RS64261B1

RS64261B1 - Supstituisani derivati tieno[2,3-d]pirimidina kao inhibitori menin-mll i načini upotrebe

Info

Publication number: RS64261B1
Application number: RS20230441A
Authority: RS
Inventors: Tao Wu; Liansheng Li; Yi Wang; Pingda Ren; Jolanta Grembecka; Tomasz Cierpicki; Szymon Klossowski; Jonathan Pollock; Dmitry Borkin
Original assignee: Kura Oncology Inc; Univ Michigan Regents
Priority date: 2016-03-16
Filing date: 2017-03-15
Publication date: 2023-07-31
Also published as: AU2017232516A1; NZ745842A; JP2019510004A; AU2017232516B2; TW201736381A; PH12018501952A1; ZA202310395B; HUE061989T2; JP2021183609A; WO2017161028A1; MD3429591T2; JP2023153820A; JP7797769B2; JP6919977B2; BR112018068703B1; EP3429591A1; US20250320225A1; SMT202300273T1; LT3429591T; FI3429591T3

Description

Opis

OBLAST TEHNIKE

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja koja su korisna u inhibiciji interakcija između menina i drugog proteina, farmaceutskog sastava koja sadrže navedena jedinjenja i jedinjenja za upotrebu u lečenju bolesti i poremećaja posredovanih meninom i drugim proteinom.

POZADINA

[0002] Protein leukemije mešovite linije (MLL) je histon metiltransferaza kritična za epigenetsku regulaciju transkripcije gena. Mnoge akutne leukemije, uključujući akutnu mijeloblastnu leukemiju (AML), akutnu limfoblastnu leukemiju (ALL) i leukemiju mešovite linije (MLL), karakteriše prisustvo himernih MLL fuzionih proteina koji su rezultat hromozomskih translokacija gena MLL koji se nalazi na hromozomu 11, opseg q23 (11q23). Himerni MLL fuzioni proteini zadržavaju približno 1400 aminokiselina N-kraja MLL-a, ali su spojeni sa jednim od približno 80 partnerskih proteina (npr., AF4, AF9, ENL, AF10, ELL, AF6, AF1p, GAS7). MLL fuzionim proteinima nedostaje originalna aktivnost histon metiltransferaze na C-kraju MLL-a i dobijaju sposobnost da regulišu transkripciju brojnih onkogena, uključujući HOX i MEIS1, što dovodi do povećane proliferacije ćelija i smanjene ćelijske diferencijacije, što na kraju dovodi do leukemogeneze.

[0003] Protein menin, koji je kodiran genom za višestruku endokrinu neoplaziju (MEN), je sveprisutno eksprimiran nuklearni protein koji učestvuje u interakcijama sa proteinima za obradu i popravku DNK, proteinima koji modifikuju hromatin i brojnim faktorima transkripcije (Agarwal, i dr.; Horm Metab Res, 2005, 37(6): 369-374). Povezivanje menina sa N-terminusom MLL fuzionih proteina je neophodno za uočenu onkogenu aktivnost MLL fuzionih proteina. Pokazalo se da ova povezanost konstitutivno reguliše ekspresiju onkogena HOX i MEIS1 i ometa proliferaciju i diferencijaciju hematopoetskih ćelija što dovodi do razvoja leukemije. Pošto je pokazano da menin funkcioniše kao opšti onkogeni kofaktor kod leukemija povezanih sa MLL, interakcija između menina i MLL fuzionih proteina i MLL predstavlja potencijalnu hemoterapeutsku metu.

[0004] Pacijenti, posebno novorođenčad, sa leukemijama koje nose hromozomske translokacije MLL gena imaju lošu prognozu, sa manje od 40% petogodišnjeg preživljavanja (Slany; Haematologica, 2009, 94(7): 984-993). Hitno je potrebna nova terapijska strategija za lečenje ovih leukemija. Inhibitori malih molekula koji blokiraju interakciju menin-MLL su stoga vredne mete za lečenje bolesti koje uključuju MLL fuzione proteine.

SU{TINA PRONALASKA

[0005] U prvom aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje Formule (II-A):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde:

C se bira između piperidinila i piperazinila;

L<2>je -CH2-;

L<3>je -CH2CH(R<56>)-, i R<56>je metil;

R<1>je C1-3haloalkil;

R<2>je izabran između halogena, -OR<52>, -N(R<52>)2, -CN, C1-3alkil, C1-3alkil-OR<52>, C1-3alkil-N(R<52>)2, C1-3haloalkil, C2-3alkenil, i C2-3alkinil;

R<3>je izabran između vodonika, halogena, -OH, -N(R<52>)2, -CN, -C(O)OR<52>, C1-3alkila i C1-3haloalkila; R<A>i Rsu svaki nezavisno izabrani pri svakom pojavljivanju od halogena, -CN, -OR<52>, -N(R<52>)2, -

NR<53>R<54>, -C(O)R<52>, -C(O)OR<52>, -OC(O)R<52>, -NR<52>C(O)R<52>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, =O, C1-10

alkila, C2-10alkenila, i C2-10alkinila;

R<C>je izabran iz -C(O)R<52>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, -S(=O)2N(R<52>)2, -S(=O)2NR<53>R<54>, -NR<52>S(=O)2R<52>, =O, C1-3alkila i C1-3haloalkila ili dve R<C>grupe vezane na različite atome mogu formirati C1-3most; m i p su svaki nezavisno ceo broj od 0 do 6;

n je ceo broj od 1 do 4;

R<51>je izabran iz grupe koju čine vodonik i C1-6alkil;

R<52>se nezavisno bira pri svakom pojavljivanju između vodonika; i C1-20alkil, C2-20alkenil, C2-20alkinil, 1- do 6-člani heteroalkil, C3-12karbocikl i 3- do 12-člani heterocikl, od kojih je svaki opciono supstituisan halogenom, -CN, -NO2, -NH2, -NHCH3, -NHCH2CH3, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, C3-12karbociklom, ili 3- do 6-članim heterociklom; i

R<53>i R<54>su uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani da formiraju heterocikl.

[0006] U nekim otelotvorenjima, m je 0, a n je ceo broj od 1 do 3.

[0007] U nekim otelotvorenjima, L<3>je izabran iz

[0008] U nekim otelotvorenjima, L<3>je

[0009] U nekim otelotvorenjima, L<3>je

[0010] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ima strukturu Formule (II-C):

[0011] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ima strukturu Formule (II-F) ili (II-H):

[0012] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje je izabrano iz grupe koju čine:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0013] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje je:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0014] U drugom aspektu pronalaska, obezbeđen je farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema prvom aspektu i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0015] U trećem aspektu pronalaska, obezbeđeno je jedinjenje iz prvog aspekta za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja.

[0016] U nekim otelotvorenjima, bolest ili stanje je leukemija, hematološki malignitet, kancer solidnog tumora, rak prostate, rak dojke, rak jetre, tumor mozga ili dijabetes.

KRATAK OPIS

[0017] Predmetno obelodanjivanje se bavi potrebom u tehnici obezbeđivanjem sastava i postupaka za inhibiciju protein-protein interakcije menina sa MLL1, MLL2 i MLL-fuzionim onkoproteinima. Ovdašnji sastavi i postupci mogu biti korisni za lečenje bolesti zavisnih od aktivnosti MLL1, MLL2, MLL fuzionih proteina i/ili menina kao što su leukemija, čvrsti kanceri i dijabetes. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje prema pronalasku reaguje nekovalentno sa meninom i inhibira interakciju menina sa MLL. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje prema pronalasku kovalentno vezuje menin i inhibira interakciju menina sa MLL.

[0018] Reference na postupke lečenja u narednim paragrafima ovog opisa treba tumačiti kao reference na jedinjenja, farmaceutske sastave i lekove predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku lečenja ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom (ili za dijagnozu).

[0019] U nekim otelotvorenjima jedinjenja datog ovde, jedinjenje se nekovalentno ili kovalentno vezuje za bilo koji jedan ili više izoforma menina, na primer, izoformu 1 (SEQ ID NO: 1), izoforma 2 (SEQ ID NO: 2 ) ili izoforma 3 (SEQ ID NO: 3) od menina. U određenim otelotvorenjima, protein menina deli 60% ili više, 70% ili više, 75% ili više, 80% ili više, 85% ili više, 90% ili više, 95% ili više, ili 99% ili više identiteta sekvence sa izoformom 1 (SEQ ID NO: 1), izoforma 2 (SEQ ID NO: 2 ) ili izoforma 3 (SEQ ID NO: 3).

[0020] Jedinjenja pronalaska su definisana u priloženim patentnim zahtevima, međutim, isključivo u svrhu obezbeđivanja konteksta za opšte šeme sinteze ovde, predmetno obelodanjivanje se odnosi na jedinjenja Formule (II):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde:

H se bira između C5-12karbocikla i 5- do 12-članog heterocikla, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednom ili više R<50>;

A, B i C su svaki nezavisno izabrani od C3-12karbocikla i 3- do 12-članog heterocikla;

L<1>i L<2>su svaki nezavisno izabrani iz veze, -O-, -S-, -N(R<51>)-, -N(R<51>)CH2-, -C(O)-, - C(O)O-, -

OC(O)-, -OC(O)O-, -C(O)N(R<51>)-, -C(O)N(R<51>)C(O)-, -C(O)N(R<51>)C(O)N(R<51>)-, -N(R<51>)C(O)-, -

N(R<51>)C(O)N(R<51>)-, -N(R<51>)C(O)O-, -OC(O)N(R<51>)-, -C(NR<51>)-, -N(R<51>)C(NR<51>)-, -C(NR<51>)N(R<51>)-, -

N(R<51>)C(NR<51>)N(R<51>)-, -S(O)2-, -OS(O)-, -S(O)O-, -S(O)-, -OS(O)2-, -S(O)2O-, -N(R<51>)S(O)2-, -

S(O)2N(R<51>)-, -N(R<51>)S(O)-, -S(O)N(R<51>)-, -N(R<51>)S(O)2N(R<51>)-, -N(R<51>)S(O)N(R<51>)-; alkilen, alkenilen, alkinilen, heteroalkilen, heteroalkenilen i heteroalkinilen, od kojih je svaki opciono supstituisan sa jednim ili više R<50>;

L<3>se bira između alkilena, alkenilena i alkinilena, od kojih je svaki supstituisan sa jednim ili više R<56>i opciono dalje supstituisan sa jednim ili više R<50>;

R<A>, Ri R<C>su svaki nezavisno izabrani pri svakom pojavljivanju od R<50>, ili dve R<A>grupe, dve Rgrupe ili dve R<C>grupe vezane za isti atom ili različiti atomi mogu zajedno opciono formirati most ili prsten;

m, n i p su svaki nezavisno ceo broj od 0 do 6;

R<50>se nezavisno bira pri svakom pojavljivanju između:

halogena, -NO2, -CN, -OR<52>, -SR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, - S(=O)2N(R<52>)2,

-S(=O)2NR<53>R<54>, -NR<52>S(=O)2R<52>, -NR<52>S(=O)2N(R<52>)2, - NR<52>S(=O)2NR<53>R<54>, -C(O)R<52>, -

C(O)OR<52>, -OC(O)R<52>, -OC(O)OR<52>, -OC(O)N(R<52>)2, - OC(O)NR<53>R<54>, -NR<52>C(O)R<52>, -

NR<52>C(O)OR<52>, -NR<52>C(O)N(R<52>)2, - NR<52>C(O)NR<53>R<54>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, -

P(O)(OR<52>)2, -P(O)(<R52>)2, =O, =S, =N(R<52>);

C1-10alkila, C2-10alkenila, i C2-10alkinila od kojih je svaki nezavisno opciono supstituisan pri svakom pojavljivanju sa jednim ili više supstituenata izabranih između halogena, -NO2, -CN, -

OR<52>, -SR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, - S(=O)2N(R<52>)2, -S(=O)2NR<53>R<54>, -

NR<52>S(=O)2R<52>, -NR<52>S(=O)2N(R<52>)2, - NR<52>S(=O)2NR<53>R<54>, -C(O)R<52>, -C(O)OR<52>, -OC(O)R<52>, -

OC(O)OR<52>, -OC(O)N(R<52>)2, - OC(O)NR<53>R<54>, -NR<52>C(O)R<52>, -NR<52>C(O)OR<52>, -

NR<52>C(O)N(R<52>)2, -NR<52>C(O)NR<53>R<54>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, -P(O)(OR<52>)2, -P(O)(<R52>)2, =O, =S, =N(R<52>), C3-12karbocikla, i 3- do 12-članog heterocikla; i

C3-12karbocikl i 3- do 12-člani heterocikl,

pri čemu je svaki C3-12karbocikl i 3- do 12-člani heterocikl u R<50>nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih od halogena, -NO2, -CN, -OR<52>, -SR<52>, -N(R<52>)2, -

NR<53>R<54>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, -S(=O)2N(R<52>)2, - S(=O)2NR<53>R<54>, -NR<52>S(=O)2R<52>, -

NR<52>S(=O)2N(R<52>)2, -NR<52>S(=O)2NR<53>R<54>, -C(O)R<52>, - C(O)OR<52>, -OC(O)R<52>, -OC(O)OR<52>, -

OC(O)N(R<52>)2, -OC(O)NR<53>R<54>, -NR<52>C(O)R<52>, - NR<52>C(O)OR<52>, -NR<52>C(O)N(R<52>)2, -

NR<52>C(O)NR<53>R<54>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, - P(O)(OR<52>)2, -P(O)(<R52>)2, =O, =S, =N(R<52>), C1-6alkila, C1-6haloalkila, C2-6alkenila i C2-6alkinila;

R<51>se nezavisno bira pri svakom pojavljivanju između:

vodonika, -C(O)R<52>, -C(O)OR<52>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>;

C1-6alkila, C2-6alkenila i C2-6alkinila, od kojih je svaki nezavisno opciono supstituisan pri svakom pojavljivanju sa jednim ili više supstituenata izabranih od halogena, -NO2, -CN, -OR<52>, -

SR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, - S(=O)2N(R<52>)2, -S(=O)2NR<53>R<54>, -

NR<52>C(O)N(R<52>)2, - NR<52>C(O)NR<53>R<54>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, -P(O)(OR<52>)2, -P(O)(<R52>)2, =O, =S, =N(R<52>), C3-12karbocikla i 3- do 12-članog heterocikla; i

C3-12karbocikl i 3- do 12-člani heterocikl,

pri čemu je svaki C3-12karbocikl i 3- do 12-člani heterocikl u R<51>nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih od halogena, -NO2, -CN, -OR<52>, -SR<52>, -N(R<52>)2, -

R<52>se nezavisno bira pri svakom pojavljivanju između vodonika; i C1-20alkila, C2-20alkenila, C2-20alkinila, 1- do 6-članog heteroalkila, C3-12karbocikla i 3- do 12-članog heterocikla, od kojih je svaki opciono supstituisan halogenom, -CN, -NO2, -NH2, -NHCH3, -NHCH2CH3, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, C3-12karbociklom ili 3- do 6-članim heterociklom;

R<53>i R<54>su uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani da formiraju heterocikl, opciono supstituisan sa jednim ili više R<50>;

R<56>se nezavisno bira pri svakom pojavljivanju između:

-NO2, -OR<59>, -SR<52>, -NR<53>R<54>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, -S(=O)2N(R<52>)2, - S(=O)2NR<53>R<54>, -

NR<52>S(=O)2R<52>, -NR<52>S(=O)2N(R<52>)2, -NR<52>S(=O)2NR<53>R<54>, -C(O)R<52>, - C(O)OR<52>, -OC(O)R<52>, -

OC(O)OR<52>, -OC(O)N(R<52>)2, -OC(O)NR<53>R<54>, -NR<52>C(O)R<52>, - NR<52>C(O)OR<52>, -

NR<52>C(O)N(R<52>)2, -NR<52>C(O)NR<53>R<54>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, - P(O)(OR<52>)2, -P(O)(<R52>)2, =O, =S, =N(R<52>), C1-10alkila, C2-10alkenila, C2-10alkinila, C3-12karbocikla i 3- do 12-članog heterocikla,

pri čemu je svaki C1-10alkil, C2-10alkenil i C2-10alkinil u R<56>nezavisno opciono supstituisan pri svakom pojavljivanju sa jednim ili više supstituenata izabranih između halogena, -NO2, -CN, -

OR<59>, -SR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, - S(=O)2N(R<52>)2, -S(=O)2NR<53>R<54>, -

NR<52>C(O)N(R<52>)2, -NR<52>C(O)NR<53>R<54>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, -P(O)(OR<52>)2, -P(O)(<R52>)2, =O, =S, =N(R<52>), C3-12karbocikla, i 3- do 12-članog heterocikla;

pri čemu je svaki C3-12karbocikl i 3- do 12-člani heterocikl u R<56>nezavisno opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata izabranih od halogena, -NO2, -CN, -OR<52>, -SR<52>, -N(R<52>)2, -

NR<52>C(O)NR<53>R<54>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, - P(O)(OR<52>)2, -P(O)(<R52>)2, =O, =S, =N(R<52>), C1-6alkila, C1-6haloalkila, C2-6alkenila i C2-6alkinila; i

dalje pri čemu R<56>opciono formira vezu za prsten C; i

R<59>se nezavisno bira pri svakom pojavljivanju između C1-20alkila, C2-20alkenila, C2-20alkinila, 1- do 6-članog heteroalkila, C3-12karbocikla i 3- do 12-članog heterocikla, od kojih je svaki opciono supstituisan sa halogenom, -CN, -NO2, -NH2, -NHCH3, -NHCH2CH3, =O, -OH, -OCH3, - OCH2CH3, C3-12karbociklom, ili 3- do 6-članim heterociklom,

pri čemu za jedinjenje ili so Formule (II), kada je R<56>-CH3, L<3>nije dalje supstituisan sa -OH, -NH2, ili -CN.

[0021] U određenim otelotvorenjima, predmetno obelodanjivanje obezbeđuje suštinski čist stereoizomer jedinjenja Formule (II-A). Opciono, stereoizomer je obezbeđen u najmanje 90% enantiomernog viška.

[0022] Ovde je opisan farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje ili so Formule (II-A) i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je formulisana za oralno davanje. U nekim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je formulisana za injektiranje.

[0023] Ovde je opisan postupak inhibicije interakcije menina sa jednim ili više od MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina i MLL delimične tandemske duplikacije, koji obuhvata dovođenje u kontakt menina sa efikasnom količinom jedinjenja ili soli Formule (II-A ). Ovde je takođe opisan postupak inhibicije interakcije menin-MLL, koji obuhvata dovođenje u kontakt menina sa efikasnom količinom jedinjenja ili soli Formule (II-A), pri čemu se inhibicija interakcije dokazuje smanjenjem ekspresije MLL fuzionog proteina ciljanog gena. Ovde je takođe opisan postupak stabilizacije menina, koji obuhvata dovođenje u kontakt menina sa jedinjenjem ili solju Formule (II-A).

[0024] U praksi bilo koje od predmetnih postupaka, ciljni gen MLL fuzionog proteina može biti HOXA9, DLX2 ili MEIS1. Kontaktiranje može da obuhvata kontaktiranje ćelije koja eksprimira menin. U nekim otelotvorenjima, postupak obuhvata primenu drugog terapeutskog sredstva. U određenim otelotvorenjima, kontakt se odvija in vivo. U određenim otelotvorenjima, Kontakt se odvija in vitro.

[0025] Ovde je takođe opisan postupak lečenja bolesti ili stanja povezanih sa MLL fuzionim proteinima, koji obuhvata davanje subjektu kome je to potrebno efikasne količine jedinjenja ili soli Formule (II-A). Ovde je takođe opisan postupak lečenja bolesti ili stanja kod ispitanika, koji obuhvata davanje ispitaniku terapeutski efikasne količine farmaceutskog sastava jedinjenja ili soli Formule (II-A). U nekim otelotvorenjima, bolest ili stanje obuhvata leukemiju, hematološki malignitet, rak solidnog tumora, rak prostate, rak dojke, rak jetre, tumor mozga ili dijabetes. U nekim otelotvorenjima, leukemija obuhvata AML, ALL, leukemiju mešovite linije ili leukemiju sa delimičnim tandemskim duplikacijama MLL.

1

[0026] Ovde je takođe opisan postupak lečenja poremećaja posredovanog hromozomskim preuređenjem na hromozomu 11q23 kod ispitanika kome je to potrebno, a postupak obuhvata davanje ispitaniku terapeutski efikasne količine jedinjenja ili soli Formule (II-A). Ovde je takođe opisan postupak lečenja poremećaja posredovanog interakcijom između menina i drugog proteina, koji obuhvata davanje ispitaniku kome je to potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja ili soli Formule (II-A). U nekim otelotvorenjima, ispitanik je čovek.

[0027] Ovde je takođe opisan komplet koji sadrži ovde opisan farmaceutski sastav i uputstva za korišćenje sastava za lečenje ispitanik koji pati od bolesti ili stanja posredovanog interakcijom između menina i drugog proteina.

KRATAK OPIS SLIKA

[0028] Nove karakteristike pronalaska su posebno izložene u priloženim patentnim zahtevima. Bolje razumevanje karakteristika i prednosti ovog pronalaska biće dobijeno pozivanjem na sledeći detaljan opis koji postavlja ilustrativna rešenja, u kojima su korišćeni principi pronalaska, i prateće crteže:

Sl. 1 prikazuje aminokiselinsku sekvencu humanog menina, izoforma 1 (SEQ ID NO: 1).

Sl. 2 prikazuje aminokiselinsku sekvencu humanog menina, izoforma 2 (SEQ ID NO: 2).

Sl. 3 prikazuje aminokiselinsku sekvencu humanog menina, izoforma 3 (SEQ ID NO: 3).

Sl. 4 prikazuje promenu u zapremini MV4; 11 tumora kod miševa tretiranih nosačem i jedinjenjem. Sl. 5 prikazuje luminiscenciju MV4; 11-luc tumori u ksenotransplantacionim mišjim modelima leukemije MLL tretiranih nosačem i jedinjenjem nakon 6 dana lečenja.

Sl. 6 prikazuje promene genske ekspresije DLX2, HOXA9, MEIS1 i CD11B u uzorcima koštane srži uzetim od miševa tretiranih nosačem i jedinjenjem prikazanih na Slici 5.

Sl. 7 prikazuje krivu preživljavanja miševa tretiranih nosačem i jedinjenjem sa MV4; 11-luc tumori.

Sl. 8 prikazuje promenu u zapremini MV4; 11 tumora kod miševa tretiranih nosačem i jedinjenjem. Sl. 9 prikazuje promene ekspresije gena HOXA9, MEIS1 i CD11B u uzorcima koštane srži uzetim od miševa tretiranih nosačem i jedinjenjem.

Sl. 10 prikazuje krivu preživljavanja miševa tretiranih nosačem i jedinjenjem sa MOLM13 tumorima.

Sl. 11 prikazuje luminiscenciju MV4; 11 -luc tumori u ksenotransplantacionim mišjim modelima leukemije MLL tretiranih nosačem i jedinjenjem nakon 6 dana lečenja.

Sl. 12 prikazuje promene genske ekspresije HOXA9, MEIS1 i CD11B u uzorcima koštane srži uzetim od miševa tretiranih nosačem i jedinjenjem prikazanih na Slici 11.

Sl. 13 prikazuje krivu preživljavanja miševa tretiranih nosačem i jedinjenjem sa MOLM13 tumorima.

DETALJNI OPIS

[0029] Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni pojmovi koji se ovde koriste imaju isto značenje kao što je obično poznato od strane stručnjaka u oblasti gde pripada ovaj pronalazak.

[0030] "MLL fuzioni protein" se odnosi na protein sa N-terminalnim fragmentom MLL spojenog sa partnerskim proteinom. Neograničavajući primeri proteina partnera uključuju 11q23, 11q23,3, 11q24, 1p13,1, 1p32 (EPS15), 21q22, 9p13,3, 9p22 (MLLT3/AF9), ABI1, ABI2, ACACA, ACTN4, AFF1/AF4, AFF3/LAF4, AFF4/AF5, AKAP13, AP2A2, ARHGEF12, ARHGEF17, BCL9L, BTBD18, BUD13, C2CD3, CASC5, CASP8AP2, CBL, CEP164, CEP170B, CREBBP, DCP1A, DCPS, EEFSEC/SELB, ELL, EPS15, FLNA, FNBP1, FOXO3, GAS7, GMPS, KIAA1524, LAMC3, LOC100131626, MAML2, ME2, MLLT1/ENL, MLLT10/AF10, MLLT11/AF1Q, MLLT3/AF9, MLLT4/AF6, MLLT6/AF17, MYH11, MYO1F, NA, NEBL, NRIP3, PDS5A, PICALM, PRPF19, PTD, RUNDC3B, SEPT11, SEPT2, SEPT5, SEPT6, SEPT9, SMAP1, TET1, TNRC18, TOP3A, VAV1, i Xq26,3 (CT45A2). MLL fuzioni proteini mogu se stvoriti spajanjem gena koji kodira za MLL protein i gena koji kodira za partnerski protein stvarajući fuzioni gen. Translacija ovog fuzionog gena može rezultirati jednim ili više polipeptida sa funkcionalnim svojstvima izvedenim iz svakog od originalnih proteina.

[0031] Termin "Cx-y" ili "Cx-Cy" kada se koristi zajedno sa hemijskim delom, kao što je alkil, alkenil ili alkinil, podrazumeva da uključuje grupe koje sadrže od x do y ugljenika u lancu. Na primer, izraz "Cx-yalkil" se odnosi na supstituisane ili nesupstituisane zasićene ugljovodonične grupe, uključujući alkil grupe ravnog lanca i alkil grupe sa razgranatim lancem koje sadrže od x do y ugljenika u lancu. Termini "Cx-yalkenil" i "Cx-yalkinil" odnose se na supstituisane ili nesupstituisane nezasićene ugljovodonične grupe ravnog ili razgranatog lanca koje sadrže najmanje jednu dvostruku ili trostruku vezu. Osim ako nije drugačije posebno navedeno u specifikaciji, Cx-yalkil, Cx-yalkenil ili Cx-yalkinil je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata kao što su oni supstituenti opisani ovde.

[0032] "Karbocikl" se odnosi na zasićeni, nezasićeni ili aromatični prsten u kome je svaki atom prstena atom ugljenika. Karbocikl može da sadrži 3- do 10-člane monociklične prstenove, 6- do 12-člane biciklične prstenove i 6- do 12-člane premoštene prstenove. Svaki prsten bicikličnog karbocikla može biti izabran između zasićenih, nezasićenih i aromatičnih prstenova. U nekim otelotvorenjima, karbocikl je aril. U nekim otelotvorenjima, karbocikl je cikloalkil. U nekim otelotvorenjima, karbocikl je cikloalkenil. U jednom primeru otelotvorenjima, aromatični prsten, npr., fenil, može biti fuzionisan sa zasićenim ili nezasićenim prstenom, na primer, cikloheksan, ciklopentan ili cikloheksen. Svaka kombinacija zasićenih, nezasićenih i aromatičnih bicikličnih prstenova, kako to valencija dozvoljava, uključena je u definiciju karbocikličnih. Primeri karbocikla uključuju ciklopentil, cikloheksil, cikloheksenil, adamantil, fenil, indanil i naftil. Osim ako nije drugačije posebno navedeno u specifikaciji, karbocikl je opciono supstituisan sa jednim ili više supstituenata kao što su oni supstituenti opisani ovde.

