RS61210B1 - Kompozicije koje sadrže bakterijske sojeve - Google Patents

Description

Opis

TEHNIČKA OBLAST

[0001] Ovaj pronalazak je u oblasti kompozicija koje uključuju sojeve bakterija izolovanih iz digestivnog trakta sisara i upotreba takvih kompozicija u lečenju bolesti.

STANJE TEHNIKE PRONALASKA

[0002] Smatrlo se da je lјudsko crevo sterilno in utero, ali je odmah po rođenju izloženo širokom spektru mikroorganizama poreklom od majke i iz okolne životne sredine. Nakon toga nastupa dinamičan period koji obuhvata kolonizaciju i sukcesiju mikroorganizama, na koji utiču faktori kao što su način porođaja, životna sredina, ishrana i genotip domaćina. Svi ovi faktori utiču na sastav mikrobiote creva, posebno tokom ranog perioda života. Nakon toga, mikrobiota se stabilizuje i postaje slična mikrobioti odraslih osoba [1]. Mikrobiota creva čoveka sadrži više od 500-1000 različitih filotipova koji u osnovi pripadaju dvema glavnim bakterijskim filumima, Bacteroidetes i Firmicutes [2]. Uspešni simbiotski odnosi koji proističu iz bakterijske kolonizacije lјudskog creva pružaju širok spektar metaboličkih, strukturnih, zaštitnih i drugih korisnih funkcija. Pojačane metaboličke aktivnosti kolonizovanog creva obezbeđuju da se inače nesvraljive komponente hrane razgrađuju oslobađanjem nusproizvoda koji pedstavljaju važan izvor hranlјivih materija za domaćina. Slično tome, imunološki značaj mikrobiote creva dobro je prepoznat i vidljiv je kod životinja koje su razvijene bez prisustva migroorganizama i zbog toga imaju narušen imunski sistem koji se funkcionalno rekonstituiše nakon uvođenja komensalnih bakterija [3-5].

[0003] Dramatične promene u sastavu mikrobiote zabeležene su kod gastrointestinalnih poremećaja poput zapalјenske bolesti creva (IBD, od eng. inflammatory bowel disease). Na primer, količina bakterija Clostridium klastera XIVa smanjena je kod pacijenata sa IBD-om, dok je broj E. coli povećan, što ukazuje na promenu ravnoteže simbionata i patobionata unutar creva [6-9].

[0004] Kao priznanje potencijalnog pozitivnog efekta koji određeni sojevi bakterija mogu imati na creva životinja, predloženi su različiti sojevi za upotrebu u lečenju različitih bolesti (videti, na primer, [10-13]). Takođe, određeni sojevi, uklјučujući uglavnom sojeve Lactobacillus i Bifidobacterium, predloženi su za upotrebu u lečenju različitih inflamatornih i autoimunskih bolesti koje nisu direktno povezane sa intestinumom (videti u [14] i [15] za revijalne preglede). Sposobnost Roseburia hominis da reguliše imunski sistem sugerisana je u [16]. Međutim, veza između različitih bolesti i različitih bakterijskih sojeva i specifični efekti određenih bakterijskih sojeva na intestinum i na sistemski nivo organizma, kao i na bilo koje vrste bolesti su slabo okarakterisane, posebno za neurodegenerativne poremećaje.

[0005] Od nedavno je povećano interesovanje u ovoj oblasti u vezi sa promenama u mikrobiomu creva koje mogu imati patofiziološku ulogu u humanim bolestima mozga [17]. Preklinički i klinički dokazi nedvosmisleno ukazuju na vezu između razvoja mozga i mikrobiote [18]. Rastući broj prekliničke literature pokazao je postojanje dvosmerne signalizacije između mozga i mikrobioma creva, uklјučujući brojne neurokrine i endokrine signalne sisteme. Zaista, povećani nivoi Clostridium vrste u mikrobiomu povezani su sa poremećajima mozga [19], kao i neravnoteža između razdela Bacteroidetes i Firmicutes je takođe povezana sa poremećajima u razvoju mozga [20]. U studijama koje ukazuju na nedostatak promena u mikrobioti između pacijenata i zdravih ispitanika dovode u pitanje nalaze da su izmenjeni nivoi komensalnih mikroorganizama creva, uklјučujući rodove Bifidobacterium, Lactobacillus, Sutterella, Prevotella i Ruminococcus i familiju Alcaligenaceae, uklјučeni u poremećaje centralnog nervnog sistema (CNS) posredovane imunskim odgovorom [10]. Roseburia hominis je predložena za lečenje različitih poremećaja, uklјučujući astmu, reumatoidni artritis i multiplu sklerozu [21].

[0006] Poput astme i reumatoidnog artritisa, multipla skleroza je prvenstveno posredovana imunskim sistemom. Imunski sistem napada mijelinizovane aksone u centralnom nervnom sistemu, uništavajući mijelin i tako nastaju plake ili lezije. Demijelinizacija se javlјa naročito u optičkim nervima, kičmenoj moždini, moždanom stablu, malom mozgu i jukstakortikalnom i periventrikularnom delu bele mase.

[0007] Kao takva, multipla skleroza ima drugačiju patologiju u odnosu na druge neurodegenerativne bolesti, kao što su Parkinsonova bolest, Alchajmerova bolest ili demencija. Na primer, multipla skleroza se obično dijagnostifikuje kod pacijenata u 20.-im i 30.-im godinama, dok se mnoge druge neurodegenerativne bolesti, poput Parkinsonove bolesti, Alchajmerove i demencije dijagnostifikuju pretežno kod pacijenata starijih od 65 godina.

[0008] Parkinsonova bolest, kao i mnoge neurodegenerativne bolesti, je prvenstveno posredovana akumulacijom pogrešno savijenih proteina. Parkinsonova bolest je sinukleinopatija koja uklјučuje akumulaciju α-sinukleina, koji se agregiraju kao nerastvorlјive fibrile u Levijevim telima unutar citoplazme neuronskog tela. Akumulacija α-sinukleina je toksična i narušava funkcije mitohondrija, lizozoma i endoplazmatičnog retikuluma i ometa transport mikrotubulama.

[0009] Nesteroidni antiinflamatorni lekovi (NSAID, od eng. nonsteroidal anti-inflammatory drug), kao što je ibuprofen, testirani su na efikasnost u lečenju različitih neuroloških oboljenja, ali klinički uticaj NSAID na neurodegenerativne bolesti poput Parkinsonove bolesti ostaje nejasan. Iako su neke studije pokazale da je hronična upotreba NSAIL pruža zaštitu od Parkinsonove bolesti, druge studije nisu mogle da potvrde postojanje značajne veze. Nedavna metaanaliza je pokazala da upotreba ne-aspirinskih NSAID, posebno ibuprofena, smanjuje rizik od PD za 15%, dok upotreba aspirina nije pokazala nikakav efekat [22].

[0010] To ukazuje na to da je trenutno slabo okarakterisan praktični efekat veze između mikrobioma i bolesti mozga kod ljudi. Shodno tome, potrebne su direktnije analitičke studije kako bi se identifikovao terapeutski uticaj promene mikrobioma na neurodegenerativne poremećaje.

[0011] Postoji potreba u ovoj oblasti za novim metodama lečenja neurodegenerativnih poremećaja. Takođe postoji zahtev za karakterizacijom potencijalnih efekata crevnih bakterija kako bi se mogle razviti nove terapije koje bi koristile ove bakterije.

[0012] US2015/132264 opisuje upotrebu Roseburia hominis u lečenju imunskih poremećaja, homeostaze imunskog sistema i poremećaja creva. US 2015/071957 opisuje upotrebu vrsta Roseburia u lečenju autoimunskih ili antiinflamatornih poremećaja. WO 2016/203221 opisuje upotrebu bakterijskog soja roda Roseburia u lečenju i prevenciji inflamatornih i autoimunskih poremećaja, prvenstveno okarakterisanih aberantnim Th17/IL17 signalnim putem. Keshavarzian i sar. (Movement Disorders 2015; 30 (10) 1351-1360) opisuju bakterijski sastav debelog creva kod pacijenata sa Parkinsonovom bolešću. Jai Yin i sar. (J Am Heart Assoc 2015; 4 (11), page e002699) opisuju mikrobiotu creva kod pacijenata sa moždanim i ishemijskim napadima.

IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA

[0013] Pronalazači su razvili nove terapije za lečenje i prevenciju neurodegenerativnih poremećaja. Pronalazači su identifikovali da bakterijski sojevi iz roda Roseburia mogu biti efikasni za lečenje neurodegenerativnih bolesti. Kao što je opisano u primerima, primena kompozicija koje sadrže Roseburia hominis mogu zaštititi od reaktivnih kiseoničnih vrsta i sprečiti upale, delujući tako kao neuroprotektant. Pronalazači su takođe identifikovali da tretman sa Roseburia hominis može smanjiti aktivaciju LPS-om i mutiranim α-sinukleinom A53T, proinflamatornih molekula kao što su NTκB i IL-6. Pronalazači su identifikovali da tretman sa Roseburia hominis može smanjiti aktivnost deacetilacije histona i peroksidacije lipida in vitro, što može pomoći u smanjenju ćelijske smrti i apoptoze. Pronalazači su takođe utvrdili da Roseburia hominis može proizvesti indol koji može redukovati inflamaciju i oksidativni stres. Dalјe, pronalazači su pokazali da je tretman sa Roseburia hominis može povećati nivo kinurenina.

[0014] Pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja uključuje bakterijski soj roda Roseburia, za upotrebu u postupku lečenja ili sprečavanja bolesti ili stanja, izabranih iz grupe koju čine: Parkinsonova bolest, uklјučujući progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivnu supranuklearnu paralizu, Steele-Richardson-Olszewski sindrom, hidrocefalus normalnog pritiska, vaskularni ili arteriosklerotski parkinsonizam i indukovani parkinsonizam; Alchajmerova bolest, koja uključuje Bensonov sindrom; Hantingtonova bolest; amiotrofična lateralna skleroza; Lu Gerigova bolest; bolest motornih neurona; prionska bolest; spinocerebelarna ataksija; spinalna mišićna atrofija; demencija, koja uključuje Levijevo telo, vaskularnu i frontotemporalnu demencija; primarna progresivna afazija; blago kognitivno oštećenje; kognitivno oštećenje povezano sa HIV-om i kortikobazalna degeneracija.

[0015] U izabranim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Roseburia, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti, kao što su Parkinsonova bolest povezana sa faktorima životne sredine, porodični parkinsonizam, ili Parkinsonova bolest povezana sa opštim zapalјenskim statusom. Pronalazači su utvrdili da u in vitro modelima porodične ili Parkinsonove bolesti povezane sa faktorima životne sredine, tretman sa sojevima Roseburia može redukovati aktivaciju strane LPS-a i mutiranog α-sinukleina A53T proinflamatornih molekula kao što su NTκB i IL-6. U izabranim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Roseburia hominis, za upotrebu u lečenju Parkinsonove bolesti. Kompozicije koje sadrže Roseburia hominis mogu biti posebno efikasne za lečenje Parkinsonove bolesti.

[0016] U izabranim realizacijama, u kompoziciji je bakterijski soj Roseburia hominis. Pored toga mogu se koristiti blisko povezani sojevi, kao što su bakterijski sojevi koji imaju sekvencu 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sekvenci 16S rRNK bakterijskog soja Roseburia hominis. Poželјno je da bakterijski soj ima sekvencu 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična SEQ ID NO:1, 2 ili 3. Poželјno je da je sekvenca identična SEQ ID NO:3. Poželјno je da bakterijski soj koji je u upotrebi u ovom pronalasku ima sekvencu 16S rRNK predstavlјenu SEQ ID NO:3.

[0017] U određenim realizacijama, kompozicija pronalaska je za oralnu primenu. Oralna primena sojeva pronalaska može biti efikasna za neurodegenerativne poremećaje. Takođe, oralna primena je pogodna za pacijente i stručnjake i omogućava postizanje isporuke i/ili delimične ili potpune kolonizaciju creva.

[0018] U određenim realizacijama, kompozicija pronalaska sadrži jednu ili više farmaceutski prihvatlјivih pomoćnih supstanci ili nosača.

[0019] U određenim realizacijama, kompozicija pronalaska sadrži soj bakterija koji je liofilizovan. Liofilizacija je efikasna i pogodna tehnika za pripremu stabilnih kompozicija koje omogućavaju isporuku bakterija.

[0020] U određenim realizacijama, pronalazak obezbeđuje prehrambeni proizvod koji sadrži kompoziciju kako je gore opisano.

[0021] U određenim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju vakcine koja sadrži kompoziciju kako je gore opisana.

[0022] U određenim realizacijama pronalaska, kompozicija je za upotrebu u lečenju povrede mozga. Neuroprotektivna aktivnost kompozicija pronalaska i njihova sposobnost da smanje nivoe aktivnosti histonske deacetilaze (HDAC, od eng. histone deacetylase) mogu ih učiniti korisnim za lečenje povreda mozga. U izabranim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju moždanog udara, kao što je lečenje povreda mozga koja je posledica moždanog udara.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0023]

Slika 1: Smanjivanje nivoa sekrecije IL-6

Slika 2: Inhibicija α-sinukleinom indukovane aktivacije NFkB promotora

Slika 3: Inhibicija LPS-om indukovane aktivacije NFkB promotora

Slika 4: Promena antioksidativnog kapaciteta

Slika 5: Promena ukupnog antioksidativnog kapaciteta (oksidacija lipida)

Slika 6: Promena aktivnosti histonske deacetilaze (HDAC)

Slika 7: Nivo produkcije indola

Figura 8: Nivo produkcije kirunenina

Slika 9: Smanjivanje sekrecije IL-6 MRX001-om

Slika 10: Smanjivanje sekrecije IL-6 sojem A

Slika 11: A) Inhibicija α-sinukleinom indukovane aktivacije NFkB promotora i B) Inhibicija sojem A LPS-om indukovane aktivacije NFkB promotora

Slika 12: Smanjivanje sekrecije IL-6 sojem B.

Slika 13: A) Inhibicija α-sinukleinom indukovane aktivacije NFkB promotora i B) Inhibicija sojem B LPS-om indukovane aktivacije NTκB promotora

OPIS PRONALASKA

Sojevi bakterija

[0024] Kompozicije pronalaska sadrže bakterijski soj roda Roseburia. Primeri pokazuju da su bakterije ovog roda korisne za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja. Izabrani bakterijski sojevi su vrste Roseburia hominis, Roseburia faecis i Roseburia intestinalis.

[0025] Primeri vrste Roseburia koji se koriste u pronalasku uklјučuju Roseburia hominis, Roseburia cecicola, Roseburia faecis, Roseburia intestinalis i Roseburia inulinivorans. Roseburia su blago zakrivlјene štapićaste bakterije koje su strogo anaerobne i autohtone za creva sisara. Oni su iz filogenetskog klastera XIVa u okviru filuma Firmicutes. Bakterije proizvode butirat i aktivno se kreću pomoću brojnih flagela koje se nalaze duž udublјene strane i u grupi na jednom kraju [23]. Roseburia hominis i Roseburia intestinalis su nedavno opisane.

[0026] Primer za Roseburia hominis je soj deponovan pod uslovima iz Budimpeštanskog sporazuma u Nacionalnim kolekcijama industrijskih, prehrambenih i morskih bakterija (NCIMB) u NCIMB Ltd, Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen, UK, AB21 9YA, 21. oktobra 2004. Od strane Istraživačkog instituta pod pristupnim brojem NCIMB 14029<T.>Roseburia hominis A2-183<T.>(DSM = 16839<T>). Ostali primerni sojevi Roseburia hominis su opisani u [24]. GenBank/EMBL/DDBJ pristupni brojevi za sekvencu 16S rRNK gena sojeva Roseburia hominis su AY804148 i AJ270482 (ovde opisani kao SEQ ID NO:1 i SEQ ID NO:2).

[0027] Primer za Roseburia intestinalis je soj deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 13810 Roseburia intestinalis L1-82<T.>(DSM = 14610<T.>). Drugi primer je soj Roseburia intestinalis kako je opisano u [24]. Referenca [24] takođe opisuje primerne sojeve Roseburia faecis i Roseburia inulinivorans.

[0028] Bakterija Roseburia hominis koja je deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42383 je testirana u Primerima i ovde se takođe naziva sojem 433. Sekvenca 16S rRNK za soj 433 koji je testiran, je data u SEQ ID NO:3. Soj 433 je deponovan kod međunarodnog organa za deponovanje NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB219IA, Scotland) od strane GT Biologics Ltd. (Life Sciences Innovation Building, Aberdeen, AB25 2ZS, Scotland) 12. marta 2015. godine kao „Roseburia hominis 433" i dodelјen mu je pristupni broj NCIMB 42383. GT Biologics Ltd. je naknadno promenio ime u 4D Pharma Research Limited.

[0029] WO 2016/203221 opisuje davanje soja 433 miševima i pokazuje da može uticati na procese bolesti van creva (kao što su astma i artritis). Soj 433 takođe utiče na procese bolesti van creva u lečenju ovde opisanih neurodegenerativnih poremećaja.

[0030] Sekvenca genoma za soj 433 je data u WO2018/229188 kao SEQ ID NO:4. Ova sekvenca je generisana pomoću platforme PacBio RS II.

[0031] Bakterija Roseburia intestinalis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43043, testirana je u Primerima i ovde se naziva sojem A. Sekvenca 16S rRNK za soj A koja je testirana je data u SEQ ID NO:5. Soj A je deponovao kod međunarodnog organa za deponovanje NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB21 9IA, Scotland) od strane 4D Pharma Research Limited (Life Science Innovation Building, Aberdeen, AB252ZS, Scotland) 3. maja 2018. kao „Roseburia intestinalis“ i dodelјen mu je pristupni broj NCIMB 43043.

