RS61925B1 - Konjugati pirolobenzodiazepina - Google Patents

Konjugati pirolobenzodiazepina

Info

Publication number
RS61925B1
RS61925B1 RS20210689A RSP20210689A RS61925B1 RS 61925 B1 RS61925 B1 RS 61925B1 RS 20210689 A RS20210689 A RS 20210689A RS P20210689 A RSP20210689 A RS P20210689A RS 61925 B1 RS61925 B1 RS 61925B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
group
gene bank
antibody
methyl
genebank
Prior art date
Application number
RS20210689A
Other languages
English (en)
Inventor
Philip Wilson Howard
Stephen John Gregson
Original Assignee
Medimmune Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Medimmune Ltd filed Critical Medimmune Ltd
Publication of RS61925B1 publication Critical patent/RS61925B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68035—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a pyrrolobenzodiazepine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6863—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from stomach or intestines cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Opis
[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na konjugate koji sadrže pirolobenzodiazepin i srodne dimere (PBD), kao i na vezujuće lekove prekursora koji se koriste za izradu takvih konjugata.
Pozadina pronalaska
Pirolobenzodiazepini
[0002] Neki pirolobenzodiazepini (PBD) imaju sposobnost da prepoznaju i da se vežu na određene sekvence DNK; poželjna sekvenca je PuGPu. Prvi PBD anti-tumorski antibiotik, antramicin, otkriven je 1965. godine (Leimgruber, i dr, J. Am Chem Soc, 87, 5793-5795 (1965); Leimgruber, i dr, J. Am Chem Soc ., 87, 5791 do 5793 (1965)). Od tada, prijavljeno je dosta PBD-a koji se javljaju u prirodi i razvijeno je više od 10 sintetičkih načina kroz različite analoge (Thurston, i dr, Chem Rev. 1994, 433-465 (1994). Članovi familije uključuju abeimicin (Hochlowski, i dr., J. Antibiotics, 40, 145-148 (1987)), chicamicin (Konishi, i dr., J. Antibiotics, 37, 200-206 (1984)), DC-81 (Japanese Patent 58-180487, Thurston, i dr, Chem Brit, 26, 767-772 (1990),. Bose, i dr, Tetrahedron, 48, 751-758 (1992)), mazetramicin (Kuminoto, i dr., J. Antibiotics, 33, 665-667 (1980)), neothramicine A i B (Takeuchi i dr., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), porotramicin (Tsunakawa, i dr. J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), protracarcin (Shimizu i dr, J. Antibiotics, 29, 2492-2503 (1982), Langley i Thurston, J. Org Chem, 52, 91- 97 (1987)), sibanomicin (DC-102) (Hara, i dr, J. Antibiotics, 41, 702-704, (1988.);. Itoh, i dr, J. Antibiotics, 41, 1281-1284 (1988) ), sibiromicin (Leber, i dr., J. Am. Chem. Soc., 110, 2992-2993 (1988)) i tomamicin (Arima, i dr., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)), PBD imaju opštu strukturu:
[0003] Oni se razlikuju po broju, vrsti i položaju supstituenata, po svojim aromatičnim A prstenovima A i pirolo C prstenova, kao i po stepenu zasićenosti C prstena. U B prstenu nalazi se ili imin (N = C), karbinolamin (NH-CH (OH)), ili karbinolamin metil eter (NH-CH (OMe)) na N10-C11 položaju koji je elektrofilni centar odgovoran za alkilovanje DNK. Svi od poznatih prirodnih proizvoda imaju (S)-konfiguraciju na hiralnom C11, što je pozicija koja im pruža zakrivljenje u desno kada se gleda od C prstena prema A prstenu. To im daje odgovarajući trodimenzionalni oblik za izoheličnost sa manjim žljebom od B oblika DNK, što dovodi do prikladnog prijanjanja na vezivnom mestu (Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley i Needham-VanDevanter, Acc Chem Res, 19, 230-237 (1986)). Njihova sposobnost da obrazuju adukt unutar manjeg žljeba omogućuje im da se umešaju u DNK procesiranje, odakle proizilazi njihova upotreba kao anti-tumorski agensa.
[0004] Prethodno je obelodanjeno da se biološka aktivnost ovih molekula može pojačati spajanjem dve PBD jedinice preko njihovih C8/C'-hidroksilnih funkcionalnih grupa putem fleksibilnog alkilenskog veznika (Bose, DS, i dr., J. Am. Chem. Soc., 114, 4939-4941 (1992); Thurston, DE, i dr., J. Org. Chem., 61, 8141-8147 (1996)). Smatra se da dimeri PBD formiraju sekvencijalno selektivne DNK lezije kao što je palindromska ukrštena veza 5'-Pu-GATC-Pi-3 '(Smellie, M., i dr., Biochemistry, 42, 8232-8239 (2003); Martin, C., i sar., Biochemistry, 44, 4135-4147) za koji se smatra da je uglavnom odgovoran za njihovu biološku aktivnost.
[0005] Jedan primer PBD dimera je SG2000 (SJG-136):
(Gregson, S., i dr., J. Med. Chem., 44, 737-748 (2001); Alley, M.C., i dr., Cancer Research, 64, 6700-6706 (2004); Hartley, J.A., i dr., Cancer Research, 64, 6693-6699 (2004)) koji je bio uključen u klinička ispitivanja kao samostalni agens, na primer, NCT02034227 koji istražuje njegovu upotrebu u lečenju akutne mijeloidne leukemije i hronične limfocitne leukemije (videti: https://www.clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02034227).
[0006] Dimerna PBD jedinjenja koja sadrže C2 aril supstituente, kao što je SG2202 (ZC-207), obelodanjena su u WO 2005/085251:
i u WO2006/111759, bisulfiti takvih PBD jedinjenja, na primer SG2285 (ZC-423):
[0007] Pokazalo se da su ova jedinjenja izuzetno korisna citotoksična sredstva (Howard, P.W., i dr., Bioorg. Med. Chem. (2009), doi: 10,1016/j.bmcl,2009,09,012).
[0008] WO 2007/085930 opisuje pripremu dimera PBD jedinjenja koji imaju grupe veznika za povezivanje na agens za vezivanje ćelija, kao što su antitela. Veznik je prisutan u mostu i povezuje monomerne jedinice PBD dimera
[0009] Dimeri PBD jedinjenja koji imaju grupe veznika za povezivanje na agens za vezivanje ćelija, kao što su antitela, su opisani u WO 2011/130598. Veznik ovih jedinjenja vezan je na jedan od dostupnih N10 položaja, i uglavnom se cepa delovanjem enzima grupu veznika. Ako je nevezani N10 položaj zaštićen grupom za ograničenje, prikazane grupe za blokiranje imaju isti okidač deljenja kao veznik za antitelo.
[0010] WO 2014/057074 opisuje dva specifična konjugata PBD dimera vezana preko položaja N10 na jednom monomeru, dok je drugi PBD monomer u iminskom obliku.
[0011] WO 2015/052322 opisuje specifični konjugat PBD dimera vezan preko N10 položaja na jednom monomeru, dok je drugi PBD monomer u iminskom obliku. Takođe opisuje specifični konjugat PBD dimera vezan preko N10 položaja na jednom monomeru, drugi PBD monomer ima grupu za blokiranje sa istim okidačem cepanja kao linker na antitelo:
Obelodanjivanje pronalaska
[0012] Predmetni pronalazak obezbeđuje PBD i srodne dimere konjugate gde N10-C11 grupa koja nije vezana za ligand jedinicu je β-glukuronid grupa za blokiranje. Okidač deljenja jedinice za vezivanje sa ligand jedinicom je ne-glukuronidni koji se može deliti.
[0013] Smatra se da je upotreba jedinice za blokiranje glukuronida u ovim konjugatima korisna, jer ako se konjugat odvaja od antitela izvan ciljne ćelije, oslobođeno zaštićeno jedinjenje ostaje neaktivno jer nije sposobno da prožme ćelijske membrane zbog svoje hidrofilnosti.
[0017] Prvi aspekt predmetnog pronalaska obuhvata jedinjenje formule I:
i njihove soli i solvate, pri čemu:
uglaste zagrade označavaju da grupa NO2nije obavezna;
D predstavlja bilo grupu D1 ili D2:
isprekidana linija označava neobavezno prisustvo dvostruke veze između C2 i C3; kada postoji dvostruka veza između C2 i C3, R<2>se bira iz grupe koju čine:
(ia) C5-10aril grupa, opciono supstituisana jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koju čine: halo, nitro, cijano, etar, karboksi, estar, C1-7alkil, C3-7heterociklil i bis-oksi-C1-3alkilen;
(ib) C1-5zasićeni alifatski alkil ;
(ic) C3-6zasićeni cikloalkil;
(id)
pri čemu su svaki od R<11>, R<12>' i R<13>nezavisno izabrani između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila, gde ukupan broj atoma ugljenika u R<2>grupi nije veći od 5;
(ie)
pri čemu je jedan od R<15a>i R<15b>H, a drugi je odabran između: fenila, gde je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo, metil, metoksi; piridil; i tiofenil; i
(if)
gde je R<14>izabran iz: H; C1-3zasićeni alkil; C2-3alkenil; C2-3alkinil; ciklopropil; fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo, metil, metoksi; piridil; i tiofenil;
kada postoji jednostruka veza između C2 i C3,
R<2>je izabran između H, OH, F, diF i
gde su R<16a>i R<16b>nezavisno izabrani između H, F, C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koje alkil i alkenil grupe su po izboru supstituisane grupom odabranom između C1-4alkil amido i C1-4alkil estar; ili, kada je jedan od R<16a>i R<16b>H, drugi je odabran od nitrila i C1-4alkil estra;
D' predstavlja bilo grupu D'1 ili D'2:
pri čemu isprekidana linija označava opcionalno prisustvo dvostruke veze između C2' i C3';
kada postoji dvostruka veza između C2' i C3', R<12>se bira iz grupe koju čine:
(iia) C5-10aril grupa, opciono supstituisana jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koju čine: halo, nitro, cijano, etar, karboksi, estar, C1-7alkil, C3-7heterociklil i bis-oksi-C1-3alkilen;
(iib) C1-5zasićeni alifatski alkil ;
(iic) C3-6zasićeni cikloalkil;
(iid)
pri čemu su svaki od R<21>, R<22>i R<23>nezavisno izabrani između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila, gde ukupan broj atoma ugljenika u grupi R<12>nije veći od 5;
(iie)
pri čemu je jedan od R<25a>i R<25b>H, a drugi je odabran između: fenila, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom između halo, metil, metoksi; piridil; i tiofenil ; i
(iif)
gde je R<24>izabran iz: H; C1-3zasićeni alkil; C2-3alkenil; C2-3alkinil; ciklopropil; fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo, metil, metoksi; piridil; i tiofenil;
kada postoji jednostruka veza između C2 'i C3',
R<12>je odabran iz H, OH, F, diF i
gde su R<26a>i R<26b>nezavisno izabrani između H, F, C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koje su alkil i alkenil grupe po izboru supstituisane grupom odabranom između C1-4alkil amido i C1-4alkil estar; ili, kada je jedan od R<26a>i R<26b>H, drugi je odabran od nitrila i C1-4alkil estra;
R<6>i R<9>su nezavsino odabran između H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn i halo; gde su R i R 'nezavisno izabrani između opciono supstituisanih C1-12alkil, C3-20heterociklil i C5-20aril grupa;
R<7>je izabran između H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn i halo;
R" je C3-12 alkilen grupa, koji lanac može biti prekinut jednim ili više heteroatoma, npr. O, S, NRN2 (gde je R<N2>H ili C1-4alkil), i/ili aromatični prstenovi, npr. benzen ili piridin;
Y i Y' su izabran između O, S, ili NH;
R<6'>, R<7'>, R<9'>su izabrani iz istih grupa kao i R<6>, R<7>i R<9>respektivno;
R<11b>je izabran iz OH, OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil; i
R<L>je veznik za vezu sa agensom za vezivanje ćelija, što je :
(iiia):
gde
Q je:
gde je Q<x>takav da je Q aminokiselinski ostatak, dipeptidni ostatak ili tripeptidni ostatak ;
X je:
gde je a = 0 to 5, b = 0 do 16, c = 0 ili 1, d = 0 do 5;
G<L>je veznik za povezivanje sa ligand jedinicom; veznik GL koji se koristi u ovom pronalasku je kako je definisan u zahtevu 1; i ovde je obelodanjeno RL i je veznik za vezu sa agensom za ćelijsko vezivanje koji i
(iiib):
gde su R<L1>i R<L2>nezavisno izabrani između H i metila, ili zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju ciklopropilen ili ciklobutilen grupu; i e je 0 ili 1.
[0018] Drugi aspekt predmetnog pronalaska daje konjugate formule II:
L-(D<L>)P(II)
gde je L jedinica liganda (tj. sredstvo za ciljanje), D<L>je jedinica veze leka formule I':
gde D, R<2>, R<6>, R<7>, R<9>, R<11b>, Y, R", Y', D', R<6'>, R<7'>, R<9'>i R<12>( uključujući prisustvo ili odsustvo dvostrukih veza između C2 i C3 i C2 'i C3', odnosno grupe NO2) su kako je definisano u prvom aspektu pronalaska;
R<LL>je veznik za vezu sa agensom za vezivanje ćelija, što je:
(iiia):
gde su Q i X kako su definisani u prvom aspektu, a GLL je veznik povezan na ligandnu jedinicu kako je definisano u patentnom zahtevu 15; i ovde je obelodanjeno da RLLi predstavlja veznik za vezu sa agensom za ćelijsko vezivanje
(iiib):
gde su R<L1>i R<L2>kako su definisani u prvom aspektu;
pri čemu je p ceo broj od 1 do 20.
[0019] Jedinica liganda, detaljnije opisana u nastavku, je sredstvo za ciljanje koje se vezuje za ciljani deo. Jedinica liganda može, na primer, da se specifično veže za ćelijsku komponentu (agens za vezivanje ćelija) ili za druge ciljne molekule od interesa. Jedinica liganda može biti, na primer, protein, polipeptid ili peptid, kao što je antitelo, fragment antitela koji vezuje antigen ili drugo vezivno sredstvo, kao što je Fc fuzioni protein.
[0020] Ovde je opisana upotreba konjugata drugog aspekta pronalaska u proizvodnji leka za lečenje proliferativne bolesti. Treći aspekt takođe obezbeđuje konjugat drugog aspekta pronalaska za upotrebu u lečenju proliferativne bolesti. Treći aspekt takođe obezbeđuje konjugat drugog aspekta pronalaska za upotrebu u lečenju proliferativne bolesti, koji uključuje primenu terapeutski efikasne količine konjugata drugog aspekta pronalaska pacijentu kome je to potrebno.
[0021] Prosečan stručnjak u ovoj oblasti je u stanju da utvrdi da li konjugat kandidat tretira proliferativno stanje za bilo koji određeni tip ćelije. Na primer, testovi koji se mogu pogodno koristiti za procenu aktivnosti koju nudi određeno jedinjenje opisani su u primerima ispod.
[0022] Četvrti aspekt predmetnog pronalaska pruža sintezu konjugata drugog aspekta pronalaska, koji uključuje konjugaciju jedinjenja (veznika leka) prvog aspekta pronalaska sa jedinicom za ligandu.
Slika 1 prikazuje efekat na održivost SKOV3 ćelija nakon inkubacije sa konjugatom predmetnog pronalaska;
Slika 2 prikazuje efekat na održivost SKOV3 ćelija nakon inkubacije sa različitim konjugatom predmetnog pronalaska;
Slika 3 prikazuje efekat na zapreminu NCI-N87 ksenograftskog tumora nakon tretmana različitim konjugatom predmetnog pronalaska;
Slika 4 prikazuje efekat na zapreminu JIMT-1 ksenograftskog tumora nakon tretmana istim konjugatom predmetnog pronalaska kao na Slici 3.
Definicije
Supstituenti
[0024] Fraza "opciono zamenjen" kako se ovde koristi, odnosi se na matičnu grupu koja može biti nezamenjena ili zamenjena.
[0025] Ukoliko drugačije nije napomenuto, termin “zamenjen” ili “supstituisan” kako se ovde koristi, odnosi se na matičnu grupu koja nosi jedan ili više supstituenata. Termin “supstituent" je ovde korišćen u konvencionalnom smislu i odnosi se na različite hemijske delove koji su kovalentno vezani za, ili ukoliko je pogodno, fuzionisani sa, Matičnom grupom. Široka raznolikost supstituenata je dobro poznata, kao i metode njihovog dobijanja introdukcije u različite matične grupe.
[0026] Primeri supstituenata su detaljnije opisani ispod
[0027] C1-12alkil: Termin alkil" kako se ovde koristi, se odnosi na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika za atoma ugljenika ugljovodoničnog jedinjenja koje ima 1 do 12 ugljenikovih atoma, koji mogu biti alifatični ili aliciklični, i koji mogu biti zasićeni ili nezasićeni (npr. delimično zasićeni, potpuno nezasićeni). Termin "C1-4alkil", kako je ovde korišćen, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika iz atoma ugljenika ugljovodoničnog jedinjenja koje ima od 1 do 4 atoma ugljenika, koji može biti alifatski ili aliciklični, a koji može biti zasićeni ili nezasićeni (npr. delimično nezasićeni, potpuno nezasićeni). Stoga, termin “alkil" obuhvata podklase alkenil, alkinil, ciklo alkil, itd., diskutovane ispod.
[0028] Primeri zasićenih alkil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, metil (C1), etil (C2), propil (C3), butil (C4), pentil (C5), heksil (C6) i heptil (C7).
[0029] Primeri zasićenih linearnih alkil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, metil (C1), etil (C2), n-propil (C3), n-butil (C4), n-pentil (amil) (C5), n-heksil (C6) i n-heptil (C7).
[0030] Primeri zasićenih granatih alkil grupa obuhvataju izo-propil (C3), izo-butil (C4), sek-butil (C4), tercbutil (C4), izo-pentil (C5), i neo-pentil (C5).
[0031] C2-12Alkenil: Termin alkenil" kako se ovde koristi, se odnosi na alkil grupu koja ima jedan ili više ugljenik-ugljenik dvostrukih veza.
[0032] Primeri nezasićenih alkenil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, etenil (vinil, -CH=CH2), 1-propenil (-CH=CH-CH3), 2-propenil (alil, -CH-CH=CH2), izopropenil (1-metilvinil, -C(CH3)=CH2), butenil (C4), pentenil (C5), i heksenil (C6).
[0033] C2-12alkinil: Termin kako se ovde koristi, se odnosi na alkil grupu koja ima jedan ili više ugljenik-ugljenik trostrukih veza.
[0034] Primeri nezasićenih alkinil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, etinil (-C≡CH) i 2-propinil (propargil, -CH2-C≡CH).
[0035] C3-12ciklo alkil: Termin “C3-12ciklo alkil" kako se ovde koristi, se odnosi na alkil grupu koja je takođe ciklil grupa; to jest, monovalentan deo dobijen uklanjanjem vodonikovog atoma sa atoma alicikličnog prstena cikličnog ugljenikvodoničnog (karbociklila) jedinjenja, čiji deo ima od 3 do 7 ugljenikovih atoma, uključujući 3 do 7 atoma prstena.
[0036] Primeri ciklo alkil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, one izvedene od:
Zasićenih monocikličnih ugljovodoničnih jedinjenja: ciklopropana (C3), ciklobutana (C4), ciklopentana (C5), cikloheksan (C6), cikloheptana (C7), metilciklopropana (C4), dimetilciklopropana (C5), metilciklobutana (C5), dimetilciklobutana (C6), metilciklopentana (C6), dimetilciklopentana (C7) i metilcikloheksan (C7);
nezasićenih monocikličnih ugljovodoničnih jedinjenja:
ciklopropena (C3), ciklobutena (C4), ciklopentena (C5), cikloheksena (C6), metilciklopropena (C4), dimetilciklopropena (C5), metilciklobutena (C5), dimetilciklobutena (C6), metilciklopentena (C6), dimetilciklopentena (C7) i metilcikloheksena (C7); i
zasićenih policikličnih ugljovodoničnih jedinjenja:
norcarana (C7), norpinana (C7), norbornana (C7).
[0037] C3-20heterociklil: Termin “C3-20heterociklil" kako se ovde koristi, se odnosi na monovalentan deo dobijen uklanjanjem vodonikovog atoma sa atoma prstena heterocikličnog jedinjenja, čiji deo ima od 3 do 20 ugljenikovih atoma, od čega su od 1 do 10 heteroatomi prstena. Poželjno, svaki prsten ima 3 do 7 atoma prstena, od koji su od 1 do 4 heteroatomi prstena.
[0038] U ovom kontekstu, prefiksi (npr. C3-20, C3-7, C5-6, itd.) ukazuju na broj atoma prstena, ili raspon brojeva atoma prstena, bilo ugljenikovih atoma ili heteroatoma. Na primer, termin “C5-6heterociklil", kako se ovde koristi, se odnosi na heterociklil, grupu sa 5 ili 6 atoma prstena.
[0039] Primeri monocikličnih heterociklil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, one izvedene od:
N1: aziridina (C3), azetidina (C4), pirolidina (tetrahidropirol) (C5), pirolina (npr., 3-pirolina, 2, 5-dihidropirol) (C5), 2H-pirola ili 3H-pirola (izopirol, izoazola) (C5), piperidina (C6), dihidropiridina (C6), tetrahidropiridina (C6), azepina (C7);
O1: oksirana (C3), oksetan (C4), oksolana (tetrahidrofuran) (C5), oksola (dihidrofuran) (C5), oksana (tetrahidropiran) (C6), dihidropiran (C6), piran (C6), oksepin (C7);
S1: tiirana (C3), tietana (C4), tiolana (tetrahidrotiofena) (C5), tiana (tetrahidrotiopiran) (C6), tiepana (C7); O2: dioksolana (C5), dioksana (C6), i dioksepana (C7);
O3: trioksana (C6);
N2: imidazolidina (C5), pirazolidina (diazolidina) (C5), imidazolina (C5), pirazolina (dihidropirazola) (C5), piperazina (C6);
N1O1: tetrahidrooksazola (C5), dihidrooksazola (C5), tetrahidroizoksazola (C5), dihidroizoksazola (C5), morfolina (C6), tetrahidrooksazina (C6), dihidrooksazina (C6), oksazina (C6);
N1S1tiazolina (C5), tiazolidina (C5), tiomorfolina (C6);
N2O1: oksadiazina (C6);
O1S1: oksatiola (C5) i oksatiana (tioksana) (C6); i,
N1O1S1: oksadiazina (C6).
[0040] Primeri supstituisanih monocikličnih heterociklil grupa obuhvataju one izvedene od saharida, u cikličnoj formi, na primer, furanoza (C5), kao što je arabinofuranoza, liksofuranoza, ribofuranoza, i ksilofuranoza, i piranoza (C6), kao što je alopiranoza, altropiranoza, glukopiranoza, manopiranoza, gulopiranoza, idopiranoza, galaktopiranoza, i talopiranoza.
[0041] C5-20aril: Termin aril", kako se ovde koristi, se odnosi na monovalentan deo dobijen uklanjanjem vodonikovog atoma sa atoma prstena aromatičnog jedinjenja, čiji deo ima od 3 do 20 atoma prstena. Termin "C5-7aril", kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika iz aromatičnog prstenastog atoma aromatičnog jedinjenja, koji deo ima od 5 do 7 atoma u prstenu, i izraz "C5-10aril ", kako se ovde koristi, odnosi se na monovalentni deo dobijen uklanjanjem atoma vodonika iz aromatičnog atoma prstena aromatičnog jedinjenja, koji deo ima od 5 do 10 atoma u prstenu. Poželjno, svaki prsten ima 5 do 7 atoma prstena.
[0042] U ovom kontekstu, prefiksi (npr. C3-20, C5-7, C5-6, C5-10itd.) ukazuju na broj atoma prstena, ili raspon brojeva atoma prstena, bilo ugljenikovih atoma ili heteroatoma. Na primer, termin “C5-6 aril" kako se ovde koristi, se odnosi na arilnu grupu koja ima 5 ili 6 atoma prstena.
[0043] Atomi prstena mogu svi biti ugljenični, kao u "ugljo aril grupama". Primeri ugljo aril grupama obuhvataju, ali nisu ograničeni na, one izvedene od benzena (tj. fenila) (C6), naftalena (C10), azulena (C10), antracena (C14), fenantrena (C14), naftacena (C18), i pirena (C16).
[0044] Primeri aril grupa koje sadrže fuzionisani prsten, od kojih je najmanje jedan aromatični prsten, obuhvataju, ali nisu ograničeni na, grupe izvedene od indena (npr. 2, 3-dihidro-<1>H-indena) (C9), indena (C9), izoindena (C9), tetralina (1, 2, 3, 4-tetrahidronaftalena (C10), acenaftena (C12), fluorena (C13), fenalena (C13), acefenantrena (C15), i aceantrena (C16).
[0045] Alternativno, the atoma prstena mogu obuhvatiti jedan ili više heteroatoma, kao u "hetero aril grupama". Primeri monocikličnih hetero aril grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, one izvedena od:
N1: pirola (azola) (C5), piridina (azina) (C6);
O1: furana (oksola) (C5);
S1: tiofena (tiola) (C5);
N1O1: oksazola (C5), izoksazola (C5), izoksazina (C6);
N2O1: oksadiazola (furazana) (C5);
N3O1: oksatriazola (C5);
N1S1: tiazola (C5), izotiazola (C5);
N2: imidazola (1, 3-diazola) (C5), pirazola (1, 2-diazola) (C5), piridazina (1, 2-diazina) (C6), pirimidina (1, 3-diazina) (C6) (npr., citosina, timina, uracil), pirazina (1, 4-diazina) (C6);
N3: triazola (C5), triazina (C6); i,
N4: tetrazola (C5).
[0046] Primeri hetero arila koje sadrže fuzionisani prsten, obuhvataju, ali nisu ograničeni na:
C9(sa dva fuzionisana prstena) izveden od benzofurana (O1), izobenzofurana (O1), indola (N1), izoindola (N1), indolizina (N1), indolina (N1), izoindolina (N1), purina (N4) (npr., adenina, guanina), benzimidazola (N2), indazola (N2), benzoksazola (N1O1), benzizoksazola (N1O1), benzodioksola (O2), benzofurazana (N2O1) benzotriazola (N3), benzotiofurana (S1), benzotiazola (N1S1), benzotiadiazola (N2S);
C10(sa dva fuzionisana prstena) izveden od hromena (O1), izohromena (O1), hroman (O1), izohromana (O1), benzodioksana (O2), kvinolina (N1), izokvinolina (N1), kinolizina (N1), benzoksazina (N1O1), benzodiazina (N2), piridopiridina (N2), kinoksalina (N2), kvinazolina (N2), cinolina (N2), ftalazina (N2), naftiridina (N2), pteridina (N4);
C11(sa dva fuzionisana prstena) izveden od benzodiazepina (N2);
C13(sa tri fuzionisana prstena) izveden od karbazola (N1), dibenzofurana (O1), dibenzotiofena (S1), karbolina (N2), perimidina (N2), piridoindola (N2); i,
C14(sa tri fuzionisana prstena) izveden od akridina (N1), ksantena (O1), tioksantena (S1), oksantrena (O2), fenoksatiin (O1S1), fenazina (N2), fenoksazina (N1O1), fenotiazina (N1S1), tiantrena (S2), fenantridina (N1), fenantrolina (N2), fenazina (N2).
[0047] Grupe iznad, bilo samostalno bilo kao deo drugog supstituenta, mogu biti opciono zamenjene sa jednom ili dve grupe odabrane među njima i dodatnim supstituentima izlistanim ispod.
Halo: -F, -Cl, -Br, i -I.
Hidroksi: -OH.
Etar: -OR, gde je R etarski supstituent, na primer, C1-7alkil grupa (takođe označena i kao C1-7alkoksi grupa, diskutovana ispod), C3-20heterociklil grupa (takođe označena i kao C3-20heterocikliloksi grupa), ili C5-20arilna grupa (takođe označena i kao C5-20ariloksi grupa), poželjno C1-7alkil grupa.
Alkoksi: -OR, gde je R alkil grupa, na primer, C1-7alkil grupa. Primeri C1-7alkoksi grupa obuhvataju,
1
ali nisu ograničeni na, -OMe (metoksi), -OEt (etoksi), -O(nPr) (n-propoksi), -O(iPr) (izopropoksi), -O(nBu) (nbutoksi), -O(sBu) (sek-butoksi), -O(iBu) (izobutoksi), i -O(tBu) (terc-butoksi).
Acetal: -CH(OR<1>) (OR<2>), gde su R<1>iR<2>nezavisno acetalni supstituenti, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20 heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa, ili, u slučaju "ciklične" acetal grupa, R<1>i R<2>, uzete zajedno sa dva kiseonikova atoma za koji su zakačene, i ugljenikovih atoma za koji su zakačene, formiraju heterociklični prsten sa 4 do 8 atoma prstena. Primeri acetalnih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -CH(OMe)2, -CH(OEt)2, i -CH(OMe) (OEt).
Hemiacetal: -CH(OH) (OR<1>), gde je R<1>je hemiacetalni supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri hemiacetalnih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -CH(OH) (OMe) i - CH(OH) (OEt).
Ketal: -CR(OR1) (OR2), gde su R<1 i>R<2>definisani kao za acetale, i R je ketalni supstituent koji nije vodonik, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri ketal grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -C(Me) (OMe)2, -C(Me) (OEt)2, -C(Me) (OMe) (OEt), -C(Et) (OMe)2, -C(Et) (OEt)2, i -C(Et) (OMe) (OEt).
Hemiketal: -CR(OH) (OR1), gde je R<1>kao što je definisana za hemiacetale, i R je hemiketal supstituent koji nije vodonik, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri hemiacetal grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -C(Me) (OH) (OMe), -C(Et) (OH) (OMe), -C(Me) (OH) (OEt), i -C(Et) (OH) (OEt).
Okso (ketoni): = O.
Tion (tioketoni): =S.
Imino (imini): =NR, gde je R iminski supstituent, na primer, vodonik, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno vodonik ili C1-7alkil grupa. Primeri estarskih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, =NH, =NMe, =NEt, i =NPh.
Formil (karbaldehid, karboksaldehid): -C(=O)H.
Acil (keto): -C(=O)R, gde je R acil supstituent, na primer, C1-7 alkil grupa (takođe označene kao C1-7alkilacil ili C1-7alkanoil), C3-20heterociklil grupa (takođe označene kao C3-20heterociklilacil), ili C5-20arilna grupa (takođe označene kao C5-20arilacil), poželjno C1-7alkil grupa. Primeri acil grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -C(=O)CH3(acetil), -C(=O)CH2CH3(propionil), -C(=O)C(CH3)3(t-butiril), i -C(=O)Ph (benzoil, fenon).
Karboksi (karboksilna kiselina): -C(=O)OH.
Tiokarboksi (tiokarboksilna kiselina): -C(=S)SH.
Tiolokarboksi (tiolokarboksilna kiselina): -C(=O)SH.
Tionokarboksi (tiolokarboksilna kiselina): -C(=S)OH.
Imidinska kiselina: -C(=NH)OH.
Hidroksaminska kiselina: -C(=NOH)OH.
Ester (karboksilat, estar karboksilne kiseline, oksikarbonil): -C(=O)OR, gde je R estarska zamena, na primer, C1-7 alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri estarskih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -C(=O)OCH3, -C(=O)OCH2CH3, -C(=O)OC(CH3)3, i -C(=O)OPh.
Acil, oksi (reverzni estar): -OC(=O)R, gde je R aciloksi supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri aciloksi grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -OC(=O)CH3(acetoksi), -OC(=O)CH2CH3, -OC(=O)C(CH3)3, -OC(=O)Ph, i -OC(=O)CH2Ph.
Oksikarboiloksi: -OC(=O)OR, gde je R estarska zamena, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri estarskih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -OC(=O)OCH3, -OC(=O)OCH2CH3, -OC(=O)OC(CH3)3, i -OC(=O)OPh.
Amino: -NR<1>R<2>, gde je R<1>iR<2>nezavisno amino supstituenti, na primer, hidrogen, C1-7alkil grupa (takođe označene kao C1-7alkilamino ili di- C1-7alkilamino), C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno H ili C1-7alkil grupa, ili, u slučaju "ciklična" amino grupa, R1
iR<2>, uzete zajedno sa azotovim atomom za koji je zakačena, formiraju heterociklični prsten sa 4 do 8 atoma prstena. Amino grupe mogu biti primarne (-NH2), sekundarne (-NHR1), ili tercijarne (-NHR<1>R<2>), i u katjonskoj formi, mogu biti kvaternarne (-+NR<1>R<2>R<3>). Primeri amino grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -NH2, -NHCH3, -NHC(CH3)2, -N(CH3)2, -N(CH2CH3)2, i -NHPh. Primeri cikličnih amino grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, aziridino, azetidino, pirolidino, piperidino, piperazino, morfolino, i tiomorfolino.
Amido (karbamoil, karbamil, aminokarbonil, karboksamid): -C(=O)NR<1>R<2>, gde je R<1>iR<2>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri amido grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -C(=O)NH2, -C(=O)NHCH3, -C(=O)N(CH3)2, -C(=O)NHCH2CH3, i -C(=O)N(CH2CH3)2, kao i amidne grupe u kojima R1 i R<2>, zajedno sa azotovim atomom za koji je zakačena, formiraju heterocikličnu strukturu kao u, na primer, piperidinokarbonil, morfolinokarbonil, tiomorfolinokarbonil, i piperazinokarbonil.
Tioamido (tiokarbamil): -C(=S)NR<1>R<2>, gde je R<1>iR<2>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri amido grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -C(=S)NH2, -C(=S)NHCH3, -C(=S)N(CH3)2, i -C(=S)NHCH2CH3.
Acilamido (acilamino): -NR1C(=O)R<2>, gde je R<1>je an amid supstituent, na primer, hidrogen, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno hidrogen ili C1-7alkil grupa, i R<2>je an acil supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno hidrogen ili C1-7alkil grupa. Primeri acilamid grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -NHC(=O)CH3, -NHC(=O)CH2CH3, i -NHC(=O)Ph. R1
iR<2>mogu zajedno formirati cikličnu strukturu, kao u, na primer, sukcinimidilu, maleimidilu, i ftalimidilu:
Aminokarboniloksi: -OC(=O)NR<1>R<2>, gde je R<1>iR<2>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri aminokarboniloksi grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -OC(=O)NH2, -OC(=O)NHMe, -OC(=O)NMe2, i -OC(=O)NEt2.
Ureido: -N(R1)CONR<2>R<3>gde je R<2 i>R<3>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe, i R<1>jeureido supstituent, na primer, hidrogen, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno hidrogen ili C1-7alkil grupa. Primeri ureido grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -NHCONH2, -NHCONHMe, -NHCONHEt, -NHCONMe2, -NHCONEt2, -NMeCONH2, -NMeCONHMe, -NMeCONHEt, - NMeCONMe2, i -NMeCONEt2.
Guanidino: -NH-C(=NH)NH2.
Tetrazolil: petočlani aromatični prsten sa četiri azotova atoma i jednim ugljenikovim atomom,
Imino: =NR, gde je R imino supstituent, na primer, na primer, vodonik, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno H ili C1-7alkil grupa. Primeri imino grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, =NH, =NMe, i =NEt.
Amidin (amidino): -C(=NR)NR<2>, gde je svako R amidinski supstituent, na primer, vodonik, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno H ili C1-7alkil grupa. Primeri amidinskih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -C(=NH)NH2, -C(=NH)NMe2, i -C(=NMe)NMe2.
Nitro: -NO2.
Nitrozo: -NO.
Azido: -N3.
Cijano (nitril, karbonitril): -CN.
Izocijano: -NC.
Cijanato: -OCN.
Izocijanato: -NCO.
Tiocijano (tiocijanato): -SCN.
Izotiocijano (izotiocijanato): -NCS.
Sulfhidril (tiol, merkapto): -SH.
Tioeter (sulfid): -SR, gde je R je tioeter supstituent, na primer, C1-7alkil grupa (takođe označena i kao C1-7alkiltio grupa), C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri C1-7alkiltio grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -SCH3 i-SCH2CH3.
Disulfide: -SS-R, gde je R je disulfid supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa (takođe ovde označen kao C1-7alkil disulfid). Primeri C1-7alkil disulfid grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -SSCH3i -SSCH2CH3.
Sulfin (sulfinil, sulfoksid): -S(=O)R, gde je R je sulfinski supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfinskih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)CH3 i-S(=O)CH2CH3.
Sulfon (sulfonil): -S(=O)2R, gde je R je sulfonski supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa, uključujući, na primer, fluorisana ili perfluorisana C1-7alkil grupa. Primeri sulfonskih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)2CH3(methanesulfonil, mesil), -S(=O)2CFO)3(triflil), -S(=O)2CH2CH3(esil), -S(=O)2C4F9(nonaflil), -S(=O)2CH2CF3(tresil), -S(=O)2CH2CH2NH2(tauril), -S(=O)2Ph (fenilsulfonil, besil), 4-metilfenilsulfonil (tosil), 4-hlorofenilsulfonil (closil), 4-bromofenilsulfonil (brosil), 4-nitrofenil (nosil), 2-naftalenesulfonat (napsil), i 5-dimetilaminonaftalen-1-ilsulfonat (dansil).
Sulfinska kiselina (sulfino): -S(=O)OH, -SO2H.
Sulfonska kiselina (sulfo): -S(=O)2OH, -SO3H.
Sulfinat (estar sulfinske kiseline): -S(=O)OR; gde je R je sulfinatni supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfinatnih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)OCH3(metoksisulfinil; metil sulfinate) i -S(=O)OCH2CH3(etoksisulfinil; etil sulfinat).
Sulfonat (estar sulfonske kiseline): -S(=O)2OR, gde je R je sulfonatni supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfonatnih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)2OCH3(metoksisulfonil; metil sulfonat) i -S(=O)2OCH2CH3(etoksisulfonil; etil sulfonat).
Sulfiniloksi: -OS(=O)R, gde je R je sulfiniloksi supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfiniloksi grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -OS(=O)CH3 i-OS(=O)CH2CH3.
Sulfoniloksi: -OS(=O)2R, gde je R je sulfoniloksi supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfoniloksi grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -OS(=O)2CH3(mesilate) i -OS(=O)2CH2CH3(esilate).
Sulfat: -OS(=O)2OR; gde je R je sulfatni supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa,
1
ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfatnih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -OS(=O)2OCH3i -SO(=O)2OCH2CH3.Sulfamil (sulfamoil; amid sulfinske kiseline; sulfinamid): -S(=O)NR<1>R<2>, gde je R<1>iR<2>nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri sulfamid grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)NH2, -S(=O)NH(CH3), -S(=O)N(CH3)2, -S(=O)NH(CH2CH3), -S(=O)N(CH2CH3)2, i -S(=O)NHPh.
Sulfonamido (sulfinamoil; amid sulfonske kiseline; sulfonamid): -S(=O)2NR<1>R<2>, gde je R1iR2 nezavisno amino supstituenti, kao što je definisano za amino grupe. Primeri sulfonamidnih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -S(=O)2NH2, -S(=O)2NH(CH3), -S(=O)2N(CH3)2, -S(=O)2NH(CH2CH3), -S(=O)2N(CH2CH3)2, i -S(=O)2NHPh.
Sulfamino: -NR<1>S(=O)2OH, gde je R<1>je aminki supstituent, kao što je definisano za amino grupe. Primeri sulfaminkih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -NHS(=O)2OH i -N(CH3)S(=O)2OH. Sulfonamino: -NR<1>S(=O)2R, gde je R<1 je>aminki supstituent, kao što je definisano za amino grupe, i R je sulfonamino supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfonaminkih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -NHS(=O)2CH3 i-N(CH3)S(=O)2C6H5.
Sulfinamino: -NR<1>S(=O)R, gde je R<1>je aminki supstituent, kao što je definisano za amino grupe, i R je sulfinamino supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa. Primeri sulfinaminkih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -NHS(=O)CH3 i-N(CH3)S(=O)C6H5.
Fosfino (fosfin): -PR<2>, gde je R je fosfinski supstituent, na primer, -H, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno -H, C1-7alkil grupa, ili C5-20arilna grupa. Primeri fosfinskih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -PH2, -P(CH3)2, -P(CH2CH3)2, -P(t-Bu)2, i -P(Ph)2.
Fosfo: -P(=O)2.
Fosfinil (fosfin oksid): -P(=O)R<2>, gde je R je fosfinil supstituent, na primer, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno C1-7alkil grupa ili C5-20arilna grupa. Primeri fosfinilskih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -P(=O) (CH3)2, -P(=O) (CH2CH3)2, -P(=O) (t-Bu)2, i -P(=O) (Ph)2.
Fosfonska kiselina (hipofosforna, fosfono): -P(=O) (OH)2.
Fosfonat (fosfono estar): -P(=O) (OR)2, gde je R je fosfonat supstituent, na primer, -H, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno -H, C1-7alkil grupa, ili C5-20arilna grupa. Primeri fosfonat grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -P(=O) (OCH3)2, -P(=O) (OCH2CH3)2, -P(=O) (O-t-Bu)2, i -P(=O) (OPh)2.
Fosfitna kiselina (fosfonooksi): -OP(=O) (OH)2.
Fosfat (fosfonooksi estar): -OP(=O) (OR)2, gde je R je fosfatni supstituent, na primer, -H, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno -H, C1-7alkil grupa, ili C5-20arilna grupa. Primeri fosfatnih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -OP(=O) (OCH3)2, -OP(=O) (OCH2CH3)2, -OP(=O) (O-tBu)2, i -OP(=O) (OPh)2.
Fosforna kiselina: -OP(OH)2.
Fosfit: -OP(OR)2, gde je R je fosfitni supstituent, na primer, -H, C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno -H, C1-7alkil grupa, ili C5-20arilna grupa. Primeri fosfitnih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -OP(OCH3)2, -OP(OCH2CH3)2, -OP(O-t-Bu)2, i -OP(OPh)2.
Fosforamidat: -OP(OR<1>)-NR<22>, gde je R<1>iR<2>are fosforamiditni supstituenti, na primer, -H, (opciono supstituisani) C1-7alkil grupa, C3-20heterociklil grupa, ili C5-20arilna grupa, poželjno -H, C1-7alkil grupa, ili C5-20arilna grupa. Primeri fosforamiditnih grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -OP(OCH2CH3)-N(CH3)2, -OP(OCH2CH3)-N(i-Pr)2, i -OP(OCH2CH2CN)-N(i-Pr)2.
Alkilen
C3-12alkilen: Termin alkilen", kako se ovde koristi, se odnosi na alkilen dobijene uklanjanjem dva vodonikova atoma, ili oba sa istog ugljenikovog atoma, ili sa dva različita ugljenikova atoma, ugljenikvodonika sa 3 do 12 ugljenikovih atoma (ukoliko drugačije nije napomenuto), koji mogu biti alifatičnili aliciklični, i koji mogu biti zasićeni, delimično zasićeni, ili potpuno nezasićeni. Stoga, termin “ alkilen" obuhvata podklase alkenilen, alkinilen, ciklo alkilen, itd., diskutovane ispod.
[0048] Primeri linearnih zasićenih C3-12alkilen grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -(CH2)n- gde je n ceo broj od 3 to 12, na primer, -CH2CH2CH2- (propilen), -CH2CH2CH2CH2- (butilen), -CH2CH2CH2H2CH2-(pentilen) i -CH2CH2CH2CH-2CH2CH2CH2- (heptilen).
[0049] Primeri razgranatih zasićenih C3-12alkilen grupa obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH3)CH2CH2CH2-, -CH2CH(CH3)CH2-, -CH2CH(CH3)CH2CH2-, -CH(CH2CH3)-, -CH(CH2CH3)CH2-, i -CH2CH(CH2CH3)CH2-.
[0050] Primeri linearnih delimično nezasićenih C3-12alkilen grupa (C3-12alkenilen, i alkinilen grupe) obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -CH=CH-CH2-, -CH2-CH=CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-, -CH=CH-CH2-CH2-
[0051] Primeri razgranatih delimično nezasićenih C3-12alkilen grupa (C3-12alkenilen i alkinilen grupe) obuhvataju, ali nisu ograničeni na, -C(CH3)=CH-, -C(CH3)=CH-CH2-, -CH=CH-CH(CH3)- i -C=C-CH(CH3)-.
[0052] Primeri alicikličnih zasićenih C3-12alkilen grupa (C3-12ciklo alkilena) obuhvataju, ali nisu ograničeni na, ciklopentilen (npr. ciklopent-1, 3-ilen), i cikloheksilen (npr. cikloheks-1, 4-ilen).
[0053] Primeri alicikličnih delimično nezasićenih C3-12alkilen grupa (C3-12ciklo alkilena) obuhvataju, ali nisu ograničeni na, ciklopentenilen (npr.4-ciklopenten-1, 3-ilen), cikloheksenilen (npr.2-cikloheksen-1, 4-ilen; 3-cikloheksen-1, 2-ilen; 2, 5-cikloheksadien-1, 4-ilen).
Jedinica liganda
[0054] Jedinica liganda može biti bilo koje vrste, i uključuje protein, polipeptid, peptid i nepeptidni agens koji se specifično vezuje za ciljni molekul. U nekim otelotvorenjima, jedinica liganda može biti protein, polipeptid ili peptid. U nekim otelotvorenjima, jedinica liganda može biti ciklični polipeptid. Ove jedinice liganda mogu da sadrže antitela ili fragment antitela koji sadrži najmanje jedno mesto vezivanja molekula cilja, limfokine, hormone, faktore rasta ili bilo koji drugi molekul ili supstancu koji se vezuju za ćeliju.
[0055] Termini "specifično se vezuje" i "specifično vezivanje" odnose se na vezivanje antitela ili drugog proteina, polipeptida ili peptida za unapred određeni molekul (npr. antigen). Tipično, antitelo ili drugi molekul se vezuje sa afinitetom od najmanje oko 1x10<7>M<-1>i vezuje se za unapred određeni molekul sa afinitetom koji je najmanje dvostruko veći od njegovog afiniteta za vezivanje za nespecifični molekul (npr., BSA, kazein) osim prethodno određenog molekula ili usko povezanog molekula.
[0056] Primeri ligand jedinica uključuju one agense opisane za upotrebu u WO 2007/085930.
[0057] U nekim otelotvorenjima, jedinica ligand je sredstvo za vezivanje ćelije koje se vezuje za vanćelijsku metu na ćeliji. Takav agens za vezivanje ćelija može biti protein, polipeptid, peptid ili nepeptidni agens. U nekim otelotvorenjima, agens za vezivanje ćelija može biti protein, polipeptid ili peptid. U nekim otelotvorenjima, agens za vezivanje ćelija može biti ciklični polipeptid. Agent za vezivanje ćelija takođe može biti antitelo ili fragment antitela koji vezuje antigen. Prema tome, u jednom otelotvorenu, predmetni pronalazak obezbeđuje konjugat antitelo-lek (ADC).
Agens za vezivanje ćelija
[0058] Agens za vezivanje ćelija može biti bilo koje vrste, i uključuje peptide i ne-peptidie. To može uključivati antitela ili fragmente antitela koji sadrže najmanje jedno mesto vezivanja, limfokine, hormone, hormonske mimetike, vitamine, faktore rasta, molekule za prenos nutrijenata, ili bilo koje druge stanice za vezivanje molekule ili supstanci.
Peptidi
1
[0059] U jednom otelotvorenju, agens za vezivanje ćelija je linearni ili ciklički peptid koji sadrži 4-30, poželjno 6-20, uzastopnih aminokiselinskih ostataka. U ovom otelotvorenju, poželjno je da se jedan agens za vezivanje ćelija veže za jedan monomer ili dimer pirolobenzodiazepin jedinjenja.
[0060] U jednom otelotvorenju agens za vezivanje ćelija sadrži peptid koji vezuje integrin αvβ6. Peptid može biti selektivan za α β preko XYS.
[0061] U jednom otelotvorenju agens za vezivanje ćelija sadrži A20FMDV-Cys polipeptid. A20FMDV-Cys ima sekvencu: NAVPNLRGDLQVLAQKVARTC. Alternativno, varijanta A20FMDV-Cys sekvence može se koristiti gde su jedan, dva, tri, četiri, pet, šest, sedam, osam, devet ili deset aminokiselinskih ostataka supstituisani sa nekim drugim aminokiselinskim ostatkom. Nadalje, polipeptid može imati sekvencu NAVXXXXXXXXXXXXXXXRTC.
Antitela
[0062] Izraz "antitelo" ovde se koristi u najširem smislu, i specifično pokriva monoklonska antitela, poliklonska antitela, dimere, multimere, multispecifična antitela (npr., bispecifična antitela) i fragmente antitela, sve dok oni pokazuju željenu biološku aktivnost (Miller i dr (2003) Jour of Immunology 170:.4854-4861). Antitela mogu biti mišja, ljudska, humanizovana, himerna ili izvedena iz drugih vrsta. Antitelo je protein stvoren od strane imunog sistema koji je sposoban da prepozna i veže se na specifični antigen. (Janeway, C., Travers, P., Walport, M. Shlomchik (2001) Immuno Biologija, 5. izd., Garland Publishing, New York). Ciljni antigen obično ima više mesta za vezivanje, koji se nazivaju epitopima, prepoznatih od strane CDR-a na više antitela. Svako antitelo koje se specifično vezuje na drugi epitop ima različitu strukturu. Tako, jedan antigen može imati više od jednog odgovarajućeg antitela. Antitelo uključuje molekule imunoglobulina pune dužine ili imunološki aktivni deo molekula imunoglobulina pune dužine, na primer, molekul koja sadrži mesto za vezivanje antigena koji imunospecifično vezuje antigen na željeni cilj ili deo takvih ciljeva, uključujući, ali ne ograničavajući se na, ćelija karcinoma ili ćelije koje proizvode autoimuna antitela povezana sa autoimunim bolestima. Imunoglobulin može biti bilo kog tipa (npr. IgG, IgE, IgM, IgD, IgA i), klase (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 i IgA2) ili podklase molekula imunoglobulina. Imunoglobulini se mogu izvesti iz bilo kog tipa, uključujući i humano, mišje ili zečje poreklo.
[0063] "Fragmenti antitela“ obuhvataju deo antitela pune dužine, uglavnom regiju koja vezuje antigen ili varijabilnu regiju istih. Primeri fragmenata antitela uključuju Fab, Fab’, F(ab’)2, i scFv fragmente; dijatela; linearna antitela; fragmente proizvedene od strane Fab ekspresujućih biblioteka, anti-idiotipska (anti-Id) antitela, CDR (komplementarna određujuća regija), kao i bilo koji od gore navedenih fragmenata za vezivanje epitopa koji se imunospecifično vezuju za ćelijske antigene karcinoma, virusne antigene ili mikrobne antigene, jednolančane molekule antitela; i multispecifična antitela formirana od fragmenata antitela.
[0064] Termin "monoklonsko antitelo", kako se ovde koristi, odnosi se na antitela dobijena iz populacije u osnovi homogenih antitela, tj. individualna antitela sadrže identičnu populaciju osim u slučaju prirodne pojave mutacija koje mogu biti prisutne u malim količinama. Monoklonska antitela su visoko specifična, usmerena protiv jednog antigenskog mesta. Nadalje, za razliku od pripreme poliklonskih antitela koja uključuju različita antitela usmerena protiv različitih determinanti (epitopa), svako monoklonsko antitelo je usmereno protiv jedne determinante na antigenu. Osim njihove specifičnosti, monoklonska antitela u prednosti su zbog toga što se mogu sintezovati nezagađena drugim antitelima. Modifikator "monoklonsko" ukazuje na karakter antitela kao što je dobijeno iz značajno homogene populacije antitela, i ne treba da se tumači da zahteva proizvodnju antitela bilo kojim posebnim postupkom. Na primer, monoklonska antitela korišćena u skladu sa ovim pronalaskom mogu se proizvesti postupkom hibridoma koju je prvi opisao Kohler i dr (1975) Nature 256: 495, ili se mogu pripremiti postupcima rekombinantne DNA (vidi, US 4816567). Monoklonska antitela mogu se izolovati iz biblioteke fag antitela pomoću tehnika opisanih u Clackson i dr (1991) Nature, 352: 624-628; Marks i dr (1991) J. Mol. Biol., 222: 581-597, ili od transgeničnih miševa koji nose potpuno human imunoglobulinski sistem (Lonberg (2008) Curr Opinion 20 (4):.450-459).
[0065] Monoklonska antitela ovde specifično uključuju "himerna" antitela u kojima je deo teškog i/ili lakog lanca identičan ili homologan sa odgovarajućim sekvencama u antitelima dobijenim iz posebnih vrsta ili pripadajućih posebnih klasa ili podklasa antitela, dok je ostatak lanca (lanaca) identičan ili homologan sa, odgovarajućim sekvencama u antitelima dobijenim iz drugih vrsta ili pripadajućih drugih klasa ili podklasa
1
antitela, kao i fragmenata takvih antitela, sve dok oni pokazuju željenu biološku aktivnost (US 4816567; i Morrison i dr (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855). Himerna antitela su "primatizovana" antitela koja sadrže varijabilne domene antigen sekvence izvedene iz ne-humanog primata (npr. majmuni starog sveta, ili čovekoliki majmun) i sekvencu humane konstantne regije.
[0066]"Netaknuto antitelo" ovde je ono koji sadrži VL i VH domene, kao i lak lanac konstantnog domena (CL) i teški lanac konstantnog domena, CH1, CH2 i CH3. Konstantni domeni mogu biti prirodna sekvenca konstantnih domena (npr. humana prirodna sekvenca konstantnih domena) ili varijanta aminokiselinske sekvence. Netaknuta antitela mogu imati jednu ili više "efektorsku funkciju" koja se odnose na one biološke aktivnosti koje se mogu pripisati u Fc regiji (prirodna sekvenca Fc regije ili aminokiselinska sekvenca varijante Fc regije) antitela. Primeri efektorskih funkcija antitela uključuju C1 q vezujuća; komplementarnu zavisnu citotoksičnost; vezivanje Fc receptora; citotoksičnost koja je posredovana ćelijama i zavisna od antitela (ADCC); fagocitoze; i donju regulaciju receptora na površini ćelije, kao što su receptori B ćelija i BCR.
[0067] Zavisno od aminokiselinske sekvenci konstantnog domena njihovih teških lanaca, netaknuta antitela mogu se dodeliti različitim "klasama". Postoji pet glavnih klasa netaknutih antitela: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, a neke od njih mogu se dalje podeliti u "podklase" (izotipovi), npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, i IgA2. Konstantni domeni teškog lanca koje odgovaraju različitim klasama antitela nazivaju se α, δ, ε, γ i µ, respektivno. Podjedinične strukture i trodimenzionalne konfiguracije različitih klasa imunoglobulina dobro su poznate.
Humanizacija
[0068] Tehnike za smanjivanje in vivo imunogenosti ne-humanog antitela ili fragmenta antitela uključuju one koje nazivamo "humanizovanjem".
[0069] "Humanizovano antitelo" odnosi se na polipeptid koji se sastoji od najmanje jednog dela modifikovane varijabilne regije ljudskog antitela, gde je deo varijabilne regije, poželjno deo značajno manji od netaknutog humanog varijabilnog domena, supstituisan odgovarajućom sekvencom iz nehumanih vrsta, gde je da modifikovana varijabilna regija povezana sa bar jednim drugim delom drugog proteina, poželjno konstantnom regijom humanog antitela. Izraz "humanizovana antitela" obuhvata humana antitela kod kojih su jedna ili više regija koja određuje komplementarnost ("CDR") ostataka aminokiselina i/ili jedna ili više okvirnih regija ("FW" ili "FR") aminokiselinskih ostataka supstituisani aminokiselinski ostaci sa analognih mesta kod glodara ili drugih nehumanih antitela. Izraz "Humanizovano antitelo" takođe uključuje varijantu imunoglobulinske aminokiselinske sekvence ili njen fragment koji sadrži FR koji ima značajnu aminokiselinsku sekvencu humanog imunoglobulina, i CDR koji ima značajnu aminokiselinsku sekvencu nehumanog imunoglobulina.