[0033] "Heterocikl" se odnosi na zasićeni, nezasićeni ili aromatični prsten koji sadrži jedan ili više heteroatoma. Primeri heteroatoma uključuju N, O, Si, P, B i S atome. Heterocikli mogu da sadrže 3- do 10-člane monociklične prstenove, 6- do 12-člane biciklične prstenove i 6- do 12-člane premoštene prstenove. Svaki prsten bicikličnog heterocikla može biti izabran između zasićenih, nezasićenih i aromatičnih prstenova. Heterocikl može biti vezan za ostatak molekula preko bilo kog atoma heterocikla, ako valenca dozvoljava, kao što je atom ugljenika ili azota heterocikla. U nekim otelotvorenjima, heterocikl je heteroaril. U nekim otelotvorenjima, heterocikl je heterocikloalkil. U jednom primeru otelotvorenjima, heterocikl, npr., piridil, može biti fuzionisan sa zasićenim ili nezasićenim prstenom, na primer, cikloheksan, ciklopentan ili cikloheksen.

[0034] "Heteroaril" se odnosi na 3- do 12-člani aromatični prsten koji sadrži najmanje jedan heteroatom pri čemu svaki heteroatom može biti nezavisno izabran između N, O i S. Kako se ovde koristi, heteroaril prsten može biti izabran između monocikličnog ili bicikličnog i fuzionisani ili premošteni prstenasti sistemi prstenovi u kojima je najmanje jedan od prstenova u sistemu prstenova aromatičan, tj. sadrži ciklični, delokalizovan (4n+2) π-elektronski sistem u skladu sa Hikelovom teorijom. Heteroatom(i) u heteroarilu mogu biti opciono oksidovani. Jedan ili više atoma azota, ako su prisutni, su opciono kvaternizovani.

Heteroaril može biti vezan za ostatak molekula preko bilo kog atoma heteroarila, ako valenca dozvoljava, kao što je atom ugljenika ili azota heteroarila. Primeri heteroarila uključuju, ali nisu ograničeni na, azepinil, akridinil, benzimidazolil, benzindolil, 1,3-benzodioksolil, benzofuranil, benzooksazolil, benzo[d]tiazolil, benzotiadiazolil, benzo[b][1,4]dioksepinil, benzo[b][1,4]oksazinil, 1,4-benzodioksanil, benzonaftofuranil, benzoksazolil, benzodioksolil, benzodioksinil, benzopiranil, benzopiranonil, benzofuranil, benzofuranonil, benzotienil (benzotiofenil), benzotieno[3,2-d]pirimidinil, benzotriazolil, benzo[4,6]imidazo[1,2-a]piridinil, karbazolil, kinolinil, ciklopenta[d]pirimidinil, 6,7-dihidro-5H-ciklopenta[4,5]tieno[2,3-d]pirimidinil, 5,6-dihidrobenzo[h]hinazolinil, 5,6-dihidrobenzo[h]kinolinil, 6,7-dihidro-5H-benzo[6,7]ciklohepta[1,2-c]piridazinil, dibenzofuranil, dibenzotiofenil, furanil, furanonil, furo[3,2-c]piridinil, 5,6,7,8,9,10-heksahidrociklookta[d]pirimidinil, 5,6,7,8,9,10-heksahidrocikloocta[d]piridazinil, 5,6,7,8,9,10-heksahidrociklookta[d]piridinil, izotiazolil, imidazolil, indazolil, indolil, indazolil, izoindolil, indolinil, izoindolinil, izohinolil, indolizinil, izoksazolil, 5,8-metano-5,6,7,8-tetrahidrohinazolinil, naftiridinil, 1,6-naftiridinonil, oksadiazolil, 2-oksoazepinil, oksazolil, oksiranil, 5,6,6a,7,8,9,10,10a-octahidrobenzo[h] hinazolinil, 1-fenil-1H-pirrolil, fenazinil, fenotiazinil, fenoksazinil, ftalazinil, pteridinil, purinil, pirolil, pirazolil, pirazolo[3,4-d]pirimidinil, piridinil, pirido[3,2-d]pirimidinil, pirido[3,4-d]pirimidinil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, pirolil, hinazolinil, hinoksalinil, hinolinil, izohinolinil, tetrahidrohinolinil, 5,6,7,8-tetrahidrohinazolinil, 5,6,7,8-tetrahidrobenzo[4,5]tieno[2,3-d]pirimidinil, 6,7,8,9-tetrahidro-5H-ciklohepta[4,5]tieno[2,3-d]pirimidinil, 5,6,7,8-tetrahidropirido[4,5-c]piridazinil, tiazolil, tiadiazolil, triazolil, tetrazolil, triazinil, tieno[2,3-d]pirimidinil, tieno[3,2-d]pirimidinil, tieno[2,3-c]pridinil i tiofenil (tj. tienil). Osim ako nije drugačije posebno navedeno u specifikaciji, termin "heteroaril" podrazumeva da obuhvata heteroaril kao što je iznad definisano koji su opciono supstituisani sa jednim ili više supstituenata kao što su oni supstituenti opisani ovde.

[0035] Jedinjenja predmetnog obelodanjivanja takođe uključuju kristalne i amorfne oblike tih jedinjenja, farmaceutski prihvatljive soli i aktivne metabolite ovih jedinjenja koji imaju istu vrstu aktivnosti, uključujući, na primer, polimorfe, pseudopolimorfe, solvate, hidrate, nesolvatne polimorfe i hidrate (uključujući), konformacioni polimorfi i amorfni oblici jedinjenja, kao i njihove smeše.

[0036] Ovde opisana jedinjenja mogu pokazivati svoje prirodno izotopsko izobilje, ili jedan ili više atoma mogu biti veštački obogaćeni određenim izotopom koji ima isti atomski broj, ali atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji se pretežno nalazi u priroda. Sve izotopske varijacije jedinjenja prema predmetnom pronalasku, bez obzira da li su radioaktivne ili ne, obuhvaćene su obimom predmetnog obelodanjivanja. Na primer, vodonik ima tri prirodna izotopa, označena kao<1>H (protijum),<2>H (deuterijum) i<3>H (tricijum). Protijum je najzastupljeniji izotop vodonika u prirodi. Obogaćivanje deuterijumom može da pruži određene terapeutske prednosti, kao što je produženi poluživot in vivo i/ili izloženost, ili može da obezbedi jedinjenje korisno za istraživanje in vivo puteva eliminacije i metabolizma leka. Izotopski obogaćena jedinjenja mogu biti pripremljena konvencionalnim tehnikama koje su dobro poznate stručnjacima.

[0037] "Izomeri" su različita jedinjenja koja imaju istu molekulsku formulu. „Stereoizomeri“ su izomeri koji se razlikuju samo po načinu na koji su atomi raspoređeni u prostoru. "Enantiomeri" su par stereoizomera koji se međusobno ne preklapaju u ogledalu.1:1 mešavina para enantiomera je "racemska" smeša. Termin "(±)" se koristi za označavanje racemske smeše gde je to prikladno. "Dijastereoizomeri" ili "dijastereomeri" su stereoizomeri koji imaju najmanje dva asimetrična atoma, ali nisu jedan drugog u ogledalu. Apsolutna stereohemija je specificirana prema R-S sistemu Cahn-Ingold-Prelog. Kada je jedinjenje čisti enantiomer, stereohemija na svakom hiralnom ugljeniku se može specificirati sa R ili S. Razdvojena jedinjenja čija je apsolutna konfiguracija nepoznata mogu se označiti (+) ili (-) u zavisnosti od smera (desno- ili levorotatorno) u kojoj rotiraju ravan polarizovanu svetlost na talasnoj dužini natrijumove D linije. Određena jedinjenja koja su ovde opisana sadrže jedan ili više asimetričnih centara i stoga mogu dovesti do enantiomera, dijastereomera i drugih stereoizomernih oblika, čiji se asimetrični centri mogu definisati, u smislu apsolutne stereohemije, kao (R)- ili (S)- . Predviđeno je da ovi hemijski entiteti, farmaceutske sastave i metode obuhvataju sve takve moguće stereoizomere, uključujući racemske smeše, optički čiste oblike, mešavine dijastereomera i intermedijarne smeše. Optički aktivni (R)- i (S)-izomeri mogu biti pripremljeni korišćenjem hiralnih sintona ili hiralnih reagenasa, ili razdvojeni korišćenjem konvencionalnih tehnika. Optička aktivnost jedinjenja se može analizirati bilo kojim pogodnim metodom, uključujući, ali ne ograničavajući se na hiralnu hromatografiju i polarimetriju, i može se odrediti stepen prevlasti jednog stereoizomera nad drugim izomerom.

[0038] Hemijski entiteti koji imaju dvostruke veze ugljenik-ugljenik ili dvostruke veze ugljenik-azot mogu postojati u Z- ili E- obliku (ili cis- ili transformaciji). Štaviše, neki hemijski entiteti mogu postojati u različitim tautomernim oblicima. Osim ako nije drugačije naznačeno, ovde opisani hemijski entiteti treba da uključe i sve Z-, E- i tautomerne oblike.

[0039] Termin "supstituisan" se odnosi na delove koji imaju supstituente koji zamenjuju vodonik na jednom ili više ugljenika ili heteroatoma strukture. Podrazumeva se da "supstitucija" ili "supstituisano sa" uključuje implicitnu uslov da je takva supstitucija u skladu sa dozvoljenom valencijom supstituisanog atoma i supstituenta, i da supstitucija rezultira stabilnim jedinjenjem, npr., koje ne nastaje spontano podvrgnuti transformaciji kao što je preuređivanje, ciklizacija, eliminacija, itd. Kako se ovde koristi, termin "supstituisan" podrazumeva sve dozvoljene supstituente organskih jedinjenja. Uopšteno govoreći, dozvoljeni supstituenti uključuju aciklične i ciklične, razgranate i nerazgranate, karbociklične i heterociklične, aromatične i nearomatične supstituente organskih jedinjenja. Dozvoljeni supstituenti mogu biti jedan ili više istih ili različitih za odgovarajuća organska jedinjenja. Za potrebe predmetnog obelodanjivanja, heteroatomi kao što je azot mogu imati vodonične supstituente i/ili bilo koje dozvoljene supstituente organskih jedinjenja koja su ovde opisana koji zadovoljavaju valence heteroatoma. Supstituenti mogu uključiti bilo koje supstituente koji su ovde opisani, na primer, halogen, hidroksil, karbonil (kao što je karboksil, alkoksikarbonil, formil ili acil), tiokarbonil (kao što je tioestar, tioacetat ili tioformat ), alkoksil, fosforil, fosfat, fosfonat, fosfinat, amino, amido, amidin, imin, cijano, nitro, azido, sulfhidril, alkiltio, sulfat, sulfonat, sulfamoil, sulfonamido, sulfonil, heterociklil, aralkil, karbocikl, heterocikl, cikloalkil, heterocikloalkil, aromatični i heteroaromatični deo. U nekim otelotvorenjima, supstituenti mogu uključivati bilo koje supstituente opisane ovde, na primer: halogen, hidroksi, okso (=O), tiokso (=S), cijano (-CN), nitro (-NO2), imino (=N-H), oksimo (=N-OH), hidrazino (=N-NH2), -R-OR<a>, -R-OC(O)-R<a>, -R-OC(O)-OR<a>, -R-OC(O)-N(R<a>)2, -R-N(R<a>)2, -R-C(O)R<a>, - R-C(O)OR<a>, -R-C(O)N(R<a>)2, -R-O-R<c>-C(O)N(R<a>)2, -R-N(R<a>)C(O)OR<a>, - R-N(R<a>)C(O)R<a>, -R-N(R<a>)S(O)tR<a>(gde je t 1 ili 2), -R-S(O)tR<a>(gde je t 1 ili 2), -R-

1

S(O)tOR<a>(gde je t 1 ili 2), i -R-S(O)tN(R<a>)2(gde je t 1 ili 2); i alkil, alkenil, alkinil, aril, aralkil, aralkenil, aralkinil, cikloalkil, cikloalkilalkil, heterocikloalkil, heterocikloalkilalkil, heteroaril, i heteroarilalkil bilo koji od kojih može biti opciono supstituisan sa alkil, halogenil, alkenil, halokinil, halogen, alkenil, halokil, halogen kinil , okso (=O), tiokso (=S), cijano (-CN), nitro (-NO2), imino (=N-H), oksimo (=N-OH), hidrazin (=N-NH2), -R-OR<a>, -R-OC(O)-R<a>, -R-OC(O)-OR<a>, -R-OC(O)-N(R<a>)2, - R-N(R<a>)2, -R-C(O)R<a>, -R-C(O)OR<a>, -R-C(O)N(R<a>)2, -R-O-R<c>-C(O)N(R<a>)2, -R-N(R<a>)C(O)OR<a>, - R-N(R<a>)C(O)R<a>, -R-N(R<a>)S(O)tRa (gde je t 1 ili 2), -R-S(O)tR<a>(gde je t 1 ili 2), -R-S(O)tOR<a>(gde je t 1 ili 2) i -R-S(O)tN(R<a>)2(gde je t 1 ili 2); pri čemu je svaki Ra nezavisno izabran od vodonika, alkila, cikloalkila, arila, aralkila, heterocikloalkila, heterocikloalkilalkila, heteroarila ili heteroarilalkila, pri čemu svaki Ra, ako valentnost dozvoljava, može biti opciono supstituisan sa alkil, alkenil, halkil, alkenil, haloksi haloalkenil, haloalkinil, okso (=O), tiokso (=S), cijano (-CN), nitro (-NO2), imino (=N-H), oksimo (=N-OH), hidrazin (=N-NH2), -R-OR<a>, -R-OC(O)-R<a>, -R-OC(O)-OR<a>, -R-OC(O)-N(R<a>)2, -R-N(R<a>)2, -R-C(O)R<a>, -R-C(O)OR<a>, -R-C(O)N(R<a>)2, -R-O-R<c>-C(O)N(R<a>)2, -R-N(R<a>)C(O)OR<a>, -R-N(R<a>)C(O)R<a>, -R-N(R<a>)S(O)tR<a>(gde je t 1 ili 2), -R-S(O)tR<a>(gde je t 1 ili 2), -R-S(O)tOR<a>(gde je t 1 ili 2) i -R-S(O)tN(R<a>)2(gde je t 1 ili 2); i gde je svaki Rnezavisno izabran iz direktne veze ili ravnog ili razgranatog alkilenskog, alkenilenskog ili alkinilenskog lanca, a svaki R<c>je ravan ili razgranati alkilenski, alkenilenski ili alkinilenski lanac.

[0040] Tamo gde su grupe supstituenata određene njihovim konvencionalnim hemijskim formulama, napisanim s leva na desno, one podjednako obuhvataju hemijski identične supstituente koji bi nastali pisanjem strukture s desna na levo, na primer, -CH2O- je ekvivalentno -OCH2-.

[0041] Termin "sol" ili "farmaceutski prihvatljiva so" odnosi se na soli izvedene iz raznih organskih i neorganskih kontrajona dobro poznatih u tehnici. Farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli se mogu formirati sa neorganskim kiselinama i organskim kiselinama. Neorganske kiseline iz kojih se mogu dobiti soli uključuju, na primer, hlorovodoničnu kiselinu, bromovodoničnu kiselinu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu, fosfornu kiselinu i slično. Organske kiseline iz kojih se mogu izvesti soli obuhvataju, na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, piruvičnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, jantarnu kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzoičnu kiselinu, cinamičnu kiselinu, bademovu kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, p-toluensulfonsku kiselinu, salicilnu kiselinu i slično. Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli se mogu formirati sa neorganskim i organskim bazama. Neorganske baze iz kojih se mogu izvesti soli obuhvataju, na primer, natrijum, kalijum, litijum, amonijum, kalcijum, magnezijum, gvožđe, cink, bakar, mangan, aluminijum i slično. Organske baze iz kojih se soli mogu izvesti uključuju, na primer, primarne, sekundarne i tercijarne amine, supstituisane amine uključujući prirodno supstituisane amine, ciklične amine, bazične smole za jonoizmenjivanje i slično, specifično kao izopropilamin, trimetilamin, dietilamin, trietilamin, tripropilamin i etanolamin. U nekim otelotvorenjima, farmaceutski prihvatljiva bazna adiciona so se bira između soli amonijuma, kalijuma, natrijuma, kalcijuma i magnezijuma.

[0042] Termin "efikasna količina" ili "terapeutski efikasna količina" odnosi se na onu količinu jedinjenja opisanog ovde koja je dovoljna da utiče na nameravanu primenu, uključujući, ali ne ograničavajući se na lečenje bolesti, kao što je definisano u nastavku. Terapeutski efikasna količina može da varira u zavisnosti od nameravane primene lečenja (in vivo), ili subjekta i stanja bolesti koje se leči, na primer, mase i starosti ispitanika, ozbiljnosti bolesti, načina primene i slično, što može lako da odredi neko od uobičajenih veština u ovoj oblasti. Termin se takođe odnosi na dozu koja će izazvati određeni odgovor u ciljnim ćelijama, na primer, smanjenje adhezije trombocita i/ili migraciju ćelija. Specifična doza će varirati u zavisnosti od odabranih jedinjenja, režima doziranja koji treba slediti, da li se primenjuje u kombinaciji sa drugim jedinjenjima, vremena primene, tkiva u koje se primenjuje i fizičkog sistema isporuke u kojem se nosio.

[0043] Kako se ovde koristi, "tretiranje" ili "lečenje" se odnosi na pristup za dobijanje korisnih ili željenih rezultata u pogledu bolesti, poremećaja ili medicinskog stanja uključujući, ali ne ograničavajući se na terapeutsku korist i/ili profilaktičku korist. Pod terapeutskom koristi se podrazumeva iskorenjivanje ili poboljšanje osnovnog poremećaja koji se leči. Takođe, terapeutska korist se postiže iskorenjivanjem ili ublažavanjem jednog ili više fizioloških simptoma povezanih sa osnovnim poremećajem, tako da se primećuje poboljšanje kod ispitanika, bez obzira na to što subjekt još uvek može biti pogođen osnovnim poremećajem. U određenim otelotvorenjima, radi profilaktičke koristi, sastavi se daju ispitaniku sa rizikom od razvoja određene bolesti, ili ispitaniku koji prijavi jedan ili više fizioloških simptoma bolesti, iako dijagnoza ove bolesti možda nije bila postavljena.

[0044] "Terapeutski efekat", kako se taj termin koristi ovde, obuhvata terapeutsku korist i/ili profilaktičku korist kao što je iznad opisano. Profilaktički efekat uključuje odlaganje ili eliminisanje pojave bolesti ili stanja, odlaganje ili eliminisanje početka simptoma bolesti ili stanja, usporavanje, zaustavljanje ili preokretanje progresije bolesti ili stanja, ili bilo koje njihove kombinacije.

[0045] Termin "ko-primena", "primenjen u kombinaciji sa" i njihovi gramatički ekvivalenti, kako se ovde koristi, obuhvata davanje dva ili više sredstava životinji, uključujući ljude, tako da su oba sredstva i/ili njihovi metaboliti prisutni u ispitaniku u isto vreme. Zajednička primena uključuje istovremenu primenu u odvojenim sastavima, primenu u različito vreme u odvojenim sastavima ili primenu u sastavu u kojem su oba sredstva prisutna.

[0046] Termini "antagonist" i "inhibitor" se koriste naizmenično i odnose se na jedinjenje koje ima sposobnost da inhibira biološku funkciju (npr., aktivnost, ekspresija, vezivanje, interakcija protein-protein) ciljnog proteina (npr., menin, MLL1, MLL2 i/ili MLL fuzioni protein). Shodno tome, termini "antagonist" i "inhibitor" su definisani u kontekstu biološke uloge ciljnog proteina. Dok poželjni antagonisti ovde specifično stupaju u interakciju (npr., vezuju se za) cilj, jedinjenja koja inhibiraju biološku aktivnost ciljnog proteina interakcijom sa drugim članovima puta za transdukciju signala čiji je ciljni protein član takođe su posebno uključena u ovaj definicija. Poželjna biološka aktivnost inhibirana antagonistom je povezana sa razvojem, rastom ili širenjem tumora.

[0047] Termin "agonist" kako se ovde koristi odnosi se na jedinjenje koje ima sposobnost da inicira ili pojača biološku funkciju ciljnog proteina, bilo da inhibira aktivnost ili ekspresiju ciljnog proteina. Shodno tome, termin "agonist" je definisan u kontekstu biološke uloge ciljnog polipeptida. Dok poželjni agonisti ovde specifično stupaju u interakciju (npr., vezuju se za) cilj, jedinjenja koja iniciraju ili pojačavaju biološku aktivnost ciljnog polipeptida interakcijom sa drugim članovima puta za transdukciju signala čiji je ciljni polipeptid član su takođe posebno uključena u okviru ove definicije.

[0048] "Transdukcija signala" je proces tokom kojeg se stimulativni ili inhibitorni signali prenose u ćeliju i unutar ćelije da bi izazvali unutarćelijski odgovor. Modulator puta transdukcije signala se odnosi na jedinjenje koje modulira aktivnost jednog ili više ćelijskih proteina mapiranih na isti specifični put transdukcije signala. Modulator može povećati (agonist) ili potisnuti (antagonist) aktivnost signalnog molekula.

[0049] "Sredstvo protiv raka", "sredstvo protiv tumora" ili "hemoterapeutsko sredstvo" odnosi se na bilo koje sredstvo korisno u lečenju neoplastičnog stanja. Jedna klasa sredstava protiv raka obuhvata hemoterapeutska sredstva. "Hemoterapija" znači davanje jednog ili više hemoterapeutskih lekova i/ili drugih agenasa pacijentu sa rakom različitim postupcima, uključujući intravensku, oralnu, intramuskularnu, intraperitonealnu, intravezikalnu, subkutanu, transdermalno, bukalno ili inhalaciju ili u obliku supozitorija.

[0050] "Ispitanik" se odnosi na životinju, kao što je sisar, na primer čovek. Ovde opisani postupci mogu biti korisni i u terapiji kod ljudi i u veterini. U nekim otelotvorenjima, ispitanik je sisar, a u nekim otelotvorenjima, ispitanik je čovek. „Sisari“ obuhvataju ljude i domaće životinje kao što su laboratorijske životinje i kućni ljubimci (npr., mačke, psi, svinje, goveda, ovce, koze, konji, zečevi), i ne-domaće životinje kao što su divlje životinje i slično.

[0051] "Prolek" označava jedinjenje koje se može konvertovati pod fiziološkim uslovima ili solvolizom u ovde opisano biološki aktivno jedinjenje (npr., jedinjenje Formule (II-A)). Dakle, termin "prolek" se odnosi na prekursor biološki aktivnog jedinjenja koje je farmaceutski prihvatljivo. Prolek može biti neaktivan kada se daje ispitaniku, ali se in vivo pretvara u aktivno jedinjenje, na primer, hidrolizom. Jedinjenje proleka često nudi prednosti rastvorljivosti, kompatibilnosti tkiva ili odloženog oslobađanja u organizmu sisara (videti, npr., Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), str.7-9, 21-24 (Elsevier, Amsterdam); Higuchi, T., i dr., "Pro-drugs as Novel Delivery Systems," (1987) A.C.S. Symposium Series, Vol.14; i Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press). Termin "prolek" takođe podrazumeva bilo koji kovalentno vezane nosače, koji oslobađaju aktivno jedinjenje in vivo kada se takav prolek daje ispitaniku sisara. Prolekovi aktivnog jedinjenja, kao što je ovde opisano, tipično se pripremaju modifikovanjem funkcionalnih grupa prisutnih u aktivnom jedinjenju na takav način da se modifikacije cepaju, bilo u rutinskoj manipulaciji ili in vivo, do matičnog aktivnog jedinjenja. Prolekovi obuhvataju jedinjenja u kojima je hidroksi, amino ili merkapto grupa vezana za bilo koju grupu koja se, kada se prolek aktivnog jedinjenja primenjuje na ispitanika sisara, cepa da formira slobodnu hidroksi, slobodnu amino ili slobodnu merkapto grupu, respektivno. Primeri prolekova obuhvataju, ali nisu ograničeni na, derivate acetata, formata i benzoata hidroksi funkcionalne grupe, ili acetamida, formamida i derivata benzamida funkcionalne grupe amina u aktivnom jedinjenju i slično.

1

[0052] Termin "in vivo" se odnosi na događaj koji se dešava u telu ispitanika.

[0053] Termin "in vitro" se odnosi na događaj koji se odvija van tela ispitanika. Na primer, in vitro test obuhvata bilo koji test koji se izvodi van ispitanika. In vitro testovi obuhvataju testove zasnovane na ćelijama u kojima se koriste žive ili mrtve ćelije. In vitro testovi takođe obuhvataju test bez ćelija u kome se ne koriste netaknute ćelije.

[0054] „Neobavezno“ ili „opciono“ znači da se naknadno opisani događaj okolnosti može ili ne mora dogoditi, i da opis uključuje slučajeve u kojima se događaj ili okolnost dešavaju i slučajeve u kojima se ne dešavaju. Na primer, "opciono supstituisani aril" znači da aril grupa može ili ne mora biti supstituisana i da opis uključuje i supstituisane aril grupe i aril grupe koje nemaju supstituciju.

[0055] "Farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens" uključuje bez ograničenja bilo koji adjuvans, nosač, ekscipijens, sredstvo za klizanje, zaslađivač, razblaživač, konzervans, boju, boju, pojačivač ukusa, surfaktant, agens za vlaženje, sredstvo za dispergovanje, agens za suspendovanje, stabilizator, izotonični agens, rastvarač ili emulgator koji je odobrila Uprava za hranu i lekove Sjedinjenih Država kao prihvatljiv za upotrebu kod ljudi ili domaćih životinja.

[0056] Ovde su opisana jedinjenja za modulaciju interakcije menina sa proteinima kao što su MLL1, MLL2 i MLL-fuzioni onkoproteini. U određenim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja i metode su za inhibiciju interakcije menina sa njegovim uzvodnim ili nizvodnim signalnim molekulima uključujući, ali bez ograničenja na MLL1, MLL2 i MLL-fuzione onkoproteine. Jedinjenja pronalaska mogu se koristiti u postupcima za lečenje širokog spektra karcinoma i drugih bolesti povezanih sa jednim ili više od MLL1, MLL2, MLL fuzionih proteina i menina. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje prema pronalasku kovalentno vezuje menin i inhibira interakciju menina sa MLL. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje prema pronalasku reaguje nekovalentno sa meninom i inhibira interakciju menina sa MLL.

[0057] Jedinjenja pronalaska mogu se koristiti u postupcima za lečenje širokog spektra bolesti povezanih sa MLL1, MLL2, MLL fuzionim proteinima i meninom. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje prema pronalasku reaguje nekovalentno sa meninom i inhibira interakciju menina sa MLL. U određenim otelotvorenjima, jedinjenje prema pronalasku kovalentno vezuje menin i inhibira interakciju menina sa MLL.

[0058] Ovde je takođe opisano jedinjenje ili so koje se selektivno vezuje za protein menina i/ili modulira interakciju menina sa MLL proteinom (npr., MLL1, MLL2 ili MLL fuzionim proteinom). U određenim otelotvorenjima, jedinjenje modulira protein menina vezivanjem ili interakcijom sa jednom ili više aminokiselina i/ili jednim ili više metalnih jona. Određena jedinjenja mogu zauzeti F9 i/ili P13 džep menina. Vezivanje ovde obelodanjenog jedinjenja može poremetiti menin ili MLL (npr. MLL1, MLL2 ili MLL fuzioni protein) nizvodnu signalizaciju.

