reakciji akrilne ili metakrilne kiseline i vinil etar monomera ili polimera. Primeri kiselih grupa su karboksilne grupe, sulfonske grupe, halogenovane (poželjno fluorovane) alkoholne grupe, fenolne OH grupe, i kisele OH grupe.
[0288]Matriks može da bude filc, koji može da bude sastavljen od multifilament prediva napravljenog od bioapsorbilnog materijala, npr., PGA, PLA, PCL kopolimera ili mešavine, ili hialuronske kiseline. Predivo se izradi u filc korišćenjem standardnih postupaka tekstilne proizvodnje koji se sastoje od skraćivanje, sečenja, grebenanje i ušivanja. Ćelije ovog pronalaska zasejavaju se na penaste skafolde koji mogu da budu kompozitne strukture. Dodatno, trodimenzionalni okvir može da se izlije u koristan oblik, kao što je specifična struktura u telu koja treba da se popravi, zameni, ili ojača. Drugi primeri skafolda koji mogu da se koriste uključuju neisprepletane podloge, porozne pene, ili samo-sklopive peptide. Neisprepletane podloge mogu da se formiraju korišćenjem vlakana koji se sastoje od sintetičkog apsorpcionog kopolimera glikolne i mlečne kiseline( npr.,PGA/PLA) (VICRYL, Ethicon, Inc., Somerville, N.J.). Pene, koje se sastoje od, npr., poli(e-kaprolakton)/poli(glikolna kiselina) (PCL/PGA) kopolimera, formirane u postupcima kao što su sušenje zamrzavanjem, ili liofilizacija( videti, npr.,U.S. Pat. Br. 6,355,699), takođe mogu da se koriste kao skafoldi.
[0289]Izolovane ćelije iz placente opisane ovde ili njihove ko-kulture mogu da se zaseju na trodimenzionalni okvir ili skafold i implantujuin vivo.Takav okvir može da se implantira u kombinaciji sa bilo kojim jednim ili više faktora rasta, ćelijama, lekovima ili drugim komponentama koje, npr., stimulišu formiranje tkiva.
[0290]Primeri skafolda koji mogu da se koriste uključuju neisprepletane podloge, porozne pene, ili samo-sklopive peptide. Neisprepletane podloge mogu da se formiraju korišćenjem vlakana sačinjenih od sintetičkog apsorpcionog kopolimera glikolne i mlečne kiseline( npr.,PGA/PLA) (VICRYL, Ethicon, Inc., Somerville, N.J.). Pene, sačinjene od,npr.,poli(e-kaprolakton)/poli(glikolna kiselina) (PCL/PGA) kopolimera, formirane u postupcima kao što su sušenje zamrzavanjem, ili liofilizacija( videti, npr.,U.S. Pat. Br. 6,355,699), takođe mogu da se koriste kao skafoldi.
[0291]U drugom ostvarenju, izolovane ćelije iz placente mogu da se zaseju na, ili da se u kontaktu sa, filc, koji može da bude, npr., sačinjen od multifilament prediva napravljenog od bioapsorbilnog materijala kao što su PGA, PLA, PCL kopolimeri ili mešavine, ili hialuronska kiselina.
[0292]Izolovane ćelije iz placente obezbeđene ovde mogu da se zaseju na penasti skafoldi koji mogu biti kompozitne strukture. Takvi penasti skafoldi mogu da se izliju u koristan oblik, takav da deo specifične strukture u telu može da se popravi, zameni ili ojača. Okvir može da se tretira,npr.,0,1M sirćetnom kiselinom praćeno inkubacijom u polilizinu, PBS, i/ili kolagenu, pre inokulacije ćelija da bi se poboljšalo pričvršćivanje ćelija. Spoljne površine matriksa mogu da se modifikuju radi poboljšanja pričvršćivanja ili rast ćelija i diferencijacije tkivo, kao što je oblaganje plazmom matriksa, ili dodavanje jednog ili više proteina (npr., kolageni, elastična vlakna, retikularna vlakna), glikoproteina, glikozaminoglikana (npr., heparin sulfat, hondroitin-4-sulfat, hondroitin-6-sulfat, dermatan sulfat, keratin sulfat,itd.),ćelijskog matriksa, i/ili drugih materijala kao što su, ali ne ograničavajući se na, želatin, alginate, agar, agarozu, i biljne gume, i slično.
[0293]Skafold može da obuhvata, ili da bude tretiran sa, materijalima koji ga čine netrombogenim. Ovi tretmani i materijali takođe mogu da promovišu i održiv endotelijalni rast, migraciju, i taloženje vanćelijskog matriksa. Primeri ovih materijala i tretmana uključuju ali nisu ograničeni na prirodne materijale kao što su proteini bazalne membrane poput laminina i kolagena tipa IV, sintetički materijali poput EPTFE, i segmentirani poliuretanurea silikoni, poput PURSPAN " (The PolymerTechnology Group, Inc., Berkeley, Calif.). Skafold može takođe da obuhvata antitrombotičke agense poput heparina; Skafoldi takođe mogu da se tretiraju radi promene naelektrisanja površine (npr., oblaganje plazmom) pre zasejavanja izolovanih ćelija iz placente.
[0294]Ćelije iz placente (npr., PDAC) obezbeđene ovde takođe mogu da se zaseju na, ili da budu u kontaktu sa, fiziološki prihvatljivim keramičkim materijalom uključujući, ali ne ograničavajući se na, mono-, di-, tri-, alfa-tri-, beta-tri-, i tetra-kalcijum fosfat, hidroksiapatit, fluoroapatite, kalcijum sulfate, kalcijum fluoride, kalcijum okside, kalcijum karbonate, magnezijum kalcijum fosfate, biološki aktivna stakla poput BIOGLASS<*>, i njihove mešavine. Porozni biokompatabilni keramički materijali trenutno komercijalno dostupni uključuju SURGIBONE<*>(CanMedica Corp., Canada), ENDOBON<*>(Merck Biomaterial France, France), CEROS<*>(Mathys, AG, Bettlach, Switzerland), i proizvodi mineralizovanog kolagena za presađivanje kosti poput HEALOS™ (DePuy, Inc., Ravnham, MA) i VITOSS*, RHAKOSS™, i CORTOSS<*>(Orthovita, Malvern, Pa.). Okvir može da bude smeša, mešavina ili kombinacija prirodnih i/ili sintetičkih materijala.
[0295]Izolovane ćelije iz placente mogu da se zaseju na, ili da budu u kontaktu sa, odgovarajući skafold sa oko 0,5 x IO<6>do oko 8 x 10<6>Ćelija/mL-
5.8 IMORTALIZOVANE ĆELIJSKE LINIJE IZ PLACENTE
[0296]Ćelije iz placente sisara, npr., PDAC, mogu da budu uslovno imortalizovane transfekcijom sa bilo kojim pogodnim vektorom koji sadrži gen promocije rasta, to jest, gen koji kodira protein koji, u odgovarajućim uslovima, promoviše rast transfektovane ćelije, tako da proizvodnja i/ili aktivnost proteina za promociju rasta regulisana je spoljašnjim faktorom. U poželjnom ostvarenju gen promocije rasta je onkogen kao što su, ali ne ograničavajući se na, v-myc, N-myc, c-myc, p53, SV40 veliki T antigen, poliom veliki T antigen, Ela adenovirus ili E7 protein humanog papilomavirusa.
[0297]Spoljašnja regulacija proteina promocije rasta može da se postigne stavljanjem gena promocije rasta pod kontrolu spoljno regulišućeg promotera, npr., promoter aktivnosti od kojih može da se kontroliše, na primer, modifikacijom temperature transfektovanih ćelija ili sastava podloge u kontaktu sa ćelijama. U jednom ostvarenju, može da se upotrebi tetraciklin (tet)-kontrolisani sistem ekspresije gena( videtiGossen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5547-5551, 1992; Hoshimaru et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:1518-1523,1996). U odsustvu tet, tet-kontrolisani transaktivator (tTA) u ovom vektoru snažno aktivira transkripciju iz ph^..^ minimalni promoter iz humanog citomegalovirusa fuziran na sekvence tet operatora. tTA je protein fuzije represora (tetR) tet rezistentnog operona izvedenog iz transpozona-10 odEscherichia colii kiselog domena iz VP16 herpes simpleks virusa. Niske, netoksične koncentracije tet (npr., 0,01-1,0 u.g/mL) skoro u potpunosti ukidaju transaktivaciju od strane tTA.
[0298]Vektor može dalje da sadrži gen koji kodira odgovarajući marker,npr.,protein koji daje otpornost na lek. Gen rezistencije na bakterijski neomicin (neo<R>) je jedan takav marker koji može da se upotrebi u ovim postupcima. Ćelije koje nose neo" mogu da se odaberu sredstvima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti, kao što je dodavanje,npr.,100-200 u.g/ml_ G418 u podlogu za rast.
[0299]Transfekcija može da se postigne bilo kojim od većeg broja sredstava koja su poznata stručnjacima iz ove oblasti uključujući, ali ne ograničavajući se na, retroviralnu infekciju. Uopšteno, ćelijska kultura može da bude transfektovana inkubiranjem sa mešavinom kondicioniranog medijuma prikupljenoj od proizvođačke ćelijske linije za vektor i DMEM/F12 koji sadrži N2 suplemente. Na primer, kultura ćelija iz placente pripremljena kao što je opisano gore može biti inficirana nakon,npr.,pet danain vitroinkubacijom za oko 20 sati u jednoj zapremini kondicioniranog medijuma i dve zapremine DMEM/F12 koji sadrži N2 suplemente. Transfektovane ćelije koje nose selektivni marker mogu onda da budu odabrane kao što je opisano gore.
[0300]Nakon transfekcije, kulture se preseju na površinu koja omogućava proliferaciju, npr., omogućava najmanje 30% ćelija da se udvostruči za vreme perioda od 24 sata. Poželjno, supstrat je poliornitin/laminin supstrat, koji se sastoji od plastike za kulturu tkiva koja je obložena poliornitinom (10 u.g/mL) i/ili lamininom (10 u.g/mL), polilizin/laminin supstrat ili površina tretirana fibronektinom. Kulture su potom hranjene svaka 3-4 dana podlogom za rast, koja može ili ne mora da bude dopunjena sa jednim ili više faktora koji povećavaju proliferaciju. Faktori koji povećavaju proliferaciju mogu da se dodaju u podlogu za rast kada su kulture manje od 50% konfluentne.
[0301]Uslovno imortalizovane ćelijske linije iz placente mogu da se preseju korišćenjem standardnih postupaka, kao što je tripsinizacija, kada su 80-95% konfluentne. Do približno dvadesetog presejavanja, u nekim ostvarenjima, to je korisno radi održavanja selekcije ( na primer, dodavanjem G418 za ćelije koje sadrže gen rezistencije na neomicin). Ćelije se takođe mogu zamrznuti u tečnom azotu radi dugoročnog čuvanja.
[0302]Klonalne ćelijske linije mogu da se izoluju od uslovno imortalizovane humane ćelijske linije iz placente pripremljene kao što je opisano gore. Uopšteno, takve klonalne ćelijske linije mogu da se izoluju korišćenjem standardnih postupaka, kao na primer ograničenim razblažavanjem ili korišćenjem klonirajućih prstenova, i širenjem. Klonalne ćelijske linije mogu uopšteno da budu hranjene i presejane kao što je opisano gore.
[0303]Uslovno imortalizovane ćelijske linije iz placente, koje mogu, ali ne moraju, da budu klonalne, mogu uopšteno da se indukuju da se diferenciraju suzbijanjem proizvodnje i/ili aktivnost proteina promocije rasta u uslovima za kultivisanje koji olakšavaju diferencijaciju. Na primer, ako je gen koji kodira protein promocije rasta pod kontrolom spoljno regulišućeg promotera, uslovi, npr., temperatura ili sastav podloge, mogu da se modifikuju da bi suzbili transkripciju gena promocije rasta. Za tetraciklinom kontrolisan sistem ekspresije gena opisan gore, diferencijacija može da se postigne dodavanjem tetraciklina radi suzbijanja transkripcije gena promocije rasta. Uopšteno, 1 u.g/mL tetraciklina za 4-5 dana je dovoljno da inicira diferencijaciju. Da bi se promovisala dalja diferencijacija, mogu da se uključe dodatni agensi u podlogu za rast.
5.9Kitovi
[0304]U drugom aspektu, opisani ovde su kitovi, pogodni za tretiranje pojedinca koji ima bolest ili poremećaj krvnog sistema, koji obuhvataju, u kontejneru odvojene od ostalog sadržaja kitova, multipotentne ćelije iz placente adherentne na plastiku za kulturu tkiva, npr., matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente,npr.,ćelije opisane u Odeljku 5.2, gore (PDAC), i uputstvima za upotrebu. Poželjno, ćelije iz placente obezbeđene su u farmaceutski prihvatljivom rastvoru, npr., rastvor pogodan za intralezionalno davanje ili rastvor pogodan za intravenozno davanje. Matične ćelije iz placente ili multipotentne ćelije iz placente mogu da budu bilo koje od CD10<+>, CD34", CD105<+>ćelija iz placente opisane ovde, npr., CD10<+>; CD34", CD105<+>, CD200<+>ćelije iz placente ili CD10<+>, CD34", CD45", CD90<+>, CD105<+>, CD200+ ćelije iz placente.