[0032] Primeri takođe opisuju bakteriju Roseburia faecis koja je testirana i označena kao soj B. Sekvenca 16S rRNK soja B koja je testirana data je u SEQ ID NO:6.

[0033] U određenim realizacijama, soj bakterije za upotrebu u pronalasku je Roseburia hominis. U određenm realizacijama, soj bakterija za upotrebu u pronalasku je Roseburia intestinalis. U određenm realizacijama, soj bakterija za upotrebu u pronalasku je Roseburia faecis.

[0034] Očekuje se da će sojevi bakterija blisko povezani sa sojem testiranim u primerima biti efikasni u lečenju ili prevenciji neurodegenerativnih bolesti i stanja posredovanih signalnim putevima IL-17 ili Th17. U određenm realizacijama, soj bakterija za upotrebu u pronalasku ima sekvencu 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sekvenci 16S rRNK bakterije soja Roseburia hominis. Poželјno je da bakterijski soj koji se koristi u pronalasku ima sekvencu 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična SEQ ID NO: 1, 2 ili 3. Poželјno je da je sekvenca SEQ ID NO:3. Poželјno je da soj bakterija koji se koristi u pronalasku ima sekvencu 16S rRNK predstavlјenu u SEQ ID NO:3.

[0035] U drugim realizacijama, bakterijski soj koji se koristi u pronalasku ima sekvencu 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sekvenci 16S rRNK bakterije soja Roseburia intestinalis. Poželјno je da bakterijski soj koji se koristi u pronalasku ima sekvencu 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična SEQ ID NO:5. Poželјno je da bakterijski soj koji se koristi u pronalasku ima sekvencu 16S rRNK predstavlјenu u SEQ ID NO:5.

[0036] U drugim realizacijama, bakterijski soj koji se koristi u pronalasku ima sekvencu 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sekvenci 16S rRNK bakterije soja Roseburia faecis. Poželјno je da bakterijski soj za upotrebu u pronalasku ima sekvencu 16S rRNK koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična SEQ ID NO:6. Poželјno je da bakterijski soj koji se koristi u pronalasku ima sekvencu 16S rRNK predstavlјenu u SEQ ID NO:6.

[0037] Očekuje se da će sojevi bakterija koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem 42383 ili NCIMB 43043 biti efikasni u lečenju ili prevenciji neurodegenerativnih poremećaja. Biotip je usko povezan sojem koji ima iste ili veoma slične fiziološke i biohemijske karakteristike.

[0038] Sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043 i koji su pogodni za upotrebu u pronalasku mogu se identifikovati sekvenciranjem drugih nukleotidnih sekvenci bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043. Na primer, u suštini celokupan genom se može sekvencirati, a soj biotipa za upotrebu u pronalasku može imati najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identičnosti sekvence u najmanje 80% svog ukupnog genoma (npr. preko najmanje 85%, 90%, 95% ili 99%, ili duž celog genoma). Druge pogodne sekvence za upotrebu u identifikovanju biotipskih sojeva mogu uklјučivati hsp60 ili ponavlјajuće sekvence kao što su BOX, ERIC, (GTG)5, ili REP ili [25]. Sojevi biotipa mogu imati sekvence sa najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% sličnosti sekvence sa odgovarajućom sekvencom bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043.

[0039] U određenim realizacijama, soj bakterija za upotrebu u pronalasku ima genom sa identičnošću sekvence sa SEQ ID NO:4 od WO2018/229188. U poželјnim realizacijama, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku ima genom sa najmanje 90% sličnosti sekvence (npr. najmanje 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% identičnosti sekvence) sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188 sa najmanje 60% (npr. najmanje 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100%) SEQ ID NO:4 od WO2018/229188. Na primer, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku može imati genom sa najmanje 90% sličnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 70% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 90% sličnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 80% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 90% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 90% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 90% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 100% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 70% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 95% sličnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 80% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 90% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 95% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 100% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 98% sličnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 70% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 98% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 80% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 98% identičnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 90% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, ili najmanje 98% sličnosti sekvence sa SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188, preko 100% SEQ ID NO:4 iz WO2018/229188.

[0040] Alternativno, sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043 i koji su pogodni za upotrebu u pronalasku mogu se identifikovati pomoću pristupnog broja depozita NCIMB 42383 ili NCIMB 43043 i analizom restrikcionih fragmenata i/ili PCR analizom, na primer korišćenjem tehnike zasnovane na polimorfizmu dužine fluorescentno amplifikovanih fragmenta (FAFLP, od eng. fluorescent amplified fragment length polymorphism) i ponovljenih DNK elemenata (rep)-PCR otisaka ili profilisanjem proteina ili delimičnim sekvenciranjem 16S ili 23S rDNK. U poželјnim realizacijama, takve tehnike se mogu koristiti za identifikaciju drugih sojeva Roseburia hominis, Roseburia faecis i Roseburia intestinalis.

[0041] U određenim realizacijama, sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043 i koji su pogodni za upotrebu u pronalasku su sojevi koji imaju isti obrazac kao i bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043 kada se analiziraju restrikcioni fragmenti amplifikovane ribozomske DNK (ARDRA, od eng. amplified ribosomal DNA restriction analysis), na primer kada se koristi restrikcioni enzim Sau3AI (za primerne metode i smernice videti u na primer [26]). Alternativno, sojevi biotipa su identifikovani kao sojevi koji imaju iste obrasce fermentacije uglјenih hidrata kao bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043.

[0042] Ostali sojevi Roseburia koji se koriste u kompozicijama i postupcima pronalaska, kao što su biotipovi bakterija deponovanih pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043, mogu se identifikovati bilo kojim odgovarajućim postupkom ili strategijom, uklјučujući testove opisane u primerima. Na primer, sojevi za upotrebu u pronalasku mogu se identifikovati kultivacijom ćelija neuroblastoma i potom procenom nivoa citokina i nivoa neuroprotekcije ili neuroproliferacije. Konkretno, bakterijski sojevi koji imaju slične obrasce rasta, metabolizma i/ili površinske antigene bakteriji deponovanoj pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043 mogu biti korisni u pronalasku. Korisni soj imaće uporedivu imuno-modulatornu aktivnost sa sojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043. Konkretno, soj biotipa imaće efekte na modelima neurodegenerativnih bolesti i na nivoima citokina uporedive sa efektima prikazanim u primerima, koji se mogu identifikovati upotrebom protokola kultivacije i administracije opisanih u primerima.

[0043] Posebno izabrani soj ovog pronalaska je Roseburia hominis deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42383. Ovaj primerni 433 soj je testiran u primerima i pokazano je da je efikasan u lečenju bolesti. Prema tome, otkriće pruža ćeliju, kao što je izolovana ćelija soja Roseburia hominis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42383, ili njen derivat. Otkriće takođe daje kompoziciju koja sadrži ćeliju Roseburia hominis soja deponovnog pod pristupnim brojem NCIMB 42383, ili njegov derivat. Pronalazak takođe obezbeđuje biološki čistu kulturu Roseburia hominis soja deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 42383. Otkriće takođe pruža ćeliju Roseburia hominis soja deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 42383, ili njen derivat, za upotrebu u terapiji, posebno za ovde opisane bolesti.

[0044] Posebno izabrani soj ovog pronalaska je Roseburia intestinalis deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 43043. Ovo je primerni soj A, testiran je u primerima i pokazano je da je efikasan u lečenju bolesti. Prema tome, otkriće pruža ćeliju, kao što je izolovana ćelija soja Roseburia intestinalis deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43043, ili njen derivat. Otkriće takođe daje kompoziciju koja sadrži ćeliju Roseburia intestinalis soja koja je deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43043, ili njen derivat. Otkriće takođe pruža biološki čistu kulturu Roseburia intestinalis soja deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43043. Otkriće takođe pruža ćeliju Roseburia intestinalis soja deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43043, ili njen derivat, za upotrebu u terapiji, posebno za ovde opisane bolesti. Derivat soja deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043 može biti potomački soj (potomstvo) ili soj gajen (subkloniran) iz originala. Derivat soja pronalaska može se modifikovati, na primer na genetskom nivou, bez narušavanja biološke aktivnosti. Konkretno, derivatni soj pronalaska je terapeutski aktivan. Derivatni soj imaće uporedivu imuno-modulatornu aktivnost sa originalnim sojem NCIMB 42383 ili NCIMB 43043. Konkretno derivatni soj će izazvati uporedive efekte na modele neurodegenerativne bolesti i imaće uporedive efekte na nivoe citokina sa efektima prikazanim u primerima, koji se mogu identifikovati korišćenjem protokola gajenja i administracije koji su opisani u primerima. Derivat soja NCIMB 42383 ili NCIMB 43043 generalno će biti biotip soja NCIMB 42383 ili NCIMB 43043.

[0045] Reference za ćelije Roseburia hominis soja deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42383 obuhvataju sve ćelije koje imaju iste sigurnosne karakteristike i karakteristike terapijske efikasnosti kao sojevi deponovani pod pristupnim brojem NCIMB 42383, a takve ćelije su obuhvaćene pronalaskom.

[0046] Reference za ćelije Roseburia intestinalis soja koje su deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 43043 obuhvataju sve ćelije koje imaju iste sigurnosne karakteristike i karakteristike terapijske efikasnosti kao sojevi deponovani pod pristupnim brojem NCIMB 43043, a takve ćelije su obuhvaćene pronalaskom.

[0047] U poželјnim realizacijama, sojevi bakterija u kompozicijama pronalaska su vijabilni i sposobni da delimično ili u potpunosti kolonizuju creva.

[0048] Otkriće takođe pruža biološki čistu kulturu Roseburia intestinalis soja koja je deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 43043. Otkriće takođe pruža ćeliju Roseburia intestinalis soja deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 43043, ili njen derivat, za upotrebu u terapiji, posebno za ovde opisane bolesti. Derivat soja deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 43043 može biti ćerka soj (potomstvo) ili soj gajen (subkloniran) iz originala.

[0049] Derivat soja pronalaska može se modifikovati, na primer na genetskom nivou, bez narušavanja biološke aktivnosti. Konkretno, derivatni soj pronalaska je terapeutski aktivan. Derivatni soj će imati uporedivu imuno-modulatornu aktivnost sa originalnim sojem NCIMB 42761. Konkretno, derivatni soj će izazvati uporedive efekte na modele neurodegenerativne bolesti sa efektima prikazanim u primerima, koji se mogu identifikovati korišćenjem protokola gajenja i administracije opisanih u primerima. Derivat soja NCIMB 43043 generalno će biti biotip soja NCIMB 43043.

[0050] Pozivanje na ćelije Roseburia intestinalis soja deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 43043 koji obuhvata sve ćelije koje imaju iste karakteristike bezbednosti i terapijske efikasnosti kao soj deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 43043, a takve ćelije su obuhvaćene pronalaskom. Dakle, u pojedinim realizacijama pozivanje na ćelije Roseburia intestinalis soja deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 43043 odnosi se samo na soj A deponovan pod NCIMB 43043 i ne odnosi se na bakterijski soj koji nije deponovan pod NCIMB 43043.

[0051] U poželјnim realizacijama, soj bakterija u kompozicijama pronalaska je vijabilan i sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva.

Terapijska upotreba

[0052] Kao što je prikazano u primerima, bakterijske kompozicije pronalaska su efikasne u lečenju neurodegenerativnih poremećaja. Konkretno, tretman kompozicijama ovog pronalaska povećava neuroproliferaciju i deluje kao neuroprotektant protiv sredstava koja uništavaju dopaminergične neurone. Prema tome, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja koji su rezultat smrti neurona.

[0053] Kompozicije pronalaska mogu smanjiti aktivaciju promotora NTkB, koji aktivira produkciju citokina, na primer IL-1β, IL-1α, IL-18, TNFα i IL-6. Lečenje ćelija mutiranim α-sinukleinom je model porodične Parkinsonove bolesti. Tačkasta mutacija na poziciji 53 adenina u treonin dovodi do pogrešnog savijanja α-sinukleina. Nepravilno savijeni α-sinuklein agregira u nerastvorlјive fibrile koje formiraju Levijeva tela. Stoga kompozicije pronalasku mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja koji su rezultat neuroinflamacije, pogrešnog savijanja proteina i/ili izloženostima faktora životne sredine. Kompozicije pronalaska se mogu koristiti za lečenje porodične Parkinsonove bolesti. Aktivacija promotora NFkB posredovana je preko TLR4. Poznato je da TLR4 posreduje u ćelijskoj smrti u mišjem modelu MPTP, koji simulira Parkinsonovu bolest. Kompozicije pronalaska se mogu koristiti za inhibiranje TLR4 signalnog puta da aktivira promotor NFkB. Od posebnog značaja za PD je to što je utvrđeno da su povećani i TLR2 i TLR4 u mozgu pacijenata sa PD-om [27]. Štaviše, α-sin je opisan kao ligand za TLR2 [28] i pokazali smo upotrebom HEK-TLR4 ćelije da je α-sin takođe ligand za TLR4.

[0054] Kompozicije pronalaska smanjuju sekreciju proinflamatornih citokina kao što je IL-6, koji mogu biti indukovani lipopolisaharidom (LPS). Tretman ćelija LPS-om simulira Parkinsonovu bolest izazvanu faktorima iz životne sredine. Kompozicije pronalaska mogu se koristiti za smanjenje sekrecije IL-6. Kompozicije pronalaska mogu se koristiti za lečenje Parkinsonove bolesti poreklom od faktora životne sredine.

[0055] Primeri neurodegenerativnih bolesti koje se leče kompozicijama pronalaska uklјučuju: Parkinsonovu bolest, uklјučujući progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivnu supranuklearnu paralizu, Steele-Richardson-Olszewski sindrom, hidrocefalus normalnog pritiska, vaskularni ili arteriosklerotski parkinsonizam i parkinsonizam indukovan lekovima; Alchajmerovu bolest, koja uključuje Bensonov sindrom; Hantingtonovu bolest; amiotrofičnu lateralnu sklerozu; Lu Gerigovu bolest; bolest motornih neurona; prionsku bolest; spinocerebelarnu ataksija; spinalnu mišićnu atrofiju; demenciju, koja uključuje Levijevo telo, vaskularnu i frontotemporalnu demenciju; primarnu progresivna afaziju; blago kognitivno oštećenje; kognitivno oštećenje povezano sa HIV-om i kortikobazalna degeneracija. Sledeća neurodegenerativna bolest koja će se lečiti ovde opisanim kompozicijama je progresivna inflamatorna neuropatija.

1

[0056] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu biti efikasne za lečenje neurodegenerativnih poremećaja koji se javlјaju kod starijih pacijenata. Primeri pokazuju da kompozicije pronalaska mogu da leče Parkinsonovu bolest koja se pretežno dijagnostikuje kod pacijenata starijih od 65 godina. U izabranim realizacijama, kompozicije pronalaska su za lečenje pacijenata starijih od 65 godina ili više. U drugim određenim realizacijama, pacijenti su stari između 40 i 65 godina. U drugim realizacijama, pacijenti su stariji od 40 godina. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju bolesti povezane sa starenjem, na primer, bolesti dijagnostikovane nakon 50.-te godine starosti.

[0057] U određenim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju neurodegenerativnog poremećaja koji je posredovan ili za kojeg je karakteristična akumulacija proteina, naročito pogrešno savijenog proteina.

[0058] U određenim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju neurodegenerativnog poremećaja povezanog sa gubitkom neuronske sive mase. U određenim realizacijama ovde opisane kompozicije su za lečenje neurodegenerativnog poremećaja koji nije povezan sa lezijama bele mase.

[0059] U određenim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju neurodegenerativnog poremećaja povezanog sa trajnim simptomima.

[0060] U određenim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju neurodegenerativnog poremećaja koji nije autoimunski poremećaj. U određenim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju neurodegenerativnog poremećaja koji nije multipla skleroza.

[0061] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju smrti neurona, posebno u lečenju neurodegenerativnih poremećaja. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u zaštiti neurona, naročito u lečenju neurodegenerativnih poremećaja.

[0062] Neuroprotektivna svojstva kompozicija pronalaska, kako su prikazane u primerima, znače da kompozicije mogu biti posebno efikasne za sprečavanje ili odlaganje početka ili napredovanja neurodegenerativnih poremećaja. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u odlaganju početka ili napredovanja neurodegenerativnih poremećaja.

Modulacija ose mikrobiota-creva-mozak

[0063] Komunikacija između creva i mozga (osa mikrobiota-creva-mozak) odvija se dvosmernim neurohumoralnim sistemom komunikacije. Noviji dokazi pokazuju da mikrobiota koja se nalazi u crevima može modulisati razvoj mozga i uticati na stvaranje određenih bihevioralnih fenotipova preko ose mikrobiota-creva-mozak. Zaista, brojni pregledi članci ukazuju na ulogu ose mikrobiota-crevamozak u održavanju funkcionalnosti centralnog nervnog sistema i ukazuju na to da disfunkcija ose mikrobiota-creva-mozak ima ulogu u razvoju poremećaja i stanja centralnog nervnog sistema [17], [20], [29].

