RS60959B1 - Triterpenoidi sa inhibitornom aktivnošću na sazrevanje hiv, supstituisani na položaju 3 sa alifatičnim prstenom koji sadrži haloalkil supstituent - Google Patents

Triterpenoidi sa inhibitornom aktivnošću na sazrevanje hiv, supstituisani na položaju 3 sa alifatičnim prstenom koji sadrži haloalkil supstituent

Info

Publication number
RS60959B1
RS60959B1 RS20201276A RSP20201276A RS60959B1 RS 60959 B1 RS60959 B1 RS 60959B1 RS 20201276 A RS20201276 A RS 20201276A RS P20201276 A RSP20201276 A RS P20201276A RS 60959 B1 RS60959 B1 RS 60959B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
mmol
mixture
fluoromethyl
cyclohex
cyclopenta
Prior art date
Application number
RS20201276A
Other languages
English (en)
Inventor
Sing-Yuen Sit
Yan Chen
Jie Chen
Jacob Swidorski
Brian Lee Venables
Ny Sin
Nicholas A Meanwell
Alicia Regueiro-Ren
Richard A Hartz
Li Xu
Zheng Liu
Original Assignee
Viiv Healthcare Uk No 4 Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=53002809&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS60959(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Viiv Healthcare Uk No 4 Ltd filed Critical Viiv Healthcare Uk No 4 Ltd
Publication of RS60959B1 publication Critical patent/RS60959B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
    • C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C309/00—Sulfonic acids; Halides, esters, or anhydrides thereof
    • C07C309/63—Esters of sulfonic acids
    • C07C309/64—Esters of sulfonic acids having sulfur atoms of esterified sulfo groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C309/65—Esters of sulfonic acids having sulfur atoms of esterified sulfo groups bound to acyclic carbon atoms of a saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C309/00—Sulfonic acids; Halides, esters, or anhydrides thereof
    • C07C309/63—Esters of sulfonic acids
    • C07C309/64—Esters of sulfonic acids having sulfur atoms of esterified sulfo groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C309/65—Esters of sulfonic acids having sulfur atoms of esterified sulfo groups bound to acyclic carbon atoms of a saturated carbon skeleton
    • C07C309/66—Methanesulfonates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/06—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D239/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms directly attached in position 2
    • C07D239/12—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D279/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one sulfur atom as the only ring hetero atoms
    • C07D279/10—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines
    • C07D279/12—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines not condensed with other rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
    • C07F5/02—Boron compounds
    • C07F5/025—Boronic and borinic acid compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
    • C07F5/02—Boron compounds
    • C07F5/04—Esters of boric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/16—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring the ring being unsaturated

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Opis
POLJE PRONALASKA
[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na nova jedinjenja korisna protiv HIV i, još preciznije, na jedinjenja dobijena od betulinske kiseline i drugih strukturno povezanih jedinjenja koja su korisna kao inhibitori sazrevanja HIV, i na farmaceutske kompozicije koje ih sadrže kao i na postupke za njihovu izradu.
POREKLO PRONALASKA
[0002] Infekcija HIV-1 (humani imunodeficijentni virus -1) ostaje glavni medicinski problem sa kako se procenjuje 45-50 miliona ljudi širom sveta inficiranih do kraja 2010. Broj slučajeva HIV i AIDS (stečeni imunodeficijentni sindrom) je rapidno porastao. U 2005., je zabeleženo približno 5.0 miliona novih infekcija 3.1 milion ljudi je umrlo od AIDS. Trenutno raspoloživi lekovi za tretman HIV uključuju nukleozid inhibitore reverzne transkriptaze (RT) ili kombinacije pojedinačnih odobrenih pilula: zidovudina (ili AZT ili RETROVIR®), didanozina (ili VIDEX®), starvudina (ili ZERIT®), lamivudin(ili (ili 3TC ili EPIVIR®), zalcitabina (ili DDC ili HIVID®), abakavir sukcinata (ili ZIAGEN®), Tenofovir dizoproksil fumaratne soli (ili VIREAD®), emtricitabina (ili FTC- EMTRIVA®), COMBIVIR® (sadrži -3TC plus AZT), TRIZIVIR® (sadrži abakavir, lamivudin i zidovudin), EPZICOM® (sadrži abakavir i lamivudin), TRUVADA® (sadrži VIREAD® i EMTRIVA®); inhibitore nonreverzne transkriptaze: nevirapin (ili VIRAMUNE®), delavirdin (ili RESCRIPTOR®) i efavirenz (ili SUSTIVA®), ATRIPLA® (TRUVADA® SUSTIVA®) i etravirin i inhibitore peptidomimetične proteaze ili odobrene formulacije: sakvinavira, indinavira, ritonavira, nelfinavira, amprenavira, lopinavira, KALETRA® (lopinavira i Ritonavira), darunavira, atazanavira (REYATAZ®) i tipranavira (APTI- VUS®) i kobicistata i inhibitore integraze kao što je raltegravir (ISENTRESS®) i inhibitore unošenja kao što su enfuvirtid (T-20) (FUZEON®) i maravirok (SELZENTRY®).
[0003] Svaki od ovih lekova može samo prolazno da zaustavi replikaciju virusa ukoliko se koristi sam. Međutim, kada se koriste u kombinaciji, ovi lekovi imaju snažan efekat na progresiju viremije i bolesti. U stvari, značajno smanjenje u broju umrlih među AIDS pacijentima je nedavno dokumentovano kao posledica široko rasprostranjene primene kombinovane terapije. Međutim, uprkos ovim impresivnim rezultatima, kod 30 do 50% pacijenata terapija kombinovanim lekovima ne daje rezultat. Nedovoljna potencija leka, ne pridržavanje režima, ograničena penetracija u tkiva i ograničenja specifičnih lekova za određene tipove ćelija (na primer, većina analoga nukleozida ne može da se fosforiliše u ćelijama u mirovanju) mogu da budu razlog za nepotpunu supresiju osetljivih virusa. Osim toga, veliki stepen replikacije i brza promena HIV-1 kombinovano sa čestom inkorporacijom mutacija, dovodi do pojave varijanti rezistentnih na lek i neuspešnog tretmana kada su prisutne suboptimalne koncentracije leka. Prema tome, nova anti-HIV sredstva koja ispoljavaju jasne oblike rezistencije i bolju farmakokinetiku kao i bezbednosne profile su potrebna za obezbeđivanje više opcija tretmana. Poboljšani inhibitori HIV fuzije i antagonisti koreceptora ulaska HIV su dva primera novih klasa anti-HIV sredstava koja se dalje ispituju od strane brojnih istraživača.
[0004] Inhibitori vezivanja HIV su naredna subklasa antivirusnih jedinjenja koja se vezuju za površinu HIV glikoproteina gp120 i ometaju interakciju između površine proteina gp120 i receptora CD4 ćelije domaćina. Prema tome, ona sprečavaju vezivanje HIV za humane CD4 T-ćelije i blokiraju HIV replikaciju u prvom stepenu životnog ciklusa HIV. Osobine inhibitora vezivanja HIV su poboljšane u naporu da se dobiju jedinjenja koja su maksimalno korisna i efikasna kao antivirusna sredstva. Preciznije, US 7,354,924 i US 7,745,625 su ilustrativni inhibitori vezivanja HIV.
[0005] Pojavljuje se druga klasa jedinjenja za tretman HIV i označena je kao inhibitori sazrevanja HIV. Sazrevanje je poslednja od čak 10 ili više faza u HIV replikaciji ili životnom ciklusu HIV, u kome HIV postaje infektivan kao posledica nekoliko slučajeva cepanja posredstvom HIV proteaze u gag proteinu što obavezno dovodi do oslobađanja kapsid (CA) proteina. Inhibitori sazrevanja sprečavaju HIV kapsid od odgovarajućeg uređenja i sazrevanja, od formiranja zaštitnog spoljašnjeg omotača ili od pravilnog uređenja i sazrevanja formiranjem zaštitnog spoljašnjeg omotača ili od pojavljivanja iz humanih ćelija. Umesto toga, stvaraju se ne-infektivni virusi koji sprečavaju naredne cikluse HIV infekcije.
[0006] Sada je pokazano da neki derivati betulinske kiseline ispoljavaju potentnu anti-HIV aktivnost kao inhibitori sazrevanja HIV. Na primer US 7,365,221 otkriva derivate monoacilovanog betulina i dihidrobetulina i njihovu upotrebu kao anti-HIV sredstava. Kako je navedeno u ’221 referenci, esterifikacijom betulinske kiseline (1) sa nekim supstituisanim acil grupama, kao što su 3’,3’-dimetilglutaril i 3’,3’-dimetilsukcinil grupe dobijaju se derivati koji imaju pojačanu aktivnost (Kashiwada, Y., i saradnici, J. Med. Chem.39:1016-1017 (1996)). Derivati acilovani betulinske kiseline i dihidrobetulinske kiseline koji su potentna anti-HIV sredstva su takođe opisani u U.S. Pat. No.5,679,828. Esterifikacijom hidroksilne grupe na ugljeniku 3 betulina sa sukcinatnom kiselinom se takođe dobija jedinjenje sposobno da inhibira aktivnost HIV-1 (Pokrovskii, A. G., i saradnici, "Synthesis of derivatives of plant triterpens and study of their antiviral and immunostimulating activity," Khimiya y Interesakh Ustoichivogo Razvitiya, Vol.9, No.3, pp.485-491 (2001) (English abstract).
[0007] Druge reference za lečenje HIV infekcije upotrebom jedinjenja dobijenih od betulinske kiseline uključuju US 2005/0239748 i US 2008/0207573, kao i WO2006/053255, WO2009/100532 i WO2011/007230.
[0008] Jedno jedinjenje za sazrevanje HIV koje je u razvoju je označeno kao Bevirimat ili PA-457, sa hemijskom formulom C36H56O6i IUPAC nazivom 3β-(3-karboksi-3-metilbutanoiloksi) lup-20(29)-en-28-karboksilna kiselina.
[0009] Ovde su takođe kao reference prijave Bristol-Myers Squibb pod nazivom "MODIFIED C-3 BETULINSKA KISELINA DERIVATIVES AS HIV MATURATION INHIBITORS" USSN 13/151,706 prijavljeno 2. juna, 2011., (sada US 8,754,068) i "C-28 AMIDS OF MODIFIED C-3 BETULINSKA KISELINA DERIVATIVES AS HIV MATURATION INHIBITORS" USSN 13/151,722, prijavljeno 2. Juna, 2011., (sada US 8,802,661). U referencama se takođe pominje prijava pod nazivom "C-28 AMINS OF C-3 MODIFIED BETULINSKA KISELINA DERIVATIVES AS HIV MATURATION INHIBITORS" USSN 13/359,680, prijavljena 27. Januara, 2012., (sada US 8,748,415). Pored toga, u referencama se takođe pominje prijava pod nazivom "C-17 AND C-3 MODIFIED TRITERPENOIDS WITH HIV MATURATION INHIBITORY ACTIVITY" USSN 13/359,727 prijavljena 27. Januara, 2012., (sada US 8,846,647). Takođe se kao referenca uzima prijava "C-3 CIKLOALKENIL TRITERPENOIDS WITH HIV MATURATION INHIBITORY ACTIVITY" odneta USSN 13/760,726 6. Februara, 2013., (sada US 8,906,889 i povezana prijava WO-A-2013/123019).
[0010] Sada su u tehnici potrebna nova jedinjenja koja su korisna kao inhibitori sazrevanja HIV, kao i nove farmaceutske kompozicije koje sadrže ova jedinjenja.
KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA
[0011] Ovaj pronalazak daje jedinjenje koje je izabrano iz grupe
ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so (jedinjenje iz pronalaska), njihove farmaceutske formulacije i ova jedinjenja za upotrebu u lečenju pacijenata obolelih od ili podložnih virusu kao što je HIV. Jedinjenja iz pronalaska su efikasna antivirusna sredstva, posebno kao inhibitori HIV. Korisna su za tretman HIV i AIDS-a.
[0012] Takođe je otkriveno jedinjenje Formule I, uključujući njegove farmaceutski prihvatljive soli:
gde je R1izopropenil ili izopropil;
X je izabran od C4-8cikloalkil, C4-8cikloalkenil, C4-9spirocikloalkil, C4-9spirocikloalkenil, C4-8oksacikloalkil, C4-8dioksacikloalkil, C6-8oksacikloalkenil, C6-8dioksacikloalkenil, C6ciklodialkenil, C6oksaciklodialkenil, C6-9oksaspirocikloalkil grupe i C6-9oksaspirocikloalkenil prstena, gde je X supstituisan sa A, pri čemu je -C1-6alkil-halo;
Y je izabran od -COOR2, -C(O)NR2SO2R3, -C(O)NHSO2NR2R2, -NR2SO2R2, -SO2NR2R2, -C3-6cikloalkil-COOR2, -C2-6alkenil-COOR2, -C2-6alkinil-COOR2, -C1-6alkil-COOR2, -alkil supstituisani C1-6alkil, -CF2-COOR2, -NHC(O)(CH2)n-COOR2, -SO2NR2C(O)R2, -tetrazol i -CONHOH grupe,
pri čemu je n = 1-6;
R2je -H, -C1-6alkil, -alkil supstituisani C1-6alkil ili -aril supstituisani C1-6alkil;
W nema, ili je -CH2ili -CO;
R3je -H, -C1-6alkil ili -alkil supstituisani C1-6alkil;
R4je izabran od -H, -C1-6alkil, -C1-6alkil-C3-6cikloalkil, -C1-6supstituisani -C1-6alkil, -C1-6alkil-Q1, -C1-6alkil-C3-6cikloalkil-Q1, aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, -COR6, -SO2R7, -SO2NR2R2grupe i
gde je G izabran od -O-, -SO2- i -NR12grupe;
gde je Q1izabran iz grupe -C1-6alkil, -C1-6fluoroalkil, heteroaril, supstituisani heteroaril, halogen, -CF3, -OR2, -COOR2, -NR8R9, -CONR8R9i -SO2R7;
R5je izabran od -H, -C1-6alkil, -C3-6cikloalkil, -C1-6alkil supstituisani alkil, -C1-6alkil-NR8R9, -COR3, -SO2R7i -SO2NR2R2grupe;
pod uslovom da R4ili R5ne mogu da budu -COR6kada je W = -CO;
i narednim uslovom da samo jedan od R4ili R5može da bude izabran iz grupe -COR6, -COCOR6, -SO2R7i -SO2NR2R2;
ili kada W nema ili je -CH2, tada R4i R5mogu da budu uzeti zajedno sa susednim N da formiraju
R6je izabran od -H, -C1-6alkil, -C1-6alkil-supstituisani alkil, -C3-6cikloalkil, -C3-6supstituisani cikloalkil-Q2, -C1-6alkil-Q2, -C1-6alkil-supstituisani alkil-Q2, -C3-6cikloalkil-Q2, aril-Q2, -NR13R14i -OR15grupe;
pri čemu je Q2izabran od aril, heteroaril, supstituisani heteroaril, -OR2, -COOR2, -NR8R9, SO2R7, -CONHSO2R3i -CONHSO2NR2R2grupe;
R7je izabran od -H, -C1-6alkil, -C1-6supstituisani alkil, -C3-6cikloalkil, -CF3, aril i heteroaril grupe;
R8i R9su nezavisno izabrani od -H, -C1-6alkil, -C1-6supstituisani alkil, aril, heteroaril, supstituisani aril, supstituisani heteroaril, -C1-6alkil-Q2i -COOR3grupe,
ili su R8i R9uzeti zajedno sa susednim N da formiraju ciklus izabran iz grupe:
M je izabran od -R15, -SO2R2, -SO2NR2R2, -OH i -NR2R12grupe;
V je izabran od -CR10R11-, -SO2-, -O- i -NR12grupe; pod uslovom da samo jedan od R8ili R9može da bude -COOR3;
R10i R11su nezavisno izabrani od -H, -C1-6alkil, -C1-6supstituisani alkil i -C3-6cikloalkil grupe;
R12je izabran od -H, -C1-6alkil, -alkil supstituisani C1-6alkil, -CONR2R2, -SO2R3, -SO2NR2R2grupe;
R13i R14su nezavisno izabrani od -H, -C1-6alkil, -C3-6cikloalkil, -C1-6supstituisani alkil, -C1-6alkil- Q3, -C1-6alkil-C3-6cikloalkil-Q3, C1-6supstituisani alkil-Q3grupe i
Q3je izabran od heteroaril, supstituisani heteroaril, -NR2R12, -CONR2R2, -COOR2, -OR2i -SO2R3grupe;
R15je izabran od -C1-6alkil, -C3-6cikloalkil, -C1-6supstituisani alkil, -C1-6alkil-Q3, -C1-6alkil-C3-6cikloalkil-Q3i -C1-6supstituisani alkil-Q3grupe;
R16je izabran od -H, -C1-6alkil, -NR2R2i -COOR2grupe;
pod uslovom da kada je V -NR12-; R16ne može da bude -NR2R2; i
R17je izabran od -H, -C1-6alkil, -COOR3i aril grupe.
[0013] U narednom ostvarenju, dat je postupak za lečenje sisara inficiranih sa virusom, posebno kada je navedeni virus HIV, uključujući primenu na tom sisaru antivirusno efektivne količine jedinjenja koje je izabrano iz grupe jedinjenja Formule I i jednog ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, podloga ili razblaživača. Opciono, jedinjenje Formule I može da se primeni u kombinaciji sa antivirusno efikasnom količinom drugog sredstva za tretman AIDS izabranog iz grupe koja se sastoji od: (a) AIDS antivirusnog sredstva; (b) antiinfektivnog sredstva; (c) imunomodulatora; i (d) drugih inhibitora unošenja HIV.
[0014] Naredno ostvarenje ovog pronalaska je farmaceutska kompozicija koja uključuje jedno ili više jedinjenja iz pronalaska i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, podloga i/ili razblaživača; i opciono u kombinaciji sa drugim sredstvom za tretman AIDS izabranog iz grupe koja se sastoji od: (a) AIDS antivirusnog sredstva; (b) anti-infektivnog sredstva; (c) imunomodulatora; i (d) drugih inhibitora unošenja HIV.
[0015] U narednom ostvarenju pronalaska, dat je jedan ili više postupaka za izradu jedinjenja iz ovog pronalaska.
[0016] Ovde su takođe dati međuproizvodi jedinjenja korisni u izradi jedinjenja iz ovog pronalaska.
[0017] Ovaj pronalazak je usmeren na ove, i druge važne ishode koji su ovde opisani.
DETALJAN OPIS OSTVARENJA
[0018] Kako se ovde koristi, oblici jednine obuhvataju i odgovarajuću množinu ukoliko nije jasno drugačije navedeno.
[0019] Kako jedinjenja iz ovog pronalaska mogu da poseduju asimetrične centre i zbog toga se javljaju kao smeše diastereomera, ovaj pronalazak obuhvata pojedinačne diastereoizomerne oblike jedinjenja Formule I, i njihove smeše.
Definicije
[0020] Ukoliko nije drugačije izričito dato bilo gde u prijavi, jedan ili više od narednih naziva mogu ovde da se koriste i treba da imaju sledeća značenja:
"H" se odnosi na vodonik, uključujući njegove izotope, kao što je deuterijum.
[0021] Naziv "C1-6alkil", kako se koristi ovde i u patentnim zahtevima (ukoliko nije drugačije navedeno) označava alkil grupe ravnog ili račvastog lanca kao što su metil, etil, propil, izopropil, butil, izobutil, t-butil, amil, heksil i slično.
[0022] "C1-C4fluoroalkil" se odnosi na F-supstituisani C1-C4alkil gde je najmanje jedan H atom supstituisan sa F atomom a svaki H atom može da bude nezavisno supstituisan sa F atomom;
[0023] "Halogen" ili "halo" se odnosi na hlor, brom, jod ili fluor.
[0024] "Aril" ili "Ar" grupa se odnosi na sve monociklične grupe ugljenika ili policiklične grupe sa kondenzovanim prstenom (to jest, prstenovi koji dele zajednički par atoma ugljenika) koji imaju potpuno konjugovani sistem pi-elektrona. Primeri, bez ograničenja, aril grupa su fenil, naftalenil i antracenil. Aril grupa može da bude supstituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, supstituent grupa(e) su preferirano jedna ili više izabranih od alkila, cikloalkila, arila, heteroarila, heteroaliciklusa, hidroksi, alkoksi, ariloksi, heteroariloksi, heteroalicikloksi, tiohidroksi, tioariloksi, tioheteroariloksi, tioheteroalicikloksi, cijano, halogena, nitro, karbonila, O-karbamila, N-karbamila, C-amido, N-amido, C-karboksi, O-karboksi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, trihalometila, ureido, amino i -NR<x>R<y>, gde su R<x>i R<y>nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata vodonik, alkil, cikloalkil, aril, karbonil, C-karboksi, sulfonil, trihalometil, i, kombinovano, pet- ili šest-članog heteroalicikličnog prstena.
[0025] Kako se ovde koristi, "heteroaril" grupa se odnosi na monociklični ili kondenzovani prsten (to jest, prstenovi koji dele zajednički par atoma) grupu koja ima jedan ili više atoma u prstenu(ovima) izabranih iz grupe koja sadrži azot, kiseonik i sumpor i, pored toga, koja ima potpuno konjugovani sistem pi-elektrona. Ukoliko nije drugačije navedeno, heteroaril grupa može da bude vezana ili za atom ugljenika ili atom azota u okviru heteroaril grupe. Treba da se napomene da naziv heteroaril obuhvata N-oksid osnovnog heteroarila ukoliko je takav N-oksid hemijski prihvatljiv kao što je poznato u tehnici. Primeri, bez ograničenja, heteroaril grupa su furil, tienil, benzotienil, tiazolil, imidazolil, oksazolil, oksadiazolil, tiadiazolil, benzotiazolil, triazolil, tetrazolil, izoksazolil, izotiazolil, pirolil, piranil, tetrahidropiranil, pirazolil, piridil, pirimidinil, hinolinil, izohinolinil, purinil, karbazolil, benzoksazolil, benzimidazolil, indolil, izoindolil, pirazinil, diazinil, pirazin, triazinil, tetrazinil i tetrazolil.
1
Kada je supstituisana, grupa(e) supstituent je preferirano jedna ili više izabrana od alkila, cikloalkila, arila, heteroarila, heteroaliciklusa, hidroksi, alkoksi, ariloksi, heteroariloksi, heteroalicikloksi, tioalkoksi, tiohidroksi, tioariloksi, tioheteroariloksi, tioheteroalicikloksi, cijano, halogena, nitro, karbonila, O-karbamila, N-karbamila, C-amido, N-amido, C-karboksi, O-karboksi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, trihalometila, ureido, amino i -NR<x>R<y>, gde su R<x>i R<y>kako je prethodno definisano.
[0026] Kako se ovde koristi, "heteroaliciklična" grupa se odnosi na grupu monocikličnog ili kondenzovanog prstena koji u prstenu(ovima) ima jedan ili više atoma izabranih iz grupe koja se sastoji od azota, kiseonika i sumpora. Prstenovi su izabrani od onih koji obezbeđuju stabilan raspored veza i ne obuhvataju sisteme koji nebi mogli da egzistiraju. Prstenovi mogu takođe da imaju jednu ili više dvostrukih veza. Međutim, prstenovi nemaju potpuno konjugovani sistem pi-elektrona. Primeri, bez ograničenja, heteroalicikličnih grupa su azetidinil, piperidil, piperazinil, imidazolinil, tiazolidinil, 3-pirolidin-1-il, morfolinil, tiomorfolinil i njegovi S oksidi i tetrahidropiranil. Kada je supstituisana, grupa(e) za supstituciju je preferirano jedna ili više izabrana od alkila, cikloalkila, arila, heteroarila, heteroaliciklusa, hidroksi, alkoksi, ariloksi, heteroariloksi, heteroalicikloksi, tioalkoksi, tiohidroksi, tioariloksi, tioheteroariloksi, tioheteroalicikloksi, cijano, halogena, nitro, karbonila, tiokarbonila, O-karbamila, N-karbamila, O-tiokarbamila, N-tiokarbamila, C-amido, C-tioamido, N-amido, C-karboksi, O-karboksi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, trihalometansulfonamid, trihalometansulfonila, silila, gvanila, gvanidino, ureido, fosfonila, amino i NR<x>R<y>, gde su R<x>i R<y>kako je prethodno definisano.
[0027] "Alkil" grupa se odnosi na zasićeni alifatični ugljovodonik uključujući grupe sa ravnim lancem i račvastim lancem. Preferirano, alkil grupa ima 1 do 20 atoma ugljenika ( kad god je dat numerički opseg; na primer, ovde je dato "1-20", to znači da grupa, u ovom slučaju alkil grupa, može da sadrži 1 atom ugljenika, 2 atoma ugljenika, 3 atoma ugljenika, do i uključujući 20 atoma ugljenika). Još poželjnije, to je alkil grupa srednje veličine koja ima 1 do 10 atoma ugljenika. Najpoželjnije, to je niža alkil grupa koja ima 1 do 4 atoma ugljenika. Alkil grupa može da bude supstituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, grupa(e) za supstituciju je preferirano jedna ili više pojedinačno izabrana od trihaloalkila, cikloalkila, arila, heteroarila, heteroaliciklusa, hidroksi, alkoksi, ariloksi, heteroariloksi, heteroalicikloksi, tiohidroksi, tioalkoksi, tioariloksi, tioheteroariloksi, tioheteroalicikloksi, cijano, halo, nitro, karbonila, tiokarbonila, O-karbamila, N-karbamila, O-tiokarbamila, N-tiokarbamila, C-amido, C-tioamido, N-amido, C-karboksi, O-karboksi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, trihalometansulfonamido, trihalometansulfonila i kombinovano, pet- ili šest-članog heteroalicikličnog prstena.
[0028] "Cikloalkil" grupa se odnosi na grupe monocikličnog prstena ugljenika ili kondenzovani prsten (to jest, prstenovi koji dele zajednički par atoma ugljenika) pri čemu jedan ili više prstenova nema potpuno konjugovani sistem pi-elektrona. Primeri, bez ograničenja, cikloalkil grupa su ciklopropan, ciklobutan, ciklopentan, ciklopenten, cikloheksan, cikloheksen, cikloheptan, ciklohepten i adamantan. Cikloalkil grupa može da bude susptituisana ili nesupstituisana. Kada je supstituisana, grupa(e) za supstituciju je preferirano jedna ili više pojedinačno izabrana od alkila, arila, heteroarila, heteroaliciklusa, hidroksi, alkoksi, ariloksi, heteroariloksi, heteroalicikloksi, tiohidroksi, tioalkoksi, tioariloksi, tioheteroariloksi, tioheteroalicikloksi, cijano, halo, nitro, karbonila, tiokarbonila, O-karbamila, N-karbamila, O-tiokarbamila, N-tiokarbamila, C-amido, C-tioamido, N-amido, C-karboksi, O-karboksi, sulfinila, sulfonila, sulfonamido, trihalometansulfonamido, trihalometansulfonila, silila, amidino, gvanidino, ureido, fosfonila, amino i -NR<x>R<y>sa R<x>i R<y>kako je prethodno definisano.
[0029] "Alkenil" grupa se odnosi na alkil grupu, kako je ovde definisano, koja ima najmanje dva atoma ugljenika i najmanje jednu ugljenik-ugljenik dvostruku vezu.
[0030] "Alkinil" grupa se odnosi na alkil grupu, kako je ovde definisano, koja ima najmanje dva atoma ugljenika i najmanje jednu ugljenik-ugljenik trostruku vezu.
[0031] "Hidroksi" grupa se odnosi na -OH grupu.
[0032] "Alkoksi" grupa se odnosi i na -O-alkil i na -O-cikloalkil grupu kako je ovde definisano.
[0033] "Ariloksi" grupa se odnosi i na -O-aril i na -O-heteroaril grupu, kako je ovde definisano.
[0034] "Heteroariloksi" grupa se odnosi na heteroaril-O- grupu gde je heteroaril kako je ovde definisano.
[0035] "Heteroalicikloksi" grupa se odnosi na heteroalicikličnu-O-grupu gde je heteroaliciklus kako je ovde definisano.
[0036] "Tiohidroksi" grupa se odnosi na -SH grupu.
[0037] "Tioalkoksi" grupa se odnosi i na S-alkil i na -S-cikloalkil grupu, kako je ovde definisano.
[0038] "Tioariloksi" grupa se odnosi i na -S-aril i na -S-heteroaril grupu, kako je ovde definisano.
[0039] "Tioheteroariloksi" grupa se odnosi na heteroaril-S-grupu gde je heteroaril kako je ovde definisano.
[0040] "Tioheteroalicikloksi" grupa se odnosi na heteroalicikličnu-S-grupu gde je heteroaliciklus kako je ovde definisano.
[0041] "Karbonil" grupa se odnosi na -C(=O)-R" grupu, gde je R" izabran iz grupe koja sadrži vodonik, alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril, heteroaril (vezana preko ugljenika prstena) i heteroaliciklus (vezan preko ugljenika prstena) grupu, koja je svaka kako je ovde definisano.
[0042] "Aldehid" grupa se odnosi na karbonil grupu gde je R" vodonik.
[0043] "Tiokarbonil" grupa se odnosi na -C(=S)-R" grupu, gde je R" kako je ovde definisano.
[0044] "Keto" grupa se odnosi na -CC(=O)C-grupu gde ugljenik na jednoj ili obe strane C=O može da bude alkil, cikloalkil, aril ili ugljenik heteroaril ili heteroaliciklične grupe.
[0045] "Trihalometankarbonil" grupa se odnosi na Z3CC(=O)- grupu gde je navedeni Z halogen.
[0046] "C-karboksi" grupa se odnosi na -C(=O)O-R" groupe, gde je R" kako je ovde definisano.
[0047] "O-karboksi" grupa se odnosi na R"C(-O)O-grupu, gde je R" kako je ovde definisano.
[0048] "Karboksilna kisela" grupa se odnosi na C-karboksi grupu u kojoj je R" vodonik.
[0049] "Trihalometil" grupa se odnosi na -CZ3, grupu gde je Z halogen kako je ovde definisano.
[0050] "Trihalometansulfonil" grupa se odnosi na an Z3CS(=O)2- grupe sa Z kako je ovde definsano.
[0051] "Trihalometansulfonamido" grupa se odnosi na Z3CS(=O)2NR<x>- grupu gde je Z kako je ovde definisano a R<x>je H ili (C1-6)alkil.
[0052] "Sulfinil" grupa se odnosi na -S(=O)-R" grupu, gde je R" (C1-6)alkil.
[0053] "Sulfonil" grupa se odnosi na -S(=O)2R" grupu gde je R" (C1-6)alkil.
[0054] "S-sulfonamido" grupa se odnosi na -S(=O)2NR<X>R<Y>, gde su R<X>i R<Y>nezavisno H ili (C1-6)alkil.
[0055] "N-sulfonamido" grupa se odnosi na R"S(=O)2NR<X>- grupu, gde je R<x>H ili (C1-6)alkil.
[0056] "O-karbamil" grupa se odnosi na -OC(=O)NR<x>R<y>grupu, gde su R<X>i R<Y>nezavisno H ili (C1-6)alkil.
[0057] "N-karbamil" grupa se odnosi na RO<x>C(=O)NR<y>grupu, gde su R<x>i R<y>nezavisno H ili (C1-6)alkil.
[0058] "O-tiokarbamil" grupa se odnosi na -OC(=S)NR<x>R<y>grupu, gde su R<x>i R<y>nezavisno H
1
ili (C1-6)alkil.
[0059] "N-tiokarbamil" grupa se odnosi na R<x>OC(=S)NR<y>- grupu, gde su R<x>i R<y>nezavisno H ili (C1-6)alkil.
[0060] "Amino" grupa se odnosi na -NH2grupu.
[0061] "C-amido" grupa se odnosi na -C(=O)NR<x>R<y>grupu, gde su R<x>i R<y>nezavisno H ili (C1-
6)alkil
[0062] "C-tioamido" grupa se odnosi na -C(=S)NR<x>R<y>grupu, gde su R<x>i R<y>nezavisno H ili (C1-6)alkil.
[0063] "N-amido" grupa se odnosi na R<x>C(=O)NR<y>- grupu, gde su R<x>i R<y>nezavisno H ili (C1-
6)alkil.
[0064] "Ureido" grupa se odnosi na -NR<x>C(=O)NR<y>R<y2>grupu, gde su R<x>, R<y>i R<y2>nezavisno H ili (C1-6)alkil.
[0065] "Gvanidino" grupa se odnosi na -R<x>NC(=N)NR<y>R<y2>grupu, gde su R<x>, R<y>i R<y2>nezavisno H ili (C1-6)alkil.
[0066] "Amidino" grupa se odnosi na R<x>R<y>NC(=N)- grupu, gde su R<x>i R<y>nezavisno H ili (C1-6)alkil.
[0067] "Cijano" grupa se odnosi na -CN grupu.
[0068] "Silil" grupa se odnosi na -Si(R")3, gde je R" (C1-6)alkil ili fenil.
[0069] "Fosfonil" grupa se odnosi na P(=O)(OR<x>)2gde je R<x>(C1-6)alkil.
[0070] "Hidrazino" grupa se odnosi na -NR<x>NR<y>R<y2>grupu, gde su R<x>, R<y>i R<y2>nezavisno H ili (C1-6)alkil.
[0071] "4, 5 ili 6 člani N-laktam ciklični prsten" grupa se odnosi na
[0072] "Spiro" grupa je biciklična organska grupa sa prstenovima vezanim preko samo jednog atoma. Prstenovi mogu da budu različiti ili identični. Vezujući atom se takođe naziva spiroatom, mnogo češće kvaternarni ugljenik ("spiro ugljenik").
[0073] "Oksospiro" ili "oksaspiro" grupa je spiro grupa koja ima kiseonik koji se nalazi u okviru strukture bicikličnog prstena. "Dioksospiro" ili "dioksaspiro" grupa ima dva kiseonika u okviru strukture bicikličnog prstena.
[0074] Bilo koje dve susedne R grupe mogu da se kombinuju da formiraju dodatni aril, cikloalkil, heteroaril ili heterociklični prsten kondenzovan sa prstenom koji inicijalno sadrži ove R grupe.
[0075] U tehnici je poznato da atomi azota u heteroaril sistemima mogu da "učestvuju u heteroaril prstenu preko dvostruke veze" a ovo se odnosi na formiranje dvostrukih veza u dve tautomerne strukture koje uključuju heteroaril grupe petočlanog prstena. Ovo određuje da li azoti mogu da budu supstituisani što je dobro poznato hemičarima u tehnici. Otkrića i zahtevi iz ovog pronalaska su zasnovani na poznavanju opštih principa hemijskog vezivanja.
Podrazumeva se da na osnovu literature zahtevi ne obuhvataju strukture za koje se zna da su nestabilne ili da ne mogu da egzistriaju.
[0076] Farmaceutski prihvatljive soli ovde otkrivenih jedinjenja iz pronalaska su obuhvaćene okvirom pronalaska. Naziv "farmaceutski prihvatljiva so" kako se koristi ovde i u zahtevima, treba da obuhvati netoksične soli nastale dodatkom baze. Odgovarajuće soli uključuju one dobijene od organskih i neorganskih kiselina kao što su, bez ogrničenja, hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, fosforna kiselina, sumporna kiselina, metansulfonska kiselina, sirćetna kiselina, vinska kiselina, mlečna kiselina, sulfinska kiselina, limunska kiselina, jabučna kiselina, fumarna kiselina, sorbatna kiselina, akonitinska kiselina, salicilna kiselina, ftalna kiselina i slično. Kako se ovde koristi, naziv "farmaceutski prihvatljiva so" takođe treba da uključi soli kiselih grupa, kao što je karboksilatna grupa, sa takvim kaunterjonima kao što su soli amonijuma, alkalnih metala, posebno natrijuma ili kalijuma, soli zemno alkalnih meteala, posebno kalcijuma ili magnezijuma i soli sa odgovarajućim organskim bazama kao što su niži alkilamini (metilamin, etilamin, cikloheksilamin i slično) ili sa suspstituisanim nižim alkilaminima (na primer hidroksil-supstituisanim alkilaminima kao što su dietanolamin, trietanolamin ili tris(hidroksimetil)-aminometan) ili sa bazama kao što su piperidin ili morfolin.
[0077] Kako je prethodno dato, ovde je otkriveno jedinjenje Formule I, uključujući njegove farmaceutski prihvatljive soli:
1
gde je R1izopropenil ili izopropil;
X je izabran od C4-8cikloalkil, C4-8cikloalkenil, C4-9spirocikloalkil, C4-9spirocikloalkenil, C4-8oksacikloalkil, C4-8dioksacikloalkil, C6-8oksacikloalkenil, C6-8dioksacikloalkenil, C6ciklodialkenil, C6oksaciklodialkenil, C6-9oksaspirocikloalkil grupe i C6-9oksaspirocikloalkenil prstena,
gde je X supstituisan sa A i gde je A -C1-6alkil-halo;
Y je izabran od -COOR2, -C(O)NR2SO2R3, -C(O)NHSO2NR2R2, -NR2SO2R2, -SO2NR2R2, -C3-6cikloalkil-COOR2, -C2-6alkenil-COOR2, -C2-6alkinil-COOR2, -C1-6alkil-COOR2, -alkil supstituisane C1-6alkil, -CF2-COOR2, -NHC(O)(CH2)n-COOR2, -SO2NR2C(O)R2, -tetrazol i -CONHOH grupe,
gde je n = 1-6;
R2je -H, -C1-6alkil, -alkil supstituisani C1-6alkil ili -aril supstituisani C1-6alkil;
W nema ili je -CH2ili -CO;
R3je -H, -C1-6alkil ili -alkil supstituisani C1-6alkil;
R4je izabran od -H, -C1-6alkil, -C1-6alkil-C3-6cikloalkil, -C1-6supstituisane -C1-6alkil, -C1-6alkil- Q1, -C1-6alkil-C3-6cikloalkil-Q1, aril, heteroaril, supstituisane heteroaril, -COR6, -SO2R7, -SO2NR2R2grupe i
gde je G izabran od -O-, -SO2- i -NR12grupe;
gde je Q1izabran od -C1-6alkil, - C1-6fluoroalkil, heteroaril, supstituisane heteroaril, halogena, -CF3, -OR2, -COOR2, -NR8R9, -CONR8R9i -SO2R7grupe;
R5je izabran od -H, -C1-6alkil, -C3-6cikloalkil, -C1-6alkil supstituisane alkil, -C1-6alkil-
1
NR8R9, -COR3, -SO2R7i -SO2NR2R2grupe;
uz uslov da R4ili R5ne mogu da budu -COR6kada je W -CO;
uz dalji uslov da samo jedan od R4ili R5može da bude izabran od -COR6,
-COCOR6, -SO2R7i -SO2NR2R2grupe;
ili kada W nema ili je -CH2, tada R4i R5mogu da budu uzeti zajedno sa susednim N da formiraju
R6je izabran od -H, -C1-6alkil, -C1-6alkil-supstituisane alkil, -C3-6cikloalkil, -C3-6supstituisane cikloalkil-Q2, -C1-6alkil-Q2, -C1-6alkil-supstituisane alkil-Q2, -C3-6cikloalkil-Q2, aril-Q2, -NR13R14i -OR15grupe;
gde je Q2izabran od aril, heteroaril, supstituisane heteroaril, -OR2, -COOR2, -NR8R9, SO2R7, -CONHSO2R3i -CONHSO2NR2R2grupe;
R7je izabran od -H, -C1-6alkil, -C1-6supstituisane alkil, -C3-6cikloalkil, -CF3, aril i heteroaril grupe;
R8i R9su nezavisno izabrani od -H, -C1-6alkil, -C1-6supstituisane alkil, aril, heteroaril, supstituisane aril, supstituisane heteroaril, -C1-6alkil-Q2i -COOR3grupe;
ili su R8i R9uzeti zajedno sa susednim N da formiraju ciklus izabran od:
1
M je izabran od -R16, -SO2R2, -SO2NR2R2, -OH i -NR2R12grupe;
V je izabran od -CR10R11-, -SO2-, -O- i -NR12- grupe; uz uslov da samo jedan od R8ili R9može da bude -COOR3;
R10i R11su nezavisno izabrani od -H, -C1-6alkil, -C1-6supstituisane alkil i -C3-6cikloalkil grupe;
R12je izabran od -H, -C1-6alkil, -alkil supstituisane C1-6alkil, -CONR2R2, -SO2R3, -SO2NR2R2grupe;
R13i R14su nezavisno izabrani od -H, -C1-6alkil, -C3-6cikloalkil, -C1-6supstituisane alkil, -C1-
6alkil-Q3, -C1-6alkil-C3-6cikloalkil-Q3, C1-6supstituisane alkil-Q3grupe i
1
Q3je izabran od heteroaril, supstituisane heteroaril, -NR2R12, -CONR2R2, -COOR2, -OR2i -SO2R3grupe;
R15je izabran od -C1-6alkil, -C3-6cikloalkil, -C1-6supstituisane alkil, -C1-6alkil-Q3, -C1-6alkil-C3-6cikloalkil-Q3i -C1-6supstituisane alkil-Q3grupe;
R16je izabran od -H, -C1-6alkil, -NR2R2i -COOR2grupe;
uz uslov da kada je V -NR12-; R16ne može da bude -NR2R2; i
R17je izabran od -H, -C1-6alkil, -COOR3i aril grupe.
[0078] Još poželjnija jedinjenja uključuju ona u kojima je R1izopropenil.
[0079] Takođe su preferirana jedinjenja u kojima nema W.
[0080] Druga preferirana jedinjenja uključuju ona u kojima je X C4-8cikloalkenil i još poželjnije, C6cikloalkenil.
[0081] Pored toga, jedinjenja Formule I su preferirana kada je A C1-C3alkil-halo i još poželjnije metil-halo i još poželjnije metil-fluor.
[0082] Takođe su preferirana jedinjenja u kojima je A supstituisan na para-položaju supstituenta X.
[0083] Takođe su preferirana jedinjenja Formule I u kojima je Y = -COOR2i još poželjnije -COOH. U nekim ostvarenjima, takođe je preferirano da je Y = -COOH i A jemetil-fluoro grupa.
[0084] Takođe su preferirana jedinjenja Formule I u kojima je Y u para položaju.
[0085] Dalje su preferirana jedinjenja Formule I u kojima i supstituent A i supstituent Y dele istu tačku vezivanja na supstituentu X; još poželjnije, na para položaju supstituenta X.
[0086] U brojnim ostvarenjima, takođe je preferirano da je R4C1-6alkil-Q1, gde je Q1-NR8R9.
[0087] U nekim ostvarenjima, preferirano je da je R4-C1-6alkil-C3-6cikloalkil.
[0088] U nekim ostvarenjima je takođe preferirano da je R5C1-6alkil-NR8R9.
[0089] Mnogo puta je takođe preferirano da -NR8R9formira strukturu prstena kako je prethodno navedeno.
1
[0090] Preferirana jedinjenja, uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli koje su ovde otkrivene, uključuju sledeće (od ovih jedinjenja, 4-to, 5-to i 6-to i njihove farmaceutski prihvatljive soli su jedinjenja iz ovog pronalaska):
2
2
�
�
�
�
�
�
�
�
[0091] Naredna jedinjenja, uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli, su jedinjenja iz pronalaska:
[0092] Prethodno data jedinjenja predstavljaju smešu diastereoizomera i dva pojedinačna stereoizomera. U nekim ostvarenjima, jedan od specifičnih diastereomera može da bude posebno preferiran.
[0093] Jedinjenja iz ovog pronalaska, u skladu sa svim prethodno opisanim različitim ostvarenjima, mogu da se primene oralno, parenteralno (uključujući subkutane injekcije, intravenske, intramuskularne, intrasternalne injekcije ili infuzione tehnike), sprej inhalacijom ili rektalno ili drugim načinima, u doznoj jedinici formulacija koje sadrže ne-toksične farmaceutski prihvatljive nosače, podloge i razblaživače raspoložive stručnjaku sa iskustvom. Takođe može da se uključi jedan ili više adjuvanasa.
[0094] Prema tome, u skladu sa ovim pronalaskom, dalje su obezbeđena jedinjenja iz pronalaska za upotrebu u postupku tretmana i farmaceutska kompozicija, za lečenje virusnih infekcija kao što su HIV infekcija i AIDS. Tretman obuhvata primenu na pacijentu kome je potreban takav tretman, farmaceutske kompozicije koja sadrži antivirusnu efektivnu količinu jednog ili više jedinjenja iz pronalaska zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, podloga ili razblaživača. Kako se ovde koristi, naziv "antivirusna efektivna količina" označava ukupnu količinu svake aktivne komponente kompozicije i postupka koja je dovoljna da pokaže značajnu korist za pacijenta, to jest, da inhibira, popravi ili izleči akutna stanja koja se karakterišu inhibicijom HIV infekcije. Kada se primeni na pojedinačni aktivni sastojak, koji se primenjuje sam, naziv se odnosi samo na taj sastojak. Kada se primenjuje na kombinaciju, naziv se odnosi na kombinovane količine aktivnih sastojaka koji dovode do terapeutskog efekta, bez obzira da li se primenjuju u kombinaciji, serijski ili istovremeno. Kako se koriste ovde i u zahtevima, nazivi "lečenje, tretman i tretiranje" označavaju prevenciju, inhibiciju, poboljšanje i/ili izlečenje bolesti i stanja povezanih sa HIV infekcijom.
[0095] Farmaceutske kompozicije iz pronalaska mogu da budu u obliku oralno primenljivih suspenzija ili tableta, kao i nazalnih sprejova, sterilnih injektabilnih preparata, na primer, kao sterilne injektabilne vodene ili uljane suspenzije ili u obliku supozitorija. Farmaceutski prihvatljive podloge, nosači ili razblaživači mogu da se koriste u farmaceutskim kompozicijama i predstavljaju one koje se u farmaceutskoj tehnici koriste za izradu.
[0096] Kada se primenjuju oralno kao suspenzije, ove kompozicije se izrađuju u skladu sa tehnikama obično poznatim u tehnici farmaceutske formulacije i mogu da sadrže mikrokristalnu celulozu za povećavanje mase, alginatnu kiselinu ili natrijum alginat kao sredstvo za suspendovanje, metilcelulozu za povećanje viskoziteta i sredstva za zaslađivanje/korekciju ukusa poznatih u tehnici. Kao tablete sa trenutnim oslobađanjem, ove kompozicije mogu da sadrže mikrokristalnu celulozu, dikalcijum fosfat, skrob, magnezijum stearat i laktozu i/ili druge ekscipijente, vezivna sredstva, ekstendere, dezintegratore, razblaživače i lubrikanse poznate u tehnici.
[0097] Injektabilni rastvori ili suspenzije mogu da se formulišu u skladu sa poznatom tehnikom upotrebom odgovarajućih ne-toksičnih, parenteralno prihvatljivih razblaživača ili rastvarača, kao što su manitol, 1,3-butandiol, voda, Ringer-ov rastvor ili izotonični rastvor natrijum hlorida ili pogodnih sredstava za disperziju ili vlaženje i suspendovanje, kao što su sterilna, neutralna, stabilizovana ulja, uključujući sintetičke mono- ili digliceride i masne kiseline, uključujući oleinsku kiselinu.
[0098] Jedinjenja iz pronalaska mogu da se primene oralno na ljudima u opsegu doze od približno 1 do 100 mg/kg telesne težine u podeljenim dozama, obično u toku dužeg perioda, kao što su dani, nedelje, meseci ili čak godine. Jedan preferirani opseg doze je približno 1 do 10 mg/kg telesne težine oralno u podeljenim dozama. Naredni preferirani opseg doze je približno 1 do 20 mg/kg telesne težine u podeljenim dozama. Međutim, razumljivo je da specifični nivo doze i učestalost doziranja može da varira za svakog posebnog pacijenta i zavisiće od različitih faktora kao što je aktivnost specifičnog primenjenog jedinjenja, metabolička stabilnost i dužina delovanja tog jedinjenja, godina starosti, telesne težine, opšteg zdravstvenog stanja, pola, ishrane, načina i vremena primene, brzine izlučivanja, kombinacije lekova i težine određenog stanja i domaćina koji je podvrgnut terapiji.