[0070] "Humanizovani" oblici nehumanih (npr. mišjih) antitela su himerna antitela koja sadrže minimalnu sekvencu dobijenu iz nehumanog imunoglobulina. Ili, gledano na drugi način, humanizovano antitelo je humano antitelo koje sadrži sekvence odabrane od nehumanih (npr. mišjih) antitela umesto ljudskih sekvenci. Humanizovano antitelo može uključivati konzervativne supstitucije aminokiselina ili neprirodne ostatke od iste ili različite vrste, koje bitno ne mijenja svoje vezivanje i/ili biološku aktivnost. Takva antitela su himerna antitela koja sadrže minimalnu sekvencu dobijenu iz nehumanih imunoglobulina.
[0071] Postoji niz tehnika humanizovanja, uključujući 'CDR presađivanje', 'vođeni izbor', 'deimunizaciju', 'ponovno izlaženje na površinu' (takođe poznato kao 'furniranje'), 'kompozitna antitela', 'Human String Content Optimisation' i preslaganje okvira.
CDR presađivanje
[0072] U ovoj tehnici, humanizovana antitela su humani imunoglobulini (antitelo primalac) u kojima su ostaci od komplementarno determinišuće regije (CDR) iz antitela primaoca zamenjeni ostacima iz CDR nehumanih vrsta (antitelo donor) kao što su miš, pacov, kamila, govedo, koza, ili zec, i koje ima željena svojstva (u praksi, nehumani CDR-ovi se „presađuju“ na humane). U nekim slučajevima, okvirne regije (FR) ostataka humanog imunoglobulina zamenjene su odgovarajućim nehumanim ostacima (to se može dogoditi kada, na primer, određeni FR ostatak ima značajno dejstvo na vezivanje antigena).
[0073] Dalje, humanizovana antitela mogu sadržati ostatke koje se ne nalaze ni u antitelu primaocu, niti u uvezenim CDR ili okvirnim sekvenci. Te promene su napravljene kako bi se dodatno rafinisale i
1
maksimizovale performanse antitela. Stoga, uglavnom, humanizovano antitelo sadržaće sve od barem jednog, a u jednom aspektu dva varijabilna domena, u kojima sve ili sve hipervarijabilne petlje odgovaraju onima nehumanog imunoglobulina i sve ili gotovo sve FR regije su one od sekvenci humanog imunoglobulina. humanizovano antitelo će po izboru sadržati barem deo imunoglobulina konstantne regije (Fc), ili ono od humanog imunoglobulina.
Vođeni izbor
[0074] Postupak sadrži kombinovanje VHi VLdomena date specifičnosti nehumanog antitela za određeni epitop sa humanim VHili VLbibliotekama i specifične humane V domene izabrane protiv željenog antigena. Ovako odabran humani VHzatim se kombinuje sa VLbibliotekom kako bi se dobila potpuno humana VhxVL kombinacija. Postupak je opisan u Nature Biotechnology (NY) 12 (1994) 899-903.
Kompozitna antitela
[0075] U ovom postupku, dva ili više segmenata aminokiselinske sekvence iz humanih antitela kombinuju se u konačne molekule antitela. Oni su konstruisani kombinovanjem više ljudskih VL segmenata sekvenci u kombinacijama koje ograničavaju ili izbegavaju humane T ćelijske epitope u finalnim V regijama kompozitnih antitela. Tamo gde je potrebno, T ćelijski epitopi su ograničeni ili izbegnuti zamenom segmenata V regija što doprinosi ili kodira T ćelijske epitope sa alternativnim segmentima koji izbegavaju T ćelijske epitope. Ovaj postupak je opisan u US 2008/0206239 A1.
Deimunizacija
[0076] Ovaj postupak uključuje uklanjanje humanih (ili od druge vrste) T-ćelijskih epitopa iz V regija terapeutskog antitela (ili drugog molekula). Terapeutska antitela sekvence V-regije analiziraju se na prisutnost MHC vezivnih motiva klase II-, na primer, poređenje sa bazama podataka MHC-vezujućih motiva (kao što su baza podataka "motiva" hostovana na www.wehi.edu.au). Alternativno, MHC vezivni motivi klase II- mogu se identifikovati računskim postupcima nanizivanja (threading), kao što su oni napravljeni od strane Altuvia i dr. (J. Mol Biol 249244-250 (1995).,); u tim postupcima, uzastopni preklapajući peptidi iz sekvence V-regije testiraju se na svoje vezivne energije do proteina MHC klase II. Ti podaci se zatim mogu kombinovati sa podacima o drugim osobinama sekvence koje se odnose na peptide, uspešno predstavljeni kao amfipaticitet, Rothbard motivi i mesta cepanja za katepsin B i drugih procesnih enzima.
[0077] Jednom kad se potencijalni T-ćelijski epitpoi druge vrste (npr. humani) identifikuju, oni se eliminišu izmenom jedne ili više aminokiselina. Modifikovane aminokiseline su obično unutar samog T-ćelijskog epitopa, ali mogu biti u susedstvu epitopa u smislu primarne ili sekundarne strukture proteina (i zbog toga ne mogu biti jedni pored drugih u primarnoj strukturi). Najtipičnije, promena se postiže pomoću supstitucije, ali u nekim slučajevima biće prikladnije dodavanje ili uklanjanje aminokiseline.
[0078] Sve promene mogu se postići rekombinantnom DNA tehnologijom, tako da se finalni molekul može pripremiti eksprimiranjem iz rekombinantnog domaćina koristeći dobro poznate postupke kao što je „Mestom usmerena mutageneza“. Međutim, upotreba hemije proteina ili bilo kojih drugim sredstava molekularne izmene takođe je moguće.
Ponovno izlaganje
[0079] Ovaj postupak uključuje:
(a) određivanje konformacijske strukture varijabilne regije nehumanog (npr. od glodara) antitela (ili njegov fragment) izgradnjom trodimenzionalnog modela nehumanog antitela varijabilne regije;
(b) generisanje poravnanja sekvenci pomoću relativne raspodele pristupačnosti sa rendgenskih kristalografskih struktura dovoljnog broja nehumanih i humanih antitela varijabilne regije teškog i lakog lanca, čime se dobija niz položaja teških i lakih lanaca gde su položaji poravnanja jednaki u 98% od dovoljnog broja nehumanih antitela teškog i lakog lanca;
(c) za definisanje nehumanog antitela koji treba se humanizuje, set površina teškog i lakog lanca izlaže aminokiselinske ostatke koristeći set okvirnih položaja generisan u koraku (b);
(d) određivanje aminokiselinskih sekvenci iz humanog antitela, set teškog i lakog lanca na površini izlaže aminokiselinske ostatke koji su najbliže identični setu površinski izloženih aminokiselinskih ostataka koji
1
su definisani u koraku (c), pri čemu su teški i laki lanac od humanog antitelo, i jesu ili nisu prirodno upareni;
(e) supstituisanje, u aminokiselinskoj sekvenci ne-humanog antitela koje treba da se humanizuje, set teškog i lakog lanca na površini izlaže aminokiselinske ostataka definisane u koraku (c) sa setom teškog i lakog lanca koji na površini izlaže aminokiselinske ostatke identifikovane u koraku (d);
(f) konstruisanje trodimenzionalnog modela varijabilne regije ne-humanog antitela dobijenog u supstituisanju navedenom u koraku (e);
(g) identifikovanje, poređenjem trodimenzionalnog modela konstruisanog u koracima (a) i (f), bilo koji aminokiselinski ostatak iz setova identifikovanih u koracima (c) ili (d), koji su unutar 5 Angstrema bilo kog atoma bilo kog ostatka u regijama koje određuju komplementarnost iz nehumanog antitela koje treba da se humanizuje; i
(h) menjanje bilo kojih ostataka utvrđenih u koraku (g) od humanog do izvornog nehumanog aminokiselinskog ostatka kako bi se time definisao set površinski izloženih aminokiselinskih ostataka za humanizovanje nehumanog antitela; uz uslov da korak (a) ne mora prvi da se izvede, ali mora da se izvede pre koraka (g).
Superhumanizacija
[0080] Postupak upoređuje nehumane sekvence sa funkcionalnim humanih embrionskim repertoarom gena. Izabrani su humani geni koji kodiraju kanonske strukture identične ili blisko povezane sa nehumanim sekvencama. Kao FR donori odabrani su ti humani geni sa najvišom homologijom unutar CDR-a. Konačno, nehumane CDR se umeću u ove humane FR. Ovaj postupak opisan je u patentu WO 2005/079479 A2.
Human String Content Optimizacija
[0081] Ova metoda upoređuje nehumanu (npr. mišju) sekvencu sa repertoarom humanih embrionskih gena, a razlike su označene kao Human String Content (HSC) koji kvantifikuje sekvencu na nivou potencijalnih MHC/T-ćelijskih epitopa. Ciljana sekvenca se zatim humanizuje povećavanjem svoje HSC, pre nego pomoću globalne mere identiteta, kako bi se generisalo više različitih humanih varijanti (opisano u Molecular Immunology, 44, (2007) 1986-1998).
Preslaganje okvira
[0082] CDR-ovi iz nehumanog antitela su fuzionisani u okvir as cDNA bibliotekom koja obuhvata sve poznate teške i lake lance humanih okvira embrionskih gena. Humanizovana antitela su zatim odabrana po, npr., ispiranju faga prikazane biblioteke antitela. To je opisano u Metodama 36, 43-60 (2005).
[0083] Primeri agenasa za vezivanje ćelija uključuju one agense opisane za primenu u WO 2007/085930.
[0084]Tumor-pridruženi antigeni i srodna antitela za korišćenje u otelotvorenjima ovog pronalaska navedena su ispod.
ANTIGENI POVEZANI SA TUMOROM I SRODNA ANTITELA
(1) BMPR1B (koštani morfogenetski protein receptor tipa IB)
Nukleotid
[0085] Banka gena pristupni broj NM_001203
Banka gena verzija broj NM_001203,2 GI:169790809
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 2012.14:06
Polipeptid
[0086] Banka gena pristupni broj NM_001194
Banka gena verzija broj NP_001194,1 GI:4502431
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 2012.14:06
Upućivanje na literaturu
1
[0087] ten Dijke,P., i dr Science 264 (5155): 101-104 (1994), Oncogene 14 10 (11):1377-1382 (1997)); WO2004/063362 (Patentni zahtev 2); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12);
US2003/134790-A1 (Strana 38-39); WO2002/102235 (Patentni zahtev 13; Strana 296); WO2003/055443 (Strana 91-92); WO2002/99122 (Primer 2; Strana 528-530); WO2003/029421 (Patentni zahtev 6); WO2003/024392 (Patentni zahtev 2; Slika 112); WO2002/98358 (Patentni zahtev 1; Strana 183); WO2002/54940 (Strana 100-101); WO2002/59377 (Strana 349-350); WO2002/30268 (Patentni zahtev 27; Strana 376); 15 WO2001/48204 (Primer; Slika 4); NP_001194 koštani morfogenetski protein receptor, tip IB /pid=NP_001194,1.; MIM:603248; AY065994
(2) E16 (LAT1, SLC7A5)
Nukleotid
[0088] Banka gena pristupni broj NM_003486
Banka gena verzija broj NM_003486,5 GI:71979931
Banka gena datum ažuriranja podatka: 27. jun 2012.12:06
Polipeptid
[0089] Banka gena pristupni broj NM_003477
Banka gena verzija broj NP_003477,4 GI:71979932
Banka gena datum ažuriranja podatka: 27. hun 2012.12:06
Upućivanje na literaturu
[0090] Biochem. Biophys. Res. Commun. 255 (2), 283-288 (1999), Nature 395 (6699):288-291 (1998), Gaugitsch, H.W., et 20 al (1992) J. Biol. Chem. 267 (16):11267-11273); WO2004/048938 (Primer 2); WO2004/032842 (Primer IV); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2002/78524 (Primer 2); WO2002/99074 (Patentni zahtev 19; Strana 127-129); WO2002/86443 (Patentni zahtev 27; strane 222, 393); WO2003/003906 (Patentni zahtev 10; Strana 293); WQ2002/64798 (Patentni zahtev 33; Strana 93-95); WO2000/14228 (Patentni zahtev 5; Strana 133-136); US2003/224454 (Slika 3); 25 WO2003/025138 (Patentni zahtev 12; Strana 150); NP_003477 porodica nosača rastvorenih supstanci 7 (katjonski aminokiselinski transporter, i sistem), član 5 /pid=NP_003477,3 - Homo sapiens; MIM:600182;; NM_015923.
(3) STEAP1 (šest transmembranskih epitelnih antigena prostate)
Nukleotid
[0091] Banka gena pristupni broj NM_012449
Banka gena verzija broj NM_012449,2 GI:22027487
Banka gena datum ažuriranja podatka: 9. septembar 2012.14:57
Polipeptid
[0092] Banka gena pristupni broj NP_036581
Banka gena verzija broj NP_036581,1 GI:9558759
Banka gena datum ažuriranja podatka: 9. septembar 2012.14:57
Upućivanje na literaturu
[0093] Cancer Res. 61 (15), 5857-5860 (2001), Hubert, R.S., i dr (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96 (25):14523-14528); WO2004/065577 (Patentni zahtev 6); WO2004/027049 (Slika 11); EP1394274 (Primer 11); WO2004/016225 (Patentni zahtev 2); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); US2003/157089 (Primer 5); US2003/185830 (Primer 5); US2003/064397 (Slika 2); WO2002/89747 (Primer 5; Strana 618-619); WO2003/022995 (Primer 9; Slika 13A, 35 Primer 53; Strana 173, Primer 2; Slika 2A); šest transmembranskih epitelnih antigena prostate; MIM:604415.
2
(4) 0772P (CA125, MUC16)
Nukleotid
[0094] Banka gena pristupni broj AF361486
Banka gena verzija broj AAK74120,3 GI:34501467
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.07:56
Polipeptid
[0095] Banka gena pristupni broj AAK74120
Banka gena verzija broj AAK74120,3 GI:34501467
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.07:56
Upućivanje na literaturu
[0096] J. Biol. Chem.276 (29):27371-27375 (2001)); WO2004/045553 (Patentni zahtev 14); WO2002/92836 (Patentni zahtev 6; Slika 12);
WO2002/83866 (Patentni zahtev 15; Strana 116-121); US2003/124140 (Primer 16); GI:34501467;
(5) MPF (MPF, MSLN, SMR, faktor potenciranja megakariocita, mezotelin)
Nukleotid
[0097] Banka gena pristupni broj NM_005823
Banka gena verzija broj NM_005823,5 GI:293651528
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. septembar 2012.13:47
Polipeptid
[0098] Banka gena pristupni broj NP_0058144
Banka gena verzija broj NP_005814,2 GI:53988378
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. septembar 2012.13:47
Upućivanje na literaturu
[0099] Yamaguchi, N., i dr Biol. Chem.269 (2), 805-808 (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.96 (20):11531-11536 (1999), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.9310 (1):136-140 (1996), J. Biol. Chem.270 (37):21984-21990 (1995)); WO2003/101283 (Patentni zahtev 14); (WO2002/102235 (Patentni zahtev 13; Strana 287-288); WO2002/101075 (Patentni zahtev 4; Strana 308- 309); WO2002/71928 (Strana 320-321); WO94/10312 (Strana 52-57); IM:601051.
(6) Napi3b (NAPI-3B, NPTIIb, SLC34A2, familija nosača rastvorljivih supstanci 34 (natrijum fosfat), član 2, tip II natrijum zavisni fosfat transporter 3b)
Nukleotid
[0100] Banka gena pristupni broj NM_006424
Banka gena verzija broj NM_006424,2 GI:110611905
Banka gena datum ažuriranja podatka: 22. jul 2012.15:39date: Jul 22, 201203:39 PM
Polipeptid
[0101] Banka gena pristupni broj NP_006415
Banka gena verzija broj NP_006415,2 GI:110611906
Banka gena datum ažuriranja podatka: 22. jul 2012.15:39
Upućivanje na literaturu
[0102] J. Biol. Chem.277 (22):19665-19672 (2002), Genomics 62 (2):281-284 (1999), Feild, J.A., i dr (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 258 (3):578-582); WO2004/022778 (Patentni zahtev 2); EP1394274 (Primer 11); WO2002/102235 (Patentni zahtev 13; Strana 20326); EP0875569 (Patentni zahtev 1; Strana 17-19); WO2001/57188 (Patentni zahtev 20; Strana 329); WO2004/032842 (Primer IV); WO2001/75177 (Patentni zahtev 24; Strana 139-140); MIM:604217.
(7) Šema 5b (FLJ10372, KIAA1445, Mm.42015, SEMA5B, SEMAG, Semaforin 5b Hlog, šema domen, sedam trombospodinskih ponavljanja (tip 1 I slični tipu 1), transmembranski domen (TM) I kratki citoplazmatični dome, (šema forin) 5B)
Nukleotid
[0103] Banka gena pristupni broj AB040878
Banka gena verzija broj AB040878,1 GI:7959148
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. avgust 2006.17:40
Polipeptid
[0104] Banka gena pristupni broj BAA95969
Banka gena verzija broj BAA95969,1 GI:7959149
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. avgust 2006.17:40
Upućivanje na literaturu
[0105] Nagase T., i dr (2000) DNA Res. 7 (2):143-150); WO2004/000997 (Patentni zahtev 1); WO2003/003984 (Patentni zahtev 1); WO2002/06339 (Patentni zahtev 1; Strana 50); WO2001/88133 (Patentni zahtev 1; Strana 41-43, 48-58); WO2003/054152 (Patentni zahtev 20); WO2003/101400 (Patentni zahtev 11); Accession: 30 Q9P283; Genew; HGNC:10737
[0106] (8) PSCA hlg (2700050C12Rik, C530008O16Rik, RIKEN cDNA 2700050C12, RIKEN cDNA 2700050C12gen)
Nukleotid
[0107] Banka gena pristupni broj AY358628
Banka gena verzija broj AY358628,1 GI:37182377
Banka gena datum ažuriranja podatka: 1. decembar 2009.04:15
Polipeptid
[0108] Banka gena pristupni broj AAQ88991
Banka gena verzija broj AAQ88991,1 GI:37182378
Banka gena datum ažuriranja podatka: 1. decembar 2009.04:15
Upućivanje na literaturu
[0109] Ross i dr (2002) Cancer Res. 62:2546-2553; US2003/129192 (Patentni zahtev 2); US2004/044180 (Patentni zahtev 12); US2004/044179 35 (Patentni zahtev 11); US2003/096961 (Patentni zahtev 11); US2003/232056 (Primer 5); WO2003/105758 16 (Patentni zahtev 12); US2003/206918 (Primer 5); EP1347046 (Patentni zahtev 1); WO2003/025148 (Patentni zahtev 20); GI:37182378.
(9) ETBR (Endotelinski receptor tipa B)
Nukleotid
[0110] Banka gena pristupni broj AY275463
Banka gena verzija broj AY275463,1 GI:305260948
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.02:26
Polipeptid
[0111] Banka gena pristupni broj AAP32295
Banka gena verzija broj AAP32295,1 GI:30526095
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.02:26
Upućivanje na literaturu
[0112] Nakamuta M., i dr Biochem. Biophys. Res. Commun. 177, 34-39, 1991; Ogawa Y., i dr Biochem. Biophys. Res. Commun. 178, 248-255, 1991; Arai H., i dr Jpn. Circ. J.56, 1303-1307, 1992; Arai H., i dr J. Biol. Chem.268, 3463-3470, 1993; Sakamoto A., Yanagisawa M., i dr Biochem. Biophys. Res. Commun.178, 656-663, 1991; Elshourbagy N.A., i dr J. Biol. Chem.268, 3873-3879, 1993; Haendler B., i dr J. Cardiovasc. Pharmacol.20, s1-S4, 1992; Tsutsumi M., i dr Gene 228, 43-49, 1999; Strausberg R.L., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; Bourgeois C., i dr J. Clin. Endocrinol. Metab. 82, 3116-3123, 1997; Okamoto Y., i dr Biol. Chem. 272, 21589-21596, 1997; Verheij J.B., i dr Am. J. Med. Genet. 108, 223-225, 2002; Hofstra R.M.W., i dr Eur. J. Hum. Genet.5, 180-185, 1997; Puffenberger E.G., i dr Cell 79, 1257-1266, 1994; Attie T., i dr, Hum. Mol. Genet. 4, 2407-152409, 1995; Auricchio A., i dr Hum. Mol. Genet. 5:351-354, 1996; Amiel J., i dr Hum. Mol. Genet.5, 355-357, 1996; Hofstra R.M.W., i dr Nat. Genet.12, 445-447, 1996; Svensson P.J., i dr Hum. Genet.103, 145-148, 1998; Fuchs S., i dr Mol. Med.7, 115-124, 2001; Pingault V., i dr (2002) Hum. Genet.111, 198-206; WO2004/045516 (Patentni zahtev 1); WO2004/048938 (Primer 2); WO2004/040000 (Patentni zahtev 151); WO2003/087768 (Patentni zahtev 1); 20 WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2002/61087 (Slika 1); WO2003/016494 (Slika 6); WO2003/025138 (Patentni zahtev 12; Strana 144); WO2001/98351 (Patentni zahtev 1; Strana 124-125); EP0522868 (Patentni zahtev 8; Slika 2); WO2001/77172 (Patentni zahtev 1; Strana 297-299); US2003/109676; US6518404 (Slika 3); US5773223 (Patentni zahtev 1a; Col 31-34); WO2004/001004. Nukleotid
[0113] Banka gena pristupni broj NM_017763
Banka gena verzija broj NM_017763,4 GI:167830482
Banka gena datum ažuriranja podatka: 22. jul 2012.00:34
Polipeptid
[0114] Banka gena pristupni broj NP_060233
Banka gena verzija broj NP_060233,3 GI:56711322
Banka gena datum ažuriranja podatka: 22. jul 2012.00:34
Upućivanje na literaturu
[0115] WO2003/104275 (Patentni zahtev 1); WO2004/046342 (Primer 2); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); WO2003/083074 (Patentni zahtev 14; Strana 61); WO2003/018621 (Patentni zahtev 1); WO2003/024392 (Patentni zahtev 2; Slika 93); WO2001/66689 (Primer 6); LocusID:54894.
(11) STEAP2 (HGNC_8639, IPCA-1, PCANAP1, STAMP1, STEAP2, STMP, gen povezan sa karcinomom prostate 1, protein povezan sa karcinomom prostate 1, šest transmembranskih epitelnih antigena prostate 2, šest transmembranskih proteina prostate)
Nukleotid
[0116] Banka gena pristupni broj AF455138
Banka gena verzija broj AF455138,1 GI:22655487
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.13:54
Polipeptid
[0117] Banka gena pristupni broj AAN04080
2
Banka gena verzija broj AAN04080,1 GI:22655488
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.13:54
Upućivanje na literaturu
[0118] Lab. Invest. 82 (11):1573-1582 (2002)); WO2003/087306; US2003/064397 (Patentni zahtev 1; Slika 1); WO2002/72596 (Patentni zahtev 13; Strana 54-55); WO2001/72962 (Patentni zahtev 1; Slika 4B); 35 WO2003/104270 (Patentni zahtev 11); WO2003/104270 (Patentni zahtev 16); US2004/005598 (Patentni zahtev 22); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); US2003/060612 (Patentni zahtev 12; Slika 10); WO2002/26822 (Patentni zahtev 23; Slika 2); WO2002/16429 (Patentni zahtev 12; Slika 10); GI:22655488. (12) TrpM4 (BR22450, FLJ20041, TRPM4, TRPM4B, prolazni receptorski potencijalni katjonski 5 kanal, podfamilija M, član 4)
Nukleotid
[0119] Banka gena pristupni broj NM_017636
Banka gena verzija broj NM_017636,3 GI:304766649
Banka gena datum ažuriranja podatka: 29. jun 2012.11:27
Polipeptid
[0120] Banka gena pristupni broj NP_060106
Banka gena verzija broj NP_060106,2 GI:21314671
Banka gena datum ažuriranja podatka: 29. jun 2012.11:27
Upućivanje na literaturu
[0121] Xu, X.Z., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.98 (19):10692-10697 (2001), Cell 109 (3):397-407 (2002), J. Biol. Chem.278 (33):30813-30820 (2003)); US2003/143557 (Patentni zahtev 4); WO2000/40614 (Patentni zahtev 14; Strana 100-103); WO2002/10382 (Patentni zahtev 1; Slika 9A); WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); WO2002/30268 (Patentni zahtev 27; Strana 391); US2003/219806 (Patentni zahtev 4); WO2001/62794 (Patentni zahtev 1014; Slika 1A-D); MIM:606936.
(13) CRIPTO (CR, CR1, CRGF, CRIPTO, TDGF1, faktor rasta dobijen od teratokarcinoma) Nukleotid
[0122] Banka gena pristupni broj NM_003212
Banka gena verzija broj NM_003212,3 GI:292494881
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 2012.14:27
Polipeptid
[0123] Banka gena pristupni broj NP_8003203
Banka gena verzija broj NP_8003203,1 GI:4507425
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 2012.14:27
Upućivanje na literaturu
[0124] Ciccodicola, A., i dr EMBO J.8 (7):1987-1991 (1989), Am. J. Hum. Genet.49 (3):555-565 (1991)); US2003/224411 (Patentni zahtev 1); WO2003/083041 (Primer 1); WO2003/034984 (Patentni zahtev 12); WO2002/88170 (Patentni zahtev 2; Strana 52-53); WO2003/024392 (Patentni zahtev 2; Slika 58); WO2002/16413 (Patentni zahtev 1; Strana 94-95, 105); WO2002/22808 (Patentni zahtev 2; Slika 1); US5854399 (Primer 2; Col 17-18); US5792616 (Slika 2); MIM:187395.
(14) CD21 (CR2 (Komplementarni receptor 2) ili C3DR (C3d/Epstein Barr virusni receptor) ili Hs.73792) Nukleotid
[0125] Banka gena pristupni broj M26004
Banka gena verzija broj M26004,1 GI:181939
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:47
Polipeptid
[0126] Banka gena pristupni broj AAA35786
Banka gena verzija broj AAA35786,1 GI:181940
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:47
Upućivanje na literaturu
[0127] Fujisaku i dr (1989) J. Biol. Chem. 264 (4):2118-2125); Weis J.J., i dr J. Exp. Med. 167, 1047-1066, 1988; Moore M., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84, 9194-9198, 1987; Barel M., i dr Mol. Immunol. 35, 1025-1031, 1998; Weis J.J., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.83, 5639-5643, 1986; Sinha S.K., i dr (1993) J. Immunol. 150, 5311-5320; WO2004/045520 (Primer 4); US2004/005538 (Primer 1); WO2003/062401 (Patentni zahtev 9); WO2004/045520 (Primer 4); WO91/02536 (Slika 9,1-9,9); WO2004/020595 (Patentni zahtev 1); Accession: P20023; Q13866; Q14212; EMBL; M26004; AAA35786,1.
(15) CD79b (CD79B, CD79β, IGb (beta povezana sa imunoglobulinom), B29)
Nukleotid
[0128] Banka gena pristupni broj NM_000626
Banka gena verzija broj NM_000626,2 GI:90193589
Banka gena datum ažuriranja podatka: 26. jun 2012.13:53
Polipeptid
[0129] Banka gena pristupni broj NM_000626
Banka gena verzija broj NM_000626,2 GI:90193589
Banka gena datum ažuriranja podatka: 26. jun 2012.13:53
Upućivanje na literaturu
[0130] Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (2003) 100 (7):4126-4131, Blood (2002) 100 (9):3068-3076, Muller i dr (1992) Eur. J. Immunol.22 (6):1621-1625); WO2004/016225 (patentni zahtev 2, Slika 140); WO2003/087768, US2004/101874 (patentni zahtev 1, strana 102); WO2003/062401 (patentni zahtev 9); WO2002/78524 (Primer 2); US2002/150573 (patentni zahtev 355, strana 15); US5644033; WO2003/048202 (patentni zahtev 1, strane 306 i 309); WO 99/58658, US6534482 (patentni zahtev 13, Slika 17A/B); WO2000/55351 (patentni zahtev 11, strane 1145-1146); MIM:147245
(16) FcRH2 (IFGP4, IRTA4, SPAP9A (SH2 domen koji sadrži protein za pričvršćivanje fosfataze 5 1a), SPAP1B, SPAP1C)
Nukleotid
[0131] Banka gena pristupni broj NM_030764
Banka gena verzija broj NM_030764,3 GI:227430280
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. jun 2012.00:30
Polipeptid
[0132] Banka gena pristupni broj NPO110391
Banka gena verzija broj NP_110391,2 GI:19923629
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. jun 2012.00:30
2
Upućivanje na literaturu
[0133] AY358130); Genome Res. 13 (10):2265-2270 (2003), Imunogenetics 54 (2):87-95 (2002), Blood 99 (8):2662-2669 (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.98 (17):9772-9777 (2001), Xu, M.J., i dr (2001) Biochem. Biophys. Res. Commun. 280 (3):768-775; WO2004/016225 (Patentni zahtev 2); WO2003/077836; WO2001/38490 (Patentni zahtev 5; Slika 18D1-18D-2); WO2003/097803 (Patentni zahtev 12); WO2003/089624 (Patentni zahtev 25);: MIM:606509.
(17) HER2 (ErbB2)
Nukleotid
[0134] Banka gena pristupni broj M11730
Banka gena verzija broj M11730,1 GI:183986
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:47
Polipeptid
[0135] Banka gena pristupni broj AAA75493
Banka gena verzija broj AAA75493,1 GI:306840
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:47
Upućivanje na literaturu
[0136] Coussens L., i dr Science (1985) 230(4730):1132-1139); Yamamoto T., i dr Nature 319, 230-234, 1986; Semba K., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82, 6497-6501, 1985; Swiercz J.M., i dr J. Cell Biol. 165, 869-15 880, 2004; Kuhns J.J., i dr J. Biol. Chem. 274, 36422-36427, 1999; Cho H.-S., i dr Nature 421, 756-760, 2003; Ehsani A., i dr (1993) Genomics 15, 426-429; WO2004/048938 (Primer 2); WO2004/027049 (Slika 1I); WO2004/009622; WO2003/081210; WO2003/089904 (Patentni zahtev 9); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); US2003/118592; WO2003/008537 (Patentni zahtev 1); WO2003/055439 (Patentni zahtev 29; Slika 1A-B); WO2003/025228 (Patentni zahtev 37; Slika 5C); 20 WO2002/22636 (Primer 13; Strana 95-107); WO2002/12341 (Patentni zahtev 68; Slika 7); WO2002/13847 (Strana 71-74); WO2002/14503 (Strana 114-117); WO2001/53463 (Patentni zahtev 2; Strana 41-46); WO2001/41787 (Strana 15); WO2000/44899 (Patentni zahtev 52; Slika 7); WO2000/20579 (Patentni zahtev 3; Slika 2); US5869445 (Patentni zahtev 3; Col 31-38); WO9630514 (Patentni zahtev 2; Strana 56-61); EP1439393 (Patentni zahtev 7); WO2004/043361 (Patentni zahtev 7); WO2004/022709; WO2001/0024425 (Primer 3; Slika 4); Accession: P04626; EMBL; M11767; AAA35808,1. EMBL; M11761; AAA35808,1
ANTITELA
[0137]
Abbott: US20110177095
Na primer, antitelo sadrži CDR-ove koji imaju ukupno preko 80% identiteta sekvenci sa CDR-ovima koji imaju aminokiselinske sekvence SEQ ID NO:3 (CDR-H1), SEQ ID NO:4 (CDR-H2), SEQ ID NO:5 (CDR-H3), SEQ ID NO:104 i/ili SEQ ID NO:6 (CDR-L1), SEQ ID NO:7 (CDR-L2), i SEQ ID NO:8 (CDR-L3), gde anti-HER2 antitelo ili anti-HER2 vezujući fragment imaju smanjenu imunogenost u poređenju sa antitelom koje ima VH od SEQ ID NO:1 i VL od SEQ ID NO:2.
Biogen: US20100119511
Na primer, ATCC pristupni brojevi: PTA-10355, PTA-10356, PTA-10357, PTA-10358
Na primer, pročišćen molekul antitela koji se vezuje za HER2 sadrži svih šest CDR-a od antitela izabranog iz grupe koja se sastoji od BIIB71F10 (SEQ ID NOs:11, 13), BIIB69A09 (SEQ ID NOs:15, 17); BIIB67F10 (SEQ ID NOs:19, 21); BIIB67F11 (SEQ ID NOs:23, 25), BIIB66A12 (SEQ ID NOs:27, 29), BIIB66C01 (SEQ ID NOs:31, 33), BIIB65C10 (SEQ ID NOs:35, 37), BIIB65H09 (SEQ ID NOs:39, 41) i BIIB65B03 (SEQ ID NOs:43, 45), ili CDR-e koji su identični ili imaju ne više od dve izmene od navedenih CDR-a.
2
Herceptin (Genentech) - US6,054,297; ATCC pristupni broj CRL-10463 (Genentech)
Pertuzumab (Genentech)
US20110117097
na primer, pogledati SEQ IDs No. 15&16, SEQ IDs No. 17&18, SEQ IDs No. 23&24 & ATCC pristupne brojeve HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12697.
US20090285837
US20090202546
na primer, ATCC pristupni brojevi: HB-12215, HB-12216, CRL 10463, HB-12698.
US20060088523
• na primer, ATCC pristupni brojevi: HB-12215, HB-12216
• na primer, antitelo koje sadrži varijabilne lake i varijabilne teške aminokiselinske sekvence u SEQ ID Nos.3 i 4, respektivno.
• na primer, antitelo koje sadrži aminokiselinske sekvence lakog lanca odabrane od SEQ ID No.
15 i 23, I aminokiselinske sekvence teškog lanca odabrane od SEQ ID No.16 i 24 US20060018899
• na primer, ATCC pristupni brojevi: (7C2) HB-12215, (7F3) HB-12216, (4D5) CRL-10463, (2C4) HB-12697.
• na primer, antitelo koje sadrži aminokiselinsku sekvencu u SEQ ID No. 23, ili njenu deamidovanu ili oksidovanu varijantu. US2011/0159014
• na primer, antitelo koje ima varijabilni domen lakog lanca koji sadrži hipervarijabilne regije od SEQ ID NO: 1".
• na primer, antitelo koje ima varijabilni domen teškog lanca koji sadrži hipervarijabilne regije od SEQ ID NO: 2.
US20090187007
Glycotope: TrasGEX antibody http://www.glycotope.com/pipeline
Na primer, pogledati International Joint Cancer Institute i Changhai Hospital Cancer Cent: HMTI-Fc Ab - Gao J., i dr BMB Rep.2009 Oct 31;42(10):636-41.
Symphogen: US20110217305
Union Stem Cell &Gene Engineering, China - Liu HQ., i dr Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi.2010 May;26(5):456-8.
(18) NCA (CEACAM6)
Nukleotid
[0138] Banka gena pristupni broj M18728
Banka gena verzija broj M18728,1 GI:189084
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:48
Polipeptid
[0139] Banka gena pristupni broj AAA59907
Banka gena verzija broj AAA59907,1 GI:189085
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:48
Upućivanje na literaturu
2
[0140] Barnett T., i dr Genomics 3, 59-66, 1988; Tawaragi Y., i dr Biochem. Biophys. Res. Commun.150, 89-96, 1988; Strausberg R.L., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:16899-16903, 2002; WO2004/063709; EP1439393 (Patentni zahtev 7); WO2004/044178 (Primer 4); WO2004/031238; WO2003/042661 (Patentni zahtev 12); WO2002/78524 (Primer 2); WO2002/86443 (Patentni zahtev 27; Strana 427); WO2002/60317 (Patentni zahtev 2); Accession: P40199; Q14920; EMBL; M29541; AAA59915,1.
(19) MDP (DPEP1)
Nukleotid
[0141] Banka gena pristupni broj BC017023
Banka gena verzija broj BC017023,1 GI:16877538
Banka gena datum ažuriranja podatka: 6. mart 2012.13:00
Polipeptid
[0142] Banka gena pristupni broj AAH17023
Banka gena verzija broj AAH17023,1 GI:16877539
Banka gena datum ažuriranja podatka: 6. mart 2012.13:00
Upućivanje na literaturu
[0143] Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26):16899-16903 (2002)); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2002/64798 (Patentni zahtev 33; Strana 85- 87); JP05003790 (Slika 6-8); WO99/46284 (Slika 9); MIM:179780.
(20) IL20R-alfa (IL20Ra, ZCYTOR7)
Nukleotid
[0144] Banka gena pristupni broj AF184971
Banka gena verzija broj AF184971,1 GI:6013324
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 2010.22:00
Polipeptid
[0145] Banka gena pristupni broj AAF01320
Banka gena verzija broj AAF01320,1 GI:6013325
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 2010.22:00
Upućivanje na literaturu
[0146] Clark H.F., i dr Genome Res. 13, 2265-2270, 2003; Mungall A.J., i dr Nature 425, 805-811, 2003; Blumberg H., i dr Cell 104, 9-19, 2001; Dumoutier L., i dr J. Immunol.167, 3545-3549,2001; Parrish-Novak J., i dr J. Biol. Chem. 277, 47517-47523, 2002; Pletnev S., i dr (2003) 10 Biochemistry 42:12617-12624; Sheikh F., i dr (2004) J. Immunol. 172, 2006-2010; EP1394274 (Primer 11); US2004/005320 (Primer 5); WO2003/029262 (Strana 74-75); WO2003/002717 (Patentni zahtev 2; Strana 63); WO2002/22153 (Strana 45-47); US2002/042366 (Strana 20-21); WO2001/46261 (Strana 57-59); WO2001/46232 (Strana 63-65); WO98/37193 (Patentni zahtev 1; Strana 55-59); Accession: Q9UHF4; Q6UWA9; Q96SH8; EMBL; AF184971; AAF01320,1.
(21) Brevican (BCAN, BEHAB)
Nukleotid
[0147] Banka gena pristupni broj AF229053
Banka gena verzija broj AF229053,1 GI:10798902
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.00:58
2
Polipeptid
[0148] Banka gena pristupni broj AAG23135
Banka gena verzija broj AAG23135,1 GI:10798903
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.00:58
Upućivanje na literaturu
[0149] Gary S.C., i dr Gene 256, 139-147, 2000; Clark H.F., i dr Genome Res.13, 2265-2270, 2003; Strausberg R.L., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16899-16903, 2002; US2003/186372 (Patentni zahtev 11); US2003/186373 (Patentni zahtev 11); US2003/119131 (Patentni zahtev 1; Slika 52); US2003/119122 (Patentni zahtev 1; 20 Slika 52); US2003/119126 (Patentni zahtev 1); US2003/119121 (Patentni zahtev 1; Slika 52); US2003/119129 (Patentni zahtev 1); US2003/119130 (Patentni zahtev 1); US2003/119128 (Patentni zahtev 1; Slika 52); US2003/119125 (Patentni zahtev 1); WO2003/016475 (Patentni zahtev 1); WO2002/02634 (Patentni zahtev 1)
(22) EphB2R (DRT, ERK, Hek5, EPHT3, Tyro5)
Nukleotid
[0150] Banka gena pristupni broj NM_004442
Banka gena verzija broj NM_004442,6 GI:111118979
Banka gena datum ažuriranja podatka: 8. septembar 2012.16:43
Polipeptid
[0151] Banka gena pristupni broj NP_004433
Banka gena verzija broj NP_004433,2 GI:21396504
Banka gena datum ažuriranja podatka: 8. septembar 2012.16:43
Upućivanje na literaturu
[0152] Chan,J. i Watt, V.M., Oncogene 6 (6), 1057-1061 (1991) Oncogene 10 (5):897-905 (1995), Annu. Rev. Neurosci. 21:309-345 (1998), Int. Rev. Cytol. 196:177-244 (2000)); WO2003042661 (Patentni zahtev 12); WO200053216 (Patentni zahtev 1; Strana 41); WO2004065576 (Patentni zahtev 1); WO2004020583 (Patentni zahtev 9); WO2003004529 (Strana 128-132); WO200053216 (Patentni zahtev 1; Strana 42); MIM:600997. (23) ASLG659 (B7h)
Nukleotid
[0153] Banka gena pristupni broj AX092328
Banka gena verzija broj AX092328,1 GI:13444478
Banka gena datum ažuriranja podatka: 26. januar 2011.07:37
Upućivanje na literaturu
[0154] US2004/0101899 (Patentni zahtev 2); WO2003104399 (Patentni zahtev 11); WO2004000221 (Slika 3); US2003/165504 (Patentni zahtev 1); US2003/124140 (Primer 2); US2003/065143 (Slika 60); WO2002/102235 (Patentni zahtev 13; Strana 299); US2003/091580 (Primer 2); WO2002/10187 (Patentni zahtev 6; Slika 10); WO2001/94641 (Patentni zahtev 12; Slika 7b); WO2002/02624 (Patentni zahtev 13; Slika 1A-1B); US2002/034749 (Patentni zahtev 54; Strana 45-46); WO2002/06317 (Primer 2; Strana 320-321, Patentni zahtev 34; Strana 321-322); WO2002/71928 (Strana 468-469); WO2002/02587 (Primer 1; Slika 1); WO2001/40269 (Primer 3; strane 190-192); WO2000/36107 (Primer 2; Strana 205-207); WO2004/053079 (Patentni zahtev 12); WO2003/004989 (Patentni zahtev 1); WO2002/71928 (Strana 233-234, 452-453); WO 01/16318.
(24) PSCA (Antigen prethodnik matične ćelija prostate)
2
Nukleotid
[0155] Banka gena pristupni broj AJ297436
Banka gena verzija broj AJ297436,1 GI:9367211
Banka gena datum ažuriranja podatka: 1. februar 2011.11:25
Polipeptid
[0156] Banka gena pristupni broj CAB97347
Banka gena verzija broj CAB97347,1 GI:9367212
Banka gena datum ažuriranja podatka: 1. februar 2011.11:25
Upućivanje na literaturu
[0157] Reiter R.E., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.95, 1735-1740, 1998;
Gu Z., i dr Oncogene 19,
1288-1296, 2000; Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000) 275(3):783-788; WO2004/022709; EP1394274 (Primer 11); US2004/018553 (Patentni zahtev 17); WO2003/008537 (Patentni zahtev 1); WO2002/81646 (Patentni zahtev 1; Strana 164); WO2003/003906 (Patentni zahtev 10; Strana 288); WO2001/40309 (Primer 1; Slika 17); US2001/055751 (Primer 1; Slika 1b); WO2000/32752 (Patentni zahtev 18; Slika 1); WO98/51805 (Patentni zahtev 17; Strana 97); WO98/51824 (Patentni zahtev 10; Strana 94); WO98/40403 (Patentni zahtev 2; Slika 1 B); Accession: 043653; EMBL; AF043498; AAC39607,1
(25) GEDA
Nukleotid
[0158] Banka gena pristupni broj AY260763
Banka gena verzija broj AY260763,1 GI:30102448
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.02:24
Polipeptid
[0159] Banka gena pristupni broj AAP14954
Banka gena verzija broj AAP14954,1 GI:30102449
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.02:24
Upućivanje na literaturu
[0160] AP14954 lipoma HMGIC proteina nalik fuziji /pid=AAP14954,1 - Homo sapiens (human); WO2003/054152 (Patentni zahtev 20); WO2003/000842 (Patentni zahtev 1); WO2003/023013 (Primer 3, Patentni zahtev 20); US2003/194704 (Patentni zahtev 45); GI:30102449;
(26) BAFF-R (faktor receptor za aktiviranje B ćelija, BLyS receptor 3, BR3)
Nukleotid
[0161] Banka gena pristupni broj AF116456
Banka gena verzija broj AF116456,1 GI:4585274
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 2010.21:44
Polipeptid
[0162] Banka gena pristupni broj AAD25356
Banka gena verzija broj AAD25356,1 GI:4585275
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 2010.21:44
Upućivanje na literaturu
[0163] BAFF receptor /pid=NP_443177,1 - Homo sapiens: Thompson, J.S., i dr Science 293 (5537), 2108-2111 (2001); WO2004/058309; WO2004/011611; WO2003/045422 (Primer; Strana 32-33); WO2003/014294 (Patentni zahtev 35; Slika 6B); WO2003/035846 (Patentni zahtev 70; Strana 615-616); WO2002/94852 (Col 136-137); WO2002/38766 25 (Patentni zahtev 3; Strana 133); WO2002/24909 (Primer 3; Slika 3); MIM:606269; NP_443177,1; NM_052945_1; AF132600
(27) CD22 (B-ćelijski receptor CD22-B izoform, BL-CAM, Lyb-8, Lyb8, SIGLEC-2, FLJ22814) Nukleotid
[0164] Banka gena pristupni broj AK026467
Banka gena verzija broj AK026467,1 GI:10439337
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. septembar 2006.23:24
Polipeptid
[0165] Banka gena pristupni broj BAB15489
Banka gena verzija broj BAB15489,1 GI:10439338
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. septembar 2006.23:24
Upućivanje na literaturu
[0166] Wilson i dr (1991) J. Exp. Med. 173:137-146; 30 WO2003/072036 (Patentni zahtev 1; Slika 1); IM:107266; NP_001762,1; NM_001771_1.
(27a) CD22 (CD22 molekul)
Nukleotid
[0167] Banka gena pristupni broj X52785
Banka gena verzija broj X52785,1 GI:29778
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.10:09
Polipeptid
[0168] Banka gena pristupni broj CAA36988
Banka gena verzija broj CAA36988,1 GI:29779
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.10:09
Upućivanje na literaturu
[0169] Stamenkovic I. i dr., Nature 345 (6270), 74-77 (1990)
Druge informacije
[0170] Zvanični simbol: CD22
Ostali alijasi: SIGLEC-2, SIGLEC2
Ostale oznake: B-ćelijski receptor CD22; molekul B-limfocit ćelijske adhezije; BL-CAM; CD22 antigen; T-ćelijski površinski antigen Leu-14; lectin 2 nalik Ig za vezivanje sijalinske kiseline; sialinska kiselina-vezujući lectin 2 nalik Ig
ANTITELA
[0171] G5/44 (Inotuzumab): DiJoseph JF.,i dr Cancer Immunol Immunother.2005 Jan;54(1):11-24.
[0172] Epratuzumab- Goldenberg DM., i dr Expert Rev Anticancer Ther.6(10): 1341-53, 2006.
(28) CD79a (CD79A, CD79alfa), alfa povezana sa imunoglobulinom, protein specifičan za B ćelije koji
1
kovalentno interakuje sa Ig beta (CD79B) i obrazuje kompleks na površini sa Ig M molekula, prenose signal koji je uključen u diferencijaciju B-ćelija), pl: 4.84, MW: 25028 TM: 2 [P] Gene Chromosome: 19q13.2). Nukleotid
[0173] Banka gena pristupni broj NM_001783
Banka gena verzija broj NM_001783,3 GI:90193587
Banka gena datum ažuriranja podatka: 26. jun 2012.13:48
Polipeptid
[0174] Banka gena pristupni broj NP_001774
Banka gena verzija broj NP_001774,1 GI:4502685
Banka gena datum ažuriranja podatka: 26. jun 2012.13:48
Upućivanje na literaturu
[0175] WO2003/088808, US2003/0228319; WO2003/062401 (patentni zahtev 9); US2002/150573 (patentni zahtev 4, strane 13-14); WO99/58658 (patentni zahtev 13, Slika 16); WO92/07574 (Slika 1); US5644033; Ha i dr (1992) J. Immunol. 148(5):1526-1531; Müller i dr (1992) Eur. J. Immunol..22:1621-1625; Hashimoto i dr (1994) Imunogenetics 40(4):287-295; Preud’homme i dr (1992) Clin. Exp.5 Immunol.90(1):141-146; Yu i dr (1992) J. Immunol.148(2) 633-637; Sakaguchi i dr (1988)EMBO J.7(11):3457-3464
(29) CXCR5 (Receptor 1 Burkittovog limfoma, G protein-upareni receptor koji se aktivira od strane CXCL 13 hemokine, funkcioniše u migraciji limfocita i humoralnoj odbrani, ima ulogu u HIV-2 infekciji i možda u razvijanju SIDE, limfoma, mijeloma, i leukemije); 372 aa, pl: 8.54 MW: 41959 TM: 7 [P] Gene Chromosome: 11q23.3,
Nukleotid
[0176] Banka gena pristupni broj NM_001716
Banka gena verzija broj NM_001716,4 GI:342307092
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:49
Polipeptid
[0177] Banka gena pristupni broj NP_001707
Banka gena verzija broj NP_001707,1 GI:4502415
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:49
Upućivanje na literaturu
[0178] WO2004/040000; WO2004/015426; US2003/105292 (Primer 2); US6555339 (Primer 2); WO2002/61087 (Slika 1); WO2001/57188 (Patentni zahtev 20, strana 269); WO2001/72830 (strane 12-13); WO2000/22129 (Primer 1, strane 152-153, 15 Primer 2, strane 254-256); WO99/28468 (patentni zahtev 1, strana 38); US5440021 (Primer 2, col 49-52); WO94/28931 (strane 56-58); WO92/17497 (patentni zahtev 7, Slika 5); Dobner i dr (1992) Eur. J. Immunol.22:2795-2799; Barella i dr (1995) Biochem. J.309:773-779 (30) HLA-DOB (Beta podjedinica MHC klasa II molekula (Ia antigen) koji vezuje peptide i daje 20 njih dp CD4+ T limfocita); 273 aa, pl: 6.56, MW: 30820.TM: 1 [P] Gene Chromosome: 6p21.3)
Nukleotid
[0179] Banka gena pristupni broj NM_002120
Banka gena verzija broj NM_002120,3 GI:118402587
Banka gena datum ažuriranja podatka: 8. septembar 2012.16:46
Polipeptid
2
[0180] Banka gena pristupni broj NP_002111
Banka gena verzija broj NP_002111,1 GI:4504403
Banka gena datum ažuriranja podatka: 8. septembar 2012.16:46
Upućivanje na literaturu
[0181] Tonnelle i dr (1985) EMBO J. 4(11):2839-2847; Jonsson i dr (1989) Imunogenetics 29(6):411-413; Beck i dr (1992) J. Mol. Biol.228:433-441; Strausberg i dr (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903; Servenius i dr (1987) J. Biol. Chem. 262:8759-8766; Beck i dr (1996) J. Mol. Biol.25255:1-13; Naruse i dr (2002) Tissue Antigens 59:512-519; WO99/58658 (patentni zahtev 13, Slika 15); US6153408 (Col 35-38); US5976551 (col 168-170); US6011146 (col 145-146); Kasahara i dr (1989) Imunogenetics 30(1):66-68; Larhammar i dr (1985) J. Biol. Chem.260(26):14111-14119
(31) P2X5 (Purinergički receptor P2X usmereno vezan za jonski kanal 5, jonski kanal usmere od strane ekstracelularng ATP, možda uključen u sinaptičku tranmisiju I neurogenezi, poremećaj koji možda doprinosi idiopatskoj nestabilnosti detrusora); 422 aa), pl: 7.63, MW: 47206 TM: 1 [P] Gene Chromosome: 17p13.3). Nukleotid
[0182] Banka gena pristupni broj NM_002561
Banka gena verzija broj NM_002561,3 GI:325197202
Banka gena datum ažuriranja podatka: 27. jun 2012.00:41
Polipeptid
[0183] Banka gena pristupni broj NP_002552
Banka gena verzija broj NP_002552,2 GI:28416933
Banka gena datum ažuriranja podatka: 27. jun 2012.00:41
Upućivanje na literaturu
[0184] Le i dr (1997) FEBS Lett.418(1-2):195-199; WO2004/047749; WO2003/072035 (patentni zahtev 10); Touchman i dr (2000) Genome Res. 10:165-173; WO2002/22660 (patentni zahtev 20); WO2003/093444 (patentni zahtev 1); WO2003/087768 (patentni zahtev 1); WO2003/029277 (strana 82)
(32) CD72 (Antigen CD72 diferencijacije B-ćelija, Lyb-2); 359 aa, pl: 8.66, MW: 40225, TM: 15 [P] Gene Chromosome: 9p13.3).
Nukleotid
[0185] Banka gena pristupni broj NM_001782
Banka gena verzija broj NM_001782,2 GI:194018444
Banka gena datum ažuriranja podatka: 26. jun 2012.13:43
Polipeptid
[0186] Banka gena pristupni broj NP_001773
Banka gena verzija broj NP_001773,1 GI:4502683
Banka gena datum ažuriranja podatka: 26. jun 2012.13:43
Upućivanje na literaturu
[0187] WO2004042346 (patentni zahtev 65); WO2003/026493 (strane 51-52, 57-58); WO2000/75655 (strane 105-106); Von Hoegen i dr (1990) J. Immunol.144(12):4870-4877; Strausberg i dr (2002) Proc. Natl. Acad. Sci USA 99:16899-16903.
(33) L Y64 (Limfocit antigen 64 (RP105), tip I membranski protein familije bogate ponavljanjem leucina (LRR), reguliše aktivaciju i apoptozu B-ćelija, gubitak funkcionalnosti dovodi se u vezu sa povećanom aktivnosti bolesti kod pacijenata sa sistemskom lupus eritematozom); 661 aa, pI: 6.20, MW: 74147 TM: 1 [P] Gene Chromosome: 5q12).
Nukleotid
[0188] Banka gena pristupni broj NM_005582
Banka gena verzija broj NM_005582,2 GI:167555126
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. septembar 2012.13:50
Polipeptid
[0189] Banka gena pristupni broj NP_005573
Banka gena verzija broj NP_005573,2 GI:167555127
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. septembar 2012.13:50
Upućivanje na literaturu
[0190] US2002/193567; WO97/07198 (patentni zahtev 11, strane 39-42); Miura i dr (1996) 15 Genomics 38(3):299-304; Miura i dr (1998) Blood 92:2815-2822; WO2003/083047; WO97/44452 (patentni zahtev 8, strane 57-61); WO2000/12130 (strane 24-26).
(34) FcRH1 (Protein 1 nalik Fc receptoru, pretpostavljeni receptor za imunoglobulin Fc domena koji sadrži C2 tipe nalik Ig i ITAM domene, možda ima ulogu u B-limfocit 20 diferencijaciji); 429 aa, pI: 5.28, MW: 469 TM: 1 [P] Gene Chromosome: 1q21-1q22)
Nukleotid
[0191] Banka gena pristupni broj NM_052938
Banka gena verzija broj NM_052938,4 GI:226958543
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. septembar 2012.13:43
Polipeptid
[0192] Banka gena pristupni broj NP_443170
Banka gena verzija broj NP_443170,1 GI:16418419
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. septembar 2012.13:43
Upućivanje na literaturu
[0193] WO2003/077836; WO2001/38490 (patentni zahtev 6, Slika 18E-1-18-E-2); Davis i dr (2001) Proc. Natl. Acad. Sci USA 98(17):9772-9777; WO2003/089624 (patentni zahtev 8); EP1347046 (patentni zahtev 1); WO2003/089624 (patentni zahtev 7).
(35) IRTA2 (receptor Imunoglobulinske superfamilije u vezi sa translokacijom 2, pretpostavljeni imunoreceptor sa mogućom ulogom u B-ćelijskom razvoju I limfomagnezi; deregulacija gena translokacijom dešava se u nekim B-ćelijskim malignitetima); 977 aa, pI: 6.88, MW: 106468, TM: 1 [P] Gene Chromosome: 1q21)
Nukleotid
[0194] Banka gena pristupni broj AF343662
Banka gena verzija broj AF343662,1 GI:13591709
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.01:16
Polupeptid
[0195] Banka gena pristupni broj AAK31325
Banka gena verzija broj AAK31325,1 GI:13591710
4
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.01:16
Upućivanje na literaturu
[0196] AF343663, AF343664, AF343665, AF369794, AF397453, AK090423, AK090475, AL834187, AY358085; Mouse:AK089756, AY158090, AY506558; NP_112571,1; WO2003/024392 (patentni zahtev 2, Slika 97); Nakayama i dr (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun. 277(1):124-127; WO2003/077836; WO2001/38490 (patentni zahtev 3, Slika 18B-1-18B-2).