[0064] Dvosmerna komunikacija između mozga i creva (tj. osa crevo-mozak) uklјučuje centralni nervni sistem, neuroendokrini i neuroimuni sistem, obuhvatajući hipotalamo-hipofizno-nadbubrežnu osu (HPA, od eng. hypothalamus-pituitary-adrenal), simpatički i parasimpatički autonomni nervni sistem (ANS, od eng. autonomic nervous system), enterični nervni sistem (ENS, od eng. enteric nervous system) i nerv vagus i mikrobiotu creva.

[0065] Kao što je prikazano u primerima, kompozicije ovog pronalaska mogu modulisati osu mikrobiota-creva-mozak i smanjiti ćelijsku smrt povezanu sa neurodegenerativnim poremećajima. Shodno tome, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja, posebno onih poremećaja i stanja povezanih sa disfunkcijom osovine mikrobiota-crevamozak.

[0066] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju bolesti ili stanja izabranih iz grupe koju čine: Parkinsonova bolest, uklјučujući progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivnu supranuklearnu paralizu, Steele-Richardson-Olszewski sindrom, hidrocefalus normalnog pritiska, vaskularni ili arteriosklerotski parkinsonizam i parkinsonizam izazvan lekovima; Alchajmerova bolest, koja uključuje Bensonov sindrom; Hantingtonova bolest; amiotrofična lateralna skleroza; Lu Gerigova bolest; bolest motornih neurona; prionska bolest; spinocerebelarna ataksija; spinalna mišićna atrofija; demencija; uklјučujući Levijevo telo; vaskularna i frontotemporalna demencija; primarna progresivna afazija; blago kognitivno oštećenje; kognitivno oštećenje povezano sa HIV-om i kortikobazalna degeneracija.

[0067] Kompozicije pronalaska mogu biti posebno korisne za lečenje ili prevenciju hronične bolesti, lečenje ili sprečavanje bolesti kod pacijenata koji nisu reagovali na druge terapije (kao što je lečenje levodopom, agonistima dopamina, MAO-B inhibitorima, COMT inhibitorima, antagonistima glutamata, i/ili antiholinergicima), i/ili lečenje ili sprečavanje oštećenja tkiva i simptoma povezanih sa disfunkcijom ose mikrobiota-creva-mozak.

[0068] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska moduliraju CNS. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska moduliraju autonomni nervni sistem (ANS). U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska moduliraju enterični nervni sistem (ENS). U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska moduliraju osu hipotalamusa, hipofize, nadbubrežne žlezde (HPA). U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska moduliraju neuroendokrini put. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska moduliraju neuroimuni put. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska moduliraju CNS, ANS, ENS, HPA osu i/ili neuroendokrine i neuroimune puteve. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu nivoe komensalnih metabolita i/ili gastrointestinalnu propustlјivost kod subjekta. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu dopaminergički sistem.

[0069] Signalizacija ose mikrobiota-creva-mozak moduliše se pomoću neuronskih sistema. Shodno tome, u pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u neuronskim sistemima. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u centralnom nervnom sistemu. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u senzornim neuronima. U drugim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u motornim neuronima. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u ANS-u. U pojedinim realizacijama, ANS je parasimpatički nervni sistem. U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju nerva vagusa. U drugim realizacijama, ANS je simpatički nervni sistem. U drugim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu signalizaciju u enteričnom nervnom sistemu. U određenim realizacijama, signalizacija ANS i ENS neurona reaguje direktno na sadržaj u lumenu gastrointestinalnog trakta. U drugim realizacijama, signalizacija ANS i ENS neurona indirektno reaguje na neurohemikalije koje proizvode luminalne bakterije. U drugim realizacijama, signalizacija ANS i ENS neurona reaguje na neurohemikalije koje proizvode luminalne bakterije ili enteroendokrine ćelije. U određenim poželјnim realizacijama, neuroni ENS aktiviraju aferentna nervna vlakna vagusa koja utiču na funkcije CNS-a. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska regulišu aktivnost enterohromafinskih ćelija.

Neurodegenerativne bolesti

[0070] Tauopatije su neurodegenerativne bolesti povezane sa patološkom agregacijom tau proteina u neurofibrilarnim ili gliofibrilarnim čvorovima u lјudskom mozgu. Alchajmerova bolest je primer tauopatologije. Sinukleinopatije (takođe nazvane α-sinukleinopatije) su neurodegenerativne bolesti koje se karakterišu abnormalnom akumulacijom agregata α-sinukleina u neuronima, nervnim vlaknima ili glijalnim ćelijama. Parkinsonova bolest je primer sinukleinopatologije.

[0071] Između ove dve patologije postoji kliničko i patološko preklapanje. Pacijenti sa Parkinsonovom bolešću često imaju demenciju, a pacijenti sa Alchajmerovom bolešću često manifestuju parkinsonizam [30]. Na primer, progresivna supranuklearna paraliza (takođe poznata kao Steele-Richardson-Olszewski sindrom) ima tauopatologiju, ali takođe dovodi do izraženog parkinsonizma [31]. Mutacije u LRRK2 za koje se zna da izazivaju parkinsonizam povezane su sa akumulacijom sinukleina, tau, niti jednog, ili oba proteina [32].

[0072] Levijeva bolest (LBD, od eng. Lewy body disease) je neurodegenerativna bolest koja je jedan od najčešćih uzroka demencije kod starijih osoba. LBD ilustruje postojanje kontinuuma između tau- i sinuklein-patologija. LBD deli kliničke i patološke karakteristike sa Parkinsonovom bolešću, demencijom Parkinsonove bolesti i Alchajmerovom bolešću [30].

[0073] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju tauopatija i/ili sinukleinopatija. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju tauopatija. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju sinukleinopatija. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju bolesti ili stanja izabranih iz grupe koju čine: Parkinsonova bolest, uklјučujući progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivnu supranuklearnu paralizu, Steele-Richardson-Olszewski sindrom, hidrocefalus normalnog pritiska, vaskularni ili arteriosklerotski parkinsonizam i parkinsonizam izazvan lekovima; Alchajmerova bolest, koja uklјučuje Bensonov sindrom; i demencija; uklјučujući Levijevo telo; vaskularna i frontotemporalna demencija.

[0074] U poželјnim izvođenjima, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju Parkinsonove bolesti, uklјučujući progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivnu supranuklearnu paralizu, Steele-Richardson-Olszewski sindrom, hidrocefalusa normalnog pritiska, vaskularnog ili arteriosklerotskog parkinsonizma i parkinsonizma izazvanog lekovima. U poželјnim izvođenjima, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju Alchajmerove bolesti, uklјučujući Bensonov sindrom. U dalјim poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu biti korisne za lečenje ili prevenciju demencije; uklјučujući Levijevo telo; vaskularnu i frontotemporalnu demenciju.

Parkinsonova bolest

[0075] Parkinsonova bolest je česta neurodegenerativna bolest koju neuropatološki karakteriše degeneracija heterogenih populacija nervnih ćelija (ćelije koje proizvode dopamin). Klinička dijagnoza Parkinsonove bolesti zahteva bradikineziju i najmanje jedan od sledećih osnovnih simptoma: tremor u mirovanju; rigidnost mišića i oštećenje posturalnog refleksa. Ostali znaci i simptomi koji mogu biti prisutni ili se mogu razviti tokom progresije bolesti su autonomne smetnje (sijaloreja, seboreja, konstipacija, poremećaji mokrenja, seksualna disfunkcija, ortostatska hipotenzija, hiperhidroza), poremećaji spavanja i poremećaji osećaja mirisa ili osećaja temperature. Parkinsonova bolest je

1

neurodegenerativna bolest koja se može razviti ili trajati usled disfunkcije ose mikrobiota-creva-mozak. Prema tome, u poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji Parkinsonove bolesti kod subjekta.

[0076] U dalјim poželјnim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj roda Roseburia, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti. Kompozicija sadrži bakterijski soj roda Roseburia koja može pobolјšati motoričke i kognitivne funkcije u modelima Parkinsonove bolesti. Lečenje sa Roseburia sojevima može modulisati signalizaciju u centralnom, autonomnom i enteričnom nervnom sistemu; može modulisati aktivnost HPA ose; može modulisati neuroendokrine i/ili neuroimune puteve; i može uticati na nivoe komensalnih metabolita, inflamatornih markera i/ili gastrointestinalne permeabilnosti kod subjekta, pošto su svi procesi uklјučeni u neuropatologiju Parkinsonove bolesti. U poželјnim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Roseburia hominis za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti. Kompozicije koje sadrže Roseburia hominis mogu biti posebno efikasne u lečenju Parkinsonove bolesti.

[0077] U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma Parkinsonove bolesti kod subjekta. U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više osnovnih simptoma Parkinsonove bolesti kod subjekta. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili olakšavaju bradikineziju kod subjekta. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju tremor u mirovanju; rigidnost mišića i/ili oštećenje posturalnog refleksa kod subjekta. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma povezanih sa progresijom Parkinsonove bolesti odabranih između autonomnih poremećaja (sijaloreja, seboreja, konstipacija, poremećaji mokrenja, seksualna disfunkcija, ortostatska hipotenzija, hiperhidroza), poremećaji spavanja i poremećaji osećaja mirisa ili osećaja temperature.

[0078] U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju simptome depresije komorbiditetne sa Parkinsonovom bolešću. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju verbalnu memoriju i/ili izvršne funkcije. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju pažnju, radnu memoriju, verbalnu fluentnost i/ili smanjuju anksioznost.

[0079] U drugim poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju kognitivne disfunkcije komorbiditetne sa Parkinsonovom bolešću.

[0080] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju progresiju Parkinsonove bolesti. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju kasnije motoričke komplikacije. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju kasne motorne fluktuacije. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju gubitak neurona. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju simptome demencije Parkinsonove bolesti (PDD, od eng. Parkinson's disease dementia). U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju oštećenje izvršne funkcije, pažnje i/ili radne memorije. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju dopaminergičku neurotransmisiju. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju oštećenu dopaminergičku neurotransmisiju.

[0081] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju simptome Parkinsonove bolesti prema simptomatskoj ili dijagnostičkoj skali. U određenim realizacijama, testovi za procenu simptomatskog pobolјšanja motoričke funkcije kod Parkinsonove bolesti je Unifikovana skala za ocenu Parkinsonove bolesti (UPDRS, od eng. Unified Parkinson's Disease Rating Scale). UPDRS II posebno razmatra aktivnosti u svakodnevnom životu, a UPDRS III stepen izraženosti motornih simptoma parkinsonizma.

[0082] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju simptome povezane sa PDD prema simptomatskom ili dijagnostičkom testu i/ili skali. U određenim realizacijama, test ili skala se biraju iz Hopkinsovog revidirani testa verbalnog učenja (HVLT-R, od eng. Hopkins Verbal Learning Test - Revised); test interferencije u boji-reči Delis-Kaplan sistema izvršne funkcije (D-KEFS, od eng. Delis-Kaplan Executive Function System); Hamiltonova skala za procenu depresivnosti (HAM-D 17; depresija); Hamiltonova skala za procenu anksioznosti (HAM-A; anksioznost) i Unifikovana skala za procenu Parkinsonove bolesti (UPDRS; težina simptoma PD).

[0083] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska dovode do pobolјšanja na skali opšteg kliničkog utiska o poboljšanju (CGI-I, od eng. Clinical Global Impression - Improvement) koja služi za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska imaju pozitivan efekat na opšte socijalno i profesionalno stanje subjekta sa Parkinsonovom bolešću.

Alchajmerova bolest i demencija

[0084] U DSM-5 termin demencija zamenjen je terminima glavni neurokognitivni poremećaj i blagi neurokognitivni poremećaj. Neurokognitivni poremećaj je heterogena grupa psihijatrijskih bolesti. Najčešći neurokognitivni poremećaj je Alchajmerova bolest, praćena vaskularnim demencijama ili mešovitim oblicima ove dve demencije. Drugi oblici neurodegenerativnih poremećaja (npr. demencija sa Levijevim telima, frontotemporalna demencija, Parkinsonova demencija, Creutzfeldt-Jakobova bolest, Hantingtonova bolest i Wernicke-Korsakoff-ov sindrom) praćeni su demencijom.

[0085] Alchajmerovu bolest i demenciju takođe karakterišu gubitak neurona, pa neuroprotektivni i neuroproliferativni efekti prikazani u primerima za kompozicije ovog pronalaska ukazuju na to da one mogu biti korisne u lečenju ili prevenciji ovih stanja.

[0086] Simptomatski kriterijumi za demenciju po DSM-5 su dokaz značajnog kognitivnog pada u odnosu na prethodni nivo kognitivnih performansi u jednom ili više kognitivnih domena izabranih između: učenja i pamćenja; jezika; izvršne funkcije; složene pažnje; perceptivno-motoričke i socijalne kognicije. Kognitivni nedostatci na nezavisnost u svakodnevnim aktivnostima. Pored toga, kognitivni nedostatci se ne javlјaju isklјučivo u kontekstu delirijuma i ne mogu se bolјe objasniti drugim mentalnim poremećajem (na primer MDD-om ili šizofrenijom).

[0087] Pored primarnog simptoma, ispitanici sa neurodegenerativnim poremećajima pokazuju i bihevioralne i psihijatrijske simptome, uklјučujući agitaciju, agresiju, depresiju, anksioznost, apatiju, psihozu i poremećaje ciklusa spavanja i budnosti.

[0088] Neurodegenerativni poremećaji mogu se razviti ili trajati zbog disfunkcije ose mikrobiota-crevamozak. Prema tome, u poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji neurodegenerativnih poremećaja kod subjekta. U poželјnim realizacijama, neurodegenerativni poremećaj je Alchajmerova bolest. U drugim realizacijama, neurodegenerativni poremećaj je selektovan između vaskularnih demencija; mešanog oblika Alchajmerove bolesti i

1

vaskularne demencije; bolesti Levijevih tela; frontotemporalne demencije; Parkinsonove demencije; Creutzfeldt-Jakob-ove bolesti; Hantingtonove bolesti; i Vernicke-Korsakoff-ovog sindroma.

[0089] U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju jedan ili više simptoma neurodegenerativnih poremećaja kod subjekta. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu kognitivnog opadanja kod subjekta. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju nivo performansi subjekta sa neurodegenerativnim poremećajima u jednom ili više kognitivnih domena izabranih između: učenja i pamćenja; jezika; izvršne funkcije; složene pažnje; perceptivno-motoričke i socijalne kognicije. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju pojavu jednog ili više oblika ponašanja i psihijatrijskih simptoma povezanih sa neurodegenerativnim poremećajima odabranim između agitacije, agresije, depresije, anksioznosti, apatije, psihoze i poremećaja ciklusa spavanja i budnosti.

[0090] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sprečavaju, smanjuju ili ublažavaju simptomatsku bolest delujući na pretpostavljene patogene mehanizme u prekliničkoj fazi. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modifikaciju bolesti tako da usporavaju ili zaustavlјaju napredovanje simptoma bolesti. U pojedinim realizacijama, usporavanje ili zaustavlјanje napredovanja simptoma bolesti korelira sa pokazateljima odlaganja osnovnog neuropatološkog procesa. U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju simptome neurodegenerativnih poremećaja, pre svega kognitivne i funkcionalne domene. U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju bihevioralne i psihijatrijske simptome demencije (BPSD). U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju sposobnost subjekta sa neurodegenerativnim poremećajem da obavlja svakodnevne aktivnosti.

[0091] U poželјnim realizacijama, kompozicije ovog pronalaska pobolјšavaju i kogniciju i funkcionisanje subjekta sa Alchajmerovom bolešću. U pojedinim realizacijama kod subjekta sa Alchajmerovom bolešću kompozicija pronalaska pobolјšava kognitivne procese u krajnjim tačkama. U pojedinim realizacijama, kod subjekta sa Alchajmerovom bolešću kompozicije pronalaska pobolјšavaju funkcionalnu memoriju u krajnjoj tačci. U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju kognitivne i funkcionalne krajnje tačke kod subjekta sa Alchajmerovom bolešću. U još dalјim poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska pobolјšavaju ukupni klinički odgovor (globalna krajnja tačka) kod subjekta sa Alchajmerovom bolešću.

[0092] U pojedinim realizacijama, prema simptomatskom ili dijagnostičkom testu kompozicije pronalaska dovode do pobolјšanja simptoma neurodegenerativnih poremećaja. U određenim realizacijama, testovi za procenu simptomatskog pobolјšanja Alchajmerove bolesti (i drugih neurodegenerativnih poremećaja) biraju se između objektivnih merenja kognitivnih funkcija, aktivnosti u svakodnevnom životu, globalne procene promene, testova o kvalitetu života povezanih sa zdravlјem i testova koji procenjuju bihevioralne i psihijatrijske simptome neurodegenerativnih poremećaja.

[0093] U određenim realizacijama, objektivni kognitivni testovi za procenu simptomatskog pobolјšanja koriste kognitivnu subskalu skale za procenu Alchajmerove bolesti (ADAS-cog) i klasičnu ADAS skalu. U određenim realizacijama, simptomatsko pobolјšanje kognicije se procenjuje korišćenjem neurofiziološke test baterije za upotrebu kod Alchajmerove bolesti (NTB).

[0094] U pojedinim izvođenjima, test globalne procene promene koristi skalu opšteg kliničkog utiska – opšteg poboljšanja (CGI-I) za procenu psihijatrijskih i neuroloških poremećaja. U pojedinim

1

realizacijama, opšta skala je utisak promene na osnovu intervjua kliničara (CIBIC-plus, od eng. Clinician's Interview Based Impression of Change plus). U pojedinim realizacijama, globalna skala je “Alzheimer's Disease Cooperative Study Unit Clinician's Global Impression of Change” (ADCS-CGIC).