[0059] U nekim otelotvorenjima, za jedinjenje Formule (II-A), L<3>se bira između

i R<56>je metil. L<3>može biti izabran između

U nekim otelotvorenjima, L<3>je

U nekim otelotvorenjima, L<3>sadrži stereocentar. U nekim otelotvorenjima, stereocentar je u R-konfiguraciji. U nekim otelotvorenjima, stereocentar je u S-konfiguraciji. U nekim otelotvorenjima, R-izomer od L<3>je obezbeđen u najmanje od 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% viška u odnosu na S-izomer. U nekim otelotvorenjima, S-izomer od L<3>je obezbeđen u najmanje od 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%,

1

75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% viška u odnosu na R-izomer.

[0060] C je supstituisan sa 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili više R<C>grupa. C može biti supstituisan sa 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 R<C>grupa, kao što je C supstituisan sa 1 ili 2 R<C>grupe. U nekim otelotvorenjima, C je supstituisan sa najmanje 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 R<C>grupa. U nekim otelotvorenjima, C je nesupstituisan. C je supstituisan sa p R<C>grupama, gde je p ceo broj od 0 do 6. p je 0, 1, 2, 3, 4, 5 ili 6. U nekim otelotvorenjima, p najmanje 1, 2, 3, 4, 5 ili 6. U nekim otelotvorenjima, p je do 6, 5, 4, 3, 2 ili 1. U nekim otelotvorenjima, p je oko 0. U nekim otelotvorenjima, p je 1 ili 2.

[0061] R<C>je izabran iz -C(O)R<52>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, -S(=O)2N(R<52>)2, -S(=O)2NR<53>R<54>, -NR<52>S(=O)2R<52>, =O, C1-3alkila i C1-3haloalkila, ili dve R<C>grupe vezane na različite atome mogu formirati C1-3most. U nekim otelotvorenjima, R<C>se bira između C1-3alkila i C1-3haloalkila, kao što je -CH3.

[0062] C se bira između piperidinila i piperazinila.

[0063] Jedinjenja opisana ovde su predstavljena Formulom (II-A):

kao što je

R<1>je C1-3haloalkil, kao što je -CH2CF3. R<2>je izabran između halogena, -OH, -OR<52>, -NH2, -N(R52)2, -CN, C1-3alkil, C1-3alkil-OR<52>, C1-3alkil-N(R<52>)2, C1-3haloalkil, C2-3alkenil, i C2-3alkinil; U nekim otelotvorenjima, R<2>je izabran između halogena, -OR<52>, -N(R<52>)2, -CN, C1-3alkila, -CH2OH, -CH2OR<52>, -CH2NH2, -CH2N(R<52>)2, C1-3alkil-N(R<52>)2, C1-3haloalkila, C2-3alkenila i C2-3alkinila, kao što je R<2>izabrana između -OH, -OR<52>, -NH2, -N(R<52>)2, -CN, i C1-2alkila. Opciono, R<2>je izabran između -NH2, - CH3, -OCH3, -CH2OH, i -NHCH3. R<3>je izabran između vodonika, halogena, -OH, -N(R<52>)2, -CN, - C(O)OR<52>, C1-3alkila, i C1-3haloalkila. R<51>je izabran između vodonika i alkila, kao što je R<51>vodonik. R<A>je izabran između halogena, -CN, -OR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, -C(O)R<52>, -C(O)OR<52>, - OC(O)R<52>, -NR<52>C(O)R<52>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, =O, C1-10alkila, C2-10alkenila i C2-10alkinila. U nekim otelotvorenjima, m je 0. L<2>je -CH2-. Rje izabrana između halogena, -CN, -OR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, - C(O)R<52>, -C(O)OR<52>, -OC(O)R<52>, -NR<52>C(O)R<52>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, =O, C1-10alkila, C2-10alkenila, i C2-10alkinila. U nekim otelotvorenjima, Rje izabrana između halogena, -CN, -OR<52>, -N(R<52>)2, - NR<53>R<54>, i C1-3alkila, kao što je RB je izabrana između halogena, -CN, -OR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, i C1-2alkila, n je ceo broj od 1 do 4, kao što je ceo broj od 2 do 3. U određenim otelotvorenjima, n je 2. U nekim otelotvorenjima, L<3>je izabran iz

, gde je R<56>metil. C se bira između piperidinila i piperazinila. R<C>je izabran iz -C(O)R<52>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, -S(=O)2N(R<52>)2, -S(=O)2NR<53>R<54>, -NR<52>S(=O)2R<52>, =O, C1-3alkila i C1-3haloalkila, ili dve RC grupe vezane na različite atome mogu formirati C1-3most. U nekim otelotvorenjima, R<C>se bira između C1-3alkila i C1-3haloalkila, kao što je -CH3. U nekim otelotvorenjima, p je izabran od celog broja od 0 do 4, kao što je p izabran od celog broja od 0 do 2. U nekim otelotvorenjima, p je oko 0. U nekim otelotvorenjima, C je izabran iz

1

[0064] Jedinjenje Formule (II-A) može biti predstavljeno sa:

kao što je

R<2>je izabran između halogena,

N(R<52>)2, C1-3haloalkil, C2-3alkenil, i C2-3alkinil; U nekim otelotvorenjima, R<2>je izabran između halogena, -OH, -OR<52>, -NH2, -N(R<52>)2, -CN, C1-3alkila, -CH2OH, -CH2OR<52>, -CH2NH2, -CH2N(R<52>)2, C1-3alkil-N(R<52>)2, C1-3haloalkila, C2-3alkenila, i C2-3alkinila, kao što je R<2>izabrana između -OH, -OR<52>, -NH2, - N(R<52>)2, -CN, i C1-2alkila. Opciono, R<2>je izabrana između -NH2, -CH3, -OCH3, -CH2OH, i -NHCH3. Rje izabrana između halogena, -CN, -OR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, -C(O)R<52>, -C(O)OR<52>, -OC(O)R<52>, - NR<52>C(O)R<52>, -C(O)N(R<52>)2, -C(O)NR<53>R<54>, =O, C1-10alkila, C2-10alkenila, i C2-10alkinila. U nekim otelotvorenjima, Rje izabrana između halogena, -CN, -OR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, i C1-3alkila, kao što je Rizabrana između, -CN, -OR<52>, -N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, i C1-2alkila. U nekim otelotvorenjima, L<3>je izabran iz

, gde je R<56>metil. C se bira između piperidinila i piperazinila. R<C>je izabran iz -C(O)R<52>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, -S(=O)2N(R<52>)2, -S(=O)2NR<53>R<54>, -NR<52>S(=O)2R<52>, =O, C1-3alkila i C1-3haloalkila, ili dve RC grupe vezane na različite atome mogu formirati C1-3most. U nekim otelotvorenjima, R<C>se bira između C1-3alkila i C1-3haloalkila, kao što je -CH3. U nekim otelotvorenjima, p je izabran od celog broja od 0 do 4, kao

1

što je p izabran od celog broja od 0 do 2. U nekim otelotvorenjima, p je oko 0. U nekim otelotvorenjima, C je izabran iz

[0065] Jedinjenje Formule (II-A) može biti predstavljeno sa:

kao što je

C se bira između piperidinila i piperazinila. R<56>je metil. U nekim otelotvorenjima, R<C>je izabrana iz -S(=O)R<52>, - S(=O)2R<52>, -S(=O)2N(R<52>)2, and -NR<52>S(=O)2R<52>, kao što je R<C>izabrana iz -S(=O)CH3, -S(=O)2CH3, - S(=O)2NH2, -NHS(=O)2CH3, i -S(=O)2NHCH3. U nekim otelotvorenjima, p je ceo broj od 1 do 3, kao što je p 1. U nekim otelotvorenjima, R<C>je -S(=O)2CH3. U nekim otelotvorenjima, R<2>je izabrana između halogena, - OH, -OR<52>, -NH2, -N(R<52>)2, -CN, C1-3alkila, -CH2OH, -CH2OR<52>, -CH2NH2, -CH2N(R<52>)2, C1-3alkil-N(R<52>)2, C1-3haloalkila, C2-3alkenila, i C2-3alkinila, kao što je R<2>izabrana između -OH, -OR<52>, -NH2, - N(R<52>)2, -CN, i C1-2alkila. U nekim otelotvorenjima, R<2>je metil ili -NHCH3.

[0066] Jedinjenje Formule (II-A) može biti predstavljeno sa:

kao što je

1

[0067] U određenim otelotvorenjima, predmetno obelodanjivanje obezbeđuje stereoizomer jedinjenja Formule (II-A). U nekim otelotvorenjima, stereoizomer je enantiomerni višak. U nekim otelotvorenjima, stereoizomer je obezbeđen najmanje 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9%, enantiomerni višak. U nekim otelotvorenjima, stereoizomer je obezbeđen više od 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9%, enantiomerni višak. U nekim otelotvorenjima, stereoizomer je u više od 95% enantiomernog viška, kao što je veći od 99% enantiomernog viška.

[0068] U određenim otelotvorenjima, predmetno obelodanjivanje obezbeđuje stereoizomer jedinjenja Formule (II-A). U nekim otelotvorenjima, stereoizomer je dijastomerni višak. U nekim otelotvorenjima, stereoizomer je obezbeđen najmanje 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9%, dijastereomerni višak. U nekim otelotvorenjima, stereoizomer je obezbeđen više od 20%, 30%, 40%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 88%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9%, dijastereomerni višak. U nekim otelotvorenjima, stereoizomer je u više od 95% dijastomernog viška, kao što je veći od 99% dijastomernog viška.

[0069] U određenim otelotvorenjima, jedinjenje Formule (II-A) se poželjno koristi kao neracemska smeša, pri čemu je jedan enantiomer prisutan u višku svog odgovarajućeg enantiomera. Tipično, takva smeša će sadržati smešu dva izomera u odnosu od najmanje oko 9:1, poželjno najmanje 19:1. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje je obezbeđeno u najmanje 96% enantiomernog viška, što znači da jedinjenje ima manje od 2% odgovarajućeg enantiomera. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje je obezbeđeno u najmanje 96% dijastereomernog viška, što znači da jedinjenje ima manje od 2% odgovarajućeg dijastereomera.

[0070] U određenim otelotvorenjima, jedinjenje Formule (II-A) se poželjno koristi kao neracemska smeša pri čemu je (+)-izomer glavna komponenta smeše. Tipično, takva smeša neće sadržati više od oko 10% (-)-izomera, što znači da je odnos (+)- prema (-)-izomera najmanje oko 9:1, a poželjno manji od 5% izomera. (-)-izomer, što znači da je odnos (+)- prema (-)-izomera najmanje oko 19:1. U nekim otelotvorenjima, korišćeno jedinjenje ima manje od 2% (-)-izomera, što znači da ima enantiomerni višak od najmanje oko 96%. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ima enantiomerni višak od najmanje 98%. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ima enantiomerni višak od najmanje 99%.

[0071] U određenim otelotvorenjima, jedinjenje Formule (II-A) se poželjno koristi kao neracemska smeša pri čemu je (-)-izomer glavna komponenta smeše. Tipično, takva smeša neće sadržati više od oko 10% (+)-izomera, što znači da je odnos (-)- prema (+)-izomera najmanje oko 9:1, a poželjno manji od 5% izomera. (+)-izomer, što znači da je odnos (-)- prema (+)-izomera najmanje oko 19:1. U nekim otelotvorenjima, korišćeno jedinjenje ima manje od 2% (+), što znači da ima enantiomerni višak od najmanje oko 96%. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ima enantiomerni višak od najmanje 98%. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ima enantiomerni višak od najmanje 99%.

[0072] Jedinjenje prema pronalasku može kovalentno da se veže za menin i inhibira interakciju menina sa MLL. Takvo vezivanje može dovesti do povećanja afiniteta jedinjenja za menin, što je prednost u mnogim primenama, uključujući terapeutsku i dijagnostičku upotrebu. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja prema pronalasku sadrže elektrofilne grupe sposobne da reaguju sa nukleofilnom grupom prisutnom u proteinu

2

menina. Pogodne elektrofilne grupe su opisane u celoj prijavi, dok pogodne nukleofilne grupe uključuju, na primer, cisteinske delove prisutne u domenu vezivanja proteina menina. Bez želje da budemo vezan teorijom, cisteinski ostatak u domenu vezivanja menina može da reaguje sa elektrofilnom grupom jedinjenja prema pronalasku, što dovodi do formiranja konjugatnog proizvoda. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja iz predmetnog obelodanjivanja su sposobna da se kovalentno vežu za cisteinski ostatak na poziciji 329 izoforme menina 2 (SEQ ID NO: 2) ili cistein 334 u menin izoformi 1 (SEQ ID NO: 1). U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje konjugat jedinjenja prema pronalasku sa proteinom menina. Na primer, obelodanjivanje obezbeđuje konjugat jedinjenja iz otkrića sa meninom, vezan za cisteinski ostatak 329 izoforme 2 menina (SEQ ID NO: 2) ili cistein 334 u menin izoformi 1 (SEQ ID NO: 1).

[0073] U nekim otelotvorenjima, za jedinjenje Formule (II-A), jedan ili više od R<A>, Ri R<C>, kada su prisutni, sadrži funkcionalnu grupu koja kovalentno reaguje sa jednim ili više ostataka na meninu. U nekim otelotvorenjima, funkcionalna grupa kovalentno reaguje sa jednim ili više cisteinskih ostataka na meninu. U nekim otelotvorenjima, funkcionalna grupa kovalentno reaguje sa cisteinom na meninu na poziciji 329 u odnosu na SEQ ID NO: 2 kada je optimalno poravnat ili položaj 334 u odnosu na SEQ ID NO: 1 kada je optimalno poravnata. U nekim otelotvorenjima, funkcionalna grupa kovalentno reaguje sa jednim ili više ostataka na meninu odabranim od cisteina 329, cisteina 241 i/ili cisteina 230 na meninu u odnosu na SEQ ID NO: 2 kada je optimalno poravnata. U nekim otelotvorenjima, funkcionalna grupa kovalentno reaguje sa cisteinom 329 u odnosu na SEQ ID NO: 2 kada je optimalno poravnata.

[0074] U nekim otelotvorenjima, za jedinjenje Formule (II-A), jedan ili više od R<A>, Ri R<C>, kada su prisutni, sadrži deo koji kovalentno reaguje sa jednim ili više ostataka na meninu. U nekim otelotvorenjima, jedan ili više od R<A>, Ri R<C>, kada su prisutni, sadrži deo koji kovalentno reaguje sa jednim ili više izoforma menina, na primer, izoformom 1 (SEQ ID NO: 1), izoforma 2 (SEQ ID NO: 2 ) ili izoforma 3 (SEQ ID NO: 3) od menina. U određenim otelotvorenjima, jedan ili više od R<A>, Ri R<C>, kada su prisutni, sadrži deo koji kovalentno reaguje sa meninom, pri čemu protein menina deli 60% ili više, 70% ili više, 75% ili više, 80% ili više , 85% ili više, 90% ili više, 95% ili više, ili 99% ili više identičnosti sekvence sa izoformom 1 (SEQ ID NO: 1), izoforma 2 (SEQ ID NO: 2 ) ili izoforma 3 (SEQ ID NO: 3).

[0075] U nekim otelotvorenjima, za jedinjenje Formule (II-A), jedan ili više od R<A>, Ri R<C>, kao što je ovde opisano, kada su prisutni, sadrži elektrofilnu grupu koja je podložna nuklefilnom napadu iz ostatka na meninu. U nekim otelotvorenjima, jedan ili više od R<A>, Ri R<C>, kada su prisutni, sadrži deo koji nije elektrofil, pri čemu je taj deo sposoban da se vezuje za ili kovalentno reaguje sa ostatkom na meninu. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) je sposobno da se (a) veže kovalentno za menin i (b) da inhibira interakciju menina i MLL.

[0076] U nekim otelotvorenjima, za jedinjenje Formule (II-A), R<C>, kako je ovde opisano, sadrži funkcionalnu grupu koja kovalentno reaguje sa jednim ili više ostataka na meninu. U nekim otelotvorenjima, funkcionalna grupa kovalentno reaguje sa jednim ili više cisteinskih ostataka na meninu. U nekim otelotvorenjima, funkcionalna grupa kovalentno reaguje sa cisteinom na meninu na poziciji 329 u odnosu na SEQ ID NO: 2 kada je optimalno poravnat ili položaj 334 u odnosu na SEQ ID NO: 1 kada je optimalno poravnata.

[0077] U nekim otelotvorenjima, za jedinjenje Formule (II-A), R<C>je deo koji sadrži alfa, beta-nezasićeni karbonil; alfa, beta-nezasićeni sulfonil; epoksid; aldehid; sulfonil fluorid; halometilkarbonil, dihalometilkarbonil ili trihalometilkarbonil.

[0078] Svaka kombinacija iznad opisanih grupa za različite promenljive je ovde razmatrana. U celoj specifikaciji, njihove grupe i supstituenti se mogu izabrati da obezbede stabilne grupe i jedinjenja.

[0079] Ovde opisani hemijski entiteti mogu se sintetizovati prema jednoj ili više ilustrativnih šema ovde i/ili tehnikama poznatim u tehnici. Ovde korišćeni materijali su ili komercijalno dostupni ili pripremljeni sintetičkim postupcima koji su opšte poznati u tehnici. Ove šeme nisu ograničene na jedinjenja navedena u primerima ili na bilo koji određeni supstituent, koji se koriste u ilustrativne svrhe. Iako su različiti koraci opisani i prikazani u Šemi 1 i Primerima 1-5, koraci se u nekim slučajevima mogu izvesti drugačijim redosledom od redosleda prikazanog u Šemi 1 i Primerima 1-5. Mogu se napraviti različite modifikacije ovih sintetičkih reakcionih šema i biće predložene stručnjaku koji se poziva na otkrivanje sadržano u ovoj prijavi. Numeracije ili R grupe u svakoj šemi ne odgovaraju nužno onima u patentnim zahtevima ili drugim šemama ili tabelama ovde.

[0080] Osim ako nije navedeno suprotno, ovde opisane reakcije se odvijaju na atmosferskom pritisku, uglavnom u temperaturnom opsegu od -10 °C do 200 °C. Dalje, osim ako nije drugačije naznačeno, reakciona vremena i uslovi treba da budu približni, na primer, da se odvijaju na oko atmosferskom pritisku u temperaturnom opsegu od oko -10 °C do oko 110 °C tokom perioda od oko 1 do oko 24 sata; reakcije ostavljene da teče preko noći u proseku traje oko 16 sati.

[0081] Uopšteno govoreći, jedinjenja prema pronalasku mogu biti pripremljena prema sledećoj reakcionoj šemi:

[0082] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje Formule 1-7 se može pripremiti prema Šemi 1. Na primer, metansulfonil hlorid se može dodati u rastvor alkohola 1-1 i trietilamina da bi se dobio mezilat 1-2.

Dodavanje mezilata 1-2 u rastvor Cs2CO3i amina 1-3 može da obezbedi jedinjenje Formule 1-4. Spajanje aldehida 1-4 sa aminom 1-5 može da se odvija u prisustvu odgovarajućeg redukcionog sredstva, kao što je NaBH(OAc)3, da bi se dobilo jedinjenje Formule 1-6. Dodatak TFA može otkriti slobodni amin, koji opciono može da reaguje sa R<57>-LG, gde je LG pogodna odlazeća grupa, da bi se dobilo jedinjenje Formule 1-7.

[0083] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje predmetnog obelodanjivanja, na primer, jedinjenje formule dato u Tabeli 1 ili 2, se sintetiše prema jednom od opštih puteva navedenih u Šemi 1, Primerima 1-5, ili postupcima koji su opšte poznati u tehnici. U nekim otelotvorenjima, primerna jedinjenja mogu uključiti, ali nisu ograničena na, jedinjenje ili njegovu so odabranu iz Tabele 1.

[0084] Jedinjenja iz Tabele 1 označena zvezdicom "*" su data samo kao referenca. ;Tabela 1 ;; ; ;;; 2 ; ;;; 2 ;;; 2 ;;; 2 ;;; 2 ;;; 2 ; ;;; 1 ;;; 2 ; ;;; 4 ; ; ; ; ; ;;; 4 ; ; ;;; 4 ; ;;; 4 ;;; 4 ;;; 4 ;;; 4 ;;; 4 ; ;;; 1 ;;; 2 ; ;;; 4 ; ; ; ; ; ; ;;; 1 ;; [0085] Jedinjenja iz Tabele 2 su data samo za referencu kako je označeno svako jedinjenje označeno zvezdicom "*".

Tabela 2

2

4

Farmaceutski sastavi

[0086] Sastavi i postupci prema predmetnom pronalasku mogu se koristiti za lečenje pojedinca kome je to potrebno. U određenim otelotvorenjima, pojedinac je sisar kao što je čovek, ili sisar koji nije čovek. Kada se daje životinji, kao što je čovek, sastav ili jedinjenje poželjno se daje kao farmaceutski sastav koji sadrži, na primer, jedinjenje ili so Formule (II-A) i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0087] U nekim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je formulisana za oralno davanje. U drugim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je formulisana za injektiranje. U još više otelotvorenja, farmaceutski sastavi sadrže jedinjenje kao što je ovde obelodanjeno i dodatno terapeutsko sredstvo (npr., sredstvo protiv raka). Neograničavajući primeri takvih terapeutskih sredstava su opisani u nastavku.

[0088] Pogodni načini primene uključuju, ali nisu ograničeni na, oralnu, intravensku, rektalnu, aerosolnu, parenteralnu, oftalmičku, plućnu, transmukoznu, transdermalnu, vaginalnu, otičku, nazalnu i lokalnu primenu. Pored toga, samo kao primer, parenteralna isporuka uključuje intramuskularne, subkutane, intravenske, intramedularne injekcije, kao i intratekalne, direktne intraventrikularne, intraperitonealne, intralimfatičke i intranazalne injekcije.

[0089] U određenim otelotvorenjima, sastav jedinjenja ili soli Formule (II-A) se primenjuje na lokalni, a ne sistemski način, na primer, putem injekcije jedinjenja direktno u organ, često u depo preparatu ili formulaciji sa produženim oslobađanjem. U specifičnim otelotvorenjima, formulacije dugog dejstva se daju implantacijom (na primer subkutano ili intramuskularno) ili intramuskularnom injekcijom. Dalje, u drugim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) se isporučuju u ciljanom sistemu za isporuku leka, na primer, u lipozomu obloženom antitelom specifičnim za organ. U takvim otelotvorenjima, lipozomi su ciljani na organ i selektivno ih preuzima. U još drugim otelotvorenjima, sastav je obezbeđen u obliku formulacije za brzo oslobađanje, u obliku formulacije sa produženim oslobađanjem, ili u obliku formulacije sa srednjim oslobađanjem. U još drugim otelotvorenjima, sastav se primenjuje lokalno.

[0090] Jedinjenje Formule (II-A), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, može biti efikasno u širokom opsegu doza. Na primer, u lečenju odraslih ljudi, doze od 0,01 do 1000 mg dnevno, od 0,5 do 100 mg dnevno, od 1 do 50 mg dnevno i od 5 do 40 mg dnevno su primeri doza koje mogu biti koristi u nekim otelotvorenjima. Tačna doza zavisiće od načina primene, oblika u kome se jedinjenje primenjuje, ispitanika koji se leči, telesne mase ispitanika koji se leči, i preferencija i iskustva lekara koji prisustvuje.

[0091] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) se daje u jednoj dozi. Tipično, takva primena će biti injekcijom, npr., intravenskom injekcijom, da bi se sredstvo brzo uvelo. Međutim, po potrebi se koriste i druge rute. U nekim otelotvorenjima, pojedinačna doza jedinjenja ili soli Formule (II-A) se koristi za lečenje akutnog stanja.

[0092] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) se daje u više doza. U nekim otelotvorenjima, doziranje je otprilike jednom, dva puta, tri puta, četiri puta, pet puta, šest puta ili više od šest puta dnevno. U drugim otelotvorenjima, doziranje je otprilike jednom mesečno, jednom u dve nedelje, jednom nedeljno ili jednom svakog drugog dana. U drugom otelotvorenju, jedinjenje ili so Formule (II-A) i drugo sredstvo se primenjuju zajedno oko jednom dnevno do oko 6 puta dnevno. U drugom otelotvorenju, primena jedinjenja ili soli Formule (II-A) i sredstva se nastavlja manje od oko 7 dana. U još jednom otelotvorenju, primena se nastavlja više od oko 6 dana, više od oko 10 dana, više od oko 14 dana, više od oko 28 dana, više od oko dva meseca, više od oko šest meseci, ili godinu dana ili više. U nekim slučajevima, kontinuirano doziranje se postiže i održava koliko god je potrebno.

[0093] Primena jedinjenja ili soli Formule (II-A) može da se nastavi koliko god je potrebno. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje iz predmetnog obelodanjivanja se primenjuje više od 1, više od 2, više od 3, više od 4, više od 5, više od 6, više od 7, više od 14 ili više od 28 dana. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje iz predmetnog obelodanjivanja se primenjuje 28 dana ili manje, 14 dana ili manje, 7 dana ili manje, 6 dana ili manje, 5 dana ili manje, 4 dana ili manje, 3 dana ili manje, 2 dana ili manje ili 1 dan ili njegov deo. U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) se daju hronično na stalnoj osnovi, npr., za lečenje hroničnih efekata.

[0094] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) se daje u dozama. U struci je poznato da je zbog intersubjektne varijabilnosti u farmakokinetici jedinjenja neophodna individualizacija režima doziranja za optimalnu terapiju. Doziranje jedinjenja ili soli Formule (II-A) može se naći rutinskim eksperimentisanjem u svetlu trenutnog obelodanjivanja.

[0095] U nekim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) je formulisano u farmaceutske sastave. U specifičnim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi su formulisane na konvencionalni način korišćenjem jednog ili više fiziološki prihvatljivih nosača koji sadrže ekscipijente i pomoćne supstance koje olakšavaju preradu aktivnih jedinjenja u preparate koji se mogu farmaceutski koristiti. Pravilna formulacija zavisi od izabranog načina davanja. Bilo koja farmaceutski prihvatljiva tehnika, nosači i ekscipijensi se koriste kao pogodni za formulisanje ovde opisanih farmaceutskih sastava: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; i Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999).

[0096] Ovde su obezbeđeni farmaceutski sastavi koje sadrže jedinjenje ili so Formule (II-A) i farmaceutski prihvatljiv(e) razblaživač(e), ekscipijens(e) ili nosač(e). U određenim otelotvorenjima, opisana jedinjenja ili soli se primenjuju kao farmaceutski sastavi u kojima je jedinjenje ili so Formule (II-A) pomešano sa drugim aktivnim sastojcima, kao u kombinovanoj terapiji. Ovde su obuhvaćene sve kombinacije aktivnih sastojaka navedene u odeljku kombinovane terapije ispod i u celom ovom obelodanjivanju. U specifičnim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi uključuju jedno ili više jedinjenja Formule (II-A), ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0097] Farmaceutski sastav, kako se ovde koristi, odnosi se na smešu jedinjenja ili soli Formule (II-A) sa drugim hemijskim komponentama, kao što su nosači, stabilizatori, razblaživači, disperzioni agensi, agensi za suspendovanje, agensi za zgušnjavanje i/ili ekscipijensi. U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastav olakšava davanje jedinjenja organizmu. U nekim otelotvorenjima, primenom postupka lečenja ili upotrebe koji su ovde dati, terapeutski efikasne količine jedinjenja ili soli Formule (II-A) se daju u farmaceutskom sastavu sisaru koji ima bolest, poremećaj ili zdravstveno stanje koje treba lečiti. U specifičnim otelotvorenjima, sisar je čovek. U određenim otelotvorenjima, terapeutski efikasne količine variraju u zavisnosti od ozbiljnosti bolesti, starosti i relativnog zdravlja ispitanika, jačine korišćenog jedinjenja i drugih faktora. Jedinjenje ili so Formule (II-A) mogu se koristiti pojedinačno ili u kombinaciji sa jednim ili više terapeutskih sredstava kao komponente smeše.