(36) TENB2 (TMEFF2, tomoregulin, TPEF, HPP1, TR, pretpostavljeni transmembranski proteoglikan, povezan sa EGF/heregulin familijom faktora rasta i follistatinom); 374 aa)
Nukleotid
[0197] Banka gena pristupni broj AF179274
Banka gena verzija broj AF179274,2 GI:12280939
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.01:05
Polipeptid
[0198] Banka gena pristupni broj AAD55776
Banka gena verzija broj AAD55776,2 GI:12280940
Banka gena datum ažuriranja podatka: 11. mart 2010.01:05
Upućivanje na literaturu
[0199] NCBI Accession: AAD55776, AAF91397, AAG49451, NCBI RefSeq: NP_057276; NCBI Gene: 23671; OMIM: 605734; SwissProt Q9UIK5; AY358907, CAF85723, CQ782436; WO2004/074320; JP2004113151; WO2003/042661; WO2003/009814; EP1295944 (strane 69-70); WO2002/30268 (strana 329); WO2001/90304; US2004/249130; US2004/022727; WO2004/063355; US2004/197325; US2003/232350; 5 US2004/005563; US2003/124579; Horie i dr (2000) Genomics 67:146-152; Uchida i dr (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 266:593-602; Liang i dr (2000) Cancer Res. 60:4907-12; Glynne-Jones i dr (2001) Int J Cancer. Oct 15; 94(2):178-84.
(37) PSMA - FOLH1 (Hidrolaza folata (membranski antigen specifičan za prostatu) 1)
Nukleotid
[0200] Banka gena pristupni broj M99487
Banka gena verzija broj M99487,1 GI:190663
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:48
Polipeptid
[0201] Banka gena pristupni broj AAA60209
Banka gena verzija broj AAA60209,1 GI:190664
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:48
Upućivanje na literaturu
[0202] Israeli R.S., i dr Cancer Res.53 (2), 227-230 (1993)
Druga informacija
[0203] Zvaničan simbol: FOLH1
Ostali alijasi: GIG27, FGCP, FOLH, GCP2, GCPII, NAALAD1, NAALAdase, PSM, PSMA, mGCP Ostale oznake: N-acetilovana afla-povezana kisela dipeptidaza 1; N-acetilovana-alfa-povezana kisela dipeptidaza I; NAALADase I; gen za pospešivanje ćelijskog rasta 27 protein; folilpoli-gama-glutamat carboksipeptidaza; glutamat carboksilaza II; glutamat carboksipeptidaza 2; glutamat carboksipeptidaza II; membranska glutamat carboksipeptidaza; membranska antigen varijanta F specifična za prostatu; pteroilpoligamma-glutamat carboksipeptidaza.
ANTITELA
[0204] US 7,666,425:
Antitela proizvedena od strane hibridoma imaju sledeće ATCC reference: ATCC pristupni broj HB-12101, ATCC pristupni broj HB-12109, ATCC pristupni broj HB-12127 i ATCC pristupni broj HB-12126.
[0205] Proscan: monoklonsko antitelo odabrano iz grupe koja se sastoji od 8H12, 3E11, 17G1, 29B4, 30C1 i 20F2 (US 7811564; Moffett S., i dr Hybridoma (Larchmt) decembar 2007; 26 (6): 363-72).
[0206] Citogen: monoklonska antitela 7E11-C5 (ATCC pristupni broj HB 10494 i 9H10-A4 (ATCC pristupni broj HB 11430) - US 5,763,202
[0207] GlycoMimetics: NUH2 - ATTC pristupni bojr HB 9762 (US 7,135,301)
[0208] Human Genome Science: HPRAJ70 - ATTC pristupni broj 97131 (US 6,824,993); Aminokiselinska sekvenca kodirana od strane cDNA klona (HPRAJ70) deponirane kao American Type Culture Collection ("ATCC") Depozitni broj 97131
[0209] Medarex: Anti-PSMA antitela kojima nedostaju fukozilni ostaci - US 7,875,278
[0210] Mišja anti-PSMA antitela uključuju 3F5,4G6, 3D7,1,1, 4E10-1,14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1 G3, 3C4, 3C6, 4D4, 1 G9, 5C8B9, 3G6, 4C8B9, i monoklonska antitela. Hibridomi koji luče 3F5,4G6, 3D7,1,1, 4E10-1,14, 3E11, 4D8, 3E6, 3C9, 2C7, 1G3, 3C4, 3C6, 4D4, 1G9, 5C8B9, 3G6 or 4C8B9 javno su deponovani i opisani u US Pat. No. 6,159,508. Relevantni hibridomi javno su deponovani i opisani u US Pat. No.
6,107,090. Nadalje, humanizovana anti-PSMA antitela, uključujući humanizovanu verziju J591, opisana su detaljno u PCT publikaciji WO 02/098897.
[0211] Druga mišja anti-humana PSMA antitela opisani su u struci, kao što su mAb 107-1A4 (Wang, S. i dr (2001) Int J Cancer 92:., 871-876) i mAb 2C9 (Kato, K. i dr. (2003) Int. J. Urol.10:439-444).
[0212] Primeri humanih anti-PSMA monoklonskih antitela uključuju 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 i 1 C3 antitela izolovana i strukturno okarakterisana kao što je prvobitno opisano u PCT publikacijama WO 01/09192 i WO 03/064606 I u U.S. Provisional Application Ser. No. 60/654,125, pod nazivom "Human Monoclonal ANTITELA to Prostate Specific Membrane Antigen (PSMA)", koja je podneta 18. februara 2005. V.sub.H aminokiselinske sekvence 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 i 1 C3 prikazane su u SEQ ID NO: 1-9, respektivno. V.sub.L aminokiselinske sekvence 4A3, 7F12, 8C12, 8A11, 16F9, 2A10, 2C6, 2F5 i 1C3 prikazane su u SEQ ID NO: 10-18, respektivno.
[0213] Druga humana anti-PSMA antitela uključuju antitela obelodanjena u PCT publikaciji WO 03/034903 i US Application No.2004/0033229.
[0214] NW Biotherapeutics: Hibridomska ćelijska linija se bira iz grupe koju čine 3F5,4G6 koji ima ATCC pristupni broj HB12060, 3D7-1.I. koji ima ATCC pristupni broj HB12309, 4E10-1,14 koji ima ATCC pristupni broj HB12310, 3E11 (ATCC HB12488), 4D8 (ATCC HB12487), 3E6 (ATCC HB12486), 3C9 (ATCC HB12484), 2C7 (ATCC HB12490), 1G3 (ATCC HB12489), 3C4 (ATCC HB12494), 3C6 (ATCC HB12491), 4D4 (ATCC HB12493), 1G9 (ATCC HB12495), 5C8B9 (ATCC HB12492) i 3G6 (ATCC HB12485) - pogledati US 6,150,508
[0215] PSMA Development Company/Progenics/Cytogen - Seattle Genetics: mAb 3,9, proizveden od strane hibridoma deponovan pod ATCC pristupnim brojem PTA-3258 ili mAb 10,3, proizveden od strane hibridoma deponovan pod ATCC pristupnim brojem PTA-3347 – US 7,850,971
PSMA Development Company - Sastavi PSMA antitela (US 20080286284, Tabela 1)
[0216] Ova prijava izdvojena je od u US patentne prijave No. 10/395,894, podnesene 21. marta 2003 (SAD 7,850,971)
[0217] Univerzitetska bolnica u Freiburgu, Nemačka - mAbs 3/A12, 3/E7, i 3/F11 (Wolf P., i dr Prostate.2010 Apr 1;70(5):562-9).
(38) (38) SST (Somatostatinski receptor; obratiti pažnju da postoji pet podtipova) (38.1) SSTR2 (Somatostatinski receptor 2)
Nukleotid
[0218] Banka gena pristupni broj NM_001050
Banka gena verzija broj NMR_001050,2 GI:44890054
Banka gena datum ažuriranja podatka: 19. avgust 2012.13:37
Polipeptid
[0219] Banka gena pristupni broj NP_001041
Banka gena verzija broj NP_001041,1 GI:4557859
Banka gena datum ažuriranja podatka: 19. avgust 2012.13:37
Upućivanje na literaturu
[0220] Yamada Y., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.89 (1), 251-255 (1992); Susini C., i dr Ann Oncol.2006 Dec;17(12):1733-42
Druga informacija
[0221] Zvanični simbol: SSTR2
Ostale oznake: SRIF-1; SS2R; somatostatinski receptor tipa 2
(38,2) SSTR5 (Somatostatinski receptor 5)
Nukleotid
[0222] Banka gena pristupni broj D16827
Banka gena verzija broj D16827,1 GI:487683
Banka gena datum ažuriranja podatka: 1. avgust 2006.12:45
Polipeptid
[0223] Banka gena pristupni broj BAA04107
Banka gena verzija broj BAA04107,1 GI:487684
Banka gena datum ažuriranja podatka: 1. avgust 2006.12:45
Upućivanje na literaturu
[0224] Yamada,Y., i dr Biochem. Biophys. Res. Commun.195 (2), 844-852 (1993)
Druga informacija
[0225] Zvanični simbol: SSTR5
Ostali alijasi: SS-5-R
Ostale oznake: Somatostatinski receptor podtipa 5; somatostatinski receptor tipa 5
(38,3) SSTR1
(38,4)SSTR3
(38,5) SSTR4
AvB6 - obe podjedinice (39+40)
(39) ITGAV (Integrin, alpha V;
Nukleotid
[0226] Banka gena pristupni broj M14648 J02826 M18365
Banka gena verzija broj M14648,1 GI:340306
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:56
Polipeptid
[0227] Banka gena pristupni broj AAA36808
Banka gena verzija broj AAA36808,1 GI:340307
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:56
Upućivanje na literaturu
[0228] Suzuki S., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.83 (22), 8614-8618 (1986)
Druga informacija
[0229] Zvanični simbol: ITGAV
Ostali alijasi CD51, MSK8, VNRA, VTNR
Ostale oznake: antigen identifikovan od strane monoclonskog antitela L230; integrin alfa-V; integrin alfaVbeta3; integrin, alfa V (vitronectinski receptor, alfa polipeptid, antigen CD51); vitronectinski receptor podjedinice alfa
(40) ITGB6 (Integrin, beta 6)
Nukleotid
[0230] Banka gena pristupni broj NM_000888
Banka gena verzija broj NM_000888,3 GI:9966771
Banka gena datum ažuriranja podatka: 27. jun 2012.00:46
Polipeptid
[0231] Banka gena pristupni broj NP_000879
Banka gena verzija broj NP_000879,2 GI:9625002
Banka gena datum ažuriranja podatka: 27. jun 2012.00:46
Upućivanje na literaturu
[0232] Sheppard D.J., i dr Biol. Chem.265 (20), 11502-11507 (1990)
Druge informacije
[0233] Zvanični simbol: ITGB6
Ostale oznake: integrin beta-6
ANTITELA
[0234] Biogen: US 7,943,742 – hibridoma klonovi 6,3G9 i 6,8G6 deponovani su kod ATCC, pristupni brojevi ATCC PTA-3649 i -3645, respektivno
[0235] Biogen: US7,465,449 – u nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži iste polipeptidne sekvence teškog i lakog lanca kao antitelo proizvedeno od strane hibridoma 6,1A8, 6,3G9, 6,8G6, 6,2B1, 6,2B10, 6,2A1, 6,2E5, 7,1G10, 7,7G5, or 7,1C5.
[0236] Centocor (J&J): US7,550,142; US7,163,681
Na primer u US 7,550,142 – antitelo ima varijabilne regije humanog teškog lanca i humanog lakog lanca koje sadrže aminokiselinske sekvence prokazane u SEQ ID NO:7 i SEQ ID NO:8.
[0237] Seattle Genetics: 15H3 (Ryan MC., i dr Cancer Res April 15, 2012; 72(8 Supplement): 4630) (41) CEACAMS (Karcinoembrionski antigen-povezan molekul ćelijske adhezije 5)
Nukleotid
[0238] Banka gena pristupni broj M17303
Banka gena verzija broj M17303,1 GI:178676
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010, 08:47
Polipeptid
[0239] anka gena pristupni broj AAB59513
Banka gena verzija broj AAB59513,1 GI:178677
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010, 08:47
Upućivanje na literaturu
[0240] Beauchemin N., i dr Mol. Cell. Biol.7 (9), 3221-3230 (1987)
Druge informacije
[0241] vanični simbol: CEACAM5
Ostali alijasi: CD66e, CEA
Ostale oznake: meconium antigen 100
[0242]
AstraZeneca-Medlmmune:US 20100330103; US20080057063; US20020142359
• na primer, antitelo koje ima komplementarno determinišuće regije (CDR) sa narednim sekvencama: teški lanac; CDR1 - DNYMH, CDR2 - WIDPENGDTE YAPKFRG, CDR3 - LIYAGYLAMD Y; i laki lanac CDR1 SASSSVTYMH, CDR2 - STSNLAS, CDR3 - QQRSTYPLT.
• Hibridoma 806,077 deponovan kao European Collection of Cell Cultures (ECACC) depozitni broj 96022936.
Research Corporation Technologies, Inc.:US5,047,507 Bayer Corporation: US6,013,772 BioAlliance: US7,982,017; US7,674,605
• US 7,674,605
• antitelo koje obuhvata sekvencu varijabilne regije teškog lanca od aminokiselinske sekvence od SEQ ID NO: 1, i sekvencu varijabilne regije teškog lanca od aminokiselinske sekvence od SEQ ID NO: 2.
• antitelo koje obuhvata sekvencu varijabilne regije teškog lanca od aminokiselinske sekvence od SEQ ID NO: 5, i sekvencu varijabilne regije teškog lanca od aminokiselinske sekvence od SEQ ID NO: 6.
Celltech Therapeutics Limited: US5,877,293
The Dow Chemical Company: US5,472,693; US6,417,337; US6,333,405
US5,472,693 - Na primer, ATCC No. CRL-11215
US6,417,337 - Na primer, ATCC CRL-12208
US6,333,405 - Na primer, ATCC CRL-12208
Immunomedics, Inc: US7,534,431; US7,230,084; US7,300,644; US6,730,300;
US20110189085
• antitelo koje ima CDR-ove varijabilne regije lakog lanca sadrži: CDR1 sadrži KASQDVGTSVA (SEQ ID NO: 20); CDR2 sadrži WTSTRHT (SEQ ID NO: 21); i CDR3 sadrži QQYSLYRS (SEQ ID NO: 22); i CDR-i varijabilne regije teškog lanca navedenog anti-CEA antitela sadrže:
• CDR1 sadrži TYWMS (SEQ ID NO: 23); CDR2 sadrži EIHPDSSTINYAPSLKD (SEQ ID NO: 24); i CDR3 sadrži LYFGFPWFAY (SEQ ID NO: 25).
US20100221175; US20090092598; US20070202044; US20110064653; US20090185974; US20080069775.
(42) MET (met proto-onkogen; hepatocit receptor faktora rasta)
Nukleotid
[0243] Banka gena pristupni broj M35073
Banka gena verzija broj M35073,1 GI:187553
Banka gena datum ažuriranja podatka: 6. mart 2012.11:12
Polipeptid
[0244] Banka gena pristupni broj AAA59589
Banka gena verzija broj AAA59589,1 GI:553531
Banka gena datum ažuriranja podatka: 6. mart 2012.11:12
Upućivanje na literaturu
[0245] Dean M., i dr Nature 318 (6044), 385-388 (1985)
Ostali podaci
[0246] Zvanični simbol: MET
Ostale pseudonime: AUTS9, HGFR, RCCP2, c-Met
Ostale oznake: HGF receptor; HGF/SF receptor; SF receptor; receptor faktora rasta hepatocita; sa protoonkogenom tirozin-kinazom; proto-onkogeni c-Met; receptor faktora rasejanja; tirozin-protein kinaza Met ANTITELA
[0247]
Abgenix/Pfizer: US20100040629
na primer, antitelo proizvedeno od strane hibridoma 13,3,2 ima American Type Culture Collection (ATCC) pristupni broj PTA-5026; antitelo proizvedeno od strane hibridoma 9,1,2 ima ATCC pristupni broj PTA-5027; antitelo proizvedeno od strane hibridoma 8,70,2 ima ATCC pristupni broj PTA-5028; ili antitelo proizvedeno od strane hibridoma 6,90,3 ima ATCC pristupni broj PTA-5029.
Amgen/Pfizer: US20050054019
na primer, antitelo koje sadrži težak lanac ima aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NO: 2 gde je X2 glutamat, a X4 je serin, i lak lanac ima aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NO: 4 gde je X8 alanin, bez signalnih sekvenci; antitelo koje sadrži lanac ima aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NO: 6 i lak lanac ima aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NO: 8, bez signalnih sekvenci; antitelo koje sadrži težak lanac ima aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NO: 10 i lak lanac ima aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NO: 12, bez signalnih sekvenci; ili antitelo koje sadrži težak lanac ima aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NO: 14 i lak lanac ima aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NO: 16, bez signalnih sekvenci.
Agouron Pharmaceuticals (Now Pfizer): US20060035907
Eli Lilly: US20100129369
Genentech: US5,686,292; US20100028337; US20100016241; US20070129301; US20070098707;
US20070092520, US20060270594; US20060134104; US20060035278; US20050233960;
US20050037431
4
US 5,686,292 – na primer, ATCC HB-11894 i ATCC HB-11895
US 20100016241 – na primer, ATCC HB-11894 (hibridom 1A3,3,13) ili HB-11895 (hybridom 5D5,11,6) National Defense Medical Center, Taiwan: Lu RM., i dr Biomaterials.2011 Apr;32(12):3265-74.
Novartis: US20090175860
- na primer, antitelo koje sadrži sekvence od CDR1, CDR2 i CDR3 teškog lanca 4687, gde su sekvence od CDR1, CDR2, i CDR3 teškog lanca 4687 ostaci 26-35, 50-65, i 98-102, respektivno, od SEQ ID NO: 58; i sekvence od CDR1, CDR2, i CDR3 lakog lanca 5097, gde su sekvence CDR1, CDR2, i CDR3 lakog lanca 5097 ostaci 24-39,55-61, i 94-100 SEQ ID NO: 37.
Pharmacia Corporation: US20040166544
Pierre Fabre: US20110239316, US20110097262, US20100115639
Sumsung: US 20110129481 - na primer monoklonsko antitelo proizvedeno od hibridoma ćelije koje ima pristupni broj KCLRF-BP-00219 ili pristupni broj KCLRF-BP-00223.
Samsung: US 20110104176 - na primer antitelo proizvedeno od hibridoma ćelije koje ima pristupni broj: KCLRF-BP-00220.
University of Turin Medical School: DN-30 Pacchiana G., i dr J Biol Chem.2010 Nov 12;285(46):36149-57
Van Andel Research Institute: Jiao Y., i dr Mol Biotechnol.2005 Sep;31(1):41-54.
(43) MUC1 ( Mucin 1, povezan sa ćelijskom površinom)
Nukleotid
[0248] Banka gena pristupni broj J05581
Banka gena verzija broj J05581,1 GI:188869
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:48
Polipeptide
[0249] Banka gena pristupni broj AAA59876
Banka gena verzija broj AAA59876,1 GI:188870
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:48
Upućivanje na literaturu
[0250] Gendler S.J., i dr J. Biol. Chem.265 (25), 15286-15293 (1990)
Ostali podaci
[0251] Zvanični simbol: MUC1
Ostali alijasi: RP11-263K19,2, CD227, EMA, H23AG, KL-6, MAM6, MUC-1, MUC-1/SEC, MUC-1/X, MUC1/ZD, PEM, PEMT, PUM
Ostale oznake: DF3 antigen; H23 antigen; antigen DF3 u vezi karcinoma dojke; mucin u vezi sa karcinomom; episialin; krebs von den Lungen-6; mucin 1, transmembranski; mucin-1; reaktivan na kikiriki urinarni mucin; pollimorfni epitelni mucin; epitelni mucin povezan sa tumorom; epitelni membranski antigen povezan sa tumorom; mucin povezan sa tumorom
ANTITELA
[0252]
AltaRex- Quest Pharma Tech: US 6,716,966 – na primer Alt-1 antitelo proizvedeno od hibridoma ATCC No PTA-975.
AltaRex- Quest Pharma Tech: US7,147,850
CRT: 5E5 - Sorensen AL., i dr Glycobiologyvol. 16 no. 2 pp.96-107, 2006; HMFG2 - Burchell J., i dr Cancer Res., 47, 5476-5482 (1987)
Glycotope GT-MAB: GT-MAB 2,5-GEX (vebsajt: http://www.glycotope.com/pipeline/pankomab-gex) Imunogen: US7,202,346
- na primer, antitelo MJ-170: hibridoma ćelijske linije MJ-170 ATCC pristupni broj PTA-5286;
monoklonsko antitelo MJ-171: hibridoma ćelijska linija MJ-171 ATCC pristupni broj PTA-5287; monoklonsko antitelo MJ-172: hibridoma ćelijska linija MJ-172 ATCC pristupni broj PTA-5288; or monoklonsko antitelo MJ-173: hibridoma ćelijska linija MJ-173 ATCC pristupni broj PTA-5302
Imuno lekovi: US 6,653,104
Ramot Tel Aviv Uni: US7,897,351
Regents Uni. CA: US 7,183,388; US20040005647; US20030077676.
Roche GlycArt: US8,021,856
Russian National Cancer Research Center: Imuteran- Ivanov PK., i dr Biotechnol J.2007 Jul;2(7):863-70 Technische Univ Braunschweig: (IIB6, HT186-B7, HT186-D11, HT186-G2, HT200-3A-C1, HT220-M-D1, HT220-M-G8) - Thie H., i dr PLoS One.2011 Jan 14;6(1):e15921
(44) CA9 (Ugljena anhidraza IX)
Nukleotid
[0253] Banka gena pristupni broj . X66839
Banka gena verzija broj X66839,1 GI:1000701
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.10:15
Polipeptid
[0254] Banka gena pristupni broj CAA47315
Banka gena verzija broj CAA47315,1 GI:1000702
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.10:15
Upućivanje na literaturu
[0255] Pastorek J., i dr Oncogene 9 (10), 2877-2888 (1994)
Ostali podaci
[0256] Zvanični simbol: CA9
Ostali alijasi: CAIX, MN
Ostale oznake: CA-IX; P54/58N; antigen G250 povezan sa RCC; protein G250 povezan sa RCC; ugljena dehidrataza IX; ugnjena dehidrataza 9; ugljena dehidrataza; membranski antigen MN; pMW1; antigen G250 povezan sa karcinomom bubrežnih ćelija
ANTITELA
[0257]
Affibody: Anti-CAIX Affibody molekuli
(http://www.affibody.com/en/Product-Portfolio/Pipeline/)
Bayer: US7,462,696
Bayer/Morphosys: 3ee9 mAb - Petrul HM., i dr Mol Cancer Ther.2012 Feb;11 (2):340-9
Harvard Medical School: Antitela G10, G36, G37, G39, G45, G57, G106, G119, G6, G27, G40 i G125. Xu C., i dr PLoS One.2010 Mar 10;5(3):e9625
Institute of Virology, Slovak Academy of Sciences (Bayer) - US5,955,075
- na primer, M75- ATCC pristupni broj HB 11128 ili MN12 - ATCC pristupni broj HB 11647 Institute of Virology, Slovak Academy of Sciences: US7,816,493
- na primer M75 monoklonsko antitelo koje je izlučeno iz hibridoma VU-M75, koje je deponovano pri American Type Culture Collection pod ATCC brojem HB 11128; ili V/10 monoklonsko antitelo koje je izlučeno iz hibridoma V/10-VU, koje je deponovano pri International Depository Authority of the Belgian Coordinated Collection of Microorganisms (BCCM) at the Laboratorium voor Moleculaire Bioloqie-Plasmidencollectie (LMBP) at the Universeit Gent in Gent, Belgium, pod pristupnim brojem LMBP 6009CB.
Institute of Virology, Slovak Academy of Sciences US20080177046; US20080176310; US20080176258; US20050031623
Novartis: US20090252738
Wilex: US7,691,375 – na primer antitelo proizvedeno od strane hibridoma ćelijske linije DSM ASC 2526. Wilex: US20110123537; Rencarex: Kennett RH., i dr Curr Opin Mol Ther.2003 Feb;5(1):70-5 Xencor: US20090162382
(45) EGFRvIII (Epidarmalni receptor faktora rasta (EGFR), transkriptna varijanta 3,
Nukleotid
[0258] Banka gena pristupni broj NM_201283
Banka gena verzija broj NM_201283,1 GI:41327733
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:47
Polipeptid
[0259] Banka gena pristupni broj NP_958440
Banka gena verzija broj NP_958440,1 GI:41327734
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:47
Upućivanje na literaturu
[0260] Batra SK., i dr Cell Growth Differ 1995;6:1251-1259.
ANTITELA:
[0261]
US7,628,986 i US7,736,644 (Amgen)
Na primer, varijabilna regija teškog lanca aminokiselinske sekvence odabrane iz grupe koja sadrži SEQ ID NO: 142 i varijante i varijabilna regija lakog lanca aminokiselinske sekvence odabrane iz grupe koja sadrži: SEQ ID NO: 144 i varijante.
US20100111979 (Amgen)
N primer, antitelo koje sadrži težak lanac aminokiselinske sekvence koja sadrži:
CDR1 koji sadrži sekvencu odabranu iz grupe koja sadrži aminokiselinske sekvence za CDR1 regiju antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i (SEQ ID NO: 17);
CDR2 koji sadrži sekvencu odabranu iz grupe koja sadrži aminokiselinske sekvence za CDR2 regiju
4
antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i 333 (SEQ ID NO: 17); i CDR3 koji sadrži sekvencu odabranu iz grupe koja sadrži aminokiselinske sekvence za CDR3 regiju antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i 333 (SEQ ID NO: 17).
US20090240038 (Amgen)
Na primer, antitelo koje ima bar jedan težak ili lak lanac oplipeptida koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je bar 90% identična aminokiselinskoj sekvenci odabranoj iz grupe koja sadrži: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, ili bilo koju njihovu kombinaciju.
US20090175887 (Amgen)
Na primer, antitelo koje ima težak lanac aminokiselinske sekvence odabrane iz grupe koja sadrži težak lanac aminokiselinske sekvence antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i 333 (SEQ ID NO: 17).
US20090156790 (Amgen)
Na primer, antitelo koje ima težak lanac polipeptida i lak lanac polipeptida, gde bar ledan od teškog ili lakog lanca polipeptida sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je barem 90% identična aminokiselinskoj sekvenci odabranoj iz grupe koja sadrži: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, ili bilo koju njihovu kombinaciju.
US20090155282, US20050059087 i US20050053608 (Amgen)
Na primer, antitelo koje ima težak lanac aminokiselinske sekvence odabrane iz grupe koja sadrži težak lanac aminokiselinske sekvence antitela 13,1,2 (SEQ ID NO: 138), 131 (SEQ ID NO: 2), 170 (SEQ ID NO: 4), 150 (SEQ ID NO: 5), 095 (SEQ ID NO: 7), 250 (SEQ ID NO: 9), 139 (SEQ ID NO: 10), 211 (SEQ ID NO: 12), 124 (SEQ ID NO: 13), 318 (SEQ ID NO: 15), 342 (SEQ ID NO: 16), i 333 (SEQ ID NO: 17).
MR1-1 (US7,129,332; Duke)
Na primer, varijanta antitela koje ima sekvencu SEQ ID NO,18 sa supstitucijama S98P-T99Y u CDR3 VH, i F92W u CDR3 VL.
L8A4, H10, Y10 (Wikstrand CJ., i dr Cancer Res.1995 Jul 15;55(14):3140-8; Duke) US20090311803 (Harvard University)
[Na primer, SEQ ID NO:9 za težak lanac varijabilne regije antitela, i SEQ ID NO: 3 za težak lanac varijabilne regije antitela.
US20070274991 (EMD72000, takođe poznat kao matuzumab; Harvard University)
Na primer, SEQ ID NOs: 3 i 9 za lak i težak lanac respektivno
US6,129,915 (Schering)
Na primer, SEQ. ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5 i 6.
mAb CH12 - Wang H., i dr FASEB J.2012 Jan;26(1):73-80 (Shanghai Cancer Institute).
RAbDMvlll - Gupta P., i dr BMC Biotechnol.2010 Oct 7;10:72 (Stanford University Medical Center). mAb Ua30 - Ohman L., i dr Tumour Biol.2002 Mar-Apr;23(2):61-9 (Uppsala University).
Han DG., i dr Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao.2010 Jan;30(1):25-9 (Xi’an Jiaotong University).
(46) CD33 (CD33 molekul)
Nukleotid
[0262] Banka gena pristupni broj M_23197
Banka gena verzija broj NM_23197,1 GI:180097
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:47
Polipeptid
[0263] Banka gena pristupni broj AAA51948
Banka gena verzija broj AAA51948,1 GI:188098
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:47
Upućivanje na literaturu
[0264] Simmons D., i dr J. Immunol.141 (8), 2797-2800 (1988)
Ostali podaci
[0265] Zvanični simbol: CD33
Ostali alijasi: SIGLEC-3, SIGLEC3, p67
Ostale oznake: CD33 antigen (gp67); gp67; mijeloidni antigen ćelijske površine CD33; sijalna kiselina koja vezuje lectin 3 poput Ig-a; sijalna kiselina koja vezuje lectin poput Ig-a
ANTITELA
[0266]
H195 (Lintuzumab)- Raza A., i dr Leuk Lymphoma. 2009 Aug;50(8):1336-44; US6,759,045 (Seattle Genetics/Imunolekovi)
mAb OKT9: Sutherland, D.R. i dr. Proc Natl Acad Sci USA 78(7): 4515-45191981, Schneider,C., i dr J Biol Chem 257, 8516-8522 (1982)
mAb E6: Hoogenboom, H.R., i dr J Immunol 144, 3211-3217 (1990)
US6,590,088 (Human Genome Sciences)
Na primer, SEQ ID NOs: 1 i 2 i ATCC pristupni broj 97521
US7,557,189 (imunogen)
Na primer, antitelo ili njegov fragment koji sadrži varijabilnu regiju teškog lanca koja sadrži tri CDR-a koji imaju aminokiselinske sekvence SEQ ID Nos:1-3 i varijabilnu regiju lakog lanca koja sadrži tri CDR-a koji imaju aminokiselinske sekvence SEQ ID NOs:4-6.
(47) CD19 (CD19 molekul)
Nukleotid
[0267] Banka gena pristupni broj NM_001178098
Banka gena verzija broj NM_001178098,1 GI:296010920
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. septembar 2012.00:43
Polipeptid
[0268] Banka gena pristupni broj NP_001171569
Banka gena verzija broj NP_001171569,1 GI:296010921
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. septembar 2012.00:43
4
Upućivanje na literaturu
[0269] Tedder TF., i dr J. Immunol.143 (2): 712-7 (1989)
Ostali podaci
[0270] Zvanični simbol: CD19
Ostali alijasi: B4, CVID3
Ostale oznake: B-limfocit antigen CD19; B-limfocit površinski antigen B4; T-ćelijski površinski antigen Leu-12; antigen diferencijacije CD19
ANTITELA
[0271]
Imunogen: HuB4 - Al-Katib AM., i dr Clin Cancer Res.2009 Jun 15;15(12):4038-45.
4G7: Kügler M., i dr Protein Eng Des Sel.2009 Mar;22(3):135-47
Na primer, sekvence u Fig.3 of of Knappik, A. i dr. J Mol Biol 2000 Feb;296(1):57-86 AstraZeneca /Medlmmune: MEDI-551 - Herbst R., i dr J Pharmacol Exp Ther.2010 Oct;335(1):213-22 Glenmark Pharmaceuticals: GBR-401 - Hou S., i dr Mol Cancer Ther November 2011 10 (Meeting Abstract Supplement) C164
US7,109,304 (imunolekovi)
Na primer, antitelo koje sadrži sekvencu hA19Vk (SEQ ID NO:7) i sekvence hA19VH (SEQ ID NO:10) US7,902,338 (imunolekovi)
Na primer, antitelo ili njegov fragment za vezivanje antigena koji sadrže lak lanac komplementarno određujuće regije CDR sekvenci CDR1 od SEQ ID NO: 16 (KASQSVDYDGDSYLN); CDR2 of SEQ ID NO: 17 (DASNLVS); i CDR3 od SEQ ID NO:18 (QQSTEDPWT) i težak lanac CDR sekvenci CDR1 od SEQ ID NO: 19 (SYWMN); CDR2 of SEQ ID NO: 20 (QIWPGDGDTNYNGKFKG) i CDR2 od SEQ ID NO: 21 (RETTTVGRYYYAMDY) i takođe sadrži humani okvir (RT) antitela i sekvence konstantne regije sa jednim ili više aminokiselinskih ostataka okvire regije supstituisani od odgovarajućih sekvenci okvirne regije roditeljskog mišjeg antitela, i gde navedeni supstituisani FR ostaci sadrže supstituciju serina za fenilalanin kod Kabat ostatka 91 varijabilne regije teškog lanca. Medarex: MDX-1342 - Cardarelli PM., i dr Cancer Immunol Immunofher.2010 Feb;59(2):257-65.
[0302] MorphoSys /Xencor: MOR-208/XmAb-5574 - Zalevsky J., i dr Blood.2009 Apr 16;113(16):3735-43 US7,968,687 (Seattle Genetics)
[0303] Antitelo ili fragment za vezivanje antigena koji sadrži varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:9 i varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 24.
4G7 chim - Lang P., i dr Blood.2004 May 15;103(10):3982-5 (University of Tubingen)
Na primer, Slika 6 i SEQ ID No: 80 US20120082664
Zhejiang University School of Medicine: 2E8 - Zhang J., i dr J Drug Target.2010 Nov;18(9):675-8 (48) IL2RA (Interleukin 2 receptor, alfa); NCBI Reference Sequence: NM_000417.2);
Nukleotid
[0272] Banka gena pristupni broj NM_000417
Banka gena verzija broj NM_000417,2 GI:269973860
Banka gena datum ažuriranja podatka: 9. septembar 2012.16:59
4
Polipeptid
[0273]Banka gena pristupni broj NP_000408
Banka gena verzija broj NP_000408,1 GI:4557667
Banka gena datum ažuriranja podatka: 9. septembar 2012.16:59Upućivanje na literaturu
[0274] Kuziel W.A., i dr J. Invest. Dermatol.94 (6 SUPPL), 27S-32S (1990)
Ostali podaci
[0275] Zvanični simbol: IL2RA
Ostali alijasi: RP11-536K7,1, CD25, IDDM10, IL2R, TCGFR
Ostale oznake: FIL-2 receptor podjedinica alfa; IL-2-RA; IL-2R podjedinica alfa; IL2-RA; TAC antigen; interleukin2 receptor podjedinica alfa; p55
ANTITELA
[0276]
US6,383,487 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
US6,521,230 (Novartis/UCL: Baxilisimab [Simulect])
Na primer, antitela koja imaju mesto za vezivanje antitela koja sadrže bar jedan domen koji sadrži CDR1 koji ima aminokiselinske sekvence u SEQ. ID. NO: 7, CDR2 koji ima aminokiselinske sekvence u SEQ. ID. NO: 8, i CDR3 koji ima aminokiselinske sekvence u SEQ. ID. NO: 9; ili navedene CDR1, CDR2 i CDR3 uzete u sekvenci kao celini koja sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je barem 90% identična sa SEQ. ID. NOs: 7, 8 i 9 uzetim u sekvenci kao celini.
Daclizumab - Rech AJ., i dr Ann N YAcad Sci.2009 Sep;1174:99-106 (Roche)
(49) AXL (AXL receptor tirozin kinaze)
Nukleotid
[0277] Banka gena pristupni broj M76125
Banka gena verzija broj M76125,1 GI:292869
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:53 AM
Polipeptid
[0278] Banka gena pristupni broj AAA61243
Banka gena verzija broj AAA61243,1 GI:29870
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:53 AM
Upućivanje na literaturu
[0279] O'Bryan J.P., i dr Mol. Cell. Biol.11 (10), 5016-5031 (1991); Bergsagel P.L., i dr J. Immunol.148 (2), 590-596 (1992)
Ostali podaci
[0280] Zvanični simbol: AXL
Ostali alijasi: JTK11, UFO
Ostale oznake: AXL onkogen; AXL koji transformiše sekvence/gene; onkogen AXL; tirozin-protein kinaze receptor UFO
ANTITELA
[0281]
4
YW327,6S2 - Ye X., i dr Oncogene.2010 Sep 23;29(38):5254-64. (Genentech)
BergenBio: BGB324 (http://www.bergenbio.com/BGB324)
(50) CD - TNFRSF8 (Član 8 superfamilije receptora faktora nekroze tumora)
Nukleotid
[0282] Banka gena pristupni broj M83554
Banka gena verzija broj M83554,1 GI:180095
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:53
Polipeptid
[0283] Banka gena pristupni broj AAA51947
Banka gena verzija broj AAA51947,1 GI:180096
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:53
Upućivanje na literaturu
[0284] Durkop H., i dr Cell 68 (3), 421-427 (1992)
Ostali podaci
[0285] Zvanični simbol: TNFRSF8
Ostali alijasi: CD30, D1S166E, Ki-1
Ostale oznake: CD30L receptor; Ki-1 antigen; receptor citokina CD30; antigen CD30 za aktivaciju limfocita; član 8 superfamilije receptora faktora nekroze tumora
(51) BCMA (B-cell maturation antigen) - TNFRSF17 (Član 17 superfamilije receptora faktora nekroze tumora)
Nukleotid
[0286] Banka gena pristupni broj Z29574
Banka gena verzija broj Z29574,1 GI:471244
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.10:40
Polipeptid
[0287] Banka gena pristupni broj CAA82690
Banka gena verzija broj CAA82690,1 GI:471245
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.10:40
Upućivanje na literaturu
[0288] Laabi Y., i dr Nucleic Acids Res.22 (7), 1147-1154 (1994)
Ostali podaci
[0289] Zvanični simbol: TNFRSF17
Ostali alijasi: BCM, BCMA, CD269
Ostale oznake: B ćelijski antigen sazrevanja; B-ćelijski faktor sazrevanja; B-ćelijski protein sazrevanja; član 17 superfamilije receptora faktora nekroze tumora
(52) CT Ags - CTA (Antigeni karcinoma testisa)
Upućivanje na literaturu
[0290] Fratta E., i dr. Mol Oncol.2011 Apr;5(2):164-82; Lim SH., at al Am J Blood Res.2012;2(1) :29-35.
4
(53) CD 174 (Lewis Y) - FUT3 ( fukoziltransferaza 3 (galaktozid 3(4)-L- fukoziltransferaza, Levisova krvna grupa)
Nukleotid
[0291] Banka gena pristupni broj NM000149
Banka gena verzija broj NM000149,3 GI:148277008
Banka gena datum ažuriranja podatka: 26. jun 201216:49
Polipeptid
[0292] Banka gena pristupni broj NP_000140
Banka gena verzija broj NP_000140,1 GI:4503809
Banka gena datum ažuriranja podatka: 26. jun 201216:49
Upućivanje na literaturu
[0293] Kukowska-Latallo,J.F., i dr Genes Dev.4 (8), 1288-1303 (1990)
Ostali podaci
[0294] Zvanični simbol: FUT3
Ostali alijasi: CD174, FT3B, FucT-III, LE, Les
Ostale oznake: Lewis FT; alfa-(1,3/1,4)-fukoziltransferaza; krvna grupa Lewis alfa-4-fukoziltransferaza; fukoziltransferaza III; galaktosid 3(4)-L- fukoziltransferaza
(54) CLEC14A (Član A, familija 14 licetinski domen tipa C; Banka gena pristupni broj NM175060) Nukleotid
[0295] Banka gena pristupni broj NM175060
Banka gena verzija broj NM175060,2 GI:371123930
Banka gena datum ažuriranja podatka: 1 april 2012.15:34
Polipeptid
[0296] Banka gena pristupni broj NP_778230
Banka gena verzija broj NP_778230,1 GI:28269707
Banka gena datum ažuriranja podatka: 1 april 2012.15:34
Ostali podaci
[0297] Zvanični simbol: CLEC14A
Ostali alijasi: UNQ236/PR0269, C14orf27, CEG1, EGFR-5
Ostale oznake: član A, familija 14 licetinski domen tipa C; domen nalik CIECT i EGF koji sadrži protein; receptor 5 epidermalnog faktora rasta
(55) GRP78 - HSPA5 (protein 5 toplotnog udara 70kDa (protein regulisan od strane glukoze, 78kDa) Nukleotid
[0298] Banka gena pristupni broj NM005347
Banka gena verzija broj NM005347,4 GI:305855105
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:42
Polipeptid
[0299] Banka gena pristupni broj NP_005338
4
Banka gena verzija broj NP_005338,1 GI:16507237
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:42
Upućivanje na literaturu
[0300] Ting J., i dr DNA 7 (4), 275-286 (1988)
Ostali podaci
[0301] Zvanični simbol: HSPA5
Ostali alijasi: BIP, GRP78, MIF2
Ostale oznake: 78 kDa protein regulisan od strane glukoze; lumenal endoplazmatičnog retikuluma Ca(2+)-vezujući protein grp78; protein za vezivanje teškog lanca imunoglobulina
(56) CD70 (CD70 molekul) L08096
Nukleotid
[0302]
Banka gena pristupni broj L08096
Banka gena verzija broj L08096,1 GI:307127
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2012.08:54
Polipeptid
[0303]
Banka gena pristupni broj AAA36175
Banka gena verzija broj AAA36175,1 GI:307128
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 201208:54
Upućivanje na literaturu
[0304] Goodwin R.G., i dr Cell 73 (3), 447-456 (1993)
Ostali podaci
[0305] Zvanični simbol: CD70
Ostali alijasi: CD27L, CD27LG, TNFSF7
Ostale oznake: CD27 ligand; CD27-L; CD70 antigen; Ki-24 antigen; površinski antigen CD70; superfamilija faktor nekroze tumora (ligand), član 7; superfamilija faktor nekroze tumora (ligand), član 7
ANTITELA
[0306]
MDX-1411 protiv CD70 (Medarex)
h1F6 (Oflazoglu, E., i dr, Clin Cancer Res.2008 Oct 1;14(19):6171-80; Seattle Genetics)
Na primer, videti US20060083736 SEQ ID NOs: 1, 2, 11 i 12 i Sl.1.
(57) Antigeni specifični za matične ćelije. Na primer:
[0307]
• 5T4 (videti unos (63) ispod)
• CD25 (videti unos (48) iznad)
• CD32
o Polipeptid
▪ Banka gena pristupni broj ABK42161
▪ Banka gena verzija broj ABK42161,1 GI:117616286
▪ Banka gena datum ažuriranja podatka: 25. jul 2007.15:00
• LGR5/GPR49
o Nukleotid
▪ Banka gena pristupni broj NM_003667
▪ Banka gena verzija broj NM_003667,2 GI:24475886
▪ Banka gena datum ažuriranja podatka: 22. jul 2012.15:38
o Polipeptid
▪ Banka gena pristupni broj NP_003658
▪ Banka gena verzija broj NP_003658,1 GI:4504379
▪ Banka gena datum ažuriranja podatka: 22. jul 2012.15:38
• Prominin/CD133
o Nukleotid
▪ Banka gena pristupni broj NM_006017
▪ Banka gena verzija broj NM_006017,2 GI:224994187
▪ Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:47 o Polipeptid
▪ Banka gena pristupni broj NP_006008
▪ Banka gena verzija broj NP_006008,1 GI:5174387
▪ Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:47 (58) ASG-5
Upućivanje na literaturu
[0308] (Smith L.M., et.al AACR 2010 Annual Meeting (abstract #2590); Gudas J.M., et.al. AACR 2010 Annual Meeting (abstract #4393)
ANTITELA
[0309] Anti- AGS-5 Antibody: M6,131 (Smith, L.M., et.al AACR 2010 Annual Meeting (abstract #2590) (59) ENPP3 (Ektonukleotid pirofosfataza/fosfodiesteraza 3)
Nukleotid
[0310] Banka gena pristupni broj AF005632
Banka gena verzija broj AF005632,2 GI:4432589
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 2010.21:41
Polipeptid
[0311] Banka gena pristupni broj AAC51813
Banka gena verzija broj AAC51813,1 GI:2465540
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 2010.21:41
Upućivanje na literaturu
[0312] Jin-Hua P., i dr Genomics 45 (2), 412-415 (1997)
1
Ostali podaci
[0313] Zvanični simbol: ENPP3
Ostali alijasi: RP5-988G15,3, B10, CD203c, NPP3, PD-IBETA, PDNP3
Ostale oznake: E-NPP 3; dJ1005H11,3 (fosfodiesteraza I/nukleotid pirofosfataza 3); dJ914N13,3 (fosfodiesteraza I/nukleotid pirofosfataza 3); familija ektonukleotid pirofosfataza/fosfodiesteraza član 3 3; gp130RB13-6; fosfodiesteraza I beta; fosfodiesteraza I/ nukleotid pirofosfataza 3; fosfodiesteraza-I beta (60) PRR4 (Bogati prolin 4 (lakrimal))
Nukleotid
[0314] Banka gena pristupni broj NM_007244
Banka gena verzija broj NM_007244,2 GI:154448885
Banka gena datum ažuriranja podatka: 28. jun 201212:39
Polipeptid
[0315] Banka gena pristupni broj NP_009175
Banka gena verzija broj NP_009175,2 GI:154448886
Banka gena datum ažuriranja podatka: 28. jun 201212:39
Upućivanje na literaturu
[0316] Dickinson D.P., i dr Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.36 (10), 2020-2031 (1995)
Ostali podaci
[0317] Zvanični simbol: PRR4
Ostali alijasi: LPRP, PROL4
Ostale oznake: lakrimal prolin-bogat protein; nasofaringeal povezan sa karcinomom prolin-bogat 4; prolinbogat polipeptid 4; prolin-bogat protein 4
(61) GCC - GUCY2C (guanilat ciklaza 2C (toplotno stabilan enterotoksin receptor)
Nukleotid
[0318] Banka gena pristupni broj NM_004963
Banka gena verzija broj NM_004963,3 GI:222080082
Banka gena datum ažuriranja podatka: 02. septembar 2012.13:50
Polipeptid
[0319] Banka gena pristupni broj NP_004954
Banka gena verzija broj NP_004954,2 GI:222080083
Banka gena datum ažuriranja podatka: 02. septembar 2012.13:50
Upućivanje na literaturu
[0320] De Sauvage F.J., i dr J. Biol. Chem. 266 (27), 17912-17918 (1991); Singh S., i dr Biochem. Biophys. Res. Commun.179 (3), 1455-1463 (1991)
Ostali podaci
[0321] Zvanični simbol: GUCY2C
Ostali alijasi: DIAR6, GUC2C, MUCIL, STAR
Ostale oznake: GC-C; STA receptor; guanilil ciklaza C; hSTAR; toplotno stabilan enterotoksin receptor;
2
crevna guanilat ciklaza
(62) Liv-1- SLC39A6 (familija 39 nosača rastvarača (transporter cinka), član 6)
Nukleotid
[0322] Banka gena pristupni broj U41060
Banka gena verzija broj U41060,2 GI:12711792
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. novembar 2009.16:35
Polipeptid
[0323] Banka gena pristupni broj AAA96258
Banka gena verzija broj AAA96258,2 GI:12711793
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. novembar 2009.16:35
Upućivanje na literaturu
[0324] Taylor KM., i dr Biochim Biophys Acta.2003 Apr 1;1611(1-2):16-30
Ostali podaci
[0325] Zvanični simbol: SLC39A6
Ostali alijasi: LIV-1
Ostale oznake: LIV-1 protein, estrogenom regulisan; ZIP-6; estrogenom regulisan protein LIV-1; familija 39 nosača rastvarača (transporter metalnih jona), član 6; familija 39 nosača rastvarača član 6; transporter cinka ZIP6; zrt- i protein 6 nalin Irt
(63) 5T4, Trofoblast glikoprotein, TPBG - TPBG (trofoblast glikoprotein)
Nukleotid
[0326] Banka gena pristupni broj AJ012159
Banka gena verzija broj AJ012159,1 GI:3805946
Banka gena datum ažuriranja podatka: 01. februar 2011.10:27
Polipeptid
[0327] Banka gena pristupni broj CAA09930
Banka gena verzija broj CAA09930,1 GI:3805947
Banka gena datum ažuriranja podatka: 01. februar 2011.10:27
Upućivanje na literaturu
[0328] King K.W.,i dr Biochim. Biophys. Acta 1445 (3), 257-270 (1999)
Ostali podaci
[0329] Zvanični simbol: TPBG
Ostali alijasi: 5T4, 5T4AG, M6P1
Ostale oznake: 5T4 onkofetalni antigen; 5T4 onkofetalni trofoblast glikoprotein; 5T4 onko trofoblast glikoprotein
Videti WO2015/155345
(64) CD56 - NCMA1 (molekul 1 adhezije nervnih ćelija)
Nukleotid
[0330] Banka gena pristupni broj NM_000615
Banka gena verzija broj NM_000615,6 GI:336285433
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 201214:32
Polipeptid
[0331] Banka gena pristupni broj NP_000606
Banka gena verzija broj NP_000606,3 GI:94420689
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 201214:32
Upućivanje na literaturu
[0332] Dickson,G., i dr, Cell 50 (7), 1119-1130 (1987)
Ostali podaci
[0333] Zvanični simbol: NCAM1
Ostali alijasi: CD56, MSK39, NCAM
Ostale oznake: antigen prepoznat od strane monoklonskog antitela 5,1H11; molekul adhezije nervnih ćelija, NCAM ANTITELA
[0334] Imunogen: HuN901 (Smith SV., i dr Curr Opin Mol Ther.2005 Aug;7(4):394-401). Na primer, videti humanizovano iz mišjeg N901 antitela. Videti slike 1b i 1e of Roguska, M.A., i dr. Proc Natl Acad Sci USA Feb 1994;91:969-973..
(65) CanAg (Antigen povezan sa tumorom CA242)
Upućivanje na literaturu
[0335] Haglund C., i dr Br J Cancer 60:845-851, 1989;Baeckstrom D., i dr J Biol Chem 266:21537-21547, 1991
ANTITELA
[0336] huC242 (Tolcher AW i dr., J Clin Oncol.2003 Jan 15;21(2):211-22;Imunogen)
[0374] Na primer, videti US20080138898A1 SEQ ID NO: 1 i 2
(66) FOLR1 (Receptor folata 1)
Nukleotid
[0337] Banka gena pristupni broj J05013
Banka gena verzija broj J05013,1 GI:182417
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23 jun 2010.08:47
Polipeptid
[0338] Banka gena pristupni broj AAA35823
Banka gena verzija broj AAA35823,1 GI:182418
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23 jun 2010.08:47
Upućivanje na literaturu
[0339] Elwood P.C., i dr J. Biol. Chem.264 (25), 14893-14901 (1989)
Ostali podaci
[0340] Zvanični simbol: FOLR1
Ostali alijasi: FBP, FOLR
4
Ostale oznake: FR-alfa; KB ćelije FBP; zreli folat-vezujući protein; folat vezujući protein; alfa receptor folata; receptor folata, zreli; antigen MOv18 u vezi sa tumorom jajnika
ANTITELA
[0341] M9346A - Whiteman KR., i dr Cancer Res April 15, 2012; 72(8 Supplement): 4628 (Immunogen) (67) GPNMB (Glikoprotein (transmembranski) nmb)
Nukleotid
[0342] Banka gena pristupni broj X76534
Banka gena verzija broj X76534,1 GI:666042
Banka gena datum ažuriranja podatka: 02. februar 2011.10:10
Polipeptid
[0343] Banka gena pristupni broj CAA54044
Banka gena verzija broj CAA54044,1 GI:666043
Banka gena datum ažuriranja podatka: 02. februar 2011.10:10
Upućivanje na literaturu
[0344] Weterman M.A., i dr Int. J. Cancer 60 (1), 73-81 (1995)
Ostali podaci
[0345] Zvanični simbol: GPNMB
Ostali alijasi: UNQ1725/PRO9925, HGFIN, NMB
Ostale oznake: glikoprotein NMB; glikoprotein nalik nmb protein; osteoaktivin; transmembranski gloloprotein HGFIN; transmembranski glikoprotein NMB
ANTITELA
[0346] Celldex Therapeutics: CR011 (Tse KF., i dr Clin Cancer Res.2006 Feb 15;12(4):1373-82)
Na primer, pogledati EP1827492B1 SEQ ID NO: 22, 24, 26, 31, 33 i 35
(68) TIM-1 - HAVCR1 (Ćelijski receptor 1 hepatitis A virusa)
Nukleotid
[0347] Banka gena pristupni broj AF043724
Banka gena verzija broj AF043724,1 GI:2827453
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 2010.18:24
Polipeptid
[0348] Banka gena pristupni broj AAC39862
Banka gena verzija broj AAC39862,1 GI:2827454
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 2010.18:24
Upućivanje na literaturu
[0349] Feigelstock D., i dr J. Virol.72 (8), 6621-6628 (1998)
Ostali podaci
[0350] Zvanični simbol: HAVCR1
Ostali alijasi: HAVCR, HAVCR-1, KIM-1, KIM1, TIM, TIM-1, TIM1, TIMD-1, TIMD1
Ostale oznake: T ćelijski protein 1 imunoglobinskog domena i mucinskog domena; T-ćelijski membranski protein 1; molecule 1 povrede bubrega
(69) RG-1/Mindin – Mindin/RG-1 cilj tumora prostate
Upućivanje na literaturu
[0351] Parry R., i dr Cancer Res.2005 Sep 15;65(18):8397-405
(70) B7-H4 - VTCN1 (V-set domen koji sadrži inhibitor 1 aktivacije T-ćelija)
Nukleotid
[0352] Banka gena pristupni broj BX648021
Banka gena verzija broj BX648021,1 GI:34367180
Banka gena datum ažuriranja podatka: 02. feburar 2011.08:40
Upućivanje na literaturu
[0353] Sica GL., i dr Immunity.2003 Jun;18(6):849-61
Ostali podaci
[0354] Zvanični simbol: VTCN1
Ostali alijasi: RP11-229A19,4, B7-H4, B7H4, B7S1, B7X, B7h,5, PRO1291, VCTN1
Ostale oznake: član familije B7, H4; član 1 superfamilije B7; T ćelijskil kostimulatorni molekul B7x; ćelijski kostimulatorni molekul B7x; V-set domen koji sadrži inhibitor 1 aktivacije T-ćelija; imunološki kostimulatorni protein B7-H4
(71) PTK7 (PTK7 protein tirozin kinaza 7)
Nukleotid
[0355] Banka gena pristupni broj AF447176
Banka gena verzija broj AF447176,1 GI:17432420
Banka gena datum ažuriranja podatka: 28. novembar 2008.13:51
Polipeptid
[0356] Banka gena pristupni broj AAL39062
Banka gena verzija broj AAL39062,1 GI:17432421
Banka gena datum ažuriranja podatka: 28. novembar 2008.13:51
Upućivanje na literaturu
[0357] Park S.K.,i dr J. Biochem.119 (2), 235-239 (1996)
Ostali podaci
[0358] Zvanični simbol: PTK7
Ostali alijasi: CCK-4, CCK4
Ostale oznake: kolon karcinomska kinaza 4; neaktivna tirozin-protein kinaza 7; pseudo recetpor 7 tirozin kinaze; tirozine-protein kinaza nalik 7
(72) CD37 (CD37 molekul)
Nukleotid
[0359] Banka gena pristupni broj NM_001040031
Banka gena verzija broj NM_001040031,1 GI:91807109
Banka gena datum ažuriranja podatka: 29. jul 2012.14:08
Polipeptid
[0360] Banka gena pristupni broj NP_001035120
Banka gena verzija broj NP_001035120,1 GI:91807110
Banka gena datum ažuriranja podatka: 29. jul 2012.14:08
Upućivanje na literaturu
[0361] Schwartz-Albiez R., i dr J. Immunol.140 (3), 905-914 (1988)
Ostali podaci
[0362] Zvanični simbol: CD37
Ostali alijasi: GP52-40, TSPAN26
Ostale oznake: CD37 antigen; antigen 37 diferencijacije ćelija; leukocit antigen CD37; leukocit površinski antigen CD37; tetraspanin-26; tspan-26
ANTITELA
[0363] Boehringer Ingelheim: mAb 37,1 (Heider KH., i dr Blood.2011 Oct 13;118(15):4159-68) Trubion: CD37-SMIP (G28-1 scFv-Ig) ((Zhao X., i dr Blood.2007;110: 2569-2577)
Na primer, videti US20110171208A1 SEQ ID NO: 253
Immunogen: K7153A (Deckert J., i dr Cancer Res April 15, 2012; 72(8 Supplement): 4625)
(73) CD138 - SDC1 (sindecan 1)
Nukleotid
[0364] Banka gena pristupni broj AJ551176
Banka gena verzija broj AJ551176,1 GI:29243141
Banka gena datum ažuriranja podatka: 01. februar 2011.12:09
Polipeptid
[0365] Banka gena pristupni broj CAD80245
Banka gena verzija broj CAD80245,1 GI:29243142
Banka gena datum ažuriranja podatka: 01. februar 2011.12:09
Upućivanje na literaturu
[0366] O'Connell FP., i dr Am J Clin Pathol.2004 Feb;121(2):254-63
Ostali podaci
[0367] Zvanični simbol: SDC1
Ostali alijasi: CD138, SDC, SYND1, sindecan
Ostale oznake: CD138 antigen; heparan sulfat proteoglikan fibroblast receptor faktora rasta; syndecan proteoglikan 1; sindecan-1
ANTITELA
[0368]
Biotest: chimerized MAb (nBT062) - (Jagannath S., i dr Poster ASH #3060, 2010; WIPO
Patenta prijava WO/2010/128087)
Na primer, videti US20090232810 SEQ ID NO: 1 i 2
Immunogen: B-B4 (Tassone P., i dr Blood 104_3688-3696)
Na primer, videti US20090175863A1 SEQ ID NO: 1 i 2
(74) CD74 (CD74 molekul, glavni kompleks histokompatibilnosti, invarijantni lanac klase II) Nukleotid [0369] Banka gena pristupni broj NM_004355
Banka gena verzija broj NM_004355,1 GI:343403784
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 2012.14:30
Polipeptid
[0370] Banka gena pristupni broj NP_004346
Banka gena verzija broj NP_004346,1 GI:10835071
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 2012.14:30
Upućivanje na literaturu
[0371] Kudo,J., i dr Nucleic Acids Res.13 (24), 8827-8841 (1985)
Ostali podaci
[0372] Zvanični simbol: CD74
Ostali alijasi: DHLAG, HLADG, II, la-GAMMA
Ostale oznake: CD74 antigen (invarijantni polipeptid glavnog kompleksa histokompatibilnosti, povezan sa antigenom klase II); HLA klase II gaman lanac antigen histokompatibilnosti; HLA-DR invarijantni lanac povezan sa antigenom; HLADR-gama; invarijantni lanac povezan sa la; MHC HLA-DR gama lanac; antigeni gama lanca klase II; p33
ANTITELA
[0373]
Immunomedics: hLL1 (Milatuzumab,) - Berkova Z., i dr Expert Opin Investig Drugs.2010 Jan;19(1):141-9)
Na primer, videti US20040115193 SEQ ID NOs: 19, 20, 21, 22, 23 i 24
Genmab: HuMax-CD74 (videti vebsajt)
(75) Klaudini - CLs (Klaudini)
Upućivanje na literaturu
[0374] Offner S., i dr Cancer Immunol Immunother.2005 May; 54(5):431-45, Suzuki H., i dr Ann NY Acad Sci.2012 Jul;1258:65-70)
Kod ljudi, 25 člana familije su opisana, pogledati reference iz literature.