[0095] U određenim realizacijama, mere kvaliteta života povezane sa zdravlјem su procenjene instrumentima “Alzheimer's Disease-Related QOL (ADRQL)” i “QOL-Alzheimer's Disease (QOL-AD)”.

[0096] U određenim realizacijama, testovi koji procenjuju bihevioralne i psihijatrijske simptome neurodegenerativnih poremećaja izabrani su iz grupe testova od “Skala procene bihevioralne patologije u Alchajmerovoj bolesti” (BEHAVE-AD, od eng. Behavioural pathology in Alzheimer's Disease Rating Scale); skala bihevioralne procene za demenciju (BRSD, od eng. Behavioural Rating Scale for Dementia); neuropsihijatrijski inventar (NPI, od eng. Neuropsychiatric Inventory); i inventar agitacije Cohen-Mansfield (CMAI, od eng. Cohen-Mansfield Agitation Inventory).

[0097] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska su posebno efikasne u sprečavanju, smanjenju ili ublažavanju neurodegenerativnih poremećaja kada se koriste u kombinaciji sa drugom terapijom za lečenje neurodegenerativnih poremećaja. U određenim realizacijama, takve terapije uklјučuju inhibitore acetilholinesteraze, kao što su donepezil (Aricept®), galantamin (Razadyne®) i rivastigmin (Exelon®), i memantin.

Neurohemijski faktori, neuropeptidi i neurotransmiteri i osa mikrobiota-creva-mozak

[0098] Kao što je gore opisano, osa mikrobiota-creva-mozak modulisana je nizom različitih fizioloških sistema. Osa mikrobiota-creva-mozak modulisana je brojnim signalnim molekulima. Promene u nivoima ovih signalnih molekula rezultiraju neurodegenerativnim bolestima. Eksperimenti koje su pronalazači izvodili ukazuju na to da administracija vrsta roda Roseburia, a posebno Roseburia hominis, može uticati na nivo indola i kinurenina. Narušena regulacija ovih metabolita može dovesti do neurodegenerativnih bolesti, poput Parkinsonove bolesti.

[0099] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu nivoe monoamina u mozgu i njihovih metabolita. U poželјnim realizacijama, metabolit je kinurenin. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu kinurenin, koji je deo glavnog puta metabolizma triptofana, a koji predstavlja put do proizvodnje nikotinamid adenin dinukleotida (NAD+). Kinurenin se može metabolisati do neuroaktivnih jedinjenja poput kinurenske kiseline (KYNA, od eng. kynurenic acid) i 3-hidroksi-1-kinurenina (3-OH-1-KYN), a u dalјim koracima i u kinolinsku kiselinu (QUIN, od eng. quinolinic acid). Narušavanje puta kinurenina može dovesti do aktivacije imunskog sistema i akumulacije potencijalno neurotoksičnih jedinjenja. Promene u metabolizmu kinurenina mogu biti uklјučene u razvoj Parkinsonove bolesti. Dokazano je da su nivoi kinurenina smanjeni u frontalnom korteksu, putamenu i supstancii nigri pars compacta pacijenata sa PD [33]. Prema tome, u određenim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u povećanju nivoa kinurenina u lečenju Parkinsonove bolesti.

[0100] U određenim realizacijama pronalaska, kompozicije pronalaska mogu povećati nivoe kinurenina. Pokazano je da povećani nivoi kinurenina smanjuju smrt neuronskih ćelija izazvanih MPP+ in vitro u ćelijskoj liniji humanog dopaminergičnog neuroblastoma [34]. U određenim realizacijama kinurenin i kinurenska kiselina mogu da aktiviraju GI aril uglјovodonične receptore (Ahr) i GPR35 receptore. Aktivacija receptora Ahr indukuje proizvodnju IL-22, što može inhibirati lokalnu inflamaciju. Aktivacija GPR35 indukuje proizvodnju inozitol trifosfata i mobilizaciju Ca2+.

1

[0101] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu nivoe indola. U poželјnim realizacijama, metabolit je kinurenin. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu kinurenin, koji je glavni put metabolizma triptofana.

[0102] Signalizacija ose mikrobiota-creva-mozak modulsana je različitim nivoima neurohemijskih faktora, neuropeptida i neurotransmitera. Shodno tome, u određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu nivoe neurohemijskih faktora, neuropeptida i neurotransmitera. Prema tome, u određenim poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska direktno menjaju biohemiju CNS-a.

[0103] Signalizacija ose mikrobiota-creva-mozak je modulisana nivoima γ-aminobuterne kiseline (GABA). Shodno tome, u poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu nivoe GABA. GABA je inhibitorni neurotransmiter koji smanjuje ekscitabilnost neurona. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska povećavaju nivoe GABA. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska smanjuju nivoe GABA. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska menjaju GABA-nergičku neurotransmisiju. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska modulišu nivo transkripcije GABA u različitim regionima centralnog nervnog sistema. U određenim realizacijama, izvedeni komensal GABA prelazi krvno-moždanu barijeru i direktno utiče na neurotransmisiju. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska dovode do smanjenja GABA u hipokampusu, amigdali i/ili lokusu ceruleusu. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska dovode do povećanja GABA u kortikalnim regionima.

Imunski odgovor

[0104] Signalizacija ose mikrobiota-creva-mozak je modulisana promenama u imunskom odgovoru i inflamatornim faktorima i markerima. Shodno tome, u određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu modulisati imunski odgovor. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska modulišu sistemske nivoe cirkulišućih neuroimunskih signalnih molekula. U određenim poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska menjaju produkciju proinflamatornih citokina i samu inflamaciju. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska menjaju inflamatorno stanje. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska smanjuju sintezu i sekreciju IL-6. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska smanjuju aktivaciju promotora NFκB. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu da modulišu aktivaciju sinteze IL-6 koja je indukovana snažnim proinflamatornim endotoksinom lipopolisaharidom (LPS). U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska mogu da menjaju aktivnost promotora NFκB koji je aktiviran od strane LPS-a i α-sinuklein mutiranih proteina, kao što je A53T. Povećani nivoi citokina u cirkulaciji usko su povezani sa različitim neurodegenerativnim poremećajima, uklјučujući Parkinsonovu bolest, demenciju i Alchajmerovu bolest. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju nivoa IL-6 i/ili nivoa NFκB u lečenju neurodegenerativnog poremećaja.

[0105] Signalizacija osovine mikrobiota-creva-mozak modulisana je nivoima komensalnih metabolita. Shodno tome, u određenim realizacijama, kompozicije pronalaska menjaju sistemske nivoe metabolita mikrobiote. U određenim poželјnim izvođenjima, kompozicije pronalaska menjaju nivo masnih kiselina kratkog lanca (SCFA). U određenim realizacijama nivo SCFA se povećava ili smanjuje. U pojedinim realizacijama, SCFA je buterna kiselina (BA) (ili butirat). U pojedinim izvođenjima, SCFA je propionska kiselina (PPA). U pojedinim realizacijama, SCFA je acetatna kiselina. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska menjaju sposobnost SCFA-a da prođu krvno-moždanu barijeru.

[0106] Acetilacija i deacetilacija histona su važni epigenetski načini regulacije ekspresije gena. Neuravnoteženost acetilacije i deacetilacije histona može rezultirati apoptozom. Narušena regulacija

1

histonskih acetiltransferaza je povezana sa patogenezom neurodegenerativnih bolesti koje su povezane sa starošću, kao što su Parkinsonova bolest, Hantingtonova bolest, Alchajmerova bolest, amiotrofična lateralna skleroza i padom kognitivnih sposobnosti [35]. Shodno tome, u određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu da menjaju aktivnost histonske deacetilaze. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu smanjiti aktivnost histonske deacetilaze. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska mogu smanjiti aktivnost histonske acetilaze.

[0107] Pacijenti sa neurodegenerativnim bolestima, uklјučujući Parkinsonovu bolest, Hantingtonovu bolest, Alchajmerovu bolest i amiotrofičnu lateralnu sklerozu, pokazuju visok nivo lipidne peroksidacije. Lipidi su osetlјivi na oksidaciju reaktivnim vrstama kiseonika, a mozak je bogat polinezasićenim masnim kiselinama. Shodno tome, u određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska mogu da modulišu peroksidaciju lipida. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska mogu smanjiti peroksidaciju lipida. Smanjivanje oksidativne štete izazvane reaktivnim vrstama kiseonika može se koristiti za targetovanje neurodegenerativnih bolesti u njihovoj ranoj fazi. Shodno tome, u određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska se mogu koristiti u lečenju neurodegeneracije u njenoj ranoj fazi. Takođe shodno tome, u određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u sprečavanju razvoja neurodegenerativnog poremećaja. U takvim izvođenjima, kompozicije pronalaska mogu se koristiti kod pacijenta za kojeg je utvrđeno da postoji rizik od razvoja neurodegenerativnog poremećaja.

[0108] Signalizacija ose mikrobiota-creva-mozak moduliše se nivoima gastrointestinalne propustlјivosti. Shodno tome, u pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska menjaju integritet epitela gastrointestinalnog trakta. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska menjaju propustlјivost gastrointestinalnog trakta. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska menjaju funkciju barijere i integritet gastrointestinalnog trakta. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska menjaju pokretlјivost gastrointestinalnog trakta. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska modulišu translokaciju komensalnih metabolita i inflamatornih signalnih molekula iz lumena gastrointestinalnog trakta u krvotok.

[0109] Signalizacija ose mikrobiota-creva-mozak moduliše se sastavom mikrobioma u gastrointestinalnom traktu. Shodno tome, u određenim realizacijama, kompozicije pronalaska menjaju sastav mikrobioma gastrointestinalnog trakta. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska sprečavaju disbiozu mikrobioma i time povezano povećanje toksičnih metabolita (npr. LPS-a). U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska menjaju nivoe Clostridium u gastrointestinalnom traktu. U poželјnim rešenjima, kompozicije pronalaska smanjuju nivo Clostridium u gastrointestinalnom traktu. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska smanjuju nivo Campylobacter jejuni. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska menjaju proliferaciju štetnih anaerobnih bakterija i time proizvodnju njihovih neurotoksina. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska menjaju nivoe Lactobacillus i/ili Bifidobacterium u mikrobiomu. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska menjaju nivoe mikrobioma rodova Sutterella, Prevotella, Ruminococcucs i/ili famiije Alcaligenaceae u mikrobiomu. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska povećavaju nivoe Lactobacillus plantarum i/ili Saccharomices boulardii.

Povreda mozga

[0110] Primeri pokazuju da su kompozicije pronalaska neuroprotektivne i da imaju HDAC inhibitornu aktivnost. HDAC2 je ključni molekul za funkcionalni oporavak od moždanog udara [36], a inhibicija

1

HDAC može sprečiti povredu bele mase [37], tako da ovde opisane kompozicije mogu biti korisne u lečenju povrede mozga.

[0111] U određenim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju povrede mozga. U pojedinim realizacijama, povreda mozga je traumatska povreda mozga. U pojedinim realizacijama, povreda mozga je stečena povreda mozga. U pojedinim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica traume. U pojedinim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica tumora. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica moždanog udara. U pojedinim realizacijama, ovde otkriveni sastavi su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica krvarenja u mozgu. U pojedinim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica encefalitisa. U pojedinim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica cerebralne hipoksije. U pojedinim realizacijama, ovde opisane kompozicije su za upotrebu u lečenju povrede mozga koja je posledica cerebralne anoksije.

[0112] U poželјnim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju moždanog udara. Efekti prikazani u primerima su posebno relevantni za lečenje moždanog udara. Moždani udar nastaje kada se prekine protok krvi u barem jednom delu mozga. Bez adekvatnog snabdevanja krvlјu koja obezbeđuje kiseonik i hranlјive materije moždanom tkivu i uklanja otpadne materije iz moždanog tkiva, moždane ćelije brzo počinju da umiru. Simptomi moždanog udara zavise od regiona mozga koji je zhvaćen neadekvatnim protokom krvi. Simptomi uklјučuju paralizu, ukočenost ili slabost mišića, gubitak ravnoteže, vrtoglavicu, iznenadne jake glavobolјe, oštećenje govora, gubitak pamćenja, gubitak sposobnosti rasuđivanja, iznenadnu zbunjenost, oštećenje vida, komu ili čak smrt. Moždani udar se naziva i moždanim napadom ili cerebrovaskularnim akcidentom (CVA, od eng. cerebrovascular accident). Simptomi moždanog udara mogu biti kratki ako se u kratkom vremenskom roku obnovi odgovarajući protok krvi. Međutim, ako se neadekvatan protok krvi nastavi tokom značajnog vremenskog perioda, simptomi mogu biti trajni.

[0113] U pojedinim realizacijama, moždani udar je cerebralna ishemija. Cerebralna ishemija nastaje kada nema dovolјno protoka krvi u tkivima mozga koje bi zadovoljile metaboličke potrebe. U pojedinim izvođenjima, cerebralna ishemija je fokalna cerebralna ishemija, tj. ograničena je na određeni region mozga. U pojedinim realizacijama cerebralna ishemija je opša cerebralna ishemija, tj. obuhvata široki deo moždanog tkiva. Fokalna cerebralna ishemija se često javlјa kada je cerebralni sud blokiran, delimično ili u potpunosti, smanjujući protok krvi u taj region mozga. U pojedinim realizacijama fokalna cerebralna ishemija je ishemijski moždani udar. U pojedinim izvođenjima, ishemijski moždani udar je trombotski, tj. uzrokovan trombom ili krvnim ugruškom, koji se razvija u cerebralnom sudu i ograničava ili blokira protok krvi. U pojedinim realizacijama ishemijski moždani udar je trombotski moždani udar. U pojedinim realizacijama, ishemijski moždani udar je emboličan, tj. izazvan embolusom ili nevezanom masom koja putuje kroz krvotok i ograničava ili blokira protok krvi na mestu udalјenom od svoje tačke porekla. U pojedinim realizacijama ishemijski moždani udar je embolijski moždani udar. Globalna cerebralna ishemija se često javlјa kada je protok krvi u mozak u celini blokiran ili smanjen. U pojedinim realizacijama globalna cerebralna ishemija je uzrokovana hipoperfuzijom, tj. usled šoka. U pojedinim izvođenjima globalna cerebralna ishemija je rezultat srčanog zastoja.

[0114] U pojedinim realizacijama, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pati od cerebralne ishemije. U pojedinim realizacijama, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga

2

pretrpeo je fokalnu cerebralnu ishemiju. U pojedinim realizacijama, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je ishemijski moždani udar. U pojedinim realizacijama, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je trombotski moždani udar. U pojedinim realizacijama, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je embolijski moždani udar. U pojedinim realizacijama, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je globalnu cerebralnu ishemiju. U pojedinim realizacijama, subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je hipoperfuziju. U pojedinim realizacijama, subjekt sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je srčani zastoj.

[0115] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju cerebralne ishemije. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju fokalne cerebralne ishemije. U pojedinim realizacijama kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ishemijskog moždanog udara. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju trombotskog moždanog udara. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju embolijskog moždanog udara. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju globalne cerebralne ishemije. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju hipoperfuzije.

[0116] U pojedinim realizacijama, moždani udar je hemoragijski moždani udar. Hemoragijski moždani udar uzrokovan je krvarenjem u mozgu ili oko njega, što dovodi do nastanka otoka, pritiskom i oštećenjem ćelija i tkiva mozga. Hemoragijski moždani udar je obično rezultat oslablјenog krvnog suda koji pukne i iskrvari u okolno moždano tkivo. U pojedinim realizacijama, hemoragijski moždani udar je intracerebralno krvarenje, tj. uzrokovano je krvarenjem u samom moždanom tkivu. U pojedinim realizacijama intracerebralno krvarenje je uzrokovano intraparenhimskim krvarenjem. U pojedinim realizacijama intracerebralno krvarenje je uzrokovano intraventrikularnim krvarenjem. U pojedinim realizacijama hemoragijski moždani udar je subarahnoidno krvarenje, tj. krvarenje koje se javlјa izvan moždanog tkiva, ali još uvek unutar lobanje. U pojedinim realizacijama, hemoragijski moždani udar je rezultat cerebralne amiloidne angiopatije. U pojedinim realizacijama, hemoragijski moždani udar je rezultat aneurizme mozga. U pojedinim realizacijama, hemoragijski moždani udar je rezultat cerebralne arterijsko-venske malformacije (AVM, od eng. arteriovenous malformation).

[0117] U pojedinim realizacijama, subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je hemoragijski moždani udar. U pojedinim izvođenjima, subjekt sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je intracerebralno krvarenje. U pojedinim izvođenjima, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je intraparenhimsko krvarenje. U pojedinim izvođenjima, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je intraventrikularno krvarenje. U pojedinim izvođenjima, subjekat sa dijagnozom povrede mozga pretrpeo je subarahnoidno krvarenje. U pojedinim izvođenjima, subjekat sa dijagnozom povrede mozga je pretrpeo cerebralnu amiloidnu angiopatiju. U pojedinim izvođenjima, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je aneurizmu mozga. U pojedinim izvođenjima, subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je cerebralni AVM

[0118] U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju hemoragijskog moždanog udara. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju intracerebralne hemoragije. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju intraparenhimskog krvarenja. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju intraventrikularnog krvarenja. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju subarahnoidnog krvarenja. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju cerebralne amiloidne angiopatije. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju aneurizme mozga. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju cerebralne AVM

[0119] Vraćanje adekvatnog krvotoka u mozak nakon perioda prekida, iako pomaže u ublažavanju simptoma povezanih sa moždanim udarom, može paradoksalno dovesti do dalјih oštećenja moždanog tkiva. Tokom perioda prekida, zahvaćeno tkivo trpi nedostatak kiseonika i hranlјivih materija, a naglo obnavlјanje krvotoka može stimulisati oksidativni stres i razvoj inflamacije i nastanak oksidativnih oštećenja. Ovo je poznato kao reperfuzijska povreda i dobro je poznata ne samo nakon moždanog udara, već i nakon srčanog udara ili drugih oštećenja tkiva kada se nakon perioda ishemije ili nedostatka kiseonika snabdevanje krvlјu vraća u tkivo. U pojedinim izvođenjima subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je reperfuzijsku povredu kao rezultat moždanog udara. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju reperfuzne povrede koja je posledica moždanog udara.