[0099] Ovde su takođe razmatrane kombinacije jedinjenja iz pronalaska zajedno sa jednim ili više drugih sredstava korisnih u tretmanu AIDS-a. Na primer, jedinjenja iz ovog otkrića mogu efikasno da se primenjuju, bilo u periodu pre izlaganja i/ili posle izlaganja virusu, u kombinaciji sa efektivnim količinama AIDS antivirusa, imunomodulatora, antiinfektivnih lekova ili vakcina, kao što su niže navedeni u ne-ograničavajućoj tabeli:
ANTIVIRUSI
[0100]
Naziv leka Proizvođač Indikacije
097 Hoechst/Bayer HIV infekcija, AIDS, ARC (nonnukleozid reverzne transkriptaze (RT) inhibitor) Amprenavir 141 W94 GW 141 Glaxo Wellcome HIV infekcija, AIDS, ARC (inhibitor proteaze) Abakavir (1592U89) GW 1592 Glaxo Wellcome HIV infekcija, AIDS, ARC (RT inhibitor)
Acemannan Carrington Labs ARC
(Irving, TX)
Aciklovir Burroughs Wellcome HIV infekcija, AIDS, ARC AD-439 Tanox Biosystems HIV infekcija, AIDS, ARC AD-519 Tanox Biosystems HIV infekcija, AIDS, ARC Adefovir dipivoxil AL-721 Gilead Sciences HIV infekcija ARC, PGL HIV Ethigen (Los Angeles, pozitivno, AIDS
CA)
Alpha Interferon Glaxo Wellcome Kaposi-jev sarkom, HIV u kombinaciji sa Retrovir Ansamycin LM 427 Adria Laboratories ARC
(Dublin, OH) Erbamont
(Stamford, CT)
Antitelo koje neutrališe pH alfa
4
nenormalnog Interferona Advanced Biotherapy AIDS, ARC
Concepts (Rockville,
MD)
AR177 Aronex Pharm HIV infekcija, AIDS, ARC Beta-fluoro-ddA Nat’l Cancer Institute AIDS-povezane bolesti BMS-234475 (CGP-61755) Bristol-Myers Squibb/ HIV infekcija, AIDS, ARC Novartis (inhibitor proteaze)
CI-1012 Warner-Lambert HIV-1 infekcija Cidofovir Gilead Science CMV retinitis, herpes,
papillomavirus
Curdlan sulfate AJI Pharma USA HIV infekcija Cytomegalovirus Immune globin MedImmune CMV retinitis
Cytovene Syntex Pretnja vidu
Ganciclovir CMV peripheral CMV retinitis Darunavir Tibotec- J & J HIV infekcija, AIDS, ARC (inhibitor proteaze) Delaviridine Pharmacia-Upjohn HIV infekcija, AIDS, ARC (RT inhibitor)
Dextran Sulfate Ueno Fine Chem. Ind. AIDS, ARC, HIV pozitivno Ltd. (Osaka, Japan) asimptomatski
ddC Dideoksicytidine Hoffman-La Roche HIV infekcija, AIDS, ARC ddI Dideoksiinosine Bristol-Myers Squibb HIV infekcija, AIDS, ARC; DMP-450 ‚ AVID (Camden, NJ) HIV infekcija, AIDS, ARC (inhibitor proteaze) Efavirenz (DMP 266, SUSTIVA®) Bristol Myers Squibb HIV infekcija, AIDS, ARC (-)6-Hlor-4-(S)- (nonnukleozid RT inhibitor) ciklopropiletinil-4(S)-trifluorometil-1,4-dihidro-2H-3,1-benzoksazin-2-on, STOCRINE
EL10 Elan Corp, PLC HIV infekcija (Gainesville, GA)
Etravirin Tibotec/ J & J HIV infekcija, AIDS, ARC (inhibitor nonnukleozid reverzne transkriptaze) Famciclovir Smith Kline herpes zoster,
herpes simplex
GS 840 Gilead HIV infekcija, AIDS, ARC (reverzne transkriptaze inhibitor) HBY097 Hoechst Marion HIV infekcija, AIDS, ARC Roussel (nonnukleozid reverzne transkriptaze inhibitor)
Hypericin VIMRx Pharm. HIV infekcija, AIDS, ARC Recombinant Human Interferon Beta Triton Biosciences AIDS, Kaposi-jev sarkom, ARC (Almeda, CA)
Interferon alfa-n3 Interferon Sciences ARC, AIDS
Indinavir Merck HIV infekcija, AIDS, ARC,
asimptomatski HIV pozitivno, also u kombinaciji sa AZT/ddI/ddC ISIS 2922 ISIS Pharmaceuticals CMV retinitis
KNI-272 Nat’l Cancer Institute HIV povezane bolesti Lamivudin, 3TC Glaxo Wellcome HIV infekcija, AIDS, ARC (reverzne transkriptaze inhibitor); takođe sa AZT
Lobucavir Bristol-Myers Squibb CMV infekcija
Nelfinavir Agouron HIV infekcija, AIDS, ARC Pharmaceuticals (inhibitor proteaze) Nevirapin Boeheringer Ingleheim HIV infekcija, AIDS, ARC (RT inhibitor)
Novapren Novaferon Labs, Inc. HIV inhibitor
(Akron, OH)
Peptide T Oktapeptide Sequence Peninsula Labs AIDS
(Belmont, CA)
Trizodium Phosphonoformate Astra Pharm. Products, CMV retinitis, HIV infekcija,
Inc. druge CMV infekcije
PNU-140690 Pharmacia Upjohn HIV infekcija, AIDS, ARC (inhibitor proteaze) Probucol Vyrex HIV infekcija, AIDS
RBC-CD4 Sheffield Med. Tech HIV infekcija, AIDS, ARC (Houston, TX)
Ritonavir Abbott HIV infekcija, AIDS, ARC (inhibitor proteaze) Sakvinavir Hoffmann-LaRoche HIV infekcija, AIDS, ARC (inhibitor proteaze) Starvudin; d4T Didehidrodeoksi-Thymidine Bristol-Myers Squibb HIV infekcija, AIDS, ARC Tipranavir Boehringer Ingelheim HIV infekcija, AIDS, ARC (inhibitor proteaze) Valaciclovir Glaxo Wellcome Genitalne HSV & CMV infekcije Virazole Ribavirin Viratek/ICN (Costa asimptomatski HIV pozitivno, LAS, Mesa, CA) ARC
VX-478 Vertex HIV infekcija, AIDS, ARC
Zalcitabin Hoffmann-LaRoche HIV infekcija, AIDS, ARC, sa AZT
Zidovudin; AZT Glaxo Wellcome HIV infekcija, AIDS, ARC, Kaposi-jev sarkom, u kombinaciji sa drugim terapijama Tenofovir dizoproksil,
fumaratna so (VIREAD®) Gilead HIV infekcija, AIDS, (reverzne transkriptaze inhibitor) EMTRIVA® (Emtricitabin) (FTC) Gilead HIV infekcija, AIDS, (reverzne transkriptaze inhibitor) COMBIVIR® GSK HIV infekcija, AIDS, (reverzne transkriptaze inhibitor) Abakavir sukcinat (ili ZIAGEN®) GSK HIV infekcija, AIDS, (reverzne
4
transkriptaze inhibitor) REYATAZ® (or atazanavir) Bristol-Myers Squibb HIV infekcija AIDs, protease inhibitor
FUZEON® (Enfuvirtid ili T-20) Roche / Trimeris HIV infekcija AIDs, inhibitor fuzije virusa
LEXIVA® (or Fosamprenavir
kalcijum) Selzentry GSK/Vertex HIV infekcija AIDs, inhibitor proteaze virusa
Maravirok; (UK 427857) Pfizer HIV infekcija AIDs, (CCR5
antagonist, u razvoju) Trizivir® GSK HIV infekcija AIDs, (kombinacija tri leka)
Sch-417690 (vicriviroc) Schering-Plough HIV infekcija AIDs, (CCR5
antagonist, u razvoju)
TAK-652 Takeda HIV infekcija AIDs, (CCR5 antagonist, u razvoju)
GSK 873140 (ONO-4128) GSK/ONO HIV infekcija AIDs, (CCR5
antagonist, u razvoju) Integrase Inhibitor MK-0518 Merck HIV infekcija AIDs Raltegravir
TRUVADA® Gilead Kombinacija Tenofovir dizoproksil fumaratne soli (VIREAD®) i
EMTRIVA® (Emtricitabin) Integrase Inhibitor GS917/JTK-303
Elvitegravir Gilead/Japan Tobacco HIV Infekcija AIDs u razvoju Triple drug combination ATRIPLA® Gilead/Bristol-Myers Kombinacija Tenofovir Squibb dizoproksil fumaratne soli (VIREAD®), EMTRIVA® (Emtricitabin) i SUSTIVA® (Efavirenz)
FESTINAVIR® 4’-etinil-d4T Oncolys BioPharma HIV infekcija AIDs u razvoju
BMS
CMX-157 Lipid conjugate of
nucleotide tenofovir GSK1349572 Chimerix HIV infekcija AIDs
GSK HIV infekcija
Integrase inhibitor dolutegravir AIDs
S/GSK1265744 Integrase inhibitor GSK HIV infekcija AIDs
IMUNOMODULATORI
[0101]
Naziv leka Proizvođač Indikacija
AS-101 Wyeth-Ayerst AIDS
Bropirimine Pharmacia Upjohn Advanced AIDS Acemannan Carrington Labs, Inc. AIDS, ARC
(Irving, TX)
CL246,738 Wyeth Lederle Labs AIDS, Kaposi-jev sarkom FP-21399 Fuki ImmunoPharm Blokira HIV fuziju sa CD4+ ćelijama
Gamma Interferon Genentech ARC, u kombinaciji sa/TNF (faktor nekroze tumora) Granulocyte Macrophage Genetics Institute Sandoz AIDS
Colony Stimulating Factor
Granulocyte Macrophage Hoechst-Roussel Immunex AIDS
Colony Stimulating Factor
Granulocyte Macrophage Schering-Plough AIDS, kombinacija sa/AZT Colony Stimulating Factor
HIV Core Particle Rorer Seropozitivni HIV Immunostimulant
IL-2 Interleukin-2 Cetus AIDS, u kombinaciji sa/AZT IL-2 Interleukin-2 Hoffman-LaRoche Immunex AIDS, ARC, HIV, u kombinaciji sa/AZT
IL-2 Interleukin-2
(aldeslukin) Chiron AIDS, povećan broj CD4 ćelije
4
Immune Globulin Intravenous
(human) Cutter Biological Pedijatrijski AIDS, u kombinaciji (Berkeley, CA) sa/AZT
IMREG-1 Imreg (New Orleans, LA) AIDS, Kaposi-jev sarkom, ARC,
PGL IMREG-2 Imreg (New Orleans, LA) AIDS, Kaposi-jev sarkom, ARC,
PGL
Imutiol Dietil Ditio
Carbamate Merieux Institute AIDS, ARC
Alpha-2 Interferon Schering Plough Kaposi-jev sarkom sa/AZT, AIDS Metionine-Enkephalin TNI Pharmaceutical AIDS, ARC
(Chicago, IL)
MTP-PE Muramil-Tripeptide Ciba-Geigy Corp. Kaposi-jev sarkom Granulocyte Colony
Stimulating Factor Amgen AIDS, u kombinaciji sa/AZT Remune Immune Response Corp. Imunoterapeutik
rCD4 Recombinant Soluble
Human CD4 Genentech AIDS, ARC
rCD4-IgG hybrids AIDS, ARC
Recombinant Soluble
Human CD4 Biogen AIDS, ARC
Interferon Alfa 2a Hoffman-La Roche Kaposi-jev sarkom AIDS, ARC, in kombinacija sa/AZT SK&F106528 Soluble T4 Smith Kline HIV infekcija
Thymopentin Immunobiology Research HIV infekcija
Institute (Annandale, NJ)
Faktor nekroze tumora; TNF Genentech ARC, u kombinaciji sa/gama Interferonom
ANTI-INFEKTIVI
[0102]
4
Naziv leka Proizvođač Indikacija
Clindamycin with Primaquine Pharmacia Upjohn PCP
Fluconazole Pfizer Kriptokokni meningitis,
kandidiaze
Pastille Nystatin Pastille Squibb Corp. Prevencija oralne kandidiaze Ornidyl Eflornithine Merrell Dow PCP
Pentamidine Isetionate LyphoMed (Rosemont, IL) PCP antibakterijski tretman (IM & IV)
Trimethoprim
Trimethoprim/sulfa Antibacterial
Piritrexim Burroughs Wellcome PCP treatment Pentamidine Isetionate
for Inhalation Fizons Corporation PCP profilaksa
Spiramycin Rhone-Poulenc diarrhea Kriptosporidialni Intraconazole-R51211 Janssen-Pharm. Histoplazmoma; kriptokokni meningitis
Trimetrexate Warner-Lambert PCP
Daunorubicin NeXstar, Sequus Kaposi-jev sarkom Recombinant Human
Erythropoietin Ortho Pharm. Corp. Teška anemija povezana sa AZT terapijom
Recombinant Human
Growth Hormone Serono AIDS-povezan sa mršavljenjem, kaheksija
Megestrol Acetat Bristol-Myers Squibb Tretman anoreksije povezane sa/AIDS
Testosterone Alza, Smith Kline mršavljenje povezano sa AIDS
Total Enteral Nutrition Norwich Eaton Dijareja i malabsorpcija Pharmaceuticals povezana sa AIDS
[0103] Pored toga, jedinjenja iz pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa inhibitorima unošenja HIV. Primeri ovakvih inhibitora unošenja HIV su dati u DRUGS OF THE FUTURE
4
1999, 24(12), pp.1355-1362; CELL, Vol.9, pp.243-246, Oct.29, 1999; i DRUG DISCOVERY TODAY, Vol.5, No.5, May 2000, pp.183-194 i Inhibitors of the entry of HIV into host cells. Meanwell, Nicholas A.; Kadow, John F., Current Opinion in Drug Discovery & Development (2003), 6(4), 451-461. Preciznije, jedinjenja mogu da se koriste u kombinaciji sa inhibitorima vezivanja, inhibitorima kondenzovanja i antagonistima hemokin receptora usmerenih ili na CCR5 ili CXCR4 koreceptor. Inhibitori vezivanja HIV su takođe dati u US 7,354,924 i US 7,745,625.
[0104] Takođe je razumljivo da okvir kombinacija jedinjenja iz ovog pronalaska sa AIDS antivirusima, imunomodulatorima, anti-infektivnim lekovima, inhibitorima unošenja HIV ili vakcinama nije ograničen listom u prethodno datoj tabeli ali uključuje, u principu, bilo koju kombinaciju sa bilo kojom farmaceutskom kompozicijom korisnom za tretman AIDS-a.
[0105] Preferirane kombinacije su istovremeni ili alternativni tretmani sa jedinjenjem iz pronalaska i inhibitorom HIV proteaze i/ili non-nukleozidnim inhibitorom HIV reverzne transkriptaze. Opciona četvrta komponenta u kombinaciji je nukleozidni inhibitor HIV reverzne transkriptaze, kao što su AZT, 3TC, ddC ili ddI. Preferirani inhibitor HIV proteaze je REYATAZ® (aktivni sastojak Atazanavir). Obično se doza od 300 do 600 mg primenjuje jedanput dnevno. Ovo može da se ko-primeni sa manjom dozom Ritonavira (50 do 500mg). Naredni preferirani inhibitor HIV proteaze je KALETRA®. Naredni koristan inhibitor HIV proteaze je indinavir, koji je sulfatna so N-(2(R)-hidroksi- 1-(S)-indanil)-2(R)-fenilmetil-4-(S)-hidroksi-5-(1-(4-(3-piridil-metil)-2(S)-N’-(t-butilkarboksamido)-piperazinil))-pentanamid etanolata i sintetizovan je u skladu sa U.S. 5,413,999. Indinavir se generalno primenjuje u dozi od 800 mg tri puta dnevno. Drugi preferirani inhibitor proteaze su nelfinavir i ritonavir. Naredni preferirani inhibitor HIV proteaze je sakvinavir koji se primenjuje u dozi od 600 ili 1200 mg tri puta dnevno. Preferirani non-nukleozid inhibitori HIV reverzne transkriptaze uključuju efavirens. Ove kombinacije mogu da imaju neočekivane efekte na ograničavanje širenja i stepen infekcije HIV. Preferirane kombinacije uključuju one sa sledećim (1) indinavir sa efavirenzom, i, opciono, AZT i/ili 3TC i/ili ddI i/ili ddC; (2) indinavir i bilo koji od AZT i/ili ddI i/ili ddC i/ili 3TC, posebno, indinavir i AZT i 3TC; (3) starvudin i 3TC i/ili zidovudin; (4) tenofovir dizoproksil fumaratna so i emtricitabin.
[0106] U ovim kombinacijama, jedinjenje iz ovog pronalaska i druga aktivna sredstva mogu da se primene odvojeno ili u konjukciji. Pored toga, primena jednog elementa može da bude pre, zajedno ili nakon primene drugog sredstva(ava).
4
OPŠTA HEMIJA (POSTUPCI SINTEZE)
[0107] Ovaj pronalazak otkriva jedinjenja Formule I, njihove farmaceutske formulacije i njihovu upotrebu na pacijentima koji boluju od ili su podložni HIV infekciji. Jedinjenja Formule I takođe uključuju njihove farmaceutski prihvatljive soli. Opšte procedure za izradu jedinjenja Formule I i međuproizvoda korisnih za njihovu sintezu su opisani u niže datim Šemama (nakon skraćenica). Jedinjenja Formule I koja više nisu jedinjenja iz ovog pronalaska su zadržana kao referentni primeri.
Skraćenice
[0108] Jedna ili više od narednih skraćenica, od kojih su većina skraćenice dobro poznate stručnjaku sa iskustvom u tehnici, mogu da se koriste kroz ceo opis otkrića i primera:
RT = sobna temperatura
BHT = 2,6-di-terc-butil-4-hidroksitoluen
CSA = kamforsulfonska kiselina
LDA = litijum diizopropilamid
KHMDS = kalijum bis(trimetilsilil)amid
SFC = superkritična tečna hromatografija
Quant = kvantitativno
TBDMS = terc-butildimetilsilan
PTFE = politetrafluoroetilen
NMO = 4-metilmorfolin-N-oksid
THF = tetrahidrofuran
TLC = hromatografija na tankom sloju
DCM = dihlormetan
DCE = dihloretan
TFA = trifluorosirćetna kiselina
LCMS = tečna hromatografija masena spektroskopija
Prep = preparativno
HPLC = visoko efikasna tečna hromatografija
DAST = (dietilamino)sumpor trifluorid
4
TEA = trietilamin
DIPEA = N,N-diizopropiletilamin
HATU = [O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat] DCC = N,N’-dicikloheksilkarbodiimid
DMAP = dimetilaminopiridin
TMS = trimetilsilil
NMR = nuklearna magnetna rezonanca
DPPA = difenil fosforil azid
AIBN = azobisizobuturonitril
TBAF = tetrabutilamonijum fluorid
DMF = dimetilformamid
TBTU = O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum tetrafluoroborat Min(s) = minut(i)
h = sat(i)
sat. = zasićen
TEA = trietilamin
EtOAc = etil acetat
TFA = trifluorosirćetna kiselina
PCC = piridinijum hlorhromat
TLC = hromatografija na tankom sloju
Tf2NPh = (trifluorometilsulfonil)metansulfonamid
dioksan = 1,4-dioksan
PG = zaštitna grupa
atm = atmosfera(e)
mol = mol(i)
mmol= milimol(i)
mg = miligram(i)
mg = mikrogram(i)
ml = mikrolitar(i)
mm= mikrometar(s)
mm= milimetar(i)
[0109] Nazivi "C-3" i "C-28" se odnose na neke pozicije triterpen jezgra kako je označeno u skladu sa IUPAC pravilima (niže opisane pozicije u odnosu na ilustrativni triterpen: betulin):
[0110] Isto numerisanje je zadržano i kada se odnosi na serije jedinjenja u šemama i opštim opisima postupaka.
C-17 ureeC-17 amidiC-17 amini
Izrada Jedinjenja Formule I opšte hemijske šeme:
[0111] Jedinjenja Formule I mogu da se izrade od komercijalno raspoložive (Aldrich, drugi)
1
betulinske kiseline hemijskim postupcima opisanim u narednim šemama.
[0112] Opšte šeme reakcije su date kako sledi:
Šema 1
Betu ns a
kiselina
Jedinjenja Formule I mogu da se izrade od betulinske kiseline kako je opisano u Šemi 1. Curtis preuređivanje betulinske kiseline može da se izvrši bez zaštite C-3 hidroksilne grupe da
2
se dobije C-17 izocijanat koji nakon kisele hidrolize daje C-17 amin. C-17 amin se nakon toga selektivno zaštiti sa amin zaštitnom grupom (to jest F-moc, Boc) da se nakon toga izvrši oksidacija C-3 hidroksi grupe u keton pod standardnim uslovima (to jest PCC, Dess-Martin reagent, itd). konverzija ketona u njegov triflat može da se izvede postupcima poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Zaštitna grupa u amino grupi se nakon toga ukloni da se dobije C-17 nesupstituisani amin. Uvođenje C-3 ostatka se izvodi Suzuki udvajanjem triflata sa odgovarajućom bornom kiselinom kako je prethodno opisano. Alternativno, udvajanje triflata sa odgovarajućom bornom kiselinom može da se izvrši pre deprotekcije C-17 amina. Kada je deprotektovana, C-17 amino grupa može nakon toga dalje da se izdvoji postupcima poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici kao što su alkilacija, reduktivna aminacija, acilacija, itd. Neki od ovih postupaka su opisani u niže datim Šemama (Šeme 2-7). U nekim slučajevima, potrebna je dodatna faza da se oslobodi bilo koja funkcionalna grupa koja može da bude funkcionalizovana sa zaštitnom grupom (to jest kada je Y COOH, uvek je maskiran kao odgovarajući estar COOR sve do poslednje faze).
C-17 primarni amin može dalje da se modifikuje po standardnim postupcima poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Neki primeri su pokazani u niže datim šemama.
Šema 2
C-17 amidi mogu da se izrade reakcijom karboksilne kiseline sa C-17 primarnim aminom u prisustvu odgovarajućeg reagensa za udvajanje kao što su HATU, DCC i drugi, poznati stručnjaku sa iskustvom u tehnici, u prisustvu baze kao što su Hunig-oa baza, TEA, itd, u odgovarajućem rastvaraču (DCM, THF, DMF, itd). Hidrolizom karboksilnog estra se dobija benzoeva kiselina. Alternativno, neki amidi mogu da se izrade tretiranjem C-17 primarnog amina sa odgovarajućim hloridom karboksilne kiseline kao reagensom umesto kiseline. Slično tome, sulfonamini i sulfonamidi mogu da se izrade od C-17 primarnog amina upotrebom sulfonil hlorida kao sredstva za sulfonilaciju.
Šema 3
C-17 uree mogu da se izrade reakcijom odgovarajućeg karbamoil hlorida ili izocijanata u prisustvu baze kao što su Hunig-ova baza, TEA, itd, u odgovarajućem rastvaraču (DCM, THF, DMF, itd). C-17 karbamati mogu da se izrade na sličan način upotrebom hloroformata umesto karbamoil hlorida.
m 4
C-17 primarni amin može da se tretira sa aldehidom pod uslovima reduktivne aminacije (na primer NaBH(OAc)3u prisustvu AcOH/NaOAc ili Ti(OPr)4u rastvaraču kao što su THF, 1,4-dioksan, DCE ili DCM) da se dobiju C-17 sekundarni amini.
Šema 5
[0113] Neki C-17 amini mogu da se izrade alkilacijom C-17 primarnog amina sa sredstvom za alkilaciju (R-LG), gde je LG odlazeća grupa kao što su, ali bez ograničenja na, Br, Cl, I, mesilat, tosilat ili triflat u prisustvu baze. U nekim slučajevima može da bude potrebno zagrevanje. Hidrolizom karboksilnog estra se dobija produkt benzoeve kiseline.
4
[0114] U nekim slučajevima, produžavanjem vremena reakcije i zagrevanjem reaktivne smeše može takođe da se formira dialkilovani produkt.
Š
Alternativno, neki C-17 amini mogu da se izrade 1,4-dodavanjem u Michael-ove akceptore [0115] Supstituenti R, R’ i R" mogu da sadrže funkcionalne grupe (to jest COOH, COOR, OH, NHR) koje mogu dalje da se modifikuju postupcima poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici. Modifikacija može da se izvede pre ili nakon finalne deprotekcije karboksilne kiseline i izvodi se u zavisnosti od prirode funkcionalne grupe.
[0116] Alternativno, C-17 sekundarni amin može dalje da se modifikuje (to jest alkiluje, aciluje, sulfoniluje, itd) upotrebom nekih od prethodno opisanih postupaka ili drugim standardnim postupcima poznatim stručnjaku sa iskustvom u tehnici.
PRIMERI
[0117] Naredni primeri ilustruju tipične sinteze jedinjenja Formule I kako je generalno prethodno opisano. Primeri 2, 2a i 2b su primeri iz ovog pronalaska, svi ostali primeri su za poređenje i/ili u svrhu ilustracije. Reagensi i početni materijali su lako raspoloživi stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici.
Hemija
Tipične procedure i karakterizacija izabranih primera:
[0118] Ukoliko nije drugačije navedeno, rastvarači i reagensi su korišćeni direktno kako su dobijeni iz komercijalnih izvora a reakcije su izvođene u atmosferi azota. Flash hromatografija je izvođena na Silika gelu 60 (0.040-0.063 veličina čestica; EM Science supply).<1>H NMR sspektar je beležen na Bruker DRX-500f pri 500 MHz (ili Bruker AV 400 MHz, Bruker DPX-300B ili Varian Gemini 300 pri 300 MHz kako je dato). Hemijske promene su zabeležene u ppm na δ skali u odnosu na δ TMS = 0. Sledeće unutrašnje reference su korišćene za rezidualne protone u sledećim rastvaračima: CDCl3(δH7.26), CD3OD (δH3.30), acetatni-d4 (sirćetna kiselina d4) (δH11.6, 2.07), DMSO miks ili DMSO-D6-CDCl3(δH2.50 i 8.25) (odnos 75%:25%) i DMSO-D6 (δH2.50). Korišćeni su standardni akronimi za opis umnoženih uzoraka: s (singlet), br. s (široki singlet), d (dablet), t (triplet), q (kvartet), m (multiplet), b (široko), app (vidljivo). Konstanta udvajanja (J) je u Hertz. Svi rezultati tečne hromatografije (LC) su beleženi na Shimadzu LC-10AS tečnom hromatografu koristeći SPD-10AV UV-Vis detektor sa rezultatima masene spektrometrije (MS) određenih pomoću Mikromass platformu za LC u elektrosprej modu.
Odeljak 1
LC/MS postupci
Postupak 1
[0119] Početni% B = 0, Finalni% B = 100 nakon 2 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B Brzina protoka = 1 mL/min
Talasna dužina = 220 nm
Rastvarač A= 90% voda, 10% metanol, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% metanol, 0.1% TFA
Kolona = Phenomenex Luna C18, 3 µm, 2.0 x 30 mm
Postupak 2
[0120] Početni% B = 0, Finalni% B = 100 nakon 4 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B Brzina protoka = 0.8 mL/min
Talasna dužina = 220 nm
Rastvarač A = 90% voda, 10% metanol, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% metanol, 0.1% TFA
Kolona = Phenomenex Luna C18, 3 µm, 2.0 x 50 mm
Postupak 3
[0121] Početni% B = 0, Finalni% B = 100 nakon 2 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B Brzina protoka = 1 mL/min
Talasna dužina = 220 nm
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Phenomenex Luna C18, 3 µm, 2.0 x 30 mm
Postupak 4
[0122] Početni% B = 20, Finalni% B = 100 nakon 2 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B
Brzina protoka = 0.8 mL/ min
Talasna dužina = 220 nm
Rastvarač A = 90% voda, 10% metanol, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% metanol, 0.1% TFA
Kolona = Waters Xbridge Fenil, 2.5 µm, 2.1 x 50 mm
Postupak 5
[0123] Start % B = 20, Finalni % B = 100, vreme zadržavanja = 1.5 min
Brzina protoka = 0.8 mL/min
Talasna dužina = 220
Rastvarač A = 10% MeOH - 90% voda - 0.1% TFA
Rastvarač B = 90% MeOH - 10% voda - 0.1% TFA
Kolona = Waters Xbridge Fenil 2.1 x 50 mm 2.5 µm
Postupak 6
[0124] Početni% B = 2, Finalni% B = 98 nakon 1.5 minuta gradijenta, zadržavanje na 98% B Brzina protoka = 0.8 mL / min
Talasna dužina = 220 nm
Rastvarač A = 100% voda, 0.05%TFA
Rastvarač B = 100% acetonitril, 0.05% TFA
Kolona = Waters Aquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 µm
Postupak 7
[0125] Start % B = 20, Finalni % B = 100, vreme zadržavanja = 3 min
Brzina protoka = 0.6 mL/min
Talasna dužina = 220
Rastvarač A = 10% MeOH - 90% voda - 0.1% TFA
Rastvarač B = 90% MeOH - 10% voda - 0.1% TFA
Kolona = Waters Xbridge Fenil 2.1 x 50 mm 2.5 µm
Postupak 8
[0126] Start % B = 20, Finalni % B = 100, vreme zadržavanja = 2 min
Brzina protoka = 0.6 mL/min
Talasna dužina = 220
Rastvarač A = 10% MeOH - 90% voda - 0.1% TFA
Rastvarač B = 90% MeOH - 10% voda - 0.1% TFA
Kolona = Waters Xbridge Fenil 2.1 x 50 mm 2.5 µm
Postupak 9
[0127] Početni% B = 0, Finalni% B = 100 nakon 2 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B Brzina protoka = 0.6 mL / min
Talasna dužina = 220 nm
Rastvarač A = 90% voda, 10% metanol, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% metanol, 0.1% TFA
Kolona = Xbridge Fenil, 2.5µm, 2.1 x 50 mm
Postupak 10
[0128] Start % B = 30, Finalni % B = 100 nakon 4 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B Brzina protoka = .8 ml/min
Talasna dužina = 220
Smeša rastvarača = Voda -Metanol-0.1% TFA
Rastvarač A = 90% Voda -10% Metanol-0.1% TFA
Rastvarač B = 10% Voda -90% Metanol-0.1% TFA
Kolona 2 = (2) PHENOMENEX-LUNA 2.0 X 50mm 3µm
Postupak 11
[0129] Start % B = 40, Finalni % B = 100 nakon 4 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B Brzina protoka = .8 ml/min
Talasna dužina = 220
Smeša rastvarača = Acetonitril:Voda: 10mM Amonijum Acetat
Rastvarač A = 5% Acetonitril:95% Voda: 10mM Amonijum Acetat
Rastvarač B = 95% Acetonitril:5% Voda: 10mM Amonijum Acetat
Kolona 2 = 2.) PHENOMENEX-LUNA 2.0 x 50mm 3µm
Postupak 12
[0130] Start % B = 20, Finalni % B = 100 nakon 4 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B Brzina protoka = .8 ml/min
Talasna dužina = 220
Smeša rastvarača = Acetonitril:Voda: 10mM Amonijum Acetat
Rastvarač A = 5% Acetonitril:95% Voda: 10mM Amonijum Acetat
Rastvarač B = 95% Acetonitril:5% Voda: 10mM Amonijum Acetat
Kolona 2 = 2.) PHENOMENEX-LUNA 2.0 x 50mm 3µm
SFC Postupci:
Postupak 1
[0131] Instrument = SFC Thar 350/A5
Brzina protoka = 220 mL/min
Talasna dužina = 220 nm
Mobilna faza = CO2/[heptan/IPA = 4:1 (v:v)] = 80/20 izokratno
Kolona = Whelko(rr) 50 x 5 cm, 10 µm
Zapremina injekcije = 1.0 mL [koncentracija rastvorka = 100 mg/mL heptan/IPA 4:1 (v:v)] Program injektiranja: Složene injekcije (1.0 mL svaka 2 min)
Postupci preparativne HPLC:
Prep HPLC postupak 1
[0132] Početni% B = 30, Finalni% B = 67 nakon 16 minuta gradijenta, faza do 100% B za 10 minuta
Brzina protoka = 100 mL / min
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 50 x 250 mm
Prep HPLC postupak 2
[0133] Početni% B = 0, Finalni% B = 100 nakon 20 minuta gradijenta, zadržavanje 100% B za 4 minuta
Brzina protoka = 50 mL / min
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Waters XBridge Fenil, 5 µm, 30 x 100 mm
Prep HPLC postupak 3
[0134] Početni% B = 15, Finalni% B = 100 nakon 20 minuta gradijenta, zadržavanje 100% B za 4 minuta
Brzina protoka = 50 mL / min
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
1
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Waters XBridge Fenil, 5 µm, 30 x 100 mm
Prep HPLC postupak 4
[0135] Početni% B = 20, Finalni% B = 100 nakon 20 minuta gradijenta, zadržavanje 100% B za 5 minuta
Brzina protoka = 50 mL / min
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 150 mm
Prep HPLC postupak 5
[0136] Početni% B = 30, Finalni% B = 100 nakon 15 minuta gradijenta, zadržavanje 100% B za 5 minuta
Brzina protoka = 20 mL / min
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Waters Xbridge Fenil, 5 µm, 19 x 250 mm
Prep HPLC postupak 6
[0137] Početni% B = 20, Finalni% B = 65 nakon 20 minuta gradijenta, faza do 100% B za 5 minuta
Brzina protoka = 50 mL / min
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
2
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 150 mm
Prep HPLC postupak 7
[0138] Početni% B = 20, Finalni% B = 100 nakon 30 minuta gradijenta, zadržavanje 100% B za 4 minuta
Brzina protoka = 50 mL / min
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 150 mm
Prep HPLC postupak 8
[0139] Početni% B = 30, Finalni% B = 100 nakon 18 minuta gradijenta, zadržavanje 100% B za 2 minuta
Brzina protoka = 25 mL / min
Sakupljanje pomoću ELSD
Rastvarač = 95% voda, 5% acetonitril, 10 mM amonijum acetat
Rastvarač B = 5% voda, 95% acetonitril, 10 mM amonijum acetat
Kolona = XBridge OBD Prep Shield RP1819x100 mm 5 µm
Prep HPLC Postupak 9
[0140] Početni% B = 10, Finalni% B = 100 nakon 10 minuta gradijenta, zadržavanje 100% B za 5 minuta
Brzina protoka = 50 mL / min
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 100 mm
Prep HPLC Postupak 10
[0141] Početni% B = 10, Finalni% B = 100 nakon 10 minuta gradijenta, zadržavanje 100% B za 5 minuta
Brzina protoka = 50 mL / min
Rastvarač = 95% voda, 5% acetonitril, 10mM amonijum acetat
Rastvarač B =5% voda, 95% acetonitril, 10mM amonijum acetat
Kolona = Xbridge OBD Prep Shield RP, 5 µm, 19 x 100mm
Prep HPLC Postupak 11
[0142] Početni% B = 25, Finalni% B = 100 nakon 15 minuta gradijenta, zadržavanje 100% B Brzina protoka = 40 mL / min
Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 100 mm
Prep HPLC Postupak 12
[0143] Start % B = 20, Finalni % B = 100 nakon 15 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B za 4 min
Brzina protoka = 50 ml/min
Talasna dužina = 220
Smeša rastvarača = Voda - acetonitril- TFA
4
Rastvarač A = 90% Voda -10% acetonitril-0.1% TFA
Rastvarač B = 10% Voda -90% acetonitril-0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 150 mm
Prep HPLC Postupak 13
[0144] Start % B = 30, Finalni % B = 100 nakon 15 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B za 15 min
Brzina protoka = 50 ml/min
Talasna dužina = 220
Smeša rastvarača = Voda - acetonitril- TFA
Rastvarač A = 90% Voda -10% acetonitril-0.1% TFA
Rastvarač B = 10% Voda -90% acetonitril-0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 150 mm
Prep HPLC Postupak 14
[0145] Start % B = 30, Finalni % B = 100 nakon 20 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B za 6 min
Brzina protoka = 50 ml/min
Talasna dužina = 220
Smeša rastvarača = Voda - acetonitril- TFA
Rastvarač A = 90% Voda -10% acetonitril-0.1% TFA
Rastvarač B = 10% Voda -90% acetonitril-0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 150 mm
Prep HPLC Postupak 15
[0146] Start % B = 30, Finalni % B = 100 nakon 15 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B za 5 min
Brzina protoka = 50 ml/min
Talasna dužina = 220
Smeša rastvarača = Voda - acetonitril- TFA
Rastvarač A = 90% Voda -10% acetonitril-0.1% TFA
Rastvarač B = 10% Voda -90% acetonitril-0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 150 mm
Prep HPLC Postupak 16
[0147] Start % B = 20, Finalni % B = 100 nakon 10 minuta gradijenta, zadržavanje na 100% B za 4 min
Brzina protoka = 50 ml/min
Talasna dužina = 220
Smeša rastvarača = Voda - acetonitril- TFA
Rastvarač A = 90% Voda -10% acetonitril-0.1% TFA
Rastvarač B = 10% Voda -90% acetonitril-0.1% TFA
Kolona = Waters Sunfire C18, 5 µm, 30 x 150 mm
Prep HPLC Postupak 17
[0148] Start % B = 30, Finalni % B = 50 nakon 30 minuta gradijenta, zadržavanje na 50% B za 5 min
Brzina protoka = 25 ml/min
Talasna dužina = 220
Smeša rastvarača = Voda - acetonitril- TFA
Rastvarač A = 90% Voda -10% acetonitril-0.1% TFA
Rastvarač B = 10% Voda -90% acetonitril-0.1% TFA
Kolona = YMC-OBD 20X100 mm S5
Izrada etil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilata
[0149]
Faza 1. Izrada etil 1-(hidroksimetil)-4-((trimetilsilil)oksi)cikloheks-3-enekarboksilata
Rastvor etil 2-(hidroksimetil)akrilata (5.21 g, 40 mmol) i (buta-1,3-dien-2-iloksi)trimetilsilana (8.54 g, 60.0 mmol) u toluenu (100 mL) se ispere sa azotom, zatvori i zagreva 48 h u boci pod pritiskom na 150 °C. Dobijena svetlo žuta reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje pod vakuumom da se dobije sirovi produkt kao ulje koji se koristi za sledeću fazu bez prečišćavanja. MS: m/e 201.05 (M+H-silil)<+>, 0.839 min (postupak 4).
Faza 2. Izrada etil l-(hidroksimetil)-4-oksocikloheksankarboksilata
U rastvor etil 1-(hidroksimetil)-4-((trimetilsilil)oksi)cikloheks-3-enekarboksilata (10.9 g, 40.0 mmol) u THF (5 mL) se doda HCl (0.005N) (1 mL, 5.00 mmol). Dobijeni rastvor se meša 18h na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 10 mL), ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(5 mL) a nakon toga sa slanim rastvorom (10 mL). Organski ekstrakt se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti hromatografijom na silika gelu koristeći etil acetat/heksane da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (3 g, 37.4%). MS: m/e 200.95 (M+H)<+>, 0.853 min (postupak 4).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.28 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.75 (s, 2H), 2.57 - 2.45 (m, 2H), 2.45 - 2.33 (m, 4H), 1.86 - 1.71 (m, 2H), 1.39 - 1.30 (m, 3H).
Faza 3. Izrada etil 4-okso-1-((((trifluorometil)sulfonil)oksi)metil)cikloheksankarboksilata
U promešanu smešu etil l-(hidroksimetil)-4-oksocikloheksankarboksilata (1,170 mg, 5.84 mmol) i piridina (0.614 mL, 7.60 mmol) u DCM (10 mL) se na -10 °C u kapima doda trifluorometansulfonski anhidrid (7.60 mL, 7.60 mmol). Dobijena smeša se meša 30 min na -10 °C i ispere sa ledeno hladnim 1N HCl rastvorom i slanim rastvorom. Izdvojeni organski sloj se suši preko natrijum sulfata. Rastvarač se ukloni i ostatak se koristi kakav jeste bez prečišćavanja. MS: m/e 333.05 (M+H)<+>, 1.969 min (postupak 4).
Faza 4. Izrada etil 1-(fluorometil)-4-oksocikloheksankarboksilata
U promešanu smešu etil 4-okso-1-((((trifluorometil)sulfonil)oksi)metil)cikloheksankarboksilata (1.941 g, 5.84 mmol) u DCM (10 mL) se na 25 °C u kapima doda tetrabutilamonijum bifluorid (3.63 mL, 7.01 mmol). Dobijena smeša se meša 18 sati na 25 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod vakuumom. Nakon mešanja dobijenog ostatka u 50 mL heksana formiraju se dva sloja. Gornji sloj se dekantuje u bocu i suši pod vakuumom da se dobije bezbojno ulje. Ovaj ostatak se prečisti flash hromatografijom pomoću 12 g silika gel kolone i sa gradijentom 0-35% EtOAc u heksanima da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (0.20g, 9.0%). MS: m/e 203.15 (M+H)<+>, 1.470 min (postupak 4).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.49 - 4.30 (m, 2H), 4.25 - 4.11 (m, 2H), 2.50 - 2.35 (m, 4H), 2.33 - 2.20 (m, 2H), 1.80 - 1.64 (m, 2H), 1.30 - 1.20 (m, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -223.02 - -225.00 (m, 1F).
Faza 5. Izrada etil 1-(fluorometil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)cikloheks-3-enekarboksilata
KHMDS (1.27 ml, 1.27 mmol) se na -78 °C doda u bledo žuti rastvor etil 1-(fluorometil)-4-oksocikloheksankarboksilata (0.20 g, 0.98 mmol) i 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-((trifluorometil)sulfonil)metansulfonamida (0.38 g, 1.07 mmol) u THF (20 mL). Dobijeni žuti rastvor se meša 2h na -78 °C. Reaktivna smeša se neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahuje jedanput sa 10 mL EtOAc. Organski sloj se ispere sa slanim rastvorom (10 mL), suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom pomoću 12g silika gel kolone i gradijentom 0-10% EtOAc u heksanima da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (179 mg, 54.7%).
<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.84 - 5.69 (m, 1H), 4.60 - 4.37 (m, 2H), 4.30 - 4.15 (m, 2H), 2.89 - 2.70 (m, 1H), 2.56 - 2.33 (m, 2H), 2.32 - 2.14 (m, 2H), 2.07 - 1.81 (m, 1H), 1.34 - 1.22 (m, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.18 - -225.70 (m, 1F)
Faza 6. U bocu koja sadrži etil 1-(fluorometil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)cikloheks-3-enekarboksilat (0.179 g, 0.53 mmol) se dodaju bis(pinakolato)dibor (0.143 g, 0.56 mmol), kalijum acetat (0.156 g, 1.59 mmol) i 1,1’-bis(difenilphosphino)ferocenpaladijum(II) dihlorid (0.013 g, 0.016 mmol). Smeša se razblaži sa dioksanom (8 mL), ispere sa azotom i zagreva 5 h do 70 °C. Nakon hlađenja na rt, smeša se razblaži sa vodom (25 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (2 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom i suše preko magnezijum sulfata. Sredstvo za sušenje se ukloni filtriranjem i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti flash hromatografijom pomoću 12 g Isco silika gel kolone i gradijentom 0-10% EtOAc u heksanima. Frakcije koje sadrže očekivani produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bistro, bezbojno ulje (91 mg, 54%). MS: m/e 313.20 (M+H)<+>, 2.299 min (postupak 4).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 6.50 (td, J=3.9, 2.0 Hz, 1H), 4.59 - 4.32 (m, 2H), 4.23 -4.13 (m, 2H), 2.74 - 2.52 (m, 1H), 2.30 - 2.08 (m, 3H), 1.98 - 1.69 (m, 2H), 1.32 - 1.20 (m, 15H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.59 - -226.36 (m, 1F).
Alternativni postupak izrade za dobijanje etil 1-(fluorometil)-4-oksocikloheksankarboksilata
[0150]
Faza 3
aza
Faza 1. Izrada etil 2-(fluorometil)akrilata
U rastvor etil 2-(hidroksimetil)akrilata (5 g, 38.4 mmol) u DCM (50 mL) se na -78 °C doda DAST (6.60 mL, 49.9 mmol). Reaktivna smeša se meša 1 sat na - 78°C. Smeša se zagreje na 25°C i kontinuirano meša još 3 sata. Reaktivna smeša se neutrališe dodavanjem CH2Cl2(20 mL) i NaHCO3zasićenim vodenim rastvorom (20 mL). Organski sloj se izdvoji i vodeni sloj se ekstrahuje dva puta sa CH2Cl2(20 mL). Kombinovani organski ekstrakti se suše preko natrijum sulfata i upare da se dobije preostalo ulje koje se koristi u sledećoj fazi bez prečišćavanja.<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 6.49 - 6.33 (m, 1H), 6.03 - 5.87 (m, 1H), 6.45 - 5.84 (m, 2H), 4.27 (q, J=7.1 Hz, 2H), 1.33 (t, J=7.1 Hz, 3H).<19>F NMR (470MHz, HLOROFORM-d) δ -220.33 - -221.86 (m, 1F).
Faza 2. Izrada etil 1-(fluorometil)-4-((trimetilsilil)oksi)cikloheks-3-enekarboksilata
Rastvor etil 2-(fluorometil)akrilata (4.7 g, 35.6 mmol)) i (buta-1,3-dien-2-iloksi)trimetilsilan (10.12 g, 71.1 mmol) u toluenu (100 mL)) se ispere sa azotom, zatvori i zagreva na 150 °C u posudi pod pritiskom 48 h. Dobijeni bledo žuti rastvor se ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao ulje koje se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.83 (t, J=3.3 Hz, 1H), 4.64 - 4.38 (m, 2H), 4.25 - 4.12 (m, 2H), 2.62 - 2.48 (m, 1H), 2.19 - 1.99 (m, 4H), 1.93 - 1.78 (m, 1H), 1.34 - 1.22 (m, 3H), 0.24 - 0.15 (m, 9H).<19>F NMR (470MHz, HLOROFORM- d) δ -224.80 - -225.37 (m, 1F).
Faza 3. Izrada etil l-(fluorometil)-4-oksocikloheksankarboksilata
1
U rastvor etil 1-(fluorometil)-4-((trimetilsilil)oksi)cikloheks-3-enekarboksilata (9.76 g, 35.6 mmol) u THF (5 ml) se doda HCl (0.005N) (1 mL, 5.00 mmol). Dobijeni rastvor se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 10 mL), ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(5 mL), nakon toga sa slanim rastvorom (10 mL), suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom pomoću 80 g silika gel kolone i gradijentom 0-25% EtOAc u heksanima. Frakcija koja sadrži očekivani produkt se sakupi i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (6.5g, 90.2%).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.59 - 4.42 (m, 2H), 4.30 (q, J=7.0 Hz, 2H), 2.58 - 2.34 (m, 6H), 1.88 - 1.73 (m, 2H), 1.33 (t, J=7.2 Hz, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -223.54 - -223.99 (m, 1F).
Izrada benzil 1 -(fluorometil)-4-oksocikloheksankarboksilata Postupak A.
[0151]
1. LiOH,
aza
2
Faza 1. Izrada etil 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata.
U bocu okruglog dna sa 3 grla zapremine 3L se stave etil 4-oksocikloheksankarboksilat (100 g, 570 mmol), etan-1,2-diol (0.159 L, 2849 mmol), ((1S,4R)-7,7-dimetil-2-oksobiciklo[2.2.1]heptan-1-il)metansulfonska kiselina (1.324 g, 5.70 mmol) i bezvodni toluen (1.2 L). Dean-Stark sakupljač vode i kondenzator se instaliraju i smeša zagreva pod refluksom uz mešanje. Nepomešani destilat se sakupi u Dean-Stark sakupljaču i postepenu ukloni.
Nakon 28 h ukupnog vremena refluksa, ukupno 82 mL nepomešanog destilata se ukloni iz Dean-Stark sakupljača. Nakon hlađenja smeše do približno 40 °C, u reaktivnu smešu se doda sat. NaHCO3(400 mL) uz brzo mešanje. Smeša se prenese u levak za razdvajanje, mućka i faze se razdvoje. Organski sloj se ispere sa vodom (4 x 500 mL), nakon toga sa 5% NaHCO3(200 mL) i nakon toga sa slanim rastvorom (100 mL). Organski materijal se suši preko anhidrovanog MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije svetlo žuto viskozno ulje (118.50 g, 97% prinos).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.15 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.96 (s, 4H), 2.41 - 2.27 (m, 1H), 1.96 (dt, J=8.7, 4.3 Hz, 2H), 1.89 - 1.74 (m, 4H), 1.68 - 1.49 (m, 2H), 1.27 (t, J=7.1 Hz, 3H).<13>C NMR (101MHz, HLOROFORM-d) δ 175.2, 108.1, 64.3, 60.3, 41.6, 33.8, 26.3, 14.3.
Faza 2: Izrada etil 8-formil-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata.
U rastvor etil 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata (32.31 g, 151 mmol) u THF (250 mL) se na -78 °C pomoću kanile, u toku 5 minuta dodaje 2M rastvor litijum diizopropilamida (98 mL, 196 mmol) u THF. Dobijeni braon rastvor se meša na -78 °C. Nakon 1h, hladno kupatilo se zameni sa ledenim kupatilom i reaktivna smeša se meša 1h na 0 °C. Reaktivna smeša se ponovo ohladi na -78 °C i tretira sa rastvorom etil formata (18.65 mL, 226 mmol) u THF (40 mL) dodatim u kapima u toku 45 min. Dobijena svetlo braon reaktivna smeša se meša 1h na -78 °C. Hladno kupatilo se ukloni i u smešu se u kapima doda zasićeni vodeni rastvor NH4Cl (250 mL) i smeša meša 30 min na temperaturi sredine. Dobijena žuta smeša se ekstrahuje sa EtOAc (3 x 300 mL). Kombinovana organska faza se ispere sa 0.5N HCl (300 mL), nakon toga sa slanim rastvorom, suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje do braon viskoznog ulja. Sirovi materijal se prečisti fleš hromatografijom na koloni preko silika gela (750 g silika gel, faza eluacije 9:1 heksani/EtOAc i 5:1 heksani/EtOAc) da se dobije obnovljeni početni materijal, etil 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat (8.6 g, 40.1 mmol, 26.6 % prinos) i željeni produkt, etil 8-formil-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat (20.1 g, 83 mmol, 55.0 % prinos), oba kao viskozna žuta ulja.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.50 (s, 1H), 4.17 (q, J=7.2 Hz, 2H), 3.94 - 3.86 (m, 4H), 2.24 - 2.09 (m, 2H), 2.01 (ddd, J=13.5, 8.3, 5.1 Hz, 2H), 1.75 - 1.48 (m, 4H), 1.23 (t, J=7.2 Hz, 3H).
Faza 3: Izrada etil 8-(hidroksimetil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata.
U rastvor etil 8-formil-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata (28.9 g, 119 mmol) u etanolu (300 mL) se na 0 °C doda natrijum borhidrid (5.30 g, 137 mmol) i dobijena smeša se meša na 0 °C. Nakon 3h, reaktivna smeša se neutrališe sa zasićenim vodenim rastvorom NH4Cl (200 mL) koji se u kapima doda pomoću levka za dodavanje. Ledeno kupatilo se ukloni i dobijena žitka masa se polako tretira sa H2O (150 mL). Dobijena smeša se filtrira da se ukloni mala količina bele čvrste supstance. Tečni filtrat se koncentruje da se ukloni najveći deo organskog rastvarača i ostatak se ekstrahuje sa EtOAc (4 x 250 mL). Kombinovana organska faza se ispere sa slanim rastvorom, suši preko MgSO4, filtrira, koncentruje i suši pod sniženim pritiskom da se dobije etil 8-(hidroksimetil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat (27.7 g, 113 mmol, 95 % prinos) kao bistro viskozno ulje. Materijal iz ovog eksperimenta se koristi direktno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja. U posebnom eksperimentu, sirovi materijal se prečisti flash hromatografijom na koloni (SiO2, eluent 3:1 heksani:EtOAc) da se dobije etil
4
8-(hidroksimetil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat sa 91% prinosa.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.18 (q, J=7.1 Hz, 2H), 3.98 - 3.87 (m, 4H), 3.61 (d, J=6.1 Hz, 2H), 2.23 (br. s., 1H), 2.17 - 2.07 (m, 2H), 1.72 - 1.51 (m, 6H), 1.32 - 1.20 (m, 3H).
Faza 4. Izrada benzil 8-(hidroksimetil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata.
U rastvor etil 8-(hidroksimetil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata (27.6 g, 113 mmol) u THF (150 mL) i MeOH (50 mL) se doda 3N vodeni rastvor litijum hidroksida (45.2 mL, 136 mmol) i smeša se zagreva 17 h na 60 °C uz mešanje. Nakon toga se doda još 3N vodenog rastvoar litijum hidroksida (30.1 mL, 90 mmol) i smeša se zagreva na 60 °C dodatnih 14h. Reaktivna smeša se koncentruje i suši pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak koji sadrži odgovarajući karboksilat (24.5 g, 107 mmol) koji se koristi bez daljeg prečišćavanja.