[0098] U jednom otelotvorenju, jedinjenje ili so Formule (II-A) je formulisano u vodenom rastvoru. U specifičnim otelotvorenjima, vodeni rastvor se bira između, samo kao primer, fiziološki kompatibilnog pufera, kao što je Hankov rastvor, Ringerov rastvor ili fiziološki slani pufer. U drugim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) je formulisano za transmukoznu primenu. U specifičnim otelotvorenjima, transmukozne formulacije uključuju penetrante koji su odgovarajući za barijeru koja se prožima. U dodatnim otelotvorenjima u kojima je jedinjenje ili so Formule (II-A) formulisano za druge parenteralne injekcije, odgovarajuće formulacije uključuju vodene ili nevodene rastvore. U specifičnim otelotvorenjima, takvi rastvori uključuju fiziološki kompatibilne pufere i/ili ekscipijense.

[0099] U drugom otelotvorenju, jedinjenje ili so Formule (II-A) je formulisano za oralnu primenu. Jedinjenje ili so Formule (II-A) mogu se formulisati kombinovanjem aktivnih jedinjenja sa, npr., farmaceutski prihvatljivim nosačima ili ekscipijensima. U različitim otelotvorenjima , jedinjenje ili so Formule (II-A) je formulisano u oralnim oblicima doziranja koji uključuju, samo kao primer, tablete, prahove, pilule, dražeje, kapsule, tečnosti, gelove, sirupe, eliksire, kaše, suspenzije i sl.

[0100] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski preparati za oralnu upotrebu se dobijaju mešanjem jednog ili više čvrstih ekscipijenasa sa jedinjenjem ili soli Formule (II-A), opciono mlevenjem dobijene smeše i obradom smeše granula, nakon dodavanja odgovarajućih pomoćnih supstanci, ako željeno, da se dobiju tablete ili jezgra dražeja. Pogodni ekscipijensi su, naročito, punioci kao što su šećeri, uključujući laktozu, saharozu, manitol ili sorbitol; preparati celuloze kao što su: na primer, kukuruzni skrob, pšenični skrob, pirinčani skrob, krompirov skrob, želatin, tragakant gume, metilceluloza, mikrokristalna celuloza, hidroksipropilmetilceluloza, natrijum karboksimetilceluloza; ili drugi kao što su: polivinilpirolidon (PVP ili povidon) ili kalcijum fosfat. U specifičnim otelotvorenjima, sredstva za dezintegraciju se opciono dodaju. Sredstva za dezintegraciju obuhvataju, samo kao primer, umreženu kroskarmelozu natrijum, polivinilpirolidon, agar ili alginsku kiselinu ili njihovu so kao što je natrijum alginat.

[0101] U jednom otelotvorenju, oblici za doziranje, kao što su jezgra dražeja i tablete, imaju jedan ili više pogodnih premaza. U specifičnim otelotvorenjima, koncentrovani rastvori šećera se koriste za oblaganje doznog oblika. Rastvori šećera opciono sadrže dodatne komponente, kao što su samo kao primer, guma arabika, talk, polivinilpirolidon, karbopol gel, polietilen glikol i/ili titanijum dioksid, rastvori lakova i pogodni organski rastvarači ili smeše rastvarača. Boje i/ili pigmenti se takođe opciono dodaju premazima u svrhu identifikacije. Dodatno, boje i/ili pigmenti se opciono koriste za karakterizaciju različitih kombinacija doza aktivnog jedinjenja.

[0102] U određenim otelotvorenjima, terapeutski efikasna količina jedinjenja ili soli Formule (II-A) je formulisana u druge oralne oblike doziranja. Oralni oblici doziranja obuhvataju kapsule napravljene od želatina, kao i meke, zatvorene kapsule napravljene od želatina i plastifikatora, kao što su glicerol ili sorbitol. U specifičnim otelotvorenjima, push-fit kapsule sadrže aktivne sastojke u mešavini sa jednim ili više filera. Fileri uključuju, samo kao primer, laktozu, veziva kao što su skrob, i/ili maziva kao što su talk ili magnezijum stearat i, opciono, stabilizatore. U drugim otelotvorenjima, meke kapsule sadrže jedno ili više aktivnih jedinjenja koja su rastvorena ili suspendovana u odgovarajućoj tečnosti. Pogodne tečnosti uključuju, samo kao primer, jedno ili više masnih ulja, tečni parafin ili tečni polietilen glikol. Pored toga, opciono se dodaju stabilizatori.

[0103] U drugim otelotvorenjima, terapeutski efikasna količina jedinjenja ili soli Formule (II-A) je formulisana za bukalnu ili sublingvalnu primenu. Formulacije pogodne za bukalnu ili sublingvalnu primenu uključuju, samo kao primer, tablete, pastile ili gelove. U dodatnim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) je formulisano za roditeljsku injekciju, uključujući formulacije pogodne za bolus injekciju ili kontinuiranu infuziju. U specifičnim otelotvorenjima, formulacije za injekcije su predstavljene u jediničnom doznom obliku (npr., u ampulama) ili u ambalažama za više doza. Konzervansi se, opciono, dodaju formulacijama za injekcije. U još nekim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi su formulisane u obliku pogodnom za parenteralnu injekciju kao sterilne suspenzije, rastvori ili emulzije u uljanim ili vodenim nosačima. Formulacije za parenteralne injekcije opciono sadrže sredstva za formulaciju kao što su sredstva za suspendovanje, stabilizaciju i/ili disperziju. U specifičnim otelotvorenjima, farmaceutske formulacije za parenteralnu primenu uključuju vodene rastvore aktivnih jedinjenja u obliku rastvorljivom u vodi. U dodatnim otelotvorenjima, suspenzija jedinjenja ili soli Formule (II-A) se priprema kao odgovarajuće uljne suspenzije za injekcije. Pogodni lipofilni rastvarači ili nosači za upotrebu u ovde opisanim farmaceutskim sastavima uključuju, samo kao primer, masna ulja kao što je susamovo ulje, ili sintetičke estre masnih kiselina, kao što su etil oleat ili trigliceridi, ili lipozomi. U određenim specifičnim otelotvorenjima, vodene suspenzije za injekcije sadrže supstance koje povećavaju viskozitet suspenzije, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, sorbitol ili dekstran. Opciono, suspenzija sadrži pogodne stabilizatore ili sredstva koji povećavaju rastvorljivost jedinjenja kako bi se omogućila priprema visoko koncentrovanih rastvora. U određenim otelotvorenjima, aktivno sredstvo je u obliku praha za konstituisanje sa odgovarajućim vehikulumom, na primer, sterilnom vodom bez pirogena, pre upotrebe.

[0104] U dodatnim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) se primenjuje topikalno. Jedinjenje ili so Formule (II-A) mogu se formulisati u različite sastave za lokalnu primenu, kao što su rastvori, suspenzije, losioni, gelovi, paste, lekoviti štapići, balzami, kreme ili masti. Takvi farmaceutski sastavi opciono sadrže solubilizatore, stabilizatore, agense za poboljšanje toničnosti, pufere i konzervanse.

[0105] U dodatnim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) je formulisano za transdermalnu primenu. Transdermalne formulacije mogu da koriste uređaje za transdermalno oslobađanje i transdermalne flastere i mogu biti lipofilne emulzije ili puferovani, vodeni rastvori, rastvoreni i/ili dispergovani u polimeru ili adhezivu. U različitim otelotvorenjima, takvi flasteri su konstruisani za kontinuiranu, pulsirajuću ili na zahtev isporuku farmaceutskih sredstava. U dodatnim otelotvorenjima, transdermalna isporuka jedinjenja ili soli Formule (II-A) se postiže pomoću jonoforetskih flastera i slično. U određenim otelotvorenjima, transdermalni flasteri obezbeđuju kontrolisanu isporuku jedinjenja ili soli Formule (II-A). U specifičnim otelotvorenjima, brzina apsorpcije se usporava korišćenjem membrana koje kontrolišu brzinu ili hvatanjem jedinjenja unutar polimerne matrice ili gela. U alternativnim otelotvorenjima, pojačivači apsorpcije se koriste za povećanje apsorpcije. Pojačivači ili nosači apsorpcije uključuju farmaceutski prihvatljive rastvarače koji se mogu apsorbovati koji pomažu prolaz kroz kožu. Na primer, u jednom otelotvorenju, transdermalni uređaji su u obliku zavoja koji se sastoji od zadnjeg elementa, rezervoara koji sadrži jedinjenje ili so Formule (II-A), opciono sa nosačima, opciono barijeru koja kontroliše brzinu za isporuku jedinjenja u kožu domaćina kontrolisanom i unapred određenom brzinom tokom dužeg vremenskog perioda, i znači da se uređaj pričvrsti za kožu.

[0106] U drugim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) je formulisano za primenu inhalacijom. Različiti oblici pogodni za primenu inhalacijom uključuju, ali nisu ograničeni na, aerosole, mistove ili prahove. Farmaceutski sastavi jedinjenja ili soli Formule (II-A) se prikladno isporučuju u obliku aerosol spreja iz pakovanja pod pritiskom ili nebulizatora, uz upotrebu odgovarajućeg potisnog gasa (npr., dihlorodifluorometan, trihlorofluorometan, dihlorotetrafluoroetan ili drugi odgovarajući gas). U specifičnim otelotvorenjima, jedinica doze aerosola pod pritiskom se određuje obezbeđivanjem ventila za isporuku odmerene količine. U određenim otelotvorenjima, kapsule i kertridži, kao što je, samo kao primer, želatin za upotrebu u inhalatoru ili insuflatoru su formulisani koji sadrže mešavinu praha jedinjenja ili soli Formule (II-A) i pogodnu bazu praha kao što je kao laktoza ili skrob.

[0107] U još nekim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) se formuliše u rektalnim sastavima kao što su klistir, rektalni gelovi, rektalne pene, rektalni aerosoli, supozitorije, žele supozitorije ili retencioni klistiri, koji sadrže konvencionalne baze supozitorija kao što je kakao puter ili drugi gliceridi, kao i sintetički polimeri kao što su polivinilpirolidon, PEG i slično. Kod sastavima u obliku supozitorija, vosak sa niskim temperaturama kao što je, ali bez ograničenja, smeša glicerida masnih kiselina, opciono u kombinaciji sa kakaovim maslacem se prvo topi.

[0108] U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastavi su formulisane na bilo koji konvencionalni način korišćenjem jednog ili više fiziološki prihvatljivih nosača koji sadrže ekscipijente i pomoćne supstance koje olakšavaju preradu aktivnih jedinjenja u preparate koji se mogu farmaceutski koristiti. Pravilna formulacija zavisi od izabranog načina davanja. Bilo koja farmaceutski prihvatljiva tehnika, nosači i ekscipijensi mogu se opciono koristiti kao pogodni. Farmaceutski sastavi koji sadrže jedinjenje ili so Formule (II-A) se proizvode na konvencionalni način, kao što je, samo kao primer, pomoću konvencionalnog mešanja, rastvaranja, granulacije, pravljenja dražeja, lebdenja, emulgovanja, kapsuliranja, procesi zarobljavanja ili kompresije.

[0109] Farmaceutski sastavi obuhvataju najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijens i jedinjenje ili so Formule (II-A), koji se ponekad ovde pominje kao aktivno sredstvo ili sastojak. Aktivni sastojak može biti u obliku slobodne kiseline ili slobodne baze, ili u obliku farmaceutski prihvatljive soli. Dodatno, jedinjenje ili so Formule (II-A) mogu biti u nesolvatovanim ili rastvorenim oblicima sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima kao što su voda i etanol. Pored toga, farmaceutski sastavi opciono uključuju druge medicinska ili farmaceutska sredstva, nosače, adjuvanse, kao što su sredstva za konzerviranje, stabilizaciju, vlaženje ili emulgovanje, promoteri rastvora, soli za regulisanje osmotskog pritiska, pufere i/ili druge terapeutski vredne supstance.

[0110] Postupci za pripremu sastava koji sadrže jedinjenje ili so Formule (II-A) uključuju formulisanje jedinjenja sa jednim ili više inertnih, farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa ili nosača da bi se formirala čvrsta, polu-čvrsta ili tečna. Čvrsti sastavi uključuju, ali nisu ograničene na, prahove, tablete, disperzibilne granule, kapsule, kapsule i supozitorije. Tečne kompozicije obuhvataju rastvore u kojima je jedinjenje rastvoreno, emulzije koje sadrže jedinjenje, ili rastvor koji sadrži lipozome, micele ili nanočestice koji sadrže jedinjenje ili so Formule (II-A). Polu-čvrsti sastavi uključuju, ali nisu ograničene na, gelove, suspenzije i kreme. Oblik farmaceutskih sastava jedinjenja ili soli Formule (II-A) obuhvata tečne rastvore ili suspenzije, čvrste oblike pogodne za rastvor ili suspenziju u tečnosti pre upotrebe, ili kao emulzije. Ovi sastavi takođe opciono sadrže manje količine netoksičnih, pomoćnih supstanci, kao što su sredstva za vlaženje ili emulgatori, pH puferska sredstva i tako dalje.

[0111] U nekim otelotvorenjima, farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje ili so Formule (II-A) ima oblik tečnosti gde su sredstva prisutna u rastvoru, u suspenziji ili u oba. Tipično, kada se sastav primenjuje kao rastvor ili suspenzija, prvi deo sredstava je prisutan u rastvoru, a drugi deo sredstava je prisutan u obliku čestica, u suspenziji u tečnom matriksu. U nekim otelotvorenjima, tečni sastav uključuje formulaciju gela. U drugim otelotvorenjima, tečni sastav je voden.

[0112] U određenim otelotvorenjima, vodene suspenzije sadrže jedan ili više polimera kao sredstva za suspendovanje. Polimeri obuhvataju polimere rastvorljive u vodi kao što su celulozni polimeri, npr., hidroksipropil metilceluloza, i polimere nerastvorljive u vodi kao što su umreženi polimeri koji sadrže karboksil. Određeni farmaceutski sastavi koji su ovde opisane sadrže mukoadhezivni polimer, izabran na primer od karboksimetilceluloze, karbomera (polimera akrilne kiseline), poli(metilmetakrilata), poliakrilamida, polikarbofila, akrilne kiseline/butil akrilat kopolimera, natrijum alginata i dekstrana.

[0113] Farmaceutski sastavi takođe, opciono, uključuju sredstva za rastvaranje koji pomažu u rastvorljivosti jedinjenja opisanog ovde. Termin "sredstvo za rastvaranje" generalno uključuje sredstva koji rezultiraju formiranjem micelarnog rastvora ili pravog rastvora sredstva. Određeni prihvatljivi nejonski surfaktanti, na primer polisorbat 80, su korisni kao sredstva za rastvaranje, kao i oftalmološki prihvatljivi glikoli, poliglikoli, npr., polietilen glikol 400 i glikol etri.

[0114] Farmaceutski sastavi opciono uključuju jedan ili više agenasa za podešavanje pH ili sredstava za puferovanje, uključujući kiseline kao što su sirćetna, borna, limunska, mlečna, fosforna i hlorovodonična kiselina; baze kao što su natrijum hidroksid, natrijum fosfat, natrijum borat, natrijum citrat, natrijum acetat, natrijum laktat i tris-hidroksimetilaminometan; i puferi kao što su citrat/dekstroza, natrijum bikarbonat i amonijum hlorid. Takve kiseline, baze i puferi su uključeni u količini koja je potrebna za održavanje pH sastava u prihvatljivom opsegu.

[0115] Dodatno, korisni sastavi takođe, opciono, uključuju jednu ili više soli u količini koja je potrebna da se osmolalnost sastava dovede u prihvatljiv opseg. Takve soli uključuju one koje imaju natrijum, kalijum ili amonijum katjone i hlorid, citrat, askorbat, borat, fosfat, bikarbonat, sulfat, tiosulfat ili bisulfit anjone; pogodne soli uključuju natrijum hlorid, kalijum hlorid, natrijum tiosulfat, natrijum bisulfit i amonijum sulfat.

[0116] Farmaceutski sastavi opciono uključuju jedan ili više konzervansa za inhibiranje mikrobne aktivnosti. Pogodni konzervansi uključuju supstance koje sadrže živu kao što su merfen i tiomersal; stabilizovani hlor dioksid; i kvaternarna amonijum jedinjenja kao što su benzalkonijum hlorid, cetiltrimetilamonijum bromid i cetilpiridinijum hlorid.

[0117] Farmaceutski sastavi mogu uključivati jedan ili više surfaktanata za poboljšanje fizičke stabilnosti ili za druge svrhe. Pogodni nejonski surfaktanti uključuju polioksietilen gliceride masnih kiselina i biljna ulja, npr., polioksietilen (60) hidrogenizovano ricinusovo ulje; i polioksietilen alkiletri i alkilfenil etri, npr., oktoksinol 10, oktoksinol 40.

[0118] Farmaceutske kompozicije mogu uključivati jedan ili više antioksidanata za poboljšanje hemijske stabilnosti gde je to potrebno. Pogodni antioksidansi uključuju, samo kao primer, askorbinsku kiselinu i natrijum metabisulfit.

[0119] U određenim otelotvorenjima, sastavi vodene suspenzije su upakovane u jednodozne kontejnere koji se ne mogu ponovo zatvoriti. Alternativno, koriste se kontejneri sa više doza koji se mogu ponovo zatvoriti, u kom slučaju je tipično uključiti konzervans u sastav.

[0120] U određenim otelotvorenjima, koriste se sistemi za isporuku hidrofobnih farmaceutskih jedinjenja. Lipozomi i emulzije su primeri sredstava za isporuku ili nosača koji su ovde korisni. U određenim otelotvorenjima, takođe se koriste organski rastvarači kao što je N-metilpirolidon. U dodatnim otelotvorenjima, jedinjenje ili so Formule (II-A) se isporučuju korišćenjem sistema sa produženim oslobađanjem, kao što su polupropusni matriksi čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže terapeutsko sredstvo. Ovde se mogu koristiti različiti materijali sa produženim oslobađanjem. U nekim otelotvorenjima, kapsule sa produženim oslobađanjem oslobađaju jedinjenja nekoliko nedelja do preko 100 dana. U zavisnosti od hemijske prirode i biološke stabilnosti terapeutskog reagensa, primenjuju se dodatne strategije za stabilizaciju proteina.

[0121] U određenim otelotvorenjima, ovde opisane formulacije sadrže jedan ili više antioksidanata, sredstava za helatiranje metala, jedinjenja koja sadrže tiol i/ili drugih opštih stabilizatora. Primeri takvih stabilizatora uključuju, ali nisu ograničeni na: (a) oko 0,5% do oko 2% w/v glicerola, (b) oko 0,1% do oko 1% w/v metionina, (c) oko 0,1% do oko 2% w/v monotioglicerola, (d) oko 1 mM do oko 10 mM EDTA, (e) oko 0,01% do oko 2% w/v askorbinske kiseline, (f) 0,003% do oko 0,02% w/v polisorbata 80, (g) 0,001% do oko 0,05% w/v. polisorbata 20, (h) arginina, (i) heparina, (j) dekstran sulfata, (k) ciklodekstrina, (1) pentosan polisulfat i drugi heparinoidi, (m) dvovalentne katjone kao što su magnezijum i cink; ili (n) njihove kombinacije.

[0122] U nekim otelotvorenjima, koncentracija jedinjenja ili soli Formule (II-A) obezbeđena u farmaceutskom sastavu je manja od oko:100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1%, 0,09%, 0,08%, 0,07%, 0,06%, 0,05%, 0,04%, 0,03%, 0,02%, 0,01%, 0,009%, 0,008%, 0,007%, 0,006%, 0,005%, 0,004%, 0,003%, 0,002%, 0,001%, 0,0009%, 0,0008%, 0,0007%, 0,0006%, 0,0005%, 0,0004%, 0,0003%, 0,0002%, ili 0,0001% w/w, w/v ili v/v.

[0123] U nekim otelotvorenjima, koncentracija jedinjenja ili soli Formule (II-A) obezbeđena u farmaceutskom sastavu je veća od oko: 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 19,75%, 19,50%, 19,25%, 19%, 18,75%, 18,50%, 18,25%, 18%, 17,75%, 17,50%, 17,25%, 17%, 16,75%, 16,50%, 16,25%, 16%, 15,75%, 15,50%, 15,25%, 15%, 14,75%, 14,50%, 14,25%, 14%, 13,75%, 13,50%, 13,25%, 13%, 12,75%, 12,50%, 12,25%, 12%, 11,75%, 11,50%, 11,25%, 11%, 10,75%, 10,50%, 10,25%, 10%, 9,75%, 9,50%, 9,25%, 9%, 8,75%, 8,50%, 8,25%, 8%, 7,75%, 7,50%, 7,25%, 7%, 6,75%, 6,50%, 6,25%, 6%, 5,75%, 5,50%, 5,25%, 5%, 4,75%, 4,50%, 4,25%, 4%, 3,75%, 3,50%, 3,25%, 3%, 2,75%, 2,50%, 2,25%, 2%, 1,75%, 1,50%, 1,25%, 1%, 0,5%, 0,4%, 0,3%, 0,2%, 0,1%, 0,09%, 0,08%, 0,07%, 0,06%, 0,05%, 0,04%, 0,03%, 0,02%, 0,01%, 0,009%, 0,008%, 0,007%, 0,006%, 0,005%, 0,004%, 0,003%, 0,002%, 0,001%, 0,0009%, 0,0008%, 0,0007%, 0,0006%, 0,0005%, 0,0004%, 0,0003%, 0,0002%, ili 0,0001% w/w, w/v ili v/v.

[0124] U nekim otelotvorenjima, koncentracija jedinjenja ili soli formule (II-A) je u opsegu od približno0,0001% do oko 50%, oko 0,001% do oko 40 %, oko 0,01% do oko 30%, oko 0,02% do oko 29%, oko 0,03% do oko 28%, oko 0,04% do oko 27%, oko 0,05% do oko 26%, oko 0,06% do oko 25%, oko 0,07% do oko 24%, oko 0,08% do oko 23%, oko 0,09% do oko 22%, oko 0,1% do oko 21%, oko 0,2% do oko 20%, oko 0,3% do oko 19%, oko 0,4% do oko 18%, oko 0,5% do oko 17%, oko 0,6% do oko 16%, oko 0,7% do oko 15%, oko 0,8% do oko 14%, oko 0,9% do oko 12%, oko 1% do oko 10% w/w, w/v ili v/v.

[0125] U nekim otelotvorenjima, koncentracija jedinjenja ili soli formule (II-A) je u opsegu od približno 0,001% do oko 10%, oko 0,01% do oko 5%, oko 0,02% do oko 4,5%, oko 0,03% do oko 4%, oko 0,04% do oko 3,5%, oko 0,05% do oko 3%, oko 0,06% do oko 2,5%, oko 0,07% do oko 2%, oko 0,08% do oko 1,5%, oko 0,09% do oko 1%, oko 0,1% do oko 0,9% w/w, w/v ili v/v.

[0126] U nekim otelotvorenjima, količina jedinjenja ili soli Formule (II-A) je jednaka ili manja od oko: 10 g, 9,5 g, 9,0 g, 8,5 g, 8,0 g, 7,5 g, 7,0 g, 6,5 g, 6,0 g, 5,5 g, 5,0 g, 4,5 g, 4,0 g, 3,5 g, 3,0 g, 2,5 g, 2,0 g, 1,5 g, 1,0 g, 0,95 g, 0,9 g, 0,85 g, 0,8 g, 0,75 g, 0,7 g, 0,65 g, 0,6 g, 0,55 g, 0,5 g, 0,45 g, 0,4 g, 0,35 g, 0,3 g, 0,25 g, 0,2 g, 0,15 g, 0,1 g, 0,09 g, 0,08 g, 0,07 g, 0,06 g, 0,05 g, 0,04 g, 0,03 g, 0,02 g, 0,01 g, 0,009 g, 0,008 g, 0,007 g, 0,006 g, 0,005 g, 0,004 g, 0,003 g, 0,002 g, 0,001 g, 0,0009 g, 0,0008 g, 0,0007 g, 0,0006 g, 0,0005 g, 0,0004 g, 0,0003 g, 0,0002 g ili 0,0001 g.

[0127] U nekim otelotvorenjima, količina jedinjenja ili soli Formule (II-A) je više od: 0,0001 g, 0,0002 g, 0,0003 g, 0,0004 g, 0,0005 g, 0,0006 g, 0,0007 g, 0,0008 g, 0,0009 g, 0,001 g, 0,0015 g, 0,002 g, 0,0025 g, 0,003 g, 0,0035 g, 0,004 g, 0,0045 g, 0,005 g, 0,0055 g, 0,006 g, 0,0065 g, 0,007 g, 0,0075 g, 0,008 g, 0,0085 g, 0,009 g, 0,0095 g, 0,01 g, 0,015 g, 0,02 g, 0,025 g, 0,03 g, 0,035 g, 0,04 g, 0,045 g, 0,05 g, 0,055 g, 0,06 g, 0,065 g, 0,07 g, 0,075 g, 0,08 g, 0,085 g, 0,09 g, 0,095 g, 0,1 g, 0,15 g, 0,2 g, 0,25 g, 0,3 g, 0,35 g, 0,4 g, 0,45 g, 0,5 g, 0,55 g, 0,6 g, 0,65 g, 0,7 g, 0,75 g, 0,8 g, 0,85 g, 0,9 g, 0,95 g, 1 g, 1,5 g, 2 g, 2,5, 3 g, 3,5, 4 g, 4,5 g, 5 g, 5,5 g, 6 g, 6,5g, 7 g, 7,5g, 8 g, 8,5 g, 9 g, 9,5 g ili 10 g.

1

[0128] U nekim otelotvorenjima, količina jednog ili više jedinjenja prema pronalasku je u opsegu od 0,0001-10 g, 0,0005-9 g, 0,001-8 g, 0,005-7 g, 0,01-6 g, 0,05-5 g, 0,1-4 g, 0,5-4 g ili 1-3 g.

[0129] Za upotrebu u terapeutskim primenama opisanim ovde, takođe su obezbeđeni kompleti i proizvodi. U nekim otelotvorenjima, takvi kompleti sadrže nosač, pakovanje ili ambalažu koji je podeljen da primi jedan ili više ambalaža kao što su bočice, epruvete i slično, pri čemu svaki od kontejnera sadrži jedan od zasebnih elemenata koji se koriste u postupku opisanom ovde. Odgovarajuće ambalaže uključuju, na primer, boce, bočice, špriceve i epruvete. Ambalaže su napravljene od raznih materijala kao što su staklo ili plastika.

