RS59027B1 - Jedinjenja koja ekspandiraju hematopoezne matične ćelije - Google Patents

Jedinjenja koja ekspandiraju hematopoezne matične ćelije

Info

Publication number
RS59027B1
RS59027B1 RS20190863A RSP20190863A RS59027B1 RS 59027 B1 RS59027 B1 RS 59027B1 RS 20190863 A RS20190863 A RS 20190863A RS P20190863 A RSP20190863 A RS P20190863A RS 59027 B1 RS59027 B1 RS 59027B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
purin
ethyl
isopropyl
ylamino
pyridin
Prior art date
Application number
RS20190863A
Other languages
English (en)
Inventor
Anthony Boitano
Michael Cooke
Shifeng Pan
Peter G Schultz
John TELLEW
Yongqin Wan
Xing Wang
Original Assignee
Novartis Ag
Scripps Research Inst
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=42111339&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS59027(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Novartis Ag, Scripps Research Inst filed Critical Novartis Ag
Publication of RS59027B1 publication Critical patent/RS59027B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/02—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6
    • C07D473/16—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with oxygen, sulphur, or nitrogen atoms directly attached in positions 2 and 6 two nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • C07D473/26—Heterocyclic compounds containing purine ring systems with an oxygen, sulphur, or nitrogen atom directly attached in position 2 or 6, but not in both
    • C07D473/32—Nitrogen atom
    • C07D473/34—Nitrogen atom attached in position 6, e.g. adenine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/60—Transcription factors