U ovaj ostatak u DMF (200 mL) se doda benzil bromid (12.98 mL, 107 mmol) i dobijena smeša se meša 17h na rt. Reaktivna smeša se koncentruje do približno polovine od originalne zapremine, razblaži sa EtOAc (250 mL) i ispere sa 1N HCl (200 mL). Vodena faza se ekstrahuje sa 3 x 250 mL EtOAc. Kombinovana organska faza se ispere sa H2O (100 mL), slanim rastvorom, suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje do svetlo žutog viskoznog ulja. Sirovi materijal se prečisti flash hromatografijom na koloni (SiO2, gradijent faze eluacije 70:30 hex:EtOAc nakon toga 1:1 hex:EtOAc) i suši pod sniženim pritiskom da se dobije benzil 8-(hidroksimetil)-1,4- dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat (23.1 g, 71.6 mmol, 63% prinos preko 3 faze).<1>H NMR (400MHz, HLOR- FORM-d) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.16 (s, 2H), 3.91 (s, 4H), 3.64 (s, 2H), 2.34 (br. s., 1H), 2.22 - 2.12 (m, 2H), 1.70 - 1.63 (m, 4H), 1.62 - 1.54 (m, 2H).<13>C NMR (101MHz, HLOROFORM-d) δ 175.3, 135.8, 128.5 (s, 2C), 128.1, 127.8, 108.3, 68.5, 66.4, 64.2, 64.1, 48.1, 31.3, 27.9.
Faza 5. Izrada benzil 8-((((trifluorometil)sulfonil)oksi)metil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata.
U boci okruglog dna zapremine 500 mL se kombinuje benzil 8-(hidroksimetil)-l,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat (14.9 g, 48.6 mmol) sa bezvodnim DCM (250 mL). Rastvor se ohladi u led/aceton kupatilu do približno -10 °C i u to se doda piridin (5.31 mL, 65.7 mmol), nakon toga se u kapima u toku 30 min dodaje Tf2O (11.09 mL, 65.7 mmol). Svetlo žuta suspenzija se meša na 0 °C (kupatilo sa ledenom vodom) u toku 1.5 h. Dobijena tamno narandžasta smeša sa značajno suspendovanim čvrstim supstancama se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak koji se ostavi pod vakuumom da se ukloni višak triflatnog anhidrida, nakon toga se ostatak ponovo rastvori u DCM (150 mL). Smeša se filtrira da se ukloni značajna količina bele ćvrste supstance koja se ispere sa DCM. Tamno crvenkasto/narandžasti filtrat se koncentruje i prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela (330 g silika, eluacija 100% DCM). Frakcije produkta se kombinuju i koncentruju do gustog narandžastog ulja koje se ostavi pod visokim vakuumom uz mešanje u toku noći. Boja postaje plavo/zelena. Tako se dobija željeni produkt (20.94 g, 98% prinos) kao plavo/zeleno viskozno ulje.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.48 - 7.30 (m, 5H), 5.21 (s, 2H), 4.53 (s, 2H), 4.04 - 3.87 (m, 4H), 2.30 - 2.14 (m, 2H), 1.76 - 1.56 (m, 6H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -74.39 (s, 1F).
Faza 6. Izrada benzil 8-(fluorometil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilata.
U boci okruglog dna zapremine 500 mL u atmosferi azota se kombinuje benzil 8-((((trifluorometil)sulfonil)oksi)metil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat (20.76 g, 47.4 mmol) sa anhidrovanim THF (150 mL) koji se uvodi pomoću kanile. U plavi rastvor se u kapima pomoću levka za dodavanje u toku 15 min dodaje TBAF, 1.0M u THF (71.0 mL, 71.0 mmol). Smeša odmah postaje žuta kao kanarinac i tada se doda TBAF. Smeša se meša 1h na rt. Sirova smeša se koncentruje da se dobije gusto ulje koje se razblaži sa etil acetatom (700 mL) i ispere sa vodom (2 x 250 mL) i sa slanim rastvorom (100 mL). Organska faza se suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje do gustog žutog ostatka. Prečišćavanjem flash hromatografijom na koloni silika gela (330 g silika, gradijent eluacije 100% heksani do 2:1 heksani:EtOAc) dobija se željeni produkt kao žuto ulje (13.73 g, 94% prinos). LCMS: m/e 309.2 (M+H)<+>, 1.27 min (postupak 6).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.44 - 7.31 (m, 5H), 5.21 (s, 2H), 4.45 (d, J=47.2 Hz, 2H), 4.01 - 3.89 (m, 4H), 2.28 - 2.16 (m, 2H), 1.75 - 1.55 (m, 6H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -223.25 (t, J=46.8 Hz, 1F).
Faza 7. U boci okruglog dna zapremine 2 L ohlađenoj u ledenom kupatilu se kombinuje benzil 8-(fluorometil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-karboksilat (13.72 g, 44.5 mmol) sa THF (500 mL) i nakon toga se u toku 2 min polako dodaje 1.5M vodeni rastvor hlorovodonične kiseline, (534 mL, 801 mmol). Ledeno kupatilo se ukloni i smeša se meša 15 h na rt. Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se ukloni organska supstanca i ostatak se ekstrahuje sa etil acetatom (300 mL). Etil acetat faza se ispere sa vodom (2 x 200 mL) i sa slanim rastvorom (50 mL). Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom dobija se željeni produkt (12.13 g, kvantitativno) kao žuto ulje. LCMS: m/e 265.3 (M+H)<+>, 1.19 min (postupak 6).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.47 - 7.32 (m, 5H), 5.27 (s, 2H), 4.52 (d, J=47.2 Hz, 2H), 2.57 - 2.42 (m, 4H), 2.42 - 2.31 (m, 2H), 1.87 - 1.76 (m, 2H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM- d) δ -223.41 (t, J=46.8 Hz, 1F).
Postupak B
[0152]
Faza 1. Izrada benzil 2-(hidroksimetil)akrilata
U bocu zapremine 1 L se stave benzil akrilat (44.6 mL, 292 mmol), dioksan (290 mL), 1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktan (32.7 g, 292 mmol) i voda (270 mL). Smeša se energično meša na RT da se formira emulzija. U izmešanu smešu se doda vodeni rastvor formaldehida (37%, 23.9 mL, 321 mmol) i mešanje se nastavi 14 sati na RT. Sirova reaktivna smeša se ekstrahuje sa metilen hloridom (3 x 150 mL). Organski slojevi se razdvoje, kombinuju i isperu sa 50:50 smešom zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida i HCl (0.2 N). Uparavanjem i Koncentrovanjem pod sniženim pritiskom (2 cm Hg) na 45 °C dobija se 49.1 g slobodno protočnog sirupa. Sirovi produkt se prečisti na koloni silika gela uz eluiranje sa gradijent smešom EtOAc/Heksani da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bistri bezbojni sirup (27 g, 141 mmol, 48%). LCMS: m/e 193.05 (M+H)<+>, 1.78 min (Postupak 1).<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.50 - 7.30 (m, 5H), 6.34 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.38 (d, J=6.4 Hz, 2H), 2.20 (t, J=6.6 Hz, 1H);<13>C NMR (126MHz, HLOROFORM-d) δ 166.1, 139.3, 135.7, 128.7, 128.4, 128.2, 126.2, 66.6, 62.7.
Faza 2. Izrada benzil 2-(fluorometil)akrilata
Benzil 2-(hidroksimetil)akrilat (13.7 g, 71.3 mmol) se rastvori u bezvodnom metilen hloridu (100 mL) u atmosferi azota i smeša se ohladi na -78 °C. U ovaj ohlađeni rastvor se pomoću polietilenske pipete dodaje dietilaminosumpor trifluorid (DAST, 13.0 mL, 98 mmol) u 4 porcije u toku 5 minuta. Formira se bledo narandžasti rastvor. Kada je dodavanje završeno, ledeno kupatilo se ukloni i omogući da temperatura reakcije poraste do RT. Mešanje se nastavi na RT ukupno 4 sata. Reaktivna smeša se u kapima prenese u ohlađenu (~4 °C) 50:50 smešu zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata i vode. Kada se sva sirova reaktivna smeša prenese, ekstrahuje se sa BHT-stabilizovanim etrom (3 x 150 mL). Organski slojevi se kombinuju i isperu jedanput sa vodom (50 mL). Rastvarač iz organske faze se ukloni pod sniženim pritiskom na temperaturi ispod sobne (~15 °C) do konstantne težine (14.2 g, kvantitativno). Sirovi materijal se odmah koristi u sledećoj fazi.<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.44 - 7.34 (m, 5H), 6.49 - 6.43 (m, 1H), 5.99 (dt, J=2.8, 1.5 Hz, 1H), 5.26 (s, 2H), 5.13 (d, J=46.5 Hz, 2H);<19>F NMR (470MHz, HLOROFORM-d) δ -220.91 (t, J=46.2 Hz).
Faza 3 - Izrada benzil 1-(fluorometil)-4-((trimetilsilil)oksi)cikloheks-3-enekarboksilata
U posudu pod pritiskom koja se može zatvoriti zapremine 500 mL se doda sirovi početni materijal benzil 2-(fluorometil)akrilat (14.2 g, 73.1 mmol) i (buta-1,3-dien-2-iloksi)trimetilsilan (Sigma Aldrich materijal korišćen kako je nabavljen, 18.73 g, 132 mmol) u toluenu (200 mL). Posuda se isprazni do 80 mikrona Hg na -78 °C, nakon toga se prečisti sa azotom. Postupak se ponovi dva puta. Boca se zatvori i zagreva na RT pre nego što se u toku 22 sata na 125 °C uroni u uljano kupatilo. Smeša se ostavi da se ohladi na RT. Mali alikvoti (25 mL) se uklone iz sirove reakcije, suše pod vakuumom na Rt za NMR analizu<1>H i<19>F. NMR rezultati su konzistentni sa formiranjem naslovljenog jedinjenja i malom količinom odgovarajućeg Diels-Alder regioizomera.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.43 -7.29 (m, 5H), 5.18 (s, 2H), 4.80 (d, J=3.0 Hz, 1H), 4.52 (dq, J=46.9, 8.4 Hz, 2H), 2.65 - 2.49 (m, 1H), 2.21 - 2.00 (m, 4H), 1.92 - 1.78 (m, 1H), 0.24 - 0.12 (m, 9H);<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -224.76 (t, J=47.7 Hz, 1F) i manje<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.20 (t, J=46.8 Hz, 0.06F). Sirovi materijal se upari i suši pod vakuumom (20 mikrona Hg) na ~35 °C do konstantne težine (24.6 g, kvantitativno). Ovaj sirovi materijal se koristi u sledećoj fazi kao takav bez daljeg prečišćavanja.
Faza 4. Sirovi materijal iz prethodne faze (24.6 gm, 73 mmol) se rastvori u THF (200 mL) na RT da se formira bistar rastvor. Dodaju se 1N vodeni rastvor HCl (2 mL, 2 mmol) i voda (4 mL). Bistar rastvor se meša na Rt ukupno 16 sati. Sirova reaktivna smeša se neutrališe sa 150 mL smeše 50:50 zasićenog vodenog rastvora amonijum natrijum bikarbonata i vode. Organski sloj se ekstrahuje sa EtOAc (3 x 75 mL). Organski slojevi se kombinuju i upare do sušenja da se dobije 18.8 g gustog sirupa. Sirovi ostatak se prečisti pomoću 330 g silika gel kolone uz eluiranje sa gradijent smešom 0 do 25 % v/v etil acetat u heksanima, sa ~25 zapremina kolone da se dobije naslovljeno jedinjenje (15.6 g, 81.0 %). LCMS: m/e 265.15 (M+H)<+>, 1.60 min (Postupak 3).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.50 - 7.30 (m, 5H), 5.26 (s, 2H), 4.43 (d, J=46.9 Hz, 2H), 2.54 - 2.29 (m, 6H), 1.90 - 1.71 (m, 2H);<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -223.47 (t, J=46.8 Hz, 1F).
Izrada (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilata i (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilata.
[0153]
THF, -78 °C KOAc,70 °C
Faza 1 Faza 2
(R)-izomer(S)-izomer
Faza 1. Izrada benzil 1-(fluorometil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)cikloheks-3-enekarboksilata.
U boci okruglog dna zapremine 500 mL se kombinuju benzil 1-(fluorometil)-4-oksocikloheksankarboksilat (12.65 g, 47.9 mmol) i N,N-bis(trifluorometilsulfonil)anilin (18.81 g, 52.7 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (250 mL). Rastvor se ohladi na -78 °C u bezvodnom kupatilu led/aceton. U ohlađeni rastvor se u toku 30 min u kapima dodaje kalijum heksametildisilazid, 0.5M rastvor u toluenu (105 mL, 52.7 mmol). Smeša se meša na -78 °C ukupno 2.5 h i nakon toga se izvadi iz ledenog kupatila i meša dodatnih 20 min na rt. Smeša se ponovo stavi u kupatilo na -78 °C i uz mešanje se u nju doda 125 mL zasićenog vodenog rastvora amonijum hlorida. Dobijena suspenzija se ukloni iz hladnog kupatila i uz mešanje ostavi da se zagreje na rt. Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se ukloni organski rastvarač, nakon toga se u smešu dodaju etil acetat (600 mL) i voda (300 mL), smeša se mućka i faze se razdvoje. Organski sloj se ispere sa vodom (2 x 200 mL) i sa slanim rastvorom (50mL). Organski sloj se suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije žuto/narandžasto ulje. Sirovi ostatak se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela (800 g silika, eluiranje izokratno 3:2 heksani:DCM). Frakcije produkta se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije željeni produkt (17.43 g, 92% prinos) kao veoma svetlo žuto ulje.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.43 - 7.31 (m, 5H), 5.78 (br. s., 1H), 5.26 - 5.15 (m, 2H), 4.52 (dm, J=46.7 Hz, 2H), 2.78 (d, J=16.9 Hz, 1H), 2.52 - 2.33 (m, 2H), 2.33 - 2.17 (m, 2H), 1.94 (dt, J=13.8, 6.9 Hz, 1H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -73.88 (s, 1F), -225.02 (t, J=46.8 Hz, 1F).
Faza 2. Izrada benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilata.
U boci okruglog dna zapremine 500 mL se kombinuju benzil 1-(fluorometil)-4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)cikloheks-3-enekarboksilat (17.42 g, 44.0 mmol), kalijum acetat (0.030 g, 0.307 mmol), 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-oktametil-2,2’-bi(1,3,2-dioksaborolan) (11.72 g, 46.1 mmol), 1,1’-bis(difenilphosphino)ferocenpaladijum(II) dihlorid (3.03 mg, 3.69 mmol) i anhidrovani dioksan (200 mL). Boca se ostavi u atmosferi azota i zagreva na 70 °C. Nakon 5 h, smeša se ostavi da se ohladi na rt i ostavi u toku noći. Reaktivna smeša se
1
koncentruje pod sniženim pritiskom i sirovi tamno crveni ostatak se razblaži sa etil acetatom (600 mL) i vodom (300 mL). Smeša se mućka i faze se razdvoje. Organska faza se ispere sa vodom (250 mL) i nakon toga sa slanim rastvorom (100 mL). Organska faza se suši preko anhidrovanog MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom do tamno crvenog viskoznog ulja. Sirova smeša se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela (800 g silika; faza eluacije 1:3 heksani:DCM za 4 L, nakon toga 100% DCM za 5 L.2 g materijala izmešanih frakcija iz prvog prečišćavanja se ponovo prečisti preko 80 g silika gela, gradijent eluacije 100% heksani do 100% DC,) da se dobije željeni produkt kao bezbojno gusto ulje (13.06 g, 79.4% prinos). LCMS: m/e 375.3 (M+H)<+>, 1.52 min (postupak 6).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.44 - 7.30 (m, 5H), 6.54 (br. s., 1H), 5.25 - 5.11 (m, 2H), 4.51 (dm, J=47.4 Hz, 2H), 2.67 (d, J=19.3 Hz, 1H), 2.29 - 2.10 (m, 3H), 2.02 - 1.89 (m, 1H), 1.86 - 1.74 (m, 1H), 1.28 (s, 12H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.62 (t, J=45.1 Hz, IF).
Faza 3. Racematni benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilat (11.15 g, 0.0298 mmol) se prečisti superkritičnom tečnom hromatografijom (SFC Postupak 1) da se dobije izdvojeni pojedinačni izomer naslovljenog jedinjenja: (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilat. Ovo je prvi izomer koji eluira SFC asimetričnim razdvajanjem. Produkt se izdvoji kao žuto ulje (5.45 g, 98% SFC povraćaj, 99.2% asimetrična čistoća).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.42 - 7.30 (m, 5H), 6.54 (br. s., 1H), 5.24 - 5.12 (m, 2H), 4.51 (dm, J=47.2 Hz, 2H), 2.67 (d, J=19.3 Hz, 1H), 2.27 - 2.10 (m, 3H), 2.00 - 1.90 (m, 1H), 1.85 - 1.75 (m, 1H), 1.28 (s, 12H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.62 (t, J=46.8 Hz, IF).
[0154] (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilat. Ovo je drugi izomer koji eluira SFC asimetričnim razdvajanjem. Produkt se izdvoji kao žuto ulje (4.94 g, 89% SFC povraćaj, 99.3% asimetrična čistoća).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.43 - 7.31 (m, 5H), 6.54 (br. s., 1H), 5.24 - 5.13 (m, 2H), 4.52 (dm, J=47.2 Hz, 2H), 2.68 (d, J=19.3 Hz, 1H), 2.27 - 2.10 (m, 3H), 2.01 - 1.90 (m, 1H), 1.85 - 1.75 (m, 1H), 1.28 (s, 12H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.61 (t, J=48.6 Hz, IF).
2
Izrada 4-(2-bromoetil)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida
[0155]
Faza 1 Izrada etil 2-(dihidro-2H-tiopiran-4(3H)-ilidene)acetata
Naslovni međuproizvod je izrađen u skladu sa postupkom datim od strane Lammek, Derdowska i Rekowski u Polish Journal of Chemistry 64, 351 (1990).
Faza 2: Izrada etil 2-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)acetata
Naslovljeni međuproizvod je izrađen u skladu sa onim objavljenim u PCT WO 00/44713 sa 64% prinosa iz dve faze (1 i 2).
Faza 3: Izrada 2-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etanola
U ohlađeni (ledeno kupatilo, 0°C) rastvor etil 2-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)acetata (6.4 g, 34.0 mmol) u dietil etru (100 mL) u bocu zapremine 500 mL se u kapima doda osnovni rastvor, 1M rastvor litijum aluminum hidrida (34.0 mL, 34.0 mmol) u THF. Najpre se formira mutna suspenzija i uočava se izdvajanje gasa vodonika. Reaktivna smeša postaje bistra nakon dodavanja približno 2/3 LiAlH4reagensa. Ledeno kupatilo se ukloni i reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na temperaturu sredine (~ 19-21 °C) u toku 4 sata. Reakcija se neutrališe dodavanjem upola zasićenog rastvora NH4Cl u 0.5N HCl u kapima sve dok se ne formira slobodno izmešana, bela suspenzija. Čvrsta supstanca se ukloni filtriranjem i ispere sa još rastvarača. Filtrat i ispirak se kombinuju i koncentruju pod vakuumom da se dobije naslovljeni međuproizvod (4.9 gm 99%).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 3.71 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.78 - 2.53 (m, 4H), 2.03 (d, J=13.3 Hz, 2H), 1.52 (dd, J=6.8, 3.3 Hz, 3H), 1.46 - 1.33 (m, 2H).
Faza 4: Izrada 4-(2-hidroksietil)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida
U rastvor 2-(tetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etanola (182 mg, 1.244 mmol) u acetonu (3 mL) se na sobnoj temperaturi doda suspenzija Oksone® (1.53 gm, 2.5 mmol) u vodi (7 mL). Detektuje se blaga egzotermija i mešanje se nastavi 2 sata na sobnoj temperaturi. Sirova reaktivna suspenzija se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 20 mL). Organski slojevi se kombinuju i koncentruju pod vakuumom da se dobije gusti sirup koji sadrži naslovljeno jedinjenje (66 mg 29.8%).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 3.74 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.12 - 2.92 (m, 4H), 2.15 (dd, J=13.8, 2.5 Hz, 2H), 1.96 - 1.84 (m, 2H), 1.84 - 1.73 (m, 1H), 1.61 (q, J=6.4 Hz, 2H)
Faza 5: Izrada 2-(1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etil metansulfonat
4
Rastvor 4-(2-hidroksietil)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida (30 mg, 0.168 mmol) u DCM (1 mL) se ohladi u ledenom kupatilu u atmosferi azota. Doda se DIPEA (0.088 ml, 0.505 mmol), nakon toga metansulfonil hlorid (0.020 ml, 0.252 mmol). Reaktivna smeša se meša 30 minuta na 0 °C. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (2 mL) i ekstrahuje sa DCM (3 x 5 mL).
Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko Na2SO4i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela uz eluiranje sa 50 -100 % EtOAc/Heksan koristeći ELS detektor da se dobije željeno jedinjenje kao ulje (37 mg, 86%). LCMS m/e 257.10 (M+H)<+>, 1.086 min (postupak 3).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.29 (t, J=5.9 Hz, 2H), 3.03 (s, 3H), 3.11 - 2.94 (m, 4H), 2.14 (dt, J=14.2, 1.2 Hz, 2H), 1.98 - 1.73 (m, 5H).
Faza 6: Izrada 4-(2-bromoetil)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida
U rastvor 2-(1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etil metansulfonata (37 mg, 0.144 mmol) u THF (2 mL) se doda litijum bromid (37.6 mg, 0.433 mmol). Smeša se meša 18 h na sobnoj temperaturi. Rastvarač se ukloni a ostatak se rastvori u DCM (20 mL) i ispere sa slanim rastvorom (20 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (2 X 20 mL). Kombinovani DCM slojevi se suše preko Na2SO4i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela uz eluiranje sa 40-75% EtOAc/Heksan koristeći ELS detektor da se dobije željeni produkt kao čvrsta supstanca (30 mg, 86%). LCMS m/e 241.05 (M+H)<+>, 1.5 minuta (postupak 3).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 3.46 (t, J=6.4 Hz, 2H), 3.12 - 2.94 (m, 4H), 2.17 - 2.07 (m, 2H), 1.96 - 1.80 (m, 5H).
Izrada 4-(1-amino-2-metilpropan-2-il)tiomorfolin 1,1-dioksida
aza
Faza 3
Faza 1: Izrada N-(2-amino-2-metilpropil)acetamida
Naslovljeni međuproizvod se izrađuje u skladu sa postupkom objavljenim u US patentu: 4906661, sa 82%.<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 6.01 (br. s., 1H), 3.15 (d, J=5.8 Hz, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.14 (s, 6H).
Faza 2: Izrada N-(2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-metilpropil)acetamida
U rastvor N-(2-amino-2-metilpropil)acetamida (2.3 g, 17.67 mmol) u 2-propanolu (28 mL) se doda (vinilsulfonil)eten (2.3 g, 19.47 mmol) u posudi pod pritiskom koja može ponovo da se zatvoriti. Posuda se ispere sa azotom i zagreva 4 sata na 100 °C. Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, čvrsta supstanca počinje da se izdvaja. Čvrsta čvrsta supstanca se filtrira, ispere sa izopropanolom i suši da se dobije željeni produkt (2.7 gm, 61.5%).<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 5.73 (br. s., 1H), 3.28 (d, J=5.2 Hz, 2H), 3.12 - 3.00 (m, 8H), 2.04 (s, 3H), 1.15 - 1.10 (m, 6H).
Faza 3: Izrada 4-(1-amino-2-metilpropan-2-il)tiomorfolin 1,1-dioksida
U rastvor N-(2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-metilpropil)acetamida (100 mg, 0.403 mmol) u MeOH (2 mL) se doda 1N NaOH (2.013 ml, 2.013 mmol) i smeša se meša 18 h na 70 °C. Doda se još NaOH (2.013 ml, 2.013 mmol) i rastvor se meša 24 h na 90 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se ukloni MeOH i ostatak se ekstrahuje sa EtOAc (2 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela uz eluiranje sa 5-10% MeOH/CH2Cl2koristeći ELS detektor da se dobije željeni produkt kao ulje u kvantitativnom prinosu. LCMS m/e 207.20 (M+H)<+>, 0.268 minuta (postupak 3).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 3.07 (s, 8H), 2.71 (s, 2H), 1.11 (s, 6H).
Primer 1
Izrada diastereomerne (1R)- i (1S)-1-(fluorometil)-4-((IR,3aS,5aR,5bR, 7aR,11a:,11bR,13 aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0157]
Primer 1
Faza 1. Izrada etil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3- enekarboksilata
Smeša (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonata (240 mg, 0.321 mmol) (izrađen kako je opisano u WO2013123019), racematnog etil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-ene-karboksilata (91 mg, 0.291 mmol), natrijum karbonat hidrata (108 mg, 0.874 mmol) i paladijum tetrakisa (20.21 mg, 0.017 mmol) se rastvori u dioksanu (4 mL) u atmosferi azota. Formira se narandžasti rastvor, koji nakon dodavanja vode (1 mL) prelazi u veoma bledu žutu suspenziju. Smeša se ohladi na -78 °C i ciklusi izdvajanja/prečišćavanja se izvode 3 puta. Boca se zaroni u uljano kupatilo zagrejano na 85 °C u toku dva sata. Dobijena crna suspenzija se razblaži sa etil acetatom (20 mL) i ispere sa vodom (30 mL). Organska faza se sakupi i suši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom da se dobije bela čvrsta supstanca (180 mg, 79%). MS: m/e 783.47 (M+H)<+>, 2.36 min (postupak 1)<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.32 (d, J=3.5 Hz, 1H), 5.18 (d, J=5.5 Hz, 1H), 4.75 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.58 -4.37 (m, 2H), 4.25 - 4.15 (m, 2H), 3.24 - 2.41 (m, 14H), 2.27 - 1.76 (m, 20H), 1.70 (s, 3H), 1.64 - 1.31 (m, 13H), 1.10 - 1.04 (m, 5H), 1.00 - 0.88 (m, 8H), 0.85 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.42 (s, IF)
Faza 2. NaOH (IN, 2 mL, 2.0 mmol) se doda u rastvor etil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR, 7aR,11a:,11bR,13 aR,13bR)-5 a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen- 9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (180 mg, 0.230 mmol) u 1,4-dioksanu (4 mL) i MeOH (2 mL). Smeša se meša 2 h na 66 °C, formira se bistar rastvor. Sirova reaktivna smeša se prečisti preparativnom HPLC (Xbridge OBD prep shield RP C1819 x100 mm) (MeCN / H2O/ AcONH4) da se formira 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline kao bela čvrsta supstanca (29 mg, 16.7 %). MS: m/e 755.50 (M+H)<+>, 2.548 min (postupak 4)<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.34 (br. s., 1H), 5.19 (br. s., 1H), 4.74 (br. s., 1H), 4.61-4.49 (m, 3H), 3.18 (d, J=10.5 Hz, 2H), 2.97 - 2.40 (m, 12H), 2.35 - 1.78 (m, 14H), 1.73 - 1.60 (m, 6H), 1.58 - 1.17 (m, 11H), 1.13 (br. s., 3H), 1.08 (m, 4H), 1.01 - 0.90 (m, 8H), 0.86 (br. s., 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -217.84 - -231.26 (m, IF)
Izrada Primera 1a i 1b
[0158] HPLC razdvajanjem Primera 1 u (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR, 7aR,11a:,11bR,13 aR,13bR)-5 a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilnu kiselinu (Primer 1a) i (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilnu kiselinu (Primer 1b)
[0159] Dva diastereomera se razdvoje koristeći preparativnu HPLC (postupak 17). Prvi produkt eluacije je identifikovan kao (S)-2-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11a,S,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene- karboksilna kiselina (Primer 1a) (bela čvrsta supstanca, 18 mg, 29.6%). MS: m/e 755.55 (M+H)<+>, 2.620 min (postupak 4).<1>H NMR (400MHz, METANOL-d4) δ 5.35 (br. s., 1H), 5.21 (d, J=4.8 Hz, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.63 - 4.39 (m, 2H),
3.51 - 3.43 (m, 1H), 3.41 - 3.37 (m, 3H), 3.28 (d, J=4.0 Hz, 1H), 3.20 (d, J=10.0 Hz, 1H), 3.10 (br. s., 1H), 3.02 - 2.96 (m, 3H), 2.85 - 2.68 (m, 2H), 2.63 - 2.51 (m, 2H), 2.35 - 1.78 (m, 16H), 1.77 (s, 3H), 1.74 - 1.28 (m, 15H), 1.21 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, METANOL-d4) δ - 227.00 (s, IF).
[0160] Drugo izdvojeno jedinjenje je identifikovano kao: (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, (Primer 1b), (bela čvrsta supstanca, 20 mg, 32.8%) MS: m/e 755.55 (M+H)<+>, 2.626 min (postupak 4)<1>H NMR (400MHz, METANOL-d4) δ 5.35 (br. s., 1H), 5.21 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.85 (br. s., 1H), 4.75 (s, 1H), 4.61 - 4.36 (m, 2H), 3.38 -3.19 (m, 6H), 3.05 (m, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.89 (d, J=7.8 Hz, 1H), 2.82 - 2.70 (m, 1H), 2.67 -2.50 (m, 2H), 2.45 - 1.97 (m, 14H), 1.92 - 1.80 (m, 3H), 1.78 (s, 3H), 1.73 - 1.28 (m, 14H), 1.21 (br. s., 3H), 1.14 - 1.08 (m, 3H), 1.01 - 0.99 (m, 3H), 0.97 - 0.94 (m, 3H), 0.93 (s, 3H).
<19>F NMR (376MHz, METANOL-d4) δ - 227.04 (s, IF).
Alternativni postupak izrade za Primer 1a: (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilna kiselina bis hidrohloridna so.
[0161]
Faza 1. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata.
1
U staklenoj posudi pod pritiskom sa navojnim zatvaračem zapremine 350 mL se kombinuju (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonat (9.00 g, 12.05 mmol), (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilat (4.96 g, 13.25 mmol) i hlor (2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropil-1,1’-bifenil)[2-(2’-amino-1,1’-bifenil)]paladijum(II) (X-Phos aminobifenil paladijum hlorid prekatalizator, XPhos-Pd-G2, 0.569 g, 0.723 mmol). Sadržaj posude se prečisti sa azotom i u reaktivnu bocu se doda anhidrovani THF (180 mL). Sveže izrađen 0.5 M vodeni rastvor K3PO4se prečisti sa gasom azotom i doda u posudu (60.2 mL, 30.1 mmol). Posuda se zatvori i dobijeni žuti rastvor se meša na 80 °C. Boja smeše u toku 30 min postaje tamnija, do veoma tamno zelene. Smeša se zagreva 18 h. Reaktivna smeša maslinasto zelene boje se razblaži sa EtOAc (700 mL) i ispere sa 5% vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (250 mL x 2) i nakon toga sa slanim rastvorom (100 mL). Vodena faza se ekstrahuje sa 2 x 100 mL hlorforma i organske faze se kombinuju, suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju do žute čvrste pene. Sirovi materijal se prečisti flash hromatografijom na koloni (800 g silika, faza eluacije 3:1 heksani:aceton za 8 L, nakon toga 1: 1 heksani:aceton za 4 L). Izmešane frakcije iz prve hromatografije (1.0 g materijala) se ponovo prečiste flash hromatografijom na silika gelu (80 g silika, gradijent eluacije 100% heksani do 3:1 heksani:aceton preko 8 zapremina kolone, zadržavanje 3:1 heksani:aceton za 10 zapremina kolone). Na taj način se dobija željeni materijal (7.18 g, 70.5% prinos) kao žuta penasta čvrsta supstanca. LCMS: m/e 845.6 (M+H)<+>, 1.57 min (postupak 6).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.41 - 7.31 (m, 5H), 5.32 (s, 2H), 5.23 - 5.15 (m, 2H), 5.13 (dd, J=6.0, 1.6 Hz, 1H), 4.73 (d, J=2.2 Hz, 1H), 4.64 - 4.44 (m, 3H), 3.13 (dd, J=15.4, 13.0 Hz, 2H), 2.89 - 2.78 (m, 4H), 2.68 - 2.53 (m, 4H), 2.52 - 2.41 (m, 2H), 2.21-1.16 (m, 31H), 1.13 - 0.99 (m, 7H), 0.97 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.85 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.07 (t, J=46.8 Hz, IF).
Faza 2. Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline.
2
U boci sa okruglim dnom zapremine 500 mL se kombinuju (S)-benzil 1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin- 1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (7.17 g, 8.48 mmol) sa litijum hidroksidom, 1.0 M vodenim rastvorom (42.4 mL, 42.4 mmol) i tetrahidrofuranom (50 mL) i MeOH (50 mL). Smeša se zagreva na 75 °C 2.5h. Skoro crna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da nastane čvrsti ostatak. Ostatak se ponovo rastvori u smeši acetonitrila (50 mL) i hlorforma (50 mL) i crni rastvor se tretira u kapima sa trifluorosirćetnom kiselinom (6.54 mL, 85 mmol). Smeša se nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije dvofazna smeša (crno ulje sa bistrom tečnošću koje pluta po površini). Ova smeša se razblaži sa smešom acetonitril:hloroform (150 mL) i ponovo koncentruje pod sniženim pritiskom. Ovaj postupak rastvaranja/rekonstitucije se ponovi još jedanput da se dobije crno ulje koje se ostavi pod visokim vakuumom u toku noći. Crno ulje očvrsne u toku noći u penu. Crna čvrsta supstanca se rastvori u smeši hlorforma (20 mL) i acetona (5 mL) i prenese na kratku kolonu sačinjenu od silicijuma (približno 60g) sa celite na vrhu (približno 25 g). Eluiranjem sa 1:1 aceton:hloroform (500 mL) nakon toga sa 3:1 aceton:hloroform (1000 mL) ukloni se crna boja i produkt eluira kao žuta masa. Frakcije produkta se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije higroskopna žuta čvrsta pena (16 g). Delovi ove čvrste pene (približno 1.4 g) se lako rastvore u 5 mL smeše 80:20 acetonitril:voda i prenesu na 130 g Isco Redisep Rf Gold C18 kertridž. Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA.
Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA. Gradijent eluacije 30-100% B preko 8 zapremina kolone, nakon toga zadržavanje 100% B za 8 zapremina kolone. Koncentrovanjem produkta koji sadrži frakcije pod sniženim pritiskom dobija se čist beli prašak. Ovaj čist materijal se ostavi sa strane kao Serija 1. Ostatak sirovog materijala (približno 14.5 g) se lako rastvori u 20 mL 80:20 smeše acetonitril:voda. Ovaj sirovi materijal se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC u 9 injektiranja koristeći prep HPLC, postupak 1. Čist materijal dobijen na ovaj način se kombinuje sa prethodno dobijenom Serijom 1 da se dobije 6.32 g čistog belog praška (Serija 2) zajedno sa malo nečistog materijala (1.40 g) iz smeše frakcija. Materijal izmešanih frakcija (1.40 g) se prenese u minimum 80:20 acetonitril:voda na 130 g Isco Redisep Rf Gold C18 kertridž. Rastvarač A = 90% voda, 10% acetonitril, 0.1% TFA. Rastvarač B = 10% voda, 90% acetonitril, 0.1% TFA. Gradijent eluacije 30-100% B preko 10 zapremina kolone, nakon toga zadržavanje 100% B za 4 zapremina kolone. Koncentrovanjem produkta koji sadrži frakcije pod sniženim pritiskom dobija se čista bela pena (1.17 g). Ovaj materijal se kombinuje sa čistom serijom 2 materijala da se dobije naslovljeno jedinjenje kao TFA so (7.41 g, 89% prinos, bela pena). LCMS: m/e 755.6 (M+H)<+>, 1.29 min (postupak 6).
<1>H NMR (400MHz, Sirćetni) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.24 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.56 (dm, J=47.2 Hz, 2H), 3.93 - 3.65 (m, 6H), 3.43 (tt, J=11.3, 3.9 Hz, 1H), 3.26 (t, J=12.3 Hz, 2H), 3.02 (s, 3H), 2.86 - 2.73 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.43 (d, J=13.0 Hz, 2H), 2.35 - 2.13 (m, 7H), 2.13 - 2.09 (m, 1H), 2.01 - 1.78 (m, 4H), 1.78 - 1.70 (m, 4H), 1.69 - 1.45 (m, 9H), 1.45 - 1.27 (m, 3H), 1.24 - 1.12 (m, 5H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, Sirćetni) δ -76.46 (s, IF), -225.82 (t, J=46.8 Hz, IF).
Faza 3. U boci okruglog dna zapremine 500 mL sa magnetnom mešalicom se kombinuju acetonitril (150 mL) sa hlorovodoničnom kiselinom 6.0M vodeni rastvor (37.1 mL, 223 mmol). U brzo izmešanu smešu se pomoću levka za dodavanje doda rastvor (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,1aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, TFA so (7.30 g, 7.42 mmol) rastvorena u acetonitrilu (60 mL). Skoro odmah se formira beli precipitat koji postaje teži kako se dodavanje nastavlja. Dodavanje se nastavlja nakon ukupno 20 min. Mlečno bela suspenzija se meša 1.25 h na rt. Suspenzija se ohladi u ledenom kupatilu i tako formirana veoma fina bela čvrsta supstanca se izdvoji filtriranjem, ispere sa ledeno hladnim acetonitrilom, ostavi da se suši na vazduhu i nakon toga suši pod visokim vakuumom na rt. Tako se izdvoji željeni produkt kao beli prašak (5.857 g, 95% prinos). LCMS: m/e 755.5 (M+H)<+>, 1.27 min (postupak 6).<1>H NMR (400MHz, Sirćetni) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.89 (s, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.55 (dm, J=47.2 Hz, 2H), 4.13 - 3.87 (m, 4H), 3.82 (br. s., 2H), 3.55 - 3.42 (m, 2H), 3.39 (br. s., 1H), 3.03 (s, 3H), 3.01 - 2.90 (m, 1H), 2.62 (d, J=17.9 Hz, 1H), 2.55 - 2.43 (m, 2H), 2.43 - 2.14 (m, 8H), 1.95 - 1.79 (m, 3H), 1.79 - 1.71 (m, 4H), 1.69 - 1.47 (m, 9H), 1.47 - 1.28 (m, 4H), 1.22
4
(s, 3H), 1.19 - 1.12 (m, 2H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, sirćetni) δ -225.81 (t, J=45.1 Hz, IF).
Alternativni postupak izrade za Primer 1b: Izrada (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0162]
Primer 1b
Faza 1. Izrada (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
U bocu sa (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonatom (3.0 g, 5.38 mmol), (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilatom (2.013 g, 5.38 mmol) (izrađen kako je opisano u WO2013169578 i tribaznim kalijum fosfatom (3.43 g, 16.14 mmol) se doda druga generacija Buchwald X-Phos prekristalizatora (0.042 g, 0.134 mmol). Smeša se razblaži sa THF (20 mL) i vodom (4 mL), ispere sa azotom i zagreva do 50 °C. Nakon 15.5 h zagrevanja smeše, ona se ohladi na rt i delimično koncentruje pod sniženim pritiskom. Smeša se razblaži sa vodom (75 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 75 mL). Organski slojevi se suše preko magnezijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti flash hromatografijom pomoću gradijenta 0-10% metanola u dihlormetanu i 220 g silika gel kolone da se dobije naslovljeni produkt (3.34 g, 95 % prinos) kao beličasti sunđer. LCMS: m/e: 656.6 (M+H)<+>, 2.30 min (postupak 1).<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ = 7.39 - 7.30 (m, 5H), 5.32 (br. s., 1H), 5.21 - 5.15 (m, 2H), 5.11 (dd, J=6.1, 1.9 Hz, 1H), 4.73 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.61 (dd, J=2.1, 1.3 Hz, 1H), 4.53 (dm, J=47.3 Hz, 2H), 2.64 - 2.51 (m, 2H), 2.23 - 1.93 (m, 7H), 1.70 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.85 (s, 3H), 1.85 - 0.83 (m, 22H).
Faza 2. Izrada (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U zatvorenu bocu sa benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilatom (3.34 g, 5.09 mmol) se doda fosforna kiselina, kalijumova so (5.40 g, 25.5 mmol), kalijum jodid (0.930 g, 5.60 mmol) i 1-(2-hloretil)-4-(metilsulfonil)piperidin.HCl (4.01 g, 15.28 mmol). Smeša se razblaži sa acetonitrilom (50 mL), ispere sa azotom, nakon toga se boca zatvori i zagreva do 100 °C. Nakon 4 h zagrevanja, smeša se ohladi na rt i meša u toku noći na rt. Smeša se razblaži sa 50 mL acetonitrila i doda se joiš 1g 1-(2-hloretil)-4-(metilsulfonil)piperidin.HCl. Boca se zatvori i smeša se zagreva 2 h na 100 °C. Smeša se ohladi na rt i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se razblaži sa vodom (75 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 75 mL).
Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti flash hromatografijom pomoću gradijenta 0-8% MeOH u dihlormetanu i 220 g silika gel kolone. Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti reverzno faznom hromatografijom (150 g C18 Kolona, gradijent 30-90% acetonitril u vodi sa dodatih 0.1% TFA) da se dobije TFA so naslovljenog produkta (3.17 g, 3.30 mmol, 64.9 % prinos) kao bela pena. LCMS: m/e: 845.6 (M+H)<+>, 2.10 min (postupak 1).<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ = 7.39 - 7.30 (m, 5H), 5.32 (br. s., 1H), 5.21 - 5.15 (m, 2H), 5.11 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.70 (s, 1H), 4.53 (dm, J=47.1 Hz, 2H), 3.44 - 3.21 (m, 6H), 3.17 - 3.08 (m, 1H), 3.05 - 2.97 (m, 1H), 2.90 (s, 3H), 2.79 - 2.57 (m, 4H), 1.69 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.86 (s, 3H), 2.37 - 0.83 (m, 31H).
Faza 3. U rastvor (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (3.17 g, 3.75 mmol) u 1,4-dioksanu (30 mL) i metanolu (10 mL) se doda NaOH (3N) (7.50 mL, 22.50 mmol) i smeša se zagreva 17 h na 80 °C. Smeša se ohladi na rt i delimično koncentruje pod sniženim pritiskom. Smeša se zakiseli dodavanjem 1N HCl i formira se čvrsta supstanca koja se sakupi filtriranjem. U sakupljeni čvrsti materijal se doda 20 mL vode i 1N NaOH rastvor (9.38 mL, 9.38 mmol). Smeša se meša deset minuta, nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se razblaži sa vodom (20 mL) i acetonitrilom (30 mL) i tretira sa TFA (1.445 mL, 18.75 mmol). Smeša se nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom i adsorbuje na silika gelu i prečisti pomoću gradijenta 20-30% hlorforma u acetonu i 220 g silika gel kolone. Frakcije koje sadrže očekivani produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt kao TFA so. Za konverziju u HCl so, ostatak se razblaži sa 200 mL acetonitrila i doda se 6N rastvor HCl (6.66 mL, 40.0 mmol). Formiraju se čvrste supstance i smeša se razblaži sa 20 mL hlorforma. Čvrste supstance se nisu rastvorile pa se smeša koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se ponovo razblaži sa acetonitrilom i hlorformom i doda se 6N HCl (6.66 mL, 40.0 mmol). Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom i postupak se ponovi treći put. Čvrste supstance se nakon toga razblaže sa acetonitrilom i zagrevaju pod refluksom, nakon toga ohlade na rt i sakupe filtriranjem da se dobije HCl so očekivanog produkta. Kako je još uvek prisutna nečistoća od ~1.5%, smeša se ponovo konvertuje u TFA so za prečišćavanje dodavanjem 20 mL vode i 1N rastvora NaOH (8.26 mL, 8.26 mmol), meša nekoliko minuta, nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se nakon toga razblaži sa vodom (20 mL) i acetonitrilom (30 mL) i tretira sa TFA (1.273 mL, 16.52 mmol). Smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom i adsorbuje na silika gelu i prečisti pomoću gradijenta 20-30% hlorforma u acetonu i 220 g silika gel kolone. Frakcije koje sadrže naslovljeno jedinjenje se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt kao TFA so. HPLC ostatka pokazuje da su još uvek prisutne manje nečistoće. Smeša se ponovo prečisti koristeći 150 g C18 Kolonu i gradijent 30-90% acetonitril u vodi uz dodavanje 0.1% TFA. Frakcije koje sadrže očekivani produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt kao bela čvrsta supstanca, TFA so naslovljenog produkta. Za konverziju u HCl so, ostatak se rastvori u acetonitrilu i tretira sa 6N rastvorom HCl (6.66 mL, 40.0 mmol), nakon toga se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ovaj proces se ponovi još dva puta, nakon toga se čvrste supstance razblaže sa acetonitrilom, zagrevaju pod refluksom, ohlade i sakupe filtriranjem da se dobije (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, bis HCl so (1.6 g, 1.859 mmol, 49.6 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/e: 755.5 (M+H)<+>, 1.69 min (postupak 1).
<1>H NMR (400MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ = 5.37 (br. s., 1H), 5.22 (d, J=4.8 Hz, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.53 (dm, J=47.0 Hz, 2H), 4.09 - 3.72 (m, 6H), 3.51 - 3.27 (m, 3H), 3.01 (s, 3H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 2.59 (d, J=17.6 Hz, 1H), 2.52 - 2.40 (m, 2H), 1.74 (s, 3H), 1.19 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 2.39 - 1.04 (m, 29H), 1.00 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).
C45H71FN2O4S • 2.0 HCl • 1.530 H2O.
Primer 2
Izrada diastereomerne (1R)- i (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,1bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0163]
Faza 1. Izrada etil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata. Naslovljeno jedinjenje se izrađuje u 82% prinosa prateći prethodno opisani postupak za izradu etil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,1aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata, koristeći (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonat (izrađen kako je opisano u WO2013123019) umesto (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonata kao reaktanta. MS: m/e 755.55 (M+H)<+>, 2.706 min (postupak 4).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.32 (d, J=3.5 Hz, 1H), 5.18 (d, J=5.8 Hz, 1H), 4.73 (d, J=1.8 Hz, 1H), 4.66 - 4.58 (m, 1H), 4.56 - 4.39 (m, 2H), 4.26 - 4.15 (m, 2H), 3.17 - 2.92 (m, 8H), 2.83 - 2.45 (m, 6H), 2.22 - 2.05 (m, 3H), 2.03 - 1.72 (m, 5H), 1.69 (s, 3H), 1.65 - 1.26 (m, 16H), 1.23 (br. s., 3H), 1.18 - 1.02 (m, 7H), 1.01 - 0.89 (m, 8H), 0.86 (s, 3H),<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ - 225.41 (s, IF).
Faza 2. Naslovljeno jedinjenje se izrađuje u 11.5% prinosa po prethodno opisanom postupku u Fazi 2 za izradu etil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata, koristeći etil
4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat umesto etil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-cikloclopenta[a]hrizen-
1
9-il)cikloheks-3-enekarboksilata kao reaktant. MS: m/e 727.55 (M+H)<+>, 2.527 min (postupak 4).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.34 (br. s., 1H), 5.18 (br. s., 1H), 4.76 (br. s., 1H), 4.64 - 4.56 (m, 2H), 4.48 (br. s., 1H), 3.26 - 2.94 (m, 8H), 2.90 - 2.38 (m, 6H), 2.32 -1.77 (m, 10H), 1.70 (m, 6H), 1.61 - 1.17 (m, 12H), 1.15 - 1.03 (m, 6H), 1.01 - 0.91 (m, 8H), 0.87 (br. s., 3H),<19>F NMR (470MHz, HLOROFORM-d) δ -225.02 (br. s., IF).
Izrada Primera 2a i 2b
[0164] HPLC razdvajanje Primera 2 u (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilnu kiselinu (Primer 2a) i (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11as,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilnu kiselinu (Primer 2b)
[0165] Dva diastereomera se razdvoje koristeći preparativnu HPLC (postupak 17). Prvi produkt eluacije je identifikovan kao (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, (Primer 2a) (bela čvrsta supstanca, 7
1 1
mg, 33%). MS: m/e 727.55 (M+H)<+>, 2.650 min (postupak 4).<1>H NMR (400MHz, METANOL-d4) δ 5.35 (br. s., 1H), 5.27 - 5.15 (m, 1H), 4.87 - 4.80 (m, 1H), 4.73 (br. s., 1H), 4.62 - 4.37 (m, 2H), 3.29 - 3.17 (m, 8H), 3.16 - 3.05 (m, 3H), 3.02 - 2.86 (m, 1H), 2.80 (td, J=11.0, 5.5 Hz, 1H), 2.63 - 2.46 (m, 1H), 2.36 - 1.80 (m, 12H), 1.76 (br. s., 3H), 1.75 - 1.29 (m, 15H), 1.20 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, METANOL-d4) δ -227.04 (s, IF).
[0166] Drugo izolovano jedinjenje je identifikovano kao (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, (Primer 2b) (bela čvrsta supstanca, 7 mg, 33%). MS: m/e 727.55 (M+H)<+>, 2.644 min (postupak 4).<1>H NMR (400MHz, METANOL-d4) δ 5.36 (br. s., 1H), 5.22 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.88 - 4.81 (m, 1H), 4.78 - 4.68 (m, 1H), 4.64 - 4.36 (m, 2H), 3.30 - 3.15 (m, 8H), 3.17 - 3.03 (m, 3H), 2.99 - 2.88 (m, 1H), 2.86 - 2.72 (m, 1H), 2.63 - 2.50 (m, 1H), 2.37 - 1.97 (m, 8H), 1.92 - 1.80 (m, 4H), 1.78 (s, 3H), 1.74 - 1.28 (m, 15H), 1.22 - 1.19 (m, 3H), 1.15 - 1.11 (m, 3H), 0.99 (br. s., 3H), 0.97 (s, 3H), 0.95 - 0.92 (m, 3H).<19>F NMR (376MHz, METANOL- d4) δ -227.05 (br. s., 1F).