[0305]Kitovi mogu da obuhvataju jednu ili više komponenata koje olašavaju dostavu ćelija iz placente pojedincu. Na primer, kit obuhvata komponente koje olakšavaju intralezionalnu dostavu ćelija iz placente pojedincu. U tim slučajevima, kit može da obuhvata, npr., špriceve i igle pogodne za dostavu ćelija pojedincu, i slično. U tim slučajevima, ćelije iz placente mogu da budu sadržane u kitu u kesi, ili u jednoj ili više bočica. Kit može dalje da obuhvata komponente koje olakšavaju intravenoznu ili intraarteriajalnu dostavu ćelija iz placente pojedincu. U tim slučajevima, ćelije iz placente mogu da budu sadržane, npr., u flaši ili kesi (na primer, kesa za krv ili slična kesa koja može da sadrži do oko 1,5 L rastvora koji obuhvata ćelije), i kit dodatno obuhvata cev i igle pogodne za dostavu ćelija pojedincu.
[0306]Dodatno, kit može da obuhvata jedno ili više jedinjenja koj smanjuju bol ili zapaljenje u pojedincu (npr., analgetička, steroidna ili nesteroidna antiinflamatorna jedinjenja, ili slično. Kit može takođe da obuhvata antibakterijska ili antiviralna jedinjenja (npr., jedno ili više antibiotika), jedinjenje za smanjenje anksioznosti u pojedincu( npr.,alaprazolam), jedinjenje koje smanjuje imuni odgovor kod pojedinca( npr.,ciklosporin A), antihistamin (difenidramin, loratadin, desloratadin, kvetijapin, feksofenadin, cetirizin, prometazin, hlorfeniramin, levocetirizin, cimetidin, famotidin, ranitidin, nizatidin, roksatidin, lafutidin ili slično).
[0307]Dodatno, kit može da obuhvata za jednokratnu upotrebu, npr., sterilne maramice, papirna sredstva za jednokratnu upotrebu, rukavice, ili slično, koji olakšavaju pripremu pojedinca za dostavu, ili koji smanjuju verovatnoću infekcije u pojedincu kao rezultat davanja ćelija iz placente.
6. PRIMERI
6.1 PRIMER 1: FENOTIPSKA KARAKTERIZACIJA ADHERENTNIH ĆELIJA IZVEDENIH IZ PLACENTE
[0308]Ovaj primer pokazuje sekreciju angiogenih faktora od strane ćelija iz placente (CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200<+>matične ćelije iz placente, takođe označene kao PDAC).
6.1.1Profilisanje sekretoma za ocenjivanje angiogene ptentnosti adherentnih ćelija izvedenih iz
placente
[0309]MulitplexBead Test:Adherentne ćelije izvedene iz placente sa 6 presejavanja zasejane sa istim ćelijskim brojem u podlozi za rast i kondicioniranom medijumu prikupljene su nakon 48 sati. Simultana kvalitativna analiza više angiogenskih citokina/faktora rasta u ćelijskom kondicioniranom medijumu izvedena je korišćenjem multipleks testova baziranih na magnetnim perlama (Bio-Plex ProTM, Bio-Rad, CA) koji omogućavaju merenje angiogenskih biomarkera u raznim matriksima uključujući serum, plazmu, i supernatante ćelije/kulture tkiva. Princip ovih testova formatiranih pločom sa 96-bazenčića, baziranim na perlama sličan je sendvič imunotestu. Antitelo usmereno protiv poželjnog cilja angiogeneze je kovalentno vezano za interno obojene perle. Spojene perle mogu da reaguju sa uzorkom koji sadrži metu angiogeneze. Nakon niza ispiranja radi uklanjanja nevezanog proteina, biotinilovana detekciona antitela specifična za različite epitope dodaju se u reakciju. Rezultat je formiranje sendviča antitela oko cilja angiogeneza. Potom se dodaje streptavidin-PE radi vezivanja za biotinilovana detekciona antitela na površini berli. Ukratko, Multipleks testovi izvode se prema proizvođačevim uputstvima i ocenjena je količina respektivnih angiogenetskih faktora rasta u kondicioniranom medijumu.
[0310]ELISA:Kvantitativna analiza pojedinih angiogenetskih citokina/faktora rasta u ćelijskom kondicioniranom medijumu izvedena je korišćenjem komercijalno dostupnih kitova od R&D Svstems (Minneapolis, MN). Ukratko, ELISA testovi izvedeni su prema proizvođačevim uputstvima i ocenjena je količina respektivnih angiogenetskih faktora rasta u kondicioniranom medijumu.
[0311]Nivo sekrecije raznih angiogenetskih proteina od strane PDAC prikazan je na FIG. 1.
[0312]U odvojenom eksperimentu, potvrđeno je da PDAC takođe luče angiopoietin-1, angiopoietin-2, PECAM-1 (CD31; molekul adhezije endotelijalnih ćelija trombocita), laminin i fibronektin.
6.2 PRIMER 2: FUNKCIONALNA KARAKTERIZACIJA ĆELIJA IZ PLACENTE
[0313]Ovaj primer pokazuje različite karakteristike ćelija iz placente (CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200<+>matične ćelije iz placente, takođe poznate kao PDAC) povezane sa sposobnošću angiogeneze i diferencijacije.
6.2.1 Formacija ceviHUVECza ocenjivanje angiogenetske potentnostiPDAC
[0314]Endotelijalne ćelije humane pupčane vrpce (HUVEC) supkultivisane su sa 3 presejavanja ili manje u EGM-2 podlozi (Cambrex, East Rutherford, NJ) tokom 3 dana, i prikupljene su na konfluenciji približno 70%-80%. HUVEC isprane su jedanput sa osnovnom podlogom/antibiotici (DMEM/F12 (Gibco)) i resuspendovane u istoj podlozi sa željenom koncentracijom. HUVEC je korišćen u okviru 1 sata pripremanja. Humani placentni kolagen (HPC) doveden je do koncentracije od 1,5 mg/mL u 10 mM HCI (pH 2,25), neutralisan je puferom do pH 7,2, i držan na ledu do upotrebe. HPC kombinovan je sa HUVEC suspenzijom na konačnoj koncentraciji ćelija od 4000 ćelija/u.1. Dobijena HUVEC/HPC suspenzija odmaj je pipetirana u ploče sa 96-bazenčića sa 3 u.1 po bazenčiću (perimeter ploča mora se prethodno ispuniti sterilnim PBS da bi se izbeglo isparavanje, n = 5 po stanju). HUVEC kapi inkubirane su na 37°C i 5% C02za 75-90 minuta bez dodatka podloge da bi se omogućila polimerizacija kolagena. Nakon završetka "suve" inkubacije, svaki bunar je pažljivo ispunjen sa 200 u.1 kondicioniranim PDAC medijumom (n = 2 ćelijske linije) ili kontrolna podloga( npr.,DMEM/F12 kao negativna kontrola, i EGM-2 kao pozitivna kontrola) i inkubiran na 37°C i 5% C02za 20 sati. Kondicionirani medijum pripremljen je inkubiranjem PDAC sa 6 presejavanja u podlozi za uzgajanje tokom 4-6 sata; nakon pričvršćivanja i širenja, podloga je zamenjena sa DMEM/F12 u toku 24 sata. Nakon inkubacije, podloga podloga je uklonjena iz bazenčića bez remećenja HUVEC kapi i bunarčići su isprani jedanput sa PBS. HUVEC kapi su potom fiksirane za 10 sekundi i bojene tokom 1 minuta korišćenjem Diff-Quik kita za bojenje ćelija i zatim ispirane 3 x puta sterilnom vodom. Obojene sušene su na vazduhu i slike svakog bunara stečene su korišćenjem Zeiss SteReo Discoverv V8 mikroskopa. Slike su potom analizirane korišćenjem kompjuterskog softverskog paketa ImageJ i/ili MatLab. Slike su konvertovane iz boje u 8-bit slike nijanse sive i postavlja se prag za konvertovanje u crnu i belu sliku. Slika je potom analizirana korišćenjem karakteristika za analizu čestica, obezbeđeni su podaci gustine piksela, uključujući brojanje (broj pojedinačnih čestica), ukupna površina, prosečna veličina (pojedinačnih čestica), i površina frakcije, što je jednako količini formiranja endotelijalne cevi u testu.
[0315]Kondicionirani medijum ima angiogenetski efekat na endotelijalne ćelije, kao što je demonstrirano indukcijom formiranja cevi (videti FIG. 2).
6.2.2Test migracije HUVEC
[0316]Ovaj eksperiment demonstrira angiogenetski kapacitet adherentnih ćelija izvedenih iz placente. HUVEC rasle su do monoslojne konfluencije u fibronektin (FN)-obloženoj pločai sa 12 bazenčića i monosloj je "ranjen" sa 1 mL vrhom plastične pipete radi stvaranja acelularne linije preko bazenčića. HUVEC migracija testirana je inkubiranjem "ranjenih" ćelija sa kondicioniranim medijumom bez seruma (EBM2; Cambrex) dobijenih od PDAC nakon 3 dana rasta. EBM2 podloga bez ćelija korišćena je kao kontrola. Nakon 15 sati, zabeležena je migracija ćelija u acelularnu oblast (n = 3) korišćenjem inverznog mikroskopa. Slike su potom analizirane korišćenjem kompjuterskog softverskog paketa ImageJ i/ili MatLab. Slike su konvertovane iz boje u 8-bit slike nijansa sive i postavlja se prag radi konvertovanja u crnu i belu sliku. Slika je potom analizirana korišćenjem karakteristika za analizu čestica, obezbeđeni su podaci gustine piksela, uključujući brojanje (broj pojedinačnih čestica), ukupna površina, prosečna veličina (pojedinačnih čestica), i površina frakcije, što se izjednačava sa količinom endotelijalne migracije u testu. Stepen migracije ćelija postignut je protiv veličine inicijalno zabeležene ranjene linije i rezultati su normalizovani do lxl0<6>ćelija.
[0317]Trofički faktori izlučeni od strane adherentnih ćelija izvedenih iz placente imaju angiogenetske efekte na endotelijalne ćelije, kao što je demonstrirano indukcijom migracije ćelija (FIG. 3).
[0318]U odvojenom eksperimentu, HUVEC kultivisane su na dnu ploča sa 24 bazenčića preko noći u EGM2, praćeno gladovanjem u EBM tokom pola dana. Istovremeno, PDAC kultivisane u podlozi
otopljene su i kultivisana u trans bazenčićima (8 U.M) preko noći. Nakon EC gladovanja, kondicioniranim DMEM bez seruma, zajedno sa trans bazenčićem, prebačen je preko u EC radi prekonoćne proliferacija. 4 ponavljanja uključena su u svaki eksperiment, i proliferacija nakon 24 sata ocenjena je sa Cell Titer Glo Testom od Promega. EBM-2 podloga korišćena je kao negativna kontrola, i EGM-2 korišćen je kao pozitivna kontrola. Šipke greške označavaju standardne devijacije analitičkih ponavljanja (n=3).
[0319]Tropički faktori izlučeni od strane PDAC rezultirali su povećanjem HUVEC ćelijskog broja, koji ukazuje na HUVEC proliferaciju.Videti FIG.4.
6.2.3Formiranje cevi za ocenjivanje angiogenetske potentnosti adherentnih ćelija izvedenih iz
placente
[0320]PDAC uzgajane su ili u podlozi za uzgajanje bez VEGF ili u EGM2-MV sa VEGF radi ocenjivanja angiogenetske potentnosti ćelija uopšteno, kao i efekat VEGF na potencijal diferencijacija ćelija. HUVEC, kao kontrolne ćelije za formiranje cevi, uzgajane su u EGM2-MV. Ćelije su uzgajane u respektivnim podlogama u toku 4 do 7 dana dok nisu dostigle 70-80% konfluencije. Hladan (4°C) MATRIGEL™ rastvor (50 uL; BD Biosciences) podeljen je u bazenčiće ploče sa 12 bazenčića i ploča je inkubirana 60 min na 37 °C kako bi rastvor postao gel. PDAC i HUVEC ćelije su tripsinizovane, resuspendovane u odgovarajućim podlogama (sa i bez VEGF) i 100 u.1 razblaženih ćelija (1 do 3 x 10<4>ćelija) dodato je u svki bazenčić koji sadrži MATRIGEL™ . Ćelije na polimerizovanom MATRIGEL™, u prisustvu ili odsustvu 0,5 do 100 ng VEGF, stavljene su tokom 4 do 24 sata u inkubator sa 5% C02na 37°C. Nakon inkubacije ćelije su ocenjene za znakove formiranja cevi korišćenjem standardnog svetlosnog mikrokroskopa.
[0321]PDAC prikazuje minimalno formiranje cevi u odsustvu VEGF, ali su indukovane/diferencirane da formiraju strukture nalik cevi usled stimulacije sa VEGF.VidetiFIG. 5.