[0120] Privremeni ishemijski napad (TIA, od eng. transient ischemic attack), koji se često naziva minimoždani udar, prepoznat je kao znak upozorenja za ozbilјniji moždani udar. Ispitanici koji su pretrpeli jedan ili više TIA imaju veći rizik od moždanog udara. U pojedinim izvođenjima subjekat kome je dijagnostikovana povreda mozga pretrpeo je TIA. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju TIA. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga kod subjekta koji je pretrpeo TIA.

[0121] Visok krvni pritisak, povišen nivo holesterola u krvi, porodična istorija moždanih udara, bolesti srca, dijabetes, aneurizme mozga, arteriovenske malformacije, bolest srpastih ćelija, vaskulitis, poremećaji krvarenja, upotreba nesteroidnih antiinflamatornih lekova (NSAILs, od eng. nonsteroidal anti-inflammatory drugs), pušenje cigareta, pijenje velikih količina alkohola, upotreba nelegalnih droga, gojaznost, nedostatak fizičke aktivnosti i nezdrava ishrana, smatraju se faktorima rizika za razvoj moždanog udara. Posebno je pokazano da snižavanje krvnog pritiska sprečava ishemijske i hemoragijske moždane udare [38, 39]. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju povrede mozga kod subjekta koji ima najmanje jedan faktor rizika za moždani udar. U pojedinim realizacijama, subjekat ima dva faktora rizika za moždani udar. U pojedinim realizacijama, subjekat ima tri faktora rizika za moždani udar. U pojedinim realizacijama, subjekat ima četiri faktora rizika za moždani udar. U pojedinim realizacijama, subjekat ima više od četiri faktora rizika za moždani udar. U pojedinim realizacijama, subjekat ima visok krvni pritisak. U pojedinim realizacijama subjekat ima visok nivo holesterola u krvi. U pojedinim realizacijama, subjekat ima porodičnu istoriju moždanih udara. U pojedinim realizacijama, subjekat ima srčanu bolest. U pojedinim realizacijama, subjekat ima dijabetes. U pojedinim realizacijama, subjekat ima aneurizmu mozga. U pojedinim realizacijama, subjekat ima arteriovenske malformacije. U pojedinim realizacijama subjekat ima vaskulitis. U pojedinim realizacijama, subjekat ima bolest srpastih ćelija. U pojedinim realizacijama subjekat ima poremećaj krvarenja. U pojedinim realizacijama, subjekat ima istoriju upotrebe nesteroidnih antiinflamatornih lekova (NSAID). U pojedinim realizacijama, subjekat puši cigarete (duvan). U pojedinim realizacijama, subjekat pije velike količine alkohola. U pojedinim realizacijama. subjekt koristi nelegalne droge. U pojedinim realizacijama, subjekat je gojazan. U pojedinim realizacijama subjekat ima prekomernu težinu. U pojedinim realizacijama, subjekat ima nedostatak fizičke aktivnosti. U pojedinim realizacijama, subjekat se nezdravo ishranjuje.

[0122] Primeri ukazuju na to da kompozicije pronalaska mogu biti korisne u lečenju povreda mozga i pomažu oporavku kada se daju pre nego što se dogodi povreda. Prema tome, kompozicije pronalaska mogu biti posebno korisne u lečenju povrede mozga kada se daju osobama sa rizikom od povrede mozga, poput moždanog udara.

[0123] U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u smanjenju štete uzrokovane potencijalnom povredom mozga, posebno moždanim udarom. Kompozicije mogu smanjiti potencijalna oštećenja ukoliko se daju pre nego što se dogodi potencijalna povreda mozga, posebno kada se daju pacijentu za koji je utvrđeno da postoji rizik od povrede mozga.

[0124] Primeri ukazuju na to da kompozicije ovog pronalaska mogu biti korisne u lečenju povreda mozga i pomoć tokom oporavku kada se daju nakon što se dogodila povreda. Prema tome, kompozicije pronalaska mogu biti posebno korisne u lečenju povrede mozga kada se daju osobama nakon povrede mozga, poput moždanog udara.

[0125] U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska leče povredu mozga smanjenjem motoričkih oštećenja. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska leče povredu mozga pobolјšanjem motoričke funkcije. U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska leče povredu mozga pobolјšanjem snage mišića. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska leče povredu mozga pobolјšanjem memorije. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska leče povredu mozga pobolјšanjem socijalnog prepoznavanja. U pojedinim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska leče povredu mozga pobolјšanjem neurološke funkcije.

[0126] Lečenje povrede mozga može se odnositi, na primer, na ublažavanje težine simptoma. Lečenje povrede mozga može se odnositi i na smanjenje neuroloških oštećenja nakon moždanog udara. Kompozicije pronalaska koje se koriste u lečenju moždanog udara mogu se dati subjektu pre početka moždanog udara, na primer kod pacijenta za kojeg je utvrđeno da rizikuje od moždanog udara. Kompozicije pronalaska koje se koriste u lečenju moždanog udara mogu se primeniti nakon što se moždani udar desio, na primer, tokom oporavka. Kompozicije pronalaska koje se koriste u lečenju moždanog udara mogu se primeniti tokom akutne faze oporavka (tj. do jedne nedelјe nakon moždanog udara). Kompozicije pronalaska koje se koriste u lečenju moždanog udara mogu se primeniti tokom subakutne faze oporavka (tj. od jedne nedelјe do tri meseca nakon moždanog udara). Kompozicije pronalaska koje se koriste u lečenju moždanog udara mogu se primeniti tokom hronične faze oporavka (od tri meseca nakon moždanog udara).

[0127] U određenim primerima izvođenja, kompozicije pronalaska su za upotrebu u kombinaciji sa sekundarnim aktivnim sredstvom. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska su za upotrebu u kombinaciji sa aspirinom ili tkivni aktivator plazminogena (tPA). Ostali sekundarni agensi uklјučuju druge antitrombotike (poput Clopidogrel-a), antikoagulanse (poput heparina, varfarina, apiksabana, dabigatrana, edoksabana ili rivaroksabana), antihipertenzive (kao što su diuretici, ACE inhibitori, blokatori kalcijumovih kanala, beta blokatori ili alfa-blokatori) ili statine. Kompozicije pronalaska mogu pobolјšati pacijentov odgovor na sekundarno aktivno sredstvo.

[0128] U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska smanjuju efekat ishemije na tkiva. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska smanjuju količinu oštećenja tkiva izazvanih ishemijom. U određenim rešenjima, tkiva oštećena ishemijom su cerebralna tkiva. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska smanjuju nekrozu ili broj nekrotičnih ćelija. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska smanjuju apoptozu ili broj apoptotičnih ćelija. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska smanjuju broj nekrotičnih i apoptotičnih ćelija. U određenim

2

izvođenjima, kompozicije pronalaska sprečavaju ćelijsku smrt nekrozom i/ili apoptozom. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska sprečavaju ćelijsku smrt nekrozom i/ili apoptozom koja je izazvana ishemijom. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska pobolјšavaju oporavak tkiva oštećenog ishemijom. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska pobolјšavaju brzinu uklanjanja nekrotičnih ćelija i/ili apoptotičnih ćelija. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska pobolјšavaju efikasnost uklanjanja nekrotičnih ćelija i/ili apoptotičnih ćelija. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska pobolјšavaju zamenu i/ili regeneraciju ćelija u tkivima. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska pobolјšavaju zamenu i/ili regeneraciju ćelija u tkivima oštećenim ishemijom. U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska pobolјšavaju ukupnu histologiju tkiva (na primer nakon biopsije).

Načini primene

[0129] Poželјno je da se kompozicije pronalaska primenjuju u gastrointestinalnom traktu kako bi se omogućilo isporučivanje i/ili delimična ili potpuna kolonizacija creva bakterijskim sojem pronalaska. Generalno, kompozicije pronalaska se primenjuju oralno, ali se mogu dati i rektalno, intranazalno ili putem bukalnih ili sublingvalnih načina.

[0130] U određenim izvođenjima, kompozicije pronalaska mogu se primeniti kao pena, sprej ili gel.

[0131] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska mogu se primeniti kao supozitorije, kao što su rektalne supozitorije, na primer u obliku ulјa teobroma (kakao puter), sintetičke tvrde masti (npr. Suppocir, Witespol), glicero-želatina, polietilen glikola ili kompozicija glicerinaskog sapuna.

[0132] U određenim realizacijama, kompozicija pronalaska se primenjuje u gastrointestinalni trakt kroz sondu, kao što su nazogastrična sonda, orogastrična sonda, želučana sonda, jejunostomska sonda (J sonda), perkutana endoskopska gastrostoma (PEG) ili otvor, kao otvor kroz zid grudnog koša koji omogućava pristup stomaku, jejunumu i drugim pogodnim pristupnim mestima.

[0133] Kompozicije pronalaska mogu se primeniti jednom ili se mogu davati sekvencijalno kao deo terapijskog režima. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska treba da se primenjuju svakodnevno.

[0134] U određenim realizacijama pronalaska, lečenje prema pronalasku prati analiza mikrobiote creva pacijenta. Lečenje se može ponoviti ako se ne postigne dobra isporuka, i/ili je postignuta delimična ili nepotpuna kolonizacija sojem pronalaska tako da se ne primećuje efikasnost tretmana, ili se tretman može zaustaviti ako je uspešna isporuka, i/ili delimična ili potpuna kolonizacija i efikasnost terapije se registruje.

[0135] U određenim realizacijama, kompozicija pronalaska može se primeniti kod trudne životinje, na primer kod sisara kao što je čovek, kako bi se sprečilo da se kod deteta in utero razvije zapalјenska ili autoimunska bolest i/ili nakon rođenja.

[0136] Kompozicije pronalaska mogu se primeniti kod pacijenta kome je dijagnostikovana neurodegenerativna bolest ili za koji je utvrđeno da rizikuje od razvoja neurodegenerativne bolesti. kompozicije se takođe mogu dati kao profilaktička mera za sprečavanje razvoja neurodegenerativne bolesti kod zdravog pacijenta.

[0137] Kompozicije pronalaska mogu se primeniti pacijentima za kojeg je utvrđeno da ima abnormalnu mikrobiotu u crevima. Na primer, pacijent može imati smanjenu ili odsutnu kolonizaciju Roseburia-om, a naročito vrstom Roseburia hominis.

[0138] Kompozicije pronalaska mogu se primenjivati kao prehrambeni proizvod, kao što je nutritivni dodatak.

[0139] Uopšteno, kompozicije pronalaska su za lečenje lјudi, mada se mogu koristiti i za lečenje životinja, uklјučujući monogastrične sisare, poput živine, svinja, mačaka, pasa, konja ili zečeva. Kompozicije pronalaska mogu biti korisne za pobolјšanje rasta i performansi životinja. Ako se daju životinjama, za to se može koristiti oralna sonda.

Kompozicije

[0140] Uopšteno, kompozicija pronalaska sadrži bakterije. U poželјnim realizacijama pronalaska, kompozicija je formulisana u liofilizovanom obliku. Na primer, kompozicija pronalaska može sadržati granule ili želatinske kapsule, na primer tvrde želatinske kapsule, koje sadrže bakterijski soj pronalaska.

[0141] Poželјno je da kompozicija pronalaska uključuje liofilizovane bakterije. Liofilizacija bakterija je dobro uspostavlјena procedura i relevantne smernice su dostupne u, na primer, referencama [40-42].

[0142] Alternativno, kompozicija pronalaska može uključivati živu, aktivnu bakterijsku kulturu.

[0143] U pojedinim realizacijama, soj bakterija u kompoziciji pronalaska nije inaktiviran, na primer, nije bio inaktiviran toplotom. U pojedinim realizacijama, soj bakterija u kompoziciji pronalaska nije ubijen, na primer, nije ubijen toplotom. U pojedinim realizacijama, soj bakterija u kompoziciji pronalaska nije oslabljen, na primer, nije oslablјen toplotom. Na primer, u pojedinim realizacijama, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska nije ubijen, inaktivisan i/ili oslabljen. Na primer, u pojedinim realizacijama, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska je živ. Na primer, u pojedinim realizacijama, soj bakterija u kompoziciji pronalaska je sposoban za život. Na primer, u pojedinim realizacijama, soj bakterija u kompoziciji pronalaska je sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva. Na primer, u pojedinim realizacijama, soj bakterija u kompoziciji pronalaska je vijabilan i sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva.

[0144] U pojedinim realizacijama, kompozicija uključuje mešavinu živih bakterijskih sojeva i bakterijskih sojeva koji su ubijeni.

[0145] U poželјnim realizacijama, kompozicija pronalaska je inkapsulirana da bi omogućila isporuku bakterijskog soja u crevo. Inkapsulacija štiti kompoziciju od degradacije sve do isporuke u cilјano mesto, kada dolazi o pucanja usled delovanja hemijskih ili fizičkih stimulusa kao što su pritisak, delovanje enzima ili fizička dezintegracija, koja može biti izazvana promenama pH. Može se koristiti bilo koja odgovarajuća metoda inkapsulacije. Primeri tehnika inkapsulacije uklјučuju zaroblјavanje unutar porozne matrice, vezivanje ili adsorpciju na čvrste površine nosača, samoagregaciju flokulacijom ili sredstvima za umrežavanje, i mehaničko zadržavanje iza mikroporozne membrane ili mikrokapsule. Uputstvaza inkapsulaciju koje mogu biti korisne za pripremu kompozicija pronalaska dostupne su, na primer, u referencama [43] i [44].

[0146] Kompozicija se može davati oralno i može biti u obliku tablete, kapsule ili praha. Inkapsulirani proizvodi su najpoželјniji jer su sojevi roda Roseburia anaerobi. Ostali sastojci (kao što je vitamin C, na primer) mogu biti uklјučeni kao sredstva za uklanjanje kiseonika i prebiotski supstarti za pobolјšanje isporuke i/ili delimične ili potpune kolonizacije i in vivo preživlјavanja. Sa druge strane, probiotička kompozicija pronalaska može se primenjivati oralno kao prehrambeni ili hranlјivi proizvod, kao što je fermentisani mlečni proizvod na bazi mleka ili surutke, ili kao farmaceutski proizvod.

[0147] Kompozicija se može formulisati kao probiotik.

2

[0148] Kompozicija pronalaska uklјučuje terapeutski efikasnu količinu bakterijskog soja pronalaska. Terapeutski efikasna količina bakterijskog soja dovolјna je da izazove blagotvorne efekte kod pacijenta. Terapeutski efikasna količina bakterijskog soja može biti dovolјna da rezultira isporukom i/ili delimičnom ili potpunom kolonizacijom creva pacijenta.

[0149] Odgovarajuća dnevna doza bakterija, na primer za odraslog čoveka, može biti od oko 1 x 10<3>do oko 1 x 10<11>jedinica formiranih kolonija (CFU, od eng. colony forming units); na primer, od oko 1 x 10<7>do oko 1 x 10<10>CFU; u drugom primeru od oko 1 x 10<6>do oko 1 x 10<10>CFU.

[0150] U određenim realizacijama, kompozicija sadrži soj bakterija u količini od oko 1 x 10<6>do oko 1 x 10<11>CFU/g, u odnosu na težinu kompozicije; na primer, od oko 1 x 10<8>do oko 1 x 10<10>CFU/g. Doza može biti, na primer, 1 g, 3 g, 5 g i 10 g.

[0151] Tipično, probiotik, kao što je kompozicija pronalaska, se po potrebi kombinuje sa najmanje jednim pogodnim prebiotskim jedinjenjem. Prebiotsko jedinjenje je obično nesvarljivi uglјeni hidrat, kao što je oligo- ili polisaharid, ili šećerni alkohol, koji se ne razgraditi ili apsorbovati u gornjem delu digestivnog trakta. Poznati prebiotici uklјučuju komercijalne proizvode kao što su inulin i transgalaktooligosaharidi.

[0152] U određenim realizacijama, probiotska kompozicija ovog pronalaska uklјučuje prebiotičko jedinjenje u količini od oko 1 do oko 30% težine, u odnosu na ukupnu težinu kompozicije (npr. od 5 do 20% težine). Uglјeni hidrati se mogu birati iz grupe koju čine: frukto-oligosaharidi (ili FOS, od eng. fructo- oligosaccharides), frukto-oligosaharidi kratkog lanca, inulin, izomalt-oligosaharidi, pektini, ksilo-oligosaharidi (ili XOS, od eng. xylo-oligosaccharides), hitozan-oligosaharidi (ili COS, od eng. chitosan-oligosaccharides), beta-glukani, skrobovi modifikovana obradiva guma i rezistentni skrobovi, polidekstroza, D-tagatoza, bagremova vlakna, rogač, ovas i citrusna vlakna. U jednom aspektu, prebiotici su frukto-oligosaharidi kratkog lanca (radi jednostavnosti prikazani ovde dole kao FOS-c.c); navedeni FOS-c.c. nisu svarlјivi uglјeni hidrati, koji se uglavnom dobijaju preradom šećera iz repe, uklјučujući molekul saharoze za koji su vezana tri molekula glukoze.