[0130] Proizvodni artikli koji su ovde navedeni sadrže materijale za pakovanje. Materijali za pakovanje za pakovanje farmaceutskih proizvoda uključuju one koji se nalaze u, npr., U.S. Pat. Nos.5,323,907, 5,052,558 i 5,033,252. Primeri farmaceutskih materijala za pakovanje uključuju, ali nisu ograničeni na, blister pakovanja, boce, tube, inhalatore, pumpe, kese, bočice, kontejnere, špriceve, boce i bilo koji materijal za pakovanje pogodan za odabranu formulaciju i predviđeni način primene i lečenja. Na primer, ambalaža(e) uključuje jedinjenje ili so Formule (II-A), opciono u sastavu ili u kombinaciji sa drugim sredstvom kao što je ovde obelodanjeno. Ambalaža može imati sterilan pristupni ulaz (na primer, ambalaža može biti vrećica za intravenozni rastvor ili bočica koja ima čep koji se može probiti pomoću igle za potkožnu injekciju). Takvi kompleti opciono sadrže jedinjenje sa identifikacionim opisom ili etiketom ili uputstvima koja se odnose na njegovu upotrebu u ovde opisanim postupcima.

[0131] Na primer, komplet obično uključuje jedan ili više dodatnih ambalaža, svaki sa jednim ili više različitih materijala (kao što su reagensi, opciono u koncentrovanom obliku, i/ili uređaji) poželjni sa komercijalnog i korisničkog stanovišta za upotrebu jedinjenja opisanog ovde. Neograničavajući primeri takvih materijala uključuju, ali bez ograničenja, pufere, razblaživače, filtere, igle, špriceve; nalepnice na nosaču, pakovanju, ambalaži, bočici i/ili epruveti sa spiskom sadržaja i/ili uputstva za upotrebu, i umeci pakovanja sa uputstvima za upotrebu. Skup uputstava će takođe obično biti uključen. Oznaka je opciono na ili povezana sa ambalažom. Na primer, etiketa je na ambalaži kada su slova, brojevi ili drugi znakovi koji čine etiketu pričvršćeni, oblikovani ili urezani u samu ambalažu, etiketa je povezana sa ambalažom kada je prisutna u posudi ili nosaču koji takođe drži ambalažu, na primer, kao umetak za pakovanje. Pored toga, nalepnica se koristi da označi da se sadržaj koristi za određenu terapeutsku primenu. Pored toga, etiketa ukazuje na uputstva za upotrebu sadržaja, kao što su postupci opisani ovde. U određenim otelotvorenjima, farmaceutski sastav je predstavljen u pakovanju ili uređaju za doziranje koji sadrži jedan ili više jediničnih doznih oblika koji sadrže jedinjenje dato ovde. Pakovanje, na primer, sadrži metalnu ili plastičnu foliju, kao što je blister pakovanje. Ili, pakovanju ili uređaju za doziranje su priložena uputstva za primenu. Ili, pakovanju ili dozatoru se prilaže obaveštenje povezano sa ambalažom u formi koju je propisala vladina agencija koja reguliše proizvodnju, upotrebu ili prodaju farmaceutskih proizvoda, a to obaveštenje odražava odobrenje agencije za oblik leka za ljude ili veterinarsku primenu. Takvo obaveštenje, na primer, je označavanje koje je odobrila Uprava za hranu i lekove SAD za lekove koji se izdaju na recept ili odobreni umetak proizvoda. U nekim otelotvorenjima, sastavi koji sadrže ovde dato jedinjenje formulisano u kompatibilnom farmaceutskom nosaču se pripremaju, stavljaju u odgovarajuću ambalažu i obeležavaju za lečenje naznačenog stanja.

Postupci

[0132] U nekim otelotvorenjima, sastavi koji sadrže ovde dato jedinjenje formulisano u kompatibilnom farmaceutskom nosaču se pripremaju, stavljaju u odgovarajuću ambalažu i obeležavaju za lečenje naznačenog stanja.

[0133] Predmetno obelodanjivanje obezbeđuje postupak inhibicije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikacije) koji obuhvata dovođenje u kontakt ćelije sa efikasnom količinom jedinjenja ili soli Formula (II-A). Inhibicija interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikacije) može se proceniti i demonstrirati na širok spektar načina poznatih u tehnici.

Neograničavajući primeri uključuju prikaz (a) smanjenja vezivanja menina za jedan ili više proteina ili fragmenata proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzioni protein, MLL delimična tandemska duplikacija ili njihov peptidni fragment); (b) smanjenje ćelijske proliferacije i/ili vitalnosti ćelije; (c) povećanje diferencijacije ćelija; (d) smanjenje nivoa nizvodnih ciljeva MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina i/ili MLL delimične tandemske duplikacije (npr., Hoxa9, DLX2 i Meis1); i/ili (e) smanjenje zapremine tumora i/ili stope rasta zapremine tumora. Kompleti i komercijalno dostupni testovi mogu se koristiti za određivanje jednog ili više od iznad navedenih.

2

[0134] Obelodanjivanje takođe obezbeđuje postupke korišćenja jedinjenja ili farmaceutskih kompozicija iz predmetnog obelodanjivanja za lečenje bolesnih stanja, uključujući, ali ne ograničavajući se na stanja koja su implicirana meninom, MLL, MLL1, MLL2 i/ili MLL fuzionim proteinima (npr., rak).

[0135] U nekim otelotvorenjima, obezbeđen je postupak za lečenje kancera, koji obuhvata davanje efikasne količine bilo koje od prethodnih farmaceutskih sastava koje sadrže jedinjenje ili so Formule (II-A) ispitaniku kome je to potrebno. U nekim otelotvorenjima, rak je posredovan MLL fuzionim proteinom. U drugim otelotvorenjima, rak je leukemija, rak dojke, rak prostate, rak pankreasa, rak pluća, rak jetre, rak kože ili tumor na mozgu. U određenim otelotvorenjima, kancer je leukemija. U nekim otelotvorenjima, rak obuhvata čvrst tumor.

[0136] U nekim otelotvorenjima, obelodanjivanja obezbeđuje postupak lečenja poremećaja kod ispitanika kome je to potrebno, pri čemu postupak obuhvata određivanje da li subjekt ima MLL fuzioni protein i, ako je utvrđeno da ispitanik ima MLL fuzioni protein, davanje na podvrgnuti terapeutski efektivnoj dozi jedinjenja ili soli Formule (II-A).

[0137] MLL fuzioni proteini su takođe identifikovani kod hematoloških maligniteta (npr., kanceri koji utiču na krv, koštanu srž i/ili limfne čvorove). Shodno tome, određena otelotvorenja su usmerena na davanje jedinjenja ili soli Formule (II-A) pacijentu kome je potrebno lečenje hematološkog maligniteta. Takvi maligniteti uključuju, ali nisu ograničeni na leukemije i limfome. Na primer, sada obelodanjena jedinjenja mogu da se koriste za lečenje bolesti kao što su akutna limfoblastna leukemija (ALL), akutna mijelogena leukemija (AML), hronična limfocitna leukemija (CLL), mali limfocitni limfom (SLL), hronična mijelogena leukemija (AML) , Akutna monocitna leukemija (AMoL), leukemija dlakavih ćelija i/ili druge leukemije. U drugim otelotvorenjima, jedinjenja se mogu koristiti za lečenje limfoma kao što su svi podtipovi Hočkinov limfoma ili ne-Hočkinovog limfoma.

[0138] Utvrđivanje da li tumor ili kancer sadrži MLL fuzioni protein može se preduzeti procenom nukleotidne sekvence koja kodira MLL fuzioni protein, procenom aminokiselinske sekvence MLL fuzionog proteina, ili procenom karakteristika navodnog MLL fuzionog proteina.

[0139] Stručnjacima su poznati postupci za detekciju nukleotidne sekvence MLL fuzionog proteina. Ovi postupci uključuju, ali nisu ograničeni na, testove polimorfizma dužine fragmenata lančane reakcije polimeraze-restrikcije (PCR-RFLP), testove polimorfizma konformacije jednolančane reakcije polimeraze (PCR-SSCP), PCR testove u realnom vremenu, PCR sekvenciranje, mutant alel-specifični PCR amplifikacioni (MASA) testovi, direktno sekvenciranje, reakcije produžetka prajmera, elektroforeza, testovi ligacije oligonukleotida, testovi hibridizacije, TaqMan testovi, testovi genotipizacije SNP, testovi topljenja visoke rezolucije i analize mikromreža. U nekim otelotvorenjima, MLL fuzioni protein se identifikuje korišćenjem postupka direktnog sekvenciranja specifičnih regiona (npr. egzon 2 i/ili egzon 3) u MLL ili genu partnera fuzije, na primer. Ova tehnika će identifikovati sve moguće mutacije u sekvenciranom regionu.

[0140] Stručnjacima su poznati postupci za detekciju MLL fuzionog proteina. Ovi postupci uključuju, ali nisu ograničeni na, detekciju MLL fuzionog proteina korišćenjem vezujućeg sredstva (npr., antitela) specifičnog za fuzioni protein, elektroforezu proteina i zapadni blot, i direktno sekvenciranje peptida.

[0141] Postupci za određivanje da li tumor ili kancer sadrže MLL fuzioni protein mogu koristiti različite uzorke. U nekim otelotvorenjima, uzorak se uzima od ispitanika koji ima tumor ili rak. U nekim otelotvorenjima, uzorak se uzima od ispitanika koji ima kancer ili tumor. U nekim otelotvorenjima, uzorak je svež uzorak tumora/raka. U nekim otelotvorenjima, uzorak je zamrznuti uzorak tumora/raka. U nekim otelotvorenjima, uzorak je uzorak fiksiran u parafin. U nekim otelotvorenjima, uzorak se obrađuje u ćelijski lizat. U nekim otelotvorenjima, uzorak se obrađuje u DNK ili RNK.

[0142] Obelodanjivanje se takođe odnosi na postupak lečenja hiperproliferativnog poremećaja kod sisara koji obuhvata davanje sisaru terapeutski efikasne količine jedinjenja ili soli Formule (II-A). U nekim otelotvorenjima, ovaj postupak se odnosi na lečenje kancera kao što je akutna mijeloidna leukemija, kancer kod adolescenata, adrenokortikalni karcinom u detinjstvu, kanceri povezani sa AIDS-om (npr. limfom i Kapošijev sarkom), analni kancer, kancer slepog creva, astrocitomi, karcinom bazalnih ćelija, rak žučnih kanala, rak mokraćne bešike, rak kostiju, gliom moždanog stabla, tumor mozga, rak dojke, tumori bronhija, Burkitov limfom, karcinoidni tumor, atipični teratoid, embrionalni tumori, tumor polnih ćelija, primarni limfom, rak grlića materice, karcinom u detinjstvu, hordom, tumori srca, hronična limfocitna leukemija (CLL),hronična mijelogena leukemija (CML), hronični mileoproliferativni poremećaji, rak debelog creva, kolorektalni kancer, kraniofaringiom, kožni T-ćelijski limfom, ekstrahepatični duktalni karcinom in situ (DCIS), embrionalni tumori, Rak CNS-a, rak endometrijuma, ependimom, kancer jednjaka, estezioneuroblastom, Juingov sarkom, ekstrakranijalni tumor zametnih ćelija, ekstragonadalni tumor zametnih ćelija, rak oka, fibrozni histiocitom kostiju, rak žučne kese, rak želuca, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumori (GIST), tumor zametnih ćelija, gestacijski trofoblastični tumor, leukemija dlakavih ćelija, rak glave i vrata, kancer srca, rak jetre, Hočkin limfom, kancer hipofarinksa, intraokularni melanom, tumori ćelija ostrvaca, tumori neuroendokrine pankreasa , rak bubrega, rak larinksa, rak usne i usne duplje, rak jetre, lobularni karcinom in situ (LCIS), rak pluća, limfom, metastatski skvamozni karcinom vrata sa okultnim primarnim, karcinom srednjeg trakta, rak usta, sindromi višestruke endokrine neoplazije, multipli mijelom/neoplazma plazma ćelija, mikozis fungoides, , mijelodisplatični sindrom, mijeloproliferativne neoplazme, multipli mijelom, karcinom Merkelovih ćelija, maligni mezoteliom, maligni fibrozni histiocitom kostiju i osteosarkom, rak nosne duplje i paranazalnog sinusa, rak nazofarinksa, neuroblastom, ne-Hodžkinov limfom, rak pluća ne-malih ćelija (NSCLC), oralni karcinom, kancer usne i usne duplje, kancer orofarinksa, rak jajnika, kancer pankreasa, papilomatoza, paragangliom, rak paranazalnog sinusa i nosne duplje, rak paratiroidne žlezde, rak penisa, rak faringesa, pleuropulmonalni blastom, primarni limfom centralnog nervnog sistema (CNS), rak prostate, rak rektuma, kancer tranzicionih ćelija, retinoblastom, rabdomiosarkom, kancer pljuvačne žlezde, rak kože, rak želuca (želuca), rak malih ćelija pluća, kancer tankog creva, sarkom mekog tkiva, T-ćelijski limfom, kancer testisa, rak grla, timom i karcinom timusa, kancer štitne žlezde, kancer prelaznih ćelija bubrežne karlice i uretera, trofoblastični tumor, neobični kanceri u detinjstvu, rak uretre, sarkom materice, kancer vagine, rak vulve ili Rak izazvan virusima. U nekim otelotvorenjima, postupak se odnosi na lečenje nekanceroznog hiperproliferativnog poremećaja kao što je benigna hiperplazija kože (npr. psorijaza), restenoza ili prostate (npr. benigna hipertrofija prostate (BPH)). U nekim slučajevima, metoda se odnosi na lečenje leukemije, hematološkog maligniteta, raka solidnog tumora, raka prostate (npr. raka prostate otpornog na kastraciju), raka dojke, Juingov sarkom, sarkoma kostiju, primarnog sarkoma kostiju, leukemije prolimfocita T-ćelija, gliom, glioblastom, rak jetre (npr. hepatocelularni karcinom) ili dijabetes. U nekim slučajevima, leukemija obuhvata AML, ALL, leukemiju mešovite linije ili leukemije sa delimičnim tandemskim duplikacijama MLL.

[0143] U određenim konkretnim otelotvorenjima, pronalazak se odnosi na postupke za lečenje karcinoma pluća, postupci obuhvataju davanje efikasne količine bilo kog od iznad opisanih jedinjenja (ili farmaceutske sastave koji ga sadrži) ispitaniku kome je to potrebno. U određenim otelotvorenjima, rak pluća je karcinom pluća ne-malih ćelija (NSCLC), na primer adenokarcinom, skvamozni karcinom pluća ili karcinom pluća velikih ćelija. U drugim otelotvorenjima, rak pluća je karcinom pluća malih ćelija. Drugi kanceri pluća koji se leče sa obelodanjenim jedinjenjima uključuju, ali nisu ograničeni na, tumore žlezde, karcinoidne tumore i nediferencirane karcinome.

[0144] Ispitanici koji se mogu lečiti jedinjenjem iz predmetnog obelodanjivanja, ili farmaceutski prihvatljivom soli, estrom, prolekom, solvatom, tautomerom, stereoizomerom, izotopolom, hidratom ili derivatom jedinjenja, u skladu sa postupcima predmetnog obelodanjivanja uključuju, na primer, ispitanici kod kojih je dijagnostifikovana akutna mijeloidna leukemija, akutna mijeloična leukemija, rak kod adolescenata, karcinom adrenokortikalne žlezde u detinjstvu, kanceri povezani sa AIDS-om (npr. limfom i Kapošijev sarkom), analni rak, rak slepog creva, astrocitomi, atipični teratoid, karcinom bazalnih ćelija, rak žučnih kanala, rak mokraćne bešike, kancer kostiju, gliom moždanog stabla, tumor mozga, rak dojke, tumori bronhija, Burkitov limfom, karcinoidni tumor, atipični teratoid, tumori embriona, tumori embriona , primarni limfom, rak grlića materice, karcinom u detinjstvu, hordom, tumori srca, hronična limfocitna leukemija (CLL), hronična mijelogena leukemija (CML), hronični mileoproliferativni poremećaji, rak debelog creva, kolorektalni kancer, kraniofaringiom, kožni T-ćelijski limfom, ekstrahepatični duktalni karcinom in situ (DCIS), embrionalni tumori, kancer CNS, kancer endometrijuma, ependimoma, karcinom jednjaka, estezioneuroblastom, Juingov sarkom, ekstrakranijalni tumor zametnih ćelija, ekstragonadalni tumor zametnih ćelija, rak oka, fibrozni histiocitom kostiju, rak žučne kese, rak želuca, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumori (GIST), tumor zametnih ćelija, gestacijski trofoblastični tumor, leukemija dlakavih ćelija, rak glave i vrata, kancer srca, rak jetre, Hočkin limfom, kancer hipofarinksa, intraokularni melanom, tumori otočnih ćelija, neuroendokrini tumori pankreasa, tumori bubrega rak larinksa, rak usne i usne duplje, rak jetre, lobularni karcinom in situ (LCIS), rak pluća, limfom, metastatski skvamozni karcinom vrata sa okultnim primarnim, karcinom srednjeg trakta, kancer usta, sindromi višestruke endokrine neoplazije, multipli mijelom/neoplazma plazma ćelija, mikoza fungoides, mijelodisplastični sindromi, mijelodisplastični/mijeloproliferativni karcinomi multiplog mijelokela, maligni tumori mijelokela, maligni fibrozni histiocitom kostiju i osteosarkoma, karcinom nosne duplje i

4

paranazalnog sinusa, rak nazofarinksa, neuroblastom, ne-Hočkin limfom, karcinom nemalih ćelija pluća (NSCLC), oralni karcinom, rak usne i usne duplje, rak orofarinksa, rak jajnika rak pankreasa, papilomatoza, paragangliom, rak paranazalnih sinusa i nosne šupljine, rak paratiroidne žlezde, rak penisa, karcinom ždrela, pleuropulmonalni blastom, primarni limfom centralnog nervnog sistema (CNS), rak prostate, rak rektuma, kancer tranzicionih ćelija, retinoblastom, rabdomiosarkom, rak pljuvačne žlezde, rak kože, rak želuca (želuca), rak malih ćelija pluća, karcinom tankog creva, sarkom mekog tkiva, T-ćelijski limfom, kancer testisa, rak grla, timom i karcinom timusa, karcinom štitne žlezde, kancer prelaznih ćelija bubrežne karlice i uretera, trofoblastični tumor, neobični karcinomi u detinjstvu, rak uretre, sarkom materice, rak vagine, rak vulve, rak izazvan virusom, leukemija, hematološki malignitet, kancer solidnog tumora, rak prostate, rak prostate otporan na kastraciju, rak dojke, Juingov sarkom, sarkom kostiju, primarni koštani sarkom, leukemija prolimfocita T-ćelija , gliom, glioblastom, hepatocelularni karcinom, rak jetre ili dijabetes. U nekim otelotvorenjima ispitanici koji se leče jedinjenjima iz obelodanjivanja obuhvataju ispitanike za koje je dijagnostifikovan nekancerogeni hiperproliferativni poremećaj kao što je benigna hiperplazija kože (npr., psorijaza), restenoza ili prostate (npr., benigna hipertrofija prostate (BPH)).

[0145] Obelodanjivanje dalje pruža postupke modulacije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplje) dovođenjem u kontakt menina sa efikasnom količinom jedinjenja ili soli Formule (II-A). Modulacija može biti inhibiranje ili aktiviranje proteinske aktivnosti menina, jednog ili više njegovih vezujućih partnera, i/ili jednog ili više nizvodnih ciljeva menina ili jednog ili više njegovih vezujućih partnera. U nekim otelotvorenjima, obelodanjivanje obezbeđuje postupke inhibicije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr. MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplje) dovođenjem u kontakt menina sa efikasnom količinom jedinjenja ili soli Formule (II-A). U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje postupke inhibicije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikate) kontaktom sa ćelijom, tkivom ili organom koji eksprimira menin, MLL1, MLL2, MLL fuzioni protein i/ili MLL delimična tandemska duplikacija. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje postupke inhibicije aktivnosti proteina kod ispitanika, uključujući ali ne ograničavajući se na glodare i sisare (npr., čoveka) davanjem ispitaniku efikasne količine jedinjenja ili soli Formule (II-A). U nekim otelotvorenjima, procentualna modulacija prelazi 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ili 90%. U nekim otelotvorenjima, procenat inhibicije prelazi 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% ili 90%.

[0146] U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje postupke inhibicije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikate) u ćeliji tako što se ćelija kontaktira sa količinom jedinjenje prema pronalasku dovoljno da inhibira interakciju menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikacije) u ćeliji. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje postupke inhibicije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikate) u tkivu dovođenjem u kontakt tkiva sa količinom jedinjenje ili so Formule (II-A) dovoljno da inhibira interakciju menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikacije) u tkivu. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje postupke inhibicije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikate) u organizmu dovođenjem u kontakt organizma sa količinom jedinjenje ili so Formule (II-A) dovoljno da inhibira interakciju menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikacije) u organizmu. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje postupke inhibicije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikate) u životinji tako što se životinja dovede u kontakt sa količinom jedinjenje prema pronalasku dovoljno da inhibira interakciju menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikacije) u životinji. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje postupke inhibicije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikate) u sisaru tako što se sisar kontaktira sa količinom jedinjenje prema pronalasku dovoljno da inhibira interakciju menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikacije) u sisaru. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje postupke inhibicije interakcije menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikate) u čoveku tako što se čovek dovede u kontakt sa količinom jedinjenje prema pronalasku dovoljno da inhibira interakciju menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina ili MLL delimične tandemske duplikacije) u čoveku. Predmetno obelodanjivanje daje postupke lečenja bolesti posredovane interakcijom menina i jednog ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionog proteina, ili MLL delimične tandemske duplikacije) kod ispitanika kome je potreban takav tretman.

[0147] Obelodanjivanje takođe pruža postupke lečenja poremećaja posredovanog interakcijom menina sa jednim ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzionim proteinom ili MLL delimičnom tandemskom duplikacijom) davanjem ispitaniku kome je to potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenje ili so Formule (II-A).

[0148] Obelodanjivanje dalje pruža postupke lečenja poremećaja posredovanog hromozomskim preuređenjem na hromozomu 11q23 kod ispitanik kome je to potrebno davanjem ispitaniku terapeutski efikasne količine jedinjenja ili soli Formule (II-A).

[0149] Obelodanjivanje takođe daje postupke za lečenje bolesti ili stanja davanjem efikasne količine jedinjenja ili soli Formule (II-A) ispitaniku koji pati od bolesti ili stanja.

[0150] Obelodanjivanje dalje pruža postupke za lečenje bolesti ili stanja davanjem jedinjenja ili soli Formule (II-A) ispitaniku koji pati od bolesti ili stanja, pri čemu se jedinjenje vezuje za menin i inhibira interakciju menina sa jednim ili više proteina (npr., MLL1, MLL2, MLL fuzioni protein ili MLL delimična tandemska duplikacija).

[0151] Obelodanjivanje dalje pruža postupke stabilizacije menina, koje obuhvataju dovođenje u kontakt menina sa jedinjenjem ili solju Formule (II-A). U nekim obelodanjivanje, korak dovođenja u kontakt obuhvata dovođenje u kontakt menina sa količinom jedinjenja dovoljnom da stabilizuje menin. U određenim otelotvorenjima, korak kontaktiranja se odvija in vivo. U određenim otelotvorenjima, korak kontaktiranja se odvija in vitro. U određenim otelotvorenjima, korak kontaktiranja se odvija u ćeliji.

[0152] Predmetno obelodanjivanje takođe pruža postupke za kombinovane terapije u kojima se sredstvo za koje je poznato da modulira druge puteve, ili druge komponente istog puta, ili čak preklapajući skupovi ciljnih enzima, koriste u kombinaciji sa jedinjenjem ili solju Formule (II-A). Takva terapija uključuje, ali nije ograničena na, kombinaciju jednog ili više jedinjenja prema pronalasku sa hemoterapeutskim agensima, terapeutskim antitelima i tretmanom zračenjem, da bi se obezbedio sinergistički ili aditivni terapeutski efekat.

[0153] Gde se želi, jedinjenje ili farmaceutski sastav predmetnog obelodanjivanja može se koristiti u kombinaciji sa Notch inhibitorima i/ili inhibitorima c-Myb. Gde se želi, jedinjenje ili farmaceutski sastav predmetnog obelodanjivanja može se koristiti u kombinaciji sa MLL-WDR5 inhibitorima i/ili Dot11 inhibitorima.

[0154] Mnogi hemoterapeutici su trenutno poznati u tehnici i mogu se koristiti u kombinaciji sa jedinjenjem iz predmetnog obelodanjivanja. U nekim obelodanjivanje, hemoterapeutik je izabran iz grupe koju čine mitotički inhibitori, agensi za alkilovanje, antimetaboliti, interkalacioni antibiotici, inhibitori faktora rasta, inhibitori ćelijskog ciklusa, enzimi, inhibitori topoizomeraze, modifikatori biološkog odgovora, antihormoni, inhibitori angiogeneze, i anti-androgeni.