Alternativni postupci izrade za Primer 2b
[0167] Postupak A: (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina via asimetričnog (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2- il)cikloheks-3-enekarboksilata
1 2
Faza 1: Izrada (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
Smeša (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonata (1.75 g, 2.434 mmol), (R)-benzil 1-(fluorometil)- 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilata (1.00 g, 2.68 mmol), Na2CO3.H2O (0.91 g, 7.30 mmol) i Pd(Ph3P)4(0.17 g, 0.15 mmol) u dioksanu (40 mL) i vodi (10.00 mL) u atmosferi N2se ohladi na -78 °C. Rastvor prelazi u čvrstu supstancu. Ciklusi vakuumiranja i prečišćavanja sa N2se izvode tri puta. Smeša se meša 1 h na 70 °C. Boja se promeni u tamno braon. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se razblaži sa H2O (100 mL) i ekstrahuje sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti na koloni silika gela uz eluiranje sa 0 - 35% EtOAc/Heksan da se dobije naslovljeno jedinjenje kao čvrsta supstanca (1.12 g, 56%).<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.39 - 7.30 (m, 5H), 5.32 (s, 1H), 5.22 - 5.14 (m, 2H), 5.11 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.60 - 4.45 (m, 2H), 3.13 - 2.98 (m, 8H),
1
2.72 - 2.54 (m, 5H), 2.51 - 2.43 (m, 1H), 2.23 - 1.00 (m, 27H), 1.69 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.85 (s, 3H).<13>C NMR (126MHz, HLOROFORM-d) δ 174.30, 150.72, 147.90, 139.10, 135.94, 128.52, 128.13, 127.97, 121.41, 121.30, 109.41, 87.60, 86.21, 66.62, 62.72, 57.21, 52.91, 51.29, 51.00, 49.71, 49.39, 47.38,
45.84, 45.70, 41.98, 41.64, 40.64, 38.71, 37.46, 36.80, 36.09, 34.14, 33.61, 30.05, 29.74, 29.18, 29.14, 29.06, 28.66, 26.79, 26.43, 26.39, 25.24, 21.52, 21.36, 19.66, 19.56, 16.30, 16.04, 14.34.<19>F NMR (470MHz, HLOROFORM-d) δ -225.09 (t, J=47.3 Hz, IF). MS m/e 817.50 (M+H)<+>, 2.32 min (postupak 5).
Faza 2: rastvor (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (2.3 g, 2.81 mmol) u 1,4-dioksanu (60 mL) i H2O (30 mL) se ohladi u ledenom kupatilu i doda se 1N NaOH rastvor (28 mL, 28 mmol). Dobijena mutna smeša se zagreje na RT i nakon toga meša 2 h na 70 °C. Reaktivna smeša se ohladi na RT i prenese u ledeno kupatilo pre nego što se neutrališe sa 0.5N HCl. Smeša se meša u toku noći. Precipitirana čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere sa smešom MeOH - H2O i suši pod vakuumom. Čvrsta supstanca se rastvori u MeCN (80 mL) i dioksanu (20 mL) i u kapima se doda 6 N HCl (50 mL). Smeša se meša 1 h. Precipitirana čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere sa MeCN i suši pod vakuumom da se dobije (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat kao bis-HCl so (1.95 g, 90%).<1>H NMR (400MHz, METANOL-d4) δ 5.34 (s, 1H), 5.20 (dd, J=6.1, 1.6 Hz, 1H), 4.87 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.58 - 4.39 (m, 2H), 3.45 - 3.11 (m, 12H), 2.87 (td, J=11.0, 5.5 Hz, 1H), 2.55 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.34 - 1.08 (m, 27H), 1.77 (s, 3H), 1.19 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).13C NMR (126MHz, METANOL-d4) δ 178.20, 149.71, 149.37, 140.47, 123.31, 122.51, 112.28, 89.36, 87.98, 73.56, 54.52, 51.90, 50.64, 50.43, 49.82, 47.03, 46.91, 46.76, 43.44, 42.95, 42.13, 40.78, 38.87, 38.77, 37.41, 34.96, 33.19, 30.55, 30.46, 30.42, 30.38, 29.37, 27.91, 27.72, 27.67, 27.54, 26.53, 22.26, 20.82, 19.41, 17.33, 17.09, 14.85.<19>F NMR (470MHz, METANOL-d4) δ -227.03 (s, IF). MS m/e 727.45 (M+H)<+>, 2.55 min (postupak 4).
1 4
Postupak B:
[0168]
,
dioksan
H2O, 70 °C
faza 3
HCl, MeCN
dioksan
faza 4
Faza 1. Izrada (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata.
U bocu sa (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen- 9-il trifluorometansulfonatom (8.9 g, 15.96 mmol), (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilatom (6.57 g, 17.55 mmol) i tribaznim kalijum fosfatom (10.16 g, 47.9 mmol) se doda Buchwald druga generacija Xphos prekatalizatora (0.313 g, 0.399 mmol). Smeša se razblaži sa THF (50 mL) i vodom (10 mL), ispere sa azotom i nakon toga zagreva 22 h na 50 °C. Smeša se ohladi na rt, delimično koncentruje i razblaži sa vodom (150 mL), ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 150 mL) (uočene su neke čvrste supstance između slojeva prve ekstrakcije pa se dodaje višak
1
etil acetata da se osigura rastvaranje produkta), suši preko magnezijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti flash hromatografijom pomoću gradijenta 0-10% metanol u dihlormetanu i 220 g silika gel kolone. Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt kao žuta čvrsta supstanca sa prisutnim manjim nečistoćama koje se prenesu u sledeću Fazu.
Faza 2. U bocu sa zatvaračem koja sadrži (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidrodro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (10.5 g, 16.0 mmol) se dodaju tribazni kalijum fosfat (13.59 g, 64.0 mmol), kalijum jodid (3.99 g, 24.01 mmol) i 4-(2-hloretil)tiomorfolin 1,1-dioksid, HCl (9.37 g, 40.0 mmol). Smeša se razblaži sa acetonitrilom (200 mL), ispere sa azotom, zatvori i zagreva do 100 °C. Nakon zagrevanja smeše 16 h, ohladi se na rt, prenese u bocu koristeći dihlormetan i nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se razblaži sa vodom (200 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (200 mL zatim 2 x 150 mL). Organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti flash hromatografijom pomoću gradijenta 0-6% metanol u dihlormetanu i 330g silika gel kolone. Frakcije koje sadrže očekivani produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt zajedno sa drugim nečistoćama u obliku gustog crvenog ulja. Ostatak se rastvori u acetonitrilu i podeli u tri frakcije zatim prečisti pomoću 25-100% od A do B gradijenta (A = 9:1 voda:acetonitril sa 0.1% TFA, B = 1:9 voda:acetonitril sa 0.1% TFA) i 275 g C18 Kolona. Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije TFA so produkta. Manje čiste frakcije se kombinuju i koncentruju a nakon toga se ponovo prečiste pomoću prethodno datog postupka reverzne faze. TFA so produkata se razblaži sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(150 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (150 mL zatim 3x75 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt (7.52g , 9.2 mmol, 57.5% prinos preko dve faze) kao bela čvrsta supstanca.
Faza 3. U rastvor (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
1
il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (0.6 g, 0.734 mmol) u 1,4-dioksanu (10 mL) i metanolu (2 mL) se doda NaOH (1N) (2.94 mL, 2.94 mmol). Smeša se zagreva 2.5 h na 60 °C, nakon toga ohladi na rt.
Faza 4.1N rastvor HCl (5 mL, 5.00 mmol) se doda u smešu i ona se delimično koncentruje pod sniženim pritiskom sve dok ne počnu da se formiraju čvrste supstance, nakon toga se smeša stavi u frižider u toku noći. Čvrste supstance koje se formiraju se sakupe filtriranjem i isperu sa vodom da se dobije HCl so (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (0.55g, 0.706 mmol, 96% prinos) kao bela čvrsta supstanca. Nove analitičke vrednosti za naslovljeno jedinjenje odgovaraju prethodno datim za isto jedinjenje izrađeno koristeći različite postupke.
Primer 3
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil- 3a-((2-morfolinoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline.
[0169]
1
Faza 1. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata.
U staklenoj posudi pod pritiskom zapremine 75 mL se kombinuju (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR, 3bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonat (0.850 g, 1.524 mmol), (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilat (0.599 g, 1.600 mmol) i XPhos-Pd-G2 (0.036 g, 0.046 mmol). Posuda se zatvori sa gumenim
1
zaptivačem. U zaptivač se ubaci igla i posuda se potpuno isprazni i nakon toga prečisti sa azotom u vakuumskoj pećnici na rt četiri puta u periodu od 10 min. U azotom ispranu reaktivnu posudu se doda anhidrovani THF (20 mL) i sveže izrađen, azotompoprskan vodeni 0.5 M rastvor K3PO4(7.62 mL, 3.81 mmol). Posuda se zatvori sa PTFE zatvaračem i dobijeni žuti rastvor meša na 80 °C. Boja postaje tamnija do jako zelene u periodu od 30 min. Smeša se zagreva 20 h. Reaktivna smeša se razblaži sa EtOAc (70 mL) i ispere sa 5% vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (25 mL x 2) i nakon toga sa slanim rastvorom (10 mL).
Vodeni sloj se ekstrahuje sa 2 x 10 mL hlorforma i organske faze se kombinuju, suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju do žute čvrste pene. Sirovi žuti materijal se prečisti flash hromatografijom na koloni (40g silika, gradijent eluacije 100% DCM do 20:1 DCM:MeOH). Frakcije produkta se kombinuju i koncentruju do gustog žutog ulja koje postaje penasto kada se stavi pod visoki vakuum. Totalni povraćaj svetlo žute pene = 0.493 g (49% prinos). LCMS: m/e 656.5 (M+H)<+>, 1.59 min (postupak 6).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 7.38 - 7.26 (m, 5H), 5.31 (br. s., 1H), 5.21 - 5.12 (m, 2H), 5.12 - 5.06 (m, 1H), 4.77 - 4.71 (m, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.57 (dm, J=47.4 Hz, 2H), 2.59 (d, J=17.6 Hz, 1H), 2.50 (td, J=10.6, 5.3 Hz, 1H), 2.16 - 1.93 (m, 6H), 1.78 - 1.65 (m, 7H), 1.60 (dd, J=12.0, 9.0 Hz, 5H), 1.55 - 1.39 (m, 8H), 1.38 - 1.22 (m, 4H), 1.11 - 1.03 (m, 4H), 1.03 - 0.93 (m, 4H), 0.89 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.86 (s, 3H).
Faza 2. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-morfolinoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata.
1
U staklenoj posudi pod pritiskom zapremine 15 mL se kombinuju (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-okta-dekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (0.091 g, 0.139 mmol) sa 4-(2-hloretil)morfolin hidrohloridom (0.077 g, 0.416 mmol), tribaznim kalijum fosfatom (0.147 g, 0.694 mmol) i kalijum jodidom (0.046 g, 0.277 mmol) u bezvodnom acetonitrilu (5 mL). Posuda se zatvori i zagreva 19 h na 120 °C u uljanom kupatilu uz mešanje. Sirova smeša se koncentruje u struji azota, prenese u EtOAc (30 mL) i ispere sa vodom (3 x 10 mL) i slanim rastvorom (5 mL). Kombinovane vodene faze se ekstrahuju sa hloroformom (10 mL) a organske faze se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Tako dobijen sirovi ostatak se direktno prenese u sledeću Fazu. LCMS: m/e 769.6 (M+H)<+>, 2.47 min (postupak 1).
Faza 3. U 1 dram bočicu sa PTFE navojnim zatvaračem se kombinuju sirova smeša iz Faze 2 koja sadrži (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-morfolinoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat sa litijum hidroksidom, 1.0M vodenim (0.973 mL, 0.973 mmol), MeOH (1 mL) i tetrahidrofuranom (1 mL). Bočica se zatvori i zagreva 45 min na 75 °C.
Sirova smeša se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (prep HPLC postupak 2). Tako dobijen materijal se nakon toga ponovo prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (prep HPLC postupak 3) da se dobije (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat kao bela čvrsta TFA so (0.0191 g, 17.3% prinos preko 2 faze). LCMS: m/e 679.5 (M+H)<+>, 4.26 min (postupak 2).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.23 -5.15 (m, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.49 dm, J=47.4 Hz, 2H), 3.84 - 3.68 (m, 4H), 3.18 -3.09 (m, 2H), 2.98 - 2.85 (m, 1H), 2.82 - 2.76 (m, 1H), 2.71 (dd, J=13.7, 3.4 Hz, 3H), 2.63 -2.50 (m, 3H), 2.30 - 2.11 (m, 2H), 2.11 - 1.91 (m, 7H), 1.83 - 1.75 (m, 3H), 1.73 (s, 4H), 1.67 - 1.30 (m, 12H), 1.19 (s, 3H), 1.17 - 1.09 (m, 2H), 1.07 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 4
11
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,1aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioksido-2-tia-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline.
[0170]
r mer
Faza 1. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioksido-2-tia-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro- 1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata.
U staklenoj posudi pod pritiskom zapremine 15 mL se kombinuju (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (0.091 g, 0.139 mmol) sa (1S,4S)-5-(2-hloretil)-2-tia-5-azabiciklo[2.2.1]heptan 2,2-dioksidom (0.075 g, 0.358 mmol) (izrađen kako je opisano u WO2013169578), tribaznim kalijum fosfatom (0.147 g, 0.694 mmol) i kalijum jodidom (0.046 g, 0.277 mmol) u bezvodnom acetonitrilu (5 mL). Posuda se zatvori i zagreva 19 h na 120 °C u uljanom kupatilu uz mešanje. Sirova smeša se koncentruje u struji azota, prenese u EtOAc (30 mL) i ispere sa vodom (3 x 10 mL) i nakon toga sa slanim rastvorom (5 mL). Kombinovane vodene faze se ekstrahuju sa hloroformom (10 mL) a organske faze se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Tako dobijen sirovi ostatak se prenese direktno u sledeću Fazu. LCMS: m/e 829.6 (M+H)<+>, 2.44 min (postupak 1).
Faza 2. U 1 dram bočicu sa PTFE navojnim zatvaračem se kombinuju sirova smeša iz Faze 1 koja sadrži (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioksido-2-tia-5-azabiciklo[2.2.1]heptan- 5-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (0.115 g, 0.139 mmol) sa litijum hidroksidom, 1.0M vodeni rastvor (0.695 mL, 0.695 mmol), MeOH (0.7 mL) i tetrahidrofuranom (0.7 mL). Bočica se zatvori i zagreva 45 min na 75 °C. Sirova smeša se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC postupak 4) i tako dobijena žuta čvrsta supstanca se nakon toga ponovo prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC postupak 5), nakon toga sa trećim i konačnim reverzno faznim preparativnim HPLC prečišćavanjem (Prep HPLC postupak 6) da se dobije 47.4 mg (39.2% prinos u toku 2 faze) (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioksido-2-tia-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat kao kao bela praškasta TFA so. LCMS: m/e 739.5 (M+H)<+>, 4.22 min (postupak 2).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.48 (dm, J=47.2 Hz, 2H), 4.00 (br. s., 1H), 3.69 - 3.63 (m, 1H), 3.23 - 3.13 (m, 2H), 3.13 2.95 (m, 4H), 2.79 (td, J=11.1, 5.0 Hz, 1H), 2.63 - 2.55 (m, 1H), 2.53 (br. s., 1H), 2.42 (d, J=12.5 Hz, 1H), 2.28 - 2.06 (m, 4H), 2.06 - 1.91 (m, 6H), 1.86 - 1.74 (m, 3H), 1.73 (s, 4H), 1.69 - 1.55 (m, 4H), 1.54 - 1.38 (m, 7H), 1.38 - 1.23 (m, 3H), 1.20 - 1.14 (m, 1H), 1.13 - 1.08 (m, 4H), 1.07 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Primer 5
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksido-1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline.
[0171]
Faza 1. Izrada 4-(2-hloretil)-1,4-tiazepan 1,1-dioksida.
11
U smešu 1,4-tiazepan 1,1-dioksida (200 mg, 1.340 mmol) i 2-hloracetaldehida, 50 mt % rastvor u vodi (0.234 mL, 1.877 mmol) u metanolu (5 mL) i sirćetnoj kiselini (1 mL) se doda 2-pikolin bor-kompleks (158 mg, 1.474 mmol). Dobijena smeša se meša na rt u toku noći. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom do ostatka koji se ispere sa zasićenim rastvorom Na2CO3(10mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 10 mL). Vodena faza se ekstrahuje sa hloroformom (10 mL). Kombinovane organske faze se suše preko anhidrovanog MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 334 mg (kvantitativno) željenog produkta kao sirovo crvenkasto braon ulje koje stajanjem delimično očvrsne. Ovaj sirovi materijal se direktno koristi u neizmenjenom obliku u sledećoj fazi. LCMS: m/e 212.0 (M+H)<+>, 0.18 min (postupak 1).
Faza 2. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksido-1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata.
U staklenoj posudi pod pritiskom zapremine 15 mL se kombinuju sirovi materijal iz Faze 1 koji sadrži 4-(2-hloretil)-1,4- tiazepan 1,1-dioksid (0.065 g, 0.305 mmol) sa (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilatom (0.100 g, 0.152 mmol), tribaznim kalijum fosfatom (0.162 g, 0.762 mmol) i kalijum jodidom (0.051 g, 0.305 mmol) u bezvodnom acetonitrilu (5 mL). Posuda se zatvori i zagreva 17h na 120 °C u uljanom kupatilu uz mešanje. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom, prenese u EtOAc (30 mL) i ispere sa vodom (3 x 10 mL) i slanim rastvorom (5 mL).
Kombinovane vodene faze se ekstrahuju sa hloroformom (10 mL) a organske faze se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Tako dobijen sirovi ostatak se prenese kao takav u fazu saponifikacije bez dodatnog prečišćavanja. LCMS: m/e 831.6 (M+H)<+>, 2.39 min (postupak 1).
Faza 3. U 1 dram bočicu sa PTFE navojnim zatvaračem se kombinuju sirova smeša iz Faze 2 koja sadrži (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksido-1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (0.126 g, 0.152 mmol) sa litijum hidroksidom, 1.0M vodenim rastvorom (1.064 mL, 1.064 mmol), MeOH (1 mL) i tetrahidrofuranom (1 mL). Bočica se zatvori i smeša zagreva 45 min na 75 °C. Smeša se filtrira i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC postupak 7) da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksido- 1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao bela čvrsta TFA so (36.7 mg, 28.2% prinos preko 2 faze). LCMS: m/e 741.5 (M+H)<+>, 2.26 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.49 (dm, J=47.4 Hz, 1H), 3.47 - 3.37 (m, 1H), 3.35 (br. s., 1H), 3.28 - 3.17 (m, 2H), 3.15 - 3.02 (m, 5H), 3.02 - 2.93 (m, 1H), 2.79 (td, J=11.0, 4.6 Hz, 1H), 2.55 (d, J=17.1 Hz, 1H), 2.29 - 2.14 (m, 2H), 2.13 - 1.91 (m, 9H), 1.86 - 1.74 (m, 3H), 1.73 (s, 4H), 1.68 - 1.55 (m, 4H), 1.55 - 1.42 (m, 6H), 1.41 - 1.24 (m, 3H), 1.19 - 1.09 (m, 5H), 1.07 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 6
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,1aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-
11
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline.
[0172]
Faza 1. Izrada 1-(2-hloretil)-4-(metilsulfonil)piperazina.
U smešu 1-(metilsulfonil)piperazina (0.200 g, 1.218 mmol) i 2-hloracetaldehida, 50 mt % rastvor u vodi (0.212 mL, 1.705 mmol) u metanolu (5 mL) i sirćetnoj kiselini (1 mL) se doda 2-pikolin-bor-kompleks (0.143 g, 1.340 mmol). Dobijena smeša se meša na rt u toku noći. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije ostatak koji se ispere sa
11
zasićenim rastvorom Na2CO3(10mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 10mL). Vodena faza se ekstrahuje sa hloroformom (10 mL). Kombinovane organske faze se suše preko anhidrovanog MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije 394 mg (>100% prinos) željenog produkta kao bezbojno ulje koje očvrsne stajanjem u voštanu, svetlo žutu čvrstu supstancu solid. Ovaj sirovi materijal se direktno koristi u neizmenjenom obliku u sledećoj fazi. LCMS: m/e 227.0 (M+H)<+>, 0.19 min (postupak 1).
Faza 2. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata.
U staklenoj posudi pod pritiskom zapremine 15 mL se kombinuje sirovi materijal iz Faze 1 koji sadrži 1-(2-hloretil)-4-(metilsulfonil)piperazin (0.069 g, 0.305 mmol) sa (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilatom (0.100 g, 0.152 mmol), tribaznim kalijum fosfatom (0.162 g, 0.762 mmol) i kalijum jodidom (0.051 g, 0.305 mmol) u bezvodnom acetonitril (5 mL). Posuda se zatvori i zagreva 15h na 120 °C u uljanom kupatilu uz mešanje. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom, ostatak prenese u EtOAc (30 mL) i ispere sa vodom (3 x 10 mL) i sa slanim rastvorom (5 mL). Kombinovane vodene faze se ekstrahuju sa hloroformom (10 mL) a organske faze se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Tako dobijen sirovi ostatak se prenese kao takav u fazu saponifikacije bez dodatnog prečišćavanja. LCMS: m/e 846.7 (M+H)<+>, 2.43 min (postupak 1).
Faza 3. U 1 dram bočicu sa PTFE navojnim zatvaračem se kombinuju sirova smeša iz Faze 2
11
koja sadrži (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-okta- dekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (0.129 g, 0.152 mmol) sa 1.0M vodenim rastvorom litijum hidroksida (1.064 mL, 1.064 mmol), MeOH (1 mL) i tetrahidrofuranom (1 mL). Bočica se zatvori i smeša zagreva 45 min na 75 °C. Smeša se filtrira i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC postupak 7) da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3- enekarboksilna kiselina kao bela čvrsta TFA so (47.4 mg, 35.8% prinos u 2 faze). LCMS: m/e 756.5 (M+H)<+>, 4.21 min (postupak 2).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.48 (dm, J=47.2 Hz, 1H), 3.30 - 3.22 (m, 2H), 3.19 - 3.09 (m, 2H), 3.00 - 2.90 (m, 1H), 2.87 (s, 3H), 2.84 - 2.64 (m, 6H), 2.55 (d, J=17.6 Hz, 1H), 2.29 - 2.14 (m, 2H), 2.14 - 1.91 (m, 7H), 1.86 - 1.75 (m, 3H), 1.73 (s, 4H), 1.65 - 1.47 (m, 7H), 1.45 - 1.34 (m, 4H), 1.29 (dd, J=17.7, 5.0 Hz, 1H), 1.17 (s, 3H), 1.16 - 1.08 (m, 2H), 1.07 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Primer 7
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0173]
11
Faza 1: Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata.
Suspenzija (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a- amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (45 mg, 0.069 mmol), 4-(2-bromoetil)tetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida (17 mg, 0.069 mmol), K3PO4(44 mg, 0.206 mmol) i Nal (17 mg, 0.103 mmol) u MeCN (1 mL) se ispere sa azotom, zatvori i meša 18 h na 100 °C. Reaktivna smeša se filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela (0-40% EtOAc/Heksan) koristeći ELS detektor da se dobije naslovljeni produkt kao čvrsta supstanca (28 mg, 50%). LCMS m/e 816.45 (M+H)<+>, 3.864 minuta (Postupak 7).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.32 (s., 1H), 5.17 (d, J=1.3 Hz, 2H), 5.15 - 5.09 (m, 1H), 4.70 (d, J=1.8 Hz, 1H), 4.63 - 4.55 (m, 2H), 4.50 - 4.43 (m, 1H), 3.13 - 2.90 (m, 4H), 2.64 - 2.41 (m, 4H), 2.21 - 0.80 (m, 34H), 1.69 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.85 (s, 3H).
Faza 2. U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-
11
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (28 mg, 0.034 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) i MeOH (1 mL) se doda 1N NaOH (1 mL, 1.0 mmol). Smeša se meša 3 h na 60 °C. Reaktivna smeša se prečisti preparativnom HPLC (Postupak 8) da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao čvrsta supstanca (16 mg, 64%). LCMS m/e 726.50 (M+H)<+>, 3.528 minuta (Postupak 7).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.34 (s, 1H), 5.18 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.60 (s, 2H), 4.48 (s, 1H), 3.10 - 2.89 (m, 4H), 2.66 - 2.48 (m, 4H), 2.27 - 0.91 (m, 34H), 1.68 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.86 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -224.87 (s, IF).
Primer 8
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-(2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0174]
12
Faza 1: Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-(2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata.
U smešu (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (50 mg, 0.076 mmol) i 2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)sirćetne kiseline (13 mg, 0.091 mmol) u CH2Cl2(1 mL) se doda DIPEA (0.05 ml, 0.305 mmol), nakon toga HATU (44 mg, 0.114 mmol). Rastvor se meša 1 h na sobnoj temperaturi . Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela (20-45% EtOAc/Heksan) koristeći ELS detektor da se dobije željeni produkt kao čvrsta supstanca (kvantitativni prinos). LCMS m/e 782.55 (M+H)<+>, 4.346 minuta (Postupak 8).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.39 - 7.29 (m, 5H), 5.32 (s, 1H), 5.21 - 5.14 (m, 2H), 5.12 (d, J=4.5 Hz, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.73 (d, J=1.3 Hz, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.61- 4.56 (m, 1H), 4.50 - 4.44 (m, 1H), 3.96 (dd, J=11.3, 3.5 Hz, 2H), 3.47 - 3.38 (m, 2H), 2.73 - 2.65 (m, 1H), 2.60 (d, J=17.3 Hz, 1H), 2.51 (dd, J=12.4, 8.2 Hz, 1H), 2.42 (td, J=10.5, 5.3 Hz, 1H), 2.19 - 0.92 (m, 32H), 1.70 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.85 (s, 3H).
Faza 2. U rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,1a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-(2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (60 mg, 0.077 mmol) u 1,4-dioksanu (3 mL) i MeOH (1.5 mL) se doda 1N NaOH (1.5 mL, 1.5 mmol). Smeša se meša 3 h na 60 °C. Reaktivna smeša se prečisti preparativnom HPLC (Postupak 8) da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-3a-(2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acetamido)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao čvrsta supstanca (45 mg, 85%). LCMS m/e 692.55 (M+H)<+>, 3.141 minuta (Postupak 8).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.33 (s, 1H), 5.18 (d, J=4.5 Hz, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.48 (s, 1H), 3.97 (d, J=8.5 Hz, 2H), 3.43 (t, J=11.8 Hz, 2H), 2.70 (d, J=12.8 Hz, 1H), 2.63 - 2.36 (m, 3H), 2.28 - 0.95 (m, 32H), 1.70 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.86 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.31 (s, IF).
Primer 9
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0175]
Faza 1: Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
Suspenzija (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (50 mg, 0.076 mmol), 4-(2bromoetil)tetrahidro-2H-pirana (15 mg, 0.076 mmol), K3PO4(49 mg, 0.229 mmol) i Nal (19 mg, 0.114 mmol) u MeCN (1 mL) se ispere sa azotom, zatvori i meša 18 h na 90 °C.
Reaktivna smeša se filtrira i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela (0-40% EtOAc/Heksan) koristeći ELS detektor da se dobije željeni produkt kao čvrsta supstanca (30 mg, 51%). LCMS m/e 768.55 (M+H)<+>, 3.033 minuta (Postupak 8).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.39 - 7.29 (m, 5H), 5.32 (s, 1H), 5.22 - 5.14 (m, 2H), 5.14 - 5.10 (m, 1H), 4.71 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.62 -4.55 (m, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.51 - 4.43 (m, 1H), 4.01 - 3.93 (m, 4H), 2.65 - 2.52 (m, 2H), 2.50 - 2.36 (m, 2H), 2.18 - 0.87 (m, 34H), 1.69 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.85 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.06 (s, IF).
Faza 2. U rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (30 mg, 0.039 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) i MeOH (1 mL) se doda 1N NaOH (1 mL, 1.0 mmol). Smeša se meša 2 h na 60 °C. Reaktivna smeša se prečisti preparativnom HPLC (Postupak 8) da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao čvrsta supstanca (12 mg, 45%). LCMS m/e 678.50 (M+H)<+>, 2.968 minuta (Postupak 8).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.34 (s, 1H), 5.18 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.72 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.60 (s, 2H), 4.48 (s, 1H), 3.97 (d, J=11.3 Hz, 2H), 3.39 (tdd, J=11.8, 4.5, 2.1 Hz, 2H), 2.67 - 2.48 (m, 4H), 2.19 - 0.89 (m, 34H), 1.69 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.86 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.04 (s, IF).
Primer 10
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-metilpropil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-
12
9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0176]
Faza 1: Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-formil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
Smeša (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-formil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonata (2.0 g, 3.50 mmol), (S)-benzil 1-fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilata (1.44 g, 3.85 mmol), Na2CO3. H2O (1.3 g, 10.5 mmol) i Pd(Ph3P)4(0.24 g, 0.21 mmol) u dioksanu (40 mL) se ispere sa azotom, zatvori i meša 1 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu i koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se razblaži sa H2O (100 mL) i ekstrahuje sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela uz eluiranje (0-15% EtOAc/Heksan) koristeći ELS detektor da se dobije željeni produkt kao čvrsta supstanca (1.85 g, 79%).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.69 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 5H), 5.31 (br. s., 1H), 5.21 - 5.14 (m, 2H), 5.12 (dd, J=6.3, 1.8 Hz, 1H), 4.77 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.65 - 4.62 (m, 1H), 4.62 - 4.55 (m, 1H), 4.50 - 4.44 (m, 1H), 2.89 (td, J=11.1, 5.9 Hz, 1H), 2.60 (d, J=16.3 Hz, 1H), 2.17 - 1.72 (m, 11H), 1.71 (s, 3H), 1.53 - 1.19 (m, 14H), 1.11 - 1.01 (m, 2H), 0.98 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.07 (s, IF)
Faza 2: Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-metilpropil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
Suspenzija (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3aformil- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (70 mg, 0.105 mmol) i 4-(1-amino-2-metilpropan-2-il)tiomorfolin 1,1-dioksida (32 mg, 0.157 mmol) u DCE (1 mL) se meša 1 h na rt. U dobijeni rastvor se dodaju natrijum cijanoborhidrid (20 mg, 0.314 mmol) i AcOH (0.012 mL, 0.209 mmol). Smeša se meša 18 h na rt. Smeša se razblaži sa zasićenim rastvorom NaHCO3(5 mL) i ekstrahuje sa CH2Cl2(3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na koloni silika gela (20-80% EtOAc/Heksan) koristeći ELS detektor da se dobije željeni produkt kao čvrsta supstanca (18 mg, 20%). LCMS m/e 859.55 (M+H)<+>, 3.113 minuta (Postupak 8).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.40 - 7.29 (m, 5H), 5.32 (s, 1H), 5.21 - 5.14 (m, 2H), 5.12 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.69 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.63 - 4.55 (m, 1H), 4.59 (s, 1H), 4.51 - 4.44 (m, 1H), 3.07 (m, 8H), 2.73 - 2.55 (m, 3H), 2.42 (td, J=11.0, 5.6 Hz, 1H), 2.18 - 0.92 (m, 29H), 1.69 (s, 3H), 1.16 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.04 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -225.06 (s, IF).
Faza 3: U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2-(1,1-
12
dioksidotiomorfolino)-2-metilpropil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (18 mg, 0.021 mmol) u 1,4-dioksanu (1 mL) i MeOH (0.5 mL) se doda 1N NaOH (0.5 mL, 0.5 mmol). Smeša se meša 2 h na 60 °C. Reaktivna smeša se prečisti preparativnom HPLC (Postupak 8) da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2- metilpropil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao čvrsta supstanca (6 mg, 37%). LCMS m/e 769.55 (M+H)<+>, 2.816 minuta (Postupak 8).1H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.33 (s, 1H), 5.17 (d, J=4.3 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.56 (s, 1H), 4.44 (s, 1H), 3.13 - 3.01 (m, 8H), 3.01 - 0.89 (m, 33H), 1.68 (s, 3H), 1.15 (s, 6H), 1.03 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.85 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -224.76 (s, IF).
Primer 11
Izrada (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-okta- dekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0177]
12
Faza 1. Izrada (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-formil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U posudi pod pritiskom zapremine 25 mL, smeša (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-formil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonata (164 mg, 0.287 mmol), (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilata (118 mg, 0.316 mmol), Na2CO3·H2O (107 mg, 0.862 mmol) i Pd(Ph3P)4(19.92 mg, 0.017 mmol) u dioksanu (2 mL) i vodi (0.500 mL) se u atmosferi N2ohladi na -78 °C. Smeša očvrsne i ciklus vakuumiranja i prečišćavanja sa N2se izvede tri puta. Smeša se meša 1 h na 70 °C i boja prelazi u tamno braon. Reaktivna smeša se razblaži sa H2O (100 mL) i ekstrahuje sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti (24g silika gel kolone; 0 - 25%, 25% EtOAc/Heksan; ELS detektor) da se dobije naslovljeno jedinjenje
12
kao bela čvrsta supstanca (122 mg, 63.5%). LCMS: m/e 691.45 (M+Na)<+>, 4.428 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.73 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.47 - 7.25 (m, 5H), 5.35 (br. s., 1H), 5.20 (d, J=1.8 Hz, 2H), 5.16 - 5.09 (m, 1H), 4.79 (d, J=1.8 Hz, 1H), 4.71 - 4.64 (m, 1H), 4.61 - 4.53 (m, 1H), 4.51 - 4.41 (m, 1H), 2.89 (td, J=11.1, 5.9 Hz, 1H), 2.63 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.31 - 1.85 (m, 8H), 1.85 - 1.76 (m, 3H), 1.73 (s, 3H), 1.61 - 1.20 (m, 14H), 1.15 - 1.05 (m, 2H), 1.04 - 1.00 (m, 3H), 0.99 (br. s., 3H), 0.96 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.87 (s, 3H).
Faza 2. Izrada (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
U rastvor (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3aformil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (122 mg, 0.182 mmol) u DCE (2 mL) se dodaju sirćetna kiselina (0.021 mL, 0.365 mmol) i 4-(3-aminopropil)tiomorfolin 1,1-dioksid (70.1 mg, 0.365 mmol). Rastvor prvo postaje mutan a 10 minuta kasnije bistar. Smeša se meša 2 h na Rt. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (193 mg, 0.912 mmol) i dobijena smeša se meša 18 h. Dodaju se sirćetna kiselina (0.2 mL) i natrijum triacetoksiborhidrid (193 mg, 0.912 mmol) i smeša se meša 18 h. Smeša se nakon toga razblaži sa sat. NaHCO3(7 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 7 mL). Kombinovani organski slojevi se suše sa Na2SO4. Sredstvo za sušenje se ukloni filtriranjem i filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti (silika gel). Frakcije koje sadrže očekivani produkt se sakupe i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (130 mg, 84%). LCMS: m/e 845.60 (M+H)<+>, 3.116 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.41 - 7.29 (m, 5H), 5.34 - 5.29 (m, 1H), 5.18 (d, J=2.3 Hz, 2H), 5.11 (s, 1H), 4.70 (s, 1H), 4.63 - 4.53 (m, 2H), 4.47 (d, J=4.5 Hz, 1H), 3.14 - 2.97 (m, 12H), 2.95 -2.82 (m, 3H), 2.68 - 2.51 (m, 4H), 2.48 - 2.33 (m, 2H), 2.24 - 2.07 (m, 3H), 2.03-1.91 (m, 4H), 1.91 - 1.73 (m, 6H), 1.71 (br. s., 3H), 1.63 - 1.30 (m, 11H), 1.08 (br. s., 3H), 0.98 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.87 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).
Faza 3. U rastvor (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((3-(1,1-
12
dioksidotiomorfolino)propil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (130 mg, 0.154 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL) i MeOH (3 mL) se doda 1N NaOH (3 mL, 3.00 mmol). Smeša se meša 2 h na 66 °C i dobija se bistar rastvor. Reaktivna smeša se prečisti preparativnom HPLC (postupak 9) da se dobije (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao bela čvrsta supstanca (55 mg, 45%). LCMS: m/e 755.50 (M+H)<+>, 2.837 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.29 (br. s., 1H), 5.15 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.50 (q, J=8.8 Hz, 1H), 4.39 (q, J=8.6 Hz, 1H), 3.36 (d, J=6.0 Hz, 4H), 3.33 - 3.28 (m, 4H), 3.23 -3.10 (m, 3H), 2.95 (t, J=7.2 Hz, 2H), 2.82 (d, J=13.1 Hz, 1H), 2.56 - 2.40 (m, 2H), 2.31 - 2.17 (m, 1H), 2.14 - 1.89 (m, 7H), 1.85 - 1.61 (m, 10H), 1.60 - 1.13 (m, 13H), 1.12 - 1.04 (m, 4H), 1.01 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.87 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -222.66 - -223.63 (m, IF).
Primer 12
Izrada (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((N-(3-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)acetamido)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0178]
[0179] U rastvor (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)propil)amino)metil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-
12
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline (20 mg, 0.026 mmol) u CH2Cl2(1 mL) se dodaju sirćetni anhidrid (0.012 mL, 0.132 mmol) i DMAP (0.324 mg, 2.65 mmol).
Dobijena smeša se zagreva 24 h na 50 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ostatak se ponovo rastvori u MeOH (4 mL) i prečisti preparativnom HPLC (postupak 10) da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (3 mg, 13.5%). LCMS: m/e 797.55 (M+H)<+>, 3.103 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, METANOL-d4) δ 5.35 (br. s., 1H), 5.21 (d, J=4.8 Hz, 1H), 4.76 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.82 - 4.72 (m, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.60 - 4.52 (m, 1H), 4.50 - 4.36 (m, 1H), 3.64 (d, J=13.8 Hz, 1H), 3.49 (t, J=7.4 Hz, 2H), 3.27 (m, 1H), 3.18 - 3.08 (m, 4H), 3.03 (d, J=5.5 Hz, 4H), 2.68 - 2.47 (m, 4H), 2.27 (d, J=6.0 Hz, 1H), 2.22 - 1.93 (m, 9H), 1.89 - 1.23 (m, 21H), 1.17 (s, 3H), 1.16 - 1.07 (m, 3H), 1.05 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, METANOL-d4) δ -226.56 - -227.82 (m, IF).
Primer 13
Izrada (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4,4-bis(etoksikarbonil)piperidin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0180]
1
Faza 1. Izrada ((R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
Smeša (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)cikloheks-3-enekarboksilata (669 mg, 1.788 mmol), (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3aamino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonata (950 mg, 1.703 mmol), natrijum karbonat hidrata (634 mg, 5.11 mmol) i paladijum tetrakis (118 mg, 0.102 mmol) se ostavi u atmosferi azota. Doda se dioksan (16 mL) i formira se narandžasti rastvor. Doda se voda (4 mL) i formira se svetlo bledo žuta suspenzija. Cela smeša se ohladi na -78 °C i ciklus izdvajanja i prečišćavanja se izvede tri puta i izvrši se finalno prečišćavanje sa azotom. Boca se uroni u uljano kupatilo na 65 - 85 °C. Boja smeše se menja od bledo žute suspenzije do tamno braon u toku 10 min. Zagrevanje se nastavlja na 85 °C ukupno 5 sati. Reaktivna smeša se razblaži sa H2O (100 mL) i ekstrahuje sa EtOAc (3 x 100 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Sirovi
1 1
materijal se prečisti hromatografijom na silika gelu da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (0.78 g, 69.8%). LCMS: m/e 656.50 (M+H)<+>, 3.003 min (Postupak 9).
<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.46 - 7.29 (m, 5H), 5.43 - 5.28 (m, 1H), 5.24 - 5.16 (m, 2H), 5.13 (dd, J=6.1, 2.0 Hz, 1H), 4.75 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.61 - 4.56 (m, 1H), 4.52 - 4.44 (m, 1H), 2.68 - 2.51 (m, 2H), 2.26 - 1.94 (m, 6H), 1.84 - 1.72 (m, 4H), 1.72 (s, 3H), 1.65 - 1.28 (m, 12H), 1.27 (s, 3H), 1.14 (d, J=13.9 Hz, 2H), 1.09 (s, 3H), 1.06 (m, 2H), 0.98 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.87 (s, 3H).
Faza 2. Izrada (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(aziridin-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
U posudu debelih zidova sa zatvaračem zaremine 75 mL sušenoj plamenom se stave (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (0.78 g, 1.189 mmol) i plamenom osušeni kalijum fosfat (1.262 g, 5.95 mmol), nakon toga 1,2-dihloretan (20 mL) i acetonitril (10 mL). Reaktivna smeša se ispere sa azotom, zatvori i zagreva 36 h na 130 °C. Sirova reaktivna smeša se filtrira kroz kratku ploču silika gela i ispere sa etil acetatom da se dobije veoma bledo narandžasti rastvor. Rastvor se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca. Jedinjenje se koristi kakvo jeste, bez daljeg prečišćavanja. LCMS: m/e 682.50 (M+H)<+>, 700.55 (M+H2O)<+>, 714.55 (M+MeOH)<+>, 3.053 min (Postupak 9).
Faza 3. Izrada dietil 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloksi)ugljenik-il)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilata
(R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(aziridin-1-il)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (100 mg, 0.147 mmol) se stavi u zapečaćenu epruvetu zapremine 15 mL. Doda se CH3CN (2 mL), a nakon toga dietil piperidin-4,4-dikarboksilat (67.2 mg, 0.293 mmol). U ovu suspenziju se
1 2
dodaju natrijum jodid (24.18 mg, 0.161 mmol) i kalijum fosfat (93 mg, 0.440 mmol).
Dobijena smeša se zagreva 15 h do 125 °C. Reaktivna smeša se razblaži sa etil acetatom (50 mL) i ispere natrijum bikarbonatom i slanim rastvorom. Organski sloj se sakupi, suši preko natrijum sulfata i koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal se prečisti na silika gelu (0-25% etil acetat/heksani) da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (60 mg, 48%). LCMS: m/e 911.65 (M+H)<+>, 3.213 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.41 - 7.31 (m, 5H), 5.31 (br. s., 1H), 5.22 - 5.14 (m, 2H), 5.10 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.71 (d, J=2.5 Hz, 1H), 4.63 - 4.53 (m, 2H), 4.50 - 4.41 (m, 1H), 4.28 - 4.20 (m, 4H), 3.01 - 2.79 (m, 2H), 2.69 - 2.55 (m, 2H), 2.54 - 2.29 (m, 2H), 2.20 - 2.10 (m, 6H), 2.00 - 1.73 (m, 15H), 1.70 - 1.67 (s, 3H), 1.67 - 1.49 (m, 10H), 1.26 (t, J=7.2 Hz, 11H), 1.07 (s, 3H), 0.97 - 0.93 (m, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.86 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).
Faza 4. Izrada dietil 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-(((tercbutildimetil-silil)oksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilata
U rastvor dietil 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 9-((R)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilata (60 mg, 0.066 mmol) u DCE (3 mL) se dodaju TEA (0.015 mL, 0.105 mmol), t-butildimetilsilan (0.022 mL, 0.132 mmol) i paladijum(II) acetat (3.70 mg, 0.016 mmol). Smeša se ispere sa N2i zagreva na 60 °C. Nakon 3 h zagrevanja smeša se ohladi na RT i filtrira kroz celite ploču i silika gel (ispere sa 50 % EtOAc u heksanima, zatim dihlormetanom). Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao čvrsta supstanca (61 mg.100%). Sirovi produkt se koristi u sledećoj fazi bez dodatnog prečišćavanja. LCMS: m/e 935.70 (M+H)<+>, 3.247 min (Postupak 9).
Faza 5. U rastvor dietil 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-(((tercbutildimetilsilil)oksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilata (15 mg, 0.016 mmol) u THF (4 mL) se doda TBAF (1M u THF) (0.024 mL, 0.024 mmol). Smeša se meša 30 min na rt.
1
Smeša se prečisti preparativnom HPLC (postupak 9) da se dobije (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4,4-bis(etoksikarbonil)piperidin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao bela čvrsta supstanca (7 mg, 53.2%). LCMS: m/e 821.60 (M+H)<+>, 2.901 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.38 - 5.32 (m, 1H), 5.17 (d, J=4.8 Hz, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.72 - 4.40 (m, 3H), 4.32 - 4.21 (m, 4H), 3.54 - 3.24 (m, 4H), 3.10 (br. s., 3H), 2.90 - 2.60 (m, 2H), 2.36 (br. s., 4H), 2.28 - 1.73 (m, 12H), 1.69 (s, 3H), 1.66 - 1.50 (m, 6H), 1.44 (br. s., 3H),
1.38-1.33 (m, 3H), 1.32 - 1.24 (m, 9H), 1.12 (s, 3H), 1.08 (d, J=8.3 Hz, 2H), 1.02 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.87 (s, 3H).
Primer 14 i Primer 15
Izrada (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-(etoksikarbonil)-1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline (izomer 1) i Izrada (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-(etoksikarbonil)-1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline (izomer 2)
[0181]
1 4
Faza 1. Izrada etil 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)tiomorfolin-3-karboksilata
Naslovljeno jedinjenje se izrađuje u 26.3% prinosa po postupku prethodno opisanom za izradu dietil 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilata, koristeći tiomorfolin-3- etil estar hidrohlorid karboksilne kiseline umesto dietil piperidin-4,4-dikarboksilata kao početni materijal. MS: m/e 857.65. (M+H)<+>, 3.876 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.38 - 7.31 (m, 5H), 5.31 (d, J=3.8 Hz, 1H), 5.23 - 5.13 (m, 2H), 5.10 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.70 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.62 - 4.54 (m, 2H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 4.28 - 4.22 (m, 2H), 3.81 - 3.67 (m, 1H), 3.63 (ddd, J=12.5, 5.8, 3.5 Hz, 1H), 3.37 (ddd, J=12.4, 9.9, 2.9 Hz, 1H), 3.21 (ddd, J=12.4, 8.5, 5.8 Hz, 1H), 3.09 (ddd, J=9.9, 6.0, 3.5 Hz, 1H), 3.03 - 2.95 (m, 1H), 2.93 - 2.66 (m, 5H), 2.64 - 2.32 (m, 5H), 2.17 - 2.08 (m, 3H), 2.00 - 1.77 (m, 8H), 1.69 (s, 3H), 1.64 - 1.48 (m, 8H), 1.18 - 1.01 (m, 8H), 0.99 - 0.80 (m, 16H).
1
Faza 2. Izrada etil 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)tiomorfolin-3-karboksilat 1,1-dioksida
U rastvor smeše etil 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)tiomorfolin-3-karboksilata (32 mg, 0.037 mmol) u MeOH (2 mL) se na 0 °C doda suspenzija OKSONE® (34.4 mg, 0.056 mmol) u vodi (2.00 mL), nakon toga aceton (5 mL). Dobijena smeša se meša 12 h na 0 °C. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (10 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom. Organski sloj se ispere sa natrijum hidrosulfitom i zatim suši preko natrijum sulfata, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao čvrsta supstanca. 30 mg sirovog produkta se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja. MS: m/e 889.55. (M+H)<+>, 3.26 min (Postupak 9).
Faza 3. Izrada etil 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-(((tercbutildimetilsilil)oksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)tiomorfolin-3-karboksilat 1,1-dioksida
Naslovljeno jedinjenje se izrađuje u 97% prinosa po postupku prethodno opisanom za izradu dietil 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)- 4-(((tercbutildimetilsilil)oksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilata, koristeći etil 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3ail)amino)etil)tiomorfolin-3-karboksilat 1,1-dioksid umesto dietil
1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3ail)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilat kao početni materijal. MS: m/e 913.65. (M+H)<+>, 3.204 min (Postupak 9)
1
Faza 4. U rastvor etil 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-(((tercbutildimetilsilil)oksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)tiomorfolin-3-karboksilat 1,1-dioksida (20 mg, 0.022 mmol) u THF (4 mL) se doda TBAF (1M u THF) (0.032 mL, 0.032 mmol). Smeša se meša 30 minuta na Rt. Smeša se prečisti preparativnom HPLC (postupak 9) da se dobiju dva produkta:
Primer 14: (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-(etoksikarbonil)-1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina (Izomer 1) kao bela čvrsta supstanca (2 mg, 11.43%). LCMS: m/e 799.50 (M+H)<+>, 2.866 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.40 - 5.29 (m, 1H), 5.19 (d, J=4.8 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.64 - 4.55 (m, 1H), 4.49 (q, J=8.6 Hz, 1H), 4.37 - 4.25 (m, 2H), 3.74 - 3.62 (m, 1H), 3.46 - 2.85 (m, 10H), 2.68 - 2.53 (m, 2H), 2.26 - 2.06 (m, 5H), 2.02 - 1.75 (m, 7H), 1.72 (s, 3H), 1.67 - 1.50 (m, 7H), 1.37 - 1.27 (m, 8H), 1.13 (s, 3H), 1.09-1.01 (m, 4H), 1.04 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.94 - 0.91 (m, 3H), 0.88 (s, 3H) i
Primer 15: (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-(etoksikarbonil)-1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina Izomer 2 kao bela čvrsta supstanca (2 mg, 11.43%) kao izomer 2. LCMS: m/e 799.55 (M+H)<+>, 2.778 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.44 - 5.31 (m, 1H), 5.20 (d, J=4.5 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.75 - 4.69 (m, 1H), 4.67 - 4.56 (m, 1H), 4.55 - 4.43 (m, 1H), 4.37 - 4.29 (m, 2H), 4.28 - 4.22 (m, 1H), 3.67 (br. s., 1H), 3.51 - 3.42 (m, 2H), 3.34 - 3.09 (m, 5H), 3.05 - 2.86 (m, 3H), 2.61 (d, J=5.8 Hz, 1H), 2.33 - 2.22 (m, 2H), 2.19 - 2.15 (m, 2H), 2.14 - 2.09 (m, 1H), 2.05 - 1.76 (m, 14H), 1.73 (s, 3H), 1.64 - 1.01 (m, 12H), 1.12 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.88 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM- d) δ -224.87 - -225.57 (m, IF).
Primer 16
1
Izrada 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-karboksi-4-(fluorometil)cikloheks-1-en- 1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3ail)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilne kiseline
[0182]
[0183] U rastvor (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4,4-bis(etoksikarbonil)piperidin-1-il)etil)aminoa,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline (5 mg, 6.09 mmol)) u 1,4-dioksanu (2 mL) i MeOH (1 mL) se doda natrijum hidroksid (1 mL, 1.000 mmol). Smeša se meša 2 h na 66 °C i nakon toga ohladi na sobnu temperaturu. Reaktivna smeša se prečisti preparativnom HPLC (postupak 9) da se dobije naslovljeno jedinjenje kao film (0.8 mg, 15.46%). LCMS: m/e 765.60 (M+H)<+>, 2.928 min (Postupak 9).