(76) EGFR (Receptor emiderpamlnog faktora rasta)
Nukleotid
[0375] Banka gena pristupni broj NM_005228
Banka gena verzija broj NM_005228,3 GI:41927737
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:47
Polipeptid
[0376] Banka gena pristupni broj NP_005219
Banka gena verzija broj NP_005219,2 GI:29725609
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:47
Upućivanje na literaturu
[0377] Dhomen NS., i dr Crit Rev Oncog.2012;17(1):31-50
Ostali podaci
[0378] Zvanični simbol: EGFR
Ostali alijasi: ERBB, ERBB1, HER1, PIG61, mENA
Ostale oznake: ptičji eritroblastični leukemijski virusni (v-erb-b) onkogeni homolog; inhibitorski protein 40 ćelijskog rasta; protein 61 za indukciju ćelijske proliferacije; proto-onkogene c-ErbB-1; receptor tirozineprotein kinaze erbB-1
ANTITELA
[0379]
BMS: Cetuximab (Erbitux) - Broadbridge VT., i dr Expert Rev Anticancer Ther. 2012 May;12(5):555-65.
Na primer, videti US6217866 - ATTC deposit br.9764.
Amgen: Panitumumab (Vectibix) - Argiles G., i dr Future Oncol.2012 Apr;8(4):373-89
Na primer, videti US6235883 SEQ ID NOs: 23-38.
Genmab: Zalutumumab - Rivera F., i dr Expert Opin Biol Ther.2009 May;9(5):667-74.
YM Biosciences: Nimotuzumab - Ramakrishnan MS., i dr MAbs.2009 Jan-Feb;1(1):41-8.
Na primer, videti US5891996 SEQ ID NOs: 27-34.
(77) Her3 (ErbB3) - ERBB3 (v-erb-b2 eritroblastični leukemijski virusni onkogene homolog 3 (ptičji)) Nukleotid
[0380] Banka gena pristupni broj M34309
Banka gena verzija broj M34309,1 GI:183990
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.20:47
Polipeptid
[0381] Banka gena pristupni broj AAA35979
Banka gena verzija broj AAA35979,1 GI:306841
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.20:47
Upućivanje na literaturu
[0382] Plowman,G.D., i dr., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.87 (13), 4905-4909 (1990)
Ostali podaci
[0383] Zvanični simbol: ERBB3
Ostali alijasi: ErbB-3, HER3, LCCS2, MDA-BF-1, c-erbB-3, c-erbB3, erbB3-S, p180-ErbB3, p45-sErbB3, p85sErbB3
Ostale oznake: protein c-ErbB-3 nalik proto-onkogenu; receptor tirozin-protein kinaze erbB-3; tirozine kinaza tip površinskog ćelijskog receptora HER3
ANTITELA
[0384] Merimack Pharma : MM-121 (Schoeberl B., i dr Cancer Res.2010 Mar 15;70(6):2485-2494) Na primer, videti US2011028129 SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 i 8.
(78) RON - MST1R (makrofag stimulišući 1 receptor (c-met-povezana tirozin kinaza))
Nukleotid
[0385] Banka gena pristupni broj X70040
Banka gena verzija broj X70040,1 GI:36109
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.22:17
Polipeptid
[0386] Banka gena pristupni broj CCA49634
Banka gena verzija broj CCA49634,1 GI:36110
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.22:17
Upućivanje na literaturu
[0387] Ronsin C., etal Oncogene 8 (5), 1195-1202 (1993)
Ostali podaci
[0388] Zvanični simbol: MST1 R
Ostali alijasi: CD136, CDw136, PTK8, RON
Ostale oznake: MSP receptor; MST1 R varijanta RON30; MST1 R varijanta RON62; PTK8 protein tirozin kinaza 8; RON varijanta E2E3; c-met-povezana tirozin kinaza; makrofag-stimulišući protein receptor; p185-Ron; rastvorljiva RON varijanta 1; rastvorljiva RON varijanta 2; rastvorljiva RON varijanta 3; rastvorljiva RON varijanta 4
(79) EPHA2 (EPH receptor A2)
Nukleotid
[0389] Banka gena pristupni broj BC037166
Banka gena verzija broj BC037166,2 GI:33879863
Banka gena datum ažuriranja podatka: 6. mart 2012.13:59
Polipeptid
[0390] Banka gena pristupni broj AAH37166
Banka gena verzija broj AAH37166,1 GI:22713539
Banka gena datum ažuriranja podatka: 6. mart 2012.13:59
Upućivanje na literaturu
[0391] Strausberg R.L., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.99 (26), 16899-16903 (2002)
Ostali podaci
[0392] Zvanični simbol: EPHA2
Ostali alijasi: ARCC2, CTPA, CTPP1, ECK
Ostale oznake: efrin receptor 2 tipa A; epitelni ćelijski receptor protein tirozin kinaza; rastvorljivi EPHA2 varjianta 1; tirozin-protein kinaza receptor ECK
ANTITELA
[0393] Medimmune: 1C1 (Lee JW., i dr Clin Cancer Res.2010 May 1;16(9):2562-2570)
Na primer, videti US20090304721A1 Sl.7 i 8.
(80) CD20 - MS4A 1 (član 1 superfamilije A 4-domena membranskog raspona)
Nukleotid
[0394] Banka gena pristupni broj M27394
Banka gena verzija broj M27394,1 GI:179307
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. novembar 2009.11:16
Polipeptid
[0395] Banka gena pristupni broj AAA35581
Banka gena verzija broj AAA35581,1 GI:179308
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. novembar 2009.11:16
Upućivanje na literaturu
[0396] Tedder T.F., i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.85 (1), 208-212 (1988)
Ostali podaci
[0397] Zvanični simbol: MS4A1
Ostali alijasi: B1, Bp35, CD20, CVID5, LEU-16, MS4A2, S7
Ostale oznake: B-limfocit antigen CD20; B-limfocit površinski ćelijski antigen B1; CD20 antigen; CD20 receptor; leukocit površinski antigen Leu-16
ANTITELA
[0398]
Genentech/Roche: Rituximab - Abdulla NE., i dr BioDrugs.2012 Apr 1;26(2):71-82.
Na primer, videti US5736137, ATCC deposit No. HB-69119.
GSK/Genmab: Ofatumumab - Nightingale G., i dr Ann Pharmacother.2011 Oct;45(10):1248-55.
Na primer, videti US20090169550A1 SEQ ID NOs: 2, 4 i 5.
Immunomedics: Veltuzumab - Goldenberg DM., i dr Leuk Lymphoma.2010 May;51(5):747-55.
Na primer, videti US7919273B2 SEQ ID NOs: 1, 2, 3, 4, 5 i 6.
(81) Tenascin C - TNC (Tenascin C)
Nukleotid
[0399] Banka gena pristupni broj NM_002160
Banka gena verzija broj NM_002160,3 GI:340745336
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 2012.14:33
Polipeptid
[0400] Banka gena pristupni broj NP_002151
Banka gena verzija broj NP_002151,2 GI:153946395
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. septembar 2012.14:33
Upućivanje na literaturu
[0401] Nies D.E., i dr J. Biol. Chem. 266 (5), 2818-2823 (1991); Siri A., i dr Nucleic Acids Res.19 (3), 525-531 (1991)
Ostali podaci
[0402] Zvanični simbol: TNC
Ostali alijasi: 150-225, GMEM, GP, HXB, JI, TN, TN-C
1
Ostale oznake: GP 150-225; citotaktin; vanćelijski matrčni antigen povezan sa gilomom; heksxabrachion (tenascin); miotendinski antigen; neuronektin; tenascin; tenascin-C izoform 14/AD1/16
ANTITELA
[0403] Philogen : G11 (von Lukowicz T., i dr J Nucl Med.2007 Apr;48(4):582-7) i F16 (Pedretti M., i dr Lung Cancer.2009 Apr;64(1):28-33)
Na primer, videti US7968685 SEQ ID NOs: 29, 35, 45 i 47.
(82) FAP (Aktivacioni protein fibroblasta, alfa)
Nukleotid
[0404] Banka gena pristupni broj U09278
Banka gena verzija broj U09278,1 GI:1888315
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.09:22
Polipeptid
[0405] Banka gena pristupni broj AAB49652
Banka gena verzija broj AAB49652,1 GI:1888316
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.09:22
Upućivanje na literaturu
[0406] Scanlan,M.J.,i dr Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.91 (12), 5657-5661 (1994)
Ostali podaci
[0407] Zvanični simbol: FAP
Ostali alijasi: DPPIV, FAPA
Ostale oznake: 170 kDa melanomska želatinaza vezana za membranu; serinska proteaza sa integralnom membranom; sepraza
(83) DKK-1 (Dickkopf 1 homolog (Xenopus laevis)
Nukleotid
[0408] Banka gena pristupni broj NM_012242
Banka gena verzija broj NM_012242,2 GI:61676924
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:48
Polipeptid
[0409] Banka gena pristupni broj NP_036374
Banka gena verzija broj NP_036374,1 GI:7110719
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:48
Upućivanje na literaturu
[0410] Fedi P. i dr J. Biol. Chem.274 (27), 19465-19472 (1999)
Ostali podaci
[0411] Zvanični simbol: DKK1
Ostali alijasi: UNQ492/PRO1008, DKK-1, SK
Ostale oznake: dikopf povezan protein-1; nalik dikopf-1; protein 1 nalik dikopf; dikopf-povezan protein 1; hDkk-1
2
ANTITELA
[0412] Novartis: BHQ880 (Fulciniti M., i dr Blood.2009 Jul 9;114(2):371-379)
Na primer, videti US20120052070A1 SEQ ID NOs: 100 i 108.
(84) CD52 (CD52 molekul)
Nukleotid
[0413] Banka gena pristupni broj NM_001803
Banka gena verzija broj NM_001803,2 GI:68342029
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:48
Polipeptid
[0414] Banka gena pristupni broj NP_001794
Banka gena verzija broj NP_001794,2 GI:68342030
Banka gena datum ažuriranja podatka: 30. septembar 2012.13:48
[0415] Xia M.Q., i dr Eur. J. Immunol.21 (7), 1677-1684 (1991)
Ostali podaci
[0416] Zvanični simbol: CD52
Ostali alijasi: CDW52
Ostale oznake: CAMPATH-1 antigen; CD52 antigen (CAMPATH-1 antigen); CDW52 antigen (CAMPATH-1 antigen); kembridžka patologija 1 antigen; epididimalni sekretni protein E5; he5; humani epididimisspecifični protein 5
ANTITELA
[0417] Alemtuzumab (Campath) - Skoetz N., i dr Cochrane Database Syst Rev.2012 Feb 15;2:CD008078. Na primer, videti Drugbank Acc. No. DB00087 (BIOD00109, BTD00109)
(85) CS1 - SLAMF7 (član 7 SLAM familije)
Nukleotid
[0418] Banka gena pristupni broj NM_021181
Banka gena verzija broj NM_021181,3 GI:1993571
Banka gena datum ažuriranja podatka: 29. jun 2012.11:24
Polipeptid
[0419] Banka gena pristupni broj NP_067004
Banka gena verzija broj NP_067004,3 GI:19923572
Banka gena datum ažuriranja podatka: 29. jun 2012.11:24
Upućivanje na literaturu
[0420] Boles K.S., i dr Immunogenetics 52 (3-4), 302-307 (2001)
Ostali podaci
[0421] Zvanični simbol: SLAMF7
Ostali alijasi: UNQ576/PRO1138, 19A, CD319, CRACC, CS1
Ostale oznake: 19A24 protein; CD2 podset 1; citotoksične ćelije za aktivaciju receptora nalik CD2; citotoksične receptoraktivirajuće ćelije nalik CD2; membranski protein FOAP-12; novel LY9 (limfocitni antigen 9) nalik proteinu; protein 19A
ANTITELA
[0422] BMS: elotuzumab/HuLuc63 (Benson DM., i dr J Clin Oncol.2012 Jun 1;30(16):2013-2015) Na primer, videti US20110206701 SEQ ID NOs: 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 i 16.
(86) Endoglin - ENG (Endoglin)
Nukleotid
[0423] Banka gena pristupni broj AF035753
Banka gena verzija broj AF035753,1 GI:3452260
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 201018:36
Polipeptid
[0424] Banka gena pristupni broj AAC32802
Banka gena verzija broj AAC32802,1 GI:3452261
Banka gena datum ažuriranja podatka: 10. mart 201018:36
Upućivanje na literaturu
[0425] Rius C., i dr Blood 92 (12), 4677-4690 (1998)
Zvanični simbol : ENG
Ostali podaci
[0426] Ostali alijasi: RP11-228B15,2, CD105, END, HHT1, ORW, ORW1
Ostale oznake: CD105 antigen
(87) Aneksin A1 - ANXA1 (Aneksin A1)
Nukleotid
[0427] Banka gena pristupni broj X05908
Banka gena verzija broj X05908,1 GI:34387
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.10:02
Polipeptid
[0428] Banka gena pristupni broj CCA29338
Banka gena verzija broj CCA29338,1 GI:34388
Banka gena datum ažuriranja podatka: 2. februar 2011.10:02
Upućivanje na literaturu
[0429] Wallner B.P.,i dr Nature 320 (6057), 77-81 (1986)
Ostali podaci
[0430] Zvanični simbol: ANXA1
Ostali alijasi: RP11-71A24,1, ANX1, LPC1
Ostale oznake: aneksin I (lipokortin I); aneksin-1; kalpaktin II; kalpaktin-2; hromobindin-9; lipokortin I; p35; fosfolipaza A2 inhibitorni protein
(88) V-CAM (CD106) - VCAM1 (Molekul 1 adhezije vaskularnih ćelija)
Nukleotid
4
[0431] Banka gena pristupni broj M60335
Banka gena verzija broj M60335,1 GI:340193
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:56 Polipeptid
[0432] Banka gena pristupni broj AAA61269
Banka gena verzija broj AAA61269,1 GI:340194
Banka gena datum ažuriranja podatka: 23. jun 2010.08:56 Upućivanje na literaturu
[0433] Hession C., i dr J. Biol. Chem.266 (11), 6682-6685 (1991) Ostali podaci
[0434]
Zvanični simbol VCAM1
Ostali alijasi: CD106, INCAM-100
Ostale oznake: CD106 antigen; protein 1 adhezije vaskularnih ćelija Sekvence antitela
[0435]
Anti-Integrin αvβ6
RHAB6,2
RKF
Anti-CD 19
CD19 B4 ponovo izašao na površinu VH
CD19 B4 ponovo izašao na površinu VK
Herceptin VL lanac
Anti-CD25
Simulect VK (takođe poznat kao Basiliksimab)
Anti-PSMA
Deimunizovan VH ’1
Deimunizovan VK '1
Deimunizovan VH2 '5
Deimunizovan VH4 '5
Deimunizovan VK2 '5
Deimunizovan VK4 '5
Deimunizovan VH DI '5
Humanizovan RHB '5
Humanizovan RHC '5
Humanizovan RHD '5
Humanizovan RHF '5
Humanizovan RKA '5
Humanizovan RKC '5
Humanizovan RKE '5
Humanizovan RKG '5
[0436] Roditeljsko antitelo takođe može biti fuzioni protein koji sadrži albumin-vezujući peptid (ABP) sekvencu (Dennis i dr (2002) "Albumin Binding As A General Strategy For Improving The Pharmacokinetics Of Proteins" J Biol Chem. 277:35035-35043; WO 01/45746). Antitela iz ovog pronalaska sadržave fuzijone proteine sa ABP sekvenci kako su opisali: (i) Dennis i dr (2002) J Biol Chem.277:35035-35043 na Tables III i IV, strana 35038; (ii) US 2004/0001827 na [0076]; i (iii) WO 01/45746 na stranama 12-13.
[0437] U jednom otelotvorenju, antitelo je napravljeno za ciljanje specifičnih antigena αvβ6 povezanih sa tumorom.
[0438] Agens za vezivanje ćelija može biti označen, na primer, da olakša detekciju ili pročišćavanje agensa ili pre dodavanja u obliku konjugata, ili kao deo konjugata. Oznaka može biti biotinska oznaka. U drugom otelotvorenju, agens za vezivanje ćelija može se označiti radioaktivnim izotopom.
Povezivanje vezničke jedinice sa ligand jedinicom
[0439] Jedinica ligand je povezana sa vezničkom jedinicom preko disulfidne veze.
[0440] U jednom otelotvorenju, veza između jedinice ligand i veznika leka se formira između tiolne grupe cisteinskog ostatka jedinice Ligand i maleimidne grupe jedinice veznika leka.
[0441] Cisteinski ostaci jedinice ligand mogu biti dostupni za reakciju sa funkcionalnom grupom jedinice veznika da bi se stvorila veza. U drugim otelotvorenjima, na primer gde je ligand jedinica antitelo, tiol grupe antitela mogu da učestvuju u međulančanim disulfidnim vezama. Ove međulančane veze mogu se pretvoriti u slobodne tiol grupe npr. tretman antitela sa DTT pre reakcije sa funkcionalnom grupom vezničke jedinice.
[0442] U nekim otelotvorenjima, ostatak cisteina se uvodi u teški ili laki lanac antitela. Pozicije za umetanje cisteina supstitucijom u teškim ili lakim lancima antitela uključuju one opisane u objavljenoj američkoj prijavi br. 2007-0092940 i međunarodnoj objavi patenta WO2008070593.
Postupci lečenja
[0443] Jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se koristiti u postupku terapije. Takođe je obezbeđena terapeutski efikasna količina konjugata formule II za upotrebu u postupku lečenja. Pojam "terapeutski delotvorna količina" je količina dovoljna da pokaže poboljšanje kod pacijenta. Takvo poboljšanje može biti bar ublažavanje najmanje jednog simptoma. Stvarni iznos primanja, i brzina i vremenski tok primene, zavisiće od prirode i težine oboljenja koje se tretira. Prepisivanje tretmana, npr. odluke o dozi, u nadležnosti su lekara opšte prakse i ostalih doktora medicine.
[0444] Konjugat može se primeniti samo ili u kombinaciji sa drugim terapijama, bilo istovremeno ili uzastopno, zavisno od stanja koje se leči. Primeri tretmana i terapija su, hemoterapija (davanje aktivnih agenasa, uključujući, ali nije ograničeno na, npr. lekove kao što su hemoterapijski); hirurgija; i terapija zračenjem.
[0445] Farmaceutski sastavi prema ovom pronalasku, i za upotrebu u skladu s ovim pronalaskom, mogu sadržati, pored aktivnog sastojka, npr. konjugat jedinjenja, i farmaceutski prihvatljiv pomoćni agens, nosač, pufer, stabilizator ili druge materijale dobro poznate stručnjacima u ovoj oblasti. Takvi materijali treba da budu netoksični i ne smeju uticati na delotvornost aktivnog sastojka. Egzaktna priroda nosača ili drugog materijala zavisiće od načinu primene, koji može biti oralni, ili sa injekcijom, npr. kožno, potkožno, ili intravenski.
[0446] Farmaceutski sastavi za oralnu primenu mogu biti u obliku tableta, kapsula, praha ili u obliku tečnosti. Tableta može sadržati čvrsti nosač ili pomoćni agens. Tečni farmaceutski sastavi uglavnom sadrže tečni nosač kao što su voda, petrolej, životinjska ili biljna ulja, mineralno ulje ili sintetička ulja. Mogu se uključiti fiziološki slani rastvor, dekstroza ili drugi rastvor saharida, ili glikoli kao što je etilen glikol, propilen glikol ili polietilen glikol. Kapsula može sadržati čvrsti nosač kao želatin.
[0447] Za intravensku, kožnu ili potkožnu injekciju, ili injekciju na mestu tumora, aktivni sastojak će biti u obliku parenteralno prihvatljivog vodenog rastvora, koji je bez pirogena i ima odgovarajući pH, izotoničnost i stabilnost. Oni sa relevantnom veštinom u oblasti mogu dobro pripremiti prikladne rastvore, na primer, izotonične agense kao što su natrijum hlorid injekcija, Ringerova injekcija, mlečna Ringerova injekcija. Konzervansi, stabilizatori, puferi, antioksidanti i/ili drugi dodaci mogu biti uključeni, po potrebi.
[0448] Konjugati se mogu koristiti za lečenje proliferativne bolesti i autoimune bolesti. Izraz "proliferativne bolesti" odnosi se na neželjene ili nekontrolisane ćelijske proliferacije viška ili abnormalnih ćelija, što je nepoželjno, kao što su, neoplastični ili hiperplastični rast, bilo in vitro ili in vivo.
[0449] Primeri proliferativnih stanja uključuju, ali nisu ograničeni na, benigne, predmaligne i maligne ćelijske proliferacije, uključujući, ali nisu ograničeni na, neoplazme i tumore (npr. histokitoma, gliom, astrokioma, osteom), kancere (npr. karcinom pluća, karcinom malih ćelija pluća, gastrointestinalni karcinom, karcinom creva, karcinom debelog creva, karcinom dojke, karcinom jajnika, karcinom prostate, karcinom testisa, karcinom jetre, karcinom bubrega, karcinom mokraćnog mehura, karcinom gušterače, karcinom mozga, sarkoma, osteosarkoma, Kaposijev sarkom, melanom), limfome, leukemije, psorijaze, bolesti kostiju, fibroproliferativne bolesti (npr. vezivnog tkiva) i ateroskleroze. Karcinomi od posebnog interesa uključuju leukemije i karcinome jajnika. Ostali karcinomi od interesa uključuju, ali nisu ograničeni na, hematološke; maligniteti poput leukemija i limfoma, kao što je ne-Hodgkinov limfom, i podtipovi kao što su DLBCL, marginalna zona, zona plašta i folikularni, Hodgkinov limfom, AML i drugi karcinomi porekla B ili T ćelija.
[0450] Primeri autoimune bolesti uključuju sledeće: reumatoidni artritis, autoimune demijelinativne bolesti (npr. Multipla skleroza, alergijski encefalomielitis), psorijatični artritis, endokrina oftalmopatija, uveoretinitis, sistemski eritemski lupus, miastenija gravis, Gravesova bolest, glomerulonefritis, glomerulonefritis bolest creva (npr. Crohnova bolest), anafilaksa, alergijska reakcija, Sjogrenov sindrom, dijabetes melitus tipa I, primarna bilijarna ciroza, Vegenerova granulomatoza, fibromialgija, polimiozitis, dermatomiozitis, višestruka endokrina insuficijencija, Schmidtov sindrom, autoimuni uveitis, Addisonova bolest, adrenalitis, tiroiditis, Hashimotov tiroiditis, autoimunska tiroidne anemije, hronični hepatitis, lupoidni hepatitis, ateroskleroza, subakutni kožni lupus eritematozus, hipoparatiroidizam, Dresslerov sindrom, autoimunska trombocitopenija, idiopatska trombocitopenična purpura, hemolitička anemija, pemfigus vulgaris, pemfigus, dermatitis herpetiformu, alopecija arcata, pemfigoid, skleroderma, progresivna sistemska skleroza, CREST sindrom (kalcinoza, Rainaudov fenomen, dismotilnost jednjaka, sklerodaktilija i telangiektazija), muška i ženska autoimuna neplodnost, ankilozirajući spondolitis, ulcerozni kolitis, mešovito vezivno tkivo, poliarteritis nedosa, sistemski nekrotizujući vaskulitis, atopijski dermatitis, atopijski rinitis, Goodpastureov sindrom, Chagasova bolest, sarkoidoza, reumatska groznica, astma, ponovljeni abortus, anti-fosfolipidni sindrom, farmerova pluća, multiformni eritem, sindrom post-kardiotomije aktivni hepatitis, pluća odgajivača ptica, toksična epidermalna nekroliza, Alportov sindrom, alveolitis, alergijski alveolitis, fibrozirajući alveolitis, intersticijska bolest pluća, eritem nodosum, pioderma gangrenosum, reakcija transfuzije, Takaiasuov arteritis, polimijalgija reumatika, temporalni arteritis, schistosomiasis asigant, schistosomiasis, schistosomiasis, schistosomiasis, schistosomasis ekcem, limfomatoidna granulomatoza, Behcetova bolest, Caplanov sindrom, Kavasakijeva bolest, denga, encefalomielitis, endokarditis, endomiokardijalna fibroza, endoftalmitis, eritem elevatum i diutinum, psorijaza, eritroblastoza feronični ciklički sindrom, sindrom Fritic, sindrom, eozinofilitis cikitis, Fuchov cikitis, IgA nefropatija, Henoch-Schonlein purpura, bolest transplantata naspram domaćina, odbacivanje transplantacije, kardiomiopatija, Eaton-Lambertov sindrom, recidivni polihondritis, krioglobulinemija, Valdenstromova makroglobulemija, Evanov sindrom i autoimunska zatajenja gonada.
[0451] U nekim otelotvorenjim, autoimuna bolest je poremećaj B limfocita (npr. Sistemski eritematozni lupus, Goodpastureov sindrom, reumatoidni artritis, dijabetes tipa I), Th1-limfociti (npr. Reumatoidni artritis, multipla skleroza, psorijaza, Sjogrenov sindrom, Hashimotov sindrom) tiroiditis, Gravesova bolest, primarna bilijarna ciroza, Vegenerova granulomatoza, tuberkuloza ili bolest transplantata naspram domaćina) ili Th2-limfociti (npr. atopijski dermatitis, sistemski eritemski lupus, atopijska astma, rinokonjunktivitis, alergijski rinitis, sindrom Omennleovog sindroma, sindrom ili hronična bolest kalem protiv domaćina). Generalno, poremećaji koji uključuju dendritične ćelije uključuju poremećaje Th1-limfocita ili Th2-limfocita. U nekim realizacijama, autoimunski poremećaj je imunološki poremećaj posredovan T ćelijama.
[0452] U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,01 do oko 10 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,01 do oko 5 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina davanog konjugata kreće se od oko 0,05 do oko 5 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina davanog konjugata kreće se od oko 0,1 do oko 5 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,1 do oko 4 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata se kreće od oko 0,05 do oko 3 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,1 do oko 3 mg/kg po dozi. U nekim otelotvorenjima, količina primenjenog konjugata kreće se od oko 0,1 do oko 2 mg/kg po dozi.
Opterećenje lekom
[0453] Unos leka je prosečan broj (p) PBD lekova po agensu za vezivanje ćelija, npr. antitela. Tamo gde su jedinjenja iz ovog pronalaska vezana na cisteine, unos leka može varirati od 1 do 8 lekova (D) po agensu za vezivanje ćelija, odnosno gde su 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 i grupe lekova su kovalentno vezane na agens za vezivanje ćelija. Sastavi konjugata uključuju zbirke agensa za vezivanje ćelija, npr. antitela, konjugovanih sa rasponom lekova, od 1 do 8. Kada su jedinjenja predmetnog pronalaska vezana na lizine, unos leka može varirati od 1 do 80 lekova (D) po agensu za vezivanje ćelija, iako gornja granica od 40, 20, 10 ili 8 može biti poželjna.
Sastavi konjugata uključuju zbirke agensa za vezivanje ćelija, npr. antitela, konjugovanih sa rasponom lekova, od 1 do 80, 1 do 40, 1 do 20, 1 do 10 ili od 1 do 8.
[0454] Prosečan broj lekova po antitelu u pripremi ADC iz reakcije konjugacije može se okarakterisati uobičajenim načinima, kao što su UV, HPLC obrnute faze, HIC, masovna spektroskopija, ELISA test i elektroforeza. Kvantitativna raspodela ADC po p takođe može biti određena. Koristeći ELISA, srednja vrednost p može se odrediti u određenoj pripremi ADC (Hamblett i dr (2004) Clin. Cancer Res.10:7063-7070; Sanderson i dr (2005) Clin. Cancer Res. 11:843-852). Međutim, raspodela p (lek) vrednosti se ne primećuje po antitelo-antigen vezivanju i ograničenjima detekcije ELISA. Takođe, ELISA test za detektovanje konjugat antitela i leka ne određuje gde su grupe lekova vezane na antitela, kao što su fragmenti teškog ili lakog lanca, ili određenih aminokiselinski ostaci. U nekim slučajevima, odvajanje, pročišćavanje i karakterisanje homogenog ADC, gde je p određena vrednost od ADC sa drugim unošenjima leka može se postići sredstvima, kao što su obrnuta faza HPLC ili elektroforeza. Takve tehnike mogu se primeniti i na druge tipove konjugata.
[0455] Za neke konjugate antitela i leka, p može biti ograničen brojem mesta za spajanje na antitelu. Na primer, antitelo može imati samo jednu ili nekoliko cistein tiolnih grupa, ili može imati samo jednu ili nekoliko dovoljno reaktivnih tiolnih grupa kroz koje veznik može biti povezan. Veće unošenje leka i, na primer p> 5, može izazvati agregaciju, nerastvorljivost, toksičnost, ili gubitak ćelijske propustljivosti određenih konjugata antitelo-lek.
[0456] Tipično, manje od teoretskog maksimuma, delovi lekova konjugovaće se sa antitelima za vreme reakcije konjugacije. Antitelo može sadržati, na primer, mnogo lizinskih ostataka koji ne reaguju sa lekom. Samo najviše reaktivne lizinske grupe mogu reagovati sa amin-reaktivnim veznik reagensima. Takođe, samo vrlo reaktivne cisteinske tiolne grupe mogu reagovati sa tiol-reaktivnim veznik reagensima. Generalno, antitela ne sadrže mnogo, ako uopšte, slobodnih i reaktivnih cisteinskih tiolnih grupa koja mogu biti povezane sa delom leka. Većina cistein tiol ostataka u jedinjenjima antitela postoje kao disulfidni mostovi i moraju se redukovati koristeći redukcioni agens kao što je ditiotreitol (DTT) i TCEP, delimično ili potpuno pod redukcijskim uslovima. Punjenje (lek/antitelo odnos) ADC-a može se kontrolisati na nekoliko različitih načina, uključujući: (i) ograničavanjem molarnog viška posrednika veznika leka na antitela, (ii) ograničavajući vreme ili temperaturu konjugacione reakcije, i (iii) delimično ili potpuno ograničavanje reduktivnih uslova za modifikaciju cisteinskoh tiola.
[0457] Pojedina antitela moraju redukovati međulančane disulfide, odnosno cisteinske mostove. Antitela mogu da se naprave reaktivna za konjugaciju sa vezivnim reagensima obradom redukcionim sredstvom kao što je ditiotreitol (DTT). Svaki cisteinski most će na taj način formirati, teoretski, dva reaktivna tiolna nukleofila. Dodatne nukleofilne grupe mogu se uvesti u reakciju antitela preko lizina as 2-iminotiolanom (Trautov reagens), što dovodi do pretvaranja amina u tiol. Reaktivne tiolne grupe mogu biti uvedene u antitela (ili njegove fragmente) inženjeringom jednim, dva, tri, četiri ili više cisteinskih ostataka (na primer, pripremanjem mutantnih antitela koja sadrže jedan ili više neprirodni cisteinski ostatak aminokiselina). US 7521541 podučava inženjering antitela uvođenjem reaktivnih cisteinskih aminokiselina.
[0458] Cisteinske aminokiseline mogu se sintezovati na reaktivnim mestima u antitelima, i koji ne obrazuju intra ili intermolekularne disulfidne veze (Junutula, i dr, 2008b Nature Biotech, 26 (8):., 925-932; Dornan i dr (2009) Blood 114 (13): 2721-2729, SAD 7521541, US 7723485; WO2009/052,249). Modifikovani cistein tiol može reagovati sa vezivnim reagensom ili lek-vezujućim reagensom iz ovog pronalaska, koje imaju tiolreaktivne elektrofilne grupe kao što su maleimidi ili alfa-halo amidi da obrazuju ADC sa cisteinskim sintetičkim antitelom i PBD delom leka. Punjenje leka u konjugatu može se unapred odrediti, kontrolisati, i znati. Doziranje leka se može kontrolisati, jer modifikovane cisteinske tiolne grupe reaguju sa tiol-reaktivnim vezivnih reagensom ili lek-vezujućim reagensom sa visokim prinosom. Inženjering IgG antitela, kako bi se uvela cisteinska aminokiselina supstitucijom na jednom mestu teškog ili lakog lanca, daje dva nova cisteina na simetričnom antitelu. Punjenje leka u blizini 2 može se postići sa skoro potpunom homogenošću konjugacija ADC proizvoda.
[0459] Kada više nukleofilnih ili elektrofilnih grupa antitela reaguje sa lek-veznik posrednikom, ili vezivnim reagensom praćenim reagensom dela leka, tada je dobijeni proizvod smesa ADC jedinjenja sa raspodelom delova leka pripojenih na antitelo, npr.1, 2, 3, itd. Postupci tečne hromatografije, kao što su polimerne reverzne
1
faze (PLRP) i hidrofobna interakcija (HIC), mogu razdvojiti jedinjenja u mešavini pomoću vrednosti unošenja leka. Pripreme ADC sa jednim doziranjem leka (p) mogu se izolovati, međutim, te pojedinačne vrednosti unošenja ADC još uvek mogu biti heterogene smese zato to delovi leka mogu biti pripojeni, pomoću veznika, za različita mesta na antitelu.
[0460] Stoga sastavi konjugata antitela i leka pronalaska obuhvataju mešavine konjugovanih konjugat antitela i leka jedinjenja gde antitelo ima jedan ili više PBD delova leka, gde delo leka mogu biti pripojeni za antitelo na različitim ostacima aminokiselina.
[0461] U jednom otelotvorenju, prosečni broj dimer pirolobenzodiazepin grupa po agensu za vezivanje ćelija je u rasponu od 1 do 20. U nekim otelotvorenjima raspon se bira od 1 do 8, 2 do 8, 2 do 6, od 2 do 4, i 4 do 8.
[0462] U nekim otelotvorenjima, postoji jedna dimer pirolobenzodiazepin grupa po agensu za vezivanje ćelija. Opšti sintetički putevi
[0463] Sinteza jedinjenja PBD opširno je razmatrana u sledećim referencama::
a) WO 00/12508 (stranice 14 do 30);
b) WO 2005/023814 (stranice 3 do 10);
c) WO 2004/043963 (stranice 28 do 29); i
d) WO 2005/085251 (stranice 30 do 39).
Put sinteze
[0464] Jedinjenja predmetnog pronalaska Formule I:
mogu se sintetisati iz jedinjenja Formule II::
gde su R<2>, R<6>, R<7>, R<9>, R<6 '>, R<7'>, R<9'>, R<11b>, R<12>, Y, Y' i R" definisani za jedinjenja formule I, a R<LL>je preteča R<L>-ovaj postupak je naročito primenljivo na jedinjenja formule I gde je R<L>Formule IIIa. Za ova jedinjenja R<LL>će tipično biti deo R<L>, kao što je grupa Formule IIIa:
2
U takvom slučaju, reakcija uključuje dodavanje grupe GL. Grupa GL koja se koristi u pronalasku je onako kako je definisana u ovom patentnom zahtevu 1.
[0465] Jedinjenja Formule 2 mogu se dobiti uklanjanjem zaštite jedinjenja formule 3:
gde su R<2>, R<6>, R<7>, R<9>, R<6'>, R<7'>, R<9'>, R<11b>, R<12>, Y, Y' i R" definisani za jedinjenja formule I, R<LL-Prot>je zaštićena verzija R<LL>, a Prot predstavlja odgovarajuću karboksi/hidroksi zaštitnu grupu.
[0466] Jedinjenja Formule 3 mogu se dobiti zatvaranjem prstena jedinjenja Formule 4:
gde se zatvaranje prstena vrši oksidacijom, npr. Swern.
[0467] Jedinjenja Formule 4 mogu se sintetisati iz jedinjenja Formule 5:
postupnim dodavanjem dve amino zaštitne grupe. Postepeno dodavanje se može postići jednostavnom zaštitom jedne amino grupe (npr. Fmoc), nakon čega sledi ugradnja željene zaštitne grupe na drugu amino grupu. Ovo može da sledi uklanjanje jednostavne zaštitne grupe, a zatim ugradnja druge željene amino zaštitne grupe.
[0468] Jedinjenja formule I gde je R<L>formule IIIb, otkrivena samo u informativne svrhe, mogu se sintetizovati na sličan način, iako se kompletna R<L>grupa može instalirati počev od jedinjenja Formule 5, umesto uz upotrebu zaštićeni prekursor.
[0469] Jedinjenja Formule 5 mogu se sintetizovati poznatim postupcima, kao što su oni obelodanjeni u WO Sinteza konjugata lekova
[0470] Konjugati se mogu pripremiti kako je prethodno opisano. Antitela mogu biti konjugovana sa jedinjenjem Drug Linker kako je opisano u Doronina i dr., Nature Biotechnologi, 2003, 21, 778-784). Ukratko, antitela (4-5 mg/ml) u PBS koja sadrže 50 mM natrijum-borata pri pH 7,4 redukuju se sa tris (karboksietil) fosfin hidrohloridom (TCEP) na 37°C. Napredak reakcije, koja smanjuje međulančane disulfide, prati se reakcijom sa 5,5'-ditiobisom (2-nitrobenzoeva kiselina) i ostavlja da se nastavi dok se ne postigne željeni nivo tiola/mAb. Smanjeno antitelo se zatim ohladi na 0°C i alkiliše sa 1,5 ekvivalenta maleimidnog veznika leka po antitelu tiolu. Posle 1 sata, reakcija se zaustavlja dodavanjem 5 ekvivalenata N-acetil cisteina. Ugašeni linklink se uklanja gelskom filtracijom preko PD-10 kolone. ADC se zatim sterilno filtrira kroz filter za špricu od 0,22 µm. Koncentracija proteina se može odrediti spektralnom analizom na 280 nm, odnosno 329 nm, sa korekcijom za doprinos apsorbancije leka na 280 nm. Hromatografija za isključivanje veličine može se koristiti za određivanje obima agregacije antitela, a RP-HPLC može se koristiti za određivanje nivoa preostalog NAC-ugašenog veznika leka.
Dalja podešavanja
[0471] Sledeće preferencije mogu se primeniti na sve aspekte pronalaska, kao što je iznad opisano, ili se mogu odnositi na jedan aspekt. Preferencije se mogu kombinovati u bilo kojoj kombinaciji.
[0472] U nekim otelotvorenjima prisutna je grupa NO2. U drugim otelotvorenjima, NO2je odsutan.
[0473] U nekim otelotvorenjima , R<6'>, R<7'>, R<9'>i Y' su izabrani iz istih grupa kao R<6>, R<7>, R<9>i Y, respektivno. U nekim od ovih otelotvorenja, R<6'>, R<7'>, R<9'>Y' su isti kao R<6>, R<7>, R<9>i Y, respektivno.
[0474] U nekim otelotvorenjima, R<12>je isti kao R<2>.
Dimerlink
[0475] U nekim otelotvorenjima, Y i Y' su oba O.
[0476] U nekim otelotvorenjima, R" je C3-7 alkilenska grupa bez supstituenata. U nekim od ovih otelotvorenja, R" je C3, C5ili C7alkilen. Naročito, R" može biti C3ili C5alkilen.
[0477] U drugim otelotvorenjima, R" je grupa formule:
gde je r je 1 ili 2.
R<6>do R<9>
[0478] U nekim otelotvorenjima, R<9>je H.
[0479] U nekim otelotvorenjima, R<6>se bira između H, OH, OR, SH, NH2, nitro i halo, a može se odabrati između H ili halo. U nekim od ovih otelotvorenja R<6>je H.
[0480] U nekim otelotvorenjima, R<7>se bira između H, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR 'i halo. U nekim od ovih izvođenja R<7>je odabran od H, OH i OR, gde je R odabran od opciono supstituisanih C1-7alkil, C3-10heterociklil i C5-10aril grupa. R može biti poželjnije C1-4alkil grupa, koja može ili ne mora biti supstituisana. Supstituent od interesa je C5-6aril grupa (npr. Fenil). Naročito poželjni supstituenti na 7- položajima su OMe i OCH2Ph. Ostali supstituenti od posebnog interesa su dimetilamino (tj. -NMe2); -(OC2H4) kOMe, gde je q od 0 do 2; heterociklili C<6>koji sadrže azot, uključujući morfolino, piperidinil i N-metil-piperazinil.
[0481] Ova otelotvorenja i preferencije se odnose na R<9'>, R<6'>i R<7'>respektivno.
D i D'
[0482] U nekim otelotvorenjima, D i D' su D1 i D'1 respektivno.
4
[0483] U nekim otelotvorenjima, D i D' su D2 i D'2 respektivno.
R<2>
[0484] Kada postoji dvostruka veza između C2 i C3, R<2>se bira između:
(a) C5-10aril grupa, opciono supstituisana jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koju čine: halo, nitro, cijano, etar, C1-7alkil, C3-7heterociklil i bis-oksi-C1-3alkilen;
(b) C1-5zasićeni alifatski alkil;
(c) C3-6zasićeni cikloalkil;
(d)
pri čemu se svaki od R<11>, R<12>' i R<13>nezavisno bira između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila, gde ukupan broj atoma ugljenika u R<2>grupi nije veći od 5;
(e)
pri čemu je jedan od R<15a>i R<15b>H, a drugi je odabran između: fenila, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo metil, metoksi; piridil; i tiofenil; i
(f)
gde je R<14>izabran iz: H; C1-3zasićeni alkil; C2-3alkenil; C2-3alkinil; ciklopropil; fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo metil, metoksi; piridil; i tiofenil.
[0485] Kada je R<2>C5-10aril grupa, to može biti C5-7aril grupa. C5-7aril grupa može biti fenil grupa ili C5-7heteroaril grupa, na primer furanil, tiofenil i piridil. U nekim otelotvorenjima, R<2>je poželjno fenil. U drugim otelotvorenjima, R<2>je poželjno tiofenil, na primer, tiofen-2-il i tiofen-3-il.
[0486] Kada je R<2>C5-10aril grupa, to može biti C8-10aril, na primer hinolinil ili izokinolinil grupa. Hinolinil ili izohinolinil grupa mogu biti vezane za jezgro PBD bilo kojim raspoloživim položajem prstena. Na primer, hinolinil može biti hinolin-2-il, hinolin-3-il, hinolin-4il, hinolin-5-il, hinolin-6-il, hinolin-7-il i hinolin-8-il. Od ovih hinolin-3-il i hinolin-6-il mogu biti poželjni. Izohinolinil može biti izohinolin-1-il, izohinolin-3-il, izohinolin-4il, izokinolin-5-il, izohinolin-6-il, izohinolin-7-il i izohinolin-8-il. Od ovih mogu biti poželjni izohinolin-3-il i izohinolin-6-il.
[0487] Kada je R<2>C5-10aril grupa, može da sadrži bilo koji broj supstituent grupa. Poželjno nosi od 1 do 3 supstituentne grupe, pri čemu su 1 i 2 poželjnije, a pojedinačno supstituisane grupe su najpoželjnije. Supstituenti mogu biti na bilo kojoj poziciji.
[0488] Gde je R2C5-7aril grupa, jedan supstituent je poželjno na atomu prstena koji nije susedan vezi sa ostatkom jedinjenja, tj. poželjno je b ili g sa vezom do ostatka jedinjenja. Prema tome, tamo gde je C5-7aril grupa fenil, supstituent je poželjno u meta- ili para-položaju, a poželjnije je u para-položaju.
[0489] Gde je R<2>C8-10aril grupa, na primer kinolinil ili izohinolinil, može da sadrži bilo koji broj supstituenata na bilo kom položaju hinolinskih ili izohinolinskih prstenova. U nekim otelotvorenjima, on ima jedan, dva ili tri supstituenta, a oni mogu biti na proksimalnom i distalnom prstenu ili na oba (ako je više od jednog supstituenta).
R2 supstituenti, kada je R<2>C5-10 aril grupa
[0490] Ako je supstituent na R<2>kada je R<2>C5-10aril grupa halo, poželjno je F ili Cl, još poželjnije Cl.
[0491] Ako je supstituent na R<2>, kada je R<2>C5-10aril grupa, etar, on u nekim realizacijama može biti alkoksi grupa, na primer, C1-7alkoksi grupa (npr. metoksi, etoksi) ili u nekim realizacije su C5-7ariloksi grupa (npr. fenoksi, piridiloksi, furaniloksi). Alkoksi grupa može i sama dalje biti supstituisana, na primer amino grupom (npr., dimetilamino).
[0492] Ako je supstituent na R<2>kada je R<2>C5-10aril grupa C1-7alkil, poželjno može biti C1-4alkil grupa (npr. metil, etil, propil, butil).
[0493] Ako je supstituent na R<2>kada je R<2>C5-10aril grupa C3-7heterociklil, u nekim otelotvorenjima to može biti heterociklil grupa koja sadrži C6azot, npr. morfolino, tiomorfolino, piperidinil, piperazinil. Ove grupe mogu biti vezane za ostatak PBD dela preko atoma azota. Ove grupe mogu biti dalje supstituisane, na primer, sa C1-4alkil grupama. Ako je heterociklil grupa C6koja sadrži azot piperazinil, pomenuti dalji supstituent može biti na drugom atomu prstena azota.
[0494] Ako je supstituent na R<2>kada je R<2>C5-10aril grupa bis-oksi-C1-3alkilen, to je poželjno bis-oksi-metilen ili bis-oksi-etilen.
[0495] Ako je supstituent na R<2>kada je R<2>C5-10aril grupa estar, to je poželjno metil estar ili etil estar.
[0496] Naročito poželjni supstituenti kada je R<2>C5-10aril grupa uključuju metoksi, etoksi, fluoro, hloro, cijano, bis-oksi-metilen, metil-piperazinil, morfolino i metiltiofenil. Ostali posebno poželjni supstituenti za R<2>su dimetilaminopropiloksi i karboksi.
[0497] Naročito poželjne supstituisane R<2>grupe kada je R<2>C5-10aril grupa uključuju, ali nisu ograničene na, 4-metoksi-fenil, 3-metoksifenil, 4-etoksi-fenil, 3-etoksi-fenil, 4-fluoro -fenil, 4-hloro-fenil, 3,4-bisoksimetilen-fenil, 4-metiltiofenil, 4-cijanofenil, 4-fenoksifenil, kinolin-3-il i kinolin-6-il, izokinolin-3-il i izokinolin-6 -il, 2-tienil, 2-furanil, metoksinaftil i naftil. Druga moguća supstituisana R<2>grupa je 4-nitrofenil. R<2>grupe od posebnog interesa uključuju 4-(4-metilpiperazin-1-il) fenil i 3,4-bisoksimetilen-fenil.
[0498] Kada je R<2>C1-5zasićeni alifatski alkil, to može biti metil, etil, propil, butil ili pentil. U nekim otelotvorenjima, to može biti metil, etil ili propil (n-pentil ili izopropil). U nekim od ovih otelotvorenja, to može biti metil. U drugim otelotvorenjima, to može biti butil ili pentil, koji može biti ravan ili razgranat.
[0499] Kada je R<2>C3-6zasićeni cikloalkil, to može biti ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil. U nekim otelotvorenjima, to može biti ciklopropil.
[0500] Kada je R<2>
svaki od R<11>, R<12'>i R<13>su nezavisno izabrani između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila, pri čemu ukupan broj atoma ugljenika u R<2>grupi nije veći od 5. U u nekim otelotvorenjima, ukupan broj atoma ugljenika u R<2>grupi nije veći od 4 ili ne veći od 3.
[0501] U nekim otelotvorenjima, jedan od R<11>, R<12>' i R<13>je H, a druge dve grupe su odabrane između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila.
[0502] U drugim otelotvorenjima, dva od R<11>, R<12>' i R<13>su H, pri čemu je druga grupa izabrana iz grupe koju čine H, C1-3zasićeni alkil, C2-3alkenil, C2-3alkinil i ciklopropil.
[0503] U nekim otelotvorenjima, grupe koje nisu H se biraju između metila i etila. U nekim od ovih otelotvorenja, grupe koje nisu H su metil.
[0504] U nekim otelotvorenjima, R<11>je H.
[0505] U nekim otelotvorenjima, R<12'>je H.
[0506] U nekim otelotvorenjima, R<13>je H.
[0507] U nekim otelotvorenjima, R<11>i R<12'>su H.
[0508] U nekim otelotvorenjima, R<11>i R<13>su H.
[0509] U nekim otelotvorenjima, R<12'>i R<13>su H.
[0510] R<2>grupa od posebnog interesa je:
[0511] Kada je R<2>
jedan od R<15a>i R<15b>je H, a drugi je odabran iz grupe koju čine: fenil, gde je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo, metil, metoksi; piridil; i tiofenil. U nekim otelotvorenjima, grupa koja nije H je opciono supstituisani fenil. Ako je fenil po izboru supstituent halo, poželjno je fluoro. U nekom otelotvorenju, fenilna grupa je nesupstituisana.
[0512] Kada je R<2>
R<14>je izabran iz: H; C1-3zasićenog alkila; C2-3alkenila; C2-3alkinil; ciklopropil; fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo metil, metoksi; piridil; i tiofenil. Ako je fenil po izboru supstituent halo, poželjno je fluoro. U nekom otelotvorenju, fenilna grupa je nesupstituisana.
U nekim otelotvorenjima, R<14>je izabran između H, metila, etila, etenila i etinila. U nekim od ovih otelotvorenja, R<14>je odabran između H i metila.
[0513] Kada postoji jednostruka veza između C2 i C3,
R<2>je H ili
gde su R<16a>i R<16b>nezavisno izabrani između H, F, C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koje su alkil i alkenil grupe po izboru supstituisane sa grupom odabranom od C1-4alkil amido i C1-4alkil estar; ili, kada je jedan od R<16a>i R<16b>H, drugi je odabran od nitrila i C1-4alkil estra.
[0514] U nekim otelotvorenjima, R<2>je H.
[0515] U nekim otelotvorenjima, R<2>je
[0516] U nekim otelotvorenjima, poželjno je da su i R<16a>i R<16b>H.
[0517] U nekim otelotvorenjima, poželjno je da su i R<16a>i R<16b>metil.
[0518] U daljim otelotvorenjima, poželjno je da je jedan od R<16a>i R<16b>H, a drugi je izabran od C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koje alkil i alkenil grupe su opciono supstituisane. U ovim daljim otelotvorenjima, može biti dalje poželjno da se grupa koja nije H bira između metila i etila.
R<12>
[0519] Kada postoji dvostruka veza između C2' i C3', R<12>se bira između:
(a) C5-10aril grupa, opciono supstituisana jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koju čine: halo, nitro, cijano, eter, C1-7alkil, C3-7heterociklil i bis-oksi-C1-3alkilen;
(b) C1-5zasićeni alifatski alkil;
(c) C3-6zasićeni alifatski alkil;
(d)
pri čemu se svaki od R<21>, R<22>i R<23>nezavisno bira između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila, gde ukupan broj atoma ugljenika u grupi R<12>nije veći od 5;
(e)
pri čemu je jedan od R<25a>i R<25b>H, a drugi je odabran između: fenila, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo metil, metoksi; piridil; i tiofenil; i
(f)
gde je R<24>izabran iz: H; C1-3zasićeni alkil; C2-3alkenil; C2-3alkinil; ciklopropil; fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo metil, metoksi; piridil; i tiofenil.
[0520] Kada je R<12>C5-10aril grupa, to može biti C5-7aril grupa. C5-7aril grupa može biti fenil grupa ili C5-7heteroaril grupa, na primer furanil, tiofenil i piridil. U nekim otelotvorenjima, R<12>je poželjno fenil. U drugim otelotvorenjima, R<12>je poželjno tiofenil, na primer, tiofen-2-il i tiofen-3-il.
[0521] Kada je R<12>C5-10aril grupa, to može biti C8-10aril, na primer hinolinil ili izokinolinil grupa. Hinolinil ili izohinolinil grupa mogu biti vezane za PBD jezgro bilo kojim raspoloživim položajem prstena. Na primer, hinolinil može biti hinolin-2-il, hinolin-3-il, hkinolin-4il, hinolin-5-il, hinolin-6-il, hinolin-7-il i hkinolin-8-il. Od ovih hinolin-3-il i hinolin-6-il mogu biti poželjni. Izohinolinil može biti izohinolin-1-il, izohinolin-3-il, izohinolin-4il, izohinolin-5-il, izohinolin-6-il, izohinolin-7-il i izohinolin-8-il. Od ovih mogu biti poželjni izohinolin-3-il i izohinolin-6-il.
[0522] Kada je R<12>C5-10aril grupa, može da sadrži bilo koji broj supstituent grupa. Poželjno nosi od 1 do 3 supstituentne grupe, pri čemu su 1 i 2 poželjnije, a pojedinačno supstituisane grupe su najpoželjnije. Supstituenti mogu biti na bilo kojoj poziciji.
[0523] Gde je R<12>C5-7aril grupa, jedan supstituent je poželjno na atomu prstena koji nije susedan vezi sa ostatkom jedinjenja, tj. Poželjno je b ili g sa vezom do ostatka jedinjenja. Prema tome, tamo gde je C5-7aril grupa fenil, supstituent je poželjno u meta- ili para-položaju, a poželjnije je u para-položaju.
[0524] Gde je<R12>C8-10aril grupa, na primer hinolinil ili izohinolinil, može da sadrži bilo koji broj supstituenata na bilo kom položaju hinolinskih ili izohinolinskih prstenova. U nekim otelotvorenjima, on ima jedan, dva ili tri supstituenta, i oni mogu biti na proksimalnom i distalnom prstenu ili na oba (ako je više od jednog supstituenta).