[0153] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska se koriste u kombinaciji sa drugim terapijskim jedinjenjem za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnog poremećaja. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska se daju sa prehrambenim suplementima koji modulišu neuroprotekciju ili neuroproliferaciju. U poželјnim rešenjima, nutritivni suplementi sadrže ili se sastoje od nutritivnih vitamina. U određenim realizacijama, vitamini su vitamin B6, magnezijum, dimetilglicin (vitamin B16) i vitamin C. U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska se daju u kombinaciji sa drugim probiotikom.

[0154] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska su za upotrebu u pojačavanju dejstva drugog agensa na neurodegenerativnu bolest. Efekti imuno-modulatornog delovanja kompozicija pronalaska mogu učiniti mozak podložnijim konvencionalnim terapijama kao što su Levodopa, agonisti dopamina, MAO-B inhibitori, COMT inhibitori, antagonisti glutamata ili antiholinergici, koji su primeri sekundarnih agenasa koja se daju u kombinaciji (sukcesivno ili istovremeno) sa kompozicijama pronalaska.

[0155] Kompozicije pronalaska mogu uključivati farmaceutski prihvatlјive pomoćne supstance ili nosače. Primeri takvih pogodnih pomoćnih supstanci mogu se naći u referenci [45]. Prihvatlјivi nosači ili diluens za terapijsku upotrebu dobro su poznati u farmaceutskoj oblasti i opisani su, na primer, u referenci [46]. Primeri pogodnih nosača uklјučuju laktozu, skrob, glukozu, metil celulozu, magnezijum

2

stearat, manitol, sorbitol i slično. Primeri pogodnih sredstava za razblaživanje uklјučuju etanol, glicerol i vodu. Izbor farmaceutskog nosača, pomoćne supstance ili razblaživača može se odabrati s obzirom na predviđeni način primene i standardnu farmaceutsku praksu. Farmaceutske kompozicije mogu sadržati, ili kao dodatak, nosač, pomoćnu supstancu ili diluens, bilo koje odgovarajuće vezivno sredstvo, mazivo (lubrikant), suspenzijsko sredstvo, sredstvo za oblaganje, sredstvo za rastvaranje. Primeri pogodnih veziva uklјučuju skrob, želatinu, prirodne šećere kao što su glukoza, anhidrovana laktoza, “free-flow” laktoza, beta-laktoza, zaslađivači od kukuruza, prirodne i sintetičke gume, kao što su bagrem, tragakant ili natrijum alginat, karboksimetil celuloza i polietilen glikol. Primeri pogodnih lubrikanata uklјučuju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i slično. U farmaceutskoj kompoziciji mogu se nalaziti konzervansi, stabilizatori, boje i čak sredstva za aromatizaciju. Primeri konzervansa uklјučuju natrijum benzoat, sorbinsku kiselinu i estre p-hidroksibenzoeve kiseline. Takođe se mogu koristiti antioksidanti i agensi za suspendovanje.

[0156] Kompozicije pronalaska mogu se formulisati kao prehrambeni proizvod. Na primer, prehrambeni proizvod može pružiti nutritivnu vrednost kao dodatak na terapijski efekat pronalaska, kao na primer u dodatku ishrani. Slično tome, prehrambeni proizvod može biti formulisan da pobolјša ukus kompozicije pronalaska ili da kompoziciju učini privlačnijom za konzumiranje na način da bude sličnija uobičajenoj prehrambenoj jedinici, nego farmaceutskoj kompoziciji. U određenim realizacijama, kompozicija pronalaska je formulisana kao proizvod na bazi mleka. Izraz „proizvod na bazi mleka“ označava bilo koji tečni ili polučvrsti proizvod na bazi mleka ili surutke koji ima različit sadržaj masti. Proizvod na bazi mleka može biti, na primer, kravlјe mleko, kozje mleko, ovčje mleko, obrano mleko, celo mleko, mleko rekombinovano iz mleka u prahu i surutke bez ikakve prerade ili prerađeni proizvod, kao što je jogurt, usireno mleko, skuta, kiselo mleko, kiselo punomasno mleko, puter mleko i drugi proizvodi od kiselog mleka. Druga važna grupa uklјučuje mlečna pića, kao što su napitci od surutke, fermentisano mleko, kondenzovano mleko, mleko za dojenčad ili bebu; aromatizovana mleka, sladoled; hranu koja sadrži mleko, poput slatkiša.

[0157] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva roda Roseburia i ne sadrže bakterije iz bilo kog drugog roda, ili ih sadrže samo minimalno ili sadrže biološki nebitne količine bakterija iz drugih rodova. Prema tome, u pojedinim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva roda Roseburia, i koja ne sadrži bakterije iz bilo kog drugog roda ili ih sadrži samo minimalno ili sadrži biološki nebitne količine bakterija iz drugih rodova.

[0158] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia hominis i ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste ili ih sadrže samo minimalno ili sadrže biološki nebitne količine bakterija druge vrste. Prema tome, u pojedinim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia hominis, i koja ne sadrži bakterije bilo koje druge vrste ili ih sadrži samo minimalno ili sadrži biološki nebitne količine bakterija druge vrste.

[0159] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia intestinalis i ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste ili ih sadrže samo minimalno ili sadrže biološki nebitne količine bakterija druge vrste. Prema tome, u pojedinim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia intestinalis, koja ne sadrži bakterije bilo koje druge vrste ili ih sadrži samo minimalno ili sadrži biološki nebitne količine bakterija druge vrste.

2

[0160] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia faecis i ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste ili ih sadrže samo minimalno ili sadrže biološki nebitne količine bakterija druge vrste. Prema tome, u pojedinim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia faecis, koja ne sadrži bakterije bilo koje druge vrste ili ih sadrži samo minimalno ili sadrži biološki nebitne količine bakterija druge vrste.

[0161] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia hominis i ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste roda Roseburia, ili ih sadrže samo minimalno, ili sadrže biološki nebitne količine bakterija druge vrste roda Roseburia. Pema tome, u pojedinim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia hominis, koja ne sadrži bakterije bilo koje druge vrste roda Roseburia, ili ih sadrži samo minimalno, ili sadrži biološki nebitne količine bakterija druge vrste roda Roseburia.

[0162] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia intestinalis i ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste roda Roseburia, ili ih sadrže samo minimalno, ili sadrže biološki nebitne količine bakterija druge vrste roda Roseburia. Tako, u pojedinim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia intestinalis, koja ne sadrži bakterije bilo koje druge vrste roda Roseburia, ili ih sadrži samo minimalno, ili sadrži biološki nebitne količine bakterija druge vrste roda Roseburia.

[0163] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia faecis i ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste roda Roseburia, ili ih sadrže samo minimalno, ili sadrže biološki nebitne količine bakterija od drugog Roseburia vrsta. Tako, u pojedinim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan ili više bakterijskih sojeva vrste Roseburia faecis, koja ne sadrži bakterije bilo koje druge vrste roda Roseburia, ili ih sadrži samo minimalno, ili sadrži biološki nebitne količine bakterija druge vrste roda Roseburia.

[0164] U određenim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže jedan soj bakterije ili vrstu i ne sadrže nijedan drugi bakterijski soj ili vrstu. Takve kompozicije mogu sadržati samo minimalne ili biološki nebitne količine drugih sojeva ili vrsta bakterija. Takve kompozicije mogu biti iz kulture koja u osnovi nema druge vrste organizama.

[0165] U pojedinim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan bakterijski soj roda Roseburia, koja ne sadrži bakterije iz bilo kog drugog soja ili koja sadrži samo minimalnu ili biološki nebitnu količinu bakterija iz drugog soja.

[0166] U pojedinim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan bakterijski soj vrste Roseburia hominis, koja ne sadrži bakterije iz bilo kog drugog soja ili koja sadrži samo minimalnu ili biološki nebitnu količinu bakterija iz drugog soja.

[0167] U pojedinim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan bakterijski soj vrste Roseburia intestinalis, koja ne sadrži bakterije iz bilo kog drugog soja ili koja sadrži samo minimalnu ili biološki nebitnu količine bakterija iz drugog soja.

[0168] U pojedinim realizacijama, pronalazak obezbeđuje kompoziciju za upotrebu u terapiji koja sadrži jedan bakterijski soj vrste Roseburia faecis, koja ne sadrži bakterije iz bilo kog drugog soja ili koja sadrži samo minimalnu ili biološki nebitnu količinu bakterija iz drugog soja.

2

[0169] U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže više od jednog bakterijskog soja. Na primer, u pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže više od jednog soja unutar iste vrste (npr. više od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 ili 45 sojeva) i, po potrebi, ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže manje od 50 sojeva unutar iste vrste (npr. manje od 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 ili 3 soja) i, po potrebi, ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste. U pojedinim realizacijama, kompozicije pronalaska sadrže 1-40, 1-30, 1-20, 1-19, 1-18, 1-15, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-50, 2-40, 2-30, 2-20, 2-15, 2-10, 2-5, 6- 30, 6-15, 16-25 ili 31-50 sojeva unutar iste vrste i, po potrebi, ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste. Pronalazak obuhvata bilo koju kombinaciju prethodno navedenog.

[0170] U pojedinim realizacijama, kompozicija sadrži mikrobni konzorcijum. Na primer, u pojedinim izvođenjima, kompozicija sadrži soj bakterija Roseburia kao deo mikrobnog konzorcijuma. Na primer, u pojedinim izvođenjima, soj bakterija Roseburia je prisutan u kombinaciji sa jednim ili više (npr. najmanje 2, 3, 4, 5, 10, 15 ili 20) drugih sojeva bakterija iz drugih rodova sa kojima može da živi simbiotski in vivo u crevima. Na primer, u pojedinim realizacijama, kompozicija sadrži soj bakterija Roseburia u kombinaciji sa bakterijskim sojem iz drugog roda. U pojedinim izvođenjima, mikrobni konzorcijum sadrži dva ili više sojeva bakterija dobijenih iz uzorka fecesa jednog organizma, npr. čoveka. U pojedinim izvođenjima, mikrobni konzorcijum se ne može naći zajedno u prirodi. Na primer, u pojedinim izvođenjima, mikrobni konzorcijum sadrži sojeve bakterija dobijene iz uzoraka fecesa najmanje dva različita organizma. U pojedinim izvođenjima, dva različita organizma su iz iste vrste, npr. dva različita čoveka. U pojedinim izvođenjima, dva različita organizma su dete i odrasli čovek. U pojedinim izvođenjima, dva različita organizma su čovek i ne-humani sisar.

[0171] U pojedinim realizacijama, kompozicija pronalaska dodatno sadrži soj bakterija koji ima iste karakteristike bezbednosti i terapijske efikasnosti kao soj MRx0001, ali koji nije MRx0001 ili koji nije Roseburia hominis.

[0172] U pojedinim realizacijama, kompozicija pronalaska dodatno sadrži soj bakterija koji ima iste karakteristike bezbednosti i terapijske efikasnosti kao soj A, ali koji nije soj A ili koji nije Roseburia intestinalis.

[0173] U pojedinim realizacijama u kojima kompozicija pronalaska sadrži više od jednog bakterijskog soja, vrste ili roda, pojedinačni sojevi, vrste ili rodovi bakterija mogu biti za odvojeno, istovremeno ili sukcesivno davanje. Na primer, kompozicija može sadržati sve više od jednog bakterijskog soja, vrste ili roda, ili se bakterijski sojevi, vrste ili rodovi mogu čuvati odvojeno i primenjivati odvojeno, istovremeno ili sukcesivno. U pojedinim realizacijama, više od jednog bakterijskog soja, vrste ili roda, mogu se čuvati odvojeno, ali se pre upotrebe pomešaju.

[0174] U pojedinim realizacijama, soj bakterija za upotrebu u pronalasku je dobijen iz fecesa odraslih lјudi. U pojedinim realizacijama u kojima kompozicija pronalaska sadrži više od jednog bakterijskog soja, svi bakterijski sojevi su dobijeni iz fecesa odraslih lјudi ili ako su prisutni drugi bakterijski sojevi, oni su prisutni samo u minimalnoj količini. Bakterije mogu biti kultivisane nakon što su dobijene iz fecesa odraslih lјudi i upotreblјene u kompoziciji pronalaska.

[0175] U pojedinim realizacijama, soj bakterija za upotrebu u pronalasku je dobijen iz fecesa male dece (do 2. godine starosti). U pojedinim realizacijama u kojima kompozicija pronalaska sadrži više od jednog bakterijskog soja, svi sojevi bakterija su dobijeni iz fecesa male dece ili ako su prisutni drugi bakterijski sojevi, oni su prisutni samo u minimalnoj količini. Bakterije mogu biti kultivisane nakon što su dobijene iz fecesa male dece i upotreblјene u kompoziciji pronalaska.

2

[0176] Kao što je gore pomenuto, u pojedinim izvođenjima, jedan ili više bakterijskih sojeva Roseburia je/su jedina terapeutski aktivna sredstva u kompoziciji pronalaska. U pojedinim realizacijama, soj(evi) bakterija u kompoziciji je/su jedina terapeutski aktivna sredstva u kompoziciji pronalaska.

[0177] Kompozicije za upotrebu u skladu sa pronalaskom mogu ili ne moraju da zahtevaju odobrenje za stavlјanje u promet.

[0178] U određenim realizacijama, pronalazak obezbeđuje gore pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je navedeni bakterijski soj liofilizovan. U određenim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje gore pomeutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je navedeni bakterijski soj osušen sprejem. U određenim realizacijama, pronalazak pruža gore pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je bakterijski soj liofilizovan ili osušen sprejem i u kojoj je živ. U određenim realizacijama, pronalazak pruža gore pomenutu farmaceutsku kompoziciju, u kojoj je bakterijski soj liofilizovan ili osušen sprejem i u kojoj je viabilan. U određenim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje gore pomeutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je bakterijski soj liofilizovan ili osušen sprejem i gde je sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva. U određenim izvođenjima, pronalazak pruža gore pomenutu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je bakterijski soj liofilizovan ili osušen sprejem i gde je viabilan i sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva.

[0179] U pojedinim slučajevima, liofilizovani soj bakterija se rekonstituiše pre primene. U pojedinim slučajevima, rekonstitucija se vrši pomoću ovde opisanog diluensa.

[0180] Sastavi pronalaska mogu obuhvatati farmaceutski prihvatlјive pomoćne supstance, diluense ili nosače.

[0181] U pojedinim realizacijama, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj pronalaska; i farmaceutski prihvatlјivu pomoćnu supstancu, nosač ili diluens; pri čemu je bakterijski soj u količini dovolјnoj za lečenje neurodegenerativnog poremećaja kada se daje subjektu kome je to potrebno.

[0182] U određenim izvođenjima, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj pronalaska; i farmaceutski prihvatlјivu pomoćnu supstancu, nosač ili diluens; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini dovolјnoj za lečenje ili sprečavanje neurodegenerativnog poremećaja.

[0183] U određenim izvođenjima, pronalazak pruža gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu je količina bakterijskog soja od oko 1 × 10<3>do oko 1 × 10<11>jedinica formiranja kolonija po gramu u odnosu na težinu kompozicije.

[0184] U određenim realizacijama, pronalazak obezbeđuje gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija daje u dozi od 1 g, 3 g, 5 g ili 10 g.

[0185] U određenim realizacijama, pronalazak pruža gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija primenjuje metodom odabranom iz grupe koju čine oralni, rektalni, potkožni, nazalni, bukalni i sublingvalni.

[0186] U određenim realizacijama, pronalazak pruža gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži nosač koji je odabran iz grupe koju čine laktoza, skrob, glukoza, metil celuloza, magnezijum stearat, manitol i sorbitol.

[0187] U određenim realizacijama, pronalazak pruža gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži diluens koji je odabran iz grupe koju čine etanol, glicerol i voda.

[0188] U određenim realizacijama, pronalazak pruža gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži pomoćnu supstancu odabranu iz grupe koju čine skrob, želatin, glukoza, anhidrovana laktoza, „free-flow“ laktoza, beta-laktoza, kukuruzni zaslađivač, bagrem, tragakant, natrijum alginat, karboksimetil celuloza, polietilen glikol, natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat i natrijum hlorid.

[0189] U određenim realizacijama, pronalazak pruža gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, koja nadalјe sadrži najmanje jedan konzervans, antioksidans i stabilizator.

[0190] U određenim realizacijama, pronalazak pruža gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži konzervans izabran iz grupe koju čine natrijum benzoat, sorbinska kiselina i estri phidroksibenzojeve kiseline.

[0191] U određenim realizacijama, pronalazak obezbeđuje gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, gde je navedeni bakterijski soj liofilizovan.

[0192] U određenim realizacijama, pronalazak pruža gore navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu kada se kompozicija čuva u zatvorenom kontejneru na oko 4°C ili oko 25°C i kada se posuda postavi u atmosferu sa 50% relativne vlažnosti, najmanje 80% bakterijskog soja, mereno u jedinicama formiranih kolonija, ostaje nakon perioda od najmanje oko: 1 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1,5 godine, 2 godine, 2,5 godine ili 3 godine.