Primer 17
Izrada 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-karboksi-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3ail)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilne kiseline
[0184]
1
[0185] Naslovljeno jedinjenje se izdvoji u toku prečišćavanja 1-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-karboksi-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3ail)amino)etil)piperidin-4,4-dikarboksilne kiseline (bela čvrsta supstanca, 1.2 mg, 22.36%). LCMS: m/e 793.60 (M+H)<+>, 2.992 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.37 (br. s., 1H), 5.18 (d, J=6.0 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.63 - 4.37 (m, 2H), 4.31 - 4.18 (m, 2H), 3.80 - 3.71 (m, 1H), 3.69 - 3.61 (m, 1H), 3.58 - 3.53 (m, 1H), 3.52 - 3.47 (m, 2H), 3.46 - 3.41 (m, 1H), 3.24 - 3.09 (m, 2H), 2.65 - 2.60 (m, 1H), 2.56 - 1.17 (m, 40H), 1.10 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.9 (s, 3H), 0.87 (s, 3H).
Primer 18
Izrada 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-karboksi-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3ail)amino)etil)tiomorfolin-3-karboksilne kiseline
[0186]
[0187] U rastvor etil 4-(2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((R)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-
1
1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)etil)tio morfolin-3-karboksilata (0.030 g, 0.035 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) i MeOH (1 mL) se doda natrijum hidroksid (1 ml, 1.000 mmol). Smeša se meša 2 h na 66 °C i formira se bistar rastvor. Sirova reaktivna smeša se prečisti preparativnom HPLC (postupak 10) da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (4.5 mg, 16.53%). LCMS: m/e 739.55 (M+H)<+>, 2.838 min (Postupak 9).<1>H NMR (400MHz, METANOL-d4) δ 5.35 (br. s., 1H), 5.21 (d, J=5.8 Hz, 1H), 4.85 - 4.80 (m, 1H), 4.75 - 4.68 (m, 1H), 4.63 - 4.51 (m, 1H), 4.49 - 4.37 (m, 1H), 3.44 - 3.36 (m, 1H), 3.22 - 2.90 (m, 4H), 2.89 - 2.68 (m, 4H), 2.66 - 2.48 (m, 3H), 2.44 - 2.23 (m, 2H), 2.18 - 1.98 (m, 8H), 1.85 (d, J=12.5 Hz, 2H), 1.77 (d, J=4.0 Hz, 3H), 1.74 - 1.28 (m, 14H), 1.25 - 1.17 (m, 3H), 1.14 (d, J=11.3 Hz, 2H), 1.11 - 1.08 (m, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.94 - 0.89 (m, 3H).<19>F NMR (376MHz, METANOL-d4) δ -226.92 (m, IF).
Primer 19
Izrada (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroksietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
Faza 1. Izrada (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroksietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-
14
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(aziridin-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (230 mg, 0.337 mmol) u CH3CN (6 mL) se dodaju tiomorfolin-3,5-diildimetanol (77 mg, 0.472 mmol), natrijum jodid (55.6 mg, 0.371 mmol) i kalijum fosfat (215 mg, 1.012 mmol). Dobijena suspenzija se zagreje do 125 °C u toku 15 h. Reaktivna smeša se razblaži sa etil acetatom, ispere sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i slanim rastvorom. Organski sloj se suši preko natrijum sulfata i koncentruje do sušenja. Sirovi materijal se prečisti pomoću silika gela da se dobije beličasta čvrsta supstanca (6 mg, 2.5%). LCMS: m/e 700.55 (M+H)<+>, 2.925 min (Postupak 9).
Faza 2. (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroksietil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (6 mg, 8.57 mmol) se rastvori u smeši MeOH (2 mL) i dioksana (2 mL). Doda se natrijum hidroksid (1 ml, 1.000 mmol). Dobijena smeša se meša 15 h na 25°C i prečisti preparativnom HPLC (postupak 9) da se dobije (R)-1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroksietil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen- 9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao bela čvrsta supstanca (2.0 mg, 36.3%). LCMS: m/e 610.55 (M+H)<+>, 2.928 min (Postupak 9).
Opšta šema za izradu Primera 20 i 21
[0189]
Primer 20
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(2-oksopirolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1 -en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-ok- tadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0190]
Faza 1. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oksopirolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U zatvorenu bocu koja sadrži (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3aamino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (0.1 g, 0.152 mmol) i 1-(2-hloroetil)pirolidin-2-on (0.056 g, 0.381 mmol) se dodaju fosforna kiselina, kalijum so (0.129 g, 0.610 mmol) i kalijum jodid (0.038 g, 0.229 mmol). Smeša se razblaži sa acetonitrilom (2 mL), ispere sa azotom, nakon toga se epruveta zatvori i zagreva na 100 °C u toku 21h. Smeša se ohladi na rt, razblaži sa vodom (10 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Organski slojevi se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti flash hromatografijom pomoću gradijenta 0-5% metanol u dihlormetanu i 12g silika gel kolone da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.104 g, 0.136 mmol, 89% prinos) kao providan film. LCMS: m/e 767.6 (M+H)<+>, 2.20 min (postupak 3).
Faza 2. U rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oksopirolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (0.104 g, 0.136 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) i MeOH (0.5 mL) se doda NaOH (IN) (0.542 mL, 0.542 mmol). Smeša se zagreva na 60 °C. Nakon 4.5 h zagrevanja, smeša se ohladi na rt i prečisti reverzno faznom hromatografijom koristeći 25-100% A do B gradijent (A = 9:1 voda:acetonitril sa dodavanjem 0.1% TFA, B = 1:9 voda:acetonitril sa dodavanjem 0.1% TFA) i 50 g C18 Kolona. Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije TFA so naslovljenog jedinjenja (0.076 g, 0.096 mmol, 71% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/e 677.4 (M+H)<+>, 1.73 min (postupak 3).<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina d4) δ 5.37 (br. s., 1H), 5.22 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.87 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.63 - 4.45 (m, 2H), 3.81 - 3.68 (m, 2H), 3.66 - 3.54 (m, 3H), 3.51 - 3.44 (m, 1H), 2.83 - 2.74 (m, 1H), 2.63 - 2.48 (m, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 2.34 - 1.04 (m, 29H), 0.98 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.93 (s, 3H).
Primer 21
14
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil- 3a-((3-(2-oksopirolidin-1-il)propil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0191]
Faza 1. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((3-(2-oksopirolidin-1-il)propil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U zatvorenu bočicu koja sadrži (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (0.1 g, 0.152 mmol) i 1-(3-hloropropil)pirolidin-2-on (0.074 g, 0.457 mmol) se dodaju fosforna kiselina, kalijum so (0.129 g, 0.610 mmol) i kalijum jodid (0.038 g, 0.229 mmol). Smeša se razblaži sa acetonitrilom (2 mL), ispere sa azotom, nakon toga se bočica zatvori i zagreva 16h na 100 °C. Smeša se ohladi na rt, razblaži sa vodom (10 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Organski slojevi se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečisti flash hromatografijom pomoću gradijenta 0-5% MeOH u DCM i 12g silika gel kolone. Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.074g, 0.095 mmol, 62% prinos) kao providan film. LCMS: m/e 781 (M+H)<+>, 2.20 min (postupak 3).
Faza 2. U rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((3-(2-oksopirolidin-1-il)propil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3- enekarboksilata (0.074 g, 0.095 mmol) u 1,4-dioksanu (2 mL) i metanolu (0.4 mL) se doda 1N NaOH (0.379 mL, 0.379 mmol) i smeša se zagreje na 60 °C. Nakon 4h zagrevanja, smeša se ohladi na rt i prečisti preparativnom HPLC (postupak 11). Frakcije koje sadrže produkt se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije TFA so naslovljenog produkta (0.042g, 0.052 mmol, 55% prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/e 691.5 (M+H)<+>, 1.73 min (postupak 3).<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.65 - 4.47 (m, 2H), 3.56 - 3.41 (m, 4H), 3.28 - 3.16 (m, 2H), 2.90 - 2.81 (m, 1H), 2.65 - 2.58 (m, 1H), 2.52 (t, J=8.1 Hz, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 2.36 - 1.06 (m, 31H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Primer 22
Izrada (R)-4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-1-izopropil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0192]
14
Faza 1. Izrada (R)-2-(trimetilsilil)etil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
Smeša (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline (180 mg, 0.248 mmol) i 2-(trimetilsilil)etil N,N’-diizopropilkarbamidata (91 mg, 0.371 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL) se refluksuje 4 sata na 80 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom i ostatak se razblaži sa metanolom (3 mL) i tetrahidrofuranom (4 mL). Dobijena smeša se ostavi 14 h na sobnoj temperaturi. Formira se bela čvrsta supstanca i ukloni filtriranjem. Filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Ovaj ostatak se tretira sa metanolom (2 mL) i vodom (5 mL) da se dobije beli precipitat. Čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem i ispere sa dietil etrom (4 mL) da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (130 mg, 60%). LCMS: m/e 827.8 (M+H)<+>, 2.39 min (postupak 3).
Faza 2. Izrada (R)-2-(trimetilsilil)etil 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-1-izopropil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
Smeša (R)-2-(trimetilsilil)etil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (50 mg, 0.060 mmol) i Pd-C (6.43 mg, 6.04 mmol) u tetrahidrofuranu (2 mL) i metanolu (1 mL) se meša 31 sat u atmosferi vodonika na 20 °C. Reaktivna smeša se filtrira kroz celite ploču da se ukloni paladijum katalizator i ispere sa tetrahidrofuranom (10 mL). Filtrati se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (40 mg, 64%, 80% čistoće). LCMS: m/e 829.8 (M+H)<+>, 2.43 min (postupak 3).
Faza 3. Smeša (R)-2-(trimetilsilil)etil 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-
14
((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-1-izopropil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (15 mg, 0.014 mmol) i tetra-N-butilamonijum fluorida (101 mg, 0.289 mmol) u dioksanu (1mL) se meša 5 sati na 20 °C. Reaktivna smeša se filtrira i prečisti preparativnom HPLC sa 0-70 acetonitril/voda/TFA da se dobije željeni produkt kao bezbojno ulje (6 mg, 54%). LCMS: m/e 729.7 (M+H)<+>, 1.90 min (postupak 3).
<1>H NMR (500MHz, sirćetni) δ 5.40 (br. s., 1H), 5.31 - 5.17 (m, 1H), 4.73 - 4.56 (m, 1H), 4.55 - 4.40 (m, 1H), 3.58 - 3.02 (m, 12H), 2.62 (d, J=16.9 Hz, 1H), 2.35 - 2.30 (m, 1H), 2.25 -1.13 (m, 28H), 1.26 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.93 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.85 (d, J=6.8 Hz, 3H).
Primer 23
Izrada 4-((1S,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-1-izopropil-5a,5b,8,8,11a-pentametil-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheksankarboksilne kiseline
[0193]
[0194] Smeša (R)-2-(trimetilsilil)etil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (18 mg, 0.022 mmol) i Pd-C (4.63 mg, 4.35 mmol) u tetrahidrofuranu (2 mL) i metanolu (2 mL) se meša 3 dana na 20 °C. Reaktivna smeša se filtrira kroz celite ploču i zatim ispere sa tetrahidrofuranom (2 mL), filtrati se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca se
14
rastvori u tetrahidrofuranu (2 mL) i u reakciju se doda tetra-N-butilamonijum fluorid (152 mg, 0.435 mmol). Smeša se meša 2 dana na 20 °C. Reaktivna smeša se filtrira i prečisti preparativnom HPLC sa 0-70 acetonitril/voda/TFA da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (4 mg, 24%). LCMS: m/e 731.8 (M+H)<+>, 1.87 min (postupak 3).<1>H NMR (500MHz, ACETONITRIL-d3) δ 5.28 (dd, J=6.5, 1.6 Hz, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.31 (s, 1H), 3.27 - 2.97 (m, 11H), 2.94 - 2.83 (m, 1H), 2.20 - 1.24 (m, 32H), 1.16 (s, 3H), 1.13 - 1.11 (m, 1H), 1.05 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.92 (d, J=6.9 Hz, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.84 (d, J=6.6 Hz, 3H).
Primer 24
Izrada (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(2,6-dimetil-1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0195]
Faza 1. Izrada 4-(2-hloretil)-2,6-dimetiltiomorfolin 1,1-dioksida
Smeša 2,6-dimetiltiomorfolin 1,1-dioksida (100 mg, 0.613 mmol), 2-hloracetaldehida (135 mg, 0.858 mmol) i bor-2-pikolin kompleksa (72.1 mg, 0.674 mmol) u metanolu (2 mL) i sirćetnoj kiselini (1 mL) se meša na rt 17 sati. Reaktivna smeša se ispere sa zasićenim rastvorom natrijum karbonata (10 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 10 mL).
Kombinovane organske faze se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (90 mg, 65%).
14
LCMS: m/e 226.2 (M+H)<+>, 0.54 min (postupak 3).
Faza 2. Smeša 4-(2-hloretil)-2,6-dimetiltiomorfolin 1,1-dioksida (20.65 mg, 0.091 mmol), (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (30 mg, 0.046 mmol), kalijum jodida (8.35 mg, 0.050 mmol) i kalijum fosfata (48.5 mg, 0.229 mmol) u acetonitrilu (1 mL) se zagreje do 120 °C u toku 16 sati. Reaktivna smeša se ohladi na rt, neutrališe sa destilovanom vodom (3 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 3 mL).
Kombinovane organske faze se isperu sa slanim rastvorom (3 mL), suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca se rastvori u acetonitrilu (1 mL) i doda se natrijum hidroksid (0.457 mL, 0.457 mmol). Smeša se zagreva 3 h na 80°C i nakon toga se filtrira i prečisti preparativnom HPLC sa smešom acteonitril/voda/TFA da se dobije (1R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(2,6-dimetil- 1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao bela čvrsta supstanca (12 mg, 33%). LCMS: m/e 755.8 (M+H)<+>, 1.96 min (postupak 3).<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 5.36 (br. s., 1H), 5.22 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.86 (br. s., 1H), 4.76 (s, 1H),
4.62 - 4.51 (m, 1H), 4.50 - 4.39 (m, 1H), 3.39-3.11 (m, 7H), 3.01 - 2.73 (m, 4H), 2.57 (d, J=17.7 Hz, 1H), 2.38 - 1.15 (m, 27H), 1.79 (s, 3H), 1.30 (dd, J=6.8, 3.3 Hz, 6H), 1.17 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Primer 25
Izrada (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(2,6-dimetil-1,1-dioksidotiomorfolino)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0196]
14
[0197] Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen- 9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (30 mg, 0.046 mmol), 4-(2-hloretil)-2,6-dimetiltiomorfolin 1,1-dioksida (20.65 mg, 0.091 mmol), kalijum jodida (8.35 mg, 0.050 mmol) i kalijum fosfata (48.5 mg, 0.229 mmol) u acetonitrilu (1 mL) se zagreva 16 h na 120 °C. Reaktivna smeša se ohladi na rt, neutrališe sa destilovanom vodom (3 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 3 mL). Kombinovane organske faze se isperu sa slanim rastvorom (3 mL), suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Ova bela čvrsta supstanca se rastvori u acetonitrilu (1 mL) i doda se natrijum hidroksid (0.457 mL, 0.457 mmol). Smeša se zagreva 3 h na 80° C, filtrira i prečisti preparativnom HPLC sa smešom acteonitril/voda/TFA da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bela čvrsta supstanca (12 mg, 33%). LCMS: m/e 755.8 (M+H)<+>, 1.92 min (postupak 3).<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 5.35 (br. s., 1H), 5.22 (dd, J=6.1, 1.6 Hz, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.76 (d, J=1.3 Hz, 1H), 4.61 - 4.51 (m, 1H), 4.50 - 4.38 (m, 1H), 3.39- 3.07 (m, 7H), 3.01 - 2.73 (m, 4H), 2.57 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.37 - 1.20 (m, 27H), 1.78 (s, 3H), 1.30 (dd, J=6.7, 3.1 Hz, 6H), 1.17 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.95 (s, 3H).
Primer 26
Izrada (1R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(6-metil-1,1-dioksido-1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0198]
1
Faza 1. Izrada 4-(2-hloretil)-6-metil-1,4-tiazepan 1,1-dioksida
Smeša 6-metil-1,4-tiazepan 1,1-dioksida (100 mg, 0.613 mmol), 2-hloracetaldehida (0.107 mL, 0.858 mmol) i bor-2-pikolin kompleksa (72.1 mg, 0.674 mmol) u metanolu (1 mL) i sirćetnoj kiselini (0.5 mL) se meša 17 sati na rt. Reaktivna smeša se ispere sa zasićenim rastvorom natrijum karbonata (3 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 2 mL). Kombinovane organske faze se suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (105 mg, 76%). LCMS: m/e 226.2 (M+H)<+>, 0.33 min (postupak 3).
Faza 2. Smeša (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (20 mg, 0.030 mmol), 4-(2-hloretil)-6-metil-1,4-tiazepan 1,1-dioksida (27.5 mg, 0.122 mmol), kalijum jodida (5.57 mg, 0.034 mmol) i kalijum fosfata (32.4 mg, 0.152 mmol) u acetonitrilu (1 mL) se zagreva 16 h na 120 °C. Reaktivna smeša se ohladi na rt, neutrališe sa destilovanom vodom (3 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 2 mL). Kombinovane organske faze se isperu sa slanim rastvorom (3 mL), suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije željeni međuproizvod, bela čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca se rastvori u dioksanu (1 mL) i doda se natrijum hidroksid (0.305 mL, 0.305 mmol). Smeša se zagreva 3 h na 80° C. Reaktivna smeša se filtrira i prečisti preparativnom HPLC sa smešom 0-70 acteonitril/voda/TFA da se dobije (1R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(6-metil-1,1-dioksido-1,4- tiazepan-4-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina kao bezbojno ulje (9.8 mg, 40%). LCMS: m/e
1 1
755.9(M+H)<+>, 1.93 min (postupak 3).<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 5.36 (br. s., 1H), 5.22 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.86 (br. s., 1H), 4.76 (s, 1H), 4.61 - 4.51 (m, 1H), 4.50 - 4.40 (m, 1H), 3.69 - 3.14 (m, 9H), 3.11 - 2.75 (m, 4H), 2.57 (d, J=17.2 Hz, 1H), 2.49 - 2.24 (m, 2H), 2.22 - 1.15 (m, 26H), 1.78 (s, 3H), 1.19 (d, J=3.0 Hz, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.09 (dd, J=7.0, 4.8 Hz, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (d, J=2.0 Hz, 3H).
Primer 27
Izrada (1S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(6-metil-1,1-dioksido-1,4-tiazepan-4-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0199]
[0200] Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen- 9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (20 mg, 0.030 mmol), 4-(2-hloretil)-6-metil-1,4-tiazepan 1,1- dioksida (34.4 mg, 0.152 mmol), kalijum jodida (5.57 mg, 0.034 mmol) i kalijum fosfata (32.4 mg, 0.152 mmol) u acetonitrilu (1 mL) se zagreva 16 h na 120 °C.
Reaktivna smeša se ohladi na rt, neutrališe sa destilovanom vodom (3 mL) i ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 2 mL). Kombinovane organske faze se isperu sa slanim rastvorom (3 mL), suše preko natrijum sulfata, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca. Ova čvrsta supstanca se rastvori u dioksanu (1 mL) i doda se natrijum hidroksid (0.305 mL, 0.305 mmol). Smeša se zagreva 3 h na 80 ° C. Reaktivna smeša se
1 2
filtrira i prečisti preparativnom HPLC sa smešom 0-70 acteonitril/voda/TFA da se dobije naslovljeno jedinjenje kao bezbojno ulje (6 mg, 25%). LCMS: m/e 755.9 (M+H)<+>, 1.90 min (postupak 3).<1>H NMR (500MHz, METANOL-d4) δ 5.35 (br. s., 1H), 5.22 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.86 (br. s., 1H), 4.76 (s, 1H), 4.62 - 4.51 (m, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 3.67 - 3.15 (m, 9H), 3.10 - 2.75 (m, 4H), 2.57 (d, J=18.1 Hz, 1H), 2.49 - 2.23 (m, 2H), 2.21 - 1.14 (m, 26H), 1.78 (s, 3H), 1.22 - 1.17 (m, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.10 - 1.06 (m, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
Primer 28
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,1aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((karboksimetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline.
[0201]
Faza 1. Izrada 2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-il)amino)sirćetne kiseline.
1
Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen- 9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (0.250 g, 0.381 mmol) i 2-oksosirćetne kiseline monohidrat (0.053 g, 0.572 mmol) u metanolu (1 mL), THF (1 mL) i sirćetnoj kiselini (0.5 mL) se tretira sa bor 2-pikolin kompleksom (0.061 g, 0.572 mmol). Smeša odmah po dodavanju počinje da ispušta mehuriće i meša se na rt. Nakon 2.5h mešanja, smeša se tretira sa novom količinom bor 2-pikolin kompleksa (0.061 g, 0.572 mmol) i 2-oksosirćetne kiseline monohidrat (0.053 g, 0.572 mmol) i dobijeni rastvor se meša na rt još 96 h. Sirova smeša se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 14) da se dobije željeni materijal (0.213 g, 78% prinos) kao bezbojna staklasto čvrsta TFA so. LCMS: m/z 714.4 (M+H)<+>, 2.63 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 7.59 (s, 2H), 7.38 - 7.26 (m, 3H), 5.31 (br. s., 1H), 5.21 - 5.12 (m, 2H), 5.10 (d, J=4.9 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.61 - 4.38 (dm, J=47.2 Hz, 2H), 3.50 (s, 2H), 2.70 - 2.54 (m, 2H), 2.12 (d, J=7.8 Hz, 3H), 2.08 - 1.87 (m, 6H), 1.84 - 1.67 (m, 8H), 1.67 - 1.57 (m, 3H), 1.56 - 1.40 (m, 6H), 1.40 - 1.28 (m, 3H), 1.28 - 1.21 (m, 1H), 1.17 (s, 3H), 1.11 - 1.00 (m, 4H), 0.93 - 0.82 (m, 9H).
Faza 2.2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3ail)amino)sirćetna kiselina TFA so (0.050 g, 0.060 mmol) se kombinuje sa LiOH, 1M vodenim (0.483 mL, 0.483 mmol) i smešom THF (0.5 mL) i MeOH (0.5 mL). Dobijena smeša se meša 30 min na 80 °C. Sirova smeša se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 15) da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.0318 g, 71% prinos) kao bela čvrsta TFA so. LCMS: m/z 624.4 (M+H)<+>, 2.43 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.18 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.60 - 4.39 (dm, J=47.2 Hz, 2H), 3.43 (s, 2H), 2.65 (td, J=11.0, 5.1 Hz, 1H), 2.55 (d, J=17.9 Hz, 1H), 2.29 - 2.11 (m, 2H), 2.11 - 1.86 (m, 7H), 1.85 - 1.66 (m, 8H), 1.66 - 1.43 (m, 8H), 1.43 - 1.24 (m, 4H), 1.18 (s, 4H), 1.14 - 1.01 (m, 4H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Primer 29
1 4
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,1aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline.
[0202]
Faza 1. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata.
U 1 dram bočici sa PTFA obloženim navojnim zatvaračem se kombinuju 2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3ail)amino)sirćetna kiselina, TFA (0.025 g, 0.030 mmol) sa tiomorfolin 1,1-dioksidom (10.20 mg, 0.075 mmol) i HATU (0.029 g, 0.075 mmol) u THF (1 mL). U smešu se doda DIPEA (0.026 mL, 0.151 mmol) i dobijeni rastvor se mućka u toku noći na rt. Sirova smeša se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 16) da se dobije produkt (0.0269 g, 94% prinos) kao bela praškasta TFA so. LCMS: m/z 831.5 (M+H)<+>, 2.50 min (postupak 1).
1
Faza 2. U 1 dram bočici sa PTFA obloženim navojnim zatvaračem se kombinuju (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-oksoetil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat, TFA (0.0269 g, 0.028 mmol) sa LiOH, 1M vodenim (0.063 mL, 0.063 mmol) i smešom THF (0.5 mL) i MeOH (0.5 mL). Dobijena smeša se meša 30 min na 70°C i zatim 1h na 80 °C. Doda se nova količina LiOH, 1M vodeni (0.080 mL, 0.080 mmol) i smeša se zagreva 20 min na 70 °C i nakon toga 30 min na 80 °C. Sirova smeša se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 4) da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.0178 g, 66% prinos) kao bela staklasto čvrsta TFA so. LCMS: m/z 741.5 (M+H)<+>, 2.34 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.59 - 4.40 (dm, J=47.2 Hz, 2H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 4.13 - 3.86 (m, 4H), 3.25 (t, J=4.9 Hz, 2H), 3.18 (t, J=4.9 Hz, 2H), 2.76 - 2.65 (m, 1H), 2.55 (d, J=16.4 Hz, 1H), 2.29 -2.13 (m, 2H), 2.13 - 2.07 (m, 2H), 2.07 - 1.91 (m, 5H), 1.91 - 1.71 (m, 7H), 1.71 - 1.20 (m, 14H), 1.18 (s, 3H), 1.15 - 1.02 (m, 4H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 30
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline.
[0203]
1
Faza 1. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata.
U 1 dram bočici sa PTFA obloženim navojnim zatvaračem se kombinuju 2-(((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-9-((S)-4-((benziloksi)karbonil)-4-(fluorometil)cikloheks-1-en-1-il)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3ail)amino)sirćetna kiselina, TFA (0.025 g, 0.030 mmol) sa 4-metilpiperidin-4-ol
(8.69 mg, 0.075 mmol) i HATU (0.029 g, 0.075 mmol) u THF (1 mL). U smešu se doda DIPEA (0.026 mL, 0.151 mmol) i dobijeni rastvor se mućka u toku noći na rt. Sirova smeša se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 16) da se dobije produkt (0.0280 g, 100% prinos) kao staklasto čvrsta TFA so. LCMS: m/z 811.6 (M+H)<+>, 2.54 min (postupak 1).
Faza 2. (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metil- piperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat, TFA (0.028 g, 0.030 mmol) se rastvori u 1,2-dihloretanu (1 mL) i u dobijeni rastvor se dodaju trietilamin (10.97 ml, 0.079 mmol), tercbutildimetilsilan (0.015 mL, 0.091 mmol) i paladijum(II) acetat (1.699 mg, 7.57 mmol).
1
Smeša se ispere sa azotom i zagreva 1h na 60 °C. Smeša se nakon toga koncentruje u struji azota do ostatka i nakon toga ponovo rastvori u THF (0.8 mL). U smešu se doda TBAF, 1.0M u THF (0.106 mL, 0.106 mmol) i dobijena smeša se meša 30 min na rt. Sirova smeša se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 16) da se dobije naslovljeno jedinjenje (0.0204 g, 79 % prinos) kao bela čvrsta TFA so. LCMS: m/z 721.5 (M+H)<+>, 2.16 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=4.9 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.44 (d, J=4.4 Hz, 1H), 4.25 - 4.13 (m, 1H), 4.13 - 3.96 (m, 1H), 3.96 - 3.80 (m, 1H), 3.53 - 3.45 (m, 2H), 2.73 - 2.60 (m, 1H), 2.60 - 2.49 (m, 1H), 2.28 - 2.13 (m, 2H), 2.13 - 1.92 (m, 7H), 1.90 -1.71 (m, 7H), 1.71 - 1.45 (m, 13H), 1.45 - 1.30 (m, 4H), 1.28 (d, J=4.2 Hz, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.10 (d, J=6.8 Hz, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 31
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline.
[0204]
[0205] Naslovljeno jedinjenje se izrađuje po istom postupku korišćenom za izradu (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro- 1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
1
il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, izuzev što se koristi 4-(metilsulfonil)piperidin (0.012 g, 0.075 mmol) umesto 4-metilpiperidin-4-ola u Fazi 1. Prečišćavanjem sirove smeše Faze 2 reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 12) dobija se naslovljeno jedinjenje (0.0205 g, 70% prinos u 2 faze) kao bela čvrsta TFA so. LCMS: m/z 769.4 (M+H)<+>, 2.33 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.22 - 5.16 (m, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.72 - 4.61 (m, 2H), 4.48 - 4.40 (m, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 1H), 4.02 - 3.87 (m, 2H), 3.29 - 3.13 (m, 1H), 3.00 - 2.87 (m, 4H), 2.73 - 2.62 (m, 1H), 2.55 (d, J=17.4 Hz, 1H), 2.28 - 2.19 (m, 3H), 2.19 -2.11 (m, 1H), 2.11 - 1.92 (m, 7H), 1.89 - 1.75 (m, 5H), 1.74 (s, 3H), 1.71 - 1.60 (m, 4H), 1.58 (br. s., 1H), 1.55 - 1.41 (m, 5H), 1.40 - 1.25 (m, 3H), 1.19 (s, 3H), 1.13 - 1.08 (m, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 32
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-morfolino-2-oksoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline.
[0206]
[0207] Naslovljeno jedinjenje se izrađuje po istom postupku korišćenom za izradu (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
1
il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, izuzev što se koristi morfolin (6.58 ml, 0.075 mmol) umesto 4-metilpiperidin-4-ola u Fazi 1. Prečišćavanjem sirove smeše Faze 2 reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 12) dobija se naslovljeno jedinjenje (0.0185 g, 74% prinos u 2 faze) kao bela čvrsta TFA so. LCMS: m/z 693.4 (M+H)<+>, 2.35 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) d 5.33 (br. s., 1H), 5.22 - 5.16 (m, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.48 - 4.39 (m, 1H), 4.05 (d, J=15.2 Hz, 1H), 3.88 (d, J=15.9 Hz, 1H), 3.78 - 3.71 (m, 4H), 3.71 - 3.64 (m, 2H), 3.53 - 3.45 (m, 2H), 2.72 -2.61 (m, 1H), 2.55 (d, J=16.4 Hz, 1H), 2.19 (d, J=19.3 Hz, 2H), 2.13 - 2.07 (m, 1H), 2.07 -1.90 (m, 6H), 1.88 - 1.75 (m, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.72 - 1.56 (m, 5H), 1.56 - 1.42 (m, 5H), 1.42 - 1.25 (m, 4H), 1.19 (s, 4H), 1.15 - 1.08 (m, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 33
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)-2-oksoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline.
[0208]
[0209] Naslovljeno jedinjenje se izrađuje po istom postupku korišćenom za izradu (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro- 1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
1
il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, izuzev što se koristi 1-(metilsulfonil)piperazin (0.012 g, 0.075 mmol) umesto 4-metilpiperidin-4-ola u Fazi 1. Prečišćavanjem sirove smeše Faze 2 reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 12) dobija se naslovljeno jedinjenje (0.0210 g, 77% prinos u 2 faze) kao bela čvrsta TFA so. LCMS: m/z 770.5 (M+H)<+>, 2.33 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.22 - 5.16 (m, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.48 - 4.40 (m, 1H), 4.21 (d, J=16.1 Hz, 1H), 3.96 (d, J=15.9 Hz, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 1H), 3.73 (ddd, J=13.6, 7.3, 3.3 Hz, 1H), 3.67 - 3.52 (m, 2H), 3.31 - 3.20 (m, 2H), 2.88 (s, 3H), 2.71 (td, J=11.1, 4.9 Hz, 1H), 2.55 (d, J=15.9 Hz, 1H), 2.29 - 2.13 (m, 2H), 2.13 - 1.91 (m, 7H), 1.89 -1.71 (m, 7H), 1.71 - 1.60 (m, 4H), 1.60 - 1.41 (m, 6H), 1.41 - 1.21 (m, 4H), 1.19 (s, 4H), 1.13 - 1.08 (m, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 34
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,1aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksido-1,4-tiazepan-4-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0210]
[0211] Naslovljeno jedinjenje se izrađuje po istom postupku korišćenom za izradu (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro- 1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
1 1
il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, izuzev što se koristi 1,4-tiazepan 1,1-dioksid (0.011 g, 0.075 mmol) umesto 4-metilpiperidin-4-ola u Fazi 1. Prečišćavanjem sirove smeša Faze 2 reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 12) dobija se naslovljeno jedinjenje (0.0188 g, 70% prinos u 2 faze) kao bela čvrsta TFA so. LCMS: m/z 755.4 (M+H)<+>, 2.32 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=4.9 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.49 - 4.39 (m, 1H), 4.25 - 4.10 (m, 1H), 4.04 - 3.91 (m, 2H), 3.91 - 3.81 (m, 1H), 3.81 - 3.66 (m, 3H), 3.66 - 3.48 (m, 1H), 3.41 (t, J=5.9 Hz, 1H), 3.30 - 3.23 (m, 1H), 2.77 - 2.64 (m, 1H), 2.55 (d, J=17.9 Hz, 1H), 2.32 - 2.13 (m, 3H), 2.13 - 1.91 (m, 8H), 1.90 - 1.75 (m, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.71 - 1.60 (m, 4H), 1.59 - 1.44 (m, 5H), 1.44 - 1.29 (m, 4H), 1.19 (d, J=2.2 Hz, 4H), 1.10 (d, J=7.1 Hz, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 35
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,1aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiazolidin-3-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-okta- dekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline.
[0212]
[0213]Naslovljeno jedinjenje se izrađuje po istom postupku korišćenom za izradu (S)-1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
1 2
il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, izuzev što se koristi tiazolidin 1,1-dioksid (9.15 mg, 0.075 mmol) umesto 4-metilpiperidin-4-ola u Fazi 1. Prečišćavanjem sirove smeše Faze 2 reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 12) dobija se naslovljeno jedinjenje (0.0117 g, 45% prinos u 2 faze) kao bela čvrsta TFA so. LCMS: m/z 727.4 (M+H)<+>, 2.31 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=6.1 Hz, 1H), 4.81 (s, 1H), 4.72 (br. s., 1H), 4.64 (br. s., 1H), 4.47 - 4.40 (m, 1H), 4.19 - 4.08 (m, 2H), 4.01 - 3.84 (m, 1H), 3.49 (t, J=6.1 Hz, 1H), 3.41 (t, J=7.2 Hz, 1H), 2.74 - 2.63 (m, 1H), 2.55 (d, J=17.1 Hz, 1H), 2.30 - 2.12 (m, 2H), 2.09 (br. s., 1H), 2.07 - 1.92 (m, 5H), 1.92 - 1.75 (m, 4H), 1.73 (s, 3H), 1.69 - 1.44 (m, 9H), 1.44 -1.36 (m, 2H), 1.36 - 1.24 (m, 2H), 1.17 (d, J=4.6 Hz, 3H), 1.14 - 1.01 (m, 4H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 36
Izrada (1S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(3-(metilsulfonil)pirolidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline.
[0214]
[0215] Naslovljeno jedinjenje se izrađuje po istom postupku korišćenom za izradu (S)-1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-
1
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, izuzev što se koristi 3-(metilsulfonil)pirolidin (0.011 g, 0.075 mmol) umesto 4-metilpiperidin-4-ola u Fazi 1. Prečišćavanjem sirove smeše Faze 2 reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 12) dobija se naslovljeno jedinjenje (0.0117 g, 57% prinos u 2 faze) kao bela čvrsta TFA so. LCMS: m/z 755.4 (M+H)<+>, 2.31 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=5.4 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.74 (br. s., 1H), 4.47 -4.39 (m, 1H), 4.19 - 3.97 (m, 2H), 3.97 - 3.81 (m, 3H), 3.81 - 3.61 (m, 2H), 3.09 - 3.01 (m, 3H), 2.75 - 2.46 (m, 4H), 2.30 - 2.12 (m, 2H), 2.12 - 1.91 (m, 7H), 1.88 - 1.75 (m, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.71 - 1.61 (m, 4H), 1.59 - 1.42 (m, 6H), 1.41 - 1.29 (m, 3H), 1.26 (br. s., 1H), 1.19 (s, 4H), 1.10 (d, J=8.6 Hz, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Primer 37
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1S,4S)-2,2-dioksido-2-tia-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline.
[0216]
[0217] Naslovljeno jedinjenje se izrađuje po istom postupku korišćenom za izradu (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)-2-oksoetil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro- 1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
1 4
il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, izuzev što se koristi (1S,4S)-2-tia-5-azabiciklo[2.2.1]heptan 2,2-dioksid, hidrobromid (0.017 g, 0.075 mmol) umesto 4-metilpiperidin-4-ola u Fazi 1. Prečišćavanjem sirove smeše Faze 2 reverzno faznom preparativnom HPLC (Prep HPLC Postupak 12) dobija se naslovljeno jedinjenje (0.0154 g, 57% prinos u 2 faze) kao bela čvrsta TFA so. LCMS: m/z 753.4 (M+H)<+>, 2.31 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 smeša CDCl3i CD3OD, CD3OD zaustavljeno) δ 5.33 (br. s., 1H), 5.22 - 5.16 (m, 1H), 5.11 (d, J=3.4 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.76 - 4.70 (m, 1H), 4.48 - 4.39 (m, 1H), 4.17 - 4.07 (m, 1H), 3.99 - 3.84 (m, 2H), 3.84 - 3.69 (m, 1H), 3.30 - 3.13 (m, 2H), 2.75 -2.60 (m, 2H), 2.60 - 2.42 (m, 2H), 2.29 - 2.12 (m, 2H), 2.12 - 1.90 (m, 7H), 1.87 - 1.75 (m, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.72 - 1.59 (m, 4H), 1.59 - 1.41 (m, 6H), 1.41 - 1.21 (m, 4H), 1.21 - 1.15 (m, 4H), 1.10 (d, J=7.6 Hz, 1H), 1.07 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Primer 38
Izrada (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)karbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, TFA.
[0218]
1
Faza 1. Izrada (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-9-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3akarboksilne kiseline.
U rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-benzil 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-9-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3akarboksilata (1.500 g, 2.216 mmol) u DCE (20 mL) i sirćetne kiseline (5 mL) se u atmosferi N2(g) doda crni paladijum (0.047 g, 0.443 mmol). Reaktivna posuda se prečisti sa H2(g), meša 5h u atmosferi H2(g), filtrira, ispere sa DCM (50 mL) i koncentruje do bele čvrste supstance. Sirovi materijal se triturira sa minimalnom količnom DCM i heksanima, koncentruje do bele žitke mase, filtrira i ispere sa heksanim da se dobije 1. serija željenog produkta. Tečni filtrat se dalje koncentruje do bele žitke mase, filtrira i ispere sa heksanim da se dobije druga serija. Obe serije se kombinuju i suše pod vakuumom da se dobije (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-9-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-
1
oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilna kiselina (1.1 g, 1.875 mmol, 85 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/e 587.2 (M+H)<+>, 3.23 min (postupak 1).
<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.57 (d, J=3.9 Hz, 1H), 4.76 (br. s., 1H), 4.63 (br. s., 1H), 3.03 (br. s., 1H), 2.46 - 2.10 (m, 3H), 2.00 (d, J=6.8 Hz, 2H), 1.81 - 1.63 (m, 6H), 1.59 -1.32 (m, 12H), 1.25 (br. s., 3H), 1.13 (br. s., 3H), 1.02 (br. s., 3H), 1.00 (br. s., 6H), 0.93 (br. s., 3H).<13>C NMR (101MHz, HLOROFORM-d) δ 182.0, 155.4, 150.3, 113.7, 109.8, 56.4, 53.3, 49.2, 48.9, 46.9, 42.5, 40.6, 40.3, 38.5, 37.9, 37.1, 36.4, 33.3, 32.1, 30.6, 29.7,27.5, 25.5, 21.4, 19.4, 19.39 - 19.33, 18.9, 16.2, 15.7, 14.6.<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -74.82 (br. s., 3F).
Faza 2. Izrada (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)karbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-okta- dekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonata.
U rastvor (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 9-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-3a-karboksilne kiseline (0.500 g, 0.852 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0.520 mL, 2.98 mmol) u DCM (10 mL) se dodaju HATU (0.389 g, 1.023 mmol) i 4-(2-aminoetil)tiomorfolin 1,1-dioksid (0.182 g, 1.023 mmol). Reakcija se meša na rt (10:25 am). Nakon 2h, reakcija se razblaži sa DCM i ispere sa 20 mL 5% vodenog rastvora limunske kiseline. Vodeni sloj se ekstrahuje sa DCM (25 mL). Kombinovani organski deo se ispere sa 10% Na2CO3, slanim rastvorom, suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje do bistrog viskoznog ulja. Sirovi materijal se prečisti hromatografijom na koloni (SiO2, 24 g Isco kertridž, uz eluiranje sa 97:3 DCM:MeOH) i suši pod vakuumom da se dobije (1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)karbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-okta- dekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonat (394 mg, 0.527 mmol, 61.9 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/e 747.5 (M+H)<+>, 2.75 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.87 (t, J=5.4 Hz, 1H), 5.56 (dd, J=6.6, 1.7 Hz, 1H), 4.74 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.61 (s, 1H), 3.37 (q, J=6.0 Hz, 2H), 3.15 - 3.07 (m, 1H), 3.05 (s, 7H), 2.66 (t, J=6.2 Hz, 2H), 2.56 - 2.46 (m, 1H), 2.16 (dd, J=17.1, 6.8 Hz, 1H), 1.97 - 1.88 (m, 2H), 1.79 - 1.71 (m, 3H), 1.69 (s, 3H), 1.66 - 1.54 (m, 3H), 1.52 - 1.30 (m, 10H), 1.25 - 1.16 (m, 2H), 1.12 (s, 3H), 1.10 - 1.06 (m,
1
1H), 1.01 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.91 (s, 3H).<13>C NMR (101MHz, HLOROFORM-d) δ 176.3, 155.3, 150.6, 113.7, 109.6, 55.7, 55.6, 53.3, 51.3, 50.7, 50.0, 49.0, 46.8, 42.5, 40.6, 40.2, 38.6, 38.4, 37.9, 37.8, 36.3, 36.3, 33.8, 33.5, 30.8, 29.4, 27.4, 25.5, 21.5, 19.5, 19.4, 19.0, 16.2, 15.9, 14.6.<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM- d) δ -74.83 (s, 3F).
Faza 3. Izrada (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)karbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata, TFA.
(1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aR,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)karbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il trifluorometansulfonat (250 mg, 0.335 mmol),(R)-benzil 1-(fluorometil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)ci kloheks-3-enekarboksilat (150 mg, 0.402 mmol) i Buchwald prekatalizator 13 (92371-003-01) (10.53 mg, 0.013 mmol) se kombinuju.
Reaktivna posuda se isprazni nakon 15 minuta u vakuumoskoj pećnici, nakon toga ponovo napuni sa N2(g). Reaktivna boca se napuni sa prethodno poprskanim N2(g) THF (4 mL) i vodenim 0.5 M rastvorom K3PO4(1.673 mL, 0.837 mmol). Reaktivna smeša se poprska sa N2(g) i meša 15h na 72 °C i ostavi da se ohladi na rt u toku noći. Reakcija se razblaži sa EtOAc (50 mL) i ispere sa 1.5N K3PO4. Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (50 mL).
Kombinovani organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje do braon viskoznog ulja. Sirovi materijal se prečisti flash hromatografijom na koloni (silika gel, 12g, uz eluiranje sa 97:3 DCM:MeOH) i suši da se dobije produkt koji je još uvek kontaminiran sa nekoliko nečistoća. Ovaj matereijal se dalje prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (prep-HPLC postupci 8) i suši pod vakuumom da se dobije (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)karbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat, TFA (161 mg, 0.166 mmol, 49.6 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/e 845.7 (M+H)<+>, 3.25 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.39 - 7.30 (m, 5H), 6.78 (br. s., 1H), 5.32 (br. s., 1H), 5.24 - 5.14 (m, 2H), 5.11 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.60 - 4.54 (m, 1H), 4.50 - 4.40 (m,
1
1H), 3.82 - 3.57 (m, 6H), 3.46 (br. s., 4H), 3.25 (t, J=5.6 Hz, 2H), 3.05 (td, J=11.0, 3.9 Hz, 1H), 2.60 (d, J=17.1 Hz, 1H), 2.41 - 2.31 (m, 1H), 2.24 - 2.03 (m, 4H), 2.02 - 1.90 (m, 3H), 1.88 - 1.72 (m, 3H), 1.69 (s, 3H), 1.66 - 1.61 (m, 1H), 1.60 - 1.46 (m, 4H), 1.46 - 1.18 (m, 10H), 1.05 (d, J=8.8 Hz, 2H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 6H), 0.87 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).
Faza 4. U rastvor (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)karbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata, TFA (96 mg, 0.100 mmol) u THF (1.0 mL) i MeOH (0.5 mL) se doda 1N rastvor litijum hidroksida (0.500 mL, 0.500 mmol) i meša na 60 °C (11:25 AM). Nakon 2h, LC/MS pokazuje da je reakcija završena i ostavi se da se ohladi na rt. Reaktivna smeša se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (prep-HPLC postupak 12) i suši pod vakuumom da se dobije (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)karbamoil)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, TFA (66.1 mg, 0.075 mmol, 75 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/e 755.5 (M+H)<+>, 2.69 min (postupak 1).<1>H NMR (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 5.30 (br. s., 1H), 5.16 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.69 (d, J=1.7 Hz, 1H), 4.45 - 4.36 (m, 1H), 3.09 (s, 6H), 3.06 - 3.01 (m, 1H), 2.67 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.57 - 2.45 (m, 2H), 2.30 - 2.19 (m, 1H), 2.12 (br. s., 1H), 2.08 - 2.04 (m, 1H), 2.02 (br. s., 1H), 2.00 - 1.92 (m, 2H), 1.91 - 1.81 (m, 1H), 1.80 - 1.69 (m, 3H), 1.67 (s, 3H), 1.63 - 1.52 (m, 3H), 1.50 - 1.30 (m, 10H), 1.29 - 1.14 (m, 5H), 1.09 - 0.99 (m, 2H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.94 (br. s., 3H), 0.89 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).).<13>C NMR (101MHz, 1:1 D3Cl3:METANOL-d4) δ 178.7, 178.0, 151.6, 148.9, 140.0, 122.3, 122.2, 110.0, 78.6, 56.6, 56.2, 53.9, 51.7, 51.5, 50.9, 50.4, 47.6, 46.2, 46.1, 43.2, 42.6, 41.4, 39.0, 38.7, 38.3, 37.1, 36.9, 34.57 - 34.44, 33.9, 31.6, 30.3, 30.2, 29.9, 29.8, 27.1, 26.6, 22.2, 22.1, 20.45 - 20.36 (m, 1C), 19.8, 16.9, 16.5, 15.1.<19>F NMR (376MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ -76.79 (s, 3F), -226.23 (t, J=47.7 Hz, IF).
Primer 39 i Primer 40: Izrada (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, TFA (izomer A) i (1S)-4-
1
((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, TFA izomer B).
[0219]
Faza 1. (1S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((1,1,1-trifluoro-3-nitropropan-2-il)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat.
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (190 mg, 0.290 mmol) u DCM (2 mL) se doda (1E)-3,3,3-trifluoro-1-nitroprolen (64.5 mg, 0.434 mmol) i meša na rt. Nakon 16h, reakcija se koncentruje u braon viskozno ulje i prečisti flash hromatografijom na koloni (SiO2, 24 g Isco kertridž, uz eluiranje sa 9:1 Hex:EtOAc) i suši pod vakuumom da se dobije (1S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((1,1,1-trifluoro-3-nitropropan-2-il)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
1
il)cikloheks-3-enekarboksilat (171.2 mg, 0.215 mmol, 74.2 % prinos) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/e 797.5 (M+H)<+>, 4.55 min (postupak 10).
Faza 2. (1S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat.
U rastvor (1S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-3a-((1,1,1-trifluoro-3-nitropropan-2-il)amino)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (26 mg, 0.033 mmol) u THF (1 mL) se doda 1N HCl (0.489 mL, 0.489 mmol). U dobijenu žitku masu se doda 1.5N Rieke cink rastvor u THF (0.217 mL, 0.326 mmol). U dobijenu sivu žitku masu se doda MeOH (1 mL). Reakcija postaje homogeni rastvor i meša se na rt u toku noći. Nakon 15h, reakcija se koncentruje. Dobijeni ostatak se rastvori sa THF (5 mL), neutrališe sa 1.5 K3PO4(5 mL) i smeša se ekstrahuje sa 2 x 25 mL EtOAc. Kombinovani organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje u belu penu. Materijal se kao sirov koristi u sledećoj fazi. LCMS: m/e 767.6 (M+H)<+>, 4.96 min (postupak 10).
Faza 3. (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, TFA (izomer A) i (1S)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, TFA izomer B).
U rastvor sirovog materijala, (1S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1- trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (25 mg, 0.033 mmol), iz eksperimenata 99699-178) u THF (1 mL) i MeOH (0.5 mL) se doda rastvor 1N litijum hidroksida (0.114 mL, 0.114 mmol). Reakcija se meša na 65 °C. Nakon 4h, reakcija se ostavi da se ohladi na rt i prečisti
1 1
reverzno faznom preparativnom HPLC (prep-postupak 13) i suši pod vakuumom da se dobije izomer A, (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, TFA i izomer B, (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, TFA; oba kao bela čvrsta supstanca. Primer 39: Izomer A: LCMS: m/e 675.8 (M+H)<+>, 4.29 min (postupak 11).<1>H NMR (400MHz, 1:1 HLOROFORM-d :METANOL-d4) δ 5.31 (br. s., 1H), 5.16 (d, J=4.9 Hz, 1H), 4.72 (br. s., 1H), 4.67 (br. s., 1H), 4.54 - 4.49 (m, 2H), 4.45 - 4.38 (m, 2H), 4.25 (br. s., 2H), 3.73 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.59 (br. s., 1H), 3.15 - 3.05 (m, 1H), 3.03 - 2.96 (m, 1H), 2.69 (td, J=11.0, 5.6 Hz, 1H), 2.53 (d, J=18.3 Hz, 1H), 2.17 (d, J=18.6 Hz, 2H), 2.05 (d, J=18.1 Hz, 1H), 2.01 - 1.90 (m, 2H), 1.89 - 1.84 (m, 2H), 1.82 - 1.71 (m, 4H), 1.68 (s, 3H), 1.66 - 1.61 (m, 1H), 1.56 (d, J=16.4 Hz, 1H), 1.44 (d, J=6.4 Hz, 6H), 1.38 - 1.22 (m, 5H), 1.20 (s, 1H), 1.07 (br. s., 2H), 1.04 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.91 (s, 2H), 0.85 (s, 3H).<19>F NMR-<1>H odvojeno (376MHz, 1:1 HLOROFORM-d :METANOL-d4) δ -73.36 (s, 3F), -76.38 (s, 3F), -226.33 (s, IF).<19>F NMR (376MHz, 1:1 HLOROFORM-d :METANOL-d4) δ -73.37 (d, J=6.9 Hz, 3F), -76.39 (s, 3F), -226.14 - -226.54 (m, IF).