Supstituenti R<12>, kada je R<12>C5-10aril grupa
[0525] Ako je supstituent na R<12>kada je R<12>C5-10aril grupa halo, poželjno je F ili Cl, još poželjnije Cl.
[0526] Ako je supstituent na R<12>, kada je R<12>C5-10aril grupa, etar, on u nekim otelotvorenjima može biti alkoksi grupa, na primer, C1-7alkoksi grupa (npr. metoksi, etoksi) ili u nekim realizacije su C5-7ariloksi grupa (npr. fenoksi, piridiloksi, furaniloksi). Alkoksi grupa može i sama dalje biti supstituisana, na primer amino grupom (npr. dimetilamino).
[0527] Ako je supstituent na R<12>kada je R<12>C5-10aril grupa C1-7alkil, poželjno može biti C1-4alkil grupa (npr. metil, etil, propril, butil).
[0528] Ako je supstituent na R<12>kada je R12 C5-10aril grupa C3-7heterociklil, u nekim otelotvorenjima to može biti heterociklil grupa koja sadrži C6 azot, npr. morfolino, tiomorfolino, piperidinil, piperazinil. Ove grupe mogu biti vezane za ostatak PBD dela preko atoma azota. Ove grupe mogu biti dalje supstituisane, na primer, sa C1-4alkil grupama. Ako je heterociklil grupa C6 koja sadrži azot piperazinil, pomenuti dalji supstituent može biti na drugom atomu prstena azota.
[0529] Ako je supstituent na R<12>kada je R<12>C5-10aril grupa bis-oksi-C1-3alkilen, to je poželjno bis-oksi-metilen ili bis-oksi-etilen.
[0530] Ako je supstituent na R<12>kada je R<12>C5-10aril grupa estar, to je poželjno metil estar ili etil estar.
[0531] Naročito poželjni supstituenti kada je R<12>C5-10aril grupa uključuju metoksi, etoksi, fluoro, hloro, cijano, bis-oksi-metilen, metil-piperazinil, morfolino i metiltiofenil. Ostali posebno poželjni supstituenti za R<12>su dimetilaminopropiloksi i karboksi.
[0532] Naročito poželjne supstituisane R<12>grupe kada je R<12>C5-10aril grupa uključuju, ali nisu ograničene na, 4-metoksi-fenil, 3-metoksifenil, 4-etoksi-fenil, 3-etoksi-fenil, 4-fluoro -fenil, 4-hloro-fenil, 3,4-bisoksimetilen-fenil, 4-metiltiofenil, 4-cijanofenil, 4-fenoksifenil, kinolin-3-il i hinolin-6-il, izokinolin-3-il i izokinolin-6-il, 2-tienil, 2-furanil, metoksinaftil i naftil. Druga moguća supstituisana R<12>grupa je 4-nitrofenil. R<12>grupe od posebnog interesa uključuju 4-(4-metilpiperazin-1-il)fenil i 3,4-bisoksimetilen-fenil.
[0533] Kada je R<12>C1-5zasićeni alifatski alkil, to može biti metil, etil, propil, butil ili pentil. U nekim otelotvorenjima, to može biti metil, etil ili propil (n-pentil ili izopropil). U nekim od ovih otelotvorenja, to može biti metil. U drugim otelotvorenjima, to može biti butil ili pentil, koji može biti ravan ili razgranat.
[0534] Kada je R<12>zasićeni C3-6cikloalkil, to može biti ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil ili cikloheksil. U nekim otelotvorenjima, to može biti ciklopropil.
[0535] Kada je R<12>
svaki od R<21>, R<22>i R<23>su nezavisno izabrani između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila, gde ukupan broj atoma ugljenika u R<12>grupi nije veći od 5. U nekim otelotvorenjima, ukupan broj ugljenika atoma u grupi R<12>nije više od 4 ili ne više od 3.
[0536] U nekim otelotvorenjima, jedan od R<21>, R<22>i R<23>je H, a druge dve grupe su odabrane između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila.
[0537] U drugim otelotvorenjima, dva od R<21>, R<22>i R<23>su H, s tim što je druga grupa izabrana iz grupe koju čine H, C1-3zasićeni alkil, C2-3alkenil, C2-3alkinil i ciklopropil.
[0538] U nekim otelotvorenjima, grupe koje nisu H se biraju između metila i etila. U nekim od ovih otelotvorenja, grupe koje nisu H su metil.
[0539] U nekim otelotvorenjima, R<21>je H.
[0540] U nekim otelotvorenjima, R<22>je H.
[0541] U nekim otelotvorenjima, R<23>je H.
[0542] U nekim otelotvorenjima, R<21>i R<22>su H.
[0543] U nekim otelotvorenjima, R<21>i R<23>su H.
[0544] U nekim otelotvorenjima, R<22>i R<23>su H.
[0545] R<12>grupa od posebnog značaja je:
[0546] Kada je R<12>
jedan od R<25a>i R<25b>je H, a drugi je odabran između: fenila, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo, metil, metoksi; piridil; i tiofenil. U nekim otelotvorenjima, grupa koja nije H je opciono supstituisani fenil. Ako je fenil po izboru supstituent halo, poželjno je fluoro. U nekom otelotvorenju, fenilna grupa je nesupstituisana.
[0547] Kada je R<12>
R<24>se bira između: H; C1-3zasićeni alkil; C2-3alkenil; C2-3alkinil; ciklopropil; fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo metil, metoksi; piridil; i tiofenil. Ako je fenil po izboru supstituent halo, poželjno je fluoro. U nekom otelotvorenju, fenilna grupa je nesupstituisana.
U nekim otelotvorenjima, R<24>se bira između H, metila, etila, etenila i etinila. U nekim od ovih otelotvorenja, R<24>je odabran od H i metila.
[0548] Kada postoji jednostruka veza između C2' i C3',
R<12>je H ili
gde su R<26a>i R<26b>nezavisno izabrani između H, F, C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koje su alkil i alkenil grupe po izboru supstituisane grupom odabranom između C1-4alkil amido i C1-4alkil estar; ili, kada je jedan od R<26a>i R<26b>H, drugi je odabran od nitrila i C1-4alkil estra.
[0549] U nekim otelotvorenjima, R<12>je H.
U nekim otelotvorenjima, R<12>je
[0550] U nekim otelotvorenjima, poželjno je da su i R<26a>i R<26b>H.
[0551] U nekim otelotvorenjima, poželjno je da su i R<26a>i R<26b>metil.
[0552] U daljim otelotvorenjima, poželjno je da je jedan od R<26a>i R<26b>H, a drugi je odabran od C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koji alkil i alkenil grupe su opciono supstituisani. U ovim daljim otelotvorenjima, može biti dalje poželjno da se grupa koja nije H bira između metila i etila.
R<11b>
[0553] U nekim otelotvorenjima, R<11b>je OH.
[0554] U nekim otelotvorenjima, R<11b>is OR<A>, gde je R<A>C1-4alkil. U nekim od ovih otelotvorenja, R<A>je metil.
[0555] U nekim otelotvorenjima prvog aspekta predmetnog pronalaska su formule la-1, la-2 ili Ia-3:
gde su R<2a>i R<12a>isti i odabrani su iz:
(a)
(b)
(c)
1
(d)
(e)
(f)
(g)
i
(h)
R<1a>je odabran između metila i benzila;
R<L>i R<11b>su kako su gore definisani.
[0556] U nekim otelotvorenjima predmetnog pronalaska i R<2>i R<12>sadrže ne više od 3 atoma ugljenika.
[0557] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde postoji dvostruka veza između C2 i C3, R<2>može biti odabran:
(i) Metil;
(ii) Etil;
(iii) Propil;
(iv) Ciklopropil;
(v)
(vi)
i
(vi)
[0558] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde ne postoji dvostruka veza između C2 i C3, R<2>može biti odabran:
(i) H;
(ii)
2
(iii)
i
(iv)
[0559] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde postoji dvostruka veza prisutna između C2' i C3', R<12>se može odabrati:
(i) Metil;
(ii) Etil;
(iii) Propil;
(iv) Ciklopropil;
(v)
(vi)
i
(vi)
[0560] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde ne postoji dvostruka veza između C2' i C3', R<12>se može odabrati između:
(i) H;
(ii)
(iii)
i
(iv)
[0561] U nekim od ovih otelotvorenja i R<2>i R<12>sadrže ne više od 2 atoma ugljenika.
[0562] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde postoji dvostruka veza između C2 i C3, R<2>se može odabrati između:
(i) Metil;
(ii) Etil; i
(vi)
[0563] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde ne postoji dvostruka veza između C2 i C', R<2>se može odabrati između:
(i) H;
(ii)
i
(iii)
[0564] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde postoji dvostruka veza između C22 i C32, R12 se može odabrati između:
(i) Metil;
(ii) Etil; i
(vi)
[0565] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde ne postoji dvostruka veza između C2' i C3', R12 se može odabrati između:
(i) H;
(ii)
i
(iii)
[0566] U daljim ovim otelotvorenjima i R2 i R12 sadrže ne više od 1 atoma ugljenika.
4
[0567] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde postoji dvostruka veza između C22 i C32, R2 može biti metil. Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde ne postoji dvostruka veza između C2 i C', R2 se može odabrati između:
(i) H; i
(ii)
[0568] Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde postoji dvostruka veza između C2' i C3', R12 može biti metil. Prema tome, u ovim otelotvorenjima gde ne postoji dvostruka veza između C2' i C3', R12 se može odabrati između:
(i) H; i
(ii)
[0569] Bez želje da se vežu teorijom, gde je supstituent na položaju C2 PBD dimera mali, smatra se da je upotreba jedinice za zatvaranje glukuronida u ovim veznicima lekova posebno korisna, jer značajno povećava hidrofilnost veznika leka, čineći veznike lekova lakšim konjugacijom u ligandnu jedinicu.
[0570] Ova otelotvorenja i preferencije se takođe primenjuju na drugi aspekt pronalaska.
Veznik (R<L>)
[0571] U predmetnom pronalasku, R<L>je formule IIIa.
[0572] U predmetnom pronalasku, R<LL>je formule IIIa'.
G<L>
[0573] G<L>je izabran iz
[0574] gde Ar predstavlja C5-6arilinsku grupu, npr. fenilen.
[0575] U nekim otelotvorenjima, G<L>je izabran iz G<L1-1>i G<L1-2>. U nekim od ovih otelotvorenja, GL je G<L1-1>. G<LL>
[0576] G<LL>je izabran iz:
gde Ar predstavlja C5-6arilen grupu, npr. fenilen.
[0577] U nekim otelotvorenjima, G<LL>se bira između G<LL1-1>i G<LL1-2>. U nekim od ovih otelotvorenja, G<LL>je G<LL1-1>.
X
[0578] X je:
gde a = 0 do 5, b = 0 do 16, c = 0 ili 1, d = 0 do 5.
a može biti 0, 1, 2, 3, 4 ili 5. U nekim otelotvorenjima, a je 0 do 3. U nekim od ovih otelotvorenjima, a je 0 do 1. U daljim otelotvorenjima, a je 0.
b može biti 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ili 16. U nekim otelotvorenjima, b je 0 do 12. U nekim od ovih otelotvorenjima, b je 0 do 8, i može biti 0, 2, 4 ili 8.
c može biti 0 ili 1.
d može biti 0, 1, 2, 3, 4 ili 5. U nekim otelotvorenjima, d je 0 do 3. U nekim od ovih otelotvorenjima, d je 1 do 2. U daljim otelotvorenjima, d je 2.
[0579] U nekim otelotvorenjima X, a je 0, c je 1 i d je 2, i b može biti od 0 do 8. U nekim od ovih otelotvorenjima, b je 0, 4 ili 8.
Q<X>
[0580] U jednom otelotvorenju, QX je aminokiselinski ostatak. Aminokiselina može biti prirodna aminokiselina ili ne-prirodna aminokiselina.
[0581] U jednom otelotvorenju, QX se bira između: Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg, i Trp, gde je Cit citrulin.
[0582] U jednom otelotvorenju, QX sadrži ostatak dipeptida. Aminokiseline u dipeptidu mogu biti bilo koja kombinacija prirodnih aminokiselina i neprirodnih aminokiselina. U nekim otelotvorenjima, dipeptid sadrži prirodne aminokiseline. Tamo gde je veznik katepsin labilni veznik, dipeptid je mesto dejstva za cepanje posredovano katepsinom. Tada je dipeptid mesto prepoznavanja katepsina.
[0583] U jednom otelotvorenju, QX se bira između:
co-Phe-Lys-NH,
co-Val-Ala-NH,
co-Val-Lys-NH,
co-Ala-Lys-NH,
co-Val-Cit-NH,
co-Phe-Cit-NH,
co-Leu-Cit-NH,
co-Ile-Cit-NH,
co-Phe-Arg-NH, i
co-Trp-Cit-NH;
gde je Cit citrulin.
[0584] Poželjno, QX je izabran iz:
co-Phe-Lys-NH,
co-Val-Ala-NH,
co-Val-Lys-NH,
co-Ala-Lys-NH,
co-Val-Cit-NH.
[0585] Najpoželjnije, QX je izabran iz co-Phe-Lys-NH, co-Val-Cit-NH i co-Val-Ala-NH.
[0586] Ostale kombinacije dipeptida od interesa uključuju:
co-Gly-Gly-NH,
co-Pro-Pro-NH, i
co-Val-Glu-NH.
[0587] Mogu se koristiti i druge kombinacije dipeptida, uključujući one koje su opisali Dubowchik i dr., Bioconjugate Chemistry, 2002, 13,855-869.
[0588] U nekim otelotvorenjima, QX sadrži ostatak tripeptida. Aminokiseline u tripeptidu mogu biti bilo koja kombinacija prirodnih aminokiselina i neprirodnih aminokiselina. U nekim otelotvorenjima, tripeptid sadrži prirodne aminokiseline. Tamo gde je veznik katepsin labilni veznik, tripeptid je mesto dejstva za cepanje posredovano katepsinom. Tada je tripeptid mesto prepoznavanja katepsina.
[0589] U jednom otelotvorenju, bočni lanac aminokiselina je hemijski zaštićen, tamo gde je to prikladno. Zaštitna grupa bočnog lanca može biti grupa kao što je objašnjeno u nastavku. Zaštićene sekvence aminokiselina mogu se deliti enzimima. Na primer, dipeptidna sekvenca koja sadrži Boc bočni lanac zaštićeni ostatak Lys može se deliti katepsinom.
[0590] Zaštitne grupe za bočne lance aminokiselina su dobro poznate u tehnici i opisane su u Novabiochem katalogu i kako je iznad opisano.
[0591] Ovde je obelodanjeno da je R<L>formule IIIb.
Ovde je obelodanjeno da je R<LL>formule IIIb'.
[0592] Ovde je obelodanjeno da su R<L1>i R<L2>nezavisno izabrani između H i metila, ili zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju ciklopropilen ili ciklobutilen grupu.
[0593] Ovde je obelodanjeno da su i R<L1>i R<L2>H.
[0594] Ovde je obelodanjeno da je R<L1>H, a R<L2>metil.
[0595] Ovde je obelodanjeno da su i R<L1>i R<L2>metil.
[0596] Ovde je obelodanjeno da R<L1>i R<L2>zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju ciklopropilensku grupu.
[0597] Ovde je obelodanjeno da R<L1>i R<L2>zajedno sa atomom ugljenika za koji su vezani formiraju ciklobutilensku grupu.
[0598] U grupi IIIb, ovde je obelodanjeno, e je 0. Ovde je obelodanjeno da je e 1 i nitro grupa može biti u bilo kom dostupnom položaju prstena. Ovde je obelodanjeno da je u orto položaju. Ovde je obelodanjeno da je u para položaju.
[0599] U jednom određenom otelotvorenju, prvi aspekt pronalaska sadrži jedinjenje formule Id:
[0600] U jednom određenom otelotvorenju, drugi aspekt pronalaska, veznik leka (D<L>) je formule (Id'):
Dodatno stanje tehnike
[0601] U studiji uticaja koju je Univerzitetski koledž u 2014 Research Excellence Framework (REF) in the United Kingdom by University College London (dostupno na http://impact.ref.ac.uk/casestudies2/refservice.svc/GetCaseStudyPDF/35393), je prokomentarisao da:
„Razvijena je sledeća generacija PBD dimera, koji su moćniji od SG2000, uključujući SG2057 i SG2202. Oni pokazuju pikomolnu/sub-pikomolnu aktivnost protiv niza ćelijskih linija humanog tumora i pokazuju kurativnu aktivnost na modelima ksenografta humanih tumora." pozivajući se na:
Hartlei JA, i dr., Umrežavanje DNK među nitima i in vivo antitumorska aktivnost proširenog pirolo[2,1-c][1,4] benzodiazepinskog dimera SG2057. Invest New Drugs. 2012 Jun; 30(3):950-8. http://dx.doi.org/10,1007/s10637-011-9647-z (od sad "Hartley i dr (2012)")
i:
„Sposobnost generisanja takvih citotoksičnih molekula koji pokazuju izvanrednu snagu sugerisala je potencijalnu ulogu u strategijama usmerenim na puštanje i oslobađanje visoko citotoksičnih sredstava direktno na mestu tumora. Primer je komponenta „bojeve glave“ konjugata leka za antitela (ADC). Potpuno sintetički PBD dimeri idealno su pogodni za ulogu bojeve glave u ADC pristupu."
[0602] Članak The Hartley i dr. (2012) u svom sažetku komentarišu da je „SG2057 stoga visoko aktivno sredstvo protiv raka, sa snažnijom in vitro aktivnošću i superiornom in vivo aktivnošću od SG2000, što garantuje dalji razvoj“.
[0603] SG2057 struktura:
[0604] Konjugati lekova koji koriste SG2057 kao bojnu glavu prvi put su obelodanjeni u WO 2011/130598. Na primer, patentni zahtev 54 ove patentne prijave uključuje formulu:
pri čemu je n od 1 do 24, još poželjnije 4 do 8. Primeri su sledeći veznici za lekove: n=4, 15c; n=8, 15d; n=24, 15e.
[0605] Patentni zahtev 54 u ovoj patentnoj prijavi takođe uključuje formulu:
pri čemu je n od 1 do 24, još poželjnije 4 do 8. Primeri su sledeći veznici za lekove: n=8, 58; n=24, 61.
[0606] WO 2011/130598 takođe obelodanjuje konjugate antitelo-lek, uključujući ove veznike leka, na primer 110 (antiSteap1-15d), primer 114 (tastuzumab-15d) i primer 115 (tastuzumab-58).
[0607] WO 2013/055987 obelodanjuje veznike lekova 14 i 22:
i njihovu upotrebu u konjugatima antitelo-lek.
[0608] U novije vreme, bojna glava:
je korišćen u veznicima lekova i konjugatima antitelo-lek. WO 2014/057074 obelodanjuje:
[0609] Sadašnji pronalazači su iznenađujuće otkrili da, iako je SG2000 najmanje 10 puta manje citotoksičan od SG2057 (videti Hartley i dr. 2012), određeni konjugati antitelo-lek, tj. oni formule Id, pokazuju najmanje uporedivu aktivnost. Pokazalo se da su se ovi konjugati iznenađujuće dobro podnosili u studijama toksičnosti kod raznih vrsta. To dovodi do toga da konjugati pokazuju visoke terapijske indekse i stoga su perspektivni klinički kandidati.
[0610] U nekim otelotvorenjima predmetnog pronalaska, supstituent C11 može biti u sledećem stereohemijskom rasporedu u odnosu na susedne grupe:
[0611] U drugim otelotvorenjima, supstituent C11 može biti u sledećem stereohemijskom rasporedu u odnosu na susedne grupe:
[0612] Jedinjenja od posebnog interesa uključuju i primere
Primeri
[0613] Fleš hromatografija je izvedena korišćenjem Biotage Isolera 1 ™ koristeći gradijentnu eluaciju počev od 88% heksana/EtOAc ili 99,9% DCM/MeOH dok sve UV aktivne komponente (detekcija na 214 i 254 nm) nisu eluirane iz kolone. Gradijent se ručno održavao kad god je primećeno značajno eluiranje UV aktivnog materijala. Čistoća frakcija proveravana je tankoslojnom hromatografijom (TLC), koristeći Merck Kieselgel 60 F254 silikagel, sa fluorescentnim indikatorom na aluminijumskim pločama. Vizualizacija TLC je postignuta UV svetlošću ili parom joda, ukoliko nije drugačije navedeno. Rastvarači za ekstrakciju i
1
hromatografiju su kupljeni i korišćeni bez daljeg prečišćavanja od kompanije VWR UK. Sve fine hemikalije su kupljene od Sigma-Aldrich ili TCI Europe, osim ako nije drugačije naznačeno. Pegilovani reagensi su dobijeni od kompanije Kuanta biodesign US preko kompanije Stratech UK.
[0614] 1H i 13C NMR spektri su dobijeni na Bruker Avance® 400 spektrometru. Konstante sprege navedene su u hercima (Hz). Hemijske promene su zabeležene u delovima na milion (ppm) ispod polja od tetrametilsilana. Više rotacija je opisano kao s (singlet), bs (široki singlet), d (dublet), t (triplet) i m (multiplet).
[0615] Analitički uslovi LC/MS (za praćenje reakcija i određivanje čistoće) bili su sledeći: Maseni spektrometrijski elektrosprej u pozitivnom režimu su izvedeni primenom Shimadzu Nexera®/Prominence® LCMS-2020. Korišćene mobilne faze su rastvarač A (H2O sa 0,1% mravlje kiseline) i rastvarač B (CH3CN sa 0,1% mravlje kiseline). Gradijent za rutinsko sprovođenje od 3 minuta: Početni sastav 5% B držao se tokom 25 sekundi, a zatim se povećao sa 5% B na 100% B tokom perioda od 1 minuta 35 sekundi. Sastav se držao 50 sekundi na 100% B, a zatim se vratio na 5% B za 5 sekundi i držao tamo 5 sekundi. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 3,0 minuta. Gradijent za sprovođenje od 15 minuta: Početni sastav 5% B držao se tokom 1 minuta, a zatim se povećao sa 5% B na 100% B tokom perioda od 9 minuta. Sastav se držao 2 minuta na 100% B, a zatim se vratio na 5% B za 10 sekundi i držao tamo 2 minuta i 50 sekundi. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 15,0 minuta. Brzina protoka je bila 0,8 mL/minut (za trčanje od 3 minuta) i 0,6 mL/minut (za trčanje od 15 minuta). Detekcija je bila na 254 nm. Kolone: Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 1,7µm 2,1 x 50 mm na 50 °C opremljen sa Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard Pre-kolona, 130A, 1,7µm, 2,1 mm x 5 mm (rutinsko 3-minutno sprovođenje); i ACE Excel 2 C18-AR, 2 µ, 3,0 x 100mm opremljen sa Waters Acquity UPLC® BEH Shield RP18 VanGuard Pre-kolona, 130A, 1,7µm, 2,1 mm x 5 mm (15-minutno sprovođenje).
[0616] Uslovi za preparativnu HPLC bili su sledeći: Reverzna faza ultrabrze tečne hromatografije visokih performansi (UFLC) izvedena je na Shimazdzu Prominence® mašini koristeći dimenzije kolone Phenomenex® Gemini NX 5µ C18 (na 50 °C): 150 x 21,2 mm. Korišćeni eluenti su rastvarač A (H2O sa 0,1% mravlje kiseline) i rastvarač B (CH3CN sa 0,1% mravlje kiseline). Svi UFLC eksperimenti izvedeni su sa gradijentnim uslovima: Početni sastav 13% B se povećao na 60% B tokom perioda od 15 minuta, a zatim povećao na 100% B tokom 2 minuta. Sastav se držao 1 minut na 100% B, a zatim se vratio na 13% B za 0,1 minut i držao tamo 1,9 minuta. Ukupno trajanje sprovođenja je bilo 20,0 minuta. Brzina protoka je bila 20,0 ml/minut, a detekcija na 254 i 280 nm.
Sinteza ključnih međujedinjenja
(a) Jedinjenje 5a
[0617] Sledeće jedinjenje 5a:
je sintetizovan kako je opisano (za jedinjenje 10) u Grinda, M., i dr., ChemMedChem 2011(5), 2137-2141 (DOI: 10,1002/cmdc,201100355).
(a) (S)-2-(metoksikarbonil)-4-metilenpirrolidinijum hlorid (I3)
[0618]
2
Komercijalno dostupan derivat prolina (I1) je dobijen od Omegachema
(i) (S)-1-terc-butil 2-metil 4-metilenpirolidin-1,2-dikarboksilat (I2)
[0619] Kalijum karbonat (19,92 g, 14 mmol, 3,0 ekv.) Je dodat mešanom rastvoru karboksilne kiseline 11 (10,92 g, 48 mmol, 1,0 ekv.) U DMF (270 mL). Dobijena bela suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta, pri čemu je dodat jodometan (21,48 g, 9,5 mL, 151 mmol, 3,15 ekv.). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 3 dana. DMF je uklonjen rotacionim isparavanjem pod smanjenim pritiskom da bi se dobio žuti ostatak koji je podeljen između etilacetata i vode. Organski sloj je odvojen, a vodena faza je ekstrahovana etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanom vodom i osušeni iznad magnezijum sulfata. Etilacetat se uklanja rotacionim isparavanjem pod smanjenim pritiskom dajući sirovi proizvod u obliku žutog ulja. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom [85% n-heksan/15% etilacetat] da bi se dobio proizvod u obliku bezbojnog ulja (10,74 g, 93%).
(ii) (S)-2-(metoksikarbonil)-4-metilenpirrolidinijum hlorid (I3)
[0620] Rastvor 4 M hlorovodonične kiseline u dioksanu (63 ml, 254,4 mmol, 4,5 ekv.) dodat je Boc zaštićenom C-prstenu fragmenta I2 (13,67 g, 56,6 mmol, 1,0 ekv.) na sobnoj temperaturi. Primećeno je usporavanje koje ukazuje na oslobađanje CO2 i uklanjanje grupe Boc. Proizvod precipitiran u obliku bele čvrste supstance i dodat je dodatni dioksan da bi se olakšalo mešanje, reakciona smeša je ostavljena da se meša sat vremena, a zatim je razblažena dietil etrom. Istaloženi proizvod je sakupljen vakuumskom filtracijom i ispran dodatnim dietil etrom. Sušenje na vazduhu daje željeni proizvod u obliku belog praha (9,42 g, 94%).
(b) ((Propan-1,3-divlbis(oksi))bis(2-amino-5-metoksi-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-il)metanon) (I11)
[0621]
(i) 1',3'-Bis[2-metoksi-4-(metoksikarbonil)fenoksi]propan (I5)
[0622] Diizopropil azodikarboksilat (71,3 ml, 73,2 g, 362 mmol) dodat je kap po kap tokom perioda od 60 minuta u mešani rastvor metil vanilije I4 (60 g, 329 mmol) i Ph3P (129,4 g, 494 mmol) u bezvodnom THF (800 mL) na 0-5 °C (led/aceton) u atmosferi azota. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na 0-5 °C tokom dodatnih 1 sata, nakon čega je kap po kap dodan rastvor 1,3-propandiola (11,4 ml, 12,0 g, 158 mmol) u THF (12 mL) tokom perioda od 20 min. Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu i mešana je 5 dana. Dobijeni beli talog I3 sakupljen je vakuumskom filtracijom, ispran THF-om i osušen u vakuumskom eksikatoru do konstantne težine. Prinos = 54,68 g (84% na bazi 1,3-propandiola). Analitički podaci: Čistoća zadovoljavajuća do LC/MS 3,20 min (ES+) m/z (relativnog intenziteta) 427 ([M+Na]+·,10); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ δ7,64 (dd, 2H, J = 1,8, 8,3 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 1,8 Hz), 6,93 (d, 2H, J = 8,5 Hz), 4,30 (t, 4H, J = 6,1 Hz), 3,90 (s, 6H), 3,89 (s, 6H), 2,40 (p, 2H, J = 6,0 Hz).
(ii) 1',3'-Bis[2-metoksi-4-(metoksikarbonil)-5-nitrofenoksi]propan (I6)
[0623] Čvrsti Cu(NO3)2,3H2O (81,54 g, 337,5 mmol) dodavan je polako u gustu mešanu suspenziju bis-estra I5 (54,68 g, 135 mmol) u anhidridu sirćetne kiseline (650 mL) na 0-5 °C (led/aceton). Reakciona smeša je ostavljena da se meša 1 h na 0-5 °C, a zatim je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu. Blaga egzoterma (v.40-50 °C), praćeno zgušnjavanjem smeše i razvojem NO2 je primećeno u ovoj fazi. Dodat je dodat anhidrid sirćetne kiseline (300 mL) i reakciona smeša je ostavljena da se meša 16 sati na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je sipana na led (∼ 1,5 L), mešana i ostavljena da se vrati na sobnu temperaturu. Dobijeni žuti talog sakupljen je vakuumskom filtracijom i osušen u eksikatoru da bi se dobilo željeno bis-nitro jedinjenje I6 kao žuta čvrsta supstanca. Prinos = 66,7 g (100%). Analitički podaci: Čistoća zadovoljavajuća do LC/MS 3,25 min (ES+) m/z (relativnog intenziteta) 517 ([M+Na]+·, 40); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7,49 (s, 2H), 7,06 (s, 2H), 4,32 (t, 4H, J = 6,0 Hz), 3,95 (s, 6H), 3,90 (s, 6H), 2,45-2,40 (m, 2H). Videti ref Thurston 1996.
(iii) 1',3'-Bis(4-karboksi-2-metoksi-5-nitrofenoksi) propan (I7)
[0624] Kaša metil estra I6 (66,7 g, 135 mmol) u THF (700 mL) obrađena je sa 1N NaOH (700 mL) i reakciona smeša je ostavljena da se snažno meša na sobnoj temperaturi. Posle 4 dana mešanja, kaša je postala rastvor tamne boje koji je podvrgnut rotacionom isparavanju pod smanjenim pritiskom da bi se uklonio THF. Dobijeni vodeni ostatak je zakiseljen do pH 1 koncentrovanom HC1 i bezbojni talog I7 je sakupljen i temeljno osušen u vakuumskoj peći (50 °C). Prinos = 54,5 g (87%). Analitički podaci: Čistoća zadovoljavajuća do LC/MS 2,65 min (ES+) m/z (relativnog intenziteta) 489 ([M+Na]+·, 30); 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,62 (s, 2H), 7,30 (s, 2H), 4,29 (t, 4H, J = 6,0 Hz), 3,85 (s, 6H), 2,30-2,26 (m, 2H).
(iv) Dimetil 1,1'-(4,4'-(propan-1,3-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitrobenzoil))(2S,2'S)-bis(4-metilenpirolidin-2-karboksilat) (I8)
[0625] Katalitička količina bezvodnog DMF (2,4 mL) dodata je mešanoj suspenziji oksalil-hlorida (14,7 g, 9,8 ml, 115,8 mmol, 3 ekv.) i dimerom jezgra I7 (18 g, 38,6 mmol, 1 ekv.) u bezvodnom DCM (500 mL) na sobnoj temperaturi. Posle dodavanja DMF primećena je snažna šumeća i reakciona smeša je ostavljena da se meša 18 sati u flašici sa okruglim dnom, opremljenoj cevi za sušenje kalcijum-hlorida. Dobijeni bistri rastvor se upari pod smanjenim pritiskom i čvrsta supstanca se triturira etrom. Čvrsti proizvod je sakupljen vakuumskom filtracijom, ispran dodatnim etrom i sušen u vakuumu na 40 °C tokom 1,5 sata. Zatim je ova čvrsta supstanca dodana u obrocima u suspenziju C-prstena 3 (15,1 g, 84,9 mmol, 2,2 ekv.) I TEA (19,5 g, 27 ml, 119,6 mmol, 5 ekv.) u suvom DCM (375 mL), održavajući temperaturu između -40 i -50 °C uz pomoć kupke sa suvim ledom/acetonitrilom. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na -40 °C tokom 1 sata, a zatim je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, pri čemu je LCMS ukazao na potpunu potrošnju početnog materijala. Reakciona smeša je razblažena sa dodatnim DCM i isprana uzastopno vodenom hlorovodoničnom kiselinom (1M, 2 x 200 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2 x 250 mL), vodom (250 mL), slanim rastvorom (250 mL), osušena (MgSO4). DCM je uklonjen rotacionim isparavanjem pod smanjenim pritiskom da bi se dobio proizvod u obliku žute pene (25,72 g, 94 %). Analitički podaci: RT 1,59 min; MS (ES+) m/z (relativni intenzitet) 713 ([M+H]+·,100)
(v) ((Propan-1,3-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4, 1-fenilen))bis(((S)-2-(hidroksimetil)-4-metilenpirolidin-1-il)metanon) (I9)
[0626] Čvrsti litijum borohidrid (3,18 g, 146 mmol, 3 ekv.) Dodan je u jednom delu rastvoru estra I8 (34,72 g, 48,7 mmol, 1 ekv.) u suvom THF (350 mL) u atmosferi azota na 0 °C (ledeno kupatilo). Reakciona smeša je ostavljena da se meša na 0 °C tokom 30 minuta, a zatim je ostavljena da se zagreje do sobne temperature, u kojoj tački je primećeno taloženje narandžaste gume. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi još 2 sata, a zatim je ohlađena u ledenom kupatilu i tretirana vodom dajući žutu suspenziju. Hlorovodonična kiselina (1M) je pažljivo dodavana sve dok ne prestane pupeljenje. Reakciona smeša je ekstrahovana etil acetatom (x 4) i kombinovani organski slojevi su isprani vodom (x 1), slanim rastvorom (x 1) i osušeni (MgSO4). Etilacetat se uklanja rotacionim isparavanjem pod smanjenim pritiskom dajući žutu penu. Prečišćavanjem fleš hromatografijom na koloni [gradijent elucije DCM/MeOH 0% do 5% u koracima od 1%] dobija se proizvod u obliku svetlo žute pene (23,1 g, 72%). Analitički podaci: RT 1,23 min; MS (ES+) m/z (relativni intenzitet) 657 ([M+H]+·,100)
(vi) ((Propan-1,3-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-i)metanon) (I10)
[0627] Rastvor bis-alkohola I9 (10 g, 15,2 mmol, 1 ekv.), T-butildimetilsililhlorida (5,97 g, 39,6 mmol, 2,6 ekv.) i imidazola (5,38 g, 79 mmol, 5,2 ekv.) u suvom DMF (80 mL) je mešano na sobnoj temperaturi tokom 3 sata. Reakciona smeša je sipana u vodu (500 mL) da bi se dobio žuti talog. Smeša je ekstrahovana sa DCM (4 x 100 mL) i kombinovani ekstrakti su isprani vodom i slanim rastvorom, osušeni (MgSO4) i ispareni pod smanjenim pritiskom da bi se dobilo viskozno žuto ulje. Prečišćavanjem hromatografijom na koloni [biotage isolera, gradijent eluiranja heksan 60%/EtOAc 40% do EtOAc 100%, 8 zapremina kolone 100 g snap ultra® kertridža] daje proizvod u obliku žute pene (11,8 g, 88%). Analitički podaci: RT 2,20 min; MS (ES+) m/z
4
(relativnog intenziteta) 885 ([M+H]+·, 100), 907 ([M+Na]+·, 50)
(vii) ((Propan-1,3-dilbis(oksi))bis(2-amino-5-metoksi-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-il)metanon) (I11)
[0628] Cink u prahu (31,9 g, 488 mmol, 40 ekv.) aktivira se mešanjem/ultrazvukom sa 1M HC1 tokom 10 minuta. Cink je filtriran pranjem sa 1M HC1, vodom (x 3) i MeOH (x 2). Aktivirani cink je dodat rastvoru nitro-TBS jedinjenja I10 (10,8 g, 12,2 mmol, 1 ekv.) u MeOH (88 mL) i 5% rastvoru mravlje kiseline/MeOH (440 mL). Temperatura je porasla na 37 °C i reakciona smeša je prešla iz žutog u bezbojni rastvor. Jednom kad se egzoterma povukla (20 minuta), pokazalo se da je reakcija završena LCMS. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit ispiranje sa EtOAc. EtOAc deo je ispran zasićenim rastvorom bikarbonata (x 4) [oprez šumeći!], vodom (x 1), slanim rastvorom (x 1), osušen (MgSO4) i isparen pod smanjenim pritiskom dajući žutu čvrstu supstancu. Prečišćavanjem fleš hromatografijom na koloni [n-heksan/EtOAc 50/50 v/v do EtOAc 100% u koracima od 10%] dobija se proizvod u obliku žute pene (9,5 g, 86%). Analitički podaci: RT 2,12 min; MS (ES+) m/z (relativnog intenziteta) 825 ([M+H]+·, 60), 847 ([M+Na]+·, 30)
(c) Alloc-Val-Ala-PABOH (I16)
[0629]
(i) Alloc-Val-OH (I13)
[0630] Alil hloroformat (41 g, 36,2 ml, 0,34 mol, 1,2 ekv.) dodat je kap po kap mešanom rastvoru L-valina I12 (33,25 g, 0,28 mol, 1 ekv.) i kalijum karbonata (58,9 g, 0,426 mol, 1,5 ekv.) u vodi (650 mL) i THF (650 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 18h THF je isparen pod sniženim pritiskom, a preostali rastvor je ekstrahovan dietil etrom (ili MTBE) (x 2). Vodeni deo je zakišeljen do pH 2 sa konc. HCl i ekstrahovana sa DCM (x 3). Kombinovani organski ekstrakti se isperu sa slanim rastvorom (x 1), osuše (MgSO4) i ispare pod smanjenim pritiskom dajući bezbojno ulje (57,1 g). Ovo je korišćeno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
(ii) Alloc-Val-OSu (I14)
[0631] Mešanom rastvoru jedinjenja I13 (57,1 g, 0,28 mol, 1 ekv.) I N-hidroksisukcinimidu (32,68 g, 0,28 mol, 1 ekv.) u suvom THF (800 mL) dodat je dicikloheksilkarbodiimid (58,6 g, 0,28 mol, 1 ekv.). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 18h Reakciona smeša je filtrirana. Čvrsta supstanca je isprana THF-om i kombinovani filtrat je koncentrovan pod smanjenim pritiskom. Ostatak ulja/čvrsti ostatak je ponovo rastvoren u DCM i ostavljen da stoji na 0 °C tokom 30 minuta. Suspenzija je filtrirana ispiranje hladnim DCM. Isparavanjem filtrata pod smanjenim pritiskom dobija se sukcinimidni estar u obliku bele čvrste supstance koja se koristi u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.
(iii) Alloc-Val-Ala-OH (I15)
[0632] Rastvor Alloc-Val-OSu I14 (11,67 g, 39,0 mmol, 1 ekv.) u THF (50 mL) dodat je rastvoru H-Ala-OH (3,66 g, 41,08 mmoL, 1,05 ekv.) I NaHCO3(3,61 g, 43,03 mmol, 1,1 ekv.) u THF (100 mL) i H2O (100 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 72 sata i THF je isparena pod smanjenim pritiskom. PH je podešen na 3 - 4 limunskom kiselinom da se istaloži bela guma. Ovo je ekstrahovano etilacetatom (6 x 150 mL) i kombinovani ekstrakti su isprani sa H2O (200 mL), slanim rastvorom (200 mL), osušeni (MgSO4) i isparen pod redukovanim pritiskom da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Trituracijom sa dietil etrom (xs) dobija se čisti proizvod u obliku belog praha (7,93 g, 74%). Analitički podaci: RT 2,17 min; MS (ES+) m/z (relativnog intenziteta) 295 ([M+Na]+·, 63), 273 ([M 1]+·, 60).
(iv) Alloc-Va/-Ala-PABOH (I16)
[0633] EEDQ (4,79 g, 19,3 mmol, 1,05 ekv.) je dodat rastvoru p-aminobenzilalkohola (2,38 g, 19,3 mmol, 1,05 ekv.) i Alloc-Val-Ala-OH I15 (5,02 g, 18,4 mmol, 1,0 ekv.) u suvom THF (100 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 72h Rastvarač je isparen pod smanjenim pritiskom da bi se dobila svetlo smeđa čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je triturisana sa dietil etrom i filtrirana je isprana sa viškom dietil etra. Ovim se dobija proizvod u obliku bele čvrste supstance (6,2 g, 89%). Analitički podaci: RT 2,50 min; MS (ES+) m/z (relativnog intenziteta) 400,6 ([M+Na]+·, 50), 378,6 ([M+1]+·, 60).
Primer 1
[0634]
(a) (9H-Fluoren-9-il)metil (5-(3-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (3)
[0635] FmocCl (1,97 g, 7,63 mmol) je dodat mešanoj smeši bis-anilina I11 (6,99 g, 8,48 mmol) i Na2CO3 (2,25 g, 21,2 mmol) u THF (65 mL) i H2O (65 mL). Smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 16 sati, gde je analiza pomoću LC/MS otkrila željeni mono Fmoc proizvod 3 u vremenu zadržavanja 2,34 minuta, I% = 40, ES+ m/z 1069 [M+Na]+·, 1047 [M+H]+· zajedno sa nereagovanim polaznim materijalom u vremenu zadržavanja 2,15 minuta, I% = 12, i bis-Fmoc materija u vremenu zadržavanja 2,50 minuta, I% = 45, ES+ m/z 1291 [M+Na]+·, 1269 [M+H]+·. Slojevi su odvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa DCM (2 x 20 mL), a kombinovani organski slojevi isprani sa H2O (30 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da bi se dobila sirova proizvoda. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 50 g, 100 mL u minuti) dalo je čisti mono Fmoc proizvod 3 u obliku narandžaste pene (2,67 g, 39% prinos na bazi FmocCl, eluiranje na 50% heksan/EtOAc) nije reagovao bis-anilin 2 (1,78 g, eluiranje na 100% EtOAc) i bis-Fmoc (3,28 g, eluiranje na 70% heksan/EtOAc).
(b) (9H-Fluoren-9-il)metil (5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (4)
[0636] Trifosgen (26 mg, 86 µmol) je dodat mešanom rastvoru mono Fmoc proizvoda 3 (250 mg, 0,24 mmol) i TEA (73 uL, 53 mg, 0,53 mmol) u suvom DCM (10 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,39 minuta, ES+ m/z 1127 [M+Na]+·, 1105 [M+NA]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim TEA (50 µL, 36 mg, 0,36 mmol), praćeno dodavanjem veznika I16 (90 mg, 0,24 mmol). Posle 4 sata mešanja pod argonom, LC/MS je pokazao zadovoljavajuću konverziju u karbamat 4 u vremenu zadržavanja 2,34 minuta, ES+ m/z 1472 [M+Na]+·, 1451 [M+H]+·. Smeša je razblažena DCM (60 mL) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (2 x 20 mL), H2O (20 mL), slanim rastvorom (30 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 25 g, 75 mL u minuti) daje čisti karbamat 4 (eluiranje na 28% heksan/EtOAc) u obliku žute pene (257 mg, prinos 74%).
(c) 4-((S)-2-((S)-2-(((Aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (5-(3-(5-amino-4((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (5)
[0637] Dimetilamin (16,5 mL 2,0 M rastvora u THF, 33,0 mmol) je dodat mešanom rastvoru Fmoc zaštićenog jedinjenja 4 (2,39 g, 1,65 mmol) u THF (46 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 1 sata mešanja na sobnoj temperaturi, analiza pomoću LC/MS otkrila je završetak reakcije sa željenim proizvodom u vremenu zadržavanja 2,17 minuta, ES+ m/z 1250 [M+Na]+·, 1228 [M+NA]+·, zajedno sa Fmoc cepanjem nusproizvod u vremenu zadržavanja 1,92 minuta i njegov DMA adukt u vremenu zadržavanja 1,10 minuta. Smeša je isparena u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod koji je zatim prečišćen Isolerom™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) da bi se dobio čisti anilin 5 (eluiranje na 100% EtOAc) u obliku narandžaste pene (1,87 g, prinos 92%).
(d) Alil (2S,3S,4S,5R, 6S)-6-(4-((((5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)ckarbamoil)oksi)metil)-2-mitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (6)
[0638] Trifosgen (161 mg, 0,54 mmol) je dodat mešanom rastvoru anilina 5 (1,85 g, 1,51 mmol) i piridina (269 µL, 263 mg, 3,32 mmol) u suvom DCM (20 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,21 minuta, ES+ m/z 1308 [M+Na]+·, 1286 [M+NA]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim piridinom (183 µL, 179 mg, 2,27 mmol) i dibutiltin dilauratom (179 µL, 191 mg, 0,30 mmol), a zatim je dodan linker 5a (960 mg, 1,51 mmol). Posle 20 sata mešanja pod argonom, LC/MS je pokazao zadovoljavajuću konverziju u karbamat 6 (vreme zadržavanja 2,25 minuta, ES+ m/z 1915 [M+Na]+·, 1892 [M+NA]+·). Smeša je razblažena DCM (60 mL) i isprana zasićenim rastvorom NH4CI (2 x 20 mL), H2O (20 mL), slanim rastvorom (30 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje čisti karbamat 6 (eluiranje na 42% heksan/EtOAc) u obliku žute pene (2,01 g, prinos 70%).
(e) Alil (2S,3S,4S,5R, 6S)-6-(4-((((5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroksimetil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(hidroksimetil)-4-metilenpirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (7)
[0639] Ledena sirćetna kiselina (18 mL) je dodata u mešani rastvor TBS-zaštićenog jedinjenja 6 (2,12 g, 1,12 mmol) u THF (6 mL) i H2O (6 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša 18 sati na sobnoj temperaturi, nakon čega je vremenska analiza LC/MS otkrila završetak reakcije sa željenim proizvodom posmatranim u vremenu zadržavanja 1,79 minuta, ES+ m/z 1663 [M+H]+·, 1686 [M+Na]+·. Reakciona smeša je dodavana u kapima u ohlađeni (0-5 °C) zasićeni rastvor NaHCO3 (300 mL). Neutralni rastvor je ostavljen da se zagreje na sobnu temperaturu i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 100 mL), kombinovani organski slojevi su isprani sa H2O (50 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da se dobije sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dobija se bis-alkohol 7 (eluiranje na 93% DCM/MeOH) u obliku žućkaste pene (1,43 g, prinos 77%).
(f) 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloksi)karbonil)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-3-nitrobenzil (11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metilen-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metilen-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin 10(5H)-karboksilat (8)
[0640] 45% IBX (264 mg, 0,43 mmol) je dodato u mešani rastvor bis-OH 7 (300 mg, 0,18 mmol) u suvom DMSO (5 mL). Smeša je zagrevana na 30 °C u atmosferi argona i napredak reakcije praćen je LC/MS. Posle 24 sata mešanja, dodat je dodatni IBKS (22 mg, 36 µmol) i smeša je mešana još 24 sata. U ovom trenutku analiza pomoću LC/MS otkrila je pretežno jedan vrh koji odgovara željenom proizvodu u vremenu zadržavanja 1,78 minuta, ES+ m/z 1682 [M+Na]+·. Reakciona smeša je sipana u vodu (40 mL), profiltrirana i talog sakupljen, ispran sa H2O (50 mL) i filtrat je zadržan na jednoj strani. Ostatak (talog) je ispran DCM (120 mL), a preostali nerastvoreni talog ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (60 mL). Kombinovani filtrati su premešteni u levak za razdvajanje i slojevi su odvojeni. Vodena faza je ekstrahovana sa DCM (2 x 20 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani sa NaHCO3 (2 x 50 mL), slanim rastvorom (60 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i upareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 mL u minuti) dobije se ciklizovani proizvod 8 (eluiranje na 94,5% DCM/MeOH) u obliku bele pene (261 mg, prinos 87%).
(g) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metilen-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metilen-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (9)
[0641] Pd(PPh3)4 (18,2 mg, 15,7 µmol) je dodat mešanom rastvoru pirolidina (72 µL, 62 mg, 0,87 mmol) i alok/alil jedinjenja 8 (261 mg, 0,16 mmol) u suvom DCM (3 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša u atmosferi argona gde je počeo da se stvara talog. Nakon mešanja tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi pomoću LC/MS otkriveno je da je reakcija završena sa željenim proizvodom posmatranim u vremenu zadržavanja 1,13 minuta, ES+ m/z 1284 [M+NA]+·. Rastvarač je uklonjen isparavanjem u vakuumu, a rezultujući ostatak triturisan sa dietil etrom praćen dodatnim isparavanjem u vakuumu da bi se dobio sirovi amin 9 u obliku čvrste supstance koja je provedena do sledećeg koraka bez daljeg prečišćavanja ili analize.
(h) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metilen-5-okso-2,3,5,10,11,11aheksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metilen-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina(10)
[0642] Rastvor estra MAL-dPEG®8-TFP (132 mg, 0,18 mmol) u suvom DCM (7 mL) dodat je mešanom uzorku amina 9 (202 mg, 0,16 mmol), piridina (24 µL, 23 mg , 0,3 mmol) i DMF (0,25 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša pod argonom 20 sati i vremenom je počela da tamni u boji. Analiza pomoću LC/MS otkrila je stvaranje željenog proizvoda u vremenu zadržavanja 1,38 minuta, ES+) m/z 1857 [M+NA]+·, 1880 [M+Na]+·, zajedno sa nereagovanim aminom u vremenu zadržavanja 1,13 minuta. Dodati su dodatni MAL-dPEG®8-TFP estar (66 mg, 0,09 mmol), piridin (12 µL, 11 mg, 0,15 mmol) i DCM (3 mL) i smeša je ostavljena da se meša naredna tri dana. U ovom trenutku se nakon analize pomoću LC/MS stvori zadovoljavajuća količina željenog proizvoda i rastvarač se ukloni isparavanjem u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC dajući maleimid 10 u obliku bele čvrste supstance (55 mg, 19%): LC/MS (trčanje od 15 minuta), vreme zadržavanja 5,93 minuta, ES+ m/z 1857 [M+NA]+·, 1880 [M+Na]+·; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 10,0 (br s, 2H), 8,25-8,12 (m, 1H), 7,99 (t, 1H, J = 5,7 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,73 (br s, 1H), 7,62-7,48 (m, 3H), 7,40 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,22-7,11 (m, 2H), 7,06 (s, 2H), 7,00 (s, 2H), 6,87 (s, 2H), 6,84-6,76 (m, 1H), 6,68-6,52 (m, 2H), 5,45-5,30 (m, 3H), 5,25-5,01 (m, 9H), 4,97-4,82 (m, 2H), 4,42-4,34 (m, 1H), 4,24-4,17 (m, 1H), 4,16-3,92 (m, 8H), 3,87-3,72 (m, 6H), 3,60 (t, 4H, J = 7,2 Hz), 3,54-3,42 (m, 30H), 3,39-3,20 (m, 5H), 3,18-3,12 (m, 2H), 2,95-2,82 (m, 2H), 2,57-2,35 (m, 4H), 2,33 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 2,24-2,13 (m, 2H), 2,03-1,90 (m, 1H), 1,30 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,7 Hz).
Primer 2
[0643]
�
(a) (S)-(2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-il)(4-hidroksi-5-metoksi-2-nitrofenil)metanon (12)
[0644] LiOAc (2,11 g, 20,7 mmol) je dodat mešanom rastvoru TIPS jedinjenja 11 (12 g, 20,7 mmol) u DMF (67 mL) i H2O (3 mL) na sobnoj temperaturi. Primećena je promena boje iz žute u crvenu. Posle 2 sata mešanja na analizi sobne temperature pomoću LC/MS otkrivena je potpuna konverzija u željeni proizvod u vremenu zadržavanja 1,83 minut, ES+ m/z 445 [M+Na]+·, 423 [M+H]+·. Smeša je razblažena sa H2O (300 mL) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 150 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani 10% w/v limunskom kiselinom (2 x 200 mL), H2O (200 mL), slanim rastvorom (200 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i upareni u vakuumu dajući sirovi proizvod 12 kao žuta čvrsta supstanca (8,74 g, prinos 100%). Čistoća zadovoljavajuća, pa je materijal prenet u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
(b) ((Pentan-1,5-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4, 1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-il)metanon) (13)
[0645] 1,5-dijodopentan (1,54 ml, 3,35 g, 10,4 mmol) je dodat mešanom rastvoru fenola 12 (8,74 g, 20,7 mmol), TBAI (750 mg, 2,05 mmol) i K2CO3(3,15 g, 22,8 mmol) u suvom DMF (60 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 70 °C i mešana je u atmosferi argona 16 sati, pri čemu je analiza tačkom LC/MS otkrila značajno stvaranje proizvoda u vremenu zadržavanja 2,21 minuta, ES+ m/z 935 [M+Na]+·, 913 [M+H]+·. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i DMF je uklonjen isparavanjem u vakuumu. Dobijeni ostatak je ponovo rastvoren u EtOAc (200 mL) i vodena faza je isprana vodom (3 x 40 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje bis-eter 13 (eluiranje na 60% heksan/EtOAc) u obliku žute pene (6,75 g, prinos 71%).
(c) ((Pentan-1,5-diilbis(oksi))bis(2-amino-5-metoksi-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-il)metanon) (14)
[0646] Cinkova prašina (2,79 g, 42,8 mmol) tretirana je sa 1N HCI (50 mL) i mešana 10 minuta na sobnoj temperaturi. Smeša se zatim ultrazvučno obrađuje 10 minuta, a aktivirani cink sakuplja sinter-vakuumskom filtracijom, zatim ispere sa 1N HCI (25 mL), H2O (20 mL), MeOH (20 mL) i osuši u vakuumu na sinterfiltarskoj podlozi. Aktivirani cink je dodat snažno mešanom rastvoru bis-nitro jedinjenja 13 (974 mg, 1,07 mmol) u MeOH (15 mL) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je tretirana u kapima rastvorom 5% v/v HCO2H u MeOH (20 mL). Primećena je promena boje od zelene do metalno sive i egzoterma na 37 °C.
1 1
Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu, pri čemu je analiza pomoću LC/MS otkrila potpunu konverziju u željeni proizvod u vremenu zadržavanja 2,19 minuta, ES+ m/z 875 [M+Na]+·, 853 [M+H]+·. Smeša je filtrirana kroz celite® i podloga je isprana EtOAc (75 mL). Filtrat je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(3 x 20 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušen (MgSO4), filtriran i isparen u vakuumu dajući sirovi bis-anilin 14 u obliku tamno narandžaste pene (840 mg, 92% prinos). Čistoća zadovoljavajuća, pa je materijal prenet u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
(d) (9H-fluoren-9-il)metil(5-((5-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (15)
[0647] FmocCl (1,50 g, 5,93 mmol) je dodat mešanoj suspenziji bis-anilina 14 (6,74 g, 7,91 mmol) i Na2CO3(2,10 g, 19,8 mmol) u THF (40 mL) i H2O (40 mL). Smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 16 sati, gde je analiza pomoću LC/MS otkrila željeni mono Fmoc proizvod 15 u vremenu zadržavanja 2,41 minuta, I% = 32, ES+ m/z 1098 [M+Na]+·, 1076 [M+H]+· zajedno sa nereagovanim polaznim materijalom u vremenu zadržavanja 2,22 minuta, I% = 30, i bis-Fmoc materija u vremenu zadržavanja 2,60 minuta, I% = 36, ES+ m/z 1321 [M+Na]+·, 1298 [M+H]+·. Smeša je podeljena između H2O (50 mL) i EtOAc (50 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran sa H2O (30 mL), slanim rastvorom (40 mL), osušen (MgSO4), filtriran i isparen u vakuumu da bi se dajte sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dalo je čisti mono Fmoc proizvod 3 u obliku narandžaste pene (2,43 g, 38% prinos na bazi FmocCl, eluiranje na 58% heksan/EtOAc) nije reagovao bis-anilin 14 (3,06 g, eluiranje na 40% heksana/EtOAc) i bis-Fmoc (2,32 g, eluiranje na 74% heksan/EtOAc).
(e) (9H-fluoren-9-il)metil(5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (16)
[0648] Trifosgen (242 mg, 0,81 mmol) je dodat mešanom rastvoru mono Fmoc proizvoda 15 (2,43 g, 2,26 mmol) i TEA (692 µL, 502 mg, 4,97 mmol) u suvom DCM (30 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,38 minuta, ES+ m/z 1156 [M+Na]+·, 1133 [M+H]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim TEA (472 µL, 342 mg, 3,39 mmol), praćeno dodavanjem veznika I16 (852 mg, 2,26 mmol). Posle 3,5 sata mešanja pod argonom, LC/MS je pokazao zadovoljavajuću konverziju u karbamat 16 na vreme zadržavanja 2,33 minuta, ES+ m/z 1501 [M+Na]+·, 1479 [M+H]+·. Smeša je razblažena DCM (50 mL) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (2 x 20 mL), slanim rastvorom (30 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje čisti karbamat 16 (eluiranje na 46% heksan/EtOAc) u obliku žute pene (2,26 g, prinos 68%).