6.2.4Odgovor na hipoksiju za ocenjivanje angiogenetske potentnosti adherentnih ćelija izvedenih iz
placente
[0322]Da bi se ocenila angiogenetska funkcionalnost endotelijalnih ćelija i/ili endotelijalnih progenitora, mogu se ćelije oceniti s obzirom na njihovu sposobnost da luče angiogenetske faktore rasta u hipoksičnim i normoksičnim uslovima. Kultivisanje u hipoksičnim uslovima obično indukuje povećanu sekreciju angiogenetskih faktora rasta ili endotelijalnim ćelijama ili endotelijalnim progenitornim ćelijama, što se može meriti u kondicioniranom medijumu. Adherentne ćelije izvedene iz placente zasejane su sa istim ćelijskim brojevima u njihovoj standardnoj podlozi za rast i uzgajane do približno 70-80% konfluencije. Zatim, ćelije su zamenjene na podlogu bez seruma (EBM-2) i inkubirane u normoksičnim (21% 02) ili hipoksični (1% 02) uslovima tokom 24 h. Kondicionirani medijumi prikupljeni su i sekrecija angiogenetskih faktora rasta analizirana je korišćenjem komercijalno dostupnih ELISA kitova od R&D Svstems. ELISA testovi izvedeni su prema proizvođačevim uputstvima i količina respektivnih angiogenetskih faktora rasta (VEGF i IL-8) u kondicioniranom medijumu normalizovana je do lxl06 ćelija.
[0323]Adherentne ćelije izvedene iz placente prikazale su povećanu sekreciju raznih angiogenetskih faktora rasta u hipoksičnim uslovima.VidetiFIG. 6.
6.2.5HUVEC odgovor na PDAC- kondicionirani medijum
[0324]PDAC kultivisane su tokom 48 sati u podlozi za uzgajanje koja sadrži 60% DMEM-LG (Gibco); 40% MCBD-201 (Sigma); 2% FBS (Hvclone Labs), lx insulin-transferin-selenijum (ITS); 10 ng/mL linolne kiseline-goveđeg seruma albumina (LA-BSA); 1 n-deksametazon (Sigma); 100U.M askorbinske kiseline 2-fosfata (Sigma); 10 ng/mL epidermalnog faktora rasta (R&D Svstems); i 10 ng/mL faktora rasta izvedenog iz trombocita (PDGF-BB) (R&D Svstems), i potom kultivisane dodatnih 48 sati u podlozi bez seruma. Kondicionirani medijum PDAC klture prikupljena je i korišćena za stimulisanje serumski izglanjivanih HUVEC tokom 5,15 i 30 minuta. HUVEC su zatim lizirane i bojene sa BD™ CBA (Cvtometric Bead Test) Cell Signaling Flex Kit (BD Biosciences) za fosfoproteine za koje se zna da imaju ulogu u putu angiogenetske signalizacije. Pronaćeno je da su PDAC jaki aktivatori AKT-1 (koji inhibira apopotične postupke), AKT-2 (koji je važan signalizirajući protein u putu insulinske signalizacije, i putevima ERK 1/2 ćelijske proliferacije HUVEC. Ovi rezultati dalje pokazuju angiogenetsku sposobnost PDAC.
6.3 PRIMER 3: INDUKCIJA ANGIOGENEZE OD STRANE PDAC
[0325]Ovaj primer pokazuje da PDAC, kao što je opisano u primeru 1, gore, promovišu angiogenezu uin vivotestu korišćenjem pileće horioalantoične membrane (CAM).
[0326]Dva odvojena CAM testa su izvedena. U prvom CAM testu, ocenjene su netaknute ćelijske granule iz različitih preparata PDAC. U drugom CAM testu, ocenjeni su supernatanti različitih PDAC preparata. Faktor rasta fibroblasta (bFGF) korišćen je kao pozitivna kontrola, i MDA-MB-231 humane ćelije raka dojke kao reference, a kontrole nosača i podloge korišćene su kao negativne kontrole. Krajnja tačka ispitivanja bila je određivanje gustina krvnih sudova svih tretiranih i kontrolnih grupa.
6.3.1CAM Test korišćenjem PDAC
[0327]Korišćene su PDAC,koje su pripremljene kao što je opisano gore i krioprezervisane. PDAC su odmrznute za doziranje i određenje broj ćelija doziran na CAM.
[0328]Dizajn ispitivanja: Ispitivanje je uključivalo 5 grupa sa po 10 embriona u svakoj grupi. Dizajn ispitivanja opisana je u Tabeli 2.
[0329]Postupak CAM Testa: Sveža plodna jaja inkubirana su tokom 3 dana u standardnom inkubatoru za jaja na 37°C tokom 3 dana. 3. dana, jaja su razlupana u sterilnim uslovima i embrioni su stavljeni u dvadeset plastični ploča od 100 mm i kultivisani na 37°C u inkubatoru za embrione sa rezervoarom za vodu na zadnjoj polici. Vazduh je kontinualno uduvavan u vodeni rezervoar korišćenjem male pumpe tako da vlažnost u inkubatoru ostane konstantna. 6. dana, sterilni silikonski "0" prsten štavljenje na svaku CAM, a onda su PDAC gustine od 7,69 x IO<5>ćelija/40 u± mešavine pod loga/M ATRIGEL™ (1:1) dostavljene u svaki "0" prsten u sterilnoj kapeli. Tabele 2A i 2B predstavljaju korišćen broj ćelija i količinu dodate podloge svakom ćelijskom preparatu radi doziranja. Embrioni kontrole nosača primili su 40 ul nosača (PBS/ MATRIGEL™, 1:1), pozitivne kontrole primile su 100 ng/ml bFGF u 40 u.1 mečavine DMEM podloga/ MATRIGEL™ (1:1), i kontrole podloge primile su 40 u.1 same DMEM podloge. Embrioni su vraćeni u inkubator nakon završetka svakog doziranja. 8. dana, embrioni su izvađeni iz inkubatora i ostavljeni na sobnoj temperaturi dok je određivana gustina krvnih sudova pod svakim "O" prstenom korišćenjem sistema hvatanja slika sa uveličanjem od 100 X.
[0330]Gustina krvnih sudova merena je sistemom za bodovanje angiogeneze koji koristi aritmetičke brojeve od 0 do 5, ili eksponencijalne brojeve 1 do 32, da naznači broj krvnih sudova prisutnih na
tretiranom mestu na CAM. Viči brojevi bodovanja predstavljaju veću gustinu sudova, dok 0 predstavlja da nema angiogeneze. Procenat inhibicije nasvakom mestu doziranja izračunat je korišćenjem rezultata zabeleženog za to mesto podeljenog sa srednjom vrednošću rezultata dobijenog od kontrolnih uzoraka za svaki pojedinačan eksperiment. Procenat inhibicije za svaku dozu datog jedinjenja izračunat je objedinjavanjem svih rezultata dobijenih za tu dozu od 8-10 embriona.
Rezultati
[0331]Postignuti rezultati gustine krvnih sudova predstavljeni su na FIG. 7. Rezultati jasno pokazuju da su rezultati gustine krvnih sudova pilećih horioalantoičnih membrana tretiranih PDAC ćelijskim suspenzijama, ili 100 ng/mL bFGF, ili MDAMB231 ćelijskim suspenzijama raka dojke statistički značajno viši u odnosu na one kontrole nosača CAM (P < 0,001, Studentski "t" test). Podloga korišćena za kultivisanje PDAC (negativna kontrola) nije imala bilo kakav efekat na gustinu krvnih sudova. Dalje, indukcija gustine krvnih sudova PDAC preparata pokazala je neke varijacije, ali varijacije nisu bile statistički značajne..
6.3.2CAM Test korišćenjem PDAC Supernatanata
[0332]Uzorci supernatanta iz MDA-MB-231 ćelija i PDAC korišćeni su u drugom CAM testu kao što je opisano gore. bFGF i MDA-MB-231 supernatanti korišćeni su kao pozitivne kontrole, podloga i nosač korišćeni su kao negativne kontrole.
[0333]Dizajn ispitivanja: Ispitivanje je uključivalo 5 grupa sa po 10 embriona u svakoj grupi. Dizajn ispitivanja opisana je u Tabeli 4.
[0334]Postupak CAM Testa: Postupak testa je isti kao što je opisano u Odeljku 6.3.1, gore. Jedina razlika je što je korišćen supernatant iz svakog preparata matičnih ćelija ili iz MDA-MB-231 ćelija kao materijal koji se testira. Za doziranje, svaki supernatant mešan je sa MATRIGEL™ (zapreminski odnos 1:1) i dozirano je 40 u± svakom embrionu.
[0335]Rezultati:Rezultati gustine krvnih sudova( videtiFIG. 8) ukazuju da se razlikuje indukcija formacije krvnih sudova supernatantima svakog preparata matičnih ćelija. Uzorci supernatanta iz PDAC pokazuju značajan efekat na indukciju kevnih sudova sa P < 0,01, P < 0,001, i P < 0,02 (Studentski "t" test) respektivno. Kao što je očekivano, pozitivna kontrola bFGF takođe je pokazala moguću indukciju formacije krvnih sudova kao što se vidi gore u CAM testu br. 1 (P < 0,001, Studentski "t" test). Međutim, supernatant iz MDA-MB-231 ćelija humanog raka dojke nije pokazao značajnu indukciju na formaciju krvnih sudova u odnosu na kontrole nosača. Kao što je prethodno prikazano, sama podloga za kultivisanje alone nije imala nikakav efekat.
6.4 PRIMER 4: PDAC POKAZUJU NEUROPROTEKTIVNI EFEKAT
[0336]Ovaj primer pokazuje da PDAC imaju neuroprotektivni efekat u uslovima sa malo kiseonika i malo glukoze korišćenjem testa izlaganja deprivaciji kiseonika i glukoze (OGD), i smanjenem reaktivne vrste kiseonika. Kao takvi, ovi rezultati ukazuju da PDAC mogu biti korisne u tretiranju ishemijskih stanja kao što je šlog ili periferna vaskularna bolest, i da mogu da zaštite od reperfuzionih povreda koje proizilaze iz ishemijskih stanja.
[0337]Humani neuroni (ScienCell, katalog # 1520) kultivisani su prema preporukama proivođeča. Ukratko, posude za kulture obloženi su Poli-L-Lizinom (2u.g/mL) u sterilnoj destilovanoj vodi tokom 1 sata na 37°C. Posuda je isprana dvostruko destilovanom H20 tri puta. Neuronska podloga (ScienCell) dodata je u posudu i uravnotežena do 37°C u inkubatoru. Neuroni su zamrznuti, i dodati direktno u posude bez centrifugiranja. Tokom sledećeg kultivisanja, podloga je promenjena dan nakon iniciranja kulture, i svaki drugi dan od tad. Neuroni obično su bili spremni za izlaganje 4. dana.
[0338]OGD podloga (Dulbecco-va modifikovana Eagle-va Podloga bez glukoze) pripremljena je prvo zagrevanjem podloge u vodenom kupatilu, u delu da bi se smanjila rastvorljivost kiseonika u tečnoj podlozi. 100% azota uduvavano je 30 minuta kroz podlogu korišćenjem 0,5u.m difuziono kamenja radi uklanjanja rastvorenog kiseonika. Dodat je HEPES pufer do konačne koncentracije od 1 mM. Podloga je dodata direktno neuronima na kraju prskanja. Mali uzorak podloge podeljenje na alikvote za potvrdu nivoa kiseonika korišćenjem potopivog-tipa senzora za kiseonik. Nivoi kiseonika obično su smanjeni do 0,9% do oko 5,0% kiseonika.
[0339]Hipoksična komora pripremljena je stavljanjem komore u inkubator na 37°C tokom najmanje 4 sati (poželjno preko noći) pre gasiranja. Podloga u poszdama za kulture uklonjena je i zamenjena degaziranom podlogom, i posude za kulturu stavljene su hipoksičnu komoru. Hipoksična komora je potom isprana sa 95% N2/5% C02gasa kroz sistem brzinom od 20-25 Lpm za najmanje 5 minuta. Sistem je inkubiran u inkubatoru na 37°C za 4 sata, sa degaziranjem komore još jedanput nakon 1 sata.
[0340]Zaključno postupku izlaganja, OGD podloga je aspirirana i topla podloga dodata je neuronima. 24-28 sata kasnije, PDAC i neuroni zasejani su sa jednakim brojem od 100.000 ćelija svaki po bazenčiću ploče sa 6 bazenčića suspendovani u podlozi za neurone dodati su neuronima i ko-kultivisani tokom 6 dana.
[0341]Fotomikrografi uzeti su nasumice sa polja u ploči sa 6 bazenčića za svaki uslov. Identifikovane su ćelije koje imaju tipičnu neuronsku morfologiju, i zabeležene su dužine neurita. Prosečna dužina neurita koja je u pozitivnoj korelaciji sa neuronskim zdravljem, i bili su duži u ko-kulturi neurona i PDAC, ukazujući da su PDAC štitile ćelije od izlaganja.
Test reaktivne vrste kiseonika
[0342]Određeno je da PDAC eksprimiraju superoksidnu dismutazu, katalazu i hem oksigenaza gen tokom hipoksije. Sposobnost PDAC da prikupe reaktivne vrste kiseonika, i da zaštite ćelije od takvih vrsta, odrećena je u testu korišćenjem vodonik peroksida kao generatora reaktivnih vrsta kiseonika.