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis
UPUĆIVANJE NA SRODNE PRIJAVE
[0001] Ova prijava traži priznanje prvenstva iz U.S. provizorne prijave patenta broj 61/109,821, podnete 30. oktobra 2008. i U.S. provizorne prijave patenta broj 61/242,765, podnete 15. septembra 2009.
POZADINA PRONALASKA
Oblast pronalaska
[0002] Ovaj se pronalazak odnosi na jedinjenja i supstance za ekspandiranje broja CD34+ ćelija za transplantaciju. Ovaj pronalazak se još odnosi na populaciju ćelija koja obuhvata ekspandirane hematopoezne matične ćelije (HSC-ovi) i njihovu upotrebu u autolognoj ili alogenoj transplantaciji za lečenje pacijenata sa naslednim nedostatkom imuniteta i autoimunim bolestima i različitim poremećajima autoimunog sistema da bi se rekonstituisale hematopoezne linije ćelije i odbrana imunog sistema.
Oblast tehnike
[0003] Hematopoezne matične ćelije (HSC-ovi) su sposobne za regenerisanje svih proizvoda krvi tokom života pojedinca, balansirajući njihovo samoobnavljanje sa diferencijacijom potomstva. Hematopoezne matične ćelije imaju terapijski potencijal kao rezultat svoje sposobnosti da oporave ćelije krvi i imunog sistema kod primalaca transplanta. Pored toga, hematopoezne matične ćelije imaju potencijal da generišu ćelije za druga tkiva kao što je mozak, mišić i jetra. Humani autologni i alogeni postupci transplantacije koštane srži su trenutno korišćeni kao terapije za leukemiju, limfom, i druge bolesti opasne po život. Zbog ovih postupaka, veliki broj matičnih ćelija mora da bude izolovan da bi se osiguralo da postoji dovoljno hematopoeznih matičnih ćelija za prihvatanje. Broj hematopoeznih matičnih ćelija dostupnih za lečenje je klinički ograničen.
[0004] Ovaj se pronalazak odnosi na jedinjenja i supstance za ekspandiranje populacija hematopoeznih matičnih ćelija i njihove upotrebe.
KRATAK OPIS PRONALASKA
[0005] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenja, supstance, postupke, komplete, supstance za upotrebu, i populacije ćelija kao što je izneto u priloženim patentnim zahtevima. Opštije, ovaj opis pruža jedinjenje Formule I:
[0006] u kom:
[0007] G1 je izabrano iz N i CR3;
[0008] G2, G3 i G4 su nezavisno izabrani iz CH i N; uz uslov da barem 1 od G3 i G4 jeste N; uz uslov da ni G1 ni G2 nisu N;
[0009] L je izabrano iz -NR5a(CH2)0-3- (0-3 ovde znači 0, 1, 2 ili 3), -NR5aCH(C(O)OCH3)CH2–, –NR5a(CH2)2NR5b–, –NR5a(CH2)2S–, –NR5aCH2CH(CH3)CH2–, –NR5aCH2CH(OH)– i -NR5aCH(CH3)CH2–; pri čemu R5a i R5b su nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila;
[0010] R1 je izabrano iz vodonika, fenila, tiofenila, furanila, 1H-benzoimidazolila, izohinolinila, 1H-imidazopiridinila, benzotiofenila, pirimidinila, 1H-pirazolila, piridinila, 1H-imidazolila, pirolidinila, pirazinila, piridazinila, 1H-pirolila i tiazolila; pri čemu pomenuti fenil, tiofenil, furanil, 1H-benzoimidazolil, izohinolinil, 1H-imidazopiridinil, benzotiofenil, pirimidinil, 1H-pirazolil, piridinil, 1H-imidazolil, pirolidinil, pirazinil, piridazinil, 1H-pirolil ili tiazolil od R1 može biti opciono supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz cijano, hidroksi, C1-4alkil, C1-4alkoksi, halo, halo-supstituisan-C1-4alkil, halo-supstituisan-C1-
4alkoksi, hidroksi, amino, -C(O)R8a, -S(O)0-2R8a, –C(O)OR8a i -C(O)NR8aR8b; pri čemu su R8a i R8b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; uz uslov da ni R1 ni R3 nisu vodonik;
[0011] R2 je izabran iz -S(O)2NR6aR6b, -NR6aC(O)R6b, -NR6aC(O)NR6bR6c, fenila, 1H-pirolopiridin-3-il, 1H-indolila, tiofenila, piridinila, 1H-1,2,4-triazolila, 2-oksoimidazolidinila, 1H-pirazolila, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzoimidazolila i 1H-indazolila; pri čemu su R6a, R6b i R6c nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; pri čemu pomenuti fenil, 1H-pirolopiridin-3-il, 1H-indolil, tiofenil, piridinil, 1H-1,2,4-triazolil, 2-oksoimidazolidinil, 1H-pirazolil, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzoimidazolil ili 1H-indazolil iz R2 jeste opciono supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz hidroksi, halo, metil, metoksi, amino, -O(CH2)nNR7aR7b, -S(O)2NR7aR7b, -OS(O)2NR7aR7b i -NR7aS(O)2R7b; pri čemu su R7a i R7b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila;
[0012] R3 je izabrano iz vodonika, C1-4alkila i bifenila; i
[0013] R4 je izabrano iz C1-10alkil, prop-1-en-2-ila, cikloheksila, ciklopropila, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etila, oksetan-3-ila, benzhidrila, tetrahidro-2H-piran-3-ila, tetrahidro-2H-piran-4-ila, fenil, tetrahidrofuran-3-ila, benzila, (4-pentilfenil)(fenil)metila i 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-ila)-1H-1,2,3-triazol-4-ila)etila; pri čemu pomenuti alkil, ciklopropil, cikloheksil, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, tetrahidro-2H-piran-2-il, tetrahidro-2H-piran-3-il, tetrahidro-2H-piran-4-il, fenil, tetrahidrofuran-3-il, tetrahidrofuran-2-il, benzil, (4-pentilfenil)(fenil)metil ili 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil može opciono biti supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz hidroksi, C1-4alkila i halo-supstituisanog-C1-4alkila; ili derivata N-oksida, derivata proleka, zaštićenih derivata, pojedinačnih izomera i mešavina njihovih izomera; ili soli (poželjno farmaceutski prihvatljivih soli) i solvata (npr. hidrata) takvih jedinjenja.
KRATAK OPIS SLIKA
[0014] Sl.1 opisuje PXRD obrazac modifikacije čvrstog oblika A 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola.
[0015] Sl.2 do 12 opisuju PXRD obrasce čvrstih oblika soli 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola, i to soli nitrata, mezilata, tozilata, hidrohlorida, sulfata, bezilata, ezilata, hidrobromida, orotata, fumarata i napadisilata.
[0016] Sl.13 opisuje DSC obrazac amorfnog oblika 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Definicije
[0017] "Alkil" kao grupa i kao strukturni element drugih grupa, na primer halo-supstituisanialkil i alkoksi, može imati ili prav lanac ili razgranat lanac. Na primer, alkil obuhvata metil, etil, izopropil, butil, izobutil, sek-butil, t-butil, itd. C1-4-alkoksi obuhvata metoksi, etoksi, i slične. Halo-supstituisan alkil obuhvata trifluorometil, pentafluoroetil, i slične.
[0018] "Aril" se odnosi na monociklični ili fuzionisani sklop aromatskog prstena koji obuhvata šest do sedam prstenova atoma ugljenika. Na primer, aril može biti fenil ili naftil, poželjno fenil. "Arilen" se odnosi na dvovalentni radikal izveden iz aril grupe.
[0019] "Heteroaril" je definisan za aril gde jedan ili više elemenata prstena jesu heteroatom ili deo izabran iz -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S-, -S(O)- ili -S(O)2-, pri čemu je R vodonik, C1-4alkil ili azot zaštitna grupa. Na primer heteroaril obuhvata piridil, indolil, indazolil, kvinoksalinil, kvinolinil, benzofuranil, benzopiranil, benzotiopiranil, benzo[1,3]dioksol, imidazolil, benzoimidazolil, pirimidinil, furanil, oksazolil, izoksazolil, triazolil, tetrazolil, pirazolil, tienil, itd.
[0020] "Cikloalkil" znači zasićeni ili delimično nezasićeni monociklični, fuzionisani biciklični ili premošćeni policiklični sklop prstena koji sadrži broj atoma prstena koji je naznačen. Na primer, C3-10cikloalkil obuhvata ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, itd. "Heterocikloalkil" znači cikloalkil, kao što je definisan u ovoj prijavi, pod uslovom da je naznačen jedan ili više prstena ugljenika, su zamenjeni delom izabranim iz -O-, -N=, -NR-, -C(O)-, -S-, -S(O)- ili -S(O)2-, pri čemu je R vodonik, C1-4alkil ili azot zaštitna grupa. Na primer, C3-8heterocikloalkil kako se koristi u ovoj prijavi da opiše jedinjenja iz opisa obuhvata morfolino, pirolidinil, piperazinil, piperidinil, piperidinilon, 2-oksopirolidin-1-il, 1,4-dioksa-8-aza-spiro[4,5]dec-8-il, itd.
[0021] "Halogen" (ili halo) poželjno predstavlja hlor ili fluor, ali može biti i bromo ili jodo.
[0022] "Hematopoezne matične ćelije" (HSC-ovi) kako se ovde koristi odnosi se na nezrele ćelije krvi koje imaju kapacitet da se samoobnove i da se diferenciraju u zrelije ćelije krvi koje obuhvataju granulocite (npr. promijelocite, neutrofile, eosinofile, bazofile), eritrocite (npr. retikulocite, eritrocite), trombocite (npr. megakarioblaste, trombocit koji proizvodi megakariocite, trombocite), i monocite (npr. monocite, makrofage). Hematopoezne matične ćelije su ravnopravno opisani kao matične ćelije u celom spisu. Poznato je u ovoj oblasti da takve ćelije mogu ili ne mogu da obuhvate CD34<+>ćelije. CD34<+>ćelije su nezrele ćelije koje izražavaju CD34 marker na površini ćelije. Veruje se da CD34+ ćelije obuhvataju potpopulaciju ćelija sa svojstvima matične ćelije definisanim gore u tekstu. Poznato je u ovoj oblasti da hematopoezne matične ćelije obuhvataju pluripotentne matične ćelije, višestruko potentne matične ćelije (npr. limfoidnu matičnu ćeliju), i/ili matičnu ćeliju posvećenu specifičnim hematopoeznim linijama. Matične ćelije posvećene specifičnim hematopoeznim linijama mogu biti T linija ćelije, B linije ćelije, dendritska linija ćelije, Langerhansovu liniju ćelije i/ili limfoidnu za tkivo specifičnu liniju ćelija makrofaga. Pored toga, hematopoezne matične ćelije se takođe odnose na dugotrajne HSC (LT-HSC) i kratkotrajne HSC (ST-HSC). ST-HSC-ovi su aktivniji i proliferativniji od LT-HSC-ova. Međutim, LT-HSC-ovi imaju neograničeno samoobnavljanje (tj. one opstaju tokom celog perioda zrelosti), dok ST-HSC-ovi imaju ograničeno samoobnavljanje (tj. one opstaju samo ograničen period vremena). Bilo koje od ovih hematopoeznih matičnih ćelija je moguće koristiti u bilo kom od ovde opisanih postupaka. Opciono, ST-HSC-ovi su korisni zato što su visoko proliferativni i samim tim, brzo povećavaju broj HSC-ova u njihovom potomstvu. Hematopoezne matične ćelije se opciono dobijaju iz proizvoda krvi. Proizvod krvi obuhvata proizvod dobijen iz krvi ili organ tela koji obuhvata ćelije hematopoeznog porekla. Takvi izvori obuhvataju nefrakcionisanu koštanu srž, pupčanu vrpcu, perifernu krv, jetru, timus, limfu i slezinu. Svi gore pomenuti sirovi ili nefrakcionisani proizvodi krvi mogu biti obogaćeni ćelijama koje imaju karakteristike hematopoezne matične ćelije na način poznat stručnjacima u ovoj oblasti.
[0023] "Lečiti", "lečenje" i "terapija" se odnosi na postupak ublažavanja ili slabljenja bolesti i/ili njenih pratećih simptoma.
[0024] "Ekspandiranje" u kontekstu ćelija se odnosi na povećanje broja karakterističnog tipa ćelije, ili tipova ćelije, od početne populacije ćelije ćelija, koja može ili ne mora da bude identična. Početne ćelije korišćene za ekspandiranje (proširivanje) ne moraju biti iste kao ćelije generisane iz proširivanja.
[0025] "Populacija ćelije" se odnosi na eukariotske ćelije sisara, poželjno humane, ćelije izolovane iz bioloških izvora, na primer, proizvod krvi ili tkiva i izvedene iz više od jedne ćelije.
[0026] "Obogaćeno" kada se koristi u kontekstu populacije ćelija se odnosi na populaciju ćelija izabranu na osnovu prisustva jednog ili više markera, na primer, CD34+.
[0027] Pojam "CD34+ ćelije" se odnosi na ćelije koje izražavaju na svojoj površini CD34 marker. CD34+ ćelije je moguće detektovati i prebrojati korišćenjem na primer protočne citometrije i fluorescentno označenih anti-CD34 antitela.
[0028] "Obogaćene CD34+ ćelije" znači da je populacija ćelija izabrana na osnovu prisustva CD34 markera. Sa tim u skladu, procenat CD34+ ćelija posle populacije ćelije posle postupka odabira je viši nego procenat CD34+ ćelija u početnoj populaciji ćelije pre koraka odabira na osnovu CD34 markera. Na primer, CD34+ ćelije mogu da predstavljaju barem 50%, 60%, 70%, 80% ili barem 90% ćelija u populaciji ćelija obogaćenim CD34+ ćelijama.
[0029] "Jedinica krvi iz pupčane vrpce" se odnosi na krv prikupljenu iz pupčane vrpce pojedinačnog rođenja.
Opis preporučenih primera i izvođenja
[0030] Ovaj se opis odnosi na postupke i supstance za proširenje HSC populacija koje koriste agens koji može da smanji aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili efektor smanjenja putanje receptora aril ugljovodonika. U primerima iz ovog opisa koji su izvođenja ovog pronalaska, supstanca je kako je definisana u priloženim patentnim zahtevima.
[0031] U jednom primeru, pomenuti agens koji može da smanjeno reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika je jedinjenje iz Formule I.
[0032] U jednom primeru, sa pozivom na jedinjenja iz Formule I, su jedinjenja izabrana iz Formula Ia, Ib, Ic, Id i Ie:
[0033] u kom je:
[0034] L izabrano iz -NR5a(CH2)0-3–, –NR5aCH(C(O)OCH3)CH2–, –NR5a(CH2)2NR5b–, – NR5a(CH2)2S–, –NR5aCH2CH(CH3)CH2–, –NR5aCH2CH(OH)– i –NR5aCH(CH3)CH2–; pri čemu su R5a i R5b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; pri čemu je desna strana L dela kao što je prikazano spojena na R2, na primer: –NR5a(CH2)0-3-R2, -NR5aCH(C(O)OCH3)CH2R2, -NR5a(CH2)2NR5b-R2, -NR5a(CH2)2S-R2, –NR5aCH2CH(CH3)CH2-R2, -NR5aCH2CH(OH)-R2 i -NR5aCH(CH3)CH2-R2.
[0035] R1 izabrano iz vodonika, fenila, tiofen-2-ila, tiofen-3-ila, furan-3-ila, 1H-benzo[d]imidazol-1-ila, izohinolin-4-ila, 1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-ila, benzo[b]tiofen-3-ila, pirimidin-5-ila, 1H-pirazol-4-ila, piridin-2-ila, piridin-4-ila, 1H-imidazol-1-ila, pirolidin-1-ila, pirazin-2-ila, piridin-3-ila, piridazin-4-ila, 1H-pirol-2-ila i tiazol-5-ila;
[0036] pri čemu pomenuti fenil, tiofen-2-il, tiofen-3-il, furan-3-il, 1H-benzo[d]imidazol-1-il, izohinolin-4-il, 1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il, benzo[b]tiofen-3-il, pirimidin-5-il, piridini-2-il, piridin-4-il, 1H-imidazol-1-il, pirolidin-1-il, pirazin-2-il, piridini-3-il, piridazin-4-il, 1H-pirol-2-il ili tiazol-5-il od R1 može opciono biti supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz cijano, hidroksi, C1-4alkil, C1-4alkoksi, halo, halo-supstituisan-C1-4alkil, -S(O)0-
2R8a i -C(O)OR8a; pri čemu R8a i R8b su nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; uz uslov da R1 i R3 nisu oba vodonik;
[0037] R2 je izabrano iz -NR6aC(O)NR6bR6c, fenila, 1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-ila, 1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-ila, 1H-indol-3-ila, tiofen-3-ila, piridin-2-il, piridin-3-ila, piridin-4-ila, 1H-1,2,4-triazol-5-ila, 2-oksoimidazolidin-1-ila, 1H-pirazol-3-ila, 1H-pirazol-4-ila, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-ila i 1H-indazol-3-ila; pri čemu su R6a, R6b i R6c nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; pri čemu je pomenuti fenil, 1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-il, 1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il, 1H-indol-3-il, tiofen-3-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, 1H-1,2,4-triazol-5-il, 2-oksoimidazolidin-1-il, 1H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-4-il, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il ili 1H-indazol-3-il od R2 opciono supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz hidroksi, halo, metoksi, amino, -OS(O)2NR7aR7b i – NR7aS(O)2R7b; pri čemu su R7a i R7b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila;
[0038] R3 je izabrano iz vodonika, C1-4alkila i bifenila; i
[0039] R4 je izabran iz izopropila, metila, etila, prop-1-en-2-ila, izobutila, cikloheksila, sekbutila, (S)-sek-butila, (R)-sek-butila, 1-hidroksipropan-2-ila, (S)-1-hidroksipropan-2-ila, (R)-1-hidroksipropan-2-ila, nonan-2-il, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etila, oksetan-3-ila, oksetan-2-ila, benzhidrila, tetrahidro-2H-piran-2-ila, fenil, tetrahidrofuran-3-il i benzila; pri čemu je pomenuti cikloheksil, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, tetrahidro-2H-piran-4-il, fenil, tetrahidrofuran-3-il ili benzil mogu opciono biti supstituisani sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz C1-4alkila i halo-supstituisanog-C1-4alkila.
[0040] U drugom primeru, L je izabrano iz -NR5a(CH2)0-3–, –NR5aCH(C(O)OCH3)
NR5a(CH2)2NR5b–, –NR5a(CH2)2S–, –NR5aCH2CH(CH3)CH2–, –NR5aCH(CH3)CH2– i – NR5aCH2CH(OH)–; pri čemu su R5a i R5b nezavisno izabrani iz vodonika i metila; i R1 je izabrano iz vodonika, fenila, tiofen-2-ila, tiofen-3-ila, furan-3-ila, 1H-benzo[d]imidazol-1-ila, izohinolin-4-ila, 1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-ila, benzo[b]tiofen-3-ila, pirimidin-5-ila, 1H-pirazol-4-ila, piridin-2-ila, piridin-4-ila, 1H-imidazol-1-ila, pirolidin-1-ila, pirazin-2-ila, piridin-3-ila, piridazin-4-ila, 1H-pirol-2-ila i tiazol-5-ila; pri čemu je pomenuti fenil, tiofen-2-il, tiofen-3-il, furan-3-il, 1H-benzo[d]imidazol-1-il, izohinolin-4-il, 1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il, benzo[b]tiofen-3-il, pirimidin-5-il, piridini-2-il, piridin-4-il, 1H-imidazol-1-il, pirolidin-1-il, pirazin-2-il, piridini-3-il, piridazin-4-il, 1H-pirol-2-il ili tiazol-5-il od R1 moguće opciono supstituisati pomoću 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz cijano, hidroksi, C1-4alkil, C1-4alkoksi, halo, halo-supstituisan-C1-4alkil, -S(O)0-2R8a i -C(O)OR8a; pri čemu su R8a i R8b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; uz uslov da ni R1 ni R3 nisu vodonik.
[0041] U drugom primeru, kada L jeste -NR5a(CH2)0-3, ono je poželjno -NR5a(CH2)1-3 (pri čemu 1-3 jeste 1, 2 ili 3).
[0042] U drugom primeru, R2 je izabrano iz uree, fenila, 1H-indol-2-ila, 1H-indol-3-ila, tiofen-3-ila, piperidin-1-ila, piridin-2-ila, piridin-3-ila, piridin-4-ila, 1H-1,2,4-triazol-3-ila, 1H-1,2,4-triazol-5-ila, 2-oksoimidazolidin-1-ila, 1H-pirazol-3-ila, 1H-pirazol-4-ila, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-ila, 1H-benzo[d]imidazol-5-ila i 1H-imidazol-4-ila; pri čemu pomenuti fenil, 1H-indol-2-il, 1H-indol-3-il, tiofen-3-il, piperidin-1-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, 1H-1,2,4-triazol-3-il, 1H-1,2,4-triazol-5-il, 2-oksoimidazolidin-1-il, 1H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-4-il, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il ili 1H-benzo[d]imidazol-5-il od R2 jeste opciono supstituisan sa hidroksi, metoksi, metil, halo, amino i amino-sulfonil.
[0043] U drugom primeru, R3 je izabrano iz vodonika, metila, i bifenila; i R4 je izabrano iz izopropila, metila, etila, prop-1-en-2-ila, izobutila, cikloheksila, sek-butila, (S)-sek-butila, (R)-sek-butila, 1-hidroksipropan-2-ila, (S)-1-hidroksipropan-2-ila, (R)-1-hidroksipropan-2-ila, nonan-2-ila, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etila, oksetan-3-ila, oksetan-2-ila, benzhidrila, tetrahidro-2H-piran-2-ila, fenila, tetrahidrofuran-3-ila i benzila; pri čemu je pomenuti cikloheksil, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, tetrahidro-2H-piran-4-il, fenil, tetrahidrofuran-3-il ili benzil moguće opciono supstituisati sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz metila ili trifluorometila.
[0044] U drugom primeru su jedinjenja izabrana iz: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-benzhidril-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-9H-pirin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiofen-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(4-(trifluorometil)benzil)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izobutil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-metil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(4-metilbenzil)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-N-(2-(tiofen-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-i)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-(benzo[b]tiofen-3-i)-N-(4-fluorofnetil)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; N-(4-aminofnetil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-izopropil-2-(piimidin-5-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-i)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-fenil-9H-purin-6-ilmino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiofen-3-i)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(furan-3-i)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-(benzo[b]tiofen-3-i)-N-(4-fluorofenetil)-9-fenil-9H-purin-6-amina; N-benzi-8-(bifenil-4-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(nonan-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-amina; 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-il 5-((3aS,4S,6aR)-2-oxohexahydro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanoata; N-(2-(2-(2-(2-(4-(1-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-6-(4-hidroksifenetilamino)-9H-purin-9-il)etil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)etoksi)etoksi)etoksi)etil)acetamida; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; etil 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)nikotinata; etil 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)nikotinata; 4-(2-(2-(6-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(4metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; 4-(2-(9-izopropil-2-(pirolidin-1-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(1H-imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridazin-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(pirazin-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-(metilsulfonil)piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(4-hlorpiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-yl)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metoksifenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metoksifenola; N-[2-(6-metoksi-1H-indol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-[2-(5-metil-1H-indol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 1-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)imidazolidin-2-ona; N-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)piridin-2-amina; 9-(propan-2-il)-N-[3-(1H-pirazol-4-il)propil]-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-{2-[(3-metil-1H-1,2,4-triazol-5-il)sulfanil]etil}-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 1-(2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)imidazolidin-2-ona; N-[2-(5-amino-1H-1,2,4-triazol-3-il)etil]-2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)piridin-2-amina; 2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-N-[3-(1H-pirazol-4-il)propil]-9H-purin-6-amina; 2-(1-benzotiofen-3-il)-N-[3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)propil]-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amina; (2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)uree; 5-({[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}metil)-2,3-dihidro-1H-1,3-benzodiazol-2-ona; N-[2-(1H-indol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenil)metansulfonamida; 4-(2-(2-(piridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)propil)fenola; 4-(2-(9-(oksetan-3-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)-N-metilnikotinamida; 4-(2-(9-(1-hidroksipropan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenil sulfamata; 4-(2-(2-(2-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(1-metil-1H-pirol-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiazol-5-il)-9Hpurin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(1H-benzo[d]imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(2,4-dimetil-1H-imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(2-metil-1H-imidazol-1-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(9-sek-butil-6-(4-hidroksi-3-metilfenetilamino)-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; N-(2-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; 9-izopropil-N-(2-(5-metil-1H-pirazol-3-il)etil)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(5-hlorpiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-(trifluorometil)piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-9-sek-butil-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; 4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(6-(benzo[b]tiofen-3-il)-1-izopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola; (R)-4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-3-metilfenola; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)pikolinonitrila; 3-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)izonikotinonitrila; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola; 3-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)pikolinonitrila; 4-(2-(9-izopropil-2-(6-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(izohinolin-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-hlor-4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 3-fluoro-4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; N-(2-(5-hlor-1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metilfenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; (S)-4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; (R)-4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-yl)propan-1-ola; (R)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola; (S)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(3H-imidazo[4,5-b]piridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(4,5-dimetil-1H-imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(piridin-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)-1-hidroksietil)fenola; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(6-metoksi-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(5-metoksi-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(prop-1-en-2-il)-9H-purin-6-amina; 5-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)piridin-2-ola; N-(2-(1H-piolo[2,3-b]piridin-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; N-(2-(6-(2-(dietilamino)etoksi)-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(5-(5-fluoropiridin-3-il)-3-izopropil-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilamino)etil)fenola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(2-metil-1H-imidazol-1-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(2-etil-1H-imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(2-propil-1H-imidazol-1-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 3-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-6-ola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(2-metil-1H-imidazol-1-il)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(7-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-yl)etil)-2-(5-metilpiridin-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(6-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(2-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(4-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; N-(2-(7-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(4-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola; 9-izopropil-2-(piridin-3-il)-N-(2-(piridin-4il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-5-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(1-hidroksipropan-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metilfenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-cikloheksil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiofen-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; i 1-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-6-(4-hidroksifenetilamino)-9H-purin-9-il)etil)pirolidin-2-ona. Jedinjenja iz Formule I su detaljno data u Primerima i Tabeli I, infra.
[0045] U drugom primeru su jedinjenja iz Formule Ia:
[0046] u kojoj je:
[0047] L izabrano iz -NR5a(CH2)0-3-, -NR5aCH(C(O)OCH3)CH2–, –NR5a(CH2)2NR5b–, – NR5a(CH2)2S–, –NR5aCH2CH(CH3)CH2–, –NR5aCH(CH3)CH2–, –(CH2)3–, –CH2OCH2–, – CH2NR5aCH2–, –NR5aC(O)CH2– i –NR5aY–; pri čemu su R5a i R5b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkil; i Y je 5-člani prsten heteroarila koji sadrži najviše do 3 heteroatoma izabrana iz O, N i S;
[0048] R1 izabrano iz vodonika, fenila, tiofen-2-ila, tiofen-3-ila, furan-2-ila, furan-3-ila, benzo[b]tiofen-2-ila, benzo[b]tiofen-3-ila, benzofuran-2-ila, benzofuran-3-ila, pirimidin-4-ila, pirimidin-5-ila, 1H-pirazol-4-ila, 1H-pirazol-3-ila, piridin-2-ila, piridazin-3-ila, piridin-4-ila, 1H-imidazol-1-ila, pirolidin-1-ila, pirazin-2-ila, piridin-3-ila, 1H-pirazol-1-ila, piridazin-4-ila, 1H-indol-2-ila, tiazol-4-ila, 1H-indol-3-ila, 1H-piol-2-ila i tiazol-5-ila; pri čemu je pomenuti fenil, tiofen-2-il, tiofen-3-il, furan-2-il, furan-3-il, benzo[b]tiofen-2-il, benzo[b]tiofen-3-il, benzofuran-2-il, benzofuran-3-il, pirimidin-4-il, pirimidin-5-il, 1H-pirazol-4-il, 1H-pirazol-3-il, piridini-2-il, piridazin-3-il, piridin-4-il, 1H-imidazol-1-il, pirolidin-1-il, pirazin-2-il, piridini-3-il, 1H-pirazol-1-il, piridazin-4-il, 1H-indol-2-il, tiazol-4-il, 1H-indol-3-il, 1H-pirol-2-il ili tiazol-5-il od R1 moguće opciono supstituisati pomoću 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz cijano, hidroksi, C1-4alkil, C1-4alkoksi, halo, halo-supstituisan-C1-4alkil, halosupstituisan-C1-4alkoksi, hidroksi, amino, -C(O)R8a, -S(O)0-2R8a, –C(O)OR8a i -C(O)NR8aR8b; pri čemu su i R8a i R8b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; uz uslov da ni R1 ni R3 nisu vodonik;
[0049] R2 izabrano iz -S(O)2NR6aR6b, -NR6aC(O)R6b, -NR6aC(O)NR6bR6c, fenila, 1H-indol-2-ila, 1H-indol-3-ila, benzo[b]tiofen-2-ila, benzo[b]tiofen-3-ila, benzofuran-2-il, benzofuran-3-ila, tiofen-2-ila, tiofen-3-ila, furan-2-il, furan-3-ila, piperidin-4-ila, piperidin-3-ila, piperidin-2-ila, piperidin-1-ila, piridin-2-ila, piridin-3-ila, piridin-4-ila, 1H-1,2,4-triazol-3-ila, 1H-1,2,4-triazol-5-ila, 2-oksoimidazolidin-1-ila 1H-pirazol-3-ila, 1H-pirazol-4-ila, 3-oksopiperazin-1-ila, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-ila, 1,2,3,4-tetrahidronaftalen-2-ila, indolin-5-ila, 2-oksoindolin-5-ila, 1H-benzo[d]imidazol-5-ila, 1H-indazol-5-ila i 1H-imidazol-4-ila; pri čemu su i R6a, R6b i R6c nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; pri čemu je pomenuti fenil, 1H-indol-2-il, 1H-indol-3-il, benzo[b]tiofen-2-il, benzo[b]tiofen-3-il, benzofuran-2-il, benzofuran-3-il, tiofen-2-il, tiofen-3-il ili furan-2-il, furan-3-il, piperidin-4-il, piperidin-3-il, piperidin-2-il, piperidin-1-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, 1H-1,2,4-triazol-3-il, 1H-1,2,4-triazol-5-il, 2-oksoimidazolidin-1-il, 1H-pirazol-3-il, 3-oksopiperazin-1-il, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il, 1,2,3,4-tetrahidronaftalen-2-il, indolin-5-il, 2-oksoindolin-5-il, 1H-benzo[d]imidazol-5-il, 1H-indazol-5-il ili 1H-imidazol-4-il ili od R2 opciono supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz hidroksi, halo, metil, metoksi, amino, -S(O)2NR7aR7b, –OS(O)2NR7aR7b i -NR7aS(O)2R7b; pri čemu su R7a i R7b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; ili pojedinačni radikal izabran iz 5-((3aS,4S,6aR)-2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanoiloksi, 2-(2-(5-((3aS,4S,6aR)-2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanamido)etoksi)etoksi i 2-(4-(4-heks-5-inamidobenzoil)fenilamino)-2-oksoetoksi;
[0050] R3 izabrano iz vodonika, C1-4alkila i bifenila; i
[0051] R4 izabran iz izopropila, izobutila, sek-butila, 1-hidroksipropan-2-ila, ciklopropila, oksetan-3-ila, oksetan-2-ila, benzhidrila, piperidin-4-ila, piperidin-3-ila, piperidin-2-ila, tetrahidro-2H-piran-2-ila, tetrahidro-2H-piran-3-ila, tetrahidro-2H-piran-4-ila, fenila, tetrahidrofuran-3-ila, tetrahidrofuran-2-ila, benzila, (4-pentilfenil)(fenil)metila i 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etila; pri čemu je pomenuti ciklopropil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, piperidin-4-il, piperidin-3-il, piperidin-2-il, tetrahidro-2H-piran-2-il, tetrahidro-2H-piran-3-il, tetrahidro-2H-piran-4-il, fenil, tetrahidrofuran-3-il, tetrahidrofuran-2-il, benzil, (4-pentilfenil)(fenil)metil ili 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil moguće opciono supstituisati sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz C1-4alkil i halo-supstituisanog-C1-4alkila; ili derivata N-oksida, derivata proleka, zaštićenih derivata, pojedinačnih izomera i mešavine tih izomera; ili farmaceutski prihvatljivih soli i solvata (npr. hidrata) takvih jedinjenja.
[0052] U još jednom primeru, sa pozivom na jedinjenja iz Formule Ia, L je izabrano iz -NR5a(CH2)0-3–, –NR5aCH(C(O)OCH3)CH2–, –NR5a(CH2)2NR5b–, –NR5a(CH2)2S–, – NR5aCH2CH(CH3)CH2–, –NR5aCH(CH3)CH2–, –(CH2)3–, –CH2OCH2–, –CH2NR5aCH2–, – NR5aC(O)CH2- i -NR5aY–; pri čemu su R5a i R5b nezavisno izabrani iz vodonika i metila; Y je izabrano iz izoksazola i 1,3,4-oksadiazola.
[0053] U još jednom primeru, kada L jeste -NR5a(CH2)0-3, ono je poželjno -NR5a(CH2)1-3 (pri čemu 1-3 ovde znači 1, 2 ili 3).
[0054] U još jednom primeru, R1 je izabrano iz vodonika, fenila, tiofen-3-ila, tiofen-2-ila, furan-3-ila, furan-2-ila, benzo[b]tiofen-3-ila, pirimidin-5-ila, piridin-4-ila, piridin-2-ila, pirolidin-1-ila, 1H-pirazol-4-ila, pirazin-2-ila, piridazin-3-ila, piridazin-4-ila, 1H-pirazol-1-ila, 1H-pirazol-3-ila, 1H-imidazol-1-ila, tiazol-4-ila, 1H-pirol-2-ila, tiazol-5-il, i piridin-3-ila; pri čemu je pomenuti fenil, tiofen-3-il, tiofen-2-il, furan-3-il, furan-2-il, benzo[b]tiofen-3-il, pirimidin-5-il, piridin-4-il, piridin-2-il, pirolidin-1-il, 1H-pirazol-4-il, pirazin-2-il, piridazin-3-il, piridazin-4-il, 1H-pirazol-1-il, 1H-pirazol-3-il, 1H-imidazol-1-il, tiazol-4-il, 1H-pirol-2-il, tiazol-5-il ili piridin-3-il od R1 opciono supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz cijano, metil, metil-sulfonil, metoksi, halo, hidroksi, karboksil, etoksi-karbonil, metilamino-karbonil i amino; uz uslov da ni R1 ni R3 nisu vodonik.
[0055] U drugom primeru, R2 se bira iz jedinjenja kao što su amino-sulfonil, metil-karbonilamino, metil-sulfonil-amino, amino-sulfonil-oksi, urea, fenil, 1H-indol-2-il, 1H-indol-3-il, benzo[b]tiofen-2-il, benzo[b]tiofen-3-il, benzofuran-2-il, benzofuran-3-il, tiofen-2-il, tiofen-3-il, furan-2-il, furan-3-il, piperidin-4-il, piperidin-3-il, piperidin-2-il, piperidin-1-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, 1H-1,2,4-triazol-3-il, 1H-1,2,4-triazol-5-il, 2-oksoimidazolidin-1-il, 1H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-4-il, 3-oksopiperazin-1-il, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il, 1,2,3,4-tetrahidronaftalen-2-il, indolin-5-il, 2-oksoindolin-5-il, 1Hbenzo[d]imidazol-5-il, 1H-indazol-5-il i 1H-imidazol-4-il; pri čemu je pomenuti fenil, 1H-indol-2-il, 1H-indol-3-il, benzo[b]tiofen-2-il, benzo[b]tiofen-3-il, benzofuran-2-il, benzofuran-3-il, tiofen-2-il, tiofen-3-il, furan-2-il, furan-3-il, piperidin-4-il, piperidin-3-il, piperidin-2-il, piperidin-1-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, 1H-1,2,4-triazol-3-il, 1H-1,2,4-triazol-5-il, 2-oksoimidazolidin-1-il, 1H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-4-il, 3-oksopiperazin-1-il, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il, 1,2,3,4-tetrahidronaftalen-2-il, indolin-5-il, 2-oksoindolin-5-il, 1H-benzo[d]imidazol-5-il, 1H-indazol-5-il i 1H-imidazol-4-il od R2 opciono supstituisan sa hidroksi, metoksi, metil, halo, amino, amino-sulfonil, 5-((3aS,4S,6aR)-2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanoiloksi, 2-(2-(5-((3aS,4S,6aR)-2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanamido)etoksi)etoksi i 2-(4-(4-heks-5-inamidobenzoil)fenilamino)-2-oksoetoksi.
