RU2249042C2 - Способ получения производных стероидных гликозидов ruscus aculeatus методом ферментативного гидролиза - Google Patents
Способ получения производных стероидных гликозидов ruscus aculeatus методом ферментативного гидролиза Download PDFInfo
- Publication number
- RU2249042C2 RU2249042C2 RU2001132330/13A RU2001132330A RU2249042C2 RU 2249042 C2 RU2249042 C2 RU 2249042C2 RU 2001132330/13 A RU2001132330/13 A RU 2001132330/13A RU 2001132330 A RU2001132330 A RU 2001132330A RU 2249042 C2 RU2249042 C2 RU 2249042C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- enzymatic hydrolysis
- ruscus aculeatus
- preparing
- steroid glycosides
- preceding paragraphs
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 240000000353 Ruscus aculeatus Species 0.000 title claims abstract description 6
- 235000003500 Ruscus aculeatus Nutrition 0.000 title claims abstract description 5
- 229930002534 steroid glycoside Natural products 0.000 title claims abstract description 5
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims abstract description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 abstract 1
- PKQGPNNFRIIDFC-MTRMYNQZSA-N Ruscoside Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)CO[C@H]1O[C@@H]1CC2=CC[C@H]3[C@@H]4C[C@H]5[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)[C@H](O)C1)C)[C@@H]([C@@](O5)(O)CCC(=C)CO[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O PKQGPNNFRIIDFC-MTRMYNQZSA-N 0.000 description 4
- JWGLJRXUTIFBHW-GKDQWZISSA-N Ruscoside Natural products O(CC(=C)CC[C@]1(O)[C@H](C)[C@@H]2[C@]3(C)[C@H]([C@H]4[C@@H]([C@@]5(C)[C@H](O[C@H]6[C@H](O[C@H]7[C@H](O)[C@@H](O[C@H]8[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O8)[C@@H](O)[C@H](C)O7)[C@H](O)[C@H](O)CO6)C[C@H](O)CC5=CC4)CC3)C[C@@H]2O1)[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 JWGLJRXUTIFBHW-GKDQWZISSA-N 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- LBBBWHJWPKKHAK-UHFFFAOYSA-N Ruscin Natural products O1C2(OCC(=C)CC2)C(C)C(C2(CCC3C4(C)C(O)C5)C)C1CC2C3CC=C4CC5OC1OCC(O)C(O)C1OC(C1O)OC(C)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O LBBBWHJWPKKHAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- KEBKEYDWZYNHHS-KNQIUGTDSA-N ruscin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)CO[C@H]1O[C@@H]1C[C@H](O)CC2=CC[C@H]3[C@@H]4C[C@H]5[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@]21C)C)[C@@H]([C@]1(OCC(=C)CC1)O5)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O KEBKEYDWZYNHHS-KNQIUGTDSA-N 0.000 description 1
- KEBKEYDWZYNHHS-UHFFFAOYSA-N ruscoponticoside D Natural products O1C2(OCC(=C)CC2)C(C)C(C2(CCC3C45C)C)C1CC2C3CC=C4CC(O)CC5OC1OCC(O)C(O)C1OC(C1O)OC(C)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O KEBKEYDWZYNHHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000011514 vinification Methods 0.000 description 1
- 150000008495 β-glucosides Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу получения производных стероидных гликозидов Ruscus aculeatus (рускосапонинов). Способ получения десглюкодесрамнорусцина включает ферментативный гидролиз стероидных гликозидов Ruscus aculeatus (рускосапонинов) с помощью неочищенных гидролаз из Aspergillus niger. Способ позволяет получить десглюкодесрамнорусцин с высокой степенью эффективности. 5 з.п. ф-лы.
Description
Настоящее изобретение относится к способу получения производных стероидных гликозидов Ruscus aculeatus (рускосапонинов).