[0155] Neograničavajući primeri su hemoterapeutska sredstva, citotoksična sredstva i nepeptidni mali molekuli kao što su Gleevec® (Imatinib Mesylate), Velcade® (bortezomib), Casodex (bikalutamid), Iressa® (gefitinib) i Adriamycin, kao i domaćin hemoterapeutskih sredstava. Neograničavajući primeri hemoterapeutskih sredstava uključuju sredstva za alkilovanje kao što su tiotepa i ciklosfosfamid (CYTOXANTM); alkil sulfonati kao što su busulfan, improsulfan i piposulfan; aziridini kao što su benzodopa, karbokuon, meturedopa i uredopa; etilenimini i metilamelamini, uključujući altretamin, trietilenmelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosfaoramid i trimetilolomelamin; azotne iperiti kao što su hlorambucil, hlomafazin, holofosfamid, estramustin, ifosfamid, mekloretamin, mehlorethamin oksid hidrohlorid, melfalan, novembicin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, uracil senf; nitrosureje kao što su karmustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin, ranimustin; antibiotici kao što su aklacinomizini, aktinomicin, autramicin, azaserin, bleomicini, kaktinomicin, kaliheamicin, karabicin, karminomicin, karzinofilin, CasodexTM, hromomicini, daktinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, doksorubicin, epirubicin, esorubicin, idarubicin, marcelomicin, mitomicini, mikofenolna kiselina, nogalamicin, olivomicini, peplomicin, potfiromicin, puromicin, kvelamicin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimeks, zinostatin, zorubicin; anti-metaboliti poput metotreksata i 5-fluorouracila (5-FU); analozi folne kiseline kao što su denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat; purinski analozi kao što su fludarabin, 6-merkaptopurin, tiamiprin, tioguanin; analozi pirimidina kao što su ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, floksuridin, androgeni kao što su kalusteron, dromostanolon propionat, epitiostanol, mepitiostan, test; antiadrenali kao što su aminoglutetimid, mitotan, trilostan; obnavljač folne kiseline, kao što je frolinska kiselina; aceglaton; aldofosfamid glikozid; aminolevulinska kiselina; amsakrin; bestrabucil; bisantren; edatraksat; defofamin; demekolcin; diazikuon; elfomitin; eliptinijum acetat; etoglucid; galijum nitrat; hidroksiurea; lentinan; lonidamin; mitoguazon; mitoksantron; mopidamol; nitrakrin; pentostatin; fenamet; pirarubicin; podofilinska kiselina; 2-etilhidrazid; prokarbazin; PSK.RTM.; razoksan; sizofiran; spirogermanijum; tenuazonska kiselina; triazikuon; 2,2',2"-trihlorotrietilamin; uretan; vindesin; dakarbazin; manomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacitozin; arabinosid ("Ara-C"); ciklofosfamid; tiotepa; taksani, npr., paklitaksel (TAXOLTM, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) i docetaksel (TAXOTERETM, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); retinoinska kiselina; esperamicini; kapecitabin; i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivati bilo kog od iznad navedenih. Kao pogodni hemoterapeutski kondicioneri ćelija uključeni su i antihormonski agensi koji deluju da regulišu ili inhibiraju delovanje hormona na tumore kao što su antiestrogeni uključujući na primer tamoksifen, (NolvadexTM), raloksifen, 4(5)-imidazole koji inhibiraju aromatazu, 4-hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY 117018, onapriston i toremifen (Fareston); i anti-androgeni kao što su flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid i goserelin; hlorambucil; gemcitabin; 6-tioguanin; merkaptopurin; metotreksat; analozi platine kao što su cisplatin i karboplatin; vinblastin; platina; etoposid (VP-16); ifosfamid; mitomicin C; mitoksantron; vinkristin; vinorelbin; navelbin; novantron; teniposid; daunomicin; aminopterin; kseloda; ibandronat; kamptotecin-11 (CPT-11); inhibitor topoizomeraze RFS 2000; difluorometilomitin (DMFO). Gde se želi, jedinjenja ili farmaceutski sastav predmetnog obelodanjivanja mogu se koristiti u kombinaciji sa uobičajeno propisanim lekovima protiv raka kao što su Herceptin<®>, Avastin<®>, Erbitux<®>, Rituxan<®>, Taxol<®>, Arimidex<®>, Taxotere<®>, ABVD, AVICINE, Abagovomab, Acridine karboksamid, Adecatumumab, 17-N-Alilamino-17-demetoksigeldanamicin, Alpharadin, Alvocidib, 3-Aminopiridin-2-karboksaldehid tiosemikarbazon, Amonafid, Anthracenedione, Anti-CD22 imunotoksini, antineoplastici, Antitumorogeno bilje, Apazikvon, Atiprimod, Azatioprin, Belotecan, Bendamustin, BIBW 2992, Biricodar, Brostallicin, Bryostatin, Buthionine sulfoksimin, CBV (hemoterapija), Kalikulin, nespecifični antineoplastični agensi ćelijskog ciklusa, Dihlorosirćetna kiselina, Diskodermolid, Elsamitrucin, Enocitabine, Epothilone, Eribulin, Everolimus, Eksatekan, Eksisulind, Feruginol, Forodezin, Fosfestrol, ICE režim hemoterapije, IT-101, Imekson, Imiquimod, Indolocarbazole, Irofulven, Lanihidar, Larotaksel, Lenalidomid, Lucanton, Lurtotekan, Mafosfamid, Mitozolomid, Nafoksidin, Nedaplatin, Olaparib, Ortataksel, PAC-1, Paupau, Piksantron, Proteazom inhibitor, Rebekamicin, Resikuimod, Rubitecan, SN-38, Salinosporamid A, Sapacitabin, Stanford V, Svainsonin, Talaporfin, Tariquidar, Tegafur-uracil, Temodar, Tesetaksel, Triplatin tetranitrat, Tris(2-hloroetil)amin, Troksacitabin, Uramustin, Vadimezan, Vinflunin, ZD6126 ili Zosukvidar.

[0156] Predmetno obelodanjivanje se dalje odnosi na postupak za korišćenje jedinjenja ili soli Formule (II-A) ili farmaceutskih sastava date ovde, u kombinaciji sa terapijom zračenjem za inhibiciju abnormalnog rasta ćelija ili lečenje hiperproliferativnog poremećaja kod sisara. Tehnike za primenu terapije zračenjem su poznate u tehnici i ove tehnike se mogu koristiti u kombinovanoj terapiji opisanoj ovde. Primena jedinjenja prema pronalasku u ovoj kombinovanoj terapiji može se odrediti kao što je ovde opisano.

[0157] Terapija zračenjem se može primeniti putem jedne od nekoliko postupaka ili kombinacijom postupaka, uključujući bez ograničenja terapiju spoljašnjim zračenjem, internu terapiju zračenjem, zračenje implantata, stereotaktičku radiohirurgiju, sistemsku terapiju zračenjem, radioterapiju i trajnu ili privremenu intersticijalnu brahiterapiju. Termin "brahiterapija", kako se ovde koristi, odnosi se na terapiju zračenjem koju daje prostorno ograničen radioaktivni materijal ubačen u telo na ili blizu tumora ili drugog mesta bolesti proliferativnog tkiva. Termin je namenjen bez ograničenja da uključuje izlaganje radioaktivnim izotopima (npr., At-211, I-131, I-125, Y-90, Re-186, Re-188, Sm-153, Bi-212, P-32 i radioaktivni izotopi Lu). Pogodni izvori zračenja za upotrebu kao kondicioneri ćelija prema predmetnom pronalasku uključuju i čvrste i tečne. Kao neograničavajući primer, izvor zračenja može biti radionukloid, kao što su I-125, I-131, Yb-169, Ir-192 kao čvrsti izvor, I-125 kao čvrsti izvor, ili drugi radionuklidi koji emituju fotone, beta čestice, gama zračenje ili druge terapeutske zrake. Radioaktivni materijal takođe može biti tečnost napravljena od bilo kog rastvora radionuklida(a), na primer, rastvora I-125 ili I-131, ili se radioaktivna tečnost može proizvesti korišćenjem suspenzije odgovarajuće tečnosti koja sadrži male čestice čvrstih radionuklida, kao što su Au-198, Y-90. Štaviše, radionuklid(i) mogu biti oličeni u gelu ili radioaktivnim mikrosferama.

[0158] Jedinjenja ili farmaceutski sastavi prema pronalasku mogu se koristiti u kombinaciji sa količinom jedne ili više supstanci odabranih od sredstava protiv angiogeneze, inhibitora transdukcije signala, antiproliferativnih sredstava, inhibitora glikolize ili inhibitora autofagije.

[0159] Sredstva protiv angiogeneze, kao što su inhibitori MMP-2 (matriks-metaloproteinaze 2), inhibitori MMP-9 (matriks-metaloproteinaze 9) i inhibitori COX-11 (ciklooksigenaze 11), mogu se koristiti zajedno sa jedinjenjem iz obelodanjivanja i ovde opisanim farmaceutskim sastavima. Sredstva protiv angiogeneze uključuju, na primer, rapamicin, temsirolimus (CCI-779), everolimus (RAD001), sorafenib, sunitinib i bevacizumab. Primeri korisnih inhibitora COX-II uključuju CELEBREXTM (alekoksib), valdekoksib i rofekoksib. Primeri korisnih inhibitora matriks metaloproteinaze su opisani u WO 96/33172 (objavljen 24. oktobra,1996), WO 96/27583 (objavljen 7. marta,1996), Evropska patentna prijava br..97304971,1 (objavljen 8. jula,1997), Evropska patentna prijava br..99308617,2 (objavljen 29. oktobra, 1999), WO 98/07697 (objavljen 26. februara,1998), WO 98/03516 (objavljen 29. januara,1998), WO 98/34918 (objavljen 13. avgusta,1998), WO 98/34915 (objavljen 13. avgusta,1998), WO 98/33768 (objavljen 6. avgusta,1998), WO 98/30566 (objavljen 16. jula, 1998), Evropska patentna objava 606,046 (objavljen 13. jula,1994), Evropska patentna objava 931, 788 (objavljen 28. jula,1999), WO 90/05719 (objavljen 31. maja,1990), WO 99/52910 (objavljen 21. oktobra,1999), WO 99/52889 (objavljen 21. maja, 1999), WO 99/29667 (objavljen 17. juna,1999), PCT međunarodna patentna prijava br. PCT/IB98/01113 (objavljen 21. juila,1998), Evropska patentna prijava br.99302232,1 (objavljen 25. marta,1999), Patentna prijava Velike Britanije br.9912961,1 (objavljen 3. juna, 1999), Privremena patentna prijava SAD br.60/148,464 (objavljen 12. avgusta,1999), patent SAD 5,863, 949 (objavljen 26. januara,1999), Patent SAD 5,861, 510 (objavljen 19. januara,1999), i Evropska patentna objava 780,386 (objavljen 25. juna, 1997). Poželjni inhibitori MMP-2 i MMP-9 su oni koji imaju malu ili nikakvu aktivnost inhibiranja MMP-1. Poželjnije su one koje selektivno inhibiraju MMP-2 i/ili AMP-9 u odnosu na druge matriks-metaloproteinaze (npr., MAP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7 , MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12 i MMP-13). Neki specifični primeri MMP inhibitora korisnih u pronalasku su AG-3340, RO 32-3555 i RS 13-0830.

[0160] Inhibitori autofagije uključuju, ali nisu ograničeni na hlorokin, 3-metiladenin, hidroksihlorokin (Plaquenil™), bafilomicin A1, 5-amino-4-imidazol karboksamid ribozid (AICAR), okadaičnu kiselinu, autofagiju supresivne algalne toksine koji inhibiraju protein fos. tip 2A ili tip 1, analozi cAMP-a i lekovi koji podižu nivoe cAMP-a kao što su adenozin, LY204002, N6-merkaptopurin ribozid i vinblastin. Pored toga, antisens ili siRNK koja inhibira ekspresiju proteina uključujući, ali ne ograničavajući se na ATG5 (koji su uključeni u autofagiju), takođe mogu da se koriste.

[0161] U nekim otelotvorenjima, jedinjenja koja su ovde opisana su formulisana ili ordinirana zajedno sa tečnim ili čvrstim barijerama tkiva takođe poznatim kao lubrikanti. Primeri tkivnih barijera uključuju, ali nisu ograničeni na, polisaharide, poliglikane, seprafilm, interceed i hijaluronsku kiselinu.

[0162] U nekim otelotvorenjima, lekovi koji se primenjuju zajedno sa jedinjenjima koja su ovde opisana uključuju bilo koje pogodne lekove koji se korisno isporučuju inhalacijom, na primer, analgetike, npr., kodein, dihidromorfin, ergotamin, fentanil ili morfin; preparati protiv angine, na primer, diltiazem; antialergijski lekovi, na primer, kromoglikat, ketotifen ili nedokromil; antiinfektivi, npr., cefalosporini, penicilini, streptomicin, sulfonamidi, tetraciklini ili pentamidin; antihistaminici, npr. metapirilen; antiinflamatorna sredstva, npr., beklometazon, flunisolid, budezonid, tipredan, triamcinolon acetonid ili flutikazon; sredstva protiv kašlja, npr. noskapin; bronhodilatatori, npr., efedrin, adrenalin, fenoterol, formoterol, izoprenalin, metaproterenol, fenilefrin, fenilpropanolamin, pirbuterol, reproterol, rimiterol, salbutamol, salmeterol, terbutalin, tuciobuharolin-ili-)-dihloro-α-[[[6-[2-(2-piridinil)etoksi]heksil]-amino]metil]benzenmetanol; diuretici, npr., amilorid; antiholinergici, npr., ipratropijum, atropin ili oksitropijum; hormoni, npr., kortizon, hidrokortizon ili prednizolon; ksantini, npr., aminofilin, holin teofilinat, lizin teofilinat ili teofilin; i terapeutski proteini i peptidi, npr., insulin ili glukagon. Stručnjaku će biti jasno da se, tamo gde je prikladno, lekovi koriste u obliku soli (npr., kao soli alkalnih metala ili amina ili kao kisele adicione soli) ili kao estri (npr., niži alkil estri) ili kao solvati (npr., hidrati) za optimizaciju aktivnosti i/ili stabilnosti leka.

[0163] Drugi primeri terapeutskih sredstava korisnih za kombinovanu terapiju uključuju, ali nisu ograničeni na, sredstva kao što je iznad opisano, terapiju zračenjem, hormonske antagoniste, hormone i njihove faktore oslobađanja, lekove za štitne žlezde i antitireoidne žlezde, estrogene i progestine, androgene, adrenokortikotropni hormon; adrenokortikalni steroidi i njihovi sintetički analozi; inhibitori sinteze i delovanja adrenokortikalnih hormona, insulina, oralnih hipoglikemika i farmakologije endokrinog pankreasa, agenasa koji utiču na kalcifikacija i koštani promet: kalcijum, fosfat, paratiroidni hormon, vitamin D, kalcitonin, vitamini kao što su vitamini rastvorljivi u vodi, kompleks vitamina B, askorbinska kiselina, vitamini rastvorljivi u masti, vitamini A, K i E, faktori rasta, citokini, hemokini, agonisti muskarinskih receptora i antagonisti; antiholinesterazna sredstva; sredstva koja deluju na neuromuskularnom spoju i/ili autonomnim ganglijama; kateholamini, simpatomimetici i agonisti ili antagonisti adrenergičkih receptora; i agonisti i antagonisti receptora 5-hidroksitriptamina (5-HT, serotonin).

[0164] Terapeutska sredstva takođe mogu uključivati sredstva za bol i upalu kao što su histamin i antagonisti histamina, antagonisti bradikinina, 5-hidroksitriptamin (serotonin), lipidne supstance koje nastaju biotransformacijom produkata selektivne hidrolize membranskih membrana, prostagisanolipidini i fosfolipidini, tromboksani, leukotrieni, aspirin, nesteroidna antiinflamatorna sredstva, analgetici-antipiretici, sredstva koja inhibiraju sintezu prostaglandina i tromboksana, selektivni inhibitori inducibilne ciklooksigenaze, selektivni inhibitori inducibilne ciklooksigenaze, selektivni inhibitori inducibilne ciklooksigenaze, inhibitori inducibilnog hormona pamatooksigenaze-2, inhibitori inducibilnog pamatooksigenaze-ciklo-2 , gastrin, citokini koji posreduju u interakcijama uključenim u humoralni i ćelijski imuni odgovor, autakoidi izvedeni iz lipida, eikozanoidi, β-adrenergički agonisti, ipratropijum, glukokortikoidi, metilksantini, blokatori natrijumovih kanala, inhibitori opioidnih receptora i stabilizatori letrijskih kanala.

[0165] Dodatna terapeutska sredstva koji se ovde razmatraju uključuju diuretike, vazopresin, agense koji utiču na renalnu konzervaciju vode, renin, angiotenzin, agense korisne u lečenju ishemije miokarda, antihipertenzivne agense, inhibitore enzima konvertovanja angiotenzina, β-adrenergičke receptore antagoniste lečenje hiperholesterolemije i sredstva za lečenje dislipidemije.

[0166] Druga razmatrana terapeutska sredstva uključuju lekove koji se koriste za kontrolu kiselosti želuca, sredstva za lečenje peptičkih ulkusa, sredstva za lečenje gastroezofagealne refluksne bolesti, prokinetička sredstva, antiemetike, sredstva koja se koriste u sindromu iritabilnog creva, sredstva koja se koriste za dijareju, sredstva koja se koriste za konstipacija, sredstva koja se koriste za inflamatornu bolest creva, sredstva koja se koriste za bolesti žuči, sredstva koja se koriste za bolesti pankreasa. Terapeutska sredstva koji se koriste za lečenje protozojskih infekcija, lekovi koji se koriste za lečenje malarije, amebijaze, đardijaze, trihomonijaze, tripanosomijaze i/ili lajšmanijaze i/ili lekovi koji se koriste u hemoterapiji helmintijaze. Ostala terapeutska sredstva uključuju antimikrobna sredstva, sulfonamide, trimetoprimsulfametoksazol hinolone i sredstva za infekcije urinarnog trakta, peniciline, cefalosporine i druge, βlaktamske antibiotike, sredstvo koje se sastoji od aminoglikozida, inhibitore sinteze proteina leka, lekove korišćene u hemoterapiji tuberkuloze, bolest Micobacterium avium kompleksa i lepre, antifungalna sredstva, antivirusna sredstva uključujući neretrovirusna sredstva i antiretrovirusna sredstva.

[0167] Primeri terapeutskih antitela koja se mogu kombinovati sa jedinjenjem iz predmetnog obelodanjivanja uključuju, ali nisu ograničeni na antitela protiv receptora tirozin kinaze (cetuksimab, panitumumab, trastuzumab), anti CD20 antitela (rituksimab, tositumomab) i druga antitela kao što je alemtuzumab bevacizumab i gemtuzumab.

[0168] Štaviše, terapeutska sredstva koja se koriste za imunomodulaciju, kao što su imunomodulatori, imunosupresivna sredstva, tolerogeni i imunostimulansi, razmatrani su metodama ovde. Pored toga, terapeutska sredstva koji deluju na krv i krvotvorne organe, hematopoetska sredstva, faktori rasta, minerali i vitamini, antikoagulansi, trombolitici i antitrombocitni lekovi.

[0169] Za lečenje karcinoma bubrega, može se kombinovati jedinjenje prema predmetnom pronalasku sa sorafenibom i/ili avastinom. Za lečenje poremećaja endometrijuma, može se kombinovati jedinjenje prema predmetnom pronalasku sa doksorubincinom, taksoterom (taksolom) i/ili cisplatinom (karboplatinom). Za lečenje raka jajnika, može se kombinovati jedinjenje prema predmetnom pronalasku sa cisplatinom (karboplatinom), taksoterom, doksorubincinom, topotekanom i/ili tamoksifenom. Za lečenje raka dojke, može se kombinovati jedinjenje iz predmetnog obelodanjivanja sa taksoterom (taksolom), gemcitabinom (kapecitabin), tamoksifenom, letrozolom, tarcevom, lapatinibom, PD0325901, avastinom, herceptinom, OSI-906 i/ili OSI-930. Za lečenje raka pluća, može se kombinovati jedinjenje prema predmetnom pronalasku sa taksoterom (taksolom), gemcitabinom, cisplatinom, pemetreksedom, Tarcevom, PD0325901 i/ili avastinom.

[0170] Dalja terapeutska sredstva koja se mogu kombinovati sa jedinjenjem iz predmetnog obelodanjivanja nalaze se u Goodman and Gilman's "The Pharmacological Basis of Therapeutics" Tenth Edition edited by Hardman, Limbird and Gilman ili Physician's Desk Reference.

[0171] Ovde opisana jedinjenja mogu se koristiti u kombinaciji sa sredstvima koji su ovde obelodanjena ili drugim pogodnim sredstvima, u zavisnosti od stanja koje se leči. Prema tome, u nekim otelotvorenjima, jedno ili više jedinjenja iz predmetnog obelodanjivanja će se primenjivati zajedno sa drugim sredstvima kao što je iznad opisano. Kada se koriste u kombinovanoj terapiji, ovde opisana jedinjenja se primenjuju sa drugim sredstvom istovremeno ili odvojeno. Ova primena u kombinaciji može uključiti istovremenu primenu dva sredstva u istom doznom obliku, istovremenu primenu u odvojenim oblicima doze i odvojenu primenu. To jest, ovde opisano jedinjenje i bilo koje od iznad opisanih sredstava mogu se formulisati zajedno u istom doznom obliku i davati istovremeno. Alternativno, jedinjenje prema pronalasku i bilo koje od sredstava opisanih iznad mogu se davati istovremeno, pri čemu su oba agensa prisutna u odvojenim formulacijama. U drugoj alternativi, jedinjenje prema predmetnom pronalasku može se davati odmah praćeno bilo kojim od iznad opisanih sredstava, ili obrnuto. U nekim otelotvorenjima protokola odvojene patentne prijave, jedinjenje prema pronalasku i bilo koje od sredstava opisanih iznad se daju u razmaku od nekoliko minuta, ili u razmaku od nekoliko sati, ili u razmaku od nekoliko dana.

[0172] Sledeći primeri su dati u svrhu ilustrovanja različitih otelotvorenja obelodanjivanja i nisu namenjeni da ograniče ovo obelodanjivanje ni na koji način. Ovi primeri, zajedno sa postupcima i sastavima opisanim ovde, trenutno su reprezentativni za poželjna otelotvorenja, predstavljaju primere i nisu zamišljeni kao ograničenja obima obelodanjivanja.

PRIMERI

Referentni primer 1: Sinteza Referentnog Jedinjenja 59 u Tabeli 1.

[0173]

[0174] Korak A: Priprema Referentnog Jedinjenja 59-2: U rastvor etil-2-(dietoksilfosforil) acetata (1,91 g, 8,5 mmol) u THF (30 mL) dodat je NaH (421 mg, 10,5 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 0,5 sata pre nego što je dodat 59-1 (2 g, 8 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 5h Dodata je ledena voda (50 mL) i proizvod je ekstrahovan etil acetatom (50 mL × 2).

Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (50 mL), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom (eluiran 20% EtOAc u pet. etru) da bi se dobilo 2,15 g 59-2 kao bele čvrste supstance (prinos: 85%).

[0175] Korak B: Priprema Referentnog Jedinjenja 59-3: U rastvor 59-2 (905 mg, 2,85 mmol) u MeOH (20 mL) je dodat (Boc)2O (1,24 g, 5,71 mmol) i Pd/C katalizator. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 8 sati pod H2. TLC je pokazao da je reakcija završena. Reakcija je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiran 20% EtOAc u pet. etru) da bi se dobilo 59-3 kao čvrsta supstanca (740 mg, prinos: 91%).

[0176] Korak C: Priprema Referentnog Jedinjenja 59-4: U rastvor 59-3 (670 mg, 2,35 mmol) u THF (20 mL) dodat je LiAlH4(179 mg, 4,7 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 2 h, zatim je dodato 0,2 mL H2O, 0,2 mL 15% NaOH, i 0,5 mL H2O. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1h Smeša je filtrirana i organski rastvor je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiran 40% EtOAc u pet. etru) da bi se dobilo 59-4 kao čvrsta supstanca (525 mg, prinos: 92%).

[0177] Korak D: Priprema Referentnog Jedinjenja 59-5: Rastvoru 59-4 (486 mg, 2 mmol) i Et3N (404 mg, 4 mmol) u CH2Cl2(20 mL) dodat je MsCl (344 mg, 3 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. TLC je pokazao da je reakcija završena. Kombinovani organski sloj je ispran sa H2O i slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo 500 mg 59-5 kao bele čvrste supstance (prinos: 78%).

[0178] Korak E: Priprema Referentnog Jedinjenja 59-6: Smeša 59-5 (500 mg, 1,56 mmol), Cs2CO3(846 mg, 2,33 mmol), i 5-formil-4-metil-1H-indol-2-karbonitril (143 mg, 0,78 mmol) je mešana u DMF (20 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 85 °C tokom 3 h. EtOAc (200 mL) je dodat u rezultujuću smešu.

Kombinovani organski sloj je ispran sa H2O i slanim rastvorom, osušen preko natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš kolonom (eluiran 30% EtOAc u pet. etru) da bi se dobilo 278 mg 59-6 kao bele čvrste supstance (prinos: 43%).

[0179] Korak F: Priprema Referentnog Jedinjenja 59-7: Smeša 59-6 (278 mg, 0,68 mmol), N-(piperidin-4-il)-6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina (280 mg, 0,88 mmol) i Et3N (412 mg, 4,08 mmol) u CH2Cl2(20 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 1 sat. NaBH(OAc)3(865 mg, 4,08 mmol) je dodat u reakciju u ledenom kupatilu i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiran 2,5% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobilo 59-7 kao bela čvrsta supstanca (400 mg, prinos: 82%).

[0180] Korak G: Priprema Referentnog Jedinjenja 59-8: Rastvor 59-7 (200 mg, 0,28 mmol) u TFA (15 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 2 sata. Rastvarač je uklonjen i dodat je rastvor NH3(7N) u MeOH (10 mL). Dobijena smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiran 10% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobilo 59-8 kao ulje (164 mg, prinos: 96%).

[0181] Korak H: Priprema Referentnog Jedinjenja 59: Rastvoru 59-8 (127 mg, 0,21 mmol) i Et3N (43mg, 0,42mmol) u CH2Cl2(20 mL) dodat je MsCl (29 mg, 0,25 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 h. TLC je pokazao da je reakcija završena. Kombinovani organski sloj je ispran sa H2O i slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu da bi se dobilo 45 mg 59 kao bele čvrste supstance (prinos: 31%).<1>H NMR (400 MHz, DMSO) δ: 8,33(s, 1H), 7,87(s, 1H),7,67(s, 1H) 7,45-7,56 (m, 3H), 4,35-4,32 (m, 2H), 4,08-4,02 (m, 4H), 3,57-3,54 (m, 3H), 3,17(m,1H, 2,88-2,83(m, 6H), 2,54 (s, 3H), 2,20-1,47 (m, 12H), 1,25 (d, 3H). ESI-MS m/z: 688,84 (M+H).

Referentni primer 2: Sinteza Referentnog Jedinjenja 48 u Tabeli 1.

[0182]

[0183] Korak A: Priprema Referentnog Jedinjenja 48-2: Smeša 48-1 (300 mg, 1,40 mmol), 2-bromoetanola (347 mg, 2,80 mmol) i K2CO3(772 mg, 5,60 mmol) u CH3CN (30 mL) je mešana na 90 °C pod N2preko noći. TLC je pokazao da je reakcija završena. Čvrsta supstanca je uklonjena filtracijom i rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (eluiran 2,5% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobilo 48-2 kao žuto ulje (296 mg, prinos: 82%).

1

[0184] Korak B: Priprema Referentnog Jedinjenja 48-3: Smeši 48-2 (296 mg, 1,15 mmol) i Et3N (232 mg, 2,30 mmol) u dihlorometanu (20 mL) je dodat MsCl (197 mg, 1,73 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 1h TLC je pokazao da je reakcija završena. Zasićeni vodeni NaHCO3je je dodat u reakcionu smešu. Organski sloj je odvojen, ispran slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiran petrolej) da bi se dobilo 48-3 kao ulje (270 mg, prinos: 70%).

[0185] Korak C: Priprema Referentnog Jedinjenja 48-4: Mešavina 48-3 (270 mg, 0,8 mmol), 5-formil-4-metil-1H-indol-2-karbonitrila (123 mg, 0,67 mmol) i Cs2CO3(524 mg, 1,6 mmol) u DMF (10 mL) je mešana na 80 °C pod N2preko noći. Čvrsta materija je uklonjena filtracijom pre nego što je reakciona smeša razblažena vodom i etil acetatom. Organski sloj je odvojen, ispran slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog Na2SO4, koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiran 20% etil acetata u petroleju) da bi se dobilo 48-4 kao ulje (169 mg, prinos: 50%). ESI-MS m/z: 424,54 (M+H).

[0186] Korak D: Priprema Referentnog Jedinjenja 48-5: Smeša 48-4 (169 mg, 0,4 mmol), N-(piperidin-4-il)-6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina (190 mg, 0,6 mmol) i Et3N (242 mg, 2,4 mmol) u CH2Cl2(20 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 1 sat. NaBH(OAc)3(508 mg, 2,4 mmol) je dodat u reakciju u ledenom kupatilu i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Rastvarač je uklonjen vakuumom ulje koje ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiran 2,5% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobilo 48-5 kao ulje (174 mg, prinos: 60%). ESI-MS m/z: 724,88 (M+H).

[0187] Korak E: Priprema Referentnog Jedinjenja 48-6: Rastvoru 48-5 (174 mg, 0,24 mmol) u CH2Cl2(15 mL) dodat je TFA (5 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata pre nego što je rastvarač uklonjen. Dodat je rastvor NH3/MeOH (7N, 10 mL) i dobijena smeša je koncentrovana. Ostatak i prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (eluiran 10% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobilo 48-6 kao ulje (120 mg, prinos: 80%). ESI-MS m/z: 624,30(M+H).