Primer 40: Izomer B: . LCMS: m/e 675.7 (M+H)<+>, 4.63 min (postupak 11).<1>H NMR (400MHz, 1:1 HLOROFORM-d :METANOL-d4) δ 5.30 (br. s., 1H), 5.16 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.70 (s, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 2H), 3.72 (t, J=6.6 Hz, 1H), 3.64 (dd, J=7.2, 3.5 Hz, 1H), 3.24 -3.15 (m, 1H), 3.14 - 3.04 (m, 1H), 2.62 - 2.46 (m, 2H), 2.30 - 2.11 (m, 2H), 2.10 - 2.00 (m, 2H), 1.99 - 1.89 (m, 4H), 1.86 (dt, J=6.7, 3.2 Hz, 1H), 1.80 - 1.70 (m, 3H), 1.68 (s, 3H), 1.66 (br. s., 1H), 1.64 - 1.57 (m, 1H), 1.55 - 1.48 (m, 3H), 1.47 - 1.38 (m, 5H), 1.38 - 1.29 (m, 2H), 1.28 - 1.18 (m, 2H), 1.12 (br. s., 2H), 1.07 (s, 3H), 1.04 (br. s., 1H), 0.97 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.86 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, 1:1 HLOROFORM-d :METANOL-d4) δ -73.84 (s, 3F), -76.35 (s, 5F), -226.26 (s, IF).
Primer 41 i Primer 42
Izrada (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-
1 2
dioksidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, TFA (Izomer A) i (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, TFA (Izomer B).
[0220]
Faza 1. Izrada (1S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata.
U rastvor (1S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-amino-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (107 mg, 0.139 mmol) u 2-Propanolu (3 mL) se doda divinil sulfon (0.020 mL, 0.167 mmol) i meša na 85 °C. Nakon 22h, reakcija se ohladi na rt i koncentruje da se dobije (1S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-
1
1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat kao viskozno braon ulje i koristi se direktno u sledećoj fazi.
Faza 2. Izrada (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorome til)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, TFA (Izomer A) i (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, TFA (Izomer B).
(1S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat se rastvori u THF (1 mL) i MeOH (1 mL) i tretira sa 1N rastvorom litijum hidroksida (0.697 mL, 0.697 mmol), zagreva 4h na 65 °C i ostavi da se ohladi na rt. Sadržaj reakcije se podvrgne prečišćavanju reverzno faznom HPLC koristeći niže dat prep-postupak i suši pod vakuumom da se dobije izomer A kao (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, TFA (32 mg, 0.035 mmol, 24.98 % prinos) i izomer B kao (1S)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-1,1,1-trifluoropropan-2-il)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-octadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, TFA (24.3 mg, 0.026 mmol, 18.97 % prinos), oba kao bela čvrsta supstanca.
Primer 41: Izomer A: LCMS: m/e 795.6 (M+H)<+>, 4.11 min (postupak 11).<1>H NMR (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL-d4) δ 5.30 (br. s., 1H), 5.16 (t, J=4.0 Hz, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.70 (d, J=9.5 Hz, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 2H), 4.21 - 4.06 (m, 1H), 3.23 - 2.94 (m, 10H), 2.88 -2.76 (m, 1H), 2.70 - 2.46 (m, 3H), 2.44 - 2.27 (m, 1H), 2.26 - 2.12 (m, 3H), 2.11 - 2.01 (m, 2H), 2.00 - 1.85 (m, 4H), 1.81 - 1.69 (m, 3H), 1.68 (s, 1H), 1.66 (s, 2H), 1.61 (d, J=11.7 Hz,
1 4
1H), 1.58 - 1.51 (m, 1H), 1.51 - 1.34 (m, 7H), 1.34 - 1.18 (m, 4H), 1.11 - 1.05 (m, 1H), 1.04 (s, 2H), 0.98 (s, 1.5H), 0.96 (s, 1.5H), 0.94 (s, 6H), 0.91 (s, 3H), 0.86 (s, 1.5H), 0.85 (br. s., 1.5H).
Primer 42: Izomer B: LCMS: m/e 795.6 (M+H)<+>, 4.19 min (postupak 11).<1>H NMR (400MHz, 1:1 CDCl3:METANOL- d4) δ 5.30 (br. s., 1H), 5.20 - 5.14 (m, 1H), 5.12 (s, 1H), 4.77 - 4.67 (m, 1H), 4.60 - 4.48 (m, 3H), 3.86 (d, J=3.4 Hz, 1H), 3.21 - 2.99 (m, 9H), 2.96 - 2.71 (m, 2H), 2.70 - 2.57 (m, 2H), 2.52 (d, J=17.4 Hz, 1H), 2.34 - 2.12 (m, 3H), 2.05 (d, J=19.1 Hz, 2H), 2.01 - 1.89 (m, 3H), 1.81 - 1.67 (m, 4H), 1.66 (s, 3H), 1.62 - 1.54 (m, 2H), 1.54 - 1.36 (m, 7H), 1.35 - 1.12 (m, 5H), 1.07 (br. s., 1H), 1.05 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 1H), 0.93 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.84 (s, 3H).
Primer 43
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, 2 TFA.
[0221]
1
Faza 1. (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat.
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (0.100 g, 0.152 mmol) u DCE (1 mL) se doda divinil sulfon (0.037 mL, 0.305 mmol), meša 15h na 65 °C i ohladi na rt. LCMS: m/e 774.5 (M+H)<+>, 4.53 min (postupak 10).
U gore datu reaktivnu smešu se doda tiomorfolin 1,1-dioksid (0.041 g, 0.305 mmol), meša 8h na 85 °C i ostavi da se ponovo ohladi na rt. Reakcija se koncentruje i suši pod vakuumom da se dobije sirovi (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat kao viskozno tamno braon ulje koje se kao sirovo koristi u sledećoj fazi. LCMS: m/e 909.8 (M+H)<+>, 4.79 min (postupak 10).
Faza 2. Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline, 2 TFA.
U rstvor sirovog (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (139 mg, 0.153 mmol) u THF (1 mL) i MeOH (0.5 mL) se doda 1N rastvor litijum hidroksida (0.535 mL, 0.535 mmol). Reakcija se meša 3h na 65 °C i ohladi na rt. Sadržaj reakcije se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (prep-postupak 12) i suši pod vakuumom da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((2-(1,1-dioksidotiomorfolino)etil)sulfonil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina, 2 TFA (66.7 mg, 0.061 mmol, 39.6 %
1
prinos za tri faze reakcije) kao bela čvrsta supstanca. LCMS: m/e 819.7 (M+H)<+>, 3.90 min (postupak 12).<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.34 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.60 (s, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.35 - 4.24 (m, 1H), 4.07 (br. s., 3H), 3.78 (t, J=6.6 Hz, 1H), 3.67 - 3.47 (m, 4H), 3.32 (dt, J=14.7, 5.6 Hz, 1H), 3.20 - 3.00 (m, 10H), 2.86 - 2.76 (m, 1H), 2.56 (d, J=17.4 Hz, 1H), 2.26 - 2.16 (m, 3H), 2.15 - 2.05 (m, 3H), 2.03 - 1.92 (m, 3H), 1.70 (s, 3H), 1.69 (br. s., 1H), 1.63 - 1.49 (m, 4H), 1.44 (br. s., 4H), 1.37 (d, J=11.0 Hz, 1H), 1.30 (br. s., 2H), 1.10 (s, 3H), 1.06 (d, J=7.6 Hz, 2H), 1.03 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.88 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, HLOROFORM-d) δ -75.76 (s, 6F), -224.87 (s, IF).
Odeljak 2
LC/MS Postupci
LC/MS Postupak 2-1
[0222] Uslovi: gradijent: 0% B → 100% B u toku 2 minuta; zadržavanje na 100% B 1 min
Rastvarač A: 90% voda, 10% metanol, 0.1% TFA
Rastvarač B: 10% voda, 90% metanol, 0.1% TFA
Kolona: Phenomenex Luna C18, 2.0 x 50 mm, 3 µm
Brzina protoka: 1 mL / min
Detektor talasne dužine: 220 nm
LC/MS Postupak 2-2
[0223] Uslovi: gradijent: 0% B → 100% B u toku 4 minuta; zadržavanje na 100% B 1 min
Rastvarač A: 90% voda, 10% metanol, 0.1% TFA
Rastvarač B: 10% voda, 90% metanol, 0.1% TFA
Kolona: Phenomenex Luna C18, 3 mm, 2.0 x 50 mm
1
Brzina protoka: 1 mL / min
Detektor talasne dužine: 220 nm
LC/MS Postupak 2-3
[0224] Uslovi: gradijent: 0% B → 100% B u toku 4 minuta; zadržavanje na 100% B 2 min
Rastvarač A: 90% voda, 10% metanol, 0.1% TFA
Rastvarač B: 10% voda, 90% metanol, 0.1% TFA
Kolona: Phenomenex Luna C18, 3 mm, 2.0 x 50 mm
Brzina protoka: 0.8 mL / min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Postupci preparativne HPLC
Prep HPLC Postupak 2-1
[0225] Uslovi: gradijent: 30% B → 100% B u toku 20 minuta; zadržavanje na 100% B 4 min
Rastvarač A: 5% acetonitril, 95% voda, 0.1% TFA
Rastvarač B: 95% acetonitril, 5% voda 0.1% TFA
Kolona: Waters Xbridge 30 x 100 mm, 5 µm
Brzina protoka: 40 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Prep HPLC Postupak 2-2
[0226] Uslovi: videti eksperimentalni odeljak
Rastvarač A: 5:95 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata
Rastvarač B: 95:5 acetonitril: voda sa 10-mM amonijum acetata
1
Kolona: Waters Xbridge C18, 19 x 200 mm, 5 µm
Brzina protoka: 20 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Prep HPLC Postupak 2-3
[0227] Uslovi: gradijent: 50 B → 100% B u toku 20 minuta; zadržavanje na 100% B 5 min
Rastvarač A: 5:95 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline
Rastvarač B: 95:5 acetonitril: voda sa 0.1% trifluorosirćetne kiseline
Kolona: Xbridge C18, 19 x 200 mm, 5- µm partikule
Brzina protoka: 20 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Prep HPLC Postupak 2-4
[0228] Uslovi: gradijent: 10% B → 100% B u toku 20 minuta; zadržavanje na 100% B 5 min
Rastvarač A: 5% acetonitril, 95% voda, 0.1% TFA
Rastvarač B: 95% acetonitril, 5% voda 0.1% TFA
Kolona: Waters Sunfire 30 x 150 mm, 5 µm
Brzina protoka: 40 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Prep HPLC Postupak 2-5
[0229] Uslovi: gradijent: 30% B → 100% B u toku 20 minuta; zadržavanje na 100% B 5 min
Rastvarač A: 5% acetonitril, 95% voda, 0.1% TFA
Rastvarač B: 95% acetonitril, 5% voda 0.1% TFA
1
Kolona: Waters Sunfire 30 x 150 mm, 5 µm
Brzina protoka: 40 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Prep HPLC Postupak 2-6
[0230] Uslovi: gradijent: 10% B → 100% B u toku 20 minuta; zadržavanje na 100% B 2 min
Rastvarač A: 10% metanol, 90% voda, 0.1% TFA
Rastvarač B: 90% metanol, 10% voda 0.1% TFA
Kolona: Waters Sunfire 30 x 100 mm, 5 µm
Brzina protoka: 40 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Analitički HPLC Postupci
Analitički HPLC Postupak 2-1
[0231] Uslovi: gradijent: 10% B → 100% B u toku 15 min; zadržavanje na 100% B 10 min
Rastvarač A: 10% metanol, 90% voda, 0.1% TFA
Rastvarač B: 90% metanol, 10% voda, 0.1% TFA
Kolona: Waters Sunfire C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 mm
Brzina protoka: 1 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Analitički HPLC Postupak 2-2
[0232] Uslovi: gradijent: 10% B → 100% B u toku 15 min; zadržavanje na 100% B 10 min
1
Rastvarač A: 10% metanol, 90% voda, 0.1% TFA
Rastvarač B: 90% metanol, 10% voda, 0.1% TFA
Kolona: Waters Xbridge fenil, 4.6 x 150 mm, 3.5 mm
Brzina protoka: 1 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Analitički HPLC Postupak 2-3
[0233] Gradijent: 0 → 100% B u toku 3 minuta, nakon toga 0.5-minuta zadržavanje na 100% B
Rastvarač A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata
Rastvarač B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata
Kolona: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-mm partikule
Brzina protoka: 1 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Temperatura: 50 °C
Analitički HPLC Postupak 2-4
[0234] Gradijent: 0 → 100% B u toku 3 minuta, nakon toga 0.5-minuta zadržavanje na 100% B
Rastvarač A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata
Rastvarač B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata
Kolona: Waters BEH C18, 2.0 x 50 mm, 1.7-mm partikule
Brzina protoka: 1 mL/min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Temperatura: 50 °C
1 1
Analitički HPLC Postupak 2-5
[0235] Uslovi: gradijent: 10% B → 100% B u toku 15 min; zadržavanje na 100% B 10 min
Rastvarač A: 5% acetonitril, 95% voda, 0.1% TFA
Rastvarač B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.1% TFA
Kolona: Waters Sunfire C18, 3.0 x 150 mm, 3.5 um
Brzina protoka: 0.5 mL / min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Analitički HPLC Postupak 2-6
[0236] Uslovi: gradijent: 10% B → 100% B u toku 15 min; zadržavanje na 100% B 10 min
Rastvarač A: 5% acetonitril, 95% voda, 0.1% TFA
Rastvarač B: 95% acetonitril, 5% voda, 0.1% TFA
Kolona: Waters Xbridge fenil, 3.0 x 150 mm, 3.5 um
Brzina protoka: 0.5 mL / min
Detektor talasne dužine: 220 nm
Primer 2-1
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-hidroksi-3-metil- butil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0237]
1 2
p-toluensulfonil hlorid
piridin
Faza 1Faza 2
-
Faza 1. Izrada 3-hidroksi-3-metilbutil 4-metilbenzensulfonata
U rastvor 3-metilbutan-1,3-diola (1.00 g, 9.60 mmol) u piridinu (10 mL) se na 0 °C doda ptoluensulfonil hlorid (2.014 g, 10.56 mmol). Reaktivna smeša se meša 16 h da se polako zagreje na sobnu temperaturu uklanjanjem kupatila led-voda. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži etil acetat (100 mL). Organski sloj se ispere sa 1 N HCl (3 x 50 mL). Organski sloj se nakon toga ispere sa zasićenim rastvorom NaHCO3(50 mL), slanim rastvorom (50 mL), suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (30% → 50% etil acetat u heksanima; 220 g kolona) da se dobije 3-hidroksi-3-metilbutil 4-metilbenzensulfonat (2.03 g, 7.86 mmol, 82% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.85 - 7.78 (m, 2H), 7.37 (dd, J=8.5, 0.8 Hz, 2H), 4.23 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.47 (s, 3H), 1.88 (t, J=6.9 Hz, 2H), 1.24 (s, 6H); LC/MS: Produkt nije jonizovao, tR= 1.78 min (postupak 2-1).
1
Faza 2. Izrada 4-bromo-2-metilbutan-2-ol
U rastvor 3-hidroksi-3-metilbutil 4-metilbenzensulfonata (400 mg, 1.548 mmol) u THF (15 mL) na sobnoj temperaturi se doda litijum bromid (403 mg, 4.65 mmol). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(10 mL) i vodu (10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etrom (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (20% → 40% etil acetat u heksanima; 80 g kolona) da se dobije 4-bromo-2-metilbutan- 2-ol (231 mg, 1.383 mmol, 89% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 3.55 - 3.49 (m, 2H), 2.15 - 2.09 (m, 2H), 1.28 (s, 6H).
Faza 3. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-hidroksi-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U smešu (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (70 mg, 0.107 mmol), 4-bromo-2-metilbutan-2-ola (24.96 mg, 0.149 mmol), tribaznog kalijum fosfata (68.0 mg, 0.320 mmol) i kalijum
1 4
jodida (24.80 mg, 0.149 mmol) u bočici osušenoj u peći se doda acetonitril (0.8 mL). Boca se zatvori i reaktivna smeša se zagreva 2 h na 120 °C. Za to vreme se rastvarač upari. Doda se još acetonitrila (0.8 mL) i reaktivna smeša se zagreva 1 h na 120 °C. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (5 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 30% 9:1 aceton:metanol/70% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-hidroksi-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (56.6 mg, 0.076 mmol, 72% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.42 - 7.31 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 - 5.16 (m, 2H), 5.13 (dd, J=6.2, 1.8 Hz, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.63 - 4.55 (m, 2H), 4.52 - 4.45 (m, 1H), 2.86 - 2.78 (m, 1H), 2.77 - 2.68 (m, 1H), 2.65 - 2.53 (m, 2H), 2.18 - 0.86 (m, 29H), 1.69 (s, 3H), 1.27 (s, 6H), 1.07 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 742.6 [(M+H)<+>, izračunato za C49H73FNO3742.6], tR= 4.86 min (postupak 2-3).
Faza 4. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-hidroksi-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (72 mg, 0.097 mmol) u 1,4-dioksanu (1.4 mL) i EtOH (0.7 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.243 mL, 0.485 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Postupak 2-1). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-hidroksi-3-metilbutil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (55.4 mg, 74% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.27 - 5.21 (m, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.61 (dt, J=10.8, 9.0 Hz, 1H), 4.51 (dt, J=10.8, 9.2 Hz, 1H), 3.46 -3.38 (m, 1H), 3.38 - 3.30 (m, 1H), 2.91 - 2.83 (m, 1H), 2.61 (d, J=17.1 Hz, 1H), 2.32 - 1.09 (m, 29H), 1.75 (s, 3H), 1.36 (s, 3H), 1.33 (s, 3H), 1.13 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99
1
(s, 3H), 0.94 (s, 3H); LC/MS m/e 652.5 [(M+H)<+>, izračunato za C42H67FNO3652.5], tR= 4.40 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.97 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.16 min.
Primer 2-2
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroksi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-okta- dekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0238]
Faza 1
Faza 2
Faza 1. Izrada 2-hidroksi-2-metilpropil 4-metilbenzensulfonata
1
U rastvor 2-metilpropan-1,2-diola (415 mg, 4.60 mmol) u piridinu (5 mL) se na 0 °C doda ptoluensulfonil hlorid (966 mg, 5.07 mmol). Reaktivna smeša se meša 16 h da se omogući polako zagrevanje na sobnu temperaturu uklanjanjem kupatil led-voda. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži etil acetat (50 mL). Organski sloj se ispere sa 1 N HCl (3 x 25 mL). Organski sloj se nakon toga ispere sa zasićenim rastvorom NaHCO3(25 mL), slanim rastvorom (25 mL), suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (30% → 50% etil acetat u heksanima; 120 g kolona) da se dobije 2-hidroksi-2-metilpropil 4-metilbenzensulfonat (1.01 g, 4.13 mmol, 90% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.86 - 7.78 (m, 2H), 7.38 (d, J=8.0 Hz, 2H), 3.86 (s, 2H), 2.48 (s, 3H), 1.24 (s, 6H); LC/MS: Produkt nije jonizovao, tR= 1.70 min (postupak 2-1).
Faza 2. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroksi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U rastvor 2-hidroksi-2-metilpropil 4-metilbenzensulfonata (22.35 mg, 0.091 mmol) u acetonitrilu (0.7 mL) se dodaju (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (50 mg, 0.076 mmol), tribazni kalijum fosfat (32.4 mg, 0.152 mmol, 2 eq) i kalijum jodid (63.27 mg, 0.381 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 6 h na 100 °C. Nakon toga se dodaju još 2-hidroksi-2-metilpropil 4-
1
metilbenzensulfonat (56 mg, 0.229 mmol, 3 eq) i tribazni kalijum fosfat (16 mg, 0.076 mmol, 1 eq) i reaktivna smeša se zagreva 22 h na 120 °C. Nakon toga se dodaju nove količine 2-hidroksi-2-metilpropil 4-metilbenzensulfonata (37 mg, 0.153 mmol, 2 eq), tribaznog kalijum fosfata (32 mg, 0.152 mmol, 2 eq) i kalijum jodida (28 mg, 0.168 mmol, 2.2 eq) i reaktivna smeša se zagreva na 120 °C još 18 h. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se koristi direktno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja: LC/MS m/e 728.6 [(M+H)<+>, izračunato za C48H71FNO3728.5], tR= 4.72 min (postupak 2-2).
Faza 3. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroksi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (55 mg, 0.076 mmol) u 1,4-dioksanu (0.5 mL) i EtOH (0.25 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (0.189 mL, 0.378 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (Postupak 2-1). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hidroksi-2-metilpropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (2.7 mg, 5% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.51 (d, J=12.7 Hz, 1H), 3.06 (d, J=12.4 Hz, 1H), 3.03 - 2.95 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.9 Hz, 1H), 2.32 - 1.07 (m, 27H), 1.75 (s, 3H), 1.43 (s, 3H), 1.41 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 738.6 [(M+H)<+>, izračunato za C41H65FNO3738.5], tR= 4.29 min (postupak 2-2). HPLC (postupak 2-1): tR= 18.88 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.24 min.
Primer 2-3
1
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((4-hidroksi-4-metil- pentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0239]
Faza 1. Izrada 5,5-dimetiltetrahidrofuran-2-ola
DIBAL (1.314 mL, 1.314 mmol) se doda u rastvor 5,5-dimetildihidrofuran-2(3H)-ona (100 mg, 0.876 mmol) u THF (10 mL) u atmosferi azota na -78 °C. Reaktivna smeša se meša 3 h na -78 °C. U reaktivnu smešu se doda rastvor Rochelle-ove soli i meša 30 min na rt.
Reaktivna smeša se podeli između EtOAc i vode. Organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši preko magnezijum sulfata i koncentruje pod vakuumom da se dobije sirovi produkt (35 mg, 0.301 mmol, 34% prinos).<1>H-NMR sirovog produkta pokazuje da postoji ravnoteža
1
između 4-hidroksi-4-metilpentanala i 5,5-dimetiltetrahidrofuran-2-ola sa tim što je 5,5-dimetiltetrahidrofuran-2-ol (35 mg, 0.301 mmol, 34% prinos) predominantni oblik.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.51 (d, J=4.8 Hz, 1H), 2.90 (br. s., 1H), 2.03 - 1.94 (m, 2H), 1.82 - 1.64 (m, 2H), 1.43 (s, 3H), 1.22 (s, 3H).
Faza 2. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((4-hidroksi-4-metilpentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (25 mg, 0.038 mmol) i 5,5-dimetiltetrahidrofuran-2-ola (13.28 mg, 0.114 mmol) u DCE (0.6 mL) se doda titanijum(IV) izopropoksid (0.018 mL, 0.061 mmol). Smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (16.15 mg, 0.076 mmol) i smeša se meša 16 h na rt. Reaktivna smeša se podeli između DCM i sat. aq. rastvora natrijum bikarbonata. Organski sloj se ispere sa slanim rastvorom, suši preko magnezijum sulfata i koncentruju pod vakuumom da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((4-hidroksi-4-metilpentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3- enekarboksilat (28.8 mg, 0.038 mmol, 100 % prinos). Sirovi produkt se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja. LC/MS m/e 756.7 [(M+H)<+>, izračunato za C50H74FNO3756.6] tR= 2.66 min (postupak 2-1).
1
Faza 3. Natrijum hidroksid (0.048 mL, 0.190 mmol, 4 N aq) se doda u rastvor sirovog (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((4-hidroksi-4-metilpentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (28.7 mg, .038 mmol) u dioksanu (1 mL) i etanolu (0.500 mL). Reaktivna smeša se meša 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu i sirovi materijal se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-2, gradijent: 60-100% B u toku 10 minuta, nakon toga 15- minuta zadržavanje na 100%) da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((4-hidroksi-4-metilpentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina (2.8 mg, 4.08 mmol, 11% prinos); LC/MS m/e 666.6 [(M+H)<+>, izračunato za C43H68FNO3666.5] tR= 2.40 min (postupak 2-1); HPLC (postupak 2-3): tR= 2.76 min; HPLC (postupak 2-4): tR= 2.11 min.
Primer 2-4
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-etil-3-hidroksipentil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro- 1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0240]
1 1
2,6-lutidin
Faza 1 dioksan/voda
Faza 2
Faza 1. Izrada 3-etilheks-5-en-3-ola
U rastvor alilmagnezijum bromida (13.93 mL, 13.93 mmol) u THF (10 mL) se na 0 °C doda pentan-3-on (400 mg, 4.64 mmol). Kupatilo za hlađenje se ukloni i reaktivna smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Reaktivna smeša se ohladi u ledenom kupatilu i neutrališe dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NH4Cl (20 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (4 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (25 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 3-etilheks-5-en-3-ol (595 mg, 4.64 mmol, 100% prinos) kao bezbojno ulje. Produkt se koristi direktno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.86 (ddt, J=16.7, 10.6, 7.5 Hz, 1H), 5.21 - 5.07 (m, 2H), 2.23 (dt, J=7.4, 1.2 Hz, 2H), 1.57 - 1.43 (m, 4H), 0.90 (t, J=7.5 Hz, 6H)
1 2
Faza 2. Izrada 3-etil-3-hidroksipentanala
U rastvor 3-etilheks-5-en-3-ola (595 mg, 4.64 mmol) u dioksanu (30 mL) i vodi (7.50 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (1.081 mL, 9.28 mmol), osmijum tetraoksid (2.5% u t-BuOH) (1.165 mL, 0.093 mmol) i natrijum perjodat (3970 mg, 18.56 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu jer se nakon 16 h mešanja led u vodi istopio. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (20 mL) i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(30 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (20 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (0% → 8% metanol u CH2Cl2; 40 g kolona) da se dobije 3-etil-3-hidroksipentanal (217 mg, 1.667 mmol, 36% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.85 (t, J=2.4 Hz, 1H), 3.66 (s, 2H), 1.65 - 1.41 (m, 4H), 0.86 (t, J=7.5 Hz, 6H).
Faza 3. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-etil-3-hidroksipentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
Titanijum(IV) izopropoksid (0.036 mL, 0.122 mmol) se doda u rastvor (S)-benzil
4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-
1
(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (50 mg, 0.076 mmol) i 3-etil-3-hidroksipentanala (15.88 mg, 0.122 mmol) u DCE (0.6 mL). Reaktivna smeša se meša 1 h na rt. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (32.3 mg, 0.152 mmol) i reaktivna smeša se meša 3 dana. Reaktivna smeša se podeli između sat. aq. natrijum bikarbonata i CH2Cl2. Vodeni sloj se ekstrahuje sa CH2Cl2(3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše preko magnezijum sulfata i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (0% 9:1 aceton/metanol/100% heksani → 40% 9:1 aceton/metanol/60% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-etil-3- hidroksipentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (14 mg, 0.018 mmol, 24% prinos) kao bezbojno ulje: LC/MS (ESI) m/e 770.6 [(M+H)<+>, izračunato za C51H76FNO3770.6] tR= 2.61 min (postupak 2-1).
Faza 4. Natrijum hidroksid (0.023 mL, 0.091 mmol) se doda u rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-etil-3-hidroksipentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (14 mg, 0.018 mmol) u dioksanu (1 mL) i etanolu (0.500 mL). Reaktivna smeša se meša 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu. Sirovi materijal se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-2, gradijent 60-100% B u toku 15 minuta, zatim 6-minuta zadržavanje na 100% B) da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-etil-3- hidroksipentil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina (5.9 mg, 8.5 mmol, 47% prinos);<1>H NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 5.25 (br. s., 1H), 5.12 (d, J=5.1 Hz, 1H), 4.67 (br. s., 1H), 4.55 (br. s., 1H), 4.48 (s, 1H), 4.38 (s, 1H), 2.61 - 2.53 (m, 1H), 2.48 - 2.38 (m, 3H), 2.23 - 2.08 (m, 1H), 2.07 - 0.93 (m, 32H), 1.65 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.82 (s, 3H), 0.80-0.77 (m, 6H); LC/MS (ESI) m/e 680.5 [(M+H)<+>, izračunato za C44H70FNO3680.5] tR= 2.38 min (postupak 2-1); HPLC (postupak 2-3): tR= 2.29 min; HPLC
1 4
(postupak 2-4): tR= 2.40 min.
Primer 2-5
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropil-3-hidroksipropil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0241]
2,6-lutidin
Faza 1 dioksan/voda
Faza 2
-
Faza 1. Izrada 1,1-diciklopropilbut-3-en-1-ola
1
U rastvor alilmagnezijum bromida (10.89 mL, 10.89 mmol) u THF (10 mL) se na 0 °C doda diciklopropil-metanon (400 mg, 3.63 mmol). Kupatilo za hlađenje se ukloni i reaktivna smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Reakcija se ohladi u ledenom kupatilu i neutrališe dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NH4Cl (20 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (4 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (25 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 1,1-diciklopropilbut-3-en-1-ol (553 mg, 3.63 mmol, 100 % prinos) kao bezbojno ulje. Produkt se koristi direktno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 6.16 - 5.98 (m, 1H), 5.21 - 5.08 (m, 2H), 2.37 (dt, J=7.5, 1.1 Hz, 2H), 0.94 - 0.79 (m, 2H), 0.49 - 0.25 (m, 8H).
Faza 2. Izrada 3,3-diciklopropil-3-hidroksipropanala
U rastvor 1,1-diciklopropilbut-3-en-1-ola (553 mg, 3.63 mmol) u dioksanu (12 mL) i vodi (3 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (0.846 mL, 7.26 mmol), osmijum tetraoksid (4% u vodi) (0.444 mL, 0.073 mmol) i natrijum perjodat (3,106 mg, 14.52 mmol). Reaktivna smeša se ostavi 16 h uz mešanje da se zagreje na sobnu temperaturu jer se led u vodi istopio. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (20 mL) i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(30 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (20 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (0% → 8% metanol u CH2Cl2; 40 g kolona) da se dobije 3,3-diciklopropil-3-hidroksipropanal (152 mg, 0.986 mmol, 27% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.96 (t, J=2.8 Hz, 1H), 2.63 (d, J=2.8 Hz, 2H), 0.94 (tt, J=8.2, 5.8 Hz, 2H), 0.51 - 0.38 (m, 8H).
Faza 3. (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropil-3-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-
1
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (40 mg, 0.061 mmol) i 3,3-diciklopropil-3-hidroksipropanala (14.10 mg, 0.091 mmol) u MeOH (0.5 mL) i sirćetnoj kiselini (0.1 mL) se doda bor-2-pikolin kompleks (9.78 mg, 0.091 mmol). Reaktivna smeša se meša 16 h na rt. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), s suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (0% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 40% 9:1 aceton:metanol/60% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropil-3-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (11 mg, 0.014 mmol, 23% prinos) kao bezbojno ulje: LC/MS (ESI) m/e 794.6 [(M+H)<+>, izračunato za C53H76FNO3794.6] tR= 2.66 min (postupak 2-1).
Faza 4. Natrijum hidroksid (0.017 mL, 0.069 mmol) se doda u rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropil-3-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
1
il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (11 mg, 0.014 mmol) u dioksanu (1 mL) i etanolu (0.500 mL). Reaktivna smeša se meša 2 h na 70 °C. Reaktivna smeša se ohladi na sobnu temperaturu. Sirovi materijal se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-2, 70-100% B u toku 10 minuta, nakon toga 15-minuta zadržavanje na 100% B) da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropil- 3-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina (1.0 mg, 1.37 mmol, 10% prinos);<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.56 - 4.47 (m, 1H), 3.53 - 3.41 (m, 2H), 2.97 - 2.87 (m, 1H), 2.62 (d, J=16.7 Hz, 1H), 2.31 - 2.32 (m, 28H), 1.14 - 1.10 (m, 1H), 1.75 (s, 3H), 1.11 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H), 0.87 - 0.76 (m, 2H), 0.65 - 0.35 (m, 8H); LC/MS (ESI) m/e 704.6 [(M+H)<+>, izračunato za C46H70FNO3704.5] tR= 2.44 min (postupak 2-1); HPLC (postupak 2-3): tR= 2.43 min; HPLC (postupak 2-4): tR= 2.46 min.
Primer 2-6
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropilalil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0242]
1
Faza 1. (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropilalil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat
Titanijum(IV) izopropoksid (0.036 mL, 0.122 mmol) se doda u rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (50 mg, 0.076 mmol) i 3,3-diciklopropil-3-hidroksipropanala (18.81 mg, 0.122 mmol) u DCE (0.6 mL). Reaktivna smeša se meša 1 h na rt. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (32.3 mg, 0.152 mmol) i reaktivna smeša se meša 3 dana. Reaktivna smeša se podeli između sat. aq. natrijum bikarbonata (10 mL) i CH2Cl2(10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa CH2Cl2(3 x 10 mL).
1
Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše preko magnezijum sulfata i koncentruju. Sirovi produkt, (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropilalil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (32 mg, 0.041 mmol, 54% prinos) se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja. LC/MS (ESI) m/e 776.6 [(M+H)<+>, izračunato za C53H74FNO2776.6], tR= 2.67 min (postupak 2-1).
Faza 2. Natrijum hidroksid (0.052 mL, 0.206 mmol) se doda u rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropilalil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen- 9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (32 mg, 0.041 mmol) u dioksanu (1 mL) i etanolu (0.500 mL). Reaktivna smeša se meša 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu. Sirovi materijal se prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-2, 90-100% B u toku 20 minuta, nakon toga 25-minuta zadržavanje na 100% B) da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3,3-diciklopropilalil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina (1.0 mg, 1.34 mmol, 3.3% prinos);<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 2H), 5.27 - 5.22 (m, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.56 - 4.48 (m, 1H), 4.01 (t, J=6.9 Hz, 2H), 2.89 (br. s., 1H), 2.62 (d, J=16.7 Hz, 1H), 2.30 - 0.85 (m, 31H), 1.75 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.80 (d, J=8.4 Hz, 2H), 0.66 - 0.60 (m, 2H), 0.47 - 0.36 (m, 2H); LC/MS (ESI) m/e 686.6 [(M+H)<+>, izračunato za C46H68FNO2686.5] tR= 2.44 min (postupak 2-1); HPLC (postupak 2-3): tR= 2.62 min; HPLC (postupak 2-4): tR= 1.96 min.
Primer 2-7
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(izopentilamino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro- 1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
2
Faza 1. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(izopentilamino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (35 mg, 0.053 mmol) i 3-metilbutanala (7.35
2 1
mg, 0.085 mmol) u DCE (0.6 mL) se doda titanijum(IV) izopropoksid (0.025 mL, 0.085 mmol). Smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (22.62 mg, 0.107 mmol) i smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL).
Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 30% 9:1 aceton:metanol/70% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(izopentilamino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks- 3-enekarboksilat (20 mg, 0.028 mmol, 52% prinos) kao bezbojna pena: LC/MS m/e 726.6 [(M+H)<+>, izračunato za C49H73FNO2726.6], tR= 5.10 min (postupak 2-3).
Faza 2. rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(izo- pentilamino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (20 mg, 0.028 mmol) u 1,4-dioksanu (0.5 mL) i EtOH (0.25 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.069 mL, 0.138 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-3) da se dobije (S)-1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-(izopentilamino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks- 3-enekarboksilna kiselina · TFA (9.9 mg, 48% prinos):<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.28 - 5.22 (m, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.61 (dt, J=10.9, 8.8 Hz, 1H), 4.52 (dt, J=11.0, 8.8 Hz, 1H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.92 - 2.84 (m, 1H), 2.62 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.30-1.10 (m, 30H), 1.75 (s, 3H), 1.19 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 6H); LC/MS m/e 636.3 [(M+H)<+>, izračunato za C42H67FNO2636.5], tR= 4.49 min
(postupak 2-2); HPLC (postupak 2-3): tR= 2.54 min; HPLC (postupak 2-4): tR= 2.59 min.
Primer 2-8
Izrada (1S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-
2 2
dioksidotiomorfolino)-2-hidroksi- propil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0244]
Faza 1. Izrada 4-(3-Hlor-2-hidroksipropil)tiomorfolin 1,1-dioksida
U rastvor tiomorfolin 1,1-dioksida (2.40 g, 17.75 mmol) u DCE (4.4 mL) se polako špricem dodaje 2-(hlormetil)oksiran (1.392 mL, 17.75 mmol). Reaktivna smeša se meša 48 h na 50 °C. Bela čvrsta supstanca (4,4’-(2-hidroksipropan-1,3-diil)bis(tiomorfolin 1,1-dioksid) koja se formira se ukloni filtriranjem. Filtrat se koncentruje i prečisti hromatografijom na koloni silika gela (3% → 5% metanol u CH2Cl2; 120 g kolona) da se dobije 4-(3-hlor-2-hidroksipropil)tiomorfolin 1,1-dioksid (2.57 g, 11.29 mmol, 64% prinos) kao bezbojno ulje koje očvrsne stajanjem:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 3.95 (dq, J=8.9, 4.6 Hz,
2
1H), 3.69 - 3.55 (m, 2H), 3.26 - 3.15 (m, 2H), 3.14 - 3.03 (m, 6H), 2.75 (dd, J=13.1, 4.3 Hz, 1H), 2.65 (dd, J=13.1, 8.5 Hz, 1H); LC/MS m/e 228.1 [(M+H)<+>, izračunato za C7H15ClNO3S 228.0], tR= 0.26 min, (pik jonizacije, nema UV) (postupak 2-1).
Faza 2. Izrada (1S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
(S)-Benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino- 5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (120 mg, 0.183 mmol), 4-(3-hlor- 2-hidroksipropil)tiomorfolin 1,1-dioksid (146 mg, 0.640 mmol), tribazni kalijum fosfat (175 mg, 0.823 mmol) i kalijum jodid (137 mg, 0.823 mmol) se kombinuju u bočici osušenoj u peći. Doda se acetonitril (2 mL), bočica se zatvori i reaktivna smeša se zagreva 20 h na 120 °C. Doda se nova količina 4-(3-hlor-2-hidroksipropil)tiomorfolin 1,1-dioksida (83 mg, 0.366 mmol, 2 eq), tribaznog kalijum fosfata (78 mg, 0.366 mmol, 2 eq) i kalijum jodida (60.7 mg, 0.366 mmol, 2 eq) i reaktivna smeša se zagreva još 16 h. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 30% 9:1 aceton:metanol/70% heksani; 40 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (1S)-benzil4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (71.4 mg, 0.084 mmol, 46% prinos) kao svetlo plava pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.39 - 7.31 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 - 5.15 (m, 2H), 5.15 - 5.10 (m, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.61 (d, J=1.4 Hz, 1H), 4.60 - 4.54 (m, 1H), 4.52 - 4.45 (m, 1H), 3.80 - 3.67 (m, 1H), 3.23 - 3.03 (m, 8H), 2.73 - 2.53 (m, 5H), 2.37 (dd, J=11.7, 7.2 Hz, 1H, diastereoizomer A), 2.29 (dd, J=11.7, 8.1 Hz, 1H, diastereoizomer B), 2.19 - 0.83 (m, 47H) (Smeša diastereomera); LC/MS m/e 847.6 [(M+H)<+>, izračunato za C51H76FN2O5S 847.5], tR= 4.58 min (postupak 2-2).
Faza 3. rastvor (1S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-
2 4
dioksidotiomorfolino)-2-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (30 mg, 0.035 mmol) u 1,4-dioksanu (0.5 mL) i EtOH (0.2 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (0.089 mL, 0.177 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (1S)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((3-(1,1-dioksidotiomorfolino)-2-hidroksipropil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (13.6 mg, 43% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.24 (d, J=4.9 Hz, 1H), 4.85 (d, J=5.3 Hz, 1H), 4.75 (br. s., 1H), 4.73 - 4.67 (m, 1H), 4.64 - 4.56 (m, 1H), 4.54 - 4.47 (m, 1H), 3.98 - 3.89 (m, 3H), 3.65 - 3.51 (m, 6H), 3.49 - 3.43 (m, 2H), 3.23 (dd, J=12.4, 8.5 Hz, 1H, diastereoizomer A), 3.07 (t, J=11.4 Hz, 1H, diastereoizomer B), 2.94 - 2.79 (m, 1H), 2.61 (d, J=17.1 Hz, 1H), 2.32 - 1.09 (m, 27H), 1.76 (s, 3H, diastereoizomer er A), 1.76 (s, 3H, diastereoizomer B), 1.15 (s, 3H), 1.11 (s, 3H, diastereoizomer A), 1.10 (s, 3H, diastereoizomer B), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H) (Smeša diastereoizomera; LC/MS m/e 757.6 [(M+H)<+>, izračunato za C44H70FN2O5S 757.5], tR= 4.24 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.72 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.02 min.
Primer 2-9
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksiciklobutil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0245]
2
2,6-lutidin
Faza 1 dioksan/voda
Faza 2
Faza 1. Izrada 1-alilciklobutanola
U rastvor alilmagnezijum bromida (12.8 mL, 12.8 mmol) u THF (10 mL) se na 0 °C doda rastvor ciklobutanona (300 mg, 4.28 mmol) u THF (5 mL). Kupatilo za hlađenje se ukloni i reaktivna smeša se meša 16 h na sobnoj temperaturi. Reakcija se ohladi u ledenom kupatilu i neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl (20 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (4 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (25 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 1-alilciklobutanol (377 mg, 3.36 mmol, 79% prinos) kao bezbojno ulje. Produkt se koristi direktno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.90 (ddt, J=16.4, 10.7, 7.3 Hz, 1H), 5.27 - 5.16 (m, 2H), 2.41 (d, J=7.3 Hz, 2H), 2.13 -
2
2.05 (m, 4H), 1.93 (s, 1H), 1.83 - 1.71 (m, 1H), 1.65 - 1.51 (m, 1H).
Faza 2. Izrada 2-(1-hidroksiciklobutil)acetaldehid
U rastvor 1-alilciklobutanola (350 mg, 3.12 mmol) u dioksanu (30 mL) i vodi (7.50 mL) se na 0 °C dodaju 2,6- lutidin (0.727 mL, 6.24 mmol), osmijum tetraoksid (4% u vodi) (0.490 mL, 0.062 mmol) i natrijum perjodat (2670 mg, 12.48 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na rt i meša 16 h. Reaktivna smeša se podeli između EtOAc (25 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (25 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše preko magnezijum sulfata i koncentruju pod vakuumom. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (0% → 8% metanol u CH2Cl2; 40g Kolona) da se dobije 2-(1-hidroksiciklobutil)acetaldehid (187 mg, 1.638 mmol, 53% prinos) kao ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.86 (t, J=1.8 Hz, 1H), 2.32 - 1.95 (m, 4H), 1.92 - 1.73 (m, 2H), 1.69 - 1.43 (m, 2H).
Faza 3. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksiciklobutil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-
2
5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (50 mg, 0.076 mmol) i 2-(1-hidroksiciklobutil)acetaldehida (13.92 mg, 0.122 mmol) u dihidroetanu (0.6 mL) u bočici se doda titanijum(IV) izopropoksid (0.036 mL, 0.122 mmol). Reaktivna smeša se meša 1 h na rt. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (32.3 mg, 0.152 mmol) i reaktivna smeša se meša 4 dana. Reaktivna smeša se podeli između zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (10 mL) i CH2Cl2(10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa CH2Cl2(3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše preko magnezijum sulfata i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (100% heksani → 40% aceton koja sadrži 10% metanol/60% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksiciklobutil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (51 mg, 0.068 mmol, 89% prinos) kao ulje: LC/MS (ESI) m/e 754.6 [(M+H)<+>, izračunato za C50H72FNO3754.6], tR= 2.74 min (postupak 2-1).
Faza 4. rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksiciklobutil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (51 mg, 0.068 mmol) u dioksanu (1 mL) i etanolu (0.500 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (0.085 mL, 0.338 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksiciklobutil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (12.9 mg, 0.016 mmol, 24% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.29 -5.21 (m, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 1H), 3.44 - 3.36 (m, 1H), 3.28 (t, J=9.9 Hz, 1H), 2.94 - 2.84 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.8 Hz, 1H), 2.31 - 0.83 (m, 35H), 1.75 (s, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.94 (s, 3H); LC/MS
2
(ESI) m/e 664.6 [(M+H)<+>, izračunato za C43H66FNO3664.5], tR= 2.43 min (postupak 2-1). HPLC (postupak 2-1): tR= 19.00 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.57 min.
Primer 2-10
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroksioksetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0246]
alilmagnezijum bromidr
or- -p o n omp eks zatm Me2S
Faza 1 CH2Cl2/MeOH
Faza 2Faza 3
Faza 1. Izrada 3-aliloksetan-3-ola
U rastvor alilmagnezijum bromida (7.29 mL, 7.29 mmol) u THF (40 mL) se na -78 °C doda rastvor oksetan-3-ona (500 mg, 6.94 mmol) u THF (10 mL). Reaktivna smeša se meša 30 min na -78 °C. Reakcija se neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl (40 mL). Smeša se
2
prenese u levak za razdvajanje i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa etrom (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 3-aliloksetan-3-ol (735 mg, 6.44 mmol, 93% prinos) kao bezbojno ulje. Produkt se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.97 - 5.78 (m, 1H), 5.28 (t, J=1.0 Hz, 1H), 5.27 - 5.22 (m, 1H), 4.64 (d, J=7.3 Hz, 2H), 4.55 - 4.50 (m, 2H), 2.65 (d, J=7.0 Hz, 2H);<13>C NMR (101MHz, HLOROFORM-d) δ 131.8, 120.1, 83.2, 73.3, 42.4.
Faza 2. Izrada 2-(3-hidroksioksetan-3-il)acetaldehida
3-Aliloksetan-3-ol (508 mg, 4.45 mmol) se rastvori u CH2Cl2(35 mL) i MeOH (3.5 mL) u boci okruglog dna zapremine 100 mL. Doda se N-metilmorfolin-N-oksid (NMO) (626 mg, 5.34 mmol) i smeša se ohladi na -78 °C [Schwartz, C., Raible, J., Mott, K., Dussault, P. H. Org. Lett.2006, 8, 3199 - 3201]. Kroz reaktivnu smešu se u mehurićima propusti ozon sve dok se rastvor ne zasiti sa ozonom (prelazi u plavu boju) nakon nekoliko minuta (ukupno vreme 10 min). Nakon toga se kroz reaktivnu smešu propušta azot u mehurićima sve dok plava boja ne nestane. Nakon toga se doda dimetil sulfid (3.29 mL, 44.5 mmol) i reaktivna smeša se meša 14 h na 0 °C. Smeša se koncentruje pod vakuumom. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50% etil acetat sa 1% metanol/50% heksani → 100% etil acetat sa 1% metanola; 80 g kolona) da se dobije 2-(3-hidroksioksetan-3-il)acetaldehid (287 mg, 2.472 mmol, 56% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.85 (s, 1H), 4.71 (d, J=7.5 Hz, 2H), 4.52 - 4.47 (m, 2H), 3.14 (d, J=0.5 Hz, 2H);
<13>C NMR (100MHz, HLOROFORM-d) δ 201.1, 83.0, 71.4, 50.7.
Faza 3. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroksioksetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
21
Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (500 mg, 0.762 mmol), bor-2-pikolin kompleksa (163 mg, 1.524 mmol) i 2-(3-hidroksioksetan-3-il)acetaldehida (177 mg, 1.524 mmol) u MeOH (8 mL) i sirćetnoj kiselini (1.6 mL) meša u bočici 16 h na rt. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (50 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 40% 9:1 aceton:metanol/60% heksani; 80 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroksioksetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (320 mg, 0.423 mmol, 56% prinos) kao bezbojno ulje: LC/MS (ESI) m/e 756.6 [(M+H)<+>, izračunato za C49H70FNO4756.5], tR= 2.59 min (postupak 2-1).
Faza 4. rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroksioksetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (320 mg, 0.423 mmol) u dioksanu (4 mL) i etanolu (2 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (0.529 mL, 2.116 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2.5 h na 70 °C. LC/MS pokazuje formiranje željenog produkta. Smeša se filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-5). Organski rastvarač se ukloni pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se zamrzne i prenese u liofilizator da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroksioksetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (220 mg, 0.282 mmol, 67% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.81 - 4.77 (m, 2H), 4.75 - 4.68 (m, 2H), 4.67 - 4.57
(m, 2H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.52 - 3.42 (m, 1H), 3.33 - 3.23 (m, 1H), 2.92 - 2.81 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.8 Hz, 1H), 2.57 - 2.42 (m, 2H), 2.31 - 1.32 (m, 25H), 1.14 - 1.12 (m, 2H), 1.75 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 666.5 [(M+H)<+>, izračunato za C42H67FNO4666.5], tR= 2.44 min (postupak 2-1); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.63 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 19.94 min.
Primer 2-11
Izrada (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroksioksetan-3- il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0247]
Faza 1. Izrada (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)3a-((2-(3-hidroksioksetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3- enekarboksilata
(R)-Benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (100 mg, 0.152 mmol) i 2-(3-hidroksioksetan-3-il)acetaldehid (31.9 mg, 0.274 mmol) se suspenduju u MeOH (1.2 mL). Doda se bor-2-pikolin kompleks (29.4 mg, 0.274 mmol) a nakon toga sirćetna kiselina (0.24 mL) i smeša se meša 16 h na sobnoj temperaturi. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL) i zasićeni vodeni rastvor natrijum karbonata (1 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (4 x 5 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (20% etil acetat sa 5% metanol/80% heksani → 90% etil acetat sa 5% Metanol l/10% heksani; 24 g kolona) da se dobije (R)-benzil 1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroksioksetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (110 mg, 0.145 mmol, 95% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.42 - 7.31 (m, 5H), 5.34 (br. s., 1H), 5.24 - 5.16 (m, 2H), 5.12 (d, J=5.7 Hz, 1H), 4.73 (br. s., 1H), 4.69 (t, J=5.3 Hz, 2H), 4.64 - 4.55 (m, 2H), 4.53 -4.46 (m, 2H), 4.43 (d, J=6.0 Hz, 1H), 2.90 - 2.83 (m, 1H), 2.72 - 2.48 (m, 3H), 2.26 - 1.87 (m, 8H), 1.82 - 0.91 (m, 21H), 1.69 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.94 (s, 3H), 0.89 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 756.6 [(M+H)<+>, izračunato za C49H71FNO4756.6], tR= 4.59 min
21
(postupak 2-3).