[0343]Opis testa: Ciljne ćelije (Astrociti, ScienCell Research Laboratories) zasejane su u crne ploče sa 96 bazenčića koje su prethodno obložene poli-L-lizinom sa 6000/cm<2>. Omogućeno je da se astrociti pričvrste preko noći za podlogu za uzgajanje na 37°C sa 5% ugljendioksida. Narednog dana, podloga za kulturu je uklonjena i ćelije su inkubirane sa ćelijski permeabilnom bojom DCFH-DA (Dihlorofluorescin diacetat), što je fluorogenska proba. Vičak boje uklonjen je ispiranjem Dulbecco-ovim fosfatnim puferskim slanimrastvorom ili Hank-ovim puferskim slanim rastvorom. Potom su ćelije izložene reaktivnoj vrsti kiseonika dodavanjem 1000 u.M vodonik peroksida tokom 30-60 minuta. Potom je uklonjena podloga koja sadrži vodonik peoksid, i zamenjena sa podlogom za rast bez seruma i glukoze. PDAC su dodate sa 6000/cm<2>, i ćelije su kultivisane doatnih 24 sata. Onda su ćelije očitane u standardnom fluorescentnom čitaču ploče na 480Ex i 530Em. Sadržaj reaktivne vrste kiseonika podloge direktno je bio proporcionalan nivoima od DCFH-DA u ćelijskom citosolu. Sadržaj reaktivne vrste kiseonika meren je poređenjem sa prethodno određenom DCF standardnom krivom. Svi eksperimenti izvedeni su sa N=24.
[0344]Za test, pripremljeno je IX DCFH-DA neposredno pre upotrebe razblažavanjem sa 20 X DCFH-DA štok rastvorom IX u podlozi za ćelijsku kulturu bez fetalnog goveđeg seruma, i mešanjem do homogenosti. Rastvori vodonik peroksida (H202) pripremljeni su u DMEM ili DPBS kao što je potrebno. Standardna kriva pripremljena je kao 1:10 serije razblaženja u opsegu koncentracije 0 u.M do 10U.M razblaživanjem lmM standardnog DCF u podlozi za ćelijsku kulturu, prenosom 100 u.1 standardnog DCF u ploču sa 96 bazenčića pogodnu za fluorescentno merenje, i dodavanjem 100 u.1 pufera ćelijske lize. Fluorescencija je očitana na 480Ex i 530Em.
[0345]Rezultati: PDAC značajno je smanjila koncentraciju reaktivnih vrsta kiseonika u ko-kulturama astrocita. Videti FIG. 9.
6.5 PRIMER 5: POSTUPCI TRETIRANJA KORIŠĆENJEM MATIČNIH ĆELIJA IZ PLACENTE
6.5.1 Tretiranje infarktamiokarda
[0346]Muškarac u srednjim 50.-im sa bolom u grudima koji se širi na levu ruku duže od 20 minuta,
plitkim disanjem, mučninom, lupanjem srca, znojenjem. Sa rezultatima elektrokardiograma i porastom i padom nivoa kreatin kinaze u krvi, postavlja se diferencijalna dijagnoza infarkta miokarda (transmuralni) anteriornog zida srca. Nakon stabilizacije pojedinca nitroglicerinom i streptokinazom, pojedincu se daje 1 x 10<8>do 5 x IO<8>CD10<+>, CD34, CD105<+>, CD200<+>matičnih ćelija iz placente (PDAC) u 0,9% slanog rastvora direktno u pogođenu mesto korišćenjem kardijačnog šprica sa lokalnim anestetikom. Pojedinac se prati na intezivnoj negi sledeća 72 sata. Pojedinac se dalje prati sledeća tri meseca nakon tretiranja elektrokardiogramom i/ili postupcima vizuelizacije bojom radi ocene obima revaskularizacije mesta zahvaćenog infarktom. Terapeutske efektivnost je ustanovljena ako su rezultati elektrokardiograma primetno bliži normalnom nego pre davanja PDAC, ili ili ako je mesto zahvaćeno infarktom, kao što se vizualizuje, primetno revaskularizovano.
6.5.2Tretiranje kardiomiopatije
[0347]Pojedinac bez daha, sa oticanjem nogu i gležnjeva, i nepravilnim otkucajima srca. Nakon isključivanja drugih uzoraka, i sa potvrdom elektrokardiograma, dijagnostikuje se kardiomiopatija. Sonogram potvrđuje da pojedinac ima kongestivnu kardiomiopatiju. Pojedincu se daje lx IO<8>do 5 x IO<8>CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200<+>matičnih ćelija iz placente u 0,9% slanog rastvora direktno srčanu arteriju korišćenjem kardijačnog šprica sa lokalnim anestetikom. Pojedinac se prati naredna tri meseca za promene koje očitava sonogram koje ukazuju na normalniju cirkulaciju krvi, i za poboljšanje osećaja gubitka daha i smanjenja oticanja nogu i gležnjeva. Terapeutska efektivnost ustanovljena je za pojedinca ako bilo koji od ovih znakova pokazuje poboljšanje tokom perioda praćenja.
6.5.3Tretiranje periferne vaskularne bolesti
[0348]Pojedinac sa hladnim stopalima, peckanje u stopalima koja postanu crvena kada se olabave, sa bolom, ili slabošću i umorom u nogama. Nakon isključivanja dijabetesa, dijagnostikuje se periferna arterijska bolest. Pojedincu se daje 1 x IO<9>do 5 x IO<9>CD10<+>, CD34, CD105<+>, CD200<+>matičnih ćelija iz placente intravenozno u 450 mL 0,9% slanog rastvora, i prati se dvonedeljno naredna tri meseca. Terapeutska efektivnost je ustanovljena ako je poboljšan bilo koji od gore opisanih simptoma tokom perioda praćenja.
6.5.4Tretiranje periferne vaskularne bolesti
[0349]Pojedinac sa hladnim stopalima, peckanje u stopalima koja postanu crvena kada se olabave, sa bolom, ili slabošću i umorom u nogama. Nakon isključivanja dijabetesa, dijagnostikuje se periferna arterijska bolest. Pojedincu se daje 1 x IO<8>do 5 x 10<8>CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200<+>matičnih ćelija iz placente intramuskularno u 5 mL, 0,9% slanog rastvora, i/ili ekvivalentna količina intravenozno ili intraarterijalno, loaklno između prstiju na stopalima, i prati se dvonedeljno naredna tri meseca. Terapeutska efektivnost je ustanovljena ako je poboljšan bilo koji od gore opisanih simptoma tokom perioda praćenja.
6.5.5Kombinovana terapija periferne vaskularne bolesti
[0350]Pojedinac sa hladnim stopalima, peckanje u stopalima koja postanu crvena kada se olabave, sa bolom, ili slabošću i umorom u nogama. Nakon isključivanja dijabetesa, dijagnostikuje se periferna arterijska bolest. Pojedincu se daje 1 x IO<9>do 5 x IO<9>CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200<+>matičnih ćelija iz placente intravenozno u 450 mL 0,9% slanog rastvora, i prati se dvonedeljno naredna tri meseca. Pojedincu se takođe propisuje Cilostazol, 100 mg, da ga uzima dvaput dnevno. Terapeutska efektivnost je ustanovljena ako je poboljšan bilo koji od gore opisanih simptoma tokom perioda praćenja.
6.5.6Kombinovana terapija p eriferne vaskularne bolesti
[0351]Pojedinac sa hladnim stopalima, peckanje u stopalima koja postanu crvena kada se olabave, sa bolom, ili slabošću i umorom u nogama. Nakon isključivanja dijabetesa, dijagnostikuje se periferna arterijska bolest. Pojedinac se podvrgava angioplastici, i operaciji radi ugradnje stenta u femoralnu arteriju. Pojedincu se zatim daje 1 x IO<9>do 5 x IO<9>CD10<+>, CD34, CD105<+>, CD200<+>matičnih ćelija iz placente intravenozno u 450 mL0,9% slanog rastvora, i prati se dvonedeljno naredna tri meseca. Terapeutska efektivnost je ustanovljena ako je poboljšan bilo koji od gore opisanih simptoma tokom perioda praćenja.
6.5.7Tretiranje šlo<g>a korišćenjem PDAC
[0352]52 godišnji muškarac sa hemiplegijom na levoj strani tela, i delimičnom afazijom. Dijagnostikuje se ishemijski šlog. Nakon lociranja mesta ishemije korišćenjem magnetne rezonatne tomografije, pojedinac se priprema za operaciju radi izvođenja otvora u lobanji na zavaćenoj strani. Jednom kada se izvede otvor, 5 x IO<7>do 1 x IO<8>CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200<+>matičnih ćelija iz placente u 1-2 mL 0/9% slanog rastvora primenjuje se na ishemijsko mesto. Pojedinac se prati tokom narednih 7-14 dana za znake poboljšanja bilo kog simptoma šloga, naročito hemiplegije ili afazije. Terapeutska efektivnost je ustanovljena ako je poboljšan bilo koji od gore opisanih simptoma tokom perioda praćenja.
6.5.8Tretiranje šloga korišćenjem PDAC
[0353]52 godišnji muškarac sa hemiplegijom na levoj strani tela, i delimičnom afazijom. Dijagnostikuje se ishemijski šlog. Nakon lociranja mesta ishemije korišćenjem magnetne rezonatne tomografije, pojedinac se priprema za operaciju radi izvođenja otvora u lobanji na zavađenoj strani. Jednom kada se izvede otvor, 1 x IO<9>do 5 x IO<9>CD10<+>, CD34", CD105<+>, CD200<+>matičnih ćelija iz placente u 450 mL 0/9% slanog rastvora daje se intravenozno. Pojedinac se prati tokom narednih 7-14 dana za znake poboljšanja bilo kog simptoma šloga, naročito hemiplegije ili afazije. Terapeutska efektivnost je ustanovljena ako je poboljšan bilo koji od gore opisanih simptoma tokom perioda praćenja.

Claims (10)

1. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente koje su CD10+, CD34-, CD105+ i CD200+, kao što je određeno protočnom citometrijom, za primenu u postupku za tretiranje pojedinca koji ima bolest ili poremećaj krvnog sistema, pri čemu je pomenuta bolest ili poremećaj krvnog sistema periferna vaskularna bolest, periferna arterijska bolest, dijabetesna ulceracija ili kritična ishemija ekstremiteta.
2. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente za primenu prema zahtevu 1, pri čemu je pomenuta bolest ili poremećaj krvnog sistema periferna vaskularna bolest.
3. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente za primenu prema zahtevu 1, pri čemu je pomenuta bolest ili poremećaj krvnog sistema periferna arterijska bolest.
4. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente za primenu prema zahtevu 1, pri čemu je pomenuta bolest ili poremećaj krvnog sistema kritična ishemija ekstremiteta.
5. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente za primenu prema zahtevu 2, pri čemu je pomenuti simptom pomenute periferne vaskularne bolesti hladna stopala, peckanje u stopalima koja postanu crvena kada se olabave; bol; ili slabost i umor u nogama.
6. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente za primenu prema zahtevu 4, pri čemu je pomenuti simptom pomenute kritične ishemije ekstremiteta ishemijska bol u stanju odmora; jak bol u nogama i stopalima dok se pojedinac ne kreće; ne zarastanje rana na stopalima ili nogama; bol ili utrnulost u stopalima; sjajna, glatka, suva koža na nogama ili stopalima; zadebljanje nožnih noktiju; odsustvo ili smanjeni puls u nogama ili stopalima; otvorene rane; infekcije kože ili čirevi koji ne zarastaju; ili suva gangrena nogu ili stopala.
7. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente za primenu prema zahtevu 1, pri čemu su pomenute adherentne ćelije izvedene iz placente dodatno jedna ili više od CD45- ili CD90+, kao što se može detektovati protočnom citometrijom.
8. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente za primenu prema zahtevu 1, pri čemu su pomenute adherentne ćelije izvedene iz placente dodatno OCT-4+, kao što je detektovano pomoću RT-PCR.
9. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente za primenu prema bilo kom od zahteva 1 do 8, pri čemu se pomenute adherentne ćelije izvedene iz placente daju intravenozno, intraarterijalno, intramuskularno, intradermalno ili subkutano.
10. Populacija adherentnih ćelija izvedenih iz placente za primenu prema bilo kom od zahteva 1 do 9, pri čemu se daje oko 1 x IO5, 5 x IO5,1 x IO6, 5 x IO6,1 x IO7, 5 x IO7,1 x IO8, 5 x IO8,1 x IO9, 5 x IO9 ili 1 x IO<10>pomenutih adherentnih ćelija izvedenih iz placente.