[0056] U još jednom primeru, R3 je izabran iz vodonika, metila, i bifenila; i R4 je izabran iz skupa koju čine izopropil, izobutil, sek-butil, 1-hidroksipropan-2-il, ciklopropil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, piperidin-4-il, piperidin-3-il, piperidin-2-il, tetrahidro-2H-piran-2-il, tetrahidro-2H-piran-3-il, tetrahidro-2H-piran-4-il, fenil, tetrahidrofuran-3-il, tetrahidrofuran-2-il, benzil, (4-pentilfenil)(fenil)metil i 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil; pri čemu je pomenuti ciklopropil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, piperidin-4-il, piperidin-3-il, piperidin-2-il, tetrahidro-2H-piran-2-il, tetrahidro-2H-piran-3-il, tetrahidro-2H-piran-4-il, fenil, tetrahidrofuran-3-il, tetrahidrofuran-2-il, benzil, (4-pentilfenil)(fenil)metil ili 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil moguće opciono supstituisati sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz metila i trifluorometila.
[0057] U drugom primeru su jedinjenja izabrana iz skupa koji čine: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-benzhidril-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(4-(trifluorometil)benzil)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izobutil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-metil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(4-metilbenzil)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amin; 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-N-(2(tiofen-3-il)etil)-9H-purin-6-amin; 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-N-(4-fluorofenetil)-9-izopropil-9H-purin-6-amin; N-(4-aminofenetil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amine; 4-(2-(9-izopropil-2-(pirimidin-5-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-fenil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiofen-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(furan-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-N-(4-fluorofenetil)-9-fenil-9H-purin-6-amin; N-benzil-8-(bifenil-4-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amine 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(nonan-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-((4-pentilfenil)(fenil)metil)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-amin; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-ol; 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-il 5-((3aS,4S,6aR)-2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanoat; N-(2-(2-(3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-iloksi)etoksi)etil)-5-((3aS,4S,6aR)-2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanamid; N-(4-(4-(2-(3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-iloksi)acetamido)benzoil)fenil)heks-5-inamid; N-(2-(2-(2-(2-(4-(1-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-6-(4-hidroksifenetilamino)-9H-purin-9-il)etil)-1H-1,2,3-triazol-1-il)etoksi)etoksi)etoksi)etil)acetamid; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; etil 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)nikotinat; etil 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)nikotinat; 4-(2-(2-(6-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(4-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(2-metoksipiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)nikotinonitril; 4-(2-(9-izopropil-2-(pirolidin-1-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(1H-pirazol-1-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(1H-imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridazin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridazin-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(pirazin-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-(metilsulfonil)piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(2-hlorpiridin-3-il)-6-izopropil-2,6-dihidroimidazo[4,5-c]pirazol-3-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(4-hlorpiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(4-metoksipiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiazol-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(1H-pirazol-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(1H-pirazol-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiofen-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)tiofen-2-karboksilna kiselina; 4-(2-(2-(furan-2-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(4-metiltiofen-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metoksifenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metoksifenol; N-[2-(6-metoksi-1H-indol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; N-[2-(5-metil-1H-indol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; N-[2-(piperidin-4-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amine; 1-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)piperidin-4-ol; metil (2S)-3-(4-hidroksifenil)-2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}propanoat; 4-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)benzen-1-sulfonamid; 2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etan-1-sulfonamid; 4-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)benzen-1,2-diol; N-[2-(1H-imidazol-4-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; 1-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)imidazolidin-2-on; N-[2-(5-amino-1H-1,2,4-triazol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; N-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)piridin-2-amin; 9-(propan-2-il)-N-[3-(1H-pirazol-4-il)propil]-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; N-[2-({[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}metil)propil]acetamid; 4-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)piperazin-2-on; N-{2-[(3-metil-1H-1,2,4-triazol-5-il)sulfanil]etil}-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; N-[3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)propil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; (2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)urea; 5-({[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}metil)-2,3-dihidro-1H-1,3-benzodiazol-2-on; 2-(1-benzotiofen-3-il)-N-[2-(1H-imidazol-4-il)etil]-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amin; 1-(2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)imidazolidin-2-on; N-[2-(5-amino-1H-1,2,4-triazol-3-il)etil]-2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amin; N-(2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)piridin-2-amin; 2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-N-[3-(1Hpirazol-4-il)propil]-9H-purin-6-amin; N-[2-({[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}metil)propil]acetamid; 4-(2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)piperazin-2-on; 2-(1-benzotiofen-3-il)-N-{2-[(3-metil-1H-1,2,4-triazol-5-il)sulfanil]etil}-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amin; 2-(1-benzotiofen-3-il)-N-[3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)propil]-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amin; (2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)urea; 5-({[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}metil)-2,3-dihidro-1H-1,3-benzodiazol-2-on; N-[2-(1H-indol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; N-(4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenil)methanesulfonamid; 4-(2-(2-(piridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)propil)fenol; 4-(2-(9-(oksetan-3-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)-N-metilnikotinamid; 6-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)-5,6,7,8-tetrahidronaftalen-2-ol; N-(2-(1H-indazol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; 4-(2-((9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il)(metil)amino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-8-metil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 1-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-on; 4-(3-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il)propil)fenol; 4-((((9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il)metil)(metil)amino)metil)fenol; 4-(((9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il)metilamino)metil)fenol; 4-(((9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il)metoksi)metil)fenol; N-(2-(indolin-5-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; 4-(2-(9-(1-metilpiperidin-4-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-(piperidin-4-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; N-(2-(1H-indazol-5-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; N-(2-(1H-benzo[d]imidazol-5-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amin; 5-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)indolin-2-on; 4-(2-(9-ciklopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-(1-hidroksipropan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenil sulfamat; 2-(4-hidroksifenil)-N-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il)acetamid; 4-(5-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)izoksazol-3-il)fenol; 4-(5-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)-1,3,4-oksadiazol-2-il)fenol; 4-(2-(2-(2-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(1-metil-1H-pirol-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; i 4-(2-(9-izopropil-2-(tiazol-5-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol.
[0058] U drugom izvođenju je jedinjenje sa formulom 1f:
[0059] u kojoj je: R2 izabran iz 1H-indol-3-ila i fenila opciono supstituisanih sa hidroksi; i R4 izabran iz izopropila, sek-butila, benzhidrila, nonan-2-ila, oksetan-3-ila i tetrahidrofuran-3-ila.
[0060] U jednom drugom izvođenju su jedinjenja izabrana iz skupa koji čine: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-benzhidril-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amine; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(nonan-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-amin; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; (S)-4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; i (R)-4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol.
[0061] U još jednom izvođenju je jedinjenje sa formulom 1g:
[0062] u kojoj je: R2 izabrano iz skupa koji čine: 1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-il; 1H-indol-3-il opciono supstituisani sa 1 do 2 radikala nezavisno izabrana iz halo, metil i metoksi; i fenil opciono supstituisan sa 1 do 2 radikala nezavisno izabrana iz skupa koji čine metil, halo i hidroksi; R4 je izabran iz skupa koji čine izopropil, sek-butil, 1-hidroksipropan-2-il, prop-1-en-2-il, benzhidril, nonan-2-il, oksetan-3-il i tetrahidrofuran-3-il; i Ra, Rb i Rc su nezavisno izabrani iz skupa koji čine vodonik, cijano, metil, halo, -SO2CH3 i trifluorometil.
[0063] U jednom drugom izvođenju su jedinjenja izabrana iz: 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(6-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(4-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-(metilsulfonil)piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(4-hlorpiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 9-izopropil-N-(2-(6-metoksi-1H-indol-3-il)etil)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 9-izopropil-N-(2-(5-metil-1H-indol-3-il)etil)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-(oksetan-3-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-(1-hidroksipropan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(2-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(9-sek-butil-6-(4-hidroksi-3-metilfenetilamino)-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(5-hlorpiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-(trifluorometil)piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(6-(2-(1Hindol-3-il)etilamino)-9-sek-butil-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; 4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola; 3-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)izonikotinonitrila; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(6-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-hlor-4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 3-fluoro-4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(5-hlor-1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metilfenola; 2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola; (R)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola; (S)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ilamino)etil)fenola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(6-metoksi-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(5-metoksi-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(prop-1-en-2-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(5-(5-fluoropiridin-3-il)-3-izopropil-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilamino)etil)fenola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(7-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-metilpiridin-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(2-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(6-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(4-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-2-(5fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(4-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(7-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; i 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(1-hidroksipropan-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metilfenola.
[0064] U još jednom primeru je prikazan postupak upotrebe jedinjenja iz Formule I da bi se simulirala ekspanzija matičnih ćelija povećanjem broja podela, pri čemu pomenuti postupak obuhvata dovođenje u kontakt matičnih ćelija sa jedinjenjem iz Formule I.
[0065] U drugom primeru je prikazan postupak u kom je ekspanzija matičnih ćelija in vivo, in vitro, ili ex vivo.
[0066] U drugom primeru je prikazan postupak u kom su matične ćelije ljudske hematopoezne matične ćelije.
[0067] U još jednom primeru je prikazana populacija ćelije sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama, kako su dobijene ili ih je moguće dobiti postupkom iz ovog opisa.
[0068] U još jednom primeru prikazana je supstanca koja obuhvata populaciju ćelije sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama izvedenim iz jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce, poželjno jedne jedinice krvi pupčane vrpce, pri čemu pomenuta supstanca obuhvata ukupnu količinu ćelija od barem 10<5>ćelija, 10<7>ćelija, 10<8>ćelija ili 10<9>ćelija, i pri čemu između 20-100% od ukupnog broja ćelija su CD34+ ćelija, na primer između 40-80% od ukupnog broja ćelija su CD34+.
[0069] U još jednom primeru prikazano je jedinjenje za upotrebu u postupku za lečenje bolesti ili poremećaja za koji bi terapija matičnim ćelijama dalo kao rezultat sprečavanje, lečenje ili iskorenjivanje pomenutog poremećaja.
[0070] Očekuje se da će se sa napredovanjem upotrebe matičnih ćelija proširiti broj bolesti čije će lečenje biti moguće transplantacijom matične ćelije. U nastavku je neograničeni spisak primera, infra.
[0071] U još jednom primeru je upotreba jedinjenja iz Formule I kako je definisano u Kratkom opisu pronalaska, ili njegove soli, za dobijanje supstance za lečenje nasleđene imunodeficijentne bolesti, autoimune bolesti i/ili hematopoeznog poremećaja.
[0072] U još jednom primeru, isporuka autolognog transplanata i hematopoezni poremećaj se bira iz grupe bolesti kao što je višestruki mijelom, ne-Hodžkinov limfom, Hodžkinova bolest, akutna mijeloidna leukemija, neuroblastom, tumori ćelija klice, poremećaji autoimunog sistema i amiloidoza.
[0073] U još jednom primeru, poremećaji autoimunog sistema se biraju iz sistemskog lupusa eritematozusa (SLE) i sistemske skleroze.
[0074] U još jednom primeru, isporuka je alogena transplantacija i hematopoezni poremećaj se bira iz akutne mijeloidne leukemije, akutne limfoblastne leukemije, hronične mijeloidne leukemije, hronične limfocitne leukemije, mijeloproliferativnih poremećaja, mijelodisplastičnih sindroma, višestrukog mijeloma, ne-Hodžkinovog limfoma, Hodžkinove bolesti, aplastične anemije, čiste aplazije crvenih ćelija, paroksismalne noćne hemoglobinurije, Fankonijeve anemije, velike talasemije, anemije srpastih ćelija, ozbiljne kombinovane imunodeficijencije (SCID), Viskot-Aldričovog sindroma, hemofagocitne limfohistiocitoze (HLH) i urođene greške metabolizma.
[0075] U još jednom primeru, urođene greške metabolizma se biraju iz mukopolisaharidoze, Gošeove bolesti, metahromatske leukodistrofije i adrenoleukodistrofije.
[0076] U još jednom primeru je jedinjenje za upotrebu u postupku za lečenje nasleđene imunodeficijentne bolesti, autoimune bolesti i/ili hematopoeznog poremećaja koji obuhvata isporuku pacijentu kom je potrebno takvo rešenje hematopoeznih matičnih ćelija ekspandiranih jedinjenjem kako je opisano u Kratkom opisu ovog pronalaska.
[0077] U još jednom primeru, isporuka autolognog transplanata i hematopoezni poremećaj se bira iz grupe bolesti kao što je višestruki mijelom, ne-Hodžkinov limfom, Hodžkinova bolest, akutna mijeloidna leukemija, neuroblastom, tumori ćelija klice, poremećaji autoimunog sistema i amiloidoza.
[0078] U još jednom primeru, poremećaji autoimunog sistema se biraju iz sistemskog lupusa eritematozusa (SLE) i sistemske skleroze.
[0079] U još jednom primeru, isporuka je alogena transplantacija i hematopoezni poremećaj se bira iz akutne mijeloidne leukemije, akutne limfoblastne leukemije, hronične mijeloidne leukemije, hronične limfocitne leukemije, mijeloproliferativnih poremećaja, mijelodisplastičnih sindroma, višestrukog mijeloma, ne-Hodžkinovog limfoma, Hodžkinove bolesti, aplastične anemije, čiste aplazije crvenih ćelija, paroksismalne noćne hemoglobinurije, Fankonijeve anemije, velike talasemije, anemije srpastih ćelija, ozbiljne kombinovane imunodeficijencije (SCID), Viskot-Aldričovog sindroma, hemofagocitne limfohistiocitoze (HLH) i urođene greške metabolizma.
[0080] U još jednom primeru, urođene greške metabolizma se biraju iz mukopolisaharidoze, Gošeove bolesti, metahromatske leukodistrofije i adrenoleukodistrofije.
Korisnost
[0081] Hematopoezne matične ćelije su primitivne ćelije koje mogu da regenerišu sve ćelije krvi. Tokom razvoja, hematopoeza se translocira iz jetre fetusa u koštanu srž, koja zatim ostaje na mestu hematopoeze tokom odraslog doba. Pošto se uspostavi hematopoeza u koštanoj srži, hematopoezne matične ćelije nisu raspoređene nasumično u celoj šupljini kosti. Umesto toga, one su pronađene sasvim blizu endostelnim površinama. Najzrelije matične ćelije povećavaju broj kako se povećava rastojanje od površine kosti. Najzad, dolazi do toga da se centralna uzdužna osa kosti približila terminalnoj diferencijaciji zrele ćelije.
[0082] Ekspandiranje broja matičnih ćelija, bilo iz odrasle osobe, krvi pupčane vrpce, fetusa, ili embrionskih izvora, bi imalo ogroman uticaj na transplantaciju i druge terapije za bolesti hematologije i onkologije i poremećaje, najmanje od kojih bi bila povećana bezbednost i smanjeni troškovi. Kako je opisano u postupcima ovde, brojevi hematopoeznih matičnih ćelija se povećavaju ex vivo. Postupak povećanja brojeva matične ćelije je važan jer sada, približno 25% autolognih transplantata donatora se zabranjuje zbog nedostatka dovoljnog broja matičnih ćelija. Pored toga, manje od 25% pacijenata kojima je potreban alogeni transplantat može da pronađe donatora ima kompatibilno tkivo. Za sada postoje banke krvi iz pupčane vrpce i obuhvataju širok rasni sastav opšte populacije, ali ove banke su trenutno ograničene na upotrebu kod dece usled neodgovarajućih brojeva matičnih ćelija u uzorcima za odrasle primaoce. Postupak za povećanje broja matičnih ćelija omogućava da krv pupčane vrpce bude korisna za odrasle pacijente, čime se proširuje upotreba alogene transplantacije. Jedinjenja iz ovog opisa moguće je takođe koristiti za povećanje broja ćelija progenitora koje su klinički korisne, na primer, da se ubrza usađivanje i smanji trajanje neutropenije.
[0083] S tim u skladu, dat je postupak za povećanje broja hematopoeznih matičnih ćelija. Kako je ovde korišćeno, povećanje hematopoeznih matičnih ćelija znači da taj subjekat ima barem jednu više hematopoeznu matičnu ćeliju, povećanje od 10%, povećanje od 20%, povećanje od 30% ili veće. Hematopoezne matične ćelije mogu da sadrže podskup CD34+ ćelija, povećanje hematopoeznih matičnih ćelija moguće je izmeriti indirektno prebrojavanjem broja CD34+ ćelija u populaciji ćelije i, opciono, procenom svojstava diferencijacije CD34+ ćelije analiziranjem jedinica koje formiraju kolonije (CFU) kao što je opisano u eksperimentalnom delu dole u tekstu: Povećanje broja kulture CD34+ ćelija od barem 10%, poželjno povećanje od 20% ili povećanje od 30% ili veće u poređenju sa kontrolom bez proširenja je indikativno za ekspanziju hematopoeznih matičnih ćelija.
Ekspandirana populacija hematopoeznih matičnih ćelija je prikupljena iz, na primer, uzorka koštane srži subjekta ili neke kulture. Prikupljanje hematopoeznih matičnih ćelija je definisano kao izmeštanje ili separacija ćelija. Ovo se postiže korišćenjem broja postupaka, kao što su enzimski, neenzimski, centrifugalni, električni, ili postupci na bazi veličine, ili poželjno, ispiranjem ćelija korišćenjem podloge kulture (npr. podloge u kojima su ćelije inkubirane) ili puferisanog rastvora. Ćelije se opciono prikupljaju, odvajaju, i dalje povećavaju generišući još veće populacije hematopoeznih matičnih ćelija i izdiferencirano potomstvo.
[0084] Postupak za pravljenje ekspandirane populacije hematopoeznih matičnih ćelija obuhvata dovođenje u kontakt agensa koji može da smanji aktivnost i/ili ekspresiju AHR i/ili nizvodni efektor AHR, npr. jedinjenje iz ovog opisa, sa početnom populacijom ćelije (tj. neekspandiranu populaciju ćelija) koja obuhvata mešavinu hematopoeznih matičnih ćelija i opciono potpornih ćelija hematopoeznih matičnih ćelija. Korak isporuke se odvija ex vivo, in vivo i/ili in vitro. Kako je ovde opisano, ekspandirana populacija hematopoeznih matičnih ćelija je opciono isporučena subjektu. Za ex vivo ekspanziju, kao što je agens za ekspanziju hematopoeznih matičnih ćelija, npr. jedinjenje iz ovog opisa, moguće je formulisati u DMSO ili nekom drugom pogodnom nosaču, "oprano" iz ćelija i ćelije mogu biti prenete, na primer, u pufersko sredstvo infuzije. DMSO formulacija, na primer, može sadržati 0,3 mg/ml jedinjenja iz ovog opisa u 60% DMSO/40% rastvoru vode. Dakle, data su jedinjenja za upotrebu u postupcima koji obezbeđuju ekspandiranu populaciju hematopoeznih matičnih ćelija subjektu koji obuhvata isporuku subjektu ekspandirane populacije hematopoeznih matičnih ćelija opisane ovde ili napravljene postupcima koji su ovde opisani. Ekspandirana populacija hematopoeznih matičnih ćelija se opciono koristi da se naprave ćelije krvi. Ćelije krvi se opciono isporučuju subjektu kom su potrebne. Opciono, subjekat je isti subjekat iz kog je izvedena neočekivana populacija hematopoeznih matičnih ćelija ili mešavine hematopoeznih matičnih ćelija i potpornih ćelija hematopoeznih matičnih ćelija.
[0085] Kako se ovde koristi, pojam potporne ćelije hematopoeznih matičnih ćelija se odnosi na blizinu jedne ili više hematopoeznih matičnih ćelija takvih da faktori koji su otpušteni potpornim ćelijama hematopoeznih matičnih ćelija dostižu hematopoezne matične ćelije difuzijom, na primer. Pomoćne ćelije hematopoeznih matičnih ćelija obuhvataju, ali se ne ograničavaju na, limforetikularne stromalne ćelije. Limforetikularne matične ćelije kako se ovde koristi, ali bez ograničenja, svi tipovi ćelija prisutni u limfoidnom tkivu koje nisu limfociti ili prekursori limfocita ili progenitori. Dakle, limforetikularne stromalne ćelije obuhvataju osteoblaste, ćelije epitela, ćelije endotela, ćelije mezotela, ćelije dendrita, splenocite i makrofage. Limforetikularne matične ćelije takođe obuhvataju ćelije koje ne bi inače funkcionisale kao limforetikularne matične ćelije, kao što su fibroblasti, koji su genetski promenjeni da bi izlučili ili izrazili na svojoj površini ćelije faktore koji su neophodni za održavanje, rast ili diferencijaciju hematopoeznih matičnih ćelija, uključujući njihovo potomstvo. Limforetikularne stromalne ćelije se opciono izvode iz disagregacije dela limfoidnog tkiva. Takve ćelije mogu da potpomognu in vitro ili in vivo održavanje, rast, diferencijaciju hematopoeznih matičnih ćelija, uključujući njihovo potomstvo. Pod limfoidnim tkivom se podrazumeva da obuhvata koštanu srž, perifernu krv (uključujući mobilisanu perifernu krv), krv iz pupčane vrpce, krv placente, jetre fetusa, embrionske matične ćelije, ćelije izvedene iz aortno-gonadalnog-mezonefrosa, i limfoidno meko tkivo. Limfoidno meko tkivo kako se ovde koristi obuhvata, ali se ne ograničava na, tkiva kao što je timus, slezina, jetra, limfni čvor, koža, krajnik, adenoidi i Pejerova opna (grupisani limfni čvorovi), i njihove kombinacije.
[0086] Limforetikularne matične ćelije obezbeđuju potporno mikrookruženje u nedirnutom limfoidnom tkivu za održavanje, rast ili diferencijaciju hematopoeznih matičnih ćelija, uključujući njihovo potomstvo. Mikrookruženje obuhvata rastvorljive i faktore koji su na površini ćelije izraženi različitim tipovima ćelije koji obuhvataju limforetikularne strome. Generalno, podrška koju obezbeđuju limforetikularne stromalne ćelije karakteriše se i kao kontaktno zavisna i kao nezavisna od kontakta.
[0087] Limforetikularne stromalne ćelije, na primer, jesu autologne, (potiču od iste jedinke) ili neautologne (ne potiču od iste jedinke, npr. heterologne, alogene, singeničke ili ksenogeničke) što se tiče hematopoeznih matičnih ćelija. Autologne, kako se ovde koristi, se odnosi na ćelije iz istog subjekta. Alogene, kako se ovde koristi, se odnosi na ćelije istih vrsta koje se razlikuju genetički. Singeničke, kako se ovde koristi, se odnosi na ćelije različitog subjekta koje su genetski identične ćeliji sa kojom se porede. Ksenogeničke, kako se ovde koristi, se odnosi na ćelije različitih vrsta. Limforetikularne matične ćelije se dobijaju, na primer, iz limfoidnog tkiva čoveka ili nehumanog subjekta u bilo kom trenutku pošto se razvio organ/tkivo do izvesnog stadijuma (tj. stadijum sazrevanja) u kom je moguće potpomoći održavanje, rast ili diferencijaciju hematopoeznih matičnih ćelija. Limfoidno tkivo iz kog su izvedene limforetikularne stromalne ćelije obično određuje posvećenost liniji izvedenih hematopoeznih matičnih ćelija, što kao rezultat daje specifičnost linije tog diferenciranog potomka.
[0088] Ko-kultura hematopoeznih matičnih ćelija (i njihovog potomstva) sa limforetikularnim stromalnim ćelijama, obično nastaje pod uslovima poznatim u ovoj oblasti (npr. temperatura, CO2 i O2 sadržaj, hranljiva podloga, trajanje, itd.). Vreme dovoljno da se poveća broj ćelija je vreme koje lako može odrediti stručnjak u ovoj oblasti i varira zavisno od originalnog broja ćelija koje su zasejane. Količina hematopoeznih matičnih ćelija i limforetikularnih matičnih ćelija početno uvedenih (i naknadno zasejanih) varira zavisno od potreba eksperimenta. Idealne količine stručnjak u ovoj oblasti lako određuje u skladu sa potrebama.
[0089] Kao što je ovde korišćeno, pod subjektom se misli na pojedinca. Dakle, subjekti obuhvataju, na primer, pripitomljene životinje, kao što su mačke i psi, domaću stoku (npr. goveda, konje, svinje, ovce, i koze), laboratorijske životinje (npr. miševe, zečeve, pacove, morsku prasad), sisare, nehumane sisare, primate, nehumane primate, glodare, ptice, reptile, vodozemce, ribe, i bilo koju drugu životinju. Subjekat je opciono sisar kao što je primat ili ljudsko biće.
Postupci za ekspandiranje hematopoeznih matičnih ćelija
[0090] Ovaj se opis samim tim odnosi na postupak za ekspandiranje hematopoeznih matičnih ćelija, koji obuhvata (a) obezbeđivanje početne populacije ćelije koja obuhvata hematopoezne matične ćelije i (b) kultivisanje pomenute početne populacije ćelije ex vivo u prisustvu agensa koji može da smanji aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili smanji efektor putanje receptora aril ugljovodonika, pod pogodnim uslovima za ekspandiranje hematopoeznih matičnih ćelija.
[0091] Receptor aril ugljovodonika (dioksin) (AHR) je citosolični faktor transkripcije aktiviran ligandom poznat po tome što posreduje u velikom broju toksičnih i karcinogenih dejstava kod životinja i možda kod ljudi (Safe S 2001 Toxicol Lett 120: 1-7). Kao posledica AHR aktivacija putem tih liganda, veliki broj gena detoksifikacije se transkripciono uvodi, uključujući i one koji se kodiraju za fazu I ksenobiotskih-metabolizujućih enzima, kao što su citohromi P450 CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1 i CYP2S1, i fazu II enzima UDP-glukuronosiltransferaza UGT1A6, NAD(P)H-zavisni hinon oksidoreduktaza-1 (NQO1), aldehid dehidrogenaza ALDH3A1, i nekoliko glutation-S-transferaza.
[0092] U jednom primeru agens koji može da smanjeno reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodni efektor putanje receptora aril ugljovodonika se bira iz grupe koja obuhvata: (i) organsko jedinjenje; (ii) mali interferentni RNK (siRNK) molekul koji može da smanjeno reguliše ekspresiju AHR; i (iii) antisens oligonukleotid koji može da smanjeno reguliše ekspresiju AHR.
[0093] U jednom specifičnom primeru, pomenuti postupak za proširenje hematopoeznih matičnih ćelija, obuhvata (a) obezbeđivanje početne populacije ćelija koja obuhvata hematopoezne matične ćelije i (b) kultivisanje pomenute početne populacije ćelije ex vivo u prisustvu agensa koji može da smanjeno reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodni efektor putanje receptora aril ugljovodonika, pod pogodnim uslovima za ekspandiranje hematopoeznih matičnih ćelija, pri čemu je pomenuti agens sposoban da smanjeno reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodni efektor putanje receptora aril ugljovodonika nije alfa-naftoflavon ili 3'-metoksi-4'-nitroflavon.
[0094] Organsko jedinjenje koje inhibira AHR aktivnost (ovde se takođe pominje kao AHR antagonist) opisano je u oblasti, na primer, 2-metil-2H-pirazol-3-karboksilna kiselina (2-metil-4-o-tolilazofenil)amid (CH223191), alfa naftoflavon, resveratrol (Nutr. Metab.
Cardiovasc. Dis., 2003 Apr; 13(2):104-13), 3'-metoksi-4'-nitroflavon (Biochem. Pharmacol., 2007 Maj 15; 73(10):1622-34, Epub 2007 Jan 30), i 6-metil-1,3,8-trihlordibenzofuran (Cancer Res., 2004, Apr 15;64(8):2889-97). Inhibitor AHR aktivnosti se odnosi na jedinjenje koje smanjuje AHR aktivnost do barem 10%, 20%, 30%, 50%, 60%, 70%, 80% ili barem 90% transkripcionu aktivnost AHR kako je primećeno pod aktiviranim uslovima. Ogled da se izmeri AHR inhibitorna aktivnost je na primer dioksinom indukovan od AHR zavisan ogled gena reportera luciferaze kako je opisano u Primerima. U jednom primeru, inhibitor AHR aktivnosti je jedinjenje koje ima EC50 manju od 10µM, poželjno manju od 5µM kako je izmereno u dioksinom indukovanom od AHR zavisnom ogledu gena reportera luciferaze.
[0095] AHR je transkripcioni faktor koji reguliše transkripciju različitih gena kod ljudi. U jednom primeru, nizvodni efektor AHR putanje je gen koji je direktno regulisan na tanskripcionom nivou pomoću AHR. Primeri takvih gena su izabrani iz Cyp1B1, Cyp1A1, i AHRR. AHR takođe funkcioniše u putanjama izvan svoje dobro karakterisane uloge u ksenobiotskoj indukciji enzima. Ksenobiotski ligandi AHR su pokazali da regulišu beta katenin, STAT5, STAT1, HES-1, c-Myc, C/EBP, PU.1, β-katenin, p21, P27, pRb, dezoksinukleotidil transferazu, CXCR4, i njegov hemokin ligand CXCL12 (SDF-1).
[0096] U jednom specifičnom primeru, agens koji može da smanjeno reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika je jedinjenje kako je definisano u Kratkom opisu pronalaska.
[0097] U drugom primeru, agens koji je sposoban da smanjeno reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika je antisens oligonukleotid ili mali interferentni RNK molekul (siRNK), koji je sposoban za smanjeno regulisanje AHR ekspresije proteina ili ekspresije proteina jednog ili više nizvodnih efektora AHR.
[0098] Struktura antisens oligonukleotida koje je moguće koristiti da bi se efikasno suzbila AHR ekspresija proteina mora da bude pod uticajem načina na koji takvi oligonukleotidi specifično vežu strukturiranu mRNK unutar ćelija na način koji suzbija njihovu translaciju. Sekvenca pogodna za upotrebu u konstrukciji i sintezi antisens oligonukleotida koji se specifično vezuju na AHR mRNK, genomsku DNK i/ili njene promoter ili druge kontrolne sekvence su dostupni u objavljenoj sekvenci AHR, u specifično humanom AHR. Pored toga algoritmi za identifikovanje sekvenci najvišim predviđenim afinitetom vezivanja za njihovu ciljnu mRNK na osnovu termodinamičkog ciklusa koji uzima u obzir energetske i strukturne alteracije i u ciljnoj mRNK i oligonukleotidima su takođe dostupni.
[0099] Na sintezu RNKi molekula pogodnih za upotrebu sa ovim opisom moguće je izvršiti uticaj kao u nastavku: Prvo, AHR mRNK sekvenca (ili jedan ili više nizvodnih efektora) se analizira nizvodno od AUG početnog kodona za sekvence AA-dinukleotida. Pojava svakog AA i 193'-susednog se registruje kao potencijalno siRNK ciljno mesto. Zatim, potencijalna ciljna mesta se porede sa odgovarajućom genomskom bazom podataka (npr. humani, mišji, pacovski, itd.) korišćenjem bilo kog softvera za poravnanje sekvence. Moguće ciljno mesto koje ispoljava značajnu homologiju sa drugim kodirajućim sekvencama se filtrira.
Preporučene sekvence su zatim one koje obuhvataju nizak G/C sadržaj, posebno sekvence sa G/C sadržajem manjim od 55%. Nekoliko ciljnih mesta se zatim bira duž dužine ciljnog gena. Postupci ili algoritmi da se identifikuje moguće ciljno mesto siRNK su opisani na primer u (Tilesi, et al., Curr. Opin. Mol. Ther.11:156, 2009). Primeri siRNK molekula koji mogu da smanjeno regulišu ekspresiju AHR su: AHR 111S, 5' GCG GCA TAG AGA CCG ACT TAA TTT CAA GAG AAT TAA GTC GGT CTC TAT GCC GCT TTT TTG G 3'; AHR 111AS, 5' CGC GCC AAA AAA GCG GCA TAG AGA CCG ACT TAA TTC TCT TGA AAT TAA GTC GGT CTC TAT GCC GC 3'; AHR 242S, 5' GGC TTC TTT GAT GTT GCA TTA ATT CAA GAG ATT AAT GCA ACA TCA AAG AAG CCT TTT TTG G 3'; AHR 242AS, 5' CGC GCC AAA AAA GGC TTC TTT GAT GTT GCA TTA ATC TCT TGA ATT AAT GCA ACA TCA AAG AAG CC 3'.
[00100] Početnu populaciju ćelije koja obuhvata hematopoezne matične ćelije će izabrati stručnjak u ovoj oblasti zavisno od predviđene upotrebe. Različiti izvori ćelija koje obuhvataju hematopoezne matične ćelije su opisani u ovoj oblasti, uključujući koštanu srž, perifernu krv, neonatalnu krv pupčane vrpce, placentu ili druge izvore kao što je jetra, posebno jetra fetusa.