[0188] Korak F: Priprema Referentnog Jedinjenja 48: Smeši 48-6 (120 mg, 0,192 mmol) i Et3N (39 mg, 0,384mmol) u CH2Cl2(10 mL) polako je dodat metansulfonil hlorid (33 mg, 0,288 mmol) u CH2Cl2(5mL) na -20 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 2 sati. TLC je pokazao da je reakcija završena. Zasićeni vodeni NaHCO3je je dodat u reakcionu smešu. Organski sloj je odvojen, ispran slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog Na2SO4, koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (eluiran 10% MeOH u dihlorometanu) da bi se dobio konačni proizvod 48 u obliku čvrste supstance (54 mg, prinos: 40%).<1>H NMR(400 MHz, CDCl3) δ: 8,48(s, 1H), 7,38(d, 1H), 7,21(s,1H), 7,15(d,1H), 7,08(s,1H), 5,10(d,1H), 4,34(m,2H), 4,24(m,1H),3,87(m, 2H), 3,65(m, 4H), 2,93(m, 5H),2,71(m, 2H), 2,63(m, 2H), 2,57(s,3H),2,29(m, 2H), 2,21(m, 2H) ,2,10(d, 2H), 1,61(m, 2H), 1,31(d, 6H); ESI-MS m/z: 702,27 (M+H).

Referentni primer 3: Sinteza Referentnog Jedinjenja 2 u Tabeli 1.

[0189]

2

[0190] Korak A: Priprema Referentnog Jedinjenja 2-2: Suspenziji K2CO3(3,6 g, 26,5 mmol) i terc-butil piperazin-1-karboksilata (1,0 g, 5,3 mmol) u CH3CN (15 mL) dodat je metil 2-bromopropanoat (2,2 g, 13,4 mmol). Reakcija je mešana na 80°C u trajanju od 10 sati. TLC je pokazao da je reakcija završena. Reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature, zatim je čvrsta supstanca filtrirana i rastvarač je uklonjen pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (CH2Cl2/MeOH = 50:1) da bi se dobio terc-butil 4-(1-metoksi-1-oksopropan-2-il)piperazin-1-karboksilat (2-2) kao smeđe ulje (1,4 g, prinos: 99%).

[0191] Korak B: Priprema Referentnog Jedinjenja 2-3: U rastvor terc-butil 4-(1-metoksi-1-oksopropan-2-il)piperazin-1-karboksilata (540 mg, 2 mmol) u THF (10 mL) dodat je LiAlH4(1,0 mL, 2,5 mol u THF) na 0 °C kap po kap. Reakciona smeša je mešana na istoj temperaturi 2 sata. TLC je pokazao da je reakcija završena. Reakcija je ugašena sa EtOAc. Reakcija je podeljena između EtOAc i H2O, a organski sloj je ispran slanim rastvorom i osušen preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (CH2Cl2/MeOH = 20:1) da bi se dobio terc-butil 4-(1-hidroksipropan-2-il)piperazin-1-karboksilat (2-3) kao smeđe ulje (300 mg, prinos: 65%).

[0192] Korak C: Priprema Referentnog Jedinjenja 2-5: Rastvoru terc-butil 4-(1-hidroksipropan-2-il)piperazin-1-karboksilata (200 mg, 0,82 mmol) i Et3N (171 mg, 1,64 mmol) u CH2Cl2(10 mL) dodat je MsCl (112 mg, 0,98 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 minuta. Reakcija je ugašena sa NaHCO3, isprana slanim rastvorom i osušena preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom da bi se dobio terc-butil 4-(1-((metilsulfonil)oksi)propan-2-il)piperazin-1-karboksilat (2-4), korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0193] Smeši Cs2CO3(682 mg, 2,1 mmol) i 5-formil-4-metil-1H-indol-2-karbonitrila (77 mg, 0,42 mmol) u DMF dodat je terc-butil 4-(1-((metilsulfonil)oksi)propan-2-il)piperazin-1-karboksilat u DMF. Reakcija je mešana na 100 °C u trajanju od 10 sati. Reakciona smeša je zatim podeljena između EtOAc i H2O, a organski sloj je ispran slanim rastvorom i osušen preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (pet. Etar : EtOAc = 5:1~3:1) da bi se dobio tercbutil 4-(1-(2-cijano-5-formil-4-metil-1H-indol-1-il)propan)piperazin-1-karboksilat (2-5) kao žuta čvrsta supstanca (90 mg, prinos: 53%).

[0194] Korak D: Priprema Referentnog Jedinjenja 2-6: Smeša terc-butil 4-(1-(2-cijano-5-formil-4-metil-1H-indol-1-il)propan-2-il)piperazin-1-karboksilata (90 mg, 0,22 mmol), 6-(2,2,2-trifluoroetil)-N-(piperidin-4-il)tieno-[2,3-d]pirimidin-4-amina (100 mg, 0,26 mmol) i Et3N (130 mg, 1,32 mmol) u CH2Cl2(10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat pre nego što je dodat NaBH(OAc)3(280 mg, 1,32 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i zatim podeljena između CH2Cl2i NaHCO3. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom i osušen preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gel koloni (CH2Cl2:MeOH = 50:1∼20:1) da bi se dobio terc-butil 4-(1-(2-cijano-4-metil-5-((4-((6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d)pirimidin-4- il)amino)piperidin-1-il)metil)-1H-indol-1-il)propan-2-il)piperazin-1-karboksilat (2-6) kao žuta čvrsta supstanca (130 mg, prinos: 81%).

[0195] Korak E: Priprema Referentnog Jedinjenja 2-7: Rastvoru terc-butil 4-(2-(2-cijano-4-metil-5-((4-((6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidin-1-il)metil)-1H-indol-1-il)-1-hidroksietil)piperidin-1-karboksilata (130 mg, 0,21 mmol) u CH2Cl2(3 mL) dodat je TFA (2 mL). Reakcija je mešana 4 sata pre nego što je rastvarač uklonjen pod vakuumom. Ostatak je razblažen sa CH2Cl2i ispran sa NaHCO3. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom i osušen preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak (2-7) je upotrebljen bez daljeg prečišćavanja kao žuta pena (100 mg, prinos: 98%).

[0196] Korak F: Priprema Referentnog Jedinjenja 2: U rastvor 4-metil-1-(2-(piperazin-1-il)propil)-5-((4-((6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d])pirimidin-4-il)amino)piperidin-1-il)metil)-1H-indol-2-karbonitrila (60 mg, 0,1 mmol) i Et3N (36 mg, 0,4 mmol) u CH2Cl2(10 mL) je dodat MsCl (21 mg, 0,2 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 30 minuta. Reakcija je ugašena sa NaHCO3, isprana slanim rastvorom i osušena preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen, a ostatak je prečišćen prep-TLC (CH2Cl2:MeOH = 15:1) da bi se dobio 4-metil-1-(2-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)propil)-5-((4-((6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidin-1-il)metil)-1H-indol-2-karbonitril (jedinjenje 2) kao bela čvrsta supstanca (10 mg, prinos: 20%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) 8,48(s, 1H), 7,36(d, 1H), 7,20(s, 1H), 7,00-7,15(m, 2H), 5,16 (d, 1H), 4,20-4,40(m, 2H), 4,00-4,10(m, 1H), 3,60-3,70 (m,4H), 3,10-3,30(m, 5H), 2,80-2,90 (m, 4H), 2,77 (s, 3H), 2,57 (s, 3H), 1,56-2,53(m, 8H), 1,08 (d,3H). ESI-MS m/z: 689,25 (M+H).

Referentni primer 4: Sinteza Referentnog Jedinjenja 61 u Tabeli 1.

[0198] Korak A: Priprema Referentnog Jedinjenja 61-2: Smeša etil 1-aminociklopropankarboksilat hidrohlorida (2,4 g, 14,5 mmol), N-benzil-2-hloro-N-(2-hloretil)etanamin hidrohlorida (4,26 g, 15,8 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (25 mL) u etanolu (32 mL) je mešano na refluksu 16 sati. Reakciona smeša je koncentrovana dok nije postala suva. Ostatak je podeljen između dihlorometana i vode. Dva sloja su odvojena, a vodeni sloj je ekstrahovan dihlorometanom. Kombinovani organski slojevi su koncentrovani. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (pet. eter/EtOAc = 1:0∼10:1 ) da bi se dobio etil 1-(4-benzilpiperazin-1-il)ciklopropankarboksilat (61-2, 1,8 g, prinos: 43%) kao žuto ulje.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 7,37-7,27 (m, 5H), 4,19-4,13 (m, 2H), 3,54 (s, 2H), 3,00(brs, 2H), 2,39 (brs, 2H), 1,31-1,26 (m,

5H), 7,52 (m 1H), 0,93-0,91 (m, 2H).

[0199] Korak B: Priprema Referentnog Jedinjenja 61-3: U smešu etil 1-(4-benzilpiperazin-1-il)ciklopropankarboksilata (880 mg, 3 mmol) u THF (12 mL) je polako dodat LiAlH4(290 mg, 6 mmol) na 0 °C. Dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h. Dodata je voda (0,5 mL), a zatim etil acetat (20 mL). Čvrsta supstanca je filtrirana i rastvarač je uklonjen. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (pet. etar/EtOAc = 3:1) da bi se dobio (1-(4-benzilpiperazin-1-il)ciklopropil)metanol (61-3, 660 mg, prinos: 88 %) kao bela čvrsta supstanca.

[0200] Korak C: Priprema Referentnog Jedinjenja 61-4: Smeša (1-(4-benzilpiperazin-1-il)ciklopropil)metanola (600 mg, 2,4 mmol) i Pd/C (10%, 50 mg) u etanolu (10 mL) je mešana na 50 °C preko noći pod H2. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan da bi se dobio (1-(piperazin-1-il)ciklopropil)metanol (61-4) kao ulje (400 mg, prinos: 96%). Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

[0201] Korak D: Priprema Referentnog Jedinjenja 61-5: U smešu (1-(piperazin-1-il)ciklopropil)metanola (400 mg, 2,5 mmol) u dihlorometanu (10 mL) dodat je Et3N (1,1 mL, 7,5 mmol), a zatim smeša metansulfonil hlorida (925 mg, 7,5 mmol) u dihlorometanu (5 mL). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 4h Reakciona smeša je razblažena vodom i CH2Cl2. Organski sloj je osušen preko Na2SO4i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod (1-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)ciklopropil)metil metansulfonat (61-5) kao smeđe ulje (500 mg).

[0202] Korak E: Priprema Referentnog Jedinjenja 61-6: Smeša sirovog (1-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)ciklopropil)metil metansulfonata (500 mg), 5-formil-4-metil-1H-indol-2-karbonitrila (200 mg, 1,1 mmol) i K2CO3(800 mg, 5,8 mmol) u acetonitrilu je mešan na 80 °C preko noći. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan dok nije postao suv. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (pet. etar/EtOAc = 3:1) da bi se dobio 5-formil-4-metil-1-((1-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)ciklopropil)metil )-1H-indol-2-karbonitril (61-6, 330 mg) kao braon čvrsta supstanca. ESI-MS m/z: 401 (M+H).

[0203] Korak F: Priprema Referentnog Jedinjenja 61: Smeša 5-formil-4-metil-1-((1-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)ciklopropil)metil)-1H-indol-2-karbonitrila (330 mg, sirov), N- (piperidin-4-il)-6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-amin hidrohlorid (391 mg, 1,1 mmol) i Et3N (0,5 mL) u dihlorometanu (12 mL) je mešano na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je razblažena vodom i CH2Cl2. Organski sloj je odvojen, osušen preko Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela (dihlorometan/metanol = 50:1∼30:1) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen Prep-TLC sa dihlorometan/metanolom (7N NH3/MeOH) = 50:1 da bi se dobio proizvod (jedinjenje 61) kao bezbojna čvrsta supstanca (12 mg). ESI-MS m/z: 701 (M+H),1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8,46 (s, 1H),

4

7,20-7,28 (m, 3H), 4,30-4,36 (m, 3H), 3,84 (brs, 2H), 3,61-3,68 (m, 2H), 3,09-3,13 (m, 6H), 2,76 (s, 3H), 2,64-2,66 (m, 4H), 2,59 (s, 3H), 2,40-2,48 (m, 2H), 2,14-2,18 (m, 2H), 1,87-1,90 (m, 2H), 0,79-0,82 (t, 2H), 0,61-0,64 (t, 2H).

Referentni primer 5: Sinteza Referentnog Jedinjenja 35 u Tabeli 1.

[0204]

[0205] Korak A: Priprema Referentnog Jedinjenja 35-2: Smeša terc-butil piperazin-1-karboksilata (1,9 g, 10 mmol) i Et3N (3 g, 30 mmol) u CH2Cl2(40 mL) je mešana na 0 °C pre 2-hloroacetil hlorida (2,2 g, 20 mmol) je dodavan polako. Reakciona smeša je mešana na 0 °C pod N2tokom 4 h. TLC je pokazao da je reakcija završena. Reakciona smeša je podeljena između CH2Cl2i H2O, a organski sloj je ispran slanim rastvorom i osušen preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak (35-2) je upotrebljen bez daljeg prečišćavanja kao svetlo žuto ulje (2,5 g, prinos: 95%).

[0206] Korak B: Priprema Referentnog Jedinjenja 35-3: Na smešu N-(piperidin-4-il)-6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-amina (1 g, 4 mmol) i 5-formila -4-metil-lH-indol-2-karbonitril (540 mg, 3 mmol) u THF (10 mL) je dodat NaH (180 mg, 4,5 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u trajanju od 16 sati. Reakciona smeša je zatim podeljena između EtOAc i H2O, a organski sloj je ispran slanim rastvorom i osušen preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (pet. Etar : EtOAc = 10:1~1:1) da bi se dobio terc-butil 4-(2-(2-cijano-5-formil-4-metil-1H-indol-1-il)acetil)piperazin-1-karboksilat (35-3) kao svetlo žuta čvrsta supstanca (60 mg, prinos: 4%).

[0207] Korak C: Priprema Referentnog Jedinjenja 35-4: Smeša metil terc-butil 4-(2-(2-cijano-5-formil-4-metil-1H-indol-1-il)acetil)piperazin-1-karboksilata (40 mg, 0,1 mmol), N- (piperidin-4-il)-6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-amin hidrohlorid (60 mg, 0,2 mmol) i Et3N (60 mg, 0,6 mmol) u CH2Cl2(5 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 2 sata. NaBH(OAc)3(120 mg, 0,6 mmol) je zatim dodat u reakciju uz hlađenje u ledenom kupatilu. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija je podeljena između CH2Cl2i NaHCO3, a organski sloj je ispran slanim rastvorom i osušen preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (CH2Cl2:MeOH = 100:1~20:1) da bi se dobio terc-butil 4-(2-(2-cijano-4-metil-5-((4-((6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidin-1-il)metil)-1H-indol-1-il)acetil)piperazin-1-karboksilat (35-4) kao žuta čvrsta supstanca (40 mg, prinos: 55%).

[0208] Korak D: Priprema Referentnog Jedinjenja 35-5: Rastvor terc-butil 4-(2-(2-cijano-4-metil-5-((4-((6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d)pirimidin-4)-il)amino)piperidin-1-il)metil)-1H-indol-1-il)acetil)piperazin-1-karboksilat (40 mg, 0,06 mmol) u HCl · MeOH (10 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 16h. TLC je pokazao da je reakcija završena. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak (35-5) je upotrebljen bez daljeg prečišćavanja u sledećem koraku kao žuta čvrsta supstanca (35 mg, prinos: 85%).

[0209] Korak E: Priprema Referentnog Jedinjenja 35: Na smešu 4-metil-1-(2-okso-2-(piperazin-1-il)etil)-5-((4-((6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4-il)amino)piperidin-1-il)metil)-1H-indol-2-karbonitril (35 mg, 0,05 mmol) i Et3N (15 mg, 0,15 mmol) u CH2Cl2(10 mL) je polako dodat MsCl (12 mg, 0,1 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 4 sata i zatim podeljena između CH2Cl2i NaHCO3. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom i osušen preko Na2SO4. Rastvarač je uklonjen pod vakuumom, a ostatak je prečišćen pomoću Prep-TLC (CH2Cl2:MeOH = 20:1) da bi se dobio 4-metil-1-(2-(4-(metilsulfonil)piperazin-1-il)-2-oksoetil)-5-((4-((6-(2,2,2-trifluoroetil)tieno[2,3-d]pirimidin-4il)amino)piperidin-1-il)metil)-1H-indol-2-karbonitril (jedinjenje 35) kao bela čvrsta supstanca (16 mg, prinos: 56%).<1>HNMR(400 MHz, CDCl3) 8,42 (s, 1H), 7,84~7,76 (m,1H), 7,33~7,22 (m,3H), 5,15 (s, 2H), 4,37-4,08(m, 2H), 3,78(s, 3H), 3,69-3,61(m, 2H), 3,44-3,30(m, 5H), 2,86(s, 3H), 2,70~2,54 (m, 4H), 2,15~2,06 (m, 3H), 1,35~1,23 (m, 4H), 0,91~0,85 (m, 2H).

[0210] Primer 6: Fluorescentni test polarizacije. Ovaj primer ilustruje test koji je efikasan u praćenju vezivanja MLL-a za menin. Eksperimenti takmičenja sa fluorescentnom polarizacijom (FP) su izvedeni da bi se odredila efikasnost kojom jedinjenje inhibira interakciju menin-MLL, prikazanu kao vrednost IC50. Peptid obeležen fluoresceinom koji sadrži motiv vezivanja menina visokog afiniteta pronađen u MLL proizveden je prema Yokoyama i dr. (Cell, 2005, 123(2): 207-218). Vezivanje obeleženog peptida (1,7 kDa) za mnogo veći menin (-67 kDa) je praćeno značajnom promenom vremena rotacije korelacije fluorofora, što rezultira značajnim povećanjem polarizacije fluorescencije i anizotropije fluorescencije (ekscitacija na 500 nm, emisija na 525 nm). Efikasnost kojom jedinjenje inhibira interakciju menin-MLL merena je u FP takmičarskom eksperimentu, gde smanjenje anizotropije fluorescencije korelira sa inhibicijom interakcije i korišćeno je kao očitavanje za određivanje IC50.

[0211] Tabela 3 prikazuje biološke aktivnosti odabranih jedinjenja u testu polarizacije fluorescencije.

Brojevi jedinjenja odgovaraju brojevima i strukturama datim u Tabelama 1 i 2 i Primerima 1-5.

Tabela 3

[0212] Primer 7: Homogeni test fluorescencije vremenske rezolucije (HTRF). Homogeni test fluorescencije vremenske rezolucije (HTRF) se koristi kao sekundarni test da bi se potvrdili rezultati FP testa. U nekim otelotvorenjima, HTRF test je primarni test, a FP test se koristi kao sekundarni test za potvrdu rezultata. HTRF se zasniva na neradijativnom prenosu energije dugovečne emisije sa donora kriptata evropijuma (Eu<3+>-kriptata) do akceptora alofikocijanina (XL665), u kombinaciji sa detekcijom sa vremenskim razrešenjem. Donor Eu<3+>-kriptata je konjugovan sa mišjim anti-6His monoklonskim antitelom (koje vezuje His-označeni menin) i XL665-akceptor je konjugovan sa streptavidinom (koji vezuje biotinilovani MLL peptid). Kada se ova dva fluorofora spoje interakcijom menina sa MLL peptidom, prenos energije do akceptora rezultira povećanjem emisije fluorescencije na 665 nm i povećanim odnosom HTRF (intenzitet emisije na 665 nm/intenzitet emisije na 620 nm). Inhibicija interakcije menin-MLL odvaja donora od akceptora, što rezultira smanjenjem emisije na 665 nm i smanjenim odnosom HTRF.

[0213] Primer 8: Test menin angažmana. Pripremanje uzorka: 2,5 µL 100 µM jedinjenja je dodato u 47,5 µL 526 nM menina u PBS (5 µM jedinjenja 500 nM menina u 5% DMSO konačnoj koncentraciji). Reakcija je inkubirana na sobnoj temperaturi promenljivo vreme i ugašena sa 2,5 µL 4% mravlje kiseline (FA, 0,2% konačna koncentracija). Postupak: Thermo Finnigan Surveyor autosampler, PDA Plus UV detektor i MS pumpa zajedno sa LTQ masenim spektrometrom sa linearnim jonima korišćeni su za prikupljanje podataka uzorka pod kontrolom softvera XCalibur. Uzorak od 5 µL u režimu „bez otpada“ je ubrizgan u Phenomenex Jupiter 5u 300A C5 (zaštitna kolona) 2 × 4,00 mm na 45 °C. Sastav mobilne faze: Pufer A (95:5 voda:acetonitril, 0,1% FA) i pufer B (acetonitril, 0,1% FA). Gradijentno eluiranje je korišćeno sa početnom mobilnom fazom od 85:15 (pufer A:B) i brzinom protoka od 250 µL/min. Nakon injekcije, 85:15 A: B je držano 1,3 min, pufer B je povećan na 90% tokom 3,2 min, držan 1 min, a zatim vraćen u početne uslove za 0,1 min i držan 2,4 min. Ukupno vreme rada je 8 min. Za prva 2 minuta postupka uzorkovanja korišćen je ventil za preusmeravanje posle kolone koji se koristi za usmeravanje soli praznine zapremine u otpad. Prazno ubrizgavanje pufera A se koristi između svake injekcije uzorka. Korišćeno je ispiranje igle od 1:1 acetonitril:voda sa 0,1% FA. Izvor elektro sprej jonizacije (ESI) koristio je kapilarnu temperaturu od 300 °C, protok gasa u omotaču 40 jedinica, protok pomoćnog gasa od 20 jedinica, protok gasa za čišćenje od 3 jedinice, napon raspršivanja 3,5 kV, cevno sočivo od 120 V. Prikupljanje Podataka: Prikupljanje podataka je obavljeno u režimu punog skeniranja pozitivnih jona 550-1500 Da, 10 mikroskenova, maksimalno vreme jona 200 ms. Analiza podataka: Maseni spektri proteina su dobijeni kao XCalibur datoteke sa podacima. Najbolja skeniranja su sakupljena pomoću pregledača XCalibur Qual. Spektri su prikazani korišćenjem „Prikaz/Lista spektra sa opcijom Prikaza za prikaz svih pikova. Meni Edit/Copy ćelije je korišćen za kopiranje masenog spektra u međumemoriju računara. Spektar u međumemoriji računara je nalepljen u Ekcel. Prve dve kolone (m/z i Intenzitet su zadržane, a treća kolona (Relativno) je izbrisana. Preostale dve kolone su zatim sačuvane kao datoteka sa tabulatorima (m/z i intenzitet) kao nazivdatoteke.txt iz Excel-a. Program Masslynx Databridge je zatim korišćen za konvertovanje datoteke razdvojene tabulatorom nazivdatoteke.txt u Masslynx format. U nekim slučajevima, eksterna kalibracija korišćenjem (slično konvertovanog) spektra mioglobina je primenjena u Masslynx-u da bi se ispravile m/z vrednosti m/z podataka proteina menina. MaxEnt1 softver iz MassLink softverskog paketa je korišćen za dekonvoluciju masenog spektra da bi se dobila prosečna MW proteina. Procenat formiranja kovalentnog adukta određen je iz dekonvolutivnog spektra i korišćen za izračunavanje brzine reakcije (k) kovalentne reakcije.

[0214] Primer 9: Test ćelijske proliferacije. Sposobnost jedinjenja prema predmetnom pronalasku da inhibira rast ćelija, kao što su ćelije humane leukemije, ćelije akutne mijeloične leukemije, ćelije sa MLL fuzijom, kontrolne ćelije bez MLL fuzije, VCaP, LNCaP, 22RV1, DU145, LNCaP-AR, MV4;11, KOPN-8, ML-2, MOLM-13, RS4;11, SEM, ćelije koštane srži (BMCs), MLL-AF9, MLL-AF4, MLL-ENL, MLL-CBP, MLL-GAS7, MLL-AF1p, MLL-AF6, HM-2, E2A-HLF, REH, U937, K562, KG-1, HL-60 i NB4 ćelije, je testirana pomoću testa vitalnosti ćelija, kao što je Promega CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay (Promega Technical Bulletin, 2015, "CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay": 1-15). Ćelije su postavljene u relevantnim koncentracijama, na primer oko 1×10<5>-2×10<5>ćelija po udubljenju u ploči sa 96 udubljenja. Jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju je dodato u koncentraciji do oko 2 µM sa osam, dvostrukih serijskih razblaženja za svako jedinjenje. Ćelije se inkubiraju na 37 °C tokom određenog vremenskog perioda, na primer, 72 sata, a zatim se broje ćelije u kontrolnim udubljenjima. Medijum je promenjen da bi se vratio broj živih ćelija u prvobitnu koncentraciju, a jedinjenja su ponovo dostavljena. Proliferacija se meri oko 72 sata kasnije korišćenjem Promega CellTiter-Glo® reagensa, prema uputstvima za komplet. Određena jedinjenja koja su ovde obelodanjena su pokazala GI50vrednosti manje od 250 nM ili manje od 50 nM kada su testirane u MV4;11 ćelijama. Kao što se koristi u Primerima, GI50vrednost jedinjenja je koncentracija jedinjenja za 50% maksimalne inhibicije proliferacije ćelije.

[0215] Tabela 4 prikazuje biološke aktivnosti odabranih jedinjenja u testu ćelijske proliferacije. Brojevi jedinjenja odgovaraju brojevima i strukturama datim u Tabelama 1 i 2 i Primerima 1-5.

Tabela 4

[0216] Primer 10: RT-PCR analiza nizvodnih ciljeva MLL fuzionog proteina. Efekat jedinjenja prema predmetnom pronalasku na ekspresiju jednog ili više MLL fuzionih proteina nizvodno je procenjen pomoću RT-PCR. Ćelije, kao što su ćelije humane leukemije, ćelije akutne mijeloične leukemije, ćelije sa MLL fuzijom, kontrolne ćelije bez MLL fuzije, VCaP, LNCaP, 22RV1, DU145, LNCaP-AR, MV4;11, KOPN-8, ML-2, MOLM-13, RS4;11, SEM, ćelije koštane srži (BMCs), MLL-AF9, MLL-AF4, MLL-ENL, MLL-CBP, MLL-GAS7, MLL-AF1p, MLL-AF6, HM-2, E2A-HLF, REH, U937, K562, KG-1, HL-60 i NB4 ćelije, tretiraju se efikasnom koncentracijom jedinjenja opisanog ovde oko 7 dana ili manje, a zatim se ukupna RNK ekstrahuje iz ćelija korišćenjem bilo kog dostupnog kompleta kao što je kao RNeasy mini komplet (QIAGEN) prema uputstvima proizvođača. Ukupna RNK se reverzno transkribuje korišćenjem kompleta za reverznu transkripciju cDNK velikog kapaciteta (Applied Biosystems), a relativna kvantifikacija relevantnih transkripata gena (npr., Hoxa9, DLX2 i Meis1) je određena PCR-om u realnom vremenu.

Očekuje se da će efektivna inhibicija interakcije menin-MLL dovesti do regulacije nizvodnih ciljeva MLL-a, uključujući Hoxa9, DLX2 i Meis1.