RS20160885A 2010-04-07 2011-04-06 Angiogeneza korišćenjem matičnih ćelija iz placente RS55287B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US32182210P 2010-04-07 2010-04-07
PCT/US2011/031335 WO2011127117A1 (en) 2010-04-07 2011-04-06 Angiogenesis using placental stem cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS55287B1 true RS55287B1 (sr) 2017-03-31

Family

ID=44761079

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20160885A RS55287B1 (sr) 2010-04-07 2011-04-06 Angiogeneza korišćenjem matičnih ćelija iz placente

Country Status (25)

Country Link
US (3) US9254302B2 (sr)
EP (2) EP2556145B1 (sr)
JP (5) JP6097684B2 (sr)
KR (7) KR20220015489A (sr)
CN (2) CN107699541A (sr)
AR (2) AR081166A1 (sr)
AU (1) AU2011237747B2 (sr)
CA (1) CA2795518C (sr)
CY (1) CY1118105T1 (sr)
DK (2) DK2556145T3 (sr)
ES (1) ES2602474T3 (sr)
HR (1) HRP20161350T1 (sr)
HU (1) HUE029144T2 (sr)
IL (2) IL250234B2 (sr)
LT (1) LT2556145T (sr)
MX (3) MX347451B (sr)
NZ (2) NZ602808A (sr)
PL (1) PL2556145T3 (sr)
PT (1) PT2556145T (sr)
RS (1) RS55287B1 (sr)
SI (1) SI2556145T1 (sr)
SM (1) SMT201600377B (sr)
TW (5) TW202011974A (sr)
WO (1) WO2011127117A1 (sr)
ZA (1) ZA201606733B (sr)

Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2305795B1 (en) 2000-12-06 2019-07-03 Celularity, Inc. Method of collecting placental stem cells
ES2432493T3 (es) 2001-02-14 2013-12-03 Anthrogenesis Corporation Placenta de mamífero post-parto, su uso y células madre de la misma
US7498171B2 (en) 2002-04-12 2009-03-03 Anthrogenesis Corporation Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof
US9119899B2 (en) * 2006-01-18 2015-09-01 Cormatrix Cardiovascular, Inc. Method and system for treatment of cardiovascular disorders
NZ597304A (en) 2005-10-13 2013-06-28 Anthrogenesis Corp Immunomodulation using placental stem cells
PL2471907T3 (pl) 2005-12-29 2019-07-31 Celularity, Inc. Populacje komórek macierzystych łożyska
CA2677679A1 (en) 2007-02-12 2008-08-21 Anthrogenesis Corporation Hepatocytes and chondrocytes from adherent placental stem cells; and cd34+, cd45- placental stem cell-enriched cell populations
US9200253B1 (en) 2007-08-06 2015-12-01 Anthrogenesis Corporation Method of producing erythrocytes
RU2536242C2 (ru) 2007-09-28 2014-12-20 Антродженезис Корпорейшн Угнетение опухолей с помощью плацентарного перфузата человека и выделенных из плаценты человека вспомогательных натуральных клеток-киллеров
KR20200011604A (ko) 2008-08-20 2020-02-03 안트로제네시스 코포레이션 개선된 세포 조성물 및 그의 제조 방법
CA2734446C (en) 2008-08-22 2017-06-20 Anthrogenesis Corporation Methods and compositions for treatment of bone defects with placental cell populations
MX353489B (es) 2009-07-02 2018-01-16 Anthrogenesis Corp Metodo para producir eritrocitos sin celulas alimentadoras.
DK3284818T3 (da) 2010-01-26 2022-06-20 Celularity Inc Behandling af knoglerelateret kræft ved hjælp af placenta stamceller
DK2556145T3 (en) 2010-04-07 2016-11-07 Anthrogenesis Corp Angiogenesis using placental stem cells
EP2555783A1 (en) 2010-04-08 2013-02-13 Anthrogenesis Corporation Treatment of sarcoidosis using placental stem cells
MX342995B (es) 2010-07-13 2016-10-21 Anthrogenesis Corp Métodos de generar células asesinas naturales.
WO2012092485A1 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Anthrogenesis Corporation Enhancement of placental stem cell potency using modulatory rna molecules
US20120264215A1 (en) * 2011-04-18 2012-10-18 Korea University Research And Business Foudation Of Korea University Placenta-derived cell-conditioned culture media and animal-free, feeder-free method for culturing stem cells using the same
ES2707579T3 (es) 2011-06-01 2019-04-04 Celularity Inc Tratamiento del dolor usando citoblastos placentarios
WO2013055476A1 (en) 2011-09-09 2013-04-18 Anthrogenesis Corporation Treatment of amyotrophic lateral sclerosis using placental stem cells
WO2013082417A1 (en) * 2011-11-30 2013-06-06 Anthrogenesis Corporation Treatment using placental stem cells
WO2013149211A2 (en) * 2012-03-30 2013-10-03 University Of Southern California Compositions and treatment methods for mesenchymal stem cell-induced immunoregulation
CA2869163A1 (en) * 2012-03-30 2013-10-03 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Methods and compositions using fgf-8 to enhance cardiac regeneration and attenuate adverse cardiac remodeling
US9943551B2 (en) 2012-08-15 2018-04-17 Mimedx Group, Inc. Tissue grafts composed of micronized placental tissue and methods of making and using the same
US9180145B2 (en) 2012-10-12 2015-11-10 Mimedx Group, Inc. Compositions and methods for recruiting and localizing stem cells
AU2013359076A1 (en) 2012-12-14 2015-07-02 Anthrogenesis Corporation Anoikis resistant placental stem cells and uses thereof
US10111910B2 (en) 2013-01-18 2018-10-30 Mimedx Group, Inc. Methods for treating cardiac conditions
US10206977B1 (en) 2013-01-18 2019-02-19 Mimedx Group, Inc. Isolated placental stem cell recruiting factors
AU2014215458A1 (en) 2013-02-05 2015-08-13 Anthrogenesis Corporation Natural killer cells from placenta
US20160030488A1 (en) * 2013-03-14 2016-02-04 Antrhogenesis Corporation Use of placental stem cells in treatment of acute kidney injury
US10329529B2 (en) 2013-03-14 2019-06-25 Celularity, Inc. Enhanced placental stem cells and uses thereof
US10029030B2 (en) 2013-03-15 2018-07-24 Mimedx Group, Inc. Molded placental tissue compositions and methods of making and using the same
KR20160098244A (ko) * 2013-11-15 2016-08-18 안트로제네시스 코포레이션 사람 태반 관류액 세포를 포함하는 조성물, 상기 세포의 부분모집단 및 이의 용도
EP3094336A4 (en) * 2014-01-17 2018-02-14 MIMEDX Group Inc. Method for inducing angiogenesis
CN103756957B (zh) * 2014-01-27 2015-11-18 山东省齐鲁干细胞工程有限公司 一种从胎盘中洗脱内皮祖细胞的方法
WO2015120114A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Muffin Incorporated Compartmented cryopreservation container and uses thereof
JP6474549B2 (ja) * 2014-03-03 2019-02-27 国立大学法人徳島大学 幹細胞の培養産物の評価指標及びその利用
WO2016011283A1 (en) * 2014-07-17 2016-01-21 Cedars-Sinai Medical Center Blood-vessel therapeutic patch composed of endothelial cells derived from ipscs pre-treated with leptin
US20170290861A1 (en) * 2014-09-26 2017-10-12 Anthrogenesis Corporation Treatment of diabetic foot ulcer using placental stem cells
CN107106615A (zh) * 2014-10-09 2017-08-29 人类起源公司 胎盘来源的贴壁细胞外泌体及其用途
WO2016068616A1 (ko) * 2014-10-29 2016-05-06 차의과학대학교 산학협력단 C3 또는 c1r 보체를 분비하는 태반 유래 세포 및 이를 포함하는 조성물
US20170369845A1 (en) * 2014-12-31 2017-12-28 Anthrogenesis Corporation Methods for isolation of platelets
CN115478043A (zh) * 2015-05-26 2022-12-16 细胞结构公司 使用受刺激的胎盘干细胞的血管生成
KR102011634B1 (ko) * 2015-08-28 2019-08-19 주식회사 차바이오텍 향상된 산후 부착형 세포 및 그의 용도
IL281185B2 (en) * 2015-09-15 2024-05-01 Celularity Inc Treatment of diabetic peripheral neuropathy using placental cells
CN108368479A (zh) * 2015-09-29 2018-08-03 细胞结构公司 细胞效能分析
US12551509B2 (en) 2015-11-18 2026-02-17 Lucina Patent Holdco, Llc Acellular regenerative products and methods of their manufacture
CN106310227A (zh) * 2016-09-30 2017-01-11 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种干细胞制剂及其制备方法和应用
WO2019177269A1 (ko) * 2018-03-16 2019-09-19 주식회사 메디노 신경줄기세포를 이용한 혈관형성 유도 방법
CN108904799A (zh) * 2018-07-09 2018-11-30 夏荣木 一种抗肿瘤制剂及制备的方法
KR102593791B1 (ko) * 2021-02-26 2023-10-25 경희대학교 산학협력단 Pdgf-bb를 이용한 혈관 형성능이 증진된 골수 유래 혈관내피전구세포의 제조방법 및 이를 이용한 혈관형성 부전-관련 질환 치료용 세포치료제의 제조방법
CN116334210B (zh) * 2023-03-06 2025-10-31 中国人民解放军总医院 Aldh1a1和amigo2基因在制备房颤诊断和干预产品中的应用

Family Cites Families (272)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3862002A (en) 1962-05-08 1975-01-21 Sanfar Lab Inc Production of physiologically active placental substances
US4829000A (en) 1985-08-30 1989-05-09 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Reconstituted basement membrane complex with biological activity
US4798824A (en) 1985-10-03 1989-01-17 Wisconsin Alumni Research Foundation Perfusate for the preservation of organs
US5902741A (en) 1986-04-18 1999-05-11 Advanced Tissue Sciences, Inc. Three-dimensional cartilage cultures
US5863531A (en) 1986-04-18 1999-01-26 Advanced Tissue Sciences, Inc. In vitro preparation of tubular tissue structures by stromal cell culture on a three-dimensional framework
US5266480A (en) 1986-04-18 1993-11-30 Advanced Tissue Sciences, Inc. Three-dimensional skin culture system
NZ226750A (en) 1987-10-29 1990-09-26 Amrad Corp Ltd Immortalisation of neural precursor cells by introducing a retrovirus vector containing a myc-oncogene
US5004681B1 (en) 1987-11-12 2000-04-11 Biocyte Corp Preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood
US5192553A (en) 1987-11-12 1993-03-09 Biocyte Corporation Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood and methods of therapeutic use
GB8803697D0 (en) 1988-02-17 1988-03-16 Deltanine Research Ltd Clinical developments using amniotic membrane cells
US5284766A (en) 1989-02-10 1994-02-08 Kao Corporation Bed material for cell culture
FR2646438B1 (fr) 1989-03-20 2007-11-02 Pasteur Institut Procede de remplacement specifique d'une copie d'un gene present dans le genome receveur par l'integration d'un gene different de celui ou se fait l'integration
US5763266A (en) 1989-06-15 1998-06-09 The Regents Of The University Of Michigan Methods, compositions and devices for maintaining and growing human stem and/or hematopoietics cells
US5605822A (en) 1989-06-15 1997-02-25 The Regents Of The University Of Michigan Methods, compositions and devices for growing human hematopoietic cells
US5635386A (en) 1989-06-15 1997-06-03 The Regents Of The University Of Michigan Methods for regulating the specific lineages of cells produced in a human hematopoietic cell culture
US5437994A (en) 1989-06-15 1995-08-01 Regents Of The University Of Michigan Method for the ex vivo replication of stem cells, for the optimization of hematopoietic progenitor cell cultures, and for increasing the metabolism, GM-CSF secretion and/or IL-6 secretion of human stromal cells
US5399493A (en) 1989-06-15 1995-03-21 The Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for the optimization of human hematopoietic progenitor cell cultures
AU633958B2 (en) 1989-07-25 1993-02-11 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
US5464764A (en) 1989-08-22 1995-11-07 University Of Utah Research Foundation Positive-negative selection methods and vectors
ATE174058T1 (de) 1989-11-06 1998-12-15 Cell Genesys Inc Herstellung von proteinen mittels homologer rekombination
US5272071A (en) 1989-12-22 1993-12-21 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Method for the modification of the expression characteristics of an endogenous gene of a given cell line
US5061620A (en) 1990-03-30 1991-10-29 Systemix, Inc. Human hematopoietic stem cell
US5635387A (en) 1990-04-23 1997-06-03 Cellpro, Inc. Methods and device for culturing human hematopoietic cells and their precursors
US6326198B1 (en) 1990-06-14 2001-12-04 Regents Of The University Of Michigan Methods and compositions for the ex vivo replication of stem cells, for the optimization of hematopoietic progenitor cell cultures, and for increasing the metabolism, GM-CSF secretion and/or IL-6 secretion of human stromal cells
US5733542A (en) 1990-11-16 1998-03-31 Haynesworth; Stephen E. Enhancing bone marrow engraftment using MSCS
US5811094A (en) 1990-11-16 1998-09-22 Osiris Therapeutics, Inc. Connective tissue regeneration using human mesenchymal stem cell preparations
US5486359A (en) 1990-11-16 1996-01-23 Osiris Therapeutics, Inc. Human mesenchymal stem cells
US5226914A (en) 1990-11-16 1993-07-13 Caplan Arnold I Method for treating connective tissue disorders
US6010696A (en) 1990-11-16 2000-01-04 Osiris Therapeutics, Inc. Enhancing hematopoietic progenitor cell engraftment using mesenchymal stem cells
US5197985A (en) 1990-11-16 1993-03-30 Caplan Arnold I Method for enhancing the implantation and differentiation of marrow-derived mesenchymal cells
US5837539A (en) 1990-11-16 1998-11-17 Osiris Therapeutics, Inc. Monoclonal antibodies for human mesenchymal stem cells
US5190556A (en) 1991-03-19 1993-03-02 O.B. Tech, Inc. Cord cutter sampler
US5744361A (en) 1991-04-09 1998-04-28 Indiana University Expansion of human hematopoietic progenitor cells in a liquid medium
EP0552380A4 (en) 1991-08-08 1995-01-25 Kao Corp Cell culture support, production thereof, and production of cell cluster using same
EP0529751A1 (en) 1991-08-09 1993-03-03 W.R. Grace & Co.-Conn. Cell culture substrate, test material for cell culture and preparations thereof
WO1993004169A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
FI943024L (fi) 1991-12-23 1994-06-22 British Bio Technology Kantasoluja estävät proteiinit
CA2110283A1 (en) 1992-03-31 1993-10-14 Tatsutoshi Nakahata Physiologically active protein and hemotopoietic stem cell growth agent
US5552267A (en) 1992-04-03 1996-09-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Solution for prolonged organ preservation
US5460964A (en) 1992-04-03 1995-10-24 Regents Of The University Of Minnesota Method for culturing hematopoietic cells
WO1994000484A1 (en) 1992-06-22 1994-01-06 Young Henry E Scar inhibitory factor and use thereof
US5672346A (en) 1992-07-27 1997-09-30 Indiana University Foundation Human stem cell compositions and methods
US5928947A (en) 1992-07-27 1999-07-27 California Institute Of Technology Mammalian multipotent neural stem cells
US5849553A (en) 1992-07-27 1998-12-15 California Institute Of Technology Mammalian multipotent neural stem cells
JPH08506007A (ja) 1992-11-16 1996-07-02 アプライド イミューン サイエンシーズ，インコーポレイテッド 多能性の休止状態の幹細胞集団
US5772992A (en) 1992-11-24 1998-06-30 G.D. Searle & Co. Compositions for co-administration of interleukin-3 mutants and other cytokines and hematopoietic factors