[00101] Ovu populaciju ćelije je prvo moguće podvrgnuti koracima obogaćivanja ili prečišćavanja, uključujući negativnu i/ili pozitivnu selekciju ćelija na osnovu specifičnih ćelijskih markera da bi se obezbedila početna populacija ćelije. Postupci za izolovanje pomenute početne populacije ćelije na osnovu specifičnih ćelijskih markera mogu koristiti tehnologiju fluorescentno aktiviranog sortiranja ćelije koja se zove još i protočna citometrija ili čvrstu supstancu ili nerastvorljiv supstrat na koji se vežu antitela ili ligandi koji međusobno reaguju sa specifičnim markerima na površini ćelije. Na primer, ćelije mogu biti dovedene u kontakt sa supstratom čvrste supstance (npr. stub sa perlicama, laboratorijske bočice, magnetne čestice) koje sadrže antitela i bilo koje nevezane ćelije se uklanjaju. Kada se koristi čvrsti supstrat koji obuhvata magnetne ili paramagnetne perlice, ćelije vezane na te perlice mogu biti ponovljeno izolovane magnetnim separatorom.
[00102] U jednom primeru, pomenuta početna populacija ćelije se obogaćuje u poželjnom fenotipu markera ćelije (npr. CD34+, CD133+, CD90+) ili na osnovu protoka boja kao što je aktivnost rodamina, Hehstova (Hoechst) ili aktivnost dehidrogenaze aldehida. U jednom specifičnom primeru, pomenuta početna populacija ćelije se obogaćuje u CD34+ ćelijama. Postupci za obogaćivanje populacije ćelija krvi u CD34+ ćelijama obuhvataju komplete koje je komercijalno proizvela kompanija Miltenyi Biotec (CD34+ komplet za direktnu izolaciju, Miltenyi Biotec, Bergisch, Gladbach, Nemačka) ili kompanija Baxter (Isolex 3000).
[00103] Količina krvi iz pupčane vrpce iz jednog rođenja je često neadekvatna da bi se lečila odrasla osoba ili starije dete. Jedna pogodnost postupka ekspanzije korišćenjem jedinjenja iz ovog opisa ili agensa koji može da smanjeno reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodnog efektora putanje receptora aril ugljovodonika, je što omogućava proizvodnju dovoljne količine hematopoeznih matičnih ćelija iz samo jedne jedinice krvi pupčane vrpce.
[00104] U skladu sa tim, u jednom primeru, početna populacija ćelije je izvedena iz neonatalnih ćelija krvi pupčane vrpce koje su obogaćene u CD34+ ćelijama. U jednom srodnom primeru, pomenuta početna populacija ćelije se izvodi iz jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce.
[00105] U još jednom primeru, početna populacija ćelije je izvedena iz humanih mobilizovanih ćelija periferne krvi koje su obogaćene u CD34+ ćelijama. U jednom srodnom primeru, pomenuta početna populacija ćelije je izvedena iz humanih mobilizovanih ćelija periferne krvi izolovanih iz samo jednog pacijenta.
[00106] Pomenuta početna populacija ćelije može poželjno obuhvatiti 50% CD34+ ćelija, u nekim primerima, više od 90% od CD34+ ćelija, i može obuhvatiti između 10<5>i 10<9>nukleinskih ćelija.
[00107] Početnu populaciju ćelija je moguće koristiti direktno za ekspanziju ili zamrznute i uskladištene za upotrebu nekog kasnijeg datuma.
[00108] Uslovi za kultivisanje početne populacije ćelije za ekspanziju hematopoezne matične ćelije će varirati zavisno od, između ostalog, početne populacije ćelija, željenog finalnog broja ćelija, i željenog finalnog dela hematopoeznih matičnih ćelija.
[00109] U jednom specifičnom primeru, posebno, korišćenje početne populacije ćelija iz ćelija krvi pupčane vrpce obogaćenih u CD34+ ćelijama, uslovi kultivisanja obuhvataju upotrebu drugih citokina i faktora rasta, generalno poznatih u ovoj oblasti za ekspanziju hematopoezne matične ćelije. Takvi citokini i faktori rasta obuhvataju bez ograničenja IL-1, IL-3, IL-6, IL-11, G-CSF, GM-CSF, SCF, FlT3-L, trombopoetin (TPO), eritropoetin, i njihove analoge. Kako se ovde koristi, "analozi" obuhvataju bilo koje strukturne varijante citokina i faktora rasta koji imaju biološku aktivnost kao što su oblici koji se prirodno javljaju, uključujući bez ograničenja, varijante sa pospešenom ili smanjenom biološkom aktivnošću kada se uporede sa oblicima koji se prirodno javljaju ili agonistima receptora citokina kao što je antitelo agonista protiv TPO receptora (na primer, VB22B sc(Fv)2 kao što je detaljno opisano u objavi patenta WO 2007/145227, i slično). Kombinacije citokina i faktora rasta su izabrane da se prošire hematopoezne matične ćelije i ćelije progenitora uz ograničenje proizvodnje terminalno diferenciranih ćelija. U jednom specifičnom primeru, jedan ili više citokina i faktora rasta su izabrani iz grupe koja obuhvata SCF, Flt3-L i TPO. U jednom specifičnom primeru, barem TPO se koristi u podlozi bez seruma pod poželjnim uslovima za ekspanziju hematopoeznih matičnih ćelija. U jednom povezanom primeru, mešavina IL6, SCF, Flt3-L i TPO je korišćena u postupku za ekspandiranje hematopoeznih matičnih ćelija u kombinaciji sa jedinjenjem iz ovog opisa ili agens pogodan za smanjeno regulisanje aktivnosti i/ili ekspresije receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodni efektor putanje receptora aril ugljovodonika.
[00110] Humani IL6 ili interleukin-6, takođe poznat kao 2. stimulacioni faktor B ćelije su opisali (Kishimoto, Ann. review of Imm. 23:1 2005) i komercijalno je dostupan. Humani SCF ili faktor matične ćelije takođe poznat kao ligand c-kompleta, faktor rasta ćelija mastocita ili Stilov faktor je opisan (Smith, MA et al., ACTA Haematologica, 105, 3:143, 2001) i komercijalno je dostupan. Flt3-L ili FLT-3 Ligand, takođe pominjan kao FL, je faktor koji se vezuje na flt3-receptor. Opisan je (Hannum C, Nature 368 (6472): 643-8) i komercijalno je dostupan. TPO ili trombopoetin, takođe poznat kao faktor rasta megakariocita (MGDF) ili c-Mpl ligand opisuje (Kaushansky K (2006). N. Engl. J. Med.354 (19): 2034-45) i komercijalno je dostupan.
[00111] Ekspanziju hematopoeznih matičnih ćelija moguće je izvesti u bazalnoj podlozi, koja je dopunjena sa mešavinama citokina i faktora rasta opisanim gore u tekstu. Bazalna podloga obično obuhvata aminokiseline, izvore ugljenika, vitamine, proteine seruma (npr. albumin), neorganske soli, dvovalentne katjone, puferska sredstva i bilo koji drugi element pogodan za upotrebu u ekspanziji hematopoeznih matičnih ćelija. Primeri takve bazalne podloge odgovarajući za postupak ekspandiranja hematopoeznih matičnih ćelija obuhvataju, bez ograničenja, StemSpan<®>SFEM - ekspanzionu podlogu bez seruma (StemCell Technologies, Vancouver, Kanada), StemSpan<®>H3000 - definisanu podlogu (StemCell Technologies, Vancouver, Kanada), CellGro<®>SCGM (CellGenix, Freiburg Nemačka), StemPro®-34 SFM (Invitrogen).
[00112] U jednom primeru, jedinjenje iz ovog opisa ili njegov agens koji je sposoban za smanjeno regulisanje aktivnosti i/ili ekspresije receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodnog efektora putanje receptora aril ugljovodonika, se isporučuje tokom postupka ekspanzije pomenute početne populacije ćelije pod koncentracijom odgovarajućom za ekspanziju hematopoezne matične ćelije. U jednom specifičnom primeru, pomenuto jedinjenje ili AhR modulacioni agens se isporučuje u koncentraciji koja sadrži između 1pM i 100µM, na primer između 10pM i 10µM, ili između 100pM i 1µM.
[00113] U jednom specifičnom primeru gde početna populacija ćelije u suštini obuhvata CD34+ obogaćene ćelije iz jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce, te ćelije rastu pod uslovima za ekspanziju hematopoeznih matičnih ćelija od oko 3 dana do oko 90 dana, na primer između 7 i 2 dana i/ili sve dok se ne dobiju naznačen stepen ekspanzije i karakteristične populacije ćelije. U jednom specifičnom primeru, ćelije se uzgajaju pod uslovima za ekspanziju hematopoezne matične ćelije ne duže od 21 dana, 14 dana ili 7 dana.
[00114] U jednom primeru, početna populacija ćelije se kultiviše tokom vremena pogodnog da se dostigne apsolutni broj CD34+ ćelija od barem 10<5>, 10<6>, 10<7>, 10<8>ili 10<9>ćelija. U drugom primeru, pomenuta početna populacija ćelije se kultiviše tokom vremena dovoljnog za 10 do 50000 struku ekspanziju CD34+ ćelija, na primer između 100 i 10000 struku ekspanzije.
[00115] Populaciju ćelije dobijene posle postupka ekspanzije moguće je koristiti bez daljeg prečišćavanja ili može biti podvrgnuta daljim koracima prečišćavanja ili selekcije.
[00116] Populaciju ćelije je zatim moguće oprati da bi se uklonilo jedinjenje iz ovog opisa ili bilo koji drugi agens koji može da smanjeno reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodni efektor putanje receptora aril ugljovodonika i/ili bilo koje druge komponente kulture ćelije i vraćen je u suspenziju odgovarajuće podloge za suspenziju ćelije za kratkotrajnu upotrebu ili u podlozi za dugotrajno skladištenje, na primer podlozi pogodnoj za kriokonzerviranje.
Populacija ćelija sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama kako je dobijena postupkom ekspanzije i terapijskim supstancama
[00117] Ovaj opis još obezbeđuje populaciju ćelije sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama, koje je moguće dobiti ili su dobijene postupkom ekspanzije opisanim gore u tekstu. U jednom specifičnom primeru, takva populacija ćelija je vraćena u suspenziju u farmaceutski prihvatljivoj podlozi pogodnoj za isporuku sisaru domaćinu, čime se obezbeđuje terapijska supstanca.
[00118] Jedinjenje kako je definisano u Kratkom opisu ovog pronalaska ili agens koji je sposoban da sniženo reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodnog efektora putanje receptora aril ugljovodonika omogućava ekspanziju hematopoeznih matičnih ćelija, na primer iz samo jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce, da bi se obezbedila populacija ćelije koja je kvantitativno i kvalitativno odgovarajuća za efikasno kratkoročno i dugoročno usađivanje u humanog pacijenta kom je potrebna.
Specifično, ovaj opis se odnosi na supstancu koja sadrži populaciju ćelije sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama izvedenim iz ne više od jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce, pri čemu pomenuta terapijska supstanca sadrži ukupnu količinu ćelija od barem 10<5>, 10<6>, 10<7>, 10<8>ili 10<9>ćelija, sa između 20-100%, na primer između 40-80% ukupnih ćelija koje su CD34+ ćelije. U jednom srodnom primeru, pomenuta supstanca sadrži između 0,1-40%, na primer između 0,1-10% ukupnih ćelija koje su CD34+ Thy1+ i 20-80% ćelije koje su CD34+ CD45RA+. U nekim specifičnim primerima, pomenuta supstanca obuhvata između 10-95% ćelija koje su CD38+ i između 5-70% ćelija koje su CD133+.
Upotreba terapijskih supstanci
[00119] Opis još obezbeđuje populaciju ćelije sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama ili njenu supstancu za upotrebu u alogenoj ili autolognoj transplantaciji matične ćelije u subjekta koji je sisar.
[00120] Subjekat koji se ovde pominje je, na primer, donator koštane srži ili pojedinac sa ili u riziku za osiromašene ili ograničene nivoe ćelija krvi. Opciono, subjekat je donator koštane srži pre prikupljanja koštane srži ili je donator koštane srži posle prikupljanja koštane srži. Subjekat je opciono primalac transplantata koštane srži. Ovde opisan postupak je posebno koristan kod subjekata koji imaju ograničenu rezervu koštane srži kao što su stariji subjekti ili subjekti prethodno izloženi koja slabi imuni sistem ili mijeloablativnoj terapiji kao što je hemoterapija, npr. za lečenje leukemije ili limfoma. Subjekat, opciono ima smanjen nivo ćelije krvi ili je u riziku da razvije smanjen nivo ćelije krvi u poređenju sa kontrolnim nivoom ćelije krvi. Kako se ovde koristi pojam kontrola nivoa ćelije krvi se odnosi na prosečan nivo ćelija krvi kod subjekta pre ili u značajnom odsustvu događaja koji menja nivoe ćelije krvi kod tog subjekta. Ono što menja nivoe ćelija u krvi kod subjekta obuhvata, na primer, anemiju, traumu, hemoterapiju, transplant koštane srži i terapiju zračenjem. Na primer, taj subjekat ima anemiju ili gubitak krvi usled, na primer, traume.
[00121] Ekspandirana populacija hematopoezne matične ćelije ili supstanca koja sadrži populaciju ćelije sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama se isporučuje subjektu, na primer, pre, u isto vreme, ili posle hemoterapije, terapije zračenjem ili transplantata koštane srži. Subjekat opciono ima slabu koštanu srž što je povezano sa, na primer, urođenim, genetskim ili stečenim sindromom koji karakteriše gubitak koštane srži ili slabu koštanu srž. Dakle, subjekat je opciono subjekat kom je potrebna hematopoeza. Opciono, subjekat je donator koštane srži ili subjekat sa ili pod rizikom za ispražnjenu koštanu srž.
[00122] Manipulacija hematopoeznom koštanom ćelijom je korisna kao dopunska terapija hemoterapiji ili terapiji zračenja. Na primer, hematopoezne matične ćelije se lokalizuju u perifernoj krvi i zatim su izolovane iz subjekta koji će proći hemoterapiju, i posle terapije ćelije se vraćaju. Dakle, subjekat je subjekat koji prolazi ili se očekuje da prođe terapiju slabljenja ćelije imunog sistema kao što je hemoterapija, terapija zračenjem ili služi kao donator za transplantat koštane srži. Koštana srž je jedna od najproduktivnijih tkiva u telu i samim tim je često organ koji je prvobitno oštećen hemoterapijskim lekovima i zračenjem. Rezultat je da je proizvodnja ćelije krvi brzo uništena tokom hemoterapije ili terapije zračenja, i hemoterapija ili zračenje moraju biti okončani da bi se omogućilo hematopoeznom sistemu da dopuni zalihe ćelije krvi pre nego što se pacijent ponovo leči hemoterapijom. Samim tim, kako je ovde opisano, hematopoezne matične ćelije ili ćelije krvi napravljene ovde opisanim postupcima se opciono isporučuju takvim subjektima kojima su potrebne dodatne ćelije krvi.
[00123] Date su hematopoezne matične ćelije ekspandirane jedinjenjem iz ovog opisa ili agensom koji je sposoban da sniženo reguliše aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodni efektor putanje receptora aril ugljovodonika ili supstance sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama kao što je opisano gore u tekstu u kombinaciji sa terapijskim sredstvom koje je sposobno da pospeši proliferaciju hematopoeznih matičnih ćelija in vivo, in vitro, ili ex vivo (na primer, mali molekul, antitelo, ili slično) i opciono barem jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent ili nosač. Pod terapijski sposobnim pospešivanjem proliferacije hematopoeznih matičnih ćelija se podrazumeva: antitelo agonist protiv TPO receptora (na primer, VB22B sc(Fv)2 kao što je detaljno opisano u objavi prijave patenta WO 2007/145227, i slično); citokin kao što je SCF, IL-6, Flt-3 ligand, TPO ili TPO mimetik (na primer, kao što je opisano u WO/2007/022269;
WO/2007/009120; WO/2004/054515; WO/2003/103686; WO/2002/085343;
WO/2002/049413; WO/2001/089457; WO/2001/039773; WO/2001/034585;
WO/2001/021180; WO/2001/021180; WO/2001/017349; WO/2000/066112;
WO/2000/035446; WO/2000/028987; WO/2008/028645; i slično); faktor stimulacije kolonije granulocita (G-CSF); faktor stimulacije kolonije makrofaga granulita (GM-CSF); prostaglandin ili agonist receptora prostaglandina (na primer, prostaglandin E2 receptor-1 (EP-1) agonist, prostaglandin E2 receptor-2 (EP-2) agonist, prostaglandin E2 receptor-3 (EP-3) agonist i prostaglandin E2 receptor-4 (EP-4) agonisti, kao što je detaljno objašnjeno u objavi patenta WO/2008/073748); tetraetilenpentamin (TEPA); Notch-ligandi (Delta-1); i/ili WNT agonist. Pored toga, kultivisanje matičnih ćelija mezenhimnim matičnim ćelijama (MSC-ovi) sprečava bolest implanta u odnosu na domaćina (GVHD) i može pospešiti ekspanziju matične ćelije. Mezenhimne matične ćelije i matične ćelije mogu biti transplantirane kao cela kultura.
[00124] Pod farmaceutski prihvatljivim se misli na materijal koji nije biološki ili na drugi način nepoželjan, tj. materijal je moguće isporučiti subjektu ili ćeliji, a da se ne prouzrokuju neželjena biološka dejstva ili interakcija na način koji će biti štetan sa drugim komponentama farmaceutske supstance u kojoj je sadržan. Nosač ili ekscipijent se bira da bi se svela na minimum razgradnja aktivnog sastojka i da bi se sveli na minimum neželjeni prateći efekti kod subjekta ili ćelije.
[00125] Supstance se formulišu na bilo koji uobičajen način za upotrebu u ovde opisanim postupcima. Isporuka je preko bilo koje putanje poznate kao delotvorne prosečnom stručnjaku u ovoj oblasti. Na primer, supstanca se isporučuje oralno, parenteralno (npr. intravenozno), intramuskularnom injekcijom, intraperitonealnom injekcijom, transdermalno, ekstrakorporalno, intranazalno ili topikalno.
[00126] Preporučeni postupak isporuke je intravenozna infuzija. Broj transfuzionisanih ćelija će uzeti u obzir činioce kao što je pol, starost, težina, tipovi bolesti ili poremećaja, stadijum poremećaja, procenat željenih ćelija u populaciji ćelije i količina ćelija potrebnih da se proizvede terapijsko poboljšanje. U jednom specifičnom primeru, supstanca koja se isporučuje intravenoznom infuzijom i obuhvata barem 10<4>ćelija/kg, od 10<5>do 5,10<7>ćelija/kg ili više ako je potrebno. U jednom specifičnom primeru, infuzirane ćelije su sve koje se izvode iz ekspandiranih ćelija krvi pupčane vrpce od jednog rođenja.
[00127] Farmaceutski prihvatljiv nosač za infuziju supstance koja obuhvata ćelije u pacijenta koji obično sadrži puferisani fiziološki rastvor sa 5% HSA ili nesuplementiranu bazalnu podlogu ili podlogu kako je poznata u ovoj oblasti.
[00128] Za oralnu isporuku, supstance imaju oblik, na primer, tableta ili kapsula pripremljenih uobičajenim sredstvima sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijentima kao što su sredstva za vezivanje (npr. preželatinizirani kukuruzni skrob, polivinilpirolidon ili hidroksipropil metilceluloza); punioci (npr. laktoza, mikrokristalna celuloza ili kalcijum vodonik fosfat); lubrikansi (npr. magnezijum stearat, talk ili silika); sredstva za dezintegraciju (npr. krompirov skrob ili natrijum skrob glikolat); ili sredstva ovlaživanja (npr. natrijum lauril sulfat). Tablete su obložene postupcima dobro poznatim u ovoj oblasti. Tečni preparati za oralnu isporuku imaju oblik, na primer, rastvora, sirupa ili suspenzija, ili mogu biti predstavljeni kao suvi proizvod za konstituisanje sa vodom ili drugim pogodnim pomoćnim farmaceutskim sredstvom pre upotrebe. Takvi tečni preparati se dobijaju uobičajenim sredstvima sa farmaceutski prihvatljivim aditivima kao što su agensi suspenzije (npr. sorbitol sirup, derivati celuloze ili hidrogenisane jestive masnoće); agensi emulzifikacije (npr. lecitin ili akacija); nevodena pomoćna sredstva (npr. bademovo ulje, uljni estri, etil alkohol ili frakcionisana biljna ulja); i konzervansi (npr. metil ili propil-p-hidroksibenzoati ili sorbinska kiselina). Preparati opciono sadrže puferske soli, agense aromatizacije, bojenja i zaslađivanja kako je prikladno.
[00129] Supstance se formulišu za parenteralnu isporuku ubrizgavanjem, npr. bolusnom injekcijom ili kontinualnom infuzijom. Formulacije za injekciju su predstavljene u obliku jedinične doze, npr. u ampulama ili u višedoznim posudama, sa ili bez dodatog konzervansa. Supstance uzimaju takve oblike kao što su suspenzije, rastvori ili emulzije u ulju ili vodenim pomoćnim sredstvima, i mogu sadržati formulatorne agense kao što su agensi suspendovanja, stabilizovanja i/ili dispergovanja. Alternativno, aktivni sastojak je u obliku praha za pravljenje sa pogodnim pomoćnim farmaceutskim sredstvom, npr. sterilnom vodom bez pirogena, pre upotrebe. Generalno, voda, pogodno ulje, slani rastvor, vodena dekstroza (glukoza), i srodni šećerni rastvori i glikoli kao što je propilenglikol ili polietilen glikoli su pogodni nosači za parenteralne rastvore. Rastvori za parenteralnu isporuku sadrže, na primer, so rastvorljivu u vodi od aktivnog sastojka, pogodne agense stabilizacije i, ako je neophodno, puferske supstance. Agensi antioksidacije kao što je natrijum bisulfat, natrijum sulfit ili askorbinska kiselina, bilo sami ili kombinovano, su pogodni za stabilizacione agense.
Takođe, opciono se koriste limunska kiselina i njene soli i natrijum etilendiamin tetrasirćetna kiselina (EDTA). Pored toga, parenteralni rastvori opciono sadrže konzervanse kao što je benzalkonijum hlorid, metil ili propil paraben i hlorbutanol. Pogodni farmaceutski nosači su opisani u priručniku kompanije Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21. izdanje, David B. Troy, ed., Lippikott Williams & Wilkins (2005), koja je ugrađena kao referenca u celosti barem za materijal koji se odnosi na farmaceutske nosače i supstance.
[00130] Supstance se opciono formulišu kao depo preparat. Takve dugotrajne formulacije se opciono isporučuju implantiranjem. Dakle, na primer, supstance se formulišu sa pogodnim polimernim ili hidrofobnim materijalima (na primer kao emulzija u pogodnom ulju) ili jonoizmenjivačke smole, ili kao teško rastvorljivi derivati, na primer, kao teško rastvorljiva so. Supstance se nanose na ili se ugrađuju sa implantima istovremeno sa ili posle hirurškog implanta.
[00131] Pored toga, standardni farmaceutski postupci se koriste da bi se kontrolisalo tajanje aktivnosti. Ovi obuhvataju preparate za kontrolisano otpuštanje i odgovarajuće makromolekule, na primer, polimere, poliestre, poliamino kiseline, polivinil, pirolidon, etilenvinilacetat, metil celulozu, karboksimetil celulozu ili protamin sulfat. Koncentracija makromolekula kao i postupci inkorporiranja su prilagođeni da bi se kontrolisalo otpuštanje. Opciono, agens je ugrađen u čestice polimerskih materijala kao što su poliestri, poliamino kiseline, hidrogelovi, poli(laktinska kiselina) ili etilenvinilacetat kopolimeri. Pored toga što postoji mogućnost inkorporiranja, ovi agensi se opciono koriste da uhvate jedinjenje u mikrokapsule.
[00132] Supstanca za upotrebu u ovde opisanim postupcima je opciono formulisana kao zadržana formulacija i/ili formulacija sa vremenskim otpuštanjem. Takve zadržane formulacije i/ili formulacije sa vremenskim otpuštanjem se prave pomoću sredstava za zadržano otpuštanje ili uređaja za isporuku sa zadržanim otpuštanjem dobro poznatim prosečnom stručnjaku u ovoj oblasti. Supstance se koriste da bi se obezbedilo sporo ili zadržano otpuštanje jednog ili više aktivnih sastojaka korišćenjem, na primer, hidropropilmetil celuloze, drugih polimernih matrica, gelova, propusnih membrana, osmotskih sistema, višeslojnih obloga, mikročestica, lipozoma, mikrosfera ili njihove kombinacije da bi se obezbedio željeni profil otpuštanja u različitim proporcijama. Pogodne formulacije sa zadržanim otpuštanjem se biraju za upotrebu sa ovde opisanim supstancama. Dakle, koriste se jedinični oblici doze pogodni za oralnu isporuku, kao što je, ali bez ograničenja na, tablete, kapsule, gelkape, kaplete, praškaste materije koji su prilagođeni za zadržano otpuštanje.
[00133] Supstance se opciono isporučuju putem sistema sa kontrolisanim otpuštanjem. Na primer, supstanca se isporučuje korišćenjem intravenozne infuzije, implantibilnom osmotskom pumpom, lipozoma, ili drugih načina isporuke leka. Sistem kontrolisanog otpuštanja se postavlja u blizinu cilja.
[00134] Opciono, poželjno je isporučiti supstancu lokalno, tj., u područje kom je potrebno lečenje. Na primer, supstanca se isporučuje ubrizgavanjem u koštanu srž duge kosti, na primer. Lokalna isporuka se postiže, na primer, lokalnom infuzijom tokom operacije, topikalnom primenom (npr. u vezi sa obradom rane posle operacije), injekcijom, kateterom, supozitorijom, ili implantom. Implant je od poroznog, neporoznog, ili želatinastog materijala, uključujući membrane, kao što su sialastične membrane, ili vlakna.
[00135] Farmaceutske supstance opisane ovde se isporučuju bilo kojim uobičajenim sredstvima dostupnim za upotrebu u vezi sa farmaceutskim proizvodima, bilo kao individualni terapijski aktivni sastojci ili u kombinaciji sa terapijski aktivnim sastojcima. Oni se opciono isporučuju samostalno, ali će uopšteno biti isporučeni sa farmaceutskim nosačem izabranim na osnovu izabranog načina isporuke leka i standardne farmaceutske prakse.
[00136] Ovde opisana jedinjenja su data u farmaceutski prihvatljivom obliku uključujući farmaceutski prihvatljive soli i njihove derivate. Pojam farmaceutski prihvatljiv oblik se odnosi na supstance koje obuhvataju ovde opisana jedinjenja koja su generalno bezbedna, relativno netoksična i nisu biološki niti na drugi način nepoželjna. Ove supstance opciono obuhvataju farmaceutski prihvatljive nosače ili stabilizatore koji su netoksični za ćeliju ili subjekta koji im je izložen u dozama i koncentracijama koje se koriste. Primeri fiziološki prihvatljivih nosača obuhvataju puferska sredstva kao što je fosfat, citrat, i druge organske kiseline; antioksidanse uključujući askorbinsku kiselinu; malu molekularnu težinu (manje od oko 10 ostataka) polipeptid; proteine, kao što su serum albumin, želatin, ili imunoglobulini; hidrofilne polimere kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline kao što je glicin, glutamin, asparagin, arginin ili lizin; monosaharide, disaharide, i druge karbohidrate uključujući glukozu, manozu, ili dekstrine; agense helacije kao što je EDTA; šećerne alkohole kao što je manitol ili sorbitol; kontrajone koji formiraju so kao što je natrijum; i/ili nejonske surfaktante kao što je TWEEN™ (Uniqema, Ujedinjeno Kraljevstvo), polietilen glikol (PEG), i PLURONICS™ (BASF, Nemačka).
[00137] Pojam farmaceutski prihvatljive kisele soli i derivati se odnosi na soli i derivate jedinjenja iz Formule I opisane ovde koji zadržavaju biološku delotvornost i svojstva kao što je opisano, i koji nisu biološki ili drugačije nepoželjni. Farmaceutski prihvatljive soli se formiraju, na primer, sa neorganskim solima kao što je hlorovodonična kiselina, brom vodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina i slične, i organske kiseline kao što je sirćetna kiselina, propionska kiselina glikolna kiselina, piruvinska kiselina, oksalna kiselina, maleinska kiselina, malonska kiselina, sukcinska kiselina, fumarna kiselina, tartarna kiselina, limunska kiselina, benzojeva kiselina, cinaminska kiselina, mandelinska kiselina, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, p-toluensulfonska kiselina, salicilna kiselina, i slično.
[00138] Hemijska pogodnost supstance koja obuhvata jedinjenje iz Formule I ili njene farmaceutski prihvatljive soli ili estra je pospešena postupcima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, estar alkanoinske kiseline polietoksilisanog sorbitola (polisorbat) se dodaje supstanci koja sadrži jedinjenje iz Formule I u količini delotvornoj da se pospeši hemijska stabilnost jedinjenja.
[00139] Podaci dobijeni iz ogleda kulture ćelija i studija na životinjama se opciono koriste za formulisanje opsega doze za upotrebu kod ljudi. Doza takvih jedinjenja leži poželjno unutar opsega koncentracija koje cirkulišu koje uključuju malu toksičnost ili nemaju nikakvu toksičnost. Doza varira unutar ovog opsega zavisno od korišćenog oblika doze i korišćene rute isporuke leka. Za bilo koje jedinjenje korišćeno u datim postupcima, terapijski delotvorna doza je procenjena na početku iz ogleda kulture ćelija.
[00140] Ovde je takođe opisano pakovanje ili komplet koji obuhvata jednu ili više posuda sa jednim ili više sastojaka opisanih ovde. Takvi kompleti opciono obuhvataju rastvore i puferska sredstva zavisno od potrebe ili želje. Komplet opciono obuhvata ekspandiranu populaciju matičnih ćelija napravljenih postupcima opisanim gore u tekstu ili mogu sadržati posude ili supstance za pravljenje ekspandirane populacije hematopoeznih matičnih ćelija. Specifično, ovaj opis obezbeđuje komplet za ekspandiranje ex vivo hematopoeznih matičnih ćelija, koji sadrži jedinjenje kako je definisano u Kratkom opisu pronalaska i uputstvima za upotrebu takvog jedinjenja u postupku za ekspresiju hematopoezne matične ćelije i, opciono, jedan ili više citokina ili faktora rasta, ili podloga za rast ćelije, posebno podloga za rast hematopoezne matične ćelije kako je opisano gore u tekstu. Ovaj komplet može još da obuhvati antitela za nadgledanu proizvodnju ćelija, kao što su anti-CD34, anti-CD133, anti-CD38, anti-CD45RA i/ili anti-Thy1 antitela. U jednom specifičnom primeru, takav komplet još obuhvata i jedan ili više citokina i faktora rasta izabranih iz grupe koja obuhvata IL6, FLT3-L, SCF i TPO. Opciono povezano sa takvim pakovanjem(ima) ili kompletom(ima) su uputstva za upotrebu.
[00141] Takođe je opisan komplet za obezbeđivanje delotvorne količine jedinjenja iz ovog opisa da bi se povećale hematopoezne matične ćelije kod subjekta koji obuhvata jednu ili više doza jedinjenja za upotrebu tokom nekog vremenskog perioda, pri čemu je ukupan broj doza tog jedinjenja iz ovog opisa jednak delotvornoj količini dovoljnoj da se povećaju hematopoezne matične ćelije kod subjekta. Ovaj period vremena iznosi od oko jednog do nekoliko dana ili nedelja ili meseci. Dakle, period vremena je od barem oko 5, 6, 7, 8, 10, 12, 14, 20, 21, 30 ili 60 dana ili više ili bilo koji broj dana između jednog i 90.
Postupci za pravljenje jedinjenja iz ovog opisa
[00142] Ovaj opis takođe obuhvata postupke za dobijanje ovde opisanih jedinjenja. U opisanim reakcijama, može biti neophodno da se štite reaktivne funkcionalne grupe, na primer hidroksi, amino, imino, tio ili karboksi grupe, pri čemu su ove grupe poželjne u finalnom proizvodu, da bi se izbeglo neželjeno učešće u reakcijama. Uobičajene zaštitne grupe moguće je koristiti u skladu sa standardnom praksom, na primer videti T.W. Greene i P. G. M. Wuts u "Protective Groups u Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1991.
[00143] Sledeće šeme reakcije 1-5 detaljno opisuju dobijanje jedinjenja iz ovog opisa.
Stručnjak u ovoj oblasti će shvatiti da, posle uvođenja postupaka detaljno opisanih dole u tekstu, bilo koja od grupa R1, R2, R3, R4, i L1 može opciono da bude dodatno elaborirana poznatim transformacijama da bi se došlo do željenih finalnih jedinjenja iz Formule I.
[00144] Jedinjenja iz Formule I moguće je pripremiti prema sledećoj Šemi reakcije 1:
[00145] u kojoj su G1, G2, G3, G4, R1, R2 i R4 kao što je definisano za Formulu I u Kratkom opisu pronalaska i L iz Formule I je definisana u šemi reakcije kao -NH-L1- što je ekvivalent sa, na primer, -NR5a(CH2)0-3- gde je R5a vodonik i -(CH2)0-3- je L1.
[00146] Jedinjenja iz Formule I moguće je pripremiti reagovanjem jedinjenja iz Formule 2 sa jedinjenjem iz Formule 3 u prisustvu pogodnog katalizatora (npr. Pd2(dba)3, ili slično) u prisustvu odgovarajućeg liganda (npr.1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil) imidazolium hlorid), pogodne baze (npr. Cs2CO3, ili slično) i odgovarajućeg rastvarača (npr.1,4-dioksan) na temperaturi od oko 80 do 100 °C tokom 2 do oko 48 sati. Jedinjenja iz Formule 2 je moguće pripremiti reagovanjem jedinjenja iz Formule 4 sa malim viškom jedinjenja amina iz Formule 5 u odgovarajućem rastvaraču (npr. izopropanol) na temperaturi približnoj sobnoj temperaturi do oko 80 °C. Jedinjenja iz Formule 4 moguće je pripremiti alkilacijom jedinjenja iz Formule 6 sa pogodnim agensom 7 alkilacije, u kom X1 jeste hlor, brom, jod, ili estar sulfonata, u prisustvu pogodne baze (npr. natrijum hidrida ili kalijum karbonata), u pogodnom rastvaraču (npr. DMF), na temperaturi od oko 0 °C do oko 80 °C. Alternativno, reakciju je moguće izvesti pod Mitsunobu-ovim uslovima koristeći pogodan alkohol R4-OH u prisustvu pogodnog fosfina (npr. trifenilfosfina) i azodikarboksilata (npr. dietilazodikarboksilata), u inertnom rastvaraču kao što je THF ili toluen, na temperaturi od oko 0 °C do oko sobne temperature.
[00147]
[00148] Jedinjenja iz Formule Ia, u kojoj G1 jeste CR3 i u kojoj su sve druge G grupe N, mogu lako biti pripremljena preradom kao u sledećoj Šemi reakcije 2:
[00149] u kojoj su R1, R2, R3 i R4 kao što je definisano za Formulu I u Kratkom opisu pronalaska i L iz Formule I je definisano u šemi reakcije kao -NH-L1- što je ekvivalentno sa, na primer, -NR5a(CH2)0-3- pri čemu je R5a vodonik i -(CH2)0-3- je L1.
[00150] Jedinjenja iz Formule I moguće je pripremiti dovođenjem u reakciju jedinjenja iz Formule 8 sa jedinjenjem amina iz Formule 5 u odgovarajućem rastvaraču (npr. izopropanol) na temperaturi približnoj sobnoj temperaturi do oko 100 °C. Jedinjenja iz Formule 8 mogu biti pripremljena dovođenjem u reakciju jedinjenja iz Formule 9 sa jedinjenjem iz Formule 3 u prisustvu pogodnog katalizatora (npr. Pd(Ph3P)4, Pd2(dba)3, ili sličnog), opciono u prisustvu odgovarajućeg liganda (npr.1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil) imidazolium hlorid), pogodne baze (npr. Cs2CO3, ili sličnog) i odgovarajućeg rastvarača (npr.1,4-dioksanu) na temperaturi od oko 80 do 100 °C tokom 2 do oko 48 sati. Jedinjenja iz Formule 9 je moguće pripremiti dovođenjem u reakciju jedinjenja iz Formule 10 sa mešavinom di-jodometana, bakar(I) jodida, i alkil nitrita (npr. izoamilnitrit), opciono u prisustvu inertnog rastvarača, na temperaturi od oko 50 do 100 °C. Jedinjenja iz Formule 10 moguće je pripremiti alkilacijom nekog jedinjenja iz Formule 11 sa pogodnim sredstvom 7 alkilacije, u kom X1 jeste hlor, brom, jod, ili sulfonat estar, u prisustvu pogodne baze (npr. natrijum hidrid ili kalijum karbonat), u pogodnom rastvaraču (npr. DMF), na temperaturi od oko 0 °C do oko 80 °C. Alternativno, reakciju je moguće izvesti pod Mitsunobu-ovim uslovima korišćenjem pogodnog alkohol R4-OH u prisustvu pogodnog fosfina (npr. trifenilfosfina) i azodikarboksilata (npr. dietilazodikarboksilata), u inertnom rastvaraču kao što je THF ili toluen, na temperaturi od oko 0 °C do oko sobne temperature.
[00151] Jedinjenja iz Formule II, koja su podskup jedinjenja iz Formule I u kojoj je R1 na N-povezan heterociklil ili na N-povezan heteroaril, moguće je pripremiti kao što je detaljno prikazano u sledećoj Šemi reakcije 3:
[00152] G1, G2, G3, G4, R1, R2 i R4 su kao što je definisano za Formulu I u Kratkom opisu pronalaska, a L iz Formule I je definisano u šemi reakcije kao -NH-L1- što je ekvivalentno sa, na primer, -NR5a(CH2)0-3- pri čemu je R5a vodonik i -(CH2)0-3- je L1. Jedinjenja iz Formule II moguće je pripremiti dovođenjem u reakciju jedinjenja iz Formule 2 sa jedinjenjem iz Formule 20 u prisustvu viška cikličnog amina ili heterocikla koji nosi NH (na primer, supstituisani pirazol, supstituisani imidazol, i slično), na temperaturi od oko 50 °C do oko 250 °C, tokom oko 1 do oko 24 sata, opciono u prisustvu baze kao što je natrijum hidrid ili DBU.
[00153] Jedinjenja iz Formule 10 u kojoj G1 jeste CR3, i u kojoj sve druge G grupe jesu N, mogu takođe da budu pripremljeni preradom kao u sledećoj Šemi reakcije 4:
Šema reakcije 4
[00154] u kojoj su R3 i R4 kao što je definisano za Formulu I u Kratkom opisu pronalaska. Jedinjenja iz Formule 10 moguće je pripremiti prema postupcima opisanim u J. Med. Chem, 1972, 456, i J. Med. Chem., 1992, 4180. Jedinjenje ortoestra iz Formule 21 je dovedeno u reakciju sa jedinjenjem iz Formule 22, opciono u prisustvu kiseline kao što je sirćetna kiselina, na temperaturi približnoj sobnoj temperaturi do oko 150 °C, tokom oko 1 do oko 24 sata. Jedinjenje iz Formule 22 moguće je pripremiti dovođenjem u reakciju jedinjenja iz Formule 23 sa primarnim jedinjenjem amina iz Formule 24, opciono u prisustvu kiseline kao što je pTSA, ili baze kao što je trietilamin ili DBU, na temperaturi od oko 50 do oko 200 °C.
[00155] Jedinjenja iz Formule IV moguće je pripremiti kao što je detaljno opisano u sledećoj Šemi reakcije 5:
Šema reakcije 5
[00156] u kojoj su G1, G2, G3, G4, R1 i R2 kao što je definisano u Formuli I u Kratkom opisu pronalaska, a L iz Formule I je definisano u šemi reakcije kao -NH-L1- što je ekvivalentno sa, na primer, -NR5a(CH2)0-3- pri čemu je R5a vodonik i -(CH2)0-3- je L1. R20 i R21 su nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila. Jedinjenje iz Formule IV, u kojoj je R21 vodonik, moguće je pripremiti iz jedinjenja iz Formule III tretiranjem sa pogodnim agensom redukcije kao što je litijum aluminijum hidrid ili di-izobutil aluminijum hidrid, u pogodnom rastvaraču kao što je THF ili toluen, na temperaturi od oko -78°C do oko 50°C. Reakciji treba oko 0,5 do oko 16 sati da bi bila završena. Jedinjenje iz Formule IV, u kojoj je R21 niži alkil, moguće je pripremiti tretiranjem jedinjenja iz Formule III sa alkil litijumom ili Grinjarovim reagensom, u pogodnom rastvaraču kao što je etar ili tetrahidrofuran, na temperaturi od oko -78°C do oko 50°C. Reakciji treba oko 0,5 do oko 16 sati da bi bila završena.
[00157] Detaljni primeri sinteze jedinjenja iz Formule I moguće je pronaći u Primerima, infra.
Dodatni procesi za pravljenje jedinjenja iz ovog opisa
[00158] Jedinjenje iz ovog opisa je moguće pripremiti kao farmaceutsku so sa dodatom kiselinom dovođenjem u reakciju oblika slobodne baze jedinjenja sa farmaceutski prihvatljivom neorganskom ili organskom kiselinom. Alternativno, farmaceutski prihvatljiva so sa dodatom bazom nekog jedinjenja iz ovog opisa moguće je dobiti dovođenjem u reakciju oblika slobodne kiseline jedinjenja sa farmaceutski prihvatljivom neorganskom ili organskom bazom. Alternativno, oblike soli jedinjenja iz ovog opisa moguće je pripremiti korišćenjem soli početnih materijala i intermedijara.
[00162] Na primer, oblici soli 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (Primer 1, infra) su bili sintetisani kao u nastavku:
[00163] Mezilatna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) je rastvorena u 12 ml acetonu na 50 °C. Metanesulfonska kiselina (0,137 g; 1,40 mmola) je dodata ukapavanjem. Kristalizacija se odvija brzo. Bela suspenzija je ostavljena da se hladi tokom oko 30 minuta sa hlađenjem na sobnoj temperaturi. Emulzija je mešana tokom 18 sati na sobnoj temperaturi i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana acetonom (6 ml) u tri dela i sušena tokom oko 3 sata na 50°C/oko 10 mbar i zatim tokom 16 sati na 80°C/oko 10 mbar. Materijal ima tačku topljenja na oko 233 °C sa entalpijom topljenja od 98g/J. Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak tokom sušenja od 0,2%. Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata. Primećena je apsorpcija vode od 0,4%.
[00164] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje mezilatnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje mezilatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,4, 6,7, 18,3, 18,6, 26,9; i koji u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,4, 6,7, 10,3, 12,9, 16,4, 18,3, 25,8, 26,5, 26,9.
[00165] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje mezilatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 3 ovde.
[00166] Tozilatna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) je rastvorena u 12 ml na 50 °C. Rastvor monohidrata para-toluenesulfonske kiseline (0,271g; 1,40 mmola) u acetonu (1,2 ml) je dodat ukapavanjem. Rastvor je zasejan na 50 °C i kristalizacija se odvija brzo. Suspenzija je ostavljena da se hladi tokom oko 30 minuta na sobnoj temperaturi i mešana je tokom 18 sati. Posle filtracije čvrsta supstanca je oprana acetonom (6 ml) u tri dela i osušena prvo tokom oko 3 sata na 50 °C/oko 10 mbar i zatim tokom 16 sati na 80 °C/oko 10 mbar. Materijal ima tačku topljenja na oko 233°C sa entalpijom topljenja od 88g/J. Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak pri sušenju od 0,2%. Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata. Primećena je apsorpcija vode od 0,4%.
[00164] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje tozilatnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje tozilatnu so od jedinjenja iz Primera 1 koja obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,2, 13,3, 16,7, 19,5, 25,4; i koje u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha: 6,2, 7,6, 12,4, 13,3, 15,1, 16,7, 17,7, 19,5, 20,2, 24,6, 24,9, 25,4, 25,6.
[00165] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje tozilatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 4 ovde.
[00166] Sulfatna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) je rastvorena u 10 ml acetona i 1 ml vode na oko 55°C. Rastvor sumporne kiseline (0,280g; 2,79 mmola) u 1 ml vode je dodat ukapavanjem.
Kristalizacija se odvija brzo. Suspenzija je ostavljena da se ohladi tokom 30 minuta sa hlađenjem na sobnoj temperaturi, mešana tokom 18 sati i filtrirana. Filter pogača je oprana sa 6 ml acetona u tri dela i osušena prvo tokom oko 3 sata na 50 °C/oko 10 mbar i zatim tokom oko 16 sati na 80 °C/oko 10 mbar. Materijal ima tačku topljenja na oko 224°C sa entalpijom topljenja od 91g/J. Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak pri sušenju ispod 0,05%.
Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata. Primećena je apsorpcija vode od 0,2%.
[00167] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje sulfatnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje sulfatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,5, 6,8, 10,7, 13,5, 26,4, 27,6; i koji u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,5, 6,8, 10,7, 13,1, 13,5, 18,6, 18,8, 20,8, 26,4, 27,1, 27,6.
[00168] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje sulfatnu so jedinjenja iz Primera 1 sa obrascem rendgenske difrakcije praha prikazanim na Slici 6 ovde.
[00169] Ezilatna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) je rastvorena u 12 ml acetona na 50°C. Etansulfonska kiselina (0,155g; 1,40 mmola) je dodata ukapavanjem. Kristalizacija se odvija brzo. Bela suspenzija dobijena kao rezultat je ostavljena da se hladi tokom oko 30 minuta na sobnoj temperaturi. Suspenzija je mešana tokom oko 18 sati na sobnoj temperaturi i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana sa 6 ml acetona u tri dela i osušena prvo tokom oko 3 sata na 50 °C/oko 10 mbar i zatim tokom oko 16 sati na 80 °C/oko 10 mbar. Materijal ima tačku topljenja na oko 231°C sa entalpijom topljenja od 76g/J. Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak pri sušenju od 0,6%. Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata. Primećena je apsorpcija vode od 0,05%.
[00170] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje ezilatnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje ezilatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,3, 9,9, 18,4, 25,3, 26,1; i koja u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,3, 9,9, 17,1, 17,9, 18,4, 19,0, 22,0, 25,3, 26,1, 27,1.
[00171] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje ezilatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 8 ovde.
[00172] Hidrobromidna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) se rastvara u 6 ml DMF na 65°C. Hidrobromna kiselina 48% (0,235g; 1,40 mmola) se dodaje ukapavanjem. Rastvor je ostavljen da se hladi tokom oko 30 minuta na sobnoj temperaturi. Semena su dodata na 55°C i kristalizacija se odvijala polako. Suspenzija je mešana tokom oko 18 sati na sobnoj temperaturi i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana sa 4 ml DMF/vode 1:1 i 6 ml vode. So se suši prvo tokom oko 3 sata na 50 °C/oko 10 mbar i zatim tokom 16 sati na 80 °C/oko 10 mbar. Materijal ima tačku topljenja na oko 285°C sa entalpijom topljenja od 119 g/J.
Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak pri sušenju od 1,0%. Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata. Nije primećena nikakva apsorpcija vode.
[00173] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 7,0, 25,9, 26,8, 27,9; i koja u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 7,0, 11,4, 13,3, 21,4, 23,4, 25,9, 26,4, 26,8, 27,9.
[00174] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje hidrobromidnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 9 ovde.
[00175] Orotatna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) i orotična kiselina (0,222g; 1,40 mmola) su rastvoreni u 7,8 ml NMP (1-metil-2-pirolidon) na 85°C. Rastvor je ohlađen do 60 °C i 6 ml vode je dodato ukapavanjem tokom oko 5 minuta. Bela suspenzija dobijena kao rezultat je ostavljena da se ohladi tokom oko 30 minuta do sobne temperature i mešana je tokom 18 sati. Posle filtracije filter pogača je oprana sa 4 ml NMP/vode 1:1 u dva dela i 6 ml vode u tri dela. Čvrsta supstanca je sušena prvo tokom oko 3 sata na 50 °C/oko 10 mbar i zatim tokom 16 sati na 80 °C/oko 10 mbar. Materijal ima tačku topljenja na oko 240°C sa entalpijom topljenja od 130g/J. Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak pri sušenju ispod 0,05%.
Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata. Primećena je apsorpcija vode od 1,7%.
[00176] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje orotatnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje orotatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 7,1, 16,3, 19,2, 23,5, 25,6, 26,9; i koja u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 7,1, 14,4, 16,3, 18,6, 19,2, 21,7, 23,0, 23,5, 25,6, 26,9, 28,7.
[00177] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje orotatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 10 ovde.
[00178] Polufumaratna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) je rastvorena u 18 ml metanola na 65°C. Fumarna kiselina (0,164g; 1,40 mmola) i 6 ml metanola su dodati. Rastvor je ostavljen da se hladi tokom oko 30 minuta na sobnoj temperaturi. Neka semena kristala su dodata na 60°C i kristalizacija se odvija lagano. Suspenzija je mešana tokom 18 sati na sobnoj temperaturi i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana sa 6 ml metanola u tri dela i osušena prvo tokom oko 3 sata na 50 °C/oko 10 mbar i zatim tokom 16 sati na 80 °C/oko 10 mbar.
Materijal ima tačku topljenja na oko 232°C sa entalpijom topljenja od 83g/J. Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak pri sušenju ispod 0,05%. Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata.
Primećena je apsorpcija vode od 0,3%.
[00179] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje polufumaratnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje polufumaratnu so jedinjenja iz Primera 1, koja obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 7,2, 8,7, 14,4, 15,8, 17,4, 19,0, 23,7; i koja u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 7,2, 8,7, 10,8, 14,4, 15,8, 17,4, 17,8, 19,0, 20,1, 23,7, 27,5.
[00180] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje polufumaratnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 11 ovde.
[00181] Bezilatna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) je rastvorena u 12 ml acetona na 50 °C. Rastvor benzensulfonske kiseline (0,225g; 2,79 mmola) u 1,2 ml acetona je dodat ukapavanjem. Seme kristala je dodato na 48°C i kristalizacija se odvija polako. Suspenzija je ostavljena da se ohladi tokom oko 30 minuta na sobnoj temperaturi. Emulzija je mešana tokom oko 18 sati na sobnoj temperature i filtrirana. So je oprana sa 6 ml acetona u tri dela i osušena prvo tokom oko 3 sata na 50 °C/oko 10 mbar i zatim tokom 16 sati na 80 °C/oko 10 mbar.
Materijal ima tačku topljenja na oko 219°C sa entalpijom topljenja od 92g/J. Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak pri sušenju od 0,3%. Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata.
Primećena je apsorpcija vode od oko 0,05%.
[00182] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje bezilatnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje bezilatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,2, 7,7, 17,7, 25,5; i koji u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,2, 7,7, 15,2, 16,7, 17,1, 17,7, 19,8, 20,2, 24,9, 25,2, 25,5.
[00183] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje bezilatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 7 ovde.
[00184] Napadisilatna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) i 0,259 g 1,5-naftalendisulfonska kiselina (0,70 mmola) su rastvoreni u 9 ml DMF na 87°C. Bistar rastvor je ostavljen da se hladi tokom oko 30 minuta na sobnoj temperaturi. Semena su dodata na 65°C i kristalizacija se odvijala polako. Suspenzija je mešana tokom oko 18 sati na sobnoj temperaturi i filtrirana. Čvrsta supstanca je oprana sa 4 ml DMF/vodi 1:1 u dva dela i 6 ml vode u tri dela. So je sušena prvo tokom oko 3 sata na 50 °C/oko 10 mbar i zatim tokom 16 sati na 80 °C/oko 10 mbar. Materijal ima tačku topljenja na oko 304°C sa entalpijom topljenja od 83g/J. Širok endotermni fenomen je primećen na 107°C koji je moguće pripisati gubitku vode.
Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak pri sušenju od 6,1%. Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata.
Primećena je apsorpcija vode manja od 0,05%.
[00185] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje napadisilatnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje napadisilatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,4, 9,6, 13,1, 15,7, 16,1, 26,0; i koja u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 9,6, 13,1, 15,7, 16,1, 16,4, 20,4, 20,9, 23,7, 26,0, 26,9.
[00186] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje napadisilatnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 12 ovde.
[00187] Hidrohloridna so: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol slobodna baza (0,60g; 1,40 mmola) je rastvorena u 12 ml acetona na 55°C. Hlorovodonična kiselina 37% (0,138g; 1,40 mmola) je dodata ukapavanjem. Kristalizacija se odvija brzo. Bela suspenzija je ostavljena da se ohladi tokom oko 30 minuta na sobnoj temperaturi i mešana je tokom 18 sati. Posle filtracije čvrsta supstanca je oprana acetonom 6 ml u tri dela i osušena prvo tokom oko 3 sata na 50 °C/oko 10 mbar i zatim tokom 16 sati na 80 °C/oko 10 mbar. Materijal koji ispoljava egzotermnu pojavu na oko 162°C sa entalpijom od -13,8J/g. Ovu pojavu bi bilo moguće pripisati transformaciji čvrste supstance u stabilniju modifikaciju. Endotermna pojava se zatim vidi na oko 259 °C sa entalpijom od 99,7J/g. Proizvedeni materijal je ispoljio gubitak pri sušenju od 0,6%. Apsorpcija vode je procenjena termogravimetrijski posle izlaganja relativnoj vlažnosti (80% rel.vl.) tokom 24 sata.
Primećena je apsorpcija vode od 0,3%.
[00188] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje hidrohloridnu so jedinjenja iz Primera 1. U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje hidrohloridnu so jedinjenja iz Primera 1 koja obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,1, 7,0, 19,8, 26,1; i koja u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 6,1, 7,0, 18,1, 19,8, 24,7, 26,1, 27,0, 27,7.
[00189] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje hidrohloridnu so jedinjenja iz Primera 1 koja ima obrazac rendgenske difrakcije praha prikazan na Slici 5 ovde.
[00190] Oblici slobodne kiseline ili oblici slobodne baze formiraju jedinjenja iz ovog opisa moguće je pripremiti iz odgovarajućeg oblika soli dodate baze ili soli dodate kiseline, prema opisanom redosledu. Na primer jedinjenje iz ovog opisa u obliku soli sa dodatom kiselinom može biti pretvoreno u odgovarajuću slobodnu bazu tretiranjem sa pogodnom bazom (npr. rastvor amonijak hidroksida, natrijum hidroksida, i slično). Jedinjenje iz ovog opisa u obliku soli sa dodatom bazom može biti pretvoreno u odgovarajuću slobodnu kiselinu tretiranjem sa pogodnom kiselinom (npr. hlorovodonična kiselina, itd.). Nitratnu so jedinjenja iz Primera 1 moguće je napraviti korišćenjem postupaka poznatih stručnjaku. Obrazac rendgenske difrakcije praha je prikazan na Slici 2 ovde.
[00191] Jedinjenja iz ovog opisa u neoksidiranom obliku je moguće pripremiti iz N-oksida jedinjenja iz ovog opisa tretiranjem sa redukcionim agensom (npr. sumpor, sumpor dioksid, trifenil fosfin, litijum borohidrid, natrijum borohidrid, fosfor trihlorid, tribromid, ili slični) u pogodnom inertnom organskom rastvaraču (npr. acetonitrilu, etanolu, vodenom rastvoru dioksana, i sličnim) na 0 do 80 °C.
[00192] Derivati proleka jedinjenja iz ovog opisa mogu biti pripremljeni postupcima poznatim prosečnim stručnjacima u ovoj oblasti (npr. za više detalja videti Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol.4, p.1985). Na primer, odgovarajuće prolekove je moguće pripremiti dovođenjem u reakciju nederivatizovanog jedinjenja iz ovog opisa sa pogodnim karbamilacionim agensom (npr.1,1-aciloksialkilkarbanohloridat, para-nitrofenil karbonat, ili slično).
[00193] Zaštićeni derivati jedinjenja iz ovog opisa mogu biti napravljeni na načine poznate prosečnim stručnjacima u ovoj oblasti. Detaljan opis tehnika koje se primenjuju za stvaranje zaštitnih grupa i njihovo uklanjanje moguće je pronaći u T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3. izdanje, John Wiley and Sons, Inc., 1999.
[00194] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu biti prikladno dobijena, ili formirana tokom postupka ovog opisa, kao solvati (npr. hidrati). Hidrati jedinjenja iz ovog opisa mogu biti prikladno pripremljena rekristalizacijom iz mešavine vodenog/organskog rastvarača, korišćenjem organskih rastvarača kao što je dioksin, tetrahidrofuran ili metanol.
[00195] Jedinjenja iz ovog opisa moguće je pripremiti kao njihove individualne stereoizomere reagovanjem racemijske mešavine tog jedinjenja sa optički aktivnim sredstvom za ponovno rastvaranje da bi se formirao par diastereoizomernih jedinjenja, koji odvaja diastereomere i oporavlja optički čiste enantiomere. Iako je ponovno otapanje enantiomera moguće izvesti korišćenjem kovalentnih diastereomernih derivata, prednost se daje rastvorljivim kompleksima (npr. kristalne diastereomerne soli). Diastereomeri imaju distinktivna fizička svojstva (npr. tačke topljenja, tačke kuvanja, rastvorljivosti, reaktivnost, itd.) i mogu biti lako odvojeni korišćenjem prednosti koje nude ove različitosti.
Diastereomere je moguće odvojiti hromatografski, ili poželjno, tehnikama odvajanja/ponovnog otapanja na osnovu razlika u rastvorljivosti. Zatim se oporavlja optički čist enantiomer, zajedno sa sredstvom za ponovno rastvaranje, praktičnim sredstvima koja ne bi kao rezultat imala racemizaciju. Detaljniji opis primenljivih tehnika za ponovno rastvaranje stereoizomera jedinjenja iz njihove racemijske mešavine moguće je pronaći u radu Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981. Jedinjenja iz ovog opisa moguće je pripremiti kao njihove individualne stereoizomere korišćenjem tehnika hiralne hromatografije, posebno, upotrebom HPLC ili SFC hromatografije korišćenjem hiralne stacionarne faze.
[00196] Spektri rendgenske difrakcije praha kako je ovde dato su dobijeni korišćenjem instrumenta Bruker D8 Vario u transmisionoj geometriji, sa radijacionim CuKα (30 kV, 40 mA), opsegom snimanja 2°-40° (2 teta vrednost), vremenom koraka 90,3 s. Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija (DSC) iz Primera 1 amorfnog materijala je izvedena korišćenjem instrumenta Perkin Elmer DSC7 pri brzini zagrevanja od 40°C/min.
[00197] Ukratko, jedinjenja iz Formule I moguće je napraviti postupkom, koji obuhvata:
(a) one šeme reakcije 1-5; i
(b) opciono pretvaranje jedinjenja iz ovog opisa u farmaceutski prihvatljivu so;
(c) opciono pretvaranje oblika soli jedinjenja iz ovog opisa u oblik koji nije so;
(d) opciono pretvaranje neoksidizovanog oblika jedinjenja iz ovog opisa u farmaceutski prihvatljiv N-oksid;
(e) opciono pretvaranje oblika N-oksida jedinjenja iz ovog opisa u njegov neoksidizovani oblik;
(f) opciono ponovno rastvaranje individualnog izomera jedinjenja iz opisa iz mešavine izomera;
(g) opciono pretvaranje nederivatizovanog jedinjenja iz ovog opisa u farmaceutski prihvatljiv derivat proleka; i
(h) opciono pretvaranje derivata proleka od jedinjenja iz ovog opisa u njegov nederivatizovan oblik.
[00198] U meri u kojoj proizvodnja početnih materijala nije posebno opisana jedinjenja su poznata ili mogu biti pripremljena analogno postupcima poznatim u ovoj oblasti ili kao što je opisano u Primerima ovde dole u tekstu.
[00199] Stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da su gornje transformacije samo predstavnici načina dobijanja jedinjenja iz ovog opisa, i da je druge dobro poznate postupke moguće slično koristiti.
Primeri
[00200] Ovaj opis sadrži i primere, ali ne kao ograničenje, pod sledećim primerima koji ilustruju dobijanje jedinjenja iz Formule I (Primeri) prema ovom opisu.
Primer 1
4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol
[00201] Sinteza 2,6-dihlor-9-izopropil-9H-purina (b): U 2,6-dihlor-9H-purin (a) (6,0 mmol) rastvoren u anhidrovanom DMF (5,0 mL) je lagano dodat natrijum hidrid (7,8 mmol) uz mešanje na sobnoj temperaturi tokom 2 sata.2-jodopropan je dodat i mešavina je mešana tokom 16 sati. Mešavina je koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na stubu na silika gelu, eluiran sa heksanom/EtOAc (20:1 do 3:1) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 8,15 (s, 1H), 4,91 (m, 1H), 1,63 (d, 6H).
[00202] Sinteza 4-(2-(2-hlor-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (c): 2,6-dihlor-9-izopropil-9H-purin (1,1 mmol) je pomešan sa tiraminom (1,16 mmol) rastvoren u i-PrOH (6 ml) i mešavina je mešana tokom noći. Reakciona mešavina je koncentrovana, i ostatak je prečišćen hromatografijom na stubu na silika gelu, eluiranjem sa heksanom/EtOAc (5:1 do 1:2) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta bela supstanca.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3): δ 9,21 (br, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,10 (d, 2H), 6,73 (d, 2H), 4,87 (m, 1H), 4,03 (t, 2H), 3,01 (t, 2H), 1,68 (d, 6H); HRMS (EI) izračunato za C16H18ClN5O (M H<+>) 332,1273, pronađeno 332,1278.
[00203] Sinteza 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (d): Plamenom sušena laboratorijska bočica je napunjena sa 4-(2-(2-hlor-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenolom (0,62 mmol), tianaften-3-boronskom kiselinom (0,94 mmol), pd2(dba)3 (0,062 mmol), Cs2CO3 (1,25 mmol) i 1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil) imidazolijum hloridom (0,125 mmol). Laboratorijska bočica je evakuisana i ponovo napunjena sa N2 i dodat je anhidrovani 1,4-dioksan (2 mL). Laboratorijska bočica je zaptivena i reakciona mešavina je mešana na 80 °C tokom 24 sata. Reakciona mešavina je koncentrovana i prečišćena direktno hromatografijom na stubu na silika gel, eluacijom sa heksanom/EtOAc (20:1 do 1:4) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao žućkasta čvrsta supstanca.
[00204] Alternativno, sintezu iz Primera 1 moguće je izvesti kao u nastavku:
[00205] Sinteza 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-6-hlor-9-izopropil-9H-purina (b): Laboratorijska flašica okruglog dna je napunjena sa 6-hlor-2-jodo-9-izopropil-9H-purinom (pripremljenim u Primeru 15c, 3,31 g, 0,0103 mol), benzo[b]tiofen-3-ilboronskom kiselinom (2,74 g, 0,0154 mol), i tetrakis(trifenilfosfin)paladijumom(0) (1,19 g, 0,0103 mol). U ovu mešavinu je dodat toluen (80 ml), etanol (25 ml) i rastvor vodenog natrijum karbonata (2M, 21 ml).
Laboratorijska flašica je zaptivena i reakciona mešavina je mešana na 90 °C tokom 1 sata. Voda je dodata u ohlađenu mešavinu, koja je ekstrahovana sa etil acetatom. Organske frakcije su kombinovane, osušene iznad natrijum sulfata, i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu, eluacijom sa 20 do 50% EtOAc u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca, koja je rekristalizovana iz 1:1 metanol/voda.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9,15 (d, 1H), 8,85 (s, 2H), 8,17 (d, 1H), 7,62 (t, 1H), 7,53 (t, 1H), 5,06 (m, 1H), 1,71 (d, 6H); MS m/z 329,0 (M 1).
[00206] Sinteza 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-Il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (c): 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-6-hlor-9-izopropil-9H-purin (2,2 g, 0,0067 mol) je držana u suspenziji anhidrovanog 2-propanola (70 mL) u cevi pod pritiskom. Tiramin (1,01 g, 0,0074 mol) je dodat. Cev je zaptivena i zagrejana na 85 °C tokom 16 sati. Dodatni tiramin (0,50 g, 0,0037 mol) je dodat i mešavina je zagrejana na 85 °C tokom 48 sati. Reakcija je koncentrovana. Vodeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat u ostatak, koji je ekstrahovan sa EtOAc. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani, i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu, eluacijom sa 50 do 85%-nim EtOAc u heksanu da bi se dobila čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je triturisana sa metanolom da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca.
[00207] Alternativno, sintezu iz Primera 1 moguće je izvesti kao u nastavku:
[00208] Sinteza 2,6-dihloro-9-izopropil-9H-purina (b): U 2,6-dihlor-9H-purin (a) (998 g, 5,28 mol) rastvoren u anhidrovanom DMF (5,0 L) je dodat natrijum hidrid (60% disperzija, 254 g, 6,35 mol) uz mešanje na 10 °C tokom 1 sata.2-jodopropan (1595 g) je dodat i mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 sata. Voda (5,0 L) je dodata, i talog čvrste supstance dobijen kao rezultat je prikupljen i opran sa vodom (500 ml) i heptanom (2 x 2,5 L). Sirova čvrsta supstanca je kristalizovana iz izopropil acetata (2,1 L) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca.
[00209] Sinteza 4-(2-(2-hloro-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (c): 2,6-dihlor-9-izopropil-9H-purin (500 g) je dodat u delovima u mešavinu tiramina koja vri (593 g), trietilamin (262 g), i i-PrOH (5,0 L) na 50 °C. Mešavina je mešana na toj temperaturi tokom 4 sata, zatim je reakciona mešavina koncentrovana. Ostatak je preuzet u izopropil acetat (6,0 L) i opran je sa 20%-nim rastvorom limunske kiseline (2,0 L) i vode (2,0 L). Organski sloj je koncentrovan do suvoće, zatim je preuzet u etanol (2,0 L) i ponovo koncentrovan do suvoće. Sirova čvrsta supstanca je kristalizovana iz etanola (3,2 L) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca.
[00210] Sinteza 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (d): Mešavina 4-(2-(2-hlor-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol (950 g), tianaften-3-boronske kiseline (561 g), dihlorbis(trifenilfosfin)paladijuma(II) (10,1 g), kalijum karbonata (791 g), vode (3,25 L), i DMA (3,25 L) je mešan pod atmosferom azota tokom 10 min.
Mešavina koja je mešana je zatim zagrevana na 70 °C tokom 14 sati. Etil acetat (6,5 L) i voda (3,25 L) su dodati, i mešavina je filtrirana kroz Celite (125 g) na 50 °C, ispiranjem sa etil acetatom (1,0 L). Slojevi su odvojeni, i vodeni sloj je ekstrahovan na 50 °C sa dodatnim etil acetatom (7,5 L). Kombinovani organski slojevi su oprani sa vodom (3 x 2,5 L), zatim su destilovani da bi se uklonilo oko 2,5 L rastvarača. Tetrahidrofuran (2,5 L) i silika veza tio silika gela (200 g) su dodati. Mešavina je mešana na 70 °C tokom 16 sati, zatim je filtrirana, ispirajući podlogu sa etil acetatom (1,0 L). Kombinovani filtrati su koncentrovani na atmosferskom pritisku do zapremine od oko 5 L, zatim je mešavina ostavljena da se hladi. Čvrsta supstanca dobijena kao rezultat je prikupljena sa etil acetatom (2 x 1,0 L) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova.
[00211] Jedinjenje iz Primera 1 može biti rekristalizovano korišćenjem mešavine toluen/etanola i oprano na sobnoj temperaturi sa NaHCO3 vodenim rastvorom.
[00212] U drugom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz Primera 1 u A modifikaciji kristalnog oblika, pri čemu A modifikacija obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 12,1, 16,9, 18,9, 21,3; i koji u dodatnom izvođenju obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 12,1, 15,9, 16,9, 17,3, 18,9, 21,3, 22,1, 23,6, 24,4, 27,3.
[00213] U još jednom izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz Primera 1 kao A modifikaciju čvrstog oblika koja obuhvata sledeće vršne vrednosti rendgenske difrakcije praha (ugao 2-teta °): 9,0, 12,1, 13,0, 13,1, 13,6, 14,4, 14,7, 15,1, 15,9, 16,9, 17,3, 17,7, 18,0, 18,9, 19,0, 20,1, 21,3, 22,1, 22,3, 22,6, 22,8, 23,4, 23,6, 24,4, 25,3, 26,3, 26,5, 27,3, 27,8, 28,2, 29,5, 29,7, 30,4, 30,7, 31,0, 31,4, 32,2, 32,8, 33,3, 34,3, 35,5, 36,4, 37,5, 38,4, 39,0, 39,4.
[00214] Obrazac rendgenske difrakcije praha jedinjenja iz Primera 1, A modifikacija, je prikazan na Sl.1 ovde. Amorfni materijal jedinjenja iz Primera 1 je proizveden na licu mesta u DSC (diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom) zagrevanjem jedinjenja sve do topljenja i zagrevanja temperiranjem/hlađenja. Posle ciklusa hlađenja tranzicija u staklo je mogla biti primećena ali posle ciklusa ponovnog zagrevanja je mnogo više karakterizirana na oko 70-75°C. DSC obrazac je prikazan na Sl.13 ovde u tekstu.
Primer 15
4-(2-(piridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol
[00215] Sinteza 2-amino-6-hlor-9-izopropil-9H-purina (b): Natrijum hidrid (1,5 g 60%-ne disperzije u mineralnom ulju, 38 mmol) je dodavan u porcijama tokom 10 min u mešanu suspenziju 2-amino-6-hlor-9H-purina (5,34 g, 31,5 mmol) u anhidrovanom DMF (50 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 45 min, mešavina je ohlađena u ledenoj kupki, onda je dodat 2-jodopropan. Rashladna kupka je uklonjena i mešana mešavina je ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 16 sati. Mešavina je ohlađena u ledu, zatim je dodata voda. Ta mešavina je koncentrovana i ostatak je tretiran vrućim etil acetatom. Ohlađena mešavina je filtrirana, filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na stubu na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 50% EtOAc u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,83(s, 1H), 5,17(s, 2H), 4,71-4,66(m, 1H), 1,57(d, 6H). MS m/z 212,1 (M 1).
[00216] Sinteza 6-hlor-2-jodo-9-izopropil-9H-purina (c): 6-hlor-9-izopropil-9H-purin-2-amin (2,68 g, 12,7 mmol) je rastvoren u THF (64 mL) na sobnoj temperaturi. Jodin (1,61 g, 6,25 mmol), CH2I2 (10,6 mL) i CuI (1,27 g, 6,66 mmol) su dodati. Mešavina je mešana tokom 5 min na sobnoj temperaturi. Izopentil nitrit (5,33 mL) je dodat. Reakciona mešavina je refluksovana tokom 45 min. i zatim je ohlađena do sobne temperature. Zasićeni vodeni natrijum bikarbonat je dodat, i mešavina je ekstrahovana sa EtOAc tri puta. Kombinovana organska faza je oprana fiziološkim rastvorom, osušena sa MgSO4 i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na stubu na silika gelu, eluiranjem sa 0 do 30% etil acetata u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,09(s, 1H), 4,95-4,88(m, 1H), 1,65(d, 6H). MS m/z 323,0 (M 1).
[00217] Sinteza 6-hlor-2-(piridin-3-il)-9-izopropil-9H-purina (d): Laboratorijska bočica okruglog dna je napunjena sa 6-hlor-2-jodo-9-izopropil-9H-purinom (1,2 g, 3,7 mmol), piridin-3-boronskom kiselinom 1,3-propandiol cikličnim estrom (0,91 g, 5,6 mmol), i tetrakis(trifenilfosfin)paladijumom(0) (430 mg, 0,37 mmol). U ovu mešavinu je dodat toluen (60 ml), etanol (6 ml) i rastvor vodenog natrijum karbonata (2M, 15 ml). Laboratorijska bočica je zaptivena i reakciona mešavina je mešana na 80 °C tokom 4 sata. Voda je dodata u ohlađenu mešavinu, koja je ekstrahovana sa etil acetatom (50 ml x 3). Organske frakcije su kombinovane, osušene iznad natrijum sulfata, i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu, eluiranjem sa 30 do 70% EtOAc u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9,60(d, 1H), 8,90-8,87(m, 1H), 8,68(s, 1H), 8,67(d, 1H), 7,63-7,60(m, 1H), 5,12-5,05(m, 1H), 1,74(d, 6H). MS m/z 274,1 (M 1).
[00218] Sinteza 4-(2-(piridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (e): 6-hlor-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin (300 mg, 1,1 mmol) je držan u suspenziji u anhidrovanom 2-propanolu (40 mL) u cevi pod pritiskom. Tiramin (300 mg, 2,2 mmol) je dodat. Cev je zaptivena i zagrejana do 85 °C tokom 16 sati. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na stubu na silika gelu, eluacijom sa 0 do 70% EtOAc u heksanu da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca.
Primer 123
4-(2-(9-izopropil-2-(2-metil-1H-imidazol-1-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol
[00219] Mikrotalasna reakciona cev je napunjena sa 4-(2-(2-hlor-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenolom (30 mg, 0,091 mmol), 2-metil-1H-imidazol (59 mg, 0,73 mmol) i 0,5 ml NMP-a. Zaptivena cev je zagrejana pod mikrotalasnim zračenjem na 240 °C tokom 2 sata. Reakciona mešavina je prečišćena reverzno-faznom HPLC (C18 kolona, eluiranjem sa ACN-H2O 0,05% TFA) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca.
Primer 128
4-(2-(2-(5-hlorpiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol
[00220] Sinteza 4-(2-(2-jodo-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (b): Mešavina 6-hlor-2-jodo-9-izopropil-9H-purina (a) (1,0 g, 3,1 mmol), tiramina (0,64 g, 4,65 mmol), trietilamina (0,63 g, 6,2 mmol) i 2-propanola (30 mL) je zagrevana na 85 °C tokom 2 sata. Reakciona mešavina je koncentrovana i zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat. Smeša je ekstrahovana sa etil acetatom (50 mL×3). Kombinovani organski slojevi su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani, i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni na silika gelu (25 do 75% etil acetata u eluantu heksana) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca. MS m/z 424,1 (M 1).
[00221] Sinteza 4-(2-(2-(5-hlorpiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (c): Sledeći postupak iz Primera 15d, 4-(2-(2-jodo-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol (b) je doveden u reakciju sa 5-hlorpiridin-3-ilboronskom kiselinom. Sirovi proizvod je prečišćen reverzno-faznom HPLC (C18 na koloni, eluiranjem sa ACN-H2O 0,05% TFA) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca.
Primer 134
4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenol
[00222] Sinteza 4-(2-(6-hlor-1-izopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola (b): Prema postupku iz Primera 128b, 4,6-dihlor-1-izopropil-1Hpirazolo[3,4-d]pirimidin (US3399196) (a) (0,184 g, 0,795 mmol) je doveden u reakciju sa tiraminom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (25 do 75% etil acetat u heksan eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca. MS m/z 332,1 (M 1).
[00223] Sinteza 4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola (c): Prema postupku iz Primera 15d, 4-(2-(6-hlor-1-izopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenol (b) je doveden u reakciju sa 5-fluoropiridin-3-ilboronskom kiselinom. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC (C18 koloni, eluiranjem sa ACN-H2O 0,05% TFA) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca.
Primer 141
4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenol
[00224] Sinteza 2,4-dihlor-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidina (b): Prema postupku iz Primera 15b, 2,4-dihlor-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin (0,5 g, 2,67 mmol) je doveden u reakciju sa 2-jodopropanom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (15 do 25% etil acetat u heksan eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca. MS m/z 230,2 (M 1).
[00225] Sinteza 4-(2-(2-hlor-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola (c): Prema postupku iz Primera 128b, 2,4-dihlor-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin (b) (0,278 g, 1,21 mmol) je doveden u reakciju sa tiraminom. Sirovi ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (25 do 75%-ni etil acetat u heksan eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca. MS m/z 331,1 (M 1).
[00226] Sinteza 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola (d): Prema postupku iz Primera 15d, 4-(2-(2-hlor-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenol (20 mg, 0,06 mmol) je doveden u reakciju sa 5-fluoropiridin-3-ilboronskom kiselinom. Sirovi ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC (C18 koloni, eluiranjem sa ACN-H2O 0,05% TFA) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca.
Primer 153
(R)-4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol
[00227] Sinteza (R)-2,6-dihlor-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purina (b): Rastvor 5,7-2,6-dihlor-9H-purina (400 mg, 2,12mmol), (S)-tetrahidrofuran-3-ol (88 mg, 2,5 mmol) i trifenilfosfina (1,0 g, 3,8 mmol) u anhidrovanom THF (30 mL) je tretiran na -78 °C sa diizopropil azodikarboksilatom (856 mg, 4,23 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, i mešana je tokom 16 sati. Zasićeni rastvor vodenog natrijum bikarbonata je dodat i mešavina je ekstrahovana sa etil acetatom. Organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad natrijum sulfata, i koncentrovani. Ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom (10 do 80% etil acetat u heksan eluantu) da bi se dobila bela čvrsta supstanca koja se sastojala od jedinjenja iz naslova kontaminiranog trifenilfosfoksidom. MS m/z 258,0 (M 1).
[00228] Sinteza (R)-4-(2-(2-hlor-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (c): Prema postupku iz Primera 128b, (R)-2,6-dihlor-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin (b) je doveden u reakciju sa tiraminom. Sirova reakciona mešavina je prečišćena reverzno-faznom pripremnom HPLC. MS m/z 360,1 (M 1).
[00229] Sinteza (R)-4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-yl)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola: Prema postupku iz Primera 15d, (R)-4-(2-(2-hlor-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol (c) je doveden u reakciju sa benzo[b]tiofen-3-ilboronskom kiselinom (22,3 mg, 0,125 mmol). Sirovi ostatak je prečišćen reverzno-faznom pripremnom HPLC da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca.
Primer 157
2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ol
[00230] Sinteza metil 2-(2,6-dihlor-9H-purin-9-il)propanoata (b): Mešavina 2,6-dihlor-9H-purina (5,0 g, 26,5 mmol), metil 2-bromopropanoata (5,3 g, 31,7 mmol) i kalijum karbonata (11,0 g, 79,4 mmol) u anhidrovanom DMF (100 mL) je zagrejana na 100 °C tokom 15 sati. Zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat i reakcija je ekstrahovana sa etil acetatom (150 ml x 3). Organski slojevi su kombinovani, oprani slanim rastvorom, osušeni iznad natrijum sulfata, i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10 do 80% etil acetat u heksan eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca. MS m/z 275,0 (M 1).
[00231] Sinteza metil 2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-hlor-9H-purin-9-il)propanoata (c): Mešavina metil 2-(2,6-dihlor-9H-purin-9-il)propanoata (b) (600 mg, 2,2 mmol), triptamina (420 mg, 2,6 mmol) i 2-propanola (30 mL) je zagrejana na 85 °C u zaptivenoj cevi tokom 16 sati. Reakciona mešavina je ohlađena do sobne temperature i koncentrovana.
Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10 do 80% etil acetat u heksan eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta bela supstanca. MS m/z 360,1 (M 1).
[00232] Sinteza metil 2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propanoata (d): Cev pod pritiskom zapremine 150 ml je napunjena sa metil 2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-hlor-9H-purin-9-il)propanoata (c) (300 mg, 0,75 mmol), 5-fluoropiridin-3-ilboronska kiselina (159 mg, 1,1 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)-paladijum(0) (87 mg, 0,075 mmol), K3PO4 (638 mg, 3,0 mmol), i anhidrovani dioksan (15 mL). Cev pod pritiskom je produvana azotom i zaptivena, zatim je reakciona mešavina zagrejana na 130 °C tokom 6 sati uz mešanje. Voda je dodata u ohlađenu mešavinu, i mešavina je ekstrahovana sa etil acetatom (50 ml x 3). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni iznad natrijum sulfata i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (10 do 80% etil acetat u heksan eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kontaminirano malom količinom trifenilfosfin oksida. MS m/z 460,1 (M 1).
[00233] Sinteza 2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola: Litijum aluminum hidrid (230 mg, 6,1 mmol) je dodat u delovima u 0 °C rastvor metil 2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propanoata (282 mg, 0,61 mmol) u anhidrovanom THF (15 mL). Mešana reakciona mešavina je ostavljena da se zagreje do sobne temperature tokom 2 sata, zatim je pažljivo dodata voda. Smeša je izdvojena sa EtOAc (50 mL×3). Organske frakcije su kombinovane, oprane sa slanim rastvorom, osušene iznad natrijum sulfata, i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na stubu na silika gelu (0 do 5% rastvarač B u dihlormetanu; rastvarač B = 2M amonijak u metanolu) da bi se dobilo delimično prečišćeno jedinjenje iz naslova. Ovo je dodatno prečišćeno pripremnom TLC (5% rastvarač B u dihlormetanu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca.
Primeri 157R & 157S
(R)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ol i
(S)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ol
[00234] (R/S)-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ol je odvojen u pojedinačne enantiomere korišćenjem pripremne hiralne HPLC na 21x250 mm Lux-Cellulose-2 (Phenomenex) hiralnom stubu.3 mg/ml rastvora racemata u metanolu je dobijeno i sipano na stub sa 0,5 ml rastvora po injekciji. Stub je eluiran sa 85/7,5/7,5 heksanom/etanolom/metanolom pri brzini protoka od 20 mL/min tokom 25 min. Vršne vrednosti 1 i 2 su eluirane na 20 min i 22,5 min, prema opisanom redosledu. Analitička hromatografija je izvedena na 4,6 x 100 mm Lux_Cellulose-2 (Phenomenex) hiralnom stubu, eluiranjem sa 90/5/5 heksanom/etanolom/metanolom na 1 mL/min tokom 20 min. Vršne vrednosti 1 i 2 su eluirane na 17,45 i 18,14 min, prema opisanom redosledu.
Primer 157R
(R)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ol
[00235] Sinteza (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-(1-(benziloksi)propan-2-il)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina (b): Prema tome, u nastavku, postupci iz Primera 153b (upotreba 2,6-dihlor-9H-purina i (S)-1-(benziloksi)propan-2-ola kao reaktanata), Primer 153c (upotreba triptamina kao reaktanta), i Primer 153d (upotreba 5-fluoropiridin-3-ilboronske kiseline kao reaktanta), dobijeno je jedinjenje iz naslova.
[00236] Sinteza (R)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola (c): Rastvor (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-(1-(benziloksi)propan-2-il)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina (b) (0,15 g, 0,29 mmol) u DCM (10 ml) je tretiran sa BCl3 (1M, 2,9 ml, 2,9 mmol) u DCM (10 ml) na -78 °C tokom 2 sata.1N vodenog rastvora natrijum hidroksida je dodato, i mešavina je ekstrahovana sa DCM. Kombinovani organski ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, filtrirani, i koncentrovani i ostatak je prečišćen hromatografijom na stubu na silika gelu (5% MeOH u DCM eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. MS m/z 432,2 (M 1).
Primer 157S
(S)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ol
[00237] Prema postupku iz Primera 157R, ali korišćenjem (R)-1-(benziloksi)propan-2-ola umesto (S)-1-(benziloksi)propan-2-ola, dobijeno je jedinjenje iz naslova. MS m/z 432,2 (M 1).
Primer 161
4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ilamino)etil)fenol
[00238] Sinteza 4,6-dihlor-1-izopropil-1H-imidazo[4,5-c]piridina (b): Prema postupku iz Primera 15b, 4,6-dihlor-1H-imidazo[4,5-c]piridin (J. Het. Chem.1965, 196-201) (0,19 g, 1,0 mmol) je doveden u reakciju sa 2-jodopropanom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (25 do 35% etil acetat u heksan eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca. MS m/z 230,2 (M 1).
[00239] Sinteza 4-(2-(6-hlor-1-izopropil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ilamino)etil)fenola (c): Mešavina 4,6-dihlor-1-izopropil-1H-imidazo[4,5-c]piridina (b) (40 mg, 0,17 mmol), tiramina (120 mg, 0,86 mmol), i 2-butanola (2 mL) je zagrejana pod mikrotalasnim zračenjem na 140 °C tokom 8 sati. Mešavina je koncentrovana i ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC (C18 koloni, eluiranjem sa ACN-H2O 0,05% TFA) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca. MS m/z 331,1 (M 1).
[00240] Sinteza 4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ilamino)etil)fenola (d): 5 ml mikrotalasna reakciona bočica je napunjena sa 4-(2-(6-hlor-1-izopropil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ilamino)etil)fenola (c): (17 mg, 0,051 mmol), 5-fluoropiridin-3-ilboronska kiselina (72 mg, 0,51 mmol), i tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (36 mg, 0,031 mmol). U ovu mešavinu je dodat toluen (1 ml), etanol (0,5 ml) i rastvor vodenog natrijum karbonata (2M, 0,5 ml). Bočica je zaptivena i reakciona mešavina je mešana na 140 °C pod mikrotalasnim zračenjem tokom 2 sata. Voda je dodata u ohlađenu mešavinu, koja je ekstrahovana sa etil acetatom (5 ml x 3). Organske frakcije su kombinovane, osušene iznad natrijum sulfata, i koncentrovane. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC (C18 kolonom, eluiranjem sa ACN-H2O 0,05% TFA) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca.
Primer 177
4-(2-(5-(5-fluoropiridin-3-il)-3-izopropil-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilamino)etil)fenol
[00241] Sinteza 5,7-dihlor-3-izopropil-3H-imidazo[4,5-b]piridina (b): Prema postupku iz Primera 15b, 5,7-dihlor-3H-imidazo[4,5-b]piridin (J. Med. Chem., 2007, 50, 828-834) (0,118 g, 0,624 mmol) je doveden u reakciju sa 2-jodopropanom. Sirova mešavina proizvoda je prečišćena hromatografijom na silika gelu (25 do 35% etil acetat u heksan eluantu) da bi se dobila mešavina jedinjenja iz naslova (glavna) i izomerni proizvod kao čvrsta supstanca. MS m/z 230,2 (M 1).
[00242] Sinteza 4-(2-(5-hlor-3-izopropil-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilamino)etil)fenola (c): Mešavina proizvoda koja sadrži 5,7-dihlor-3-izopropil-3H-imidazo[4,5-b]piridin (b) (40 mg, 0,17 mmol), tiramin (120 mg, 0,87 mmol), i 2-propanol (2 mL) je zagrejana u zaptivenoj bočici na 140 °C tokom 72 sata. Mešavina je koncentrovana, i ostatak je prečišćen pripremnom TLC (1:2 heksani/etil acetat eluant) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca. MS m/z 331,1 (M 1).
[00243] Sinteza 4-(2-(5-(5-fluoropiridin-3-il)-3-izopropil-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilamino)etil)fenola (d): Prema postupku iz Primera 161d, 4-(2-(5-hlor-3-izopropil-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilamino)etil)fenol (c) (15 mg, 0,047 mmol) je doveden u reakciju sa 5-fluoropiridin-3-ilboronskom kiselinom. Sirovi ostatak je prečišćen pripremnom TLC (1:1 heksani/etil acetat eluant) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca.
[00244] Ponavljanjem postupaka opisanih u gornjim primerima, korišćenjem odgovarajućih početnih materijala, dobijena su sledeća jedinjenja u Formuli I, kako je navedeno u Tabeli 1.
Tabela 1
[00245] Jedinjenja iz ispitivanja afiniteta koja se odnose na jedinjenja iz ovog opisa je takođe moguće pripremiti, kako je opisano u sledećim primerima.
Primer 210
3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-il 6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanamido)heksanoat
[00246] Sinteza 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-il 6-aminoheksanoata (e): U rastvor 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-il 6-(tert-butoksikarbonilamino)heksanoata (a) (80 mg, 0,117 mmol) u DCM (20 ml) je dodat TFA (5 ml). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Koncentrovana je. Rastvor vodenog rastvora natrijum karbonata je dodat i mešavina je ekstrahovana sa DCM. Organske frakcije su kombinovane, osušene iznad natrijum sulfata, i koncentrovane da bi se dobio proizvod kao ulje. MS m/z 582,2 (M 1).
[00247] Sinteza 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-il 6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-oksoheksahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanamido)heksanoata: U rastvor (+)-biotina (35 mg, 0,14 mmol) i Et3N (36 mg, 0,35 mmol) u DMF (1 ml) je dodat HATU (90 mg, 0,24 mmol). Mešavina je mešana tokom 10 min i zatim je dodata u rastvor (3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-il 6-aminoheksanoata (b) (68 mg, 0,12 mmol) u DMF (1 ml).
Reakciona mešavina je mešana tokom 16 sati na sobnoj temperaturi i zatim je koncentrovana. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom HPLC (C18 stub, eluiranjem sa MeOH-H2O 0,05% TFA) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca. Primer 210 je pokazao EC50 vrednost u %CD34+ ogledu od 2,1 µM.
Primer 211
3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-il 6-(tertbutoksikarbonilamino)heksanoata
[00248] Sinteza 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-6-hlor-9-izopropil-9H-purina (b): Pridržavajući se postupka iz Primera 15d, 6-hlor-2-jodo-9-izopropil-9H-purin (3,31 g, 0,0103 mol) je doveden u reakciju sa benzo[b]tiofen-3-ilboronskom kiselinom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na silika gelu (20 do 50% etil acetata u heksanu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca. MS m/z 329,0 (M 1).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ = 9,15 (d, 1H), 8,85 (s, 2H), 8,17 (d, 1H), 7,62 (t, 1H), 7,53 (t, 1H), 5,06 (m, 1H), 1,71 (d, 6H).
[00249] Sinteza 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-ola (c): Pridržavajući se postupka iz Primera 15e, 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-6-hlor-9-izopropil-9H-purin (b) (80 mg, 0,243 mmol) je doveden u reakciju sa serotoninom.
Reakciona mešavina je koncentrovana, zatim je dodat vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Mešavina je ekstrahovana sa etil acetatom. Organske frakcije su kombinovane, osušene iznad natrijum sulfata, i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0 do 5% MeOH u DCM eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca. MS m/z 469,2 (M 1).
[00250] Sinteza 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-il 6-(tert-butoksikarbonilamino)heksanoata (d): U rastvor 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-5-ol (55,5 mg, 0,119 mmol) i 6-(tert-butoksikarbonilamino)heksanske kiseline (30 mg, 0,113 mmol) u DMF (3 ml) je dodat Et3N (24 mg, 0,237 mmol) i HATU (90 mg, 0,237 mmol). Mešavina je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati, i zatim je koncentrovana. Voda je dodata i reakciona mešavina je ekstrahovana sa etil acetatom. Organske frakcije su kombinovane, osušene iznad natrijum sulfata, i koncentrovane. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (0 do 5% MeOH u DCM eluantu) da bi se dobilo jedinjenje iz naslova kao beličasta čvrsta supstanca.
[00251] Ponavljanjem postupaka opisanih u gornjim primerima, korišćenjem odgovarajućih polaznih materijala, pridržavajući se ispitivanja afiniteta, kako je definisano u Tabeli 2, dobijeni su:
Tabela 2
Ogledi
[00252] Sledeći ogledi se koriste da bi se procenila aktivnost jedinjenja iz ovog opisa da bi se olakšalo proširivanje hematopoezne matične ćelije (HSC).
[00253] Primarne odrasle CD34<+>humane hematopoezne matične ćelije (HSC-ovi) su kultivisane i analizirane da bi se utvrdila jedinjenja iz ovog opisa koja olakšavaju ekspanziju hematopoeznih matičnih ćelija. Ćelije su analizirane u prisustvu željenog fenotipa (CD34 ekspresije). Jedinjenja iz ovog opisa pospešuju proširivanje hematopoeznih matičnih ćelija na način koji je uslovljen dozom.
[00254] Podloga kulture: StemSpan SFEM podloga je podloga bez seruma (StemCell Technologies, Vancouver, BC) dopunjena sledećim humanim rekombinantnim citokinima: trombopoetinom, interleukinom-6, Flt-3 ligandom, i faktorom matične ćelije (svi iz R&D Systems, Minneapolis, MN), svaki u finalnoj koncentraciji od 50 ng/mL, sa pomoćnim farmaceutskim sredstvom (DMSO) ili jedinjenjem iz ovog opisa.
[00255] Humana kultura ćelije: Sveža humana leukoforezovana G-CSF mobilisana periferna krv iz normalnih donatora, CD34<+>ćelije iz koštane srži odrasli i kriokonzervirane ćelije krvi pupčane vrpce čoveka CD34<+>su kupljene od kompanije AllCells (Berkeley, CA). Humane CD34<+>ćelije su obogaćene iz leukoforezovane G-CSF mobilisane periferne krvi korišćenjem magnetnog sortiranja ćelije (MACS, Direct CD34 Progenitor Cell Isolation Kit, Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Nemačka) i zamrznute (kriokonzervirane). CD34<+>čistoća ćelije, proverena protočnom citometrijom, je veća od 90%. Posle otapanja, održivost ćelije testirana isključivanjem tripan plavom je veća od 70%. Otopljene ćelije su centrifugirane i vraćene u suspenziju sa StemSpan podlogom koja je alikvotovana za neposrednu kulturu. Ćelije su raspoređene na ploče u količini 10<4>ćelija/mL na ploči sa 384 pregrade (Greiner Bio-One, Monroe, Severna Karolina) sa 50 µL podlogom po pregradi tokom 7 dana. Svakih 7 dana ćelije su prenošene na veće ploče sa pregradama i sveža podloga je dodata da bi se očuvala gustina ćelije između 10<4>i 5 × 10<5>ćelija/mL. Ćelije su kultivisane na 37°C u 5%-nom CO2. Radi transplantacije, ćelije su kultivisane u 75 cm<2>laboratorijskim bočicama pre nego što su ćelije transplantirane na miševe. U koncentraciji od 1 mikromola po litru, 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1), 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol (jedinjenje 2, tabela 1), i N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amin (jedinjenje 9, tabela 1) pri čemu svako daje podsticaj veći od 10-strukog povećanja u broju CD34<+>CD45RA<->ćelija izvedenih iz 1000 mPB CD34<+>hematopoeznih matičnih ćelija posle 21 dana u poređenju sa pomoćnim sredstvom. Jedinjenja iz ovog opisa su analizirana u formatu odgovora na dozu (1nM do 10µM) da bi se odredila delotvorna koncentracija koja je proizvela željeno dejstvo kod 50% ćelija (EC50). Jedinjenja iz ovog opisa su povećala ukupan broj i/ili procenat CD34+ ćelija EC50 i to manje od 10 µM. Rezultati su prikazani u Tabeli 1 i primerima, supra.
[00256] Ogled sa jedinicama koja formiraju koloniju u kulturi (CFU-C): Mononuklearne ćelije na 1000 po mL za 5 nedelja staru krv iz pupčane vrpce i 3 nedelje staru kulturu mPB i 100 ćelija po mL tokom CB 3 nedelje i 1 nedelju dana stara kultura mPB su dodate u MethoCult SF H4436, podlogu od metil celuloze bez seruma koja sadrži metilcelulozu u MDM kompanije Iscove, albuminu seruma govečeta, 2-merkaptoetanol, L-glutamin, prenos humanih (gvožđem zasićenog), rekombinantnog humanog insulina, i rekombinantnih humanih citokina: faktor matične ćelije, GM-CSF, IL-3, IL-6, G-CSF, i eritropoetin (StemCell Technologies). MethoCult je suplementiran sa sledećim humanim rekombinantnim citokinima: trombopoetinom, i Flt-3 ligandom (R&D Systems), svaki u finalnoj koncentraciji od 50 ng/mL. Pošto je mešana, mešavina je podeljena u tri posude od 35-mm. Posude su inkubirane tokom 14 dana na 37°C u vlažnoj atmosferi od 5% CO2 u vazduhu. Na kraju perioda inkubacije, mijeloidne i eritroidne kolonije su prebrojane pod invertovanim mikroskopom na uvećanju od 40X. CFU-C sadržaj ekspanzije kulture je izračunat kao u nastavku: broj dobijenih kolonija na tri posude × ukupan broj mononuklearnih ćelija/broj unetih ćelija. Posle najviše nedelju dana, ukupan broj mononuklearnih ćelija je određen množenjem broja ćelija po mililitru sa količinom kulture. Od nedelje 1 pa nadalje, broj prolaza se takođe uzima u obzir. Kulture tretirane sa 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenolom (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1) u koncentraciji od 1 mikromola po litru, generisale su više nego 10-struko povećanje broja ćelija koje formiraju kolonije posle 21 dana kulture mPB CD34+ ćelija u poređenju sa pomoćnim sredstvom. Korišćenje 1 x 10<3>CB CD34+ ćelija tretiranih sa 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenolom (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1) u koncentraciji od 1 mikromola po litru uzetih iz kulture stare 5 nedelja je pokazalo >10-struko povećanje jedinica koje formiraju koloniju u poređenju sa kontrolom. Ćelije tretirane sa 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenolom (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1) su generisale više mešovitih kolonija povezanih sa >10-strukim povećanjem kolonija eritrocita, >10-struko povećanje kolonija granulocita/makrofaga, i >10-struko povećanje kolonija makrofaga. Ćelije tretirane sa 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenolom (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1) su takođe dale podsticaj mešovitim kolonijama granulocita/eritrocita/monocita/makrofaga, koje nisu primećene u kolonijama izvedenim iz netretiranih kultura.
[00257] Ogledi sa ćelijom koja formira polja slična kaldrmi (CAFC): FBMD-1 stromalne ćelije su održavane u 25-cm<2>laboratorijskim flašicama i tripsinizovane su posle 1/3 konfluentnosti. Kako ova netransformisana linija stari, i samim tim postepeno gubi svoj potencijal za podršku CAFC rastu u kasnim stadijumima, a svi uređaji za dovod se koriste ispod prolaza 20. Za podršku CAFC rastu na pločama sa 96 pregrada, zasejano je 1 × 10<3>stromalnih ćelija po pregradi. Kulture su održavane u podlozi kompanije Iscove dopunjenoj sa 10%-nim fetusnim serumom teleta (FCS), 2,5%-nim serumom konja (HS), 1%-nim L-glutaminom, 1%-nim penicilin-streptomicinom, i 1 × 10<-5>M hidrokortizona na 37°C u vlažnoj atmosferi od 5% CO2 u vazduhu. Pošto stromalni slojevi dostignu konfluentnost, oni se imunizuju vakcinom sa CD34<+>hematopoeznim matičnim ćelijama koje su kultivisane tokom 5 dana sa pomoćnim sredstvom ili jedinjenjem iz ovog opisa. MNC-ovi su dodati u 8 serijskih 1:3 razblaženja (počevši od 25,000 ćelija/pregradi), sa 10 pregrada za svaku dozu ćelije. Razblaženja sa ćelijama sa barem jednim hematopoeznim klonom tamne faze (polje "kaldrme") od barem pet ćelija ispod stromalnog sloja se određuje u nedelji 4. U koncentraciji testa od 1 mikromolara, 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1), stimuliše više nego 2-struko povećanje broja ćelija koje formiraju polja slična kaldrmi izvedene iz mPB CD34<+>hematopoeznih matičnih ćelija posle 5 dana kultivisanja, u poređenju sa kontrolnim kulturama koje se tretiraju samo sa DMSO.
[00258] Analiza antigena na površini: Ćelije su oprane podlogama za bojenje (Hanks-ov balansirani slani rastvor koji obuhvata FBS (2%) i EDTA (2mM)) i obojeno (na 4°C tokom 30 minuta) sa označenim primarnim konjugovanim antitelima. Ćelije su oprane u prethodno opisanom puferu i analizirane korišćenjem BD LSR II protočnog citometra (Becton Dickinson, San Jose, CA). Ćelije su provlačene brzinom od najviše 1000 ćelija/sekundi koristeći 488-nm argona i 633-nm HeNe laserske zrake kao izvor svetlosti za pobuđivanje. Emisija 10<4>ćelija je izmerena korišćenjem logaritamske amplifikacije i analizirana korišćenjem FlowJo softvera (TreeStar Inc. Ashland, OR). Ćelije su bojene primarno konjugovanim izotipnim kontrolnim antitelima da bi se odredila fluorescencije u pozadini.
[00259] Određivanje CD34<+>podskupova ćelije: Procenti CD34<+>podskupova ćelije su određeni iz alikvota kulture ćelije. Ćelije su bojene sa APC anti-Thy1,1, PerCP anti-CD34, PECy7 anti-CD45RA, FITC anti-CD38, i PE anti-CD133 za određivanje CD34<+>Thy1,1<+>, CD34<+>CD45RA-, CD34<+>CD38-, CD133<+>CD38<->i CD34<+>CD133<+>ćelija. Antitela za CD34, CD38, Thy1,1 i CD45RA su kupljena od Becton Dickinson i antitela za CD133 su kupljena od Miltenyi Biotec. Rezultati FACS analize ovih podskupova su dati kao procenat ukupne populacije. Apsolutan broj svake populacije ćelija u kulturi je izračunat iz ukupnog broja ćelija pomnoženog procentom svake populacije. Počevši sa CB CD34+ ćelijom, posle pet nedelja ukupan broj ćelije u kulturama je povećan u proseku više nego 2-struko u 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenolu (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1) 1-mikromolarno tretiranih ćelija u poređenju sa kontrolnim kulturama. Još važnije, >50% od 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1) kultivisane ćelije su bile CD34<+>u poređenju sa <10% ćelija kultivisanih pomoćnim farmaceutskim sredstvom što je dalo kao rezultat više od 10-struke ekspanzije CD34<+>ćelija u poređenju sa kontrolom i više od 10,000-struke ekspanzije u poređenju sa unosom ćelija. Pored toga, prisustvo 1 mikromola po litru 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1) je povećalo i procenat i ukupan broj CD34<+>podpopulacija, CD34<+>CD45RA-, CD34<+>CD38-, CD133<+>CD38-, i CD34<+>CD133<+>što je kao rezultat dalo neto ekspanziju veću od 30-struke za svaki podskup.
[00260] Transplantacija humanih CD34<+>ćelija kod NOD.CB17-Prkdc<scid>miševa (NOD/SCID): Da bi se procenio in vivo kapacitet repopulacije CD34<+>ćelija i njihovog kultivisanog potomstva, nekultivisane CD34<+>ili potomstva kultivisanih CD34<+>ćelija posle 4 dana (mPB) ili 21 dana (CB) sa pomoćnim farmaceutskim sredstvom ili jedinjenjem koje se testira su ubrizgani miševima koji su nesmrtonosno ozračeni (3,0 Gy) 8 do 10-nedelja starim NOD/SCID (za mPB HSC eksperimente) ili NOD/SCIDgc-/- (za CB HSC eksperimente) intravenozno preko retro-orbitalne putanje. Da bi se pratilo stanje usađena krv je uzeta svake nedelje preko retroorbitalne putanje i tretirana je rastvorom za lizu eritrocita (Qiagen, Valencia, CA) da bi se uklonile crvene krvne ćelije, oprane na podlogama za bojenje, i analizirane protočnom citometrijom. Usađivanje je izmereno detekcijom anti-humanih CD45<+>ćelija u krvi. Miševi su žrtvovani 10 nedelja posle transplantacije; koštana srž (BM) je prikupljena iz butne kosti (femura) i potkolenične kosti (tibija). Ćelije koštane srži (BM) su oprane na podlogama za bojenje i obojene sa anti-humanim antitelima. Posle inkubacije, suspenzija je tretirana sa eritrocitnim liznim rastvorom (Qiagen, Valencia, CA) da bi se uklonile crvene ćelije krvi, oprane na podlogama za bojenje, i analizirane protočnom citometrijom, kao što je opisano ranije. Hematopoezne matične ćelije izvedene iz mPB i iz CB i kultivisane sa 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenolom (jedinjenje 1, tabela 1; primer 1) u koncentraciji od 1 mikromola po litru su dali podsticaj statistički značajnom povećanju u procentu humanih ćelija 10 nedelja posle usađivanja.
Identifikacija cilja
[00261] Da bi se identifikovao mehanizam pri čemu jedinjenje iz ovog opisa ekspandira hematopoezne matične ćelije u nediferenciranom stanju, transkripciono profilisanje na celom genomu iz mPB izvedenih CD34<+>ćelija tretiranih tokom 24 sata sa primerom 1 i manje aktivnim analogom (∼20-struko) iz primera 1 (2-(benzo[b]tiofen-3-il)-N-(3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)propil)-9-izopropil-9H-purin-6-amin). Od >50,000 kompleta ogleda analiziranih , samo je 5 gena bilo povećano regulisano više od 3-struko posle tretiranja sa Primerom 1 i većina je bila takođe indukovana do nekog stepena neaktivnim analogom. Pored toga, 5 geni su bili smanjeno regulisani pomoću >70% posle terapije sa 1µM iz Primera 1. Svi su bili smanjeno regulisani u dozi zavisno od načina i nijedan nije bio značajno podložan dejstvu neaktivnog analoga. Dva gena koja su bila najviše suzbijena terapijom sa Primerom 1 (citohrom P4501B1 [CYP1B1] i represor receptora aril ugljovodonika [AHRR]) su transkripciono regulisani pomoću receptora aril ugljovodonika (AHR). Samim tim, jedinjenja iz ovog opisa bi mogla da deluju kao antagonist AHR signaliziranja.
[00262] Pored toga, utvrđena je sposobnost iz Primera 1 da blokira 2,3,7,8-tetrahlordibenzo-pdioksin (TCDD, dioksin)-posredovanu CYP1B1 mRNK ekspresiju pomoću qPCR kod iz mPB izvedenih CD34<+>ćelija. Lečenje sa TCDD (3nM) je prouzrokovalo 4,5-struko povećanje nivoa CYP1B1 mRNK u poređenju sa kontrolnim pomoćnim farmaceutskim sredstvom (0,01% toluena). Ovo povećanje je inhibirano pomoću Primera 1 na način zavisan od doze koji ukazuje da jedinjenja iz ovog opisa mogu da antagonizuju AHR signaliziranje. Da bi se odredila dejstva iz Primera 1 u AHR transkripciji, testirana je sposobnost iz Primera 1 da suzbije dioksinom indukovan od AHR zavisnu analizu gena reportera luciferaze.
Uključivanje iz Primera 1 (1µM) je potpuno ukinulo dioksinom indukovanu od AHR zavisnu transkripciju kada je korišćena na ćelijama koje izražavaju humani AHR. Titracija iz Primera 1 je otkrila EC50 iz 127nM, da pokazuje da je Primer 1 jak AHR antagonist. Interesantno, Primer 1 je samo slabo inhibirao dioksinom indukovanu transkripciju mišjih ćelija i nije imao nikakvu aktivnost na ćelije pacova, što ukazuje na to da Primer 1 preporučljivo suzbija humani AHR. Ovo se dovodi u vezu sa nedostatkom aktivnosti iz Primera 1 na mišji HSC, i može objasniti selektivnost vrsta iz Primera 1. Najzad, Primer 1 je imao samo slabu aktivnost agonista na mišje ili pacovske ćelije, i nije uspeo da indukuje od AHR zavisnu transkripciju u ćelijama čoveka.
[00263] Da bi se dalje istraživala uloga AHR signaliziranja u hematopoeznim matičnim ćelijama, testirana su dva druga AHR antagonista (alfa-naftoflavon i CH-223191). Oba jedinjenja su odvela do povećanja koja su zavisila od doze kod izvesnog broja CD34<+>ćelija kada su kultivisane sa iz mPB izvedenom CD34<+>ćelijom tokom 7 dana: uključivanje 1 µM CH223191 je dalo 2,2-struku ekspanziju CD34<+>ćelija; 0,75 µM α-naftoflavona je dalo 1,9-struku ekspanziju CD34<+>ćelija pri čemu je 0,75 µM Primer 1 dalo 3,4-struku ekspanziju ukupnih CD34<+>ćelija. Da bi se pokazala direktna uloga za AHR u Primeru 1 je indukovana ekspanzija hematopoeznih matičnih ćelija, humane iz CB izvedene CD34<+>hematopoezne matične ćelije su tretirane lentivirusnim česticama koje sadrže shRNK koji ciljaju AHR koji ima koekspresiju GFP ili kontrolni virus. Četrdeset osam sati posle transdukcije, CD34<+>GFP<+>ćelije su prečišćene sortiranjem ćelije i nivoi AHR su određeni putem qPCR. Obe AHR koje su ciljale shRNK su dovele do smanjenja u AHR ekspresiji posle transdukcije (81% sa sh111 i 51% sa sh242). Ova smanjenja nisu utvrđena kod ćelija kojima nedostaje GFP ili kod ćelija koje su transdukovane sa kontrolnim virusom. Iz CB-izvedene CD34<+>ćelije sa smanjenom AHR ekspresijom su pokazale fenotip sličan Primeru 1 u kom su ćelije tretirane sa zadržanom ekspresijom CD34<+>. Ovi podaci pokazuju da je inhibicija AHR aktivnosti putem jedinjenja iz ovog opisa dovoljna da se pospeši ex-vivo ekspanzija hematopoeznih matičnih ćelija.
Postupak ekspandiranja hematopoeznih matičnih ćelija iz humane neonatalne krvi iz pupčane vrpce
[00264] Podloga kulture koja je korišćena je iz kompanije StemSpan SFEM (StemCell Technologies, Kat #09650) dopunjena sa sledećim rekombinantnim humanim citokinima: TPO, IL6, Flt3 ligand, i SCF svaki u finalnoj koncentraciji od 50 ng/mL. Podloga kulture je pripremljena sveža na dan upotrebe.
[00265] Razblaženje jedinjenja u podlogama: 10,000x koncentrata jedinjenja iz ovog opisa je korišćeno za razblaženja. Dodavanje jedinjenja u podloge kulture se odvija u dva koraka. Prvi korak je 1:100 razblaženje (10µL od 10,000x koncentrata u 990µL potpune podloge kulture (koja sadrži citokine) u 1,5 mL efendorfovoj cevčici [USA Scientific, Kat #1615-5500]) da bi se generisao 100x rastvor jedinjenja u podlogama kulture. Drugi korak je 1:100 razblaženje u podlogama kulture koje će biti korišćeno da se pokrene kultura ćelije. Količina kulture je promenljiva zavisno od broja unosa krvi pupčane vrpce (CB) CD34<+>ćelija. Na primer, 1x10<6>CB CD34<+>ćelije su zasejane u 20 mL podloga (5x10<4>ćelija/mL). U ovom slučaju, 200µL od 100x Primera 1 rastvora se dodaje u 20 mL podloge u 50 mL konusnoj epruveti (Becton Dickinson, Kat #352098) da bi se dostigla finalna koncentracija (videti Tabelu 3).
[00266] Pokretanje kulture ćelije: prečišćene humane CB CD34<+>ćelije su korišćene za ex vivo eksperimente ekspanzije. Posle otapanja, održivost ćelije testirana isključivanjem tripan plavom je viša od 50%. Otopljene ćelije su razblažene 5-struko sa podlogama kulture (bez citokina ili jedinjenja iz ovog opisa kao što je Primer 1) i centrifugirane na 300g na 25°C tokom 8 minuta. Posle aspiriranja supernatanta, pelet je vraćen u suspenziju sa odgovarajućom količinom podloge kulture (5 x 10<4>ćelije/mL, Tabela 3) pre nego što se ubrizga (igla kalibra 22, Air-Tite proizvodi; 20 mL špric, BD kat # 309661) u AFC vreće (Tabela 5) za neposrednu kulturu. Ćelije su kultivisane na 37 °C u 5%-nom CO2.
[00267] Dodavanje podloga u kulturu ćelije: za količine podloga ne veće od 80 mL, koristi se postupak gore u tekstu (razblaženje jedinjenja u podlogama). Za količine podloga veće od 80 mL izvodi se prvo razblaženje 1:100 u 10 mL konusnim epruvetama (Corning, Cat #430052, Tabela 4). Drugi korak je 1:100 razblaženje podloga kulture, u sterilnim posudama (BD Falcon, Kat #354015) koje se dodaju u AFC vreću (igla kalibra 22, Air-Tite proizvodi; 60 mL špric, BD kat # 309653).
Tabela 3. Primer 1 razblaženja za početnu krv iz pupčane vrpce izvedenu ekspanziju CD34+ ćelije
Tabela 4. razblaženja iz Primera 1 za dodavanje podloga u ekspanziju CD34+ ćelije izvedene iz krvi pupčane vrpce
Tabela 5. Ograničenja zapremine za vreće kompanije American Fluoroseal Corporation.
[00268] Isti protokol je moguće koristiti počevši od mobilisanih ćelija periferne krvi iz pacijenta za autolognu transplantaciju usađivanjem.
[00269] Supstanca koja obuhvata populaciju ćelija sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama pogodnim za intravenoznu isporuku ili kao infuzija mogu takođe biti pripremljeni. Da bi se pripremile ćelije za infuziju, kultivisane ćelije su peletirane centrifugiranjem tokom 10 minuta na 300g i vraćene su u suspenziju u puferskom sredstvu infuzije koje obuhvata 5%-ni HSA (Baxter) u koncentraciji od između 10<6>do 10<8>ćelija /ml.
[00270] Jasno je da primeri izvođenja opisani ovde služe samo u ilustrativne svrhe i da će različite modifikacije ili promene u tom svetlu biti predložene stručnjacima u ovoj oblasti i da ih treba obuhvatiti tako da su u duhu i obimu primene ove prijave.

Claims (28)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje Formule I:
    u kom je: G1 izabrano iz N i CR3; G2, G3 i G4 nezavisno izabrani iz CH i N; uz uslov da najmanje 1 od G3 i G4 jeste N; uz uslov da ni G1 ni G2 nisu N; L izabrano iz -NR5a(CH2)2-, -NR5a(CH2)3-, -NR5aCH(C(O)OCH3)CH2-, -NR5a(CH2)2NR5b-, -NR5a(CH2)2S-, -NR5aCH2CH(CH3)CH2-, -NR5aCH2CH(OH)- i -NR5aCH(CH3)CH2-; pri čemu su R5a i R5b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; R1 izabrano iz fenila, tiofenila, furanila, 1H-benzoimidazolila, izohinolinila, 1H-imidazopiridinila, benzotiofenila, pirimidinila, piridinila, 1H-imidazolila, pirazinila, piridazinila, 1H-pirolila i tiazolila; pri čemu pomenuti fenil, tiofenil, furanil, 1H-benzoimidazolil, izohinolinil, 1H-imidazopiridinil, benzotiofenil, pirimidinil, piridinil, 1H-imidazolil, pirazinil, piridazinil, 1H-pirolil ili tiazolil od R1 mogu opciono biti supstituisani sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz skupa koji čine cijano, hidroksi, C1-4alkil, C1- 4alkoksi, halo, halo-supstituisani-C1-4alkil, halo-supstituisani-C1-4alkoksi, hidroksi, amino, -C(O)R8a, -S(O)0-2R8a, -C(O)OR8a, i -C(O)NR8aR8b; pri čemu su R8a i R8b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; R2 izabran iz -S(O)2NR6aR6b, -NR6aC(O)R6b, -NR6aC(O)NR6bR6c, fenila, 1H-pirolopiridin-3-ila, 1H-indolila, tiofenila, piridinila, 1H-1,2,4-triazolila, 2 oksoimidazolidinila, 1H-pirazolila, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzoimidazolila i 1H-indazolila; pri čemu su R6a, R6b i R6c nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; i pri čemu pomenuti fenil, 1H-pirolopiridin-3-il, 1H-indolil, tiofenil, piridinil, 1H-1,2,4-triazolil, 2-oksoimidazolidinil, 1H-pirazolil, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzoimidazolil ili 1H-indazolil od R2 jeste opciono supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz skupa koji čine hidroksi, halo, metil, metoksi, amino, -O(CH2)nNR7aR7b, –S(O)2NR7aR7b, –OS(O)2NR7aR7b i –NR7aS(O)2R7b; pri čemu su R7a i R7b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; R3 izabran iz vodonika, C1-4alkil i bifenila; i R4 izabran iz C1-10alkila, prop-1-en-2-ila, cikloheksila, ciklopropila, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etila, oksetan-3-ila, oksetan-2-ila, benzhidrila, tetrahidro-2H-piran-3-ila, tetrahidro-2H-piran-4-ila, fenila, tetrahidrofuran-3-ila, tetrahidrofuran-2-ila, benzila, (4-pentilfenil)(fenil)metila i 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etila; pri čemu pomenuti alkil, ciklopropil, cikloheksil, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, tetrahidro-2H-piran-3-il, tetrahidro-2H-piran-4-il, fenil, tetrahidrofuran-3-il, tetrahidrofuran-2-il, benzil, (4-pentilfenil)(fenil)metil ili 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil mogu opciono biti supstituisani sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz skupa koji čine hidroksi, C1-4alkil i halo-supstituisani-C1-4alkil; ili njihova so.
  2. 2. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je to jedinjenje sa Formulom 1a:
    u kom je: L je -NR5a(CH2)2-; pri čemu je R5a izabrano iz vodonika i C1-4alkila; a R1 izabrano iz fenila, tiofen-2-ila, tiofen-3-ila, furan-3-ila, 1H-benzo[d]imidazol-1-ila, izohinolin-4-ila, 1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-ila, benzo[b]tiofen-3-ila, pirimidin-5-ila, piridin-2-ila, piridin-4-ila, 1H-imidazol-1-ila, pirazin-2-ila, piridin-3-ila, piridazin-4-ila, 1H-pirol-pri čemu pomenuti fenil, tiofen-2-il, tiofen-3-il, furan-3-il, 1H-benzo[d]imidazol-1-il, izohinolin-4-il, 1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il, benzo[b]tiofen-3-il, pirimidin-5-il, piridini-2-il, piridin-4-il, 1H-imidazol-1-il, pirazin-2-il, piridini-3-il, piridazin-4-il, 1H-pirol-2-il ili tiazol-5-il od R1 mogu opciono biti supstituisani sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz skupa koji čine cijano, hidroksi, C1-4alkil, C1-4alkoksi, halo, halo-supstituisani-C1-4alkil, -S(O)0-2R8a i –C(O)OR8a; pri čemu je R8a izabran iz vodonika i C1-4alkila; R2 izabrano iz -NR6aC(O)NR6bR6c, fenila, 1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-ila, 1H-indol-3-ila, tiofen-3-ila, piridin-2-ila, piridin-3-ila, piridin-4-ila, 1H-1,2,4-triazol-5-ila, 2-oksoimidazolidin-1-ila, 1H-pirazol-3-ila, 1H-pirazol-4-ila, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-ila i 1H-indazol-3-ila; pri čemu su R6a, R6b i R6c nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; i pomenuti fenil, 1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-il, 1H-indol-3-il, tiofen-3-il piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, 1H-1,2,4-triazol-5-il, 2-oksoimidazolidin-1-il, 1H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-4-il, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il ili 1H-indazol-3-il od R2 je opciono supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz hidroksi, halo, metoksi, amino, -OS(O)2NR7aR7b i –NR7aS(O)2R7b; pri čemu su R7a i R7b nezavisno izabrani iz vodonika i C1-4alkila; i R4 izabrano iz izopropila, metila, etila, prop-1-en-2-ila, izobutila, cikloheksila, sek-butila, (S)-sek-butila, (R)-sek-butila, 1-hidroksipropan-2-ila, (S)-1-hidroksipropan-2-ila, (R)-1-hidroksipropan-2-ila, nonan-2-ila, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etila, oksetan-3-ila, oksetan-2-ila, benzhidrila, fenila, tetrahidrofuran-3-ila i benzila; pri čemu pomenuti cikloheksil, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, fenil, tetrahidrofuran-3-il ili benzil mogu biti opciono supstituisani sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz C1-4alkila i halosupstituisanog-C1-4alkila.
  3. 3. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1 ili patentnog zahteva 2, u kom je R2 izabrano iz uree, fenila, 1H-indol-2-ila, 1H-indol-3-ila, tiofen-3-ila, piridin-2-ila, piridin-3-ila, piridin-4-ila, 1H-1,2,4-triazol-3-ila, 1H-1,2,4-triazol-5-ila, 2-oksoimidazolidin-1-ila, 1H-pirazol-3-ila, 1H-pirazol-4-ila i 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-ila; pri čemu je pomenuti fenil, 1H-indol-2-il, 1H-indol-3-il, tiofen-3-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, 1H-1,2,4-triazol-3-il, 1H-1,2,4-triazol-5-il, 2-oksoimidazolidin-1-il, 1H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-4-il ili 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il od R2 opciono supstituisan sa hidroksi, metoksi, metil, halo, amino i amino-sulfonil.
  4. 4. Jedinjenje iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 3, pri čemu je R3 izabran iz vodonika, metila i bifenila; i R4 je izabran iz izopropila, metila, etila, prop-1-en-2-ila, izobutila, cikloheksila, sek-butila, (S)-sek-butila, (R)-sek-butila, 1-hidroksipropan-2-ila, (S)-1-hidroksipropan-2-ila, (R)-1-hidroksipropan-2-ila, nonan-2-ila, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etila, oksetan-3-ila, oksetan-2-ila, benzhidrila, fenila, tetrahidrofuran-3-ila i benzila; pri čemu pomenuti cikloheksil, 2-(2-oksopirolidin-1-il)etil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, fenil, tetrahidrofuran-3-il ili benzil mogu biti opciono supstituisani sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz metila i trifluorometila.
  5. 5. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je to jedinjenje sa formulom 1a:
    pri čemu L jeste -NH(CH2)2-; R1 je izabrano iz fenila, tiofen-3-ila, tiofen-2-ila, furan-3-ila, furan-2-ila, benzo[b]tiofen-3-ila, pirimidin-5-ila, piridin-4-ila, piridin-2-ila, pirazin-2-ila, piridazin-3-ila, piridazin-4-ila, 1H-imidazol-1-ila, thiazol-4-ila, 1H-pirol-2-ila, tiazol-5-ila, i piridin-3-ila; pri čemu pomenuti fenil, tiofen-3-il, tiofen-2-il, furan-3-il, furan-2-il, benzo[b]tiofen-3-il, pirimidin-5-il, piridin-4-il, piridin-2-il, pirazin-2-il, piridazin-3-il, piridazin-4-il, 1H-imidazol-1-il, tiazol-4-il, 1H-pirol-2-il, tiazol-5-il ili piridin-3-il od R1 jeste opciono supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz cijano, metila, metilsulfonila, metoksi, halo, hidroksi, karboksila, etoksi-karbonila, metil-amino-karbonila i amino; R2 je izabran iz amino-sulfonila, metil-karbonil-amino, urea, fenila, 1H-indol-2-ila, 1H-indol-3-il, tiofen-2-ila, tiofen-3-il, piridin-2-ila, piridin-3-il, piridin-4-ila, 1H-1,2,4-triazol-3-ila, 1H-1,2,4-triazol-5-ila, 2-oksoimidazolidin-1-ila, 1H-pirazol-3-ila, 1H-pirazol-4-ila, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-ila i 1H-indazol-5-ila; pri čemu je pomenuti fenil, 1H-indol-2-il, 1H-indol-3-il, tiofen-2-il, tiofen-3-il, piridin-2-il, piridin-3-il, piridin-4-il, 1H-1,2,4-triazol-3-il, 1H-1,2,4-triazol-5-il, 2-oksoimidazolidin-1-il, 1H-pirazol-3-il, 1H-pirazol-4-il, 2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il, i 1H-indazol-5-il od R2 opciono supstituisan sa hidroksi, metoksi, metil, halo, amino i amino-sulfonil; i R4 je izabran iz izopropila, izobutila, sek-butila, 1-hidroksipropan-2-ila, ciklopropila, oksetan-3-ila, oksetan-2-ila, benzhidrila, tetrahidro-2H-piran-3-ila, tetrahidro-2H-piran-4-ila, fenila, tetrahidrofuran-3-ila, tetrahidrofuran-2-ila, benzila, (4-pentilfenil)(fenil)metila i 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etila; pri čemu pomenuti ciklopropil, oksetan-3-il, oksetan-2-il, benzhidril, tetrahidro-2H-piran-3-il, tetrahidro-2H-piran-4-il, fenil, tetrahidrofuran-3-il, tetrahidrofuran-2-il, benzil, (4-pentilfenil)(fenil)metil ili 1-(1-(2-okso-6,9,12-trioksa-3-azatetradekan-14-il)-1H-1,2,3-triazol-4-il)etil može biti opciono supstituisan sa 1 do 3 radikala nezavisno izabrana iz metila i trifluorometila.
  6. 6. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je to jedinjenje iz formule 1f:
    u kom je: R2 izabrano iz 1H-indol-3-ila i fenila opciono supstituisanog sa hidroksi; i R4 je izabrano iz izopropila, sek-butila, benzhidrila, nonan-2-ila, oksetan-3-ila i tetrahidrofuran-3-ila.
  7. 7. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je jedinjenje sa formulom 1g:
    u kom je: R2 izabrano iz 1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-ila; 1H-indol-3-il je opciono supstituisan sa 1 do 2 radikala nezavisno izabrana iz halo, metil i metoksi; i fenil je opciono supstituisan sa 1 do 2 radikala nezavisno izabrana iz metil, halo i hidroksi; R4 je izabrano iz izopropila, sek-butila, 1-hidroksipropan-2-ila, prop-1-en-2-ila, benzhidrila, nonan-2-ila, oksetan-3-ila i tetrahidrofuran-3-ila; i Ra, Rb i Rc su svaki nezavisno izabrani iz vodonika, cijano, metila, halo, -SO2CH3 i trifluorometila.
  8. 8. Jedinjenje iz bilo kog od prethodnih patentnih zahteva koje se bira iz: 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-benzhidril-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidro-2H-piran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiofen-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(4-(trifluorometil)benzil)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izobutil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-metil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(4-metilbenzil)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-N-(2-(tiofen-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 3-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-N-(4-fluorofenetil)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; N-(4-aminofenetil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-izopropil-2-(pirimidin-5-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-fenil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiofen-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(furan-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-(benzo[b]tiofen-3-il)-N-(4-fluorofenetil)-9-fenil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(nonan-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-sek-butil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; etil 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)nikotinata; 4-(2-((9-izopropil-2-(5-metoksipiridin-3-il)-9H-purin-6-il)amino)etil)fenola; 4-(2-(2-(6-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(4-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; 4-(2-(2-(1H-imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridazin-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(pirazin-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-(metilsulfonil)piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(4-hlorpiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-((9-izopropil-2-(4-metiltiofen-3-il)-9H-purin-6-il)amino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metoksifenola; N-[2-(6-metoksi-1H-indol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-[2-(5-metil-1H-indol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 1-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)imidazolidin-2-ona; N-(2-{[9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)piridin-2-amina; 9-(propan-2-il)-N-[3-(1H-pirazol-4-il)propil]-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-{2-[(3-metil-1H-1,2,4-triazol-5-il)sulfanil]etil}-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 1-(2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)imidazolidin-2-ona; N-[2-(5-amino-1H-1,2,4-triazol-3-il)etil]-2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)piridin-2-amina; 2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-N-[3-(1H-pirazol-4-il)propil]-9H-purin-6-amina; 2-(1-benzotiofen-3-il)-N-[3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-4-il)propil]-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-amina; (2-{[2-(1-benzotiofen-3-il)-9-(propan-2-il)-9H-purin-6-il]amino}etil)urea; N-[2-(1H-indol-3-il)etil]-9-(propan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenil)methanesulfonamida; 4-(2-(2-(piridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)propil)fenola; 4-(2-(9-(oksetan-3-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-(1-hidroksipropan-2-il)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenil sulfamata; 4-(2-(2-(2-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(1-metil-1H-pirol-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiazol-5-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(1H-benzo[d]imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(2,4-dimetil-1H-imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(2-metil-1H-imidazol-1-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(9-sek-butil-6-(4-hidroksi-3-metilfenetilamino)-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; 9-izopropil-N-(2-(5-metil-1H-pirazol-3-il)etil)-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(5-hlorpiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(5-(trifluorometil)piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 5-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-9-sek-butil-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; (S)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-2-il)nikotinonitrila; 4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(6-(benzo[b]tiofen-3-il)-1-izopropil-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola; (R)-4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-3-metilfenola; 5-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)pikolinonitrila; 3-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)isonikotinonitrila; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola; 3-(6-(4-hidroksifenetilamino)-9-izopropil-9H-purin-2-il)pikolinonitrila; 4-(2-(9-izopropil-2-(6-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(izohinolin-4-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-hlor-4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 3-fluoro-4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; N-(2-(5-hlor-1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(9-izopropil-2-(piridin-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metilfenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; (S)-4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; (R)-4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola; (R)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola; (S)-2-(6-(2-(1H-indol-3-il)etilamino)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9H-purin-9-il)propan-1-ola; (R)-N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(tetrahidrofuran-3-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(3H-imidazo[4,5-b]piridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola 4-(2-(2-(1H-imidazo[4,5-b]piridin-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola 4-(2-(6-(5-fluoropiridin-3-il)-1-izopropil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-4-ilamino)etil)fenola 4-(2-(2-(4,5-dimetil-1H-imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(piridin-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)-1-hidroksietil)fenola 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(6-metoksi-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(5-metoksi-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(prop-1-en-2-il)-9H-purin-6-amina; 5-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)piridin-2-ola; N-(2-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin6-amina; N-(2-(6-(2-(dietilamino)etoksi)-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 4-(2-(5-(5-fluoropiridin-3-il)-3-izopropil-3H-imidazo[4,5-b]piridin-7-ilamino)etil)fenola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-sek-butil-2-(2-metil-1H-imidazol-1-il)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(2-etil-1H-imidazol-1-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(2-propil-1H-imidazol-1-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 3-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-ilamino)etil)-1H-indol-6-ola; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(5-metilpiridin-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-9-izopropil-2-(2-metil-1H-imidazol-1-il)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(7-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(1H-indol-3-il)etil)-2-(5-metilpiridin-3-il)-9-(oksetan-3-il)-9H-purin-6-amina; N-(2-(6-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(6-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(2-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; N-(2-(4-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; N-(2-(7-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-9H-purin-6-amina; 2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-izopropil-N-(2-(4-metil-1H-indol-3-il)etil)-9H-purin-6-amina; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-7-izopropil-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(2-(5-fluoropiridin-3-il)-9-(1-hidroksipropan-2-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)-2-metilfenola; 4-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-9-cikloheksil-9H-purin-6-ilamino)etil)fenola; 4-(2-(9-izopropil-2-(tiofen-3-il)-9H-purin-6-ilamino)etil)fenol; i 1-(2-(2-(benzo[b]tiofen-3-il)-6-(4-hidroksifenetilamino)-9H-purin-9-il)etil)pirolidin-2-ona; ili njegova so.
  9. 9. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je to jedinjenje predstavljeno formulom:
    ili njegova so; ili formulom:
    ili njegova so; ili formulom:
    ili njegova so; ili formulom:
    ili njegova so; ili formulom:
    ili njegova so.
  10. 10. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je to jedinjenje predstavljeno formulom: ili njegova so.
  11. 11. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je to jedinjenje predstavljeno formulom: ili njegova so.
  12. 12. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je to jedinjenje predstavljeno formulom: ili njegova so.
  13. 13. Jedinjenje iz patentnog zahteva 1, pri čemu je to jedinjenje predstavljeno formulom: ili njegova so.
  14. 14. Supstanca koja obuhvata jedinjenje iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 13.
  15. 15. Postupak za in vitro ili ex vivo povećanje broja matičnih i progenitornih ćelija; pomenuti postupak obuhvata dovođenje u kontakt matičnih ćelija sa jedinjenjem prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 13, pri čemu je to jedinjenje sposobno da antagonizuje aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodnog efektora putanje receptora aril ugljovodonika.
  16. 16. Jedinjenje iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 13 za upotrebu u postupku lečenja povećanjem broja matičnih ili progenitornih ćelija; pri čemu je to jedinjenje sposobno da antagonizuje aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i(ili nizvodni efektor putanje receptora aril ugljovodonika.
  17. 17. Postupak iz patentnog zahteva 15 ili jedinjenje za upotrebu u postupku lečenja iz patentnog zahteva 16, pri čemu: (i) su matične ćelije humane; i/ili (ii) matične ćelije su izvedene iz koštane srži, matične ćelije su izvedene iz krvi pupčane vrpce i/ili su matične ćelije hematopoezne matične ćelije.
  18. 18. Ex vivo postupak ekspandiranja hematopoeznih matičnih ćelija, pri čemu taj postupak obuhvata (a) obezbeđivanje početne populacije ćelije koja obuhvata hematopoezne matične ćelije i (b) kultivisanje pomenute početne populacije ćelije ex vivo u prisustvu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 13 pod pogodnim uslovima za ekspandiranje matičnih ćelija, pri čemu jedinjenje može da antagonizuje aktivnost i/ili ekspresiju receptora aril ugljovodonika i/ili nizvodni efektor ili putanju receptora aril ugljovodonika; i pogodno pri čemu je nizvodni efektor putanje receptora aril ugljovodonika izabran iz Cyp1B1, Cyp1A1, Beta katenin, AHRR, STAT5 i STAT1.
  19. 19. Postupak iz patentnog zahteva 18, pri čemu: (a) pomenuta početna populacija ćelije jeste obogaćena CD34+ ćelijama; ili (b) se pomenuta početna populacija ćelije dobija iz ćelija krvi pupčane vrpce; ili (c) se pomenuta početna populacija ćelije dobija iz jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce, poželjno jedne jedinice krvi pupčane vrpce; ili (d) se pomenuta početna populacija ćelije dobija iz mobilizovanih ćelija periferne krvi, opciono pri čemu su mobilizovane ćelije periferne krvi dobijene od pojedinačnog subjekta koji je sisar.
  20. 20. Postupak iz patentnog zahteva 18 ili patentnog zahteva 19, pri čemu: (a) pomenuta početna populacija ćelije u suštini obuhvata CD34+ ćelije prečišćene iz jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce, poželjno jedne jedinice krvi pupčane vrpce; ili (b) pomenuti uslovi za ekspanziju hematopoezne matične ćelije obuhvataju kultivisanje pomenute početne populacije ćelije u prisustvu dovoljne količine IL6, Flt3-L, TPO i SCF; ili (c) se pomenuto jedinjenje dodaje u podlogu kulture ćelije u koncentraciji između 1pM i 10µM; ili (d) se pomenuta početna populacija ćelije u suštini sastoji od CD34+ ćelija prečišćenih iz jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce, poželjno jedne jedinice krvi pupčane vrpce; ili (e) se pomenuta početna populacija ćelije kultiviše u prisustvu pomenutog jedinjenja tokom vremena dovoljnog za 10-struku do 50,000-struku ekspanziju CD34+ ćelija; ili (f) taj postupak obuhvata vraćanje u suspenziju ekspandiranih ćelija u farmaceutski prihvatljivoj podlozi pogodnoj za isporuku u domaćina koji je sisar.
  21. 21. Komplet za ekspandiranje hematopoeznih matičnih ćelija, koji obuhvata jedinjenje za koje se zaštita patentom traži u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 13 i uputstva za upotrebu u postupku iz bilo kog od patentnih zahteva 18 do 20, i, opciono, jedan ili više od sledećih: citokin, faktori rasta i podloge za rast ćelije, pri čemu su pomenuti jedan ili više citokina ili faktora rasta poželjno odabrani iz grupe koja obuhvata IL6, Flt3-L, SCF i TPO.
  22. 22. Supstanca koja obuhvata populaciju ćelije sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama i jedinjenje za koje se zaštita patentom traži u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 13.
  23. 23. Supstanca iz patentnog zahteva 22, pri čemu: (a) se pomenuta populacija ćelije sa ekspandiranim hematopoeznim matičnim ćelijama dobija iz jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce, poželjno jedne jedinice krvi pupčane vrpce, pri čemu pomenuta supstanca sadrži ukupnu količinu ćelija od barem 10<5>ćelija, 10<7>ćelija, 10<8>ćelija ili 10<9>ćelija, i pri čemu su 20-100% od ukupnog broja ćelija CD34+ ćelije; ili (b) pomenuta supstanca sadrži između 0,1%-40% ukupnih ćelija koje izražavaju CD34 i Thy1 markere; 20-80% ukupnih ćelija koje izražavaju CD34 i CD45RA markere; 10-95% ćelija koje su CD38+; i 5-70% ćelija koje su CD133+; ili (c) je pomenuta supstanca odgovarajuća za intravenoznu infuziju i pomenuta supstanca obuhvata barem 10<4>ćelija/kg transfuzionisanih pacijentu, poželjno između 10<5>ćelija/kg i 10<9>ćelija/kg.
  24. 24. Supstanca prema patentnom zahtevu 22 ili patentnom zahtevu 23 za upotrebu u postupku alogene transplantacije hematopoezne matične ćelije subjektu koji je sisar.
  25. 25. Jedinjenje iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 13 ili supstanca prema patentnom zahtevu 22 ili patentnom zahtevu 23 za upotrebu u postupku lečenja ekspandiranjem hematopoeznih matičnih ćelija koje se koriste a lečenje nasledne imunodeficijentne bolesti, autoimune bolesti i/ili hematopoeznog poremećaja.
  26. 26. Jedinjenje ili supstanca za upotrebu u postupku lečenja prema patentnom zahtevu 25, pri čemu: (a) je isporuka autologne transplantacije i hematopoeznog poremećaja izabrana iz višestrukog mijeloma, ne-Hodžkin-ovog limfoma, Hodžkinove bolesti, akutne mijeloidne leukemije, neuroblastoma, tumora ćelije klice, autoimunih poremećaja i amiloidoze; ili (b) se autoimuni poremećaji biraju iz sistemskog lupusa eritematozusa i sistemske skleroze; ili (c) je hematopoezni poremećaj izabran iz akutne mijeloidne leukemije, akutne limfoblastne leukemije, hronične mijeloidne leukemije, hronične limfocitne leukemije, mijeloproliferativnih poremećaja, mijelodisplastičnih sindroma, višestrukog mijeloma, ne-Hodžkin-ovog limfoma, Hodžin-ove bolesti, aplastične anemije, čiste aplazije crvene ćelije, paroksismalne noćne hemoglobinurije, Frankonijeve anemije, talasemije glavnog tipa, anemije srpaste ćelije, ozbiljne kombinovane imunodeficijencije (SCID), Viskot-Aldričovog sindroma, hemofagocitne limfohistiocitoze (HLH) i urođene greške metabolizma, kao što je mukopolisaharidoza, Gošeova bolest, metahromatske leukodistrofije i adrenoleukodistrofije.
  27. 27. Postupak iz patentnog zahteva 18, pri čemu pomenuta početna populacija ćelije obuhvata CD34+ ćelije prečišćene iz jedne ili dve jedinice krvi pupčane vrpce, poželjno jedne jedinice krvi pupčane vrpce, i (i) pomenuta početna populacija ćelije je kultivisana u prisustvu jedinjenja iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 13 od oko 3 dana do oko 90 dana, poželjno između 7 do 35 dana; i/ili (ii) pomenuta početna populacija ćelije se kultiviše u prisustvu jedinjenja iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 13 tokom vremenskog perioda dovoljnog za 100-struku do 10,000-struku ekspanziju CD34+ ćelija.
  28. 28. Postupak iz patentnog zahteva 27, pri čemu se pomenuta početna populacija ćelije kultiviše u prisustvu jedinjenja iz bilo kog od patentnih zahteva 1 do 13 tokom ne duže od 21 dana, 14 dana ili 7 dana i/ili sve dok se ne dobiju naznačen broj ekspanzija i karakteristične populacije ćelije.
RS20190863A 2008-10-30 2009-10-29 Jedinjenja koja ekspandiraju hematopoezne matične ćelije RS59027B1 (sr)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US10982108P 2008-10-30 2008-10-30
US24276509P 2009-09-15 2009-09-15
PCT/US2009/062646 WO2010059401A2 (en) 2008-10-30 2009-10-29 Compounds that expand hematopoietic stem cells
EP09748626.0A EP2350078B1 (en) 2008-10-30 2009-10-29 Compounds that expand hematopoietic stem cells