Faza 2. rastvor (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroksioksetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (105 mg, 0.139 mmol) u 1,4-dioksanu (1.5 mL) i MeOH (0.5 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.347 mL, 0.694 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 4 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu i delimično neutrališe dodavanjem 6 N HCl (70 mL). Smeša se nakon toga filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-5). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (R)-1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(3-hidroksioksetan-3-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (38.0 mg, 0.048 mmol, 35% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.24 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.80 (d, J=7.3 Hz, 2H), 4.74 - 4.69 (m, 2H), 4.66 - 4.57 (m, 2H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.47 (ddd, J=12.7, 6.1, 3.2 Hz, 1H), 3.28 (ddd, J=12.5, 9.2, 2.9 Hz, 1H), 2.90 - 2.83 (m, 1H), 2.61 (d, J=17.2 Hz, 1H), 2.56 - 2.44 (m, 2H), 2.37 - 2.28 (m, 1H), 2.22 - 1.32 (m, 24H), 1.75 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.14 - 1.12 (m, 2H), 1.09 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 666.5 [(M+H)<+>, izračunato za C42H65FNO4666.5], tR= 4.31 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-5): tR= 10.94 min; HPLC (postupak 2-6): tR= 10.82 min.
Primer 2-12
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksitetrahidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0248]
2,6-lutidin
Primer 1 dioksan/voda
Faza 2
Faza 1. Izrada 4-aliltetrahidro-2H-piran-4-ola
U rastvor alilmagnezijum bromida (20.98 mL, 20.98 mmol) u THF (40 mL) se na 0 °C pomoću kanile doda rastvor dihidro-2H-piran-4(3H)-ona (700 mg, 6.99 mmol) u THF (10 mL). Kupatilo za hlađenje se ukloni i reaktivna smeša se meša 2 h na sobnoj temperaturi. Reakcija se ohladi u ledenom kupatilu i obogati dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl (40 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (20% → 60% etil acetat u heksanima; 80 g kolona) da se dobije 4-aliltetrahidro-2H-piran-4-ol (818 mg, 5.75 mmol, 82% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM- d) δ 5.90 (ddt, J=17.2, 9.9, 7.5 Hz, 1H), 5.28 - 5.14 (m, 2H), 3.85
21
- 3.74 (m, 4H), 2.28 (d, J=7.5 Hz, 2H), 1.80 - 1.68 (m, 2H), 1.51 (dq, J=14.0, 2.5 Hz, 3H).
Faza 2. Izrada 2-(4-hidroksitetrahidro-2H-piran-4-il)acetaldehida
U rastvor 4-aliltetrahidro-2H-piran-4-ola (150 mg, 1.055 mmol) u dioksanu (12 mL) i vodi (3 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (0.246 mL, 2.110 mmol), osmijum tetraoksid (0.265 mL, 0.021 mmol) i natrijum perjodat (903 mg, 4.22 mmol). Reaktivna smeša se ostavi uz mešanje 14 h da se zagreje na sobnu temperaturu jer se led u vodi istopi. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (10 mL) i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (20 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (3% → 6% metanol u CH2Cl2; 40 g kolona) da se dobije 2-(4- hidroksitetrahidro-2H-piran-4-il)acetaldehid (67 mg, 0.465 mmol, 44% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.89 (t, J=1.3 Hz, 1H), 3.90 -3.80 (m, 2H), 3.78 - 3.69 (m, 2H), 3.50 (s, 1H), 2.70 (d, J=1.3 Hz, 2H), 1.75 - 1.66 (m, 4H).
Faza 3. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksitetrahidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-
21
5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (40 mg, 0.061 mmol) i 2-(4-hidroksitetrahidro-2H-piran-4-il)acetaldehida (13.19 mg, 0.091 mmol) u DCE (0.5 mL) se doda titanijum(IV) izopropoksid (0.027 mL, 0.091 mmol). Smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (25.8 mg, 0.122 mmol) i smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL).
Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 40% 9:1 aceton:metanol/60% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksitetrahidro- 2H-piran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (33.2 mg, 0.042 mmol, 69% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.43 - 7.32 (m, 5H), 5.36 - 5.31 (m, 1H), 5.23 - 5.16 (m, 2H), 5.14 (dd, J=6.0, 1.8 Hz, 1H), 4.75 (d, J=1.8 Hz, 1H), 4.64 - 4.57 (m, 2H), 4.53 - 4.45 (m, 1H), 3.94 - 3.82 (m, 2H), 3.80 - 3.70 (m, 2H), 2.86 - 2.69 (m, 2H), 2.67 - 2.51 (m, 2H), 2.19 - 0.86 (m, 33H), 1.70 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 784.6 [(M+H)<+>, izračunato za C51H75FNO4784.6], tR= 4.69 min (postupak 2-2).
Faza 4. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR, 13bR)-3a-((2-(4-hidroksitetrahidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (56 mg, 0.071 mmol) u 1,4-dioksanu (0.7 mL) i EtOH (0.35 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.179 mL, 0.357 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1).
Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksitetrahidro-2H-piran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-
21
il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (37.1 mg, 64% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.28 - 5.21 (m, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.97 - 3.79 (m, 4H), 3.46 -3.31 (m, 2H), 2.92 - 2.83 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.8 Hz, 1H), 2.34 - 1.09 (m, 33H), 1.75 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.96 (s, 3H); LC/MS m/e 694.6 [(M+H)<+>, izračunato za C44H69FNO4694.5], tR= 4.27 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.95 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.14 min.
Primer 2-13
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0249]
21
2,6-lutidin
Faza 1 dioksan/voda
Faza 2
-
Faza 1. Izrada 4-alil-4-hidroksitetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida
U rastvor alilmagnezijum bromida (10.83 mL, 10.83 mmol) u THF (15 mL) se na 0 °C pomoću kanile doda rastvor dihidro-2H-tiopiran-4(3H)-on 1,1-dioksida (1.07 g, 7.22 mmol) u THF (50 mL) (rastvoren zagrevanjem na 70 °C u uljanom kupatilu). Kupatilo za hlađenje se ukloni i reaktivna smeša se meša 30 min na sobnoj temperaturi. Reakcija se ohladi u ledenom kupatilu i neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl (50 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (4 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 4-alil-4-hidroksitetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksid (1.42 g, 7.46 mmol, 103% prinos) kao bezbojna čvrsta supstnaca. Produkt se koristi direktno u sledećoj fazi
21
bez daljeg prečišćavanja:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.85 (ddt, J=17.2, 9.9, 7.6 Hz, 1H), 5.34 - 5.28 (m, 1H), 5.23 (dq, J=17.1, 1.4 Hz, 1H), 3.43 (td, J=13.6, 3.8 Hz, 2H), 2.92 - 2.84 (m, 2H), 2.32 (d, J=7.5 Hz, 2H), 2.23 (td, J=13.8, 3.3 Hz, 2H), 2.05 - 1.97 (m, 2H).
Faza 2. Izrada 2-(4-hidroksi-1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)acetaldehida
U rastvor 4-alil-4-hidroksitetrahidro-2H-tiopiran 1,1-dioksida (1.52 g, 7.99 mmol) u dioksanu (80 mL) i vodi (20 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (1.861 mL, 15.98 mmol), osmijum tetraoksid (4% u vodi) (1.254 mL, 0.160 mmol) i natrijum perjodat (6.84 g, 32.0 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu jer se led u vodi otopi uz 14 h mešanja. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži 1 N rastvor HCl (50 mL).
Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (12 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa 1 N rastvorom HCl (10 mL), zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(10 mL), slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (3% → 10% metanol u CH2Cl2; 80 g kolona) da se dobije 2-(4-hidroksi-1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4- il)acetaldehid (821 mg, 4.27 mmol, 54% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.86 (s, 1H), 3.54 - 3.43 (m, 3H), 2.91 - 2.83 (m, 2H), 2.80 (s, 2H), 2.28 - 2.14 (m, 4H).
Faza 3. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
22
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (632 mg, 0.963 mmol) i 2-(4-hidroksi-1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)acetaldehida (296 mg, 1.542 mmol) u DCE (7.5 mL) se doda titanijum(IV) izopropoksid (0.452 mL, 1.542 mmol). Smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (408 mg, 1.927 mmol) i smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (25 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (4 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (25 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 40% 9:1 aceton:metanol/60% heksani; 80 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-1,1-dioksidotetrahidro-2H -tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (591 mg, 0.710 mmol, 74% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.40 - 7.32 (m, 5H), 5.34 (br. s., 1H), 5.23 - 5.16 (m, 2H), 5.14 (dd, J=6.2, 1.8 Hz, 1H), 4.75 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.61 - 4.55 (m, 1H), 4.53 - 4.46 (m, 1H), 3.58 - 3.46 (m, 2H), 2.91 - 2.81 (m, 3H), 2.78 - 2.70 (m, 1H), 2.62 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.53 (td, J=10.8, 5.6 Hz, 1H), 2.17 - 1.06 (m, 33H), 1.70 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.87 (s, 3H); LC/MS m/e 832.6 [(M+H)<+>, izračunato za C51H75FNO5S 832.5], tR= 4.64 min (postupak 2-2).
Faza 4. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)3a-((2-(4-hidroksi-1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (500 mg, 0.601 mmol) u 1,4-dioksanu (6 mL) i EtOH (3 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (1.502 mL, 3.00 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2.5 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu i doda se 6 N rastvor HCl (0.20 mL, 2 eq) da delimično neutrališe reaktivnu smešu. Smeša se filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-1,1-dioksidotetrahidro-2H-tiopiran-4- il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (435 mg, 84% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.24 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.65 - 4.56 (m, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 1H), 3.59 - 3.33 (m, 4H), 3.10 - 2.97 (m, 2H), 2.88 - 2.78 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.42 - 1.12 (m, 33H), 1.75 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 742.6 [(M+H)<+>, izračunato za C44H69FNO5S 742.5], tR= 4.19 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.71 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 19.66 min.
Primer 2-14
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0250]
2,6-lutidin
Faza 1 dioksan/voda
Faza 2
Faza 1. Izrada 4-alil-1-(metilsulfonil)piperidin-4-ola
U rastvor alilmagnezijum bromida (5.08 mL, 5.08 mmol) u THF (15 mL) se na 0 °C pomoću kanile doda rastvor 1-(metilsulfonil)piperidin-4-ona (300 mg, 1.693 mmol) u THF (5 mL). Kupatilo za hlađenje se ukloni i reaktivna smeša se meša 30 min na sobnoj temperaturi. Reakcija se ohladi u ledenom kupatilu i neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl (20 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (4 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (25 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 4-alil-1-(metilsulfonil)piperidin- 4-ol (423 mg, 1.929 mmol, 114% prinos (nečist)) kao bezbojna čvrsta supstnaca, koja se koristi direktno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 5.87 (ddt,
22
J=17.2, 10.0, 7.6 Hz, 1H), 5.28 - 5.24 (m, 1H), 5.23 - 5.17 (m, 1H), 3.61 (dt, J=11.4, 2.4 Hz, 2H), 3.05 (td, J=11.9, 3.0 Hz, 2H), 2.80 (s, 3H), 2.27 (d, J=7.5 Hz, 2H), 1.80 - 1.71 (m, 2H), 1.70 - 1.61 (m, 2H).
Faza 2. Izrada 2-(4-hidroksi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)acetaldehida
U rastvor 4-alil-1-(metilsulfonil)piperidin-4-ola (210 mg, 0.958 mmol) u dioksanu (12 mL) i vodi (3 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (0.223 mL, 1.915 mmol), osmijum tetraoksid (4% u vodi) (0.150 mL, 0.019 mmol) i natrijum perjodat (819 mg, 3.83 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu jer se led u vodi otopi uz mešanje u toku 14 h. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (10 mL) i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (5 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (20 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (3% → 8% metanol u CH2Cl2; 40 g kolona) da se dobije 2-(4-hidroksi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)acetaldehid (101 mg, 0.456 mmol, 48% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.87 (s, 1H), 3.64 - 3.55 (m, 2H), 3.15 - 3.05 (m, 3H), 2.81 (s, 3H), 2.73 (d, J=0.8 Hz, 2H), 1.93 - 1.85 (m, 2H), 1.73 (dd, J=12.8, 4.5 Hz, 2H).
Faza 3. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (50 mg, 0.076 mmol) i 2-(4-hidroksi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)acetaldehida (25.3 mg, 0.114 mmol) u DCE (0.6 mL) se doda titanijum(IV) izopropoksid (0.034 mL, 0.114 mmol). Smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (32.3 mg, 0.152 mmol) i smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 30% 9:1 aceton:metanol/70% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (49 mg, 0.057 mmol, 75% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.41 - 7.31 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.22 - 5.16 (m, 2H), 5.13 (dd, J=6.2, 1.8 Hz, 1H), 4.75 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.61 - 4.55 (m, 1H), 4.49 (td, J=8.9, 5.5 Hz, 1H), 3.67 - 3.58 (m, 2H), 3.16 - 3.05 (m, 2H), 2.86 - 2.79 (m, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.77 - 2.69 (m, 1H), 2.62 (d, J=16.8 Hz, 1H), 2.55 (td, J=10.9, 5.6 Hz, 1H), 2.18 - 0.86 (m, 33H), 1.70 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 861.6 [(M+H)<+>, izračunato za C52H78FN2O5S 861.6], tR= 4.63 min (postupak 2-2).
22
Faza 4. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-1-(metilsulfonil)piperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (48 mg, 0.056 mmol) u 1,4-dioksanu (0.7 mL) i EtOH (0.35 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.139 mL, 0.279 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1).
Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-1-(metilsulfonil)piperidin- 4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (38.6 mg, 77% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.66 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 1H), 3.65 - 3.50 (m, 2H), 3.47 - 3.34 (m, 2H), 3.25 - 3.12 (m, 2H), 2.88 (s, 3H), 2.87 - 2.79 (m, 1H), 2.61 (d, J=17.5 Hz, 1H), 2.33 - 1.09 (m, 33H), 1.75 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 771.6 [(M+H)<+>, izračunato za C45H72FN2O5S 771.5], tR= 4.43 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.97 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.11 min.
Primer 2-15
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-acetil-4-hidroksipiperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0251]
22
2,6-lutidin
Faza 1 dioksan/voda
Faza 2
Faza 1. Izrada 1-(4-alil-4-hidroksipiperdin-1-il)etanona
U rastvor 1-acetilpiperidin-4-ona (1.00 g, 7.08 mmol) u THF (50 mL) se na -10 °C (aceton/ledeno kupatilo) doda alilmagnezijum bromid (1 M u dietil etru) (7.44 mL, 7.44 mmol). Reaktivna smeša se meša 30 min na -10 °C. Reakcija se neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl (50 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 1-(4-alil-4-hidroksipiperidin-1-il)etanon (836 mg, 4.56 mmol, 64% prinos) kao braon ulje. Produkt se koristi direktno u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.88 (ddt, J=17.2, 10.1, 7.6 Hz, 1H), 5.28 - 5.22 (m, 1H), 5.19 (ddt, J=17.1, 2.1, 1.2 Hz, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 1H), 3.65 - 3.56 (m, 1H), 3.52 - 3.43 (m, 1H), 3.04 (ddd, J=13.4, 9.3, 6.1
22
Hz, 1H), 2.26 (d, J=7.8 Hz, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.63 - 1.55 (m, 4H).
Faza 2. Izrada 2-(1-acetil-4-hidroksipiperidin-4-il)acetaldehida
U rastvor 1-(4-alil-4-hidroksipiperidin-1-il)etanona (280 mg, 1.528 mmol) u dioksanu (12 mL) i vodi (3 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (0.356 mL, 3.06 mmol), osmijum tetraoksid (2.5% u t-BuOH) (0.384 mL, 0.031 mmol) i natrijum perjodat (1307 mg, 6.11 mmol).
Kupatilo za hlađenje se ukloni i reaktivna smeša se meša 2.5 h na sobnoj temperaturi. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (10 mL) i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa 5% metanolom u hloroformu (8 x 20 mL).
Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (20 mL), suše preko MgSO4, filtrira i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (4% → 10% metanol u CH2Cl2; 24 g kolona) da se dobije 2-(1-acetil-4-hidroksipiperidin-4-il)acetaldehid (48.6 mg, 0.262 mmol, 17% prinos) kao bezbojno ulje.<1>H NMR pokazuje da produkt nije potpuno čist. Produkt se koristi direktno u sledećoj fazi.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.88 (t, J=1.0 Hz, 1H), 4.41 - 4.33 (m, 1H), 3.61 - 3.56 (m, 1H), 3.56 - 3.45 (m, 3H), 3.12 - 3.00 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 1.87 - 1.76 (m, 2H), 1.54 (tdd, J=12.8, 8.0, 4.9 Hz, 2H).
Faza 3. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-acetil-4-hidroksip- iperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
22
U rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (50 mg, 0.076 mmol) i 2-(1-acetil-4-hidroksipiperidin-4-il)acetaldehida (42.4 mg, 0.229 mmol) u DCE (0.6 mL) se doda titanijum(IV) izopropoksid (0.067 mL, 0.229 mmol). Smeša se meša 1 h na sobnoj temperaturi. Doda se natrijum triacetoksiborhidrid (48.5 mg, 0.229 mmol) i smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 40% 9:1 aceton:metanol/60% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-acetil-4-hidroksipiperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadek ahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (46 mg, 0.056 mmol, 73% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.40 - 7.31 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.22 -5.16 (m, 2H), 5.15 - 5.10 (m, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.62 (d, J=1.2 Hz, 1H), 4.60 - 4.55 (m, 1H), 4.52 - 4.46 (m, 1H), 4.38 (d, J=13.1 Hz, 1H), 3.64 - 3.49 (m, 2H), 3.15 - 3.05 (m, 1H), 2.87 -2.70 (m, 2H), 2.64 - 2.52 (m, 2H), 2.19 - 0.87 (m, 33H), 2.11 (s, 3H), 1.70 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 825.6 [(M+H)<+>, izračunato za C53H78FN2O4825.6], tR= 4.74 min (postupak 2-3).
Faza 4. Rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-acetil-4-hidroksipiperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-
22
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (45 mg, 0.055 mmol) u 1,4-dioksanu (0.7 mL) i EtOH (0.35 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.136 mL, 0.273 mmol).
Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 50 °C nakon toga 1 h na 65 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-acetil-4-hidroksipiperidin-4-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (34 mg, 73% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.83 (br. s., 1H), 4.73 (s, 1H), 4.64 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 1H), 4.43 - 4.28 (m, 1H), 3.78 - 3.67 (m, 1H), 3.66 - 3.52 (m, 1H), 3.47 - 3.35 (m, 2H), 3.26 - 3.10 (m, 1H), 2.92 - 2.77 (m, 1H), 2.61 (d, J=17.2 Hz, 1H), 2.39 - 1.10 (m, 33H), 2.18 (s, 3H), 1.75 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 735.6 [(M+H)<+>, izračunato za C46H76FN2O4739.6], tR= 4.27 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.86 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 19.90 min.
Izrada 2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehid i 2-((cis)-1, 4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehida
[0252]
2
z
Faza 1
Faza 3
OsO4, NalO4OsO4, NalO42,6-lutidin 2,6-lutidin dioksan/voda dioksan/voda ili Faza 4b
O3, NMO
zatim Me2S
CH2Cl2/MeOH
Faza 4a
Faza 1. Izrada 8-metil-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ola
U THF (100 mL) u boci okruglog dna se na -78 °C u atmosferi N2špricem dodaju metillitijum (48.0 mL, 77 mmol) i metilmagnezijum bromid (12.81 mL, 38.4 mmol). Nakon 1 h mešanja na -78 °C, doda se 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-on (5.00 g, 32.0 mmol) u THF (50 mL) pomoću kanile. Reaktivna smeša se meša 1.5 h na -78 °C. Reakcija se neutrališe dodavanjem zasićenog vodenog rastvora NH4Cl (100 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (50 mL) i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 150 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (100 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 8-metil-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ol (5.47 g, 99% prinos).
Produkt se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.03 - 3.91 (m, 4H), 1.97 - 1.84 (m, 2H), 1.79 - 1.56 (m, 6H), 1.28 (s,
2 1
3H), 1.17 (s, 1H);<13>C NMR (100MHz, HLOROFORM-d) δ 108.27, 68.52, 63.87, 63.81, 36.33, 30.47, 29.39.
Faza 2. Izrada 4-hidroksi-4-metilcikloheksanona
U rastvor 8-metil-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ola (5.26 g, 30.5 mmol) u acetonu (40 mL) i vodi (60 mL) se na sobnoj temperaturi doda 4 M HCl (22.91 mL, 92 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 14 h na 40 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu i neutrališe dodavanjem čvrstog natrijum karbonata. Aceton se ukloni pomoću rotacionog uparivača i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (7 x 150 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (70% etil acetat u heksanima) da se dobije 4-hidroksi-4-metilcikloheksanon (3.27 g, 25.5 mmol, 84% prinos) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 2.80 - 2.68 (m, 2H), 2.30 - 2.20 (m, 2H), 2.04 - 1.94 (m, 2H), 1.92 - 1.80 (m, 2H), 1.56 (s, 1H), 1.39 (s, 3H);<13>C NMR (100MHz, HLOROFORM-d) δ 211.55, 68.14, 38.40, 36.80, 29.51.
Faza 3. Izrada (trans)-1-alil-4-metilcikloheksan-1,4-diola i (cis)-1-alil-4-metilcikloheksan-1,4-diola
U rastvor 4-hidroksi-4-metilcikloheksanona (3.20 g, 24.97 mmol) u THF (200 mL) se na 0 °C doda alilmagnezijum bromid (1 M u dietil etru) (62.4 mL, 62.4 mmol). Reaktivna smeša se meša 30 min na 0 °C. Reakcija se neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl (70 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 150 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (30% → 90% etil acetat u heksanima; 330 g kolona, 35 min gradijent) da se dobiju (trans)-1-
2 2
alil-4-metilcikloheksan-1,4-diol (1.90 g, 11.16 mmol, 45% prinos) kao bela čvrsta supstanca i (cis)-1-alil-4-metilcikloheksan-1,4-diol (2.35 g, 13.80 mmol, 55% prinos) kao bezbojno ulje, koje očvrsne stajanjem.
(trans)-1-alil-4-metilcikloheksan-1,4-diol:
<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.92 (ddt, J=17.3, 10.1, 7.5 Hz, 1H), 5.23 - 5.12 (m, 2H), 2.26 (d, J=7.5 Hz, 2H), 1.85 - 1.71 (m, 4H), 1.55 - 1.43 (m, 4H), 1.28 (s, 3H);<13>C NMR (100MHz, HLOROFORM-d) δ 133.08, 118.72, 69.66, 68.77, 47.59, 33.87, 32.29, 30.80. Struktura (trans)-1-alil-4-metilcikloheksan-1,4-diola se potvrdi Kristalografijom X-zracima. (cis)-1-alil-4-metilcikloheksan-1,4-diol:
<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.90 (ddt, J=17.2, 10.0, 7.5 Hz, 1H), 5.21 - 5.10 (m, 2H), 2.25 (dt, J=7.5, 1.0 Hz, 2H), 1.81 - 1.66 (m, 4H), 1.57 - 1.47 (m, 4H), 1.24 (s, 3H);<13>C NMR (100MHz, HLOROFORM-d) δ 133.12, 118.59, 70.01, 69.34, 44.54, 35.55, 33.99, 26.76.
Faza 4a. Izrada 2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehida (Postupak A)
U rastvor (trans)-1-alil-4-metilcikloheksan-1,4-diola (0.98 g, 5.76 mmol) u dioksanu (40 mL) i vodi (10 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (1.341 mL, 11.51 mmol), osmijum tetraoksid (4% u vodi) (0.704 mL, 0.115 mmol) i natrijum perjodat (4.92 g, 23.03 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu jer se led u vodi otopi uz mešanje u toku 14 h. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži 1 N HCl (aq) (25mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (20 x 50 mL). (Bilo je teško da se ekstrahuje produkt iz vodenog sloja). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom NaHCO3(8 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. TLC ispirka bikarbonata pokazuje da je malo produkta otišlo u vodeni sloj. Ovaj sloj se koncentruje. Ostatak se suspenduje u dihlormetanu i, zajedno sa ostatkom iz organskog ektrakta, se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (70% etil acetat sa 3% metanol/30% heksani → 100% etil acetat sa 3% metanol; 120 g kolona) da se dobije 2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehid (0.78 g, 4.53 mmol, 79% prinos) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.91 (t, J=1.6 Hz, 1H), 2.65 (d, J=1.8 Hz, 2H), 1.91 - 1.73 (m, 4H), 1.69 - 1.62 (m, 2H), 1.53 - 1.46 (m, 2H),
2
1.28 (s, 3H).
Faza 4a. Alternativni postupak za izradu 2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehida (Postupak B)
(trans)-1-Alil-4-metilcikloheksan-1,4-diol (1.00 g, 5.87 mmol) se rastvori u CH2Cl2(50 mL) i MeOH (10 mL) u boci okruglog dna zapremine 250 mL. Doda se N-metilmorfolin-N-oksid (NMO) (0.826 g, 7.05 mmol) i smeša se ohladi na -78 °C [Schwartz, C., Raible, J., Mott, K., Dussault, P. H. Org. Lett.2006, 8, 3199 - 3201]. U mehurićima se kroz reaktivnu smešu propušta ozon sve dok se rastvor ne zasiti sa ozonom (boja postaje plava) posle nekoliko minuta (ukupno vreme 10 min). Azot se nakon toga u mehurićima propušta kroz reaktivnu smešu sve dok plava boja ne nestane. Nakon toga se doda dimetil sulfid (4.34 mL, 58.7 mmol) i reaktivna smeša se meša 2.5 h na 0 °C. Smeša se koncentruje pod vakuumom.
Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50% etil acetat sa 1% metanol/50% heksani → 95% etil acetat sa 1% metanol/5% heksani; 80 g kolona) da se dobije 2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehid (937 mg, 5.44 mmol, 93% prinos) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.90 (s, 1H), 2.65 (s, 2H), 1.89 - 1.74 (m, 4H), 1.69 - 1.62 (m, 2H), 1.52 - 1.46 (m, 2H), 1.28 (s, 3H);<13>C NMR (100MHz, HLOROFORM-d) δ 203.02, 69.65, 68.45, 55.15, 33.34, 32.46, 30.90.
Faza 4b. Izrada 2-((cis)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehida
U rastvor (cis)-1-alil-4-metilcikloheksan-1,4-diola (185 mg, 1.087 mmol) u dioksanu (8 mL) i vodi (2 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (0.253 mL, 2.173 mmol), osmijum tetraoksid (4% u vodi) (0.133 mL, 0.022 mmol) i natrijum perjodat (930 mg, 4.35 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu jer se led u vodi otopi uz mešanje u toku 14 h. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži 1N HCl (aq) (15 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (10 mL). Nakon prve ekstrakcije, vodeni sloj se zasiti sa natrijum hloridom i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (17 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(2 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (8% → 12%
2 4
metanol u CH2Cl2; 40 g kolona) da se dobije 2-((cis)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehid (146 mg, 0.848 mmol, 78% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.91 (t, J=1.8 Hz, 1H), 2.65 (d, J=2.0 Hz, 2H), 1.91 - 1.76 (m, 4H), 1.63 - 1.46 (m, 4H), 1.26 (s, 3H).
Primer 2-16
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0253]
r mer -
Faza 1. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
2
(S)-Benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (1.00 g, 1.524 mmol) i 2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehid (0.420 g, 2.439 mmol) se rastvore u MeOH (12.5 mL) i sirćetnoj kiselini (2.5 mL). Doda se bor-2-pikolin kompleks (0.261 g, 2.439 mmol) i smeša se meša 14 h na sobnoj temperaturi. U reaktivnu smešu se dodaju se nove količine 2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehida (0.131 g, 0.762 mmol, 0.5 eq) i bor-2-pikolin kompleksa (0.082 g, 0.762 mmol, 0.5 eq) i mešanje se nastavi 1 h. Reaktivna smeša se neutrališe dodavanjem vode (5 mL) i čvrstog natrijum karbonata. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (50 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (7 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (15 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (20% etil acetat sa 5% metanol/80% heksani → 90% etil acetat sa 5% metanol/10% heksani; 120 g kolona, 25 min gradijent) da se dobije (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi- 4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (856 mg, 1.054 mmol, 69% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.40 - 7.31 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 - 5.16 (m, 2H), 5.13 (dd, J=6.2, 1.8 Hz, 1H), 4.74 (d, J=1.5 Hz, 1H), 4.62 - 4.56 (m, 2H), 4.53 - 4.46 (m, 1H), 2.85 - 2.78 (m, 1H), 2.77 - 2.70 (m, 1H), 2.66 - 2.55 (m, 2H), 2.18 - 1.02 (m, 37H), 1.69 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 812.6 [(M+H)<+>, izračunato za C53H79FNO4812.6], tR= 4.89
2
min (postupak 2-3).
Faza 2. Rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi-4- metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (401 mg, 0.494 mmol) u 1,4-dioksanu (7.5 mL) i EtOH (2.5 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (1.234 mL, 2.469 mmol).
Reaktivna smeša se zagreva 2.5 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, razblaži sa metanolom (4 mL) (da se rastvori precipitat), filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-4). Organski rastvarač upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (S)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (267 mg, 0.316 mmol, 64% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.27 - 5.22 (m, 1H), 4.82 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.66 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.44 (m, 1H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 2.89 - 2.81 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.9 Hz, 1H), 2.31 - 1.34 (m, 35H), 1.75 (s, 3H), 1.30 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.15 - 1.11 (m, 2H), 1.09 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 722.6 [(M+H)<+>, izračunato za C46H73FNO4722.6], tR= 4.36 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 19.03 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.26 min.
Primer 2-17
Izrada (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0254]
2
Faza 1. Izrada (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
(R)-Benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (120 mg, 0.183 mmol) i 2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehid (56.7 mg, 0.329 mmol) se rastvore u MeOH (1.5 mL) i sirćetnoj kiselini (0.3 mL). Doda se bor-2-pikolin kompleks (35.2 mg, 0.329 mmol) i smeša se meša 16 h na sobnoj temperaturi. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (20
2
mL) i zasićeni vodeni rastvor natrijum karbonata (2 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (4 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (15 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (20% etil acetat sa 5% metanol/80% heksani → 90% etil acetat sa 5% metanol/10% heksani; 80 g kolona, 20 min gradijent) da se dobije (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (96.7 mg, 0.119 mmol, 65% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.39 - 7.31 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.22 - 5.15 (m, 2H), 5.11 (dd, J=6.1, 1.5 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.62 - 4.55 (m, 2H), 4.52 -4.45 (m, 1H), 2.83 - 2.69 (m, 2H), 2.65 - 2.53 (m, 2H), 2.21 - 0.87 (m, 37H), 1.69 (s, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 812.6 [(M+H)<+>, izračunato za C53H79FNO4812.6], tR= 4.58 min (postupak 2-3).
Faza 2. rastvor (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (95 mg, 0.117 mmol) u 1,4-dioksanu (1.5 mL) i MeOH (0.5 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.292 mL, 0.585 mmol).
Reaktivna smeša se zagreva 4 h na 70 °C. Reakcija je završena. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-4). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (R)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (40.8 mg, 0.049 mmol, 42% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=5.4 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.66 - 4.57 (m, 1H),
4.55 - 4.47 (m, 1H), 3.43 - 3.36 (m, 2H), 2.90 - 2.82 (m, 1H), 2.62 (d, J=16.9 Hz, 1H), 2.38 -2.28 (m, 1H), 2.26 - 1.35 (m, 34H), 1.75 (s, 3H), 1.31 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.14 (d, J=9.5 Hz, 2H), 1.10 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 722.6 [(M+H)<+>, izračunato za C46H73FNO4722.6], tR= 4.34 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-5): tR=
2
11.74 min; HPLC (postupak 2-6): tR= 11.29 min.
Primer 2-18
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0255]
Faza 1. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
24
Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (100 mg, 0.152 mmol), 2-((cis)1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)acetaldehidA (52.5 mg, 0.305 mmol) i bor-2-pikolin kompleksA (32.6 mg, 0.305 mmol) u MeOH (1.4 mL) i sirćetnoj kiselini (0.35 mL) se meša 18 h na sobnoj temperaturi. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metano l/90% heksani → 30% 9:1 aceton:metanol/70% heksani; 40 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 4-((1R,3aS,SaR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (72.5 mg, 0.089 mmol, 59% prinos) kao bela pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.38 - 7.34 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 -5.16 (m, 2H), 5.13 (dd, J=6.1, 1.5 Hz, 1H), 4.73 (d, J=1.7 Hz, 1H), 4.62 - 4.56 (m, 2H), 4.53 - 4.46 (m, 1H), 2.83 - 2.75 (m, 1H), 2.73 - 2.66 (m, 1H), 2.64 - 2.52 (m, 2H), 2.18 - 1.00 (m, 37H), 1.69 (s, 3H), 1.24 (s, 3H), 1.07 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 812.7 [(M+H)<+>, izračunato za C53H79FNO4812.6], tR= 4.78 min (postupak 2-3).
Faza 2. Rastvor (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (65 mg, 0.080 mmol) u 1,4-dioksanu (1.0 mL) i EtOH (0.5 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.200 mL, 0.400 mmol).
Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1). Produkt (37 mg) sadrži značajnu količinu nečistoća (ca.10%). Produkt se nakon toga ponovo prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-5) da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1,4-dihidroksi-4-metilcikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (22.1 mg, 33% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.64 - 4.56 (m, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.44 -3.37 (m, 1H), 3.36 - 3.28 (m, 1H), 2.91 - 2.82 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.31 - 1.11 (m, 37H), 1.75 (s, 3H), 1.27 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 722.6 [(M+H)<+>, izračunato za C46H73FNO4722.6], tR= 4.34 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.87 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.20 min.
Izrada 4-(metilsulfonil)cikloheksanon (Način 1)
[0256]
aza
Faza 1. Izrada 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il 4-metilbenzensulfonata
U rastvor 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ola (10 g, 63.2 mmol), trietilamina (13.22 mL, 95.0 mmol) i N,N-dimetilpiridin-4-amina (0.772 g, 6.32 mmol) u CH2Cl2(400 mL) se na 0 °C u porcijama doda 4-metilbenzen-1-sulfonil hlorid (13.26 g, 69.5 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu uz 16 sati mešanja. Reaktivna smeša se razblaži sa CH2Cl2(400 mL) i ispere sa vodom (2 x 400 mL). Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (0% → 30% etil acetat u heksanima; sirovi produkt se podeli na pola i prečisti u dve 330 g kolone) da se dobije 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il 4-metilbenzensulfonat (19.6 g, 62.7 mmol, 99% prinos):<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.82 (d, J=8.3 Hz, 2H), 7.35 (d, J=8.0 Hz, 2H), 4.66 (tt, J=6.0, 3.0 Hz, 1H), 3.98 - 3.88 (m, 4H), 2.47 (s, 3H), 1.95 - 1.74 (m, 5H), 1.63 -1.51 (m, 3H); LC/MS (ESI) m/e 335.2 [(M+Na)<+>, izračunato za C15H20O5SNa 335.1], tR= 2.06 min (postupak 2-1).
Faza 2. Izrada 8-(metiltio)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekana
1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il 4-metilbenzensulfonat (19.6 g, 62.7 mmol) u etanolu (26.7 mL) se doda u rastvor natrijum tiometoksida (13.19 g, 188 mmol) u MeOH (80 mL).
Reaktivna smeša se zagreva 16 h na 80 °C u zatvorenoj posudi pod pritiskom. LC-MS pokazuje formiranje željenog produkta. Reaktivna smeša se podeli između etil acetata i vode. Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 250 mL) i kombinovani organski slojevi se koncentruju pod vakuumom. Ostatak se podeli između CH2Cl2i sat. aq. rastvora natrijum bikarbonata. Vodeni sloj se ekstrahuje sa novom količinom CH2Cl2. Kombinovani organski slojevi se suše preko natrijum sulfata, koncentruju pod vakuumom i prečiste hromatografijom na koloni silika gela (100% heksani → 25% etil acetat sa 5% metanol/75% heksani; 330 g kolona) da se dobije 8-(metiltio)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan (9.6 g, 51.0 mmol, 81% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 3.93 (s, 4H), 2.62 (tt, J=9.9, 3.8 Hz, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.02 - 1.93 (m, 2H), 1.87 - 1.78 (m, 2H), 1.72 - 1.52 (m, 4H); LC/MS (ESI) m/e 189.2 [(M+H)<+>, izračunato za C9H16O2S 189.1], tR= 1.91 min (postupak 2-1).
Faza 3. Izrada 8-(metilsulfonil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekana
24
U rastvor 8-(metiltio)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekana (9.6 g, 51.0 mmol) u CH2Cl2(400 mL) se na 0 °C doda mCPBA (22.85 g, 102 mmol). Rastvor se zagreje na sobnu temperaturu i meša 15 h. Reaktivna smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži 1 N vodeni rastvor natrijum hidroksida (200 mL) i ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 200 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 8-(metilsulfonil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekan (9.42 g, 42.8 mmol, 84% prinos).
Produkt se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 3.99 - 3.95 (m, 4H), 2.90 - 2.80 (m, 1H), 2.85 (s, 3H), 2.29 - 2.19 (m, 2H), 1.98 - 1.83 (m, 4H), 1.67 - 1.56 (m, 2H).
Faza 4. Izrada 4-(metilsulfonil)cikloheksanona
U bocu okruglog dna, se u rastvor 8-(metilsulfonil)-1,4-dioksaspiro[4.5]dekana (9.4 g, 42.7 mmol) doda HCl (71.1 mL, 427 mmol). Reaktivna smeša se meša 16 h u toku noći na rt. Reaktivna smeša se delimično koncentruje pod vakuumom i podeli između EtOAc (200 mL) i vode (200 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (3 x 200 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, slanim rastvorom, suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod vakuumom. Sirovi produkt se
prečisti hromatografijom na koloni silika gela (70% etil acetat sa 1% metanol/30% heksani → 100% etil acetat sa 1% metanol; 330 g kolona) da se dobije 4-(metilsulfonil)cikloheksanon (4.7 g, 26.7 mmol, 63% prinos):<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 3.35 - 3.21 (m, 1H), 2.92 (s, 3H), 2.65 - 2.56 (m, 2H), 2.54 - 2.35 (m, 4H), 2.16 - 2.01 (m, 2H).
Alternativni postupak za izradu 4-(metilsulfonil)cikloheksanona (Način 2)
[0258] U rastvor (metilsulfonil)etena (10.0 g, 94 mmol) u benzenu (50 mL) se dodaju (buta-1,3-dien-2-iloksi)trimetilsilan (14.07 g, 99 mmol) i hidrohinon (20 mg, 0.182 mmol). Smeša se pre zagrevanja degasira nekoliko puta na -78 °C. Sadržaji se stave u posudu zatvore i zagrevaju 48 sati na 105 °C. Reakcija se analizira pomoću NMR u CDCl3čime se pokazuje približno 10% vinil sulfon ostatak. Doda se još (buta-1,3-dien-2-iloksi)trimetilsilana (4 mL) i zagrevanje nastavi narednih 48 sati. Reaktivna smeša se upari do guste gume pod vakuumom na sobnoj temperaturi (~19 °C). Smeša se ponovo razblaži sa acetonom (250 mL) što rezultira formiranjem bistrog rastvora. Smeša se hladi u ledenom kupatilu dok ne postane hladna. Doda se 4 mL 0.25 N HCl (prethodno ohlađen u istom ledenom kupatilu) što rezultira formiranjem mutne smeše, koja postaje bistra nakon 15 minuta mešanje na 0 °C a nakon još 10 min ponovo postaje mutna i ostaje zamućena u preostalom periodu mešanja. Rastvor acetona se filtrira kroz kratku ploču silika gela tip-H nakon ukupnog vremena reakcije od približno jedan sat i nakon toga se ispere sa još acetona. Filtrat se koncentruje pomoću rotacionog uparivača na 19 °C temperature kupatila. Sirovi produkt se dalje podeli u dva dela, 7.75 gm svaki, zbog prečišćavanja. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (30% etil acetat → 100% etil acetat u heksanima; dve 330 g kolone) da se dobije 4-(metilsulfonil)cikloheksanon (16.7 g, 100% prinos) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 3.29 (tt, J=11.0, 3.9 Hz, 1H), 2.94 (s, 3H), 2.73 - 2.62 (m, 2H), 2.58 - 2.37 (m, 4H), 2.15 (qd, J=11.9, 4.5 Hz, 2H).
Izrada 2-(cis-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehid i 2-(trans-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehida
[0259]
24
Faza 1
(pik 1) (pik 2)
(29% prinos) (43% prinos)
Faza 1. Izrada (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanola i (trans)-1-alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanola
U rastvor 4-(metilsulfonil)cikloheksanona (1.03 g, 5.84 mmol) u THF (40 mL) se na 0 °C pomoću kanile doda alilmagnezijum bromid (7.60 mL, 7.60 mmol). Reaktivna smeša se meša 30 min na 0 °C. Reakcija se neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl (25 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (5 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (20 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (70% etil acetat sa 1% metanol/30% heksani → 100% etil acetat sa 1% metanol; 40 g kolona) da se dobije (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanol (374 mg, 1.713 mmol, 29% prinos) kao bela čvrsta supstanca i (trans)-1-alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanol (551 mg, 2.52 mmol, 43% prinos) kao bezbojno ulje. (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanol:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.96 - 5.79 (m, 1H), 5.26 - 5.21 (m, 1H), 5.18 (ddt, J=17.1, 2.1, 1.2 Hz, 1H), 2.85 (s, 3H), 2.80 (tt, J=12.5, 3.6 Hz, 1H), 2.25 (d, J=7.5 Hz, 2H), 2.15 - 2.07 (m, 2H), 1.97 (qd,
24
J=13.0, 3.8 Hz, 2H), 1.88 - 1.81 (m, 2H), 1.52 - 1.42 (m, 2H);<13>C NMR (100MHz, CDCl3) δ 132.50, 120.02, 69.06, 62.26, 47.86, 36.85, 35.67, 21.13.
Struktura (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanola se potvrdi kristalografijom X-zracima. (trans)-1-alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanol:
<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 5.88 (ddt, J=17.2, 10.1, 7.4 Hz, 1H), 5.28 - 5.16 (m, 2H), 2.98 -2.91 (m, 1H), 2.90 (s, 3H), 2.35 (d, J=7.5 Hz, 2H), 2.23 - 2.14 (m, 2H), 2.02 - 1.93 (m, 2H), 1.90 - 1.78 (m, 2H), 1.57 - 1.46 (m, 2H);<13>C NMR (100MHz, CDCl3) δ 132.62, 120.19, 69.20, 62.41, 48.00, 36.98, 35.83, 21.29.
Faza 2a. Izrada 2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehida (Postupak A)
U rastvor (cis)-1-alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanola (125 mg, 0.573 mmol) u dioksanu (4.4 mL) i vodi (1.1 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (0.133 mL, 1.145 mmol), osmijum tetraoksid (4% u vodi) (0.070 mL, 0.011 mmol) i natrijum perjodat (490 mg, 2.290 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu jer se led u vodi otopi uz mešanje u toku 14 h. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži 1 N HCl (aq) (10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (20 x 15 mL). (Bilo je teško ekstrahovati produkt iz vodenog sloja). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom NaHCO3(8 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. TLC bikarbonatnog ispirka pokazuje da je produkt prešao u vodeno sloj. Ovaj sloj se koncentruje. Ostatak se suspenduje u dihlormetanu i, zajedno sa ostatkom iz organskog ektrakta, se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (80% etil acetat sa 3% metanol/20% heksani → 100% etil acetat sa 3% metanol; 40 g kolona) da se dobije 2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehid (94.4 mg, 0.429 mmol, 75% prinos) kao bezbojno ulje koje očvrsne stajanjem:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.87 (t, J=1.3 Hz, 1H), 2.85 (s, 3H), 2.82 - 2.75 (m, 1H), 2.68 (d, J=1.0 Hz, 2H), 2.13 - 1.98 (m, 6H), 1.50 - 1.39 (m, 2H).
Faza 2a. Izrada 2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehida (Postupak B) (trans)-1-Alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanol (3.4 g, 15.57 mmol) se rastvori u CH2Cl2(160
24
mL) i MeOH (32.0 mL) u boci okruglog dna zapremine 500 mL. Doda se N-metilmorfolin-N-oksid (NMO) (2.189 g, 18.69 mmol) i smeša se ohladi na -78 °C [Schwartz, C., Raible, J., Mott, K., Dussault, P. H. Org. Lett.2006, 8, 3199 - 3201]. Ozon se u mehurićima propušta kroz reaktivnu smešu sve dok se rastvor ne zasiti sa ozonom (boja prelazi u plavu), posle nekoliko minuta (ukupno vreme 25 min). Azot se nakon toga u mehurićima propušta kroz reaktivnu smešu sve dok plava boja ne nestane. Nakon toga se doda dimetil sulfid (11.52 mL, 156 mmol) i reaktivna smeša se meša 16 h na 0 °C. Smeša se koncentruje pod vakuumom. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (50% etil acetat sa 1% metanol/50% heksani → 95% etil acetat sa 1% metanol/5% heksani; 330 g kolona) da se dobije 2-((1s,4s)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehid (3.31 g, 15.03 mmol, 96% prinos) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.87 (t, J=1.1 Hz, 1H), 2.85 (s, 3H), 2.82 - 2.76 (m, 1H), 2.67 (d, J=1.3 Hz, 2H), 2.13 - 1.98 (m, 6H), 1.50 - 1.38 (m, 2H);<13>C NMR (101MHz, HLOROFORM-d) δ 202.5, 68.9, 61.9, 54.9, 36.8, 35.9, 20.8.
Faza 2b. Izrada 2-((trans)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehida
U rastvor (trans)-1-alil-4-(metilsulfonil)cikloheksanola (242 mg, 1.108 mmol) u dioksanu (10 mL) i vodi (2.5 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (0.258 mL, 2.217 mmol), osmijum tetraoksid (4% u vodi) (0.135 mL, 0.022 mmol) i natrijum perjodat (948 mg, 4.43 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu jer se led u vodi otopi uz mešanje u toku 14 h. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži 1 N HCl (aq) (10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (20 x 20 mL). (Bilo je teško ekstrahovati produkt iz vodenog sloja). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom NaHCO3(8 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. TLC bikarbonatnog ispirka pokazuje da je deo produkta prešao u vodeni sloj. Ovaj sloje se koncentruje. Ostatak se suspenduje u dihlormetanu i, zajedno sa ostatkom iz organskog ektrakta, prečisti hromatografijom na koloni silika gela (80% etil acetat sa 3% metanol/20% heksani → 100% etil acetat sa 3% metanol; 40 g kolona) da se dobije 2-((trans)-1- hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehid (191 mg, 0.867 mmol, 78% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 9.89 (t, J=1.3 Hz, 1H), 3.13 (br. s., 1H), 3.02 - 2.93 (m, 1H),
24
2.91 (s, 3H), 2.79 (d, J=1.3 Hz, 2H), 2.29 - 2.17 (m, 2H), 2.13 - 2.04 (m, 2H), 1.92 - 1.78 (m, 2H), 1.68 - 1.57 (m, 2H).
Primer 2-19
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0260]
Faza 1. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,SaR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
24
Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (550 mg, 0.838 mmol), 2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehida (406 mg, 1.845 mmol) i bor-2-pikolin kompleksa (197 mg, 1.845 mmol) u MeOH (8 mL) i sirćetnoj kiselini (1.6 mL) se meša 14 h na sobnoj temperaturi. LC/MS pokazuje pik željene mase zajedno sa nešto preostalog početnog materijala. Dodaju se nove količine 2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehida (56 mg, 0.254 mmol, 0.3 eq) i bor-2-pikolin kompleksa (27 mg, 0.252 mmol, 0.3 eq) i mešanje se nastavi 3 h. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (20 mL) i zasićeni vodeni rastvor natrijum karbonata (2 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (4 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (25 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 70% 9:1 aceton:metanol/30% heksani, 20 min gradijent; 80 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)- 1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (566 mg, 0.658 mmol, 78% prinos) kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.41 - 7.31 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 - 5.16 (m, 2H), 5.13 (dd, J=6.2, 1.8 Hz, 1H), 4.75 (d, J=1.8 Hz, 1H), 4.64 - 4.55 (m, 2H), 4.53 - 4.46 (m, 1H), 2.85 (s, 3H), 2.83 - 2.69 (m, 3H), 2.64 - 2.51 (m, 2H), 2.19 - 1.02 (m, 36H), 1.70 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 860.6 [(M+H)<+>, izračunato za C53H79FNO5S 860.6], tR= 4.63 min (postupak 2-3).
2
Faza 2. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,SaR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (537 mg, 0.624 mmol) u 1,4-dioksanu (9 mL) i EtOH (3 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (1.561 mL, 3.12 mmol).
Reaktivna smeša se zagreva 2.5 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, razblaži sa metanolom (4 mL) (da se rastvori precipitat), filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1). Organski rastvarač se upari na rotacionom isparivaču i vodeni sloj se liofilizira da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (438 mg, 0.495 mmol, 79% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.27 -5.21 (m, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.65 - 4.56 (m, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 1H), 3.47 - 3.33 (m, 2H), 3.08 - 2.99 (m, 1H), 2.96 (s, 3H), 2.89 - 2.80 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.8 Hz, 1H), 2.31 - 1.11 (m, 37H), 1.75 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 770.5 [(M+H)<+>, izračunato za C46H73FNO5S 770.5], tR= 4.22 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.75 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 19.89 min.
Primer 2-20
Izrada (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0261]
2 1
Faza 1. Izrada (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,SaR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U suspenziju (R)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentam- etil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (100 mg, 0.152 mmol) i 2-((cis)-1-hidroksi- 4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehida (60.4 mg, 0.274 mmol) u MeOH (1.2 mL) se doda bor-2-pikolin kompleks (29.4 mg, 0.274 mmol), nakon toga sirćetna kiselina (0.24 mL) i smeša se meša 16 h na sobnoj temperaturi. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL) i zasićeni vodeni rastvor natrijum karbonata (1
2 2
mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (4 x 5 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (20% etil acetat sa 5% metanol/80% heksani → 90% etil acetat sa 5% metanol/10% heksani; 24 g kolona) da se dobije (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,1laS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (120 mg, 0.139 mmol, 92% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.41 - 7.30 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 - 5.15 (m, 2H), 5.11 (d, J=5.7 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.64 - 4.55 (m, 2H), 4.51 - 4.45 (m, 1H), 2.85 (s, 3H), 2.83 - 2.69 (m, 4H), 2.64 - 2.49 (m, 2H), 2.21 - 0.90 (m, 36H), 1.70 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.93 (s, 3H), 0.88 (s, 3H), 0.85 (s, 3H); LC/MS m/e 860.6 [(M+H)<+>, izračunato za C53H79FNO4812.6], tR= 4.62 min (postupak 2-3).