US5654186A (en) 1993-02-26 1997-08-05 The Picower Institute For Medical Research Blood-borne mesenchymal cells
AU694111B2 (en) 1993-03-31 1998-07-16 Pro-Neuron, Inc. Inhibitor of stem cell proliferation and uses thereof
GB9308271D0 (en) 1993-04-21 1993-06-02 Univ Edinburgh Method of isolating and/or enriching and/or selectively propagating pluripotential animal cells and animals for use in said method
US5709854A (en) 1993-04-30 1998-01-20 Massachusetts Institute Of Technology Tissue formation by injecting a cell-polymeric solution that gels in vivo
US5372581A (en) 1993-07-21 1994-12-13 Minneapolis Children's Services Corporation Method and apparatus for placental blood collection
US5591625A (en) 1993-11-24 1997-01-07 Case Western Reserve University Transduced mesenchymal stem cells
US6288030B1 (en) 1993-12-22 2001-09-11 Amgen Inc. Stem cell factor formulations and methods
US6001654A (en) 1994-01-28 1999-12-14 California Institute Of Technology Methods for differentiating neural stem cells to neurons or smooth muscle cells using TGT-β super family growth factors
US5942496A (en) 1994-02-18 1999-08-24 The Regent Of The University Of Michigan Methods and compositions for multiple gene transfer into bone cells
CA2192103C (en) 1994-06-06 2002-02-05 Arnold I. Caplan Biomatrix for tissue regeneration
US6174333B1 (en) 1994-06-06 2001-01-16 Osiris Therapeutics, Inc. Biomatrix for soft tissue regeneration using mesenchymal stem cells
DE4422667A1 (de) 1994-06-30 1996-01-04 Boehringer Ingelheim Int Verfahren zur Herstellung und Züchtung hämatopoetischer Vorläuferzellen
US6103522A (en) 1994-07-20 2000-08-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Human marrow stromal cell lines which sustain hematopoiesis
US5516532A (en) 1994-08-05 1996-05-14 Children's Medical Center Corporation Injectable non-immunogenic cartilage and bone preparation
US5827742A (en) 1994-09-01 1998-10-27 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Method of selecting pluripotent hematopioetic progenitor cells
US5665557A (en) 1994-11-14 1997-09-09 Systemix, Inc. Method of purifying a population of cells enriched for hematopoietic stem cells populations of cells obtained thereby and methods of use thereof
US5914268A (en) 1994-11-21 1999-06-22 National Jewish Center For Immunology & Respiratory Medicine Embryonic cell populations and methods to isolate such populations
US5874301A (en) 1994-11-21 1999-02-23 National Jewish Center For Immunology And Respiratory Medicine Embryonic cell populations and methods to isolate such populations
US5789147A (en) 1994-12-05 1998-08-04 New York Blood Center, Inc. Method for concentrating white cells from whole blood by adding a red cell sedimentation reagent to whole anticoagulated blood
US5736396A (en) 1995-01-24 1998-04-07 Case Western Reserve University Lineage-directed induction of human mesenchymal stem cell differentiation
US5695998A (en) 1995-02-10 1997-12-09 Purdue Research Foundation Submucosa as a growth substrate for islet cells
US6011000A (en) 1995-03-03 2000-01-04 Perrine; Susan P. Compositions for the treatment of blood disorders
US5906934A (en) 1995-03-14 1999-05-25 Morphogen Pharmaceuticals, Inc. Mesenchymal stem cells for cartilage repair
US5716616A (en) 1995-03-28 1998-02-10 Thomas Jefferson University Isolated stromal cells for treating diseases, disorders or conditions characterized by bone defects
US5733541A (en) 1995-04-21 1998-03-31 The Regent Of The University Of Michigan Hematopoietic cells: compositions and methods
US5677139A (en) 1995-04-21 1997-10-14 President And Fellows Of Harvard College In vitro differentiation of CD34+ progenitor cells into T lymphocytes
CZ289896B6 (cs) 1995-04-27 2002-04-17 The Procter & Gamble Company Nosič upravený pomocí inverzní emulze s vysokým obsahem vnitřní vodní fáze, připravené za uľití organopolysiloxan-polyoxyalkylenového emulgátoru
US5925567A (en) 1995-05-19 1999-07-20 T. Breeders, Inc. Selective expansion of target cell populations
US5908782A (en) 1995-06-05 1999-06-01 Osiris Therapeutics, Inc. Chemically defined medium for human mesenchymal stem cells
US5830708A (en) 1995-06-06 1998-11-03 Advanced Tissue Sciences, Inc. Methods for production of a naturally secreted extracellular matrix
AU6223296A (en) 1995-06-07 1996-12-30 Novartis Ag Methods for obtaining compositions enriched for hematopoieti c stem cells and antibodies for use therein
US5877299A (en) 1995-06-16 1999-03-02 Stemcell Technologies Inc. Methods for preparing enriched human hematopoietic cell preparations
US6306575B1 (en) 1995-06-16 2001-10-23 Stemcell Technologies, Inc. Methods for preparing enriched human hematopoietic cell preparations
US5654381A (en) 1995-06-16 1997-08-05 Massachusetts Institute Of Technology Functionalized polyester graft copolymers
US5935576A (en) 1995-09-13 1999-08-10 Fordham University Compositions and methods for the treatment and prevention of neoplastic diseases using heat shock proteins complexed with exogenous antigens
US5858782A (en) 1995-11-13 1999-01-12 Regents Of The University Of Michigan Functional human hematopoietic cells
WO1997018298A1 (en) 1995-11-14 1997-05-22 Regents Of The University Of Minnesota Ex vivo culture of stem cells
JP3781433B2 (ja) 1995-11-16 2006-05-31 ケース ウエスターン リザーブ ユニバーシティ ヒト間葉幹細胞の試験管内軟骨形成誘導
DE69635899T2 (de) 1995-11-17 2006-11-23 Asahi Kasei Kabushiki Kaisha Polypeptid, das die differenzierung unterdrueckt
US5716794A (en) 1996-03-29 1998-02-10 Xybernaut Corporation Celiac antigen
ES2329953T3 (es) 1996-04-19 2009-12-02 Osiris Therapeutics, Inc. Regeneracion e incremento de hueso utilizando celulas madre mesenquimales.
AU2808397A (en) 1996-04-26 1997-11-19 Case Western Reserve University Skin regeneration using mesenchymal stem cells
US5919176A (en) 1996-05-14 1999-07-06 Children's Hospital Medical Center Of Northern California Apparatus and method for collecting blood from an umbilical cord
US5827740A (en) 1996-07-30 1998-10-27 Osiris Therapeutics, Inc. Adipogenic differentiation of human mesenchymal stem cells
US5851984A (en) 1996-08-16 1998-12-22 Genentech, Inc. Method of enhancing proliferation or differentiation of hematopoietic stem cells using Wnt polypeptides
US5916202A (en) 1996-08-30 1999-06-29 Haswell; John N. Umbilical cord blood collection
US6227202B1 (en) 1996-09-03 2001-05-08 Maulana Azad Medical College Method of organogenesis and tissue regeneration/repair using surgical techniques
US5945337A (en) 1996-10-18 1999-08-31 Quality Biological, Inc. Method for culturing CD34+ cells in a serum-free medium
US5919702A (en) 1996-10-23 1999-07-06 Advanced Tissue Science, Inc. Production of cartilage tissue using cells isolated from Wharton's jelly
US5969105A (en) 1996-10-25 1999-10-19 Feng; Yiqing Stem cell factor receptor agonists
US6335195B1 (en) 1997-01-28 2002-01-01 Maret Corporation Method for promoting hematopoietic and mesenchymal cell proliferation and differentiation
US6152142A (en) 1997-02-28 2000-11-28 Tseng; Scheffer C. G. Grafts made from amniotic membrane; methods of separating, preserving, and using such grafts in surgeries
US6231880B1 (en) 1997-05-30 2001-05-15 Susan P. Perrine Compositions and administration of compositions for the treatment of blood disorders
CA2294944A1 (en) 1997-07-03 1999-01-14 Osiris Therapeutics, Inc. Human mesenchymal stem cells from peripheral blood
CA2296704C (en) 1997-07-14 2010-10-19 Osiris Therapeutics, Inc. Cardiac muscle regeneration using mesenchymal stem cells
US7514074B2 (en) 1997-07-14 2009-04-07 Osiris Therapeutics, Inc. Cardiac muscle regeneration using mesenchymal stem cells
US6077708A (en) 1997-07-18 2000-06-20 Collins; Paul C. Method of determining progenitor cell content of a hematopoietic cell culture
US5879318A (en) 1997-08-18 1999-03-09 Npbi International B.V. Method of and closed system for collecting and processing umbilical cord blood
AU9127098A (en) 1997-09-04 1999-03-22 Osiris Therapeutics, Inc. Ligands that modulate differentiation of mesenchymal stem cells
US5968829A (en) 1997-09-05 1999-10-19 Cytotherapeutics, Inc. Human CNS neural stem cells
US6093531A (en) 1997-09-29 2000-07-25 Neurospheres Holdings Ltd. Generation of hematopoietic cells from multipotent neural stem cells
US6248587B1 (en) 1997-11-26 2001-06-19 University Of Southern Cailfornia Method for promoting mesenchymal stem and lineage-specific cell proliferation
US6059968A (en) 1998-01-20 2000-05-09 Baxter International Inc. Systems for processing and storing placenta/umbilical cord blood
US6291240B1 (en) 1998-01-29 2001-09-18 Advanced Tissue Sciences, Inc. Cells or tissues with increased protein factors and methods of making and using same
AU749675B2 (en) 1998-03-13 2002-07-04 Mesoblast International Sarl Uses for human non-autologous mesenchymal stem cells
US6368636B1 (en) 1998-03-18 2002-04-09 Osiris Therapeutics, Inc. Mesenchymal stem cells for prevention and treatment of immune responses in transplantation
AU755888B2 (en) 1998-03-18 2003-01-02 Mesoblast International Sarl Mesenchymal stem cells for prevention and treatment of immune responses in transplantation
AU2999199A (en) 1998-04-03 1999-10-25 Osiris Therapeutics, Inc. Mesenchymal stem cells as immunosuppressants
CA2331122A1 (en) 1998-05-04 1999-11-11 Point Therapeutics, Inc. Hematopoietic stimulation
US6835377B2 (en) 1998-05-13 2004-12-28 Osiris Therapeutics, Inc. Osteoarthritis cartilage regeneration
AU4094099A (en) 1998-05-22 1999-12-13 Osiris Therapeutics, Inc. Production of megakaryocytes by co-culturing human mesenchymal stem cells with cd34+ cells
PT1082410E (pt) 1998-05-29 2007-11-09 Osiris Therapeutics Inc Células estaminais mesenquimatosas humanas cd45+ e/ou fibroblastos+
AU4336599A (en) 1998-06-08 1999-12-30 Osiris Therapeutics, Inc. (in vitro) maintenance of hematopoietic stem cells
DE69937347T2 (de) 1998-06-08 2008-09-04 Osiris Therapeutics, Inc. Regulierung der hämatopoietischen stammzelldifferenzierung durch verwendung von menschlichen mesenchymalen stammzellen
US6713245B2 (en) 1998-07-06 2004-03-30 Diacrin, Inc. Methods for storing neural cells such that they are suitable for transplantation
PT1100488E (pt) 1998-07-28 2003-09-30 Synthes Ag Utilizacao de compostos de creatina para tratamento das celulas e tecidos do osso ou cartilagem
US5958767A (en) 1998-08-14 1999-09-28 The Children's Medical Center Corp. Engraftable human neural stem cells
JP3517359B2 (ja) 1998-09-14 2004-04-12 テルモ株式会社 細胞分離・回収装置および細胞の分離・回収方法
CA2345397A1 (en) 1998-09-23 2000-03-30 Mount Sinai Hospital Trophoblast cell preparations
WO2000027995A1 (en) 1998-11-09 2000-05-18 Monash University Embryonic stem cells
US6548299B1 (en) 1999-11-12 2003-04-15 Mark J. Pykett Lymphoid tissue-specific cell production from hematopoietic progenitor cells in three-dimensional devices
WO2000027999A2 (en) 1998-11-12 2000-05-18 Cell Science Therapeutics, Inc. Lymphoid tissue-specific cell production from hematopoietic progenitor cells in three-dimensional devices
US6184035B1 (en) 1998-11-18 2001-02-06 California Institute Of Technology Methods for isolation and activation of, and control of differentiation from, skeletal muscle stem or progenitor cells
US6328765B1 (en) 1998-12-03 2001-12-11 Gore Enterprise Holdings, Inc. Methods and articles for regenerating living tissue
HK1041454B (en) 1998-12-24 2004-12-31 生物安全股份有限公司 Blood separation system particularly for concentrating hematopoietic stem cells
US20030007954A1 (en) 1999-04-12 2003-01-09 Gail K. Naughton Methods for using a three-dimensional stromal tissue to promote angiogenesis
JP2002542349A (ja) 1999-04-16 2002-12-10 ダブリューエム・マーシュ・ライス・ユニバーシティー ポリ（プロピレンフマラート）−ジアクリレートマクロマーで交差結合された生体分解性のポリ（プロピレンフマラート）ネットワーク
IN191359B (sr) 1999-04-20 2003-11-29 Nat Inst Immunology
AU4860900A (en) 1999-06-02 2000-12-18 Lifebank Services, L.L.C. Methods of isolation, cryopreservation, and therapeutic use of human amniotic epithelial cells
US6333029B1 (en) 1999-06-30 2001-12-25 Ethicon, Inc. Porous tissue scaffoldings for the repair of regeneration of tissue
US6355699B1 (en) 1999-06-30 2002-03-12 Ethicon, Inc. Process for manufacturing biomedical foams
US8075881B2 (en) 1999-08-05 2011-12-13 Regents Of The University Of Minnesota Use of multipotent adult stem cells in treatment of myocardial infarction and congestive heart failure
US7838289B2 (en) 2001-02-14 2010-11-23 Abt Holding Company Assay utilizing multipotent adult stem cells
US8147824B2 (en) 1999-08-05 2012-04-03 Athersys, Inc. Immunomodulatory properties of multipotent adult progenitor cells and uses thereof
US7015037B1 (en) 1999-08-05 2006-03-21 Regents Of The University Of Minnesota Multiponent adult stem cells and methods for isolation
US6239157B1 (en) 1999-09-10 2001-05-29 Osiris Therapeutics, Inc. Inhibition of osteoclastogenesis
US6685936B2 (en) 1999-10-12 2004-02-03 Osiris Therapeutics, Inc. Suppressor cells induced by culture with mesenchymal stem cells for treatment of immune responses in transplantation
US6280718B1 (en) 1999-11-08 2001-08-28 Wisconsin Alumni Reasearch Foundation Hematopoietic differentiation of human pluripotent embryonic stem cells
EP1264877B1 (en) 2000-03-16 2013-10-02 Cellseed Inc. Cell cultivation-support material, method of cocultivation of cells and cocultivated cell sheet obtained therefrom
US20010038836A1 (en) 2000-04-04 2001-11-08 Matthew During Application of myeloid-origin cells to the nervous system
ES2267778T3 (es) 2000-06-06 2007-03-16 Glaxo Group Limited Composicion para el tratamiento del cancer, que contiene un agente anti-neoplastico y un inhibidor de pde4.