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS59027B1 true RS59027B1 (sr) 2019-08-30

Family

ID=42111339

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20190863A RS59027B1 (sr) 2008-10-30 2009-10-29 Jedinjenja koja ekspandiraju hematopoezne matične ćelije

Country Status (41)

Country Link
US (4) US8927281B2 (sr)
EP (2) EP2350078B1 (sr)
JP (1) JP5390626B2 (sr)
KR (1) KR101434719B1 (sr)
CN (1) CN102203096B (sr)
AR (1) AR074063A1 (sr)
AU (1) AU2009317898B2 (sr)
BR (1) BRPI0921799B8 (sr)
CA (3) CA2740589C (sr)
CL (2) CL2009002010A1 (sr)
CO (1) CO6410309A2 (sr)
CR (1) CR20110192A (sr)
CU (1) CU24495B1 (sr)
CY (1) CY1121857T1 (sr)
DK (1) DK2350078T3 (sr)
DO (1) DOP2011000114A (sr)
EA (1) EA019872B1 (sr)
EC (1) ECSP11011090A (sr)
ES (2) ES2736728T3 (sr)
GE (1) GEP20146053B (sr)
HN (1) HN2011001195A (sr)
HR (1) HRP20191238T1 (sr)
HU (1) HUE044802T2 (sr)
IL (1) IL212368A (sr)
JO (1) JO3593B1 (sr)
LT (1) LT2350078T (sr)
MA (1) MA32828B1 (sr)
MX (1) MX347834B (sr)
MY (1) MY155137A (sr)
NI (1) NI201100083A (sr)
NZ (1) NZ592435A (sr)
PE (1) PE20100362A1 (sr)
PL (1) PL2350078T3 (sr)
PT (1) PT2350078T (sr)
RS (1) RS59027B1 (sr)
SI (1) SI2350078T1 (sr)
SM (1) SMP201100024B (sr)
SV (1) SV2011003888A (sr)
TN (1) TN2011000174A1 (sr)
TW (1) TWI532486B (sr)
WO (1) WO2010059401A2 (sr)

Families Citing this family (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8846393B2 (en) * 2005-11-29 2014-09-30 Gamida-Cell Ltd. Methods of improving stem cell homing and engraftment
JP2010522719A (ja) * 2007-03-28 2010-07-08 ノイロサーチ アクティーゼルスカブ プリニル誘導体及びカリウムチャネルモジュレーターとしてのそれらの使用
EP2132208A1 (en) * 2007-03-28 2009-12-16 NeuroSearch AS Purinyl derivatives and their use as potassium channel modulators
JP2011521968A (ja) * 2008-05-30 2011-07-28 ジェネンテック， インコーポレイテッド プリンｐｉ３ｋ阻害剤化合物および使用方法
EP2344501A1 (en) * 2008-09-26 2011-07-20 NeuroSearch A/S Substituted purinyl-pyrazol derivatives and their use as potassium channel modulators
WO2010034707A1 (en) * 2008-09-26 2010-04-01 Neurosearch A/S Substituted purinyl-pyrazol derivatives and their use as potassium channel modulators
PE20100362A1 (es) * 2008-10-30 2010-05-27 Irm Llc Derivados de purina que expanden las celulas madre hematopoyeticas
JP5946775B2 (ja) * 2010-12-01 2016-07-06 日産化学工業株式会社 ピラゾール化合物による造血幹細胞の製造方法
WO2012102937A2 (en) * 2011-01-25 2012-08-02 Irm Llc Compounds that expand hematopoietic stem cells
WO2012167053A1 (en) * 2011-06-01 2012-12-06 Janus Biotherapeutics, Inc. Novel immune system modulators
US20140205582A1 (en) * 2011-07-06 2014-07-24 Cellerant Therapeutics, Inc. Megakaryocyte progenitor cells for production of platelets
JP2014526887A (ja) * 2011-08-01 2014-10-09 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 造血幹細胞移植の成功率を改善する方法
EP2753315B1 (en) * 2011-09-07 2017-03-01 Deutsches Krebsforschungszentrum Means and methods for treating and/or preventing natural ahr ligand-dependent cancer
CA2858069C (en) 2011-12-08 2020-02-11 Novartis Ag Compositions and methods for enhanced generation of hematopoietic stem/progenitor cells
PT2807165T (pt) 2012-01-27 2019-07-12 Univ Montreal Derivados de pirimido[4,5-b]indole e sua utilização na expansão de células estaminais hematopoiéticas
HK1202581A1 (en) 2012-02-13 2015-10-02 Gamida-Cell Ltd. Mesenchymal stem cells conditioned medium and methods of generating and using the same
CA2876780A1 (en) 2012-06-26 2014-01-03 Saniona Aps A phenyl triazole derivative and its use for modulating the gabaa receptor complex
US9567569B2 (en) * 2012-07-23 2017-02-14 Gamida Cell Ltd. Methods of culturing and expanding mesenchymal stem cells
US9175266B2 (en) 2012-07-23 2015-11-03 Gamida Cell Ltd. Enhancement of natural killer (NK) cell proliferation and activity
US9074186B2 (en) 2012-08-15 2015-07-07 Boston Medical Center Corporation Production of red blood cells and platelets from stem cells
EP2943566A1 (en) 2013-01-08 2015-11-18 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for expansion of embryonic hematopoietic stem cells
WO2014138485A1 (en) 2013-03-08 2014-09-12 Irm Llc Ex vivo production of platelets from hematopoietic stem cells and the product thereof
CA2848575C (en) * 2013-05-17 2021-01-26 Universite De Montreal Methods to modulate acute myeloid leukemia stem/progenitor cell expansion and/or differentiation
ES2747951T3 (es) * 2013-10-24 2020-03-12 Ospedale San Raffaele Srl Método
MX389160B (es) 2013-10-31 2025-03-20 Hutchinson Fred Cancer Res Células no t efectoras y madre/progenitoras hematopoyéticas modificadas y usos de estas.
UA115388C2 (uk) 2013-11-21 2017-10-25 Пфайзер Інк. 2,6-заміщені пуринові похідні та їх застосування в лікуванні проліферативних захворювань
US10350245B2 (en) 2015-01-21 2019-07-16 Fred Hutchinson Cancer Research Center Point-of-care and/or portable platform for gene therapy
EP3288570A4 (en) 2015-04-29 2018-11-21 Fred Hutchinson Cancer Research Center Modified stem cells and uses thereof
WO2016176651A2 (en) 2015-04-29 2016-11-03 Fred Hutchinson Cancer Research Center Modified hematopoietic stem/progenitor and non-t effector cells, and uses thereof
MY201637A (en) * 2015-10-15 2024-03-06 Celularity Inc Natural killer cells and ilc3 cells and uses thereof
EP3842450A1 (en) 2015-10-23 2021-06-30 Eureka Therapeutics, Inc. Antibody/t-cell receptor chimeric constructs and uses thereof
MX2018005274A (es) 2015-10-30 2019-09-19 The Regents Of The Universtiy Of California Metodos para la generacion de celulas-t a partir de celulas madre y metodos inmunoterapeuticos que utilizan las celulas-t.
KR102860636B1 (ko) * 2015-12-28 2025-09-17 노파르티스 아게 혈색소병증의 치료를 위한 조성물 및 방법
AU2017250295B2 (en) 2016-04-14 2022-08-25 Fred Hutchinson Cancer Center Compositions and methods to program therapeutic cells using targeted nucleic acid nanocarriers
CN109843304A (zh) * 2016-05-07 2019-06-04 细胞结构公司 使用自然杀伤细胞治疗急性髓性白血病和多发性骨髓瘤的方法
CA3025227A1 (en) 2016-05-25 2017-11-30 Bayer Pharma Aktiengesellschaft 3-oxo-2,6-diphenyl-2,3-dihydropyridazine-4-carboxamides
WO2018013430A2 (en) 2016-07-12 2018-01-18 Arisan Therapeutics Inc. Heterocyclic compounds for the treatment of arenavirus infection
KR102522572B1 (ko) * 2016-08-18 2023-04-17 내셔널 유니버시티 오브 싱가포르 조혈 줄기 및 전구 세포의 생성, 증식 및 분화를 위한 치환된 아졸 유도체
JP2019532672A (ja) 2016-09-28 2019-11-14 ノバルティス アーゲー 多孔質膜系巨大分子送達システム
TW201839136A (zh) 2017-02-06 2018-11-01 瑞士商諾華公司 治療血色素異常症之組合物及方法
JP7128826B2 (ja) 2017-02-09 2022-08-31 バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト がん治療のための２－ヘテロアリール－３－オキソ－２，３－ジヒドロピリダジン－４－カルボキサミド類
MX392743B (es) 2017-04-12 2025-03-12 Magenta Therapeutics Inc Antagonistas del receptor de hidrocarburo de arilo y sus usos.
WO2018195397A2 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Kyn Therapeutics Indole ahr inhibitors and uses thereof
WO2018200585A1 (en) 2017-04-26 2018-11-01 Eureka Therapeutics, Inc. Cells expressing chimeric antigen receptors and secondary effectors and uses thereof
WO2019018562A1 (en) 2017-07-19 2019-01-24 Ideaya Biosciences, Inc. AMIDO COMPOUND AS MODULATORS OF AHR
CA3066711A1 (en) 2017-07-31 2019-02-07 Novartis Ag Use of mavoglurant in the reduction of cocaine use or in preventing relapse into cocaine use
US12291533B2 (en) * 2017-08-02 2025-05-06 Northwestern University Substituted fused pyrimidine compounds and uses thereof
CA3077325A1 (en) 2017-09-28 2019-04-04 Celularity Inc. Tumor suppression using human placenta-derived intermediate natural killer (pink) cells in combination with an antibody
BR112020006256A2 (pt) 2017-09-29 2020-10-20 Intellia Therapeutics, Inc. método in vitro de administração de mrna usando nanopartículas de lipídio
WO2019089833A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Magenta Therapeutics Inc. Compositions and methods for hematopoietic stem and progenitor cell transplant therapy
EP3704232A1 (en) 2017-10-31 2020-09-09 Magenta Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the expansion of hematopoietic stem and progenitor cells
WO2019101641A1 (en) 2017-11-21 2019-05-31 Bayer Aktiengesellschaft 2-hetarylpyrimidine-4-carboxamides as aryl hydrocarbon receptor anatgonists
EP3713922A1 (en) 2017-11-21 2020-09-30 Bayer Aktiengesellschaft Sulphur substituted 3-oxo-2,3-dihydropyridazine-4-carboxamides
CA3082858A1 (en) 2017-11-21 2019-05-31 Bayer Aktiengesellschaft 2-phenylpyrimidine-4-carboxamides as ahr inhibitors
EP3713931B1 (en) 2017-11-21 2025-03-05 Deutsches Krebsforschungszentrum 3-oxo-6-heteroaryl-2-phenyl-2,3-dihydropyridazine-4-carboxamides
CN111712262A (zh) 2017-12-06 2020-09-25 美真达治疗公司 用于动员造血干细胞和祖细胞的给药方案
US11260079B2 (en) 2017-12-06 2022-03-01 Magenta Therapeutics, Inc. Dosing regimens for the mobilization of hematopoietic stem and progenitor cells
EP3735412B1 (en) * 2018-01-03 2024-02-21 EdiGene Biotechnology, Inc. Compositions and methods for the expansion of hematopoietic stem and progenitor cells and treatment of inherited metabolic disorders
WO2019156989A1 (en) * 2018-02-06 2019-08-15 Ideaya Biosciences, Inc. COMPOUNDS AND METHODS FOR THE MODULATION OF AhR
US20220340875A1 (en) * 2018-07-19 2022-10-27 Ideaya Biosciences, Inc. Methods of culturing and/or expanding stem cells and/or lineage committed progenitor cells using amido compounds
CN112739698A (zh) 2018-08-24 2021-04-30 捷豹治疗有限公司 作为ahr调节剂的四氢嘧啶衍生物
EP3843853A1 (en) 2018-08-31 2021-07-07 Jaguahr Therapeutics Pte Ltd Heterocyclic compounds as ahr modulators
JP7448527B2 (ja) 2018-09-07 2024-03-12 大塚製薬株式会社 ヘテロ環式化合物
EP3849565A4 (en) 2018-09-12 2022-12-28 Fred Hutchinson Cancer Research Center REDUCTION OF CD33 EXPRESSION TO SELECTIVELY PROTECT THERAPEUTIC CELLS
US20220144839A1 (en) * 2018-10-16 2022-05-12 Ikena Oncology, Inc. Indole ahr inhibitors and uses thereof
EP3874027A4 (en) * 2018-10-31 2022-08-10 Magenta Therapeutics, Inc. METHODS OF HEMATOPOIETIC STEM AND PROGENITOR CELL TRANSPLANTATION THERAPY
US12419865B2 (en) 2018-12-06 2025-09-23 Arisan Therapeutics Inc. Compounds for the treatment of arenavirus infection
IL290445B1 (en) * 2019-08-12 2026-02-01 Bayer Ag [4,2,1]Triazolo[5,1-c]quinazolin-5-amines
US20220401481A1 (en) 2019-11-01 2022-12-22 Magenta Therapeutics, Inc. Dosing regimens for the mobilization of hematopoietic stem and progenitor cells
PT4065582T (pt) 2019-11-26 2025-05-22 Ikena Oncology Inc Derivados polimórficos do carbazol e utilizações dos mesmos
IL291322B2 (en) 2019-12-09 2026-02-01 Otsuka Pharma Co Ltd Acrylamide compounds
CN115176005A (zh) 2019-12-18 2022-10-11 诺华股份有限公司 用于治疗血红蛋白病的组合物和方法
US20230279000A1 (en) * 2020-02-26 2023-09-07 Jaguahr Therapeutics Pte Ltd Pyridopyrimidine derivatives useful in modulation of ahr signalling
EP4146797A1 (en) 2020-05-06 2023-03-15 Orchard Therapeutics (Europe) Limited Treatment for neurodegenerative diseases
US20230212613A1 (en) 2020-05-06 2023-07-06 Cellectis S.A. Methods for targeted insertion of exogenous sequences in cellular genomes
EP4146284A1 (en) 2020-05-06 2023-03-15 Cellectis S.A. Methods to genetically modify cells for delivery of therapeutic proteins
EP4177337A4 (en) 2020-07-01 2024-12-11 Nextgem Inc. MARKER OF HUMAN HEMATOPOIETIC LONG-TERM STEM CELLS
WO2022029063A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Bayer Aktiengesellschaft Pyrido[1,2,4]triazolo[1,5-c]pyrimidin-5-amines
WO2022078356A1 (zh) * 2020-10-15 2022-04-21 山东轩竹医药科技有限公司 杂芳环类AhR抑制剂
WO2022197776A1 (en) 2021-03-16 2022-09-22 Magenta Therapeutics, Inc. Dosing regimens for hematopoietic stem cell mobilization for stem cell transplants in multiple myeloma patients
US20250127809A1 (en) 2021-06-23 2025-04-24 Novartis Ag Compositions and methods for the treatment of hemoglobinopathies
EP4476331A2 (en) 2022-02-07 2024-12-18 Ensoma, Inc. Inhibitor-resistant mgmt modifications and modification of mgmt-encoding nucleic acids
US12191004B2 (en) 2022-06-27 2025-01-07 Microsoft Technology Licensing, Llc Machine learning system with two encoder towers for semantic matching
CN119790063A (zh) 2022-07-22 2025-04-08 莱尔免疫制药股份有限公司 免疫细胞疗法
WO2024076300A1 (en) 2022-10-03 2024-04-11 Jaguahr Therapeutics Pte Ltd Compounds useful in modulation of ahr signalling

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3399196A (en) 1959-01-22 1968-08-27 Ciba Geigy Corp Nu-substituted pyrazolo-pyrimidines
DE3150486A1 (de) * 1981-12-19 1983-08-25 Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt Imidazo(4,5-c)pyridine, diese enthaltende pharmazeutische zubereitungen und verfahren zu ihrer herstellung
US5437994A (en) * 1989-06-15 1995-08-01 Regents Of The University Of Michigan Method for the ex vivo replication of stem cells, for the optimization of hematopoietic progenitor cell cultures, and for increasing the metabolism, GM-CSF secretion and/or IL-6 secretion of human stromal cells
US5117830A (en) 1990-11-08 1992-06-02 Whitby Research, Inc. Method of determining viability of tissue
EP0682027B1 (de) * 1994-05-03 1997-10-15 Novartis AG Pyrrolopyrimidinderivate mit antiproliferativer Wirkung
FR2732604B1 (fr) * 1995-04-07 1997-06-06 Vacsyn Sa Derives et conjugues du mdp presentant une activite stimulatrice de la fonction hematopoietique et compositions les contenant
FR2741881B1 (fr) 1995-12-01 1999-07-30 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de purine possedant notamment des prorietes anti-proliferatives et leurs applications biologiques
US6232320B1 (en) * 1998-06-04 2001-05-15 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory compounds
JP2002529502A (ja) 1998-11-17 2002-09-10 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 血小板減少症の治療法
GC0000177A (en) 1998-12-17 2006-03-29 Smithkline Beecham Thrombopoietin mimetics
HUP0200535A3 (en) * 1999-02-01 2002-11-28 Cv Therapeutics Inc Palo Alto 2,6,9-trisubstituted purine derivatives inhibitors of cyclin dependent kinase 2 and ikappa-b-alpha and pharmaceutical compositions containing them
AU4692400A (en) 1999-05-03 2000-11-17 Smithkline Beecham Corporation Cxcr-4 receptor antagonists - thrombopoietin mimetics
US6960439B2 (en) * 1999-06-28 2005-11-01 Source Precision Medicine, Inc. Identification, monitoring and treatment of disease and characterization of biological condition using gene expression profiles
CN1110552C (zh) * 1999-07-13 2003-06-04 中国人民解放军第二军医大学 一种体外扩增造血干细胞的新方法
EP1213965B1 (en) 1999-09-10 2006-01-18 Smithkline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
ATE350044T1 (de) 1999-09-24 2007-01-15 Smithkline Beecham Corp Thrombopoietinmimetika
WO2001034585A1 (en) 1999-11-05 2001-05-17 Smithkline Beecham Corporation Semicarbazone derivatives and their use as thrombopoietin mimetics
AU2079901A (en) 1999-12-06 2001-06-12 Smithkline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
DE60028253T2 (de) 1999-12-17 2007-03-08 Ariad Pharmaceuticals, Inc., Cambridge Neue purine
ATE322494T1 (de) * 2000-01-07 2006-04-15 Universitaire Instelling Antwe Purin derivate, ihre herstellung und verwendung
CY2010012I2 (el) 2000-05-25 2020-05-29 Novartis Ag Μιμητικα θρομβοποιητινης
AU7107301A (en) * 2000-07-18 2002-01-30 Nichimo Co. Ltd. Stem cell reinforcing material
WO2002049413A2 (en) 2000-12-19 2002-06-27 Smithkline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
WO2002085343A1 (en) 2001-03-01 2002-10-31 Smithkline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
EP1578722A4 (en) * 2001-10-12 2006-09-06 Irm Llc KINASEINHIBITOR SCAFFOLD AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF
EP1459758B1 (en) * 2001-12-28 2009-02-25 Asubio Pharma Co., Ltd. Cofilin for promoting the proliferation and/or differentiation of hematopoietic stem cells and/or hematopoietic precursor cells
AU2003248630A1 (en) 2002-06-06 2003-12-22 Smithkline Beecham Corporation Thrombopoietin mimetics
US20030139427A1 (en) * 2002-08-23 2003-07-24 Osi Pharmaceuticals Inc. Bicyclic pyrimidinyl derivatives and methods of use thereof
JP2004089068A (ja) * 2002-08-30 2004-03-25 Kobe University Ａｈ受容体リガンド特異的な遺伝子発現誘導因子及びその機能に基づく異種遺伝子誘導発現系の利用技術
EP1581527A4 (en) 2002-12-13 2006-11-22 Smithkline Beecham Corp MIMETICS OF THROMBOPOIETINE
WO2005020892A2 (en) * 2003-08-08 2005-03-10 Mitochroma Research, Inc. Pharmaceutical compositions and methods for metabolic modulation
WO2005026164A1 (en) 2003-09-18 2005-03-24 Altana Pharma Ag Pharmacologically active imidazo[4,5-c]pyridines
CA2548951A1 (en) 2003-12-22 2005-07-14 Gilead Sciences, Inc. Kinase inhibitor phosphonate conjugates
WO2005080377A1 (ja) 2004-02-20 2005-09-01 Kirin Beer Kabushiki Kaisha TGFβ阻害活性を有する化合物およびそれを含んでなる医薬組成物
US7622108B2 (en) * 2004-04-23 2009-11-24 Bioe, Inc. Multi-lineage progenitor cells
KR20070063507A (ko) * 2004-09-03 2007-06-19 프로메틱 바이오사이언시즈 인코포레이티드 면역조절작용과 화학방어활성을 가진 치환된 퓨리닐 유도체및 단독 또는 중쇄 길이 지방산이나 글리세리드와의 혼합사용
GB0420719D0 (en) * 2004-09-17 2004-10-20 Addex Pharmaceuticals Sa Novel allosteric modulators
WO2006035061A1 (en) 2004-09-30 2006-04-06 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hcv inhibiting bi-cyclic pyrimidines
FR2876583B1 (fr) 2004-10-15 2007-04-13 Centre Nat Rech Scient Cnrse Utilisation de derives de purines pour la fabrication de medicaments pour le traitement de la mucoviscidose et de maladies liees a un defaut d'adressage des proteines dans les cellules
CA2589448A1 (en) 2004-12-09 2006-06-15 Altana Pharma Ag Substituted imidazo[4,5-b]pyridines as inhibitors of gastric acid secretion
WO2006118914A2 (en) * 2005-04-29 2006-11-09 Children's Medical Center Corporation Methods of increasing proliferation of adult mammalian cardiomyocytes through p38 map kinase inhibition
ATE478863T1 (de) 2005-07-14 2010-09-15 Irm Llc Heterotetracyclische verbindungen als tpo- mimetica
US7816542B2 (en) 2005-08-15 2010-10-19 Irm Llc Compounds and compositions as TPO mimetics
EP2322525B1 (en) * 2006-04-21 2013-09-18 Novartis AG Purine derivatives for use as adenosin A2A receptor agonists
KR20090021217A (ko) 2006-06-14 2009-02-27 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 조혈 줄기세포 증가 촉진제
WO2007149548A2 (en) * 2006-06-22 2007-12-27 Medistem Laboratories, Inc. Treatment of erectile dysfunction by stem cell therapy
EP1889846A1 (en) * 2006-07-13 2008-02-20 Novartis AG Purine derivatives as A2a agonists
WO2008028645A1 (en) 2006-09-05 2008-03-13 Aplagen Gmbh Peptides binding the tpo receptor
EP2617423A1 (en) 2006-10-19 2013-07-24 Genzyme Corporation Purine derivatives for the treatment of cystic diseases
US9394520B2 (en) 2006-12-08 2016-07-19 University Of Rochester Expansion of hematopoietic stem cells
EP2132208A1 (en) 2007-03-28 2009-12-16 NeuroSearch AS Purinyl derivatives and their use as potassium channel modulators
ES2494365T3 (es) * 2008-01-30 2014-09-15 Genentech, Inc. Compuestos de pirazolopirimidina que inhiben PI3K y métodos de uso
PE20100362A1 (es) * 2008-10-30 2010-05-27 Irm Llc Derivados de purina que expanden las celulas madre hematopoyeticas
US9175266B2 (en) * 2012-07-23 2015-11-03 Gamida Cell Ltd. Enhancement of natural killer (NK) cell proliferation and activity

Also Published As

Publication number Publication date
AU2009317898A1 (en) 2010-05-27
EP2350078A2 (en) 2011-08-03
ES2736728T3 (es) 2020-01-07
PT2350078T (pt) 2019-07-19
PL2350078T3 (pl) 2019-09-30
CL2009002010A1 (es) 2010-06-25
HRP20191238T1 (hr) 2019-11-29
JP5390626B2 (ja) 2014-01-15
IL212368A0 (en) 2011-06-30
SI2350078T1 (sl) 2019-08-30
MX347834B (es) 2016-10-07
US9580426B2 (en) 2017-02-28
GEP20146053B (en) 2014-03-10
IL212368A (en) 2015-02-26
SMP201100024B (it) 2012-03-05
KR101434719B1 (ko) 2014-08-27
CA2943540A1 (en) 2010-05-27
CU20110096A7 (es) 2012-01-31
CY1121857T1 (el) 2020-07-31
TWI532486B (zh) 2016-05-11
JO3593B1 (ar) 2020-07-05
HUE044802T2 (hu) 2019-11-28
CR20110192A (es) 2011-06-10
CN102203096A (zh) 2011-09-28
WO2010059401A2 (en) 2010-05-27
SV2011003888A (es) 2011-07-05
SMAP201100024A (it) 2011-07-11
AR074063A1 (es) 2010-12-22
ECSP11011090A (es) 2011-09-30
CN102203096B (zh) 2014-09-17
AU2009317898B2 (en) 2013-07-11
MX2011004593A (es) 2011-06-16
JP2012507554A (ja) 2012-03-29
EA201100663A1 (ru) 2011-12-30
LT2350078T (lt) 2019-07-25
EP3524604B1 (en) 2023-03-29
US20210187033A1 (en) 2021-06-24
CA2740589C (en) 2017-11-21
US20100183564A1 (en) 2010-07-22
EP3524604A1 (en) 2019-08-14
DK2350078T3 (da) 2019-07-15
DOP2011000114A (es) 2017-09-29
CU24495B1 (es) 2021-01-12
US20140114070A1 (en) 2014-04-24
CA3061937A1 (en) 2010-05-27
ES2948567T3 (es) 2023-09-14
EP2350078B1 (en) 2019-04-17
BRPI0921799B1 (pt) 2020-09-29
US8927281B2 (en) 2015-01-06
CO6410309A2 (es) 2012-03-30
PE20100362A1 (es) 2010-05-27
BRPI0921799A2 (pt) 2016-01-12
MY155137A (en) 2015-09-15
CA2943540C (en) 2020-10-27
TW201028153A (en) 2010-08-01
CL2013001874A1 (es) 2014-04-04
KR20110075042A (ko) 2011-07-05
CA2740589A1 (en) 2010-05-27
BRPI0921799B8 (pt) 2021-05-25
TN2011000174A1 (en) 2012-12-17
EA019872B1 (ru) 2014-06-30
NZ592435A (en) 2013-01-25
WO2010059401A3 (en) 2010-09-23
NI201100083A (es) 2011-11-03
MA32828B1 (fr) 2011-11-01
HN2011001195A (es) 2014-01-13
US20170239296A1 (en) 2017-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210187033A1 (en) Compounds that expand hematopoietic stem cells
JP6250556B2 (ja) ピリミド［４，５−ｂ］インドール誘導体及び造血幹細胞の増殖におけるその使用
US9567569B2 (en) Methods of culturing and expanding mesenchymal stem cells
WO2014138485A1 (en) Ex vivo production of platelets from hematopoietic stem cells and the product thereof
WO2012102937A2 (en) Compounds that expand hematopoietic stem cells
HK40011563A (en) Expanded hematopoietic stem cells from cord blood and their therapeutic use
AU2013203936A1 (en) Compounds that expand hematopoietic stem cells
HK1153999A (en) Compounds that expand hematopoietic stem cells
HK1153999B (en) Compounds that expand hematopoietic stem cells