RS65380B1

RS65380B1 - Glp-1 kompozicije i njihova upotreba

Info

Publication number: RS65380B1
Application number: RS20240414A
Authority: RS
Inventors: Møller Eva Horn; Sørensen Michael Duelund; Joakim Lundqvist
Original assignee: Novo Nordisk As
Priority date: 2017-08-24
Filing date: 2018-08-24
Publication date: 2024-04-30
Also published as: CN118903386A; US12214017B2; US20210085755A1; MA46990B1; IL272232B1; WO2019038412A1; BR112020002804A2; PL3474820T3; TW202304501A; US20200164042A1; EP4360651A3; AU2018321157B2; EP3474820B1; HRP20240485T1; US20240016896A1; MY198425A; PE20211202A1; MX2020001525A; KR20200044016A; TWI762706B

Description

GLP-1 KOMPOZICIJE I NJIHOVA UPOTREBA

Predmetni pronalazak se odnosi na oblast farmaceutskih kompozicija koje sadrže GLP-1 peptidni semaglutid.

STANJE TEHNIKE

Poznato je da su GLP-1 peptidi skloni da razviju nedostatak stabilnosti u tečnim rastvorima, na primer, nedostatak fizičke stabilnosti. Stoga su poželjne tečne farmaceutske kompozicije koje sadrže GLP-1 peptide sa još boljom stabilnošću. Takva poboljšana stabilnost može biti fizička stabilnost i/ili hemijska stabilnost.

WO 2006/097537 opisuje jedinjenje semaglutid kao i njegove kompozicije i medicinsku upotrebu.

KRATAK PRIKAZ PRONALASKA

Predmetni pronalazak se odnosi na tečnu farmaceutsku kompoziciju za paranteralnu primenu koja sadrži semaglutid i ne više od 0,01 % (m/m) fenola, pri čemu je takva kompozicija vodeni rastvor koji sadrži najmanje 60 %m/m vode; i/ili dalje sadrži jednu ili više farmaceutski prihvatljivih pomoćnih supstanci izabranih iz grupe koja sadrži pufer ili izotonično sredstvo.

U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na tečne farmaceutske kompozicije koje sadrže semaglutid i ne više od 0,01 %(m/m) fenola. U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na komplete koji sadrže farmaceutsku kompoziciju kako je ovde definisano. U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju kako je ovde definisano za upotrebu u medicini.

OPIS

Predmetni pronalazak se odnosi na tečne farmaceutske kompozicije za parenteralnu primenu koje sadrže GLP-1 peptid semaglutid i ne više od 0,01 %(m/m) fenola, pri čemu je navedena kompozicija vodeni rastvor koji sadrži najmanje 60 %m/m vode; i/ili dalje sadrži jednu ili više farmaceutski prihvatljivih pomoćnih supstanci izabranih iz grupe koja sadrži pufer ili izotonično sredstvo. Iznenađujuće, prisutni pronalazači su pronašli da su takve kompozicije poboljšale hemijsku i/ili fizičku stabilnost. U nekim realizacijama kompozicija sadrži fenol. U nekim realizacijama kompozicija sadrži 0,01-10 mg/ml semaglutida. U nekim realizacijama kompozicija ima pH u rasponu od 6,0-10,0, kao što je pH 7,0-7,8.

U nekim realizacijama kompozicija iz pronalaska je tečna farmaceutska kompozicija za parenteralnu primenu koja sadrži semaglutid i ne više od 0,01 %(m/m) fenola, pri čemu je navedena kompozicija

a. vodeni rastvor koji sadrži najmanje 60%m/m vode; ili

b. dalje sadrži jednu ili više farmaceutski prihvatljivih pomoćnih supstanci izabranih iz grupe koja sadrži pufer ili izotonično sredstvo.

U nekim realizacijama kompozicija iz pronalaska je tečna farmaceutska kompozicija koja sadrži semaglutid, ne više od 0,01 %(m/m) fenola, i opcionalno jedno ili više farmaceutski prihvatljivih pomoćnih supstanci, pri čemu je formulacija za paranteralno davanje, kao što je subkutano davanje.

U nekim realizacijama kompozicija iz pronalaska je tečna farmaceutska kompozicija koja sadrži semaglutid, ne više od 0,01 %(m/m) fenola, najmanje 60 %m/m vode, i opcionalno jedno ili više farmaceutski prihvatljivih pomoćnih supstanci.

U nekim realizacijama izraz “stabilnost“ kako se ovde koristi, odnosi se na stabilnost semaglutida u tečnoj farmaceutskoj kompoziciji. U nekim realizacijama stabilnost je hemijska stabilnost GLP-1 peptida (npr. utvrđenu pomoću HPLC, kao što je Test (I) ovde), i opcionalno fizička stabilnost GLP-1 peptida (npr. utvrđenu pomoću Tioflavin T testa, kao što je Test (II) ovde).

U nekim realizacijama izraz “hemijska stabilnost“ u odnosu na semaglutid kako se ovde koristi, odnosi se na kovalentne veze jedinjenja semaglutida koji je suštinski netaknut. U nekim realizacijama hemijska stabilnost GLP-1 peptida je utvrđena pomoću HPLC, kao što je Test (I) ovde. U nekim realizacijama kompozicija ima hemijsku stabilnost ukoliko su kovalentne veze netaknute u najmanje 80%(m/z) tih GLP-1 peptida posle skladištenja 3 meseca na 25°C. U nekim realizacijama hemijska stabilnost semaglutida je utvrđena pomoću Testa (IV) ovde.

U nekim realizacijama izraz “fizička stabilnost“ u odnosu na semaglutid kako se ovde koristi, odnosi se na semaglutid koji suštinski ne formira agregate, npr. u obliku formiranja fibrila. U nekim realizacijama fizička stabilnost je utvrđena pomoću Tioflavin T testa, kao što je Test (II) ovde.

U nekim realizacijama kompozicija predmetnog pronalaska je stabilna farmaceuska kompozicija. Izraz „stabilna farmaceutska kompozicija“, kad se ovde koristi, odnosi se na farmaceutsku kompoziciju, npr. rastvor ili suspenziju, koja sadrži GLP-1 peptid, i čiji sastav nakon skladištenja sadrži najmanje 80%(m/z) navedenog GLP-1 peptida (npr. posle mirnog skladištenja od 3 meseca na 25°C). Uslovi skladištenja za testiranje stabilnosti mogu biti 2-8°C, kao što je 5°C, ili najmanje 2,5 godine na 5°C. Alternativno, uslovi skladištenja mogu da budu najmanje 4 nedelje, kao što je 6 nedelja ili 3 meseca, opcionalno na 30°C. Uslovi skladištenja za ovu stabilnu farmaceutsku kompoziciju mogu biti 5°C na 1 ili 2 godine. Uslovi skladištenja za ovu stabilnu farmaceutsku kompoziciju mogu biti 5°C na 3 godine.

Alternativno, uslovi ovog skladištenja mogu biti 25°C na 24 časa ili 1 nedelju. U još jednoj alternativi, uslovi ovog skladištenja mogu da budu sobna temperatura na dva meseca, kao što je do dva meseca.

U nekim realizacijama hemijska stabilnost GLP-1 peptida zahteva najmanje 80%(m/z), kao što je najmanje 90%(m/z) ili najmanje 95%(m/z), pomenutog GLP-1 peptida koji ostaje sa svojim kovalentnim vezama netaknut do kraja perioda skladištenja. U nekim realizacijama hemijska stabilnost GLP-1 peptida zahteva najmanje 95%(m/z), kao što je najmanje 97%(m/z) ili najmanje 99%(m/z), pomenutog GLP-1 peptida koji ostaje sa svojim kovalentnim vezama netaknut do kraja perioda skladištenja.

Kompozicija iz pronalaska sadrži ne više od 0,01 %(m/m) fenola. U nekim realizacijama kompozicija suštinski ne sadrži fenol.

Farmaceutske kompozicije

Izrazi „farmaceutska kompozicija“ i „kompozicija“ se ovde koriste naizmenično i odnose se na farmaceutsku kompoziciju pogodnu za davanje subjektu koji ima potrebu za tim.

U nekim realizacijama kompozicija sadrži 0,01-100 mg/ml semaglutida. U nekim realizacijama kompozicija sadrži 0,1-50 mg/ml, kao što je 0,5-25 mg/ml ili 1-15 mg/ml, semaglutida. U nekim realizacijama kompozicija sadrži 0,1-10 mg/ml, kao što je 0,5-5 mg/ml ili 1-2 mg/ml, semaglutida. U nekim realizacijama kompozicija sadrži 0,01-10 mg/ml, kao što je 0,01-5 mg/ml, semaglutida. U nekim realizacijama kompozicija sadrži ne više od 9 mg/ml, kao što je ne više od 8 mg/ml ili ne više od 7 mg/ml, semaglutida. U nekim realizacijama kompozicija sadrži ne više od 6 mg/ml, kao što je ne više od 5 mg/ml ili ne više od 4 mg/ml, semaglutida. U nekim realizacijama kompozicija sadrži ne više od 3 mg/ml, kao što je ne više od 2 mg/ml ili ne više od 1 mg/ml, semaglutida. U nekim realizacijama kompozicija sadrži najmanje 0,01 mg/ml, kao što je najmanje 0,02 mg/ml ili najmanje 0,05 mg/ml, semaglutida. U nekim realizacijma kompozcija sadrži 1,34 mg/ml semaglutida.

U nekim realizacijama kompozicija iz pronalaska ima pH u rasponu od pH 3-10, kao što je pH 6-10 ili 6-9. U nekim realizacijama kompozicija iz pronalaska ima pH u rasponu od pH 6,5-8,5, kao što je pH 7,0-7,8.

U nekim realizacijama, kompozicija iz pronalaska sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.

U nekim realizacijama kompozicija iz pronalaska sadrži izotonično sredstvo, kao što je propilen glikol. U nekim realzacijama izotonično sredstvo je propilen glikol ili natrijum hlorid.

U nekim realizacijama kompozicija iz pronalaska sadrži pufer, kao što je fosfatni pufer, TRIS, citratni ili je bez pufera. U nekim realizacijama fosfatni pufer je natrijum fosfatni pufer, kao što j dinatrijum hidrogen fosfat.

U nekim realizacijama kompozicija iz pronalaska ne sadrži konzervans. Kompozicija iz pronalaska je u obliku tečne farmaceutske kompozicije. U nekim realizacijama tečna farmaceuska kompozicija je rastvor ili suspenzija. U nekim realizacijama kompozicija iz pronalaska je u obliku rastvora, kao što je vodeni rastvor. U nekim realizacijama izraz „vodeni rastvor“ kako se ovde koristi odnosi se na rastvor koji sadrži najmanje 60 %m/m vode. U nekim realizacijama vodeni rastvor sadrži 60-99 %m/m vode. U nekim realizacijama vodeni rastvor sadrži najmanje 75 %m/m vode, kao što je najmanje 80 %m/m vode ili najmanje 85 %m/m vode. U nekim realizacijama, vodeni rastvor sadrži najmanje 90 %m/m vode, kao što je najmanje 92 %m/m vode ili najmanje 94 %m/m vode.

Semaglutid

GLP-1 peptid semaglutid može se pripremiti kao što je opisano u Primeru 4 iz WO2006/097537. Semaglutid je takođe poznat kao N<6,26>-{18-[N-(17-karboksiheptadekanoil)-L-γ-glutamil]-10-okso-3,6,12,15-tetraoksa-9,18-diazaoktadekanoil}-[8-(2-amino-2-propionska kiselina),34-L-arginin]humani peptid sličan glukagonu 1(7-37), vidi WHO Drug Information Vol. 24, br.1, 2010. U nekim realizacijama semaglutid može biti prisutan u kompoziciji u svom potpuno ili delimično jonizovanom obliku; na primer, jedna ili više grupa karboksilne kiseline (-COOH) mogu biti deprotonovane u karboksilatnu grupu (-COO-) i/ili jedna ili više amino grupa (-NH2) mogu biti protonovane u –NH3<+>grupu. U nekim realizacijama semaglutid se dodaje kompoziciji u obliku soli.

Primena i kompleti

Kompozicija pronalaska je za parenteralnu primenu. U nekim realizacijama kompozicija je za subkutano davanje.

U nekim realizacijama kompozicija pronalaska je za primenu jednom nedeljno. U nekim realizacijama kompozicija pronalaska je za primenu jednom dnevno, jednom svakog drugog ili jednom svakog trećeg dana.

U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na komplet koji sadrži farmaceutsku kompoziciju kako je ovde definisano i uputstva za upotrebu. U nekim realizacijama uputstva za upotrebu sadrže umetak pakovanja leka.

U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na komplet koji sadrži farmaceutsku kompoziciju kako je ovde definisano i uređaj za injekciju. U nekim realizacijama uređaj za injekciju se bira iz grupe koja sadrži trajno penkalo i unapred napunjeno penkalo. Primeri trajnih penkala su NovoPen®4 ili NovoPen®5 (obe iz kompanije Novo Nordisk A/S, Danska). Primer unapred napunjenog penkala je FlexPen® (Novo Nordisk A/S, Danska).

Indikacije

U nekim realizacijama kompozicije pronalaska su za upotrebu u medicini. U nekim realizacijama kompozicija pronalaska se može koristiti za sledeće medicinske tretmane:

(i) prevenciju i/ili lečenje svih oblika dijabetesa, kao što su hiperglikemija, dijabetes tipa 2, poremećena tolerancija na glukozu, dijabetes tipa 1, insulin nezavisni dijabetes, MODY (dijabetes sa ranom postavkom kod mladih), gestacijski dijabetes, i/ili za smanjenje HbA1c;

(ii) odlaganje ili sprečavanje progresije dijabetske bolesti, kao što je progresija dijabetesa tipa 2, odlaganje progresije poremećene tolerancije na glukozu (IGT) na dijabetes tipa 2 koji zahteva insulin, i/ili odlaganje progresije dijabetesa tipa 2 koji ne zahteva insulin na dijabetes tipa 2 koji zahteva insulin;

(iii) prevenciju i/ili lečenje poremećaja u ishrani, kao što je gojaznost, npr. smanjenjem unosa hrane, smanjenjem telesne težine, suzbijanjem apetita, izazivanjem sitosti; lečenje ili sprečavanje poremećaja prejedanja, bulimije i/ili gojaznosti izazvane primenom antipsihotika ili steroida; smanjenje pokretljivosti želuca; i/ili odlaganje pražnjenja želuca.

U nekim realizacijama indikacija je (i). U nekim realizacijama indikacija je (ii). U još jednom posebnom aspektu indikacija je (iii). U nekim realizacijama, indikacija je dijabetes tipa 2 i/ili gojaznost.

U nekim realizacijama postupak ili upotreba obuhvata prevenciju, lečenje, smanjenje i/ili indukciju u jednoj ili više bolesti ili stanja definisanih ovde. U nekim realizacijama indikacija je (i) i (iii). U nekim realizacijama indikacija je (ii) i (iii). U nekim realizacijama pronalazak obuhvata davanje efikasne količine GLP-1 peptida. U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na davanje efikasne količine GLP-1 peptida.

Uopšteno, svi subjekti koji pate od gojaznosti takođe se smatraju da imaju problem s preteranom telesnom težinom. U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na postupak za lečenje ili prevenciju gojaznosti. U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na upotrebu kompozicije u lečenju ili prevenciji gojaznosti. U nekim realizacijama subjekt koji pati od gojaznosti je čovek, kao što je odrasla osoba ili mlada osoba (uključujući bebe, decu i adolescente). Indeks telesne mase (BMI) je mera telesne masti zasnovana na visini i težini. Formula za izračunavanje je BMI = težina u kilogramima/visina u metrima)<2>. Ljudski subjekt koji pati od gojaznosti može imati BMI od ≥30; ovaj subjekt se takođe može nazvati gojaznim. U nekim realizacijama ljudski subjekt koji pati od gojaznosti može imati BMI ≥35 ili BMI u rasponu od ≥30 do <40. U nekim realizacijama gojaznost je teška gojaznost ili ekstremna gojaznost, pri čemu ljudski subjekt može imati BMI ≥40.

U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na postupak za lečenje ili prevenciju prekomerne težine, opcionalno u prisustvu najmanje jednog komorbiditeta koji je povezan sa težinom. U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na upotrebu kompozicije za lečenje ili prevenciju prekomerne težine, opcionalno u prisustvu najmanje jednog komorbiditeta koji je povezan sa težinom. U nekim realizacijama subjekt koji pati od prekomerne težine je čovek, kao što je odrasla osoba ili mlada osoba (uključujući bebe, decu i adolescente). U nekim realizacijama ljudski subjekt koji pati od prekomerne težine može imati BMI ≥25, kao što je BMI ≥27. U nekim realizacijama ljudski subjekt koji pati od prekomerne težine ima BMI u rasponu od 25 do <30 ili u rasponu od 27 do <30. U nekim realizacijama komorbiditet povezan sa težinom je izabran iz grupe koju čine hipertenzija, dijabetes (kao što je dijabetes tipa 2), dislipidemija, visok holesterol i opstruktivna apneja u snu.

U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na postupak za smanjenje telesne težine. U nekim realizacijama pronalazak se odnosi na upotrebu kompozicije za smanjenje telesne težine. Čovek koji će biti podvrgnut redukciji telesne težine prema predmetnom pronalasku može imati BMI ≥25, kao što je BMI ≥27 ili BMI ≥30. U nekim realizacijama čovek koji će biti podvrgnut redukciji telesne težine prema predmetnom pronalasku može imati BMI ≥35 ili BMI ≥40. Izraz „redukcija telesne težine“ može da uključuje lečenje ili prevenciju gojaznosti i/ili prekomerne težine.

U nekim realizacijama, kako se ovde koriste, specifične vrednosti date u odnosu na brojeve ili intervale mogu se shvatiti kao specifična vrednost ili kao oko specifične vrednosti (npr. plus ili minus 10 procenata od određene vrednosti).

Realizacije pronalaska

Neograničavajuće realizacije pronalaska su sledeće:

1. Tečna farmaceutska kompozicija za parenteralno davanje koja sadrži semaglutid i ne više od 0,01 %(m/m) fenola, pri čemu je navedena kompozicija vodeni rastvor koji sadrži najmanje 60 %m/m vode; i/ili dalje sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa izabranih iz grupe koju čine pufer i izotonično sredstvo.

2. Tečna farmaceutska kompozicija koja sadrži semaglutid i suštinski ne i fenol.

3. Kompozicija prema realizacijama 1 ili 2, pri čemu navedena kompozicija ne sadrži fenol.

4. Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je navedena kompozicija vodeni rastvor koji sadrži najmanje 60 %m/m vode, kao što je najmanje 70 %m/m vode ili najmanje 80 %m/m vode.

5. Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je koncentracija semaglutida 0,5-10 mg/mL navedene kompozicije.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je navedeni semaglutid u obliku farmaceutski prihvatljive soli.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu navedena kompozicija sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu navedena kompozicija sadrži jedno ili više sredstava za podešavanje pH, kao što je HCl, NaOH, ili acetat. Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu navedena kompozcija sadrži pufer i/ili izotonično sredstvo.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je navedeni pufer prisutan u koncentraciji 0,01-50 mM navedene kompozicije.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je navedeni pufer fosfatni pufer.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je navedeni fosfatni pufer izabran iz grupe koja sadrži natrijum dihidrogen fosfat, natrijum hidrogen fosfat, i natrifjum fosfat.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je navedeno izotonično sredstvo prisutno u koncentraciji od 8 mg/ml do 50 mg/ml, kao što je 14 mg/ml do 30 mg/ml, navedene kompozicije.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je izotonično sredstvo propilen glikol.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu navedena kompozicija ne sadrži konzervans.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu navedena kompozicija ima pH u rasponu od 6,0-10,0.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je navedena kompozicija za parenteralno davanje.

Kompozicija prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je navedena kompozicija za subkutano davanje.

Komplet koji sadrži farmaceutsku kompoziciju definisanu u bilo kojoj od prethodnih realizacija i uputstvima za upotrebu.

Komplet koji sadrži farmaceutsku kompoziciju definisanu u bilo kojoj od prethodnih realizacija i uređaj za injektiranje za davanje navedene kompozicije subjektu, pri čemu je navedeni uređaj za injektiranje izabran iz grupe koju čine trajno penkalo i unapred napunjeno penkalo.

Farmaceutska kompozicija kao što je definisana u bilo kojoj od prethodnih realizacija za upotrebu u medicini.

22. Farmaceutska kompozicija za upotrebu definisanu u bilo kojoj od prethodnih realizacija za upotrebu u lečenju dijabetesa ili gojaznosti.

23. Postupak prevencije ili lečenja dijabetesa ili gojaznosti, pri čemu se farmaceutska kompozicija definisana u bilo kojoj od prethodnih realizacija daje subjektu kome je to potrebno.

PRIMERI

Opšti postupci i karakterizacija

Priprema kompozicije semaglutida:

Ako nije drugačije naznačeno, kompozicije semaglutida su pripremljene rastvaranjem pufera (dinatrijum hidrogen fosfat dihidrata), izotoničnog sredstva (npr. propilen glikol), i opcionalno konzervansa (fenola) u vodi. Semaglutid je rastvoren u njemu, pH je podešen na 7,4 korišćenjem natrijum hidroksida i/ili hlorovodonične kiseline, i kompozicija je na kraju sterilisana filtracijom kroz sterilni filter od 0,22 µm.

Priprema kompozicija liraglutida:

Ako nije drugačije naznačeno, kompozicije liraglutida su pripremljene iz Rastvora 1 i Rastvora 2: Rastvor 1 je pripremljen rastvaranjem pufera (dinatrijum hidrogen fosfat dihidrata), izotoničnog sredstva (manitol), i opcionalno konzervansa (fenola) u vodi. Rastvor 2 je pripremljen rastvaranjem liraglutida uz lagano mešanje. Rastvor 1 i Rastvor 2 su pomešani, pH je podešen na 8,15 korišćenjem natrijum hidroksida i/ili hlorovodonične kiseline, i kompozicija je na kraju sterilisana filtracijom kroz sterilni filter od 0,22 µm.

Test (I): Određivanje sadržaja proteina visoke molekularne težine (HMWP) u kompozicijama semaglutida

Određivanje sadržaja HMWP je izvršeno korišćenjem hromatografije za isključivanje po veličini (SE-HPLC) korišćenjem Waters Insulin HMWP kolone sa mobilnom fazom natrijum hlorida, natrijum fosfata, fosforne kiseline i izopropanola, izokratskim eluiranjem i detekcijom na 280 nm. Sadržaj HMWP je dat u % kao kombinovana površina hromatografskih pikova koji eluiraju ranije od pikova semaglutidnog monomera (tj. HMWP pikova), u odnosu na ukupnu površinu pikova HMWP i semaglutidnog monomera.

Test (II): Fizička stabilnost kompozicije semaglutida procenjena putem ThT

Svrha ovog testa je da proceni fizičku stabilnost GLP-1 peptida u vodenom rastvoru.

Niska fizička stabilnost peptida ili proteina može dovesti do formiranja amiloidnih fibrila. Fibrile su strukturno dobro uređene, filamentozne makromolekularne strukture formirane agregacijom rastvorljivih proteina i kojima dominira beta struktura. Zrele fibrile su nerastvorljive i otporne su na degradaciju. Radi kvaliteta leka i bezbednosti pacijenata, poželjno je da se minimiziraju i kontrolišu događaji fibrilacije u farmaceutskim kompozicijama terapeutskih peptida i proteina. Agregacija proteina, uključujući fibrilaciju, može se proceniti vizuelnom inspekcijom uzorka. Fibrilacija se može proceniti upotrebom Tioflavina T (ThT), probe indikatora malih molekula sa visokom specifičnošću za fibrile. ThT ima jasan fluorescentni potpis kada se vezuje za fibrile u poređenju sa ThT u rastvoru [Naiki et al. (1989) Anal. Biochem.177, 244-249; LeVine (1999) Methods. Enzymol.309, 274-284].

Formiranje delimično savijenog intermedijera peptida se predlaže kao opšti mehanizam iniciranja fibrilacije. Mala količina ovih intermedijara stvara jezgro kako bi formirala šablon na koji se mogu sastaviti dalji intermedijeri i fibrilacija se nastavlja. Vreme kašnjenja odgovara intervalu u kome se stvara kritična količina jezgara, a prividna konstanta brzine je brzina kojom se formira sam fibril. Vreme kašnjenja opisano u ThT testu izvedenom na čitaču ploča se stoga smatra indikativnim za sklonost fibrilaciji peptidne kompozicije u rastvoru.

Pre izvođenja testa, ThT je dodat uzorcima iz osnovnog rastvora u H2O do konačne koncentracije od 20 μM u uzorcima. Alikvoti uzoraka od 200 μl kompozicije koja sadrži GLP-1 peptid stavljeni su u mikrotitarsku ploču sa 96 ležišta (optički 0,4 mL crni Thermo Scientific Nunc) sa staklenom perlom (2,8-3,2 mm, Whitehouse Scientific) postavljenom u svako ležište. Obično, na ploču se stavljalo osam replika svakog uzorka. Ploča je zapečaćena zaptivnom trakom (Thermo Scientific Nunc).

Inkubacija na datoj temperaturi, mućkanje i merenje emisije ThT fluorescencije su izvedeni u BMG FLUOStar Omega ili BMG FLUOStar Optima. Ploča je inkubirana na 40°C uz dvostruko orbitalno mućkanje na 300 rpm sa amplitudom od 2 mm. Merenje fluorescencije je izvršeno pobudom kroz filter od 450 nm i merenjem emisije kroz filter od 480 nm. Ploča je merena svakih 20 minuta tokom željenog vremenskog perioda. Između svakog merenja, ploča je protresena i zagrejana kako je opisano.

Vrednost praga je određena kao najviša ThT fluorescencija (u relativnim fluorescentnim jedinicama (RFU)) merena na ploči u vremenu 1 č 13 min, plus 100 RFU. Vrednost praga je zatim korišćena za izračunavanje vremena kašnjenja korišćenjem metode „vreme do praga“ u softveru BMG FLUOstar.

Test (III): Određivanje čistoće liraglutida

Određivanje čistoće je izvedeno korišćenjem tečne hromatografije visokih performansi (HPLC) korišćenjem Waters KSTerra™ MS C18 kolone sa gradijentom eluiranja dve mobilne faze, gde je jedna mobilna faza bila vodeni amonijum fosfatni pufer (pH 8)/acetonitril mešavina, a druga mobilna faza je acetonitril u vodi. Detekcija je vršena na 215 nm.

Test (IV): Određivanje zbira primesa liraglutida

Određivanje čistoće semaglutida je izvedeno korišćenjem reverzne faze tečne hromatografije visokih performansi (RP-HPLC) korišćenjem Kinetex C18 kolone sa izokratskim eluiranjem koju sledi gradijent eluiranja dve mobilne faze, gde je jedna mobilna faza bila vodeni fosfatni pufer/acetonitril mešavina, a druga mobilna faza je acetonitril/izopropranol mešavina. Detekcija je vršena na 210 nm. Čistoća semaglutida je data kao zbir nečistoća u % kao kombinovana površina svih hromatografskih pikova u odnosu na pikove monomera semaglutida.

Primer 1: Semaglutid

Kompozicije koje sadrže semaglutid su testirane u ovom eksperimentu. Testirane kompozicije su sadržale semaglutid (kao što je navedeno u Tabeli 1), propilen glikol (14 mg/ml), dinatrijum hidrogen fosfat dihidrat (1,42 mg/ml) i opcionalno fenol (5,5 mg/ml) (kao što je navedeno u Tabeli 1), na pH 7,4 u vodenom rastvoru. Ove kompozicije su pripremljene kako je opisano u odeljku Opšti postupci pripreme. Hemijska stabilnost kao što je izražena u HMWP utvrđena je pomoću Testa (I) ovde opisanog na početku eksperimenta i posle skladištenja na 25°C, 30°C ili na 37°C. Fizička stabilnost izražena testom Tioflavin T (ThT) utvrđena je pomoću Testa (II) ovde opisanog.

Rezultati su dati u Tabeli 2 i 3. Iznenađujuće, ovi rezultati pokazuju da su fizička i hemijska stabilnost semaglutida poboljšane u kompozicijama bez fenola u odnosu na one sa fenolom. Rezultati prikazani u Tabeli 3 su prosek 8 testirani uzoraka.

Tabela 1. Kompozicije testirane u Primeru 1.

Tabela 2. Hemijska stabilnost kompozcija semaglutida, kao što je izraženo u sadržaju proteina visoke molekularne težine (HMWP) posle skladištenja na različitim temperaturama. Niža koncentracija HMWP odgovara boljoj hemijskoj stabilnosti.

Tabela 3. Fizička stabilnost kompozicija semaglutida izražena testom tioflavina T (ThT). Duže vreme kašnjenja odgovara boljoj fizičkoj stabilnosti.

Primer 2 (Referentni): Liraglutid

Rezultati iz Primera 1 su takođe iznenađujući u pogledu činjenice da je GLP-1 jedinjenje liraglutida – suprotno semaglutidu – manje stabilno u kompoziciji bez fenola. Ovi rezultati su prikazani u Tabeli 5.

Rezultati iz Tabele 5 dobijeni su na sledeći način: Testirane su kompozicije koje sadrže liraglutid. Testirane kompozicije su sadržavale liraglutid (kao što je opisano u Tabeli 4), mannitol (36,9 mg/ml), dinatrijum hidrogen fosfat (1,42 mg/ml), i opcionalno fenol (kao što je opisano u Tabeli 4) na pH 7,4 u vodenom rastvoru. Ove kompozicije su pripremljene kako je ovde opisano u odeljku Opšti postupci pripreme. Hemijska stabilnost izražena čistoćom utvrđena je Testom (III) ovde opisanom na početku eksperimenta i posle skladištenja na 25°C ili na 37°C.

Tabela 4. Kompozicije testirane u Primeru 2.

Tabela 5. Hemijska stabilnosti, izražena čistoćom, kompozicija koje sadrže liraglutid posle skladištenja na različitim temperaturama. Veća čistoća odgovara boljoj hemijskoj stabilnosti.

Primer 3: Semaglutid – dodatni eksperimenti

Kompozicije koje sadrže semaglutid su testirane u ovom eksperimentu. Testirane kompozicije su sadržavale semaglutid, izotonično sredstvo (propilen glikol (14 mg/ml) ili natrijum hlorid (6,3 mg/ml), opcionalno pufer (dinatrijumhidrogenfosfat dihidrat (1,42 mg/ml), ili trinatrijumcitrat dihidrat (2,35 mg/ml), i opcionalno fenol (5,5 mg/ml ili 0,1 mg/ml), na pH 7,0, 7,4 ili 7,8 u vodenom rastvoru; detalji svake testirane kompozicije su prikazani u Tabeli 6. Kompozicije su pripremljene kako je ovde opisano u odeljku Opšti postupci pripreme. Hemijska stabilnost kao što je izražena HMWP je određena Testom (I) i kao što je izraženo zbirom nečistoća određena je Testom (IV) ovde opisanom na početku eksperimenta i posle skladštenja na 30ºC. Fizička stabilnost izražena testom Tioflavina T (ThT) određena je Testom (II) koji je ovde opisan.

Rezultati su dati u Tabelama 7 i 8. U skladu sa rezultattima iz Primer 1, ovi rezultati pokazuju da su fizička stabilnost i hemijska stabilnost semaglutida bili poboljšani u kompozicijama bez ili sa niskom koncentracijom fenola u odnosu na one sa fenolom od 5,5 mg/ml. Rezultati pokazuju da su fizička stabilnost i hemijska stabilnost semaglutida bili takođe poboljšani u kompozicijama sa fenolom koji sadrži ili pufer trinatrijumcitrat dihidrat ili bez pufera ili izotoničnog sredstva natrijum hlorida, u odnosu na ove sa fenolom. Hemijska i fizička stabilnost su poboljšane za kompozicije sa 0,1 mg/ml fenola u odnosu na kompozcije sa 5,5 mg/ml fenola i slično kompozicijama bez fenola. Ovo je prikazano za kompozicije sa pH 7,0-7,8 i koncentraciju semaglutida 0,1-10 mg/ml.

Tabela 6. Kompozicije testirane u Primeru 3.

*) Fos: Dinatrijumhidrogenfosfat dihidrat, 1,42 mg/ml. **) PG: Propilen glikol, 14 mg/ml. ***) Citrat: Trinatrijumcitrat dihidrat, 2,35 mg/ml.<#>) Nijedan: Nijedan farmaceutski ekscipijens nije dodat u obliku pufera.<##>) NaCl: Narijum hlorid, 6,3 mg/ml.

Tabela 7. Hemijska stabilnost kompozicija semaglutida, kao što je izražena sadržajem proteina visoke molekularne težine (HMWP) i zbira nečistoća, posle skladištenja na temperaturi od 30ºC. Niža koncentracija HMWP i zbira koncentracije nečistoća odgovara boljoj hemijskog stabilnosti.

DS: Semaglutid.<1>Nema fizičke stabilnosti > 1 mesec na 30ºC.

Tabela 8. Fizička stabilnost kompozicija semaglutida izražena testom tioflavina T (ThT). Duže vreme kašnjenja odgovara boljoj fizičkoj stabilnosti.

Rezultati su prosek za 8 testiranih uzoraka. DS: Semaglutid.

Claims

PATENTNI ZAHTEVI

1. Tečna farmaceutska kompozicija za parenteralno davanje koja sadrži semaglutid i ne više od 0,01 %(m/m) fenola, naznačena time što je navedena kompozicija

a. vodeni rastvor koji sadrži najmanje 60 %m/m vode; i/ili

b. dalje sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa izabranih iz grupe koju čine pufer ili izotonično sredstvo.

2. Kompozicija prema zahtevu 1, naznačena time što ne sadrži fenol.

3. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time što je koncentracija semaglutida 0,5-10 mg/ml ili 0,01-5 mg/ml navedene kompozicije.

4. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time što je koncentracija semaglutida 0,5-5 mg/ml navedene kompozicije.

5. Kompozicija prema zahtevu 1 ili zahtevu 2, naznačena time što je koncentracija semaglutida najmanje 0,01 mg/ml semaglutida i ne više od 4 mg/ml semaglutid.

6. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time što je navedeni pufer prisutan u koncentraciji 0,01-50 mM navedene kompozicije.

7. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time, što je navedeni pufer fosfatni pufer.

8. Kompozicija prema zahtevu 6, naznačena time što je fosfatni pufer izabran iz grupe koja sadrži natrijum dihidrogen fosfat, dinatrijum hidrogen fosfat, i natrijum fosfat.

9. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time što je navedeno izotonično sredstvo propilen glikol ili natrijum hlorid.

10. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time, što kompozicija ne sadrži konzervans.

11. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time što data kompozicija ima pH u rasponu od 6,0-10,0.

12. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time što data kompozicija ima pH u rasponu od pH 7,0-7,8.

13. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačena time, što je data kompozicija za subkutano davanje.

14. Komplet koji sadrži tečnu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži semaglutid i ne više od 0,01 %(m/m) fenola i uputstvo za upotrebu.

15. Komplet koji sadrži tečnu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži semaglutid i ne više od 0,01 %(m/m) fenola i injekcioni uređaj za davanje navedene kompozicije subjektu, naznačen time što je injekcioni uređaj izabran iz grupe koju čine trajni pen i napunjeni pen.

16. Komplet prema zahtevu 14 ili 15, naznačen time što je navedena farmaceutska kompozicija definisana u jednom od zahteva 1-13.

17. Farmaceutska kompozicija kao što je definisana u bilo kom od prethodnih zahteva za upotrebu u medicini.

18. Farmaceutska kompozicija kao što je definisano u bilo kom od prethodnih zahteva za upotrebu u lečenju dijabetesa ili gojaznosti.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Kneginje Ljubice 5, 11000 Beograd

19