AU2002253795B2 (en) 2000-11-30 2007-02-01 The Children's Medical Center Corporation Synthesis of 4-Amino-Thalidomide enantiomers
US7311905B2 (en) 2002-02-13 2007-12-25 Anthrogenesis Corporation Embryonic-like stem cells derived from post-partum mammalian placenta, and uses and methods of treatment using said cells
US20080152629A1 (en) 2000-12-06 2008-06-26 James Edinger Placental stem cell populations
EP2305795B1 (en) 2000-12-06 2019-07-03 Celularity, Inc. Method of collecting placental stem cells
US7091353B2 (en) 2000-12-27 2006-08-15 Celgene Corporation Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
US20030045552A1 (en) 2000-12-27 2003-03-06 Robarge Michael J. Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
ES2432493T3 (es) 2001-02-14 2013-12-03 Anthrogenesis Corporation Placenta de mamífero post-parto, su uso y células madre de la misma
EP2316918B1 (en) 2001-02-14 2015-07-01 Anthrogenesis Corporation Post-partum mammalian placenta, its use and placental stem cells therefrom
US20020132343A1 (en) 2001-03-19 2002-09-19 Clark Lum System and method for delivering umbilical cord-derived tissue-matched stem cells for transplantation
US20030022358A1 (en) 2001-05-29 2003-01-30 Hall Jane H. Growth of filterable organisms that require non-diffusable media components
US20030044977A1 (en) 2001-08-10 2003-03-06 Norio Sakuragawa Human stem cells originated from human amniotic mesenchymal cell layer
DE10139783C1 (de) 2001-08-14 2003-04-17 Transtissue Technologies Gmbh Zellzusammensetzungen zur Behandlung von Osteoarthrose, sowie Verfahren zu deren Herstellung
EP1288293A1 (en) 2001-08-30 2003-03-05 Norio Sakuragawa Human neural stem cells originated from human amniotic mesenchymal cell layer
CN1195055C (zh) 2001-09-06 2005-03-30 周胜利 从胎盘组织中提取造血干细胞用于建立造血干细胞库的新方法
US9969980B2 (en) 2001-09-21 2018-05-15 Garnet Biotherapeutics Cell populations which co-express CD49c and CD90
JP4330995B2 (ja) 2001-11-15 2009-09-16 チルドレンズ メディカル センター コーポレーション 絨毛膜絨毛、羊水、および胎盤からの胎児性幹細胞を単離、増殖、および分化させる方法、ならびにその治療的使用方法
JP3728750B2 (ja) 2001-11-22 2005-12-21 ニプロ株式会社 培養皮膚及びその製造方法
US7799324B2 (en) 2001-12-07 2010-09-21 Geron Corporation Using undifferentiated embryonic stem cells to control the immune system
JP3934539B2 (ja) 2001-12-12 2007-06-20 独立行政法人科学技術振興機構 胎盤等由来の成体又は生後組織の前駆細胞
US20040018178A1 (en) 2002-01-22 2004-01-29 Advanced Cell Technology Stem cell-derived endothelial cells modified to disrupt tumor angiogenesis
NZ534643A (en) 2002-02-13 2010-06-25 Anthrogenesis Corp Embryonic-like stem cells derived from post-partum mammalian placenta and uses and methods of treatment using said cells
US20030161818A1 (en) 2002-02-25 2003-08-28 Kansas State University Research Foundation Cultures, products and methods using stem cells
US7736892B2 (en) 2002-02-25 2010-06-15 Kansas State University Research Foundation Cultures, products and methods using umbilical cord matrix cells
IL164079A0 (en) 2002-03-15 2005-12-18 Us Dept Veterans Affairs Methods and compositions using cellular asialodeterminants and glycoconjugates for targeting cells to tissues and organs
US20030187515A1 (en) 2002-03-26 2003-10-02 Hariri Robert J. Collagen biofabric and methods of preparing and using the collagen biofabric
US7498171B2 (en) 2002-04-12 2009-03-03 Anthrogenesis Corporation Modulation of stem and progenitor cell differentiation, assays, and uses thereof
KR20050000400A (ko) 2002-04-12 2005-01-03 셀진 코포레이션 줄기 및 전구 세포 분화의 조절, 측정 및 이들의 용도
ZA200408369B (en) 2002-04-12 2006-11-29 Celgene Corp Methods for identification of modulators of angiogenesis, compounds discovered thereby, and methods of treatment using the compounds
US20030235563A1 (en) 2002-04-19 2003-12-25 Strom Stephen C. Placental derived stem cells and uses thereof
US20040161419A1 (en) 2002-04-19 2004-08-19 Strom Stephen C. Placental stem cells and uses thereof
CA2488013A1 (en) 2002-05-30 2003-12-11 Celgene Corporation Methods of using jnk or mkk inhibitors to modulate cell differentiation and to treat myeloproliferative disorders and myelodysplastic syndromes
US7422736B2 (en) 2002-07-26 2008-09-09 Food Industry Research And Development Institute Somatic pluripotent cells
JP4603883B2 (ja) 2002-07-31 2010-12-22 サントル・ナショナル・ドゥ・ラ・レシェルシュ・サイエンティフィーク−セ・エン・エール・エス− 脂肪組織由来の幹細胞および前記細胞から分化した細胞
EP1535994A4 (en) 2002-08-23 2005-12-07 Srl Inc HUMAN BONE STEM CELLS
US20040062753A1 (en) 2002-09-27 2004-04-01 Alireza Rezania Composite scaffolds seeded with mammalian cells
US7189740B2 (en) 2002-10-15 2007-03-13 Celgene Corporation Methods of using 3-(4-amino-oxo-1,3-dihydro-isoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione for the treatment and management of myelodysplastic syndromes
AU2003298775B2 (en) 2002-11-26 2008-07-17 Anthrogenesis Corporation Cytotherapeutics, cytotherapeutic units and methods for treatments using them
EP2277992A3 (en) 2003-02-11 2011-03-02 John E. Davies Progenitor cells from Wharton's jelly of human umbilical cord
CN1770976A (zh) 2003-02-13 2006-05-10 人类起源公司 利用脐带血治疗患有疾病、紊乱或状况的个体的用途
WO2004087896A2 (en) 2003-03-31 2004-10-14 Pfizer Products Inc. Hepatocyte differentiation of stem cells
CN1548529A (zh) 2003-05-09 2004-11-24 中国人民解放军军事医学科学院基础医 一种人胎盘间充质干细胞的分离方法
US7255729B2 (en) 2003-05-30 2007-08-14 Noritake Co., Limited Porous cylindrical-body module, structure for supporting porous cylindrical bodies, and method for fastening a supporting member
US7875272B2 (en) * 2003-06-27 2011-01-25 Ethicon, Incorporated Treatment of stroke and other acute neuraldegenerative disorders using postpartum derived cells
EP2399990B1 (en) 2003-06-27 2015-07-22 DePuy Synthes Products, Inc. Cells derived from post-partum umbilical cord for use in treatment of disease of the heart and circulatory system
US20050042595A1 (en) 2003-08-14 2005-02-24 Martin Haas Banking of multipotent amniotic fetal stem cells
US20050089513A1 (en) 2003-10-28 2005-04-28 Norio Sakuragawa Side population cells originated from human amnion and their uses
WO2005047491A2 (en) 2003-11-10 2005-05-26 Amgen Inc. Methods of using g-csf mobilized c-kit+cells in the production of embryoid body-like cell clusters for tissue repair and in the treatment of cardiac myopathy
KR100560340B1 (ko) 2003-11-11 2006-03-14 한훈 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법
JP2005151907A (ja) 2003-11-27 2005-06-16 Shigeo Saito 胎盤又は羊膜由来ヒト幹細胞及びその樹立方法並びに臓器への分化誘導方法
KR20120039065A (ko) 2003-12-02 2012-04-24 셀진 코포레이션 혈색소병증　및　빈혈의　치료　및　관리를　위한　방법및　조성물
TWI338714B (en) 2003-12-02 2011-03-11 Cathay General Hospital Method of isolation and enrichment of mesenchymal stem cells from amniotic fluid
US20050176139A1 (en) 2004-01-12 2005-08-11 Yao-Chang Chen Placental stem cell and methods thereof
US20050266391A1 (en) 2004-01-15 2005-12-01 Bennett Brydon L Methods for preserving tissue
EP2298864B1 (en) 2004-03-22 2017-10-11 Mesoblast International Sàrl Mesenchymal stem cells and uses therefor
WO2005097190A2 (en) 2004-03-26 2005-10-20 Celgene Corporation Systems and methods for providing a stem cell bank
WO2005105992A1 (en) 2004-04-21 2005-11-10 New York Eye & Ear Infirmary Chondrocyte culture formulations
JP2006006249A (ja) 2004-06-28 2006-01-12 Hiroshima Univ 羊膜由来細胞の培養方法及びその利用
US7244759B2 (en) 2004-07-28 2007-07-17 Celgene Corporation Isoindoline compounds and methods of making and using the same
US20080292597A1 (en) 2004-07-29 2008-11-27 David A Steenblock Umbilical Cord Stem Cell Composition & Method of Treating Neurological Diseases
KR101322889B1 (ko) 2004-08-16 2013-10-30 셀리서치 코포레이션 피티이 리미티드 제대의 양막으로부터 줄기/전구세포의 추출
US7147626B2 (en) 2004-09-23 2006-12-12 Celgene Corporation Cord blood and placenta collection kit
US7909806B2 (en) 2004-09-23 2011-03-22 Anthrogenesis Corporation Cord blood and placenta collection kit
US8039258B2 (en) 2004-09-28 2011-10-18 Ethicon, Inc. Tissue-engineering scaffolds containing self-assembled-peptide hydrogels
US20060171930A1 (en) 2004-12-21 2006-08-03 Agnieszka Seyda Postpartum cells derived from umbilical cord tissue, and methods of making, culturing, and using the same
US20060166361A1 (en) 2004-12-21 2006-07-27 Agnieszka Seyda Postpartum cells derived from placental tissue, and methods of making, culturing, and using the same
CA2589041C (en) 2004-12-23 2019-08-20 DePuy Synthes Products, Inc. Postpartum cells derived from umbilical cord tissue, and methods of making and using the same
EP1835924B1 (en) 2004-12-23 2013-08-21 Ethicon, Incorporated Treatment of parkinson's disease and related disorders using postpartum derived cells
US20070041943A1 (en) 2004-12-29 2007-02-22 Children's Hospital Research Expression of virus entry inhibitors and recombinant AAV thereof
CA2593549C (en) 2005-01-07 2016-04-26 Wake Forest University Health Sciences Regeneration of pancreatic islets by amniotic fluid stem cell therapy
WO2006091766A2 (en) 2005-02-24 2006-08-31 Jau-Nan Lee Human trophoblast stem cells and use thereof
US20060222634A1 (en) 2005-03-31 2006-10-05 Clarke Diana L Amnion-derived cell compositions, methods of making and uses thereof
CA2648506A1 (en) 2005-04-16 2006-10-26 Axordia Limited Cytotrophoblast stem cell
AU2006202209B2 (en) 2005-05-27 2011-04-14 Lifescan, Inc. Amniotic fluid derived cells