[0217] Primer 11: Farmakokinetičke ispitivanja na miševima. Farmakokinetika inhibitora menin-MLL određena je kod ženki miševa C57BL/6 nakon intravenske (iv) doze od 15 mg/kg i oralne doze (po) od 30 mg/kg. Jedinjenja su rastvorena u nosaču koji sadrži 25% (v/v) DMSO, 25% (v/v) PEG-400 i 50% (v/v) PBS. Serijski uzorci krvi (50 µL) se sakupljaju tokom 24 h, centrifugiraju na 15000 rpm tokom 10 minuta i čuvaju za analizu. Koncentracije jedinjenja u plazmi su određene LC-MS/MS postupkom razvijenim i validiranim za ovo ispitivanje. LC-MS/MS postupak se sastoji od Agilent 1200 HPLC sistema i hromatografsko razdvajanje testiranog jedinjenja se postiže korišćenjem Agilent Zorbax Extend-C18 kolone (5 cm × 2,1 mm, 3,5 µm; Waters). Za detekciju se koristi AB Sciex QTrap 3200 maseni spektrometar opremljen elektrosprej jonizacionim izvorom (ABI-Sciex, Toronto, Kanada) u režimu praćenja višestrukih reakcija pozitivnih jona (MRM). Svi farmakokinetički parametri su izračunati nekompartmentalnim postupcima korišćenjem WinNonlin® verzije 3,2 (Pharsight Corporation, Mountain View, Kalifornija, SAD).

[0218] Primer 12: Studija efikasnosti na modelu tumora ksenografta miša. Imunodeficijentni miševi, kao što su ženke golih (nu/nu) miševa stare 8-10 nedelja, koriste se za in vivo ispitivanja efikasnosti u skladu sa smernicama koje je odobrio IACUC. Ćelije leukemije, kao što su ćelije humane leukemije MV4-11 dostupne od ATCC-a, implantiraju se subkutano preko igle u ženke golih miševa (5 × 10<6>ćelija/miš). Kada tumor dostigne veličinu od približno 150 do 250 mm<3>kod miševa, miševi koji nose tumor su nasumično raspoređeni u kontrolnu grupu ili grupu za lečenje jedinjenjem (8 životinja po grupi). Životinje se tretiraju jedinjenjem prema ovom oralni pronalasku oralnom gavažom ili intraperitonealnom injekcijom u odgovarajućoj količini i učestalosti koju može odrediti stručnjak bez nepotrebnog eksperimentisanja.

Zapremina potkožnog tumora kod golih miševa i telesna masa miševa se meri dva puta nedeljno. Zapremine tumora se izračunavaju merenjem dva okomita prečnika pomoću čeljusti (V = (dužina × širina<2>)/2). Procenat inhibicije rasta tumora (%TGI = 1 - [promena zapremine tumora u tretiranoj grupi/promena zapremine tumora kontrolna grupa]<∗>100) se koristi za procenu antitumorske efikasnosti. Statistička značajnost se procenjuje korišćenjem jednostranog t testa sa dva uzorka. P<0,05 se smatra statistički značajnim.

[0219] Primer 13: Studija efikasnosti u modelu ksenotransplantata tumora prostate. Imunodeficijentni miševi, kao što su muški CB17 miševi sa teškom kombinovanom imunodeficijencijom (SCID) stari 4-6 nedelja, koriste se za in vivo ispitivanja efikasnosti u skladu sa smernicama koje je odobrio IACUC.

Roditeljske ćelije raka prostate, kao što su VCaP ili LNCaP-AR ćelije, implantiraju se subkutano u mužjake CB,17.SCID miševa (3-4 × 106 ćelija u 50% Matrigel). Kada tumor dostigne opipljivu veličinu od približno 80 mm<3>, miševi koji nose tumor su nasumično raspoređeni u kontrolnu grupu ili grupu za lečenje jedinjenjem (6 ili više životinja po grupi). Životinje se tretiraju jedinjenjem prema ovom pronalasku intraperitonealnom injekcijom u odgovarajućoj količini i učestalosti koju može odrediti stručnjak bez nepotrebnog eksperimentisanja. U jednom primeru, miševi se tretiraju sa 40 mg/kg jedinjenja prema ovom pronalasku dnevno i.p. injekcija dve nedelje, a zatim 5 dana nedeljno. Zapremina subkutanog tumora i telesna masa miševa mere se dva puta nedeljno. Zapremine tumora se izračunavaju merenjem dva okomita prečnika pomoću čeljusti (V = (dužina × širina<2>)/2).

[0220] Primer 14: Studija efikasnosti na modelu ksenotransplantata tumora prostate otpornog na kastraciju (VCaP). Imunodeficijentni miševi, kao što su muški CB17 miševi sa teškom kombinovanom imunodeficijencijom (SCID) stari 4-6 nedelja, koriste se za in vivo ispitivanja efikasnosti u skladu sa smernicama koje je odobrio IACUC. Roditeljske ćelije raka prostate, kao što su VCaP ćelije, implantiraju se subkutano u mužjake CB,17.SCID miševa (3-4 × 106 ćelija u 50% Matrigel). Kada tumor dostigne veličinu od približno 200-300 mm<3>, miševi koji nose tumor se fizički kastriraju, a tumori se posmatraju za regresiju i ponovni rast do približno 150 mm<3>. Miševi koji nose tumor su nasumično raspoređeni u kontrolnu grupu ili grupu za lečenje jedinjenjem (6 ili više životinja po grupi). Životinje se tretiraju jedinjenjem prema ovom pronalasku intraperitonealnom injekcijom u odgovarajućoj količini i učestalosti koju može odrediti stručnjak bez nepotrebnog eksperimentisanja. U jednom primeru, miševi se tretiraju sa 40 mg/kg jedinjenja prema predmetnom pronalasku dnevno i.p. injekcija. Zapremina subkutanog tumora i telesna masa miševa mere se dva puta nedeljno. Zapremine tumora se izračunavaju merenjem dva okomita prečnika pomoću čeljusti (V = (dužina × širina<2>)/2).

[0221] Primer 15: Studija efikasnosti na modelu ksenotransplantata tumora prostate otpornog na kastraciju (LNCaP-AR). Imunodeficijentni miševi, kao što su muški CB17 miševi sa teškom kombinovanom imunodeficijencijom (SCID) stari 4-6 nedelja, koriste se za in vivo ispitivanja efikasnosti u skladu sa smernicama koje je odobrio IACUC. CB,17.SCID miševi su hirurški kastrirani i ostavljeni da se oporave 2-3 nedelje pre implantacije roditeljskih ćelija raka prostate, kao što su LNCaP-AR ćelije, subkutano u (3-4 × 10<6>ćelija u 50% Matrigel). Kada tumor dostigne veličinu od približno 80-100 mm3, miševi koji nose tumor su nasumično raspoređeni u kontrolnu grupu ili grupu za lečenje jedinjenjem (6 ili više životinja po grupi). Životinje se tretiraju jedinjenjem prema ovom pronalasku intraperitonealnom injekcijom u odgovarajućoj količini i učestalosti koju može odrediti stručnjak bez nepotrebnog eksperimentisanja. U jednom primeru, miševi se tretiraju sa 60 mg/kg jedinjenja prema predmetnom pronalasku dnevno i.p. injekcija 27 dana. Zapremina subkutanog tumora i telesna masa miševa mere se dva puta nedeljno. Zapremine tumora se izračunavaju merenjem dva okomita prečnika pomoću čeljusti (V = (dužina × širina<2>)/2).

[0222] Primer 16: Ćelijski test termalnog pomaka (CESTA). Za eksperimente sa ćelijskim lizatom CETSA, kultivisane ćelije iz ćelijskih linija (npr., HEK293, uzorci koštane srži) su sakupljene i isprane sa PBS. Ćelije su razblažene u kinaznom puferu (KB) (25 mM Tris(hidroksimetil)-aminometan hidrohlorid (Tris-HCl, pH 7,5), 5 mM beta-glicerofosfat, 2 mM ditiotreitol (DTT), 0,1 mM natrijum oksid 10M magnezijum hlorid) ili u fiziološkom rastvoru puferovanom fosfatom (PBS) (10 mM fosfatni pufer (pH 7,4), 2,7 mM kalijum hlorida i 137 mM natrijum hlorida). Svi puferi su dopunjeni potpunim koktelom inhibitora proteaze.

Suspenzije ćelija se zamrzavaju-odmrzavaju tri puta korišćenjem tečnog azota. Rastvorljiva frakcija (lizat) se odvaja od ostataka ćelije centrifugiranjem na 20000 x g tokom 20 minuta na 4°C. Ćelijski lizati su razblaženi odgovarajućim puferom i podeljeni u dva alikvota, pri čemu je jedan alikvot tretiran lekom, a drugi alikvot razblaživačem inhibitora (kontrola). Posle 10-30 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi, odgovarajući lizati se dele na manje (50 µL) alikvote i zagrevaju pojedinačno na različitim temperaturama 3 minuta, nakon čega sledi hlađenje 3 minuta na sobnoj temperaturi. Odgovarajuće temperature se određuju u preliminarnim CETSA eksperimentima. Zagrejani lizati se centrifugiraju na 20000 x g tokom 20 minuta na 4°C da bi se rastvorljive frakcije odvojile od taloga. Supernatanti se prenose u nove mikroepruvete i analiziraju elektroforezom na natrijum dodecil sulfatu na poliakrilamidnom gelu (SDS-PAGE) nakon čega sledi zapadna blot analiza.

[0223] Za eksperimente sa netaknutim ćelijama ćelije tretirane lekom iz in vitro eksperimenata iznad se zagrevaju kao što je prethodno opisano, a zatim se dodaje KB (30 µL) i lizira pomoću 2 ciklusa zamrzavanjaodmrzavanja sa tečnim azotom. Rastvorljive frakcije se izoluju i analiziraju zapadnim blotom.

[0224] Za eksperimente na miševima in vivo, korišćeni su lizati smrznutih tkiva. Zamrznuti organi (npr., jetra ili bubrezi) se odmrzavaju na ledu i nakratko ispiraju PBS-om. Organi su homogenizovani u hladnom PBS-u korišćenjem mlevenja tkiva nakon čega slede 3 ciklusa zamrzavanja-odmrzavanja korišćenjem tečnog azota. Lizati tkiva se odvajaju od ćelijskih ostataka i lipida. Lizati tkiva su razblaženi sa PBS koji sadrži inhibitore proteaze, podeljeni u alikvote od 50 µL i zagrevani na različitim temperaturama. Rastvorljive frakcije se izoluju i analiziraju zapadnim blotom.

[0225] Očekuje se da alikvoti tretirani sa jednim ili više jedinjenja koja su ovde obelodanjena pokazuju povećanu termičku stabilizaciju menina u poređenju sa kontrolnim alikvotima.

[0226] Primer 17: Dot-blot eksperimenti nalik CETSA na prečišćenim proteinima. Prečišćeni protein (0,5 µg) je dodat u otvore na PCR ploči i zapremina je podešena na 50 µL dodavanjem pufera ili ćelijskih lizata i liganada u zavisnosti od eksperimentalne postavke. Uzorci se zagrevaju na određeno vreme i temperaturu u termocikleru. Nakon zagrevanja, uzorci se odmah centrifugiraju 15 minuta na 3000 x g i filtriraju pomoću filter ploče od 0,65 µm Multiscreen HTS sa 96 udubljenja.3 µL svakog filtrata se nanese na nitroceluloznu membranu. Primarno antitelo i sekundarni konjugat se koriste za imunoblotiranje. Sve membrane su blokirane puferom za blokiranje; koriste se standardni transfer i zapadnim blot protokoli koje preporučuju proizvođači. Sva antitela su razblažena u puferu za blokiranje. Dot-blot je razvijen. Intenzitet hemiluminiscencije se detektuje i snima. Neobrađene dot-blot slike se obrađuju. Pozadina se oduzima, a intenziteti se kvantifikuju. Grafikoni su ucrtani i postavljeni korišćenjem sigmoidnog doza-odgovor (promenljivi nagib).

[0227] Primer 18: Testovi ćelijske proliferacije. Sposobnost jedinjenja predmetnog obelodanjivanja da inhibira rast ćelija testirana je u obe ćelijske linije MLL leukemije (npr., MV4;11, MOLM13 i/ili KOPN8) i kontrolnih ćelijskih linija (npr., K562, REH, U937, KG -1, i/ili HL-60) korišćenjem testa proliferacije MTT ćelija (ATCC® 30-1010K). Jedno ili više jedinjenja koja su ovde obelodanjena, npr., jedinjenje dato u Tabeli 3 koje ima vrednost IC50manju od 1 µM, poželjno manju od 50 nM (mera koja odražava sposobnost jedinjenja da poremeti interakciju menin-MLL, mereno u skladu sa sa Primerom 6), inhibiraju proliferaciju MLL ćelijskih linija leukemije (MV4;11 i MOLM13 ćelije) dok imaju mnogo slabiji inhibitorni efekat na proliferaciju kontrolnih ćelijskih linija (npr., K562 i REH ćelije) pri istoj koncentraciji. Ćelije su postavljene na oko 1×10<5>ćelija po udubljenju u ploču sa 96 udubljenja. Jedinjenje prema predmetnom obelodanjivanju je dodato u koncentraciji do oko 2 µM sa sedam, 2-strukih serijskih razblaženja za svako jedinjenje. Ćelije su inkubirane na 37 °C tokom 72 sata, a zatim su prebrojane ćelije u kontrolnim udubljenjima. Medijum je promenjen da bi se vratio broj živih ćelija u prvobitnu koncentraciju, a jedinjenja su ponovo dostavljena. Proliferacija je izmerena 96 sati kasnije korišćenjem MTT reagensa, prema uputstvima za komplet. Vrednost GI50jedinjenja predmetnog obelodanjivanja, kao što je Jedinjenje B sa Sl.4, bila je 35 nM u MV4;11 ćelijama (MLL-AF4 AML), 75 nM u MOLM13 ćelijama (MLL-AF9 AML), 1500 nM u K562 ćelije i 2000 nM u REH ćelijama, mereno testom proliferacije MTT ćelija. GI50vrednost jedinjenja ovog otkrića, kao što je Jedinjenje C sa Slike 8, bila je 15 nM u MV4;11 ćelijama (MLL-AF4 AML), 16 nM u MOLM13 ćelijama (MLL-AF9 AML), 20 nM u KOPN8 (MLL-ENL AML) ćelije, 1500 nM u REH ćelijama, više od 6000 nM u K562 ćelijama i više od 6000 nM u U937 ćelijama, mereno testom proliferacije MTT ćelija. GI50vrednost jedinjenja predmetnog obelodanjivanja, kao što je jedinjenje D sa Sl.11, bila je 10 nM u MV4;11 ćelijama (MLL-AF4 AML), 17 nM u MOLM13 ćelijama (MLL-AF9 AML), 18 nM u KOPN8 (MLL-ENL AML) ćelije, veće od 2000 nM u HL-60 ćelijama i veće od 2000 nM u U937 ćelijama. REH, K562, KG-1 i U937 ćelije su kontrolne ćelijske linije bez MLL fuzije. Određena jedinjenja koja su ovde obelodanjena su pokazala vrednosti GI50u opsegu od 1500 nM do više od 6000 nM kada su testirana u REH, K562, KG-1 i U937 ćelijama. Određena jedinjenja koja su ovde obelodanjena pokazala su GI50vrednosti u opsegu od 5 nM do 25 nM kada su testirana u MV4;11 ćelijama (MLL-AF4 AML), MOLM13 ćelijama (MLL-AF9 AML), ćelijama mišje koštane srži (rMML-AF9 AML), KOPN8 (MLL-ENL AML) ćelije, RS4;11 ćelije (MLL-AF4 ALL) ili SEM (MLL-AF4 ALL) ćelije.

[0228] Primer 19: Studija efikasnosti na modelu tumora ksenografta miša. Jedno ili više jedinjenja koja su ovde obelodanjena, npr., jedinjenje dato u Tabeli 3 koje ima vrednost IC50manju od 1 µM, poželjno manju od 50 nM (mera koja odražava sposobnost jedinjenja da poremeti interakciju menin-MLL, mereno u skladu sa sa Primerom 6), obezbeđuju supresiju rasta tumora MV4;11 (humana leukemija) u modelima ksenotransplantata miša. Imunokompromitovane ženke golih miševa (nu/nu) stare 8-10 nedelja su korišćene za in vivo studije efikasnosti u skladu sa smernicama IACUC. Ljudske ćelije leukemije MV4; 11 dostupne od ATCC su implantirane subkutano u ženke golih miševa (5 × 10<6>ćelija po mišu). Kada je tumor dostigao veličinu od približno 150 do 250 mm<3>, miševi koji su nosili tumor su nasumično raspoređeni u kontrolnu grupu ili grupu za lečenje jedinjenjem (8 miševa po grupi). Miševima u svakoj grupi tretmana je dato jedinjenje prema predmetnom pronalasku oralnom gavažom u naznačenoj dozi (50 mg/kg, bid; 50 gm/kg, qd; 100 mg/kg, bid; 100 mg/kg, qd; 200 mg/kg, qd.; ili 200 mg/kg, bid). Zapremina subkutanog tumora i telesna masa miša mereni su dva puta nedeljno. Zapremine tumora su izračunati merenjem dva okomita prečnika pomoću čeljusti (V = (dužina × širina<2>)/2). Kao što je prikazano na Slici 4, jedinjenje dato u Tabeli 3 koje ima IC50vrednost manju od 50 nM (mera koja odražava sposobnost jedinjenja da poremeti interakciju menin-MLL, mereno u skladu sa Primerom 6), označeno kao Jedinjenje B na slici, inhibirao rast tumora i indukovao regresiju tumora u odnosu na kontrolnu grupu nosača na način zavisan od doze. Kao što je prikazano na Slici 8, jedinjenje dato u Tabeli 3 koje ima IC50vrednost manju od 50 nM (mera koja odražava sposobnost jedinjenja da poremeti interakciju menin-MLL, mereno u skladu sa Primerom 6), označeno kao Jedinjenje C slici, inhibirao rast tumora i indukovao regresiju tumora u odnosu na kontrolnu grupu nosača na način zavisan od doze.

[0229] Primer 20: Studija efikasnosti u ksenotransplantacionom mišjem modelu MLL leukemije. Jedno ili više jedinjenja koja su ovde obelodanjena, npr., jedinjenje dato u Tabeli 3 koje ima vrednost IC50manju od 1 µM, poželjno manju od 50 nM (mera koja odražava sposobnost jedinjenja da poremeti interakciju menin-MLL, mereno u skladu sa Primerom 6), obezbeđuju supresiju rasta tumora MV4;11 u ksenotransplantacionom mišjem modelu MLL leukemije. Imunokompromitovane ženke NSG miševa stare 8-10 nedelja su korišćene za in vivo studije efikasnosti u skladu sa smernicama IACUC. Ćelije humane leukemije MV4; 11 koje eksprimiraju luciferazu (MV4; 11-luc) su usađene intravenozno injekcijom u repnu venu (1 × 10<7>ćelija/životinja). Kada je srednja luminiscencija ćelija dostigla približno 1,5×10<6>, miševi sa tumorom su nasumično raspoređeni u kontrolnu grupu ili grupu koja je tretirana jedinjenjem (5 životinja po grupi). Životinjama u svakoj od grupa za tretman dato je različito jedinjenje prema ovom pronalasku oralnom gavažom (120 mg/kg b.i.d., 150 mg/kg b.i.d., 200 mg/kg b.i.d., ili 200 mg/kg k.d.). Telesna masa je merena dnevno, dok je srednja luminiscencija merena 6 dana nakon početka tretmana jedinjenjem ili vehikulumom.

[0230] Kao što je prikazano na Slici 5, 200 mg/kg b.i.d. režim lečenja Jedinjenja B prema predmetnom pronalasku je inhibirao rast tumora i indukovao regresiju tumora u odnosu na kontrolnu grupu sa nosačem. Nasuprot tome, jedinjenje dato u Tabeli 3 koje ima IC50vrednost veću od 1 µM (mera koja odražava sposobnost jedinjenja da poremeti interakciju menin-MLL, mereno u skladu sa Primerom 6), označeno kao Jedinjenje A na Sl.5, inhibirao rast tumora, ali nije indukovao regresiju tumora u odnosu na kontrolnu grupu sa vehikulumom kada je davan u dozi od 200 mg/kg b.i.d. Kao što je prikazano na Sl.11, a 120 mg/kg b.i.d. režim tretmana jedinjenja 165-jedinjenja datog u Tabeli 3 koje ima IC50vrednost manju od 50 nM (merenje koje odražava sposobnost jedinjenja da poremeti interakciju menin-MLL, mereno u skladu sa Primerom 6) i označeno kao Jedinjenje D u figure su inhibirali rast tumora i indukovali regresiju tumora u odnosu na kontrolnu grupu sa nosačem.

[0231] Životinje su žrtvovane 7. dana tretmana, a uzorci koštane srži su sakupljeni i pripremljeni za analizu genske ekspresije. Nivoi ekspresije ciljnih gena MLL fuzionog proteina HOXA9, DLX2 i/ili MEIS1 mereni su qRT-PCR-om i predstavljeni su na Sl.6, Sl.9 i Sl.12 kao nagomilane promene normalizovane na ekspresiju GAPDH. Ekspresija markera diferencijacije CD11b je bila povišena u uzorcima koštane srži životinja tretiranih Jedinjenjem B, životinja tretiranih jedinjenjem C i životinja tretiranih jedinjenjem D, što sugeriše da ove ćelije prolaze kroz diferencijaciju. Pored toga, nivoi ekspresije MEIS1 i HOXA9 su značajno smanjeni nakon tretmana sa jedinjenjem B, jedinjenjem C ili jedinjenjem D, u skladu sa inhibicijom progresije leukemije izazvane ovim jedinjenjem.

[0232] Primer 21: Studija preživljavanja u ksenotransplantacionom mišjem modelu MLL leukemije. Za ispitivanja preživljavanja u modelu ksenotransplantacije MV4;11 ksenotransplantata, ženke NSG miševa starih 6 do 8 nedelja su intravenozno ubrizgane sa 1 × 10<7>ćelijama MV4;11 koje eksprimiraju luciferazu i koje sadrže MLL-AF4 translokaciju.12. dana nakon transplantacije, tretman je započet sa jedinjenjem B, 120 mg/kg, b.i.d., p.o. ili vehikulum (20% 2-hidroksipropil-b-ciklodekstrin sa 5% kremofora) i nastavljeno je 22 uzastopna dana. Kao što je prikazano na Slici 7, Jedinjenje B prema predmetnom pronalasku je produžilo srednje vreme preživljavanja u odnosu na kontrolnu grupu nosača. Miševi tretirani Jedinjenjem B imali su srednje vreme preživljavanja od 54 dana, dok su miševi u kontrolnoj grupi sa nosačem imali srednje vreme preživljavanja od 37 dana, što ukazuje na korist od preživljavanja od 17 dana (46%) za miševe tretirane jedinjenjem.

[0233] Za ispitivanja preživljavanja u modelu ksenotransplantacije MOLM13 ksenografta, 6 do 8 nedelja starim ženkama NSG miševa intravenozno su ubrizgane 0,5 × 10<6>MOLM13 ćelija koje sadrže MLL-AF9 translokaciju. Dana 4 nakon transplantacije, tretman je započet sa Jedinjenjem C, 75 mg/kg, b.i.d., p.o. ili vehikulum (20% 2-hidroksipropil-b-ciklodekstrina sa 5% kremofora) i nastavljeno je 16 uzastopnih dana kod miševa tretiranih predmetnim jedinjenjem ili dok se ne razvije terminalna leukemija kod miševa tretiranih nosačem. Kao što je prikazano na Slici 10, Jedinjenje C prema predmetnom pronalasku je produžilo srednje vreme preživljavanja u odnosu na kontrolnu grupu sa vehikulumom.

[0234] Slično, 120 mg/kg b.i.d. režim tretmana jedinjenja D je započet 6. dana nakon transplantacije MOLM13 i nastavljen je 16 uzastopnih dana kod miševa tretiranih ovim jedinjenjem ili dok se ne razvije terminalna leukemija kod miševa tretiranih nosačem. Kao što je prikazano na slici 13, Jedinjenje D predmetnog obelodanjivanja je produžilo srednje vreme preživljavanja na 24 dana, u odnosu na srednje vreme preživljavanja od 16 dana za miševe u kontrolnoj grupi sa nosačem, što ukazuje na korist preživljavanja od 18 dana (75%) za miševe tretirane jedinjenjem.

[0235] Dok su poželjna otelotvorenja predmetnog obelodanjivanja prikazana i opisana ovde, stručnjacima će biti očigledno da su takva ostvarenja data samo kao primer.

1

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje prema Formuli
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: se C bira između piperidinila i piperazinila; L<2>je -CH2-; L<3>je -CH2CH(R<56>)-, i R<56>je metil; R<1>je C1-3haloalkil; R<2>je izabran između halogena, -OR<52>, -N(R<52>)2, -CN, C1-3alkil, C1-3alkil-OR<52>, C1-3alkil-N(R<52>)2, C1-3haloalkila, C2-3alkenila i C2-3alkinila; R<3>je izabran između vodonika, halogena, -OH, -N(R<52>)2, -CN, -C(O)OR<52>, C1-3alkila i C1-3haloalkila; R<A>i Rsu svaki nezavisno izabrani pri svakom pojavljivanju između halogena, -CN, -OR<52>, - N(R<52>)2, -NR<53>R<54>, -C(O)R<52>, -C(O)OR<52>, -OC(O)R<52>, -NR<52>C(O)R<52>, -C(O)N(R<52>)2, - C(O)NR<53>R<54>, =O, C1-10alkila, C2-10alkenila, i C2-10alkinila; R<C>je izabran između -C(O)R<52>, -S(=O)R<52>, -S(=O)2R<52>, -S(=O)2N(R<52>)2, -S(=O)2NR<53>R<54>, -NR<52>S(=O)2R<52>, =O, C1-3alkila i C1-3haloalkila, ili dve R<C>grupe vezane na različite atome mogu formirati C1-3most; m i p su svaki nezavisno ceo broj od 0 do 6; n je ceo broj od 1 do 4; R<51>je izabran iz grupe koju čine vodonik i C1-6alkil; R<52>se nezavisno bira pri svakom pojavljivanju između vodonika; i C1-20alkil, C2-20alkenila, C2-20alkinila, 1- do 6-članog heteroalkila, C3-12karbocikla, i 3- do 12-članog heterocikla, od kojih je svaki opciono supstituisan halogenom, -CN, -NO2, -NH2, -NHCH3, -NHCH2CH3, =O, -OH, -OCH3, -OCH2CH3, C3-12karbociklom, ili 3- do 6-članim heterociklom; i R<53>i R<54>su uzeti zajedno sa atomom azota za koji su vezani da formiraju heterocikl. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je m 0 i n je ceo broj od 1 do 3. 3. Jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde je L<3>izabran između
i
4. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 2, gde je L<3>
5. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 2, gde je L<3> 2
6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima strukturu Formule (II-C):

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
7. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima strukturu Formule (II-C):
8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima strukturu Formule (II-F), ili (II-H):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima strukturu Formule (II-F), ili (II-H):
10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima strukturu Formule (II-F):
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde jedinjenje ima strukturu Formule (II-F):
12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je jedinjenje izabrano iz grupe koju čine:

4

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je jedinjenje:

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je jedinjenje:
15. Farmaceutski sastav koji sadrži jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva i farmaceutski prihvatljiv nosač.
16. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 14, za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja.
17. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 16, gde je bolest ili stanje leukemija, hematološki malignitet, kancer solidnog tumora, rak prostate, rak dojke, rak jetre, tumor mozga ili dijabetes.
18. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 17, gde je bolest ili stanje leukemija.