Faza 2. Rastvor (R)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,SaR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (115 mg, 0.134 mmol) u 1,4-dioksanu (1.5 mL) i MeOH (0.5 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.334 mL, 0.668 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 4 h na 70 °C. Reakcija je završena. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu i delimično neutrališe dodavanjem 6 N HCl (70 µL). Smeša se nakon toga filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-5). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (R)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,SaR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-((cis)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3- enekarboksilna kiselina · TFA (72.6 mg, 0.082 mmol, 61% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.24 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.54 - 4.46 (m, 1H), 3.47 - 3.34 (m, 2H), 3.09 - 2.99 (m, 1H), 2.96 (s, 3H), 2.90 - 2.81 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.8 Hz, 1H), 2.35 - 1.71 (m, 21H), 1.75 (s, 3H), 1.65 - 1.32 (m, 14H), 1.17 (s, 3H), 1.13 (d, J=6.0 Hz, 2H), 1.09 (s, 3H), 1.02 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 770.5 [(M+H)<+>, izračunato za
2
C46H73FNO5S 770.5], tR= 4.33 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-5): tR= 11.55 min; HPLC (postupak 2-6): tR= 11.20 min.
Primer 2-21
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0262]
Faza 1. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
2 4
Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (150 mg, 0.229 mmol), 2-((trans)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)acetaldehida (126 mg, 0.572 mmol) i bor-2-pikolin kompleksa (61.1 mg, 0.572 mmol) u metanolu (2.5 mL) i sirćetnoj kiselini (0.5 mL) se meša 16 h na sobnoj temperaturi. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (10 mL) i zasićeni vodeni rastvor natrijum karbonata (2 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (4 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 50% 9:1 aceton:metanol/50% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((1r,4S)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil) cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (143 mg, 0.166 mmol, 73% prinos) kao bezbojni film:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.40 - 7.32 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 - 5.16 (m, 2H), 5.13 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.73 (d, J=1.7 Hz, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 2H), 4.52 - 4.46 (m, 1H), 2.99 - 2.91 (m, 1H), 2.89 (s, 3H), 2.83 - 2.76 (m, 1H), 2.71 - 2.50 (m, 3H), 2.19 - 1.04 (m, 36H), 1.69 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.98 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 860.6 [(M+H)<+>, izračunato za C53H79FNO5S 860.6], tR= 4.61 min (postupak 2-3).
Faza 2. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-((trans)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-
2
ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (80 mg, 0.093 mmol) u 1,4-dioksanu (1 mL) i EtOH (0.5 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.232 mL, 0.465 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1). Produkt (59 mg) sadrži značajnu količinu nečistoće (ca.5-10%). Produkt se nakon toga ponovo prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-6). Organski rastvarač se upari pomoću rotacionog uparivača i vodena smeša se liofilizira da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)- 3a-((2-((trans)-1-hidroksi-4-(metilsulfonil)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2- il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3- enekarboksilna kiselina · TFA (27.2 mg, 33% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.72 (s, 1H), 4.66 - 4.57 (m, 1H), 4.54 - 4.47 (m, 1H), 3.42 (dd, J=8.2, 4.7 Hz, 1H), 3.36 - 3.28 (m, 1H), 3.18 - 3.10 (m, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.91 - 2.83 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.31 - 1.11 (m, 37H), 1.75 (s, 3H), 1.14 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.94 (s, 3H); LC/MS m/e 770.5 [(M+H)<+>, izračunato za C46H73FNO5S 770.5], tR= 4.20 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.74 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.05 min.
Primer 2-22
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksi-4-((metilsulfonil)oksi)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0263]
2
da
Faza 1. Izrada 4-oksocikloheksil metansulfonata
Metansulfonil hlorid (0.746 mL, 9.64 mmol) i trietilamin (1.343 mL, 9.64 mmol) se dodaju u rastvor 4-hidroksicikloheksanona (1 g, 8.76 mmol) u dihlormetanu (10 mL). Reaktivna smeša se meša 16 h na rt. Smeša se koncentruje i produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (0% heksani → 60% 9:1 aceton:metanol/40% heksani, 80 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije 4-oksocikloheksil metansulfonat (1.65 g, 8.58 mmol, 98% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.14 (tt, J=5.5, 2.8 Hz, 1H), 3.11 (s, 3H), 2.75 -2.59 (m, 2H), 2.49 - 2.28 (m, 4H), 2.24 - 2.06 (m, 2H).
2
Faza 2. Izrada 4-alil-4-hidroksicikloheksil metansulfonata
U rastvor alilmagnezijum bromida (9.83 mL, 9.83 mmol) u THF (75 mL) se na -78 °C doda 4-oksocikloheksil metansulfonat (1.8 g, 9.36 mmol). Smeša se meša 2 h na -78 °C. Reakcija se neutrališe dodavanjem zasićenog rastvora NH4Cl (60 mL). Smeša se prenese u levak za razdvajanje i slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa etrom (5 x 50 mL).
Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije 4-alil-4-hidroksicikloheksil metansulfonat (1.15 g, 4.91 mmol, 52% prinos) kao bezbojno ulje. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% heksani:etil acetat:MeOH (4:4:1)/90% heksani → 50% heksani:etil acetat:MeOH (4:4:1)/50% heksani; 120g kolona) da se dobije 4-alil-4-hidroksicikloheksil metansulfonat (1.15 g, 4.91 mmol, 52% prinos):<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 5.83 (ddt, J=17.2, 9.9, 7.5 Hz, 1H), 5.20 - 5.04 (m, 2H), 4.68 - 4.53 (m, 1H), 2.99 (s, 3H), 2.18 (d, J=7.3 Hz, 2H), 1.99 - 1.87 (m, 4H), 1.71 (s, 2H), 1.53 - 1.37 (m, 2H).
Faza 3. Izrada 4-hidroksi-4-(2-oksoetil)cikloheksil metansulfonata
U rastvor 4-alil-4-hidroksicikloheksil metansulfonata (182 mg, 0.777 mmol) u dioksanu (12 mL) i vodi (3.00 mL) se na 0 °C dodaju 2,6-lutidin (0.181 mL, 1.553 mmol), osmijum tetraoksid (2.5% u t-BuOH) (0.195 mL, 0.016 mmol) i natrijum perjodat (665 mg, 3.11 mmol). Reaktivna smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu jer se led u vodi otopi uz mešanje u toku 14 h. Reaktivna smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (50 mL) i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(50 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (3 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (50 mL), suše preko
2
MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (0% → 8% metanol u CH2Cl2; 40 g kolona) da se dobije 4-hidroksi-4-(2-oksoetil)cikloheksil metansulfonat (91 mg, 0.385 mmol, 50% prinos) kao bezbojno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 9.86 (t, J=1.3 Hz, 1H), 4.66 (tt, J=10.5, 4.2 Hz, 1H), 3.03 (s, 3H), 2.65 (d, J=1.3 Hz, 2H), 2.12 - 2.00 (m, 2H), 2.00 - 1.89 (m, 4H), 1.54 - 1.43 (m, 2H).
Faza 4. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksi-4-((metilsulfonil)oksi)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (60 mg, 0.091 mmol), 4-hidroksi-4-(2-oksoetil)cikloheksil metansulfonata (32.4 mg, 0.137 mmol) i bor-2-pikolin kompleksa (14.68 mg, 0.137 mmol) u MeOH (1 mL) i sirćetnoj kiselini (0.200 mL) se meša 16 h na sobnoj temperaturi. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlorometanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksi-4-((metilsulfonil)oksi)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (15 mg, 17% prinos). Sirovi produkt se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja. LC/MS m/e 876.6 [(M+H)<+>, izračunato za C53H78FNO6S 876.6], tR=
2
2.66 min (postupak 2-1).
Faza 5. Natrijum hidroksid (0.038 mL, 0.150 mmol) se doda u rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksi-4-((metilsulfonil)oksi)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (13.14 mg, 0.015 mmol) u dioksanu (0.5 mL) i etanolu (0.125 mL). Reaktivna smeša se meša 16 h na 70 °C. Sirovi materijal se filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-2, gradijent 50-100% B u toku 10 minuta nakon toga 15-minuta zadržavanje sa 100% B) da se dobije prečišćen produkt, (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(1-hidroksi-4-((metilsulfonil)oksi)cikloheksil)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina (3.2 mg, 3.87 mmol, 26% prinos):<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=5.2 Hz, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.76 - 4.67 (m, 2H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.56 - 4.47 (m, 1H), 3.79 (s, 1H), 3.40 (d, J=12.0 Hz, 1H), 3.35 -3.25 (m, 1H), 3.15 (q, J=7.1 Hz, 1H), 3.10 (s, 3H), 2.90 (br. s., 1H), 2.62 (d, J=17.2 Hz, 1H), 2.35 - 0.91 (m, 35H), 1.75 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.97 (s, 3H); LC/MS m/e 786.8 [(M+H)<+>, izračunato za C46H72FNO6S 786.5], tR= 2.46 min (postupak 2.1); HPLC (postupak 2-3): tR= 2.54 min; HPLC (postupak 2-4): tR= 2.29 min.
Primer 2-23
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-l)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0264]
2
Faza 1. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hloretil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen- 9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (100 mg, 0.152 mmol), 2-hloracetaldehida (0.028 mL, 0.229 mmol) i bor-2-pikolin kompleksa (24.46 mg, 0.229 mmol) u MeOH (1 mL) i sirćetnoj kiselini (0.2 mL) se meša 18 h na sobnoj temperaturi. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (4 x 15 mL).
2 1
Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 50% 9:1 aceton:metanol/50% heksani; 40 g kolona, → = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hloretil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (57 mg, 0.079 mmol, 52% prinos) kao bela pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.40 - 7.31 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 -5.16 (m, 2H), 5.14 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.73 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 2H), 4.53 -4.46 (m, 1H), 3.72 - 3.65 (m, 2H), 2.85 - 2.72 (m, 2H), 2.67 - 2.57 (m, 2H), 2.17 - 1.02 (m, 27H), 1.71 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 718.6 [(M+H)<+>, izračunato za C46H66ClFNO2718.5], tR= 4.82 min (postupak 2-3).
Faza 2. Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hloretil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (15 mg, 0.021 mmol), 4-metilpiperidin-4-ola (7.21 mg, 0.063 mmol), Hunig-ove baze (0.018 mL, 0.104 mmol) i kalijum jodida (4.16 mg, 0.025 mmol) u DMSO (0.4 mL) se zagreva 14 sati na 80 °C. Reaktivna smeša se nakon toga ohladi na rt i doda se NaOH (0.052 mL, 0.104 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Reaktivna smeša se filtrira i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1) da se dobije (S)-1-(fluorometil)- 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-hidroksi-4-metilpiperidin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · 2 TFA (9.5 mg, 48% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.24 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.65 - 4.56 (m, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 1H), 3.85 - 3.70 (m, 4H), 3.56 (br. s., 2H), 3.43 (br. s., 2H), 2.85 - 2.76 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.9 Hz, 1H), 2.31 - 1.11 (m, 32H), 1.75 (s, 3H), 1.35 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 707.6 [(M+H)<+>, izračunato za C45H72FN2O3707.6], tR= 4.31 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.63 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 19.58 min.
Primer 2-24
2 2
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(2-oksooksazolidin-3-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-ok- tadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0265]
Faza 1. Izrada 3-(2-bromoetil)oksazolidin-2-ona
U rastvor 3-(2-hidroksietil)oksazolidin-2-ona (1.0 g, 7.63 mmol) u CH2Cl2(30 mL) se doda ugljen tetrabromid (3.03 g, 9.15 mmol). Nakon hlađenja rastvora na 0 °C, u porcijama se doda trifenilfosfin (2.80 g, 10.68 mmol). Dobijeni rastvor se meša 18 h na sobnoj temperaturi. Smeša se koncentruje. Ostatak se suspenduje u etru (75 mL) i meša 30 min. Čvrsta supstanca se ukloni filtriranjem i filtrat se koncentruje. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (1% → 4% metanol u dihlormetanu; 220 g kolona).
2
Prvo hromatografijom izolovano jedinjenje je primarni produkt (1.01 g) u obliku bezbojnog ulja koji očvrsne stajanjem (zbog prisustva trifenilfosfin oksida). Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (0.5% → 3% metanol u CH2Cl2; 120 g kolona) da se dobije 3-(2-bromoetil)oksazolidin-2-on (785 mg, 4.05 mmol, 53% prinos) kao bezbojno ulje.
<1>H NMR ukazuje da je produkt kontaminiran sa trifenilfosfin oksidom. Ttrifenilfosfin oksid je prisutan kao 7:1 molarni odnos produkta i trifenilfosfin oksida. Produkt se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 4.46 - 4.35 (m, 2H), 3.82 - 3.67 (m, 4H), 3.58 - 3.52 (m, 2H).
Faza 2. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oksooksazolidin-3-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
U smešu (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (70 mg, 0.107 mmol), 3-(2-bromoetil)oksazolidin-2-ona (72.5 mg, 0.373 mmol), tribaznog kalijum fosfata (91 mg, 0.427 mmol) i kalijum jodida (62.0 mg, 0.373 mmol) u posudi pod pritiskom osušenoj u pećnici se doda acetonitril (1.0 mL). Boca se zatvori i reaktivna smeša se zagreva 14 h na 120 °C. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 15 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 30% 9:1 aceton:metanol/70%
2 4
heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oksooksazolidin-3-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (54.5 mg, 0.071 mmol, 66% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.41 - 7.32 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 - 5.16 (m, 2H), 5.13 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.72 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.55 (m, 2H), 4.53 - 4.44 (m, 1H), 4.38 - 4.32 (m, 2H), 3.77 - 3.62 (m, 2H), 3.49 - 3.41 (m, 1H), 3.33 (dt, J=14.1, 5.5 Hz, 1H), 2.70 (ddd, J=12.0, 7.3, 5.0 Hz, 1H), 2.65 - 2.52 (m, 3H), 2.19 - 1.10 (m, 27H), 1.70 (s, 3H), 1.06 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS m/e 769.6 [(M+H)<+>, izračunato za C49H70FN2O4769.5], tR= 4.65 min (postupak 2-2).
Faza 3. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oksooksazolidin-3-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (53 mg, 0.069 mmol) u 1,4-dioksanu (0.7 mL) i EtOH (0.35 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.172 mL, 0.345 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1) da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((lR,3aS,5aR,5bR,7aR,11as,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oksooksazolidin-3-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (31.4 mg, 62% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.24 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.64 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.43 (m, 3H), 3.84 (q, J=8.2 Hz, 1H), 3.80 - 3.72 (m, 3H), 3.65 - 3.58 (m, 1H), 3.57 - 3.51 (m, 1H), 2.85 - 2.77 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.32 - 1.11 (m, 27H), 1.76 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 679.5 [(M+H)<+>, izračunato za C42H64FN2O4679.5], tR= 4.18 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.68 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 19.92 min.
Primer 2-25
2
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b- oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0266]
aza Faza 2
Faza 1. Izrada 2-(2-oksoimidazolidin-1-il)etil 4-metilbenzensulfonata
U rastvor 1-(2-hidroksietil)imidazolidin-2-ona (500 mg, 3.84 mmol) u piridinu (5 mL) se na 0 °C doda p-toluensulfonil hlorid (806 mg, 4.23 mmol). Reaktivna smeša se meša 16 h da se omogući reaktivnoj smeši da se polako zagreje na sobnu temeraturu uklanjanjem kupatila ledvoda. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži etil acetat (50 mL). Vodeni sloj se ispere sa 1N HCl (2 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim rastvorom NaHCO3(25 mL), slanim rastvorom (25 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i
2
koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (3% → 7% metanol u dihlormetanu; 120 g kolona) da se dobije 2-(2-oksoimidazolidin-1-il)etil 4-metilbenzensulfonat (356 mg, 1.252 mmol, 33% prinos) kao žuta čvrsta supstanca:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.86 - 7.77 (m, 2H), 7.38 (d, J=8.0 Hz, 2H), 4.51 (br. s., 1H), 4.17 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.59 - 3.52 (m, 2H), 3.47 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.43 - 3.35 (m, 2H), 2.48 (s, 3H); LC/MS m/e 285.1 [(M+H)<+>, izračunato za C12H17N2O4S 285.1], tR= 1.58 min (postupak 2-1).
Faza 2. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11as,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
(S)-Benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en- 2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (40 mg, 0.061 mmol), 2-(2-oksoimidazolidin-1-il)etil 4-metilbenzensulfonat (69.4 mg, 0.244 mmol), tribazni kalijum fosfat (64.7 mg, 0.305 mmol) i kalijum jodid (50.6 mg, 0.305 mmol) se kombinuju u bočici. Doda se acetonitril (1 mL), bočica se zatvori i reaktivna smeša se zagreva 16 h na 120 °C. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 40% 9:1 aceton:metanol/60% heksani; 40 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-
2
(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a- pentametil-3a-((2-(2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (31 mg, 0.040 mmol, 66% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.38 - 7.33 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.19 (d, J=2.4 Hz, 2H), 5.13 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.72 (d, J=1.8 Hz, 1H), 4.63 - 4.55 (m, 2H), 4.53 - 4.45 (m, 1H), 4.32 (s, 1H), 3.61 - 3.47 (m, 3H), 3.46 - 3.35 (m, 4H), 3.24 (dt, J=13.8, 5.3 Hz, 1H), 2.70 -2.52 (m, 4H), 2.20 - 0.85 (m, 26H), 1.70 (s, 3H), 1.05 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.85 (s, 3H); LC/MS m/e 768.6 [(M+H)<+>, izračunato za C49H71FN3O3768.5], tR= 4.61 min (postupak 2-2).
Faza 3. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (31 mg, 0.040 mmol) u 1,4-dioksanu (0.5 mL) i EtOH (0.25 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (0.101 mL, 0.202 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1) da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil- 3a-((2-(2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (19.0 mg, 58% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca.<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.24 (d, J=4.6 Hz, 1H), 4.89 (s, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.65 - 4.56 (m, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 1H), 3.73 - 3.66 (m, 1H), 3.65 - 3.51 (m, 6H), 3.47 - 3.43 (m, 2H), 2.84 - 2.75 (m, 1H), 2.61 (d, J=17.5 Hz, 1H), 2.32 -1.08 (m, 26H), 1.76 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.94 (s, 3H); LC/MS m/e 678.5 [(M+H)<+>, izračunato za C42H65FN3O3678.5], tR= 4.30 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.88 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.30 min.
Primer 2-26
Izrada (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil-3a-((2-(3-metil-2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-
2
2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-ene-karboksilne kiseline
[0267]
Primer 2-26
Faza 1. Izrada 2-(3-metil-2-oksoimidazolidin-1-il)etil 4-metilbenzensulfonata
U rastvor 2-(2-oksoimidazolidin-1-il)etil 4-metilbenzensulfonata (135 mg, 0.475 mmol) u THF (4 mL) se na 0 °C doda natrijum bis(trimetilsilil)amid (0.522 mL, 0.522 mmol). Nakon 5 min mešanje, pomoću šprica se doda jodmetan (0.119 mL, 1.899 mmol). Kupatilo za hlađenje se ukloni i smeša se ostavi da se zagreje na sobnu temperaturu i meša 2 h. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(10 mL). Vodeni sloj se
2
ekstrahuje sa etil acetatom (4 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (1% → 5% metanol u CH2Cl2; 40 g kolona) da se dobije 2-(3-metil- 2-oksoimidazolidin-1-il)etil 4-metilbenzensulfonat (91.3 mg, 0.306 mmol, 65% prinos) kao bledo zeleno ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 7.83 - 7.77 (m, 2H), 7.37 (d, J=8.0 Hz, 2H), 4.15 (t, J=5.1 Hz, 2H), 3.45 (t, J=5.0 Hz, 2H), 3.43 - 3.37 (m, 2H), 3.29 - 3.23 (m, 2H), 2.77 (s, 3H), 2.47 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 299.2 [(M+H)<+>, izračunato za C13H19N2O4S 299.1], tR= 1.61 min (postupak 2-1).
Faza 2. Izrada 1-(2-bromoetil)-3-metilimidazolidin-2-ona
U rastvor 2-(3-metil-2-oksoimidazolidin-1-il)etil 4-metilbenzensulfonata (158 mg, 0.530 mmol) u THF (5 mL) se na sobnoj temperaturi doda litijum bromid (138 mg, 1.589 mmol). Reaktivna smeša se meša na sobnoj temperaturi u toku noći. Reaktivna smeša se nakon toga zagreva 3 h na 60 °C. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(5 mL) i vodu (5 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa etil acetatom (4 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše
preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (2% → 5% metanol u CH2Cl2; 40 g kolona) da se dobije 1-(2-bromoetil)-3-metilimidazolidin-2-on (92.3 mg, 0.446 mmol, 84% prinos) kao žuto ulje:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 3.65 - 3.60 (m, 2H), 3.52 - 3.44 (m, 4H), 3.38 - 3.32 (m, 2H), 2.82 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 207.2 [(M+H)<+>, izračunato za C6H12BrN2O 207.0], tR= 1.70 min (postupak 2-1).
Faza 3. Izrada (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(3-metil-2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata
2
U smešu (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (60 mg, 0.091 mmol), 1-(2-bromoetil)-3-metilimidazolidin-2-ona (56.8 mg, 0.274 mmol), tribaznog kalijum fosfata (78 mg, 0.366 mmol) i kalijum jodida (45.6 mg, 0.274 mmol) u posudi pod pritiskom osušenoj u pećnici se doda acetonitril (1.0 mL). Boca se zatvori i reaktivna smeša se zagreva 14 h na 120 °C. Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži vodu (5 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (5 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 50% 9:1 aceton:metanol/50% heksani; 24 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(3-metil-2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilat (47.7 mg, 0.061 mmol, 66% prinos) kao bela pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.40 - 7.33 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 - 5.16 (m, 2H), 5.14 (dd, J=6.2, 1.6 Hz, 1H), 4.72 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 2H), 4.53 - 4.47 (m, 1H), 3.45 - 3.20 (m, 6H), 2.82 (s, 3H), 2.68 - 2.51 (m, 4H), 2.19 - 0.87 (m 27H), 1.70 (s, 3H), 1.03 (s, 3H), 0.96 (s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.85 (s, 3H); LC/MS m/e 782.6 [(M+H)<+>, izračunato za C50H73FN3O3782.6], tR= 4.56 min (postupak 2-3).
Faza 4. Rastvor (S)-benzil 1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-3a-((2-(3-metil-2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)- 2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-
2 1
ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilata (46 mg, 0.059 mmol) u 1,4-dioksanu (0.7 mL) i EtOH (0.35 mL) se tretira sa natrijum hidroksidom (2M aq) (0.147 mL, 0.294 mmol). Reaktivna smeša se zagreva 2 h na 70 °C. Smeša se ohladi na sobnu temperaturu, filtrira kroz špric filter i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1) da se dobije (S)-1-(fluorometil)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-5a,5b,8,8,11apentametil- 3a-((2-(3-metil-2-oksoimidazolidin-1-il)etil)amino)-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (35.6 mg, 74% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, Sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.88 (s, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.64 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 1H), 3.63 - 3.40 (m, 8H), 2.84 (s, 3H), 2.85 - 2.81 (m, 1H), 2.61 (d, J=16.5 Hz, 1H), 2.31 - 1.12 (m, 27H), 1.76 (s, 3H), 1.15 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.95 (s, 3H); LC/MS m/e 692.6 [(M+H)<+>, izračunato za C43H67FN3O3692.5], tR= 4.19 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 18.80 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.44 min.
Primer 2-27
Izrada (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-acetil-3,3-dimetil-2-oksopiperazin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilne kiseline
[0268]
2 2
Faza 1
-
Faza 1. Izrada 4-acetil-3,3-dimetilpiperazin-2-ona
U rastvor 3,3-dimetilpiperazin-2-ona (50 mg, 0.390 mmol) u CH2Cl2(1.2 mL) se na 0 °C doda N,N-diizopropiletilamin (0.204 mL, 1.170 mmol) nakon toga se polako dodaje acetil hlorid (0.031 mL, 0.429 mmol). Reaktivna smeša se meša 4 h na 0 °C. Smeša se nakon toga koncentruje. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (25% 4:1 CH2Cl2:MeOH sa 0.2% NH4OH/75% CH2Cl2→ 100% 4:1 CH2Cl2:MeOH sa 0.2% NH4OH; 40 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije 4-acetil-3,3-dimetilpiperazin-2-on (59.6 mg, 0.350 mmol, 90% prinos) kao bezbojna čvrsta supstnaca:<1>H NMR (400MHz, HLOROFORM-d) δ 3.64 - 3.57 (m, 2H), 3.46 - 3.39 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 1.77 (s, 6H); LC/MS (ESI) m/e 171.3
2
[(M+H)<+>, izračunato za C8H15N2O2171.2], tR= 0.43 min (postupak 2-1).
Faza 2. Izrada (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hloretil)amino)- 5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata
Smeša (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-amino-5a,5b,8,8,11apentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13boktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen- 9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (100 mg, 0.152 mmol), 2-hloracetaldehida (0.028 mL, 0.229 mmol) i bor-2-pikolin kompleksa (24.46 mg, 0.229 mmol) u MeOH (1 mL) i sirćetnoj kiselini (0.2 mL) se meša 18 h na sobnoj temperaturi . Smeša se prenese u levak za razdvajanje koji sadrži zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (10 mL). Vodeni sloj se ekstrahuje sa dihlormetanom (4 x 15 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa slanim rastvorom (10 mL), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju. Produkt se prečisti hromatografijom na koloni silika gela (10% 9:1 aceton:metanol/90% heksani → 50% 9:1 ace ton:metanol/50% heksani; 40 g kolona, λ = 220 nm) da se dobije (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hloretil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop- 1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilat (57 mg, 0.079 mmol, 52% prinos) kao bezbojna pena:<1>H NMR (500MHz, HLOROFORM-d) δ 7.40 - 7.31 (m, 5H), 5.33 (br. s., 1H), 5.23 -5.16 (m, 2H), 5.14 (dd, J=6.1, 1.7 Hz, 1H), 4.73 (d, J=2.0 Hz, 1H), 4.63 - 4.56 (m, 2H), 4.53 -4.46 (m, 1H), 3.72 - 3.65 (m, 2H), 2.85 - 2.72 (m, 2H), 2.67 - 2.57 (m, 2H), 2.17 - 1.02 (m, 27H), 1.71 (s, 3H), 1.08 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.92 (s, 3H), 0.90 (s, 3H), 0.86 (s, 3H); LC/MS
2 4
m/e 718.6 [(M+H)<+>, izračunato za C46H66ClFNO2718.5], tR= 4.82 min (postupak 2-3).
Faza 3. U smešu (S)-benzil 4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-hloretil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilata (22 mg, 0.031 mmol), 4-acetil-3,3-dimetilpiperazin-2-ona (15.64 mg, 0.092 mmol) i tetrabutilamonijum bromida (9.87 mg, 0.031 mmol) u THF (0.6 mL) se na 0 °C u atmosferi azota doda natrijum bis(trimetilsilil)amid (0.092 mL, 0.092 mmol). Smeša se meša 5 min na 0 °C. Kupatilo za hlađenje se ukloni i reaktivna smeša se nakon toga zagreva 14 h na 75 °C. Smeša se koncentruje i ostatak se rastvori u smeši dioksan/metanol/voda i neutrališe dodavanjem 2 N rastvora HCl (0.10 mL). Rastvor se filtrira i prečisti reverzno faznom preparativnom HPLC (postupak 2-1) da se dobije (S)-4-((1R,3aS,5aR,5bR,7aR,11aS,11bR,13aR,13bR)-3a-((2-(4-acetil-3,3-dimetil- 2-oksopiperazin-1-il)etil)amino)-5a,5b,8,8,11a-pentametil-1-(prop-1-en-2-il)-2,3,3a,4,5,5a,5b,6,7,7a,8,11,11a,11b,12,13,13a,13b-oktadekahidro-1H-ciklopenta[a]hrizen-9-il)-1-(fluorometil)cikloheks-3-enekarboksilna kiselina · TFA (9.6 mg, 34% prinos) kao bela amorfna čvrsta supstanca:<1>H NMR (500MHz, sirćetna kiselina-d4) δ 5.39 (br. s., 1H), 5.25 (d, J=4.7 Hz, 1H), 4.88 (s, 1H), 4.76 (s, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.47 (m, 1H), 3.96 - 3.76 (m, 3H), 3.73 - 3.64 (m, 3H), 3.53 (t, J=4.1 Hz, 2H), 2.82 (t, J=11.1 Hz, 1H), 2.61 (d, J=16.6 Hz, 1H), 2.31 - 1.12 (s, 27H), 2.22 (s, 3H), 1.79 (s, 3H), 1.77 (s, 6H), 1.22 (s, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.99 (s, 3H), 0.96 (s, 3H); LC/MS (ESI) m/e 762.6 [(M+H)<+>, izračunato za C47H73FN3O4762.6], tR= 4.29 min (postupak 2-2); HPLC (postupak 2-1): tR= 19.04 min; HPLC (postupak 2-2): tR= 20.23 min.
[0269] Ispitivanje ćelijske kulture HIV - MT-2 ćelije i 293T ćelije su dobijene od NIH AIDS Research i Reference Reagent Program-a. MT-2 ćelije su razmnožavane u RPMI 1640 medijumu obogaćenom sa 10% serumom fetusa govečeta inaktiviranim toplotom, 100 µg/mL penicilina G i do 100 jedinica/mL streptomicina.293T ćelije su razmnožavane u DMEM medijumu obogaćenom sa 10% serumom fetusa govečeta inaktiviranim toplotom (FBS), 100 jedinica/mL penicilina G i 100 µg/mL streptomicina. Provirusni DNK klon NL4-3je dobijen od NIH AIDS Research i Reference Reagent Program-a. Rekombinantni NL4-3virus, u kome je deo nef gena iz NL4-3zamenjen sa Renilla luciferaza genom, je korišćen kao referentni virus. Pored toga, ostatak Gag P373 je promenjen u P373S. Ukratko, rekombinantni virus je
2
izrađen transfekcijom izmenjenog provirusnog klona NL4-3. Transfekcije su izvršene u 293T ćelijama pomoću LipofectAMIN PLUS iz Invitrogena (Carlsbad, CA), u skladu sa uputstvima proizvođača. Virus je titriran u MT-2 ćelijama koristeći kao marker aktivnost luciferaza enzima. Luciferaza je kvantifikovana pomoću Dual luciferaza kita proizvođača Promega (Madizon, WI), sa modifikacijama na protokol proizvođača. Razblaženi Passive Lysis rastvor je prethodno izmešan sa reruspendovnim reagensom za analizu luciferaze i resuspendovanim Stop & Glo substratom (2:1:1 odnos). Pedeset (50) µL smeše se doda u svako aspirirano udubljenje ploča za analizu a aktivnost luciferaze se odmah meri na Wallac TriLux (Perkin-Elmer). Antivirusne aktivnosti inhibitora na rekombinantni virus su kvantifikovane merenjem aktivnosti luficeraze u ćelijama inficiranim u toku 4-5 dana sa NLRluc rekombinantima u prisustvu serijskih razblaženja inhibitora. EC50vrednosti za jedinjenja su niže date u Tabeli 1.
[0270] Određivanje EC50za WT, EC50za A364V i EC50za 92UG029 viruse:
WT se odnosi na izvorni tip HIV virusa.
[0271] HIV-1 NL4-3ekspresujući Renilla luciferaza gen je konvertovan u gag A364V virus pomoću mesta specifične mutageneze. A364V je mesto specifičnog mutanta.
[0272] HIV-192UG029 je dobijen od NIH (kataloški broj: 1650). On je subtip A Gag i subtip A Env, X4 (SI) virusa iz Ugande. Referenca: WHO mreža za HIV izolaciju i karakterizaciju. AIDS Res Hum Retroviruses 10:1359, 1994. Gag/Pr region od 92UG029 je korišćen da zameni postojeći u HIV-1 NL4-3virus ekspresujućem Renilla luciferaza genu.
[0273] Oba rekombinantna virusa su korišćena kako je prethodno opisano u ispitivanju HIV ćelijske kulture za NL4-3virus. EC50WT, EC50A364V i EC5092UG029 rezultati za jedinjenja su pokazani u Tabeli 1 i Tabeli 2.
Rezultat Tabele 2 je generisan sa 3x većim ubačenim virusom nego rezultat generisan za rezultat regularnog praćenja objavljen u Tabeli 1.
Ključni biološki podaci za EC50S
[0274]
2
TABELA 1
2
2
2
2
21
22
2
24
2
2
2
2
2
2
21
22
2
Komparativni rezultati
[0275] Za ovaj aspekt, komparativna jedinjenja A i B (koja su data i opisana u US 20130210787 - WO 2013/123019), kao i jedinjenje 2 kao deo ovog pronalaska, su pripremljeni kao smeša 1-(R) i 1-(S)-diastereomera i procenjena im je potencija u odnosu na WT, A364V rezistentni virus i clade virus 92UG029. Jedinjenje A pokazuje dobru potenciju u odnosu na WT, ali je približno sedam puta i >100 puta manje potentan nego jedinjenje 2 u odnosu na A364V i 92UC029, tim redom. Jedinjenje B ima uporedivu potenciju u odnosu na WT kada se poredi sa jedinjenjem 2. Međutim, jedinjenje B je 6 puta manje potentno nego jedinjenje 2 u odnosu na druga dva virusa (A364V i 92UC029). Izabranim jedinjenjima su takođe procenjivane farmakokinetičke osobine na pacovima (kako je prikazano). Rezultati su pokazani u niže datoj Tabeli 2. Jedinjenje 2 ima bolji kombinovani profil (EC50WT EC50A364V+ EC5092UC029) u poređenju sa jedinjenjima A i B. Prema tome, pojedinačni diastereomeri jedinjenja 2a i 2b su odvojeni i/ili posebno sintetizovani za dalju procenu. Potencija/PK pojedinačnih diastereomera (jedinjenja 2a i 2b) su takođe uporedive sa onim što je uočeno sa smešom diastereoizomera (jedinjenje 2). Prema tome 2a i 2b su takođe održiva jedinjenja. Mada razvoj virusne rezistencije na bilo koji antiretrovirusni lek može da bude značajno pitanje u tretmanu HIV-1 infekcije, ona jedinjenja sa najboljim profilom potencije i za izvorni tip i mutant oblike HIV-1 virusa su često odlični kandidati za razvoj leka.
2 4
TABELA 2
Farmakokinetičke studije na pacovima:
[0276] Za PO farmakokinetičke studije jedinjenja na pacovima, svako jedinjenje je rastvoreno u PEG- 400/etanol (90/10) u obliku rastvora.
[0277] Korišćeni su mužjaci Sprague-Dawley pacova (300-350 g, Hilltop Lab Animals, Inc.,
2
Scottsdale, PA) sa kanilama implantiranim u jugularnu venu. Pacovi nisu hranjeni u toku noći u PO farmakokinetičkim studijama. Iz jugularne vene su sakupljeni uzorci krvi u količini od 0.3 mL u mikrokivete koje sadrže EDTA (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), i centrifugirani da se izdvoji plazma.
[0278] U PO studiji testiranih jedinjenja, pacovi (n = 3) su primili oralnu dozu od 5 mg/kg datog jedinjenja. Serijski uzorci krvi su sakupljeni pre doziranja i 15, 30, 45, 60, 120, 240, 360, 480 i 1440 min nakon doziranja.
[0279] Količina jedinjenja u plazmi. Alikvote uzoraka plazme pacova, uzorci su pripremljeni za analizu precipitacijom proteina plazme sa dve zapremine acetonitrila koji sadrži unutrašnji standard sličnog jedinjenja. Nastali supernatanti su odvojeni od precipitiranih proteina centrifugiranjem 10 minuta i preneti u bočice za automatsko uzorkovanje. Uzorci su ili pripremljeni manuelno ili upotrebom Tomtec sitema za automatsko pipetiranje. Alikvot od 5 µL se injektuje za analize.
[0280] HPLC sistem se sastoji od dve Shimadzu LC10AD pumpe (Columbia, MD), Shimadzu SIL-HTC automatskog uzorkovača (Columbia, MD) i dela Hewlett Packard Series 1100 kolone (Palo Alto, CA). Kolona je YMC Pro C18 (2.0 x 50 mm, 3 µm čestice, Waters Co., Milford, MA), održavana na 60°C i brzini protoka od 0.3 ml/min. Mobilna faza se sastoji od 10 mM amonijum formata i 0.1mravlje kiseline u vodi (A) i 100% 10 mM amonijum formata i 0.1% mravlje kiseline u metanolu (B). Početna kompozicija mobilne faze je 95% A. Nakon injektovanja uzorka, mobilna faza se promeni u 15% A/85% B u toku 2 minuta i ova kompozicija se zadržava još 1 minut. Nakon toga se mobilna faza vrati na početne uslove i kolona se ponovo uravnoteži u toku 1 minut. Ukupno vreme anlize je 4 minuta.
[0281] HPLC je međusobno povezan sa Mikromass Quattro LC. Ultra visoko čist azot je koršćen kao gas za nebulizaciju i desolvaciju pri brzini protoka od 100 L/h za nebulizaciju i 1100 L/h za desolvaciju. Temperatura desolvacije je 300°C i temperatura izvora je 150°C. Za rezultate akvizicije je korišćen monitoring izabranih reakcija (SRM). Joni koji predstavljaju (M+H)<+>vrste za jedinjenje i unutrašnji standard su izabrani u MS1 i koliziono disocirani sa argonom pod pritiskom od 2 x 10<-3>tora, da se formira specifični produkt jona koji se nakon toga prati pomoću MS2.
2

Claims (7)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje, naznačeno time što je izabrano iz grupe:
    ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.
  2. 2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to:
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
  3. 3. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje jedno ili više jedinjenja ili soli u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 2, zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, podloga i/ili razblaživača. 2
  4. 4. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje jedinjenje
    ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so zajedno sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, podloga i/ili razblaživača.
  5. 5. Farmaceutska kompozicija u skladu sa patentnim zahtevom 4, korisna za lečenje infekcije sa HIV, naznačena time što dodatno uključuje sredstvo za tretman AIDS-a iuzabrano iz grupe koja se sastoji od: (a) AIDS antivirusnog sredstva; (b) antiinfektivnog sredstva; (c) imunomodulatora; i (d) inhibitora unošenja HIV.
  6. 6. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 2 za upotrebu u lečenju sisara inficiranih sa HIV virusom, naznačeno time što uključuje primenu na tom sisaru antivirusne efektivne količine jedinjenja ili soli u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 2, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, podloga ili razblaživača.
  7. 7. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 2, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5
RS20201276A 2014-04-11 2015-04-09 Triterpenoidi sa inhibitornom aktivnošću na sazrevanje hiv, supstituisani na položaju 3 sa alifatičnim prstenom koji sadrži haloalkil supstituent RS60959B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461978306P 2014-04-11 2014-04-11
PCT/US2015/025029 WO2015157483A1 (en) 2014-04-11 2015-04-09 Triterpenoids with hiv maturation inhibitory activity, substituted in position 3 by a non-aromatic ring carrying a haloalkyl substituent
EP15718402.9A EP3129392B1 (en) 2014-04-11 2015-04-09 Triterpenoids with hiv maturation inhibitory activity, substituted in position 3 by a non-aromatic ring carrying a haloalkyl substituent

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS60959B1 true RS60959B1 (sr) 2020-11-30

Family

ID=53002809

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20201276A RS60959B1 (sr) 2014-04-11 2015-04-09 Triterpenoidi sa inhibitornom aktivnošću na sazrevanje hiv, supstituisani na položaju 3 sa alifatičnim prstenom koji sadrži haloalkil supstituent

Country Status (36)

Country Link
US (5) US9527882B2 (sr)
EP (2) EP3129392B1 (sr)
JP (1) JP6568202B2 (sr)
KR (1) KR102411082B1 (sr)
CN (1) CN106604909B (sr)
AR (1) AR101077A1 (sr)
AU (1) AU2015243500B2 (sr)
BR (1) BR112016023414B1 (sr)
CA (1) CA2944778C (sr)
CL (1) CL2016002528A1 (sr)
CR (1) CR20160472A (sr)
CY (1) CY1123742T1 (sr)
DK (1) DK3129392T3 (sr)
DO (1) DOP2016000277A (sr)
EA (1) EA030178B1 (sr)
ES (1) ES2828705T3 (sr)
HR (1) HRP20201645T1 (sr)
HU (1) HUE051719T2 (sr)
IL (1) IL248053B (sr)
LT (1) LT3129392T (sr)
MA (1) MA39374A1 (sr)
MX (1) MX374543B (sr)
NZ (1) NZ724644A (sr)
PE (1) PE20161391A1 (sr)
PH (1) PH12016501951B1 (sr)
PL (1) PL3129392T3 (sr)
PT (1) PT3129392T (sr)
RS (1) RS60959B1 (sr)
SG (2) SG10201709017PA (sr)
SI (1) SI3129392T1 (sr)
SM (1) SMT202000581T1 (sr)
TW (1) TWI659964B (sr)
UA (1) UA120927C2 (sr)
UY (1) UY36070A (sr)
WO (1) WO2015157483A1 (sr)
ZA (1) ZA201606748B (sr)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX374543B (es) 2014-04-11 2025-03-06 Viiv Healthcare Uk No 4 Ltd Triterpenoides con actividad inhibidora de la maduración del virus de inmunodeficiencia humana, sustituidos en la posición 3 con un anillo no aromático que lleva un sustituyente haloalquilo.
RU2018116772A (ru) * 2015-11-20 2019-12-20 ВАЙВ ХЕЛТКЕР ЮКей (N4) ЛИМИТЕД Композиции ингибитора созревания ВИЧ
AR107512A1 (es) 2016-02-04 2018-05-09 VIIV HEALTHCARE UK Nº 5 LTD Triterpenoides modificados en c-3 y c-17 como inhibidores del vih-1
EP3506902A4 (en) * 2016-08-31 2020-04-22 VIIV Healthcare Company COMBINATIONS AND USES AND TREATMENTS THEREOF
JP7436385B2 (ja) * 2018-04-24 2024-02-21 ヴィーブ ヘルスケア ユーケー（ナンバー５）リミテッド Ｈｉｖ成熟阻害活性を有する化合物
RS64113B1 (sr) * 2018-12-10 2023-04-28 Viiv Healthcare Uk No 4 Ltd Mesilatna so amino-lupan jedinjenja koja inhibitorno deluje na sazrevanje hiv
CN109705189B (zh) * 2018-12-29 2020-06-05 中国医学科学院药用植物研究所 具有式i所示结构的三萜衍生物及其制备方法和应用
CN110981765A (zh) * 2019-11-07 2020-04-10 肇庆巨元生化有限公司 一种25-羟基维生素d3中间体的制备方法
IL293566A (en) * 2019-12-09 2022-08-01 Viiv Healthcare Co Pharmaceutical preparations containing Cabotgravir

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4906661A (en) 1981-11-12 1990-03-06 E. I. Du Pont De Nemours And Company Esters of aryloxypropanolamine derivatives
US5413999A (en) 1991-11-08 1995-05-09 Merck & Co., Inc. HIV protease inhibitors useful for the treatment of AIDS
US5679828A (en) 1995-06-05 1997-10-21 Biotech Research Labs, Inc. Betulinic acid and dihydrobetulinic acid derivatives and uses therefor
AR035311A1 (es) 1999-01-27 2004-05-12 Wyeth Corp Derivados de acido hidroxamico que contienen alquinilo, como inhibidores de las metalloproteinasas de matriz y de la tace, composicion farmaceutica y el uso de los mismos para la manufactura de un medicamento
US20040110785A1 (en) 2001-02-02 2004-06-10 Tao Wang Composition and antiviral activity of substituted azaindoleoxoacetic piperazine derivatives
US7365221B2 (en) 2002-09-26 2008-04-29 Panacos Pharmaceuticals, Inc. Monoacylated betulin and dihydrobetulin derivatives, preparation thereof and use thereof
US7745625B2 (en) 2004-03-15 2010-06-29 Bristol-Myers Squibb Company Prodrugs of piperazine and substituted piperidine antiviral agents
EP1730163A4 (en) 2004-03-17 2009-12-30 Panacos Pharmaceuticals Inc Pharmaceutical salts of 3-O- (3,3-dimethylsuccinyl) betulinic acid
TW200628161A (en) 2004-11-12 2006-08-16 Panacos Pharmaceuticals Inc Novel betulin derivatives, preparation thereof and use thereof
WO2008115281A2 (en) 2006-10-16 2008-09-25 Myriad Genetics, Inc. Compounds for treating viral infections
WO2012106190A1 (en) 2011-01-31 2012-08-09 Bristol-Myers Squibb Company C-17 and c-3 modified triterpenoids with hiv maturation inhibitory activity
WO2009020732A1 (en) * 2007-08-03 2009-02-12 Advanced Life Sciences, Inc. Lupane-type triterpenoids modified at 30-position and analogues thereof
JP2011511812A (ja) 2008-02-14 2011-04-14 バイロケム ファーマ インコーポレイテッド 新規１７βルパン誘導体
US9067966B2 (en) 2009-07-14 2015-06-30 Hetero Research Foundation, Hetero Drugs Ltd. Lupeol-type triterpene derivatives as antivirals
BR112012030810A2 (pt) 2010-06-04 2019-09-24 Bristol-Myers Squibb Company "c-28 amidas de derivados de ácido c-3 betulínico modificados como inibidores de maturação de hiv"
CA2801487C (en) * 2010-06-04 2017-12-05 Bristol-Myers Squibb Company Modified c-3 betulinic acid derivatives as hiv maturation inhibitors
HRP20151212T1 (hr) 2011-01-31 2015-12-04 Bristol-Myers Squibb Company C-28 AMINI C-3 MODIFICIRANIH DERIVATA BETULINSKE KISELINE KAO INHIBITORI SAZRIJEVANJA HIV-a P
US8906889B2 (en) 2012-02-15 2014-12-09 Bristol-Myers Squibb Company C-3 cycloalkenyl triterpenoids with HIV maturation inhibitory activity
US8889854B2 (en) 2012-05-07 2014-11-18 Bristol-Myers Squibb Company C-17 bicyclic amines of triterpenoids with HIV maturation inhibitory activity
MX374543B (es) 2014-04-11 2025-03-06 Viiv Healthcare Uk No 4 Ltd Triterpenoides con actividad inhibidora de la maduración del virus de inmunodeficiencia humana, sustituidos en la posición 3 con un anillo no aromático que lleva un sustituyente haloalquilo.

Also Published As

Publication number Publication date
SMT202000581T1 (it) 2020-11-10
TWI659964B (zh) 2019-05-21
EP3129392A1 (en) 2017-02-15
US10780102B2 (en) 2020-09-22
MX2016013425A (es) 2017-05-02
KR20160147809A (ko) 2016-12-23
EP3750910A1 (en) 2020-12-16
US9527882B2 (en) 2016-12-27
PH12016501951B1 (en) 2021-02-19
AU2015243500A1 (en) 2016-10-27
IL248053B (en) 2020-04-30
ES2828705T3 (es) 2021-05-27
DOP2016000277A (es) 2017-02-28
DK3129392T3 (da) 2020-10-19
CA2944778A1 (en) 2015-10-15
US20170056420A1 (en) 2017-03-02
HRP20201645T1 (hr) 2020-12-25
MX374543B (es) 2025-03-06
PE20161391A1 (es) 2017-01-10
EA030178B1 (ru) 2018-06-29
CN106604909A (zh) 2017-04-26
SG11201608041QA (en) 2016-10-28
JP2017510659A (ja) 2017-04-13
BR112016023414A2 (sr) 2017-08-15
HUE051719T2 (hu) 2021-03-29
LT3129392T (lt) 2020-11-10
CY1123742T1 (el) 2022-03-24
US10245275B2 (en) 2019-04-02
SG10201709017PA (en) 2017-11-29
JP6568202B2 (ja) 2019-08-28
IL248053A0 (en) 2016-11-30
PL3129392T3 (pl) 2021-04-06
TW201623324A (zh) 2016-07-01
US11464790B2 (en) 2022-10-11
UA120927C2 (uk) 2020-03-10
AR101077A1 (es) 2016-11-23
CR20160472A (es) 2017-03-10
BR112016023414B1 (pt) 2022-09-13
US20150291655A1 (en) 2015-10-15
NZ724644A (en) 2023-07-28
CA2944778C (en) 2022-06-14
SI3129392T1 (sl) 2020-11-30
KR102411082B1 (ko) 2022-06-17
AU2015243500B2 (en) 2017-03-30
US20190151336A1 (en) 2019-05-23
PT3129392T (pt) 2020-10-30
WO2015157483A1 (en) 2015-10-15
EP3129392B1 (en) 2020-08-05
MA39374A1 (fr) 2018-06-29
ZA201606748B (en) 2018-05-30
EA201691760A1 (ru) 2017-02-28
US20200360404A1 (en) 2020-11-19
PH12016501951A1 (en) 2017-01-09
UY36070A (es) 2015-10-30
CL2016002528A1 (es) 2017-06-23
US20170340650A1 (en) 2017-11-30
CN106604909B (zh) 2019-02-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11464790B2 (en) Triterpenoids with HIV maturation inhibitory activity
EP2670764B1 (en) C-28 amines of c-3 modified betulinic acid derivatives as hiv maturation inhibitors
EP2847208B1 (en) C-17 bicyclic amines of triterpenoids with hiv maturation inhibitory activity
EP2814834B1 (en) C-3 cycloalkenyl triterpenoids with hiv maturation inhibitory activity
CA2801491A1 (en) C-28 amides of modified c-3 betulinic acid derivatives as hiv maturation inhibitors
RS61746B1 (sr) C-3 i c-17 modifikovani triterpenoidi kao hiv-1 inhibitori
WO2016077561A1 (en) Oxolupene derivatives
HK40041853A (en) Triterpenoids with hiv maturation inhibitory activity
HK1232548B (en) Triterpenoids with hiv maturation inhibitory activity, substituted in position 3 by a non-aromatic ring carrying a haloalkyl substituent
EP3218389A1 (en) Extended betulinic acid analogs