[0193] U pojedinim izvođenjima, kompozicija pronalaska je obezbeđena u zatvorenom kontejneru koja sadrži kompoziciju kako je ovde opisana. U pojedinim izvođenjima, zatvoreni kontejner je kesica ili bočica. U pojedinim izvođenjima, kompozicija pronalaska je obezbeđena u špricu koja sadrži kompoziciju kako je ovde opisana.

[0194] Sastav ovog pronalaska može, u pojedinim realizacijama, biti obezbeđen kao farmaceutska formulacija. Na primer, kompozicija može biti u obliku tablete ili kapsule. U pojedinim realizacijama, kapsula je želatinska kapsula ("gel-kapa").

[0195] U pojedinim izvođenjima, kompozicije pronalaska se primenjuju oralno. Oralna primena može uklјučivati gutanje, tako da jedinjenje ulazi u gastrointestinalni trakt, i/ili bukalno, lingvalno ili sublingvalno, kojim jedinjenje ulazi u krvotok direktno iz usta.

[0196] Farmaceutske formulacije pogodne za oralnu primenu uklјučuju čvrste čepove, čvrste mikročestice, polučvrste i tečne (uklјučujući više-fazne ili dispergovane sisteme) kao što su tablete; meke ili tvrde kapsule koje sadrže multi- ili nano-čestice, tečnosti (npr. vodeni rastvori), emulzije ili praškovi; pastile (uklјučujući one napunjene tečnošću); za žvakanje; gelovi; brzo raspršene oblike doziranja; filmovi; vaginalete; sprejevi; i bukalni/mukoadhezivni flasteri.

[0197] U pojedinim realizacijama farmaceutska formulacija je enterična formulacija, tj. gastrorezistentna formulacija (na primer, otporna na pH želuca) koja je odgovarajuća za isporuku kompozicije pronalaska u intestinum oralnom primenom. Enterične formulacije mogu biti posebno korisne kada su bakterije ili druge komponente kompozicije osetlјive na kiseline, npr. podložne degradaciji u uslovima želudca.

[0198] U pojedinim realizacijama enterična formulacija sadrži enteričnu oblogu. U pojedinim realizacijama, formulacija ima oblik obložene enterične doze. Na primer, formulacija može biti enterična-obložena tableta ili enterična-obložena kapsula ili tome slično. Enterična obloga može biti uobičajena enterična obloga, na primer, uobičajena obloga za tabletu, kapsulu ili tome slično za oralnu

1

primenu. Formulacija može sadržati oblogu od filma, na primer, tanki sloj enteričnog polimera, npr. u kiselini nerastvorlјiv polimer.

[0199] U pojedinim realizacijama, enterična formulacija je u osnovi enterična, na primer, gastrorezistentna bez potrebe za enteričnom oblogom. Prema tome, u pojedinim realizacijama, formulacija je enterična formulacija koja ne sadrži enteričnu oblogu. U pojedinim realizacijama, formulacija je kapsula napravlјena od termogelnog materijala. U pojedinim realizacijama, termogelni materijal je celulozni materijal, kao što je metilceluloza, hidroksimetilceluloza ili hidroksipropilmetilceluloza (HPMC). U pojedinim realizacijama, kapsula sadrži omotač koji ne sadrži polimer koji stvara film. U pojedinim realizacijama, kapsula sadrži lјusku, a lјuska je od hidroksipropilmetilceluloze i ne sadrži polimer koji stvara film (npr. videti [47]). U pojedinim realizacijama, formulacija je unutrašnja enterična kapsula (na primer, Vcaps® iz Capsugel-a).

[0200] U pojedinim realizacijama, formulacija je mekana kapsula. Mekane kapsule su kapsule koje mogu, zahvalјujući dodatim omekšivačima, koji su prisutni u omotaču kapsule, kao što su, na primer, glicerol, sorbitol, maltitol i polietilen glikoli, da imaju određenu elastičnost i mekoću. Mekane kapsule se mogu proizvoditi, na primer, na bazi želatina ili skroba. Mekane kapsule na bazi želatina komercijalno su dostupne od različitih dobavlјača. U zavisnosti od načina primene, kao što je, na primer, oralni ili rektalni način, mekane kapsule mogu imati različite oblike, mogu biti na primer okrugle, ovalne, dugulјaste ili u obliku torpeda. Mekane kapsule mogu se proizvesti konvencionalnim postupcima, kao što su na primer Scherer-ov postupak, Accogel-ov postupak ili u postupku kaplјica ili duvanja.

Metode gajenja

[0201] Sojevi bakterija koje su za upotrebu u ovom pronalasku mogu se gajiti upotrebom standardnih mikrobioloških tehnika kako su detalјno opisane u, na primer, referencama [48-50].

[0202] Čvrsti ili tečni medijum koji se koristi za gajenje može biti YCFA agar ili YCFA medijum. YCFA podloga može sadržavati (na 100 ml, približne vrednosti): Casitone (1,0 g), ekstrakt kvasca (0,25 g), NaHCO3(0.4 g), cistein (0,1 g), K2HPO4(0,045 g), KH2PO4(0,045 g), NaCl (0,09 g), (NH4)2SO4(0,09 g), MgSO4x 7H2O (0,009 g), CaCl2(0,009 g), resazurin (0,1 mg), hemin (1 mg), biotin (1 µg), kobalamin (1 µg), p-aminobenzoeva kiselina (3 µg), folna kiselina (5 µg) i piridoksamin (15 µg).

Sojevi bakterija za upotrebu u kompozicijama vakcina

[0203] Pronalazači su identifikovali da su sojevi bakterija pronalaska korisni za lečenje ili prevenciju neurodegenerativnih poremećaja. Ovo je verovatno rezultat efekta koji bakterijski sojevi pronalaska imaju na imuni sistem domaćina. Prema tome, kompozicije pronalaska mogu takođe biti korisne za prevenciju neurodegenerativnih poremećaja, kada se primenjuju kao kompozicije vakcine. U određenim takvim realizacijama, sojevi bakterija pronalaska mogu biti ubijeni, inaktivirani ili oslabljeni. U određenim takvim realizacijama, kompozicije mogu sadržati adjuvans u vakcini. U određenim realizacijama, kompozicije su za primenu injekcijom, kao što je subkutana injekcija.

Opšte

[0204] Praksa ovog pronalaska koristiće, ukoliko nije drugačije naznačeno, uobičajene metode hemije, biohemije, molekularne biologije, imunologije i farmakologije, u okviru veštine tehnike. Takve tehnike su u potpunosti objašnjene u literaturi. Viditi na primer reference [51] i [52-58], itd.

2

[0205] Izraz "obuhvata" se odnosi na "uklјučuje", kao i "sastoji se" na primer, kompozicija „koja obuhvata“ X može se sastojati isklјučivo od X ili može obuhvatati nešto dodatno na primer X Y.

[0206] Pojam „otprilike“ u odnosu na numeričku vrednost x je opcioni i znači, na primer, x 10%.

[0207] Reč „suštinski“ ne isklјučuje „potpuno“ na primer kompozicija koja je „suštinski bez“ Y može biti potpuno bez Y. Tamo gde je potrebno, reč „suštinski“ može se izostaviti iz definicije pronalaska.

[0208] Upućivanje na procentualni identitet sekvence između dve nukleotidne sekvence znači da je, kada se poravnaju, taj procenat nukleotida isti u poređenju dve sekvence. Ovo poravnanje i procenat homologije ili identiteta sekvence mogu se odrediti pomoću softverskih programa poznatih u struci, na primer onih opisanih u odelјku 7.7.18 ref. [59]. Poželјno poravnanje je određeno Smith-Watermanovim algoritmom za homologiju pretraživanja koji koristi paralelnu pretragu praznine sa zabranom za praznine od 12 i zabranom za produženje praznine od 2, BLOSUM matricom od 62. Smith-Watermanov algoritam pretrage homologije je opisan u ref. [60].

[0209] Ako nije izričito navedeno, proces ili postupak koji sadrži brojne korake može obuhvatati dodatne korake na početku ili na kraju postupka, ili može sadržati dodatne intervenišuće korake. Takođe, koraci se mogu kombinovati, izostavlјati ili izvoditi u alternativnom redosledu, ako je to potrebno.

[0210] Ovde su opisane razne realizacije pronalaska. Podrazumeva se da se karakteristike navedene u svakoj realizaciji mogu kombinovati sa drugim naznačenim karakteristikama, kako bi se obezbedile dalјe realizacije. Konkretno, realizacije koja su ovde istaknute kao prikladna, tipična ili poželјna mogu se kombinovati jedna sa drugom (osim kada se međusobno isklјučuju).

NAČINI IZVOĐENјA PRONALASKA

Primer 1 - Efikasnost bakterijskih inokuluma na smanjenje sekrecije IL-6.

Rezime

[0211] Aktivacija proinflamatornih citokina povezana je sa oštećenjem neurona kod neurodegenerativne bolesti. Lipopolisaharid (LPS) je poznati stimulator proinflamatornog citokina IL-6. Ćelije humanog glioblastoma astrocitoma tretirane su kompozicijama koje sadrže sojeve bakterija prema pronalasku u kombinaciji sa LPS-om kako bi se posmatrala njihova sposobnost modulacije nivoa IL-6.

Materijal i metode

Soj bakterije

Roseburia hominis MRx0001

Ćelijska linija

[0212] MG U373 je humani glioblastoma astrocitoma izveden iz malignog tumora i kuplјen je od Sigma-Aldrich (kat. br. 08061901-1VL). MG U373 ćelije humanog glioblastoma astrocitoma uzgajane su u MEM (Sigma Aldrich, kat. br. M-2279), dopunjenog sa 10% FBS, 1% Pen Strep, 4 mM L-Glut, IX MEM neesencijalnim rastvorom aminokiseline i IX natrijum piruvatom.

Postupak

[0213] Jednom uzgajane, MG U373 ćelije su zasejane na ploču sa 24-bunara po 100.000 ćelija/bunaru. Ćelije su tretirane samo LPS-om (1 ug/ml) ili sa 10% supernatanta bakterija iz MRx0001 tokom 24 sata.

Takođe je izvršena kontrola gde su ćelije inkubirane u netretiranom medijumu. Ćelije su tretirane sa 10% supernatanta bakterija samo iz MRx0001 ili YCFA tokom 24 sata. Takođe je izvršena kontrola gde su ćelije inkubirane u netretiranom medijumu. Posle toga su sakuplјeni supernatanti bez ćelija, centrifugirani na 10.000xg tokom 3 min na 4°C. IL-6 je meren upotrebom humanog IL-6 ELISA kompleta kompanije Peprotech (kat. br. #900-K16) prema uputstvu proizvođača.

Rezultati

[0214] Rezultati ovih eksperimenata prikazani su na slikama 1 i 9. Tretman ćelija neuroblastoma sa LPS-om i sojem bakterija dovelo je do smanjenja nivoa sekretovanog IL-6 do nivoa kao kod kontrolnih ćelija koje nisu tretirane LPS-om (Slika 1). Tretman ćelija neuroblastoma sa Roseburia hominis doveo je do smanjenja nivoa sekretovanog IL-6 ispod nivoa zabeleženog kod kontrolnih ćelija (Slika 9).

Primer 2 - Efikasnost bakterijskih inokuluma na smanjenje aktivacije NFκB

Rezime

[0215] Aktivacija promotora NFkB dovodi do sinteze proinflamatornih citokina koji obuhvataju IL-1β, IL-1α, IL-18, TNFα i IL-6. Promotor NFκB može se aktivirati pomoću α-sinukleina i LPS-a, stimulisanjem TLR4. Mutacije u α-sinukleinu, kao što je α-sinuklein A53T, povezane su sa pojavom familijarne Parkinsonove bolesti. Lečenje neuronskih ćelija LPS-om simuliše razvoj Parkinsonove bolesti izazvane faktorima životne sredine. Ispitana je sposobnost kompozicija, koje obuhvataju sojeve bakterija prema pronalasku, da inhibiraju aktivaciju promotora NFkB.

Materijal i metode

Soj bakterije

Roseburia hominis MRx0001

Ćelijska linija

[0216] Humani “Hek blue TLR4” je kuplјen od InvivoGen-a (kat. br. hkb-htlr4). Humani “Hek blue TLR4” su uzgajani u DMEM medijumu sa visokim sadržajem glukoze (Sigma Aldrich, kat. br. D-6171), koji je dopunjen sa 10% FBS, 1% Pen Strep, 4 mM L-Glut, Normocin-om i “1X HEK Blue Selection” rastvorom.

Postupak

[0217] Jednom uzgajane, humane “Hek blue” ćelije su zasejane na ploču sa 96-bunara po 25.000 ćelija/bunaru u 4 replike. Jedan set ćelija je tretiran samo sa α-sinukleinom A53T (1 ug/ml) ili sa 10% supernatantom bakterija iz MRx0001 tokom 22 sata. Drugi set ćelija je tretiran samo LPS-om (10 ng/ml, iz Salmonella enterica serotipa Typhimurium, Sigma Aldrich, kat. br. L6143) ili sa 10% supernatantom bakterija iz MRx0001 tokom 22 sata. Ćelije su potom oborene centrifugiranjem i 20 ul supernatanta je pomešano sa 200 ul “Quanti Blue” reagensa (InvivoGen, kat. br. rep-qb2), inkubirano 2 sata i potom je očitana apsorbancija na 655 nm.

Rezultati

[0218] Rezultati ovih eksperimenata prikazani su na slikama 2 i 3. Slika 2 pokazuje da je aktiviranje promotora NFκB α-sinuklein-om inhibirano MRx0001. Slika 3 pokazuje da je aktiviranje NTκB promotora pomoću LPS-a inhibirano MRx0001.

Primer 3 - Efikasnost bakterijskih inokuluma da promeni antioksidativni kapacitet

Rezime

4

[0219] Sposobnost kompozicija koje uključuju sojeve bakterija prema pronalasku da promene antioksidativni kapacitet. Antioksidativni kapacitet bakterijskog soja utvrđen je korišćenjem dobro poznatog ABTS (2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolin-6-sulfonske kiseline) testa.

Soj bakterije

Roseburia hominis MRx0001

Postupak

[0220] Bakterijske ćelije (10<6>ili više) sakuplјane su i centrifugirane. Resuspendovane su u puferu testa (upotrebom tri puta veće zapremine pufera od zapremine peleta). Suspenzija je sonifikovana na ledu tokom 5 minuta, a zatim je oborena na 12.000 x g tokom 10 minuta. Supernatant je uklonjen i izmeren pomoću ABTS testa koji je proizvela Sigma Aldrich (kod CS0790), u skladu sa uputstvima proizvođača.

Rezultati

[0221] Rezultati ovih eksperimenata prikazani su na Slici 4. Slika 4 prikazuje da MRx0001 ima antioksidativni kapacitet od približno 1 mM u poređenju sa Trolox-om.

Primer 4 - Efikasnost bakterijskih inokuluma na promenu nivoa peroksidacije lipida

Rezime

[0222] Ispitana je sposobnost kompozicija koje uključuju sojeve bakterija prema pronalasku da menjaju nivo peroksidacije lipida. Određivanje reaktivnih supstanci tiobarbiturne kiseline (TBAR) je korišćeno za merenje nusproizvoda lipidne peroksidacije.

Materijal i metode

Soj bakterije

Roseburia hominis MRx0001

Postupak

[0223] Bakterijske ćelije (10<6>ili više) sakuplјene su i centrifugirane, izveden je korak pranja izotoničnim fiziološkim rastvorom pre nego što je pelet resuspendovan u kalijum hloridnom puferu eseja. Suspenzija je somifikovana na ledu tokom 10 minuta, a zatim je 10 minuta centrifugirana na 10000 x g. Supernatant je uklonjen i urađena je procena nivoa peroksidacije lipida primenom testa određivanja reaktivnih supstanci tiobarbiturne kiseline.

Rezultati

[0224] Rezultati eksperimenata prikazani su na Slici 5. Slika 5 pokazuje da je MRx0001 sposoban da inhibira peroksidaciju lipida za približno 18%, što je viši antioksidativni kapacitet u poređenju sa pozitivnom kontrolom, butiliranim hidroksitoluenom (1% w/v).

Primer 5 - Efikasnost bakterijskih inokuluma na aktivnost histonske deacetilaze

Rezime

[0225] Ispitana je sposobnost kompozicija koje uključuju sojeve bakterija pronalasku da menjaju aktivnost histonske deacetilaze. Narušena regulacija histonske deacetilaze uključena je u patogenezu neurodegenerativnih bolesti povezanih sa starošću.

Materijal i metode

Soj bakterije

Roseburia hominis MRx0001

Ćelijska linija

[0226] Korišćena je ćelijska linija HT-29 jer ima histon deacetilazu.

Postupak

[0227] Supernatanti bez ćelija nepokretnih faza bakterijskih kultura izolovani su centrifugiranjem i filtriranjem kroz filtru od 0,22 uM. HT-29 ćelije su korišćene 3 dana nakon postizanja konfluentnosti i potom spuštene u 1 mL DTS 24 sata pre početka eksperimenta. HT-29 ćelije su tretirane sa 10% -tni supernatant bez ćelija razblaženim u DTS-u. Nakon ovoga ćelije su ostavljene da se inkubiraju 48 sati. Proteini nukleaze su zatim ekstrahovane pomoću kompleta za ekstrakciju nukleaza proizvođača Sigma Aldrich, a uzorci su potom brzo zamrznuti pre merenja HDAC aktivnosti. Aktivnost HDAC procenjena je fluorometrijski pomoću kompleta Sigma Aldrich (UK).