WO2006135843A2 (en) 2005-06-10 2006-12-21 Celgene Corporation Human placental collagen compositions, processes for their preparation, methods of their use and kits comprising the compositions
WO2007005807A2 (en) 2005-06-30 2007-01-11 Anthrogenesis Corporation Repair of tympanic membrane using placenta derived collagen biofabric
EP1919365A2 (en) 2005-07-13 2008-05-14 Anthrogenesis Corporation Ocular plug formed from placenta derived collagen biofabric
US7928280B2 (en) 2005-07-13 2011-04-19 Anthrogenesis Corporation Treatment of leg ulcers using placenta derived collagen biofabric
WO2007011693A2 (en) 2005-07-14 2007-01-25 Medistem Laboratories, Inc. Compositions of placentally-derived stem cells for the treatment of cancer
EP1915440A4 (en) 2005-08-19 2009-11-04 Bio Regenerate Inc COMPOSITIONS OF CELLS ENRICHED WITH COMBINATIONS OF VARIOUS STRAIN AND PRECURSOR CELL POPULATIONS, METHOD OF USE THEREOF, AND METHOD FOR THE PREPARATION OF PRIVATE BANKS THEREOF
ZA200803929B (en) 2005-10-13 2009-08-26 Anthrogenesis Corp Production of oligodendrocytes from placenta-derived stem cells
NZ597304A (en) 2005-10-13 2013-06-28 Anthrogenesis Corp Immunomodulation using placental stem cells
CN100344757C (zh) 2005-10-18 2007-10-24 天津昂赛细胞基因工程有限公司 人胎盘、脐带间充质干细胞库及其构建方法
WO2007070870A1 (en) 2005-12-16 2007-06-21 Ethicon, Inc. Compositions and methods for inhibiting adverse immune response in histocompatibility-mismatched transplantation
US8741638B2 (en) 2005-12-19 2014-06-03 DePuy Synthes Products, LLC In vitro expansion of postpartum-derived cells in roller bottles
CN103173401A (zh) 2005-12-22 2013-06-26 简·恩尼斯 来自冷冻的脐带组织的活细胞
EP1979050B1 (en) 2005-12-28 2017-04-19 DePuy Synthes Products, Inc. Treatment of peripheral vascular disease using postpartum-derived cells
EP1976978A2 (en) 2005-12-29 2008-10-08 Anthrogenesis Corporation Co-culture of placental stem cells and stem cells from a second source
ZA200804717B (en) 2005-12-29 2010-02-24 Anthrogenesis Corp Improved composition for collecting and preserving a placental stem cells and methods of using the composition
PL2471907T3 (pl) * 2005-12-29 2019-07-31 Celularity, Inc. Populacje komórek macierzystych łożyska
US20070253931A1 (en) 2006-01-12 2007-11-01 Osiris Therapeutics, Inc. Use of mesenchymal stem cells for treating genetic diseases and disorders
US9944900B2 (en) 2006-01-18 2018-04-17 Hemacell Perfusion Pulsatile perfusion extraction method for non-embryonic pluripotent stem cells
US11992507B2 (en) 2006-01-23 2024-05-28 Abt Holding Company MAPC therapeutics without adjunctive immunosuppressive treatment
KR20090031895A (ko) 2006-06-09 2009-03-30 안트로제네시스 코포레이션 태반 니치 및 줄기 세포 배양을 위한 이의 용도
US20070287176A1 (en) 2006-06-13 2007-12-13 Alireza Rezania Chorionic villus derived cells
US7993918B2 (en) 2006-08-04 2011-08-09 Anthrogenesis Corporation Tumor suppression using placental stem cells
WO2008021391A1 (en) 2006-08-15 2008-02-21 Anthrogenesis Corporation Umbilical cord biomaterial for medical use
WO2008042441A1 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Anthrogenesis Corporation Use of umbilical cord biomaterial for ocular surgery
WO2008060377A2 (en) 2006-10-04 2008-05-22 Anthrogenesis Corporation Placental or umbilical cord tissue compositions
CN101622007A (zh) 2006-10-06 2010-01-06 人类起源公司 天然(端肽)胎盘胶原组合物
US8562972B2 (en) * 2006-10-23 2013-10-22 Anthrogenesis Corporation Methods and compositions for treatment of bone defects with placental cell populations
CN101611139B (zh) 2006-11-13 2012-07-04 伊西康公司 利用微载体的产后来源的细胞的体外扩增
CA2677679A1 (en) 2007-02-12 2008-08-21 Anthrogenesis Corporation Hepatocytes and chondrocytes from adherent placental stem cells; and cd34+, cd45- placental stem cell-enriched cell populations
NZ612888A (en) 2007-02-12 2015-02-27 Anthrogenesis Corp Treatment of inflammatory diseases using placental stem cells
US20100172830A1 (en) 2007-03-29 2010-07-08 Cellx Inc. Extraembryonic Tissue cells and method of use thereof
KR20140107677A (ko) 2007-09-19 2014-09-04 플루리스템 리미티드 지방 또는 태반 조직 유래의 부착 세포 및 이의 치료 용도
KR20220122774A (ko) * 2007-09-26 2022-09-02 셀룰래리티 인코포레이티드 인간 태반 관류액으로부터의 혈관형성 세포
RU2536242C2 (ru) 2007-09-28 2014-12-20 Антродженезис Корпорейшн Угнетение опухолей с помощью плацентарного перфузата человека и выделенных из плаценты человека вспомогательных натуральных клеток-киллеров
EP2217329B1 (en) 2007-11-07 2018-01-10 Anthrogenesis Corporation Use of umbilical cord blood in the treatment of premature birth complications
KR20200011604A (ko) * 2008-08-20 2020-02-03 안트로제네시스 코포레이션 개선된 세포 조성물 및 그의 제조 방법
CA2734237C (en) * 2008-08-20 2019-07-02 Anthrogenesis Corporation Treatment of stroke using isolated placental cells
CA2734446C (en) 2008-08-22 2017-06-20 Anthrogenesis Corporation Methods and compositions for treatment of bone defects with placental cell populations
RU2539786C2 (ru) * 2008-09-02 2015-01-27 Плуристем Лтд. Выращенные в прикрепленной к субстрату культуре клетки из ткани плаценты и их использование при лечении
RU2015130665A (ru) 2008-11-19 2018-12-24 Антродженезис Корпорейшн Амниотические адгезивные клетки
DK2375907T3 (da) 2008-11-21 2019-06-11 Celularity Inc Behandling af sygdomme, lidelser eller tilstande i lungerne under anvendelse af placentaceller
WO2010141654A1 (en) 2009-06-05 2010-12-09 Anthrogenesis Corporation Improved method of collecting placental cells
MX353489B (es) 2009-07-02 2018-01-16 Anthrogenesis Corp Metodo para producir eritrocitos sin celulas alimentadoras.
DK3284818T3 (da) 2010-01-26 2022-06-20 Celularity Inc Behandling af knoglerelateret kræft ved hjælp af placenta stamceller
US20110280849A1 (en) 2010-03-26 2011-11-17 Anthrogenesis Corporation Tumor suppression using human placenta-derived intermediate natural killer cells and immunomodulatory compounds
DK2556145T3 (en) 2010-04-07 2016-11-07 Anthrogenesis Corp Angiogenesis using placental stem cells
EP2555783A1 (en) 2010-04-08 2013-02-13 Anthrogenesis Corporation Treatment of sarcoidosis using placental stem cells
MX342995B (es) 2010-07-13 2016-10-21 Anthrogenesis Corp Métodos de generar células asesinas naturales.
KR20230084328A (ko) 2010-12-30 2023-06-12 셀룰래리티 인코포레이티드 세포의 동결보존 및 캡슐화 방법
US20120171161A1 (en) 2010-12-30 2012-07-05 Sascha Abramson Compositions comprising placental stem cells and platelet rich plasma, and methods of use thereof
WO2012092485A1 (en) 2010-12-31 2012-07-05 Anthrogenesis Corporation Enhancement of placental stem cell potency using modulatory rna molecules
ES2707579T3 (es) 2011-06-01 2019-04-04 Celularity Inc Tratamiento del dolor usando citoblastos placentarios

Also Published As

Publication number Publication date
MX2019001414A (es) 2019-07-04
LT2556145T (lt) 2016-11-10
EP3088512B1 (en) 2019-12-11
JP2022160449A (ja) 2022-10-19
JP2018161133A (ja) 2018-10-18
KR20230054905A (ko) 2023-04-25
JP2021006041A (ja) 2021-01-21
CN107699541A (zh) 2018-02-16
PT2556145T (pt) 2016-10-25
AU2011237747B2 (en) 2015-07-23
JP2016192966A (ja) 2016-11-17
WO2011127117A1 (en) 2011-10-13
AR081166A1 (es) 2012-07-04
NZ630009A (en) 2016-05-27
HRP20161350T1 (hr) 2016-12-16
KR20240096688A (ko) 2024-06-26
KR101993254B1 (ko) 2019-06-26
TW202122099A (zh) 2021-06-16
IL222321A (en) 2017-02-28
TW202011974A (zh) 2020-04-01
DK2556145T3 (en) 2016-11-07
IL222321A0 (en) 2012-12-31
TW201138791A (en) 2011-11-16
TWI756797B (zh) 2022-03-01
IL250234B (en) 2020-08-31
KR20220015489A (ko) 2022-02-08
KR20200047797A (ko) 2020-05-07
SI2556145T1 (sl) 2017-01-31
CN102933703A (zh) 2013-02-13
CA2795518C (en) 2020-03-24
IL250234A0 (en) 2017-03-30
JP2013523152A (ja) 2013-06-17
TW201703777A (zh) 2017-02-01
TW201902496A (zh) 2019-01-16
KR20210029310A (ko) 2021-03-15
PL2556145T3 (pl) 2017-02-28
IL250234B2 (en) 2023-10-01
CA2795518A1 (en) 2011-10-13
AR111656A2 (es) 2019-08-07
MX337172B (es) 2016-02-16
MX347451B (es) 2017-04-27
US9254302B2 (en) 2016-02-09
EP2556145A4 (en) 2013-11-13
JP6097684B2 (ja) 2017-03-15
ZA201606733B (en) 2019-12-18
US20160106784A1 (en) 2016-04-21
EP2556145B1 (en) 2016-07-20
AU2011237747A1 (en) 2012-11-01
EP2556145A1 (en) 2013-02-13
KR20130100053A (ko) 2013-09-09
CY1118105T1 (el) 2017-06-28
US20180071343A1 (en) 2018-03-15
NZ602808A (en) 2014-10-31
US20110250182A1 (en) 2011-10-13
TWI578993B (zh) 2017-04-21
DK3088512T3 (da) 2020-03-16
MX2012011542A (es) 2013-05-30
HUE029144T2 (hu) 2017-02-28
SMT201600377B (it) 2017-01-10
ES2602474T3 (es) 2017-02-21
KR20190076060A (ko) 2019-07-01
EP3088512A1 (en) 2016-11-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK2556145T3 (en) Angiogenesis using placental stem cells
AU2016268322A1 (en) Angiogenesis using stimulated placental stem cells
US20230302058A1 (en) Treatment of lymphedema and related conditions using placental adherent cells
AU2013203479B2 (en) Angiogenesis using placental stem cells
AU2018247315A1 (en) Angiogenesis using placental stem cells
HK1229375A1 (en) Use of placental stem cells for treating heart and circulatory diseases by promoting angiogenesis
HK1229375A (en) Use of placental stem cells for treating heart and circulatory diseases by promoting angiogenesis
HK1229375B (en) Use of placental stem cells for treating heart and circulatory diseases by promoting angiogenesis
HK1180724B (en) Angiogenesis using placental stem cells