(f) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (5-((5-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (17)
[0649] Dimetilamin (15,0 mL 2,0 M rastvora u THF, 30,6 mmol) je dodat mešanom rastvoru Fmoc zaštićenog jedinjenja 16 (2,26 g, 1,65 mmol) u THF (20 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 1 sata mešanja na sobnoj temperaturi, analiza pomoću LC/MS otkrila je završetak reakcije sa željenim proizvodom u vremenu zadržavanja 2,17 minuta, ES+ m/z 1279 [M+Na]+·, 1257 [M+H]+·, zajedno sa Fmoc cepanjem nusproizvod u vremenu zadržavanja 1,79 minuta i njegov DMA adukt u vremenu zadržavanja 0,97 minuta. Smeša je isparena u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod koji je zatim prečišćen Isolerom™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) da bi se dobio čisti anilin 17 (eluiranje na 18% heksana/EtOAc) u obliku narandžaste pene (1,94 g, prinos 100%).
(g) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (18)
[0650] Trifosgen (165 mg, 0,55 mmol) je dodat mešanom rastvoru anilina 17 (1,94 g, 1,54 mmol) i piridina
1 2
(274 µL, 268 mg, 3,39 mmol) u suvom DCM (20 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,21 minuta, ES+ m/z 1337 [M+Na]+·, 1315 [M+H]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim piridinom (187 µL, 183 mg, 2,31 mmol) i dibutiltin dilauratom (179 µL, 191 mg, 0,30 mmol), a zatim je dodan linker 5a (984 mg, 1,54 mmol). Posle 18 sata mešanja pod argonom, LC/MS je pokazao zadovoljavajuću konverziju u karbamat 18 na vreme zadržavanja 2,23 minuta, ES+ m/z 1942 [M+Na]+·, 1920 [M+H]+·. Smeša je razblažena DCM (30 mL) i isprana zasićenim rastvorom NH4CI (2 x 20 mL), H2O (20 mL), slanim rastvorom (40 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje čisti karbamat 18 (eluiranje na 43% heksan/EtOAc) u obliku žute pene (2,17 g, prinos 74%).
(h) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroksimetil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(hidroksimetil)-4-metil-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (19)
[0651] Ledena sirćetna kiselina (18 mL) je dodata u mešani rastvor TBS-zaštićenog jedinjenja 18 (2,17 g, 1,13 mmol) u THF (6 mL) i H2O (6 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša 18 sati na sobnoj temperaturi, nakon čega je vremenska analiza LC/MS otkrila završetak reakcije sa željenim proizvodom posmatranim u vremenu zadržavanja 1,82 minuta, ES+ m/z 1691 [M+H]+·, 1714 [M+Na]+·. Reakciona smeša je dodavana u kapima u ohlađeni (0-5°C) zasićeni rastvor NaHCO3(300 mL). Neutralni rastvor je ostavljen da se zagreje na sobnu temperaturu i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 100 mL), kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (50 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da se dobije sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dobija se bis-alkohol 19 (eluiranje na 96,5% DCM/MeOH) u obliku bele pene (1,31 g, prinos 69%).
(i) 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloksi)karbonil)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-3-nitrobenzil(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-5,10,11,11atetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-11,11a-dihidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin- 10(5H)-karboksilat (20)
[0652] 45% IBX (269 mg, 0,43 mmol) je dodato u mešani rastvor bis-OH 19 (300 mg, 0,18 mmol) u suvom DMSO (5 mL). Smeša je zagrevana na 30 °C u atmosferi argona i napredak reakcije praćen je LC/MS. Posle 24 sata mešanja, dodat je dodatni IBKS (22 mg, 36 µmol) i smeša je mešana još 24 sata. U ovom trenutku analiza pomoću LC/MS otkrila je stvaranje proizvoda u vremenu zadržavanja 1,79 minuta, ES+ m/z 1710 [M+Na]+·. Reakciona smeša je dodavana kap po kap zasićenom vodenom rastvoru NaHCO3 (100 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 75 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3 (2 x 20 mL), H2O (30 mL), slanim rastvorom (40 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i upareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 mL u minuti) dobije se ciklizovani proizvod 11 (eluiranje na 97,4% DCM/MeOH) u obliku bele pene (136 mg, prinos 46%).
(j) Alternativna sinteza 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloksi)karbonil)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-3-nitrobenzil(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11as)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-11, 11a-dihidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-karboksilata (20)
[0653] TEMPO (6,6 mg, 42 umol) i DAIB (125 mg, 0,39 mmol) dodani su mešanom rastvoru bis-OH 19 (300 mg, 0,18 mmol) u suvom DCM (15 mL) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana u atmosferi argona i napredak reakcije praćen je LC/MS. Posle 24 sata mešanja dodani su dodatni TEMPO (6,6 mg, 42 µmol) i DAIB (25 mg, 78 µmol) i smeša je mešana još 24 sata. U ovom trenutku analiza pomoću LC/MS otkrila je stvaranje proizvoda u vremenu zadržavanja 1,79 minuta, ES+ m/z 1710 [M+Na]+·. Smeša je razblažena DCM (50 mL) i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum tiosulfata (40 mL), zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(30 mL), slanim rastvorom (40 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod proizvoda. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 mL u minuti) dobije se ciklizovani proizvod 21 (eluiranje na 96,5% DCM/MeOH) u obliku bele pene (231 mg, prinos 78%).
1
(k) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S, 11aS)-8-((5-(((11S, 11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-5,10,11,11atetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (21)
[0654] Pd(PPh3)4(15,8 mg, 13,7 µmol) je dodat mešanom rastvoru pirolidina (63 µL, 54 mg, 0,75 mmol) i alok/alil jedinjenja 20 (231 mg, 0,14 mmol) u suvom DCM (4 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša u atmosferi argona gde je počeo da se stvara talog. Nakon mešanja tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi pomoću LC/MS otkriveno je da je reakcija završena sa željenim proizvodom posmatranim u vremenu zadržavanja 1,18 minuta 1,13 minuta, ES+ m/z 1312 [M+H]+·. Rastvarač je uklonjen isparavanjem u vakuumu, a rezultujući ostatak triturisan sa dietil etrom praćen dodatnim isparavanjem u vakuumu da bi se dobio sirovi amin 12 u obliku čvrste supstance koja je provedena do sledećeg koraka bez daljeg prečišćavanja ili analize.
(I) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-5,10,11,11atetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina (22)
[0655] Rastvor estra MAL-dPEG®8-TFP (122 mg, 0,16 mmol) u suvom DCM (5 mL) dodat je mešanom uzorku amina 21 (180 mg, 0,16 mmol), piridina (28 µL, 27 mg , 0,34 mmol) i DMF (0,25 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša pod argonom 20 sati i vremenom je počela da tamni u boji. Analiza pomoću LC/MS otkrila je stvaranje željenog proizvoda u vremenu zadržavanja 1,43 minuta, ES- m/z 1884 [M- H]+·, zajedno sa nereagovanim aminom u vremenu zadržavanja 1,18 minuta. Dodati su dodatni MAL-dPEG®8-TFP estar (66 mg, 0,09 mmol), piridin (12 µL, 11 mg, 0,15 mmol) i DCM (3 mL) i smeša je ostavljena da se meša naredna tri dana. U ovom trenutku se nakon analize pomoću LC/MS stvori zadovoljavajuća količina željenog proizvoda i rastvarač se ukloni isparavanjem u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC dajući maleimid 22 u obliku bele čvrste supstance (55 mg, 19%): LC/MS (trčanje od 15 minuta), vreme zadržavanja 5,82 minuta, ES+ m/z 1886 [M+H]+·, 1908 [M+Na]+·; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 9,98 (br s, 2H), 8,25-8,15 (m, 1H), 7,99 (t, 1H, J = 5,7 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,69 (br s, 1H), 7,62-7,48 (m, 3H), 7,37 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 7,21-7,09 (m, 2H), 7,04 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,98 (s, 2H), 6,79 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,72-6,65 (m, 2H), 6,62-6,58 (m, 2H), 5,63-5,50 (m, 2H), 5,41-5,32 (m, 2H), 5,25-5,05 (m, 4H), 4,93-4,80 (m, 2H), 4,41-4,32 (m, 1H), 4,23-4,16 (m, 1H), 4,00-3,90 (m, 4H), 3,87-3,72 (m, 6H), 3,70-3,60 (m, 2H), 3,58 (t, 4H, J = 7,2 Hz), 3,52-3,43 (m, 28H), 3,39-3,20 (m, 5H), 3,18-3,10 (m, 2H), 2,95-2,82 (m, 2H), 2,53-2,34 (m, 4H), 2,31 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 1,99-1,90 (m, 1H), 1,82-1,68 (m, 4H), 1,73 (s, 6H), 1,60-1,47 (m, 2H), 1,28 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 0,85 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,81 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Primer 3
[0656]
1 4
�
[0657] Jedinjenje 23 je jedinjenje 46 u WO2014/057074.
(a) (5S,5'S)-(4,4'-(Pentan-1,5-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitrobenzoil))bis(5-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)-4,5-dihidro-1H-pirol-1,3-diil)bis(trifluorometansulfonat) (24)
[0658] Bezvodni 2,6-lutidin (8,90 ml, 8,22 g, 76,7 mmol) je dodat špricem u mešani rastvor bis-ketona 23 (5,41 g, 5,90 mmol) u suvom DCM (200 mL) na -45°C (suv led/acetonitril) u atmosferi argona. Anhidridni anhidrid trifluorometansulfonske kiseline (5,96 ml, 10,0 g, 35,5 mmol), uzet iz sveže otvorene ampule, dodat je špricem, održavajući temperaturu na -40°C ili nižu. Reakciona smeša je ostavljena da se meša na -45°C tokom 1 sata, a u tom trenutku je analiza LC/MS otkrila pretvaranje u proizvod u vremenu zadržavanja, vreme zadržavanja 2,23 minuta, ES+ m/z 1203 [M+Na]+·, 1181 [M+NA]+·. Hladna reakciona smeša je odmah razblažena DCM (200 mL) i isprana vodom (1 x 200 mL), 5% rastvorom limunske kiseline (2 x 200 mL), zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(200 mL), slanim rastvorom (300 mL), osušen (MgSO4), filtriran i isparen u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje bis-enol triflat 3 (eluiranje na 78% heksan/EtOAc) u obliku žute pene (5,02 g, prinos 72%).
(b) ((Pentan-1,5-diilbis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-il)metanon) (25)
[0659] Pd(PPh3)4(196 mg, 0,17 mmol) je dodat mešanoj smeši bis-enol triflata 24 (5,02 g, 4,25 mmol), 4-metoksifenilboronske kiseline (1,68 g, 11,1 mmol), Na2CO3(1,44 g, 13,6 mmol), EtOH (20 mL), toluen (40 mL i voda (20 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 30°C i mešana u atmosferi argona tokom 3 sata, nakon čega je LC/MS zabeležila potpuno prevođenje u željeni proizvod, vreme zadržavanja 2,23 minuta, ES+ m/z 1120 [M+Na]+·, 1098 [M+H]+·. Reakciona smeša je podeljena između EtOAc (200 mL) i H2O (100 mL) i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa H2O (2 x 50 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i upareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dobija se bis-C2-arilno jedinjenje 25 (eluiranje na 63% heksan/EtOAc) u obliku žućkaste pene (3,11 g, prinos 67%). (c) ((Pentan-1,5-diilbis(oksi))bis(2-amino-5-metoksi-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-il)metanon) (26)
[0660] Neaktivirani cink (4,13 g, 63,1 mmol) je dodat snažno mešanom rastvoru bis-nitro jedinjenja 25 (1,73
1
g, 1,58 mmol) u EtOH (15 mL) i EtOAc (15 mL) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je obrađena vodom (1 mL), a zatim kap po kap rastvorom 5% v/v HCO2H u MeOH (19 mL). Primećena je promena boje od zelene do metalno sive i egzoterma na 40 °C. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu, pri čemu je analiza pomoću LC/MS otkrila potpunu konverziju u željeni proizvod u vremenu zadržavanja 2,19 minuta, ES+ m/z 1060 [M+Na]+·, 1038 [M+H]+·. Smeša je filtrirana kroz celite® i podloga je isprana EtOAc (100 mL). Filtrat je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(3 x 50 mL) [nega: šumeće!], slani rastvor (50 mL), osušen (MgSO4), filtriran i uparen u vakuumu dajući sirovi bis-anilin 26 u obliku tamno narandžaste pene (1,56 g, 95% prinos). Čistoća zadovoljavajuća, pa je materijal prenet u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
(d) (9H-Fluoren-9-il)metil(5-((5-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (27)
[0661] FmocCl (1,22 g, 4,70 mmol) je dodat mešanoj suspenziji bis-anilina 26 (6,50 g, 6,27 mmol) i Na2CO3(1,66 g, 15,7 mmol) u THF (32 mL) i H2O (40 mL). Smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 3 sati, gde je analiza pomoću LC/MS otkrila željeni mono Fmoc proizvod 27 u vremenu zadržavanja 2,33 minuta, I% = 51, ES+ m/z 1282 [M+Na]+·, 1260 [M+H]+· zajedno sa nereagovanim polaznim materijalom u vremenu zadržavanja 2,19 minuta, I% = 24, i bis-Fmoc materija u vremenu zadržavanja 2,47 minuta, I% = 24, ES+ m/z 1504 [M+Na]+·, 1482 [M+H]+·. Smeša je podeljena između H2O (50 mL) i EtOAc (75 mL), slojevi su odvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa H2O (30 mL), slanim rastvorom (40 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dalo je čisti mono Fmoc proizvod 27 u obliku narandžaste pene (3,31 g, 56% prinos na bazi FmocCl, eluiranje na 53% heksan/EtOAc) nije reagovao bis-anilin 26 (2,09 g, eluiranje na 40% heksana/EtOAc) i bis-Fmoc (1,39 g, eluiranje na 68% heksan/EtOAc).
(e) (9H-Fluoren-9-il)metil(5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (28)
[0662] Trifosgen (281 mg, 0,81 mmol) je dodat mešanom rastvoru mono Fmoc proizvoda 27 (3,31 g, 2,63 mmol) i TEA (805 µL, 584 mg, 5,79 mmol) u suvom DCM (35 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,35 minuta, ES+ m/z 1340 [M+Na]+·, 1318 [M+H]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim TEA (549 µL, 398 mg, 3,95 mmol), praćeno dodavanjem veznika I16 (992 mg, 2,63 mmol). Posle 20 sati mešanja pod argonom, LC/MS je otkrio konverziju u željeni karbamat 28 za vreme zadržavanja 2,33 minuta, I% = 40, ES+ m/z 1685 [M+Na]+· zajedno sa Fmoc cepanim materijalom 29 u vremenu zadržavanja 2,19 minuta, I% = 28, ES+ m/z 1463 [M+Na]+·, 1441 [M+H]+·. Smeša je razblažena DCM (40 mL) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (2 x 30 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanjem Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dobija se čisti karbamat 28 u obliku žute pene (1,64 g, prinos 38%, eluiranje na 40% heksan/EtOAc) zajedno sa Fmoc cepanim proizvodom 29 (1,31 g, eluiranje na 20% heksan/EtOAc).
(f) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (5-((5-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (29)
[0663] Dimetilamin (9,9 mL 2,0 M rastvora u THF, 19,7 mmol) je dodat mešanom rastvoru Fmoc zaštićenog jedinjenja 28 (1,64 g, 0,99 mmol) u THF (15 mL) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja tokom 1,5 sata na sobnoj temperaturi, analiza pomoću LC/MS otkrila je završetak reakcije sa željenim proizvodom u vremenu zadržavanja 2,19 minuta, ES+ m/z 1463 [M+Na]+·, 1441 [M+H]+·, zajedno sa Fmoc cepanjem po proizvodu DMA adukt u vremenu zadržavanja 0,97 minuta. Smeša je isparena u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod koji je zatim prečišćen Isolerom™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) da bi se dobio čisti anilin 29 (eluiranje na 20% heksana/EtOAc) u obliku narandžaste pene (1,36 g, prinos 96%).
(g) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-
1
metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (30)
[0664] Trifosgen (198 mg, 0,67 mmol) je dodat mešanom rastvoru anilina 29 (2,67 g, 1,85 mmol) i piridina (329 µL, 322 mg, 4,07 mmol) u suvom DCM (25 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,22 minuta, ES+ m/z 1521 [M+Na]+·, 1499 [M+H]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim piridinom (224 µL, 220 mg, 2,78 mmol) i dibutiltin dilauratom (219 µL, 234 mg, 0,37 mmol), a zatim je dodan linker 5a (1,18 g, 1,85 mmol). Posle 16 sati mešanja pod argonom, LC/MS je otkrio potrošnju izocijanata i smanjenje intenziteta signala za linker 5a, ali ne i M2+ za željeni proizvod u vremenu zadržavanja 2,23 minuta. Smeša je razblažena DCM (30 mL) i isprana zasićenim rastvorom NH4CI (2 x 30 mL), slanim rastvorom (40 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje čisti karbamat 30 (eluiranje na 39% heksan/EtOAc) u obliku žute pene (2,40 g, prinos 62%).
(h) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((5-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroksimetil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)pentil)oksi)-2-((S)-2-(hidroksimetil)-4-(4-metoksifenil)-2,3-dihidro-1H-pirol-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (31)
[0665] Ledena sirćetna kiselina (21 mL) je dodata u mešani rastvor TBS-zaštićenog jedinjenja 30 (2,40 g, 1,14 mmol) u THF (7 mL) i H2O (7 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša 16 sati na sobnoj temperaturi, nakon čega je vremenska analiza LC/MS otkrila završetak reakcije sa željenim proizvodom posmatranim u vremenu zadržavanja 1,88 minuta, ES+ m/z 1876 [M+H]+·, 1898 [M+Na]+·. Reakciona smeša je dodavana u kapima u ohlađeni (0-5 °C) zasićeni rastvor NaHCO3(350 mL). Neutralni rastvor je ostavljen da se zagreje na sobnu temperaturu i podeljen sa EtOAc (200 mL). Vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 50 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani sa NaHCO3(2 x 60 mL), slanim rastvorom (70 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i upareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dobija se bis-alkohol 31 (eluiranje na 95,6% DCM/MeOH) u obliku žućkaste pene (2,07 g, prinos 97%).
(i) 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloksi)karbonil)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-3-nitrobenzil(11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-(4-metoksifenil)-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-(4-metoksifenil)-5-okso-11,11a-dihidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-karboksilat (32)
[0666] Cu(NCCH3)4·CF3SO3(2 mg, 5,3 µmmol) je dodat u mešani rastvor bis-OH 31 (100 mg, 53 µmmol) i rastvor Stahl aerobne oksidacije TEMPO (27 µL 0,2M rastvora u CH3CN, 5,3 µmmol) u CH3CN (1 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša u vazdušnoj atmosferi (balon) tokom 3 sata, pri čemu analiza tačke pomoću LC/MS nije otkrila očiglednu promenu u vremenu zadržavanja ili ES+. Dodati su dodatni Cu(NCCH3)4·CF3SO3(2 mg, 5,3 µmmol) i Stahlov rastvor za aerobnu oksidaciju TEMPO (27 uL 0,2M rastvora u CH3CN,, 5,3 µmmol) i reakciona smeša je mešana narednih 16 sati. Analiza pomoću LC/MS ponovo nije otkrila promenu u vremenu zadržavanja, međutim, ES+ je pokazao odsustvo početnog materijala m/z i snažno prisustvo željenog proizvoda m/z 1894 [M+Na]+·. Rastvarač je uklonjen isparavanjem u vakuumu, a rezultujući ostatak prečišćen Isolerom™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 10 g, 36 mL u minuti) dajući ciklični proizvod 32 (eluiranje na 96,2% DCM/MeOH) u obliku bele pene (91 mg, prinos 92%).
(j) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-(4-metoksifenil)-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-Il-hidroksi-7-metoksi-2-(4-metoksifenil)-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina(33)
[0667] Pd(PPh3)4(15,0 mg, 12,8 µmol) je dodat mešanom rastvoru pirolidina (59 µL, 50 mg, 0,70 mmol) i alok/alil jedinjenja 32 (240 mg, 0,13 mmol) u suvom DCM (5 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša u atmosferi argona, nakon što je mešanje tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi LC/MS otkrilo završetak
1
reakcije sa željenim proizvodom primećenim u vremenu zadržavanja 1,31 minuta, ES+ m/z 1496 [M+H]+·. Rastvarač je uklonjen isparavanjem u vakuumu, a rezultujući ostatak triturisan sa dietil etrom, sonikacija praćena dodatnim isparavanjem u vakuumu da bi se dobio sirovi amin 33 u obliku žute čvrste supstance koja je provedena do sledećeg koraka bez daljeg prečišćavanja ili analize.
(k) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-(4-metoksifenil)-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4] benzodiazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-(4-metoksifenil)-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina(34)
[0668] Rastvor estra MAL-dPEG®8-TFP (114 mg, 0,15 mmol) u suvom DCM (7 mL) dodat je mešanom uzorku amina 33 (191 mg, 0,13 mmol), piridina (26 µL, 25 mg , 0,32 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se meša pod argonom 20 sati i vremenom je počela da tamni u boji. Analiza pomoću LC/MS otkrila je stvaranje željenog proizvoda u vremenu zadržavanja 1,59 minuta (željeni m/z za M2+ nije otkriven tokom praćenja reakcije), zajedno sa nereagovanim aminom u vremenu zadržavanja 1,31 minuta. Dodati su dodatni MAL-dPEG®8-TFP estar (114 mg, 0,15 mmol), piridin (26 µL, 25 mg, 0,32 mmol) i DCM (3 mL) i smeša je ostavljena da se meša naredna šest dana. U ovom trenutku se nakon analize pomoću LC/MS stvori zadovoljavajuća količina željenog proizvoda i rastvarač se ukloni isparavanjem u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen sa Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 10 g, 36 mL u minuti, eluiranje na 82% DCM/MeOH) praćeno preparativnom HPLC dajući maleimid 34 u obliku blago žute čvrste supstance (46 mg, 13 %): LC/MS (15-minutno sprovođenje) vreme zadržavanja 6,71 minuta, ES+ m/z 1036 [M2+·+ H], 1058 [M2++ Na], 1046 [M+Na]2+; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 10,02 (br s, 2H), 8,27-8,16 (m, 1H), 8,01 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 7,90 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,72 (br s, 1H), 7,60-7,51 (m, 3H), 7,46-7,38 (m, 5H), 7,23-7,15 (m, 2H), 7,11 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 6,99 (s, 2H), 6,92 (d, 2H, J = 8,9 Hz), 6,91 (d, 2H, J = 8,9 Hz), 6,88-6,77 (m, 6H), 5,70-5,60 (m, 2H), 5,39-5,33 (m, 2H), 5,24-5,09 (m, 4H), 4,96-4,81 (m, 2H), 4,42-4,34 (m, 1H), 4,24-4,17 (m, 1H), 4,04-3,93 (m, 4H), 3,87-3,79 (m, 8H), 3,77 (s, 6H), 3,59 (t, 4H, J = 7,3 Hz), 3,52-3,46 (m, 28H), 3,40-3,26 (m, 7H, dobijeno od H2O), 3,19-3,11 (m, 2H), 2,95-2,82 (m, 2H), 2,53-2,31 (m, 4H), 2,02-1,92 (m, 1H), 1,86-1,73 (m, 4H), 1,62-1,52 (m, 2H), 1,30 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Primer 4
[0669]
1
11
(a) 4,4'-((1,3-fenilenbis(metilen))bis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitrobenzaldehid) (36)
[0670] 1,3-bis(bromometil)benzen (1,54 ml, 5,0 g, 19,1 mmol) je dodat mešanom rastvoru fenola 35 (7,5 g, 38,2 mmol), TBAI (705 mg, 1,91 mmol) i K2CO3(5,81 g, 42,0 mmol) u suvom DMF (60 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 70 °C i mešana je u atmosferi argona 2 sati, pri čemu je analiza tačkom LC/MS otkrila značajno stvaranje proizvoda u vremenu zadržavanja 1,67 minuta, ES+ m/z 519 [M+Na]+·, 497 [M+H]+·. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu i DMF je uklonjen isparavanjem u vakuumu. Dobijeni ostatak se razblaži vodom (300 mL) i narandžasti talog 36 sakupi vakuumskom filtracijom, zatim ispere sa H2O, dietil etrom i osuši u vakuumskoj peći do konstantne težine (9,18 g, prinos 97%).
(b) 4,4'-((1,3-fenilenbis(metilen))bis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitrobenzojeva kiselina) (37)
[0671] Rastvor natrijum-hlorita (8,44 g, 92,7 mmol, 80% tehničkog stepena) i natrijum-dihidrogenfosfatmonobaza (6,2 g, 51,8 mmol) u vodi (140 mL) dodat je rastvoru aldehida 36 (9,18 g, 18,5 mmol) u tetrahidrofuranu (100 mL) na sobnoj temperaturi. Vodonik-peroksid (30% m/m, 53 ml, 518 mmol) je odmah dodat kap po kap snažno mešanoj dvofaznoj smeši. Uočeni su meteor i egzoterma na 30 °C, zajedno sa promenom boje od narandžaste do bledo žute i rastvaranjem suspenzije. Reakciona smeša je ohlađena u ledenom kupatilu i zakiseljena do pH2 koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom. Reakciona smeša je zatim ekstrahovana sa EtOAc (4 x 150 mL) i kombinovana organska faza isprana slanim rastvorom (2 x 100 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu da bi se dobila sirova kiselina 37. Čvrsta supstanca je triturisana sa dietil etrom i sušena u vakuumskoj peći do konstantne težine (9,90 g, prinos> 100%). Čistoća zadovoljavajuća pomoću LC/MS (vreme zadržavanja 1,56 minuta, ES- m/z 527 [M+NA]+·).
(c) (((1,3-fenilenbis(metilen))bis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin1-il)metanon) (38)
[0672] DMF (12 kapi) je dodat mešanoj suspenziji bis-nitrobenzojeve kiseline 37 (9,90 g, 18,7 mmol) i oksalil hlorida (4,9 ml, 7,1 g, 56,3 mmol) u bezvodnom DCM (130 mL). Posle početne šumeće reakciona suspenzija je postala rastvor i smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 16 sati. Većina rastvarača je uklonjena isparavanjem u vakuumu, a koncentrovani rastvor je triturisan sa dietil etrom. Dobijeni žuti talog (LC/MS uzorkovan u MeOH dao je metil estar u vremenu zadržavanja 1,69 minuta, ES+ m/z 579 [M+Na]+·) sakupljen vakuumskom filtracijom, ispran hladnim dietil etrom i sušen 1 sat vakuum peć na 40 °C. Čvrsti kiselinski hlorid je dodat u obrocima u mešanu suspenziju (S)-(+)-2-pirolidinmetanola (4,35 g, 4,25 ml, 43,0 mmol) i TEA (13,0 ml, 9,46 g, 93,5 mmol) u DCM ( 100mL) na -40 °C (suvi led/CH3CN). Posle 1 sata mešanja, reakcija je završena kako je ocenjeno na LC/MS sa ekskluzivno željenim proizvodom u vremenu zadržavanja 1,44 minuta, ES+ m/z 717 [M+Na]+·, 695 [M+H]+·. Smeša je razblažena DCM (100 mL) i isprana sa 1N HCI (3 x 50 mL), zasićenim NaHCO3(3 x 40 mL), slanim rastvorom (70 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i rastvarač je uparen u vakuumu da bi se dati je čisti proizvod 38 kao žuta čvrsta supstanca (12,7 g, prinos 100%).
(d) (((1,3-fenilenbis(metilen))bis(oksi))bis(5-metoksi-2-nitro-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-il)metanon) (39)
[0673] TBSCI (8,27 g, 54,9 mmol) je dodat mešanom rastvoru bis-alkohola 38 (12,7 g, 18,3 mmol) i imidazola (7,47 g, 110 mmol) u suvom DCM (100 mL). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 1,5 sata, analizom LC/MS otkrivena je potpuna konverzija u željeni proizvod u vremenu zadržavanja 2,11 minuta, ES+ m/z 946 [M+Na]+·, 924 [M+H]+·. Smeša je razblažena DCM (100 mL) i isprana vodom (2 x 75 mL), slanim rastvorom (80 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i rastvarač je uparen u vakuumu dajući sirovi proizvod 39 u obliku žute pene (16,7 g, prinos 99%). Materijal dovoljno čist za prelazak u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja
(e) (((1,3-fenilenbis(metilen))bis(oksi))bis(2-amino-5-metoksi-4,1-fenilen))bis(((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-il)metanon) (40)
[0674] Neaktivirani cink (18,5 g, 282 mmol) je dodat snažno mešanom rastvoru bis-nitro jedinjenja 39 (6,50 g, 7,10 mmol) u EtOH (65 mL) i EtOAc (65 mL) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je obrađena vodom (6,5 mL), a zatim kap po kap rastvorom 5% v/v HCO2H u EtOH (130 mL). Primećena je promena boje od zelene do metalno sive i egzoterma na 37 °C. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi na sobnu temperaturu, pri čemu je analiza pomoću LC/MS otkrila potpunu konverziju u željeni proizvod u vremenu zadržavanja 2,04 minuta, ES+ m/z 885 [M+Na]+·, 863 [M+H]+·. Smeša je filtrirana kroz celite® i podloga je isprana EtOAc (200 mL). Filtrat je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(3 x 100 mL) [nega: šumeće!], slani rastvor (150 mL), osušen (MgSO4), filtriran i uparen u vakuumu dajući sirovi bis-anilin 40 u obliku tamno narandžaste pene (5,41 g, 89% prinos). Čistoća zadovoljavajuća, pa je materijal prenet u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.
(f) (9H-fluoren-9-il)metil (5-((3-((5-amino-4-((S)-2-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)metil)benzil)oksi)-2-((S)-2-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (41)
[0675] FmocCl (1,43 g, 5,50 mmol) je dodat mešanoj suspenziji bis-anilina 40 (6,34 g, 7,35 mmol) i Na2CO3 (1,95 g, 18,4 mmol) u THF (32 mL) i H2O (40 mL). Smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 2 sati, gde je analiza pomoću LC/MS otkrila željeni mono Fmoc proizvod 24 u vremenu zadržavanja 2,24 minuta, I% = 41, ES+ m/z 1108 [M+Na]+·, 1086 [M+H]+· zajedno sa nereagovanim polaznim materijalom u vremenu zadržavanja 2,03 minuta, I% = 24, i bis-Fmoc materija u vremenu zadržavanja 2,39 minuta, I% = 40, ES+ m/z 1330 [M+Na]+·, 1308 [M+H]+·. Smeša je podeljena između H2O (50 mL) i EtOAc (50 mL), slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran sa H2O (30 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušen (MgSO4), filtriran i isparen u vakuumu da bi se dajte sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heptan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dalo je čisti mono Fmoc proizvod 41 u obliku narandžaste pene (2,40 g, 40% prinos na bazi FmocCl, eluiranje na 30% heptan/EtOAc) nije reagovao bis-anilin 40 (1,72 g, eluiranje na 100% EtOAc) i bis-Fmoc (1,95 g, eluiranje na 69% heptan/EtOAc).
(g) (9H-fluoren-9-il)metil(5-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)metil)benzil)oksi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (42)
[0676] Trifosgen (236 mg, 0,80 mmol) je dodat mešanom rastvoru mono Fmoc proizvoda 41 (2,40 g, 2,21 mmol) i TEA (676 µL, 491 mg, 4,86 mmol) u suvom DCM (30 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,27 minuta, ES+ m/z 1166 [M+Na]+·, 1144 [M+H]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim TEA (461 µL, 335 mg, 3,32 mmol), praćeno dodavanjem veznika I16 (835 mg, 2,21 mmol). Posle 2,5 sata mešanja pod argonom, LC/MS je pokazao zadovoljavajuću konverziju u karbamat 9 na vreme zadržavanja 2,24 minuta, ES+ m/z 1511 [M+Na]+·, 1489 [M+H]+·. Smeša je razblažena DCM (50 mL) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (2 x 40 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heptan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje čisti karbamat 42 (eluiranje na 38% heptan/EtOAc) u obliku žute pene (2,40 g, prinos 73%).
(h) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (5-((3-((S-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)metil)benzil)oksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (43)
[0677] Dimetilamin (16,1 mL 2,0 M rastvora u THF, 32,2 mmol) je dodat mešanom rastvoru Fmoc zaštićenog jedinjenja 42 (2,40 g, 1,61 mmol) u THF (20 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 1 sata mešanja na sobnoj temperaturi, analiza pomoću LC/MS otkrila je završetak reakcije sa željenim proizvodom u vremenu zadržavanja 2,07 minuta, ES+ m/z 1289 [M+Na]+·, 1267 [M+NA]+·, zajedno sa Fmoc cepanjem nusproizvod u vremenu zadržavanja 1,74 minuta i njegov DMA adukt u vremenu zadržavanja 0,95 minuta. Smeša je isparena u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod koji je zatim prečišćen Isolerom™ (heptan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) da bi se dobio čisti anilin 43 (eluiranje na 100% EtOAc) u obliku pene (1,77 g, prinos 87%).
(i) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)metil)benzil)oksi)-2-((S)-2-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (44)
[0678] Trifosgen (150 mg, 0,50 mmol) je dodat mešanom rastvoru anilina 43 (1,77 g, 1,40 mmol) i piridina (249 µL, 243 mg, 3,08 mmol) u suvom DCM (20 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,11 minuta, ES+ m/z 1347 [M+Na]+·, 1325 [M+NA]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim piridinom (170 µL, 166 mg, 2,10 mmol) i dibutiltin dilauratom (165 µL, 177 mg, 0,28 mmol), a zatim je dodan linker 5a (891 mg, 1,40 mmol). Posle 24 sata mešanja pod argonom, LC/MS je pokazao zadovoljavajuću konverziju u karbamat 44 na vreme zadržavanja 2,16 minuta, ES+ m/z 1952 [M+Na]+·, 1930 [M+NA]+·. Smeša je razblažena DCM (40 mL) i isprana zasićenim rastvorom NH4CI (2 x 35 mL), slanim rastvorom (30 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heksan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje čisti karbamat 44 (eluiranje na 32% heksan/EtOAc) u obliku bele čvrste supstance (2,16 g, prinos 80%).
(j) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-((3-((5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroksimethyi)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)metil)benzil)oksi)-2-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (45)
[0679] Ledena sirćetna kiselina (18 mL) je dodata u mešani rastvor TBS-zaštićenog jedinjenja 44 (2,16 g, 1,12 mmol) u THF (6 mL) i H2O (6 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša 5 sati na sobnoj temperaturi, nakon čega je vremenska analiza LC/MS otkrila završetak reakcije sa željenim proizvodom posmatranim u vremenu zadržavanja 1,77 minuta, ES+ m/z 1702 [M+NA]+·, 1724 [M+Na]+·. Reakciona smeša je dodavana u kapima u ohlađeni (0-5°C) zasićeni rastvor NaHCO3(300 mL). Neutralni rastvor je ostavljen da se zagreje na sobnu temperaturu i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 50 mL), kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (60 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da se dobije sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dobija se bis-alkohol 45 (eluiranje na 94,8% DCM/MeOH) u obliku bele pene (1,86 g, prinos 98%).
(k) 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloksi)karbonil)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-3-nitrobenzil(11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-
11
heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)metil)benzil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-karboksilat (46)
[0680] 45% IBX (263 mg, 0,42 mmol) je dodato u mešani rastvor bis-OH 45 (300 mg, 0,18 mmol) u suvom DMSO (4 mL). Smeša je zagrevana na 30 °C u atmosferi argona i napredak reakcije praćen je LC/MS. Posle 24 sata mešanja, dodat je dodatni IBKS (2 x 22 mg, 2 x 36 µmol) i smeša je mešana još 28 sata. U ovom trenutku analiza pomoću LC/MS otkrila je stvaranje razlučenog proizvoda u vremenu zadržavanja 1,72 minuta, ES+ m/z 1698 [M+NA]+·,1720 [M+Na]+·. Reakciona smeša je dodavana kap po kap zasićenom vodenom rastvoru NaHCO3(100 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 40 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (40 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 mL u minuti) dobije se ciklizovani proizvod 46 (eluiranje na 96,5% DCM/MeOH) u obliku bele pene (219 mg, prinos 73%).
(I) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11aheksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)metil)benzil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina(47)
[0681] Pd(PPh3)4(13,0 mg, 11,1 µmol) je dodat mešanom rastvoru pirolidina (51 µL, 43 mg, 0,61 mmol) i alok/alil jedinjenja 46 (189 mg, 0,11 mmol) u suvom DCM (2 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša u atmosferi argona tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi gde LC/MS otkriva završetak reakcije sa željenim proizvodom primećenim u vremenu zadržavanja 1,13 minuta, ES+ m/z 1322 [M+H]+·. Rastvarač je uklonjen isparavanjem u vakuumu, a rezultujući ostatak triturisan sa dietil etrom praćen dodatnim isparavanjem u vakuumu da bi se dobio sirovi amin 47 u obliku čvrste supstance koja je provedena do sledećeg koraka bez daljeg prečišćavanja ili analize.
(m) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((3-((((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)metil)benzil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina(48)
[0682] Rastvor estra MAL-dPEG®8-TFP (123 mg, 0,16 mmol) u suvom DCM (2 mL) dodat je mešanom uzorku amina 47 (147 mg, 0,11 mmol), piridina (22 µL, 22 mg , 0,28 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se meša pod argonom 20 sati i vremenom je počela da tamni u boji. Analiza pomoću LC/MS otkrila je stvaranje željenog proizvoda u vremenu zadržavanja 1,37 minuta, ES+ m/z 1896 [M+H]+·, 1918 [M+Na]+· zajedno sa tragom nereagovanog amina u vremenu zadržavanja 1,13 minuta. Značajno razlaganje proizvoda i rastvarača uklonjeno je isparavanjem u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC dajući maleimid 48 u obliku bele čvrste supstance (75 mg, 36%): LC/MS (trčanje od 15 minuta), vreme zadržavanja 5,48 minuta, ES+ m/z 1896 [M+NA]+·, 1918 [M+Na]+·; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 9,92 (br s, 2H), 8,20-8,14 (m, 1H), 8,01 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,73 (br s, 1H), 7,62-7,36 (m, 8H), 7,23-7,15 (m, 2H), 7,11 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,00 (s, 2H), 6,99 (s, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,62-6,51 (m, 2H), 5,53-5,41 (m, 3H), 5,35-5,85 (m, 9H), 4,41-4,32 (m, 1H), 4,23-4,16 (m, 1H), 4,00-3,90 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,61-3,58 (m, 4H), 3,52-3,45 (m, 28H), 3,42-3,23 (m, 9H), 3,18-3,12 (m, 2H), 2,50-2,35 (m, 2H), 2,34-2,31 (m, 2H), 2,10-1,8 (m, 9H), 1,28 (d, 1H, J = 7,1 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Primer 5
[0683]
(a) (9H-fluoren-9-il)metil(5-(3-(5-amino-4-((S)-2-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (50)
[0684] FmocCl (1,58 g, 6,09 mmol) je dodat mešanoj smeši bis-anilina I11 (6,50 g, 8,12 mmol) i Na2CO3(2,15 g, 20,3 mmol) u THF (35 mL) i H2O (35 mL). Smeša je ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 2,5 sati, gde je analiza pomoću LC/MS otkrila željeni mono Fmoc proizvod 3 u vremenu zadržavanja 2,19 minuta, I% = 49, ES+ m/z 1046 [M+Na]+·, 1024 [M+H]+· zajedno sa nereagovanim polaznim materijalom u vremenu
11
zadržavanja 1,96 minuta, I% = 19, i bis-Fmoc materija u vremenu zadržavanja 2,34 minuta, I% = 32, ES+ m/z 1270 [M+Na]+·, 1246 [M+H]+·. Smeša je podeljena između H2O (50 mL) i EtOAc (50 mL), slojevi su odvojeni i vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc (2 x 25 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa H2O (30 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heptan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dalo je čisti mono Fmoc proizvod 50 u obliku narandžaste pene (3,61 g, 58% prinos na bazi FmocCl, eluiranje na 61% heptan/EtOAc) nije reagovao bis-anilin 2 (2,04 g, eluiranje na 100% EtOAc) i bis-Fmoc (1,71 g, eluiranje na 30% heptan/EtOAc).
(b) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (5-(3-(5-((((9H-fluoren-9-il)metoksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (51)
[0685] Trifosgen (377 mg, 1,27 mmol) je dodat mešanom rastvoru mono Fmoc proizvoda 50 (3,61g, 3,53 mmol) i TEA (1,08 mL, 784 mg, 7,70 mmol) u suvom DCM (40 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,23 minuta, ES+ m/z 1104 [M+Na]+·, 1082 [M+NA]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim TEA (737 µL, 535 mg, 5,30 mmol), praćeno dodavanjem veznika I16 (1,33 g, 3,53 mmol). Posle 2,5 sata mešanja pod argonom, LC/MS je pokazao zadovoljavajuću konverziju u karbamat 51 na vreme zadržavanja 2,21 minuta, ES+ m/z 1449 [M+Na]+·, 1427 [M+NA]+·. Smeša je razblažena DCM (50 mL) i isprana zasićenim vodenim rastvorom NH4CI (2 x 30 mL), H2O (30 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heptan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje čisti karbamat 51 (eluiranje na 40% heksana/EtOAc) u obliku žute pene (3,34 g, prinos 66%).
(c) 4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil (5-(3-(5-amino-4-((S)-2-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamat (52)
[0686] Dimetilamin (23,4 mL 2,0 M rastvora u THF, 46,8 mmol) je dodat mešanom rastvoru Fmoc zaštićenog jedinjenja 51 (3,34 g, 2,34 mmol) u THF (15 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 1 sata pod argonom mešanja na sobnoj temperaturi, analiza pomoću LC/MS otkrila je završetak reakcije sa željenim proizvodom u vremenu zadržavanja 2,02 minuta, ES+ m/z 1227 [M+Na]+·, 1205 [M+NA]+·, zajedno sa Fmoc cepanjem nusproizvod u vremenu zadržavanja 1,72 minuta i njegov DMA adukt u vremenu zadržavanja 0,93 minuta. Smeša je isparena u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod koji je zatim prečišćen Isolerom™ (heptan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) da bi se dobio čisti anilin 52 (eluiranje na 100% EtOAc) u obliku narandžaste pene (2,51 g, prinos 89%).
(d) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(((tertbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(((tercbutildimetilsilil)oksi)metil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (53)
[0687] Trifosgen (222 mg, 0,75 mmol) je dodat mešanom rastvoru anilina 52 (2,51 g, 2,08 mmol) i piridina (370 µL, 362 mg, 4,58 mmol) u suvom DCM (30 mL) na sobnoj temperaturi. Posle 10 minuta mešanja pod argonom, analiza pomoću LC/MS otkrila je potpunu konverziju u izocijanat (uzorkovan u MeOH da bi se dobio metil karbamat, vreme zadržavanja 2,06 minuta, ES+ m/z 1285 [M+Na]+·, 1263 [M+NA]+·). Smeša je tretirana sa dodatnim piridinom (252 µL, 247 mg, 3,12 mmol) i dibutiltin dilauratom (247 µL, 263 mg, 0,42 mmol), a zatim je dodan linker 5a (1,33 g, 2,08 mmol). Posle 28 sata mešanja pod argonom, LC/MS je pokazao zadovoljavajuću konverziju u karbamat 53 (vreme zadržavanja 2,12 minuta, ES+ m/z 1890 [M+Na]+·, 1868 [M+NA]+·). Smeša je razblažena DCM (40 mL) i isprana zasićenim rastvorom NH4CI (3 x 30 mL), slanim rastvorom (50 mL), osušena (MgSO4), filtrirana i uparena u vakuumu dajući sirovi proizvod. Prečišćavanje pomoću Isolera™ (heptan/EtOAc, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) daje čisti karbamat 53 (eluiranje na 37% heptan/EtOAc) u obliku žute pene (3,12 g, prinos 80%).
(e) Alil(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((5-(3-(5-((((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)amino)-4-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-2-metoksifenoksi)propoksi)-2-((S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karbonil)-4-metoksifenil)karbamoil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-karboksilat (54)
11
[0688] Ledena sirćetna kiselina (24 mL) je dodata u mešani rastvor TBS-zaštićenog jedinjenja 53 (3,12 g, 1,67 mmol) u THF (8 mL) i H2O (8 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša 18 sati na sobnoj temperaturi, nakon čega je vremenska analiza LC/MS otkrila završetak reakcije sa željenim proizvodom posmatranim u vremenu zadržavanja 1,72 minuta, ES+ m/z 1640 [M+NA]+·, 1662 [M+Na]+·. Reakciona smeša je dodavana u kapima u ohlađeni (0-5°C) zasićeni rastvor NaHCO3(450 mL). Neutralni rastvor je ostavljen da se zagreje na sobnu temperaturu i ekstrahovan sa EtOAc (3 x 80 mL), kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (80 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da se dobije sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 100 g, 100 mL u minuti) dobija se bis-alkohol 54 (eluiranje na 96,6% DCM/MeOH) u obliku bele pene (2,05 g, prinos 75%).
(f) 4-(((2S,3R,4S,5S,6S)-6-((aliloksi)karbonil)-3,4,5-tris(((aliloksi)karbonil)oksi)tetrahidro-2H-piran-2-il)oksi)-3-nitrobenzil(11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(((aliloksi)karbonil)amino)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11aheksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10(5H)-karboksilat (55)
[0689] 45% IBX (273 mg, 0,44 mmol) je dodato u mešani rastvor bis-OH 54 (300 mg, 0,18 mmol) u suvom DMSO (4 mL). Smeša je zagrevana na 30 °C u atmosferi argona i napredak reakcije praćen je LC/MS. Posle 24 sata mešanja, dodat je dodatni IBX (26 mg, 42 µmol) i smeša je mešana još 24 sata. U ovom trenutku analiza pomoću LC/MS otkrila je pretežno jedan vrh koji odgovara željenom proizvodu u vremenu zadržavanja 1,68 minuta, ES+ m/z 1658 [M+Na]+·. Reakciona smeša je dodavana kap po kap zasićenom vodenom rastvoru NaHCO3(100 mL) i ekstrahovana sa DCM (2 x 40 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (40 mL), osušeni (MgSO4), filtrirani i ispareni u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod. Prečišćavanjem pomoću Isolera™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 25 g, 75 mL u minuti) dobije se ciklizovani proizvod 55 (eluiranje na 97% DCM/MeOH) u obliku bele pene (256 mg, prinos 87%).
(g) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11aheksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina(56)
[0690] Pd(PPh3)4(18,1 mg, 15,7 µmol) je dodat mešanom rastvoru pirolidina (72 µL, 62 mg, 0,86 mmol) i alok/alil jedinjenja 55 (256 mg, 0,16 mmol) u suvom DCM (2 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša u atmosferi argona gde je počeo da se stvara talog. Nakon mešanja tokom 30 minuta na sobnoj temperaturi pomoću LC/MS otkriveno je da je reakcija završena sa željenim proizvodom posmatranim u vremenu zadržavanja 1,07 minuta, ES+ m/z 1260 [M+NA]+. Rastvarač je uklonjen isparavanjem u vakuumu, a rezultujući ostatak triturisan sa dietil etrom praćen dodatnim isparavanjem u vakuumu da bi se dobio sirovi amin 56 u obliku čvrste supstance koja je provedena do sledećeg koraka bez daljeg prečišćavanja ili analize.
(h) (2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((2S,5S)-37-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)-5-izopropil-2-metil-4,7,35-triokso-10,13,16,19,22,25,28,31-oktaoksa-3,6,34-triazaheptatriakontanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-5-okso-2,3,5,10,11,11aheksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina(57)
[0691] Rastvor estra MAL-dPEG®8-TFP (140 mg, 0,16 mmol) u suvom DCM (2 mL) dodat je mešanom uzorku amina 56 (198 mg, 0,16 mmol), piridina (32 µL, 31 mg , 0,39 mmol) i DMF (0,25 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša pod argonom 20 sati i vremenom je počela da tamni u boji. Analiza pomoću LC/MS otkrila je stvaranje željenog proizvoda u vremenu zadržavanja 1,31 minuta, ES+ m/z 1834 [M+NA]+·, 1857 [M+Na]+, zajedno sa nereagovanim aminom u vremenu zadržavanja 1,07 minuta. Dodati su dodatni MAL-dPEG®8-TFP estar (70 mg, 0,09 mmol), piridin (16 µL, 16 mg, 0,2 mmol) i DCM (2 mL) i smeša je ostavljena da se meša naredna 24 sata. Zapremina rastvarača je zatim smanjena za 50% isparavanjem u vakuumu, u ovom trenutku se zadovoljavajuća količina željenog proizvoda stvorila analizom LC/MS i rastvarač je potpuno uklonjen isparavanjem u vakuumu. Sirovi proizvod je prečišćen preparativnom HPLC dajući maleimid 56 u obliku bele čvrste supstance (48 mg, 17%): LC/MS (trčanje od 15 minuta), vreme zadržavanja 5,22 minuta, ES+ m/z 1834 [M+NA]+, 1856 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 9,99 (br s, 2H), 8,24-8,17 (m, 1H), 8,01 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 7,88 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,74 (br s, 1H), 7,64-7,50 (m, 3H), 7,44-7,34 (m, 1H), 7,23-7,13 (m, 2H), 7,06 (s, 2H), 7,00 (s, 2H), 6,86 (s, 1H), 6,79 (s, 1H), 6,59-6,47 (m,
11
2H), 5,52-5,37 (m, 3H), 5,32-5,02 (m, 4H), 4,98-4,84 (m, 2H), 4,44-4,34 (m, 1H), 4,24-4,19 (m, 1H), 4,17-3,96 (m, 5H), 3,92-3,84 (m, 1H), 3,77 (s, 6H), 3,60 (t, 4H, J = 7,3 Hz), 3,54-3,45 (m, 29H), 3,40-3,24 (m, 8H), 3,19-3,12 (m, 2H), 2,57-2,35 (m, 2H), 2,34-2,30 (m, 2H), 2,25-2,12 (m, 2H), 2,10-1,78 (m, 9H), 1,30 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 0,87 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,7 Hz).
Primer 6
[0692]
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-(3-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanamido)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metilen-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)propoksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metilen-5-okso-2,3,5,10,11,11a-heksahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-10-karbonil)oksi)metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina(58)
[0693] Rastvor N-hidroksisukcinimid estra 6-maleimidoheksanske kiseline (51 mg, 0,17 mmol) u suvom DCM (2 mL) dodat je mešanom uzorku amina 9 (141 mg, 0,11 mmol), piridina (22 µL, 21 mg , 0,33 mmol) i DMF (0,25 mL). Reakciona smeša je ostavljena da se meša pod argonom 20 sati i vremenom je počela da tamni u boji. Analiza pomoću LC-MS otkrila je stvaranje željenog proizvoda u vremenu zadržavanja 1,42 minuta, ES-m/z 1474 [M- H]+·, zajedno sa malom količinom nereagovanog amina u vremenu zadržavanja 1,12 minuta. Rastvarač je uklonjen isparavanjem u vakuumu i rezultujući ostatak je prečišćen Isolerom™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 10 g, 36 mL u minuti, eluiranje na 80% DCM/MeOH) dajući 90 mg obogaćenog 58. Daljim prečišćavanjem preparativnom HPLC dobije se maleimid 58, u obliku bele čvrste supstance (26 mg, 16%): LC-MS (trčanje od 15 minuta), vreme zadržavanja 5,85 minuta, ES+ m/z 1477 [M+NA]+, 1499 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ10,0 (br s, 2H), 8,16 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,74 (br s, 1H), 7,62-7,50 (m, 3H), 7,39 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,22-7,11 (m, 2H), 7,06 (s, 2H), 7,00 (s, 2H), 6,89 (s, 2H), 6,84-6,78 (m, 1H), 6,68-6,56 (m, 2H), 5,45-5,30 (m, 3H), 5,29-5,01 (m, 9H), 4,98-4,85 (m, 2H), 4,42-4,33 (m, 1H), 4,24-3,92 (m, 9H), 3,77 (s, 6H), 3,44 (t, 2H, J = 9,5 Hz), 3,39-3,30 (m, 2H), 2,93-2,80 (m, 2H), 2,57-2,35 (m, 2H), 2,23-2,06 (m, 4H) 2,03-1,90 (m, 1H), 1,48 (p, 4H, J = 7,3 Hz), 1,30 (d, 3H, J = 7,0 Hz), 1,18 (p, 2H, J = 7,6 Hz), 0,86 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,83 (d, 3H, J = 6,7 Hz).
Primer 7
[0694]
11
(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-((((11S,11aS)-8-((5-(((11S,11aS)-10-(((4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-diokso-2,5-dihidro-1H-pirol-1-il)heksanamido)-3-metilbutanamido)propanamido)benzil)oksi)karbonil)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-8-il)oksi)pentil)oksi)-11-hidroksi-7-metoksi-2-metil-5-okso-5,10,11,11a-tetrahidro-1H-pirolo[2,1-c][1,4benzodiazepin-10-karbonil)oksi) metil)-2-nitrofenoksi)-3,4,5-trihidroksitetrahidro-2H-piran-2-karboksilna kiselina(59)
[0695] Rastvor N-hidroksisukcinimid estra 6-maleimidoheksanske kiseline (42 mg, 0,14 mmol) u suvom DCM (2 mL) dodat je mešanom uzorku amina 21 (118 mg, 0,09 mmol) i piridina (18 µL, 18 mg , 0,23 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se meša pod argonom 24 sati i vremenom je počela da tamni u boji. Analiza pomoću LC-MS otkrila je stvaranje željenog proizvoda u vremenu zadržavanja 1,45 minuta, ES- m/z 1502 [M-H]+, zajedno sa malom količinom nereagovanog amina u vremenu zadržavanja 1,15 minuta. Rastvarač je uklonjen isparavanjem u vakuumu i rezultujući ostatak je prečišćen Isolerom™ (DCM/MeOH, SNAP Ultra 10 g, 36 mL u minuti, eluiranje na 66% DCM/MeOH) dajući 76 mg obogaćenog 59. Daljim prečišćavanjem preparativnom HPLC dobije se maleimid 59, u obliku bele čvrste supstance (27 mg, 20%): LC-MS (trčanje od 15 minuta), vreme zadržavanja 6,13 minuta, ES+ m/z 1505 [M+NA]+, 1527 [M+Na]+; 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 9,95 (br s, 2H), 8,15 (d, 1H, J = 6,9 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 7,71 (br s, 1H), 7,62-7,48 (m, 3H), 7,39 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,21-7,12 (m, 2H), 7,06 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 6,99 (s, 2H), 6,82 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 6,72-6,65 (m, 2H), 6,62 (s, 2H), 5,63-5,50 (m, 2H), 5,48-5,40 (m, 2H), 5,31-5,08 (m, 6H), 4,98-4,82 (m, 3H), 4,43-4,34 (m, 1H), 4,21-4,14 (m, 1H), 4,03-3,86 (m, 4H), 3,79 (s x 2, 6H), 3,72-3,61 (m, 2H), 3,38-3,35 (m, 2H), 2,98-2,85 (m, 2H), 2,59-2,42 (m, 2H), 2,23-2,06 (m, 2H), 2,00-1,88 (m, 1H), 1,82-1,68 (m, 4H), 1,74 (s, 6H), 1,61-1,41 (m, 8H), 1,22-1,14 (m, 2H), 1,28 (d, 1H, J = 7,0 Hz), 0,86 (d, 3H, J = 6,7 Hz), 0,82 (d, 3H, J = 6,8 Hz).