Rezultati

[0228] Rezultati eksperimenata prikazani su na Slici 6. Slika 6 prikazuje da MRx0001 može da smanji nivo aktivnosti histonske deacetilaze.

Primer 6 - Nivo proizvodnje indola u bakterijama

Rezime

[0229] Ispitana je sposobnost bakterija pronalaska da proizvode indol. Indol je povezan sa ublažavanjem inflamacije i oksidativnog stresa.

Materijal i metode

Soj bakterije

Roseburia hominis MRx0001

[0230] ATCC 11775 je bakterijski referentni soj za koji je poznato da proizvodi indol.

Postupak

[0231] Intaktne bakterijske ćelije u stacionarnoj fazi su inkubirane sa 6 mM triptofanom tokom 48 sati. Vrste bakterija koje poseduju enzim triptofanazu koristiće triptofan kao supstrat za proizvodnju indola. Nakon 48-časovnog perioda inkubacije, supernatant je uklonjen i dodat Kovačevom reagensu za kvantifikaciju indola. Standardi, osnovni rastvori i reagensi pripremlјeni su korišćenjem standardizovanih postupaka potvrđenih u laboratoriji.

Rezultati

[0232] Rezultati eksperimenata prikazani su na Slici 7. Slika 7 pokazuje da MRx0001 ima kapacitet da proizvodi indol iz triptofana, u koncentracijama od približno 0,25 mM.

Primer 7 - Nivo proizvodnje kinurenina u bakterijama

Rezime

[0233] Ispitana je sposobnost bakterija pronalaska da proizvode kinurenin. Narušavanje puta kinurenina može dovesti do aktivacije imunskog sistema i akumulacije potencijalno neurotoksičnih jedinjenja. Promene u metabolizmu kinurenina mogu biti uklјučene u razvoj Parkinsonove bolesti.

Soj bakterija

Roseburia hominis MRx0001

[0234] DSM 17136 je soj Bacteroides copricola za koji je poznato da proizvodi kinurenin.

Postupak

[0235] Supernatanti bez ćelija stacionarnih faza bakterijskih kultura su izolovani centrifugiranjem i filtriranjem kroz filtere od 0,22 uM i zamrznuti do upotrebe. Standardi kinurenina, osnovni rastvori i reagensi pripremlјeni su korišćenjem standardizovanih metoda koje su potvrđene u laboratoriji. Uzorci su tretirani sa trihlorosirćetnom kiselinom i centrifugirani na 10.000xg tokom 10 minuta na 4°C. Supernatant je sakuplјen i razliven na ploču sa 96-bunara. Ehrlich-ov reagens je korišćen za detekciju kinurenina i dodat je u odnosu 1: 1.

Rezultati

[0236] Rezultati eksperimenata prikazani su na Slici 8. Slika 8 pokazuje da MRx0001 ima kapacitet da proizvodi kinurenin u koncentraciji od približno 50 µM.

Primer 8 - Ispitivanje stabilnosti

[0237] Ovde opisana kompozicija koja uključuje najmanje jedan ovde opisani bakterijski soj čuva se u zatvorenom kontejneru na 25°C ili 4°C, a kontejner se čuva u atmosferi sa 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% ili 95% relativne vlažnosti. Nakon 1 meseca, 2 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1,5 godine, 2 godine, 2,5 godine ili 3 godine ostaće najmanje 50%, 60%, 70%, 80% ili 90% bakterijskog soja mereno u jedinicama za formiranje kolonija utvrđenim standardnim protokolima.

Primer 9 - Efikasnost bakterijskih inokuluma za smanjenje sekrecije IL-6.

Rezime

[0238] Aktivacija proinflamatornih citokina povezana je sa oštećenjem neurona kod neurodegenerativne bolesti. Lipopolisaharid (LPS) je poznati stimulator proinflamatornog citokina IL-6. Ćelije humanog glioblastoma astrocitoma tretirane su kompozicijama koje sadrže sojeve bakterija prema pronalasku u kombinaciji sa LPS-om kako bi se posmatrala njihova sposobnost modulacije nivoa IL-6.

Materijal i metode

Soj bakterija

Roseburia intestinalis Soj A.

Roseburia faecis Soj B.

Ćelijska linija

[0239] MG U373 je humani glioblastom astrocitoma izveden iz malignog tumora i nabavljen od Sigma-Aldrich (kat. br. 08061901-1VL). MG U373 ćelije humanog glioblastoma astrocitoma uzgajane su u MEM (Sigma Aldrich, kat. br. M-2279), koji je dopunjen sa 10% FBS, 1% Pen Strep, 4 mM L-Glut, 1X MEM neesencijalnim rastvorom aminokiseline i 1X natrijum piruvatom.

Postupak

[0240] Jednom uzgojene, MG U373 ćelije su postavlјene na ploču sa 24-bunara, po 100.000 ćelija/bunaru. Ćelije su tretirane pod sledećim uslovima tokom 24 sata:

● LPS (1 ug/ml)

● LPS sa 10% supernatanta bakterija iz soja A.

● LPS sa 10% supernatanta bakterija iz soja B.

● LPS sa YCFA medijumom

● YCFA

[0241] Takođe je urađena kontrola gde su ćelije inkubirane u netretiranom medijumu.

[0242] Posle toga su sakuplјeni supernatanti bez ćelija, centrifugirani na 10.000xg tokom 3 min na 4°C. IL-6 je meren upotrebom humanog IL-6 ELISA kompleta kompanije Peprotech (kat. br. #900-K16) prema uputstvu proizvođača.

Rezultati

[0243] Rezultati ovih eksperimenata prikazani su na slikama 10 i 12. Tretman ćelija neuroblastoma sa LPS-om i sojem bakterija A i B, doveo je do smanjenja nivoa sekretovanog IL-6 na isti nivo kao i kod kontrolnih ćelija koje nisu tretirane LPS-om (Slike 10A i 12A).

[0244] Tretman ćelija neuroblastoma sa Roseburia intestinalis i Roseburia faecis dovelo je do smanjenja nivoa sekretovanog IL-6 ispod nivoa zabeleženih kod ćelija tretiranih kontrolom (Slike 10B i 12B).

Primer 10 - Efikasnost bakterijskih inokuluma na smanjenje aktivacije NFkB

Rezime

[0245] Aktivacija promotora NFkB dovodi do produkcije proinflamatornih citokina koji uključuju IL-1β, IL-1α, IL-18, TNFα i IL-6. Promotor NFκB može se aktivirati pomoću α-sinukleina i LPS-a stimulisanjem TLR4. Mutacije u α-sinukleinu, kao što je α-sinuklein A53T, povezane su sa pojavom familijarne Parkinsonove bolesti. Lečenje neuronskih ćelija LPS-om simuliše razvoj Parkinsonove bolesti izazvane faktorima životne sredine. Ispitana je sposobnost kompozicija, koje obuhvataju sojeve bakterija prema pronalasku, da inhibiraju aktivaciju promotora NFkB.

Materijal i metode

Soj bakterija

Roseburia intestinalis Soj A.

Roseburia faecis Soj B.

Ćelijska linija

[0246] Humani “Hek blue TLR4” je kuplјen od InvivoGen-a (kat. br. Hkb-htlr4). Humani “Hek blue TLR4” su uzgajani u DMEM medijumu sa visokim sadržajem glukoze (Sigma Aldrich, kat. br. D-6171), koji je dopunjen sa 10% FBS, 1% Pen Strep, 4 mM L-Glut, Normocin-om i “1X HEK Blue Selection” rastvorom.

Postupak

[0247] Jednom uzgojane, humane “Hek blue” ćelije su zasejane na ploču sa 96-bunara po 25.000 ćelija/bunaru u 4 replike. Jedan set ćelija je tretiran samo sa α-sinukleinom A53T (1 ug/ml) ili sa 10% supernatantom bakterija iz soja A ili soja B tokom 22 sata. Drugi set ćelija je tretiran samo LPS-om (10 ng/ml, iz Salmonella enterica serotipa Typhimurium, Sigma Aldrich, kat. br. L6143) ili sa 10% supernatantom bakterija iz soja A ili soja B tokom 22 sata. Ćelije su potom oborene centrifugiranjem i 20 ul supernatanta je pomešano sa 200 ul “Quanti Blue” reagensa (InvivoGen, kat. br. Rep-qb2), inkubirano tokom 2 sata i potom je očitana apsorbancija na 655 nm.

Rezultati

[0248] Rezultati ovih eksperimenata prikazani su na Slikama 11 i 13.

Sekvence

[0249]

4

SEQ ID NO:3 (Konsenzus 16S rRNK sekvenca za Roseburia hominis soj 433)

SEQ ID NO:5 (Konsenzus 16S rRNK sekvenca, Soj A Roseburia intestinalis)

Ċ

SEQ ID NO:6 (Konsenzus 16S rRNK sekvenca, Soj B Roseburia faeces)

REFERENCE

[0250]

[1] Spor et al. (2011) Nat Rev Microbiol.9(4):279-90.

[2] Eckburg et al. (2005) Science.10;308(5728):1635-8.

[3] Macpherson et al. (2001) Microbes Infect.3(12):1021-35

[4] Macpherson et al. (2002) Cell Mol Life Sci.59(12):2088-96.

[5] Mazmanian et al. (2005) Cell 15;122(1):107-18.

[6] Frank et al. (2007) PNAS 104(34): 13780-5.

[7] Scanlan et al. (2006) J Clin Microbiol.44(11):3980-8.

[8] Kang et al. (2010) Inflamm Bowel Dis.16(12):2034-42.

[9] Machiels et al. (2013) Gut.63(8):1275-83.

[10] WO 2013/050792

[11] WO 03/046580

[12] WO 2013/008039

4

[13] WO 2014/167338

[14] Goldin and Gorbach (2008) Clin Infect Dis.46 Suppl 2:S96-100.

[15] Azad et al. (2013) BMJ.347:f6471.

[16] WO2013/050792

[17] Mayer et al (2014) The Journal of Neuroscience 34(46):15490-15496

[18] Cryan and Dinan (2015) Neuropsychopharmacology, 40: 241-2.

[19] Zhou and Foster (2015) Neuropsychiatric Disease and Treatment 11: 715-723.

[20] Wang and Kasper (2014) Brain Behav Immun.38: 1-12.

[21] WO2016/203221

[22] Chapter 38 - Nonsteroidal anti-inflammatory drugs exposure and the central nervous system (2014) Handbook of Clinical Neurology 119, 577-584

[23] Stanton and Savage (1983) Appl Environ Microbiol.45(5):1677-84

[24] Duncan et al. (2006) Int. J. Syst. Evol. Microbiol.56: 2437-2441

[25] Masco et al. (2003) Systematic and Applied Microbiology, 26:557-563.

[26] Srůtková et al. (2011) J. Microbiol. Methods, 87(1):10-6.

[27] Pal R et al, Neurol Res 2016, 38(12):1111-1122

[28] Daniele SG et al, Sci Signal 2015, 8(376):ra45

[29] Wang et al. (2016) J Neurogastroenterol Motil 22: 589-605.

[30] Foguem & Manckoundia (2018) Current Neurology and Neuroscience Reports, 18: 24 [31] Ludolph et al. (2009) Eur J Neurol.16(3): 297-309.

[32] Galpern & Lang (2006) Neurological Progress 59 (3) 449-458

[33] Zadori et al (2012) Journal of Neural Transmission, 119, 2, 275-283

[34] Lee et al (2008) European J. Cell Biology 87:389-397

[35] Pirooznia and Elefant (2013) Front Cell Neurosci.7: 30.

[36] Tang, et al. (2017) JAm Heart Assoc, 6(10).

[37] Wang et al. (2015) PNAS 112(9):2583-2858

[38] Psaty et al. (2003) JAMA, 289(19):2534-44

[39] Lancet. (1995) 346(8991-8992):1647-53

[40] Miyamoto-Shinohara et al. (2008) J. Gen. Appl. Microbiol., 54, 9-24.

[41] Cryopreservation and Freeze-Drying Protocols, ed. by Day and McLellan, Humana Press.

[42] Leslie et al. (1995) Appl. Environ. Microbiol.61, 3592-3597.

[43] Mitropoulou et al. (2013) J Nutr Metab. (2013) 716861.

[44] Kailasapathy et al. (2002) Curr Issues Intest Microbiol.3(2):39-48.

[45] Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd Edition, (1994), Edited by A Wade and PJ Weller [46] Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit.1985) [47] US 2016/0067188

[48] Handbook of Microbiological Media, Fourth Edition (2010) Ronald Atlas, CRC Press.

[49] Maintaining Cultures for Biotechnology and Industry (1996) Jennie C. Hunter-Cevera, Academic Press

[50] Strobel (2009) Methods Mol Biol.581:247-61.

[51] Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 20th edition, ISBN:

0683306472.

[52] Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course, (Ream et al., eds., 1998, Academic Press).

[53] Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.)

[54] Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds, 1986, Blackwell Scientific Publications)

[55] Sambrook et al. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition (Cold Spring Harbor Laboratory Press).

[56] Handbook of Surface and Colloidal Chemistry (Birdi, K.S. ed., CRC Press, 1997)

[57] Ausubel et al. (eds) (2002) Short protocols in molecular biology, 5th edition (Current Protocols).

[58] PCR (Introduction to Biotechniques Series), 2nd ed. (Newton & Graham eds., 1997, Springer Verlag)

[59] Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987) Supplement 30 [60] Smith & Waterman (1981) Adv. Appl. Math.2: 482-489.

4

4

4

4

Claims (15)

Patentni zahtevi

1. Kompozicija koja sadrži soj bakterija roda Roseburia, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti, koja uključuje progresivnu supranuklearnu paralizu, progresivnu supranuklearnu paralizu, Steele-Richardson-Olszewski sindrom, hidrocefalus normalnog pritiska, vaskularni ili arteriosklerotski parkinsonizam i parkinsonizam izazvan lekovima; Alchajmerove bolesti, koja uključuje Bensonov sindrom; Hantingtonove bolesti; amiotrofične lateralne skleroze; Lu Gerigove bolesti; bolesti motornih neurona; prionske bolesti; spinocerebelarne ataksije; spinalne mišićne atrofije; demencije, koja uključuje Levijevo telo, vaskularnu i frontotemporalnu demenciju; primarne progresivne afazije; blagog kognitivnog oštećenja; kognitivnog oštećenja povezanog sa HIV-om; ili kortikobazalne degeneracije.

2. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti.

3. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1 ili 2, gde se (a) Parkinsonova bolest; Alchajmerova bolest; Hantingtonova bolest; amiotrofična lateralna skleroza; Lu Gerigova bolest; bolest motornih neurona; prionska bolest; spinocerebelarna ataksija; spinalna mišićna atrofija; demencija; primarna progresivna afazija; blago kognitivno oštećenje; kognitivno oštećenje povezano sa HIV-om; ili kortikobazalna degeneracija; rano javlјa; i/ili u kome (b) je kompozicija za upotrebu u postupku sprečavanja ili odlaganja početka ili progresije Parkinsonove bolesti; Alchajmerove bolesti, Hantingtonove bolesti; amiotrofične lateralne skleroze; Lu Gerigove bolesti; bolesti motornih neurona; prionske bolesti; spinocerebelarne ataksije; spinalne mišićne atrofije; demencije; primarne progresivne afazije; blagog kognitivnog oštećenja; kognitivnog oštećenja povezanog sa HIV-om; ili kortikobazalne degeneracije.

4. Kompozicija koji sadrži soj bakterija roda Roseburia, za upotrebu u postupku lečenja moždanog udara, poput cerebralne ishemije, fokalne cerebralne ishemije, ishemijskog moždanog udara ili hemoragijskog moždanog udara.

5. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, u kome je bakterijski soj Roseburia hominis, opciono pri čemu bakterijski soj ima sekvencu 16s rRNK koja je najmanje 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična SEQ ID NO:3, ili gde bakterijski soj ima 16s rRNK sekvencu koja je predstavlјena u SEQ ID NO:3.

6. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, pri čemu kompozicija sadrži bakterijski soj vrste Roseburia hominis, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti.

7. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 5-6, pri čemu je bakterijski soj Roseburia hominis deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42383.

8. Kompozicija za upotrebu prema patentnim zahtevima 1-4, pri čemu je bakterijski soj vrste Roseburia intestinalis, opciono pri čemu bakterijski soj ima sekvencu 16s rRNK koja je najmanje 99%, 99,5% ili 99,9% identična SEQ ID NO:5.

4

9. Kompozicija za upotrebu prema patentnim zahtevima 1-3, pri čemu sadrži bakterijski soj vrste Roseburia intestinalis, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti.

10. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 8 ili 9, pri čemu je bakterijski soj Roseburia intestinalis deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 43043.

11. Kompozicija za upotrebu prema patentnim zahtevima 1-4, pri čemu je bakterijski soj vrste Roseburia faecis, opciono pri čemu bakterijski soj ima sekvencu 16s rRNK koja je najmanje 99%, 99,5% ili 99,9% identična SEQ ID NO:6.

12. Kompozicija za upotrebu prema patentnim zahtevima 1-3, pri čemu kompozicija sadrži bakterijski soj vrste Roseburia faecis, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije Parkinsonove bolesti.

13. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je kompozicija za oralnu primenu; i ili gde kompozicija sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatlјivih ekscipijensa ili nosača.

14. Kompozicija za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je soj bakterija liofilizovan.

15. Prehrambeni proizvod koji sadrži kompoziciju iz bilo kog prethodnog patentnih zahteva, za upotrebu u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva.