RS66084B1 - Jedinjenja koja sadrže nitril za upotrebu kao lekovi - Google Patents

Jedinjenja koja sadrže nitril za upotrebu kao lekovi

Info

Publication number
RS66084B1
RS66084B1 RS20241168A RSP20241168A RS66084B1 RS 66084 B1 RS66084 B1 RS 66084B1 RS 20241168 A RS20241168 A RS 20241168A RS P20241168 A RSP20241168 A RS P20241168A RS 66084 B1 RS66084 B1 RS 66084B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
compound
methyl
mmol
oxopyrrolidin
ethyl
Prior art date
Application number
RS20241168A
Other languages
English (en)
Inventor
Dafydd Rhys Owen
Martin Youngjin Pettersson
Matthew Richard Reese
Matthew Forrest Sammons
Jamison Bryce Tuttle
Patrick Robert Verhoest
Liuqing Wei
Qingyi Yang
Xiaojing Yang
Original Assignee
Pfizer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=77411985&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS66084(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Pfizer filed Critical Pfizer
Publication of RS66084B1 publication Critical patent/RS66084B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/401—Proline; Derivatives thereof, e.g. captopril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/26—2-Pyrrolidones
    • C07D207/263—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms
    • C07D207/267—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D497/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having oxygen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D497/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having oxygen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D497/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)

Description

Opis
Osnova pronalaska
[0001] Pronalazak se odnosi na jedinjenja za upotrebu kao lek, pri čemu su jedinjenja korisna u postupcima inhibicije aktivnosti replikacije virusa koji se sastoje od dovođenja u kontakt SARS-CoV-2 srodne 3C-slične ("3CL") proteinaze sa terapeutski efikasnom količinom inhibitora SARS-CoV-2 srodne 3C-slične proteaze. Jedinjenja su takođe korisna u postupcima lečenja COVID-19 kod pacijenata davanjem terapeutski efikasne količine inhibitora SARS-CoV-2 srodne 3C-slične proteaze pacijentu kome je to potrebno. Jedinjenja su dodatno korisna u postupcima lečenja COVID-19 kod pacijenata, pri čemu postupak obuhvata davanje farmaceutske kompozicije koja sadrži terapeutski efikasnu količinu inhibitora SARS-CoV-2 srodne 3C-slične proteaze pacijentu kome je to potrebno.
[0002] Svetska epidemija bolesti korona virusa 2019 („COVID-19“) povezana je sa njegovim pojavljivanjem krajem 2019. godine u Vuhanu, provincija Hubej, Kina. Do sredine 2020. godine izbijanje COVID-19 je evoluiralo u globalnu pandemiju sa milionima ljudi koji su potvrđeni kao zaraženi, što je rezultovalo stotinama hiljada smrtnih slučajeva. Uzročnik COVID-19 identifikovan je kao novi koronavirus koji je nazvan Teški akutni respiratorni sindrom Korona virus 2 („SARS-CoV-2“). Sekvenca genoma SARS-CoV-2 je sekvencionirana iz izolata dobijenih od devet pacijenata u Vuhanu u Kini i utvrđeno je da pripada podrodu Sarbecovirus roda Betacoronavirus. Lu, R. et al. The Lancet, 395, 10224, 565-574; onlajn 29. januara, 2020. Utvrđeno je da sekvenca SARS-CoV-2 ima 88% homologije sa dva koronavirusa slična SARS-u, bat-SL-CoVZC45 i bat-SL-CoVZXC21, koji su prikupljeni 2018. u Zhoushanu, u istočnoj Kini. Takođe je utvrđeno da SARS-CoV-2 deli oko 79% homologije sa virusom korona teškog akutnog respiratornog sindroma („SARS-CoV“), uzročnikom izbijanja SARS-a 2002-2003, i oko 50% homologije sa respiratornim sindromom korona virusa sa Bliskog istoka („MERS-CoV“), koji je uzročnik respiratorne virusne epidemije koja je nastala na Bliskom istoku 2012. Na osnovu nedavne analize 103 sekvencirana genoma SARS-CoV-2, predloženo je da se SARS-CoV- 2 može podeliti na dva glavna tipa (L i S tip) pri čemu je S tip predak i L tip koji je evoluirao iz S-tipa. Lu, J.; Cui, J. et al. On the origin and continuing evolution of SARS-CoV-2; National Science Review, 7(6), June 2020, 1012-1023, http://doi.org/10.1093/nsr/nwaa036. S i L tipovi mogu biti jasno definisani sa samo dva čvrsto povezana SNP-a na pozicijama 8.782 (orf1ab:T8517C, sinonim) i 28.144 (ORF8: C251T, S84L). U 103 analizirana genoma približno 70% je bilo L-tipa i približno 30% S-tipa. Nejasno je da li se evolucija L-tipa od S-tipa dogodila kod ljudi ili preko zoonotskog intermedijera, ali izgleda da je L-tip agresivniji od S-tipa i ljudska intervencija u pokušaju suzbijanja izbijanja možda je promenila relativno obilje L i S tipova ubrzo nakon što je počela epidemija SARS-CoV-2. Otkriće predloženih S- i L- podtipova SARS-CoV-2 otvara mogućnost da bi pojedinac mogao biti inficiran uzastopno sa pojedinačnim podtipovima ili biti zaražen sa oba podtipa u isto vreme. S obzirom na ovu pretnju koja se razvija, postoji akutna potreba u struci za efikasnim tretmanom za COVID-19 i za postupci inhibicije replikacije SARS-CoV-2 koronavirusa.
[0003] Nedavni dokazi jasno pokazuju da je novonastali koronavirus SARS-CoV-2, uzročnik COVID-19 (Centers for Disease Control, CDC), stekao sposobnost prenošenja sa čoveka na čoveka što dovodi do širenja virusa u zajednici. Sekvenca SARS-CoV-2 domena koji vezuje receptor za spajk protein („RBD“), uključujući njegov motiv vezivanja za receptore (RBM) koji direktno dolazi u kontakt sa receptorom enzima koji konvertuje angiotenzin 2, ACE2, slična je RBD i RBM SARS-CoV, što snažno ukazuje na to da SARS-CoV-2 koristi ACE2 kao svoj receptor. Wan, Y.; Shang, J.; Graham, R.; Baric, R.S.; Li, F.; Receptor recognition by the novel coronavirus from Wuhan: An analysis based on decade-long structural studies of SARS coronavirus; J. Virol. 2020; doi:10.1128/JVI.00127-20. Nekoliko kritičnih ostataka u SARS-CoV-2 RBM (posebno Gln<493>) obezbeđuju povoljne interakcije sa humanim ACE2, u skladu sa kapacitetom SARS-CoV-2 za infekciju ljudskih ćelija. Nekoliko drugih kritičnih ostataka u RBM-u SARS-CoV-2 (posebno Asn<501>) su kompatibilni, ali nisu idealni za vezivanje humanog ACE2, što sugeriše da SARS-CoV-2 na neki način koristi vezivanje ACE2 za prenos sa čoveka na čoveka.
[0004] Funkcija replikacije i transkripcije koronavirusa je kodirana takozvanim genom "replikaze" (Ziebuhr, J., Snijder, E.J., and Gorbalenya, A.E.; Virus-encoded proteinases and proteolytic processing in the Nidovirales. J. Gen. Virol. 2000, 81, 853-879; and Fehr, A.R.; Perlman, S.; Coronaviruses: An Overview of Their Replication and Pathogenesis, Methods Mol. Biol. 2015; 1282: 1-23. doi:10.1007/978-1-4939-2438-7_1), koji se sastoji od dva poliproteina koji se preklapaju koji su u velikoj meri obrađeni virusnim proteazama. C-proksimalni region se obrađuje na jedanaest očuvanih međudomenskih spojeva pomoću glavne proteaze koronavirusa ili proteaze slične 3C (Ziebuhr, Snijder, Gorbalenya, 2000 i Fehr, Perlman et al., 2015). Naziv proteaza „slična 3C“ potiče od određenih sličnosti između enzima koronavirusa i dobro poznatih pikornavirusnih 3C proteaza. Ovo uključuje preferencije supstrata, upotrebu cisteina kao nukleofila aktivnog mesta u katalizi i sličnosti u njihovim pretpostavljenim ukupnim polipeptidnim naborima. Xu, J.; Zhao, S.; Teng, T.; Abdalla, A.E.; Zhu, W.; Xie, L.; Wang, Y.; Guo, X.; Systematic Comparison of Two Animal-to-Human Transmitted Human Coronaviruses: SARS-CoV-2 and SARS-CoV; Viruses 2020, 12, 244; doi:10.3390/v12020244. Nedavno su Hilgenfeld i kolege objavili rendgensku strukturu visoke rezolucije glavne proteaze koronavirusa SARS-CoV-2 (3CL) Zhang, L.; Lin, D.; Sun, X.; Rox, K.; Hilgenfeld, R.; X-ray Structure of Main Protease of the Novel Coronavirus SARS-CoV-2 Enables Design of α-Ketoamide Inhibitors; bioRxiv preprint doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.17.952879. Struktura ukazuje da postoje razlike kada se uporede 3CL proteaze SARS-CoV-2 i SARS-CoV. U SARS-CoV, ali ne i u dimeru proteaze SARS-CoV-2 3CL, postoji polarna interakcija između dva domena III koja uključuje vodoničnu vezu od 2.60 Å između hidroksilnih grupa bočnog lanca ostatka Thr<285>svakog protomera, i podržan hidrofobnim kontaktom između bočnog lanca Ile<286>i Thr<285>Cγ2. U SARS-CoV-2 3CL, treonin je zamenjen alaninom, a izoleucin leucinom u poređenju sa istim ostacima u SARS-CoV 3CL. Zamena Thr285Ala primećena u SARS-CoV-2 3CL proteazi omogućava da se dva domena III približe jedan drugom nešto bliže (razdaljina između Cα atoma ostataka 285 u molekulima A i B je 6.77 A u SARS-CoV 3CL proteazi i 5.21 A u SARS-CoV-2 3CL proteazi i rastojanje između centara mase dva domena III se smanjuje sa 33.4 A na 32.1 A). Na aktivnom mestu SARS-CoV-23CL, Cys<145>i His<41>formiraju katalitičku dijadu, koja kada se uzme zajedno sa zakopanim molekulom vode koji je preko vodonika vezan za His<41>može se smatrati da čini katalitičku trijadu SARS-CoV-2 3CL proteaze. S obzirom na tekuće širenje SARS-CoV-2 koje je izazvalo trenutnu epidemiju COVID-19 širom sveta, poželjno je imati nove postupke za inhibiciju replikacije virusa SARS-CoV-2 i za lečenje COVID-19 kod pacijenata.
[0005] Međunarodna patentna objava WO-2005/113580 opisuje antikoronavirusna jedinjenja koja su inhibitori SARS 3C-slične proteaze.
[0006] U članku "Inhibition of enterovirus 71 replication by an α-hydroxy-nitrile derivative NK-1.9k" (Antiviral Research, 141, 2017, 91-100), Vang et al opisuju specifično jedinjenje za koje se kaže da je potencijalni tretman za bolesti slinavke i šapa.
Rezime pronalaska
[0007] Ovaj pronalazak obezbeđuje nova jedinjenja za upotrebu kao lek, pri čemu jedinjenja deluju tako što inhibiraju ili sprečavaju replikaciju virusa SARS-CoV-2 i stoga su korisna u lečenju COVID-19.
[0008] Jedinjenja obezbeđena ovim pronalaskom za upotrebu kao lek, izabrana od jedinjenja E11 kako je definisano u nastavku, spadaju u obim Formule I
i njegove farmaceutski prihvatljive soli; pri čemu je R<1>je izabran iz grupe koju čine C1-C6alkil koji je izborno supstituisan sa cijano ili sa jednim do pet fluora; C2-C6alkinil; i (C3-C6cikloalkil)-C1-C3alkil koji je izborno supstituisan sa jednim do dva supstituenta izabrana od trifluorometila i C1-C3alkil ili sa jednim do pet fluora; R<2>je vodonik ili R<2>i R<1>uzeti zajedno sa atomima azota i ugljenika za koje su vezani su pirolidinski ili piperidinski prsten koji je izborno supstituisan sa jednim do četiri R<2a>; R<2a>pri svakom pojavljivanju je nezavisno izabran iz grupe koju čine fluoro, C1-C6alkil izborno supstituisan sa jednim do tri fluora i C1-C6alkoksi izborno supstituisan sa jednim do tri fluora; ili dve R<2a>grupe kada su vezane za susedne ugljenike i uzete zajedno sa ugljenicima za koje su vezane su spojeni C3-C6cikloalkil koji je izborno supstituisan sa jednim do četiri R<2b>; ili dve R<2a>grupe kada su vezane za isti ugljenik i uzete zajedno sa ugljenikom za koji su vezane su spiro C3-C6cikloalkil koji je izborno supstituisan sa jednim do četiri R<2b>; R<2b>pri svakom pojavljivanju je nezavisno izabran od fluora, C1-C3alkil izborno supstituisan sa jednim do tri fluora, i C1-C3alkoksi izborno supstituisan sa jednim do tri fluora; R<3>je izabran iz grupe koju čine C1-C8alkil, C1-C8alkoksi, (C1-C6alkoksi)-C1-C6alkil, C2-C6alkinil, C2-C6alkiniloksi, C3-C12cikloalkil izborno fuzionisan sa 5- do 6-članim heteroarilom ili fenilom, (C3-C12cikloalkil)-C1-C6alkil, C3-C12cikloalkoksi, (C3-C12cikloalkoksi)-C1-C6alkil, 4-do 12-člani heterocikloalkil koji je izborno fuzionisan sa 5- do 6-članim heteroarilom ili fenilom i gde pomenuti heterocikloalkil sadrži jedan do četiri heteroatoma nezavisno odabrana od N, O i S(O)n, (4- do 12-člani heterocikloalkil)-C1-C6alkil gde pomenuti heterocikloalkil deo sadrži jedan do četiri heteroatoma nezavisno izabrana između N, O i S(O)n, C6-C10aril izborno fuzionisan sa C4-C6cikloalkil ili 4- do 7-člani heterocikloalkil, (C6-C10aril)-C1-C6alkil, 5- do 10-člani heteroaril koji sadrži jedan do pet heteroatoma nezavisno izabranih između N, O i S, koji je izborno fuzionisan sa C5-C6cikloalkil; (5- do 10-člani heteroaril)-C1-C6alkil gde heteroaril deo sadrži jedan do pet heteroatoma nezavisno odabranih od N, O i S; (C6-C10aril)-(5-do 10-člani heteroaril)- gde heteroaril deo sadrži jedan do pet heteroatoma nezavisno izabranih između N, O i S, (5- do 10-člani heteroariloksi)-C1-C6alkil gde heteroaril deo sadrži jedan do pet heteroatoma nezavisno odabranih od N, O i S; (5- do 6-člani heteroaril)-(5- do 6-člani heteroaril)- gde svaki heteroaril deo sadrži jedan do četiri heteroatoma nezavisno izabrana između N, O i S; (4- do 7-člani heterocikloalkil)-(5- do 6-člani heteroaril)- gde heterocikloalkil deo sadrži jedan do tri heteroatoma nezavisno izabrana između N, O i S(O)ni heteroaril deo sadrži jedan do četiri heteroatoma nezavisno odabrana od N, O i S; (5- do 6-člani heteroaril)-(4-do 7-člani heterocikloalkil)-gde heterocikloalkil deo sadrži jedan do tri heteroatoma nezavisno odabrana od N, O i S(O)ni heteroaril deo sadrži jedan do četiri heteroatoma nezavisno odabrana od N, O i S; pri čemu svaka R<3>grupa je izborno supstituisana sa jednim do pet R<4>; R<4>pri svakom pojavljivanju je nezavisno izabran iz grupe koju čine okso, halo, hidroksi, cijano, fenil, benzil, amino, (C1-C6alkil)amino izborno supstituisan sa jednim do pet fluoro, di(C1-C6alkil)amino izborno supstituisan sa jednim do deset fluoro, C1-C6alkil izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, C1-C6alkoksi izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, C1-C3alkoksi-C1-C3alkil izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, C3-C6cikloalkil izborno supstituisan sa jednim do tri fluora ili C1-C3alkil, C1-C6alkil-C(O)NH- izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, C1-C6alkil-S(O)2NH- izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, C1-C6alkil-C(O)- izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, C1-C6alkilS(O)n- izborno supstituisan sa jednim do pet fluora; i n pri svakom pojavljivanju se nezavisno bira između 0, 1 i 2.
[0009] Ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje E11 koje je jedinjenje izabrano iz grupe koju čine
pri čemu je R<4>je izabran iz grupe koju čine (C1-C6alkil)amino izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, C1-C6alkil-C(O)NH- izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, i C1-C6alkil-S(O)2NH- izborno supstituisan sa jednim do pet fluora; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; za upotrebu kao lek.
[0010] E13 je jedinjenje E11 u kome R<4>je izabran iz grupe koju čine CF3C(O)NH-, CF3SO)2NH-, CH3C(O)NH-, CH3CH2C(O)NH- i CF3CH2NH-; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao lek.
[0011] E14 je jedinjenje E11 ili E13 u kome je R<4>je CF3C(O)NH- ili CF3SO)2NH-; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao lek.
[0012] E29 je jedinjenje E11 izabrano iz grupe koju čine:
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N -(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil) -L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
(2S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4,4-dimetil-1-[3-metil-N(trifluoroacetil) -L-valil]piperidin-2-karboksamid;
3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil- 4-(trifluorometil)-L-prolinamid;
(2S.4S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-{3-metil-N-[(trifluorometil )sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamid;
(2S,4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[N-(trifluoroacetil)-L-valil ]piperidin-2-karboksamid;
(2S,4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[3-metil-N-(metilsulfonil) -L-valil]piperidin-2-karboksamid;
(2S.4S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[N-(trifluoroacetil)-L-valil ]piperidin-2-karboksamid;
(2S.4S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[3-metil-N-(trifluoroacetil) -L-valil]piperidin-2-karboksamid;
(2S,4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[3-metil-N-(trifluoroacetil) -L-valil]piperidin-2-karboksamid;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-{(2S)-2-cikloheksil-2-[ (trifluoroacetil)amino]acetil}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(2,2,2-trifluoroetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(3, 3.3-trifluoropropanoil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-(N-propanoil-L -valil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
(2S,4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[N-(2,2,2- trifluoroetil)-L-valil]piperidin-2-karboksamid;
N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-(etoksikarbonil)-L-leucinamid;
N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-(etoksikarbonil)-4-metil-L-leucinamid; i (1R,2S,5S)-3-[N-(terc-butilsulfonil)-3-metil-L-valil]-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3 -il]etil}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao lek.
[0013] E30 je jedinjenje E11 izabrano iz grupe koju čine:
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil) -L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N (trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
(2S.4S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[N-(trifluoroacetil)-L-valil ]piperidin-2-karboksamid;
(2S.4S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[3-metil-N-(trifluoroacetil) -L-valil]piperidin-2-karboksamid;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-{(2S)-2-cikloheksil-2-[ (trifluoroacetil)amino]acetil}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid;
(2S.4S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-1-{3-metil-N-[(trifluorometil )sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamid;
3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil- 4-(trifluorometil)-L-prolinamid; i
(2S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4,4-dimetil-1-[3-metil-N-(trifluoroacetil) -L-valil]piperidin-2-karboksamid;
ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao lek.
[0014] E31 je farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski efikasnu količinu jedinjenja bilo kog od E11, E13, E14, E29 i E30 ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0015] E32 je farmaceutska kompozicija E31 pri čemu je kompozicija u obliku intravenskog, subkutanog, inhalacionog ili oralnog doznog oblika.
[0016] E33 je farmaceutska kompozicija E31 ili E32 pri čemu je kompozicija u oralnom doznom obliku.
[0017] E34 je farmaceutska kompozicija bilo kog od E31 do E33 koja dalje sadrži dodatni terapeutski agens.
[0018] E35 je farmaceutska kompozicija bilo kog od E31 do E34 gde farmaceutska kompozicija dalje sadrži jedan ili više od deksametazona, azitromicina i remdesivira.
[0019] E36 je jedinjenje bilo kog od E11, E13, E14, E29 i E30 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u postupku lečenja koronavirusne infekcije kod pacijenta, a postupak obuhvata davanje terapeutski efikasne količine bilo kog od jedinjenja E11, E13, E14, E29 i E30 ili njihove farmaceutski prihvatljive soli na pacijenta kome je to potrebno.
[0020] E37 je jedinjenje za upotrebu u postupku E36 gde je infekcija koronavirusom COVID-19.
[0021] E38 je farmaceutska kompozicija bilo kog od E31 do E35 za upotrebu u postupku lečenja koronavirusne infekcije kod pacijenta, pri čemu postupak obuhvata davanje farmaceutske kompozicije bilo kog od E31 do E35 pacijentu kome je to potrebno.
[0022] E39 je farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku E38 gde je infekcija koronavirusom COVID-19.
[0023] E40 je jedinjenje bilo kog od E11, E13, E14, E29 i E30 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u postupku inhibicije ili prevencije replikacije virusa SARS-CoV-2 koji uključuje dovođenje u kontakt SARS-CoV-2 koronavirusne 3CL proteaze sa terapeutski efikasnom količinom jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli bilo kog od E11, E13, E14, E29 i E30.
[0024] E41 je jedinjenje bilo kog od E11, E13, E14, E29 i E30 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u postupku inhibicije ili prevencije replikacije virusa SARS-CoV-2 kod pacijenta koji se sastoji od davanja pacijentu kome je potrebna inhibicija ili prevencija replikacije virusa SARS-CoV-2 terapeutski efikasne količine bilo kog od E11, E13, E14, E29 i E30 jedinjenja ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.
[0025] E49 je jedinjenje bilo kog od E11, E13, E14, E29 i E30 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u postupku lečenja koronavirusne infekcije kod pacijenta, pri čemu postupak obuhvata davanje terapeutski efikasne količine bilo kog od E11, E13, E14, E29 i E30 jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli pri čemu se daje dodatni terapeutski agens, a dodatni terapeutski agens se bira iz grupe koju čine remdesivir, galidesivir, favilavir/avifavir, molnupiravir, AT-527 AT-301, BLD-2660, favipiravir, kamostat, SLV213, emtriktabin/tenofivir, klevudin, dalcetrapib, boceprevir, ABX464, deksametazon, hidrokortizon, rekonvalescentna plazma, gelsolin (Nhu-Reglizuris), revulglizuris (Rhu-glizui5), VIR-7831/VIR-7832, BRII-196/BRII-198, COVI-AMG/COVI KAPI (STI-2020), bamlanivimab (LI-CoV555), mavrilimab, leronlimab (PRO140), AZD7442, lenzilimumab, in JS 016, STI-1499 (COVIGUARD), lanadelu mab (Takhziro), kanakinumab (Ilaris), gimsilumab, otilimab, kasirivimab/imdevimab (REGN-Cov2), MK-7110 (CD24Fc/SACCOVID), heparin, apxaban, tocilizumab (Actemra), sarilumab (Kevmod7), sarilumab (Kevmod7) , DC402234, PB1046, dapaglifozin, abivertinib, ATR-002, bemcentinib, akalabrutinib, baricitinib, tofacitinib, losmapimod, famotidin, ritonavir, niklozamid i diminazen.
[0026] E50 je jedinjenje (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
[0027] E50a je jedinjenje (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid.
[0028] E51 je farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski efikasnu količinu (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
1
[0029] E51a je farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski efikasnu količinu (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0030] E52 je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za upotrebu u postupku lečenja koronavirusne infekcije kod pacijenta, pri čemu postupak obuhvata davanje terapeutski efikasne količine (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli pacijentu kome je potrebno lečenje.
[0031] E52a je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid za upotrebu u postupku lečenja koronavirusne infekcije kod pacijenata, pri čemu postupak koja obuhvata primenu terapeutski efikasne količine (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida na pacijenta kome je potrebno lečenje.
[0032] E53 je jedinjenje za upotrebu u postupku E52 gde je infekcija koronavirusom COVID-19.
[0033] E53a je jedinjenje za upotrebu u postupku E52a gde je infekcija koronavirusom COVID-19.
[0034] E54 je jedinjenje za upotrebu u postupku E52 ili E53 gde (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so se daje oralno.
[0035] E54a je jedinjenje za upotrebu u postupku E52a ili E53a gde (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid se primenjuje oralno.
[0036] E55 je jedinjenje za upotrebu u postupku E54 gde se 50 mg do 1500 mg (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida ili njegova farmaceutski prihvatljive soli daje svakog dana.
[0037] E55a je jedinjenje za upotrebu u postupku E54a gde se 50 mg do 1500 mg (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida primenjuje svakog dana.
[0038] E56 je jedinjenje za upotrebu u postupku E55 gde se 380 mg (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid ili njegove farmaceutski prihvatljive soli daje tri puta dnevno.
[0039] E56a je jedinjenje za upotrebu u postupku E55a gde se 380 mg (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli se daje tri puta dnevno.
[0040] E57 je jedinjenje za upotrebu u postupku E55 gde se 50 mg do 1500 mg (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli primenjuje svakog dana kao oralna suspenzija, kapsula ili tableta.
[0041] E57a je jedinjenje za upotrebu u postupku E55a u kojoj se 50 mg do 1500 mg (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida ili njegove farmaceutski prihvatljive soli primenjuje svakog dana kao oralna suspenzija, kapsula ili tableta.
[0042] E58 je jedinjenje za upotrebu u postupku E57 gde se daje tableta.
[0043] E58a je jedinjenje za upotrebu u postupku E57a gde se daje tableta.
[0044] E60 je jedinjenje (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid; ili njegov solvat ili hidrat, ili farmaceutski prihvatljiva so pomenutog jedinjenja, solvata ili hidrata.
[0045] E61 je jedinjenje (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida koji ima strukturu
ili njegov solvat ili hidrat.
[0046] E62 je jedinjenje E61 koje je kristalno (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid.
[0047] E63 je jedinjenje E62 koje je kristalno (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, čvrsti oblik 1.
[0048] E64 je jedinjenje E62 koje je kristalno (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, čvrsti oblik 4.
[0049] E65 je jedinjenje E61 koje je amorfno (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid.
[0050] E66 je jedinjenje E61 koje je (1R,2S,5S)-N{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil solvat.
[0051] E67 je jedinjenje E66 koje je kristalno (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil solvat.
[0052] E68 je jedinjenje E67 koje je kristalno (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil solvat, čvrsti oblik 2.
[0053] E69 je jedinjenje u skladu sa bilo kojim od E61 do E68 za upotrebu u postupku lečenja koronavirusne infekcije kod pacijenta, pri čemu se postupak sastoji od davanja terapeutski efikasne količine jedinjenja prema bilo kom od E61 do E68 pacijentu kome je potreban takav tretman.
[0054] E70 je jedinjenje za upotrebu u postupku E69 gde je infekcija koronavirusom COVID-19.
[0055] E71 je jedinjenje za upotrebu u postupku E70 gde se ritonavir takođe daje pacijentu.
[0056] E72 je jedinjenje za upotrebu u postupku E71 gde se jedinjenje bilo kog od E61 do E68 i ritonavir daju pacijentu oralno.
[0057] E73 je jedinjenje za upotrebu u postupku E72 gde se primenjuje oko 10 mg do oko 1500 mg jedinjenja bilo kog od E61 do E68 i oko 10 mg do oko 1000 mg ritonavira dnevno.
[0058] E74 je jedinjenje za upotrebu u postupku E73 pri čemu se oko 50 mg jedinjenja bilo kog od E61 do E68 i oko 100 mg ritonavira svaki daje pacijentu dva puta dnevno.
[0059] E75 je farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski efikasnu količinu (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid; ili njegov solvat ili hidrat, ili farmaceutski prihvatljiva so pomenutog jedinjenja, solvat ili hidrat zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0060] E75a je farmaceutska kompozicija koja sadrži terapeutski efikasnu količinu (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid; ili njegov solvat ili hidrat zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
1
[0061] E76 je farmaceutska kompozicija E75a koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od E62 do E68.
[0062] E77 je jedinjenje za upotrebu u postupku E69 ili E70 gde oko 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg, 550 mg, 600 mg, 650 mg 700 mg ili 750 mg jedinjenja prema bilo kom od E61 do E68 se daje oralno pacijentu dva puta dnevno.
[0063] E78 je jedinjenje za upotrebu u postupku E77 gde se ritonavir istovremeno oralno primenjuje kod pacijenta dva puta dnevno.
[0064] E79 je jedinjenje za upotrebu u postupku E78 pri čemu se oko 300 mg jedinjenja prema bilo kom od E61 do E68 i oko 100 mg ritonavira istovremeno daju pacijentu dva puta dnevno.
[0065] E80 je jedinjenje E63 koje karakteriše<19>F pik sa hemijskim pomeranjem na -73.3 ± 0.1 ppm i<13>C pikovi sa hemijskim pomeranjima na 31<.>0 ± 0.1 ppm, 27.9 ± 0.1 ppm i 178.9 ± 0.2 ppm.
[0066] E81 je jedinjenje E64 koje karakteriše jedan ili više pikova izabranih iz grupe koju čine<19>F pik sa hemijskim pomeranjem na -73.6 ± 0.1 ppm i<13>C ima maksimum na 26<.>9 ± 0.1 ppm, 21.6 ± 0.1 ppm i 41.5 ± 0.1 ppm.
[0067] E82 je jedinjenje N-(Metoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid koji ima strukturu
ili njegov solvat ili hidrat.
[0068] E83 je jedinjenje E82 koje je N-(Metoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid.
[0069] E84 je farmaceutski proizvod koji sadrži terapeutski efikasnu količinu N-(metoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid; ili njegov solvat ili hidrat zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0070] E85 je jedinjenje E82 ili E83 za upotrebu u postupku lečenja koronavirusne infekcije kod pacijenta, postupak koja obuhvata davanje terapeutski efikasne količine jedinjenja E82 ili E83 pacijentu kome je potrebno lečenje.
[0071] E86 je jedinjenje za upotrebu u postupku E85 gde je infekcija koronavirusom COVID-19.
[0072] E87 je jedinjenje za upotrebu u postupku E85 ili E86 gde se daje 10 mg do 1500 mg jedinjenja E82 ili E83 dnevno.
[0073] E88 je jedinjenje za upotrebu u postupku bilo kog od E85 do E87 gde se jedinjenje primenjuje oralno.
[0074] E89 je jedinjenje za upotrebu u postupku E88 gde se 200 mg jedinjenja primenjuje dva puta dnevno.
[0075] E91 je jedinjenje inhibitora SARS-CoV-2 proteaze bilo kog od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83 za upotrebu u postupku identifikacije ćelijskih ili virusnih puteva koji ometaju funkcionisanje članova koji bi se mogli koristiti za lečenje indikacija izazvanih SARS-CoV-2 infekcijama primenom jedinjenja inhibitora proteaze SARS-CoV-2 bilo kojeg od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83.
[0076] E92 je postupak upotrebe jedinjenja inhibitora proteaze SARS-CoV-2 bilo kojeg od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83 kao alata za razumevanje mehanizma delovanja drugih SARS-a -CoV-2 inhibitori.
[0077] E93 je postupak upotrebe jedinjenja inhibitora proteaze sličnog SARS-CoV-2 3C bilo kojeg od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83 za izvođenje eksperimenata za profilisanje gena za praćenje ushodne ili nishodne regulacije gena u spiku identifikacije inhibitora za lečenje indikacija izazvanih infekcijama SARS-CoV-2 kao što je COVID-19.
[0078] E94 je farmaceutska kompozicija za lečenje COVID-19 kod sisara koja sadrži količinu jedinjenja inhibitora proteaze sličnog SARS-CoV-2 3C bilo kojeg od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83 koji je efikasan u lečenju COVID-19 zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem.
[0079] E95 je jedinjenje bilo kog od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83 za upotrebu u postupku lečenja MERS-a kod pacijenata, postupak koja obuhvata davanje terapeutski efikasne količine jedinjenje bilo kog od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83 pacijentu kome je to potrebno.
[0080] E96 je farmaceutska kompozicija bilo kog od E31 do E35, E51, E51a, E75, E75a, E84 i E94 za upotrebu u postupku lečenja MERS kod pacijenata, postupak koja se sastoji od davanja farmaceutske kompozicije bilo kog od E31 do E35 , E51, E51a, E75, E75a, E84 i E94 pacijentu kome je to potrebno.
[0081] E97 je jedinjenje bilo kog od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83 za upotrebu u postupku inhibicije ili prevencije replikacije virusa MERS koja se sastoji od kontakta sa SARS-CoV-2 koronavirusom 3CL proteaza sa terapeutski efikasnom količinom jedinjenja bilo kog od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83.
[0082] E98 je jedinjenje bilo kog od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83 za upotrebu u postupku inhibicije ili prevencije replikacije virusa MERS kod pacijenta koji
1
se sastoji od davanja pacijentu u potreba za inhibicijom ili prevencijom replikacije MERS virusa terapeutski efikasna količina jedinjenja bilo kog od E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 do E68 i E80 do E83.
Kratak opis crteža
[0083]
Slika 1: Difrakcija rendgenskih zraka na prahu Primera 13, metil terc-butil etar solvat, čvrsti oblik 2, iz alternativne sinteze Primera 13, metil terc-butil etar solvat; Sinteza čvrstog oblika 2 Slika 2: Difrakcija rendgenskih zraka na prahu Primera 13, metil terc-butil etar solvat, čvrsti oblik 2, iz Druge alternativne sinteze Primera 13, metil terc-butil etar solvat; Sinteza čvrstog oblika 2
Slika 3: Uzorak difrakcije rendgenskih zraka praha Primera 13, čvrsti oblik 1, iz Rekristalizacije Primera 13; Sinteza čvrstog oblika 1
Slika 4: Određivanje strukture rendgenskih zraka monokristalnog primera 13, čvrsti oblik 1. ORTEP dijagram nacrtan sa parametrima pomeranja sa verovatnoćom od 50%
Slika 5: Prekrivanje praškastog uzorka dobijenog za Primer 13, Čvrsti oblik 1, iz Rekristalizacije Primera 13; Sinteza čvrstog oblika 1 (slika 3) i izračunatog uzorka praha, generisanog preko Mercury softvera, iz rešenih rendgenskih monokristalnih podataka Oblike 1 (videti određivanje strukture rendgenskih zraka monokristalnog primera 13, čvrsti oblik 1) .
Slika 6: Uzorak difrakcije rendgenskih zraka praha iz Primera 13, čvrsti oblik 4, iz alternativne rekristalizacije Primera 13; Sinteza čvrstog oblika 4
Slika 7: Određivanje strukture rendgenskih zraka monokristalnog primera 13, čvrsti oblik 4. ORTEP dijagram nacrtan sa parametrima pomeranja sa verovatnoćom od 50%
Slika 8: Prekrivanje praškastog uzorka dobijenog za Primer 13, čvrsti oblik 4, iz alternativne rekristalizacije Primera 13; Sinteza čvrstog oblika 4 (Slika 6) i izračunatog uzorka praha, generisanog preko Mercury softvera, iz rešenih rendgenskih monokristalnih podataka Oblike 4 (videti Određivanje strukture rendgenskih zraka monokristala Primera 13, Čvrsti oblik 4) .
Slika 9: Uzorak difrakcije rendgenskih zraka praha iz Primera 13, Čvrsti oblik 5, iz Primera 96. Slika 10: Rendgenska difrakcija praha za intermedijer C16, HCI so.
Slika 11: Uzorak difrakcije rendgenskih zraka u prahu za intermedijer C91.
Slika 12: Određivanje strukture intermedijera C91 rendgenskim zracima monokristala. ORTEP dijagram nacrtan sa parametrima pomeranja sa 50% verovatnoćom.
Slika 13: Difrakcija rendgenskih zraka praha za intermedijer C92.
1
Slika 14: Uzorak difrakcije rendgenskih zraka u prahu za intermedijer C42.
Slika 15: Određivanje strukture intermedijera C42 rendgenskim zracima monokristala. ORTEP dijagram nacrtan sa parametrima pomeranja sa 50% verovatnoćom.
Detaljan opis pronalaska
[0084] Reference na postupci lečenja u narednim pasusima ovog opisa treba tumačiti kao reference na jedinjenja, farmaceutsku kompoziciju i lekove ovog pronalaska za upotrebu u postupku lečenja ljudskog ili životinjskog tela terapijom (ili za dijagnozu).
[0085] Za potrebe ovog pronalaska, kako je ovde opisano i zahtevano, sledeći termini su definisani na sledeći način:
Kako se ovde koristi, izrazi "sadrži" i "uključujući" se koriste u svom otvorenom, neograničavajućem smislu. Izraz "lečenje", kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, znači preokretanje, ublažavanje, inhibiranje napredovanja ili sprečavanje poremećaja ili stanja na koje se taj termin odnosi, ili jednog ili više simptoma takvog poremećaja ili stanja. U postupcima lečenja COVID-19 podrazumeva se da je COVID-19 bolest izazvana infekcijom virusom SARS-CoV-2 kod pacijenata. Pod virusom SARS-CoV-2 treba shvatiti da obuhvata prvobitno otkriveni soj virusa, kao i mutantne sojeve koji se pojavljuju, kao što su, ali ne ograničavajući se na, sojevi kao što su B.1.1.7 (varijanta UK), B.1.351 (južnoafrička varijanta), P.1 (brazilska varijanta) i B.1.427/B.1.429 (Kalifornija varijante). Izraz "lečenje", kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, odnosi se na čin lečenja kao što je "lečenje" definisano neposredno prethodno.
[0086] Termin "pacijent" se odnosi na toplokrvne životinje kao što su, na primer, zamorci, miševi, pacovi, gerbili, mačke, zečevi, psi, goveda, koze, ovce, konji, majmuni, šimpanze i ljudi. U pogledu lečenja COVID-19, postupci pronalaska su posebno korisni za lečenje ljudskih pacijenata.
[0087] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" znači da supstanca ili kompozicija moraju biti kompatibilni, hemijski i/ili toksikološki, sa drugim sastojcima koji sadrže formulaciju, i/ili sisarom koji se njime leči.
[0088] Termin "terapeutski efikasna količina" označava količinu jedinjenja iz ovog pronalaska koja (i) leči ili sprečava određenu bolest, stanje ili poremećaj, (ii) ublažava, olakšava ili eliminiše jedan ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja, ili (iii) sprečava ili odlaže početak jednog ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja opisanog ovde.
[0089] Termin "alkil" kako se ovde koristi odnosi se na linearni ili razgranati lanac zasićenog ugljovodonika supstituenta (tj., supstituent dobijen od ugljovodonika uklanjanjem vodonika); u
1
jednom aspektu koji sadrži od jednog do osam atoma ugljenika, u drugom jedan do šest atoma ugljenika i još jedan do tri atoma ugljenika. Neograničavajući primeri takvih supstituenata uključuju metil, etil, propil (uključujući n-propil i izopropil), butil (uključujući n-butil, izobutil, sek-butil i terc-butil), pentil, izoamil, heksil, heptil, oktil i slično. U drugom aspektu koji sadrži jedan do tri ugljenika i sastoji se od metila, etila, n-propil i izopropil.
[0090] Termin "alkinil" kako se ovde koristi odnosi se na linearni ili račvasti lanac zasićenog hidrokarbil supstituenta koji sadrži trostruku vezu ugljenik-ugljenik (tj. supstituent dobijen od ugljovodonika koji sadrži trostruku vezu uklanjanjem vodonika); u jednom aspektu koji sadrži od dva do šest atoma ugljenika. Neograničavajući primeri takvih supstituenata uključuju prop-2-in-1-il, but-3-in-1-il, pent-4-in-1-il i heks-5-in-1-il.
[0091] Termin "alkoksi" se odnosi na linearni ili razgranati zasićeni ugljovodonik supstituent vezan za radikal kiseonika (tj., supstituent dobijen od ugljovodoničnog alkohola uklanjanjem vodonika iz OH); u jednom aspektu koji sadrži od jednog do šest atoma ugljenika. Neograničavajući primeri takvih supstituenata uključuju metoksi, etoksi, propoksi (uključujući npropoksi i izopropoksi), butoksi (uključujući n-butoksi, izobutoksi, sek-butoksi i terc-butoksi), pentoksi, heksoksi i slično. U drugom aspektu koji ima jedan do tri ugljenika i sastoji se od metoksi, etoksi, n-propoksi i izopropoksi. Alkoksi grupa koja je vezana za alkil grupu se naziva alkoksialkil. Primer alkoksialkil grupe je metoksimetil.
[0092] Termin "alkiniloksi" se odnosi na linearni ili razgranati lanac zasićenog ugljovodonika supstituenta koji sadrži trostruku vezu ugljenik-ugljenik vezanu za radikal kiseonika (tj., supstituent dobijen od ugljovodoničkog alkohola koji sadrži trostruku vezu uklanjanjem vodonika iz OH ); u jednom aspektu koji sadrži od tri do šest atoma ugljenika. Neograničavajući primeri takvih supstituenata uključuju propiniloksi, butiniloksi i pentiniloksi i slično.
[0093] U nekim slučajevima, broj atoma ugljenika u hidrokarbil supstituentu (tj. alkil, cikloalkil, itd.) je označen prefxom „Cx-Cy-" ili "Cx-y", gde je x minimum, a y maksimalni broj atoma ugljenika u supstituentu. Tako, na primer, "C1-C8alkil" ili "C1-8alkil" se odnosi na alkil supstituent koji sadrži od 1 do 8 atoma ugljenika, "C1-C6alkil" ili "C1-6alkil" se odnosi na alkil supstituent koji sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika, "C1-C3alkil" ili "C1-3alkil" se odnosi na alkil supstituent koji sadrži od 1 do 3 atoma ugljenika. Ilustrujući dalje, C3-C6cikloalkil ili C3-6-cikloalkil se odnosi na zasićenu cikloalkil grupu koja sadrži od 3 do 6 atoma ugljenika u prstenu.
[0094] Izraz "cikloalkil" se odnosi na karbociklični supstituent dobijen uklanjanjem vodonika iz zasićenog karbocikličnog molekula, na primer onog koji ima tri do sedam atoma ugljenika. Termin "cikloalkil" uključuje monociklične zasićene karbocikle. Termin „C3-C7cikloalkil" označava radikal tro- do sedmočlanog sistema prstenova koji uključuje grupe ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil i cikloheptil. Izraz "C3-C6cikloalkil" označava radikal tro- do
1
šestočlanog sistema prstenova koji uključuje grupe ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil i cikloheksil. Cikloalkil grupe takođe mogu biti biciklični ili spirociklični karbocikli. Na primer, termin "C3-C12cikloalkil" uključuje monociklične karbocikle i biciklične i spirociklične cikloalkil grupe kao što su biciklopentil, bicikloheksil, bicikloheptil, biciklooktil, biciklononil, spiropentil, spiroheksil, spiroheptil, spirooktil i spirononil.
[0095] Termin „C3-C6cikloalkoksi" se odnosi na tro- do šestočlanu cikloalkil grupu vezanu za radikal kiseonika. Primeri uključuju ciklopropoksi, ciklobutoksi, ciklopentoksi i cikloheksoksi.
[0096] Termin "aril" se odnosi na karbociklični aromatični sistem. Termin „C6-C10aril" se odnosi na karbociklične aromatične sisteme sa 3 do 10 atoma i uključuje fenil i naftil.
[0097] U nekim slučajevima, broj atoma u cikličnom supstituentu koji sadrži jedan ili više heteroatoma (tj. heteroaril ili heterocikloalkil) je označen prefxom „x- do y-člani“, pri čemu je x minimalni, a y maksimalni broj atomi koji formiraju ciklični deo supstituenta. Tako, na primer, "4- do 6-člani heterocikloalkil" se odnosi na heterocikloalkil koji sadrži od 4 do 6 atoma, uključujući jedan do tri heteroatoma, u cikličnom delu heterocikloalkila. Slično, fraza "5- do 6-člani heteroaril" se odnosi na heteroaril koji sadrži od 5 do 6 atoma, a "5- do 10-člani heteroaril" se odnosi na heteroaril koji sadrži od 5 do 10 atoma, od kojih svaki uključuje jedan ili više heteroatoma, u cikličnom delu heteroarila. Dodatno, fraze "5-člani heteroaril" i "6-člani heteroaril" odnose se na petočlani heteroaromatični sistem prstenova i šestočlani heteroaromatični sistem prstenova, respektivno. Heteroatomi prisutni u ovim sistemima prstenova se biraju između N, O i S.
[0098] Izraz "hidroksi" ili "hidroksil" se odnosi na -OH. Kada se koristi u kombinaciji sa drugim terminom (terminima), prefx "hidroksi" označava da je supstituent za koji je prefx vezan je supstituisan sa jednim ili više hidroksi supstituenata. Jedinjenja koja nose ugljenik za koji jedan ili više hidroksi supstituenata uključuju, na primer, alkohole, enole i fenol. Izrazi cijano i nitril odnose se na -CN grupu. Termin "okso" označava kiseonik koji je vezan za ugljenik dvostrukom vezom (tj. kada je R<4>je okso onda R<4>zajedno sa ugljenikom za koji je vezan su C=O deo).
[0099] Termin "halo" ili "halogen" se odnosi na fluor (koji se može prikazati kao -F), hlor (koji se može prikazati kao -Cl), brom (koji se može prikazati kao -Br) ili jod (koji može biti prikazan kao -I).
[0100] Termin "heterocikloalkil" se odnosi na supstituent dobijen uklanjanjem vodonika iz zasićene ili delimično zasićene prstenaste strukture koja sadrži ukupan određeni broj atoma, kao što je 4 do 6 atoma u prstenu ili 4 do 12 atoma, pri čemu je najmanje jedan od atomi u prstenu su heteroatom (tj. kiseonik, azot ili sumpor), pri čemu su preostali atomi u prstenu nezavisno izabrani iz grupe koju čine ugljenik, kiseonik, azot i sumpor. Sumpor može biti oksidovan [tj., S(O) ili S(O)2] ili ne. U grupi koja ima heterocikloalkil supstituent, atom prstena heterocikloalkil
1
supstituenta koji je vezan za grupu može biti heteroatom azota, ili može biti atom ugljenika u prstenu. Slično, ako je heterocikloalkil supstituent zauzvrat supstituisan sa grupom ili supstituentom, grupa ili supstituent može biti vezan za heteroatom azota, ili može biti vezan za atom ugljenika u prstenu. Treba razumeti da heterociklična grupa može biti monociklična, biciklična, policiklična ili spirociklična.
[0101] Termin "heteroaril" se odnosi na aromatičnu prstenastu strukturu koja sadrži određeni broj atoma u prstenu u kojem je najmanje jedan od atoma u prstenu heteroatom (tj. kiseonik, azot ili sumpor), pri čemu se preostali atomi u prstenu nezavisno biraju između grupa koju čine ugljenik, kiseonik, azot i sumpor. Primeri heteroaril supstituenata uključuju 6-člane heteroaril supstituente kao što su piridil, pirazil, pirimidinil i piridazinil; i 5-člani heteroaril supstituenti kao što su triazolil, imidazolil, furanil, tiofenil, pirazolil, pirolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, 1,2,3-, 1,2,4-, 1,2,4- ili 1,3,4-oksadiazolil i izotiazolil. Heteroaril grupa takođe može biti biciklična heteroaromatična grupa kao što je indolil, benzofuranil, benzotienil, benzimidazolil, benzotiazolil, benzoksazolil, benzoizoksazolil, oksazolopiridinil, imidazopiridinil, imidazopirimidinil i slično. U grupi koja ima heteroaril supstituent, atom prstena heteroaril supstituenta koji je vezan za grupu može biti jedan od heteroatoma, ili može biti atom ugljenika u prstenu. Slično, ako je heteroaril supstituent zauzvrat supstituisan sa grupom ili supstituentom, grupa ili supstituent može biti vezan za jedan od heteroatoma, ili može biti vezan za atom ugljenika u prstenu. Termin "heteroaril" takođe uključuje piridil N-okside i grupe koje sadrže piridin N-oksidni prsten. Pored toga, heteroaril grupa može da sadrži okso grupu kao što je ona prisutna u piridonskoj grupi. Dalji primeri uključuju furil, tienil, oksazolil, tiazolil, imidazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, izoksazolil, izotiazolil, oksadiazolil, tiadiazolil, piridinil, piridazinil, pirimidinil(1, pirazidinil, pirazidinil)H)-onil, piridazin-2(1H)-onil, pirimidin-2(1H)-onil, pirazin-2(1H)-onil, imidazo[1,2-a]piridinil i pirazolo[1.5-a]piridinil. Heteroaril može biti dalje supstituisan kao što je ovde definisano.
[0102] Primeri heteroarila sa jednim prstenom i heterocikloalkila uključuju furanil, dihidrofuranil, tetrahidrofuranil, tiofenil, dihidrotiofenil, tetrahidrotiofenil, pirolil, izopirolil, pirolinil, pirolidinil, imidazolil, izoimidazolil, imidazolinil, imidazolidinil, pirazolil, pirazolinil, pirazolidinil, triazolil, tetrazolil, ditiolil, oksatiolil , oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, tiazolinil, izotiazolinil, tiazolidinil, izotiazolidinil, tiaoksadiazolil, oksatiazolil, oksadiazolil (uključujući oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, ili 1,3,4-oksadiazolil), ), piranil (uključujući 1,2-piranil ili 1,4-piranil), dihidropiranil, piridinil, piperidinil, diazinil (uključujući piridazinil, pirimidinil, piperazinil, triazinil (uključujući s-triazinil, v-triazinil), v-triazinil i (uključujući 2H-1,2-oksazinil, 6H-1.3-oksazinil, ili 2H-1,4-oksazinil), izoksazinil (uključujući oizoksazinil ili str-izoksazinil), oksazolidinil, izoksazolidinil, oksatiazinil (uključujući 1,2,4-
2
oksatiazinil ili 1,2,6-oksatiazinil), oksadiazinil (uključujući 2H-1,2,4-oksadiazinil ili 2H-1,2,4-oksadiazinil) i morfolinil.
[0103] Termin "heteroaril" takođe može uključivati, kada je tako specificiran, sisteme prstenova koji imaju dva prstena u kojima takvi prstenovi mogu biti fuzionisani i gde je jedan prsten aromatičan, a drugi prsten nije u potpunosti deo konjugovanog aromatičnog sistema (tj. heteroaromatični prsten mogu biti kondenzovani na cikloalkil ili heterocikloalkil prsten). Neograničavajući primeri takvih sistema prstenova uključuju 5,6,7,8-tetrahidroizohinolinil, 5,6,7,8-tetrahidrokinolinil, 6,7-dihidro-5H-ciklopenta[b]piridinil, 6,7-dihidro-5H-ciklopenta[c]piridinil, 1,4,5,6-tetrahidrociklopenta[c]pirazolil, 2,4,5,6-tetrahidrociklopenta[c]pirazolil, 5,6-dihidro-4H-pirolo[1,2-b]pirazolil, 6,7-dihidro-5H-pirolo[1,2-b][1,2,4]triazolil, 5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1.5-a]piridinil, 4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1.5-a]piridinil, 4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazolil i 4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazolil. Podrazumeva se da ako karbociklični ili heterociklični deo može biti vezan ili na drugi način vezan za određeni supstrat preko različitih atoma u prstenu bez označavanja određene tačke vezivanja, onda su sve moguće tačke stvorene, bilo preko atoma ugljenika ili, npr. , trovalentnog atoma azota. Na primer, izraz "piridil" označava 2-, 3- ili 4-piridil, izraz "tienil" označava 2- ili 3-tienil, i tako dalje.
[0104] Ako su supstituenti opisani kao da "nezavisno" imaju više od jedne promenljive, svaka instanca supstituenta se bira nezavisno od druge (drugih) sa liste dostupnih promenljivih. Svaki supstituent stoga može biti identičan ili različit od drugog supstituenta (supstituenata).
[0105] Ako su supstituenti opisani kao "nezavisno odabrani" iz grupe, svaki primerak supstituenta se bira nezavisno od drugog (drugih). Svaki supstituent stoga može biti identičan ili različit od drugog supstituenta (supstituenata).
[0106] Jedinjenje formule I koje je jedinjenje formule Ih-1a, Ih-1b, Ih-1c, li-1a, Ii-1b, Ii-1c, Ij-1a, Ij-1b, Ij-1c, Ik-a , Ik-b ili Ik-c se u daljem tekstu mogu nazivati "jedinjenjem pronalaska". Jedinjenja formule I koja su jedinjenja formule Ih-1a, Ih-1b, Ih-1c, Ii-1a, Ii-1b, Ii-1c, Ij-1a, Ij-1b, Ij-1c, Ik-a, Ik-b ili Ik-c se u daljem tekstu mogu nazivati "jedinjenjima pronalaska". Takvi termini su takođe definisani da uključuju sve oblike jedinjenja uključujući njihove hidrate, solvate, izomere, kristalne i nekristalne oblike, izomorfe, i polimorfe. Na primer, jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu postojati u nesolvatovanim i rastvorenim oblicima. Kada su rastvarač ili voda čvrsto vezani, kompleks će imati dobro definisanu stehiometriju nezavisno od vlažnosti. Međutim, kada su rastvarač ili voda slabo vezani, kao u kanalnim solvatima i higroskopnim jedinjenjima, sadržaj vode/rastvarača zavisiće od vlažnosti i uslova sušenja. U takvim slučajevima, nestehiometrija će biti norma.
[0107] Jedinjenja pronalaska mogu postojati kao klatrati ili drugi kompleksi. U okviru ovog pronalaska uključeni su kompleksi kao što su klatrati, kompleksi inkluzije lek-domaćin gde su lek i domaćin prisutni u stehiometrijskim ili nestehiometrijskim količinama. Takođe su uključeni kompleksi jedinjenja pronalaska koji sadrže dve ili više organskih i/ili neorganskih komponenti, koje mogu biti u stehiometrijskim ili nestehiometrijskim količinama. Dobijeni kompleksi mogu biti jonizovani, delimično jonizovani ili nejonizovani. Za pregled takvih kompleksa, pogledati J. Pharm. Sci., 64 (8), 1269-1288 od Halebliana (avgust 1975.).
[0108] Jedinjenja pronalaska imaju asimetrične atome ugljenika. Ugljenik-ugljenik veze jedinjenja pronalaska mogu biti prikazane ovde koristeći punu liniju ( ), puni klin ( ), ili tačkasti klin ( ). Upotreba pune linije za prikazivanje veza za asimetrične atome ugljenika treba da ukaže na to da su uključeni svi mogući stereoizomeri (npr. specifični enantiomeri, racemske smeše, itd.) na tom atomu ugljenika. Upotreba ili punog ili tačkastog klina za prikazivanje veza za asimetrične atome ugljenika treba da ukaže da samo prikazani stereoizomer treba da bude uključen. Moguće je da jedinjenja formule I, može da sadrži više od jednog asimetričnog atoma ugljenika. U tim jedinjenjima, upotreba pune linije za prikazivanje veza za asimetrične atome ugljenika treba da ukaže na to da su uključeni svi mogući stereoizomeri. Na primer, osim ako nije drugačije navedeno, podrazumeva se da jedinjenja Oblikule I mogu postojati kao enantiomeri i diastereomeri ili kao racemati i njihove smeše. Upotreba pune linije za prikazivanje veza za jedan ili više asimetričnih atoma ugljenika u jedinjenju formule I a upotreba punog ili isprekidanog klina za prikazivanje veza za druge asimetrične atome ugljenika u istom jedinjenju ima za cilj da ukaže da je prisutna mešavina diastereomera.
[0109] Stereoizomeri formule I uključuju cis i trans izomere, optičke izomere kao npr R i S enantiomeri, dijastereomeri, geometrijski izomeri, rotacioni izomeri, konformacioni izomeri i tautomeri jedinjenja pronalaska, uključujući jedinjenja koja pokazuju više od jedne vrste izomerizma; i njihove smeše (kao što su racemati i diastereomerni parovi). Takođe su uključene kisele adicione ili bazne adicione soli u kojima je protivjon optički aktivan, na primer, D-laktat ili L-lizin, ili racemski, na primer, DL-tartarat ili DL-arginin.
[0110] Kada bilo koji racemat kristališe, mogući su kristali dve različite vrste. Prvi tip je racemsko jedinjenje (pravi racemat) pomenuto prethodno, gde se proizvodi jedan homogeni oblik kristala koji sadrži oba enantiomera u ekvimolarnim količinama. Drugi tip je racemska smeša ili konglomerat gde se proizvode dva oblika kristala u ekvimolarnim količinama od kojih svaki sadrži jedan enantiomer.
[0111] Jedinjenja pronalaska mogu da ispolje fenomen tautomerije; takvi tautomeri se takođe smatraju jedinjenjima pronalaska. Svi takvi tautomerni oblici i njihove smeše su uključeni u obim pronalaska. Tautomeri postoje kao mešavine tautomernog seta u rastvoru. U čvrstom obliku, obično preovlađuje jedan tautomer. Iako se može opisati jedan tautomer, ovaj pronalazak uključuje sve tautomere jedinjenja pronalaska.
[0112] Izraz "farmaceutski prihvatljive soli (ili više njih)", kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, uključuje soli kiselih ili baznih grupa koje mogu biti prisutne u ovde opisanim jedinjenjima. Jedinjenja koja se koriste u postupcima pronalaska koja su bazna po prirodi sposobna su da formiraju širok spektar soli sa različitim neorganskim i organskim kiselinama. Kiseline koje se mogu koristiti za pripremu farmaceutski prihvatljivih kiselinskih adicionih soli takvih baznih jedinjenja su one koje formiraju netoksične kisele adicione soli, tj. soli koje sadrže farmakološki prihvatljive anjone, kao što su acetat, benzensulfonat, benzoat, bikarbonat, bisulfat, bitartrat, borat, bromid, kalcijum edetat, kamzilat, karbonat, hlorid, klavulanat, citrat, dihidrohlorid, edetat, edizlijat, estolat, ezilat, etilsukcinat, fumarat, gluceptat, glukonat, glutamat, heksilhidroamin hidrohlorid laktat, laktobionat, laurat, malat, maleat, mandelat, mezilat, metilsulfat, mukat, napsilat, nitrat, oleat, oksalat, pamoat (embonat), palmitat, pantotenat, fosfat/difosfat, poligalakturonat, salicilat, stearat, salicilat, stearat, subacetat, sukcinat, tanat, tartarat, teolat, tozilat, trietiodod i valeratne soli.
[0113] U pogledu jedinjenja pronalaska koja se koriste u postupcima pronalaska, ako jedinjenja takođe postoje kao tautomerni oblici, onda se ovaj pronalazak odnosi na te tautomere i upotrebu svih takvih tautomera i njihovih smeša.
[0114] Predmetni pronalazak takođe uključuje jedinjenja i postupci lečenja koronavirusnih infekcija kao što je COVID-19 i postupci inhibicije SARS-CoV-2 sa izotopski obeleženim jedinjenjima, koja su identična onima navedenim ovde, ali zbog činjenice da je jedan ili više atoma zamenjen atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji se obično nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji se mogu ugraditi u jedinjenja pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao npr.<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<15>N,<18>O,<17>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F, i<36>Cl, respektivno. Jedinjenja ovog pronalaska, njihovi prolekovi i farmaceutski prihvatljive soli navedenih jedinjenja ili navedenih prolekova koji sadrže gore pomenute izotope i/ili izotope drugih atoma su u okviru ovog pronalaska. Određena izotopski obeležena jedinjenja ovog pronalaska, na primer ona u koja se ubacuju radioaktivni izotopi kao npr.<3>H i<14>C su ugrađeni, korisni su u testovima distribucije leka i/ili supstrata u tkivu. Tricijumovani, tj.<3>H i ugljenik-14, tj.<14>C, izotopi su posebno poželjni zbog njihove lakoće pripreme i detekcije. Dalje, zamena sa težim izotopima kao što je deuterijum, tj.<2>H, može priuštiti određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer povećan in vivo poluživot ili smanjena potrebna doza i, stoga, može biti poželjna u nekim okolnostima. Izotopski obeležena jedinjenja koja se koriste u postupcima ovog pronalaska i njihovi prolekovi se generalno mogu pripremiti izvođenjem
2
postupaka za pripremu jedinjenja otkrivenih u tehnici zamenom lako dostupnog izotopski obeleženog reagensa za ne-izotopski obeleženi reagens.
[0115] Jedinjenja pronalaska koja imaju slobodne amino, amido ili hidroksi grupe mogu se konvertovati u prolekove. Prolekovi obuhvataju jedinjenja u kojima je aminokiselinski ostatak, ili polipeptidni lanac od dva ili više (npr. dva, tri ili četiri) amino kiselinskih ostataka kovalentno spojen preko estarske veze sa hidroksi jedinjenjima koja se koriste u postupcima ovog pronalaska. Ostaci aminokiselina uključuju, ali nisu ograničeni na 20 prirodnih aminokiselina koje se obično označavaju simbolima od tri slova, a takođe uključuju 4-hidroksiprolin, hidroksilizin, dezmozin, izodesmozin, 3-metilhistidin, norvalin, beta-alanin, gama-aminobuternu kiselinu, citrulin, homocistein, homoserin, ornitin i metionin sulfon. Dodatni tipovi prolekova takođe se mogu pripremiti. Na primer, slobodne hidroksi grupe mogu biti derivatizovane korišćenjem grupa koje uključuju, ali bez ograničenja na, hemisukcinate, fosfatne estre, dimetilaminoacetate i fosforiloksimetiloksikarbonile, kao što je navedeno u Advanced Drug Delivery Reviews, 1996, 19, 115. Karbamatni prolekovi hidroksi i amino grupa su takođe mogući, kao i karbonatni prolekovi, sulfonatni estri i sulfatni estri hidroksi grupa. Derivatizacija hidroksi grupa kao (aciloksi)metil i (aciloksi)etil etri pri čemu acil grupa može biti alkil estar, izborno supstituisan grupama uključujući, ali ne ograničavajući se na etar, amin i karboksilnu kiselinu, ili gde je acil grupa amino kiseli estar kao što je gore opisano, takođe su obuhvaćeni. Prolekovi ovog tipa su opisani u J. Med. Chem., 1996, 29, 10. Slobodni amini takođe mogu biti derivatizovani kao amidi, sulfonamidi ili fosfonamidi. Svi ovi delovi prolekova mogu da inkorporiraju grupe uključujući, ali ne ograničavajući se na funkcionalne grupe etra, amina i karboksilne kiseline.
[0116] Jedinjenja iz ovog pronalaska se mogu koristiti u postupcima pronalaska u kombinaciji sa drugim lekovima. Na primer, doziranje pacijentu zaraženom SARS-CoV-2 koronavirusom (tj. pacijentu sa COVID-19) inhibitorom 3CL proteaze SARS-CoV-2 koronavirusa prema pronalasku i interferonom, kao što je interferon alfa, ili pegilovani interferon, kao što je PEG-Intron ili Pegasus, može pružiti veću kliničku korist od doziranja bilo interferona, pegilovanog interferona ili samo inhibitora koronavirusa SARS-CoV-2. Drugi dodatni agensi koji se mogu koristiti u postupcima ovog pronalaska uključuju deksametazon, azitromicin i remdesivir. Primeri veće kliničke koristi mogu uključivati izrazitije smanjenje simptoma COVID-19, brže vreme do ublažavanja simptoma, smanjenu patologiju pluća, veće smanjenje količine SARS-CoV-2 koronavirusa kod pacijenta (virusno opterećenje) i smanjen mortalitet.
[0117] Koronavirus SARS-CoV-2 inficira ćelije koje eksprimiraju P-glikoprotein. Neki od inhibitora 3CL proteaze SARS-CoV-2 koronavirusa prema pronalasku su supstrati P-glikoproteina. Jedinjenja koja inhibiraju SARS-CoV-2 koronavirus, a koja su takođe supstrati Pglikoproteina, mogu se dozirati sa inhibitorom P-glikoproteina. Primeri inhibitora P-glikoproteina su verapamil, vinblastin, ketokonazol, nelfinavir, ritonavir ili ciklosporin. Inhibitori P-glikoproteina deluju tako što inhibiraju efluks SARS-CoV-2 inhibitora koronavirusa pronalaska iz ćelije. Inhibicija efluksa zasnovanog na P-glikoproteinu će sprečiti smanjenje intracelularnih koncentracija inhibitora koronavirusa SARS-CoV-2 usled efluksa P-glikoproteina. Inhibicija efluksa P-glikoproteina će rezultovati većim intracelularnim koncentracijama inhibitora koronavirusa SARS-CoV-2. Doziranje pacijentu inficiranom SARS-CoV-2 koronavirusom inhibitorima 3CL proteaze SARS-CoV-2 koronavirusa prema pronalasku i inhibitorom P-glikoproteina može smanjiti količinu inhibitora 3CL proteaze SARS-CoV-2 koronavirusa potrebnog za postizanje efikasnog doze povećanjem intracelularne koncentracije inhibitora 3CL proteaze SARS-CoV-2 koronavirusa.
[0118] Među agensima koji se mogu koristiti za povećanje izloženosti sisara jedinjenju iz ovog pronalaska su oni koji mogu delovati kao inhibitori najmanje jedne izoforme enzima citohroma P450 (CIP450). Izoforme CIP450 koje mogu biti korisno inhibirane uključuju, ali nisu ograničene na CIP1A2, CIP2D6, CIP2C9, CIP2C19 i CIP3A4. Jedinjenja koja se koriste u postupcima pronalaska uključuju jedinjenja koja mogu biti supstrati CIP3A4 i koja se metabolišu pomoću CIP3A4. Doziranje pacijentu zaraženom SARS-CoV-2 koronavirusom inhibitora koronavirusa SARS-CoV-2 koji je supstrat CIP3A4, kao što je inhibitor 3CL proteaze SARS-CoV-2 koronavirusa, i inhibitorom CIP3A4, kao što su ritonavir, nelfinavir ili delavirdin, smanjiće metabolizam inhibitora koronavirusa SARS-CoV-2 pomoću CIP3A4. Ovo će rezultovati smanjenim klirensom inhibitora koronavirusa SARS-CoV-2 i povećanom koncentracijom inhibitora SARS-CoV-2 u plazmi. Smanjeni klirens i veće koncentracije u plazmi mogu dovesti do niže efikasne doze inhibitora koronavirusa SARS-CoV-2.
[0119] Dodatni terapeutski agensi koji se mogu koristiti u kombinaciji sa inhibitorima SARS-CoV-2 u postupcima ovog pronalaska uključuju sledeće:
PLpro inhibitori, Apilomod, EIDD-2801, Ribavirin, Valganciklovir, β-Timidin, Aspartam, Oksprenolol, Doksiciklin, Acetofenazin, lopromid, Riboflavin, Reproterol, 2,2’-Ciklocitidin, hloramfenikol, hlorfenezin karbamat, Levodropropizin, Cefamandol, Floksuridin, Tigeciklin, Pemetreksed, L(+)-askorbinska kiselina, Glutation, Hesperetin, Ademetionin, Mazoprokol, Izotretinoin, Dantrolen, Sulfasalazin Anti-bakterijski, Silibin, Nikardipin, Sildenafil, Platikodin, hrisin, Neohesperidin, Baikalin, Sugetriol-3,9-diacetat, (-)-Epigalokathin galat, Faitantrin D, 2-(3,4-Dihidroksifenil)-2-[[2-(3,4-dihidroksifenil)-3,4-dihidro-5,7-dihidroksi-2H-1-benzopiran-3-il]oksi]-3,4-dihidro-2H-1-benzopiran-3,4,5,7-tetrol, 2,2-di(3-indolil)-3-indolon, (S)-(1S,2R,4aS,5R,8aS)-1-formamido-1,4a-dimetil-6-metilen-5-((E)-2-(2-okso-2,5-dihidrofuran-3-il)etenil)decahidronaftalen-2-il-2-amino-3-fenilpropanoat, Piceatanol, Rozmarinska kiselina i
2
Magnolol.
[0120] 3CLpro inhibitori, Limeciklin, hlorheksidin, Alfuzosin, Cilastatin, Famotidin, Almitrin, Progabid, Nepafenak, Karvedilol, Amprenavir, Tigeciklin, Montelukast, karminska kiselina, Mimozin, Flavin, Lutein, Cefpiramid, Feneticillin, Kandoksatril, Nikardipin, Estradiol valerat, Pioglitazon, Konivaptan, Telmisartan, Doksiciklin, Oksitetraciklin, (1S,2R,4aS,5R,8aS)-1-formamido-1,4a-dimetil-6-metilen-5-((E)-2-(2-okso-2,5-dihidrofuran-3-il)etenil)dekahidronaftalen-2-il 5-((R)-1,2-ditiolan-3-il) pentanoat, Betulonal, hrisin-7-O-βglukuronid, Andrografizid, (1S,2R,4aS,5R,8aS)-1-formamido-1,4a-dimetil-6-metilen-5-((E)-2-(2-okso-2,5-dihidrofuran-3-il)etenil)dekahidronaftalen-2-il 2-nitrobenzoat, 2β-Hidroksi-3,4-seko-friedelolakton-27-oinska kiselina (S)-(1S,2R,4aS,5R,8aS)-1-formamido-1,4a-dimetil-6-metilen-5-((E)-2-(2-okso-2,5-dihidrofuran-3-il)etenil) decahidronaftalen-2-il-2-amino-3-fenilpropanoat, Izodekortinol, Cerevisterol, Hesperidin, Neohesperidin, Andrograpanin, 2-((1R,5R,6R,8aS)-6-Hidroksi-5-(hidroksimetil)-5,8a-dimetil-2-metilenedecahidronaftalen-1-il)etil benzoat, Kozmosiin, Kleistokalton A, 2,2-Di(3-indolil)-3-indolon, Biorobin, Gnidicin, Filaemblinol, Teaflavin 3,3’-di-O-galat, Rozmarinska kiselina, Kouithenzid I, Oleanolinksa kiselina, Stigmast-5-en-3-ol, Decetilcentapikrin i Berhemol.
[0121] RdRp inhibitori, valganciklovir, hlorheksidin, ceftibuten, fenoterol, fludarabin, itrakonazol, cefuroksim, atovakon, henodeoksiholna kiselina, kromolin, pankuronijum bromid, kortizon, tibolon, novobiocin, silibin, Idarubicin Bromokriptin, Difenoksilat, Benzilpeniciloil G, Dabigatran eteksilat, Betulonal, Gnidicin, 2β,30β-Dihidroksi-3,4-seko-friedelolakton-27-lakton, 14-Deoksi-11.12-didehidroandrografolid, Gniditrin, Teaflavin 3,3’-di-O-galat, (R)-((1R,5aS,6R,9aS)-1,5a-Dimetil-7-metilen-3-okso-6-((E)-2-(2-okso-2,5-dihidrofuran-3-il)etenil)decahidro-1H-benzo[c]azepin-1-il)metil2-amino-3-fenilpropanoat, 2β-Hidroksi-3,4-seko-friedelolakton-27-oinska kiselina, 2-(3,4-Dihidroksifenil)-2-[[2-(3,4-dihidroksifenil)-3,4-dihidro-5,7-dihidroksi-2H-1-benzopiran-3-il]oksi]-3,4-dihidro-2H-1-benzopiran-3,4,5,7-tetrol, Filaemblicin B, 14-hidroksiciperotundon, Andrografisid, 2-((1R,5R,6R,8aS)-6-Hidroksi-5-(hidroksimetil)-5,8a-dimetil-2-metilenedekahidro naftalen-1-il)etil benzoat, Andrografolid, Sugetriol-3,9-diacetat, Baikalin, (1S,2R,4aS,5R,8aS)-1-formamido-1,4a-dimetil-6-metilen-5-((E)-2-(2-okso-2,5-dihidrofuran-3-il)etenil)decahidronaftalen-2-il 5-((R)-1,2-ditiolan-3-il)pentanoat, 1,7-Dihidroksi-3-metoksiksanton, 1,2,6-Trimetoksi-8-[(6-O-β-D-ksilopiranosil-β-D-glucopiranosil)oksi]-9H-ksanten-9-on, i 1,8-Dihidroksi-6-metoksi-2-[(6-O-β-D-ksilopiranozilβ-D-glucopiranosil)oksi]-9H-ksanten-9-on, 8-(β-D-Glucopiranosiloksi)-1,3,5-trihidroksi-9H-ksanten-9-on.
[0122] Dodatni terapeutski agensi koji se mogu koristiti u postupcima pronalaska uključuju diosmin, hesperidin, MK-3207, venetoklaks, dihidroergokristin, bolazin, R428, diterkalinijum,
2
etopozid, tenipozid, UK-432097, irinotekan, lumakafator, eldipasdovir, eldikaftor, Lopinavir / Ritonavir Ribavirin, Alferon i prednizon. Drugi dodatni agensi korisni u postupcima ovog pronalaska uključuju deksametazon, azitromicin i remdesivir, kao i boceprevir, umifenovir i favipiravir.
[0123] Drugi dodatni agensi koji se mogu koristiti u postupcima ovog pronalaska uključuju jedinjenja α-ketoamida označena kao 11r, 13a i 13b, prikazana u nastavku, kao što je opisano u Zhang, L.; Lin, D.; Sun, X.; Rox, K.; Hilgenfeld, R.; X-ray Structure of Main Protease of the Novel Coronavirus SARS-CoV-2 Enables Design of α-Ketoamide Inhibitors; bioRxiv preprint doi:
[0124] Dodatni agensi koji se mogu koristiti u postupcima ovog pronalaska uključuju RIG 1 aktivatore puta kao što su oni opisani u US Patent No.9.884,876.
[0125] Drugi dodatni terapeutski agensi uključuju inhibitore proteaze kao što su oni opisani u Dai W, Zhang B, Jiang X-M, et al. Structure-based design of antiviral drug candidates targeting the SARS-CoV-2 main protease. Science. 2020;368(6497):1331-1335 uključujući jedinjenja kao što je jedinjenje prikazano u nastavku i jedinjenje označeno kao DC402234
[0126] Sledeći primer izvođenja ovog pronalaska je jedinjenje iz ovog pronalaska za upotrebu u postupku lečenja COVID-19 kod pacijenata gde se pored primene jedinjenja iz ovog pronalaska primenjuje dodatni agens i dodatni agens se bira između antivirusnih lekova kao što su remdesivir, galidesivir, favilavir/avifavir, molnupiravir (MK-4482/EIDD 2801), AT-527, AT-301, BLD-2660, favipiravir, kamostat, SLV213 emtriktabin/tenofivir, klevudin, dalcetrapib, boceprevir i ABX464, glukokortikoidi kao što su deksametazon i hidrokortizon, rekonvalescentna plazma, rekombinantna ljudska plazma kao što je gelsolin (Rhu-p65N), monoklonska antitela kao što su regdanvimab (Regkirova), ravulizumab (Ultomiris), VIR-7831/VIR/BR-7832, 198, COVI-AMG/COVI KAPI (STI-2020), bamlanivimab (LI-CoV555),
2
mavrilimab, leronlimab (PRO140), AZD7442, lenzilumab, inflximab, adalimumab, JS 016, STI-1499 (COVIGUARD), lanadelumab (Takhzyro), kanakinumab (Ilaris), gimsilumab i otilimab, kokteli antitela kao što su kasirivimab/imdevimab (REGN-Cov2), rekombinantni fuzioni protein kao što je MK-7110 (CD24Fc/SACCOVID), antikoagulansi kao što su heparin i apxaban, agonisti IL-6 receptora kao što su tocilizumab (Actumabra) i saktemrab (Kevzara), PlKfyve inhibitori kao što je apilimod dimezilat, RIPK1 inhibitori kao što su DNL758, DC402234, agonisti VIP receptora kao što je PB1046, SGLT2 inhibitori kao što je dapaglifozin, TYK inhibitori kao što je abivertinib, inhibitori kinaze kao što je ATR-002, bemcentinib, akalabrutinib, lozmapimod, baricitinib i tofacitinib, H2 blokatori kao što je famotidin, anthelmintici kao što je niklozamid, inhibitori furina kao što je diminazen.
[0127] Izraz "sredstvo za inhibiciju SARS-CoV-2" označava bilo koje jedinjenje inhibitora 3C-slične proteaze koronavirusa povezanog sa SARS-CoV-2 opisano ovde ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, hidrat, prolek, aktivni metabolit ili solvat ili jedinjenje koje inhibira replikaciju SARS-CoV-2 na bilo koji način.
[0128] Termin „ometanje ili sprečavanje“ replikacije virusa korona virusa povezanog sa SARS-CoV-2 („SARS-CoV-2“) u ćeliji znači smanjenje replikacije SARS-CoV-2 ili proizvodnje komponenti SARS-CoV-2 neophodnih za potomstvo virusa u ćeliji tretiranoj jedinjenjem ovog pronalaska u poređenju sa ćelijom koja nije tretirana jedinjenjem iz ovog pronalaska. Jednostavni i praktični testovi za određivanje da li je replikacija virusa SARS-CoV-2 smanjena uključuju ELISA test na prisustvo, odsustvo ili smanjeno prisustvo anti-SARS-CoV-2 antitela u krvi subjekta (Nasoff, et al., PNAS 88:5462-5466, 1991), RT-PCR (Yu, et al., in Viral Hepatitis and Liver Disease 574-577, Nishioka, Suzuki i Mishiro (Eds.); Springer-Verlag, Tokyo, 1994). Takvi postupci su dobro poznati stručnjacima iz oblasti tehnike. Alternativno, ukupna RNK iz transdukovanih i inficiranih „kontrolnih“ ćelija može da se izoluje i podvrgne analizi dot blotom ili northern blotom i ispita sa SARS-CoV-2-specifičnom DNK da bi se utvrdilo da li je replikacija SARS-CoV-2 smanjena. Alternativno, smanjenje ekspresije proteina SARS-CoV-2 se takođe može koristiti kao indikator inhibicije replikacije SARS-CoV-2. Više od pedeset procenata smanjenja replikacije SARS-CoV-2 u poređenju sa kontrolnim ćelijama obično kvantifikuje prevenciju replikacije SARS-CoV-2.
[0129] Ako je jedinjenje inhibitora SARS-CoV-2 korišćeno u postupku pronalaska baza, željena so se može pripremiti bilo kojim pogodnim postupkom poznatim u struci, uključujući tretman slobodne baze neorganskom kiselinom (kao što je hlorovodonična kiselina , bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, fosforna kiselina i slično), ili sa organskom kiselinom (kao što su sirćetna kiselina, maleinska kiselina, jantarna kiselina, bademova kiselina, fumarna kiselina, malonska kiselina, pirogrožđana kiselina, oksalna kiselina, glikolna kiselina,
2
salicilna kiselina, piranozidil kiselina (kao što je glukuronska kiselina ili galakturonska kiselina), alfa-hidroksi kiselina (kao što je limunska kiselina ili vinska kiselina), amino kiselina (kao što je asparaginska kiselina ili glutaminska kiselina), aromatična kiselina (kao što je benzojeva kiselina ili cimetna kiselina), sulfonska kiselina (kao što je p-toluensulfonska kiselina ili etansulfonska kiselina) i slično.
[0130] Ako je jedinjenje inhibitora SARS-CoV-2 korišćeno u postupku pronalaska kiselina, željena so se može pripremiti bilo kojim pogodnim postupkom poznatim u struci, uključujući tretman slobodne kiseline sa neorganskom ili organskom bazom [kao što je amin (primarni, sekundarni ili tercijarni)], hidroksid alkalnog metala ili hidroksid zemnoalkalnog metala. Ilustrativni primeri pogodnih soli uključuju organske soli izvedene iz amino kiselina (kao što su glicin i arginin), amonijaka, primarnih amina, sekundarnih amina, tercijalnih amina i cikličnih amina (kao što su piperidin, morfolin i piperazin), kao i neorganske soli dobijene od natrijuma, kalcijuma, kalijuma, magnezijuma, mangana, gvožđa, bakra, cinka, aluminijuma i litijuma.
[0131] U slučaju jedinjenja inhibitora SARS-CoV-2, prolekova, soli ili solvata koji su čvrste materije, stručnjaci u ovoj oblasti će shvatiti da jedinjenje, prolekovi, soli i solvati koji se koriste u postupku pronalaska mogu da postoje u različitim polimorfnim ili kristalnim oblicima, od kojih svi treba da budu u okviru ovog pronalaska i specificiranih formula. Pored toga, jedinjenje, soli i solvati koji se koriste u postupku pronalaska mogu postojati kao tautomeri, od kojih svi treba da budu unutar širokog obima ovog pronalaska.
[0132] Sredstva za raSinteza se takođe mogu koristiti sa jedinjenjima pronalaska da bi se povećala rastvorljivost jedinjenja u vodi fiziološki prihvatljivih rastvora. Ovi agensi za raSinteza uključuju ciklodekstrine, propilen glikol, dietilacetamid, polietilen glikol, Tween, etanol i agense za formiranje micela. Ponuđena sredstva za raSinteza su ciklodekstrini, posebno betaciklodekstrini i posebno hidroksipropil beta-ciklodekstrin i sulfobutil etar beta-ciklodekstrin.
[0133] U nekim slučajevima, jedinjenja inhibitora SARS-CoV-2, soli i solvati koji se koriste u postupku pronalaska mogu imati hiralne centre. Kada su prisutni hiralni centri, jedinjenje, soli i solvati mogu postojati kao pojedinačni stereoizomeri, racemati i/ili smeše enantiomera i/ili dijastereomera. Svi takvi pojedinačni stereoizomeri, racemati i njihove smeše treba da budu unutar širokog obima ovog pronalaska.
[0134] Kao što je opšteprihvaćeno u struci, optički čisto jedinjenje je ono koje je enantiomerno čisto. Kako se ovde koristi, termin "optički čist" označava jedinjenje koje sadrži najmanje dovoljnu aktivnost. Poželjno, optički čista količina jednog enantiomera da bi se dobilo jedinjenje koje ima željeno farmakološki čisto jedinjenje pronalaska sadrži najmanje 90% jednog izomera (80% enantiomernog viška), poželjnije najmanje 95% (90% e.e.) još poželjnije najmanje 97.5% (95% e.e.), a najpoželjnije najmanje 99% (98% e.e.).
2
[0135] Izraz "lečenje", kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, znači preokretanje, ublažavanje, inhibiranje napredovanja ili sprečavanje poremećaja ili stanja na koje se taj termin odnosi, ili jednog ili više simptoma takvog poremećaja ili stanja. Izraz "lečenje", kako se ovde koristi, osim ako nije drugačije naznačeno, odnosi se na čin lečenja kao što je "lečenje" definisano neposredno prethodno. U poželjnom primeru izvođenja ovog pronalaska, „lečenje“ ili „tretman“ znači barem ublažavanje bolesnog stanja kod ljudi, koje je ublaženo inhibicijom aktivnosti SARS-CoV-2 3C slične proteaze koja je glavna proteaza SARS-CoV-2, uzročnika COVID-19. Za pacijente koji boluju od COVID-19, temperatura, umor i suv kašalj su glavne manifestacije bolesti, dok su začepljenost nosa, curenje iz nosa i drugi simptomi gornjih disajnih puteva retki. Pekinški centri za kontrolu i prevenciju bolesti ukazali su da tipični slučaj COVID-19 ima progresivan proces pogoršanja. COVID-19 se može klasifikovati na lake, normalne, teške i kritične tipove na osnovu težine bolesti. National Health Commission of the People’s Republic of China. Diagnosis and Treatment of Pneumonia Caused by 2019-nCoV (Trial Version 4). Dostupno onlajn :http:// www.nhc.gov.cn/jkj/s3577/202002/573340613ab243b3a7f61df260551dd4/files/c791e5a7ea5149 f680fdcb34dac0f54e.pdf: (1) Blagi slučajevi - klinički simptomi su bili blagi, a na kompjuterizovanoj tomografiji grudnog koša (CT) nije pronađena pneumonija; (2) normalni slučajevi - groznica, respiratorni simptomi i pacijenti za koje je utvrđeno da imaju manifestacije pneumonije; (3) teški slučajevi – jedno od sledeća tri stanja: Respiratorni distres, brzina disanja ≥ 30 puta/min (u stanju mirovanja, odnosi se na zasićenost kiseonikom ≤ 93%), parcijalni arterijski pritisak kiseonika (PaO2)/koncentracija apsorpcije kiseonika (FiO2 ) ≤300 mmHg (1 mm Hg = 0.133 kPa); (4) kritični slučajevi-jedan od sledeća tri stanja: Respiratorna insuficijencija i potreba za mehaničkom ventilacijom, šok ili povezano otkazivanje drugih organa koji zahtevaju jedinicu intenzivne nege. Trenutni klinički podaci pokazuju da se većina smrtnih slučajeva dogodila kod starijih pacijenata. Međutim, teški slučajevi su dokumentovani kod mladih odraslih osoba koje imaju jedinstvene faktore, posebno one sa hroničnim bolestima, kao što su dijabetes ili hepatitis B. Oni sa dugotrajnom upotrebom hormona ili imunosupresiva i smanjenom imunološkom funkcijom verovatno će ozbiljno zaraženi.
[0136] Postupci lečenja za ublažavanje stanja bolesti izazvane virusom korona, kao što je COVID-19, uključuju upotrebu jednog ili više jedinjenja pronalaska na bilo koji konvencionalno prihvatljiv način. U skladu sa određenim poželjnim primerima izvođenja pronalaska, jedinjenje ili jedinjenja koja se koriste u postupcima ovog pronalaska daju se sisaru, kao što je čovek, kome je to potrebno. Poželjno je da je sisar kome je to potrebno zaražen koronavirusom kao što je uzročnik COVID-19, odnosno SARS-CoV-2.
[0137] Ovaj pronalazak takođe uključuje profilaktičke postupke, koji obuhvataju davanje efikasne količine inhibitora SARS-CoV-2 pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, farmaceutski aktivnog metabolita ili solvata sisaru, kao što je čovek koji je u riziku od infekcije SARS-CoV-2. U skladu sa određenim poželjnim primerima izvođenja, efikasna količina jednog ili više jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, farmaceutski aktivnog metabolita ili solvata se daje čoveku sa rizikom od infekcije SARS-CoV-2, uzročnika COVID-19. Profilaktički postupci pronalaska uključuju upotrebu jednog ili više jedinjenja u pronalasku na bilo koji konvencionalno prihvatljiv način.
[0138] Određena jedinjenja koja se koriste u postupcima pronalaska, na primer deksametazon, azitromicin i remdesivir su poznata i mogu se dobiti postupcima poznatim u tehnici.
[0139] Nedavni dokazi ukazuju da je novi koronavirus SARS-CoV-2 uzročnik COVID-19. Nukleotidna sekvenca koronavirusa SARS-CoV-2, kao i nedavno utvrđeni L- i S- podtipovi su nedavno određeni i javno dostupni.
[0140] Aktivnost inhibitornih jedinjenja kao inhibitora virusne aktivnosti SARS-CoV-2 može se meriti bilo kojim od odgovarajućih postupaka dostupnih u struci, uključujući in vivo i in vitro testove. Aktivnost jedinjenja ovog pronalaska kao inhibitora aktivnosti 3C slične proteaze virusa (kao što je 3C proteaza SARS-CoV-2 koronavirusa) može se meriti bilo kojim od odgovarajućih postupaka poznatih stručnjacima iz ove oblasti, uključujući in vivo i in vitro testove. Primeri pogodnih testova za merenje aktivnosti uključuju testove antivirusne ćelijske kulture koji su ovde opisani, kao i testove antiproteaze opisane ovde, kao što su testovi opisani u Eksperimentalnom delu.
[0141] Primena jedinjenja inhibitora SARS-CoV-2 i njihovih farmaceutski prihvatljivih prolekova, soli, aktivnih metabolita i solvata može se izvesti prema bilo kom od prihvaćenih načina primene koji je dostupan stručnjacima. Ilustrativni primeri pogodnih načina primene uključuju oralno, nazalno, pulmonalno, parenteralno, lokalno, intravensko, injektirano, transdermalno i rektalno. Poželjne su oralne, intravenske, potkožne i nazalne isporuke.
[0142] Sredstvo za inhibiciju SARS-CoV-2 može se primeniti kao farmaceutska kompozicija u bilo kom pogodnom farmaceutskom obliku. Pogodni farmaceutski oblici uključuju čvrste, polučvrste, tečne ili liofilizovane formulacije, kao što su tablete, praškovi, kapsule, supozitorije, suspenzije, lipozomi i aerosoli. Sredstvo za inhibiciju SARS-CoV-2 može se pripremiti kao rastvor korišćenjem bilo koje od različitih metodologija. Na primer, agens koji inhibira SARS-CoV-2 može se rastvoriti kiselinom (npr. 1 M HCl) i razblažiti sa dovoljnom zapreminom rastvora 5% dekstroze u vodi (D5V) da bi se dobila željena konačna koncentracija SARS-a. Sredstvo za inhibiciju CoV-2 (npr. oko 15 mM). Alternativno, rastvor D5V koji sadrži oko 15 mM HCI može da se koristi za obezbeđivanje rastvora agensa koji inhibira SARS-CoV-2 u odgovarajućoj koncentraciji. Dalje, sredstvo za inhibiciju SARS-CoV-2 može se pripremiti kao
1
suspenzija korišćenjem, na primer, 1% rastvora karboksimetilceluloze (CMC).
[0143] Prihvatljivi postupci za dobijanje pogodnih farmaceutskih oblika farmaceutskih kompozicija su poznate ili ih mogu rutinski odrediti stručnjaci u ovoj oblasti. Na primer, farmaceutski preparati se mogu pripremiti prema konvencionalnim tehnikama farmaceutskog hemičara koje uključuju korake kao što su mešanje, granuliranje i komprimovanje kada je to potrebno za tabletne forme, ili mešanje, punjenje i raSinteza sastojaka prema potrebi, da bi se dobili željeni proizvodi za intravensku, oralnu, parenteralnu, lokalnu, intravaginalnu, intranazalnu, intrabronhijalnu, intraokularnu, intraauralnu i/ili rektalnu primenu.
[0144] Tipično, jedinjenje pronalaska se primenjuje u količini efikasnoj za lečenje stanja kao što je ovde opisano. Jedinjenja pronalaska se daju na bilo koji pogodan način u obliku farmaceutske kompozicije prilagođene takvom putu, i u dozi efikasnoj za predviđeni tretman. Terapeutski efikasne doze jedinjenja potrebnih za lečenje napredovanja medicinskog stanja lako se utvrđuju od strane stručnjaka u tehnici korišćenjem prekliničkih i kliničkih pristupa poznatih u medicinskoj tehnici.
[0145] Jedinjenja pronalaska se mogu davati oralno. Oralna primena može uključivati gutanje, tako da jedinjenje ulazi u gastrointestinalni trakt, ili se može primeniti bukalna ili sublingvalna primena, kojom jedinjenje ulazi u krvotok direktno iz usta.
[0146] U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska se takođe mogu davati direktno u krvotok, u mišiće ili u unutrašnji organ. Pogodna sredstva za parenteralnu primenu uključuju intravensku, intraarterijsku, intraperitonealnu, intratekalnu, intraventrikularnu, intrauretralnu, intrasternalnu, intrakranijalnu, intramuskularnu i subkutanu. Pogodni uređaji za parenteralnu primenu uključuju injektore sa iglama (uključujući mikroigle), injektore bez igle i tehnike infuzije.
[0147] U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska se takođe mogu primeniti lokalno na kožu ili mukozu, odnosno dermalno ili transdermalno. U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska se takođe mogu davati intranazalno ili inhalacijom. U drugom aspektu, jedinjenja pronalaska se mogu davati rektalno ili vaginalno. U drugom izvođenju, jedinjenja pronalaska se takođe mogu davati direktno u oko ili uho.
[0148] Režim doziranja za jedinjenja i/ili kompozicije koje sadrže jedinjenja zasniva se na različitim faktorima, uključujući tip, starost, težinu, pol i zdravstveno stanje pacijenta; ozbiljnost stanja; put primene; i aktivnost određenog upotrebljenog jedinjenja. Stoga režim doziranja može uveliko varirati. Nivoi doze od oko 0.01 mg do oko 100 mg po kilogramu telesne težine dnevno su korisni u lečenju gore navedenih stanja. U jednom aspektu, ukupna dnevna doza jedinjenja pronalaska (primenjena u pojedinačnim ili podeljenim dozama) je tipično od oko 0.01 do oko 100 mg/kg. U drugom aspektu, ukupna dnevna doza jedinjenja pronalaska je od oko 0.1 do oko 50 mg/kg, au drugom aspektu, od oko 0.5 do oko 30 mg/kg (tj., mg jedinjenja pronalaska po kg
2
telesne težine ). U jednom aspektu, doziranje je od 0.01 do 10 mg/kg/dan. U drugom izvođenju, doziranje je od 0.1 do 1.0 mg/kg/dan. Kompozicije jedinične doze mogu sadržati takve količine ili višestruke količine da bi se napravila dnevna doza. U mnogim slučajevima, primena jedinjenja će se ponoviti više puta u toku dana (obično ne više od 4 puta). Više doza dnevno se obično može koristiti za povećanje ukupne dnevne doze, ukoliko je poželjno.
[0149] Za oralnu primenu, kompozicije se mogu obezbediti u obliku tableta koje sadrže od oko 0.01 mg do oko 500 mg aktivnog sastojka, ili u drugom aspektu, od oko 1 mg do oko 100 mg aktivnog sastojka. Intravenski, doze mogu da se kreću od oko 0.1 do oko 10 mg/kg/minut tokom infuzije konstantne brzine.
[0150] Pogodni pacijenti prema ovom pronalasku uključuju pacijente sisare. Sisari u skladu sa ovim pronalaskom uključuju, ali nisu ograničeni na, pse, mačke, goveda, koze, kopitare, ovce, svinje, glodare, lagomorfe, primate i slično, i obuhvataju sisare in utero. U jednom aspektu, ljudi su pogodni pacijenti. Ljudski pacijenti mogu biti bilo kog pola i u bilo kojoj fazi razvoja.
[0151] U sledećoj realizaciji, pronalazak obuhvata upotrebu jednog ili više jedinjenja pronalaska za pripremu leka za lečenje ovde navedenih stanja.
[0152] Za lečenje gore navedenih stanja, jedinjenje pronalaska se može primeniti kao jedinjenje per se. Alternativno, farmaceutski prihvatljive soli su pogodne za medicinsku primenu zbog njihove veće rastvorljivosti u vodi u odnosu na matično jedinjenje.
[0153] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obuhvata farmaceutske kompozicije. Takve farmaceutske kompozicije sadrže jedinjenje pronalaska predstavljeno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Farmaceutski prihvatljivi nosač obuhvata bilo koji pogodan dozni oblik koji je prihvatljiv za davanje pacijentu. Nosač može biti čvrsta supstanca, tečnost ili oba, i može se formulisati sa jedinjenjem kao kompozicija jedinične doze, na primer, tableta, koja može da sadrži od težinskih 0.05% do 95% aktivnih jedinjenja. Jedinjenje pronalaska može biti spojeno sa pogodnim polimerima kao nosačima leka kojim se može ciljati. Mogu biti prisutne i druge farmakološki aktivne supstance.
[0154] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se davati na bilo koji pogodan način, poželjno u obliku farmaceutske kompozicije prilagođene takvom putu, i u dozi koja je efikasna za predviđeni tretman. Aktivna jedinjenja i kompozicije, na primer, mogu se davati oralno, rektalno, parenteralno ili lokalno.
[0155] Oralna primena čvrstog doznog oblika može biti, na primer, predstavljena u diskretnim jedinicama, kao što su tvrde ili meke kapsule, pilule, kapsule, pastile ili tablete, od kojih svaka sadrži unapred određenu količinu najmanje jednog jedinjenja ovog pronalaska. U drugom izvođenju, oralna primena može biti u obliku praha ili granula. U drugom izvođenju, oralni oblik doze je sublingvalan, kao što je, na primer, pastila. U takvim čvrstim oblicima doze, jedinjenja pronalaska se obično kombinuju sa jednim ili više pomoćnih sredstava. Takve kapsule ili tablete mogu sadržati formulaciju sa kontrolisanim oslobađanjem. U slučaju kapsula, tableta i pilula, dozni oblici takođe mogu sadržati puferske agense ili se mogu pripremiti sa enteričkim oblogama.
[0156] U drugom izvođenju, oralna primena može biti u tečnom doznom obliku. Tečni dozni oblici za oralnu primenu obuhvataju, na primer, farmaceutski prihvatljive emulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i elxire koji sadrže inertne razblaživače koji se obično koriste u tehnici (npr. voda). Takve kompozicije takođe mogu da sadrže adjuvanse, kao što su sredstva za vlaženje, emulgovanje, suspendovanje, aromatiziranje (npr. zaslađivači) i/ili sredstva za dodavanje mirisa.
[0157] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obuhvata parenteralni dozni oblik. "Parenteralna primena" obuhvata, na primer, subkutane injekcije, intravenske injekcije, intraperitonealne injekcije, intramuskularne injekcije, intrasternalne injekcije i infuziju. Preparati za injektiranje (npr. sterilne injektabilne vodene ili uljne suspenzije) mogu se formulisati u skladu sa poznatim stanjem tehnike korišćenjem pogodnih sredstava za dispergovanje, vlaženje i/ili agensa za suspendovanje.
[0158] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obuhvata oblik za lokalnu dozu. "Lokalna primena" uključuje, na primer, transdermalnu primenu, kao što je preko transdermalnih flastera ili uređaja za jontoforezu, intraokularnu primenu, ili intranazalnu ili inhalaciju. Kompozicije za topikalnu primenu takođe uključuju, na primer, lokalne gelove, sprejeve, masti i kreme. Lokalna formulacija može da sadrži jedinjenje koje poboljšava apsorpciju ili prodiranje aktivnog sastojka kroz kožu ili druga zahvaćena područja. Kada se jedinjenja ovog pronalaska daju transdermalnim uređajem, primena će biti obavljena korišćenjem flastera ili tipa rezervoara i porozne membrane ili tipa čvrstog matrxa. Tipične formulacije za ovu spiku uključuju gelove, hidrogelove, losione, rastvore, kreme, masti, praškove, obloge, pene, filmove, flastere za kožu, vafere, implante, sunđere, vlakna, zavoje i mikroemulzije. Lipozomi se takođe mogu koristiti. Tipični nosači uključuju alkohol, vodu, mineralno ulje, tečni vazelin, beli vazelin, glicerin, polietilen glikol i propilen glikol. Mogu biti ugrađeni pojačivači penetracije; vidi, na primer, J. Pharm. Sci., 88 (10), 955-958, Finin and Morgan (oktobar 1999.).
[0159] Oblikulacije pogodne za lokalnu primenu na oko uključuju, na primer, kapi za oči u kojima je jedinjenje ovog pronalaska rastvoreno ili suspendovano u pogodnom nosaču. Tipična formulacija pogodna za očnu ili auralnu primenu može biti u obliku kapi mikronizovane suspenzije ili rastvora u izotoničnom, pH prilagođenom, sterilnom fiziološkom rastvoru. Druge formulacije pogodne za okularnu i auralnu primenu uključuju masti, biorazgradive (npr. apsorbujuće gel sunđere, kolagen) i ne-biorazgradive (npr. silikon) implante, pločice, sočiva i sisteme čestica ili vezikula, kao što su niozomi ili lipozomi. Polimer kao što je umrežena
4
poliakrilna kiselina, polivinil alkohol, hijaluronska kiselina, celulozni polimer, na primer, hidroksipropilmetil celuloza, hidroksietil celuloza, ili metil celuloza, ili heteropolisaharidni polimer, na primer, gelan guma, može biti ugrađen zajedno sa konzervansom, kao što je benzalkonijum hlorid. Takve formulacije se takođe mogu dostaviti jontoforezom.
[0160] Za intranazalnu primenu ili davanje inhalacijom, aktivna jedinjenja pronalaska se obično isporučuju u obliku rastvora ili suspenzije iz posude za raspršivanje pumpe koju pacijent pritiska ili pumpa ili kao aerosol sprej iz posude pod pritiskom ili nebulizator, uz upotrebu odgovarajućeg pogonskog goriva. Oblikulacije pogodne za intranazalnu primenu se obično daju u obliku suvog praha (ili sami, kao mešavina, na primer, u suvoj mešavini sa laktozom, ili kao čestice mešane komponente, na primer, pomešane sa fosfolipidima, kao što je fosfatidilholin ) iz inhalatora suvog praha ili kao aerosol sprej iz kontejnera pod pritiskom, pumpe, spreja, raspršivača (poželjno raspršivača koji koristi elektrohidrodinamiku za proizvodnju fine magle), ili nebulizatora, sa ili bez upotrebe odgovarajućeg potisnog gasa, kao što je 1,1,1,2-tetrafluoroetan ili 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropan. Za intranazalnu upotrebu, prah može da sadrži bioadhezivni agens, na primer, hitozan ili ciklodekstrin.
[0161] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obuhvata rektalni dozni oblik. Takav rektalni dozni oblik može biti u obliku, na primer, supozitorija. Kakao puter je tradicionalna baza za supozitorije, ali se mogu koristiti različite alternative prema potrebi.
[0162] Mogu se takođe koristiti i drugi materijali za nosače i načini primene poznati u farmaceutskoj tehnici. Farmaceutske kompozicije pronalaska se mogu pripremiti bilo kojom od dobro poznatih tehnika farmacije, kao što su efikasne formulacije i procedure primene. Gore navedena razmatranja u vezi sa efikasnim formulacijama i postupcima administracije su dobro poznata u tehnici i opisana su u standardnim udžbenicima. Oblikulisanje lekova se razmatra u npr. Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsilvania, 1975; Liberman et al., Eds., Pharmaceutical Dosage Oblx, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; i Kibbe et al., Eds., Handbook of Pharmaceutical Excipients (3rd Ed.), American Pharmaceutical Association, Washington, 1999.
[0163] Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se koristiti, sama ili u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensima, u lečenju različitih stanja ili bolesnih stanja. Jedinjenje (jedinjenja) ovog pronalaska i drugi terapeutski agens(i) mogu se davati istovremeno (bilo u istom doznom obliku ili u odvojenim oblicima doze) ili uzastopno. Dva ili više jedinjenja se mogu davati simultano, konkurentno ili uzastopno. Dodatno simultana primena se može izvršiti mešanjem jedinjenja pre primene ili primenom jedinjenja u istom trenutku, ali na različitim anatomskim mestima ili korišćenjem različitih puteva primene. Izrazi "konkurentna primena", "zajednička administracija", "simultana primena" i "primenjena istovremeno" znače da se jedinjenja primenjuju u kombinaciji.
[0164] Ovaj pronalazak uključuje upotrebu kombinacije jedinjenja pronalaska i jednog ili više dodatnih terapeutskih agenasa. Ako se primenjuje kombinacija aktivnih agenasa, oni se mogu primeniti uzastopno ili istovremeno, u odvojenim oblicima doze ili kombinovani u jednom doznom obliku. Shodno tome, ovaj pronalazak takođe uključuje farmaceutske kompozicije koje sadrže količinu: (a) prvog agensa koji sadrži jedinjenje pronalaska ili farmaceutski prihvatljivu so jedinjenja; (b) drugi terapeutski agens; i (c) farmaceutski prihvatljiv nosač. Farmaceutske kompozicije pronalaska mogu takođe uključiti pogodne ekscipijente, razblaživače, vehikulume i nosače, kao i druge farmaceutski aktivne agense, u zavisnosti od nameravane upotrebe. Čvrsti ili tečni farmaceutski prihvatljivi nosači, razblaživači, vehikulumi ili ekscipijenti mogu se koristiti u farmaceutskim kompozicijama. Ilustrativni čvrsti nosači uključuju skrob, laktozu, kalcijum sulfat dihidrat, terra alba, saharozu, talk, želatin, pektin, akaciju, magnezijum stearat i stearinsku kiselinu. Ilustrativni tečni nosači uključuju sirup, ulje od kikirikija, maslinovo ulje, fiziološki rastvor i vodu. Nosač ili razblaživač može uključivati odgovarajući materijal sa produženim oslobađanjem, kao što je gliceril monostearat ili gliceril distearat, sam ili sa voskom. Kada se koristi tečni nosač, preparat može biti u obliku sirupa, elxira, emulzije, meke želatinske kapsule, sterilne tečnosti za injekcije (npr. rastvor), ili nevodene ili vodene tečne suspenzije.
[0165] Doza farmaceutske kompozicije može da sadrži najmanje terapeutski efikasnu količinu agensa koji inhibira SARS-CoV-2 i poželjno je da se sastoji od jedne ili više farmaceutskih doznih jedinica. Odabrana doza se može davati sisaru, na primer, čoveku pacijentu, kome je potreban tretman posredovan inhibicijom aktivnosti koronavirusa povezane sa SARS-CoV-2, bilo kojim poznatim ili pogodnim postupkom primene doze, uključujući lokalno, npr. , kao mast ili krema; oralno; rektalno, na primer, kao supozitorija; parenteralno injekcijom; intravenski; ili kontinuirano intravaginalnom, intranazalnom, intrabronhijalnom, intraauralnom ili intraokularnom infuzijom.
[0166] Izrazi "terapijski efikasna količina" i "efikasna količina" imaju za cilj da označe količinu inventivnog agensa koja je, kada se daje sisaru kome je potrebno lečenje, dovoljna da utiče na lečenje povreda ili bolesti koje se ublažavaju inhibicijom replikacije SARS virusa CoV-2. Količina datog agensa za inhibiciju SARS-CoV-2 korišćenog u postupku pronalaska koja će biti terapeutski efikasna će varirati u zavisnosti od faktora kao što su određeni agens koji inhibira SARS-CoV-2, stanje bolesti i njena težina, identitet i karakteristike sisara kome je to potrebno, pri čemu količinu mogu rutinski odrediti stručnjaci u ovoj oblasti.
[0167] Shvatiće se da će stvarne doze agenasa koji inhibiraju SARS-CoV-2 korišćene u farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska biti odabrane u skladu sa osobinama određenog agensa koji se koristi, posebnom formulisanom kompozicijom, načinom primene i određenim mestom, i domaćinom i stanjem koje se leči. Optimalne doze za dati skup uslova mogu da utvrde stručnjaci u ovoj oblasti koristeći konvencionalne testove za određivanje doze. Za oralnu primenu, na primer, doza koja se može koristiti je od oko 0.01 do oko 1000 mg/kg telesne težine, poželjno od oko 0.1 do oko 500 mg/kg telesne težine, a još poželjnije od oko 1 do oko 500 mg/ kg telesne težine, sa ponavljanjem tura lečenja u odgovarajućim intervalima. Za intravensko doziranje može se koristiti doza do 5 grama dnevno. Intravenska primena se može desiti u periodima sa prekidima tokom jednog dana ili kontinuirano tokom perioda od 24 sata.
[0168] Izrazi "količina koja inhibira citohrom P450" i "količina koja inhibira aktivnost enzima citohroma P450", kako se ovde koriste, odnose se na količinu jedinjenja koja je potrebna za smanjenje aktivnosti enzima citohroma P450 ili određene izoforme enzima citohroma P450 u prisustvu takvog jedinjenja. Da li određeno jedinjenje smanjuje aktivnost enzima citohroma P450, i količina takvog jedinjenja koja je potrebna za to, može se odrediti postupcima poznatim onima koji su verzirani u ovoj oblast i postupcima opisanim ovde.
[0169] Proteinske funkcije potrebne za replikaciju i transkripciju koronavirusa kodira takozvani gen "replikaze". Dva poliproteina koji se preklapaju su prevedena iz ovog gena i ekstenzivno obrađena virusnim proteazama. C-proksimalni region se obrađuje na jedanaest očuvanih međudomenskih spojeva pomoću glavne proteaze koronavirusa ili proteaze slične 3C. Naziv 3C slična proteaza potiče od određenih sličnosti između enzima koronavirusa i dobro poznatih pikornavirusnih 3C proteaza. Ovo uključuje preferencije supstrata, upotrebu cisteina kao nukleofila aktivnog mesta u katalizi i sličnosti u njihovim pretpostavljenim ukupnim polipeptidnim naborima. Poređenje aminokiselinske sekvence 3C slične proteaze korona virusa povezane sa SARS-CoV-2 sa sekvencom drugih poznatih koronavirusa kao što je SARS-CoV pokazuje da sekvence aminokiselina imaju približno 96% zajedničku homologiju.
[0170] Amino kiseline supstrata na mestu cepanja proteaze su numerisane od N do C kraja na sledeći način: -P3-P2-P1-P1'-P2'-P3', pri čemu se cepanje dešava između P1 i P1' ostataka (Schechter i Berger, 1967). Specifičnost supstrata je u velikoj meri određena P2, P1 i P1' pozicijama. Specifičnosti glavnog mesta cepanja proteaze koronavirusa su visoko očuvane sa zahtevom za glutaminom na P1 i malom amino kiselinom na P1' [Journal of General Virology, 83, str.595-599 (2002)].
[0171] Jedinjenja iz ovog pronalaska se mogu pripremiti prema postupcima datim u reakcionim šemama 1 do 3 u nastavku.
[0172] Šeme date u nastavku dalje ilustruju i ilustruju primere jedinjenja ovog pronalaska i postupci za dobijanje takvih jedinjenja. Podrazumeva se da obim ovog pronalaska nije ni na koji način ograničen obimom sledećih primera i priprema. U sledećim primerima molekuli sa jednim hiralnim centrom mogu postojati kao jedan enantiomer ili racemska smeša. Oni molekuli sa dva ili više hiralnih centara mogu postojati kao jedan enantiomer, racemska ili na neki drugi način mešavina dva enantiomera, ili kao različite mešavine dijastereomera. Takvi enantiomeri, racemati i dijastereomeri se mogu dobiti i/ili razdvojiti postupcima poznatim stručnjacima. Stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da određene sintetičke manipulacije mogu epimerizovati ili racemizovati stereocentar, a sintetički uslovi mogu biti odabrani da ili promovišu ili obeshrabre takvu epimerizaciju ili racemizaciju.
[0173] Šema 1 ilustruje sintetičku sekvencu za pripremu jedinjenja Oblikule I kao što je prikazano, gde N-BOC metil estar Oblikule 1 (WO 2005/113580) se pretvara u primarni amid Oblikule 3 (N-BOC je N-terc-butoksikarbonil). Ovo se može postići direktno, na primer tretmanom sa amonijakom (NH3) u zatvorenoj posudi u rastvaraču kao što je metanol ili etanol, na primer, izborno u prisustvu aditiva kao što je kalcijum hlorid (CaCl2) ili magnezijum dimetoksid, Mg(OMe)2.
[0174] Transformacija jedinjenja Oblikule 1 u jedinjenje Oblikule 3 može se takođe izvršiti prethodnom konverzijom u karboksilnu kiselinu Oblikule 2 (WO 2005/113580). U ovom slučaju, jedinjenje Oblikule 2 može se konvertovati u jedinjenje Oblikule 3 korišćenjem postupaka koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, jedinjenje formule 2 može se tretirati sa reagensom kao što je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU), izobutil hloroformijat, 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (EDCI) i hidroksibenzotriazol (HOBt), ili 1.1'-karbonildiimidazol (CDI), izborno u prisustvu baze kao što je N,N-diizopropiletilamin (DIEA), 4-metilmorfolin (NMM) ili trietilamin (TEA), nakon čega sledi tretman sa NH3primenjen kao gas ili rastvor u rastvaraču kompatibilnom sa reakcijom, ili sa soli NH3kao što je amonijum acetat ili amonijum hlorid u prisustvu baze kao što je N,N-diizopropiletilamin, 4-metilmorfolin ili trietilamin. Pogodni rastvarači uključuju, ali nisu ograničeni na, dihlorometan (CH2Cl2), N,N-dimetilformamid (DMF), tetrahidrofuran (THF) ili acetonitril (CH3CN).
[0175] Jedinjenje formule 3 može biti N-deprotektovano da bi se obezbedio amin formule 4 korišćenjem postupaka koji su dobro poznati stručnjacima za sprovođenje takvih deprotekcija. Često se koriste kiseli reagensi kao što su hlorovodonik, metansulfonska kiselina ili trifluorosirćetna kiselina, obično u rastvaraču kompatibilnom sa reakcijom kao što je CH2Cl2, 1,4-dioksan, 1,2-dihloretan, ili CH3CN. Stručnjak u ovoj oblasti će ceniti da jedinjenje formule 4 će se često dobijati kao kisela adiciona so. Jedinjenje formule 4 može se zatim transformisati u jedinjenje formule 6 tretmanom sa N-protektovanim aminokiselinskim jedinjenjem formule 5 pod odgovarajućim uslovima. Takvi postupci su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti i generalno se mogu izabrati standardni uslovi kuplovanja peptida.
[0176] Jedinjenje formule 6 može biti N-edprotektovano da bi se obezbedio amin formule 7 korišćenjem postupaka koji su dobro poznati stručnjacima za sprovođenje takvih deprotekcija. Često se koriste kiseli reagensi kao što su hlorovodonik, metansulfonska kiselina ili trifluorosirćetna kiselina, obično u rastvaraču kompatibilnom sa reakcijom kao što je CH2Cl2, 1,4-dioksan, 1,2-dihloretan ili CH3CN. Stručnjak u ovoj oblasti će ceniti da jedinjenje formule 7 će se često dobijati kao kisela adiciona so. Jedinjenje formule 7 može se zatim transformisati u jedinjenje formule 9 tretmanom sa jedinjenjem karboksilne kiseline formule 8 pod odgovarajućim uslovima. Takvi postupci su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Na primer, kada je X = atom hlora, jedinjenje karboksilne kiseline je poznato kao hlorid kiseline i reakcija se sprovodi u prisustvu baze da bi se potrošio halogenovodonik HX proizveden kao nusprodukt reakcije. Primeri pogodnih baza uključuju, ali nisu ograničeni na, tercijarne amine kao što su 4-metilmorfolin, 2,6-dimetilpiridin ili N,N-diizopropiletilamin, ili neorganske baze kao što su magnezijum oksid (MgO), natrijum karbonat (Na2CO3), ili kalijum bikarbonat (KHCO3). Pogodni rastvarači uključuju, ali nisu ograničeni na, CH2Cl2, DMF, THF ili CH3CN. Kada je X = OH, uobičajeno je da se koristi reagens ili kombinacija reagenasa da bi se olakšala reakcija jedinjenja karboksilne kiseline formule 8. Stručnjak u ovoj oblasti može izabrati da koristi, na primer, karbodiimid reagens kao što je 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (EDCI) ili N,N'-dicikloheksil karbodiimid (DCC), izborno u prisustvo pomoćnog nukleofila kao što je hidroksibenzotriazol (HOBt) ili 2-hidroksipiridin-N-oksid (HOPO). Dalje, kada je X = OH, stručnjak može da izabere da koristi reagense koji su pogodni za formiranje mešanih anhidrida karboksi/karboksila, kao što su CDI, izobutil ili etil hloroformat, često u prisustvu baze kao što je prethodno opisano. Pogodni rastvarači uključuju, ali nisu ograničeni na, CH2Cl2, THF ili CH3CN. Drugi pristup koji obično koriste stručnjaci u ovoj oblasti kada je X = OH je tretiranje jedinjenja karboksilne kiseline formule 8 sa hloridom karboksilne kiseline, na primer kao što je Me3CCOCl, u prisustvu baze kao što je gore opisano da bi se dobio mešani karboksilni anhidrid Oblikule R3C(O)O(O)CCMe3. Pogodni rastvarači uključuju, ali nisu ograničeni na, CH2Cl2, THF ili CH3CN. U mnogim slučajevima moguće je koristiti simetrični anhidrid željenog jedinjenja karboksilne kiseline formule 8 da se izvrši reakcija, izborno u prisustvu baze kao što je gore opisano, u kom slučaju X = O(O)CR3i jedinjenje karboksilne kiseline Oblikule 8 je dakle R3C(O)O(O)CR3. Pogodni rastvarači uključuju, ali nisu ograničeni na, CH2Cl2, THF ili CH3CN.
[0177] Jedinjenje formule 9 može se transformisati u jedinjenje formule I tretmanom u uslovima dehidratacije koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Često se ovaj korak dehidratacije može postići korišćenjem viška anhidrida trifluorosirćetne kiseline ili fosfor-oksihlorida, generalno u prisustvu baze kao što je piridin, N,N-diizopropiletilamin, 4-metilmorfolin ili trietilamin.
[0178] Stručnjak u ovoj oblasti zna da su N-BOC zaštićene aminokiseline Oblikule 5 su poznati u hemijskoj literaturi, komercijalno su dostupni i mogu biti pripremljeni od odgovarajućih poznatih i komercijalno dostupnih amino kiselina od strane stručnjaka u ovoj oblasti koristeći dobro uspostavljene procedure za sintezu N-protektovanih amino kiselina. Slično, stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da jedinjenja karboksilne kiseline formule 8 mogu biti poznata u hemijskoj literaturi, i/ili su komercijalno dostupna, i/ili mogu biti pripremljena objavljenim postupcima ili po analogiji sa objavljenim postupcima.
[0179] Stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da se koraci formiranja veze u Šemi 1 mogu sprovesti različitim redosledom uz odgovarajuća razmatranja, na primer kao što je prikazano u Šemi 2.
4
Šema 2
[0180] U šemi 2, jedinjenje formule 3 se pretvara u jedinjenje formule 10 tretmanom u uslovima dehidratacije koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Često se ovaj korak dehidratacije može postići korišćenjem viška anhidrida trifluorosirćetne kiseline ili fosfor-oksihlorida, generalno u prisustvu baze kao što je piridin, N,N-diizopropiletilamin, 4-metilmorfolin ili trietilamin. Jedinjenje formule 10 je N-deprtotektovano da bi se obezbedio amin formule 11 korišćenjem postupaka koji su dobro poznati stručnjacima za sprovođenje takvih deprotekcija. Često se koriste kiseli reagensi kao što su hlorovodonik, metansulfonska kiselina ili trifluorosirćetna kiselina, obično u rastvaraču kompatibilnom sa reakcijom kao što je CH2Cl2, 1,4-dioksan, 1,2-dihloretan ili CH3CN. Stručnjak u ovoj oblasti će ceniti da jedinjenje formule 11 će se često dobijati kao kisela adiciona so. Jedinjenje formule 11 može se zatim transformisati u jedinjenje formule I tretmanom sa jedinjenjem formule 12 pod odgovarajućim uslovima. Takvi postupci su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti i generalno se mogu izabrati standardni uslovi kuplovanja peptida. Jedinjenja formule 12 su izuzetno dobro poznata u hemijskoj literaturi, a stručnjak u ovoj oblasti može izabrati da pripremi bilo koje dato jedinjenje formule 12 koristeći postupke analogne onima opisanim u hemijskoj literaturi.
[0181] Stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da se koraci formiranja veze u Šemama 1 i 2 mogu sprovesti u dodatnim različitim redosledima uz odgovarajuća razmatranja, na primer kao što je prikazano u Šemi 3.
Šema 3
[0182] U šemi 3, jedinjenje formule 4 može se zatim transformisati u jedinjenje formule 9 tretmanom sa jedinjenjem formule 12 pod odgovarajućim uslovima. Takvi postupci su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti i generalno se mogu izabrati standardni uslovi kuplovanja peptida. Jedinjenja formule 12 su izuzetno dobro poznati u hemijskoj literaturi, a stručnjak u ovoj oblasti može izabrati da pripremi bilo koje dato jedinjenje formule 12 koristeći postupke analogne onima opisanim u hemijskoj literaturi. Jedinjenje formule 9 se zatim pretvara u jedinjenje formule I tretmanom u uslovima dehidratacije koji su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Često se ovaj korak dehidratacije može postići korišćenjem viška anhidrida trifluorosirćetne kiseline ili fosfor-oksihlorida, generalno u prisustvu baze kao što je piridin, N,N-diizopropiletilamin, 4-metilmorfolin ili trietilamin.
[0183] Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da se uz odgovarajuća razmatranja mogu primeniti još dalje permutacije koraka formiranja veze i manipulacije funkcionalnim grupama u Šemama 1, 2 i 3. Takve permutacije u izboru redosleda koraka su dobro poznate u hemijskoj literaturi i neko verziran u ovoj oblasti može da konsultuje hemijsku literaturu za dalja uputstva ukoliko želi. Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da se mogu napraviti drugi izbori zaštitnih grupa i reagenasa za vršenje različitih transformacija.
PRIMERI
Eksperimentalne procedure
[0184] Sledeće ilustruje sintezu različitih jedinjenja ovog pronalaska. Dodatna jedinjenja u okviru ovog pronalaska mogu biti pripremljena korišćenjem postupaka ilustrovanih u ovim Primerima, bilo samih ili u kombinaciji sa tehnikama koje su opšte poznate u tehnici. Svi početni materijali u ovim Preparacijama i Primerima su ili komercijalno dostupni ili se mogu dobiti postupcima poznatim u tehnici ili kako je ovde opisano.
[0185] Sve reakcije su izvedene korišćenjem neprekidnog mešanja u atmosferi gasa azota ili argona osim ako nije drugačije naznačeno. Po potrebi, reakcioni aparati su sušeni pod dinamičkim vakuumom korišćenjem toplotnog pištolja i anhidrovanih rastvarača (Sure-Seal<™>proizvodi kompanije Aldrich Chemical Company, Milvaukee, Visconsin ili DriSolv<™>proizvodi iz EMD Chemicals, Gibbstown, NJ). U nekim slučajevima, komercijalni rastvarači su propušteni kroz kolone pune 4A molekularnih sita, sve dok se ne postignu sledeći QC standardi za vodu: a) <100 ppm za dihlorometan, toluen, N,N-dimetilformamid i tetrahidrofuran; b) <180 ppm za metanol, etanol, 1,4-dioksan i diizopropilamin. Za veoma osetljive reakcije, rastvarači su dalje tretirani metalnim natrijumom, kalcijum hidridom ili molekularnim sitom i destilovani neposredno pre upotrebe. Drugi komercijalni rastvarači i reagensi su korišćeni bez daljeg prečišćavanja. Za sinteze koje se odnose na postupke u drugim Primerima ili Postupcima, uslovi reakcije (vreme reakcije i temperatura) mogu da variraju. Proizvodi su uglavnom sušeni pod vakuumom pre nego što su preneti na dalje reakcije ili podvrgnuti biološkom testiranju.
[0186] Kada je indicirano, reakcije su zagrejane mikrotalasnim zračenjem korišćenjem mikrotalasne pećnice Biotage Initiator ili Personal Chemistry Emris Optimizer. Napredak reakcije je praćen analizom hromatografije na tankom sloju (TLC), tečne hromatografije-masene spektrometrije (LCMS), tečne hromatografije visokih performansi (HPLC) i/ili gasne hromatografije-masene spektrometrije (GCMS). TLC je izvedena na prethodno obloženim pločama silika gela sa indikatorom fluorescencije (254 nm talasne dužine ekscitacije) i vizuelizovana pod UV svetlom i/ili sa I2, KMnO4, CoCl2, fosfomolibdinskom kiselinom i/ili mrljama cernog amonijum molibdata. LCMS podaci su dobijeni na instrumentu serije Agilent 1100 sa Leap Technologies autosampler, Gemini C18 kolonama, gradijentima acetonitril/voda i modifikatorima trifluorosirćetne kiseline, mravlje kiseline ili amonijum hidroksida. Eluat kolone je analiziran korišćenjem Waters ZQ masenog spektrometra koji je skenirao u oba režima pozitivnih i negativnih jona od 100 do 1200 Da. Korišćeni su i drugi slični instrumenti. HPLC podaci su generalno dobijeni na instrumentu serije Agilent 1100, koristeći naznačene kolone, gradijente acetonitril/voda i modifikatore trifluorosirćetne kiseline ili amonijum hidroksida. GCMS podaci su dobijeni korišćenjem peći Hewlett Packard 6890 sa HP 6890 injektorom, HP-1 kolonom (12 m k 0.2 mm k 0.33 µm) i gasom nosačem helijumom. Uzorak je analiziran na HP 5973 masenom selektivnom detektoru koji je skenirao od 50 do 550 Da korišćenjem jonizacije elektrona. Prečišćavanja su obavljena tečnom hromatografijom srednje performanse (MPLC) korišćenjem Isco CombiFlash Companion, AnaLogic IntelIiFlash 280, Biotage SP1 ili Biotage Isolera One instrumenata i unapred upakovanih Isco RediSep ili Biotage Snap kertridža od silicijum dioksida. Hiralna prečišćavanja su izvedena hiralnom superkritičnom tečnom
4
hromatografijom (SFC), uglavnom koristeći Berger ili Thar instrumente; kolone kao što su ChiralPAK-AD, -AS, -IC, Chiralcel-OD ili -OJ kolone; i CO2smeše sa metanolom, etanolom, 2-propanolom ili acetonitrilom, same ili modifikovane korišćenjem trifluorosirćetne kiseline ili propan-2-amina. UV detekcija je korišćena za pokretanje sakupljanja frakcija. Za sinteze koje se odnose na procedure u drugim Primerima ili Postupcima, prečišćavanja mogu da variraju: generalno, rastvarači i odnosi rastvarača koji se koriste za eluente/gradijente su izabrani da obezbede odgovarajući Rfs ili vremena zadržavanja.
[0187] Podaci masene spektrometrije su dati iz LCMS analiza. Masena spektrometrija (MS) je izvedena putem izvora hemijske jonizacije pod atmosferskim pritiskom (APCI), jonizacije elektrosprejom (ESI), jonizacije elektronskim udarom (EI) ili jonizacije rasejanja elektrona (ES). Hemijski pomaci protonske nuklearne magnetne spektroskopije (<1>H NMR) su dati u delovima na milion na niže polje od tetrametilsilana i zabeleženi su na 300, 400, 500 ili 600 MHz Varian, Bruker ili Jeol spektrometrima. Hemijski pomaci su izraženi u delovima na milion (ppm, δ) koji se odnose na rezidualne pikove deuterisanog rastvarača (hloroform, 7.26 ppm; CD2HOD, 3.31 ppm; acetonitril-d2, 1.94 ppm; dimetil sulfoksid-d5, 2.50 ppm; DHO, 4.79 ppm). Oblici pikova su opisani na sledeći način: s, singlet; d, dublet; t, triplet; k, kvartet; kvin, kvintet; m, multiplet; br s, široki singlet; app, očigledno. Analitički SFC podaci su generalno dobijeni na Berger analitičkom instrumentu kao što je gore opisano. Podaci o optičkoj rotaciji su dobijeni na polarimetru PerkinElmer model 343 korišćenjem ćelije od 1 dm. Mikroanalize su izvršile kompanije Quantitative Technologies Inc. i bile su u granicama od 0.4% od izračunatih vrednosti.
[0188] Osim ako nije drugačije naznačeno, hemijske reakcije su izvedene na sobnoj temperaturi (oko 23 stepena Celzijusa).
[0189] Osim ako nije drugačije naznačeno, svi reaktanti su nabavljeni komercijalno i korišćeni bez daljeg prečišćavanja, ili su pripremljeni korišćenjem postupaka poznatih u literaturi.
[0190] Izrazi "koncentrovano", "upareno" i "koncentrovano in vacuo" odnose se na uklanjanje rastvarača pod sniženim pritiskom na rotacionom isparivaču sa temperaturom kupatila manjom od 60 °C. Skraćenice "min" i "h" označavaju "minute" i "sate", respektivno. Izraz "TLC" odnosi se na tankoslojnu hromatografiju, "sobna temperatura ili temperatura okoline" označava temperaturu između 18 do 25 °C, "GCMS" se odnosi na gasnu hromatografiju-masenu spektrometriju, "LCMS" se odnosi na tečnu hromatografiju-masenu spektrometriju, "UPLC" se odnosi na za tečnu hromatografiju ultra-performanse, "HPLC" se odnosi na tečnu hromatografiju visokih performansi, a "SFC" se odnosi na superkritičnu tečnu hromatografiju.
[0191] Hidrogenacija se može izvesti u Parr šejkeru pod pritiskom vodonika, ili u Thales-nano H-Cube aparatu za hidrogenizaciju protoka pri punom vodoniku i brzini protoka između 1-2 mL/min na određenoj temperaturi.
[0192] HPLC, UPLC, LCMS, GCMS i SFC vremena zadržavanja su merena korišćenjem postupaka navedenih u procedurama.
[0193] U nekim primerima, hiralne separacije su sprovedene da bi se odvojili enantiomeri ili dijastereomeri određenih jedinjenja pronalaska (u nekim primerima, razdvojeni enantiomeri su označeni kao ENT-1 i ENT-2, prema njihovom redosledu eluiranja; slično tome, odvojeni dijastereomeri označeni su kao DIAST-1 i DIAST-2, prema njihovom redosledu eluiranja). U nekim primerima, optička rotacija enantiomera je merena pomoću polarimetra. Prema njegovim posmatranim podacima o rotaciji (ili njegovim specifičnim podacima o rotaciji), enantiomer sa rotacijom u smeru kazaljke na satu je označen kao (+)-enantiomer, a enantiomer sa rotacijom u smeru suprotnom od kazaljke na satu je označen kao (-)-enantiomer. Racemska jedinjenja su naznačena ili odsustvom nacrtane ili opisane stereohemije, ili prisustvom (+/-) pored strukture; u ovom poslednjem slučaju, naznačena stereohemija predstavlja samo jedan od dva enantiomera koji čine racemsku smešu.
[0194] Jedinjenja i međuproizvodi opisani u nastavku su imenovani korišćenjem konvencije imenovanja koja je obezbeđena uz ACD/ChemSketch 2019.1.1, verzija datoteke C05H41, Build 110712 (Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Ontario, Kanada). Konvencija imenovanja obezbeđena sa ACD/ChemSketch 2019.1.1 je dobro poznata stručnjacima i veruje se da je konvencija o imenovanju obezbeđena sa ACD/ChemSketch 2019.1.1 generalno u skladu sa IUPAC-om (Međunarodna unija za čistu i primenjenu hemiju) preporuke o nomenklaturi organske hemije i pravilima CAS indeksa.
Primer 1
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (1)
[0195]
4
Korak 1. Sinteza metil (1R,2S,5S)-3-[N-(terc-butoksikarbonil)-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C1).
4
[0196] Rastvor na 0°C N-(terc-butoksikarbonil)-L-valina (69.7 g, 321 mmol) u smeši acetonitrila i N,N-dimetilformamida (10:1, 1.10 L) je tretiran sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU; 122 g, 321 mmol), praćen N,N-diizopropiletilamin (127 mL, 729 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana 5 minuta, dodata je hidrohloridna so metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (60.0 g, 292 mmol), i mešanje je nastavljeno na 0°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena vodenim rastvorom limunske kiseline (1 N; 50 mL) i vodom (100 mL), mešana 2 minuta i koncentrovana in vacuo do otprilike jedne polovine početne zapremine. Dobijena smeša je podeljena između etil acetata i vode, a vodeni sloj je ekstrahovan tri puta sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su zatim isprani tri puta vodom i jednom zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je mešan u minimalnoj količini etil acetata, a zatim filtriran; nerastvorni materijal je ispran etil acetatom dok nije bio beo. Kombinovani filtrati su koncentrovani pod sniženim pritiskom i zatim podvrgnuti hromatografiji na silika gelu (eluent: 1:1 etil acetat/heptan), dajući C1 kao žuto ulje. Prinos: 109 g, kvantitativno. LCMS m/z 369.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 5.08 (d, J = 9.6 Hz, IH), 4.45 (s, IH), 4.11 (dd, J = 9.7, 7.8 Hz, 1H), 3.95 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.1 Hz, 1H), 3.86 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.2, 4.8 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 2.04 - 1.93 (m, 1H), 1.50 - 1.41 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.04 (s, 3H), 1.00 ( d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.95 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.93 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza metila (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-L-valil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilat, hidrohloridna so (C2).
[0197] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 15 mL, 60 mmol) je dodat u rastvor na 0 °C C1 (1.00 g, 2.71 mmol) u etil acetatu (50 mL). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2 sata, nakon čega je dodato još hlorovodonika u rastvoru 1,4-dioksana (4 M; 10 mL, 40 mmol) i mešanje je nastavljeno na 0 °C tokom 3 sata, a zatim na sobnoj temperaturi 1 sat. Reakciona smeša je zatim tretirana rastvorom hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 10 mL, 40 mmol) i metanolom (15 mL) i ostavljena da se meša preko noći na sobnoj temperaturi. Koncentracija in vacuo priuštila je C2 kao žvakaća guma; ovaj materijal je korišćen u daljoj hemiji bez dodatnog prečišćavanja, a pretpostavljeno je da je reakcija kvantitativna. LCMS m/z 269.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.24 (br s, 3H), 4.27 (s, 1H), 3.81 - 3.61 (m, 3H), 3.67 (s, 3H), 2.21 - 2.06 (m, 1H), 1.63 - 1.55 (m, 1H) , 1.49 (d, komponenta AB kvarteta, J = 7.6 Hz, IH), 1.09 - 0.88 (m, 12 H).
4
Korak 3. Sinteza metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C3).
[0198] Trietilamin (1.55 mL, 11.1 mmol) je dodat u rastvor na 0 °C C2 (1.0 g, 3.3 mmol) u dihlorometanu (37 mL), praćeno ukapavanjem anhidrida trifluorosirćetne kiseline (0.57 mL, 4.0 mmol) tokom 30 minuta. Reakciona smeša je mešana na 0 °C 30 minuta, nakon čega je razblažena dihlorometanom (100 mL), isprana uzastopno sa 10% vodenim rastvorom kalijum bisulfata (50 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (30 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana in vacuo čime se dobija C3 kao svetložuto ulje. Prinos: 1.2 g, 3.3 mmol, kvantitativno. LCMS m/z 365.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.04 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 4.54 (dd, J = 8.9, 6.3 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 3.91 (dd, J = 10.1, 5.0 Hz, 1H), 3.80 - 3.73 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.25 - 2.13 (m, 1H), 1.55 - 1.47 (m, 2H), 1.09 - 1.03 (m, 1H) ), 0.94 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.92 (s, 3H).
Korak 4. Sinteza (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C4).
[0199] Koncentrovana hlorovodonična kiselina (0.57 mL, 6.6 mmol) je dodata u rastvor C3 (1.25 g, 3.43 mmol) u smeši sirćetne kiseline (40.8 mL) i vode (8.2 mL). Reakciona smeša je zagrevana na 55 °C tokom 3 dana, nakon čega je podeljena između vode (50 mL) i etil acetata (100 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 x 50 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo dajući C4 kao belu penu. Prinos: 1.00 g, 2.85 mmol, 83%. LCMS m/z 351.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d), karakteristični pikovi: δ 4.56 - 4.44 (m, 2H), 2.24 - 2.12 (m, 1H), [1.66 (d, komponenta AB kvarteta, J = 7.5 Hz) i 1.59-1.47 (m), ukupno 2H], 1.10-1.01 (m, 6H), 0.96-0.91 (m, 6H).
Korak 5. Sinteza terc-butil {(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}karbamata (C5).
[0200] Rastvor amonijaka u metanolu (7.0 M; 150 mL, 1.0 mol) je dodat u rastvor metila na 0 °C. N-(terc-butoksikarbonil)-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninat (5.00 g, 17.5 mmol) u metanolu (25 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 3 dana, koncentrovana je in vacuo; ostatak je razblažen i ponovo koncentrisan uzastopno sa smešom etil acetata i heptana (1:1, 4 x 50 mL), a zatim heptanom (50 mL) da bi se dobilo C5 kao čvrsta
4
supstanca (5.27 g, pretpostavljeno kvantitativno) koja je sadržala rezidualni rastvarač. Deo ovog materijala je korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 216.2 [(M - 2-metilprop-1-en)+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.16 - 3.96 (m, 1H), 3.40 - 3.27 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.55 - 2.42 (m, 1H), 2.35 (dddd, J = 12.2, 8.6, 6.8, 3.3 Hz, 1H), 2.03 (ddd, J = 14.0, 11.0, 4.4 Hz, 1H), 1.93 - 1.81 (m, 1H), 1.74 (ddd, J = 14.2, 10.1, 4.3 Hz, IH), 1.45 (s, 9H).
Korak 6. Sinteza terc-butil {(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}karbamat (C6).
[0201] 2,6-Dimetilpiridin (2 mL, 17 mmol) i anhidrid trifluorosirćetne kiseline (0.94 mL, 6.6 mmol) su dodati u rastvor na 0 °C C5 (iz prethodnog koraka; 1.0 g, ≤3.3 mmol) u dihlorometanu (12 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1.5 h, nakon čega je tretirana hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 30 mL) i dihlorometanom (60 mL). Organski sloj je ispran uzastopno sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (30 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 mL), osušen preko natrijum sulfata i koncentrovan in vacuo; hromatografija na silika gelu (Gradijent: 40% do 100% etil acetata u heptanu) dala je C6 kao čvrstu supstancu. Prinos: 737 mg, 2.91 mmol, 88% u 2 koraka. LCMS m/z 254.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.72 (dd, J = 9.3, 6.8 Hz, 1H), 3.39 - 3.27 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.57 - 2.46 (m, 1H), 2.36 (dddd, J = 12.2, 8.6, 6.3, 3.4 Hz, 1H), 2.21 (ddd, J = 13.8, 9.3, 5.6 Hz, IH), 1.92 - 1.79 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
Korak 7. Sinteza metansulfonatne soli (2S)-2-amino-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propannitrila (C7).
[0202] Rastvoru C6 (317 mg, 1.25 mmol) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-olu (3 mL) dodata je metansulfonska kiselina (81.2 uL, 1.25 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 45 minuta, koncentrovana je in vacuo, zatim više puta rastvorena u mešavini rastvarača i ponovo koncentrisana: acetonitril i etil acetat (1:1, 2 x 10 mL), a zatim etil acetat i heptan (1:1, 2 x 10 mL). Rezultujuće C7 je dobijeno kao staklo (423 mg), bez nitrilnog epimera preko<1>H i<13>C NMR analiza. Deo ovog materijala je korišćen u daljim reakcijama bez dodatnog prečišćavanja. LCMS m/z 154.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.78 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 3.42 - 3.36 (m, 2H), 2.82 - 2.68 (m, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.50 - 2.39 (m, 1H), 2.20 (t, J = 7.3 Hz, IH), 2.07 - 1.80 (m, 2H).
4
Korak 8. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (1).
[0203] Smeša C7 (iz prethodnog koraka; 98.8 mg, ≤0.292 mmol) i C4 (100 mg, 0.285 mmol) u acetonitrilu (1.5 mL) je ohlađena na 0 °C. Dodat je O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU, 97%; 112 mg, 0.286 mmol), a zatim rastvor 4-metilmorfolina (94.0 µL, 0.855 mmol) u acetonitrilu (0.5 mL), i reakciona smeša je mešana na 0 °C oko 2 sata. Zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (30 mL) je zatim dodat u reakcionu smešu na 0 °C, a zatim dihlorometan (50 mL), a organski sloj je ispran hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 30 mL). Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani dihlorometanom (60 mL), nakon čega su kombinovani organski slojevi osušeni preko natrijum sulfata, koncentrovani in vacuo, i podvrgnuti hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 20% metanola u etil acetatu). Pošto je sa NMR i LCMS procenjeno da je dobijeni materijal kontaminiran epimerom proizvoda, zatim je prečišćen HPLC reverzne faze (kolona: Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Gradijent: 5% do 95% B tokom 8.54 minuta, zatim 95% B tokom 1.46 minuta; Brzina protoka: 25 mL/minuti) da se dobije (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (1). Prinos: 14.6 mg, 30.1 umol, 11%. LCMS m/z 486.5 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.33 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis C18, 4.6 x 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline ( zapr/zapr). Gradijent: 5% do 95% B tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta Brzina protoka: 2 mL/min).
Alternativna sinteza C4
(1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilna kiselina (C4)
[0204]
Korak 1. Sinteza (1R,2S,5S)-3-[N-(terc-butoksikarbonil)-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C8).
[0205] Vodeni rastvor litijum hidroksida (2.0 M; 436 mL, 872 mmol) je dodat u rastvor C1 (107 g, 290 mmol) u tetrahidrofuranu (730 mL). Nakon što je dobijena smeša mešana na sobnoj temperaturi približno 2 sata, razblažena je vodom i etil acetatom, zatim tretirana sa 1 M vodenim rastvorom natrijum hidroksida. Vodeni sloj je ispran etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su ekstrahovani tri puta sa 1 M vodenim rastvorom natrijum hidroksida, sve dok LCMS analiza nije pokazala da je C8 bio potpuno uklonjen iz organskog sloja. Zakiseljavanje kombinovanih vodenih slojeva do pH 2 je izvedeno dodavanjem koncentrovane hlorovodonične kiseline, nakon čega je smeša ekstrahovana tri puta etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani; trituracija ostatka sa heptanom dala je C8 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 92.8 g, 262 mmol, 90%. LCMS m/z 355.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.32 (s, 1H), 4.05 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.5 Hz, 1H), 4.01 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.88 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.4, 5.3 Hz, 1H), 2.03 - 1.91 (m, 1H), 1.57 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.5, 5.2 Hz, 1H), 1.50 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.5 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.08 (s, 3H), 0.99 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.97-0.94 (m, 6H).
Korak 2. Sinteza hidrohloridne soli (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-L-valil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C9).
1
[0206] Rastvoru C8 (82.8 g, 234 mmol) u dihlorometanu (230 mL) dodat je rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4.0 M; 409 mL, 1.64 mol). Reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi, nakon čega je koncentrovana in vacuo, obezbeđivanje C9 kao bela pena. Ovaj materijal je direktno korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 255.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.42 (s, IH), 4.05 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 3.89 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.5, 5.2 Hz, 1H), 3.74 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.5 Hz, 1H), 2.36 - 2.25 (m, 1H), 1.62 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.5, 5.1 Hz, 1H), 1.57 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, IH), 1.16 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.10 (s, 3H), 1.04 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.01 (s, 3H).
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilna kiselina (C4).
[0207] Rastvor C9 (iz prethodnog koraka; ≤234 mmol) u metanolu (230 mL) je ohlađen na 0 °C, tretiran trietilaminom (66.7 mL, 479 mmol) i mešan 5 minuta, nakon čega je etil trifluoroacetat (36.1 mL, 303 mmol) je polako dodavan. Nakon što je reakciona smeša ostavljena da se meša na sobnoj temperaturi 90 minuta, koncentrovana je in vacuo. Ostatak je razblažen vodom, 1 M vodenim rastvorom natrijum hidroksida i etil acetatom, a dobijeni organski sloj je ekstrahovan dva puta sa 1 M vodenim rastvorom natrijum hidroksida. Kombinovani vodeni slojevi su zakiseljeni do pH 2 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline, zatim ekstrahovani tri puta etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo, što je dalo C4 kao belu penu. Prinos: 73.4 g, 210 mmol, 90% u 2 koraka. LCMS m/z 351.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.65 (v br s, 1H), 9.82 (d, J = 7.7 Hz, IH), 4.16 (dd, J = 9.9, 7.9 Hz, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.86 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 3.81 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.5, 5.0 Hz, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 1H), 1.54 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.7, 4.6 Hz, 1H), 1.42 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.5 Hz, 1H), 1.02 (s, 3H), 0.95 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.84 (s, 3H).
Alternativna sinteza Primera 1
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (1)
[0208]
2
Korak 1. Sinteza metansulfonatne soli metil 3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninata (C10).
[0209] U rastvor metila N-(terc-butoksikarbonil)-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninat (10.1 g, 35.3 mmol) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-olu (70 mL) je dodata metansulfonska kiselina (2.30 mL, 35.4 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 70 minuta, LCMS analiza je pokazala da je početni materijal pretvoren u C10: LCMS m/z 187.2 [M+H]<+>. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, i ostatak je ponovo rastvoren dva puta, nakon čega je usledila koncentracija pod sniženim pritiskom, u smeši acetonitrila i etil acetata (1:1, 2 x 20 mL). Dobijeni materijal je uzet u smešu acetonitrila i etil acetata (1:1, 30 mL), koncentrovan, zatim dva puta ponovo rastvoren u etil acetatu (2 x 40 mL) i koncentrovan. Ostatak je triturisan sa etil acetatom (60 mL) da bi se dobilo C10. Prinos: 9.87 g, 35.0 mmol, 99%.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.22 (dd, J = 9.7, 3.6 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.41 - 3.36 (m, 2H), 2.84 - 2.74 (m, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.41 (dddd, J = 12.3, 8.6, 5.1, 3.6 Hz, 1H), 2.25 (ddd, J = 15.1, 4.5, 3.6 Hz, 1H), 1.98 (ddd, J = 15.1, 9.6, 9.6 Hz, 1H), 1.87 (dddd, J = 12.6, 10.9, 9.2, 9.2 Hz, IH).
Korak 2. Sinteza metila N-({(1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il}karbonil)-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninat (C11).
[0210] Na 0 °C rastvor od C10 (2.76 g, 9.78 mmol) i C4 (3.43 g, 9.79 mmol) u acetonitrilu (40 mL) dodat je 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (1.88 g, 9.81 mmol), nakon čega je u kapima dodavan piridin (2.37 mL, 29.3 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2.25 sati, nakon čega je tretirana hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 50 mL) i ekstrahovana etil acetatom (150 mL). Organski sloj je ispran uzastopno sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (50 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je stavljen u metil terc-butil etar (30 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom, a dobijeno staklo je mešano sa metil terc-butil etrom (50 mL) na sobnoj temperaturi preko noći. Posle filtracije, filter kolač je ispran metilom terc-butil etar (3 x 6 mL) da se dobije C11 kao čvrsta supstanca, koja po<1>H NMR analizi je sadržala značajan rezidualni metil terc-butil etar. Deo ovog materijala je korišćen u sledećem koraku. Prinos: 3.74 g; korigovano za preostali metil terc-butil etar: 2.94 g, 5.67 mmol, 58%. LCMS m/z 519.5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.55 (dd, J = 12.0, 3.8 Hz, 1H), 4.34 (s, 1H), 4.29 (d, J = 9.6 Hz, IH), 3.97 (d, J = 3.1 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.37 - 3.23 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.73 - 2.62 (m, 1H), 2.32 (dddd, J = 12.4, 8.8, 6.7, 2.4 Hz, 1H), 2.21 - 2.10 (m, 2H), 1.86 - 1.74 (m, 2H), 1.60 (dt, komponenta ABX2sistem, J = 7.7, 3.1 Hz, 1H), 1.49 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.02 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.99-0.95 (m, 6H).
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (C12).
[0211] Rastvor amonijaka u metanolu (7.0 M; 5 mL, 40 mmol) je dodat u rastvor C11 (iz prethodnog koraka: 205 mg, 0.311 mmol) u metanolu (1 mL). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 1.5 sata, nakon čega je ponovo dodat rastvor amonijaka u metanolu (7.0 M; 5 mL, 40 mmol) i mešanje je nastavljeno preko noći. Reakciona smeša je zatim tretirana po treći put sa istom količinom amonijaka u metanolu; posle narednih 8 sati reakcije, koncentrovana je in vacuo. Ostatak je razblažen i ponovo koncentrisan uzastopno sa etil acetatom (2 x 20 mL) i smešom etil acetata i heptana (1:1, 2 x 20 mL). Dobijeni materijal je rastvoren u dihlorometanu (50 mL), ispran hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 30 mL) i zasićenim vodenim rastvorom
4
natrijum hlorida (30 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo obezbediti C12 kao čvrsta. Prinos: 87 mg, 0.17 mmol, 55%. LCMS m/z 504.5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.68 (d, J = 7.9 Hz, <1H, nepotpuno zamenjeno sa rastvaračem), 4.44 (ddd, J = 11.9, 7.9, 4.0 Hz, 1H), 4.37 - 4.26 (m, 2H), 4.01 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.3, 5.1 Hz, 1H), 3.94 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.2 Hz, 1H), 3.39 - 3.24 (m, 2H, pretpostavljeno; u velikoj meri prikriveno pikom rastvarača), 2.72 - 2.62 (m, 1H), 2.38 - 2.28 (m, 1H), 2.21 - 2.08 (m, 2H), 1. - 1.72 (m, 2H), 1.58 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.5, 5 Hz, 1H), 1.54 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.08 (s, 3H), 1.02 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.97 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.96 (s, 3H).
Korak 4. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (1).
[0212] Metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 88.4 mg, 0.371 mmol) je dodat u rastvor C12 (85.0 mg, 0.17 mmol) u dihlorometanu (4.0 mL), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi. Posle 3 sata, metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 20 mg, 84 umol) ponovo je dodat; 30 minuta kasnije, reakciona smeša je razblažena etil acetatom (60 mL), isprana uzastopno sa hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 30 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (30 mL) , osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je stavljen u heptan i ponovo koncentrisan pre nego što je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 5% metanola u etil acetatu). (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (1) je izolovan kao čvrsta supstanca. Prinos: 35 mg, 72 umol, 42%. LCMS m/z 486.5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 5.04 (dd, J = 10.7, 5.4 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.03 - 3.94 (m, 2H), 3.35 - 3.23 (m, 2H, pretpostavljeno; u velikoj meri prikriveno pikom rastvarača), 2.72 - 2.62 (m, 1H), 2.3 - 2.26 (m, 2H), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 1.93 - 1.75 (m, 2H), 1.64 (ddd, J = 7.6, 4.2, 2.1 Hz, 1H), 1.41 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 1.09 (s, 3H), 1.02 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 1.00-0.95 (m, 6H).
Primer 2 (samo kao referentan)
trifluoroacetatna so N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-N<2>-(pirolidin-1-ilacetil)-L-leucinamida (2)
Korak 1. Sinteza soli p-toluensulfonske kiseline benzil 4-metil-L-leucinata (C13).
[0214] Suspenzija 4-metil-L-leucina (9.5 g, 65 mmol), benzil alkohola (28.3 g, 262 mmol) i strtoluensulfonska kiselina monohidrat (14.9 g, 78.3 mmol) u toluenu (200 mL) je zagrevan na refluksu preko noći; korišćena je Dean-Stark zamka za azeotropsko uklanjanje nastale vode. Reakciona smeša je zatim koncentrovana in vacuo, nakon čega je ostatak razblažen dietil etrom (200 mL) i etil acetatom (100 mL). Dobijena suspenzija je mešana 1.5 h i filtrirana; filter kolač je ispran dietil etrom da se dobije C13 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 24.9 g, 61.1 mmol, 94%. LCMS m/z 236.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.30 (br s, 3H), 7.47 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.44 - 7.36 (m, 5H), 7.11 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 5.23 (AB kvartet, JAB= 12.3 Hz, ΔνAB= 13.7 Hz, 2H), 4.02 (dd, J = 7.3, 4.5 Hz, 1H), 2.29 (s, 3H), 1.81 (dd, J = 14.5, 7.3 Hz, 1H), 1.57 (dd, J = 14.5, 4.6 Hz, IH), 0.90 (s, 9H).
Korak 2. Sinteza benzil 4-metil-N-(pirolidin-1-ilacetil)-L-leucinat (C14).
[0215] Smeša C13 (800 mg, 1.96 mmol) i pirolidin-1-iloctene kiseline (254 mg, 1.97 mmol) u N,N-dimetilformamid (4 mL) na 0 °C je tretirana sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU; 746 mg, 1.96 mmol), a zatim rastvorom 4-metilmorfolina (0.496 mL, 4.51 mmol) u dihlorometanu (1 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0°C tokom 2 sata, dodat je zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (30 mL) na 0°C; dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 x 60 mL), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu je obavljeno dva puta (gradijent: 0% do 20% etil acetata u heptanu, nakon čega je usledilo drugo hromatografsko prečišćavanje korišćenjem 0% do 10% etil acetata u heptanu), da bi se dobilo C14 kao guma (761 mg). Ovaj materijal je direktno korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 347.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.40 -7.29 (m, 5H), 5.16 (AB kvartet, JAB= 12.2 Hz, ΔνAB= 11.1 Hz, 2H), 4.56 (dd, J = 9.0, 3.1 Hz, 1H), 3.76 (AB kvartet, JAB= 15.6 Hz, ΔνAB= 13.6 Hz, 2H), 3.17 - 3.06 (m, 4H), 2.03 - 1.93 (m, 4H), 1.81 (dd, J = 14.5, 3.1 Hz, 1H), 1.60 (dd, J = 14.5, 9.0 Hz, IH), 0.95 (s, 9H).
Korak 3. Sinteza 4-metil-N-(pirolidin-1-ilacetil)-L-leucina (C15).
[0216] Rastvoru C14 (iz prethodnog koraka; 760 mg, ≤1.96 mmol) u metanolu (5 mL) dodat je paladijum na ugljeniku (76.0 mg). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi pod vodonikom (50 psi) preko noći, nakon čega je LCMS analiza pokazala konverziju u C15: LCMS m/z 257.4 [M+H]<+>. Reakciona smeša je filtrirana dva puta kroz filter od 0.15 µm, a filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je dva puta rastvoren u smeši etil acetata i heptana (1:1, 2 x 20 mL), nakon čega je usledila koncentracija pod sniženim pritiskom; ovo je obezbedilo C15 kao čvrsta supstanca (646 mg). Delovi ovog materijala su korišćeni u kasnijim hemijskim reakcijama bez daljeg prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.46 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.31 (ddd, J = 8.9, 8.6, 3.0 Hz, 1H), 3.74 - 3.60 (m, 2H), 3.00 br (s, 4H), 1.90 - 1.79 (m, 4H), 1.70 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.3, 3.0 Hz, 1H), 1.56 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.3, 9.2 Hz, IH), 0.90 (s, 9H).
Korak 4. Sinteza trifluoroacetatna soli N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-N<2>-(pirolidin-1-ilacetil)-L-leucinamida (2).
[0217] Rastvor C15 (iz prethodnog koraka; 30 mg, ≤91 µmol) i C7 (iz koraka 7 Primera 1; 35.3 mg, ≤0.104 mmol) u N,N-dimetilformamidU (1 mL) je ohlađen na 0 °C i tretiran sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatOM (HATU, 97%; 39.9 mg, 0.102 mmol), a zatim rastvorOM 4-metilmorfolina (28.0 uL, 0.255 mmol) u dihlorometanu (0.25 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C oko 1.5 sata, razblažena je zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (3 mL) na 0 °C i ekstrahovana dihlorometanom (4 x 4 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i prečišćenI pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Gradijent: 5% do 25% B tokom 8.5 minuta, zatim 25% do 95% acetonitrila tokom 0.5 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 25 mL/min) da se dobije N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-N<2>-(pirolidin-1-ilacetil)-L-leucinamid, trifluoroacetatna so (2) kao guma. Prinos: 8.1 mg, 16 µmol, 18% u 3 koraka. LCMS m/z 392.6 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 1.47 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis C18, 4.6 x 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline ( zapr/zapr). Gradijent: 5% do 95% B tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta Brzina protoka: 2 mL/min).
Primer 3 (samo kao referentni)
N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-(2,6-dihlorobenzoil)-4-metil-L-leucinamid (3)
[0218]
Korak 1. Sinteza metansulfonatne soli 3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C16).
[0219] Rastvoru C5 (6.13 g, ≤19 mmol) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-olu (40 mL) dodata je metansulfonska kiselina (1.83 g, 19 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, nakon čega je koncentrovana in vacuo, resuspendovana u mešavini toluena i heptana, i još jednom koncentrovana, dajući higroskopno staklo (7.47 g). Deo ovog materijala (6.47 g) je razblažen i ponovo koncentrisan uzastopno sa sledećim: smešom dihlorometana i etanola (2:3, 2 x 50 mL); etil acetata i etanola (2:3, 50 mL); etil acetata, heptana i dihlorometana (4:4:1, 2 x 50 mL). Dobijeni materijal je rastvoren u smeši acetonitrila i vode (1:1, 22 mL) i liofilizovan 2 dana da bi se dobilo C16 kao staklo. Prinos: 3.23 g, 12.1 mmol, 73% u 2 koraka. LCMS m/z 172.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.03 (dd, J = 9.1, 4.6 Hz, 1H), 3.43 - 3.35 (m, 2H), 2.82 - 2.72 (m, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.49 - 2.38 (m, 1H), 2.12 - 1.96 (m, 1H) ), 1.94-1.81 (m, IH).
Korak 2. Sinteza N-(terc-butoksikarbonil)-4-metil-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C17).
[0220] Rastvor na 0 °C C16 (1.34 g, 5.02 mmol) i N-(terc-butoksikarbonil)-4-metil-L-leucin (1.28 g, 5.22 mmol) u N,N-dimetilformamidu (7.0 mL) je tretiran sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU, 97%; 2.04 g, 5.20 mmol), a zatim rastvorom 4-metilmorfolina (1.43 mL, 13.0 mmol) u dihlorometanu (3 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom 2.25 sata, ugašena je na 0 °C dodavanjem hlorovodonične kiseline (1 M; 30 mL) i zatim razblažena dihlorometanom (50 mL). Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 mL), a kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani dihlorometanom (60 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i suspendovani/koncentrovani sa heptanom (3 x 10 mL). Prečišćavanje ostatka hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 20% metanola u etil acetatu) dalo je C17 kao čvrsta. Prinos: 1.42 g, 3.56 mmol, 71%. LCMS m/z 399.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.83 (d, J = 7.4 Hz, <1H, nepotpuno zamenjeno sa rastvaračem), 4.43 (dd, J = 11.2, 4.2 Hz, 1H), 4.11 - 4.05 (m, 1H), 3.38 - 3.24 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.52 - 2.41 (m, 1H), 2.40 - m, 2.
1H), 2.13 (ddd, J = 14.0, 11.2, 4.5 Hz, 1H), 1.91 - 1.75 (m, 2H), 1.71 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.4, 3.2 Hz, 1H), 1.51 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.4, 9.3 Hz, IH), 1.45 (s, 9H), 0.97 (s, 9H).
Korak 3. Sinteza metansulfonatne soli 4-metil-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C18).
[0221] Metansulfonska kiselina (32.6 µL, 0.502 mmol) je dodata u rastvor C17 (200 mg, 0.502 mmol) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-olu (1.5 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 40 minuta, nakon čega je koncentrovana in vacuo, rastvoren u etil acetatu i još jednom koncentrovana, obezbeđujući C18 kao čvrstu supstancu (238 mg). Većina ovog materijala je korišćena u sledećem koraku. LCMS m/z 299.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.53 (dd, J = 10.3, 5.0 Hz, 1H), 3.91 (dd, J = 7.6, 5.5 Hz, 1H), 3.41 - 3.27 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjen pikom rastvarača), 2.70 (s, 3H), 2.57 - 2.47 (m, 1H), 2.41 (dddd, J = 12.0, 8.6, 7.0, 3.2 Hz, 1H), 2.15 (ddd, J = 14.0, 10.3, 5.0 Hz, 1H), 2.01 (dd, J = 14.4, 7.5 Hz, 1H), 1.96 - 1.85 (m, 1H), 1.78 (ddd, J = 14.1, 9.1, 5.0 Hz, 1H), 1.59 (dd, J = 14.3, 5.5 Hz, IH), 1.01 (s, 9H).
Korak 4. Sinteza N-(2,6-dihlorobenzoil)-4-metil-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C19).
[0222] Suspenzija C18 (iz prethodnog koraka: 234 mg, ≤0.49 mmol) u dihlorometanu (2 mL) na 0 °C je tretirana trietilaminom (170 µL, 1.2 mmol) nakon čega je u kapima dodavan rastvor 2,6-dihlorobenzoil hlorida (130 mg, 0.621 mmol) u dihlorometanu (0.2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, nakon čega je razblažena dihlorometanom (60 mL), zatim isprana hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 30 mL), a zatim zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 mL). Organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran, koncentrovan in vacuo, i podvrgnut hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 30% metanola u etil acetatu) da bi se dobilo C19. Prinos: 120 mg, 0.255 mmol, 52% u 2 koraka. LCMS m/z 471.4 (uočen uzorak dihloro izotopa) [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.45 (d, J = 7.9 Hz, <1H, nepotpuno zamenjeno sa rastvaračem), 7.45 - 7.35 (m, 3H), 4.59 (dd, J = 7.8, 4.5 Hz, 1H), 4.52 - 4.44 (m, 1H), 3.37 - 3.24 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.65 - 2.55 (m, 1H), 2.37 (dddd, J = 12.5, 8.8, 6.6, 2.8 Hz, 1H), 2.19 (ddd, J = 13.9, 11.3, 4.5 Hz, 1H), 1.91 - 1.72 (m, 3H), 1.66 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.4, 7.8 Hz, IH), 1.03 (s, 9H).
Korak 5. Sinteza N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-(2,6-dihlorobenzoil)-4-metil-L-leucinamid (3).
[0223] Rastvor C19 (90 mg, 0.19 mmol) i 1H-imidazol (33.8 mg, 0.496 mmol) u piridinu (1 mL) je ohlađen u kupatilu acetonitrila/suvog leda (-35 °C). Ovome je dodat fosfor oksihlorid (0.100 mL, 1.07 mmol) i reakciona smeša je mešana na -30 °C do -20 °C. Posle 30 minuta, dodat je piridin (2 mL) da bi se olakšalo mešanje; posle 1 sata, dodat je dihlorometan (2 mL) iz istog razloga. Posle 2 sata reakcije, ponovo je dodat fosfor oksihlorid (0.100 mL, 1.07 mmol) i mešanje je nastavljeno 30 minuta na -30 °C, nakon čega je reakciona smeša zagrejana do 0 °C i mešana dodatnih 40 minuta. Zatim je tretirana hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 30 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (2 x 60 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i podvrgnut hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 15% metanola u etil acetatu) da bi se dobila čvrsta supstanca (67 mg). Ovaj materijal je kombinovan sa proizvodom (12 mg) iz slične reakcije izvedene korišćenjem C19 (30 mg, 64 µmol) i dva puta rastvoren u etil acetatu (2 x 3 mL) nakon čega je usledila koncentracija pod sniženim pritiskom. Ostatak je mešan sa smešom etil acetata i heptana (1:3, 4 mL) na sobnoj temperaturi 40 minuta i filtriran; filter kolač je ispran smešom etil acetata i heptana (1:3, 5 x 2 mL), da bi se obezbedilo N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-(2,6-dihlorobenzoil)-4-metil-L-leucinamid (3) kao čvrsta supstanca. Kombinovani prinos: 70 mg, 0.15 mmol, 59%. LCMS m/z 453.3 (uočen uzorak dihloro izotopa) [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.45 - 7.34 (m, 3H), 5.05 (dd, J = 10.7, 5.4 Hz, 1H), 4.56 (dd, J = 7.0, 5.7 Hz, 1H), 3.37 - 3.23 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjen pikom rastvarača), 2.70 - 2.59 (m, 1H), 2.42 - 2.29 (m, 2H), 1.75 - 1.73H), 1.67 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.4, 7.0 Hz, IH), 1.04 (s, 9H).
1
Primer 4 (samo kao referentni)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (4)
[0224]
Korak 1. Sinteza metil L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninat, hidrohloridna so (C20).
[0225] Rastvor metil N-(terc-butoksikarbonil)-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninata (videti Prior, A.M., et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013, 23, 6317-6320; 2.0 g, 5.0 mmol) u smeši metanola (2 mL) i rastvora hlorovodonika u etil acetatu (4 M; 20 mL) je mešano na 25 °C tokom 1 sata. Koncentrovanje in vacuo je dala C20 kao bela čvrsta supstanca (1.92 g, pretpostavljeno kvantitativno).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 9<.>09 -8.98 (m, 1H), 8.39 (br s, 3H), 7.69 (s, 1H), 4.44 - 4.31 (m, 1H), 3.22 - 3.07 (m, 2H), 2.5 - 2.38 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.24 - 2.11 (m, 1H), 2.11 - 1.99 (m, 1H), 1.78 - 1.48 (m, 5H), 0.92 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
2
Korak 2. Sinteza metila N-(4-metoksi-1H-indol-2-karbonil)-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninat (C21).
[0226] O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 494 mg, 1.30 mmol) i N,N-diizopropiletilamin (388 mg, 3.00 mmol) je dodat u rastvor na 0 °C C20 (iz eksperimenta manjeg obima sličnog koraku 1; 336 mg, ≤0.840 mmol) i 4-metoksi-1H-indol-2-karboksilne kiseline (159 mg, 0.832 mmol) u N,N-dimetilformamid (6 mL). Rastvor je mešan na 0 °C tokom 1.5 sata, nakon čega je sipan u vodu/led (10 mL) i ekstrahovan etil acetatom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (eluent: dihlorometan/metanol 10:1) dala je C21 kao žuto ulje. Prinos: 380 mg, 0.804 mmol, 97%. LCMS m/z 473.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.59 - 11.53 (m, IH), 8.53 (d, J = 8.0 Hz, IH), 8.37 (d, J = 8.0 Hz, IH), 7.65 (s, IH), 7.37 - 7.33 (m, 1H), 7.09 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.00 (d, komponenta AB kvarteta, J = 8.2 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.56-4.47 (m, 1H), 4.40-4.31 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.18-3.05 (m, 2H), 2.41- 2.29 (m, 1H), 2.15-2.03 (m, 2H), 1.78-1.49 (m, 5H), 0.93 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
Korak 3. Sinteza N-(4-metoksi-1H-indol-2-karbonil)-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alanina (C22).
[0227] U mešavinu kalcijum hlorida (0.887 g, 7.99 mmol) i natrijum hidroksida (0.168 g, 4.20 mmol) u 2-propanolu (7 mL) i vode (3 mL) je dodat C21 (1.8 g, 3.8 mmol). Reakciona smeša je mešana na 20°C tokom 6 sati, nakon čega je koncentrovana in vacuo, razblažen vodom (4 mL), podešen na pH 4 dodatkom 1 M hlorovodonične kiseline i ekstrahovan etil acetatom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (eluent: 10:1 : 0.1 dihlorometan / metanol / sirćetna kiselina) dala je C22 kao žuta čvrsta supstanca. Prinos: 1.76 g, 3.84 mmol, 100%. LCMS m/z 459.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d), karakteristični pikovi: δ 6.51 - 6.43 (m, 1H), 4.80 - 4.66 (m, 1H), 4.60 - 4.45 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.36 - 3.18 (m, 2H), 2 -2.44 (m, IH).
Alternativni korak 3. Sinteza N-(4-metoksi-1H-indol-2-karbonil)-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alanina (C22).
[0228] Rastvor C21 (20 mg, 42 umol) u tetrahidrofuranu (0.4 mL) tretiran je vodenim rastvorom koji sadrži litijum hidroksid (14.2 mg, 0.593 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 2.5 sata, razblažena je etil acetatom i isprana sa 10% vodenim rastvorom kalijum bisulfata. Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo, obezbeđivanje C22 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 20 mg, kvantitativno. LCMS m/z 459.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.27 (s, 1H), 7.14 (dd, komponenta ABX sistema, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.02 (d, komponenta AB kvarteta, J = 8.3 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.66 (dd, J = 9.0, 5.9 Hz, 1H), 4.52 (dd, J = 11.7, 3.9 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.30 - 3.18 (m, 2H), 2.65 - 2.52 (m, 1H), 2.38 - 2.26 (m, 1H), 2.21 (ddd, J = 14.0, 11.7, 4.1 Hz, 1H), 1.90 - 1.70 (m, 5H), 1.02 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.99 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Korak 4. Sinteza N-(4-metoksi-1H-indol-2-karbonil)-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C23).
[0229] U rastvor C22 (1.76 g, 3.84 mmol) i amonijum hlorida (0.246 g, 4.60 mmol) u N,N-dimetilformamid (15 mL) na 0 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 1.90 g, 5.00 mmol) i N,N-diizopropiletilamin (1.49 g, 11.5 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom 1.5 sata, N,N-diizopropiletilamin (2.3 g, 18 mmol) je korišćen za podešavanje pH na 8. Reakciona smeša je mešana dodatnih 30 minuta, nakon čega je sipana u smešu hlorovodonične kiseline (1 M; 20 mL, 20 mmol) i led. Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 x 10 mL); kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno sa hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 10 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i prečišćeni hromatografijom na silika gelu (eluent: dihlorometan/metanol 10:1), dajući C23 kao žutu čvrstu supstancu. Prinos: 1.09 g, 2.38 mmol, 62%. LCMS m/z 458.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.62 - 11.55 (m, IH), 8.42 (d, J = 7.9 Hz, IH), 8.04 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.60 (br s, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.10 (dd, komponenta ABX sistema, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.06 (br s, 1H), 7.00 (d, komponenta AB kvarteta, J = 8.2 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.54-4.41 (m, 1H), 4.34-4.22 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.17-3.01 (m, 2H), 2.31-1.95 (m, 3H), 1.76 - 1.45 (m, 5H), 0.92 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.88 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Korak 5. Sinteza N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (4).
4
[0230] U smešu C23 (500 mg, 1.09 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (565 mg, 4.37 mmol) u tetrahidrofuranu (8 mL) na 0 °C dodat je 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (50% rastvor po težini u etil acetatu: 2.78 g, 4.37 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 50 °C tokom 3 sata, koncentrovana je in vacuo, razblažen vodom (5 mL) i ekstrahovan etil acetatom (3 x 5 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo; hromatografija na silika gelu (eluent: 10:1 dihlorometan/metanol) praćeno HPLC prečišćavanjem reverzne faze (kolona: IMC-Actus Triart C18, 50 x 250 mm, 7 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.225% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 18% do 58% B; Brzina protoka: 25 mL/min). N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (4) kao žuta čvrsta supstanca. Prinos: 130 mg, 0.296 mmol, 27%. LCMS m/z 440.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.58 (br s, 1H), 8.90 (d, J = 8.0 Hz, IH), 8.47 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.71 (br s, 1H), 7.38 - 7.35 (m, 1H), 7.09 (dd, komponenta ABX sistema, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.00 (d, komponenta AB kvarteta, J = 8.2 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.02-4.93 (m, 1H), 4.49-4.40 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.19-3.05 (m, 2H), 2.41-2.29 (m, 1H), 2.20 - 2.06 (m, 2H), 1.85 - 1.62 (m, 4H), 1.58 - 1.47 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Alternativna sinteza Primera 4 (samo kao referentni)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (4)
[0231]
Korak 1. Sinteza N-[(4-metoksi-1H-indol-2-il)karbonil]-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamid (C23).
[0232] Rastvor amonijaka u metanolu (7.0 M; 21 mL, 150 mmol) je dodat u rastvor C21 (500 mg, 1.06 mmol) u metanolu (2.0 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi tokom 6 sati, ponovo je dodat rastvor amonijaka u metanolu (7.0 M; 7.0 mL, 49 mmol) i mešanje je nastavljeno preko noći. Ponovo je dodat rastvor amonijaka u metanolu (7.0 M; 7.0 mL, 49 mmol) i mešanje je nastavljeno 24 sata, nakon čega je izvršena završna obrada rastvorom amonijaka u metanolu (7.0 M; 7.0 mL, 49 mmol). Reakciona smeša je mešana još jedan dan, nakon čega je koncentrovana in vacuo. Ostatak je kombinovan sa proizvodom slične reakcije (350 mg od izolovanih 512 mg) izvedene korišćenjem C21 (500 mg, 1.06 mmol), i smeša je više puta rastvorena u etil acetatu (5 x 10 mL) i koncentrovana pod sniženim pritiskom, dajući C23 (835 mg). Ovaj materijal je direktno korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 458.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.29 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.15 (dd, komponenta ABX sistema, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.03 (br d, komponenta AB kvarteta, J = 8.3 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.59 (dd, J = 9.7, 5.0 Hz, 1H), 4.45 (dd, J = 11.3, 4.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.34 -3.19 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.57 - 2.47 (m, 1H), 2.31 (dddd, J = 12.6, 8.5, 6.8, 2.8 Hz, 1H), 2.15 (ddd, J = 14.0, 11.4, 4.6 Hz, 1H), 1.88 - 1.67 (m, 5H), 1.02 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.98 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
Korak 2. Sinteza N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (4).
[0233] Rastvor C23 (iz prethodnog koraka; 835 mg, ≤1.78 mmol) i 1H-imidazola (323 mg, 4.74 mmol) u smeši piridina (4 mL) i dihlorometana (4 mL) je ohlađen na -35 °C korišćenjem kupatila sa acetonitrilom/suvim ledom, nakon čega je dodat fosfor oksihlorid (0.956 mL, 10.2 mmol) kap po kap tokom 5 minuta. Reakcija je mešana na temperaturi između -30 °C i -20 °C oko 1.5 sata, zatim tretirana hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 50 mL) i mešana 1 sat. Posle ekstrakcije sa dihlorometanom (3 x 60 mL), dobijeni organski slojevi su kombinovani, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je kombinovan sa prečišćenim 4 iz druge serije (75 mg, 0.17 mmol) i podvrgnuti hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 5% metanola u etil acetatu) da bi se obezbedilo 4 kao čvrsta supstanca (800 mg). Ovaj materijal je kombinovan sa proizvodom (80 mg) iz slične reakcije izvedene korišćenjem C23 (161 mg, 0.352 mmol); dobijeni materijal je mešan u dietil etru (25 mL) tokom 3 dana, nakon čega je filtriran. Filter kolač je ispran smešom dietil etra i heptana (1:1, 4 x 2 mL) da bi se dobilo N[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (4) kao čvrsta. Kombinovani prinos: 519 mg, 1.18 mmol, približno 50% u 2 koraka. LCMS m/z 440.5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.57 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 8.1 Hz, IH), 8.46 (d, J = 7.7 Hz, IH), 7.70 (s, IH), 7.37 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.10 (dd, komponenta ABX sistema, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.00 (d, komponenta AB kvarteta, J = 8.2 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.03 - 4.92 (m, 1H), 4.51 - 4.39 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.19 - 3.05 (m, 2H), 2.42 - 2.30 (m, 1H), 2.20 - 2.06 (m, 2H), 1.80 (ddd, J = 13.2, 9.3, 6.7 Hz, 1H), 1.75-1.63 (m, 3H), 1.58-1.47 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
Primeri 5 i 6 (samo kao referentni)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-3-(trifluorometil)-1H-indol-2-karboksamid (5) i N-[(2S)-1-({(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-karboksamid (6)
[0234]
[0235] U bočicu za otpuštanje pod pritiskom koja sadrži cink(II) trifluorometansulfinat (98%, 2.44 mg, 7.21 µmol) uzastopno je dodat rastvor 4 (0.79 mg, 1.8 µmol) u dimetil sulfoksidu (60 µL), trifluorosirćetnoj kiselini (0.56 µL, 7.3 µmol) i terc-butil hidroperoksid (70% u vodi; 1.25 uL, 9.03 µmol). Bočica je zatvorena i zagrevana na 50 °C preko noći, nakon čega je reakciona smeša ohlađena i razblažena acetonitrilom i 1% rastvorom mravlje kiseline u vodi, do zapremine od približno 2 do 3 mL. Konačni sastav rastvarača je bio takav da je dobijena smeša izgledala bistra, uglavnom oko 20% do 30% acetonitrila. Cela smeša je podvrgnuta HPLC reverzne faze (kolona: Phenomenex Luna C18, 10 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza A: 0.5% sirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: 9:1 acetonitril/metanol; Gradijent: 15 % B tokom 5 minuta, zatim 15% do 70% B linearni gradijent tokom 84 minuta, zatim 70% do 95% B tokom 1 minuta, zatim 95% B tokom 9 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min). Eluat je propušten kroz UV/VIS detektor, a zatim je podeljen na približno 15:1 između kolektora frakcija i masenog spektrometra za hvatanje jona. Frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi, a one koji potencijalno sadrže proizvode od interesa su procenjene pomoću UHPLC-UV-HRMS pre spajanja. Dva proizvoda su eluirana na približno 71 i 75 minuta. Proizvod koji je prvi eluirao bio je 5 {N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-3-(trifluorometil)-1H-indol-2-karboksamid}, a drugo eluiranje je bilo 6 {N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-karboksamid}.
[0236] 5 - Prinos: 0.101 mg, 0.199 µmol, 11%. MS visoke rezolucije m/z 508.2171 [M+H]<+>; izračunato za C24H29F3N5O4, 508.2172.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) 512.22 (br s, IH), 9.01 (d, J = 7.6 Hz, IH), 8.96 (d, J = 7.9 Hz, IH), 7.73 (s, IH), 7.21 (dd, J = 8, 8 Hz, 1 H), 7.08 (d, J = 8.2 Hz, IH), 6.69 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.03-4.95 (m, 1H), 4.49-4.40 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.22-3.08 (m, 2H), 2.43-2.34 (m, 1H), 2.23 - 2.10 (m, 2H), 1.82 (ddd, J = 13.7, 9.3, 6.8 Hz, 1H), 1.78 - 1.66 (m, 2H), 1.62 (ddd, J = 14.6, 9.7, 5.2 Hz, 1H), 1.49 (ddd, J = 13.8, 8.8, 5.5 Hz, IH), 0.97 -0.88 (m, 6H). Retenciono vreme: 8.43 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Phenomenex Kinetex KSB-C18, 2.1 x 100 mm, 2.6 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 5% B tokom 0.5 minuta , zatim 5% do 70% B tokom 10.5 minuta, zatim 70% do 95% B tokom 2 minuta; Brzina protoka: 0.4 mL/min).
[0237] 6 - Prinos: 14.7 µg, 0.029 µmol, 1.6%. MS visoke rezolucije m/z 508.2178 [M+H]<+>; izračunato za C24H29F3N5O4, 508.2172.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.47 (br s, IH), 9.00 (d, J = 7.9 Hz, IH), 8.79 (d, J = 7.8 Hz, IH), 7.70 (s, IH), 7.55 (d, J = 8.2 Hz, IH), 7.35 (s, IH), 6.72 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.02-4.94 (m, 1H), 4.56-4.48 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.18-3.05 (m, 2H), 2.39-2.30 (m, 1H), 2.18 - 2.08 (m, 2H), 1.86 - 1.77 (m, 1H), 1.75 - 1.64 (m, 3H), 1.61 - 1.52 (m, 1H), 0.95 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.1 Hz, 3H). Retenciono vreme: 8.92 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 5).
Alternativna sinteza Primera 6 (samo kao referentno)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-karboksamid (6)
[0238]
Korak 1. Sinteza trifluorometilovanog 4-metoksi-1H-indol-2-karboksilna kiselina (C24).
[0239] Smeša 4-metoksi-1H-indol-2-karboksilne kiseline (100 mg, 0.523 mmol) i cink(II) trifluorometansulfinata (120 mg, 0.362 mmol) su tretirani sa dimetil sulfoksidom (1.5 mL), a zatim sa trifluorosirćetnom kiselinom (56 µL, 0.362 mmol). Nakon što je reakciona smeša ohlađena na 0 °C, dodat je terc-butil hidroperoksid (70% u vodi; 143 uL, 1.03 mmol) i mešanje je nastavljeno na 0 °C tokom 20 minuta, zatim na sobnoj temperaturi tokom 25 minuta. Reakciona smeša je zatim zagrevana na 52 °C tokom 2 sata, nakon čega je ohlađena do sobne temperature i tretirana u kapima sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata sve dok ne prestanu mehurići. Nakon što je dobijena smeša podeljena između vodenog rastvora natrijum bikarbonata i etil acetata, vodeni sloj je ekstrahovan jednom etil acetatom i organski slojevi su odbačeni. Vodeni sloj je zatim zakiseljen do pH 7 sa 1 M hlorovodoničnom kiselinom; dodat je etil acetat, i smeša je mešana dok je pH podešen na 1 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline. Nakon što je dvofazna smeša mešana 10 minuta, organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko magnezijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. LCMS analizom, ostatak (115 mg) je sadržao smešu polaznog materijala i mono-trifluorometilovanih proizvoda, kao i malu količinu di-trifluorometilovanog materijala. Najveći deo ove smeše je korišćen u koraku 4. Prinos: 115 mg, <0.4 mmol. LCMS m/z 189.8, 257.8, 325.8 (malo) [M-H]-.
<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4), karakteristični pikovi iz tri glavne komponente: δ 7.07 (br d, J = 8.4 Hz), 7.02 (br d, J = 8.4 Hz), 6.81 (d, J = 7.8 Hz), 6.66 (d, J = 7.8 Hz), 6.51 (d, J = 7.7 Hz), 4.06 (s, -OMe), 3.93 (s, -OMe), 3.92 (s, -OMe).
Korak 2. Sinteza N-(terc-butoksikarbonil)-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamid (C25).
[0240] Rastvoru metil N-(terc-butoksikarbonil)-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninata (videti Prior, A.M., et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013, 23, 6317-6320; 1.5 g, 3.8 mmol) u metanolu (5 mL) na 0 °C dodat je rastvor amonijaka u metanolu (7 M; 43 mL, 300 mmol). Nakon što je reakciona posuda zatvorena, reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Ponovo je dodat rastvor amonijaka u metanolu (7 M; 10.7 mL, 74.9 mmol) i reakcija je ostavljena da se nastavi na sobnoj temperaturi 3 dana, nakon čega je koncentrovana in vacuo. Ostatak je stavljen dva puta u dietil etar (40 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom, dajući C25 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 1.46 g, 3.80 mmol, kvantitativno. LCMS m/z 385.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.29 - 8.17 (m, 1H), 7.23 (br s, 1H), 5.64 (br s, 1H), 5.32 (br s, 1H), 5.02 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 4.50 - 4.38 (m, 1H), 4.05 (ddd, J = 10.3, 6.3, 4.5 Hz, 1 H), 3.44 - 3.32 (m, 2H), 2.51 - 2.35 (m, 2H), 2.16 - 1.98 (m, 2H), 1.97 - 1.83 (m, 1H), 1.6-1. (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 1.49 - 1.39 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 0.94 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 6.3 Hz, 3H).
Korak 3. Sinteza metansulfonatne soli L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C26).
[0241] Rastvor metansulfonske kiseline (0.861 mL, 13.3 mmol) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-olu (5 mL) je polako dodat u rastvor C25 (5.1 g, 13 mmol) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2olu (43 mL). Posle 30 minuta, LCMS analiza je pokazala konverziju u C26: LCMS m/z 285.3 [M+H]<+>. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo, zatim je rastvorena u sledećim smešama rastvarača i ponovo koncentrovana: smeša acetonitrila i etil acetata (1:1, 2 x 20 mL), zatim smeša etil acetata i heptana, (1:1, 2 x 20 mL). Dobijena čvrsta supstanca je dva puta azeotropovana smešom acetonitrila i etil acetata, zatim dva puta smešom etil acetata i heptana, dajući C26 kao belu čvrstu supstancu (6.05 g) koja je zadržala rastvarače po<1>H NMR analizi. Prinos: pretpostavljeni kvantitativan.<1>H NMR (600 MHz, metanol-d4) δ 4<.>50 (dd, J = 10.7, 4.9 Hz, 1H), 3.91 (dd, J = 8.6, 5.5 Hz, 1H), 3.39 - 3.28 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjen pikom rastvarača), 2.70 (s, 3H), 2.53 - 2.46 (m, 1H), 2.43 - 2.36 (m, 1H) , 2.14 (ddd, J = 14.0, 10.7, 5.0 Hz, 1H), 1.95 - 1.86 (m, 1H), 1.82 - 1.71 (m, 3H), 1.70 - 1.64 (m, 1H), 1.02 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 1.01 (d, J = 6.1 Hz, 3H).
Korak 4. Sinteza N-{[4-metoksi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-il]karbonil}-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C27).
[0242] Rastvor C24 (iz koraka 1; 101 mg, <0.35 mmol) i C26 (iz prethodnog koraka; 204 mg, ≤0.438 mmol) u acetonitrilu (1.7 mL) i N,N-dimetilformamidu (1 mL) je ohlađen na 0 °C i tretiran sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU; 163 mg, 0.429 mmol) a zatim 4-metilmorfolinom (0.129 mL, 1.17 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 40 minuta, nakon čega je polako dodavana smeša 1:1 vodenog rastvora natrijum bikarbonata i leda sve dok se nije formirao mutni talog. Zatim je dodat etil acetat i dvofazna smeša je mešana 5 minuta. Vodeni sloj je ekstrahovan jednom etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu je obavljeno dva puta (Gradijent #1: 0% do 10% metanola u dihlorometanu; Gradijent #2: 5% do 10% metanola u dihlorometanu) da bi se dobilo C27. Regiohemija ovog materijala je potvrđena 2D NMR eksperimentima. Prinos: 19 mg, 36 µmol, približno 10%. LCMS m/z 526.5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.53 (br d, J = 8.2 Hz, IH), 7.41 (s, IH), 6.68 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.60 (dd, J = 9.5, 5.1 Hz, 1H), 4.45 (dd, J = 11.4, 4.2 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.3 -3.21 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.60-2.49 (m, 1H), 2.36-2.26 (m, 1H) , 2.15 (ddd, J = 14.1, 11.5, 4.6 Hz, 1H), 1.89-1.68 (m, 5H), 1.03 (d, J = 6.1 Hz, 3H), 0.99 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
Korak 5. Sinteza N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-karboksamida (6).
1
[0243] Metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 17.2 mg, 72.2 µmol) je dodat u rastvor C27 (19 mg, 36 µmol) u smeši dihlorometana (0.5 mL) i acetonitrila (0.2 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, razblažena je etil acetatom i isprana sa 1:1 smešom vodenog rastvora natrijum bikarbonata i leda. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i propušteni kroz kertridž za ekstrakciju čvrste faze napunjen magnezijum sulfatom. Koncentracija filtrata in vacuo dao je ostatak, koji je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05 % trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Gradijent: 25% do 65% B tokom 8.5 minuta, zatim 65% do 95% B tokom 0.5 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 25 mL/min) da se dobije N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-karboksamid (6). Prinos: 4.3 mg, 8.5 umol, 24%. LCMS m/z 508.6 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.83 minuta (Kolona: Waters Atlantis C18, 4.6 x 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr) ); Gradijent: 5% do 95% B tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min).
Primer 7 (samo kao referentni)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-3-metilimidazo[2.1-b][1.3]tiazol-2-karboksamid (7)
[0244]
2
Korak 1. Sinteza N<2>-(terc-butoksikarbonil)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-L-leucinamida (C28).
[0245] Rastvor C17 (560 mg, 1.41 mmol) i 1H-imidazola (249 mg, 3.65 mmol) u smeši piridina (3 mL) i dihlorometana (3 mL) je ohlađen na -35 °C korišćenjem kupatila sa acetonitrilom/suvim ledom. Fosfor oksihlorid (0.74 mL, 7.94 mmol) je dodat u kapima, tokom 4 minuta, nakon čega je dodato još dihlorometana (2 mL), i mešanje je nastavljeno na -30 °C do -20 °C. Posle 1 sata, reakciona smeša je razblažena dihlorometanom (2 mL). Posle približno 1.5 sata, dodata je hlorovodonična kiselina (1 M; 30 mL); dobijena smeša je mešana 30 minuta, a zatim ekstrahovana dihlorometanom (2 x 60 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo, dajući C28 kao čvrstu supstancu. Prinos: 492 mg, 1.29 mmol, 91%. LCMS m/z 381.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 5.03 (dd, J = 10.4, 5.7 Hz, 1H), 4.09 (dd, J = 8.7, 4.2 Hz, 1H), 3.39 - 3.25 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjen pikom rastvarača), 2.64 - 2.52 (m, 1H), 2.40 - 2.27 (m, 2H), 1.97 - 1.72H), 1.70 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.3, 4.1 Hz, 1H), 1.54 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.3, 8.7 Hz, IH), 1.45 (s, 9H), 1.00 (s, 9H).
Korak 2. Sinteza N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-3-metilimidazo[2.1-b][1.3]tiazol-2-karboksamida (7).
[0246] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4.0 M; 0.3 mL, 1.2 mmol) je dodat u rastvor C28 (100 mg, 0.263 mmol) u smeši acetonitrila (1.5 mL) i metanola (1.0 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta, nakon čega je tretirana sa 4-metilmorfolinom (0.144 mL, 1.31 mmol). Nakon što su rastvarači uklonjeni in vacuo, ostatak je dva puta resuspendovan u smeši dihlorometana i heptana (1:1, 2 x 10 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je kombinovan sa 3-metilimidazo[2.1-b][1.3]tiazol-2-karboksilnom kiselinom (47.9 mg, 0.263 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3.3 mL), ohlađen na 0 °C, i tretiran sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU; 99.9 mg, 0.263 mmol) nakon čega sledi rastvor 4-metilmorfolina (72 uL, 0.655 mmol) u dihlorometanu (0.2 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom približno 2 sata, tretirana je na 0 °C sa hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 30 mL), a rezultujuća smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 60 mL). Vodeni sloj je zatim zalužen do pH 9 dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata, nakon čega je ekstrahovan dihlorometanom (3 x 60 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (50 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo.<1>H NMR analiza ovog materijala pokazala je prisustvo manjeg epimera, za koji se pretpostavlja da nastaje delimičnom racemizacijom u centru koji nosi nitril. Glavni proizvod je izolovan korišćenjem hromatografije na silika gelu (Gradijent: 0% do 20% metanola u etil acetatu), dajući N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-3-metilimidazo[2.1-b][1.3]tiazol-2-karboksamid (7) kao čvrsta. Prinos: 56 mg, 0.13 mmol, 49%. LCMS m/z 445.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.73 (d, J = 1.6 Hz, IH), 7.37 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.04 (dd, J = 10.3, 5.9 Hz, 1H), 4.53 (dd, J = 7.8, 5.0 Hz, 1H), 3.36 - 3.24 (m, 2H; pretpostavljeno; delimično zaklonjen pikom rastvarača), 2.70 (s, 3H), 2.67 - 2.57 (m, 1H), 2.38 -2.27 (m, 2H) , 1.93 (ddd, J = 14.0, 9.4, 6.0 Hz, IH), 1.88 - 1.78 (m, 3H), 1.03 (s, 9H).
Primeri 8 i 9 (samo kao referentni)
N-{1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-[cikloheksil(metoksi)acetil]-4-metil-L-leucinamid, DIAST-1 (8) i N-{1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-[cikloheksil(metoksi)acetil]-4-metil-L-leucinamid, DIAST-2 (9)
[0247]
4
Korak 1. Sinteza N-{1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-L-leucinamida (C29).
[0248] U rastvor C28 (114 mg, 0.300 mmol) u smeši acetonitrila (1 mL) i metanola (1 mL) dodat je rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 0.4 mL, 1.6 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta, nakon čega je dodat 4-metilmorfolin (0.165 mL, 1.50 mmol), dovodeći pH na 7 do 8. Nakon što su rastvarači uklonjeni in vacuo, ostatak je dva puta stavljen u smešu etil acetata i heptana (1:1, 2 x 10 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobilo C29 kao čvrsta supstanca (269 mg); po<1>H NMR analizi sastojala se od mešavine epimera, za koje se pretpostavlja da su u centru koji nosi nitril, u odnosu 2-3 prema 1. Deo ovog materijala je korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 281.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4), karakteristični pikovi: δ [5.11 (dd, J = 8.8, 7.3 Hz, major) i 5.01 (dd, J = 6.5, 6.5 Hz, manji), ukupno 1H], [2.75 - 2.65 (m, manji) i 2.64 - 2.54 (m, glavni), ukupno 1H], 2.48 -2.38 (m, 1H), 2.30 - 2.20 (m , 1H), 2.06 - 1.83 (m, 3H), 1.64 (dd, J = 14.1, 4.8 Hz, 1H), [1.04 (s, glavni), 1.01 (s, manji), ukupno 9H].
Korak 2. Sinteza N-{1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-[cikloheksil(metoksi)acetil]-4-metil-L-leucinamida, DIAST-1 (8) i N-{1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-[cikloheksil(metoksi)acetil]-4-metil-L-leucinamida, DIAST-2 (9).
[0249] U rastvor C29 (iz prethodnog koraka; 83.4 mg, ≤93 µmol) i cikloheksil(metoksi) sirćetne kiseline (17.2 mg, 99.9 µmol) u N,N-dimetilformamidu (1 mL) na 0 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 38.0 mg, 0.100 mmol), a zatim rastvor 4-metilmorfolina (30.8 uL, 0.280 mmol) u dihlorometanu (0.2 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C oko 2 sata, razblažena je zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (3 mL) na 0 °C i ekstrahovana dihlorometanom (4 x 4 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo; na osnovu LCMS analize, ostatak se sastojao od dve komponente, za koje se pretpostavlja da odgovaraju dva epimera u centru koji nose nitril. Ovi dijastereomeri su razdvojeni pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Waters XBridge C18, 19 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza: voda; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 5% do 95% B tokom 8.54 minuta, zatim 95 % B tokom 1.46 minuta; Brzina protoka: 25 mL/min). Prvi dijastereomer koji eluira je označen kao 8 (N-{1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-[cikloheksil(metoksi)acetil]-4-metil-L-leucinamid, DIAST-1), i dijastereomer drugog eluiranja kao 9 (N-{1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-[cikloheksil(metoksi)acetil]-4-metil-L-leucinamid, DIAST-2).
[0250] 8 - Prinos: 12.8 mg, 29.4 µmol, 32% u 2 koraka. LCMS m/z 435.6 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.63 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis C18, 4.6 x 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline ( zapr/zapr). Gradijent: 5% do 95% B tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta Brzina protoka: 2 mL/min).
[0251] 9 - Prinos: 10 mg, 23.0 µmol, 25% u 2 koraka. LCMS m/z 435.6 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.72 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 8).
Primer 10 (samo kao referentni)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (10)
[0252]
Korak 1. Sinteza N-[(4-metoksi-1H-indol-2-il)karbonil]-4-metil-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C30).
[0253] U rastvor C18 (200 mg, ≤0.46 mmol) i 4-metoksi-1H-indol-2-karboksilne kiseline (88.2 mg, 0.460 mmol) u acetonitrilu (2 mL) na 0 °C je dodat O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 175 mg, 0.460 mmol), a zatim rastvor 4-metilmorfolina (0.127 mL, 1.16 mmol) u acetonitrilu (0.2 mL). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 2.5 sata, nakon čega je razblažena zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 mL) na 0 °C, a zatim ekstrahovana sa dihlorometanom (50 mL). Organski sloj je ispran hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 30 mL), a vodeni slojevi su ekstrahovani dihlorometanom (60 mL). Nakon što su kombinovani organski slojevi osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo, ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (gradijent: 0% do 30% metanola u etil acetatu) da bi se dobilo C30 kao čvrsta. Prinos: 148 mg, 0.314 mmol, 68% u 2 koraka. LCMS m/z 472.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.25 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.03 (br d, komponenta AB kvarteta, J = 8.3 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.65 (dd, J = 9.2, 3.4 Hz, 1H), 4.44 (dd, J = 11.2, 4.2 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.54 - 2.44 (m, 1H), 2.29 (dddd, J = 12.6, 8.6, 7.0, 2.7 Hz, 1H), 2.14 (ddd, J = 14.0, 11.2, 4.6 Hz, 1H), 1.89 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.5, 3.4 Hz, IH), 1.85 - 1.74 (m, 3H), 1.02 (s, 9H).
Korak 2. Sinteza N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamida (10).
[0254] Rastvor C30 (143 mg, 0.303 mmol) i 1H-imidazol (53.7 mg, 0.789 mmol) u smeši piridina (1 mL) i dihlorometana (1 mL) je ohlađen u kupatilu acetonitrila/suvog leda (-35 °C). Fosfor oksihlorid (0.159 mL, 1.71 mmol) je dodavan u kapima tokom 5 minuta i reakciona smeša je mešana na -30 °C do -20 °C tokom 2 sata, nakon čega je tretirana hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 30 mL), mešana 20 minuta i ekstrahovana dihlorometanom (2 x 60 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Obezbeđena je hromatografija na silika gelu (gradijent: 0% do 10% metanola u etil acetatu) N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (10) kao čvrsta. Prinos: 68 mg, 0.15 mmol, 50%. LCMS m/z 454.5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.24 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.02 (br d, komponenta AB kvarteta, J = 8.3 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.03 (dd, J = 10.1, 6.0 Hz, 1H), 4.64 (dd, J = 8.6, 4.3 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.30 - 3.17 (m, 2H), 2.63 - 2.52 (m, 1H), 2.37 - 2.21 (m, 2H), 1.95 - 1.74 (m, 2H) ), 1.03 (s, 9H).
Primer 11 (samo kao referentni)
N<2>-[(4-bromo-1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)karbonil]-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-L-leucinamid (11)
[0255]
[0256] U gustu suspenziju C18 (43.4 mg, ≤0.10 mmol) i 4-bromo-1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-karbonske kiseline (23.3 mg, 0.100 mmol) u acetonitrilu (1.0 mL) na 0 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 38.0 mg, 0.100 mmol), a zatim rastvor 4-metilmorfolina (30 uL, 0.27 mmol) u acetonitrilu (0.2 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C približno 80 minuta, metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, dodata je unutrašnja so (Burgess reagens; 71.5 mg, 0.300 mmol) i mešanje je nastavljeno. Posle približno 2.75 sati, metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 71.5 mg, 0.300 mmol) je ponovo dodato, i reakcija je ostavljena da se odvija 1.5 sati, nakon čega je tretirana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (3 mL) na 0° C, i ekstrahovana sa dihlorometanom (2 x 8 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo, zatim rastvoreni u acetonitrilu (4 mL) i ponovo koncentrovani korišćenjem Genevac evaporatora da bi se dobio sirovi proizvod (138 mg). Deo ovog materijala (80 mg) je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B : acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Gradijent: 5% do 95% B tokom 8.54 minuta, zatim 95% B tokom 1.46 minuta; Brzina protoka: 25 mL/min) da se dobije N<2>-[(4-bromo-1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)karbonil]-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-metil-L-leucinamid (11). Prinos: 24.7 mg, 49.8 umol, 86% u 2 koraka. LCMS m/z 495.5 (uočen obrazac izotopa broma) [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.48 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis C18, 4.6 x 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline ( zapr/zapr). Gradijent: 5% do 95% B tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta Brzina protoka: 2 mL/min).
Primer 12 (samo kao referentni)
N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-[(3.3-difluorociklobutil)acetil]-4-metil-L-leucinamid (12)
[0257]
Korak 1. Sinteza hidrohloridne soli 4-metil-L-leucil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C18, HCl so).
[0258] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 1.7 mL, 6.8 mmol) je dodat u rastvor C17 (260 mg, 0.652 mmol) u acetonitrilu (3 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1.5 h, nakon čega je koncentrovana in vacuo, zatim više puta rastvorena u smeši dihlorometana i heptana (1:1, 3 x 10 mL) i ponovo koncentrovana, dajući C18, HCl so (242 mg) kao staklo. Deo ovog materijala je korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 299.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.53 (dd, J = 10.3, 5.0 Hz, 1H), 3.91 (dd, J = 7.5, 5.4 Hz, 1H), 3.41 - 3.26 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.57 - 2.47 (m, 1H), 2.41 (dddd, J = 12.0, 8.7, 7.0, 3.1 Hz, 1H), 2.15 (ddd, J = 13.9, 10.3, 4.9 Hz, 1H), 2.05 - 1.97 (m, 1H), 1.97 -1.85 (m, 1H), 1.78 (ddd, J = 14.1, 9.1, 5.0 Hz, 1H), 1.60 (dd, J = 14.3, 5.4 Hz, IH), 1.01 (s, 9H).
Korak 2. Sinteza N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-[(3.3 difluorociklobutil)acetil]-4-metil-L-leucinamida (12).
[0259] Gusta suspenzija C18, HCl so (iz prethodnog koraka; 37.2 mg, ≤0.100 mmol) i (3.3-difluorociklobutil)sirćetna kiselina (15.8 mg, 0.105 mmol) u tetrahidrofuranu (1.0 mL) tretirana je sa 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid trioksidom (50% rastvora po težini u etil acetatu; 65.5 µL, 0.110 mmol) i 4-metilmorfolin (27.5 µL, 0.250 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zagrevana je na 50 °C tokom 4.5 sata, nakon čega su ponovo dodati 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid trioksid (50% rastvora po težini u etil acetatu; 2.2 ekvivalenta) i 4-metilmorfolin (5 ekvivalenata). Nakon što je reakciona smeša mešana na 50 °C tokom 3 dodatna dana, tretirana je zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (3 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (4 x 4 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i prečišćeni pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Waters XBridge C18, 19 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 20% do 40% B tokom 8.5 minuta, zatim 40% do 95% B tokom 0.5 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 25 mL/min) da se dobije N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-N<2>-[(3.3-difluorociklobutil)acetil]-4-metil-L-leucinamid (12). Prinos: 10.1 mg, 24.5 µmol, 24% u 2 koraka. LCMS m/z 413.5 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 1.96 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis C18, 4.6 x 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline ( zapr/zapr). Gradijent: 5% do 95% B tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta Brzina protoka: 2 mL/min).
Primer 13
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13)
[0260]
1
Korak 1. Sinteza metila (1R,2S,5S)-3-[N-(terc-butoksikarbonil)-3-metil-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilat (C31).
[0261] O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 7.92 g, 20.8 mmol) je dodat u smešu od 0 °C N-(terc-butoksikarbonil)-3-metil-L-valin (4.38 g, 18.9 mmol) i metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilat, hidrohloridna so (3.9 g, 19 mmol) u N,N-dimetilformamid (95 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana 5 minuta, dodat je N,N-diizopropiletilamin (8.25 mL, 47.4 mmol); mešanje je nastavljeno na 0 °C tokom 2 sata, nakon čega su dodati vodeni rastvor limunske kiseline (1N, 20 mL) i voda (40 mL). Dobijena smeša je mešana 2 minuta, a zatim razblažena etil acetatom (250 mL). Organski sloj je ispran vodom (3 x 150 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 100% etil acetata u heptanu) dalo je C31 kao ulje. Prinos: 3.60 g, 9.41
2
mmol, 50%.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.42 (d, J = 9.7 Hz, <1H; nepotpuno zamenjeno rastvaračem), 4.35 (s, 1H), 4.21 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 4.02 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 3.91 (dd, komponenta ABX sistema , J = 10.3, 5.3 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 1.57 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.5, 5.1 Hz, 1H), 1.47 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.5 Hz, IH), 1.41 (s, 9H), 1.07 (s, 3H), 1.02 (s, 9H), 0.93 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza (1R,2S,5S)-3-[N-(terc-butoksikarbonil)-3-metil-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C32).
[0262] Vodeni rastvor litijum hidroksida (1.0 M; 14.7 mmol, 14.7 mL) je dodat u kapima u rastvor C31 (3.60 g, 9.41 mmol) na 0 °C u smeši tetrahidrofurana i metanola (1:1, 30 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C 1 sat, ostavljena je da se zagreje do sobne temperature i mešana 1 sat, nakon čega je LCMS analiza pokazala konverziju u C32: LCMS m/z 367.3 [M-H]-. Podešavanje na pH 3 je izvedeno dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline, nakon čega je smeša razblažena vodom (30 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (2 x 75 mL), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobilo C32 kao prljavo bela čvrsta supstanca. Prinos: 3.10 g, 8.41 mmol, 89%.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 6.39 (d, J = 9.7 Hz, približno 0.5 H; nepotpuno zamenjeno rastvaračem), 4.33 (s, 1H), [4.21 (d, J = 9.6 Hz) i 4.21 (s), ukupno 1H], 4.01 ( d, polovina AB kvarteta, J = 10.5 Hz, 1H), 3.91 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.4, 5.2 Hz, 1H), 1.56 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.5, 5.0 Hz, 1H), 1.50 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.07 (s, 3H), 1.02 (s, 9H), 0.93 (s , 3H).
Korak 3. Sinteza od terc-butil {(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan- 3-il]-3.3-dimetil-1-oksobutan-2-il}karbamata (C33).
[0263] Smeša C7 (31.9 mg, ≤94 µmol) i C32 (34 mg, 92 umol) u acetonitrilu (1 mL) 0 °C je tretirana sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU, 97%; 36.2 mg, 92.3 µmol) nakon čega sledi rastvor 4-metilmorfolina (25 µL, 0.23 mmol) u acetonitrilu (0.25 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C približno 1 sat, razblažena je zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (3 mL) na 0 °C i ekstrahovana dihlorometanom (4 x 4 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo da bi se dobilo C33 kao guma (48 mg). Većina ovog materijala je korišćena u sledećem koraku. LCMS m/z 504.6 [M+H]<+>.
Korak 4. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (13).
[0264] Pripremljen je osnovni rastvor metansulfonske kiseline (60 µL) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-olu (940 µL). U rastvor C33 (iz prethodnog koraka; 47 mg, ≤90 µmol) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-ola (1 mL) dodat je deo osnovnog rastvora metansulfonske kiseline (0.1 mL; 100 µmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, koncentrovana je in vacuo, zatim je rastvorena u sledećim smešama rastvarača i ponovo koncentrovana: smeša acetonitrila i etil acetata (1:1, 2 x 10 mL), a zatim smeša etil acetata i heptana (1:1, 2 x 10 mL). Ostatak je rastvoren u dihlorometanu (1 mL) i tretiran sa 4-metilmorfolinom (30.8 uL, 0.280 mmol), a zatim sa anhidridom trifluorosirćetne kiseline (0.143 mL, 1.01 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 40 minuta, nakon čega je tretirana sa 4-metilmorfolinom (30.8 uL, 0.280 mmol), a zatim sa anhidridom trifluorosirćetne kiseline (0.143 mL, 1.01 mmol); posle 30 minuta, ponovo je dodat 4-metilmorfolin (30.8 uL, 0.280 mmol), a zatim trifluorosirćetni anhidrid (0.143 mL, 1.01 mmol). Posle dodatnih 15 minuta mešanja, reakciona smeša je tretirana hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 3 mL), a rezultujuća smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 4 mL); kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr) Gradijent: 20% do 60% B tokom 8.5 minuta, zatim 60% do 95% B tokom 0.5 minuta, zatim 95% B tokom 1 minuta; Brzina protoka: 25 mL/min) da se dobije (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13). Prinos: 7.5 mg, 15 µmol, 17% u 2 koraka. LCMS m/z 500.5 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.66 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis dC18, 4.6 x 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: 0.05% trifluorosirćetne kiseline u vodi (zapr/zapr); Mobilna faza B: 0.05% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu ( zapr/zapr); Gradijent: 5.0% do 95% B tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min).
Alternativna sinteza Primera 13, metil terc-butil etar solvat; Sinteza 13, metil terc-butil etar solvata, čvrsti oblik 2
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat), Čvrsti oblik 2
4
Korak 1. Sinteza terc-butil {(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}karbamata (C5).
[0266] Ovaj eksperiment je izveden u 2 paralelne serije. Rastvor amonijaka u metanolu (7 M; 2.4 L, 17 mol) je dodat u metil N-(terc-butoksikarbonil)-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninat (600 g, 2.10 mol) i reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 40 sati. Koncentrovanje in vacuo i kombinacija 2 serije dala je C5 kao žutu čvrstu supstancu. Kombinovani prinos: 1.10 kg, 4.05 mol, 96%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.63 (br s, 1H), 7.29 (br s, 1H), 7.01 (br s, 1H), 6.89 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 1H), 3.22 - 3.06 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 2.28 - 2.08 (m, 2H), 1.89 (ddd, J = 14.6, 10.8, 4.0 Hz, IH), 1.74 - 1.60 (m, IH), 1.56 - 1.43 (m, IH), 1.36 (s, 9H).
Korak 2. Sinteza hidrohloridne soli 3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C16, HCl so).
[0267] Ovaj eksperiment je izveden u 3 paralelne serije. Rastvoru C5 (840 g, 3.10 mol) u dihlorometanu (2.0 L) na 0 °C dodat je rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 2 L, 8 mol). Reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 2 sata, nakon čega je koncentrovana in vacuo; kombinacija 3 ponuđene serije dala je C16, HCl so kao belu čvrst supstancu. Kombinovani prinos: 1.20 kg, 5.78 mol, 62%. GOSPOĐA m/z 172.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.52 - 8.35 (br s, 3H), 8.12 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 3.88 - 3.76 (m, 1H), 3.24 - 3.10 (m, 2H) , 2.59 - 2.5 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično zaklonjen pikom rastvarača), 2.35 - 2.24 (m, 1H), 2.01 (ddd, J = 14.9, 9.2, 6.1 Hz, 1H), 1.80 - 1.68 ).
[0268] Uzorak C16, HCl so je triturisan u 2-propanolu tokom 1.5 sata, nakon čega je sakupljen filtracijom i ispran sa 2-propanolom. Sakupljena čvrsta supstanca je sušena preko noći pod visokim vakuumom da bi se dobio uzorak za ispitivanje rendgenske difrakcije praha. Obrazac difrakcije rendgenskih zraka praha za ovaj materijal je dat na slici 10; karakteristični pikovi su navedeni u tabeli K.
Prikupljanje podataka o difrakciji rendgenskih zraka praha
[0269] Analiza difrakcije rendgenskih zraka na prahu je sprovedena korišćenjem Bruker AXS D4 Endeavour difraktometra opremljenog Cu izvorom zračenja. Prorez za divergenciju je postavljen na 0.6 mm, dok je sekundarna optika koristila promenljive proreze. Difraktovano zračenje je detektovano PSD-Linx Eye detektorom. Napon i amperaža rendgenske cevi su podešeni na 40 kV i 40 mA respektivno. Podaci su prikupljeni u Teta-2Teta goniometru na Cu talasnoj dužini od 3.0 do 40.0 stepeni 2-Teta koristeći veličinu koraka od 0.020 stepeni i vreme koraka od 0.3 sekunde. Uzorci su pripremljeni tako što su stavljeni u silikonski držač uzoraka sa niskom pozadinom i rotirani tokom sakupljanja.
[0270] Analiza difrakcije rendgenskih zraka na prahu je sprovedena korišćenjem Bruker AXS D8 Advance difraktometra opremljenog Cu izvorom zračenja. Difraktovano zračenje je detektovano LYNKSEYE_EX detektorom sa motorizovanim prorezima. I primarni i sekundarni opremljeni sa 2.5 prorezima za soler. Napon i amperaža rendgenske cevi su podešeni na 40 kV i 40 mA respektivno. Podaci su prikupljeni u Teta-Teta goniometru u zaključanom skeniranju para na Cu K-alfa (prosečnoj) talasnoj dužini od 3.0 do 40.0 stepeni 2-Teta sa povećanjem od 0.02 stepena, koristeći brzinu skeniranja od 0.5 sekundi po koraku. Uzorci su pripremljeni stavljanjem u silicijumski držač za uzorke sa niskim pozadinom.
[0271] Podaci su prikupljeni sa oba instrumenta korišćenjem softvera Bruker DIFFRAC Plus, a analiza je izvršena pomoću softvera EVA DIFFRAC plus. PXRD datoteka sa podacima nije obrađena pre pretraživanja pikova. Koristeći algoritam za pretragu pikova u EVA softveru, pikovi izabrani sa graničnom vrednošću od 1 korišćeni su za preliminarne dodele pikova. Da bi se osigurala validnost, prilagođavanja su napravljena ručno; izlaz automatizovanih zadataka je vizuelno proveren, a pozicije pikova su podešene na maksimum pika. Uglavnom su izabrani pikovi sa relativnim intenzitetom od ≥ 3%. Tipično, nisu izabrani pikovi koji nisu rešeni ili su bili u skladu sa šumom. Tipična greška povezana sa pozicijom pika iz PXRD navedenog u USP do /- 0.2° 2-Teta (USP-941).
Tabela Q. Odabrani pikovi difrakcije rendgenskih zraka praha za C16, HCl so
Alternativna sinteza 3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida, hidrohloridne soli, C16 HCl so [0272] Alternativna priprema jedinjenja C16, HCl soli je prikazana na reakcionoj šemi ispod.
[0273] U rastvor amonijaka u metanolu (7.0 M; 100 mL, 725.4 mmol) dodat je metil (S)-2-amino-3-((S)-2-oksopirolidin-3-il)propanoat 4-metilbenzensulfonat (20 g, 55.8 mmol) i magnezijum sulfat (6.7 g, 55.8 mmol) na sobnoj temperaturi. Posle mešanja reakcione smeše tokom 7 sati na sobnoj temperaturi, azot je pušten u reakcionu smešu tokom 1 sata da bi se uklonio višak amonijaka. Nakon toga, reakcija je filtrirana kroz jastučić od Celite<®>a zatim koncentrovana in vacuo i dobijeni (S)-2-amino-3-((S)-2-oksopirolidin-3-il)propanamid 4-metilbenzensulfonat je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. U rastvor dimetilformamida (50 mL, 647 mmol) dodat je deo (S)-2-amino-3-((S)-2-oksopirolidin-3-il)propanamid 4-metilbenzensulfonata (10 g, 25.9 mmol). ) i rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4.0 M; 19.4 mL, 77.7 mmol). Posle mešanja tokom 12 sati na sobnoj temperaturi, suspenzija je filtrirana i isprana dimetilformamidom (15 mL, 190 mmol). Dobijena čvrsta supstanca je sušena u vakuum peći na 40 °C tokom 12 sati da bi se dobio 3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamid, hidrohloridna so, C16 HCl so (2.7 g, 12.4 mmol) kao čvrsta supstanca žute boje (ukupni prinos od 48%).
Korak 3. Sinteza metil (1R,2S,5S)-3-[N-(terc-butoksikarbonil)-3-metil-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C31).
[0274] Ovaj eksperiment je izveden u 3 paralelne serije. U rastvor metila na 0 °C (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilat, hidrohloridna so (237 g, 1.15 mol) i N-(tercbutoksikarbonil)-3-metil-L-valin (293 g, 1.27 mol) u smeši N,N-dimetilformamid (400 mL) i acetonitril (3.6 L) su dodati O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 481 g, 1.26 mol), nakon čega sledi dodavanje u kapima N,N-diizopropiletilamin (601 mL, 3.45 mol). Reakciona smeša je zatim ostavljena da se zagreje na 25 °C i mešana je 16 sati, nakon čega je sipana u smešu ledene vode (1 L) i hlorovodonične kiseline (0.5 M; 1 L), pH približno 5, i mešano 6 minuta. Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 L), a organski sloj je ispran vodom (2 L), osušen preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana in vacuo. Ostatak je prečišćen korišćenjem hromatografije na silika gelu (Gradijent: 0% do 50% etil acetata u petrol etru), dajući, nakon kombinacije 3 serije, C31 kao bezbojno ulje. Kombinovani prinos: 1.17 kg, 3.06 mol, 89%. LCMS m/z 383.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 5.10 (d, J = 10.2 Hz, IH), 4.46 (s, IH), 4.20 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 3.98 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.2 Hz, 1H), 3.89 - 3.82 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 1.48 -1.41 (m, 2H), 1.38 (s, 9H), 1.03 (s, 3H), 1.01 (s, 9H), 0.89 (s, 3H).
Korak 4. Sinteza (1R,2S,5S)-3-[N-(terc-butoksikarbonil)-3-metil-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C32).
[0275] Ovaj eksperiment je izveden u 3 paralelne serije. U rastvor C31 (668 g, 1.75 mol) u tetrahidrofuranu (2.5 L) je dodat litijum hidroksid monohidrat (220 g, 5.24 mol) i voda (500 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 25 °C tokom 2 sata, koncentrovana je in vacuo za uklanjanje većine tetrahidrofurana; ostatak je zatim podešen na pH 2 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline. Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 x 500 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (500 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo da bi se dobio C32 kao bela čvrsta supstanca (2.0 kg) nakon kombinacije 3 serije. Ovaj materijal je direktno korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 313.2 [(M-2-metilprop-1-en)+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroformd) δ 5.14 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.46 (s, 1H), 4.24 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.06 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.5 Hz, 1H), 3.82 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.5, 5.5 Hz, 1H), 1.75 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 1.49 (dd, J = 7.7, 5.4 Hz, 1H), 1.40 (s, 9H) , 1.06 (s, 3H), 1.00 (s, 9H), 0.89 (s, 3H).
Korak 5. Sinteza hidrohloridne soli ( 1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-(3-metil-L-valil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C41).
[0276] Ovaj eksperiment je izveden u 2 paralelne serije. Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 4.0 L, 16 mol) je dodat u rastvor C32 (iz prethodnog koraka; 1.00 kg, ≤2.62 mol) u dihlorometanu (1.0 L), i reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 16 sati. Uklanjanje rastvarača in vacuo na 50 °C dao je C41 kao belu čvrstu supstancu (1.8 kg) nakon kombinacije 2 serije. Ovaj materijal je direktno korišćen u sledećem koraku.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.42 (s, 1H), 4.00 (s, 1H), 3.94 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.7, 5.4 Hz, 1H), 3.80 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.7 Hz, 1H ), 1.62 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.7, 5.2 Hz, 1H), 1.56 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, IH), 1.15 (s, 9H), 1.09 (s, 3H), 1.03 (s, 3H).
Korak 6. Sinteza (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C42).
[0277] Ovaj eksperiment je izveden u 3 paralelne serije. U rastvor od C41 (iz prethodnog koraka; 600 g, ≤1.75 mol) u metanolu (2 L) na 0 °C dodat je trietilamin (1.64 L, 11.8 mol), a zatim etil trifluoracetat (699 g, 4.92 mol), nakon čega je reakciona smeša ostavljena da se zagreje do 25°C, i mešano je 16 sati. Nakon toga je koncentrovana in vacuo na 50 °C, a ostatak je razblažen etil acetatom (3 L) i podešen na pH od 3 do 4 dodavanjem 2 M hlorovodonične kiseline. Posle ekstrakcije vodenog sloja etil acetatom (1 L), kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (3 L), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani pod sniženim pritiskom. 3 serije su kombinovane u ovom trenutku, tretirane mešavinom petrol etra i etil acetata (5:1, 3 L) i mešane na 25 °C tokom 2 sata. Filtracija je dala C42 kao belu čvrstu supstancu. Kombinovani prinos: 1.90 kg, 5.21 mol, 99% u 3 koraka. LCMS m/z 365.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8.88 (d, J = 8.8 Hz, <1H; nepotpuno zamenjeno), [4.60 (d, J = 8.9 Hz) i 4.59 (s), ukupno 1H], 4.35 (s, 1H), 3.96 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.5, 5.1 Hz, 1H), 3.90 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 1.58 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.6, 4.9 Hz, 1H), 1.52 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.08 (s, 12H), 0.92 (s, 3H).
Korak 7. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C43).
[0278] Ovaj eksperiment je izveden u 4 paralelne serije. 2-hidroksipiridin 1-oksid (33.9 g, 305 mmol) je dodat u rastvor C42 (445 g, 1.22 mol) i C16, HCl so (256 g, 1.23 mol) u butan-2-onu (2.5 L), i smeša je ohlađena na 0 °C. Zatim je dodat N,N-diizopropiletilamin (638 mL, 3.66 mol), a zatim je u kapima dodat 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (351 g, 1.83 mol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C 16 sati, nakon čega je razblažena etil acetatom (1 L) i tretirana smešom hlorovodonične kiseline (1 M; 1.5 L, 1.5 mol) i zasićenog vodenog rastvora natrijum hlorida (1 L). Organski sloj je ispran smešom vodenog rastvora natrijum hidroksida (1 M; 1.5 L, 1.5 mol) i zasićenog vodenog rastvora natrijum hlorida (1 L), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Kombinacija 4 serije dala je C43 kao belu čvrstu supstancu (2.3 kg). Kombinovani prinos: 2.1 kg (korigovano za ostatak etil acetata), 4.1 mol, 84%. LCMS m/z 518.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9<.>41 (br d, J = 7.7 Hz, IH), 8.30 (d, J = 8.8 Hz, IH), 7.56 (s, 1H), 7.32 (br s, 1H), 7.04 (br s, 1H), 4.43 (br d, J = 7.3 Hz, 1H), 4.35 - 4.25 (m, 1H), 4.28 (s, 1H), 3.89 (dd, J = 10.3, 5.5 Hz, 1H), 3.67 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.17 - 3.09 (m, 1H), 3.07 - 2.98 (m, 1H), 2.46 - 2.35 (m, 1H), 2.19 - 2.10 (m, 1H), 1.99 - 1.89 (m,
1
1H), 1.70 - 1.58 (m, 1H), 1.55 - 1.44 (m, 2H), 1.38 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.01 (s, 3H), 0.98 (s, 9H), 0.84 (s, 3H).
Korak 8. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat), Čvrsti oblik 2.
[0279] Ovaj eksperiment je izveden u 3 paralelne serije. Metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 552 g, 2.32 mol) je dodat u rastvor C43 (600 g, 1.16 mol) u etil acetatu (3 L). Nakon što je reakciona smeša mešana na 25 °C tokom 3 sata, tretirana je sa dodatnim metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamatom, unutrašnjom solju (Burgess reagens; 27.6 g, 116 mmol) i reakciona smeša je mešana 1 sat. Zatim je filtrirana; filter kolač je ispran etil acetatom (2 x 500 mL), a kombinovani filtrati su isprani uzastopno vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (1 M; 2 L), zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 L), hlorovodoničnom kiselinom (1 M 2 L), i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 L). Organski sloj je zatim osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je tretiran smešom etil acetata i metil terc-butil etra (1:10, 2.5 L) i zagrevan do 50 °C; posle mešanja tokom 1 sata na 50 °C, ohlađena je na 25 °C i mešana 2 sata. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, a 3 serije su kombinovane u etil acetatu (8 L) i filtrirane kroz silika gel (3.0 kg); silika gel je zatim ispran etil acetatom (2 x 2 L). Nakon što su kombinovani eluati koncentrovani in vacuo, ostatak je stavljen u etil acetat (900 mL) i metil tercbutil etar (9 L). Ova smeša je zagrevana na 50 °C 1 sat, ohlađena na 25 °C i mešana 2 sata. Filtracija je dala (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat) kao belu čvrstu supstancu. Difrakcija rendgenskih zraka praha za ovaj materijal, označena kao čvrsti oblik 2, data je na slici 1; karakteristični pikovi su navedeni u tabeli A. Kombinovani prinos: 1.41 kg, 2.82 mol, 81%. LCMS m/z 500.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 9.03 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 4.97 (ddd, J = 10.9, 8.5, 5.1 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.16 (s, 1H), 3.91 (dd, J = 10.4, 5.5 Hz, 1H), 3.69 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.18 - 3.10 (m, 1H), 3.08 - 2.99 (m, 1H), 2.46 - 2.34 (m, 1H), 2.20 - 2.03 (m, 2H), 1.78 - 1.25 (m, 1H) ), 1.57 (dd, J = 7.6, 5.4 Hz, IH), 1.32 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 1.03 (s, 3H), 0.98 (s, 9H), 0.85 (s, 3H).
Prikupljanje podataka o difrakciji rendgenskih zraka praha
2
[0280] Analiza difrakcije rendgenskih zraka praha je sprovedena korišćenjem Bruker AXS D8 Endeavour difraktometra opremljenog Cu izvorom zračenja (K-α prosek). Prorez za divergenciju je postavljen na 15 mm neprekidnog osvetljenja. Difraktovano zračenje je detektovano PSD-Lynk Eye detektorom, sa otvorom detektora PSD postavljenim na 2.99 stepeni. Napon i amperaža rendgenske cevi su podešeni na 40 kV i 40 mA respektivno. Podaci su prikupljeni u Teta-Teta goniometru na Cu talasnoj dužini od 3.0 do 40.0 stepeni 2-Teta koristeći veličinu koraka od 0.00998 stepeni i vreme koraka od 1.0 sekunde. Paravan protiv raspršivanja je postavljen na fxno rastojanje od 1.5 mm. Uzorci su rotirani na 15/min tokom sakupljanja. Uzorci su pripremljeni tako što su stavljeni u silicijumski držač za uzorke niske pozadine i rotirani tokom sakupljanja. Podaci su prikupljeni korišćenjem softvera Bruker DIFFRAC Plus, a analiza je izvršena pomoću softvera EVA DIFFRAC Plus. Koristeći algoritam za pretragu pikova u EVA softveru, pikovi odabrani sa graničnom vrednošću od 1 korišćeni su za preliminarne dodele pikova. Da bi se osigurala validnost, prilagođavanja su napravljena ručno; izlaz automatizovanih dodela je vizuelno proveren i pozicije pikova su podešene na maksimum pikova. Generalno su birani pikovi sa relativnim intenzitetom od ≥ 3%. Pikovi koji nisu rešeni ili su bili u skladu sa šumom nisu izabrani. Tipična greška povezana sa pozicijom pikova iz PKSRD navedena u USP je do /- 0.2° 2-Teta (USP-941).
Tabela A. Izabrani pikovi difrakcije rendgenskih zraka praha za 13, metil terc-butil etar solvat, Čvrsti oblik 2, iz alternativne sinteze Primera 13, solvat metil terc-butil etra; Sinteza 13, metil terc-butil etar solvata, čvrsti oblik 2
[0281] Alternativna sinteza (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilna kiselina (C42).
Druga alternativna sinteza Primera 13, metil terc-butil etar solvat; Sinteza 13, metil tercbutil etar solvat, čvrsti oblik 2
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat), Čvrsti oblik 2
[0282]
[0283] Metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 392 g, 1.64 mol) je dodat u rastvor C43 (415 g, 802 mmol) u etil acetatu (2.0 L). Reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 3 sata, nakon čega je ponovo dodat metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 86.0 g, 361 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana 1 sat,
4
filtrirana je, a filtrat je uzastopno ispran vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (1 M; 1.5 L), zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (1.5 L), hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 1.5 L), i zasićeni vodeni rastvor natrijum hlorida (1.5 L), osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je tretiran smešom etil acetata i metil terc-butil etra (1:10, 2.5 L) i zagrevan do 50 °C; posle mešanja tokom 1 sata na 50 °C, ohlađena je na 25 °C i mešana 2 sata. Sakupljanje čvrste supstance filtracijom dalo je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat) kao kristalnu belu čvrstu supstancu. Difrakcioni uzorak rendgenskih zraka praha za ovaj materijal, označen kao čvrsti oblik 2, dat je na slici 2; karakteristični pikovi su navedeni u tabeli B. Prinos: 338 g, 575 mmol, 72%. LCMS m/z 500.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 9.04 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 4.97 (ddd, J = 10.9, 8.5, 5.0 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.91 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.4, 5.5 Hz, 1H), 3.69 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 3.18 - 3.10 (m, 1H), 3.08 - 2.98 (m, 1H), 2.46 - 2.34 (m, 1H), 2.20 - 2.02 (m, 2H), 1.77 - 1.25 (m, 1H) ), 1.57 (dd, J = 7.6, 5.4 Hz, 1H), 1.32 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.02 (s, 3H), 0.98 (s, 9H), 0.85 (s , 3H); metil terc-butil etar pikovi: 3.07 (s, 3H), 1.10 (s, 9H).
[0284] Postupak prikupljanja podataka rendgenske difrakcije praha je opisana u alternativnoj sintezi Primera 13, solvat metil terc-butil etra, korak 8.
Tabela B. Odabrani pikovi difrakcije rendgenskih zraka praha za 13, metil terc-butil etar solvat, Čvrsti oblik 2, iz Druge alternativne sinteze Primera 13, metil terc-butil etar solvat; Sinteza 13, metil terc-butil etar solvata, čvrsti oblik 2
Treća alternativna sinteza Primera 13
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13)
[0285]
Korak 1. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat)
[0286] Smeša C42 (90.5 masenih %, 5.05 g, 12.5 mmol) i C16, HCl so (98.9 mas.%, 3.12 g, 14.9 mmol) u acetonitrilu (50 mL) na 0 °C tretirana je sa 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksidom (50% rastvor u acetonitrilu (17 mL, 24.3 mmol) tokom približno 10 minuta. 1-metil-1H-imidazol (4.0 mL, 50.2 mmol) je zatim dodat polako, tokom približno 15 minuta, i reakciona smeša je ostavljena da se meša na 0 °C tokom 3.5 sata, nakon čega je zagrejana na 25 °C. 2,4,6-Tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (50% rastvora po težini u acetonitrilu; 17 mL, 24.3 mmol) je dodat u jednoj porciji, i reakciona smeša je mešana na 45°C tokom 16 sati. U tom trenutku je ohlađen na 25 °C, a zatim tretiran tokom 10 minuta sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (1.14 M; 35 mL, 40 mmol). Posle dodavanja etil acetata (25 mL) i dovoljno vode da se rastvori rezultujuća čvrsta supstanca, organski sloj je dva puta ispran vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (1.14 M; 25 mL, 28 mmol). Nakon što je organski sloj ispran vodenim rastvorom natrijum hlorida (14%, 2 x 20 mL), osušen je preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je pomešan sa etil acetatom (2.1 mL) i tretiran sa metil terc-butil etrom (19 mL); dobijena suspenzija je zagrevana uz mešanje na 50 °C tokom 1 sata, ohlađena na 25 °C tokom 1 sata i držana na 25 °C tokom 1.5 sata. Čvrste materije su izolovane filtracijom, isprane metil terc-butil etrom (2 mL/g) i sušene u vakuumskoj peći preko noći na 50 °C da bi se dobio (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat) kao kristalna bela čvrsta supstanca. Najveći deo ovog materijala je napredovao do sledećeg koraka. Prinos: 3.71 g, 6.31 mmol, 50%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.40 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 9.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 4.97 (ddd, J = 10.7, 8.6, 5.1 Hz, 1H), 4.41 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.16 (s, 1H), 3.91 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.3, 5.5 Hz, 1H), 3.69 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz , 1H), 3.18 - 3.10 (m, 1H), 3.09 - 2.99 (m, 1H), 2.46 - 2.35 (m, 1H), 2.20 - 2.04 (m, 2H), 1.78 - 1.64 (m, 2H), m. (dd, J = 7.4, 5.6 Hz, 1H), 1.32 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.03 (s, 3H), 0.98 (s, 9H), 0.85 (s, 3H) ; metil terc-butil etar pikovi: 3.07 (s, 3H), 1.10 (s, 9H).
Korak 2. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (13).
[0287] Smeša propan-2-il acetata (17 mL) i heptana (17 mL) je dodata u 13, metil terc-butil etar solvat (iz prethodnog koraka; 3.41 g, 5.80 mmol), i mešanje je izvedeno preko noći na 20 °C. Zatim je dodat heptan (17 mL) tokom 2 sata, i smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Dobijena suspenzija je filtrirana, a sakupljene čvrste materije su isprane smešom propan-2-il acetata (1.36 mL) i heptana (3.73 mL) i osušene na 50 °C pod vakuumom, dajući (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13) kao kristalna čvrsta supstanca. Deo ove serije je korišćen kao materijal za klicu u Rekristalizaciji Primera 13; Sinteza čvrstog oblika 1 u nastavku. Prinos: 2.73 g, 5.46 mmol, 94%.
Rekristalizacija Primera 13; Sinteza čvrstog oblika 1
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13), Čvrsti oblik 1
[0288]
[0289] Smeša 13, metil terc-butil etar solvata (iz alternativne sinteze Primera 13, metil tercbutil etar solvat; Sinteza 13, metil terc-butil etar solvata, čvrsti oblik 2; 60.1 g, 102 mmol) i propan-2-il acetata (480 mL) su zagrejani na 60 °C. Dodat je uzorak od 13 (materijal klice, iz Treće alternativne sinteze Primera 13, korak 2; 1.2 g, 2.4 mmol); posle 10 minuta, materijal za klicu je još uvek bio prisutan u čvrstom obliku. Heptan (360 mL) je polako dodat u mešavinu, tokom 12 sati. Dodatni heptan (360 mL) je uveden tokom 4 sata, a rezultujuća smeša je mešana 30 minuta. Zatim je ohlađena na 20 °C, brzinom od 0.1 stepen/minutu, nakon čega je mešana preko noći. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i isprana smešom propan-2-il acetata (72 mL) i heptana (168 mL). Zatim je osušen pod vakuumom na 50 °C da bi se dobio (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13) kao bela, kristalna čvrsta supstanca. Difrakcioni uzorak rendgenskih zraka praha za ovaj materijal, označen kao čvrsti oblik 1, dat je na slici 3; karakteristični pikovi su navedeni u tabeli C. Prinos: 47.8 g, 95.7 mmol, 94%.
[0290] Postupak prikupljanja podataka difrakcije rendgenskih zraka praha je opisana u Alternativnoj sintezi Primera 13, metil terc-butil etar solvat, korak 8.
Tabela C. Odabrani pikovi difrakcije rendgenskih zraka praha za 13, Čvrsti oblik 1
Određivanje rendgenske strukture monokristala iz Primera 13, čvrsti oblik 1
[0291] Uzorak Primera 13 je podvrgnut kristalizaciji putem difuzije, korišćenjem etil acetata i heksana. Posuda za kristalizaciju je ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi dok je rastvarač ispario; nakon 2.5 meseca prisutni su kristali rendgenskog kvaliteta. Jedan od njih je korišćen za određivanje strukture. ORTEP dijagram monokristalnih podataka je prikazan na slici 4. Mercury softver je korišćen za izračunavanje obrasca praha iz razdvojene kristalne strukture; poređenje sa uzorkom difrakcije iz Rekristalizacije Primera 13; Sinteza čvrstog oblika 1 je identifikovalo ovaj materijal kao čvrsti oblik 1 (pogledajte sliku 5). Karakteristični pikovi za ove izračunate podatke dati su u tabeli D.
Tabela D. Podaci o obrascu praha za 13, Čvrsta forma 1 izračunato na osnovu određivanja rendgenske strukture monokristala iz Primera 13, čvrsti oblik 1
Jednokristalna rendgenska analiza
[0292] Prikupljanje podataka je obavljeno na Bruker D8 Quest difraktometru na sobnoj temperaturi. Prikupljanje podataka se sastojalo od omega i fi skeniranja.
[0293] Struktura je rešena intrinzičnim faziranjem korišćenjem SHELX softverskog paketa u prostornoj grupi ortorombske klase P212121. Struktura je naknadno rafinisana metodom najmanjih kvadrata pune matrice. Svi nevodonikovi atomi su pronađeni i rafinisani korišćenjem parametara anizotropnog pomeranja.
[0294] Atomi vodonika koji se nalaze na azotu pronađeni su iz Furijeove mape razlike i rafinisani sa ograničenim rastojanjima. Preostali atomi vodonika su postavljeni na izračunate pozicije i dozvoljeno im je da se kreću na svojim atomima nosačima. Završno preciziranje uključivalo je parametre izotropnog pomeranja za sve atome vodonika.
[0295] Analiza apsolutne strukture primenom postupak verovatnoće (Hooft, 2008) izvršena je pomoću PLATON (Spek). Rezultati pokazuju da je apsolutna struktura ispravno dodeljena. Postupak izračunava da je verovatnoća da je struktura ispravno dodeljena 100%. Hooft parametar je registrovan kao -0.01 sa esd (procenjena standardna devijacija) od (3), a Parson parametar je prijavljen kao -0.01 sa esd od (2).
[0296] Konačni R-indeks je bio 3.3%. Konačna Furije razlika nije otkrila nestalu ili pogrešno
1
postavljenu elektronsku gustinu.
[0297] Odgovarajuće informacije o kristalu, prikupljanju podataka i preciziranju sumirane su u tabeli E. Atomske koordinate, dužine veze, uglovi veze i parametri pomeranja navedeni su u tabelama F - H.
Softver i reference
[0298]
SHELXTL, Version 5.1, Bruker AXS, 1997.
PLATON, A. L. Spek, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 7-13.
MERCURY, C. F. Macrae, P. R. Edington, P. McCabe, E. Pidcock, G. P. Shields, R. Taylor, M. Towler, and J. van
de Streek, J. Appl. Cryst.2006, 39, 453-457.
OLEX2, O. V. Dolomanov, L. J. Bourhis, R. J. Gildea, J. A. K. Howard, and H. Puschmann, J. Appl. Cryst.2009,
42, 339-341.
R. W. W. Hooft, L. H. Straver, and A. L. Spek, J. Appl. Cryst.2008, 41, 96-103.
H. D. Flack, Acta Cryst.1983, A39, 867-881.
Tabela E. Kristalni podaci i preciziranje strukture za Primer 13, Čvrsti oblik 1.
1 1
Tabela F. Atomske koordinate (x 10<4>) i ekvivalentne parametre izotropnog pomeranja (Å<2>x 10<3>) za Primer 13, Čvrsti oblik 1. U(ekv) je definisana kao jedna trećina traga ortogonalizovanog U<ij>tenzora.
1 2
Tabela G. Dužina veze [A] i uglovi [°] za Primer 13, Čvrsti oblik 1.
1
14
1
1
1
1
1
[0299] Transformacije simetrije koje se koriste za sintezu ekvivalentnih atoma.
Tabela H. Parametri anizotropnog pomeranja (A<2>x 10<3>) za Primer 13, Čvrsti oblik 1.
Eksponent faktora anizotropnog pomeranja ima oblik: -2π<2>[h<2>a*<2>U<11>+ ... 2 h k a* b* U<12>].
11
[0300] NMR analiza u čvrstom stanju jedinjenja iz Primera 13, oblik 1 i 4 je sprovedena na CPMAS sondi postavljenoj u Bruker-BioSpin Avance III 500 MHz (<1>H frekvencija) NMR spektrometaru. Korišćena je brzina okretanja magičnog ugla od 15.0 kHz. Spektri Oblika 1 su sakupljeni na sobnoj temperaturi (temperatura nekontrolisana), a spektri Oblika 4 su sakupljeni na 15°C.
[0301]<13>C ssNMR spektri su sakupljeni korišćenjem eksperimenta sa protonskom dekuplujućom unakrsnom polarizacijom okretanja magičnog ugla (CPMAS). Tokom spektralne akvizicije primenjeno je fazno modulisano polje dekuplovanja protona od 80-100 kHz. Vreme kontakta sa unakrsnom polarizacijom je podešeno na 2 ms, a kašnjenje recikliranja na 3.5 sekunde za Oblik 1 i Oblik 4. Broj skeniranja je podešen da bi se dobio adekvatan odnos signala i šuma. The<13>C skala hemijskog pomeranja je referencirana korišćenjem<13>C CPMAS eksperimenta na eksternom standardu kristalnog adamantana, postavljajući njegovu rezonancu uzlaznog polja na 29.5 ppm.
[0302]<19>F ssNMR spektri su prikupljeni korišćenjem eksperimenta sa protonskim dekuplujućim magičnim uglom okretanja (MAS). Tokom spektralne akvizicije primenjeno je fazno modulisano polje dekuplovanja protona od 80-100 kHz. Spektri su prikupljeni sa odlaganjem recikliranja do 6 sekundi za obrazac 1 i 5.25 sekundi za obrazac 4. Broj skeniranja je podešen da bi se dobio adekvatan odnos signala i šuma. The<19>F skala hemijskog pomeranja je referencirana korišćenjem<19>F MAS eksperimenta na eksternom standardu trifluorosirćetne kiseline (50%/50% zapr/zapr u H2O), postavljajući njegovu rezonancu na -76.54 ppm.
[0303] Automatsko biranje pikova je izvršeno korišćenjem softvera Bruker-BioSpin TopSpin verzija 3.6. Generalno, granična vrednost od 4% relativnog intenziteta je korišćena za preliminarni odabir pika. Izlaz automatizovanog odabira pikova je vizuelno proveren da bi se osigurala validnost i podešavanja su ručno napravljena ako je potrebno. Iako su ovde navedene specifične vrednosti NMR u čvrstom stanju, postoji opseg za ove vrednosti pikova zbog razlika u instrumentima, uzorcima i pripremi uzorka. Ovo je uobičajena praksa u oblasti NMR u čvrstom stanju zbog varijacija svojstvenih pozicijama pikova. Tipična varijabilnost za<13>C vrednost hemijskog pomeranja x-ose je reda plus ili minus 0.2 ppm, osim ako nije drugačije navedeno, za kristalnu čvrstu supstancu. Varijabilnost za<19>F vrednost hemijskog pomeranja x-ose je reda plus ili minus 0<.>1 ppm. Visine NMR pikova u čvrstom stanju koje su ovde navedene su relativni intenziteti. Intenzitet NMR u čvrstom stanju može da varira u zavisnosti od stvarne postavke eksperimentalnih parametara i termičke istorije uzorka.
[0304]<13>C NMR u čvrstom stanju Primera 13, Oblika 1 je dobijen kao što je gore opisano i određena je sledeća lista pikova Primera 13, Oblika 1. Varijabilnost za<13>C vrdenosti hemijskog pomeranja su ± 0.2 ppm, osim ako nije drugačije naznačeno.
[0305]<19>F NMR u čvrstom stanju jedinjenja iz Primera 13, Oblika 1 je dobijen i određen je<19>F NMR pik u čvrstom stanju pri hemijskom pomeranju od -73.3 ± 0.1 ppm.
[0306] Karakteristični pikovi za jedinjenje iz Primera 13, Oblik 1 su<19>F pik sa hemijskim pomeranjem na -73.3 ± 0.1 ppm u kombinaciji sa<13>C pikovima sa hemijskim pomeranjima na 31<.>0 ± 0.1 ppm, 27.9 ± 0.1 ppm i 178.9 ± 0.2 ppm.
Alternativna rekristalizacija Primera 13; Sinteza čvrstog oblika 4
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13), čvrsti oblik 4
Korak 1. Rekristalizacija (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13) od propan-2-il acetata i heptana.
[0308] Smeša propan-2-il acetata (50 mL) i heptana (50 mL) je dodata u 13, metil terc-butil etar solvat, Čvrsti oblik 2 (iz Druge alternativne sinteze Primera 13, solvat metil terc-butil etra; 10.02 g, 17.0 mmol) i smeša je mešana na 20 °C i 3500 rpm preko noći. Zatim je polako dodat heptan (50 mL) i mešanje je nastavljeno tokom 30 minuta, nakon čega je smeša ohlađena na 10 °C tokom 30 minuta. Posle mešanja još 2 sata, suspenzija je filtrirana; filter kolač je ispran smešom propan-2-il acetata (4 mL) i heptana (16 mL) i zatim osušen na 55 °C pod vakuumom da bi se dobio (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13) kao kristalna čvrsta supstanca. Deo ovog materijala je korišćen u sledećoj rekristalizaciji. Prinos: 7.74 g, 15.5 mmol, 91%.
Korak 2. Rekristalizacija (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (13) iz vode.
11
[0309] Gusta suspenzija 13 (iz prethodnog koraka; 1.0 g, 2.0 mmol) u vodi (12 mL) je mešana na 5 °C tokom 21 dana, nakon čega je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom. Zatim se suši pod vakuumom 10 minuta i suši na vazduhu u tankom sloju na papiru 20 minuta, dajući (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13) kao bela, kristalna čvrsta supstanca. Difrakcioni obrazac rendgenskih zraka praha za ovaj materijal, označen kao čvrsti oblik 4, dat je na slici 6; karakteristični pikovi su navedeni u Tabeli J. Prinos: 755 mg, 1.51 mmol, 76%. Metoda prikupljanja podataka difrakcije rendgenskih zraka praha je opisana u Alternativnoj sintezi Primera 13, metil terc-butil etar solvat, korak 8.
Tabela J. Odabrani pikovi difrakcije rendgenskih zraka praha za 13, Čvrsti oblik 4
Određivanje rendgenske strukture monokristala iz Primera 13, čvrsti oblik 4
[0310] Uzorak Primera 13 je podvrgnut kristalizaciji putem difuzije na sobnoj temperaturi, korišćenjem etil acetata i pentana; jedan od dobijenih kristala je korišćen za određivanje strukture rendgenskih zraka monokristala. ORTEP dijagram monokristalnih podataka je prikazan na slici 7. Mercury softver je korišćen za izračunavanje obrasca praha iz razdvojene kristalne strukture; poređenje sa uzorkom difrakcije iz alternativne rekristalizacije Primera 13; Sinteza čvrstog oblika 4 je identifikovalo ovaj materijal kao čvrsti oblik 4 (vidi sliku 8). Karakteristični pikovi za ove izračunate podatke dati su u tabeli K.
Tabela K. Podaci o uzorku praha za 13, Čvrsta forma 1 izračunato na osnovu određivanja rendgenske strukture monokristala iz Primera 13, čvrsti oblik 4
11
Monokristalna rendgenska analiza
[0311] Prikupljanje podataka je obavljeno na Bruker D8 Venture difraktometru na -100 °C. Prikupljanje podataka se sastojalo od omega i fi skeniranja.
[0312] Struktura je rešena intrinzičnim faziranjem korišćenjem SHELX softverskog paketa u prostornoj grupi ortorombske klase P212121. Struktura je naknadno rafinisana metodom najmanjih kvadrata pune matrice. Svi nevodonikovi atomi su pronađeni i rafinisani korišćenjem parametara anizotropnog pomeranja.
[0313] Atomi vodonika koji se nalaze na azotu pronađeni su iz Furijeove mape razlike i rafinisani sa ograničenim rastojanjima. Preostali atomi vodonika su postavljeni na izračunate pozicije i dozvoljeno im je da se kreću na svojim atomima nosačima. Završno preciziranje uključivalo je parametre izotropnog pomeranja za sve atome vodonika.
[0314] Analiza apsolutne strukture primenom postupaka verovatnoće (Hooft, 2008) izvršena je pomoću PLATON (Spek). Apsolutna stereohemija nije određena, zbog vrednosti izvan specifikacije Hooft/Parsons/Flekovih parametara i standardnih devijacija.
[0315] Konačni R-indeks je bio 6.3%. Konačna Furije razlika nije otkrila nestalu ili pogrešno postavljenu elektronsku gustinu.
[0316] Odgovarajuće informacije o kristalu, prikupljanju podataka i preciziranju sumirane su u tabeli L. Atomske koordinate, dužine veze, uglovi veze i parametri pomeranja navedeni su u tabelama M - P.
Softver i reference
[0317]
SHELXTL, Verzija 5.1, Bruker AXS, 1997.
PLATON, A.L. Spek, J. Appl. Crist. 2003, 36, 7-13.
MERCURI, C. F. Macrae, P. R. Edington, P. McCabe, E. Pidcock, G. P. Shields, R. Tailor, M. Towler, i J. van de Streek, J. Appl. Crist.2006, 39, 453-457.
OLEKS2, O. V. Dolomanov, L. J. Bourhis, R. J. Gildea, J. A. K. Howard, i H. Puschmann, J. Appl. Crist.2009, 42, 339-341.
R.V.V. Hooft, L.H. Straver, and A.L. Spek, J. Appl. Crist.2008, 41, 96-103.
H. D. Flack, Acta Crist.1983, A39, 867-881.
11
Tabela L. Kristalni podaci i preciziranje strukture za Primer 13, Čvrsti oblik 4.
Tabela M. Atomske koordinate (x 10<4>) i ekvivalentne parametre izotropnog pomeranja (Å<2 x>10<3>) za Primer 13, Čvrsti oblik 4. U(ekv) je definisana kao jedna trećina traga ortogonalizovanog U<ij>tenzora.
11
11
Tabela N. Dužina veze [Å] i uglovi [°] za Primer 13, Čvrsti oblik 4.
11
12
12
12
[0318] Transformacije simetrije koje se koriste za sintezu ekvivalentnih atoma.
Tabela P. Parametri anizotropnog pomeranja (Å<2>x 10<3>) za Primer 13, Čvrsti oblik 4. Eksponent faktora anizotropnog pomeranja ima oblik: -2π<2>[h<2>a*<2>U<11>+ ... 2 h k a* b* U<12>].
12
<13>C lista pikova NMR u čvrstom stanju PF-07321332-00 Oblika 4. Varijabilnost za<13>C vrednosti hemijskog pomeranja su ±0.2 ppm, osim ako nije drugačije navedeno.
12
[0319]<19>F NMR u čvrstom stanju jedinjenja iz Primera 13, Oblika 4 je dobijen i određen je pik na -73.6 ± 0.1 sa relativnim intenzitetom od 100%.
[0320] Za jedinjenje Primera 13, Oblika 4, identifikovano je šest karakterističnih pikova:<19>F hemijsko pomeranje na -73.6 ± 0.1 ppm i<13>C hemijska pomeranja na 26<.>9 ± 0.1 ppm, 21.6 ± 0.1 ppm, 41.5 ± 0.2 ppm, 27.9 ± 0.1 ppm i 12.9 ± 0.1.<19>F pik sa hemijskim pomeranjem na -73<.>6 ± 0.1 ppm je karakterističan za jedinjenje Primera 13, Oblika 4.<13>C pikovi na 26.9 ± 0.1 ppm, 21.6 ± 0.1 ppm i 41.5 ± 0.1 ppm su svaki karakteristični pikovi jedinjenja iz Primera 13, Oblika 4.<13>C pikovi na 27.9 ppm i 12.9 ppm su svaki karakteristični za jedinjenje iz Primera 13, Oblik 4 kada se uzima u kombinaciji sa jednim ili više pikova odabranih iz<13>C ima maksimum na 21.6 ppm, 26.9 ppm i 41.5 ppm i<19>F maksimum na -73<.>6 ppm.
Četvrta alternativna sinteza Primera 13, solvat metil terc-butil etra
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat)
[0321]
[0322] Gusta suspenzija C43 (5.0 g, 9.7 mmol) u propan-2-il acetatu (7.6 mL/g, 38 mL) na 0 °C je napunjena 4-metilmorfolinom (4.5 ekvivalenata; 4.8 mL, 44 mmol). U rezultujuću suspenziju
12
je punjen trifluorosirćetni anhidrid (2.25 ekvivalenata; 3.1 mL, 22 mmol) tokom 1 sata preko dozirne pumpe. Posle mešanja na 0 °C tokom najmanje 1 sata, reakciona smeša je zagrejana do oko 20 °C, ugašena vodom (8 mL/g, 40 mL) i mešana najmanje 10 minuta. Posle dekantovanja, donji (vodeni) sloj je odbačen i u organski sloj je dodata voda (8 mL/g, 40 mL). Posle mešanja najmanje 10 minuta, slojevi su razdvojeni, a donji (vodeni) sloj je odbačen. Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom do približno 4 mL/g (oko 20 mL), nakon čega je vakuum prekinut korišćenjem azota i rastvor je zagrejan do približno 50 °C. Metil terc-butil etar (12 mL/g, 60 mL) je polako dodavan tokom najmanje 4 sata preko levka za dodavanje, a reakciona smeša je održavana na 50 °C najmanje 1 sat pre nego što je ohlađena na 25 °C tokom 1 sat. Dobijena suspenzija je držana na 25°C preko noći, zatim filtrirana, isprana uzastopno smešom propan-2-il acetata i metil terc-butil etra [1:3 (zapr/zapr); 2 mL/g] i sa metil terc-butil etrom (2 mL/g, 10 mL), i sušeno na filteru najmanje 30 minuta. Čvrste materije su zatim prebačene u vakuum peć na 50 °C i sušene najmanje 8 sati, dajući (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat) kao prljavo bela čvrsta supstanca. Prinos: 3.4 g, 5.8 mmol, 60%.
Peta alternativna sinteza Primera 13, metil terc-butil etar solvat
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat)
[0323]
[0324] Gusta suspenzija C43 (4.0 g, 7.7 mmol) u acetonitrilu (10 mL/g, 40 mL) na sobnoj temperaturi je napunjena 1-metil-1H-imidazolom (4.6 ekvivalenata; 2.84 mL, 35.6 mmol) i dobijena smeša je zagrejana na približno 30 °C. Dodan je rastvor 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-
12
trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksida (50% rastvora po težini u acetonitrilu; 2 ekvivalenta; 10.8 mL) na najmanje 6 sati korišćenjem pumpe. Nakon što je reakciona smeša mešana najmanje 10 sati, ohlađena je na 25 °C i pažljivo ugašena dodavanjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (7 mL/g, 28 mL) (egzotermno i oslobađanje gasa). Acetonitril je zatim oddestilovan pod sniženim pritiskom; u rezultujuću smešu je dodat etil acetat (10 mL/g, 40 mL) i dodatni zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (5 mL/g, 20 mL). Posle razdvajanja faze, donji (vodeni) sloj je odbačen, a organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (3.5 mL/g; 14 mL). Vodeni sloj je ponovo odbačen, a organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom do približno 1 mL/g (4 mL). Metil terc-butil etar (9 mL/g; 36 mL) je napunjen i dobijeni rastvor je zagrejan na 50 °C, što je brzo rezultiralo suspenzijom. Ova suspenzija je držana na 50 °C najmanje 30 minuta, nakon čega je ohlađena na 25 °C tokom 1 sata i držana na 25 °C najmanje 8 sati. Suspenzija je zatim filtrirana, isprana smešom etil acetata i metil terc-butil etra [1:3 (zapr/zapr); 2 mL/g], a zatim ispran metil terc-butil etrom (2 mL/g; 8 mL). Sakupljena čvrsta supstanca je sušena na filteru najmanje 30 minuta, prebačena u vakuum peć na oko 50 °C i sušena najmanje 8 sati, dajući (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat (13, metil terc-butil etar solvat) kao prljavo bela čvrsta supstanca. Prinos: 2.9 g, 4.9 mmol, 64%.
Primeri formulacije za jedinjenje iz Primera 13
[0325] (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid ili njegov hidrat ili solvat ili farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja, hidrata ili solvata je formulisan da napravi konvencionalni film sa trenutnim oslobađanjem obložene tablete za oralnu primenu, sa dozama u rasponu od 100 do 250 mg. Kao primer, formulacija sa trenutnim oslobađanjem je opisana u Tabeli formulacije i sadrži konvencionalne neaktivne ekscipijente mikrokristalnu celulozu i laktozu monohidrat (razblaživači), krospovidon (dezintegrant), koloidni silicijum dioksid (klizajuće sredstvo) i natrijum stearil fumarat (lubrikant). Tablete sa trenutnim oslobađanjem su obložene filmom korišćenjem komercijalno dostupnih formulacija filmskog omotača uključujući Opadry belu i Opadry roze. Svi ekscipijenti koji se koriste u filmom obloženim tabletama su globalno prihvatljivi i prisutni su na prethodnim nivoima. Formulacija koja je data je primer formulacije tableta sa trenutnim oslobađanjem, i kao takva, stručnjak u ovoj oblasti bi mogao da koristi lako dostupne rutinske tehnike koristeći alternativne ekscipijente formulacije da bi napravio pogodne tablete i postigao željene atribute kvaliteta tableta.
1
Primeri formulacija: Reprezentativne formulacije obloženih tableta (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida
[0326] (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (koji se u nastavku naziva API) tablete sa trenutnim oslobađanjem se proizvode korišćenjem rutinskih, standardnih serijskih procesa za čvrste, oralne tablete sa trenutnim oslobađanjem. Primeri standardnih serijskih procesa koji se mogu koristiti za proizvodnju (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid tableta sa trenutnim oslobađanjem uključuju direktnu kompresiju, suvu granulaciju i vlažnu granulaciju. Alternativno, može se koristiti kontinuirani radni proces proizvodnje. Nakon kompresije tablete, jezgra tableta su obložena filmom. Oblaganje tableta filmom se može izvršiti kontinuiranom operacijom oblaganja ili korišćenjem konvencionalnog procesa serijske filmske obloge.
[0327] Tabela formulacije: 100 mg, 150 mg i 250 mg (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid formulacije tablete
1 1
Primer 14 (samo kao referentni)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-5,5,5-trifluoro-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (14)
[0328]
1 2
Korak 1. Sinteza 9H-fluoren-9-ilmetil [(2S)-1-amino-5,5,5-trifluoro-1-oksopentan-2-
1
il]karbamata (C34).
[0329] Natrijum bikarbonat (4.8 g, 57 mmol) je dodat u rastvor 5,5,5-trifluoro-L-norvalinamida, hidrohloridne soli (ovo je sintetizovano korišćenjem postupaka opisanih za njegov enantiomer, u J. E. Starrett, PCT Int. Appl., 2010107997, September 23, 2010; 4.0 g, 19 mmol) i 9H-fluoren-9-ilmetil karbonohlorid (Fmoc hlorid; 10.2 g, 39.4 mmol) u vodi (80 mL). Dobijena suspenzija je mešana na 15°C do 25°C tokom 24 sata, nakon čega je podeljena između vode i dihlorometana. Organski sloj je ispran uzastopno vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo, obezbeđujući C34 kao čvrstu suspstancu. Prinos: 6.2 g, 16 mmol, 83%. LCMS m/z 393.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.9 (d, 2H), 7.7 (m, 2H), 7.5 (d, 1H), 7.4 (m, 5H), 7.1 (br s, 1H), 4.3 (m, 3H), 4.0 (m, 1H ), 2.2 (m, 2H), 1.9 (m, IH), 1.7 (m, 1H).
Korak 2. Sinteza N-[(9H-fluoren-9-ilmetoksi)karbonil]-5,5,5-trifluoro-L-norvalina (C35).
[0330] U rastvor C34 (6.2 g, 16 mmol) u 1,4-dioksanu (60 mL) dodata je hlorovodonična kiselina (3 M; 10 mL, 30 mmol), i reakciona smeša je mešana na 80 °C tokom 16 sati. Zatim je podeljena između vode i dihlorometana, a organski sloj je ispran vodom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak je razmućen sa petrolej etrom da se dobije C35 kao čvrsta supstanca. Prinos: 5.5 g, 14 mmol, 88%. LCMS m/z 392.1 [M-H]-.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.83 (br s, IH), 7.89 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.77 - 7.67 (m, 3H), 7.46 - 7.38 (m, 2H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 4.38 - 4.28 (m, 2H), 4.26-4.19 (m, 2H) ), 4.06 (ddd, J = 9, 9, 4.9 Hz, 1H), 2.43-2.15 (m, 2H), 2.01-1.89 (m, IH), 1.89-1.75 (m, 1H).
Korak 3. Sinteza benzila N-[(9H-fluoren-9-ilmetoksi)karbonil]-5,5,5-trifluoro-L-norvalinata (C36).
[0331] Smeša C35 (435 mg, 1.11 mmol), benzil bromid (0.263 mL, 2.21 mmol) i natrijum bikarbonata (464 mg, 5.52 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 mL) je mešan 15 sati na 25 °C. Nakon što je reakciona smeša razblažena vodom (30 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 x 30 mL), kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i 5% vodenim rastvorom litijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata. , filtriran i koncentrovan in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 100% etil acetata u petrolej etru) obezbedila je C36 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 510 mg, 1.05 mmol, 95%.
1 4
LCMS m/z 506.1 [M+Na<+>].
Korak 4. Sinteza benzil 5,5,5-trifluoro-L-norvalinata (C37).
[0332] Dietilamin (10 mL) je dodat u smešu C36 (510 mg, 1.05 mmol) u acetonitrilu (25 mL) na 0 °C. Nakon što je reakciona smeša mešana na 20°C tokom 2 sata, koncentrovana je pod sniženim pritiskom; hromatografija na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu) zatim je dala C37 kao bezbojno ulje. Prinos: 250 mg, 0.957 mmol, 91%. LCMS m/z 302.9 [M CH3CN H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 5 7.42-7.32 (m, 5H), 5.17 (s, 2H), 3.50 (dd, J = 8.4, 5.0 Hz, 1H), 2.32 - 2.13 (m, 2H), 2.01 (dddd, J = 13.7, 10.8, 5.2, 5.2 Hz, 1H), 1.76 (dddd, J = 13.6, 10.8, 8.4, 5.3 Hz, IH).
Korak 5. Sinteza benzil 5,5,5-trifluoro-N-[(4-metoksi-1H-indol-2-il)karbonil]-L-norvalinata (C38).
[0333] Rastvoru C37 (250 mg, 0.957 mmol) i 4-metoksi-1H-indol-2-karboksilne kiseline (220 mg, 1.15 mmol) u N,N-dimetilformamid (10 mL) na 0 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 437 mg, 1.15 mmol), nakon čega sledi dodavanje u kapima 4-metilmorfolina (194 mg, 1.92 mmol). Mešanje je nastavljeno na 0 °C do 10 °C tokom 1 sata, nakon čega je reakciona smeša razblažena vodom (20 mL) i vodenim rastvorom limunske kiseline (20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i vodenim rastvorom litijum hlorida (5%, 20 mL), zatim osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je prečišćen korišćenjem hromatografije na silika gelu (Gradijent: 0% do 100% etil acetata u petrolej etru) da bi se dobilo C38 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 350 mg, 0.806 mmol, 84%. LCMS m/z 435.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 59.09 (br s, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 5H), 7.23 (dd, J = 8, 8 Hz, 1 H), 7.09 (d, J = 2.3 Hz, 1 H), 7.03 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.76 (br d, J = 7.6 Hz, IH), 6.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.25 (AB kvartet, JAB= 12.1 Hz, ΔνAB= 11.4 Hz, 2H), 4.94-4.87 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.35-2.14 (m, 2H), 2.14-1.96 (m, 2H).
Korak 6. Sinteza 5,5,5-trifluoro-N-[(4-metoksi-1H-indol-2-il)karbonil]-L-norvalina (C39).
[0334] Smeša C38 (350 mg, 0.806 mmol) i paladijuma na ugljeniku (10%, 85.7 mg, 80.5 umol) u metanolu (10 mL) je hidrogenizovana 16 sati na 20 °C i 15 psi. Reakciona smeša je zatim
1
filtrirana, a kolač na filteru je ispran metanolom (10 mL); kombinovani filtrati su koncentrovani in vacuo i podvrgnuti hromatografiji na silika gelu (eluent: etil acetat) da bi se dobilo C39 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 270 mg, 0.784 mmol, 97%. LCMS m/z 345.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.62 (br s, 1H), 8.61 (d, J = 7.9 Hz, IH), 7.32 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.01 (d, polovina AB kvarteta, J = 8.2 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 4.47 (ddd, J = 8.5, 8.5, 4.8 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 2.5 - 2.27 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.12-1.92 (m, 2H).
Korak 7. Sinteza 5,5,5-trifluoro-N-[(4-metoksi-1H-indol-2-il)karbonil]-L-norvalil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C40).
[0335] Smeša C16 (58.2 mg, 0.218 mmol) i C39 (75.0 mg, 0.218 mmol) u N,N-dimetilformamidu (4 mL) na 0 °C je tretirana sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU; 99.4 mg, 0.261 mmol) i 4-metilmorfolinom (44.1 mg, 0.436 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C 1 sat, razblažena je vodom (20 mL) i vodenim rastvorom limunske kiseline (1 M; 20 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (3 x 20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Hromatografija na silika gelu (eluent: 10:1 etil acetat/metanol) obezbedila je C40 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 72 mg, 0.145 mmol, 66%. LCMS m/z 498.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.60 (br s, IH), 8.52 (d, J = 7.7 Hz, IH), 8.20 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.42-7.33 (m, 2H), 7.14-7.05 (m, 2H), 7.00 (d, polovina AB kvarteta, J = 8.2 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.58-4.46 (m, 1H), 4.32-4.22 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.18-3.02 (m, 2H), 2.45-2.21 (m, 3H), 2.18-2.07 (m, 1H), 2.06-1.88 (m, 3H), 1.73-1.59 (m, IH), 1.59-1.48 (m, 1H).
Korak 8. Sinteza N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-5,5,5-trifluoro-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamida (14).
[0336] U smešu C40 (52 mg, 0.10 mmol) u dihlorometanu (13 mL) je dodat metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 37 mg, 0.16 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1.5 sata, a zatim metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 37 mg, 0.16 mmol) je ponovo dodat, i mešanje je nastavljeno tokom 16 sati. Završno dodavanje metila N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 24.9 mg, 0.105 mmol) je praćeno mešanjem tokom 2 sata, nakon čega je
1
reakciona smeša razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 x 20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo; preparativna tankoslojna hromatografija (eluent: 20:1 etil acetat/metanol) dala je N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-5,5,5-trifluoro-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (14) kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 17.4 mg, 36.3 umol, 36%. Ovaj materijal je kombinovan sa prečišćenim proizvodima iz dve druge sinteze 14 (3 mg i 4 mg) i podvrgnut superkritičnoj tečnoj hromatografiji [Kolona: Chiral Technologies ChiralCel OD-H, 30 x 250 mm, 5 µm; Mobilna faza: 7:3 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida); Brzina protoka: 60 mL/min] da se obezbedi N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-5,5,5-trifluoro-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (14) kao čvrsta. Prinos: 11.3 mg, 23.6 umol, 46% za superkritičnu tečnu hromatografiju. LCMS m/z 480.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.61 (br s, IH), 8.96 (d, J = 8.0 Hz, IH), 8.61 (d, J = 7.7 Hz, IH), 7.71 (s, IH), 7.37 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 7.01 (d, polovina AB kvarteta, J = 8.2 Hz, 1H), 6.51 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.03-4.94 (m, 1H), 4.51-4.43 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.19-3.07 (m, 2H), 2.43-2.28 (m, 3H), 2.20- 2.08 (m, 2H), 2.06-1.92 (m, 2H), 1.86-1.76 (m, IH), 1.76-1.64 (m, 1H).
Primeri 15, 16, 17, 18 i 19 (samo kao referentni)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-7-fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (15), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-5-fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (16), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-3-fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (17), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il] -5.7-difluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (18), i N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-3.5 -difluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (19)
[0337]
1
[0338] Smeša 4 (10.0 mg, 22.8 µmol), tetra-n-butilamonijum dekatungstata (TBADT; 3.78 mg, 1.14 µmol), i N-fluoro-N-(fenilsulfonil)benzensulfonamida (8.61 mg, 27.3 µmol) je tretiran acetonitrilom (0.75 mL), vodom (0.5 mL) i trifluorosirćetnom kiselinom (1.74 uL, 22.6 µmol) pod argonom. Reakciona bočica je zatim zapečaćena, stavljena u EvoluChem<™>PhotoRedOx Box opremljen ventilatorom i ozračen crnim svetlom (PAR20-18V LG 365 nm, 100-240 VAC) na 25 °C tokom 16 sati. U reakcionu smešu je dodat vodeni rastvor kalijum fosfata (1 M, pH 7.45; 1 mL), a zatim naizmenični alikvoti vode i acetonitrila da bi se održao bistri rastvor na konačnoj zapremini od 18 mL. Alikvoti (3 mL) ove smeše su primenjeni na Biotage Isolute C18 kertridž za ekstrakciju čvrste faze koji su prethodno kondicionirani sa metanolom (3 mL), a zatim vodom (3 mL). Kertridži su isprani vodom (3 mL) i 20% acetonitrilom u 20 mM vodenom rastvoru amonijum acetata (3 mL), zatim eluirani acetonitrilom (3 mL). Nakon što su eluati upareni u vakuum centrifugi, ostaci su rekonstituisani u smeši 1% vodenog rastvora mravlje kiseline i acetonitrila i kombinovani do ukupno 6 mL. Ovaj rastvor je podeljen na pola i svaka polovina je
1
podvrgnuta HPLC reverzne faze (kolona: Phenomenex Luna C18.10 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent : 15% B tokom 5 minuta, zatim 15% do 70% B tokom 70 minuta, zatim 70% do 95% B tokom 15 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min). Frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi, i slične frakcije od interesa iz dve separacije su objedinjene i koncentrisane. Ove frakcije su dalje prečišćene pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Agilent Polaris C18, 4.6 x 250 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 10% B tokom 5 minuta , zatim 10% do 35% B tokom 35 minuta, zatim 35% do 60% B tokom 15 minuta, zatim 60% do 95% B tokom 9 minuta; Brzina protoka: 0.8 mL/min). Frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi, dajući N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-7-fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (15), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-5-fluoro -4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (16), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-3-fluoro -4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (17), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-5.7 -difluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (18), i N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oksopentan-2-il]-3.5 -difluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (19).
[0339] 15 - Prvo razdvajanje, brojevi frakcija 172-174; Drugo razdvajanje, brojevi frakcija 136-137. Prinos: 58 µg, 0.13 µmol, 0.6%. MS visoke rezolucije m/z 458.2201 [M+H]<+>; izračunato za C23H29FN5O4, 458.2204.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 12.05 (br s, IH), 8.93 (d, J = 7.9 Hz, IH), 8.51 (d, J = 7.6 Hz, IH), 7.70 (s, IH), 7.37 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.92 (dd, J = 10.8, 8.6 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 8.4, 2.5 Hz, 1H), 5.01-4.94 (m, 1H), 4.50-4.43 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.18-3.07 (m, 2H), 2.40-2.31 (m, 1H), 3.18-3.07 (m, 1H), ), 2.19-2.08 (m, 2H), 1.85 - 1.76 (m, 1H), 1.76 - 1.64 (m, 3H), 1.58 - 1.49 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.3 Hz, 3H). Retenciono vreme: 7.90 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Phenomenex Kinetex KSB-C18, 2.1
1
x 100 mm, 2.6 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 5% B tokom 0.5 minuta , zatim 5% do 70% B tokom 10.5 minuta, zatim 70% do 95% B tokom 2 minuta; Brzina protoka: 0.4 mL/min).
[0340] 16 - Prvo razdvajanje, brojevi frakcija 172-174; Drugo razdvajanje, brojevi frakcija 138-139. Prinos: 153 µg, 0.33 µmol, 1.4%. MS visoke rezolucije m/z 458.2201 [M+H]<+>; izračunato za C23H29FN5O4, 458.2204.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.73 (br s, IH), 8.95 (d, J = 8.0 Hz, IH), 8.61 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.09 - 7.03 (m, 2H), 5.01 -4.94 (m, 1H), 4.51 -4.43 (m, 1H), 4.06 ( s, 3H), 3.18-3.07 (m, 2H), 2.40-2.31 (m, 1H), 2.19-2.08 (m, 2H), 1.80 (ddd, J = 13.6, 9.2, 7.2 Hz, 1H), 1.76-1.65 (m, 3H), 1.58-1.50 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.89 (d, J = 6.3 Hz, 3H). Retenciono vreme: 7.94 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 15).
[0341] 17 - Prvo razdvajanje, brojevi frakcija 176-177; Drugo razdvajanje, brojevi frakcija 141-142. Prinos: 22 µg, 0.048 µmol, 0.21%. MS visoke rezolucije m/z 458.2199 [M+H]<+>; izračunato za C23H29FN5O4, 458.2204.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.45 (s, IH), 8.94 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.62 (br d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 8, 8 Hz, 1 H), 6.95 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.02-4.94 (m, 1H), 4.54-4.46 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.19-3.07 (m, 2H), 2.41-2.31 (m, 1H), 2.20-2.08 (m, 2H), 1.85-1.77 (m, 1H), 1.76-1.63 (m, 3H), 1.61-1.53 (m, 1H), 0.94 (d, J = 6.3 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.3 Hz, 3H). Retenciono vreme: 8.06 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 15).
[0342] 18 - Prvo razdvajanje, brojevi frakcija 180-181; Drugo odvajanje, frakcija broj 145. Prinos: 17 µg, 0.036 µmol, 0.16%. MS visoke rezolucije m/z 476.2100 [M+H]<+>; izračunato za C23H28F2N5O4, 476.2109.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) 512.23 (s, IH), 8.96 (d, J = 8.0 Hz, IH), 8.62 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.52-7.48 (m, 1H), 7.13 (dd, J = 11, 11 Hz, 1H), 5.02-4.94 (m, 1H), 4.53-4.44 (m, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.18 - 3.07 (m, 2H), 2.38-2.30 (m, 1H) ), 2.19-2.08 (m, 2H), 1.81 (ddd, J = 13.6, 9.1, 7.0 Hz, 1H), 1.76-1.65 (m, 3H), 1.59-1.51 (m, 1H), 0.95 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.3 Hz, 3H). Retenciono vreme: 8.20 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 15).
[0343] 19 - Prvo razdvajanje, brojevi frakcija 185-187; Drugo razdvajanje, brojevi frakcija 150-151. Prinos: 35 µg, 0.074 µmol, 0.32%. MS visoke rezolucije m/z 476.2107 [M+H]<+>; izračunato za C23H28F2N5O4, 476.2109.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.64 (s, IH), 8.94 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.80 (br d, J = 7 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.16 (dd, komponenta ABX sistema, J = 11.9, 9.1 Hz, 1H), 7.08 (br d, polovina AB kvarteta, J = 8.5 Hz, 1H), 5.02-4.94 (m, 1H), 4.55-4.47 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.19-3.08 (m, 2H), 2.41-2.32 (m, 1H), 2.19-2.10 (m, 2H), 1.81 (ddd, J = 13.7, 9.0, 7.2 Hz, 1H), 1.77-1.63 (m, 3H), 1.57 (ddd, J = 12.9, 8.4, 4.8 Hz, 1H), 0.94 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.4 Hz, 3H). Retenciono vreme: 8.44 minuta (analitički uslovi identični onima
14
koji se koriste za 15).
Primeri 20, 21, 22 i 23 (samo kao referentni)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-7-fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (20), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-5 -fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (21), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-3 -fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (22), i N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-5.7-difluoro-4-metoksi -1H-indol-2-karboksamid (23)
[0344]
[0345] Smeša 10 (10.0 mg, 22.0 µmol), tetra-n-butilamonijum dekatungstat (TBADT; 3.66 mg, 1.10 µmol), i N-fluoro-N-(fenilsulfonil)benzensulfonamid (8.34 mg, 26.4 µmol) je tretiran acetonitrilom (0.75 mL), vodom (0.5 mL) i trifluorosirćetnom kiselinom (1.69 uL, 21.9 µmol) pod argonom. Reakciona bočica je zatim zapečaćena, stavljena u EvoluChem<™>PhotoRedOx Box opremljen ventilatorom i ozračen crnim svetlom (PAR20-18V LG 365 nm, 100-240 VAC) na 25 °C tokom 16 sati. U reakcionu smešu je dodat vodeni rastvor kalijum fosfata (1 M, pH 7.45; 1 mL), a zatim naizmenični alikvoti vode i acetonitrila da bi se održao bistri rastvor na konačnoj zapremini od 18 mL. Alikvoti (3 mL) ove smeše su primenjeni na Biotage Isolute C18 kertridž za ekstrakciju čvrste faze koji su prethodno kondicionisani sa metanolom (3 mL), a zatim sa vodenim rastvorom amonijum acetata (10 mM; 3 mL). Kertridži su isprani vodenim rastvorom amonijum acetata (10 mM; 3 mL) i sa 20% acetonitrila u 20 mM amonijum acetata (3 mL), zatim eluirani acetonitrilom (3 mL). Nakon što su eluati upareni u vakuum centrifugi, ostaci su rekonstituisani u smeši 1% vodenog rastvora mravlje kiseline i acetonitrila i kombinovani do ukupno 6 mL. Ovaj rastvor je podeljen na pola i svaka polovina je podvrgnuta HPLC reverzne faze (kolona: Phenomenex Luna C18.10 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent : 15% B tokom 5 minuta, zatim 15% do 70% B tokom 70 minuta, zatim 70% do 95% B tokom 15 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min). Frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi, i slične frakcije od interesa iz dve separacije su objedinjene i koncentrisane. Ove frakcije su dalje prečišćene pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Agilent Polaris C18, 4.6 x 250 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 10 mM amonijum acetata; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 10% B tokom 5 minuta , zatim trenutno povećanje na 20% B, zatim 20% do 40% B tokom 35 minuta, zatim 40% do 60% B tokom 15 minuta, zatim 60% do 95% B tokom 9 minuta; Brzina protoka: 0.8 mL/min ). Frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi, dajući N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-7-fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (20), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-5 -fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (21), N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-3-fluoro-4-metoksi-1H-indol-2-karboksamid (22), i N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-5.7-difluoro-4-metoksi -1H-indol-2-karboksamid (23).
[0346] 20 - Prvo razdvajanje, brojevi frakcija 183-185; Drugo razdvajanje, brojevi frakcija 150-151. Prinos: 24 µg, 0.051 µmol, 0.23%. MS visoke rezolucije m/z 472.2342 [M+H]<+>; izračunato za C24H31FN5O4, 472.2360.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 12.05 (br s, IH), 8.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.52 (d, J = 8.0 Hz, IH), 7.69 (s, IH), 7.37 - 7.32 (m, 1H), 6.92 (dd, J = 10.9, 8.4 Hz, 1H), 6.41 (dd, J = 8.5, 2.7 Hz, 1H), 5.00-4.93 (m, 1H), 4.52 (ddd, J = 8.5, 8.2, 3.7 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.17 - 3.05 (m, 2H), 2.38-2.30 (m, 1H), 2.18 - 2.06 (m, 2H), 1.85-1.64 (m, 1H) , 4H), 0.94 (s, 9H). Retenciono vreme: 8.32 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Phenomenex Kinetex KSB-C18, 2.1 x 100 mm, 2.6 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 5% B tokom 0.5 minuta , zatim 5% do 70% B tokom 10.5 minuta, zatim 70% do 95% B tokom 2 minuta; Brzina protoka: 0.4 mL/min).
[0347] 21 - Prvo razdvajanje, brojevi frakcija 183-185; Drugo razdvajanje, brojevi frakcija 152-153. Prinos: 68 µg, 0.14 µmol, 0.64%. MS visoke rezolucije m/z 472.2344 [M+H]<+>; izračunato za C24H31FN5O4, 472.2360.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.72 (br s, IH), 8.91 (d, J = 8.1 Hz, IH), 8.59 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (s, IH), 7.47 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.09 - 7.04 (m, 2H), 5.00 - 4.93 (m, 1H), 4.52 (ddd, J = 8.5, 8.5, 3.8 Hz, 1H), 4.06 (br s, 3H), 3.17-3.05 (m, 2H), 2.39-2.31 (m, 1H), 2.18-2.06 (m, 2H), 1.84-1.77 (m, 1H), 2.18-2.06 (m, 2H), 2.39-2.31 (m, 1H), m, 1H), 1.78 (dd, J = 13.9, 9.0 Hz, IH), 1.74 - 1.64 (m, 2H), 0.94 (s, 9H). Retenciono vreme: 8.34 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 20).
[0348] 22 - Prvo razdvajanje, brojevi frakcija 187-188; Drugo odvajanje, frakcija broj 154. Prinos: 5 µg, 0.011 µmol, 0.05%. MS visoke rezolucije m/z 472.2354 [M+H]<+>; izračunato za C24H31FN5O4, 472.2360.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.45 (s, IH), 8.91 (d, J = 7.9 Hz, IH), 7.70 (s, IH), 7.57 (dd, J = 8.2, 3.6 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 8.8 Hz, 1H), 6.95 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.54 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.00-4.94 (m, 1H), 4.56-4.49 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.18-3.07 (m, 2H), 2.40-2.32 (m, 1H), 2.17-2.09 (m, 2H), 1.84-1.77 (m, IH), 1.76-1.65 (m, 3H), 0.95 (s, 9H). Retenciono vreme: 8.51 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 20).
[0349] 23 - Prvo razdvajanje, brojevi frakcija 190-192; Drugo razdvajanje, brojevi frakcija 156-157. Prinos: 21 µg, 0.043 µmol, 0.19%. MS visoke rezolucije m/z 490.2258 [M+H]<+>; izračunato za C24H30F2N5O4, 490.2266.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 12.24 (s, IH), 8.95 (d, J = 8.0 Hz, IH), 8.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.49-7.47 (m, 1H), 7.13 (dd, J = 11.1, 11.1 Hz, 1H), 5.00-4.93 (m, 1H), 4.54 (ddd, J = 8, 8, 4.1 Hz, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.17-3.06 (m, 2H), 2.38-2.30 (m, 1H), 2.18-2.07 (m, 2H), 1.85 - 1.65 (m , 4H), 0.95 (s, 9H). Retenciono vreme: 8.65 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 20).
Tabela 1. Postupak sinteze, struktura i fizičko-hemijski podaci za Primere 24 - 74 (samo kao referentni).
14
14
14
14
14
14
1
11
12
1
14
1
1. U ovom slučaju, C28 je deprotektovan korišćenjem metansulfonske kiseline, umesto hlorovodonika.
2. Epimeri Primer 25 i Primer 26 su razdvojeni superkritičnom tečnom hromatografijom (Kolona: Chiral Technologies Chiralpak IB, 21 x 250 mm, 5 µm; Mobilna faza: 9:1 ugljendioksid / metanol; Povratni pritisak: 120 bara, Brzina protoka: 75 mL /minuta). Dijastereomer koji eluira prvi označen je kao Primer 25, a dijastereomer koji eluira drugi kao Primer 26.
3. Uslovi za analitičku HPLC. Kolona: Chiral Technologies Chiralpak IB, 4.6 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza: 85:15 ugljen dioksid / metanol; Povratni pritisak: 120 bara; Brzina protoka: 1.5 mL/min.
4. Uslovi za analitičku HPLC. Kolona: Waters Atlantis dC18, 4.6 x 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Gradijent: 5.0% do 95% B, linearni tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min.
5.<1>H NMR Primera 30 pre konačnog prečišćavanja:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 7.48 -7.42 (m, 2H), 7.36 - 7.26 (m, 3H), 4.90 (dd, J = 10.5, 5.7 Hz, 1H), 4.37 (dd, J = 7.7, 4.9 Hz, 1H), 3.69 (s, 1H), 3.25 (ddd, J = 9.9, 8.9, 2.5 Hz, 1H), 3.18 (ddd, J = 9.6, 9.0, 7.1 Hz, 1H), 2.40-2.29 (m, 1H), 2.20 (s, 6H), 2.2-2.10 (m, 1H), 2.09-1.99 (m, 1H), 1.80-1. m, 2H), 1.73 (dd, J = 14.5, 5.0 Hz, 1H), 1.61 (dd, J = 14.4, 7.8 Hz, IH), 0.95 (s, 9H).
6. Kuplovanje amida sa odgovarajućom karboksilnom kiselinom je izvedeno korišćenjem 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid trioksida.
7. Primer 4 (25 uM) je inkubiran sa humanim citohromom P450 3A5 (4 nmol) u kalijum fosfatnom puferu (100 mM, pH 7.4; 40 mL) koji sadrži magnezijum hlorid (3.3 mM) i NADPH
1
(1.3 mM). Inkubacija je izvedena 0.75 sati u vodenom kupatilu koje se mućkalo na 37 °C. Inkubacija je prekinuta dodavanjem jednake zapremine acetonitrila, nakon čega je smeša centrifugirana na 1700 k g tokom 5 minuta, a supernatant je podvrgnut vakuumskom centrifugiranju približno 1.5 sata. Ovoj smeši je dodata mravlja kiselina (0.5 mL), acetonitril (0.5 mL) i voda do krajnje zapremine od 50 mL, i dobijena smeša je centrifuga centrifugirana na 40000 k g tokom 30 minuta. Supernatant je podvrgnut HPLC reverzne faze (kolona: Polaris C18, 4.6 x 250 mm; 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlja kiselina; Mobilna faza B: metanol; Gradijent: 15% B tokom 5 minuta, zatim 15% do 35% B tokom 75 minuta, zatim 35% do 95% B tokom 10 minuta; Brzina protoka: 0.8 mL/min). Frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi. Materijal za prvo eluiranje, nečist Primer 33, eluiran je na 54.7 minuta, a Primer 34 je eluiran na 55.3 minuta. Nečisti Primer 33 je ponovo prečišćen korišćenjem HPLC reverzne faze (kolona: Phenomenex Kinetex KSB-C18, 2.1 x 100 mm, 2.6 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.5% sirćetne kiseline; Mobilna faza B: 9:1 acetonitril/metanol; Gradijent: 10% B tokom 0.5 minuta, zatim 10% do 35% tokom 26.5 minuta, zatim 35% do 60% B tokom 3 minuta; brzina protoka 0.5 mL/min); frakcije su sakupljane svakih 15 sekundi. U ovom sistemu, Primer 33 je imao vreme zadržavanja od 12.7 minuta; dodatni Primer 34 eluiran na 13.5 minuta.
8. Neophodan 4-hloro-1.3-dimetil-1H-pirazol-5-karboksilna kiselina se može dobiti hidrolizom komercijalno dostupnog etil estra.
9. Reakciona smeša je razblažena acetonitrilom i 1% vodenim rastvorom mravlje kiseline, do zapremine od približno 2 mL; konačni sastav rastvarača je bio takav da je smeša izgledala bistra, sa približno 20% do 30% sadržaja acetonitrila. Komponente ove smeše su razdvojene pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Phenomenex Luna C18, 10 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 15% B za 5 minuta, zatim 15% do 70% B tokom 70 minuta, zatim 70% do 95% B tokom 15 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min); frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi. Primeri 37, 38, 39, 40 i 41 su eluirani u vremenima zadržavanja koja su data u nastavku.
10. Uslovi za analitičku HPLC. Kolona: Phenomenex Kinetex KSB-C18, 2.1 x 100 mm, 2.6 µm;
1
Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 5% B tokom 0.5 minuta, zatim 5% do 70% B tokom 10.5 minuta, zatim 70% do 95% B tokom 2 minuta; Brzina protoka: 0.4 mL/min.
11. Regiohemija Primera 41 nije rigorozno određena; druge moguće strukture za ovaj primer su N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]- 4-metoksi-5,6-bis(trifluorometil)-1H-indol-2-karboksamid i N-[(2S)-1-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oksopentan-2-il]-4-metoksi-6,7-bis(trifluorometil)-1H-indol-2-karboksamid.
12. Reakciona smeša je prečišćena korišćenjem uslova opisanih u fusnoti 9. Primer 42 je eluiran na 58.1 minuta i Primer 43 je eluiran na 59.2 minuta.
13. Reakciona smeša je razblažena smešom acetonitrila (0.3 mL) i 1% vodenog rastvora mravlje kiseline (0.7 mL). Dobijena smeša je centrifugirana, a supernatant je podvrgnut HPLC reverzne faze (kolona: Phenomenex Luna C18, 10 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 2% do 10% B tokom 5.0 minuta, zatim 10% do 95% B tokom 95 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min); frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi. Primeri 46, 47 i 48 su eluirani u vremenima zadržavanja koja su data u nastavku. Primer 5 je takođe izolovan iz ove reakcije, u frakcijama 189-190.
14. Uslovi za analitičku HPLC. Kolona: Phenomenex Kinetex C18, 2.1 x 50 mm, 1.7 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.1% mravlje kiseline; Gradijent: 5% B tokom 0.5 minuta, zatim 5% do 50% B tokom 6.0 minuta, zatim 50% do 80% B tokom 1.5 minuta, zatim 80% do 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 0.4 mL/min.
15. Iz ove reakcije primećen je samo naznačeni proizvod.
16. Pripremljen je osnovni rastvor Primera 4 (5.56 mg, 12.7 umol) i trifluorosirćetne kiseline (4 uL, 50 uL) u dimetil sulfoksidu (420 uL). Jedna šestina ovog rastvora je tretirana sa natrijum 1,1-difluoroetansulfinatom 1.3 mg, 8.5 µmol), zatim terc-butil hidroperoksidom (70% u vodi; 1.4 µL, 10 µmol), i zagrejana na 50 °C preko noći. Reakciona smeša je razblažena acetonitrilom i 1% vodenim rastvorom mravlje kiseline, do zapremine od približno 2-3 mL; konačni sastav rastvarača je bio takav da je smeša izgledala bistra, sa približno 20% do 30% sadržaja
1
acetonitrila. Komponente ove smeše su razdvojene pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Phenomenex Luna C18, 10 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlje kiseline; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 15% B za 5 minuta, zatim 15% do 40% B tokom 70 minuta, zatim 40% do 95% B tokom 15 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min); frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi. Primer 74 je eluiran na 68.6 minuta.
Primeri 75 i 76 (samo kao referentni)
(2S,4R)-4-terc-butil-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamid i (2R,4S)-4-terc-butil-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamid [75 (DIAST-1) i 76 (DIAST-2)
[0350]
1
Korak 1. Sinteza terc-butila N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valinata (C44).
[0351] Rastvor anhidrida trifluorometansulfonske kiseline (8.88 mL, 52.8 mmol) u dihlorometanu (10 mL) je dodat u -78 °C rastvor terc-butil L-valinata, hidrohloridne soli (10.0 g, 47.7 mmol) i trietilamina (18.7). 134 mmol) u dihlorometanu (90 mL). Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 2 sata, nakon čega je sipana u vodu i zakiseljena do pH od približno 4 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline. Dobijena smeša je ekstrahovana dihlorometanom, a organski sloj je ispran vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. in vacuo. Ostatak je kombinovan sa proizvodima dve slične reakcije sprovedene korišćenjem terc-butil L-valinata,
1
hidrohloridne soli (1.00 g, 4.77 mmol; 1.00 g, 4.77 mmol) i prečišćen hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 20 % etil acetata u petrolej etru), dajući C44 kao belu čvrstu supstancu. Kombinovani prinos: 14.0 g, 45.9 mmol, 80%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.92 (d, J = 8.8 Hz, IH), 3.68 (dd, J = 8.8, 6.2 Hz, 1H), 2.16-2.02 (m, 1H), 1.43 (s, 9H), 0.92 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
Korak 2. Sinteza N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valina (C45).
[0352] U rastvor C44 (14.0 g, 45.9 mmol) u dihlorometanu (85 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (85 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata, nakon čega je koncentrovana in vacuo; ostatak je ispran petrol etrom da se dobije C45 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 10.9 g, 43.7 mmol, 95%. GOSPOĐA m/z 248.0 [M-H]-.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.86 (br d, J = 8.3 Hz, 1H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 2.19 - 2.05 (m, 1H), 0.93 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
Korak 3. Sinteza hidrohloridne soli metil cis-4-terc-butilpiperidin-2-karboksilata (C46).
[0353] U rastvor hidrohloridne soli cis-4-terc-butilpiperidin-2-karboksilne kiseline (vidi R.T. Shuman et al., J. Org. Chem. 1990, 55, 738-741; 4.00 g, 18.0 mmol) u metanolu (40 mL) je dodat tionil hlorid (6.44 g, 54.1 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 25 °C tokom 16 sati, koncentrovana je in vacuo dajući C46 kao prljavo belu čvrstu supstancu (4.50 g). Deo ovog materijala je korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 200.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.46 (br s, 1H), 9.09 (br s, 1H), 4.11 - 3.96 (m, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.4 - 3.21 (m, 1H, pretpostavljeno; u velikoj meri zaklonjeno pikom vode) , 2.93 - 2.77 (m, 1H), 2.07 (br d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.75 (br d, J = 10.6 Hz, IH), 1.51 - 1.32 (m, 3H), 0.84 (s, 9H).
Korak 4. Sinteza metil (2S,4R)-4-terc-butil-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksilata i metil (2R,4S)-4-terc-butil-1-{N-[(trifluorometil) sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksilata (C47).
[0354] Na 25 °C mešavina C45 (300 mg, 1.20 mmol) i C46 (iz prethodnog koraka; 341 mg, ≤1.36 mmol) u N,N-dimetilformamid (3 mL) je dodat 4-metilmorfolin (365 mg, 3.61 mmol). Dobijena smeša je ohlađena na 0 °C i tretirana sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 549 mg, 1.44 mmol). Nakon što je reakciona smeša prskana azotom 1 minut, mešana je na 25 °C 12 sati. LCMS analiza u ovom trenutku je
1 1
ukazala na prisustvo C47: LCMS m/z 431.1 [M+H]<+>. Reakciona smeša je podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (20 mL), a vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (4 x 20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 20% etil acetata u petrol etru) obezbedila je C47 kao žutu gumu.<1>H NMR analiza je potvrdila da ovo sadrži mešavinu dijastereomera. Prinos: 320 mg, 0.743 mmol, 62%.
<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 6.12 - 5.94 (m, 1H), [4.51 (dd, J = 11.7, 6.3 Hz) i 4.32 - 4.18 (m), ukupno 2H], [3.73 (s) i 3.71 (s), ukupno 3H], [3.63 - 3.49 (m) i 3.48 - 3.39 (m), ukupno 2H], 2.18 - 1.93 (m, 2H), 1.91 - 1.77 (m, 1H), 1.63 - 1.37 ( m, 2H), 1.37 - 1.22 (m, 1H), 1.13 -1.04 (m, 3H), [0.94 (d, J = 6.8 Hz) i 0.91 (d, J = 6.8 Hz), ukupno 3H], 0.87 ( s, 9H).
Korak 5. Sinteza (2S,4R)-4-terc-butil-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksilne kiseline i (2R,4S)-4-terc-butil-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksilne kiseline (C48).
[0355] Rastvor C47 (314 mg, 0.729 mmol) u smeši metanola (2 mL) i tetrahidrofurana (2 mL) tretiran je rastvorom litijum hidroksida monohidrata (91.8 mg, 2.19 mmol) u vodi (1.4 mL), a reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 3 sata. Nakon uklanjanja rastvarača in vacuo, ostatak je razblažen vodom (10 mL) i zakiseljen do pH od približno 1 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline. Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 x 20 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (15 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo, priuštivši C48 kao žuto staklo.<1>H NMR analiza je potvrdila da ovo sadrži mešavinu dijastereomera. Prinos: 304 mg, kvantitativno.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ [9.82 (d, J = 8.7 Hz) i 9.69 (br d, J = 8.8 Hz), ukupno 1H], [4.28 (dd, J = 11.5, 6.4 Hz), 4.24 - 4.14 (m) i 4.05 - 3.96 (m), ukupno 2H], [3.80 - 3.69 (m) i 3.6 - 3.2 (m, pretpostavljeno; znatno zaklonjeno pikom vode), ukupno 2H], 2.06 - 1.90 (m, 2H), 1.80 -1.65 ( m, 1H), 1.41 - 1.17 (m, 3H), [0.96 (d, J = 6.8 Hz) i 0.93 (d, J = 6.5 Hz), ukupno 3H], [0.89 (d, J = 6.9 Hz) i 0.86 - 0.80 (m), ukupno 12H].
Korak 6. Sinteza (2S,4R)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-4-terc-butil-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamida i (2R,4S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-4-terc-butil-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamida (C49).
[0356] Smeši C16 (120 mg, 0.449 mmol) i C48 (144 mg, 0.346 mmol) u N,N-dimetilformamidu
1 2
(3 mL) na 25 °C je dodat 4-metilmorfolin (100 mg, 0.989 mmol), nakon čega je smeša ohlađena na 0 °C i tretirana sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU; 151 mg, 0.397 mmol). Reakciona smeša je prskana azotom 1 minut i zatim mešana na 25 °C tokom 12 sati. LCMS analiza je ukazala na prisustvo C49: LCMS m/z 570.3 [M+H]<+>. Reakciona smeša je zatim podeljena između etil acetata (20 mL) i vode (20 mL), a vodeni sloj je zasićen čvrstim natrijum hloridom i ekstrahovan etil acetatom (5 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i podvrgnut hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 15% metanola u dihlorometanu), dajući C49 kao belu čvrstu supstancu. Ovaj materijal je sadržao mešavinu dijastereomera, po<1>H NMR analizi. Prinos: 190 mg, 0.334 mmol, 96%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi, integracije su približne: δ [9.88 (d, J = 8.6 Hz) i 9.82 - 9.68 (m), ukupno 1H], [8.12 (d, J = 8.8 Hz) i 8.09 - 7.98 (m), ukupno 1H], [7.63 (s) i 7.57 (s), ukupno 1H], [7.30 (br s) i 7.18 (br s), ukupno 1H], [7.06 (br s) i 7.03 (br s), ukupno 1H], [4.36 (dd, J = 12.0, 6.1 Hz) i 4.32 - 4.08 (m), ukupno 2H], 2.26 - 2.05 (m, 2H), 1.81 - 1.54 (m, 2H), 1.53 - 1.30 (m, 2H), 0.98 - 0 , 6H), 0.86-0.76 (m, 9H).
Korak 7. Sinteza (2S,4R)-4-terc-butil-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamida i (2R,4S)-4-terc-butil-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamida [75 (DIAST-1) i 76 (DIAST-2)].
[0357] Smeša C49 (190.0 mg, 0.334 mmol) i metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamata, unutrašnja so (Burgess reagens; 238 mg, 1.00 mmol) u dihlorometanu (10 mL) je mešana na 25 °C tokom 2 dana, nakon čega je reakciona smeša razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana dihlorometom 2 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Hromatografija na silika gelu (Gradijent: 0% do 8% metanola u dihlorometanu) dala je belu čvrstu supstancu, koja je LCMS analizom sadržala oko 3:1 smešu proizvoda: LCMS m/z 552.2 [M+H]<+>i LCMS m/z 552.2 [M+H]<+>. Ovi dijastereomeri su razdvojeni superkritičnom tečnom hromatografijom [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak IG, 30 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza: 3:1 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida); Brzina protoka: 70 mL/min]. Dijastereomer koji se prvi eluira, izolovan kao bela čvrsta supstanca, označen je kao 75, a dijastereomer koji se drugi eluira, takođe bela čvrsta supstanca, označen je kao 76 [(2S,4R)-4-terc-butil-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamid i (2R,4S)-4-terc-butil-N-{(lS)-1-
1
cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidin-2-karboksamid].
[0358] 75 - Prinos: 26.2 mg, 47.5 umol, 14%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.87 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 4.99 - 4.91 (m, 1H), 4.24 (dd, J = 12.3, 6.0 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 8.3, 8.3 Hz, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 1H), 3.19 - 3.00 (m, 2H), 2.46 - 2.35 (m, 1H), 2.17 - 2.02 (m, 2H), 1.99 - 1 , 2H), 1.79-1.62 (m, 3H), 1.50-1.36 (m, 2H), 1.26-1.12 (m, 2H), 0.97-0.87 (m, 6H), 0.84 (s, 9H). Retenciono vreme: 1.30 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Chiral Technologies Chiralpak IG-3, 4.6 x 50 mm, 3 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: etanol koji sadrži 0.05% dietilamina; Gradijent: 5% do 40% B tokom 2 minuta, zatim 40% B tokom 1.2 minuta; Brzina protoka: 4 mL/minuti; Povratni pritisak: 1500 psi).
[0359] 76 - Prinos: 8.8 mg, 16 µmol, 5%. LCMS m/z 552.3 [M+H]<+>. Od strane<1>H NMR analiza, ovaj uzorak od 76 sadržao nečistoće.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi, integracije su približne: δ 9.76 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.59 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 5.02 -4.90 (m, 1H), 0.94-0.86 (m, 6H), 0.82 (s, 9H). Retenciono vreme: 1.61 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 75).
Primer 77 (samo kao referentni)
3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid (77)
[0360]
1 4
Korak 1. Sinteza (4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-(trifluorometil)-L-prolil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamid (C50).
[0361] U smešu (4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-(trifluorometil)-L-prolina (429 mg, 1.51 mmol) i C16, HCl soli (346 mg, 1.67 mmol) u N,N-dimetilformamidu (7.8 mL) na -30 °C dodat je N,N-diizopropiletilamin (0.791 mL, 4.54 mmol), a zatim O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-
1
tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 633 mg, 1.66 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje do 0 °C tokom 1 sata, nakon čega je razblažena vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (30 mL) i ekstrahovana smešom 2-butanola i dihlorometana (9:1, 3 x 7 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i prečišćeni hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 100% metanola u dihlorometanu), dajući C50 kao prljavo belu penu. Na osnovu<1>H NMR analize, ovaj materijal je postojao kao mešavina rotamera i sadržao je nečistoće izvedene iz upotrebljenih reagenasa; deo ovog uzorka je napredovao do sledećeg koraka. Prinos: 613 mg, 1.40 mmol, 93%. LCMS m/z 459.3 [M+Na<+>].<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), samo karakteristični pikovi proizvoda: δ 8.33 - 8.18 (m, 1H), [7.65 (br s) i 7.59 (br s), ukupno 1H], [7.39 (br s) i 7.27 br (s), ukupno 1H] , 7.05 (br s, IH), 4.38 - 4.28 (m, 1 H), 4.28 - 4.17 (m, 1 H), 3.46 - 3.36 (m, 1 H), 2.02 - 1.89 (m, 1 H), 1.80 - 1. , 2H), [1.39 (s) i 1.32 (s), ukupno 9H].
Korak 2. Sinteza N-(terc-butoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-4-(trifluorometil)-L-prolil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C51).
[0362] Smeša C50 (242 mg, 0.554 mmol) i rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 2 mL, 8 mmol) je mešan na sobnoj temperaturi 5 minuta, nakon čega je reakciona smeša koncentrovana in vacuo za uklanjanje rastvarača i zaostalog hlorovodonika. Dobijeni materijal bez zaštite je kombinovan sa N-(terc-butoksikarbonil)-3-metil-L-valin (128 mg, 0.553 mmol) i O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU: 232 mg, 0.610 mmol) u N,N-dimetilformamid (2 mL), a zatim ohlađen na -30 °C. Dodat je N,N-diizopropiletilamin (0.290 mL, 1.66 mmol) i reakciona smeša je zagrejana do 0 °C tokom 1 sata. Posle dodavanja vodenog rastvora natrijum bikarbonata, dobijena smeša je ekstrahovana tri puta sa etil acetatom; kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i prečišćen hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 30% metanola u dihlorometanu), dajući C51 kao čvrsta. Prinos: 230 mg, 0.418 mmol, 75%. LCMS m/z 550.3 [M+H]<+>.
Korak 3. Sinteza 3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida (77).
[0363] Smeša C51 (230 mg, 0.418 mmol) i rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 2 mL, 8 mmol) je mešan na sobnoj temperaturi 5 minuta, nakon čega je reakciona smeša koncentrovana in vacuo za uklanjanje rastvarača i zaostalog hlorovodonika. Dobijeni materijal bez zaštite je kombinovan sa etil trifluoroacetatom (595 mg, 4.19 mmol) i N,N-diizopropiletilaminom (0.219
1
mL, 1.26 mmol) u metanolu (1.0 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta, ponovo je dodat etil trifluoracetat (60 mg, 0.422 mmol) i mešanje je nastavljeno 30 minuta. Zatim je dodat vodeni rastvor natrijum bikarbonata i dobijena smeša je ekstrahovana tri puta etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i rastvoreni u dihlorometanu (3 mL). Ovome je dodat etil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 299 mg, 1.25 mmol), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata, nakon čega je tretirana sa dodatnim metilom. N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 100 mg, 0.420 mmol) i ostavljena da se meša narednih 30 minuta. Zatim je dodat razblažen vodeni rastvor natrijum karbonata, i smeša je ekstrahovana dva puta etil acetatom; kombinovani organski slojevi su sušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje superkritičnom tečnom hromatografijom (kolona: Princeton Dinitrofenil, 10 x 250 mm, 5 µm; Mobilna faza: 9:1 ugljen-dioksid/metanol; Povratni pritisak: 120 bara; Brzina protoka: 80 mL/min) dalo je materijal koji je zatim razmućen u heptanu (2.0 mL) na 50 °C tokom 2 sata, ohlađen na sobnu temperaturu i sakupljen filtracijom, dajući 3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid (77) kao čvrsta. Prinos: 64 mg, 0.121 mmol, 29%. LCMS m/z 528.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 9.05 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.67 (s, 1H), 4.96 (ddd, J = 11.0, 8.5, 5.0 Hz, 1H), 4.56 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.37 (dd, J = 7.5, 7.5 Hz, 1H), 3.98 (dd, komponenta ABX sistema, J = 11.2, 7.5 Hz, 1H), 3.92 (dd, komponenta ABX sistema, J = 11.3, 4.8 Hz, 1H), 3.46 - 3.35 (m, 1H), 3.19 - 3.10 (m, 1H), 3.09 - 3.00 (m, 1H), 2.5 - 2.38 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično rastvarači ob. pik), 2.38-2.28 (m, 1H), 2.21-2.04 (m, 3H), 1.78-1.65 (m, 2H), 0.99 (s, 9H).
Primer 78 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(metilkarbamoil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (78)
[0364]
1
Korak 1. Sinteza hidrohloridne soli metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-(3-metil-L-valil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C52).
[0365] Rastvor C31 (1.00 g, 2.61 mmol) u dihlorometanu (20 mL) na 0 °C, u kapima je dodat rastvor hlorovodonika u etil acetatu (4 M; 20 mL, 80 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 25 °C preko noći, koncentrovana je in vacuo dobijen je C52 kao bela guma. Prinos: 700 mg, 2.20 mmol, 84%. LCMS m/z 283.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (br s, 3H), 4.25 (s, 1H), 3.87 - 3.77 (m, 2H), 3.72 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.8 Hz, 1H), 3.67 (s, 3H), 1.59 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.7, 5.3 Hz, 1H), 1.49 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, IH), 1.03 (s, 9H), 1.02 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
1
Korak 2. Sinteza metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(metilkarbamoil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C53).
[0366] Rastvoru C52 (320 mg, 1.00 mmol) u dihlorometanu (6 mL) na 0 °C su polako dodavani trietilamin (0.769 mL, 5.52 mmol) i metilkarbamil hlorid (188 mg, 2.01 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na 20 °C i mešana 18 sati, nakon čega je tretirana kap po kap sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (5 mL) i ekstrahovana sa dihlorometanom (2 x 5 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 x 20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Hromatografija na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu) dala je C53 kao svetložutu gumu. Prinos: 190 mg, 0.560 mmol, 56%. LCMS m/z 339.9 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 6.03 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.89 (br k, J = 5 Hz, 1H), 4.20 - 4.14 (m, 2H), 3.91 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.3 Hz, 1H), 3.79 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.3, 5.3 Hz, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.17 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 1.55 - 1.49 (m, 1H), 1.40 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.4 Hz, IH), 1.00 (s, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.83 (s, 3H).
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(metilkarbamoil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C54).
[0367] U rastvor C53 (190 mg, 0.560 mmol) u smeši tetrahidrofurana (2 mL), vode (4 mL) i metanola (1 mL) na 0 °C dodat je litijum hidroksid monohidrat (82.0 mg, 1.95 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 20°C tokom 2 sata, razblažena je etil acetatom (10 mL); vodeni sloj je zatim ohlađen na 0 °C do 5 °C i zakiseljen do pH 2 do 3 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline. Vodena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 x 15 mL), a ovi kombinovani slojevi etil acetata su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo obezbeđujući C54 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 120 mg, 0.369 mmol, 66%. LCMS m/z 348.3 [M+Na<+>].<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 6.04 (d, J = 9.6 Hz, IH), 5.89 (d, J = 4.7 Hz, IH), 4.17 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.09 (s, 1H), 3.87 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 3.77 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.3, 5.4 Hz, 1H), 1.49 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.6, 5.1 Hz, 1H), 1.38 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.5 Hz, IH), 1.00 (s, 3H), 0.92 (s, 9H), 0.82 (s, 3H).
Korak 4. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(metilkarbamoil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C55).
1
[0368] Rastvoru C54 (120 mg, 0.369 mmol) i C16, HCl so (75%, 107 mg, 0.387 mmol) u N,N-dimetilformamid (3.0 mL) na 0 °C do 5 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 154 mg, 0.405 mmol) i 4-metilmorfolin (0.144 mL, 1.31 mmol). Nakon što je reakciona smeša ostavljena da se zagreje od 0 °C do 20 °C tokom 1.5 sata, ostavljena je da se meša na 20 °C tokom 18 sati, nakon čega je razblažena vodom i tretirana čvrstim natrijum sulfatom do zasićenja. Dobijena smeša je ekstrahovana smešom 2-propanola i hloroforma (1:4, 3 x 20 mL), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 20% metanola u dihlorometanu) obezbeđena C55 (240 mg) kao bezbojno staklo. Deo ovog materijala je korišćen u sledećem koraku. LCMS m/z 479.2 [M+H]<+>. Od strane<1>H NMR analizom, ovaj materijal je kontaminiran nusproizvodom izvedenim iz HATU reagensa.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), samo karakteristični pikovi proizvoda: δ 8.21 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.53 (br s, 1H), 7.29 (br s, 1H), 7.03 (br s, 1H), 6.02 (d, J = 9.6 Hz, IH), 5.86 (k, J = 4.6 Hz, 1H), 4.31-4.23 (m, 1H), 4.21 (s, 1H), 4.15 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 2.18-2.08 (m, 1H), 1.98 - 1.88 (m, 1H), 1.68 - 1.55 (m, 1H), 1.54 - 1.42 (m, 2H), 1.34 (d, polovina AB kvartet, J = 7.6 Hz, IH), 1.01 (s, 3H), 0.90 (s, 9H), 0.84 (s, 3H).
Korak 5. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(metilkarbamoil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (78).
[0369] U rastvor C55 (iz prethodnog koraka; 190 mg, ≤0.292 mmol) u acetonitrilu (12 mL) je dodat metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 303 mg, 1.26 mmol). Reakciona smeša je mešana na 20 °C tokom 22 sata, nakon čega je kombinovana sa sličnom reakcijom izvedenom korišćenjem C55 (iz prethodnog koraka; 50 mg, ≤77 µmol). Dobijeni rastvor je koncentrovan in vacuo, razblažen vodom (10 mL) i ekstrahovan etil acetatom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo; prečišćavanje pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Boston Prime C18, 30 x 150 mm, 5 µm; Mobilna faza A: 0.225% mravlja kiselina u vodi; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 23% do 46% B; Brzina protoka: 25 mL/min) dato (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(metilkarbamoil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (78) kao bela čvrsta supstanca. Kombinovani prinos: 25 mg, 54 µmol, 15% u 2 koraka. LCMS m/z 461.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 8.96 (d, J = 8.6 Hz, IH), 7.65 (s, IH), 6.02 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.85 (k, J = 4.5 Hz, 1H), 4.95 (ddd, J = 10.8, 8.4, 5.1 Hz, 1H), 4.13 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.88 -
1
3.79 (m, 2H), 3.18 - 3.09 (m, 1H), 3.07 - 2.98 (m, 1H), 2.48 - 2.37 (m, 1H), 2.20 - 2.02 (m, 2H), 1.77 - 1.62 (m, 2H), 1.56 - 1.50 (m, 1H), 1.27 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, IH), 1.02 (s, 3H), 0.89 (s, 9H), 0.85 (s, 3H).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d), karakteristični pikovi: δ 8.12 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 5.78 (br s, 1H), 5.04 (br d, J = 9.4 Hz, IH), 4.99 - 4.90 (m, IH), 4.57 - 4.49 (m, 1 H), 4.39 (d, J = 9.7 Hz, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.01 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.2 Hz, 1H), 3.93 (br dd, komponenta ABX sistema, J = 10.6, 4.9 Hz, 1H), 3.43 - 3.25 (m, 2H), 2.71 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 2.61 - 2.50 (m, 1H), 2.45 - 2.30 (m, 2H), 2.03 - 1.93 (m, 1H), 1.91 - 1.78 (m, 1H), 1.05 (s, 3H), 0.98 (s, 9H), 0.91 (s, 3H).
Primer 79 (samo kao referentni)
Metil {(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-3.3-dimetil-1-oksobutan-2-il} karbamat (79)
[0370]
1 1
Korak 1. Sinteza metil (1R,2S,5S)-3-[N-(metoksikarbonil)-3-metil-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C56).
[0371] Rastvoru C52 (370 mg, 1.16 mmol) u dihlorometanu (6 mL) na 0 °C su polako dodavani trietilamin (0.647 mL, 4.64 mmol) i metil hloroformat (335 mg, 3.55 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 20 °C tokom 16 sati, razblažena je u kapima sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (5 mL) i ekstrahovana sa dihlorometanom (2 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 x 20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo; hromatografija na silika gelu (Gradijent: 0% do 100% etil acetata u petrolej etru) obezbedila je C56 kao bela guma. Prinos: 115 mg, 0.338 mmol, 29%. LCMS m/z 341.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 5.29 (br d, J = 9.6 Hz, IH), 4.46 (s, IH), 4.23 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 3.94 - 3.86 (m, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.63 (br s, 3H), 1.49 - 1.41 (m, 2H), 1.04 (s, 3H), 1.03 (s , 9H), 0.91 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza (1R,2S,5S)-3-[N-(metoksikarbonil)-3-metil-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C57).
1 2
[0372] U rastvor C56 (115 mg, 0.338 mmol) u smeši metanola (2.0 mL), tetrahidrofurana (2.0 mL) i vode (2 mL) dodat je litijum hidroksid monohidrat (28.4 mg, 0.677 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi (22 °C do 25 °C) tokom 16 sati, a zatim koncentrovana in vacuo. Vodeni ostatak je podeljen između vode (5 mL) i etil acetata (20 mL), nakon čega je organski sloj odbačen, a vodeni sloj je podešen na pH od 1 do 2 dodavanjem koncentrovane hlorovodonične kiseline. Dobijena smeša je ekstrahovana tri puta sa etil acetatom; kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo obezbediti C57 kao bezbojna guma. Prinos: 100 mg, 0.306 mmol, 91%. LCMS m/z 327.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 55.42 (d, J = 9.9 Hz, IH), 4.46 (s, IH), 4.26 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.96 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.5 Hz, 1H), 3.87 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.3, 5.4 Hz, 1H), 3.64 (s, 3H), 1.68 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.50 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.6, 5.3 Hz, IH), 1.06 (s, 3H), 1.01 (s, 9H), 0.91 (s, 3H).
Korak 3. Sinteza metil {(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-3.3-dimetil-1-oksobutan- 2-il}karbamata (C58).
[0373] U rastvor C57 (100 mg, 0.306 mmol) i C16, HCl soli (75%, 84.8 mg, 0.306 mmol) u N,N-dimetilformamid (3 mL) na 0 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 140 mg, 0.368 mmol), nakon čega sledi dodavanje u kapima rastvora 4-metilmorfolina (93 mg, 0.919 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 mL). Reakciona smeša je zatim zagrejana do sobne temperature (25 °C) i mešana 16 sati, nakon čega je dodata voda (10 mL). Nakon što je čvrsti natrijum sulfat dodat do zasićenja, dobijena smeša je ekstrahovana smešom hloroforma i 2-propanola (4:1, 3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i prečišćeni hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 30% metanola u dihlorometanu), dajući C58 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 93 mg, 0.19 mmol, 62%. LCMS m/z 480.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 58.30 (br s, 1H), 7.18 (br s, 1H), 5.98 (br s, 1H), 5.64 (br s, 1H), 5.58 -5.42 (m, 1H ), 4.49 - 4.37 (m, IH), 4.29 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.23 (s, 1H), 4.11 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.3, 5.5 Hz, 1H), 3.93 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.3 Hz, 1H), 3.64 (s, 3H), 3.43 - 3.29 (m, 2H), 2.55 - 2.33 (m, 2H), 2.15 - 1.81 (m, 3H), 1.54 - 1.47 (m, 1H), 1.45 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, IH), 1.03 (s, 3H), 1.01 (s, 9H), 0.88 (s, 3H).
Korak 4. Sinteza metil {(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-
1
il]etil}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan- 3-il]-3.3-dimetil-1-oksobutan-2-il}karbamata (79).
[0374] U suspenziju C58 (93 mg, 0.19 mmol) u dihlorometanu (5 mL) je dodat metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 139 mg, 0.583 mmol), i reakciona smeša je mešana na 25 °C tokom 2 sata. Zatim je razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (3 x 10 mL); kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 x 10 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 100% etil acetata u petrol etru, praćena gradijentom od 0% do 20% metanola u dihlorometanu) dala je metil {(2S)-1-[(1)R.2S,5S)-2-({(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-3.3-dimetil-1-oksobutan-2-il} karbamat (79) kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 7.0 mg, 15 umol, 8%. LCMS m/z 462.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.13 (br d, J = 7.0 Hz, 1H), 5.68 (br s, 1H), 5.34 (br d, J = 9.9 Hz, IH), 4.95 -4.85 (m, IH), 4.26 (s, 1 H), 4.23 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.94 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.1, 4.5 Hz, 1H), 3.88 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.3 Hz, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.45 - 3.29 (m, 2H), 2.62 - 2.50 (m, 1H), 2.46 - 2.28 (m, 2H), 2.02 - 1.93 (m, 1H), 1.92 - 1.79 (m, 1H), 1.6 - 1.49 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom vode), 1.06 (s, 3H), 0.98 (s, 9H), 0.90 (s, 3H).
Primer 80 (samo kao referentni)
N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid (80)
[0375]
1 4
Korak 1. Sinteza 2-benzil 1-terc-butil (2S,4R)-4-(trifluorometil)pirolidin-1,2-dikarboksilata (C59).
[0376] Smeša (4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-(trifluorometil)-L-prolina (400 mg, 1.41 mmol), benzil bromida (0.335 mL, 2.82 mmol) i natrijum bikarbonata (593 mg, 7.06 mmol) u N,N-dimetilformamidu (8 mL) je mešana 15 sati na 25 °C. Nakon što je reakciona smeša razblažena vodom (30 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 x 30 mL), kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida i 5% vodenim rastvorom litijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija
1
(Gradijent: 0% do 30% etil acetata u petrolej etru) dala je C59 kao bezbojno ulje. Na osnovu<1>H NMR analizom, ovaj materijal je postojao kao mešavina rotamera. Prinos: 355 mg, 0.951 mmol, 67%.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 57.44 - 7.28 (m, 5H), 5.29 - 5.07 (m, 2H), [4.54 (br d, J = 8.6 Hz) i 4.40 (br dd, J = 8.5, 2 Hz), ukupno 1H], 3.87 - 3.70 (m, 1H), [3.58 (dd, J = 11.2, 7.4 Hz) i 3.49 (dd, J = 11.0, 7.9 Hz), ukupno 1H], 3.13 - 2.95 (m, 1H), 2.47 - 2.27 (m, 1H), 2.25 -2.11 (m, 1H), [1.46 (s) i 1.33 (s), ukupno 9H].
Korak 2. Sinteza hidrohloridne soli benzil (4R)-4-(trifluorometil)-L-prolinata (C60).
[0377] Rastvoru C59 (200 mg, 0.536 mmol) u etil acetatu (3 mL) na 0 °C dodat je rastvor hlorovodonika u etil acetatu (4 M; 6 mL, 24 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi (28 °C) tokom 3 sata, koncentrovana je in vacuo što je dalo C60 kao belu čvrstu supstancu; ovaj materijal je prenet direktno u sledeći korak. LCMS m/z 274.0 [M+H]<+>.
Korak 3. Sinteza benzil N-(terc-butoksikarbonil)-L-valil-(4R)-4-(trifluorometil)-L-prolinata (C61).
[0378] O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 277 mg, 0.728 mmol) i 4-metilmorfolin (184 mg, 1.82 mmol) su dodati u smešu C60 (iz prethodnog koraka; ≤0.536 mmol) i N-(terc-butoksikarbonil)-L-valina (158 mg, 0.727 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C 1 sat, nakon čega je sipana u ledenu vodu (15 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 x 15 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno sa 1 M hlorovodoničnom kiselinom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 40% etil acetata u petrolej etru) obezbedilo je C61 kao bezbojnu gumu. Prinos: 230 mg, 0.487 mmol, 91% u 2 koraka. LCMS m/z 495.0 [M+Na<+>].<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d), karakteristični pikovi: δ 7.40 - 7.30 (m, 5H), 5.17 (AB kvartet, JAB= 12.3 Hz, ΔνAB= 12.6 Hz, 2H), 4.21 (dd, J = 9.3, 6.8 Hz, 1H), 4.00 - 3.86 (m, 2H), 3.18 - 3.04 (m, 1H), 2.36 (ddd, komponenta ABXI sistema, J = 13.5, 9, 9 Hz, 1H), 2.20 (ddd, komponenta ABXI sistema, J = 13.4, 7.4, 3.5 Hz, 1H), 2.05 - 1.94 (m, 1H), 1.42 (s, 9H), 0.98 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.91 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
Korak 4. Sinteza hidrohloridne soli benzil L-valil-(4R)-4-(trifluorometil)-L-prolinat (C62).
1
[0379] Rastvoru C61 (230 mg, 0.487 mmol) u etil acetatu (2 mL) na 0 °C dodat je rastvor hlorovodonika u etil acetatu (4 M; 4 mL, 16 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi (28 °C) 1 sat, nakon čega je LCMS analiza pokazala konverziju u C62: LCMS m/z 373.1 [M+H]<+>. Koncentracija reakcione smeše in vacuo obezbedila je C62 kao belu čvrstu supstancu, koja je direktno preneta u sledeći korak.
Korak 5. Sinteza benzil N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-4-(trifluorometil)-L-prolinata (C63).
[0380] Rastvor anhidrida trifluorosirćetne kiseline (154 mg, 0.733 mmol) u dihlorometanu (0.5 mL) je dodat u suspenziju C62 (iz prethodnog koraka; ≤0.487 mmol) u dihlorometanu (3 mL) na 0 °C. Posle 3 minuta, u kapima je dodat rastvor trietilamina (148 mg, 1.46 mmol) u dihlorometanu (0.5 mL), i mešanje je nastavljeno na 25 °C tokom 3 sata. Posle razblaživanja dihlorometanom (5 mL), reakciona smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (10 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (15 mL), osušena, filtrirana i koncentrovana in vacuo; hromatografija na silika gelu (gradijent: 0% do 30% etil acetata u petrolej etru) dala je C63 kao bezbojno ulje. Prinos: 129 mg, 0.275 mmol, 56% u 2 koraka. LCMS m/z 491.2 [M+Na<+>].
Korak 6. Sinteza N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-4-(trifluorometil)-L-prolina (C64).
[0381] Rastvoru C63 (129 mg, 0.275 mmol) u metanolu (3 mL) na 28 °C dodat je paladijum na ugljeniku (10%, 29.3 mg, 27.5 umol), nakon čega je smeša hidrogenizovana na 15 psi tokom 16 sati. Filtracijom se dobija filter kolač, koji je ispran metanolom (10 mL); kombinovani filtrati su koncentrovani in vacuo dajući C64 kao svetložuta čvrstu supstancu. Prinos: 80 mg, 0.21 mmol, 76%. LCMS m/z 401.0 [M+Na<+>].
Korak 7. Sinteza N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-4-(trifluorometil)-L-prolil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C65).
[0382] O-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 88.5 mg, 0.233 mmol) i 4-metilmorfolin (64.2 mg, 0.635 mmol) su dodati u rastvor na 0 °C C64 (80 mg, 0.21 mmol) i C16 (76.8 mg, 0.287 mmol) u N,N-dimetilformamid (3 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom 2 sata, tretirana je vodom (10 mL) i vodenim rastvorom limunske kiseline (1 M; 10 mL, 10 mmol), zatim ekstrahovana etil acetatom (3 x 10 mL ).
1
Kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (15 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (15 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu) dalo je C65 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 72 mg, 0.14 mmol, 67%. LCMS m/z 532.2 [M+H]<+>.
Korak 8. Sinteza N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida (80).
[0383] Metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 96.9 mg, 0.407 mmol) je dodat u smešu C65 (72 mg, 0.14 mmol) u dihlorometanu (5 mL), i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle razblaženja vodom (15 mL), smeša je ekstrahovana dihlorometanom (3 x 15 mL), a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 k 20 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrisani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu) dala je N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid (80) kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 30.9 mg, 60.2 umol, 43%. LCMS m/z 536.1 [M+Na<+>].<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 9.89 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 9.06 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 4.96 (ddd, J = 10.6, 8.4, 5.5 Hz, 1H), 4.38 (dd, J = 7.9, 6.3 Hz, 1H), 4.28 (dd, J = 9.8, 7.8 Hz, 1H), 4.07 - 3.94 (m, 2H), 3.20 -3.00 (m, 2H), 2.5 - 2.41 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.38 -2.28 (m, 2H), 2.5 - 2.41 (m, 1H, pretpostavljeno; 1H), 2.19-2.02 (m, 4H), 1.78-1.61 (m, 2H), 0.92 (d, J = 7 Hz, 3H), 0.90 (d, J = 6.8 Hz, 3H).
Primeri 81-84 (samo kao referentni)
[0384]
1
Primer 81: (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3R)-5-hidroksi-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid
Primer 82: (1R,2S,5S.6R)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6-(hidroksimetil)-6-metil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid
Primer 83: (1R,2S,5S.6S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6-(hidroksimetil)-6-metil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid
Primer 84: (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[3-(hidroksimetil)-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid
[0385] Jedinjenja iz Primera 81-84 su dobijena putevima biotransformacije, oba in vitro i in vivo, od (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (jedinjenje iz Primera 13) kao što sledi. U in vitro studijama, (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid je inkubiran sa mikrozomima jetre miša, pacova, hrčaka, zeca, majmuna ili čoveka (videti tabelu M1 dole) ili sa mikrozomima pacova, majmuna ili humanim hepatocitima (videti tabelu M2 ispod). Alternativno, u in vivo studijama (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-
1
azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid je davan pacovima i majmunima. Dobijeni su uzorci plazme pacova, urina i žuči i plazme majmuna. Dobijeni metaboliti su zatim analizirani korišćenjem HPLC/MS i dobijena jedinjenja oksidativnog metabolita iz Primera 81-84 su otkrivena i dobijena. Pored jedinjenja iz Primera 81-84 dodatni metabolit, (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilna kiselina, nastala hidrolitičkim cepanjem, primećena je u in vivo studijama.
Tabela M1: Jedinjenja dobijena iz mikrozoma jetre
Tabela M2: Jedinjenja Primera 81-84 dobijena iz Hepatocita
Tabela M3: Dobijena jedinjenja iz primera 81-84 in vivo u pacovu ili majmunu
1
Primeri 82, 83, 84 i 81 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S.6R)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6-(hidroksimetil)-6-metil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (82), (1R,2S,5S.6S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6-(hidroksimetil)-6-metil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (83), (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[3-(hidroksimetil)-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (84), i (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3R)-5-hidroksi-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (81)
[0386]
[0387] Primer 13 (25 uM) je kombinovan sa mikrozomima humane jetre (2 mg/mL) u kalijum fosfatnom puferu (100 mM, pH 7.4; 40 mL) koji sadrži magnezijum hlorid (3.3 mM) i NADPH (1.3 mM). Inkubacija je izvedena 55 minuta u vodenom kupatilu koje se šejkira i održavana na 37 °C. Reakcija je prekinuta dodavanjem jednake zapremine acetonitrila, nakon čega je smeša centrifugirana na 1800 x g tokom 5 minuta, a supernatant je podvrgnut vakuumskom centrifugiranju približno 1.5 sata. Ostatku se dodaju mravlja kiselina (0.5 mL), acetonitril (0.5 mL) i voda do krajnje zapremine od 50 mL, a dobijena smeša je centrifugirana na 40000 x g tokom 30 minuta. Supernatant je primenjen na HPLC kolonu (Polaris C18, 4.6 x 250 mm; 5 µm) pri 1 mL/min korišćenjem Jasco HPLC pumpe. Nakon primene, kolona je premeštena u Waters Aquiti HPLC-UV sistem u kombinaciji sa Thermo LTK masenim spektrometrom i CTC Analitics kolektorom frakcija i podvrgnuta HPLC separaciji reverzne faze (Mobilna faza A: voda
1 1
koja sadrži 0.1% mravlje kiseline (zapr/zapr ); Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 2% tokom 5 minuta, zatim povećan na 15% B, zatim 15% do 60% B tokom 80 minuta, zatim 60% do 95% B tokom 5 minuta; Brzina protoka: 0.8 mL /min). Frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi, dajući (1R,2S,5S.6R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6-(hidroksimetil)-6-metil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (82), (1R,2S,5S,6S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6-(hidroksimetil)-6-metil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (83), (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[3-(hidroksimetil)-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (84), i (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3R)-5-hidroksi-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (81).
[0388] 82 - Prinos: 60 µg, 0.12 µmol, 12%. MS visoke rezolucije m/z 516.2424 [M+H]<+>; izračunato za C23H33F3N5O5, 516.2434.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 9.42 (br d, J = 7.9 Hz, IH), 9.03 (d, J = 8.5 Hz, IH), 7.66 (s, IH), 5.01 - 4.93 (m, 1 H), 4.69 - 4.63 (m, 1 H), 4.43 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.94 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.2, 5.4 Hz, 1H), 3.68 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 3.21 - 3.17 (m, 2H), 3.17 - 3.11 (m, 1H), 3.07 - 3.00 (m, 1H), 1.69 - 1.65 (m, 1H), 1.44 (d, J = 7.8 Hz, IH), 0.98 (s, 9H), 0.84 (s, 3H).
[0389] 83 - Prinos: 30 µg, 0.058 µmol, 6%. MS visoke rezolucije m/z 516.2425 [M+H]<+>; izračunato za C23H33F3N5O5, 516.2434.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 9.37 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 9.04 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 5.00 - 4.94 (m, IH), 4.54 - 4.49 (m, 1H), 4.40 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.28 (s, 1H), 3.93 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.2, 5.8 Hz, 1H), 3.74 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.6 Hz, 1H), 3.3 - 3.20 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 3.17 - 3.11 (m, 1H), 3.07 - 3.00 (m, 1H), 1.75 - 1.63 (m, 2H) , 1.38 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.3 Hz, IH), 1.06 (s, 3H), 0.98 (s, 9H).
[0390] 84 - Prinos: 40 µg, 0.078 µmol, 8%. MS visoke rezolucije m/z 516.2423 [M+H]<+>; izračunato za C23H33F3N5O5, 516.2434.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 9.61 - 9.51 (m, 1H), 9.00 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 5.02 - 4.92 (m, 1H), 4.51 - 4.43 (m,
1 2
1H), 4.16 (s, 1H), 3.92 (br dd, J = 10.0, 5.6 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 10.6 Hz, IH), 3.51 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 3.18 - 3.10 (m, 1H), 3.10 - 3.03 (m, 1H), 1.73 - 1.67 (m, 2H), 1.60 - 1.54 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.6 Hz, IH), 1.03 (s, 3H), 1.01 (s, 3H), 0.88 (br s, 6H).
[0391] 81 - Prinos: 130 µg, 0.252 µmol, 25%. Utvrđeno je da ovaj materijal postoji kao interkonvertujuća mešavina stereoizomera oko karbinolaminskog dela pirolidona (videti Primere 81 i 82). MS visoke rezolucije m/z 516.2428 [M+H]<+>; izračunato za C23H33F3N5O5, 516.2434.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ [9.40 (d, J = 8.4 Hz) i 9.38 (d, J = 8.2 Hz), ukupno 1H], [8.99 (d, J = 8.5 Hz) i 8.92 (d, J = 7.6 Hz), ukupno 1H], [8.37 (s) i 8.25 (s), ukupno 1H], [5.83 (br s) i 5.70 (br s), ukupno 1H], 5.04 - 4.92 (m, 2H), 4.44 - 4.38 (m, 1H), [4.19 (s) i 4.15 (s), ukupno 1H], 3.91 (dd, J = 10.2, 5.5 Hz, 1H), [3.69 (d, J = 10 Hz) i 3.68 (d, J = 10.2 Hz), ukupno 1H], [2.65 -2.57 (m), 2.43 - 2.30 (m), i 2.21 - 2.13 (m), ukupno 2H], [2.08 (ddd, J = 13.7, 8.4, 6.2 Hz), 2.00 -1.90 (m), i 1.87 - 1.79 (m), ukupno 2H], [1.78 - 1.70 (m) i 1.51 - 1.44 (m), ukupno 1H], 1.60 - 1 (m, 1H), [1.32 (d, J = 7.6 Hz) i 1.29 (d, J = 7.6 Hz), ukupno 1H], 1.03 (s, 3H), [0.99 (s) i 0.98 (s), ukupno 9H], [0.85 (s) i 0.84 (s), ukupno 3H].
Primeri 81 i 85 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3R)-5-hidroksi-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (81) i (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3R)-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (85)
[0392]
1
[0393] Smeša Primera 13 (1.0 mg, 2.0 µmol) i tetra-n-butilamonijum dekatungstata (TBADT; 0.33 mg, 0.10 µmol) je tretirana acetonitrilom (0.15 mL) i hlorovodoničnom kiselinom (1.0 M; 0.050 µm). Igla šprica (18 gauge) je ubačena kroz teflonski poklopac bočice, a reakciona smeša dostupna vazduhu je stavljena u EvoluChem<™>PhotoRedOx Box opremljen ventilatorom i ozračen crnim svetlom (PAR20-18V LG 365 nm, 100-240 VAC) na 25 °C tokom 16 sati. U reakcionu smešu je dodat vodeni rastvor kalijum fosfata (1 M, pH 7.5; 0.5 mL), zatim voda (do zapremine od približno 6 mL), nakon čega je dodat vodeni rastvor mravlje kiseline (1%, 2 mL) i dovoljno acetonitrila. za održavanje rastvora. Dobijeni rastvor je podeljen na pola i primenjen na dva kertridža za ekstrakciju čvrste faze Biotage Isolute C18 od 5 g. Kertridži su isprani vodenim rastvorom amonijum acetata (10 mM; 3 mL) i 20% acetonitrilom u 10 mM vodenom rastvoru amonijum acetata (3 mL), zatim eluirani acetonitrilom (3 mL). Rastvarači su uklonjeni korišćenjem Genevac evaporatora, a dva ostatka su rekonstituisana u smeši acetonitrila i 1% vodenog rastvora mravlje kiseline i kombinovana do ukupno 2 mL rastvora. Ovaj materijal je podvrgnut HPLC reverzne faze (kolona: Phenomenex Luna C18.10 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlja kiselina (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 2% do 15% B tokom 5 minuta, zatim 15% do 60% B tokom 80 minuta, zatim 60% do 95% B tokom 5 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min). Frakcije su sakupljane svakih 20 sekundi; jedinjenje koje je prvo eluiralo je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3R)-5-hidroksi-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (81), a jedinjenje koje je eluiralo kao drugo je
1 4
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3R)-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (85).
[0394] Prinos od 81: 0.122 mg, 0.237 µmol, 12%. Utvrđeno je da ovaj materijal postoji kao interkonvertujuća mešavina stereoizomera oko karbinolaminskog dela pirolidona i eluiran kao dvostruki pik na HPLC. MS visoke rezolucije m/z 516.2413 [M+H]<+>; izračunato za C23H33F3N5O5, 516.2434.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 9.44 - 9.34 (m, 1H), [8.99 (d, J = 8.5 Hz) i 8.92 (d, J = 7.6 Hz), ukupno 1H], [8.37 (s) i 8.25 (s), ukupno 1H], [5.83 (br s) i 5.70 (br s), ukupno 1H], 5.05 - 4.91 (m, 2H), 4.44 - 4.37 (m, 1H), [4.19 (s) i 4.15 (s), ukupno 1H], 3.91 (dd, J = 10.3, 5.5 Hz, 1H), [3.69 (d, J = 10.1 Hz) i 3.68 (d, J = 10.3 Hz), ukupno 1H], [2.65 -2.57 (m), 2.43 - 2.30 (m) i 2.17 (ddd, J = 14.9, 10.7, 4.7 Hz), ukupno 2H], [2.08 (ddd, J = 14.1, 8.5, 6.2 Hz), 2.01 - 1.90 (m) i 1.83 (ddd, J = 13.7, 10.1, 5.7 Hz), ukupno 2H], [1.78 - 1.70 (m) i 1.51 - 1.44 (m), ukupno 1H], 1.60 - 1.53 (m, 1H), [1.32 (d, J = 7.6 Hz) i 1.29 (d, J = 7.6 Hz), ukupno 1H], 1.03 (s, 3H), [0.99 (s) i 0.98 (s), ukupno 9H], [0.85 (s) i 0.84 (s), ukupno 3H]. Retenciono vreme: 7.7 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Phenomenex Kinetex KSB-C18, 2.1 x 100 mm, 2.6 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.1% mravlja kiselina (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 5 % B tokom 0.5 minuta, zatim 5% do 70% B tokom 10.5 minuta, zatim 70% do 95% B tokom 2 minuta; Brzina protoka: 0.4 mL/min).
[0395] Prinos od 85: 0.104 mg, 0.203 µmol, 10%. MS visoke rezolucije m/z 514.2259 [M+H]<+>; izračunato za C23H31F3N5O5, 514.2277.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 11.17 (br s, 1H), 9.40 (br s, 1H), 9.08 (d, J = 8.9 Hz, IH), 5.06 - 4.98 (m, IH), 4.42 - 4.36 (m, 1 H), 4.13 (s, 1 H), 3.91 (dd, J = 10.3, 5.6 Hz, 1H), 3.70 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 3.00 - 2.93 (m, 1H), 2.60 (dd, komponenta ABX sistema, J = 18.0, 5.9 Hz, 1H), 2.46 (dd, komponenta ABX sistema, J = 18.1, 9.1 Hz, 1H), 2.25 - 2.18 (m, 1H), 2.04 - 1.97 (m, 1H), 1.60 - 1.55 (m, 1H), 1.35 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz 1H), 1.03 (s, 3H), 0.95 (s, 9H), 0.86 (s, 3H). Retenciono vreme: 8.3 minuta (analitički uslovi identični onima koji se koriste za 81).
Primer 86 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[5,5,5-trifluoro-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)pentanoil]-3-azabiciklo[3.1. 0]heksan-2-karboksamid (86)
[0396]
1
Korak 1. Sinteza terc-butil (1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}karbamoil)- 6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-karboksilata (C66).
[0397] U suspenziju (1R,2S,5S)-3-(terc-butoksikarbonil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (5.25 g, 20.6 mmol), C16, HCl soli (4.70 g, 22.6 mmol) i 2-hidroksipiridin 1-oksida (571 mg, 5.14 mmol) u butan-2-onu (108 mL) na 0 °C dodat je N,N-diizopropiletilamin (7.97 g, 61.7 mmol) a zatim 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilkarbodiimid
1
hidrohlorid (4.73 g, 24.7 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom 20 minuta, ostavljena je da se postepeno zagreje do sobne temperature, a zatim mešana na sobnoj temperaturi preko noći, nakon čega je LCMS analiza pokazala prisustvo C66: LCMS m/z 407.1 [M-H]-. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (100 mL) i isprana uzastopno sledećim: smešom vode (50 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (70 mL), dva puta sa smešom hlorovodonične kiseline (1 M; 50 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (20 mL), i na kraju sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (70 mL). Svaki vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom (100 mL), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata i filtrirani. Sakupljeni natrijum sulfat je ispran etil acetatom (2 x 50 mL), a kombinovani filtrati su koncentrovani in vacuo, razblažen heptanom (50 mL) i koncentrovan pod sniženim pritiskom da se dobije C66 kao bezbojno staklo (6.69 g). Na osnovu<1>H NMR analize, prisutni su neki rastvarači; čistoća je procenjena na približno 85% težine.<1>H NMR analiza je takođe pokazala da ovaj materijal postoji kao mešavina rotamera. Prinos, prilagođen za prisustvo rastvarača: 5<.>7 g, 14 mmol, 68%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 8.23 - 8.13 (m, 1H), [7.63 (br s) i 7.59 (br s), ukupno 1H], [7.36 (br s) i 7.23 (br s), ukupno 1H], 7.08 - 7.00 (m, 1H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), [4.03 (s) i 3.99 (s), ukupno 1H], [3.58 (dd, J = 10.8, 4.6 Hz) i 3.49 (dd, J = 10.8, 3.9 Hz), ukupno 1H], [3.27 (d, J = 10.9 Hz) i 3.26 (d, J = 10.7 Hz), ukupno 1H], 3.22 -3.00 (m, 2H), 2.38 - 2.09 (m, 2H), 1.79 - 1.43 (m, 2H), [1.36 (s) i 1.29 (s), ukupno 9H] , 1.00 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza metansulfonatne soli (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C67).
[0398] Metansulfonska kiselina (0.920 mL, 14.2 mmol) je dodata u rastvor C66 (približno težinskih 85%, iz prethodnog koraka; 6.68 g, 14 mmol) u 1,1,1,3,3,3-heksafluoropropan-2-olu (30 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata, nakon čega je koncentrovana in vacuo. Ostatak je uzastopno uzet u sledeće sisteme rastvarača, nakon čega je usledilo rekoncentrovanje: acetonitril/etil acetat (1:1, 2 x 10 mL) i etil acetat/heptan (1:1, 2 x 10 mL), da bi se dobilo C67 kao staklo (7.18 g). Deo ovog materijala je prenet u sledeći korak. LCMS m/z 309.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 4.51 (dd, J = 10.8, 4.7 Hz, 1H), 4.21 (br s, 1H), 3.73 (dd, J = 12.4, 6.3 Hz, 1H), 3.41 - 3.22 (m, 3H), 2.70 (s, 3H), 2.58 - 2.47 (m, 1H), 2.42 - 2.32 (m, 1H), 2.16 (ddd, J = 14.0, 10.8, 4.8 Hz, IH), 1.97 (br d, J = 7.9 Hz, IH), 1.95 - 1.84 (m, IH), 1.84 - 1.75 (m, 2H), 1.15 (s, 6H).
1
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[5,5,5-trifluoro-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)pentanoil]-3-azabiciklo[3.1. 0]heksan-2-karboksamida (86).
[0399] U rastvor 2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-5,5,5-trifluoropentanske kiseline (59.0 mg, 0.218 mmol) u smeši acetonitrila (0.60 mL) i N,N-dimetilformamid (0.40 mL) dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 82.7 mg, 0.218 mmol), a zatim 4-metilmorfolin (54.4 uL, 0.495 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana 20 minuta, C67 (iz prethodnog koraka; 100 mg, ≤0.19 mmol) je dodato kao čvrsta supstanca. Reakciona smeša je ostavljena da se meša 1.5 sata, nakon čega je podeljena između etil acetata i zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani korišćenjem struje azota. Ostatak je rastvoren u dihlorometanu (0.70 mL), tretiran trifluorosirćetnom kiselinom (0.175 mL) i mešan na sobnoj temperaturi. Posle 2 sata, ponovo je dodata trifluorosirćetna kiselina (0.10 mL); mešanje je nastavljeno još 3 sata, nakon čega je reakciona smeša koncentrovana u struji azota, a zatim in vacuo. Ovaj materijal je rastvoren u dihlorometanu (0.75 mL), ohlađen u ledenom kupatilu i tretiran trietilaminom (54.8 uL, 0.393 mmol); trifluorosirćetni anhidrid (41.2 uL, 0.292 mmol) je dodat u kapima, i reakciona smeša je ostavljena da se meša na 0 °C tokom 3 sata. Isparljive supstance su uklonjene korišćenjem Genevac evaporatora, a ostatak je rastvoren u dihlorometanu (0.90 mL), tretiran metilom. N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 132 mg, 0.554 mmol), i mešana na sobnoj temperaturi 2.5 sata. Reakciona smeša je zatim koncentrovana pod strujom azota, razblažena etil acetatom i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani u struji azota. Prečišćavanje pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza A: 0.05% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: 0.05% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu; Gradijent: 5% do 95% B tokom 8.54 minuta, nakon čega sledi 95% B tokom 1.46 minuta; Brzina protoka: 25 mL/minuti) dalo je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[5,5,5-trifluoro-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)pentanoil]-3-azabiciklo[3.1. 0]heksan-2-karboksamid (86). Prinos: 14 mg, 26 µmol, 14% u 2 koraka. LCMS m/z 540.6 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.60 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis dC18, 4.6 x 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline zapr/zapr); Gradijent: 5.0% do 95% B, linearno tokom 4.0
1
minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min).
Primer 87
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[(2S)-2-cikloheksil-2-{[(trifluorometil)sulfonil]amino}acetil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (87)
[0400]
Korak 1. Sinteza metil (1R,2S,5S)-3-{(2S)-2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-2-cikloheksilacetil}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C68).
[0401] U rastvor hidrohloridne soli metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-
1
karboksilat, (300 mg, 1.46 mmol) i (2S)-[(terc-butoksikarbonil)amino](cikloheksil)sirćetne kiseline (394 mg, 1.53 mmol) u N,N-dimetilformamid (5 mL) na 0 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 610 mg, 1.60 mmol), nakon čega sledi dodavanje u kapima 4-metilmorfolina (443 mg, 4.38 mmol). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 10 minuta, zatim na sobnoj temperaturi (20 °C) tokom 2 sata, nakon čega je sipana u ledenu vodu (30 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 x 40 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno vodom (40 mL), hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 40 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (40 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, zatim osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrisani in vacuo da bi se obezbedilo C68 kao bela pena. Prinos: 580 mg, 1.42 mmol, 97%. LCMS m/z 409.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.17 (s, 1H), 4.00 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.88 (dd, J = 9, 9 Hz, 1H), 3.75 (dd , J = 10.3, 5.3 Hz, 1H), 3.64 (s, 3H), 1.83 -1.47 (m, 8H), 1.46 - 1.28 (m, 2H), 1.33 (s, 9H), 1.18 - 1.06 (m, 3H), 1.46 - 1.28 (m, 2H), 1.33 (s, 9H), 1.18 - 1.06 (m, 3H). ), 1.00 (s, 3H), 0.86 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza hidrohloridne soli metil (1R,2S,5S)-3-[(2S)-2-amino-2-cikloheksilacetil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C69).
[0402] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 15 mL) dodat je u kapima u rastvor na 5 °C C68 (580 mg, 1.42 mmol) u 1,4-dioksanu (3 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi (20 °C) tokom 1.5 sata, koncentrovana je in vacuo. Ostatak je zajedno uparen sa dihlorometanom da bi se dobio C69 kao svetložuta pena (490 mg), čiji je veći deo korišćen u sledećem eksperimentu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.22 (br s, 3H), 4.26 (s, 1H), 3.99 -3.90 (m, 1H), 3.76 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.7, 5.1 Hz, 1H), 3.71 (d, pola AB kvarteta, J = 10.6 Hz, 1H), 3.66 (s, 3H), 1.83 - 1.60 (m, 6H), 1.59 (dd, J = 7.6, 5.1 Hz, 1H), 1.49 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.27 - 1.02 (m, 5H), 1.03 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Korak 3. Sinteza metil (1R,2S,5S)-3-[(2S)-2-cikloheksil-2-{[(trifluorometil)sulfonil]amino}acetil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C70).
[0403] Rastvoru C69 (iz prethodnog koraka; 480 mg, ≤1.39 mmol) u dihlorometanu (10 mL) na 0 °C je dodat N,N-diizopropiletilamin (630 mg, 4.87 mmol), nakon čega sledi dodavanje u kapima trifluorometansulfonskog anhidrida (0.328 mL, 1.95 mmol). Reakciona smeša je mešana na -10 °C 1 sat, zatim na sobnoj temperaturi (20 °C) 1 sat, nakon čega je razblažena zasićenim
1
vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (3 x 30 mL ). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i prečišćeni hromatografijom na silika gelu (eluent: 1:4 etil acetat/petrol etar), dajući C70 kao svetložuto ulje. Prinos: 124 mg, 0.282 mmol, 20% u 2 koraka. LCMS m/z 441.1 [M+H]<+>.
Korak 4. Sinteza (1R,2S,5S)-3-[(2S)-2-cikloheksil-2-{[(trifluorometil)sulfonil]amino}acetil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C71).
[0404] U rastvor C70 (120 mg, 0.272 mmol) u smeši vode (2 mL), metanola (2 mL) i tetrahidrofurana (2 mL) dodat je litijum hidroksid monohidrat (28.6 mg, 0.682 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi (20 °C) tokom 18 sati na sobnoj temperaturi, LCMS je pokazala da je reakcija završena: LCMS m/z 427.2 [M+H]<+>. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo za uklanjanje organskih rastvarača. Ostatak je razblažen vodom (5 mL) i zatim zakiseljen do pH od 2 do 3 dodavanjem 1 M hlorovodonične kiseline; dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (2 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su sušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo, obezbeđivanje C71 kao svetložuta čvrsta supstanca. Prinos: 92.0 mg, 0.216 mmol, 79%.
Korak 5. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-3-[(2S)-2-cikloheksil-2-{[(trifluorometil)sulfonil]amino}acetil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C72).
[0405] Rastvoru C71 (92.0 mg, 0.216 mmol) i C16, HCl so (72%, 68.8 mg, 0.238 mmol) u N,N-dimetilformamid (3 mL) na 0 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 98.4 mg, 0.259 mmol), a zatim 4-metilmorfolin (76.4 mg, 0.755 mmol). Reakciona smeša je zatim mešana na 20 °C tokom 2 sata, nakon čega je sipana u ledenu vodu (10 mL) i ekstrahovana smešom hloroforma i 2-propanola (4:1, 4 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i prečišćen hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu), dajući C72 kao bezbojno staklo. Prinos: 100 mg, 0.173 mmol, 80%. LCMS m/z 580.2 [M+H]<+>.
Korak 6. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[(2S)-2-cikloheksil-2-{[(trifluorometil)sulfonil]amino}acetil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1. 0]heksan-2-karboksamida (87).
1 1
[0406] Rastvor trifluorosirćetnog anhidrida (47.1 mg, 0.224 mmol) u dihlorometanu (1 mL) je dodat u kapima u rastvor na 0 °C C72 (100 mg, 0.173 mmol) i piridin (41.7 uL, 0.516 mmol) u dihlorometanu (3 mL). Nakon što je smeša mešana 20 sati na sobnoj temperaturi (10 °C do 20 °C), koncentrovana je in vacuo i ponovo rastvorena u dihlorometanu (3 mL). Metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 103 mg, 0.432 mmol) je dodat, i reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi (20 °C) tokom 20 sati. Zatim je razblažen zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL) i ekstrahovan dihlorometanom (3 x 20 mL); kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i podvrgnuti superkritičnoj tečnoj hromatografiji [Kolona: Chiral Technologies Chiralcel OD, 30 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza: 4:1 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida); Brzina protoka: 60 mL/min]. Frakcije koje sadrže 87 bili koncentrisani in vacuo ispod 40 °C da bi se uklonio alkoholni ko-rastvarač. Ostatak je razblažen etil acetatom (50 mL) i dihlorometanom (5 mL) i ispran uzastopno sa hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 20 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida. Dobijeni organski sloj je osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan in vacuo pre nego što se pomeša sa vodom (20 mL) i acetonitrilom (5 mL); ova smeša je liofilizovana da bi se dobilo (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[(2S)-2-cikloheksil-2-{[(trifluorometil)sulfonil]amino}acetil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (87) kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 27.6 mg, 49.1 umol, 28%. LCMS m/z 562.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 9.93 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 9.10 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 5.03 - 4.94 (m, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.88 - 3.78 (m, 2H) , 3.55 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.20 - 3.11 (m, 1H), 3.10 - 3.00 (m, 1H), 2.19 -2.08 (m, 1H), 2.06 - 1.95 (m, 1H), 1.85 - 1.93 (m, 1H) ), 1.33 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.03 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Primeri 88 i 89 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[3-ciklobutil-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid i (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[3-ciklobutil-N-(trifluoroacetil)-D-alanil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (88 i 89)
[0407]
1 2
Korak 1. Sinteza terc-butil {1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il }karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-3-ciklobutil-1-oksopropan-2-il}karbamata (C73).
[0408] Rastvor C67 (150 mg, 0.371 mmol) i N-(terc-butoksikarbonil)-3-ciklobutilalanina (99.2 mg, 0.408 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 mL) na 0 °C je tretiran sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU; 169 mg, 0.444 mmol). Zatim je u kapima dodat 4-metilmorfolin (131 mg, 1.30 mmol), nakon čega je reakciona smeša ostavljena da se zagreje na 25 °C i mešana preko noći. Dodata je ledena voda (10 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana smešom hloroforma i 2-propanola (4:1, 4 x 20 mL); kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Hromatografija na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu) je obavljena dva puta, dajući C73 kao belu čvrstu supstancu, koja se sastoji od mešavine dva dijastereomera. Prinos: 106 mg, 0.199 mmol, 54%. LCMS m/z 534.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ [8.59 (d, J = 5.5 Hz) i 7.85 (d, J = 7.7 Hz), ukupno 1H], 7.20 - 7.06 (m, 1H), [5.78 (br s ) i 5.67 (br s), ukupno 1H], [5.51 (br s) i 5.40 br (s), ukupno 1H], 5.22 - 5.12 (m, 1H), [4.49 - 4.39 (m) i 4.38 - 4.23 ( m), ukupno 3H], 4.17 - 4.06 (m, 1H), [3.83 (d, J = 10.4 Hz) i 3.50 (d, J = 10.5 Hz), ukupno 1H], 3.42 - 3.28 (m, 2H), 2.50 - 2.30 (m, 3H), 2.23 - 2.00 (m, 4H), 2.00 - 1.77 (m, 4H), 1.73 - 1.44 (m, 5H), [1.40 (s) i 1.39 (s), ukupno 9H] , [1.07 (s) i 1.03 (s), ukupno 3H], [0.98 (s) i 0.92 (s),
1
ukupno 3H].
Korak 2. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[3-ciklobutil-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid i (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[3-ciklobutil-N-(trifluoroacetil)-D-alanil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid [88 (DIAST-1) i 89 (DIAST-2)].
[0409] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 5 mL, 20 mmol) dodat je u kapima u rastvor na 0 °C C73 (106 mg, 0.199 mmol) u dihlorometanu (5 mL). Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 15 minuta, a zatim na 25 °C tokom 2 sata, nakon čega je koncentrovana in vacuo da obezbedi materijal sa deprotekcijom kao belu čvrstu supstancu: LCMS m/z 434.2 [M+H]<+>. Ovo je rastvoreno u dihlorometanu (3 mL), ohlađeno u ledenom kupatilu i tretirano piridinom (79.9 mg, 1.01 mmol) i rastvorom trifluorosirćetnog anhidrida (170 mg, 0.809 mmol) u dihlorometanu (1.5 mL). Reakciona smeša je mešana na 20°C tokom 20 sati; Zatim je dodat piridin (40.0 mg, 0.506 mmol) i mešanje je nastavljeno još 12 sati na 25 °C. Posle razblaživanja dihlorometanom (15 mL), reakciona smeša je isprana uzastopno hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 10 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (3 x 10 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL), osušena, filtrirana i koncentrovana in vacuo. Hromatografiju na silika gelu (Gradijent: 0% do 20% metanola u dihlorometanu) pratila je superkritična tečna hromatografija [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak IC, 30 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza: 3:1 ugljen-dioksid / (metanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida); Brzina protoka: 70 mL/min], dajući odvojene dijastereomere (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[3-ciklobutil-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid i (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil-3-[3-ciklobutil-N-(trifluoroacetil)-D-alanil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid. Koji materijal sadrži D-alanil konfiguraciju, a koji L-alanil konfiguraciju nije utvrđeno; dijastereomer koji se prvi eluira je označen kao 88, a dijastereomer koji se drugi eluira je označen kao 89. Oba su dobijena kao bela čvrsta supstanca.
[0410] 88 - Prinos: 9.3 mg, 18.2 µmol, 9% u 2 koraka. LCMS m/z 512.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.75 (br d, J = 7.0 Hz, 1H), 8.96 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 5.00 - 4.90 (m, 1H), 4.32 - 4.23 (m, 1H), 4.13 (s, 1H) , 3.82 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.2, 5.4 Hz, 1H), 3.69 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.2 Hz, 1H), 3.20 - 3.02 (m, 2H), 2.44 - 2.28 ( m, 2H), 2.16 - 2.04 (m, 2H), 2.04 - 1.91 (m, 2H), 1.87 - 1.54 (m, 9H), 1.32 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.03 (s, 3H), 0.88 (s, 3H). Retenciono vreme: 2.78 minuta (Analitički uslovi.
1 4
Kolona: Chiral Technologies Chiralpak IC-3, 4.6 x 150 mm, 3 µm; Mobilna faza A: ugljendioksid; Mobilna faza B: metanol koji sadrži 0.05% dietilamina (zapr/zapr); Gradijent: 5% do 40% B tokom 5 minuta, zatim 40% B tokom 2.5 minuta; Povratni pritisak: 1500 psi; Brzina protoka: 2.5 mL/min).
[0411] 89 - Prinos: 23 mg, 45.0 mmol, 23% u 2 koraka.<1>H NMR analiza je pokazala da ovaj materijal postoji kao mešavina rotamera. LCMS m/z 512.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ [9.92 br (s) i 9.65 (br s), ukupno 1H], [9.22 (d, J = 7.7 Hz) i 8.85 (d, J = 8.4 Hz), ukupno 1H], [7.76 (s) i 7.67 (s), ukupno 1H], [5.11 - 5.00 (m) i 4.98 - 4.87 (m), ukupno 1H], [4.51 (s) i 4.07 (s), ukupno 1H], [4.47 - 4.36 (m) i 4.09 - 4.00 (m), ukupno 1H], [3.90 (dd, J = 10.2, 5.3 Hz) i 3.60 - 3.45 (m), ukupno 2H] , 3.21 - 3.00 (m, 2H), 2.44 - 2.33 (m, 1H), 2.28 - 1.98 (m, 3H), 1.98 - 1.52 (m, 10H), [1.49 - 1.38 (m) i 1.32 (d) AB kvarteta, J = 7.6 Hz), ukupno 2H], [1.04 (s) i 1.02 (s), ukupno 3H], [0.93 (s) i 0.82 (s), ukupno 3H]. Retenciono vreme: 4.14 minuta (analitički uslovi identični onima korišćenim za 88).
Primer 90 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-(piridin-2-il)-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (90)
[0412]
Korak 1. Sinteza terc-butil [(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan -2-il}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-1-
1
okso-3-(piridin-2-il)propan-2-il]karbamat (C74).
[0413] Rastvoru C67 (250 mg, 0.618 mmol) i N-(terc-butoksikarbonil)-3-piridin-2-il-L-alanina (198 mg, 0.744 mmol) u N,N-dimetilformamid (2 mL) na 0 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 282 mg, 0.742 mmol), nakon čega sledi dodavanje u kapima rastvora 4-metilmorfolina (188 mg, 1.86 mmol) u N,N-dimetilformamid (1 mL). Reakciona smeša je zatim zagrejana do 20 °C i mešana 2 sata, nakon čega je razblažena vodom (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (10 mL). Čvrsti natrijum sulfat je dodat u vodeni sloj dok nije postignuto zasićenje, nakon čega je vodeni sloj ekstrahovan smešom dihlorometana i metanola (10:1, 3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i prečišćeni hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu), dajući C74 kao žutu gumu. Prinos: 250 mg, 0.449 mmol, 73%. LCMS m/z 557.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4), karakteristični pikovi: δ 8.49 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.78 - 7.71 (m, 1H), 7.35 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.30 - 7.25 (m, 1H), 4.73 ( dd, J = 8.5, 5.2 Hz, 1H), 4.40 (dd, J = 11.8, 4.2 Hz, 1H), 4.30 (s, 1H), 4.01 - 3.90 (m, 1H), 3.26 (dd, J = 14.2, 5.6 Hz, 1H), 2.94 (dd, J = 14.1, 8.9 Hz, 1H), 2.65 - 2.53 (m, 1H), 2.37 - 2.25 (m, 1H), 2.14 - 2.04 (m, 1H), 1.91 -1.78 (m, 2H), 1.51 - 1.51 - m , 1H), 1.53 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.34 (s, 9H), 1.08 (s, 3H), 1.00 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza hidrohloridne soli (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-[3-(piridin-2-il)-L-alanil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan -2-karboksamida (C75).
[0414] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 6 mL) je dodat u rastvor na 0 °C C74 (250 mg, 0.449 mmol) u dihlorometanu (2 mL), i reakciona smeša je mešana 5 sati na 20 °C. LCMS analiza je pokazala konverziju u C75: LCMS m/z 457.1 [M+H]<+>. Uklanjanje rastvarača in vacuo dalo je C75 kao žutu čvrstu supstancu (250 mg); deo ovog materijala je direktno korišćen u sledećem koraku.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 8.81 (br d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.43 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.39 - 8.31 (m, 1H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.87 - 7.81 (m, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 4.77 - 4.67 (m, 1H), 4.35 ( s, 1H), 4.32 - 4.23 (m, 1H), 3.94 - 3.86 (m, 1H), 3.80 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.6 Hz, 1H), 3.36 - 3.25 (m, 1H), 3.20 - 3.08 (m, 2H), 2.35 - 2.23 (m, 1H), 2.17 - 2.06 (m, 1H), 2.01 - 1.90 (m, 1H), 1.55 -1.48 (m, 1H), 1.43 (d, polovina od AB kvartet, J = 7.6 Hz, IH), 1.04 (s, 3H), 0.96 (s, 3H).
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-
1
3-[3-(piridin-2-il)-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (90).
[0415] Rastvoru C75 (iz prethodnog koraka; 175 mg, ≤0.314 mmol) u dihlorometanu (6 mL) na 0 °C dodat je piridin (197 mg, 2.49 mmol), a zatim rastvor trifluorosirćetnog anhidrida (186 mg, 0.886 mmol) u dihlorometanu (2L) . Nakon što je reakciona smeša mešana na 20 °C tokom 2 sata, razblažena je vodom i ekstrahovana smešom dihlorometana i metanola (10:1, 3 x 15 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i podvrgnut hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu), nakon čega sledi superkritična tečna hromatografija [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AS, 30 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza: 3:1 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida); Brzina protoka: 70 mL/min], da bi se priuštilo (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-(piridin-2-il)-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (90) kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 25 mg, 46.8 µmol, 15% u 2 koraka. LCMS m/z 535.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.92 (d, J = 7.5 Hz, IH), 8.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.51 (br d, J = 5 Hz, 1H), 7.75 - 7.68 (m, 2H), 7.28 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.25 (dd, J = 7.3, 5.1 Hz, 1H), 5.00 - 4.88 (m, 2H), 4.15 (s, 1H), 3.86 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.3, 5.4 Hz, 1H), 3.70 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.3 Hz, 1H), 3.21 - 3.04 (m, 4H), 2.42 - 2.31 (m, 1H), 2.18 - 2.04 (m, 2H), 1.76 (ddd, J = 13.5, 9.6, 1H), Hz, Hz 1.74 - 1.62 (m, 1H), 1.62 - 1.53 (m, 1H), 1.33 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.03 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Primer 91 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-{N-[(4-fluorofenoksi)acetil]-3-metil-L-valil}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (91)
[0416]
1
Korak 1. Sinteza terc-butil {(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan -2-il}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-3.3-dimetil-1-oksobutan-2-il}karbamata (C76).
[0417] Rastvor C32 (15.4 g, 41.8 mmol) i C16, HCl soli (75%, 11.6 g, 41.9 mmol) u N,N-dimetilformamidu (380 mL) je ohlađe na -5 °C do 0 °C. Ovome je dodato O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 18.3 g, 48.1 mmol) i 4-
1
metilmorfolin (12.7 g, 126 mmol) na -5 °C do 0 °C. Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom 1.5 sata, sipana je u ledenu vodu (400 mL), i dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom (3 x 200 mL). Kombinovani organski slojevi su uzastopno isprani vodenim rastvorom limunske kiseline (1 M; 120 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (120 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (3 k 60 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i kombinovani sa sirovim proizvodom iz slične reakcije izvedene korišćenjem C32 (1.08 g, 2.93 mmol). Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu) obezbedila je C76 kao belu čvrstu supstancu (9.80 g). Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani smešom hloroforma i 2-propanola (4:1, 3 x 100 mL); koncentrovanje ovih kombinovanih ekstrakata je praćena hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu) da bi se dobilo dodatno C76 kao bela čvrsta supstanca (2.3 g). Kombinovani prinos: 12.1 g, 23.2 mmol, 52%. LCMS m/z 522.5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 58.28 (br d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.20 (br s, 1H), 5.71 (br s, 1H), 5.38 (br s, 1H), 5.10 (br s, 1H) br d, J = 10.3 Hz, 1H), 4.47 - 4.38 (m, 1H), 4.28 - 4.20 (m, 2H), 4.12 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.2, 4.0 Hz, 1H), 3.99 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.2 Hz, 1H), 3.40 - 3.33 (m, 2H), 2.53 - 2.35 (m, 2H), 2.17 - 2.07 (m, 2H), 2.17 - 2.07 (m, 2H), 3.40 - 3.33 (m, 2H), 1H), 2.00 - 1.81 (m, 2H), 1.52 - 1.4 (m, 2H, pretpostavljeno; u velikoj meri prikriveno pikom vode i terc-butil signalom), 1.39 (s, 9H), 1.02 (s, 3H), 1.01 ( s, 9H), 0.88 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza hidrohloridne soli (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-(3-metil-L-valil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C77).
[0418] Rastvoru C76 (12.1 g, 23.2 mmol) u dihlorometanu (50 mL) na 0 °C dodat je rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 250 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 20 °C tokom 2 sata, filtrirana je. Filter kolač je mešan sa metil terc-butil etrom (250 mL) tokom 18 sati; pružena filtracija C77 kao svetlo-žuta/bela čvrsta supstanca (10.89 g). LCMS m/z 422.2 [M+H]<+>.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.38 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 8.19 (br s, 3H), 7.57 (br s, 1H), 7.41 (br s, 1H), 7.04 (br s, 1H), 4.35 - 4.27 (m, 1H), 4.34 ( s, 1H), 3.85 - 3.72 (m, 2H), 3.65 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.8 Hz, 1H), 3.16 - 3.09 (m, 1H), 3.05 - 2.95 (m, 1H), 2.43 - 2.31 (m, 1H), 2.17 - 2.04 (m, 1H), 2.00 - 1.89 (m, 1H), 1.71-1.42 (m, 3H), 1.38 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.02 (s, 3H), 1.02 (s, 9H), 0.97 (s, 3H).
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-
1
il}-3-[N-(hloroacetil)-3-metil-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C78).
[0419] Trietilamin (2.21 g, 21.8 mmol) je dodat u rastvor na 0 °C C77 (iz prethodnog koraka; 2.50 g, ≤5.33 mmol) u dihlorometanu (100 mL). Rastvor hloracetil hlorida (1.23 g, 10.9 mmol) u dihlorometanu (9 mL) je dodat u kap po kap u reakcionu smešu i mešanje je nastavljeno na 0 °C tokom 1 sata. Zatim je dodata voda (50 mL) i dobijena smeša je ekstrahovana smešom hloroforma i 2-propanola (4:1, 3 x 50 mL); kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (50 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu) dalo je C78 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 1.21 g, 2.43 mmol, 46% u 2 koraka. LCMS m/z 498.1 (uočen obrazac izotopa hlora) [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.30 - 8.22 (m, 2H), 7.54 (br s, 1H), 7.30 (br s, 1H), 7.03 (br s, 1H), 4.35 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.29 (ddd , J = 12.1, 8.7, 3.4 Hz, 1H), 4.24 (s, 1H), 4.11 (AB kvartet, JAB= 12.4 Hz, ΔvAB= 14.3 Hz, 2H), 3.86 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.2, 5.4 Hz, 1H), 3.72 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.3 Hz, 1H), 3.18 - 3.08 (m, 1H) ), 3.07 - 2.97 (m, 1H), 2.48 - 2.36 (m, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 1.99 - 1.88 (m, 1H), 1.69 - 1.43 (m, 3H), 1.37 , polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.01 (s, 3H), 0.94 (s, 9H), 0.84 (s, 3H).
Korak 4. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-3-{N-[(4-fluorofenoksi)acetil]-3-metil-L-valil}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C79).
[0420] 4-Fluorofenol (49.5 mg, 0.442 mmol) je dodat u smešu cezijum fluorida (67.1 mg, 0.442 mmol) u N,N-dimetilformamid (3 mL), i smeša je mešana na 65 °C 1 sat, nakon čega je dodat C78 (110.0 mg, 0.221 mmol) i reakciona smeša je mešana na 65 °C tokom 8 sati. Zatim je kombinovan sa sličnom reakcijom koja je izvedena korišćenjem C78 (30 mg, 60 umol), sipana u vodu (10 mL) i ekstrahovana etil acetatom (3 k 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno vodom (20 mL), hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 10 mL), zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (10 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu) dala je C79 kao belo staklo. Kombinovani prinos: 100 mg, 0.174 mmol, 62%. LCMS m/z 574.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.23 (br d, J = 6 Hz, 1 H), 7.19 (br s, 1 H), 7.04 (br d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.99 (dd, J = 9.2, 8.0 Hz, 2H), 6.85 (dd, komponenta ABX sistema, J = 9.1, 4.2 Hz, 2H), 5.78 (br s, 1H), 5.46 ( br s, 1H), 4.65
2
(d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 3H), 4.22 (s, 1H), 4.14 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.3, 5.3 Hz, 1H), 3.93 (d, polovina AB kvarteta , J = 10.3 Hz, 1H), 3.41 - 3.32 (m, 2H), 2.55 -2.34 (m, 2H), 2.14 - 2.05 (m, 1H), 2.03 - 1.80 (m, 3H), 1.03 (s, 1H) ), 1.00 (s, 9H), 0.86 (s, 3H).
Korak 5. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-{N-[(4-fluorofenoksi)acetil]-3-metil-L-valil}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (91).
[0421] Rastvor metila N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 125 mg, 0.524 mmol) u dihlorometanu (2 mL) je dodavan u kapima u rastvor od 10 °C (sobna temperatura) C79 (100 mg, 0.174 mmol) u dihlorometanu (4 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na 10 °C tokom 16 sati, razblažena je vodom (10 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (3 x 10 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 k 10 mL) i koncentrovani in vacuo; hromatografija na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu), praćena superkritičnom tečnom hromatografijom [Kolona: Chiral Technologies Chiralcel OD, 30 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza: 4:1 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida); Brzina protoka: 60 mL/min], dobijen je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-{N-[(4-fluorofenoksi)acetil]-3-metil-L-valil}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (91) kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 55 mg, 99.0 umol, 57%. LCMS m/z 556.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.01 (d, J = 8.5 Hz, IH), 7.96 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.13 - 7.04 (m, 2H), 6.90 - 6.84 (m, 2H), 4.97 (ddd, J = 10.9, 8.5, 5.1 Hz, 1H), 4.61 - 4.50 (m, 2H), 4.39 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.87 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.4, 5.5 Hz, 1H), 3.73 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 3.19 - 3.09 (m, 1H), 3.09 - 2.99 (m, 1H), 2.47 - 2.36 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično prikriveno pikom rastvarača), 2.21 - 2.02 (m , 1.79 - 1.65 (m, 2H), 1.53 (dd, J = 7.6, 5.4 Hz, 1H), 1.29 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.00 (s, 3H), 0.93 ( s, 9H), 0.75 (s, 3H).
Primer 92 (samo kao referentni)
3-metil-N-[(4-metilfenil)acetil]-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid (92)
[0422]
2 1
[0423] Smeša C51 (68.0 mg, 0.12 mmol) i rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 1 mL, 4 mmol) je mešano na sobnoj temperaturi 5 minuta, nakon čega je reakciona smeša koncentrovana in vacuo da se ukloni rastvarač, a zatim dalje evakuiše korišćenjem visokog vakuuma da bi se eliminisao rezidualni hlorovodonik. Ostatku je dodata (4-metilfenil)sirćetna kiselina (18.6 mg, 0.124 mmol); dobijena smeša je rastvorena u N,N-dimetilformamid (1.0 mL) i ohlađena na -30 °C. Nakon dodavanja od N,N-diizopropiletilamin (64.7 µL, 0.371 mmol), praćen O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 61.2 mg, 0.161 mmol), reakciona smeša je zagrevana do sobne temperature tokom 1 sata i zatim tretirana vodenim rastvorom natrijum bikarbonata. Smeša je ekstrahovana 5 puta etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je zatim rastvoren u dihlorometanu (1 mL), tretiran metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 88.5 mg, 0.371 mmol), i mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, nakon čega je reakciona smeša tretirana sa razblaženim vodenim rastvorom natrijum karbonata i ekstrahovana dva puta etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i prečišćeni pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Waters XBridge C18, 19 k 100 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda; Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 20% do 60% B tokom 8.5 minuta, zatim 60% do 95% B tokom 0.5 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 25 mL/min) da se dobije 3-metil-N-[(4-metilfenil)acetil]-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid (92).
Prinos: 20.7 mg, 36.7 umol, 31%. LCMS m/z 564.8 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.71 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis dC18, 4.6 k 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline zapr/zapr); Gradijent: 5.0% do 95% B, linearno tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min).
2 2
Primer 93 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-(1H-pirazol-1-il)-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (93)
[0424]
Korak 1. Sinteza hidrohloridne soli (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C67, HCl so).
[0425] U rastvor C66 (9.97 g, 24.4 mmol) u dihlorometanu (50 mL) dodat je rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 90 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi (25 °C) tokom 2 sata, nakon čega je LCMS analiza pokazala konverziju u C67: LCMS m/z 309.0
2
[M+H]<+>. Koncetrovanje in vacuo dala je C67, HCl so kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 8.10 g, 23.5 mmol, 96%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.20 - 10.08 (m, 1H), 8.93 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.86 - 8.71 (m, 1H), 7.68 (br s, 1H), 7.63 (br s, 1H), 7.12 (br s, 1H), 4.30 (ddd, J = 10.9, 8.1, 4.1 Hz, 1H), 4.09 - 4.02 (m, 1H), 3.63 - 3.53 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 3.22 - 2.99 (m, 3H -), 2.22 (m, 3H -). m, 1H), 2.21 - 2.11 (m, 1H), 2.01 (ddd, J = 13.6, 11.1, 3.6 Hz, 1H), 1.80 - 1.66 (m, 3H), 1.55 (ddd, J = 13.6, 11.4, 4.1 Hz, IH), 1.08 (s, 3H), 1.05 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza terc-butil [(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan -2-il}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-1-okso-3-(1H-pirazol-1-il)propan-2-il]karbamata (C80).
[0426] Rastvor C67, HCl so (300 mg, 0.870 mmol) i N-(terc-butoksikarbonil)-3-(1H-pirazol-1-il)-L-alanin (222 mg, 0.870 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 mL) na 0 °C je tretiran sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 430 mg, 1.13 mmol) i 4-metilmorfolin (264 mg, 2.61 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom 2 sata, razblažena je vodom (50 mL) i ekstrahovana etil acetatom (20 mL). Vodeni sloj je zatim zasićen dodavanjem čvrstog natrijum sulfata i ekstrahovan smešom dihlorometana i metanola (10:1, 4 x 30 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i dva puta podvrgnut hromatografiji na silika gelu (Gradijent #1: 0% do 10% metanola u dihlorometanu; Gradijent #2: 0% do 25% metanola u dihlorometanu), dajući C80 kao žuta čvrsta supstanca. Prinos: 340 mg, 0.623 mmol, 72%. LCMS m/z 546.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6) δ 8.29 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.70 - 7.66 (m, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.51 (br s, 1H), 7.38 (br d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.15 - 7.06 (m, 2H), 6.23 - 6.19 (m, 1H), 4.53 - 4.43 (m, 1H), 4.34 - 4.18 (m, 3H), 4.17 (s, 1H), 3.76 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.5 Hz, 1H), 3.65 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.4, 5.4 Hz, 1H), 3.20 - 3.06 (m, 2H), 2.36 - 2.24 (m, 1H), 2.19 - 2.08 (m, 1H), 2.02 - 1.90 (m, 1H), 1.71 - 1.55 (m, 2H), 1.53 - 1.46 (m, 1H), 1.39 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.30 (s , 9H), 1.01 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Korak 3. Sinteza hidrohloridne soli (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-[3-(1H-pirazol-1-il)-L-alanil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C81).
[0427] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 15 mL) je dodat u rastvor C80 (340 mg, 0.623 mmol) u dihlorometanu (4 mL) na 0 °C. Nakon što je reakciona smeša mešana na 20 °C 1
2 4
sat, filtrirana je, a filter kolač je ispran dihlorometanom (3 x 10 mL). Kombinovani filtrati su koncentrovani in vacuo da bi se obezbedio C81 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 244 mg, 0.506 mmol, 81%. LCMS m/z 446.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 8.57 - 8.48 (m, 3H), 8.42 (br d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.65 (br s, 1H), 7.58 ( d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.35 (br s, 1H), 7.09 (br s, 1H), 6.27 (dd, J = 2, 2 Hz, 1H), 4.59 (dd, komponenta ABX sistema, J = 14.4, 4.7 Hz, 1H), 4.54 - 4.41 (m, 2H), 4.36 - 4.25 (m, 1H), 4.30 (s, 1H), 3.66 - 3.60 (m, 1H), 3.42 - 3.33 (m, 1H) ), 3.21 - 3.03 (m, 2H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.18 - 2.06 (m, 1H), 1.97 (ddd, J = 13.5, 11.5, 3.7 Hz, 1H), 1.46 (dd, komponenta ABX sistema, J = 7.7, 5.3 Hz, 1H), 1.41 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.01 (s, 3H), 0.92 (s, 3H).
Korak 4. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-(1H-pirazol-1-il)-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (93).
[0428] Rastvor na C81 (120 mg, 0.249 mmol) u dihlorometanu (6.0 mL) 0 °C tretiran je piridinom (170 mg, 2.15 mmol), nakon čega je dodat rastvor trifluorosirćetnog anhidrida (158 mg, 0.752 mmol) u dihlorometanu (2.0 mL). Reakciona smeša je zatim zagrejana na 20 °C i ostavljena da se meša 3 sata, nakon čega je razblažena vodom (20 mL) i ekstrahovana dihlorometanom (3 x 20 mL). Kombinovani organski slojevi su isprani hlorovodoničnom kiselinom (1 M; 20 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (2 k 20 mL), osušeni, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Silika gel hromatografija (Gradijent: 0% do 10% metanola u dihlorometanu), praćena superkritičnom tečnom hromatografijom [Kolona: Chiral Technologies Chiralpak AD, 30 x 250 mm, 10 µm; Mobilna faza: 4:1 ugljen-dioksid / (etanol koji sadrži 0.1% amonijum hidroksida); Brzina protoka: 60 mL/min], obezbeđeno (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-(lH-pirazol-1-il)-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (93) kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 15.0 mg, 28.6 umol, 11%. LCMS m/z 524.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.03 (br s, IH), 8.92 (d, J = 8.0 Hz, IH), 7.74 (br s, IH), 7.69 (d, J = 2.3 Hz, IH), 7.51 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.23 (dd, J = 2, 2 Hz, 1H), 5.01 - 4.93 (m, 1H), 4.91 - 4.83 (m, 1H), 4.49 - 4.39 (m, 2H), 4.13 ( s, 1H), 3.73 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.4, 5.4 Hz, 1H), 3.60 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 3.21 - 3.09 (m, 2H), 2.40 - 2.31 (m, 1H), 2.20 - 2.10 (m, 2H), 1.79 (ddd, J = 13.7, 9.5, 6.8 Hz, 1H), 1.76 - 1.66 (m, 1H), 1.56 (dd, J = 7.5, 5.4 Hz, 1H), 1.36 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.02 (s, 3H), 0.85 (s, 3H).
2
Primer 94 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[(2S)-4,4-difluoro-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)butanoil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (94)
[0429]
Korak 1. Sinteza 9H-fluoren-9-ilmetil {(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3)S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-4,4-difluoro-1-oksobutan- 2-il}karbamata (C82).
[0430] Rastvoru C67 (230 mg, 0.569 mmol) i (2S)-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoksi)karbonil]amino}-4,4-difluorobutanske kiseline (247 mg, 0.684 mmol) u N,N-dimetilformamid (5 mL) na 0 °C dodat je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 281 mg, 0.739 mmol) u jednoj porciji; zatim je u kapima dodat 4-metilmorfolin (173 mg, 1.71 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom 10 minuta, zagrejana je do sobne temperature (20 °C) i mešanje je nastavljeno tokom 2 sata, nakon čega je reakciona smeša izlivena u ledenu vodu (15 mL) i ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 15 mL). Kombinovani organski slojevi su uzastopno isprani sa 1 M hlorovodoničnom kiselinom, zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i prečišćen hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 10% metanola u
2
dihlorometanu) da se dobije C82 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 245 mg, 0.376 mmol, 66%. LCMS m/z 652.5 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) 58.86 (br s, 1H), 7.74 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.58 - 7.51 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 7.4, 7.4 Hz , 2H), 7.33 - 7.25 (m, 2H, pretpostavljeno; delimično zaklonjen pikom rastvarača), 7.08 (br s, 1H), 6.49 - 6.32 (m, 1H), 6.17 - 5.79 (m, 3H), 4.78 - 4.78 - 4 (m, 1H), 4.41 - 4.24 (m, 4H), 4.22 - 4.07 (m, 2H), 3.83 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 3.45 - 3.32 (m, 2H), 2.62 - 2.36 (m, 3H), 2.26 - 2.10 (m, 2H), 1.99 - 1.83 (m, 2H), 1.53 (d, polovina AB kvartet, J = 7.6 Hz, IH), 1.51 - 1.44 (m, IH), 1.03 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza (1R,2S,5S)-3-[(2S)-2-amino-4,4-difluorobutanoil]-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida (C83).
[0431] Suspenziji C82 (195 mg, 0.299 mmol) u dihlorometanu (3 mL) na 0 °C dodat je rastvor dietilamina (32.8 mg, 0.448 mmol) u dihlorometanu (0.5 mL). Reakciona smeša je mešana na 30 °C tokom 16 sati, nakon čega je kombinovana sa sličnom reakcijom izvedenom korišćenjem C82 (50 mg, 77 µmol) i koncentrovana in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu [Gradijent: 0% do 10% (10:1 smeša metanola i amonijum hidroksida) u dihlorometanu] dalo je C83 kao bezbojnu gumu. Kombinovani prinos: 149 mg, 0.347 mmol, 92%. LCMS m/z 452.3 [M+Na<+>].<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.73 (br d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.11 (br s, 1H), 6.03 (tdd, J = 56.8, 6.2, 3.0 Hz, 1H), 5.64 (br s, 1H), 5.28 (br s, 1H), 4.35 - 4.27 (m, 1H), 4.27 (s, 1H), 4.11 (dd, J = 10.3, 5.5 Hz, 1H), 3.72 (dd, J = 9.3, 4.1 Hz, 1H), 3.61 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 3.41 -3.35 (m, 2H), 2.53 - 2.36 (m, 3H), 2.20 - 2.11 (m, 1H), 2.00 - 1.84 (m, 3H), 1.6 - 1.25 (m, 1H) , pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 1.06 (s, 3H), 0.94 (s, 3H).
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[(2S)-4,4-difluoro-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)butanoil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[ 3.1.0]heksan-2-karboksamida (94).
[0432] Rastvoru C83 (99 mg, 0.23 mmol) u dihlorometanu (4 mL) na 0 °C dodati su piridin (146 mg, 1.85 mmol) i rastvor trifluorosirćetnog anhidrida (194 mg, 0.924 mmol) u dihlorometanu (2 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi (15 °C) tokom 20 sati, tretirana sa dodatnim piridinom (30 mg, 0.38 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi (15 °C) još 16 sati. Zatim je podeljen između dihlorometana (15 mL) i hlorovodonične kiseline (1 M; 15 mL), a organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (15 mL) i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida (10 mL), osušen , filtriran i koncentrovan in vacuo. Ostatak
2
je kombinovan sa proizvodom iz slične reakcije koja je izvedena korišćenjem C83 (50 mg, 0.12 mmol) i prečišćen korišćenjem HPLC reverzne faze (kolona: Waters XBridge BEH C18, 25 x 150 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% amonijum hidroksida (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril; Gradijent: 23% do 63% B). (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-3-[(2S)-4,4-difluoro-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)butanoil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (94) je izolovan kao bela čvrsta supstanca. Kombinovani prinos: 28.8 mg, 56.8 umol, 16%. LCMS m/z 508.0 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSOd6) δ 10.01 (br s, IH), 8.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.72 (s, IH), 6.16 (tt, J = 55.9, 4.6 Hz, 1H), 4.99 - 4.90 (m, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.14 (s, 1H), 3.85 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.2, 5.4 Hz, 1H), 3.67 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.3 Hz, 1H), 3.21 - 3.04 (m, 2H), 2.42 - 2.19 (m, 3H), 2.17 - 2.04 (m, 2H), 1.83 - 1.64 (m, 2H), 1.60 (dd, J = 7.6, 5.3 Hz, IH), 1.35 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.6 Hz, 1H), 1.03 (s, 3H), 0.89 (s, 3H).
Primer 95
N-(Metoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid (95)
[0433]
2
Korak 1. Sinteza (4R)-1-(terc-butoksikarbonil)-4-(trifluorometil)-L-prolil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C50).
[0434] N,N-Diizopropiletilamin (14.8 mL, 85.0 mmol) je dodat u smešu (4R)-1-(tercbutoksikarbonil)-4-(trifluorometil)-L-prolin (8.00 g, 28.2 mmol), C16, HCl so (6.45 g, 31.1 mmol), i O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfata (HATU; 11.8 g, 31.0 mmol) u N,N-dimetilformamidu (100 mL) na -30 °C. Reakciona smeša je ostavljena
2
da se zagreje na 0 °C tokom 1 sata, nakon čega je LCMS analiza pokazala prisustvo C50: LCMS m/z 437.3 [M+H]<+>. Dodat je vodeni rastvor natrijum bikarbonata (300 mL), i dobijena smeša je ekstrahovana smešom 2-propanola i dihlorometana (1:4, 5 k 100 mL); kombinovani organski slojevi su koncentrovani in vacuo i prečišćeni hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 100% metanola u dihlorometanu), dajući C50 kao ulje.<1>H NMR analiza je pokazala da ovaj materijal postoji kao mešavina rotamera. Prinos: 10.9 g, 25.0 mmol, 89%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ [8.28 (d, J = 8.5 Hz) i 8.22 (d, J = 8.2 Hz), ukupno 1H], [7.64 (s) i 7.59 (s), ukupno 1H], [7.38 (br s) i 7.27 (br s), ukupno 1H], 7.05 (br s, 1H), 4.38 - 4.28 (m, 1H), 4.28 - 4.17 (m, 1H), 3.45 - 3.36 (m, 1H), 3.12 - 3.00 (m, 1H), 2.42-2.03 (m, 4H), 2.02-1.89 (m, 1H), 1.80-1.45 (m, 2H), [1.39 (s) i 1.32 (s), ukupno 9H].
Korak 2. Sinteza N-(terc-butoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-4-(trifluorometil)-L-prolil-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]-L-alaninamida (C51).
[0435] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 80 mL) je dodat u rastvor C50 (7.00 g, 16.0 mmol) u dihlorometanu (15 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 5 minuta, koncentrovana je in vacuo da se ukloni rastvarač, i dalje evakuiše preko visokog vakuuma da bi se eliminisao rezidualni hlorovodonik. Ostatak je pomešan sa N-(tercbutoksikarbonil)-3-metil-L-valinom (4.08 g, 17.6 mmol) i O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU; 6.71 g, 17.6 mmol) u N,N-dimetilformamid (25 mL), ohlađen na -30 °C, i tretiran sa N,N-diizopropiletilamin (8.38 mL, 48.1 mmol). Reakciona smeša je ostavljena da se zagreje na 0 °C tokom 1 sata, nakon čega je LCMS analiza pokazala prisustvo C51: LCMS m/z 550.4 [M+H]<+>. Reakciona smeša je zatim razblažena vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana tri puta sa 4:1 smešom dihlorometana i 2-propanola. Nakon što su kombinovani organski slojevi koncentrovani in vacuo, ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 30% metanola u dihlorometanu), dajući C51 kao čvrsta. Prinos: 3.95 g, 7.19 mmol, 45%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 8.28 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.29 (br s, 1H), 7.03 (br s, 1H), 6.77 (br d, J = 9.1 Hz , 1H), 4.52 - 4.43 (m, 1H), 4.24 (ddd, J = 12.2, 8.7, 3.5 Hz, 1H), 4.12 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 4.02 - 3.84 (m, 2H), 3.16 - 3.08 (m, 1H), 3.08 - 2.98 (m, 1H), 2.50 - 2.37 (m, 1H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.19 - 2.05 (m, 2H), 1.870 - m , IH), 1.69-1.55 (m, IH), 1.55-1.44 (m, IH), 1.36 (s, 9H), 0.93 (s, 9H).
Korak 3. Sinteza od N-(metoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid (95).
21
[0436] Smeša C51 (230 mg, 0.418 mmol) i rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 2 mL, 8 mmol) je mešan na sobnoj temperaturi 5 minuta, nakon čega je reakciona smeša koncentrovana in vacuo da se ukloni rastvarač, a zatim dalje evakuiše korišćenjem visokog vakuuma da bi se eliminisao rezidualni hlorovodonik. Ostatak je rastvoren u dihlorometanu (2 mL), ohlađen na 0 °C i tretiran sa N,N-diizopropiletilaminom (0.219 mL, 1.26 mmol) a zatim metil hloroformatom (59.3 mg, 0.628 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0°C tokom 10 minuta, razblažena je vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i ekstrahovana tri puta sa 4:1 smešom dihlorometana i 2-propanola; kombinovani organski slojevi su sušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Ostatak je rastvoren u dihlorometanu (3 mL); posle dodavanja metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamata, unutrašnja so (Burgess reagens; 299 mg, 1.25 mmol), reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Zatim je tretiran razblaženim vodenim rastvorom natrijum karbonata i ekstrahovan 3 puta etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i prečišćeni hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 50% do 100% etil acetata u heptanu). Dobijeni materijal je suspendovan u heptanu (4 mL) na 50 °C tokom 2 sata, ohlađen na sobnu temperaturu i mešan na sobnoj temperaturi preko noći; sakupljanje čvrstih supstanci obezbedilo je N-(metoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid (95) kao čvrstu supstancu. Prinos: 123 mg, 0.251 mmol, 60%. LCMS m/z 490.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.27 (br d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.94 (ddd, J = 11.1, 8.5, 5.0 Hz, 1H), 4.36 (dd, J = 7.3, 7.2 Hz, 1H), 4.14 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.00 - 3.91 (m, 2H), 3.52 (s, 3H), 3.46 - 3.34 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom vode), 3.18 -2.98 (m, 2H), 2.5 - 2.39 (m, 1H, pretpostavljeno; delimično zaklonjeno pikom rastvarača), 2.35 -2. m, 1H), 2.22-2.01 (m, 3H), 1.77-1.63 (m, 2H), 0.94 (s, 9H).
Primer 96
(1R,2S,5S)-N-{(1R)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (96) i (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13), čvrsti oblik 5
[0437]
[0438] U rastvor 13, metil terc-butil etar solvata (iz Alternativne sinteze Primera 13, solvat metil terc-butil etra; 15.0 g, 25.5 mmol) u acetonitrilu (80 mL) dodata je metansulfonska kiselina (6.4 mL, 99 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata, nakon čega je zalužena dodavanjem smeše zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata (80 mL) i zasićenog vodenog rastvora natrijum hlorida (10 mL). Dobijena smeša je ekstrahovana dihlorometanom (2 x 100 mL), a kombinovani organski slojevi su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Razdvajanje dva epimera izvršeno je hromatografijom superkritične tečnosti (Kolona: Chiral Technologies Chiralcel OKS-H, 30 x 250 mm, 5 µm; Mobilna faza: 9:1 ugljen-dioksid / 2-propanol; Povratni pritisak: 100 bara; Brzina protoka: 80 mL/min). Materijal koji je prvi eluirao je dao (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (13). Analizom difrakcije rendgenskih zraka praha, ovaj materijal je bio amorfan; ovo je označeno kao čvrsti oblik 5. Materijal drugog eluiranja je dobijen kao staklo, koje je rastvoreno u dihlorometanu, tretirano heptanom i koncentrovano in vacuo da bi se dobio (1R,2S,5S)-N-{(1R)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (96) kao čvrsta supstanca.
[0439] Rekuperovano 13 - Prinos: 6.00 g, 12.0 mmol, 47%. LCMS m/z 500.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.46 - 9.33 (m, IH), 9.01 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 5.03-4.91 (m, 1H), 4.46-4.37 (m, 1H), 4.16 (s, 1H), 3.97-3.86 (m, 1H), 3.69 ( d, polovina AB kvarteta, J = 10.4 Hz, 1H), 3.19 - 3.09 (m, 1H), 3.09 - 2.98 (m, 1H), 2.46 - 2.33 (m, 1H), 2.21 - 2.03 (m, 2H), 1.79 - 1.25 (m, 1H) ), 1.61-1.53 (m, 1H), 1.32 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.03 (s, 3H), 0.98 (s, 9H), 0.85 (s, 3H). Retenciono vreme: 3.93 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Chiral Technologies Chiralcel OKS-H, 4.6 k 250 mm, 5 µm; Mobilna faza A: ugljen-dioksid; Mobilna faza B: 2-propanol; Gradijent: 5% B tokom 1.00 minuta, zatim 5% do 60% B tokom 8.00 minuta; Povratni pritisak: 120 bara; Brzina protoka: 3.0 mL/min). Difrakcija rendgenskih zraka praha za ovaj amorfni materijal je data na slici 9. Metoda prikupljanja podataka difrakcije rendgenskih zraka praha je opisana u alternativnoj sintezi Primera 13, solvat metil terc-butil etra, korak 8.
[0440] 96 - Prinos: 2.58 g, 5.16 mmol, 20%. LCMS m/z 500.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 9.06 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 4.96 - 4.86 (m, 1H), 4.41 (d, J = 8.7 Hz , 1H), 4.20 (s, 1H), 3.92 (br dd, J = 10.7, 5.4 Hz, 1H), 3.66 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.5 Hz, 1H), 3.22 - 3.12 (m, 2H), 2.43 - 2.31 (m, 1H), 2.31 - 2.20 (m, 1H), 2.16 -2.04 (m, 1H), 1.84 - 1.23 (m, 1H) ), 1.57-1.49 (m, 1H), 1.32 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.00 (br s, 12H), 0.84 (s, 3H). Retenciono vreme: 4.20 minuta (analitički uslovi identični onima koji su korišćeni za regeneraciju 13 gore).
Primer 97 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-trifluoroacetamido)-3-(trifluorometil)pentanoil]-3-azabiciklo[3.1.0] heksan-2-karboksamid, iz C86 (DIAST-2) (97)
[0441]
21
Korak 1. Sinteza 2-[(terc-butoksikarbonil)amino]-3-(trifluorometil)pentanske kiseline (C84).
[0442] Vodeni rastvor natrijum hidroksida (1 M; 1.48 mL, 1.48 mmol) je dodat u suspenziju 2-amino-3-(trifluorometil)pentanske kiseline (Vang et al., J. Amer. Chem. Soc. 2003, 125, 6900-6906; 137 mg, 0.740 mmol) u 1,4-dioksanu (3 mL) i dobijena smeša je ohlađena na 0 °C. Diterc-butil dikarbonat (0.204 mL, 0.888 mmol) je polako dodat, nakon čega je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Posle razblaživanja etil acetatom, reakciona smeša je ohlađena u ledenom kupatilu i zatim zakiseljena do pH 2 dodavanjem 1 M vodenog rastvora kalijum hidrogen sulfata. Vodeni sloj je ekstrahovan dva puta etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo, da bi se dobilo C84 kao čvrsta supstanca. Pretpostavlja se da se ovaj materijal sastoji od mešavine 4 dijastereomera, koji potencijalno pokazuju i rotamere. Prinos: 197 mg, 0.690 mmol, 93%. LCMS m/z 284.3 [M-H]-.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.16 (br s, 1H), [7.29 (d, major, J = 9.8 Hz) i 6.95 - 6.85 (m, manji), ukupno 1H], [4.55 (dd, glavni, J = 9.8, 3.3 Hz), 4.46 (br d, minor, J = 9.1 Hz), i 4.40 (dd, manji, J = 9.4, 4.5 Hz), ukupno 1H], 2.86 - 2.67 (m, 1H), 1.71 - 1.47 (m, 2H), 1.39 (br s, 9H), [0.98 (t, minor, J = 7.4 Hz) i 0.91 (t, glavni, J = 7.5 Hz), ukupno 3H].
Korak 2. Sinteza terc-butil {1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il }karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-1-okso-3-(trifluorometil)pentan-2-il}karbamat, DIAST-1 (C85) i terc-butil {1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}karbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-3-il]-1-okso-3-(trifluorometil)pentan -2-il}karbamat, DIAST-2 (C86).
[0443] Rastvor C84 (128 mg, 0.449 mmol) u smeši acetonitrila (2.7 mL) i N,N-dimetilformamida (1.5 mL) na 0 °C je tretiran sa O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfatom (HATU; 176 mg, 0.463 mmol) i 4-metilmorfolinom (0.116 mL, 1.06 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0 °C tokom 30 minuta, C67 (170 mg, 0.420 mmol) je dodat kao čvrsta supstanca i mešanje je nastavljeno 2 sata. Reakciona smeša je zatim razblažena etil acetatom i vodom i isprana zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata. Vodeni sloj je ekstrahovan dva puta etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Dobijeno ulje je azeotropovano dva puta sa heptanom i dva puta sa metil terc-butil etrom, a zatim podvrgnuto hromatografiji na silika gelu (Gradijent: 0% do 20% metanola u dihlorometanu). Prvi dijastereomer koji se eluira je označen kao C85, a drugi dijastereomer koji se eluira je označen kao C86.
[0444] C85 (DIAST-1) - Prinos: 77.3 mg, 0.134 mmol, 32%. Ovaj materijal se sastojao od
21
mešavine izomera ili rotamera<1>H NMR analiza. LCMS m/z 576.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi, integracije su približne: δ [8.35 (d, J = 7.9 Hz) i 8.16 (d, J = 8.5 Hz), ukupno 1H], 7.62 - 7.54 (m, 1H), 7.41 - 7.18 (m, 2H), [7.02 (br s) i 6.98 (br s), ukupno 1H], 4.59 - 4.50 (m, 1H) , 4.29 - 4.13 (m, 2H), 3.89 (dd, J = 10.4, 5.4 Hz, 1H), 3.44 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.20 - 3.04 (m, 2H), 2.70 - 2.59 (m, 1H), 2.43 - 2.31 (m, 1H), 2.21 - 2.08 (m, 1H), 1.99 - 1.88 (m, 1H) ), [1.38 (s) i 1.36 (s), ukupno 9H], 1.01 (br s, 3H), 0.94 - 0.82 (m, 6H).
[0445] C86 (DIAST-2) - Prinos: 87.8 mg, 0.153 mmol, 36%. Ovaj materijal je uglavnom bio jedan izomer po<1>H NMR analizi. LCMS m/z 576.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi: δ 8.27 (d, J = 8.6 Hz, IH), 7.59 (s, IH), 7.31 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.22 (br s, 1H), 7.04 (br s, 1H), 4.55 (dd, J = 9.5, 5.9 Hz, 1H), 4.30 - 4.17 (m, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.79 (dd, komponenta ABX sistema, J = 10.1, 5.2 Hz, 1H), 3.71 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.1 Hz, 1H), 3.09 - 2.99 (m, 1H), 2.68 - 2.55 (m, 1H), 2.42 - 2.30 (m, 1H), 2.17 - 2.04 (m, 1H), 1.97 -1.86 (m, 1H) ), 1.36 (s, 9H), 1.02 (s, 3H), 0.94-0.83 (m, 6H).
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-trifluoroacetamido)-3-(trifluorometil)pentanoil]-3-azabiciklo[ 3.1.0]heksan-2-karboksamida, od C86 (DIAST-2) (C87).
[0446] Rastvor C86 (DIAST-2) (87.8 mg, 0.153 mmol) u dihlorometanu (1 mL) je tretiran rastvorom hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 0.381 mL, 1.52 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 40 minuta, dodat je metanol (0.5 mL) da bi se poboljšala rastvorljivost. Posle još 40 minuta, dodat je rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 0.10 mL, 0.4 mmol); 30 minuta kasnije, LCMS analiza je pokazala potpuno uklanjanje zaštitne grupe: LCMS m/z 476.2 [M+H]<+>. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo i azeotropovana dva puta sa heptanom; ostatak je triturisan dva puta sa dietil etrom, suspendovan u dihlorometanu (1.2 mL) i ohlađen na 0 °C. Posle dodavanja trietilamina (42.4 µL, 0.304 mmol), a zatim trifluorosirćetnog anhidrida (47.9 µL, 0.339 mmol), reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 30 minuta, nakon čega je uklonjena iz ledenog kupatila i podeljena između vode i etil acetata. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom, a kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani, koncentrovani in vacuo, i azeotropovani dva puta sa metilom terc-butil etarom. Po<1>H NMR i LCMS analizi, ovaj materijal je sadržao smešu C87 i odgovarajući metil estar (LCMS m/z 587.4 [M+H]<+>).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični pikovi za C87: δ 8.31 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.05 (s, 1H), 3.59 (d, polovina AB kvarteta, J = 10.0 Hz, 1H), 1.97 - 1.87 (m, 1H), 1.40 (d, polovina AB
21
kvarteta, J = 7.6 Hz, IH), 1.03 (s, 3H), 0.84 (s, 3H). Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu (Gradijent: 0% do 20% metanola u dihlorometanu), praćeno azeotropovanjem dobijenog ulja sa heptanom, praćeno azeotropovanjem sa smešom dietil etra i heptana, dalo je C87 kao belu čvrstu supstancu. Prinos: 17.9 mg, 31.3 umol, 20%. LCMS m/z 572.0 [M+H]<+>.
Korak 4. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-trifluoroacetamido)-3 -(trifluorometil)pentanoil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida, od C86 (DIAST-2) (97).
[0447] Metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 18.8 mg, 78.9 µmol) je dodat u rastvor C87 (18 mg, 31 umol) u etil acetatu (0.8 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, lopaticom je dodana merica metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamata, unutrašnja so (Burgess reagens) je ponovo dodata. Mešanje je nastavljeno tokom 2 sata, nakon čega je reakciona smeša filtrirana, a filter kolač je ispran etil acetatom. Kombinovani filtrati su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, a vodeni sloj je ekstrahovan jednom etil acetatom; kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo da se obezbedi sirovi proizvod.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6), glavna komponenta: δ 9.90 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.85 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.56 (br s, 1H), 4.97 - 4.89 (m, 2H), 4.17 (s, 1H), 3.89 (dd, J = 10.1, 5.4 Hz, 1H), 3.62 (d, J = 10.1 Hz, 1H), 3.21 - 3.14 (m, 1H), 3.12 - 3.06 (m, 1H), 2.92 - 2.82 (m, 1H), 2.43 - 2.35 (m, 1H), 2.18 - 2.10 (m, 1H) ), 1.78 (ddd, J = 13.6, 9.6, 6.0 Hz, 1H), 1.75 - 1.66 (m, 2H), 1.62 - 1.55 (m, 2H), 1.35 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, 1H), 1.04 (s, 3H), 0.97 - 0.92 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 0.85 (s, 3H). Ovaj materijal je prečišćen pomoću HPLC reverzne faze (kolona: Waters Sunfire C18, 19 k 100 mm, 5 µm; Mobilna faza A: 0.05% trifluorosirćetne kiseline u vodi (zapr/zapr); Mobilna faza B: 0.05% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu (zapr/zapr); Gradijent: 5% do 95% B tokom 8.54 minuta, nakon čega sledi 95% B tokom 1.46 minuta; Brzina protoka: 25 mL/min) da se dobije (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-trifluoroacetamido)-3 -(trifluorometil)pentanoil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, od C86 (DIAST-2) (97). Prinos: 8.3 mg, 15 umol, 48%. LCMS m/z 554.6 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.72 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis dC18, 4.6 k 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline zapr/zapr); Gradijent: 5.0% do 95% B, linearno tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min).
21
Primer 98 (samo kao referentni)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-trifluoroacetamido)-3-(trifluorometil)pentanoil]-3-azabiciklo[3.1.0] heksan-2-karboksamid, iz C85 (DIAST-1) (98)
[0448]
Korak 1. Sinteza hidrohloridne soli (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-3-[2-amino-3-(trifluorometil)pentanoil]-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2- karboksamida, od C85 (DIAST-1) (C88).
[0449] Rastvor hlorovodonika u 1,4-dioksanu (4 M; 0.336 mL, 1.34 mmol) je dodat u rastvor C85 (DIAST-1) (77.3 mg, 0.134 mmol) u dihlorometanu (1 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 40 minuta, dodat je metanol (0.5 mL) da bi se poboljšala rastvorljivost. Mešanje je nastavljeno 2 sata, nakon čega je LCMS analiza pokazala da je uklanjanje zaštite završeno: LCMS m/z 476.2 [M+H]<+>. Reakciona smeša je koncentrovana in vacuo; ostatak je azeotropiran dva puta sa heptanom, zatim triturisan dva puta sa dietil etrom da se dobije C88 kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 54.5 mg, 0.106 mmol, 79%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), karakteristični glavni pikovi: δ 8.53 (br s, 3H), 8.36 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.61
21
(s, 1H), 7.28 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 4.25 (ddd, J = 10.9, 8.4, 4.5 Hz, 1H), 4.17 (s, 1H), 4.08 (dd, J = 10.5, 5.6 Hz, 1H), 2.80 - 2.68 (m, 1H), 2.37 - 2.26 (m, 1H), 2.23 - 2.13 (m, 1H), 2.05 -1.96 (m, 1H), 1.713 - m , 5H), 1.44 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, IH), 1.04 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Korak 2. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-okso-3-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-trifluoroacetamido)-3-(trifluorometil)pentanoil]-3-azabiciklo[ 3.1.0]heksan-2-karboksamida, od C85 (DIAST-1) (C89).
[0450] Suspenzija C88 (54.5 mg, 0.106 mmol) u dihlorometanu (1 mL) na 0 °C je tretirana sa trietilaminom (26 uL, 0.19 mmol), a zatim sa anhidridom trifluorosirćetne kiseline (19.5 uL, 29.1 mg, 0.138 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana na 0°C 1 sat i 10 minuta, dodat je anhidrid trifluorosirćetne kiseline (1 ekvivalent); 30 minuta kasnije, ponovo je dodat trifluorosirćetni anhidrid (9.4 uL, 67 umol). Mešanje je nastavljeno 45 minuta, nakon čega je LCMS analiza pokazala potpunu konverziju u C89: LCMS m/z 572.4 [M+H]<+>. Reakciona smeša je podeljena između vode i etil acetata, a vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su isprani uzastopno sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušeni preko magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo obezbediti C89. Prinos: 41.2 mg, 72.1 umol, 68%.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6), glavna komponenta, karakteristični pikovi: δ 10.04 (d, J = 9.3 Hz, IH), 8.23 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.58 (s, IH), 7.31 (br s, 1H), 7.01 (br s, 1H), 4.92 - 4.83 (m, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.95 (dd, J = 10.2, 5.5 Hz, 1H), 2.98 - 2.86 (m, 1H), 2.38 - 2.27 (m, 1H), 1.90 (ddd, J = 13.5, 11.2, 4.0 Hz, 1H), 1.39 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, IH), 1.02 (s, 3H), 0.90 (s, 3H).
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-trifluoroacetamido)-3 -(trifluorometil)pentanoil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida, od C85 (DIAST-1) (98).
[0451] Metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens; 42.7 mg, 0.179 mmol) je dodat u rastvor C89 (41.0 mg, 71.7 umol) u etil acetatu (0.8 mL). Nakon što je reakciona smeša mešana na sobnoj temperaturi 1 sat, lopaticom je dodana merica metil N-(trietilamoniosulfonil)karbamat, unutrašnja so (Burgess reagens). Mešanje je nastavljeno tokom 2 sata, nakon čega je reakciona smeša filtrirana, a kolač na filteru je ispran etil acetatom. Kombinovani filtrati su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, a vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom; kombinovani organski slojevi su isprani zasićenim vodenim
21
rastvorom natrijum hlorida, osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo da se obezbedi sirovi proizvod.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6), glavna komponenta, karakteristični pikovi: δ 10.12 (d, J = 9.1 Hz, IH), 8.99 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 4.94 (ddd, J = 9.4, 8.1, 6.5 Hz, 1H), 4.87 (dd, J = 9.0, 9.0 Hz, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.96 (dd, J = 10.2, 5.6 Hz, 1H), 3.52 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 3.18 - 3.07 (m, 2H), 2.98 - 2.88 (m, 1H), 2.40 - 2.33 (m, 1H), 1.79 - 1.52 (m, 4H), 1.61 (dd, J = 7.6, 5.5 Hz, 1H), 1.33 (d, polovina AB kvarteta, J = 7.7 Hz, IH), 1.04 (s, 3H), 0.91 - 0.86 (m, 6H).
[0452] Prečišćavanje ovog materijala putem HPLC reverzne faze (kolona: Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 µm; Mobilna faza: 0.05% trifluorosirćetne kiseline u vodi; Mobilna faza B: 0.05% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu; Gradijent: 5% do 95% B tokom 8.54 minuta, nakon čega sledi 95% B tokom 1.46 minuta; Brzina protoka: 25 mL/minuti) (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-trifluoroacetamido)-3-(trifluorometil)pentanoil]-3-azabiciklo[3.1.0] heksan-2-karboksamid, iz C85 (DIAST-1) (98).
Prinos: 4.3 mg, 7.8 umol, 11%. LCMS m/z 554.6 [M+H]<+>. Retenciono vreme: 2.80 minuta (Analitički uslovi. Kolona: Waters Atlantis dC18, 4.6 k 50 mm, 5 µm; Mobilna faza A: voda koja sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline (zapr/zapr); Mobilna faza B: acetonitril koji sadrži 0.05% trifluorosirćetne kiseline zapr/zapr); Gradijent: 5.0% do 95% B, linearno tokom 4.0 minuta, zatim 95% B tokom 1.0 minuta; Brzina protoka: 2 mL/min).
Priprema 3-terc-butil 2-metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2.3-dikarboksilata (C90)
[0453]
[0454] Ova priprema je sprovedena korišćenjem opšte procedure koju je prijavio C. Uieda i J. Werth, Angew. Chem. Int. Ed. 2018, 57, 13902-13906. Boca sa 3 grla opremljena magnetnom mešalicom, refluks kondenzatorom, termometrom i ulazom za azot napunjena je kobalt(II)
22
bromidom (0.15 ekvivalenata; 0.146 g, 0.667 mmol), (1E.1'E)-1.1'-piridin-2,6-diilbis[N-(2-tercbutilfenil)etaniminom] (<2-t-Bu>PDI; 0.15 ekvivalenata; 0.284 g, 0.667 mmol) i tetrahidrofuranom (11 mL). Gusta, zelena suspenzija je mešana preko noći na sobnoj temperaturi, pa su dodati cink (2.4 ekvivalenta; 0.70 g, 11 mmol) i cink bromid (1.1 ekvivalent; 1.1 g, 4.9 mmol). Posle mešanja tokom 15 minuta, reakciona smeša je postala ljubičasta i dodati su rastvor 1-terc-butil 2-metil (2S)-2,5-dihidro-1H pirol-1,2-dikarboksilat (1.0 ekvivalent; 1.0 g, 4.4 mmol) u tetrahidrofuranu (7.5 mL) i 2,2-dihloropropanu (2.0 ekvivalenta; 1.0 g, 8.8 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 5 dana, nakon čega je filtrirana kroz sloj dijatomejske zemlje i isprana tetrahidrofuranom (10.8 mL). Filtrat je kombinovan sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida (3.5 mL) i etil acetatom (9.5 mL); slojevi su zatim razdvojeni i vodena faza je ekstrahovana etil acetatom (8.4 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (10.5 mL), osušeni iznad magnezijum sulfata, filtrirani i koncentrovani do suva, dajući 3-terc-butil 2-metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2.3-dikarboksilat (C90) kao žuto ulje. Prinos: 0.90 g, 3.3 mmol, 75%. Od strane<1>H NMR analizom, ovaj materijal je postojao kao dva karbamatna rotamera (odnos ~3:2).<1>1H NMR (400 MHz, hloroform-d) 54.20 & 4.09 (2 s, 1H), 3.74 & 3.75 (2 s, 3H), 3.68 -3.60 (m, 1H), 3.44 & 3.38 (2 d, J = 10). Hz, 1H), 1.43 & 1.38 (2 s, 9H), 1.38 - 1.34 (m, 2H), 1.03 & 0.98 i 0.96 (3 s, 6H). ESI-MS (poz.) m/z (%) = 255.1 (12.5) [M - Me H]<+>, 214.1 (100) [M -t-Bu H]<+>, 170.2 (50) [M - Boc H]<+>.
Alternativna priprema C42
(1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilna kiselina (C42)
[0455]
Korak 1. Sinteza 3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valin (C91).
[0456] Rastvor natrijum metoksida u metanolu (25 težinskih %; 28.5 mL, 124 mmol) je dodat u rastvor 3-metil-L-valina (99%, 15 g, 113 mmol) u metanolu (30 mL). Zatim je dodat etil trifluoroacetat (130 mmol) i reakciona smeša je mešana na 40 °C dok se reakcija ne završi (približno 2.5 sata), nakon čega je ohlađena na 20 °C. Posle dodavanja hlorovodonične kiseline (1 M; 136 ml, 136 mmol), smeša je razblažena etil acetatom (150 mL) i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je dva puta ispran zasićenim vodenim rastvorom natrijum hlorida, osušen preko magnezijum sulfata i filtriran. U filtrat je dodat heptan, nakon čega je rastvor koncentrovan na 50 °C do zapremine od 5 mL/g. Ova procedura je sprovedena dva puta; posle druge destilacije, dodate su klice kristala C91 (50 mg; videti u nastavku). Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana heptanom i osušena na 40 °C da bi se dobilo C91 kao prljavo bela čvrsta supstanca. Prinos: 22.2 g, 97.7 mmol, 86%.
[0457] Prethodno korišćene klice kristala su dobijeni iz slične reakcije sprovedene korišćenjem 3-metil-L-valina; nakon toga organski sloj koji sadrži C91 je osušen preko magnezijum sulfata i filtriran, koncentrovan in vacuo da bi obezbedio čvrstu supstancu. Deo ove čvrste supstance je korišćen kao materijal za klica.
[0458] Fizičko-hemijski podaci dobijeni su na uzorcima od C91 dobijene reakcijama izvedenim na isti način. HRMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>Izračunato za C8H13F3NE3, 228.0842; Pronađeno, 228.0842. Primarni jon posmatran kao C8H11F3NNa2O3[M+Na<+>]: Izračunato, 272.0481; Pronađeno, 272.0482.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 13.05 (s, IH), 9.48 (d, J = 8.9 Hz, IH), 4.21 (d, J = 8.9 Hz, IH), 1.00 (s, 9H).<13>C NMR (150.8 MHz, DMSO-d6) δ 170.9, 156.6 (k,<2>JCF= 36<.>9 Hz), 115.8 (k,<1>JCF= 287<.>7 Hz), 61.0, 33.6, 26.5. Obrazac difrakcije rendgenskih zraka praha za C91 dat je na slici 11; karakteristični pikovi su navedeni u tabeli R.
Tabela R. Odabrani pikovi difrakcije rendgenskih zraka praha za C91
[0459] Kristal za rendgensku kristalografiju je dobijen rekristalizacijom iz etil acetata i heksana, korišćenjem kristala za zasejavanje iz iste serije kao prethodno. ORTEP dijagram monokristalnih podataka za C91 je prikazano na slici 12.
Rendgensko određivanje strukture monokristala C91
22
Monokristalna rendgenska analiza
[0460] Prikupljanje podataka je obavljeno na Bruker D8 Quest difraktometru na -100 °C. Prikupljanje podataka se sastojalo od omega i fi skeniranja.
[0461] Struktura je rešena intrinzičnim faziranjem korišćenjem SHELX softverskog paketa u grupi hiralnog prostora tetragonalne klase P41212. Struktura je naknadno rafinisana metodom najmanjih kvadrata pune matrice. Svi nevodonikovi atomi su pronađeni i rafinisani korišćenjem parametara anizotropnog pomeranja.
[0462] Atomi vodonika koji se nalaze na azotu i kiseoniku pronađeni su iz Furijeove mape razlike i rafinisani sa ograničenim rastojanjima. Vodonik na O2(H2Z) i O3(H3Z) je podeljen kao punjenje i rafinisan kao po 10.5 popunjenosti. Preostali atomi vodonika su postavljeni na izračunate pozicije i dozvoljeno im je da se kreću na svojim atomima nosačima. Završno preciziranje uključivalo je parametre izotropnog pomeranja za sve atome vodonika.
[0463] Poremećaj zauzetosti populacije kao odnos od ~67/33 na -CF3 segmentu je identifikovan i modeliran u skladu sa tim.
[0464] Analiza apsolutne strukture primenom postupka verovatnoće (Hooft, 2008) izvršena je pomoću PLATON (Spek). Rezultati pokazuju da je apsolutna struktura ispravno dodeljena. Postupak izračunava da je verovatnoća da je struktura ispravno dodeljena 100%. Hooft parametar je prijavljen kao 0.02 sa esd (procenjena standardna devijacija) od (4), a Parson parametar je prijavljen kao 0.02 sa esd od (4).
[0465] Konačni R-indeks je bio 4.1%. Konačna Furije razlika nije otkrila nestalu ili pogrešno postavljenu elektronsku gustinu.
[0466] Odgovarajuće informacije o kristalu, prikupljanju podataka i preciziranju sumirane su u tabeli S. Atomske koordinate, dužine veze, uglovi veze i parametri pomeranja navedeni su u tabelama T - V.
[0467] Spisak upotrebljenog softvera i referenci može se naći u Određivanje strukture rendgenskih zraka monokristalnog primera 13, čvrsti oblik 1.
Tabela S. Kristalni podaci i preciziranje strukture za C91.
Tabela T. Atomske koordinate (x 10<4>) i ekvivalentni parametre izotropnog pomeranja (Å<2>x 10<3>) za C91. U(ekv) je definisana kao jedna trećina traga ortogonalizovanog U<ij>tenzor.
22
Tabela U. Dužina veze [Å] i uglovi [°] za C91.
22
22
[0468] Transformacije simetrije koje se koriste za Sintezu ekvivalentnih atoma.
22
Tabela V. Parametri anizotropnog pomeranja (Å<2>x 10<3>) za C91. Eksponent faktora anizotropnog pomeranja ima oblik: -2π<2>[h<2>a*<2>U<11>+ ... 2 h k a* b* U<12>].
Korak 2. Sinteza litijum (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata (C92).
[0469] Litijum hidroksid monohidrat (29.0 g, 678 mmol) je dodat u smešu hidrohloridne soli metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilat, (68.5 g, 333 mmol) u tetrahidrofuranu (950 mL) i voda (48 mL). Reakciona smeša je mešana na 25 °C dok se hidroliza nije završila, nakon čega je čvrsta supstanca sakupljena filtracijom, isprana sa 5% rastvorom vode u tetrahidrofuranu (400 mL) i osušena pod vakuumom na 70 °C da bi se dobila C92 kao bela do gotovo bela čvrsta supstanca. Prinos: 47.6 g, 295 mmol, 89%. Fizičko-hemijski podaci dobijeni su na uzorcima od C92 dobijene reakcijama izvedenim na isti način.
[0470] HRMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>Izračunato za C8H14NE2, 156.1019; Pronađeno, 156.1019.<1>H NMR (600 MHz, D2O) δ 3.23 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 3.09 (dd, J = 11.1, 5.2 Hz, 1H), 2.63 (d, J = 11.1 Hz, IH), 1.33 - 1.24 (m, 2H), 0.86 (s, 2H), 0.83 (s, 3H).<13>C NMR (150.8 MHz, D2O) δ
22
182.7, 62.3, 45.6, 35.5, 30.0, 25.8, 19.3, 12.7. Difrakcioni uzorak rendgenskih zraka na prahu za C92 dat je na slici 13; karakteristični pikovi su navedeni u tabeli V.
Tabela V. Odabrani pikovi difrakcije rendgenskih zraka praha za C92
Korak 3. Sinteza (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (C42).
[0471] Smeša C91 (1.29 g, 5.68 mmol), 4-(dimetilamino)piridina (0.60 g, 4.8 mmol), i N,N-diizopropiletilamina (1.70 mL, 9.75 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL), tretirana je sa ptoluensulfonil hloridom (0.99 g, 5.2 mmol). Nakon što je reakciona smeša mešana 2 sata na 20 °C, C92 (75.7 maseni %, 1.00 g, 4.70 mmol) je napunjeno i mešanje je nastavljeno preko noći na 20 °C. Dobijena suspenzija je pomešana sa propan-2-il acetatom (10 mL) i isprana uzastopno sa vodenim rastvorom limunske kiseline (10%, 10 mL) i vodom (10 mL). Organski sloj je zatim koncentrovan, nakon čega je dodat propan-2-il acetat (5 mL), a zatim je u kapima dodat heptan (15 mL) iz levka za dodavanje. Čvrste materije su izolovane filtracijom i osušene pod vakuumom da bi se dobilo (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilna kiselina (C42) kao bela čvrsta supstanca. Prinos: 1.2 g.
2
Ovo jedinjenje prikazuje dva seta NMR signala. Glavni i minorni skupovi odgovaraju Z i E izomerima tercijarnog amida, respektivno, sa molarnim odnosom od 20:1. Uzorak takođe sadrži izopropil acetat od 37% molarnog odnosa u odnosu na C42, pokazujući<1>H rezonancije na 4.86, 1.96 i 1.17 ppm, i<13>C rezonancije na 169<.>7, 66.9, 21.5 i 21.0 ppm.<1>H i<13>C signali su referencirani korišćenjem TMS signala, podešenog na 0 ppm u oba.
[0472] HRMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>Izračunato za C16H24F3N2O4, 365.1683; Pronađeno: 365.1684.<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ glavni: 9.44 (d, J = 8<.>5 Hz, IH), 4.44 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.85 (dd, J = 10.5, 5.4 Hz, 1H), 3.73 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 1.53 (dd, J = 7.6, 5.3 Hz, 1H), 1.43 (d, J = 7.6 Hz, IH), 1.01 (s, 3H), 1.01 (s, 9H), 0.83 (s, 3H); minorni: 9.11 (d, J = 9.4 Hz, IH), 4.53 (s, IH), 4.33 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 3.53 (dd, J = 12.5, 5.3 Hz, 1H), 3.41 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 1.55 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 1.41 (dd, J = 7.5, 5.3 Hz, IH), 1.02 (s, 3H), 0.97 (s, 3H), 0.91 (s, 9H).<13>C NMR (150.8 MHz, DMSO-d6) δ glavni: 172.3, 167.5, 156.8 (<2>JCF= 37.0 Hz), 115.7 (<1>JCF= 287<.>7 Hz), 59.1, 58.0, 47.1, 34.6, 29.6, 26.7, 26.1, 25.6, 18.7, 12.0; minorni: 172.3, 168.1, 155.9 (<2>JCF= 36.8 Hz), 115.8 (<1>JCF= 288<.>1 Hz), 59.9, 57.3, 46.4, 36.2, 32.1, 26.2, 26.0, 24.4, 19.0, 12.7. Difrakcioni obrazac rendgenskih zraka praha za C42 dat je na slici 14; karakteristični pikovi su navedeni u tabeli X.
[0473] Kristalizacija i za obradu difrakcije rendgenskih zraka u prahu i za određivanje strukture rendgenskih zraka monokristala izvedena je na sledeći način. Rastvor C42 (2.96 g) u etanolu (9 mL) je zagrevan na 40 °C uz mešanje (3500 rpm), nakon čega je dodavana voda (10.5 mL) tokom 10 minuta. Dodatna voda (16.5 mL) je zatim dodata tokom 4 sata, i smeša je ohlađena na 10 °C i ostavljena da se meša preko noći. Posle filtracije, filter kolač je ispran vodom (6 mL) i osušen na 50 °C da bi se dobio kristalni C42 (2.6 g).
Tabela X. Odabrani pikovi difrakcije rendgenskih zraka praha za C42
2 1
[0474] ORTEP dijagram monokristalnih podataka za C42 je prikazano na slici 15.
Rendgensko određivanje strukture monokristala C42
Jednokristalna rendgenska analiza
[0475] Prikupljanje podataka je obavljeno na Bruker D8 Venture difraktometru na sobnoj temperaturi. Prikupljanje podataka se sastojalo od omega i fi skeniranja. Posebna strategija podataka od 0.3 stepena širine po kadru je primenjena da bi se odvojili domeni, čime su eliminisani problemi TWIN i pseudosimetrije.
[0476] Struktura je rešena intrinzičnim faziranjem korišćenjem SHELX softverskog paketa u grupi romboedarskih klasa R3. Struktura je naknadno rafinisana metodom najmanjih kvadrata pune matrice. Svi nevodonikovi atomi su pronađeni i rafinisani korišćenjem parametara anizotropnog pomeranja.
[0477] Atomi vodonika koji se nalaze na azotu i kiseoniku pronađeni su iz Furijeove mape razlike i rafinisani sa ograničenim rastojanjima. Preostali atomi vodonika su postavljeni na izračunate pozicije i dozvoljeno im je da se kreću na svojim atomima nosačima. Završno preciziranje uključivalo je parametre izotropnog pomeranja za sve atome vodonika.
[0478] Analiza apsolutne strukture primenom postupak verovatnoće (Hooft, 2008) izvršena je pomoću PLATON (Spek). Rezultati pokazuju da je apsolutna struktura ispravno dodeljena. Postupak izračunava da je verovatnoća da je struktura ispravno dodeljena 100%. Hooft parametar je prijavljen kao -0.08 sa esd (procenjena standardna devijacija) od (7), a Parson parametar je prijavljen kao -0.09 sa esd od (6).
[0479] Poremećaj populacionog mesta na segmentu C1_F1_F2 u odnosu 78:22 je identifikovan i tretiran u skladu sa tim.
[0480] Konačni R-indeks je bio 5.8%. Konačna Furije razlika nije otkrila nestalu ili pogrešno postavljenu elektronsku gustinu.
2 2
[0481] Odgovarajuće informacije o kristalu, prikupljanju podataka i preciziranju sumirane su u tabeli I. Atomske koordinate, dužine veze, uglovi veze i parametri pomeranja su navedeni u tabelama Z - BB.
[0482] Spisak upotrebljenog softvera i referenci može se naći u Određivanje strukture rendgenskih zraka monokristalnog primera 13, čvrsti oblik 1.
Tabela I. Kristalni podaci i preciziranje strukture za C42.
2
Tabela Z. Atomske koordinate (x 10<4>) i ekvivalentne parametre izotropnog pomeranja (Å<2>x 10<3>) za C42. U(ekv) je definisana kao jedna trećina traga ortogonalizovanog U<ij>tenzor.
2 4
Tabela AA. Dužine veze [Å] i uglovi [°] za C42.
2
2
2
2
2
[0483] Transformacije simetrije koje se koriste za Sintezu ekvivalentnih atoma.
TabelaBB. Parametri anizotropnog pomeranja (Å<2>x 10<3>) za C42. Eksponent faktora anizotropnog pomeranja ima oblik: -2π<2>[h<2>a*<2>U<11>+ ... 2 h k a* b* U<12>].
24
[0484] Pored pripreme (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilna kiselina (C42) prema gore opisanim postupcima, jedinjenje se takođe može pripremiti kao što je prikazano u reakcionim šemama prikazanim direktno ispod. U koraku 1, metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilat hidrohlorid se prvo tretira trietilaminom u smeši tetrahidrofurana i vode da bi se neutralisala hidrohloridna so nakon čega sledi hidroliza metil estra korišćenjem natrijum hidroksida u smeši tetrahidrofurana i vode da bi se dobio natrijum (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilat.
Priprema natrijum (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata
[0485]
[0486] U odgovarajući sud je dodat tetrahidrofuran (30 mL0), voda (7.5 mL), trietilamin (7.62 mL, 54.7 mmol) i metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0] heksan-2-karboksilat hidrohlorid (7.59 g, 36.9 mmol). Smeša je mešana na 25°C najmanje 30 minuta. Mešanje je prekinuto i slojevi su razdvojeni. U odvojenom sudu 28 zapr/zapr% vodenog rastvora natrijum hidroksida (4.19 mL, 38.3 mmol) i tetrahidrofurana (71 mL) su dodati uz mešanje na 40°C.25% organskog sloja koji sadrži rastvor metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0] heksan-2-karboksilata u tetrahidrofuranu iz separacije se dodaje i rastvor se zaseje sa natrijum (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilatom (0.1182 g, 0.7336 mmol - prethodno pripremljeno analognom procedurom). Smeša je držana na 40 °C najmanje 15 minuta i polako je dodato preostalih 75% organskog sloja. Smeša je držana uz mešanje na 40 °C tokom 16 sati, zatim je polako ohlađena na 20 °C i držana najmanje 4 sata. Dobijeni čvrsti natrijum (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilat je izolovan filtracijom, ispran rastvorom koji se sastoji od tetrahidrofurana (43 mL) i vode ( 2.25 mL). Čvrsti materijal je osušen na 70 °C pod vakuumom da bi se dobilo 6.13 g (93.8%) natrijum (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata kao kristalna čvrsta supstanca. PXRD je određen prema gore opisanim postupcima.
[0487] Odabrani PXRD pikovi kristalnog natrijum (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilata.
[0488] Odabrani PXRD pikovi (S)-3.3-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)butanske kiseline (C91)
[0489] Podaci o kristalima i preciziranje strukture za (S)-3.3-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroacetamido) butansku kiselinu (C91).
24
[0490] U koraku 2 dobijeni natrijum (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilat se zatim spaja sa (S)-3.3-dimetil-2-( 2,2,2-trifluoroacetamido)butanska kiselina u prisustvu tozil hlorida i dimetilamino piridina u tetrahidrofuranu. Tetrahidrofuran je uklonjen i zamenjen izopropil acetatom, nakon čega sledi tretman sa HCl u slanom rastvoru, a zatim obrada sa vodom i heptanom da se dobije C42.
[0491] Kristalni C42 je okarakterisan PXRD i identifikovan je dodatni oblik dobijen produženim sušenjem ili višom temperaturom.
[0492] Odabrani PXRD pikovi za C42 - Kristalni oblik dobijen produženim vremenom sušenja ili višom temperaturom
24
Antivirusna aktivnost kod infekcije SARS-CoV-2
[0493] Sposobnost jedinjenja da spreče smrt ćelije izazvanu SARS-CoV-2 koronavirusom ili citopatski efekat može se proceniti putem vitalnosti ćelije, korišćenjem formata testa koji koristi luciferazu za merenje intracelularnog ATP-a kao krajnje tačke. Ukratko, ćelije VeroE6 koje su obogaćene za ekspresiju hACE2 su inokulisane sa SARS-CoV-2 (USA_VA1/2020) sa višestrukom infekcijom od 0.002 u laboratoriji BSL-3. Ćelije inokulisane virusom su zatim dodate u ploče sa jedinjenjem spremne za analizu u gustini od 4000 ćelija/bunarčiću. Nakon 3-dnevne inkubacije, vremena u kojem je citopatski efekat izazvan virusom 95% u netretiranim, inficiranim kontrolnim uslovima, vitalnost ćelija je procenjena korišćenjem Cell Titer-Glo (Promega), prema protokolu proizvođača, koji kvantifikuje nivoe ATP-a. Citotoksičnost jedinjenja je procenjena u paralelnim neinficiranim ćelijama. Test jedinjenja su testirana ili sama ili u prisustvu inhibitora P-glikoproteina (P-gp) CP-100356 u koncentraciji od 2 uM. Uključivanje CP-100356 je da se proceni da li se testna jedinjenja izlučuju iz VeroE6 ćelija, koje imaju visok nivo ekspresije P-glikoproteina. Procenat efekta pri svakoj koncentraciji test jedinjenja je izračunat na osnovu vrednosti za kontrolne bunarčiće bez virusa i kontrolne bunarčiće koje sadrže virus na svakoj ploči za ispitivanje. Koncentracija potrebna za 50% odgovor (EC50) vrednost je određena iz ovih podataka korišćenjem 4-parametarskog logističkog modela. EC50krive su bile prilagođene nagibu od 3 kada je >3 i najveća doza je postigla efekat od ≥ 50%. Ako je citotoksičnost otkrivena pri efektu većem od 30%, odgovarajući podaci o koncentraciji su eliminisani iz determinacije EC50.
[0494] Za ploče citotoksičnosti, procenat efekta pri svakoj koncentraciji test jedinjenja je izračunat na osnovu vrednosti za kontrolne bunarčiće samo za ćelije i kontrolne bunarčiće koje sadrže hiamin na svakoj ploči za ispitivanje. CC50vrednost je izračunata korišćenjem 4-parametarskog logističkog modela. TI je zatim izračunat deljenjem CC50vrednost sa EK50vrednošću.
SARS-CoV-2 koronavirus 3C proteaza FRET test i analiza
[0495] Proteolitička aktivnost glavne proteaze, 3CLpro, SARS-CoV-2 je praćena korišćenjem
24
testa kontinualnog fluorescentnog rezonantnog prenosa energije (FRET). SARS-CoV-23CLpro test meri aktivnost SARS-CoV-23CL proteaze pune dužine za cepanje sintetičkog fluorogenog supstratnog peptida sa sledećom sekvencom: Dabcil-KTSAVLQ-SGFRKME-Edans po uzoru na konsenzus peptid (V. Grum-Tokars i dr. V. Grum-Tokars et al. Evaluating the 3C-like protease activity of SARS-coronavirus: recommendations for standardized assays for drug discovery. Virus Research 133 (2008) 63-73). Fluorescencija odcepljenog Edans peptida (ekscitacija 340 nm / emisija 490 nm) se meri korišćenjem protokola intenziteta fluorescencije na Flexstation čitaču (Molecular Devices). Fluorescentni signal je smanjen u prisustvu PF-835231, snažnog inhibitora SARS-CoV-2 3CLpro. Pufer za analizu sadržao je 20 mM Tris-HCl (pH 7.3), 100 nM NaCl, 1 mM EDTA i 25 µM peptidnog supstrata. Enzimske reakcije su započete dodatkom 15 nM SARS-CoV-2 3CL proteaze i ostavljene da se odvijaju 60 minuta na 23 °C. Procenat inhibicije ili aktivnosti je izračunat na osnovu kontrolnih bunarčića koji ne sadrže jedinjenje (0% inhibicije/100% aktivnosti) i kontrolnog jedinjenja (100% inhibicije/0% aktivnosti). IC50vrednosti su generisane korišćenjem modela uklapanja sa četiri parametra korišćenjem softvera ABASE (IDBS). Ki vrednosti su prilagođene Morisonovoj jednačini sa parametrom koncentracije enzima fiksiranim na 15 nM, parametrom Km fiksiranim na 14 µM i parametrom koncentracije supstrata fiksiranim na 25 µM korišćenjem ABASE softvera (IDBS).
[0496] Proteolitička aktivnost SARS-CoV-2 Coronavirus 3CL proteaze se meri pomoću testa prenosa energije kontinualne fluorescentne rezonance. SARS-CoV-2 3CL<pro>FRET test meri cepanje TAMRA-SITSAVLQSGFRKMK-(DABCIL)-OH katalizovano proteazom do TAMRA-SITSAVLQ i SGFRKMK(DABCIL)-OH. Fluorescencija odcepljenog TAMRA (npr. 558 nm / em. 581 nm) peptida je merena korišćenjem čitača TECAN SAFIRE fluorescentnih ploča tokom 10 min. Tipični reakcioni rastvori su sadržali 20 mM HEPES (pH 7.0), 1 mM EDTA, 4.0 µM FRET supstrata, 4% DMSO i 0.005% Tveen-20. Testovi su započeti dodatkom 25 nM SARS 3CL<pro>(nukleotidna sekvenca 9985-10902 Urbani soja kompletne sekvence genoma SARS koronavirusa (NCBI pristupni broj AY278741)). Procenat inhibicije je određen u duplikatu na nivou inhibitora od 0.001 mM. Podaci su analizirani programom za nelinearnu regresionu analizu Kalidagraph pomoću jednačine:
FU=ofset+(granica)(1-e<-(kobs)>t)
gde je ofset jednak signalu fluorescencije neotcepljenog peptidnog supstrata, a granica je jednaka fluorescenciji potpuno otcepljenog peptidnog supstrata. Kobs je konstanta brzine prvog reda za ovu reakciju, a u odsustvu bilo kakvog inhibitora predstavlja iskorišćenje supstrata. U reakciji pokretanja enzima koja sadrži ireverzibilni inhibitor i gde je izračunata granica manja od 20%
24
teorijske maksimalne granice, izračunati kobs predstavlja stopu inaktivacije proteaze koronavirusa 3C. Nagib (kobs/I) grafikona kobs u odnosu na [I] je mera avidnosti inhibitora za enzim. Za veoma brze ireverzibilne inhibitore, kobs/I se izračunava iz posmatranja na samo jedan ili dva [I], a ne kao nagib.
Tabela 2. Biološka aktivnost i IUPAC naziv za Primere 1 - 84.
24
24
2
21
22
2
24
2
2
2
2
2
2
Predviđeni farmakokinetički parametri (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid (jedinjenje iz Primera 13) kod ljudi
[0497] Na osnovu fiziološki zasnovanog farmakokinetičkog (PBPK) modeliranja in vitro podataka koji sadrže CLintiz mikrozoma ljudske jetre i CLžučiiz humanih hepatocita u uslovima kultivisane u sendviču, predviđeni CL i Vsshumane plazme od (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamida su 5.9 mL/min/kg i 0.97 L/kg, respektivno, obezbeđujući efektivno vreme poluraspada, t1/2, od 1.9 sati. Ciljni Ceffod 0.16 µM (koncentracija
2 1
nevezane plazme) definisana je na osnovu podataka o antivirusnoj inhibiciji dobijenih od in vitro studije (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid sa bilo kojom VeroE6 ćelijama u prisustvu P-gp inhibitora (EC90vrednost od 0.156 µM) ili u testu diferenciranog normalnog humanog epitelnog epitela (dNHBE) (EC90vrednost od 0.149 µM). Doza od 380 mg (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid koji se daje oralno tri puta dnevno (TID) predviđa se da pokrije efikasnu nevezanu koncentraciju od 0.16 µM kod Cmin.
2 2

Claims (13)

  1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje bilo koje od formula Ih-1a, Ih-1b, Ih-1c, Ii-1a, Ii-1b, Ii-1c, Ij-1a, Ij-1b, Ij-1c, Ik-a, Ik-b i Ik-c:
    2
    pri čemu je R<4>je izabran iz grupe koju čine (C1-C6alkil)amino izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, C1-C6alkil-C(O)NH- izborno supstituisan sa jednim do pet fluora, i C1-C6alkil-S(O)2NH- izborno supstituisan sa jednim do pet fluora; ili njegov solvat ili hidrat, ili farmaceutski prihvatljiva so pomenutog jedinjenja, solvata ili hidrata za upotrebu kao leka.
  2. 2. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time da R<4>je izabran iz grupe koju čine CF3C(O)NH-, CF3SO)2NH-, CH3C(O)NH-, CH3CH2C(O)NH- i CF3CH2NH-; ili njegov solvat ili hidrat, ili farmaceutski prihvatljiva so pomenutog jedinjenja, solvata ili hidrata.
  3. 3. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 2, naznačeno time da R<4>je CF3C(O)NH- ili CF3SO)2NH-; ili njegov solvat ili hidrat.
  4. 4. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 1 naznačeno time da jedinjenje je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)- L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid koji ima strukturu
    ili njegov solvat ili hidrat.
  5. 5. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 4 naznačeno time da jedinjenje je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil- 3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid koji ima strukturu
  6. 6. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 4 naznačeno time da jedinjenje je kristalni (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil -3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid.
  7. 7. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 6 gde jedinjenje je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil- 3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, čvrsti oblik 1, naznačeno time da obrazac difrakcije rendgenskih zraka praha (izvor Cu zračenja, prosečni K-α) koji sadrži pikove na 7.6, 9.8, 11.4, 11.9, 12.7, 15.7, 15.8, 17.3, 17.8, 18.3, 18.9. 19.7, 19.9, 20.5, 21.0, 21.7, 22.2, 22.5, 23.1, 23.6, 24.7, 25.3, 27.0, 27.2, 27.9, 28.1, 29.5, 32.6, 35.7 i 37.0 °2-teta /-0.2°.
  8. 8. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 6 gde jedinjenje je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3- 2 metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, Čvrsta forma 4, naznačeno time da obrazac difrakcije rendgenskih zraka praha (izvor Cu zračenja, prosečni K-α) koji sadrži pikove na 7.6, 9.8, 10.8, 11.2, 11.4, 11.4, 11.7, 12.0, 12.3, 12.7, 13.7, 14.9, 15.1, 15.9, 17.5, 18.0, 18.2, 18.5, 18.8, 20.0, 20.4, 20.7, 21.1, 21.6, 21.8, 22.3, 23.1, 23.4, 24.2, 24.9, 25.2, 26.1, 27.0, 27.2, 28.1, 28.9, 29.4, 29.5, 29.8, 30.0, 30.6, 30.8, 31.3, 31.8, 32.5, 32.8, 33.2, 34.4, 35.5, 35.6, 35.6, 36.0, 36.4, 37.1, 38.7, 39.4, 39.5 i 39.8 °2-teta /-0.2°.
  9. 9. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 4 naznačeno time da jedinjenje je amorfni (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3- azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid.
  10. 10. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 4 naznačeno time da jedinjenje je (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3- azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksamid, metil terc-butil etar solvat.
  11. 11. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 10, naznačeno time da je jedinjenje kristal.
  12. 12. Jedinjenje N-(metoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid koji ima strukturu
    ili njegov solvat ili hidrat, za upotrebu kao lek.
  13. 13. Jedinjenje za upotrebu kao lek, kao što je tražena zaštita prema patentnom zahtevu 12, koje je N-(metoksikarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-cijano-2-[(3S)-2-oksopirolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamid. 2
RS20241168A 2020-09-03 2021-08-06 Jedinjenja koja sadrže nitril za upotrebu kao lekovi RS66084B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063073982P 2020-09-03 2020-09-03
US202163143435P 2021-01-29 2021-01-29
US202163170158P 2021-04-02 2021-04-02
US202163194241P 2021-05-28 2021-05-28
EP22198597.1A EP4166539B1 (en) 2020-09-03 2021-08-06 Nitrile-containing compounds for use as medicaments

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS66084B1 true RS66084B1 (sr) 2024-11-29

Family

ID=77411985

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20241168A RS66084B1 (sr) 2020-09-03 2021-08-06 Jedinjenja koja sadrže nitril za upotrebu kao lekovi
RS20221020A RS63714B1 (sr) 2020-09-03 2021-08-06 Jedinjenja koja sadrže nitril korisna kao antivirusna sredstva za lečenje infekcije koronavirusom

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20221020A RS63714B1 (sr) 2020-09-03 2021-08-06 Jedinjenja koja sadrže nitril korisna kao antivirusna sredstva za lečenje infekcije koronavirusom

Country Status (38)

Country Link
US (5) US11351149B2 (sr)
EP (3) EP4516301A3 (sr)
JP (2) JP7126628B2 (sr)
KR (2) KR102481876B1 (sr)
CN (3) CN114466838B (sr)
AU (3) AU2021266232C1 (sr)
BR (2) BR122023004755B1 (sr)
CA (1) CA3137824C (sr)
CL (1) CL2021002965A1 (sr)
CO (1) CO2021015067A2 (sr)
CR (1) CR20210558A (sr)
DK (2) DK4166539T3 (sr)
DO (1) DOP2023000168A (sr)
EC (1) ECSP21080528A (sr)
ES (2) ES2932173T3 (sr)
FI (1) FI4166539T3 (sr)
GE (3) GEP20237515B (sr)
HR (2) HRP20241513T1 (sr)
HU (2) HUE060811T2 (sr)
IL (2) IL299071B2 (sr)
LT (2) LT3953330T (sr)
MA (1) MA63032B1 (sr)
MD (2) MD4166539T2 (sr)
MX (2) MX2021013679A (sr)
MY (1) MY196455A (sr)
NZ (1) NZ782196A (sr)
PE (2) PE20241760A1 (sr)
PH (1) PH12021552851A1 (sr)
PL (2) PL4166539T3 (sr)
PT (2) PT4166539T (sr)
PY (1) PY2165555A (sr)
RS (2) RS66084B1 (sr)
SA (1) SA521430792B1 (sr)
SI (2) SI3953330T1 (sr)
TW (2) TWI845093B (sr)
UY (1) UY39372A (sr)
WO (1) WO2021250648A1 (sr)
ZA (3) ZA202108834B (sr)

Families Citing this family (119)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11124497B1 (en) 2020-04-17 2021-09-21 Pardes Biosciences, Inc. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
US11174231B1 (en) 2020-06-09 2021-11-16 Pardes Biosciences, Inc. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
PH12022553378A1 (en) 2020-06-10 2024-03-25 Univ Leuven Kath Anti-viral compounds for treating coronavirus, picornavirus, and norovirus infections
JP2023533016A (ja) 2020-07-11 2023-08-01 ファイザー・インク 抗ウイルス性ヘテロアリールケトン誘導体
US20220033383A1 (en) * 2020-07-20 2022-02-03 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized peptides as antiviral agents
MX2023001756A (es) * 2020-08-13 2023-05-04 Enanta Pharm Inc Peptidos funcionalizados como agentes antivirales.
US11384090B2 (en) 2020-11-23 2022-07-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Spiropyrrolidine derived antiviral agents
US12540141B2 (en) 2020-11-23 2026-02-03 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Spiropyrrolidine derived antiviral agents
US11352363B1 (en) 2020-11-23 2022-06-07 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Spiropyrrolidine derived antiviral agents
KR20230124583A (ko) 2020-11-23 2023-08-25 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 신규한 스피로피롤리딘 유래 항바이러스제
CA3200437A1 (en) * 2020-12-01 2022-06-09 Arun K. Ghosh Compounds for the treatment of sars
WO2022133588A1 (en) * 2020-12-21 2022-06-30 The Governors Of The University Of Alberta Rna virus inhibitor compounds and uses thereof
LT4122926T (lt) 2021-04-14 2025-07-25 Shionogi & Co., Ltd. Triazino dariniai, turintys virusų replikaciją slopinantį poveikį, ir juos apimanti farmacinė kompozicija
RS66213B1 (sr) * 2021-04-16 2024-12-31 Fujian Akeylink Biotechnology Co Ltd Jedinjenje kratkog peptida prolina modifikovanog prstenom i upotreba istog
WO2022235605A1 (en) 2021-05-04 2022-11-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Novel macrocyclic antiviral agents
US11857617B2 (en) 2021-05-10 2024-01-02 Topelia Aust Limited (652 771 670) Methods for treating, ameliorating or preventing infections using drug and vaccination combination treatment
US12398147B2 (en) 2021-05-11 2025-08-26 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic spiropyrrolidine derived antiviral agents
US11319325B1 (en) 2021-05-11 2022-05-03 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic spiropyrrolidine derived antiviral agents
WO2022251615A1 (en) 2021-05-28 2022-12-01 Arun K Ghosh Compounds for the treatment of sars
WO2022256434A1 (en) 2021-06-02 2022-12-08 ACEA Therapeutics, Inc. Protease inhibitors as antivirals
US20230033285A1 (en) * 2021-06-16 2023-02-02 The Scripps Research Institute Protease Inhibitors for Treatment of Coronavirus Infections
CN113444144A (zh) * 2021-06-23 2021-09-28 周龙兴 一种蛋白酶抑制剂及其药物组合物和用途
AU2022306289A1 (en) 2021-07-09 2024-01-18 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds
US11325916B1 (en) 2021-07-29 2022-05-10 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Spiropyrrolidine derived antiviral agents
US11339170B1 (en) 2021-07-23 2022-05-24 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Spiropyrrolidine derived antiviral agents
CN114149415A (zh) * 2021-07-26 2022-03-08 中国药科大学 一种拟肽类化合物及其衍生物、制备方法、药物组合物和应用
US12479854B2 (en) 2021-07-29 2025-11-25 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Spiropyrrolidine derived antiviral agents
WO2023023631A1 (en) * 2021-08-18 2023-02-23 Pardes Biosciences, Inc. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
WO2023043816A1 (en) 2021-09-17 2023-03-23 Aligos Therapeutics, Inc. Anti-viral compounds for treating coronavirus, picornavirus, and norovirus infections
US12186309B2 (en) 2021-09-27 2025-01-07 The Governors Of The University Of Alberta RNA virus inhibitor compounds and uses thereof
AU2022353486A1 (en) 2021-09-28 2024-05-02 National University Corporation Hokkaido University Pharmaceutical composition containing triazine derivative
WO2023054292A1 (ja) 2021-09-28 2023-04-06 塩野義製薬株式会社 トリアジン誘導体を含有する医薬組成物
CN114957381B (zh) * 2021-10-22 2026-04-17 广州谷森制药有限公司 新型氘代氰基类化合物、其制备方法、组合物及应用
US11912714B2 (en) 2021-11-12 2024-02-27 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Spiropyrrolidine derived antiviral agents
US11919910B2 (en) 2021-11-12 2024-03-05 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Spiropyrrolidine derived antiviral agents
US11858945B2 (en) 2021-11-12 2024-01-02 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Alkyne-containing antiviral agents
WO2023088418A1 (en) * 2021-11-20 2023-05-25 Fochon Biosciences, Ltd. Compounds as sars-cov-2 inhibitors
EP4289432A4 (en) 2021-11-24 2025-01-15 Shionogi & Co., Ltd PREPARATION FOR ORAL ADMINISTRATION CONTAINING TRIAZINE DERIVATIVES
CN115490626B (zh) * 2021-11-26 2024-08-23 杭州科巢生物科技有限公司 一种pf-07321332的关键手性化合物及其制备方法
CN118302421A (zh) * 2021-11-26 2024-07-05 海南先声药业有限公司 一种吡咯烷类抗病毒化合物
US20250025459A1 (en) * 2021-11-26 2025-01-23 Shionogi & Co., Ltd. Covid-19 treatment medicine characterized by combining 3cl protease inhibitor and covid-19 treatment drug
US12145941B2 (en) 2021-12-08 2024-11-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Heterocyclic antiviral agents
WO2023107419A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Saturated spirocyclics as antiviral agents
CN115010639B (zh) * 2021-12-14 2024-03-08 上海艾洋化学科技有限公司 一种中间体化合物及其制备方法和应用
CN115433256B (zh) * 2021-12-17 2025-11-07 中国科学院微生物研究所 一种氮杂双环[3.1.0]己烷衍生物及其制备方法和用途
CN114031543A (zh) * 2021-12-21 2022-02-11 上海朴颐化学科技有限公司 一种帕罗韦德中间体的制备方法
WO2023116734A1 (en) * 2021-12-21 2023-06-29 Shanghai Micurx Pharmaceutical Co., Ltd. Fused pyrrolidine compounds and compositions for treatment of respiratory viral infections
WO2023116811A1 (zh) * 2021-12-22 2023-06-29 福建广生中霖生物科技有限公司 含β-胺基酮的短肽化合物及其应用
CN114456101A (zh) * 2021-12-23 2022-05-10 上海璨谊生物科技有限公司 用于合成pf-07321332的关键中间体的合成方法
CN114591299A (zh) * 2021-12-24 2022-06-07 雅本化学股份有限公司 一种帕罗韦德中间体及其制备和应用
CN114409727A (zh) * 2021-12-28 2022-04-29 苏州康纯医药科技有限公司 一种抗冠状病毒的3clpro抑制剂的制备方法
CN116514902A (zh) * 2021-12-28 2023-08-01 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 氘代拟肽类化合物及其用途
CN118909031B (zh) * 2021-12-29 2025-05-27 上海柯君医药科技有限公司 抗冠状病毒化合物及其组合物和用途
TW202334123A (zh) * 2021-12-31 2023-09-01 大陸商蘇州愛科百發生物醫藥技術有限公司 用於預防和治療冠狀病毒感染的化合物及其偶聯物和方法
CN114213275B (zh) * 2021-12-31 2023-08-04 戊言医药科技（上海）有限公司 用于合成帕罗韦德的中间产物及制备方法
CN115192536A (zh) * 2022-01-06 2022-10-18 江苏奥赛康药业有限公司 一种含有奈玛特韦的药用组合物及其制备方法
US20250223259A1 (en) * 2022-01-07 2025-07-10 Merck Sharp & Dohme Llc Protease inhibitors for treating or preventing coronavirus infection
CN115583984A (zh) * 2022-01-11 2023-01-10 嘉兴安谛康生物科技有限公司 氮杂螺类化合物及其制备方法、药物组合物和用途
CN118451090A (zh) * 2022-01-13 2024-08-06 海南先声药业有限公司 一种酰胺类抗病毒化合物
US11760722B2 (en) * 2022-01-18 2023-09-19 Ascletis Bioscience Co., Ltd. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
WO2023139402A1 (en) * 2022-01-18 2023-07-27 Ascletis Bioscience Co., Ltd. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
CN114057627B (zh) * 2022-01-18 2022-04-01 南京桦冠生物技术有限公司 一种丙型肝炎及新冠药物中间体及其盐的制备方法
CN114948950A (zh) * 2022-01-19 2022-08-30 广州谷森制药有限公司 一种药物组合物及其抗病毒用途
CN114394927B (zh) * 2022-01-20 2023-03-31 汉瑞药业(荆门)有限公司 6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-羧酸的制备方法
CN114437043B (zh) * 2022-02-02 2023-06-16 浙江乐普药业股份有限公司 一种抗新冠药物Nirmatrelvir的制备方法
WO2023148747A1 (en) * 2022-02-07 2023-08-10 Dr. Reddy’S Institute Of Life Sciences Improved processes for preparation of nirmatrelvir and intermediates thereof
WO2023151188A1 (zh) * 2022-02-08 2023-08-17 上海皓元医药股份有限公司 一种抗病毒药物中间体的绿色合成方法
CN114230504B (zh) * 2022-02-24 2022-06-03 南京桦冠生物技术有限公司 一种吡咯烷酮中间体的合成方法
CN114668737A (zh) * 2022-03-02 2022-06-28 乐普制药科技有限公司 一种用于治疗新型冠状病毒含有利托那韦微丸的复方双层片剂
CN114573470B (zh) * 2022-03-17 2023-12-15 浙江海洲制药有限公司 一种合成n-三氟乙酰叔亮氨酸的方法
CN114957382A (zh) * 2022-03-17 2022-08-30 广州谷森制药有限公司 氘代尼马瑞韦晶型i及其制备方法
WO2023180189A1 (en) * 2022-03-23 2023-09-28 Exscientia Ai Limited Mpro targeting antiviral compounds
CN114605436B (zh) * 2022-03-23 2023-07-21 浙江九洲药业股份有限公司 帕罗韦德或波普瑞韦的中间体、制备方法和应用
CN114437044B (zh) * 2022-03-24 2022-10-04 山东诚创蓝海医药科技有限公司 一种奈玛特韦的制备方法
CN114702425B (zh) * 2022-03-28 2024-04-19 苏州汉酶生物技术有限公司 （s）-2-氨基-(s)-3-[吡咯烷酮-2’]丙氨酸衍生物及中间体的制备方法
US11648300B1 (en) * 2022-03-31 2023-05-16 Asavi Llc Pharmaceutical combination therapy and prevention with aprotinin + nirmatrelvir of SARS-CoV-2 and/or disease associated with this infection, including COVID-19
CN115043900B (zh) * 2022-03-31 2025-02-18 深圳博瑞医药科技有限公司 一种拟肽化合物及其制备2019-nCoV主蛋白酶抑制剂的用途
CN114957383B (zh) * 2022-04-01 2024-12-31 中国科学院上海药物研究所 一种拟肽类化合物及其制备方法、药物组合物和用途
WO2023196307A1 (en) 2022-04-05 2023-10-12 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Novel spiropyrrolidine derived antiviral agents
JP7624093B2 (ja) 2022-04-08 2025-01-29 塩野義製薬株式会社 ウイルス増殖阻害活性を有するウラシル誘導体およびそれらを含有する医薬組成物
CN117203195A (zh) * 2022-04-08 2023-12-08 盐野义制药株式会社 具有病毒增殖抑制活性的尿嘧啶衍生物及含有其的医药组合物
CN114957087A (zh) * 2022-04-13 2022-08-30 湖南复瑞生物医药技术有限责任公司 一种帕罗韦德中间体制备方法
WO2023200364A1 (ru) * 2022-04-15 2023-10-19 Общество С Ограниченной Ответственностью "Промомед Рус" Способы получения (1r,2s,5s)-n-[(1s)-1-циано-2-[(3s)-2-оксопирролидин-3-ил]этил]-3-[(2s)-3,3-диметил-2-[(2,2,2-трифторацетил)амино]бутаноил]-6,6-диметил-3-азабицикло[3.1.0]гексан-2-карбоксамида
CN114702545A (zh) * 2022-04-19 2022-07-05 海化生命(厦门)科技有限公司 一种抗新冠病毒药物尼玛瑞韦的制备方法
CN117126229A (zh) * 2022-05-19 2023-11-28 浙江海正药业股份有限公司 Hs378晶型及其制备方法
CN114957053B (zh) * 2022-05-20 2023-12-22 中国医学科学院医药生物技术研究所 一种氧代亚乙基类化合物或其药学上可接受的盐及其制备方法和应用、药物组合物及其应用
CN114989045B (zh) * 2022-06-14 2023-09-08 斯坦德药典标准物质研发(湖北)有限公司 合成奈玛特韦的中间体及其制法以及合成奈玛特韦的方法
CA3259556A1 (en) * 2022-06-17 2023-12-21 Trawsfynydd Therapeutics, Inc. COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF CORONAVIRUS INFECTION
CN119677728A (zh) * 2022-06-30 2025-03-21 辉瑞大药厂 用于制备奈玛特韦的方法和中间体
CN116970028A (zh) * 2022-07-08 2023-10-31 腾讯科技（深圳）有限公司 大环拟肽类蛋白酶抑制剂及其用途
CN116621918B (zh) * 2022-07-20 2023-10-31 深圳信立泰药业股份有限公司 一种螺环化合物及其制备方法与应用
US11986479B2 (en) 2022-07-22 2024-05-21 PharSoln, Inc. Combination drug products for treating patients suffering from one or more medical conditions caused by coronavirus infection, including by SARS-CoV-2, its alpha, beta, delta, or omicron variants and sub variants
CN117503776A (zh) * 2022-08-05 2024-02-06 临港国家实验室 一种药物组合物及其用途
KR20250166848A (ko) 2022-10-06 2025-11-28 이난타 파마슈티칼스, 인코포레이티드 안티-사스 코브-2(anti-sars cov-2) 제제의 결정형 형태
CN119894917A (zh) * 2022-10-13 2025-04-25 广东众生睿创生物科技有限公司 酮酰胺衍生物的无定型及其制备方法
EP4582084A4 (en) * 2022-10-13 2025-12-31 Guangdong Raynovent Biotech Co Ltd CRYSTALLINE FORM OF A KETOAMIDE DERIVATIVE AND ITS PREPARATION PROCESS
AU2023359283A1 (en) * 2022-10-14 2025-05-29 Fujian Akeylink Biotechnology Co., Ltd. Crystal form of cyano-substituted polypeptide compound and preparation method therefor
WO2024083099A1 (zh) * 2022-10-18 2024-04-25 福建广生中霖生物科技有限公司 药物中间体及其制备方法
CN120076804A (zh) * 2022-10-19 2025-05-30 普罗莫梅德俄罗斯有限责任公司 治疗冠状病毒感染用药物组合物和药品
WO2024086777A2 (en) * 2022-10-21 2024-04-25 The Trustees Of Indiana University Compounds and methods for treating diseases caused by viruses and bacteria
WO2024091148A2 (ru) * 2022-10-26 2024-05-02 Общество С Ограниченной Ответственностью "Абицея Медикал Технолоджис" Жидкий бальнеологический концентрат и ампула с мерной шкалой и устройством для удобного дозирования бальнеологического концентрата
WO2024089159A1 (en) 2022-10-27 2024-05-02 Ubiq Holding B.V. Main protease inhibitors
IL321635A (en) 2022-12-23 2025-08-01 Meiji Seika Pharma Co Ltd The aftermath of avermectin
CN115998836B (zh) * 2023-02-08 2026-02-24 南通市海门品尚医药科技有限公司 一种含有奈玛特韦和利托那韦的液体制剂及其制备方法与应用
CN118697729A (zh) * 2023-03-27 2024-09-27 江苏天士力帝益药业有限公司 一种含有水飞蓟宾的组合物
CN118436756A (zh) * 2023-05-04 2024-08-06 广东众生睿创生物科技有限公司 一种抗新冠药物组合物及其制备方法
CN116283741B (zh) * 2023-05-10 2023-09-05 江苏欣诺科催化剂股份有限公司 双亚胺配体及其制备方法与应用
WO2024237816A1 (ru) * 2023-05-12 2024-11-21 Общество С Ограниченной Ответственностью "Промомед Рус" Новые производные азабициклогексана
WO2024252327A1 (en) 2023-06-09 2024-12-12 Pfizer Inc. Solid forms of n-(methoxycarbonyl)-3-methyl-l-valyl-(4 r)- n-{(1 s)-1-cyano-2-[(3 s)-2-oxopyrrolidin-3-yl]ethyl}-4-(trifluoromethyl)-l-prolinamide and solvates thereof
EP4724424A1 (en) 2023-06-09 2026-04-15 Pfizer Inc. Process and intermediates for preparing ibuzatrelvir
EP4501942A1 (en) 2023-08-02 2025-02-05 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (CSIC) Peptidomimetics with antiviral activity
WO2025037206A1 (en) 2023-08-11 2025-02-20 Pfizer Inc. Deuterated antiviral compounds
CN116763898A (zh) * 2023-08-21 2023-09-19 北京科翔中升医药科技有限公司 一种蛋白酶抑制剂化合物在制备猫冠状病毒感染药物中的用途
AU2024309726A1 (en) * 2023-10-05 2026-04-16 Shionogi & Co., Ltd. Preparation containing uracil derivative
AU2024307335A1 (en) * 2023-10-05 2026-04-16 Shionogi & Co., Ltd. Pharmaceutical composition containing uracil derivative
US20250163026A1 (en) * 2023-11-21 2025-05-22 Daljit Singh Dhanoa Deuterium-Enriched Nirmatrelvir as SARS-CoV-2 Mpro Inhibitor for the Treatment of COVID-19
CN119139307B (zh) * 2023-12-29 2025-09-23 上海柯君医药科技有限公司 螺环类化合物在制备3CLpro蛋白酶抑制剂或药物中的用途
EP4686470A1 (en) 2024-08-01 2026-02-04 Ospedale San Raffaele S.r.l. Macrocyclic peptidomimetics as antiviral agents
WO2025125695A2 (en) 2024-12-17 2025-06-19 Medchemica Consultancy Ltd Chemical compoundsid50000167790940 p. doc 2025-05-07 filing no.:19

Family Cites Families (227)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5583238A (en) 1990-11-19 1996-12-10 G. D. Searle & Co. Method for making intermediates useful in synthesis of retroviral protease inhibitors
CA2170020C (en) 1992-12-29 2005-08-02 Dale J. Kempf Retroviral protease inhibiting compounds
US5543417A (en) 1994-10-21 1996-08-06 Merck & Co., Inc. Combination method of treating acne using 4-AZA-5α-cholestan-ones and 4-AZA-5α-androstan-ones as selective 5α-reductase inhibitors with anti-bacterial, keratolytic, or anti-inflammatory agents
US6037157A (en) 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
CZ291690B6 (cs) 1996-02-13 2003-05-14 Akzo Nobel N. V. Inhibitory serinové proteázy a farmaceutický prostředek
IL120310A (en) 1996-03-01 2002-02-10 Akzo Nobel Nv Serine protease inhibitors and pharmaceuticals containing them
WO1997037997A1 (en) 1996-04-04 1997-10-16 Brystol-Myers Squibb Company Cephalosporin derivatives
DE19748470A1 (de) 1997-11-03 1999-05-06 Hoechst Schering Agrevo Gmbh Carbamoylphenylsulfonylharnstoffe, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Herbizide und Pflanzenwachstumsregulatoren
HUP0103256A3 (en) 1998-07-15 2002-05-28 Teijin Ltd Thiobenzimidazole derivatives and pharmaceutical compositions containing the compounds
US20050267148A1 (en) 1998-07-15 2005-12-01 Teijin Limited Benzimidazole derivative
EP1206484B1 (en) 1999-08-04 2004-10-06 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Antipicornaviral compounds and compositions, their pharmaceutical uses, and materials for their synthesis
PA8507801A1 (es) 1999-12-03 2002-08-26 Agouron Pharma Compuestos y composiciones antipicornavirales, sus usos farmaceuticos y los materiales para su sintesis
US7244721B2 (en) 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
DK1385870T3 (da) 2000-07-21 2010-07-05 Schering Corp Peptider som inhibitorer af NS3-serinprotease fra hepatitis C-virus
US7842727B2 (en) 2001-03-27 2010-11-30 Errant Gene Therapeutics, Llc Histone deacetylase inhibitors
TW200301079A (en) 2001-12-21 2003-07-01 Syngenta Participations Ag Avermectin B1 derivatives having an aminosulfonyloxy substituent in the 4"-position
US6894072B2 (en) 2002-01-23 2005-05-17 Schering Corporation Compounds as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
GB0205165D0 (en) 2002-03-06 2002-04-17 Astrazeneca Ab Chemical compounds
US7348318B2 (en) 2002-03-25 2008-03-25 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha α-Amino-N-(diaminophosphinyl)lactam derivatives
AR040126A1 (es) 2002-05-29 2005-03-16 Glaxo Group Ltd Compuesto de fenilsulfonilo, composicion farmaceutica que lo comprende y su uso para la elaboracion de un medicamento
AR040149A1 (es) 2002-06-07 2005-03-16 Novartis Ag Compuestos de aminoacetonitrilo, un proceso para su preparacion, composicion, y uso del compuesto
EP1513848A4 (en) 2002-06-12 2005-11-09 Biogen Idec Inc METHOD FOR TREATING ISCHEMIA REPERFUSION INJURIES WITH ADENOSINE RECEPTOR ANTAGONISTS
GB0220187D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Novartis Ag Organic compounds
WO2004058717A1 (en) 2002-12-20 2004-07-15 X-Ceptor Therapeutics, Inc. Isoquinolinone derivatives and their use as therapeutic agents
US7078419B2 (en) 2003-03-10 2006-07-18 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Cytokine inhibitors
WO2004093860A1 (en) 2003-04-21 2004-11-04 Pfizer Inc. Inhibitors of sars related coronavirus proteinase
US20040235952A1 (en) 2003-05-05 2004-11-25 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of severe acute respiratory syndrome (SARS) 3C-like proteinase
SE0301320D0 (sv) 2003-05-06 2003-05-06 Astrazeneca Ab Positive modulators of nicotinic acetylcholine receptors
JP2007527389A (ja) 2003-06-30 2007-09-27 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド 放射性カンナビノイド−１受容体修飾因子
US7449447B2 (en) 2003-08-26 2008-11-11 Schering Corporation Peptidomimetic NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
US20060014821A1 (en) 2003-08-27 2006-01-19 Agouron Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of SARS 3C like protease
ATE507845T1 (de) 2003-09-05 2011-05-15 Gen Hospital Corp Polyacetal-arzneimittelkonjugate als freisetzungssystem
WO2005058821A1 (en) 2003-12-11 2005-06-30 Schering Corporation Inhibitors of hepatitis c virus ns3/ns4a serine protease
US7462594B2 (en) 2003-12-31 2008-12-09 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Peptide-like compounds that inhibit coronaviral 3CL and flaviviridae viral proteases
EP1704142A4 (en) 2003-12-31 2008-08-20 Taigen Biotechnology Co Ltd PROTEASE INHIBITORS
WO2005074598A2 (en) 2004-01-30 2005-08-18 Johns Hopkins University Nitroxyl progenitor compounds and methods of use
AU2005219859A1 (en) 2004-02-27 2005-09-15 Schering Corporation Inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
DE602005021760D1 (de) 2004-02-27 2010-07-22 Schering Corp Schwefelverbindungen als inhibitoren der ns3-serinprotease des hepatitis-c-virus
JP4874227B2 (ja) 2004-02-27 2012-02-15 シェーリング コーポレイション Ｃ型肝炎ウイルスのｎｓ３セリンプロテアーゼインヒビターとしての環状ｐ４’ｓを有する新規ケトアミド
US7186747B2 (en) 2004-02-27 2007-03-06 Schering Corporation Compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
US7816326B2 (en) 2004-02-27 2010-10-19 Schering Corporation Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
WO2005113580A1 (en) 2004-05-21 2005-12-01 Pfizer Inc. Anticoronviral compounds and compositions, their pharmaceutical uses and materials for their synthesis
WO2006012227A2 (en) 2004-06-24 2006-02-02 Incyte Corporation Amido compounds and their use as pharmaceuticals
AU2005279042A1 (en) 2004-09-03 2006-03-09 Syngenta Limited Isoxazoline derivatives and their use as herbicides
WO2006035067A2 (en) 2004-09-30 2006-04-06 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Hiv inhibiting 5-heterocyclyl pyrimidines
ES2371924T3 (es) 2004-09-30 2012-01-11 Tibotec Pharmaceuticals Pirimidinas 5-carbo o heterociclo- sustituidas que inhiben el hiv.
CN100363346C (zh) * 2004-10-22 2008-01-23 清华大学 冠状病毒主蛋白酶的小分子抑制剂、制备方法及其应用
JP5118972B2 (ja) 2004-10-29 2013-01-16 テイボテク・フアーマシユーチカルズ Ｈｉｖ阻害性二環式ピリミジン誘導体
WO2006061714A2 (en) 2004-12-09 2006-06-15 Pfizer Inc. Anticoronaviral compounds and compositions, their pharmaceutical uses and materials for their synthesis
GB2422831A (en) 2005-02-04 2006-08-09 Oxagen Ltd Pyrrolopyridines and their use in the treatment of diseases mediated by PGD2 at the CRTH2 receptor
GB2422829A (en) 2005-02-04 2006-08-09 Oxagen Ltd Pyrrolopyridines and their use in the treatment of diseases mediated by PGD2 at the CRTH2 receptor
KR20070113286A (ko) 2005-04-14 2007-11-28 에프. 호프만-라 로슈 아게 아미노피라졸 유도체, 이의 제조 및 약학 제제로서의 용도
DE602006002887D1 (de) 2005-04-14 2008-11-06 Hoffmann La Roche Tricyclische azolderivate, ihre herstellung und ihre verwendung als pharmazeutische mittel
US20060281689A1 (en) 2005-06-02 2006-12-14 Schering Corporation Method for modulating activity of HCV protease through use of a novel HCV protease inhibitor to reduce duration of treatment period
WO2006130552A2 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Methods of treating hepatitis c virus
WO2007120160A2 (en) 2005-06-16 2007-10-25 Novartis Ag Lactam containing hcv inhibitors
CA2623534A1 (en) 2005-10-03 2007-04-12 Pfizer Products Inc. Inhibitors of the hiv integrase enzyme
WO2007058832A2 (en) 2005-11-12 2007-05-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pyrrolo (2, 3-b) pyridine derivatives useful as tec kinase inhibitors
DE102005055354A1 (de) 2005-11-21 2007-10-31 Merck Patent Gmbh Substituierte 5-Phenyl-3,6-dihydro-2-oxo-6H-[1,3,4]thiadiazine
BRPI0619955A2 (pt) 2005-12-15 2011-10-25 Hoffmann La Roche derivados tricìclicos da lactama, sua produção e seus usos como agentes farmacêuticos
DE102006012251A1 (de) 2006-03-15 2007-11-08 Grünenthal GmbH Substituierte 4-Amino-chinazolin-Derivate und ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln
CA2652307A1 (en) 2006-04-10 2007-10-18 Painceptor Pharma Corporation Compositions and methods for modulating gated ion channels
TW200815351A (en) 2006-05-02 2008-04-01 Astrazeneca Ab Novel compounds
WO2008037266A1 (en) 2006-09-25 2008-04-03 Universite Libre De Bruxelles Inhibitors of conventional protein kinase c isozymes and use thereof for treating inflammatory diseases
US20100093738A1 (en) 2006-10-06 2010-04-15 Basf Se Fungicidal Compounds and Fungicidal Compositions
US20090137549A1 (en) 2006-11-09 2009-05-28 Paul John Edward Novel compounds useful for the treatment of degenerative & inflamatory diseases
NZ577980A (en) 2006-12-27 2012-01-12 Sanofi Aventis Cycloalkylamine substituted isoquinolone derivatives
MX2009005964A (es) 2006-12-27 2009-06-15 Sanofi Aventis Derivados de isoquinolina sustituidos con cicloalquilamina.
CA2679185A1 (en) 2007-02-28 2008-09-04 Advinus Therapeutics Private Limited 2,2,2-tri-substituted acetamide derivatives as glucokinase activators, their process and pharmaceutical application
JP2008260716A (ja) 2007-04-12 2008-10-30 Sumitomo Chemical Co Ltd ヒドラジド化合物及びそれを含有する有害節足動物防除剤
JP2008280339A (ja) 2007-04-12 2008-11-20 Sumitomo Chemical Co Ltd ヒドラジド化合物及びそれを含有する有害節足動物防除剤
MX2009012471A (es) 2007-05-24 2010-02-24 Memory Pharm Corp Compuestos 4´sustituidos que tienen afinidad al receptor 5-hidroxitriptamina 6.
AU2008324833A1 (en) 2007-11-06 2009-05-14 E. I. Du Pont De Nemours And Company Fungicidal heterocyclic amines
US9446995B2 (en) 2012-05-21 2016-09-20 Illinois Institute Of Technology Synthesis of therapeutic and diagnostic drugs centered on regioselective and stereoselective ring opening of aziridinium ions
US10189803B2 (en) 2008-02-22 2019-01-29 Illinois Institute Of Technology Synthesis of therapeutic and diagnostic drugs centered on regioselective and stereoselective ring opening of aziridinium ions
GB0808952D0 (en) 2008-05-16 2008-06-25 Shire Llc Substituted quinazolines
GB0808950D0 (en) 2008-05-16 2008-06-25 Shire Llc Substituted quinazolines
GB0808967D0 (en) 2008-05-16 2008-06-25 Shire Llc Substitute quinazolines
GB0808953D0 (en) 2008-05-16 2008-06-25 Shire Llc substituted quinazolines
GB0808947D0 (en) 2008-05-16 2008-06-25 Shire Llc Substituted quinazolines
GB0808951D0 (en) 2008-05-16 2008-06-25 Shire Llc Substituted quinazolines
CA2721851A1 (en) 2008-05-30 2009-12-03 Genentech, Inc. Purine pi3k inhibitor compounds and methods of use
WO2010014179A1 (en) 2008-07-31 2010-02-04 Duke University Photolabile caged transition metal complexes and methods of using the same
WO2010039982A1 (en) 2008-10-01 2010-04-08 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Crth2 modulators
US8497269B2 (en) 2008-10-10 2013-07-30 Amgen Inc. Phthalazine compounds as p38 map kinase modulators and methods of use thereof
US8772481B2 (en) 2008-10-10 2014-07-08 Amgen Inc. Aza- and diaza-phthalazine compounds as P38 map kinase modulators and methods of use thereof
RS54998B1 (sr) 2008-12-22 2016-11-30 Chemocentryx Inc Antagonisti c5ar
US8569512B2 (en) 2009-03-23 2013-10-29 Merck Sharp & Dohme Corp. P2X3 receptor antagonists for treatment of pain
US20120202801A1 (en) 2009-05-27 2012-08-09 Liangxian Cao Methods for treating breast cancer
WO2010138652A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating kaposi sarcoma
WO2010138695A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating neurofibromatosis
WO2010138659A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating brain tumors
WO2010138685A1 (en) 2009-05-27 2010-12-02 Ptc Therapeutics, Inc. Methods for treating prostate conditions
US9221765B2 (en) 2009-06-10 2015-12-29 North Carolina State University Inhibition and dispersion of bacterial biofilms with benzimidazole derivatives
WO2011003932A2 (de) 2009-07-10 2011-01-13 Basf Se Verfahren zur direktaminierung von kohlenwasserstoffen zu aminokohlenwasserstoffen mit elektrochemischer abtrennung von wasserstoff
AU2010276441B2 (en) 2009-07-21 2015-07-02 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of Flaviviridae viruses
TW201107330A (en) 2009-07-31 2011-03-01 Biocryst Pharm Inc Heterocyclic compounds as janus kinase inhibitors
JP2011057661A (ja) 2009-08-14 2011-03-24 Bayer Cropscience Ag 殺虫性カルボキサミド類
TW201124078A (en) 2009-12-22 2011-07-16 Du Pont Fungicidal 2-(bicyclic aryloxy) carboxamides
MX2012008211A (es) 2010-01-15 2012-08-08 Gilead Sciences Inc Inhibidores de virus flaviviridae.
US8524764B2 (en) 2010-01-15 2013-09-03 Gilead Sciences, Inc. Inhibitors of Flaviviridae viruses
US8686145B2 (en) 2010-02-25 2014-04-01 Vereniging Voor Christelijk Hoger Onderwijs, Wetenschappelijk Onderzoek en Patientenzorg C/O Technology Transfer Officer VU & Vumc Process for the preparation of α-acyloxy β-formamido amides
WO2011132048A1 (en) 2010-04-19 2011-10-27 Glenmark Pharmaceutical S.A. Heteroaryl compounds as pde10a inhibitors
US9062072B2 (en) 2010-04-20 2015-06-23 Emory University Inhibitors of HIF and angiogenesis
US9198891B2 (en) 2010-05-21 2015-12-01 New York University Method of treating cancer by inhibition of protein kinase-like endoplasmic reticulum protein kinase
WO2012022045A1 (en) 2010-08-20 2012-02-23 Hutchison Medipharma Limited Pyrrolopyrimidine compounds and uses thereof
WO2012028578A1 (de) 2010-09-03 2012-03-08 Bayer Cropscience Ag Substituierte anellierte pyrimidinone und dihydropyrimidinone
WO2012058531A2 (en) 2010-10-29 2012-05-03 North Carolina State University Modulation of response regulators by imidazole derivatives
WO2012058173A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Hiv integrase inhibitors
WO2012087372A1 (en) 2010-12-22 2012-06-28 E. I. Du Pont De Nemours And Company Fungicidal 2-(bicyclic aryloxy)carboxamides
WO2012125668A1 (en) 2011-03-17 2012-09-20 Merck Sharp & Dohme Corp. TrkA KINASE INHIBITORS, COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF
EP2704576A4 (en) 2011-05-04 2014-12-10 Merck Sharp & Dohme METHOD FOR THE PRODUCTION OF INHIBITORS OF HEPATITIS C VIRUS
CN103748087A (zh) 2011-06-07 2014-04-23 大日本住友制药株式会社 吲唑和吡咯并吡啶衍生物和其药学用途
CN102827073A (zh) 2011-06-17 2012-12-19 安吉奥斯医药品有限公司 治疗活性组合物和它们的使用方法
CN102838523A (zh) 2011-06-23 2012-12-26 南开大学 抗肠病毒71(ev71)戊内酰胺类化合物及其制备方法和用途
JP6121658B2 (ja) 2011-06-29 2017-04-26 大塚製薬株式会社 治療用化合物、及び関連する使用の方法
WO2013012681A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Abbott Laboratories Tricyclic inhibitors of kinases useful for the treatment of proliferative diseases
EP2748137A1 (en) 2011-08-22 2014-07-02 Syngenta Participations AG Dihydrofuran derivatives as insecticidal compounds
CA2850003C (en) 2011-09-27 2020-01-07 Kansas State University Research Foundation Broad-spectrum antivirals against 3c or 3c-like proteases of picornavirus-like supercluster: picornaviruses, caliciviruses and coronaviruses
CN103130710B (zh) 2011-11-29 2015-12-16 南开大学 抗肠病毒71(ev71)己内酰胺醛类化合物及其制备方法和用途
CN103145608B (zh) 2011-12-07 2015-09-02 南开大学 抗肠病毒71(ev71)己内酰胺类化合物及其制备方法和用途
CN104114559B (zh) 2011-12-12 2016-08-24 拜耳知识产权有限责任公司 氨基取代的咪唑并哒嗪
SG11201403268QA (en) 2011-12-22 2014-07-30 Connexios Life Sciences Pvt Ltd Cyclic amide derivatives as inhibitors of 11 - beta - hydroxysteroid dehydrogenase and uses thereof
BR112014015720B1 (pt) 2011-12-30 2020-03-17 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Derivados de tieno[3,2-d]pirimidina, composição farmacêutica e uso dos mesmos para a prevenção ou tratamento de uma doença causada por ativação anormal de uma proteína quinase
US20150080381A1 (en) 2012-04-12 2015-03-19 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating alopecia and acne
MY170299A (en) 2012-04-20 2019-07-17 Kumiai Chemical Industry Co Alkyl phenyl sulfide derivative and pest control agent
EP2844249A4 (en) 2012-05-02 2016-03-09 Univ Kansas State MACROCYCLIC AND PEPTIDOMIMETIC COMPOUNDS AS VIRUZIDES AGAINST 3C OR 3C LIKE PROTEASES OF PICORNIVERS, CALICIVIRES AND CORONA VIRUSES
WO2013181135A1 (en) 2012-05-31 2013-12-05 Emory University Quinazoline derivatives, compositions, and uses related thereto
WO2013185124A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Wisconsin Alumni Research Foundation Antimicrobial compounds, compositions and methods of use thereof
MX2014014828A (es) 2012-06-27 2015-02-12 Hoffmann La Roche Compuestos de 5-azaindazol y metodos de uso.
EP2733143A1 (en) 2012-11-14 2014-05-21 Laboratorios Del Dr. Esteve, S.A. Substituted pyrazolo[3,4-d]pyrimidine compounds, their preparation and use as sigma receptors ligands
WO2014078214A1 (en) 2012-11-15 2014-05-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Azetidine benzimidazoles as pde10 inhibitors
JP2014133739A (ja) 2012-12-12 2014-07-24 Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd インダゾール誘導体またはピロロピリジン誘導体からなる医薬
CA2898440A1 (en) 2013-01-18 2014-07-24 Bristol-Myers Squibb Company Phthalazinones and isoquinolinones as rock inhibitors
WO2014172871A1 (en) 2013-04-25 2014-10-30 Syngenta Participations Ag Dihydrobenzofuran derivatives as insecticidal compounds
TWI646092B (zh) 2013-08-26 2019-01-01 拜耳作物科學股份有限公司 具有殺蟲活性之化合物
WO2015036059A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
CA2923101A1 (en) 2013-09-16 2015-03-19 Basf Se Fungicidal pyrimidine compounds
CA2926250A1 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of substituted dihydro-oxindolyl sulfonamides, or the salts thereof, for increasing the stress tolerance of plants
US9399640B2 (en) 2013-11-26 2016-07-26 Incyte Corporation Substituted pyrrolo[2,3-c]pyridines and pyrazolo[3,4-c]pyridines as BET protein inhibitors
JP5542237B1 (ja) 2013-11-28 2014-07-09 新日鉄住金エンジニアリング株式会社 高炉ガス乾式集塵設備のガス温度調節方法および高炉ガス乾式集塵設備
CN105899512A (zh) 2014-01-09 2016-08-24 拜耳医药股份公司 可用于治疗过度增殖性和/或血管生成疾病的酰胺基团取代的咪唑并哒嗪
BR112016015542B1 (pt) 2014-01-22 2022-08-30 Nabriva Therapeutics Ag 12-epi-pleuromutilinas, seus usos, e composição farmacêutica
NO2699580T3 (sr) 2014-01-24 2018-02-24
JP6295702B2 (ja) 2014-02-14 2018-03-20 東洋インキＳｃホールディングス株式会社 反応性単量体、およびそれを用いた重合性組成物
WO2015143653A1 (en) 2014-03-26 2015-10-01 Merck Sharp & Dohme Corp. TrkA KINASE INHIBITORS,COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF
WO2015155332A1 (en) 2014-04-11 2015-10-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Spiro[3h-indole-3,2'-pyrrolidin]-2(1h)-one derivatives and their use as mdm2-p53 inhibitors
CN105037367A (zh) 2014-04-18 2015-11-11 四川海思科制药有限公司 氨基六元环类衍生物及其在医药上的应用
JP6419313B2 (ja) 2014-05-09 2018-11-07 キネタ・インコーポレイテッドＫｉｎｅｔａ， Ｉｎｃ． 抗ウイルスの化合物、医薬組成物およびその使用方法
CN106536509B (zh) 2014-06-16 2020-06-09 基础应用医学研究基金会 作为组蛋白甲基转移酶和dna甲基转移酶的双重抑制剂的新型化合物
EP2957561A1 (en) 2014-06-18 2015-12-23 Université Paris 6 Pierre et Marie Curie UPMC Novel fluoroquinolones and use thereof to treat bacterial infections
EP3186239B1 (en) 2014-08-29 2018-10-10 Gilead Sciences, Inc. Antiretroviral agents
CN106922146B (zh) 2014-10-02 2020-05-26 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗由布鲁顿酪氨酸激酶(btk)介导的疾病的吡唑甲酰胺化合物
CN105566321B (zh) 2014-10-29 2020-04-21 广东东阳光药业有限公司 杂芳化合物及其在药物中的应用
JP6695875B2 (ja) 2014-11-20 2020-05-20 カウンシル・オブ・サイエンティフィック・アンド・インダストリアル・リサーチ 抗がん剤としての新規な１，３，５−トリアジン系ｐｉ３ｋ阻害剤及びその製造方法
JP6858712B2 (ja) 2015-01-30 2021-04-14 リーバー インスティテュート フォー ブレイン ディベロップメントＬｉｅｂｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｆｏｒ Ｂｒａｉｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏｍｔ阻害方法及び組成物
GB201501870D0 (en) 2015-02-04 2015-03-18 Cancer Rec Tech Ltd Autotaxin inhibitors
GB201502045D0 (en) 2015-02-06 2015-03-25 Ocado Innovation Ltd Device and method for purchasing goods and services
US9409872B1 (en) 2015-02-16 2016-08-09 Mark Quang Nguyen Fumarate compounds, pharmaceutical compositions thereof, and methods of use
MA41551A (fr) 2015-02-20 2017-12-26 Incyte Corp Hétérocycles bicycliques utilisés en tant qu'inhibiteurs de fgfr4
WO2016204816A1 (en) 2015-06-15 2016-12-22 Ruckus Wireless, Inc. Operator formed network consortiums
GB2548542A (en) 2015-06-16 2017-09-27 Redx Pharma Plc Compounds
FR3037955B1 (fr) 2015-06-25 2017-08-18 Univ Nantes Ligands polydentates et complexes metalliques
JP6739516B2 (ja) 2015-07-30 2020-08-12 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 呼吸器合胞体ウイルス阻害剤
KR20240158360A (ko) 2015-10-09 2024-11-04 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 Mdm2-p53 억제제로서의 스피로[3h-인돌-3,2'-피롤리딘]-2(1h)-온 화합물 및 유도체
CN110072864B (zh) 2015-12-24 2022-05-27 基因泰克公司 Tdo2抑制剂
CN106928206B (zh) 2015-12-31 2022-02-18 中国科学院上海药物研究所 醛基类化合物及其制法和用途
JP6806413B2 (ja) 2016-02-03 2021-01-06 塩野義製薬株式会社 多環性ピリドン誘導体およびそのプロドラッグ
WO2017155816A1 (en) 2016-03-09 2017-09-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Quinazoline compounds useful as m1 receptor positive allosteric modulators
US10166236B2 (en) 2016-03-21 2019-01-01 Perlara Pbc Pharmaceutical formulations comprising substituted pyrazolo[5,1-c]pyrido[4,3-e][1,2,4]triazines for treating lysosomal storage disorders
US9975885B2 (en) 2016-04-28 2018-05-22 Purdue Research Foundation Broad-spectrum non-covalent coronavirus protease inhibitors
TW201808888A (zh) 2016-05-05 2018-03-16 嘉來克生命科學有限責任公司 整合應激途徑之調節劑
TW201808903A (zh) 2016-05-05 2018-03-16 嘉來克生命科學有限責任公司 整合應激途徑之調節劑
TWI763668B (zh) 2016-05-05 2022-05-11 美商嘉來克生命科學有限責任公司 整合應激途徑之調節劑
US11021513B2 (en) 2016-05-13 2021-06-01 Emory University Peptidomimetics for the treatment of norovirus infection
CN107459511B (zh) 2016-06-02 2020-05-29 南开大学 抗肠病毒71(ev71)4-亚氨基恶唑烷-2-酮类化合物及其制备方法和用途
US20170355708A1 (en) 2016-06-09 2017-12-14 Cadent Therapeutics, Inc. Potassium channel modulators
WO2017222935A1 (en) 2016-06-20 2017-12-28 Kansas State University Research Foundation Small molecule therapeutic inhibitors against picornaviruses, caliciviruses, and coronaviruses
EP3481826B1 (en) 2016-07-08 2021-11-03 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Tyrosine kinase inhibitors
US20190292155A1 (en) 2016-07-15 2019-09-26 Lifesci Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic inhibitory compounds
WO2018023054A1 (en) 2016-07-28 2018-02-01 Kansas State University Research Foundation Protease transition state inhibitor prodrugs
TW201817714A (zh) 2016-08-30 2018-05-16 英商葛蘭素史密斯克藍智慧財產權有限公司 抑制3c及3cl蛋白酶之化合物及其使用方法
CN108069984B (zh) 2016-11-18 2021-02-05 沈阳中化农药化工研发有限公司 含嘧啶并环的取代五元杂环类化合物及其制备方法和用途
WO2018108627A1 (de) 2016-12-12 2018-06-21 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Verwendung substituierter indolinylmethylsulfonamide oder deren salze zur steigerung der stresstoleranz in pflanzen
EP3342779A1 (en) 2016-12-27 2018-07-04 Zedira GmbH Inhibitors of transglutaminases
US20180289676A1 (en) 2017-03-30 2018-10-11 Saint Louis University Compounds and methods targeting gper in cancer
CN108690043B (zh) 2017-04-11 2019-10-18 东莞东阳光科研发有限公司 喹啉类衍生物及其制备方法和用途
US10562896B2 (en) 2017-05-31 2020-02-18 Chemocentryx, Inc. 6-5 fused rings as C5a inhibitors
WO2018234139A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Basf Se 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi
JP2020152641A (ja) 2017-07-07 2020-09-24 国立研究開発法人理化学研究所 リジン特異的脱メチル化酵素１阻害活性を有する新規化合物、その製造方法及びその用途
AU2018344883B2 (en) 2017-10-02 2024-03-07 Scientist Of Fortune S.A. Cellular transport system for transferring a sulfonic acid construct carrying a cargo into the cytoplasm of a cell
EP3694528A4 (en) 2017-10-13 2021-07-28 The Regents of the University of California MTORC1 MODULATORS
WO2019086474A1 (en) 2017-10-31 2019-05-09 Syngenta Participations Ag Pesticidally active mesoionics heterocyclic compounds
WO2019089412A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel substituted tetrahydroquinolin compounds as indoleamine 2,3-dioxygenase (ido) inhibitors
WO2019104070A1 (en) 2017-11-21 2019-05-31 Nanostring Technologies, Inc. O-nitrobenzyl photocleavable bifunctional linker
WO2019101551A1 (en) 2017-11-23 2019-05-31 Basf Se Herbicidal phenylethers
CN111902386A (zh) 2017-12-28 2020-11-06 瑞璞鑫(苏州)生物科技有限公司 作为fto抑制剂的苯基甲酮衍生物
CN109988109B (zh) 2017-12-29 2020-12-29 广东东阳光药业有限公司 抑制ssao/vap-1的胺类化合物及其用途
GB201801355D0 (en) 2018-01-26 2018-03-14 Enterprise Therapeutics Ltd Compounds
EP3759078A1 (en) 2018-03-02 2021-01-06 Inflazome Limited Novel compounds
US20190282703A1 (en) 2018-03-13 2019-09-19 Mavupharma, Inc. Ectonucleotide pyrophosphatase-phosphodiesterase (enpp) conjugates and uses thereof
EP3775186A4 (en) 2018-03-30 2022-01-05 AbbVie Inc. ECTONUCLEOTIDE PYROPHOSPHATE-PHOSPHODIESTERASE (ENPP) CONJUGATES AND THEIR USES
WO2019201432A1 (en) 2018-04-17 2019-10-24 Zedira Gmbh Inhibitors of blood coagulation factor xiii
US11708376B2 (en) 2018-04-20 2023-07-25 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Substituted imidazo[4,5-b]pyridines, imidazo[4,5-b]pyrazines, and oxazolo[4,5- b]pyrazines as mitochondrial uncouplers
WO2019228289A1 (zh) 2018-05-29 2019-12-05 沈阳化工大学 一种取代恶二唑类化合物及其应用
WO2019232245A1 (en) 2018-06-01 2019-12-05 The Regents Of The University Of California A method for fluorinated ring-opening of a substrate
EP3820500A4 (en) 2018-07-13 2022-04-13 Teqla Therapeutics, Inc. USE OF BCL6 INHIBITORS FOR THE TREATMENT OF AUTOIMMUNE DISEASES
RU2761824C2 (ru) 2018-08-03 2021-12-13 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Ингибиторы CDK8/19
CN110818691A (zh) 2018-08-09 2020-02-21 中国科学院上海药物研究所 酮酰胺类化合物及其制备方法、药物组合物和用途
US11884685B2 (en) 2018-08-16 2024-01-30 Cornell University Rhenium complexes and methods of use for treating cancer
EP3843846A4 (en) 2018-08-27 2022-09-07 Spinogenix, Inc. FASCIN-BINDING COMPOUNDS FOR SPINOGENESIS
SG11202105256QA (en) 2018-11-21 2021-06-29 Accutar Biotechnology Inc Novel compounds having estrogen receptor alpha degradation activity and uses thereof
EP3656762A1 (en) 2018-11-26 2020-05-27 Instituto Biomar S.A. Compounds for the treatment of nf-kb-related diseases or disorders
BR112021012950A2 (pt) 2019-01-03 2021-09-14 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Métodos e materiais para aumentar os níveis de polipeptídeo do fator de transcrição eb
AR118119A1 (es) 2019-02-18 2021-09-22 Genentech Inc Compuestos de pirido-pirimidinilo y métodos de uso
WO2020169682A1 (en) 2019-02-19 2020-08-27 Yncrea Hauts De France Hydrazide derivatives and their specific use as antibacterial agents by controlling acinetobacter baumannii bacterium
CN110105348A (zh) 2019-03-08 2019-08-09 南开大学 新型迈克尔受体类肠病毒71型抑制剂的制备及用途
BR112021017957A2 (pt) 2019-03-28 2021-11-23 Jiangsu Hengrui Medicine Co Derivado tienoeterocíclico, método de preparação do mesmo e uso médico do mesmo
BR112021024310A2 (pt) 2019-06-05 2022-02-15 Univ Emory Peptidomiméticos para o tratamento de infecções por coronavírus e picornavírus
KR20220151038A (ko) * 2020-03-31 2022-11-11 피닉스 바이오테크놀러지 인코포레이티드. 코로나바이러스 감염 예방를 위한 조성물
PH12021552872A1 (en) * 2020-04-05 2022-03-21 Pfizer Compounds and methods for the treatment of covid-19
AU2021254045A1 (en) * 2020-04-10 2022-10-13 Cocrystal Pharma, Inc. Inhibitors of norovirus and coronavirus replication
US11124497B1 (en) 2020-04-17 2021-09-21 Pardes Biosciences, Inc. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
US11174231B1 (en) 2020-06-09 2021-11-16 Pardes Biosciences, Inc. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
BR112021023814A2 (pt) 2020-06-09 2022-12-20 Pardes Biosciences Inc Inibidores de proteases de cisteína e métodos de uso das mesmas
PH12022553378A1 (en) 2020-06-10 2024-03-25 Univ Leuven Kath Anti-viral compounds for treating coronavirus, picornavirus, and norovirus infections
US20220033383A1 (en) 2020-07-20 2022-02-03 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Functionalized peptides as antiviral agents

Also Published As

Publication number Publication date
BR122023004755B1 (pt) 2024-01-30
CN114681443A (zh) 2022-07-01
PL3953330T3 (pl) 2023-01-16
HRP20221379T1 (hr) 2023-01-06
HRP20241513T1 (hr) 2025-01-03
IL287880B2 (en) 2024-08-01
SI4166539T1 (sl) 2025-01-31
MD4166539T2 (ro) 2025-01-31
HUE069570T2 (hu) 2025-03-28
NZ782196A (en) 2022-08-26
TW202214604A (zh) 2022-04-16
AU2022221493B2 (en) 2024-03-28
EP4166539A1 (en) 2023-04-19
SI3953330T1 (sl) 2023-01-31
AU2022202158B2 (en) 2022-06-02
SA521430792B1 (ar) 2024-08-13
EP4516301A3 (en) 2025-04-02
KR102481876B1 (ko) 2022-12-29
TW202317540A (zh) 2023-05-01
EP4516301A2 (en) 2025-03-05
US20250099424A1 (en) 2025-03-27
ZA202204779B (en) 2022-10-26
LT4166539T (lt) 2024-11-25
JP2022534186A (ja) 2022-07-28
RS63714B1 (sr) 2022-11-30
GEAP202315794A (en) 2023-01-25
CN114466838B (zh) 2023-05-02
EP4166539B1 (en) 2024-10-09
ES2932173T3 (es) 2023-01-16
MX2024003960A (es) 2024-04-29
KR20220031547A (ko) 2022-03-11
CN114466838A (zh) 2022-05-10
GEP20237515B (en) 2023-06-12
CA3137824A1 (en) 2022-03-03
AU2021266232B1 (en) 2022-02-03
HUE060811T2 (hu) 2023-04-28
CR20210558A (es) 2022-01-24
US20220142976A1 (en) 2022-05-12
PT3953330T (pt) 2022-12-06
AU2022221493A1 (en) 2022-10-13
CO2021015067A2 (es) 2022-01-17
GEP20247607B (en) 2024-03-11
PE20220432A1 (es) 2022-03-29
AU2022202158A1 (en) 2022-04-21
US11351149B2 (en) 2022-06-07
JP7788360B2 (ja) 2025-12-18
UY39372A (es) 2022-03-31
PE20241760A1 (es) 2024-08-28
PL4166539T3 (pl) 2025-02-03
DK4166539T3 (da) 2024-10-28
MA63032B1 (fr) 2024-12-31
TWI845093B (zh) 2024-06-11
DK3953330T3 (da) 2022-10-24
JP2022166188A (ja) 2022-11-01
IL299071A (en) 2023-02-01
EP3953330A1 (en) 2022-02-16
WO2021250648A1 (en) 2021-12-16
KR20220045251A (ko) 2022-04-12
PT4166539T (pt) 2024-12-09
EP3953330B1 (en) 2022-10-12
CL2021002965A1 (es) 2022-01-28
US20230120254A1 (en) 2023-04-20
CN114681443B (zh) 2024-05-10
DOP2023000168A (es) 2023-10-15
IL299071B2 (en) 2025-04-01
US20220062232A1 (en) 2022-03-03
BR112021022419A2 (pt) 2022-05-10
FI4166539T3 (fi) 2024-12-10
ZA202108834B (en) 2023-04-26
US11541034B2 (en) 2023-01-03
IL287880B1 (en) 2024-04-01
ZA202204781B (en) 2022-10-26
PH12021552851A1 (en) 2022-07-18
ECSP21080528A (es) 2022-01-31
US11452711B2 (en) 2022-09-27
PY2165555A (es) 2022-12-07
MD3953330T2 (ro) 2023-01-31
JP7126628B2 (ja) 2022-08-26
BR112021022419B1 (pt) 2023-04-25
KR102794132B1 (ko) 2025-04-11
CA3137824C (en) 2022-11-08
TWI790704B (zh) 2023-01-21
US20220257563A1 (en) 2022-08-18
MY196455A (en) 2023-04-12
IL287880A (en) 2022-01-01
MX2021013679A (es) 2022-01-24
CN116789648A (zh) 2023-09-22
ES3000422T3 (en) 2025-02-28
IL299071B1 (en) 2024-12-01
LT3953330T (lt) 2022-12-12
AU2021266232C1 (en) 2022-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7788360B2 (ja) ニトリル含有抗ウイルス化合物
RU2845865C2 (ru) Нитрилсодержащие противовирусные соединения
RU2820150C2 (ru) Нитрилсодержащие противовирусные соединения
RU2786722C1 (ru) Нитрилсодержащие противовирусные соединения
EA046321B1 (ru) Нитрилсодержащие противовирусные соединения
EA047572B1 (ru) Нитрилсодержащие противовирусные соединения
HK40064692B (en) Nitrile-containing antiviral compounds
OA21481A (en) Nitrile-containing antiviral compounds.