Primer 8 - Konjugacija
Konjugat Tratuzumab-10 (KonjA)
[0696] 50 mM rastvor DL-ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent/antitelo, 16 mikromola, 320 µL) u 12,0 mL rastvora antitela, trastuzumaba (30 mg, 200 nanomola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) i konačnu koncentraciju antitela od 2,5 mg/mL. Smeša za redukciju je ostavljena da reaguje na sobnoj temperaturi 4-5 sati (ili dok UHPLC ne primeti potpunu redukciju) u orbitalnoj potresalici uz blago mućkanje (50 o/min). Redukovano antitelo je izmenjeno puferom, centrifugiranjem u spin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodan je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 20 molarnih ekvivalenta/antitelo, 4 mikromola, 80 µL) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago (50 o/min) mućkanje antitela koncentracija od 1,5 mg/mL (ili više dodatih DHAA i reakcija ostaje duže dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cisteintiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Smeša za reoksidaciju je zatim sterilno filtrirana i razblažena u konjugacionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM EDTA za krajnju koncentraciju antitela od 1,0 mg/mL. Jedinjenje 10 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta/antitelo, 1 mikromola, u 1,5 mL DMSO)
11
u 13,5 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (15 mg, 100 nanomola) za 10% (v/v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mešan 1,5 sata na sobnoj temperaturi, a zatim je konjugacija ugašena dodavanjem N-acetil cisteina (15 mikromola, 150 µL na 100 mM), zatim prečišćena centrifugiranjem centrifugom pomoću spin filtera Amicon Ultracell 50 kDa MVCO od 15 mL, sterilno filtrirano i analizirano.
[0697] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku KonjA na 280 nm i 330 nm (za Jedinjenje 10) pokazuje nekonjugovanu svetlost lanaca i smeša nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za jedan molekul jedinjenja 10, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 1,89 molekula jedinjenja 10 po antitelu.
[0698] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjA na 280 nm pokazuju monomernu čistoću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjA na 1,45 mg/ml u 8,5 ml, dobijena masa KonjA je 12,3 mg (prinos 82%).
Konjugat Tratuzumab-22 (KonjB)
[0699] 50 mM rastvor DL-ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent/antitelo, 42,7 mikromola, 853 µL) u 20,0 mL rastvora antitela, trastuzumaba (80 mg, 533 nanomola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) i konačnu koncentraciju antitela od 4,0 mg/mL. Smeša za redukciju je ostavljena da reaguje na sobnoj temperaturi 4-5 sati (ili dok UHPLC ne primeti potpunu redukciju) u orbitalnoj potresalici uz blago mućkanje (60 o/min). Redukovano antitelo je izmenjeno puferom, centrifugiranjem u spin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodan je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 20 molarnih ekvivalenta/antitelo, 10,7 mikromola, 213 µL) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago (50 o/min) mućkanje antitela koncentracija od 1,5 mg/mL (ili više dodatih DHAA i reakcija ostaje duže dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Smeša za reoksidaciju je zatim sterilno filtrirana i razblažena u konjugacionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM EDTA za krajnju koncentraciju antitela od 1,0 mg/mL. Jedinjenje 22 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta/antitelo, 1,33 mikromola, u 2,0 mL DMSO) u 18,0 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (20 mg, 133 nanomola) za 10% (v/v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mešan 1,5 sata na sobnoj temperaturi, a zatim je konjugacija ugašena dodavanjem N-acetil cisteina (20 mikromola, 200 µL na 100 mM), zatim prečišćena centrifugiranjem centrifugom pomoću spin filtera Amicon Ultracell 50 kDa MWCO od 15 mL, sterilno filtrirano i analizirano.
[0700] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku KonjB na 280 nm i 330 nm (za Jedinjenje 22) pokazuje nekonjugovanu svetlost lanaca i smeša nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za jedan molekul Jedinjenja 22, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 1,71 molekula jedinjenja 22 po antitelu.
[0701] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjB na 280 nm pokazuju monomernu čistoću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjB na 1,39 mg/ml u 10,3 ml, dobijena masa KonjB je 14,3 mg (prinos 72%).
Konjugat Tratuzumab-34 (KonjC)
[0702] 50 mM rastvor DL-ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent/antitelo, 42,7 mikromola, 853 µL) u 20,0 mL rastvora antitela, trastuzumaba (80 mg, 533 nanomola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) i konačnu koncentraciju antitela od 4,0 mg/mL. Smeša za redukciju je ostavljena da reaguje na sobnoj temperaturi 4-5 sati (ili dok UHPLC ne primeti potpunu redukciju) u orbitalnoj potresalici uz blago mućkanje (60 o/min). Redukovano antitelo je izmenjeno puferom, centrifugiranjem u spin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodan je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 20 molarnih ekvivalenta/antitelo, 10,7 mikromola, 213 µL) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago (50 o/min) mućkanje antitela koncentracija od 1,5 mg/mL (ili više dodatih DHAA i reakcija ostaje duže dok UHPLC ne primeti
12
potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Smeša za reoksidaciju je zatim sterilno filtrirana i razblažena u konjugacionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM EDTA za krajnju koncentraciju antitela od 1,0 mg/mL. Jedinjenje 34 je dodato kao rastvor DMSO (10 molarnih ekvivalenta/antitelo, 1,33 mikromola, u 2,0 mL DMSO) u 18,0 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (20 mg, 133 nanomola) za 10% (v/v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mešan 1,5 sata na sobnoj temperaturi, a zatim je konjugacija ugašena dodavanjem N-acetil cisteina (20 mikromola, 200 µL na 100 mM), zatim prečišćena centrifugiranjem centrifugom pomoću spin filtera Amicon Ultracell 50 kDa MWCO od 15 mL, spin filter i dalje prečišćen na AKTA™ Start FPLC upotrebom GE Healthcare HiLoad™ 26/600 kolone upakovane u Superdex 200 PG, eluiranje sa 2,5 mL/min PBS. Frakcije koje odgovaraju vrhuncu KonjC monomera su sakupljene, koncentrovane upotrebom 15 mL Amicon Ultracell 50KDa MWCO spin filtera, sterilno filtrirane i analizirane.
[0703] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku KonjC na 280 nm i 330 nm (za Jedinjenje 34) pokazuje nekonjugovanu svetlost lanaca i smeša nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za jedan molekul Jedinjenja 34, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 1,66 molekula jedinjenja 34 po antitelu.
[0704] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjC na 280 nm pokazuju monomernu čistoću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjC na 1,36 mg/ml u 10,4 ml, dobijena masa KonjC je 14,1 mg (prinos 71%).
Konjugat Tratuzumab-10 (KonjD)
[0705] 50 mM rastvor DL-ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (150 molarni ekvivalent/antitelo, 40 mikromola, 800 µL) u 16,0 mL rastvora antitela, trastuzumaba (40 mg, 267 nanomola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) i konačnu koncentraciju antitela od 2,5 mg/mL. Smeša za redukciju je ostavljena da reaguje na sobnoj temperaturi 4 sata (ili dok UHPLC ne primeti potpunu redukciju) u orbitalnoj potresalici uz blago mućkanje (50 o/min). Redukovani rastvor antitela je zamenjen puferom (da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa), centrifugiranjem u spin, u pufer za konjugaciju koji sadrži PBS i 1 mM EDTA za konačnu koncentraciju antitela od 2,5 mg/mL. Jedinjenje 10 je dodato kao rastvor DMSO (25 molarnih ekvivalenta/antitelo, 1,67 mikromola, u 0,4 mL DMSO) u 3,6 mL ovog redukovanog rastvora antitela (10 mg, 67 nanomola) za 10% (v/v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mešan 1,5 sata na sobnoj temperaturi, a zatim je konjugacija ugašena dodavanjem N-acetil cisteina (8,33 mikromola, 83,3 µL na 100 mM), zatim prečišćen na AKTA™ Start FPLC pomoću GE Healthcare HiLoad™ 26/600 kolona nabijena Superdex 200 PG, eluiranje sa 2,5 ml/min PBS. Frakcije koje odgovaraju vrhuncu KonjD monomera su sakupljene, koncentrovane upotrebom 15 mL Amicon Ultracell 50KDa MWCO spin filtera, sterilno filtrirane i analizirane.
[0706] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku KonjD na 280 nm i 330 nm (za Jedinjenje 10) pokazuje smešu nekonjugovanih lakih lanaca, lakih lanaca vezanih za jedan molekul jedinjenja 10, nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za do tri molekula Jedinjenja 10, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 7,47 molekula Jedinjenja 10 po antitelu.
[0707] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjD na 280 nm pokazuju monomernu čistoću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjD na 1,90 mg/ml u 4,4 ml, dobijena masa KonjD je 8,4 mg (prinos 84%).
Konjugat Tratuzumab-22 (KonjE)
[0708] 50 mM rastvor DL-ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (150 molarni ekvivalent/antitelo, 40 mikromola, 800 mL) u 16,0 mL rastvora antitela, trastuzumaba (40 mg, 267 nanomola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) i konačnu koncentraciju antitela od 2,5 mg/mL. Smeša za redukciju je ostavljena da reaguje na sobnoj temperaturi 4 sata (ili dok UHPLC ne primeti potpunu redukciju) u orbitalnoj potresalici uz blago mućkanje (50 o/min).
[0709] Redukovani rastvor antitela je zamenjen puferom (da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa), centrifugiranjem u spin, u pufer za konjugaciju koji sadrži PBS i 1 mM EDTA za konačnu koncentraciju antitela od 2,5 mg/mL. Jedinjenje 22 je dodato kao rastvor DMSO (25 molarnih ekvivalenta/antitelo, 1,67 mikromola, u 0,4 mL DMSO) u 3,6 mL ovog redukovanog rastvora antitela (10 mg, 67 nanomola) za 10% (v/v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mešan 1,5 sata na sobnoj temperaturi, a zatim je konjugacija ugašena dodavanjem N-acetil cisteina (8,33 mikromola, 83,3 mL na 100 mM), zatim prečišćen na AKTA™ Start FPLC pomoću GE Healthcare HiLoad™ 26/600 kolona nabijena Superdex 200 PG, eluiranje sa 2,5 ml/min PBS. Frakcije koje odgovaraju vrhuncu KonjE monomera su sakupljene, koncentrovane upotrebom 15 mL Amicon Ultracell 50KDa MWCO spin filtera, sterilno filtrirane i analizirane.
[0710] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku KonjE na 280 nm i 330 nm (za Jedinjenje 22) pokazuje smešu nekonjugovanih lakih lanaca, lakih lanaca vezanih za jedan molekul jedinjenja 22, nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za do tri molekula Jedinjenja 22, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 7,39 molekula Jedinjenja 22 po antitelu.
[0711] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjE na 280 nm pokazuju monomernu čistoću od 96%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjE na 1,93 mg/ml u 4,6 ml, dobijena masa KonjE je 8,9 mg (prinos 89%).
Konjugat Tratuzumab-34 (KonjF)
[0712] 50 mM rastvor DL-ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (150 molarni ekvivalent/antitelo, 10 mikromola, 200 µL) u 4,0 mL rastvora antitela (10 mg, 66,7 nanomola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA) i konačnu koncentraciju antitela od 2,5 mg/mL. Smeša za redukciju je ostavljena da reaguje na sobnoj temperaturi 4 sata (ili dok UHPLC ne primeti potpunu redukciju) u orbitalnoj potresalici uz blago mućkanje (50 o/min). Redukovani rastvor antitela je zamenjen puferom (da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa), centrifugiranjem u spin, u pufer za konjugaciju koji sadrži PBS i 1 mM EDTA za konačnu koncentraciju antitela od 2,5 mg/mL. Jedinjenje 34 je dodato kao rastvor DMSO (25 molarnih ekvivalenta/antitelo, 1,67 mikromola, u 0,4 mL DMSO) u 3,6 mL ovog redukovanog rastvora antitela (10 mg, 67 nanomola) za 10% (v/v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mešan 0,75 sata na sobnoj temperaturi, a zatim je konjugacija ugašena dodavanjem N-acetil cisteina (8,33 mikromola, 83,3 µL na 100 mM), zatim prečišćen na AKTA™ Start FPLC pomoću GE Healthcare HiLoad™ 26/600 kolona nabijena Superdex 200 PG, eluiranje sa 2,5 ml/min PBS. Frakcije koje odgovaraju vrhuncu KonjF su objedinjene, koncentrovane pomoću spin filtera Amicon Ultracell 50KDa MWCO od 15 ml, prečišćene na AKTA™ Start FPLC pomoću kolone GE Healthcare HiLoad™ 26/600 upakovane u Superdex 200 PG, eluiranje sa 2,5 mL/min PBS. Frakcije koje odgovaraju vrhuncu KonjF su sakupljene, koncentrovane upotrebom 15 mL Amicon Ultracell 50KDa MWCO spin filtera, sterilno filtrirane i analizirane.
[0713] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku KonjF na 280 nm i 330 nm (za Jedinjenje 34) pokazuje smešu nekonjugovanih lakih lanaca, lakih lanaca vezanih za jedan molekul jedinjenja 34, nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za do tri molekula Jedinjenja 34, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 7,41 molekula Jedinjenja 34 po antitelu.
[0714] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjF na 280 nm pokazuju monomernu čistoću od 0% (100% dimer-trimer). UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjF na 1,09 mg/ml u 4,4 ml, dobijena masa KonjF je 4,8 mg (prinos 48%).
Konjugat Tratuzumab-58 (KonjG)
[0715] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (120 molarni ekvivalent/antitelo, 32 mikromola, 0,64 mL na 50 mM) u 3,7 mL rastvora (40 mg, 0,267 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 2,0 mg/mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 4 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o/min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO Viva spin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodan je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 20 molarnih ekvivalenta/antitelo, 5,3 mikromola, 0,1 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o/min) pri koncentraciji antitela od ∼ 2,0 mg/ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o/min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 58 je dodato kao rastvor DMSO (11 molarnih ekvivalenta/antitelo, 1,46 mikromola, u 0,9 mL DMSO) u 9,1 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (20 mg, 0,13 mikromola) za 10% (v/v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 3 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (7,3 mikromola, 0,07 mL na 100 mM).
[0716] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO Viva spin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, KonjG je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0717] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku Konjugata na 214 nm i 330 nm (za Jedinjenje 58) pokazuje nekonjugovanu svetlost lanaca i smeša nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za jedan molekul Jedinjenja 58, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 1,83 molekula jedinjenja 58 po antitelu.
[0718] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjG na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjG na 1,34 mg/ml u 8,9 mL, dobijena masa KonjG je 11,9 mg (prinos 60%).
Konjugat Tratuzumab-59 (KonjH)
[0719] Antitelo (30 mg) je natovareno na čvrsti nosač i redukovano, ponovo oksidovano, konjugovano u Jedinjenje 59, prečišćeno, oslobođeno od smole i formulisano na 25 mM histidina, 200 mM saharoze, Tween-20 0,02%, pH 6,0 prema opisanom postupku u US2014-0037961A1.
[0720] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku Konjugata na 214 nm i 330 nm (za Jedinjenje 59) pokazuje nekonjugovanu svetlost lanaca i smeša nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za jedan molekul Jedinjenja 59, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 1,9 molekula jedinjenja 59 po antitelu.
[0721] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjH na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 97%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjH na 1,49 mg/ml u 7,5 mL, dobijena masa KonjH je 11,2 mg (prinos 37%).
Konjugat Tratuzumab-48 (KonjI)
[0722] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent/antitelo, 21,4 mikromola, 0,43 mL na 50 mM) u 3,7 mL rastvora (40 mg, 0,267 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 2,0 mg/mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 4 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o/min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO Viva spin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodan je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 20 molarnih ekvivalenta/antitelo, 5,3 mikromola, 0,1 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o/min) pri koncentraciji antitela od ∼ 2,0 mg/ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je
12
centrifugirana 3 minuta 4000 o/min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 48 je dodato kao rastvor DMSO (11 molarnih ekvivalenta/antitelo, 1,46 mikromola, u 1,7 mL DMSO) u 16,8 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (20 mg, 0,13 mikromola) za 10% (v/v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 3 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (7,3 mikromola, 0,07 mL na 100 mM).
[0723] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO Viva spin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0724] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku Konjugata na 214 nm i 330 nm (za Jedinjenje 48) pokazuje nekonjugovanu svetlost lanaca i smeša nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za jedan molekul Jedinjenja 48, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 1,86 molekula jedinjenja 48 po antitelu.
[0725] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjI na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 99%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjI na 1,7 mg/ml u 7,3 mL, dobijena masa KonjI je 12,4 mg (prinos 62 %).
Konjugat Tratuzumab-57 (KonjJ)
[0726] 50 mM rastvor Ditiotreitola (DTT) u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru pH 7,4 (PBS) dodat je (80 molarni ekvivalent/antitelo, 21,4 mikromola, 0,43 mL na 50 mM) u 3,7 mL rastvora (40 mg, 0,267 mikromola) u redukcionom puferu koji sadrži PBS i 1 mM etilendiamintetrasirćetne kiseline (EDTA od 50 mM) i konačnu koncentraciju antitela od 2,0 mg/mL. Smeša za redukciju je zagrevana na 25°C tokom 4 sata (ili do potpune redukcije koju je primetio UHPLC) u orbitalnom šejkeru uz blago mućkanje (60 o/min). Posle hlađenja na sobnu temperaturu, redukovano antitelo je izmenjeno u puferu, pomoću spin filtera, koristeći 50 KDa MWCO Viva spin, u pufer za reoksidaciju koji sadrži PBS pH 7,4 i 1 mM EDTA da bi se uklonio sav višak redukcionog agensa. Dodan je 50 mM rastvor dehidroaskorbinske kiseline (DHAA, 20 molarnih ekvivalenta/antitelo, 5,3 mikromola, 0,1 mL na 50 mM) u DMSO i smeša za reoksidaciju je ostavljena da reaguje 16 sati na sobnoj temperaturi uz blago mućkanje (60 o/min) pri koncentraciji antitela od ∼ 2,0 mg/ml (ili dok UHPLC ne primeti potpunu reoksidaciju cistein-tiola za reformu međulančanog cistein-disulfida). Reoksidaciona smeša je centrifugirana 3 minuta 4000 o/min, a zatim je sterilno filtrirana upotrebom membranskog filtera od 0,22 µm. Jedinjenje 57 je dodato kao rastvor DMSO (11 molarnih ekvivalenta/antitelo, 1,46 mikromola, u 1,7 mL DMSO) u 16,8 mL ovog reoksidovanog rastvora antitela (20 mg, 0,13 mikromola) za 10% (v/v) konačne koncentracije DMSO. Rastvor je mućkan 3 sata na 25°C, a zatim je konjugacija ugašena sa N-acetil cisteinom (7,3 mikromola, 0,07 mL na 100 mM).
[0727] Prekomerni lek je uklonjen spin filterom koristeći 50 kDa MWCO Viva spin u pufer koji sadrži PBS pH 7,4. Obim besplatnog uklanjanja leka praćen je pomoću UHPLC-RP koristeći uredan konjugat. Posle potpunog uklanjanja slobodnog leka, ADC je filtriran koristeći 0,22 µm, Mustang filter u sterilnoj atmosferi, a zatim je čuvan na 4°C.
[0728] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu koristeći Phenomenex Aeris 3,6u XB-C18150 mm x 2,1 mm kolonu eluiranjem gradijentom vode i acetonitrila na smanjenom uzorku Konjugata na 214 nm i 330 nm (za Jedinjenje 57) pokazuje nekonjugovanu svetlost lanaca i smeša nekonjugovanih teških lanaca i teških lanaca vezanih za jedan molekul Jedinjenja 57, u skladu sa odnosom leka po antitelu (DAR) od 1,87 molekula jedinjenja 57 po antitelu.
[0729] UHPLC analiza na Shimadzu Prominence sistemu korišćenjem Tosoh Bioscience TSKgel SuperSV mAb HTP 4 µm 4,6 x 150 mm kolone (sa 4 µm 3,0 x 20 mm zaštitne kolone) eluiranjem s 0,3 ml/minuti sterilno filtriranim SEC puferom koji sadrži 200 mM kalijum fosfata pH 6,95, 250 mM kalijum hlorida i 10% izopropanola (v/v) na uzorku KonjJ na 280 nm pokazuju monomernu čistoću veću od 100%. UHPLC SEC analiza daje koncentraciju konačnog KonjJ na 0,86 mg/ml u 10,3 mL, dobijena masa KonjJ je 8,9 mg (prinos 45 %).
Primer 9
In vitro testiranje Jedinjenja 10
[0730] DU145 (2000/udubljenju, 72-satni test) i MDA-MB-361 (5000/udubljenju, 144-časovni test) ćelije su postavljene u medijum za kulturu na ploče sa 96 udubljenja tretirane kulturom tkiva u zapremini od 80 µL po udubljenju i dozvoljene da se pridržavaju preko noći. Za razblaživanje bojevih glava, prvo je pripremljena koncentracija od 60X svake doze koja se testira razređivanjem ispitnih predmeta u DMSO. Razređenja bojeve glave od 60X su zatim razblažena do koncentracije od 5 puta bilo u samom medijumu ćelijske kulture ili u medijumu ćelijske kulture koji sadrži 5x enzim β-glukuronidaze (Sigma Cat # G0799-25KU).20 µL medijuma ćelijske kulture koji sadrži testni proizvod /- enzim je dodato ćelijama u trostrukim udubljenjima, a kriva krajnje doze je bila u rasponu od 6,4 nM do 61 pM u serijskim serijama razblaživanja u razmeri 1:4. Kao kontrola je korišćen samo DMSO razblažen u medijumu za kulturu. Tretirane ćelije su kultivisane na 37°C/5% CO2tokom 72 do 144 sata (u zavisnosti od utvrđene kinetike rasta svake određene ćelijske linije). Na kraju testa, za određivanje relativne citotoksičnosti korišćen je test luminiscentne održivosti CellTiter-Glo® (CTG) (Promega). U svako udubljenje je dodato 100 µL CTG reagensa, a ploče su inkubirane 10 minuta na sobnoj temperaturi uz lagano mućkanje, očitana je apsorbancija svakog uzorka na 560 nM pomoću luminometra EnVision (Perkin Elmer). Procenat održivosti ćelija izračunat je prema sledećoj formuli:
[0731] Vrednosti IC50određene su korišćenjem logističke nelinearne regresione analize sa softverom GraphPad Prism.
In vitro testiranje KonjA
[0732] Korišćen je sličan postupak kao što je gore opisano sa MDA-MB-361 (HER2 visok, 5000 ćelija/jamica, 144-satni test) i MCF-7 ćelijama (HER2 nizak, 1500 ćelija/jamici, 144-satni test). Gustina oblaganja ćelija i trajanje testa određeni su na osnovu utvrđene kinetike rasta svake određene ćelijske linije. Koncentracija od 5x svake doze ADC koja se testira pripremljena je razređivanjem ispitnih predmeta u medijumu za kulturu. Dvadeset µL ADC je dodato ćelijama u trostrukim udubljenjima sa krivom krajnje doze koja se kretala od 3 µg/mL do 11 pg/mL u serijskim serijama razblaživanja 1:4. Obrađene ćelije su kultivisane na 37°C/5% CO2tokom 144 sata, a test luminiscentne održivosti CellTiter-Glo® (CTG) (Promega) korišćen je za određivanje relativne citotoksičnosti kako je gore opisano.
[0733] Prekomerno eksprimirajuće HER2 ćelije SKOV3 podvrgnute su obrnutoj transfekciji da bi se oborili nivoi ekspresije GUSB. Prvo, 4x zaliha RNAiMAX (konačna koncentracija 0,125 ul/udubljenju, Life Technologies) i 4x zaliha siRNK oligosa (ne ciljana/negativna siRNK, GAPDH siRNK i GUSB siRNK konačna koncentracija 100 nM/udubljenju, Life Technologies) pripremljeni su u OptiMEM medijumu. Smeša koja sadrži samo RNAiMAX/OptiMEM je uključena kao kontrola lipida.4x rastvor RNAiMAX i 4x rastvori siRNK dovedeni su do 2x mešanjem u odnosu jedan prema jedan, a smeša RNAiMAX/siRNK je ostavljena da se inkubira na sobnoj temperaturi 20 minuta. Posle inkubacije, 40 µl smeša RNAiMAX/siRNK i kontrola lipida dodane su po jamici na ploče sa 96 udubljenja tretiranih kulturom tkiva i 40 µl ćelijskog rastvora je dodato u smešu lipid/siRNK, sa konačnom gustinom oblaganja 2000 ćelija/udubljenju. Ploče su kultivisane na 37°C/5% CO2tokom 72 sata, nakon čega je ćelijama u duplikatnim jamicama dodato 20 µl 5X koncentracije svake doze KonjB/KonjC sa krivom konačne doze u rasponu od 10 µg/mL do 0,15 ng/mL u serijskoj seriji razblaživanja 1:4. Obrađene ADC ćelije su kultivisane na 37°C/5% CO2tokom dodatna 72 sata, a test luminiscentne održivosti CellTiter-Glo® (CTG) (Promega) korišćen je za određivanje relativne citotoksičnosti kako je gore opisano. Efikasnost obaranja siRNK određena je nivoom ekspresije RNK i merenjem aktivnosti enzima b-glukuronidaze.
12
[0734] Rezultati su prikazani na Slici 1 (KonjB) i Slici 2 (KonjC), pri čemu se koriste sledeći simboli:
[0735] Takođe je primetan mnogo veći maksimalni uboj za KonjC.
Primer 10 - in vitro testiranje
[0736] Aspiriran je medijum iz subkonferentne (80-90% konfluentnosti) ćelijske kulture u boci T75, a boca je isprana PBS (oko 20 mL) i ispražnjena. Dodat je tripsin-EDTA (5 mL), tikvica se vratila u gasni inkubator na oko 37°C do oko 5 minuta, a zatim naglo pokucala da bi se ćelije odvojile i razdvojile od plastike. Suspenzija ćelija je prebačena u sterilnu epruvetu za centrifugiranje sa navojem od 50 ml, razblažena sredstvom za rast do krajnje zapremine od 15 ml, a zatim centrifugirana (400 g tokom 5 minuta). Supernatant je usisan i pelet je ponovo suspendovan u medijumu za kulturu od 10 ml. Ponovljeno pipetiranje može biti potrebno za proizvodnju monodisperznih suspenzija ćelija. Koncentracija i održivost ćelija mere se ćelijama obojenim tripan plavim ćelijama i prebrojavaju pomoću LUNA-II ™ automatizovanog brojača ćelija. Ćelije su razblažene do 2x105/ml, raspodeljene (50µl/udubljenje) u ploče sa 96 udubljenja sa ravnim dnom i inkubirane preko noći pre upotrebe.
[0737] Osnovni rastvor (1 mL) konjugata leka antitela (ADC) (20µg/ml) napravljen je razblaživanjem filtrirano sterilisanog ADC u medijumu ćelijske kulture. Set od 8x 10-puta razblaženja osnovnog ADC napravljen je u ploči sa 24 udubljenja serijskim prenosom 100 µl na 900 µl medijuma ćelijske kulture.
[0738] Razređeno ADC je dodato (50 µl/udubljenju) u 4 ponovljena udubljenja ploče sa 96 udubljenja, koje su sadržavale 50 µl suspenzije ćelija zasejanih prethodnog dana. U kontrolna udubljenja primljen je 50 µl medijuma ćelijske kulture. Ploča sa 96 udubljenja koja sadrži ćelije i ADC inkubirana je na 37°C u inkubatoru sa gasom CO2, tokom vremena izlaganja.
[0739] Na kraju perioda inkubacije, održivost ćelija je merena MTS testom. MTS (Promega) je doziran (20 µl po udubljenju) u svaku udubljenje i inkubiran 4 sata na 37°C u inkubatoru sa gasom CO2. Apsorbancija udubljenja izmerena je na 490nm. Procenat preživljavanja ćelija izračunat je iz srednje apsorbancije u 4 udubljenja tretirane ADC-om u poređenju sa srednjom apsorbancijom u 4 kontrolne neobrađene udubljenja (100%). IC50 je određen na osnovu podataka o dozi-odgovoru koristeći GraphPad Prism koristeći nelinearni algoritam prilagođavanja krive: sigmoidalni, 4PL X je log(koncentracija).
12
Primer 11 - Ksenograft testiranje
NCI-N87 Ksenograftovani miševi
[0740] Ženski teški kombinovani miševi sa nedostatkom imuniteta (Fox Chase SCID®, C.B-17/Icr-Prkdcscid, Charles River) bili su stari deset nedelja sa rasponom telesne težine (BW) od 16,5 do 21,1 grama 1. dana ispitivanja. Životinje su hranjene vodom ad libitum (reverzna osmoza, 1 ppm CI) i NIH 31 Modified i Irradiated Lab Diet® koja se sastojala od 18,0% sirovih proteina, 5,0% sirove masti i 5,0% sirovih vlakana. Miševi su bili smešteni na ozračenoj Enricho'cobs™ laboratorijskoj posteljini za životinje u statičkim mikroizolatorima u 12-časovnom svetlosnom ciklusu na 20-22 ° C (68-72°F) i vlažnosti 40-60%. CR Discovery Services se posebno pridržava preporuka Vodiča za negu i upotrebu laboratorijskih životinja u pogledu ograničenja, uzgoja, hirurških postupaka, regulacije hrane i tečnosti i veterinarske nege. Program nege i upotrebe životinja u kompaniji CR Discovery Services akreditovan je od strane Udruženja za procenu i akreditaciju Laboratory Animal Care International (AAALAC), koje obezbeđuje usaglašenost sa prihvaćenim standardima za negu i upotrebu laboratorijskih životinja.
Tumorska ćelijska kultura
[0741] Ljudske ćelije limfoma karcinoma želuca NCI-N87 kultivisane su u podlozi RPMI-1640, dopunjenoj sa 10% fetalnog goveđeg seruma, 2 mM glutamina, 100 jedinica/ml penicilina, 100 µg/ml streptomicin sulfata i 25 µg/ml gentamicina. Ćelije su gajene u čuturama za kulturu tkiva u vlažnom inkubatoru na 37°C, u atmosferi od 5% CO2 i 95% vazduha.
12
In vivo implantacija i rast tumora
[0742] NCI-N87 ćelije korišćene za implantaciju sakupljene su tokom rasta faze dnevnika i ponovo suspendovane u fosfatnom puferu fiziološkom rastvoru (PBS) koji sadrži 50% Matrigel™ (BD Biosciences). Na dan implantacije tumora, svakom test mišu je subkutano ubrizgano u desni bok 1 x 107 ćelija (0,1 mL ćelijske suspenzije) i praćen je rast tumora dok se prosečna veličina približavala ciljnom opsegu od 100 do 150 mm3. Četrnaest dana kasnije, označeni kao 1. dan studije, miševi su sortirani prema izračunatoj veličini tumora u grupe od kojih se svaka sastojala od deset životinja sa pojedinačnim volumenom tumora u rasponu od 108 do 144 mm3 i grupnim srednjim volumenom tumora od 115 mm3.
[0743] Tumori su mereni u dve dimenzije pomoću čeljusti, a zapremina je izračunata po formuli:
gde je w = širina i l = dužina, u mm, tumora. Težina tumora može se proceniti uz pretpostavku da je 1 mg ekvivalentno 1 mm3 zapremine tumora.
Tretman
[0744] Lečenje je započelo 1. dana u grupama od 10 miševa (n = 10) sa utvrđenim potkožnim NCI-N87 tumorima (108-144 mm3). Trastuzumab-10 (KonjA) je primenjen intravenski jednom 1. dana (qd x 1). Grupa tretirana vozilom služila je kao kontrolna grupa za analizu efikasnosti. Tumori su mereni dva puta nedeljno dok se ispitivanje nije završilo 79. dana. Svaki miš je eutanaziran kada je njegov tumor dostigao zapreminu krajnje tačke od 800 mm3 ili poslednjeg dana, šta god se prvo desilo. Izračunato je vreme do krajnje tačke (TTE) za svakog miša.
[0745] Ishod lečenja određen je iz procenta kašnjenja rasta tumora (% TGD), definisanog kao procenat povećanja srednje TTE za lečene naspram kontrolnih miševa, sa razlikama među grupama za koje se smatra da su statistički značajne pri P ≤ 0,05 korišćenjem analize preživljavanja logrank. Kod miševa je nadgledan odgovor na potpunu regresiju (CR) i delimičnu regresiju (PR).
[0746] Podnošljivost lečenja procenjena je merenjem telesne težine i čestim posmatranjem znakova neželjenih efekata povezanih sa lečenjem. Podnošljivost lečenja procenjena je merenjem telesne težine i čestim posmatranjem znakova neželjenih efekata povezanih sa lečenjem. Svi režimi su se dobro podnosili. Medijan TTE za kontrole tretirane nosačem bio je 50,7 dana, uspostavljajući maksimalno mogući TGD od 28,3 dana (56%) za 79-dnevno ispitivanje.
[0747] Minimalna efektivna doza je definisana kao minimalna doza potrebna za stvaranje zastoja tumora tokom dvadeset i osam dana nakon primene test proizvoda. Na osnovu vizuelne inspekcije srednje i srednje zapremine tumora i procentualne promene zapremine tumora od 1. dana, čini se da je trastuzumab-10 (KonjA) od 1,0 mg/kg doza koja je postigla odgovor u skladu sa minimalnom efektivnom dozom
[0748] Dve životinje iz grupe od 0,3 mg/kg preživele su kraj ispitivanja sa MTV od 708 mm3. Osam životinja iz grupe od 1,0 mg/kg preživele su kraj ispitivanja sa MTV od 650 mm3. Rezultati su prikazani na Slici 3. JIMT-1 Ksenograftovani miševi
Miševi
[0749] Ženski teški kombinovani imunodeficijentni miševi (Fox Chase SCID®, CB17/lcr-Prkdcscid/IcrlcoCrl, Charles River) bili su stari deset nedelja sa rasponom telesne težine (BW) od 15,1 do 22,2 g prvog dana ispitivanja.
Tumorska ćelijska kultura
[0750] JIMT-1 ćelije karcinoma dojke čoveka su uzgajane u DMEM koji sadrži 10% fetalnog goveđeg seruma, 100 jedinica/ml penicilin G natrijuma, 100 µg/ml streptomicin sulfata, 25 µg/ml gentamicina i 2 mM glutamina. Ćelijska kultura je gajena u čuturama za kulturu tkiva u vlažnom inkubatoru na 37°C, u atmosferi od 5% CO2 i 95% vazduha.
In vivo implantacija i rast tumora
[0751] JIMT-1 ćelije korišćene za implantaciju sakupljene su tokom eksponencijalnog rasta i ponovo suspendovane u 50% Matrigelu (BD Biosciences): 50% fiziološki rastvor puferovan fosfatom u koncentraciji 5 x 107 ćelija/mL. Na dan implantacije tumora, svakom test mišu je subkutano ubrizgano u desni bok 1 x 107
12
ćelija (0,2 mL ćelijske suspenzije) i praćen je rast tumora dok se prosečna veličina približavala ciljnom opsegu od 100 do 150 mm3. Tumori su mereni u dve dimenzije pomoću čeljusti, a zapremina je izračunata po formuli:
gde je w = širina i l = dužina, u mm, tumora. Težina tumora može se proceniti uz pretpostavku da je 1 mg ekvivalentno 1 mm3 zapremine tumora.
Tretman
[0752] Lečenje je započelo 1. dana u grupama od 10 miševa (n=10) sa utvrđenim potkožnim JIMT-1 tumorima sa zapreminom opsega (88-196 mm3) i grupnom srednjom zapreminom od 120 do 122 mm3. Trastuzumab-10 (KonjA) je primenjen intravenski jednom 1. dana (qd x 1). Grupa tretirana vozilom služila je kao kontrolna grupa za analizu efikasnosti. Tumori su mereni dva puta nedeljno dok se ispitivanje nije završilo 59. dana. Svaki miš je eutanaziran kada je njegov tumor dostigao zapreminu krajnje tačke od 1000 mm3 ili poslednjeg dana, šta god se prvo desilo. Izračunato je vreme do krajnje tačke (TTE) za svakog miša.
[0753] Ishod lečenja određen je iz procenta kašnjenja rasta tumora (% TGD), definisanog kao procenat povećanja srednje TTE za lečene naspram kontrolnih miševa, sa razlikama među grupama za koje se smatra da su statistički značajne pri P ≤ 0,05 korišćenjem analize preživljavanja logrank. Kod miševa je nadgledan odgovor na potpunu regresiju (CR) i delimičnu regresiju (PR).
[0754] Podnošljivost lečenja procenjena je merenjem telesne težine i čestim posmatranjem znakova neželjenih efekata povezanih sa lečenjem. Svi režimi su se dobro podnosili. Medijan TTE za kontrole tretirane nosačem bio je 48,4 dana, uspostavljajući maksimalno mogući TGD od 10,6 dana (22%) za 59-dnevno ispitivanje. Svi testirani ADC režimi dali su značajnu korist za preživljavanje u poređenju sa kontrolama tretiranim nosačem (P < 0,01).
[0755] Minimalna efektivna doza je definisana kao minimalna doza potrebna za stvaranje zastoja tumora tokom dvadeset i osam dana nakon primene test proizvoda. Na osnovu vizuelne inspekcije srednje i srednje zapremine zapremine tumora i procentualne promene zapremine tumora od 1. dana, čini se da je trastuzumab-10 (KonjA) od 1,0 mg/kg doza koja je postigla odgovor u skladu sa minimalnom efektivnom dozom [0756] Primećen je efekat zavisan od doze gde se srednja zapremina tumora grupe od 0,3 mg/kg polako povećavala tokom 34. dana, a zatim je napredovala, dok je grupa od 1,0 mg/kg pokazivala statičku srednju zapreminu tumora do 38. dana koja je napredovala nakon toga. Medijan TTE za grupu od 0,3 mg/kg iznosio je 56,9 dana što odgovara značajnom TGD od 8,5 dana (18%) u odnosu na kontrolu (P < 0,05). Grupa od 0,3 mg/kg nije imala objektivne reakcije na regresiju. Pet životinja iz grupe od 0,3 mg/kg preživele su kraj ispitivanja sa MTV od 486 mm3.
[0757] Medijan TTE za grupu od 1,0 mg/kg iznosio je maksimalno 59,0 dana što odgovara značajnom TGD od 10,6 dana (22%) u odnosu na kontrolu (P < 0,001). Grupa od 1,0 mg/kg nije imala objektivne reakcije na regresiju. Devet životinja iz grupe od 1,0 mg/kg bilo je preživelih sa „kraja ispitivanja“ sa MTV od 446 mm3. Grupe od 0,3 i 1,0 mg/kg međusobno su se značajno razlikovale (P < 0,05).
[0758] Rezultati su prikazani na Slici 4.
Primer 12 - Ispitivanje toksičnosti/Terapijski indeks
Ispitivanje pacova:
[0759] Ispitivanje toksičnosti u jednoj dozi je korišćena za određivanje maksimalne tolerisane doze (MTD) i sigurnosnog profila trastuzumaba-10 (KonjA). Mužjacima Sprague Dawley pacova (ENVIGO) dozirano je jednom sporo bolus intravenskim ubrizgavanjem kroz repnu venu sa kontrolom nosača (25 mM Histidin, 200 mM Saharoza, pH 6,0) ili ispitnim materijalom (KonjA). Parametri procenjeni tokom studije obuhvatali su smrtnost, fizičke preglede, posmatranje u kavezu, telesnu težinu, promene telesne težine, kliničku patologiju (klinička hemija, hematologija i koagulacija) i grube nalaze patologije. Sve životinje u grupama 1-6 prekinute su na Dan ispitivanja (SD) 29, osim jedne životinje iz Grupe 6 koje su prekinute na Dan ispitivanja (SD) 25.
12
[0760] Podnošljivost je utvrđena na osnovu krajnjih tačaka toksičnosti, uključujući smanjene apsolutne retikulocite, bele krvne ćelije i ćelijske komponente, kao i makroskopske i mikroskopske lezije u plućima. Glavni nalaz pri nivoima doze od ≥ 4 mg/kg bila su histopatološka posmatranja plućnih lezija. Pri dozi od 4 mg/kg nalazi su bili blagi i smatrali su se reverzibilnim. Kako se doza povećavala, plućne lezije su bile sve ozbiljnije i nisu se smatrale reverzibilnim. Na osnovu ovog nalaza, utvrđeno je da je maksimalna tolerisana doza (MTD) kod pacova nakon pojedinačne doze KonjA 6 mg/kg.
Terapijski indeks
[0761] Terapijski indeks se može izračunati deljenjem maksimalno tolerisane pojedinačne doze (MTD) ne ciljanog ADC kod pacova, sa minimalnom efektivnom pojedinačnom dozom (MED) ciljanog ADC. MED je pojedinačna doza neophodna za postizanje zastoja tumora u in vivo modelu u 28 dana (za NCI-N87 ksenograft).
[0762] Prema tome, za konjugate jedinjenja 10, terapeutski indeks je MTD od 6 mg/kg podeljen sa MED koji iznosi 1,0 mg/kg (videti iznad), dajući terapeutski indeks od 6.
1

Claims (25)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule I:
    i njihove soli i solvati, pri čemu: uglaste zagrade označavaju da je grupa NO2neobavezna; D predstavlja ili grupu D1 ili D2:
    isprekidana linija označava neobavezno prisustvo dvostruke veze između C2 i C3; kada postoji dvostruka veza između C2 i C3, R<2>se bira iz grupe koju čine: (ia) C5-10aril grupa, opciono supstituisana jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja sadrži: halo, nitro, cijano, etar, karboksi, estar, C1-7alkil, C3-7heterociklil i bis-oksi-C1-3alkilen; (ib) C1-5zasićeni alifatski alkil; (ic) C3-6zasićeni cikloalkil; (id)
    pri čemu se svaki od R<11>, R<12'>i R<13>nezavisno bira između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila, gde ukupan broj atoma ugljenika u R2grupi nije veći od 5; (ie)
    pri čemu je jedan od R<15a>i R<15b>H, a drugi se bira iz grupe koju čine: fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo, metil, metoksi; piridila; i tiofenila; i (if)
    gde je R<14>izabran iz: H; C1-3zasićenog alkila; C2-3alkenila; C2-3alkinila; ciklopropila; fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo, metil, metoksi; piridila; i tiofenila; kada postoji jednostruka veza između C2 i C3, R<2>se bira između H, OH, F, diF i
    pri čemu su R<16a>i R<16b>nezavisno izabrani između H, F, C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koje alkil i alkenil grupe su po izboru supstituisane grupom odabranom između C1-4alkil amido i C1-4alkil estar; ili, kada je jedan od R<16a>i R<16b>H, drugi je odabran od nitrila i C1-4alkil estra; D' predstavlja bilo grupu D'1 ili D'2:
    gde isprekidana linija označava neobavezno prisustvo dvostruke veze između C2' i C3'; kada postoji dvostruka veza između C2' i C3', R<12>se bira iz grupe koju čine: (iia) C5-10aril grupa, opciono supstituisana jednim ili više supstituenata izabranih iz grupe koja sadrži: halo, nitro, cijano, etar, karboksi, estar, C1-7alkil, C3-7heterociklil i bis-oksi-C1-3alkilen; (iib) C1-5zasićeni alifatski alkil; (iic) C3-6zasićeni cikloalkil; (iid)
    pri čemu se svaki od R<21>, R<22>R<23>nezavisno bira između H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila, gde ukupan broj atoma ugljenika u R<12>grupi nije veći od 5; (iie)
    pri čemu je jedan od R<25a>i R<25b>H, a drugi se bira iz grupe koju čine: fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo, metil, metoksi; piridila; i tiofenila; i (iif)
    gde je R<24>izabran iz: H; C1-3zasićenog alkila; C2-3alkenila; C2-3alkinila; ciklopropila; fenil, koji je fenil opciono supstituisan sa grupom odabranom od halo, metil, metoksi; piridila; i tiofenila; kada postoji jednostruka veza između C2' i C3', R<12>se bira između H, OH, F, diF i
    pri čemu su R<26a>i R<26b>nezavisno izabrani između H, F, C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koje alkil i alkenil grupe su po izboru supstituisane grupom odabranom između C1-4alkil amido i C1-4alkil estar; ili, kada je jedan od R<26a>i R<26b>H, drugi je odabran od nitrila i C1-4alkil estra; R<6>i R<9>nezavisno odabrani iz H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn i halo; gde su R i R' nezavisno izabrani između opciono supstituisanih C1-12alkil, C3-20heterociklil i C5-20aril grupa; R<7>je nezavisno odabran iz H, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NRR', nitro, Me3Sn i halo; gde su R i R' nezavisno izabrani između opciono supstituisanih C1-12alkil, C3-20heterociklil i C5-20aril grupa; Y i Y' su izabrani između O, S ili NH; R<6'>, R<7'>, R9' su izabrani iz iste grupe kao i R<6>, R<7>i R<9>respektivno; R<11b>je izabran iz OH, OR<A>, gde je R<A>C1-4 alkil; i R<L>je veznik za vezu sa sredstvom za vezivanje ćelija, a to je:
    gde Q je:
    gde je Q<X>takav da je Q aminokiselinski ostatak, dipeptidni ostatak ili tripeptidni ostatak; X je:
    gde a = 0 do 5, b = 0 do 16, c = 0 ili 1, d = 0 do 5; G<L>je izabran iz;
    1
    gde Ar predstavlja C5-6arilinsku grupu.
  2. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde: a) i Y i Y' su O; i/ili b) R" je C3-7alkilen ili grupa formule:
    gde je r 1 ili 2; i/ili c) R<9>je H; i/ili d) R<6>je H; i/ili e) R<7>je izabran iz H, OH i OR ili C1-4alkiloksi grupe.
  3. 3. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 ili 2, gde: a) D je D1, postoji dvostruka veza između C2 i C3, a R<2>je C5-7aril grupa, pri čemu R<2>opciono nosi jednu do tri supstituent grupe odabrane između metoksi, etoksi, fluoro, hloro, cijano, bis-oksi metilen, metil-piperazinil, morfolino i metil-tiofenil; ili b) D je D1, postoji dvostruka veza između C2 i C3, a R<2>je C8-10aril grupa, pri čemu R<2>opciono nosi jednu do tri supstituent grupe odabrane između metoksi, etoksi, fluoro, hloro, cijano, bis-oksi metilen, metil-piperazinil, morfolino i metil-tiofenil; ili c) D je D1, postoji dvostruka veza između C2 i C3, a R<2>je metil, etil ili propil; ili g) postoji dvostruka veza između C2 i C3, a R<2>je ciklopropil; ili e) gde je D D1, postoji dvostruka veza između C2 i C3, a R<2>je grupa formule:
    gde: i) ukupan broj atoma ugljenika u R<2>grupi nije veći od 4; i/ili ii) jedan od R<11>, R<12'>i R<13>je H, a druge dve grupe su odabrane od H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3alkinila i ciklopropila; ili iii) dva od R<11>, R<12'>i R<13>su H, a druga grupa je izabrana iz grupe koju čine H, C1-3zasićeni alkil, C2-3alkenil, C2-3alkinil i ciklopropil; ili f) D je D1, postoji dvostruka veza između C2 i C3, a R<2>je grupa:
    ili g) D je D1, postoji dvostruka veza između grupa formule: pri čemu je R<14>odabran između H, metila, etila, etenila i etinila.
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 2, gde a) D je D1, postoji jednostruka veza između C2 i C3, a R<2>je H; ili b) D je D1, postoji jednostruka veza između C2 i C3, R<2>jeste
    i R<16a>i R<16b>su H; ili c) D je D1, postoji jednostruka veza između C2 i C3, R<2>jeste
    i R<16a>i R<16b>su metil; ili d) D je D1, postoji jednostruka veza između C2 i C3, R<2>jeste
    jedan od R<16a>i R<16b>je H, a drugi je odabran između C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koji su alkil i alkenil grupe po izboru supstituisani.
  5. 5. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde: a) D' je D'1, postoji dvostruka veza između C2 i C3, a R<12>je C5-7aril grupa, pri čemu R<12>opciono nosi jednu do tri supstituent grupe odabrane između metoksi, etoksi, fluoro, hloro, cijano, bis-oksi metilen, metil-piperazinil, morfolino i metil-tiofenil; ili b) D' je D'1, postoji dvostruka veza između C2 i C3, a R<12>je C8-10aril grupa, pri čemu R<12>opciono nosi jednu do tri supstituent grupe odabrane između metoksi, etoksi, fluoro, hloro, cijano, bis-oksi 1 metilen, metil-piperazinil, morfolino i metil-tiofenil; ili c) D' je D'1, postoji dvostruka veza između metil, etil ili propil; ili d) D' je D'1 postoji dvostruka veza između ciklopropil; ili e) D' je D'1, postoji dvostruka veza između grupa formule: gde: i) ukupan broj atoma ugljenika u R<12>grupi nije veći od 3; ii) jedan od R<21>, R<22'>i R<23>je H, a druge dve grupe su odabrane od H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3 alkinila i ciklopropila; ili iii) jedan od R<21>, R<22'>i R<23>je H, a druge dve grupe su odabrane od H, C1-3zasićenog alkila, C2-3alkenila, C2-3 alkinila i ciklopropila; ili f) D' je D'1, postoji dvostruka veza između C2' i C3', a R<12>je grupa:
    ili g) D' je D'1, postoji dvostruka veza između C2' i C3', a R<12>je grupa formule:
    pri čemu je R<24>odabran između H, metila, etila, etenila i etinila.
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, gde a) D' je D'1, postoji jednostruka veza između C2' i C3', a R<12>je H; ili b) D' je D'1, postoji jednostruka veza između C2' i C3', R<12>jeste
    i R<26a>i R<26b>su H; ili c) D' je D'1, postoji jednostruka veza između C2' i C3', R<12>jeste
    i R<26a>i R<26b>su metil; ili d) D' je D'1, postoji jednostruka veza između C2' i C3', R<12>jeste
    jedan od R<26a>i R<26b>je H, a drugi je odabran između C1-4zasićenog alkila, C2-3alkenila, koji su alkil i alkenil grupe po izboru supstituisani.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, gde a) R<6'>je odabran iz istih grupa kao R<6>, R<7'>je odabran iz istih grupa kao R<7>, R<9'>je odabran iz istih grupa kao R<9>i Y' je odabran iz istih grupa kao Y; i/ili 1 b) R<6'>je iste grupe kao R<6>, R<7'>je iste grupe kao R<7>, R<9'>je iste grupe kao R<9>i Y' je iste grupe kao Y; i/ili c) R<12>je ista grupa kao i R<2>.
  8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je formule la-1, la-2 ili la-3:
    gde su R<2a>i R<12a>isti i biraju se između: (a)
    (b)
    (c)
    (d) 1
    (e)
    (f)
    (g)
    i (h)
    R<1a>je odabran između metila i benzila; R<L>i R<11b>su kao što su definisani u patentnom zahtevu 1.
  9. 9. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 ili 2, gde i R<2>i R<12>sadrže ne više od 3 atoma ugljenika.
  10. 10. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 9, gde R11b je OH ili ORA, gde je RA C1-4 alkil, opciono gde RA je metil.
  11. 11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10, gde je QX: a) aminokiselinski ostatak odabran između Phe, Lys, Val, Ala, Cit, Leu, Ile, Arg i Trp; ili b) ostatak dipeptida izabran iz: CO-Phe-Lys-NH, CO-Val-Ala-NH, CO-Val-Lys-NH, CO-Ala-Lys-NH, CO-Val-Cit-NH, CO-Phe-Cit-NH, CO-Leu-Cit-NH, CO-Ile-Cit-NH, CO-Phe-Arg-NH, i CO-Trp-Cit-NH; ili c) tripeptidni ostatak.
  12. 12. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, gde a) a je 0 do 3; i/ili b) b je 0 do 12; i/ili c) d je 0 do 3. 1
  13. 13. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 11, gde je a 0, c je 1 i d je 2, a b je od 0 do 8.
  14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je jedinjenje formule Id:
  15. 15. Konjugat formule I: L - (DL)p (I) gde je L jedinica liganda, D<L>je jedinica povezivanja leka formule I':
    gde D, R<2>, R<6>, R<7>, R<9>, R<11b>, Y, R", Y', D', R<6'>, R<7'>, R<9'>i R<12>, uključujući prisustvo ili odsustvo dvostrukih veza između C2 i C3 i C2' i C3', kako je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 10; pri čemu je p ceo broj od 1 do 20; R<LL>je veznik za vezu sa sredstvom za vezivanje ćelija, a to je:
    gde su Q i X definisani u bilo kom od zahteva 1 i 11 do 13, a GLL se bira između:
    1
    gde Ar predstavlja C5-6arilinsku grupu.
  16. 16. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14 ili konjugat prema patentnom zahtevu 15, gde a) Ar je fenilenska grupa; i/ili b) G<LL>se bira između G<LL1-1>i G<LL1-2>.
  17. 17. Konjugat prema patentnom zahtevu 15, gde je D<L>formule (Id'):
  18. 18. Konjugat u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 15 do 17, gde je Ligand jedinica antitelo ili njegov aktivni fragment.
  19. 19. Konjugat prema patentnom zahtevu 18, gde je antitelo ili fragment antitela antitelo ili fragment antitela za antigen povezan sa tumorom, opciono gde je antitelo ili fragment antitela antitelo koje se vezuje za jedan ili više tumora povezanih antigena ili ćelijsku površinu receptori izabrani iz (1)-(88): (1) BMPR1B; (2) E16; (3) STEAP1; (4) 0772P; 14 (5) MPF; (6) Napi3b; (7) Šema 5b; (8) PSCA hlg; (9) ETBR; (10) MSG783; (11) STEAP2; (12) TrpM4; (13) CRIPTO; (14) CD21; (15) CD79b; (16) FcRH2; (17) HER2; (18) NCA; (19) MDP; (20) IL20R-alpha; (21) Brevican; (22) EphB2R; (23) ASLG659; (24) PSCA; (25) GEDA; (26) BAFF-R; (27) CD22; (28) CD79a; (29) CXCR5; (30) HLA-DOB; (31) P2X5; (32) CD72; (33) LY64; (34) FcRH1; (35) IRTA2; (36) TENB2; (37) PSMA - FOLH1; (38) SST; (38,1) SSTR2; (38,2) SSTR5; (38,3) SSTR1; (38,4)SSTR3; (38,5) SSTR4; (39) ITGAV; (40) ITGB6; (41) CEACAM5; (42) MET; (43) MUC1; (44) CA9; (45) EGFRvIII; (46) CD33; (47) CD19; (48) IL2RA; (49) AXL; (50) CD30 - TNFRSF8; (51) BCMA - TNFRSF17; (52) CT Ags - CTA; (53) CD174 (Lewis Y) - FUT3; (54) CLEC14A; (55) GRP78 - HSPA5; (56) CD70; (57) Antigeni specifični za matične ćelije; (58) ASG-5; (59) ENPP3; (60) PRR4; (61) GCC - GUCY2C; (62) Liv-1 - SLC39A6; (63) 5T4; (64) CD56 - NCMA1; (65) CanAg; (66) FOLR1; (67) GPNMB; (68) TIM-1 - HAVCR1; (69) RG-1/Tumor prostate cilja Mindin - Mindin/RG-1; (70) B7-H4 - VTCN1; (71) PTK7; (72) CD37; (73) CD138 - SDC1; (74) CD74; (75) Claudins - CLs; (76) EGFR; (77) Her3; (78) RON - MST1R; (79) EPHA2; (80) CD20 - MS4A1; (81) Tenascin C - TNC; (82) FAP; (83) DKK-1; (84) CD52; (85) CS1 - SLAMF7; (86) Endoglin - ENG; (87) Annexin A1 - ANXA1; (88) V-CAM (CD106) - VCAM1.
  20. 20. Konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 18 do 19, gde je antitelo ili fragment antitela antitelo projektovano cisteinom.
  21. 21. Konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 15 do 20, gde je p ceo broj od 1 do 8.
  22. 22. Sastav koji sadrži smešu konjugata prema bilo kom od patentnih zahteva 15 do 21, gde je prosečni p u smeši konjugovanih jedinjenja oko 1 do oko 8.
  23. 23. Konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 15 do 21, za upotrebu u terapiji.
  24. 24. Farmaceutski sastav koji sadrži konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 15 do 21, farmaceutski prihvatljiv razblaživač, nosač ili ekscipijens.
  25. 25. Konjugat prema bilo kom od patentnih zahteva 15 do 21 ili farmaceutski sastav prema patentnom zahtevu 24, za upotrebu u lečenju proliferativne bolesti kod ispitanika, opciono gde je lečena bolest rak.
RS20210689A 2016-10-14 2017-10-13 Konjugati pirolobenzodiazepina RS61925B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1617466.6A GB201617466D0 (en) 2016-10-14 2016-10-14 Pyrrolobenzodiazepine conjugates
EP17791980.0A EP3525830B1 (en) 2016-10-14 2017-10-13 Pyrrolobenzodiazepine conjugates
PCT/EP2017/076162 WO2018069490A1 (en) 2016-10-14 2017-10-13 Pyrrolobenzodiazepine conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS61925B1 true RS61925B1 (sr) 2021-06-30

Family

ID=57680766

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20210689A RS61925B1 (sr) 2016-10-14 2017-10-13 Konjugati pirolobenzodiazepina

Country Status (28)

Country Link
US (1) US10799595B2 (sr)
EP (1) EP3525830B1 (sr)
JP (1) JP6678821B2 (sr)
KR (1) KR102253480B1 (sr)
CN (1) CN109843335B (sr)
AU (1) AU2017343793B2 (sr)
CA (1) CA3039832C (sr)
CL (1) CL2019000992A1 (sr)
CO (1) CO2019003709A2 (sr)
CY (1) CY1124385T1 (sr)
DK (1) DK3525830T3 (sr)
EA (1) EA038662B1 (sr)
ES (1) ES2874699T3 (sr)
GB (1) GB201617466D0 (sr)
HR (1) HRP20210868T1 (sr)
HU (1) HUE054461T2 (sr)
IL (1) IL265919B (sr)
LT (1) LT3525830T (sr)
MX (1) MX375570B (sr)
MY (1) MY190504A (sr)
NZ (1) NZ752526A (sr)
PL (1) PL3525830T3 (sr)
PT (1) PT3525830T (sr)
RS (1) RS61925B1 (sr)
SI (1) SI3525830T1 (sr)
SM (1) SMT202100484T1 (sr)
WO (1) WO2018069490A1 (sr)
ZA (1) ZA201902081B (sr)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3006242A1 (en) 2015-11-25 2017-06-01 Legochem Biosciences, Inc. Conjugates comprising self-immolative groups and methods related thereto
CA3006247A1 (en) 2015-11-25 2017-06-01 Legochem Biosciences, Inc. Conjugates comprising peptide groups and methods related thereto
EP3380126A4 (en) 2015-11-25 2019-07-24 LegoChem Biosciences, Inc. ANTIBODY-ACTIVE CONJUGATES WITH BRANCHED LINKERS AND ASSOCIATED METHODS
JOP20190080A1 (ar) 2016-10-14 2019-04-11 Bayer Pharma AG مركبات مشتقة من 6-(1h-بيرازول-1-يل) بيريميدين-4- أمين مستبدل واستخداماتها
AU2018246806B2 (en) 2017-03-29 2022-05-12 Ligachem Biosciences Inc. Pyrrolobenzodiazepine dimer precursor and ligand-linker conjugate compound thereof
SI3612537T1 (sl) * 2017-04-18 2022-10-28 Medimmune Limited Konjugati pirolobenzodiazepina
GB201806022D0 (en) 2018-04-12 2018-05-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA3099680A1 (en) 2018-05-09 2019-11-14 Legochem Biosciences, Inc. Compositions and methods related to anti-cd19 antibody drug conjugates
JP2021525265A (ja) 2018-05-25 2021-09-24 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン複合体
IL278973B2 (en) 2018-05-29 2025-07-01 Intocell Inc History of new benzodiazepines and their uses
WO2020079229A1 (en) * 2018-10-19 2020-04-23 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine conjugates
CA3118026A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Intocell, Inc. Fused heterocyclic benzodiazepine derivatives and uses thereof
WO2020141923A2 (ko) * 2019-01-03 2020-07-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도
MX2021010453A (es) * 2019-03-06 2021-09-21 Legochem Biosciences Inc Conjugados anticuerpo-farmaco que comprenden anticuerpos contra dlk1 humana y uso de estos.
MX2021010477A (es) 2019-03-15 2021-10-01 Medimmune Ltd Dimeros de azetidobenzodiazepina y conjugados que los comprenden para uso en el tratamiento de cancer.
CN114302745A (zh) * 2019-06-10 2022-04-08 Adc治疗有限公司 包含抗cd19抗体药物缀合物以及pi3k抑制剂或第二剂的组合疗法
EP4013494A1 (en) 2019-08-12 2022-06-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Macrophage stimulating 1 receptor (mst1r) variants and uses thereof
KR20210028544A (ko) * 2019-09-04 2021-03-12 주식회사 레고켐 바이오사이언스 인간 ror1에 대한 항체를 포함하는 항체 약물 접합체 및 이의 용도
US20240123081A1 (en) 2019-10-25 2024-04-18 Medimmune, Llc Branched moiety for use in conjugates
GB202015226D0 (en) 2020-09-25 2020-11-11 Adc Therapeutics S A Pyrrol obenzodiazepine-antibody conugates and uses thereof
GB202105186D0 (en) * 2021-04-12 2021-05-26 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
US20230201366A1 (en) 2021-11-19 2023-06-29 Adc Therapeutics Sa Anti-psma conjugates
US20230285580A1 (en) 2021-11-19 2023-09-14 Adc Therapeutics Sa Anti-il-13ralpha2 conjugates
JP2025500342A (ja) * 2021-12-21 2025-01-09 イントゥーセル，インコーポレーティッド 極性基を有する毒素を含む抗体薬物コンジュゲート及びその使用
EP4230222A1 (en) 2022-02-17 2023-08-23 Oxsonics Limited Combination therapy with an anti-axl antibody-pbd conjugate and nanocups
JP2025507736A (ja) 2022-02-28 2025-03-21 アーデーセー セラピューティクス ソシエテ アノニム 投薬レジメン
US20250367307A1 (en) 2022-06-30 2025-12-04 Toray Industries, Inc. Pharmaceutical composition for cancer treatment and/or prevention
EP4410314A1 (en) 2023-02-02 2024-08-07 ADC Therapeutics SA Combination therapy comprising anti-cd22 antibody-drug conjugate and irak1 inhibitor
WO2025032556A1 (en) * 2023-08-10 2025-02-13 Beigene Switzerland Gmbh Bioactive conjugates, preparation method and use thereof
WO2025032555A1 (en) * 2023-08-10 2025-02-13 Beigene Switzerland Gmbh Bioactive conjugates, preparation method and use thereof

Family Cites Families (406)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3361742A (en) 1964-12-07 1968-01-02 Hoffmann La Roche 5-oxo-1h-pyrrolo-[2, 1-c][1, 4]-benzodiazepin-2-crylamides
US3523941A (en) 1967-03-06 1970-08-11 Hoffmann La Roche Benzodiazepine compounds and process for their preparation
US3524849A (en) 1967-10-27 1970-08-18 Hoffmann La Roche Process for the preparation of pyrrolo-benzodiazepine acrylamides and intermediates useful therein
DE1965304A1 (de) 1968-12-30 1970-07-23 Fujisawa Pharmaceutical Co Benzdiazepinon-Verbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung
JPS4843755B1 (sr) 1969-06-26 1973-12-20
IL33558A (en) 1968-12-30 1973-10-25 Fujisawa Pharmaceutical Co Antibiotic pyrrolo-benzodiazepine compound,its derivatives and processes for their production
JPS6053033B2 (ja) 1976-12-28 1985-11-22 財団法人微生物化学研究会 新制癌抗生物質マゼスラマイシン及びその製造方法
JPS585916B2 (ja) 1977-12-27 1983-02-02 株式会社ミドリ十字 新規ベンゾジアゼピン系化合物
JPS5615289A (en) 1979-07-17 1981-02-14 Green Cross Corp:The Novel benzodiazepinnbased compound 3
JPS57131791A (en) 1980-12-31 1982-08-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd Benzodiazepine derivative and its preparation
CA1184175A (en) 1981-02-27 1985-03-19 Walter Hunkeler Imidazodiazepines
CA1173441A (en) 1981-02-27 1984-08-28 Hoffmann-La Roche Limited Imidazodiazepines
CA1185602A (en) 1981-02-27 1985-04-16 Emilio Kyburz Imidazodiazepines
JPS58180487A (ja) 1982-04-16 1983-10-21 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 抗生物質ｄｃ−８１およびその製造法
US4427588A (en) 1982-11-08 1984-01-24 Bristol-Myers Company Process for conversion of oxotomaymycin to tomaymycin
US4427587A (en) 1982-11-10 1984-01-24 Bristol-Myers Company Total synthesis of antitumor antibiotics BBM-2040A and BBM-2040B
JPS59152329A (ja) 1983-02-17 1984-08-31 Green Cross Corp:The 局所障害抑制剤
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
FR2586683B1 (fr) 1985-08-29 1988-07-01 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de neothramycine, leur procede de preparation et leur application en tant que medicaments
US5583024A (en) 1985-12-02 1996-12-10 The Regents Of The University Of California Recombinant expression of Coleoptera luciferase
JP2660201B2 (ja) 1988-08-05 1997-10-08 塩野義製薬株式会社 新規ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン誘導体および老人性痴呆薬
WO1991002536A1 (en) 1989-08-23 1991-03-07 Scripps Clinic And Research Foundation Compositions and methods for detection and treatment of epstein-barr virus infection and immune disorders
JPH053790A (ja) 1990-04-19 1993-01-14 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd デヒドロペプチダーゼ−ｉ
US5256643A (en) 1990-05-29 1993-10-26 The Government Of The United States Human cripto protein
WO1992007574A1 (en) 1990-10-25 1992-05-14 Tanox Biosystems, Inc. Glycoproteins associated with membrane-bound immunoglobulins as antibody targets on b cells
US5543503A (en) 1991-03-29 1996-08-06 Genentech Inc. Antibodies to human IL-8 type A receptor
US5440021A (en) 1991-03-29 1995-08-08 Chuntharapai; Anan Antibodies to human IL-8 type B receptor
ES2149772T5 (es) 1991-03-29 2008-02-16 Genentech, Inc. Receptores humanos pf4a y su utilizacion.
FR2676058B1 (fr) 1991-04-30 1994-02-25 Hoechst Lab Prodrogues glycosylees, leur procede de preparation et leur utilisation dans le traitement des cancers.
FR2676230B1 (fr) 1991-05-07 1993-08-27 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives de pyrrolo [1,4]-benzodiazepines, leur procede de preparation et medicaments les contenant.
JP3050424B2 (ja) 1991-07-12 2000-06-12 塩野義製薬株式会社 ヒトエンドセリンリセプター
US5264557A (en) 1991-08-23 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polypeptide of a human cripto-related gene, CR-3
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
US6153408A (en) 1991-11-15 2000-11-28 Institut Pasteur And Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
US6011146A (en) 1991-11-15 2000-01-04 Institut Pasteur Altered major histocompatibility complex (MHC) determinant and methods of using the determinant
GB9205051D0 (en) 1992-03-09 1992-04-22 Cancer Res Campaign Tech Pyrrolobenzodiazepine derivatives,their preparation,and compositions containing them
FR2696176B1 (fr) 1992-09-28 1994-11-10 Synthelabo Dérivés de pipéridine, leur préparation et leur application en thérapeutique.
IL107366A (en) 1992-10-23 2003-03-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Genes coding for megakaryocyte potentiator
US5644033A (en) 1992-12-22 1997-07-01 Health Research, Inc. Monoclonal antibodies that define a unique antigen of human B cell antigen receptor complex and methods of using same for diagnosis and treatment
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
GB9316162D0 (en) 1993-08-04 1993-09-22 Zeneca Ltd Fungicides
US5773223A (en) 1993-09-02 1998-06-30 Chiron Corporation Endothelin B1, (ETB1) receptor polypeptide and its encoding nucleic acid methods, and uses thereof
EP0647450A1 (en) 1993-09-09 1995-04-12 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Improved prodrugs for enzyme mediated activation
US5750370A (en) 1995-06-06 1998-05-12 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acid encoding human endothlein-bombesin receptor and method of producing the receptor
JPH08336393A (ja) 1995-04-13 1996-12-24 Mitsubishi Chem Corp 光学活性なγ−置換−β−ヒドロキシ酪酸エステルの製造法
US5707829A (en) 1995-08-11 1998-01-13 Genetics Institute, Inc. DNA sequences and secreted proteins encoded thereby
US20020193567A1 (en) 1995-08-11 2002-12-19 Genetics Institute, Inc. Secreted proteins and polynucleotides encoding them
JP3646191B2 (ja) 1996-03-19 2005-05-11 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
US6218519B1 (en) 1996-04-12 2001-04-17 Pro-Neuron, Inc. Compounds and methods for the selective treatment of cancer and bacterial infections
PL329930A1 (en) 1996-05-17 1999-04-26 Schering Corp Antigens of human lymphocytes b and related reagents
CA2264227A1 (en) 1996-09-27 1998-04-02 Raymond A. Firestone Hydrolyzable prodrugs for delivery of anticancer drugs to metastatic cells
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
US5945511A (en) 1997-02-20 1999-08-31 Zymogenetics, Inc. Class II cytokine receptor
US7033827B2 (en) 1997-02-25 2006-04-25 Corixa Corporation Prostate-specific polynucleotide compositions
US20030185830A1 (en) 1997-02-25 2003-10-02 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer
US6541212B2 (en) 1997-03-10 2003-04-01 The Regents Of The University Of California Methods for detecting prostate stem cell antigen protein
US6261791B1 (en) 1997-03-10 2001-07-17 The Regents Of The University Of California Method for diagnosing cancer using specific PSCA antibodies
US6267960B1 (en) 1997-03-10 2001-07-31 The Regents Of The University Of California PSCA: prostate stem cell antigen
US6555339B1 (en) 1997-04-14 2003-04-29 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, constitutively activated human protein-coupled receptors
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
WO1998051805A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate
WO1998051824A1 (en) 1997-05-15 1998-11-19 Abbott Laboratories Reagents and methods useful for detecting disease of the urinary tract
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
US20030060612A1 (en) 1997-10-28 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US20020034749A1 (en) 1997-11-18 2002-03-21 Billing-Medel Patricia A. Reagents and methods useful for detecting diseases of the breast
US6110695A (en) 1997-12-02 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Modulating the interaction of the chemokine, B Lymphocyte Hemoattractant, and its Receptor, BLR1
AU762991B2 (en) 1998-03-13 2003-07-10 Burnham Institute, The Molecules that home to various selected organs or tissues
CA2685270C (en) 1998-05-13 2014-07-29 Pharmexa Inc. Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same
HK1040052B (zh) 1998-05-22 2006-09-15 第一制药株式会社 药物复合物
US20030064397A1 (en) 1998-05-22 2003-04-03 Incyte Genomics, Inc. Transmembrane protein differentially expressed in prostate and lung tumors
US20020187472A1 (en) 2001-03-09 2002-12-12 Preeti Lal Steap-related protein
EP1754995B1 (en) 1998-07-08 2012-04-04 E Ink Corporation Methods for achieving improved color in microencapsulted electrophoretic devices
CA2341471C (en) 1998-08-27 2009-04-07 Spirogen Limited Pyrrolbenzodiazepines
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
GB9818732D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collection of compounds
GB9818730D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Collections of compounds
WO2000012130A1 (en) 1998-08-27 2000-03-09 Smithkline Beecham Corporation Rp105 agonists and antagonists
JP4689781B2 (ja) 1998-09-03 2011-05-25 独立行政法人科学技術振興機構 アミノ酸輸送蛋白及びその遺伝子
WO2000020579A1 (en) 1998-10-02 2000-04-13 Mcmaster University Spliced form of erbb-2/neu oncogene
WO2001057188A2 (en) 2000-02-03 2001-08-09 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US6962980B2 (en) 1999-09-24 2005-11-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030091580A1 (en) 2001-06-18 2003-05-15 Mitcham Jennifer L. Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6468546B1 (en) 1998-12-17 2002-10-22 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20020119158A1 (en) 1998-12-17 2002-08-29 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US6858710B2 (en) 1998-12-17 2005-02-22 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030009013A1 (en) 1998-12-30 2003-01-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
EP2006300A3 (en) 1998-12-30 2009-03-11 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Characterization of a calcium channel family
DE60044665D1 (de) 1999-01-29 2010-08-26 Corixa Corp Her2/neu fusionsproteine
GB9905124D0 (en) 1999-03-05 1999-04-28 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
AU3395900A (en) 1999-03-12 2000-10-04 Human Genome Sciences, Inc. Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides
US7304126B2 (en) 1999-05-11 2007-12-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6268488B1 (en) 1999-05-25 2001-07-31 Barbas, Iii Carlos F. Prodrug activation using catalytic antibodies
AU4952600A (en) 1999-06-03 2000-12-28 Takeda Chemical Industries Ltd. Screening method with the use of cd100
ES2466715T3 (es) 1999-06-25 2014-06-11 Immunogen, Inc. Métodos de tratamiento usando conjugados de anticuerpo anti-ErbB-maitansinoide
US6302318B1 (en) 1999-06-29 2001-10-16 General Electric Company Method of providing wear-resistant coatings, and related articles
US7589172B2 (en) 1999-07-20 2009-09-15 Genentech, Inc. PRO256 polypeptides
US7297770B2 (en) 1999-08-10 2007-11-20 Genentech, Inc. PRO6496 polypeptides
US7294696B2 (en) 1999-08-17 2007-11-13 Genentech Inc. PRO7168 polypeptides
US6909006B1 (en) 1999-08-27 2005-06-21 Spirogen Limited Cyclopropylindole derivatives
CA2380355A1 (en) 1999-09-01 2001-03-08 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030232056A1 (en) 1999-09-10 2003-12-18 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030206918A1 (en) 1999-09-10 2003-11-06 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
US20030129192A1 (en) 1999-09-10 2003-07-10 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of ovarian cancer
JP4028237B2 (ja) 1999-10-29 2007-12-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド 抗前立腺幹細胞抗原（ｐｓｃａ）抗体組成物及び使用方法
ES2591102T3 (es) 1999-11-29 2016-11-24 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Aislamiento de cinco genes novedosos que codifican nuevos melanomas de tipo receptor de Fc implicados en la patogénesis del linfoma/melanoma
AU1807401A (en) 1999-11-30 2001-06-12 Corixa Corporation Compositions and methods for therapy and diagnosis of breast cancer
WO2001041787A1 (en) 1999-12-10 2001-06-14 Epimmune Inc. INDUCING CELLULAR IMMUNE RESPONSES TO HER2/neu USING PEPTIDE AND NUCLEIC ACID COMPOSITIONS
NZ502058A (en) 1999-12-23 2003-11-28 Ovita Ltd Isolated mutated nucleic acid molecule for regulation of ovulation rate
DK1246846T3 (da) 1999-12-23 2008-12-08 Zymogenetics Inc Oplöselig interleukin-20-receptor
US6610286B2 (en) 1999-12-23 2003-08-26 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation using soluble receptors to interleukin-20
WO2001046261A1 (en) 1999-12-23 2001-06-28 Zymogenetics, Inc. Method for treating inflammation
ES2270893T3 (es) 1999-12-24 2007-04-16 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones para prolongar la vida media de compuestos bioactivos.
US20040001827A1 (en) 2002-06-28 2004-01-01 Dennis Mark S. Serum albumin binding peptides for tumor targeting
US7294695B2 (en) 2000-01-20 2007-11-13 Genentech, Inc. PRO10268 polypeptides
US20030224379A1 (en) 2000-01-21 2003-12-04 Tang Y. Tom Novel nucleic acids and polypeptides
AU2001234493A1 (en) 2000-01-21 2001-07-31 Corixa Corporation Compounds and methods for prevention and treatment of her-2/neu associated malignancies
US20030104562A1 (en) 2000-02-11 2003-06-05 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU2001238596A1 (en) 2000-02-22 2001-09-03 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 18607, a novel human calcium channel
US20030219806A1 (en) 2000-02-22 2003-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel 18607, 15603, 69318, 12303, 48000, 52920, 5433, 38554, 57301, 58324, 55063, 52991, 59914, 59921 and 33751 molecules and uses therefor
US20040052793A1 (en) 2001-02-22 2004-03-18 Carter Paul J. Caspase activivated prodrugs therapy
US20040002068A1 (en) 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
EP1261743A2 (en) 2000-03-07 2002-12-04 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
JP2004521602A (ja) 2000-03-24 2004-07-22 ファハリ サッチオグリュ 前立腺特異的または精巣特異的な新規の核酸分子、ポリペプチド、ならびに診断法および治療法
US20030186889A1 (en) 2000-03-31 2003-10-02 Wolf-Georg Forssmann Diagnostic and medicament for analysing the cell surface proteome of tumour and inflammatory cells and for treating tumorous and inflammatory diseases, preferably using a specific chemokine receptor analysis and the chemokine receptor-ligand interaction
US7279294B2 (en) 2000-04-03 2007-10-09 The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services, Nih Tumor markers in ovarian cancer
EP1301594A2 (en) 2000-04-07 2003-04-16 Arena Pharmaceuticals, Inc. Non-endogenous, consstitutively activated known g protein-coupled receptors
WO2001088133A2 (en) 2000-05-18 2001-11-22 Lexicon Genetics Incorporated Human semaphorin homologs and polynucleotides encoding the same
WO2001090304A2 (en) 2000-05-19 2001-11-29 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2001094641A2 (en) 2000-06-09 2001-12-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of ovarian carcinomas
AU2001268471A1 (en) 2000-06-16 2002-01-02 Incyte Genomics, Inc. G-protein coupled receptors
AU2001271714A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
JP2004528003A (ja) 2000-06-30 2004-09-16 インサイト・ゲノミックス・インコーポレイテッド 細胞外マトリクスおよび細胞接着分子
CA2413262A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Amgen, Inc. B7-like molecules and uses thereof
AU2002214531A1 (en) 2000-07-03 2002-01-30 Curagen Corporation Proteins and nucleic acids encoding same
US20040044179A1 (en) 2000-07-25 2004-03-04 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6891030B2 (en) 2000-07-27 2005-05-10 Mayo Foundation For Medical Education And Research T-cell immunoregulatory molecule
CA2417671A1 (en) 2000-07-28 2002-02-07 Ulrich Wissenbach Trp8, trp9 and trp10, novel markers for cancer
US7229623B1 (en) 2000-08-03 2007-06-12 Corixa Corporation Her-2/neu fusion proteins
WO2002013847A2 (en) 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Methods for diagnosis and therapy of hematological and virus-associated malignancies
WO2002014503A2 (en) 2000-08-14 2002-02-21 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of her-2/neu-associated malignancies
AU2001270118A1 (en) 2000-08-24 2002-03-04 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
GB0020953D0 (en) 2000-08-24 2000-10-11 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
EP1346040A2 (en) 2000-09-11 2003-09-24 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7582293B2 (en) 2000-09-15 2009-09-01 Genentech, Inc. Anti-PRO6308 antibodies
US6613567B1 (en) 2000-09-15 2003-09-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of Her-2 expression
WO2002022153A2 (en) 2000-09-15 2002-03-21 Zymogenetics, Inc. Use of a polypeptide comprising the extracellular domains of il-20rb for the treatment of inflammation
UA83458C2 (uk) 2000-09-18 2008-07-25 Байоджен Айдек Ма Інк. Виділений поліпептид baff-r (рецептор фактора активації в-клітин сімейства tnf)
WO2002022808A2 (en) 2000-09-18 2002-03-21 Biogen, Inc. Cripto mutant and uses thereof
CN1315805C (zh) 2000-09-19 2007-05-16 斯皮罗根公司 Cc－1065和多卡米新的非手性类似物的组合物及其使用方法
AU2002215345A1 (en) 2000-10-13 2002-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of prostate cancer, compositions and methods of screening for modulators of prostate cancer
CA2428242A1 (en) 2000-11-07 2002-05-16 Zymogenetics, Inc. Human tumor necrosis factor receptor
US20020150573A1 (en) 2000-11-10 2002-10-17 The Rockefeller University Anti-Igalpha-Igbeta antibody for lymphoma therapy
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
WO2002061087A2 (en) 2000-12-19 2002-08-08 Lifespan Biosciences, Inc. Antigenic peptides, such as for g protein-coupled receptors (gpcrs), antibodies thereto, and systems for identifying such antigenic peptides
US20020159986A1 (en) 2001-01-12 2002-10-31 John Langenfeld Bone morphogenetic protein-2 in the treatment and diagnosis of cancer
US20030119133A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US20030119125A1 (en) 2001-01-16 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
CA2440703A1 (en) 2001-01-24 2002-08-01 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of breast cancer, compositions and methods of screening for modulators of breast cancer
US20030073144A1 (en) 2001-01-30 2003-04-17 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
WO2002064798A1 (en) 2001-02-12 2002-08-22 Bionomics Limited Dna sequences differentially expressed in tumour cell lines
AU2002258518A1 (en) 2001-03-14 2002-09-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules and proteins for the identification, assessment, prevention, and therapy of ovarian cancer
EP1243276A1 (en) 2001-03-23 2002-09-25 Franciscus Marinus Hendrikus De Groot Elongated and multiple spacers containing activatible prodrugs
WO2002078524A2 (en) 2001-03-28 2002-10-10 Zycos Inc. Translational profiling
US6362331B1 (en) 2001-03-30 2002-03-26 Council Of Scientific And Industrial Research Process for the preparation of antitumor agents
WO2003008537A2 (en) 2001-04-06 2003-01-30 Mannkind Corporation Epitope sequences
US6820011B2 (en) 2001-04-11 2004-11-16 The Regents Of The University Of Colorado Three-dimensional structure of complement receptor type 2 and uses thereof
JP5232350B2 (ja) 2001-04-17 2013-07-10 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ アーカンソー Ｃａ１２５遺伝子のリピート配列並びに診断および治療的介入のためのその使用
JP2005527180A (ja) 2001-04-18 2005-09-15 プロテイン デザイン ラブス， インコーポレイテッド 肺がんの診断方法、肺がんの修飾因子の組成及びスクリーニングの方法
HUP0501113A3 (en) 2001-04-26 2007-12-28 Biogen Idec Inc Cripto blocking antibodies and uses thereof
WO2003083041A2 (en) 2002-03-22 2003-10-09 Biogen, Inc. Cripto-specific antibodies
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
EP1515982A4 (en) 2001-05-09 2005-10-26 Corixa Corp COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE THERAPY AND DIAGNOSIS OF PROSTATE CANCER
WO2002092836A2 (en) 2001-05-11 2002-11-21 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acid sequence encoding ovarian antigen, ca125, and uses thereof
KR100976743B1 (ko) 2001-05-24 2010-08-19 지모제넥틱스, 인코포레이티드 Ｔａｃｉ-면역글로불린 융합 단백질
JP2005518185A (ja) 2001-06-04 2005-06-23 キュラジェン コーポレイション 新規タンパク質およびそれをコード化する核酸
AU2002314901A1 (en) 2001-06-04 2002-12-16 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis and treatment of androgen-dependent prostate cancer, prostate cancer undergoing androgen-withdrawal, and androgen-independent prostate cancer
JP2005505257A (ja) 2001-06-05 2005-02-24 エクセリクシス・インコーポレイテッド ｐ５３経路のモディファイヤーとしてのＩＧｓおよび使用方法
DE60237917D1 (de) 2001-06-05 2010-11-18 Exelixis Inc Gfats als modifikatoren des p53-wegs und verwendungsverfahren
US7235358B2 (en) 2001-06-08 2007-06-26 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing and monitoring transplant rejection
WO2002101075A2 (en) 2001-06-13 2002-12-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
US7189507B2 (en) 2001-06-18 2007-03-13 Pdl Biopharma, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
AU2002347428A1 (en) 2001-06-18 2003-01-02 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
AU2002322280A1 (en) 2001-06-21 2003-01-21 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
US20030108958A1 (en) 2001-06-28 2003-06-12 Rene De Waal Malefyt Biological activity of AK155
US20030120040A1 (en) 2001-06-29 2003-06-26 Genentech, Inc. Secreted and Transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
AU2002314433A1 (en) 2001-07-02 2003-01-21 Licentia Ltd. Ephrin-tie receptor materials and methods
US20040076955A1 (en) 2001-07-03 2004-04-22 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of bladder cancer, compositions and methods of screening for modulators of bladder cancer
WO2003003984A2 (en) 2001-07-05 2003-01-16 Curagen Corporation Novel proteins and nucleic acids encoding same
US7446185B2 (en) 2001-07-18 2008-11-04 The Regents Of The University Of California Her2/neu target antigen and use of same to stimulate an immune response
WO2003009814A2 (en) 2001-07-25 2003-02-06 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of prostate cancer
CN1636067A (zh) 2001-08-03 2005-07-06 杰南技术公司 TACls和BR3多肽及其用途
AU2002324700A1 (en) 2001-08-14 2003-03-03 Bayer Ag Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
US20030092013A1 (en) 2001-08-16 2003-05-15 Vitivity, Inc. Diagnosis and treatment of vascular disease
AU2002313559A1 (en) 2001-08-23 2003-03-10 Oxford Biomedica (Uk) Limited Genes
AU2002357643A1 (en) 2001-08-29 2003-04-14 Vanderbilt University The human mob-5 (il-24) receptors and uses thereof
US20030124579A1 (en) 2001-09-05 2003-07-03 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
EP2287186B1 (en) 2001-09-06 2014-12-31 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled STEAP-1 useful in treatment and detection of cancer
WO2003025138A2 (en) 2001-09-17 2003-03-27 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003025228A1 (en) 2001-09-18 2003-03-27 Proteologics, Inc. Methods and compositions for treating hcap associated diseases
EP2143438B1 (en) 2001-09-18 2011-07-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumors
WO2003025148A2 (en) 2001-09-19 2003-03-27 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
AU2002327792A1 (en) 2001-09-28 2003-04-07 Bing Yang Diagnosis and treatment of diseases caused by mutations in cd72
US20040249144A1 (en) 2001-10-03 2004-12-09 Zairen Sun Regulated breast cancer genes
WO2003029277A2 (en) 2001-10-03 2003-04-10 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Modulators of lymphocyte activation and migration
CA2461665A1 (en) 2001-10-19 2003-05-01 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of inflammatory bowel disorders
US20050123925A1 (en) 2002-11-15 2005-06-09 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US7825089B2 (en) 2001-10-24 2010-11-02 National Jewish Health Three-dimensional structures of TALL-1 and its cognate receptors and modified proteins and methods related thereto
EP2053135A1 (en) 2001-10-31 2009-04-29 Alcon, Inc. Bone morphonic proteins (BMP), BMP receptors and BMP binding proteins and their use in the diagnosis and treatment of glaucoma
US20030232350A1 (en) 2001-11-13 2003-12-18 Eos Biotechnology, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
WO2003042661A2 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer, compositions and methods of screening for modulators of cancer
CA2467242A1 (en) 2001-11-20 2003-05-30 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
US7344843B2 (en) 2001-11-29 2008-03-18 Serono Genetics Institute S.A. Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders
ATE550352T1 (de) 2001-12-03 2012-04-15 Alexion Pharma Inc Verfahren zur herstellung von hybridantikörper
AU2002349784A1 (en) 2001-12-03 2003-06-17 Asahi Kasei Pharma Corporation Nf-kappab activating genes
CA2469941A1 (en) 2001-12-10 2003-07-03 Nuvelo, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US20030134790A1 (en) 2002-01-11 2003-07-17 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bone Morphogenetic Protein-2 And Bone Morphogenetic Protein-4 In The Treatment And Diagnosis Of Cancer
CA2473549C (en) 2002-01-16 2011-02-15 Japan Science And Technology Agency Moving-image holographic reproducing device and color moving-image holographic reproducing device
US7452675B2 (en) 2002-01-25 2008-11-18 The Queen's Medical Center Methods of screening for TRPM4b modulators
WO2003072736A2 (en) 2002-02-21 2003-09-04 Duke University Reagents and treatment methods for autoimmune diseases
WO2003072035A2 (en) 2002-02-22 2003-09-04 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20030165966A1 (en) 2002-03-01 2003-09-04 Marcia Belvin MSRAs as modifiers of the p53 pathway and methods of use
US6660856B2 (en) 2002-03-08 2003-12-09 Kaohsiung Medical University Synthesis of pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine analogues
EP2258712A3 (en) 2002-03-15 2011-05-04 Multicell Immunotherapeutics, Inc. Compositions and Methods to Initiate or Enhance Antibody and Major-histocompatibility Class I or Class II-restricted T Cell Responses by Using Immunomodulatory, Non-coding RNA Motifs
WO2004000997A2 (en) 2002-03-19 2003-12-31 Curagen Corporation Therapeutic polypeptides, nucleic acids encoding same, and methods of use
US7202033B2 (en) 2002-03-21 2007-04-10 Sunesis Pharmaceuticals, Inc. Identification of kinase inhibitors
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
AU2003245239A1 (en) 2002-03-25 2003-11-03 Uab Research Foundation FC receptor homolog, reagents, and uses thereof
AU2003222103A1 (en) 2002-03-28 2003-10-13 Idec Pharmaceuticals Corporation Novel gene targets and ligands that bind thereto for treatment and diagnosis of colon carcinomas
US20030194704A1 (en) 2002-04-03 2003-10-16 Penn Sharron Gaynor Human genome-derived single exon nucleic acid probes useful for gene expression analysis two
AU2003223469A1 (en) 2002-04-05 2003-10-27 Agensys, Inc. Nucleic acid and corresponding protein entitled 98p4b6 useful in treatment and detection of cancer
WO2003087768A2 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Mitokor Targets for therapeutic intervention identified in the mitochondrial proteome
KR20040101502A (ko) 2002-04-16 2004-12-02 제넨테크, 인크. 종양의 진단 및 치료 방법 및 이를 위한 조성물
AU2003239158A1 (en) 2002-04-17 2003-11-03 Baylor College Of Medicine Aib1 as a prognostic marker and predictor of resistance to encocrine therapy
AU2003228869A1 (en) 2002-05-03 2003-11-17 Incyte Corporation Transporters and ion channels
EP1572925A4 (en) 2002-05-15 2007-08-15 Avalon Pharmaceuticals CANCER-ASSOCIATED GENE AS A TARGET FOR CHEMOTHERAPY
US20030224454A1 (en) 2002-05-30 2003-12-04 Ryseck Rolf Peter Human solute carrier family 7, member 11 (hSLC7A11)
WO2003101283A2 (en) 2002-06-04 2003-12-11 Incyte Corporation Diagnostics markers for lung cancer
AU2003239969A1 (en) 2002-06-04 2003-12-19 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
WO2003104270A2 (en) 2002-06-06 2003-12-18 Ingenium Pharmaceuticals Ag Dudulin 2 genes, expression products, non-human animal model: uses in human hematological disease
DE60336227D1 (de) 2002-06-06 2011-04-14 Oncotherapy Science Inc Gene und proteine mit bezug zu menschlichem kolonkrebs
EP1576111A4 (en) 2002-06-07 2006-10-18 Avalon Pharmaceuticals CANCER-RELATED GENE AS TARGET IN CHEMOTHERAPY
WO2003105758A2 (en) 2002-06-12 2003-12-24 Avalon Pharmaceuticals, Inc. Cancer-linked gene as target for chemotherapy
CA2487809A1 (en) 2002-06-18 2003-12-24 Archemix Corp. Aptamer-toxin molecules and methods for using same
US20040249130A1 (en) 2002-06-18 2004-12-09 Martin Stanton Aptamer-toxin molecules and methods for using same
EP1539218A4 (en) 2002-06-20 2007-08-22 Univ California COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING LYMPHOCYTE ACTIVITY
AU2003278161A1 (en) 2002-06-21 2004-01-06 Johns Hopkins University School Of Medicine Membrane associated tumor endothelium markers
DE10229834A1 (de) 2002-07-03 2004-01-29 Zinser Textilmaschinen Gmbh Streckwerk für Spinnmaschinen mit nachgeordneter Verdichtungsvorrichtung
WO2004009622A2 (en) 2002-07-19 2004-01-29 Cellzome Ag Protein complexes of cellular networks underlying the development of cancer and other diseases
EP1551877A4 (en) 2002-07-25 2006-01-18 Genentech Inc TACI ANTIBODIES AND THEIR USE
DK1545613T3 (da) 2002-07-31 2011-11-14 Seattle Genetics Inc Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom
WO2004032828A2 (en) 2002-07-31 2004-04-22 Seattle Genetics, Inc. Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
WO2004015426A1 (en) 2002-08-06 2004-02-19 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human cxc chemokine receptor 5(cxcr5)
EP1578371A4 (en) 2002-08-19 2009-05-20 Genentech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR TUMOR DIAGNOSIS AND TREATMENT
WO2004020583A2 (en) 2002-08-27 2004-03-11 Bristol-Myers Squibb Company Polynucleotide predictor set for identifying protein tyrosine kinase modulators
WO2004020595A2 (en) 2002-08-29 2004-03-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Novel human polypeptides encoded by polynucleotides
WO2004019993A1 (en) 2002-08-30 2004-03-11 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Self-immolative dendrimers releasing many active moieties upon a single activating event
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
WO2004022709A2 (en) 2002-09-06 2004-03-18 Mannkind Corporation Epitope sequences
AU2003300776A1 (en) 2002-09-09 2004-05-25 Omeros Corporation G protein coupled receptors and uses thereof
JP2004113151A (ja) 2002-09-27 2004-04-15 Sankyo Co Ltd 癌遺伝子及びその用途
CA2500978A1 (en) 2002-10-03 2004-04-15 Mcgill University Antibodies and cyclic peptides which bind cea (carcinoembryonic antigen) and their use as cancer therapeutics
CA2501131A1 (en) 2002-10-04 2004-04-22 Van Andel Research Institute Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
US20040138269A1 (en) 2002-10-11 2004-07-15 Sugen, Inc. Substituted pyrroles as kinase inhibitors
EP2364716A3 (en) 2002-11-08 2012-01-11 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of natural killer cell related diseases
WO2004044178A2 (en) 2002-11-13 2004-05-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for diagnosing dysplasia
WO2004043493A1 (en) 2002-11-14 2004-05-27 Syntarga B.V. Prodrugs built as multiple self-elimination-release spacers
GB0226593D0 (en) 2002-11-14 2002-12-24 Consultants Ltd Compounds
CA2505601C (en) 2002-11-15 2014-10-28 Musc Foundation For Research Development Complement receptor 2 targeted complement modulators
JP2006516189A (ja) 2002-11-15 2006-06-29 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ アーカンソー Ｃａ１２５遺伝子、および診断および治療のためのその使用
US20080213166A1 (en) 2002-11-20 2008-09-04 Biogen Idec Inc. Novel Gene Targets and Ligands that Bind Thereto for Treatment and Diagnosis of Colon Carcinomas
WO2004047749A2 (en) 2002-11-21 2004-06-10 University Of Utah Research Foundation Purinergic modulation of smell
WO2004048938A2 (en) 2002-11-26 2004-06-10 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
EP1581641A4 (en) 2002-12-06 2006-11-15 Diadexus Inc COMPOSITIONS, SPREADING VARIATIONS AND METHODS RELATED TO OVARAL SPECIFIC GENES AND PROTEINS
US20040157278A1 (en) 2002-12-13 2004-08-12 Bayer Corporation Detection methods using TIMP 1
WO2004058171A2 (en) 2002-12-20 2004-07-15 Protein Design Labs, Inc. Antibodies against gpr64 and uses thereof
AU2003299819A1 (en) 2002-12-23 2004-07-22 Human Genome Sciences, Inc. Neutrokine-alpha conjugate, neutrokine-alpha complex, and uses thereof
WO2004063709A2 (en) 2003-01-08 2004-07-29 Bristol-Myers Squibb Company Biomarkers and methods for determining sensitivity to epidermal growth factor receptor modulators
US20050227301A1 (en) 2003-01-10 2005-10-13 Polgen Cell cycle progression proteins
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
US20040171823A1 (en) 2003-01-14 2004-09-02 Nadler Steven G. Polynucleotides and polypeptides associated with the NF-kappaB pathway
WO2004065576A2 (en) 2003-01-15 2004-08-05 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the treatment of urological disorder using differential expressed polypeptides
CA2516128A1 (en) 2003-02-14 2004-09-02 Sagres Discovery, Inc. Therapeutic targets in cancer
US20030224411A1 (en) 2003-03-13 2003-12-04 Stanton Lawrence W. Genes that are up- or down-regulated during differentiation of human embryonic stem cells
ATE421967T1 (de) 2003-03-31 2009-02-15 Council Scient Ind Res Nichtvernetzende pyrroloä2,1-cüä1, 4übenzodiazepine als potentielle antitumor- agentien und ihre herstellung
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
GB0416511D0 (en) 2003-10-22 2004-08-25 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
WO2005040170A2 (en) 2003-10-22 2005-05-06 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
WO2005079479A2 (en) 2004-02-17 2005-09-01 Absalus, Inc. Super-humanized antibodies against respiratory syncytial virus
EP1718667B1 (en) 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
CA2558195C (en) 2004-03-01 2012-11-06 Spirogen Limited 11-hydroxy-5h-pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepin-5-one derivatives as key intermediates for the preparation of c2 substituted pyrrolobenzodiazepines
GB0404577D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0404574D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Amino acids
GB0404578D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
DE102004010943A1 (de) 2004-03-03 2005-09-29 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von N-geschützten 4-Ketprolinderivaten
US7528126B2 (en) 2004-03-09 2009-05-05 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines
FR2869231B1 (fr) 2004-04-27 2008-03-14 Sod Conseils Rech Applic Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine
EP1750614B1 (en) 2004-05-11 2017-09-27 The General Hospital Corporation Methods for making oxidation resistant polymeric material
GB0410725D0 (en) 2004-05-13 2004-06-16 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepine therapeutic agents
KR101270829B1 (ko) 2004-09-23 2013-06-07 제넨테크, 인크. 시스테인 유전자조작 항체 및 접합체
EP1831418A2 (en) 2004-12-24 2007-09-12 Showa Denko Kabushiki Kaisha Production method of thermoelectric semiconductor alloy, thermoelectric conversion module and thermoelectric power generating device
JP2008528668A (ja) 2005-02-03 2008-07-31 アンチトープ リミテッド ヒト抗体及びタンパク質
CN101203241B (zh) 2005-04-19 2012-02-22 西雅图基因公司 人源化抗-cd70结合物和其应用
GB0508084D0 (en) 2005-04-21 2005-06-01 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
NZ563136A (en) 2005-04-21 2009-11-27 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US8637664B2 (en) 2005-10-05 2014-01-28 Spirogen Sarl Alkyl 4- [4- (5-oxo-2,3,5, 11a-tetrahydo-5H-pyrrolo [2, 1-c] [1,4] benzodiazepine-8-yloxy)-butyrylamino]-1H-pyrrole-2-carboxylate derivatives and related compounds for the treatment of a proliferative disease
US20070154906A1 (en) 2005-10-05 2007-07-05 Spirogen Ltd. Methods to identify therapeutic candidates
DE602006021205D1 (de) 2005-10-07 2011-05-19 Exelixis Inc Azetidine als mek-inhibitoren bei der behandlung proliferativer erkrankungen
SI1813614T1 (sl) 2006-01-25 2012-01-31 Sanofi 174 Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomajmicinske derivate
NZ574215A (en) 2006-07-18 2012-07-27 Sanofi Aventis Antagonist antibody against epha2 for the treatment of cancer
JP5825756B2 (ja) 2006-08-14 2015-12-02 ゼンコー・インコーポレイテッドＸｅｎｃｏｒ、 Ｉｎｃ． Ｃｄ１９を標的とする最適化抗体
US20080112961A1 (en) 2006-10-09 2008-05-15 Macrogenics, Inc. Identification and Engineering of Antibodies with Variant Fc Regions and Methods of Using Same
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
WO2008050140A2 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Spirogen Limited Compounds for treatment of parasitic infection
DK2099823T4 (da) 2006-12-01 2022-05-09 Seagen Inc Målbindingsmiddelvarianter og anvendelser deraf
AR066476A1 (es) 2007-05-08 2009-08-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-muc16 disenados con cisteina y conjugaods de anticuerpos y farmacos
SI2019104T1 (sl) 2007-07-19 2013-12-31 Sanofi Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomaimicinske derivate, in njihova terapevtska uporaba
ATE543826T1 (de) * 2007-08-01 2012-02-15 Council Scient Ind Res Als selektive antitumormittel geeignete pyrroloä2,1-cüä1,4übenzodiazepinglycosid-prodru s
CA2698541C (en) 2007-10-19 2018-01-09 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-tenb2 antibodies and antibody drug conjugates
GB0722088D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0722087D0 (en) 2007-11-09 2007-12-19 Spirogen Ltd Polyamides
DK2265283T3 (da) 2008-03-18 2014-10-20 Seattle Genetics Inc Auristatin-lægemiddel-linker-konjugater
EP2109244A1 (de) 2008-04-09 2009-10-14 Siemens Aktiengesellschaft Verfahren zur sicherheitsgerichteten Übertragung Sicherheitsschaltgerät und Kontrolleinheit
HUE034763T2 (en) 2008-04-30 2018-02-28 Immunogen Inc Crosslinkers and their use
KR20110028450A (ko) 2008-06-16 2011-03-18 이뮤노젠 아이엔씨 새로운 상승 효과
GB0813432D0 (en) 2008-07-22 2008-08-27 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
GB0819095D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
SG173152A1 (en) 2009-02-05 2011-08-29 Immunogen Inc Novel benzodiazepine derivatives
SG173654A1 (en) 2009-02-23 2011-09-29 Glenmark Pharmaceuticals Sa Humanized antibodies that bind to cd19 and their uses
JP5382792B2 (ja) 2009-08-14 2014-01-08 独立行政法人理化学研究所 光２次非線形薄膜における１次及び２次光感受率異方性同時測定方法、当該方法を実行する装置及び当該方法をコンピュータに実行させるプログラム
FR2949469A1 (fr) 2009-08-25 2011-03-04 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique
KR20120060877A (ko) 2009-09-01 2012-06-12 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
US20110070227A1 (en) 2009-09-18 2011-03-24 Anna-Marie Novotney-Barry Treatment of Autoimmune and Inflammatory Diseases
EP2480230A4 (en) 2009-09-24 2015-06-10 Seattle Genetics Inc DR5 Ligand-HEILMITTELKONJUGATE
US9040526B2 (en) 2010-02-09 2015-05-26 Bristol-Myers Squibb Company Benzylpyrrolidinone derivatives as modulators of chemokine receptor activity
TW201129383A (en) 2010-02-10 2011-09-01 Immunogen Inc CD20 antibodies and uses thereof
WO2011100403A1 (en) 2010-02-10 2011-08-18 Immunogen, Inc Cd20 antibodies and uses thereof
ES2623057T3 (es) 2010-04-15 2017-07-10 Medimmune Limited Pirrolobenzodiazepinas usadas para tratar enfermedades proliferativas
KR101772354B1 (ko) 2010-04-15 2017-08-28 시애틀 지네틱스, 인크. 표적화된 피롤로벤조디아제핀 접합체
GB201006340D0 (en) 2010-04-15 2010-06-02 Spirogen Ltd Synthesis method and intermediates
WO2011130615A2 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Dr. Reddy's Laboratories Ltd. Preparation of lacosamide
WO2011130598A1 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3108886B1 (en) 2010-04-21 2020-06-17 Syntarga B.V. Conjugates of cc-1065 analogs and bifunctional linkers
FR2963007B1 (fr) 2010-07-26 2013-04-05 Sanofi Aventis Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique
WO2012064733A2 (en) 2010-11-09 2012-05-18 Medimmune, Llc Antibody scaffold for homogenous conjugation
KR20190089048A (ko) 2011-02-15 2019-07-29 이뮤노젠 아이엔씨 컨쥬게이트의 제조방법
US9135118B2 (en) 2011-03-07 2015-09-15 Aptare, Inc. System to catalog and search point-in-time instances of a file system
WO2013041606A1 (en) 2011-09-20 2013-03-28 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines as unsymmetrical dimeric pbd compounds for inclusion in targeted conjugates
EP2751076B1 (en) 2011-10-14 2018-04-25 MedImmune Limited Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines
MX358757B (es) 2011-10-14 2018-09-03 Seattle Genetics Inc Pirrolobenzodiazepinas y conjugados dirigidos.
BR112014008888A2 (pt) 2011-10-14 2017-04-18 Seattle Genetics Inc pirrolobenzodiazepinas
US9526798B2 (en) 2011-10-14 2016-12-27 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
WO2013055987A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US9388187B2 (en) 2011-10-14 2016-07-12 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines
JP2013194140A (ja) 2012-03-19 2013-09-30 Fuji Xerox Co Ltd トナー用ポリエステル樹脂、静電荷像現像用トナー、静電荷像現像剤、トナーカートリッジ、プロセスカートリッジ、画像形成装置及び画像形成方法
KR101960130B1 (ko) 2012-04-30 2019-03-19 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀
NZ701290A (en) 2012-04-30 2016-08-26 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines
US9062577B2 (en) 2012-05-14 2015-06-23 Southwest Research Institute Diesel engine operation for fast transient response and low emissions
WO2013177481A1 (en) 2012-05-25 2013-11-28 Immunogen, Inc. Benzodiazepines and conjugates thereof
TW201406785A (zh) 2012-07-09 2014-02-16 Genentech Inc 抗ｃｄ２２抗體及免疫結合物
IN2014DN10652A (sr) 2012-07-09 2015-09-11 Genentech Inc
BR112015002193A2 (pt) 2012-08-02 2017-07-04 Genentech Inc anticorpos anti-etbr e imunoconjugados
EP2887965A1 (en) 2012-08-22 2015-07-01 ImmunoGen, Inc. Cytotoxic benzodiazepine derivatives
AU2013328673B2 (en) 2012-10-12 2017-07-13 Medimmune Limited Synthesis and intermediates of pyrrolobenzodiazepine derivatives for conjugation
PL2906251T3 (pl) 2012-10-12 2018-02-28 Adc Therapeutics Sa Koniugaty pirolobenzodiazepina-przeciwciało anty-CD22
WO2014057120A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
ES2680153T3 (es) 2012-10-12 2018-09-04 Adc Therapeutics Sa Conjugados de anticuerpos anti-PSMA-pirrolobenzodiazepinas
HRP20181646T2 (hr) 2012-10-12 2019-08-09 Adc Therapeutics Sa Konjugati pirolobenzodiazepin - anti-psma protutijela
WO2014057118A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sarl Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd22 antibody conjugates
KR101645905B1 (ko) 2012-10-12 2016-08-04 스피로즌 살 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
HRP20190366T1 (hr) 2012-10-12 2019-04-19 Medimmune Limited Pirolobenzodiazepini i njihovi konjugati
HRP20171264T1 (hr) 2012-10-12 2017-10-20 Adc Therapeutics Sa Konjugati protutijela anti-her2-pirolobenzodiazepina
MX364328B (es) 2012-10-12 2019-04-23 Medimmune Ltd Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina.
WO2014057117A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Adc Therapeutics Sàrl Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
CA2891280C (en) 2012-11-24 2018-03-20 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
CN105246894A (zh) 2012-12-21 2016-01-13 斯皮罗根有限公司 用于治疗增殖性和自身免疫疾病的非对称吡咯并苯并二氮杂卓二聚物
AU2013366493B2 (en) 2012-12-21 2017-08-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
RU2019109456A (ru) 2013-02-22 2019-04-10 ЭББВИ СТЕМСЕНТРКС ЭлЭлСи Новые конъюгаты антител и их применения
EP2968585B1 (en) 2013-03-13 2018-07-18 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
WO2014140862A2 (en) 2013-03-13 2014-09-18 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP6445519B2 (ja) 2013-03-13 2018-12-26 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ ピロロベンゾジアゼピン及びそのコンジュゲート
WO2014174111A1 (en) 2013-04-26 2014-10-30 Pierre Fabre Medicament Axl antibody-drug conjugate and its use for the treatment of cancer
KR20160047567A (ko) 2013-08-28 2016-05-02 스템센트알엑스 인코포레이티드 조작된 항-dll3 접합체 및 사용 방법
NL2011583C2 (en) 2013-10-10 2015-04-13 Wwinn B V Module, system and method for detecting acoustical failure of a sound source.
GB201317982D0 (en) * 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US10010624B2 (en) 2013-10-11 2018-07-03 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
GB201318069D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Maersk Olie & Gas Seismic data processing method and apparatus
DE102013220528B4 (de) 2013-10-11 2015-05-07 Continental Automotive Gmbh Einspritzventil und Verfahren zum Betreiben eines Einspritzventils
AU2014333776B2 (en) 2013-10-11 2021-01-28 Cellectis Methods and kits for detecting nucleic acid sequences of interest using DNA-binding protein domain
GB201317981D0 (en) 2013-10-11 2013-11-27 Spirogen Sarl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
EP3054984A1 (en) 2013-10-11 2016-08-17 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
EP3054986B1 (en) * 2013-10-11 2019-03-20 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
US9950078B2 (en) 2013-10-11 2018-04-24 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates
MX381017B (es) 2013-12-16 2025-03-12 Genentech Inc Compuestos peptidomiméticos y conjugados anticuerpo-fármaco de estos.
GB201406767D0 (en) * 2014-04-15 2014-05-28 Cancer Rec Tech Ltd Humanized anti-Tn-MUC1 antibodies anf their conjugates
WO2016037644A1 (en) * 2014-09-10 2016-03-17 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
SG11201701627PA (en) 2014-09-12 2017-03-30 Genentech Inc Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates
GB201416112D0 (en) 2014-09-12 2014-10-29 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP2017533887A (ja) 2014-09-17 2017-11-16 ジェネンテック， インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピン類及びその抗体ジスルフィドコンジュゲート

Also Published As

Publication number Publication date
CO2019003709A2 (es) 2019-06-28
AU2017343793B2 (en) 2019-10-10
IL265919B (en) 2020-06-30
CA3039832A1 (en) 2018-04-19
JP6678821B2 (ja) 2020-04-08
DK3525830T3 (da) 2021-05-31
LT3525830T (lt) 2021-06-25
CN109843335A (zh) 2019-06-04
PL3525830T3 (pl) 2021-09-27
NZ752526A (en) 2020-07-31
US10799595B2 (en) 2020-10-13
KR20190064619A (ko) 2019-06-10
ZA201902081B (en) 2019-11-27
JP2020503250A (ja) 2020-01-30
IL265919A (en) 2019-06-30
GB201617466D0 (en) 2016-11-30
HUE054461T2 (hu) 2021-09-28
CL2019000992A1 (es) 2019-09-23
EA201990615A1 (ru) 2019-08-30
HRP20210868T1 (hr) 2021-07-09
SI3525830T1 (sl) 2021-08-31
EP3525830A1 (en) 2019-08-21
SMT202100484T1 (it) 2021-09-14
EP3525830B1 (en) 2021-03-10
US20190282705A1 (en) 2019-09-19
KR102253480B1 (ko) 2021-05-18
MX375570B (es) 2025-03-06
WO2018069490A1 (en) 2018-04-19
CY1124385T1 (el) 2022-07-22
MX2019004292A (es) 2019-10-14
PT3525830T (pt) 2021-06-07
AU2017343793A1 (en) 2019-04-18
BR112019007612A2 (pt) 2019-07-02
CA3039832C (en) 2020-05-05
EA038662B1 (ru) 2021-09-30
ES2874699T3 (es) 2021-11-05
CN109843335B (zh) 2021-07-30
MY190504A (en) 2022-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA3039832C (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
JP6527466B2 (ja) 増殖性疾患および自己免疫疾患の治療に使用するための非対称ピロロベンゾジアゼピンニ量体
JP7309764B2 (ja) ピロロベンゾジアゼピン複合体
JP6837487B2 (ja) ピロロベンゾジアゼピン複合体
JP2017528467A (ja) ピロロベンゾジアゼピン及びそのコンジュゲート
JP2017531622A (ja) ピロロベンゾジアゼピン及びそのコンジュゲート
CN107530442A (zh) 位点特异性抗体‑药物缀合物
JP2019508391A (ja) ピロロベンゾジアゼピン類
HK40007607A (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
HK40007607B (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
BR112019007612B1 (pt) Compostos e conjugados de pirrolobenzodiazepina, composições que compreendem ditos conjugados e uso dos mesmos para tratar uma doença proliferativa
EA038267B1 (ru) Пирролобензодиазепиновые конъюгаты
HK40016994A (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
HK40016994B (en) Pyrrolobenzodiazepine conjugates
BR112019021942B1 (pt) Compostos, conjugados de pirrolobenzodiazepina, composição farmacêutica que compreende os ditos conjugados e uso dos mesmos para o tratamento de câncer