Более конкретно, настоящее изобретение относится к способу получения десглюкодесрамнорусцина неполным ферментативным гидролизом русцина, десглюкорусцина или рускозида.
Известен способ получения десглюкодесрамнорусцина из сапонинов Ruscus aculeatus путем ферментативного гидролиза такадиастазой (DE 2202393 A). Такадиастазу получают гидролизом из Aspergillus oryzae, причем в данном источнике не упоминается фермент целлюлаза.
В соответствии с настоящим изобретением ферментативный гидролиз проводят с помощью неочищенных ферментных препаратов на основе гидролаз, экстрагированных из Aspergillus niger. Указанные препараты представляют собой коммерчески доступные материалы, которые применяются в виноделии и пищевой промышленности. Особенно предпочтительно использовать препарат коммерчески доступный от Gist Brocades под торговой маркой Cytolase PCL5.
Указанные ферментативные препараты одновременно обладают β-глюкопиранозидазной и α-рамнопиранозидазной активностями и вследствие этого обеспечивают последовательное удаление β-глюкозидного и α-рамнозидного остатков с получением желаемого продукта.
Ферментативный гидролиз проводят в водном растворе, забуференном до рН 5, или в воде, содержащей до 30 об.% этанола. Было установлено, что на практике присутствие этанола не оказывает нежелательного влияния на ферментативную активность: в присутствии этанола наблюдается увеличение β-глюкопиранозидазной активности, и хотя α-рамнопиранозидазная активность несколько уменьшается, такое падение активности никоим образом не влияет на реакцию настоящего изобретения. Для полного растворения десглюкорусцина необходимо присутствие около 30% об./об. этанола, тогда как для рускозида требуются более низкие количества, порядка 17% об./об. В связи с этим применение последнего из указанных веществ в некоторых случаях более предпочтительно, поскольку оно не требует специальных предварительных обработок, а также в связи с тем, что поверхностно-активные свойства этого вещества обеспечивают растворение десглюкорусцина, образующегося на первой стадии ферментативного гидролиза, причем последующая трансформация в α-рамнопиранозидазу осуществляется более эффективно.
Концентрация рускосапонина может иметь значение в интервале 5-40% мас./об., причем реакцию гидролиза проводят при температурах в интервале 20-50°С в течение времени от 3 до 7 дней.
По окончании процесса биопревращения конечный продукт - десглюкодесрамнорусцин, не растворимый в реакционной системе, может быть легко выделен центрифугированием и последующей промывкой метанолом. Кроме этого, благодаря стабильности используемого фермента способ согласно изобретению может осуществляться непрерывно, с удалением в определенное время гидролизованного продукта и непрерывным добавлением свежего субстрата. Для этой цели с тем, чтобы исключать накопление ингибиторов и денатурированных молекул, предпочтительно использовать биореактор, снабженный ультрафильтрационной мембраной.
Следующий ниже пример более подробно иллюстрирует настоящее изобретение.
Пример
Ферментный препарат Cytolase PCL5 (Gist Brocades) перед применением подвергали диафильтрации против 0,1М цитрат-фосфатного буфера с рН 5 в аппарате Amicon, снабженном мембраной ХМ (отсечение 50 кДа) с целью удаления денатурирующих агентов и ингибиторов.
Смесь для инкубации готовили добавлением в указанном порядке следующих материалов: субстрата (десглюкорусцин или рускозид), 0,1М цитрат-фосфатного буфера с рН 5, Cytolase PCL5 и при медленном перемешивании этанола. Концентрация субстрата может изменяться в интервале 5-40% (мас./об.), а концентрация этанола в интервале 0-30% (об./мас.). Ход реакции контролировали методом ТСХ на силикагелевых пластинах (60 F250 Merck), используя смесь этилацетат/метанол/вода в соотношении 100:15:10, в качестве элюента. Активность ферментативного препарата составляла 38 единиц β-глюкопиранозидазы и 2,3 единицы α-рамнопиранозидазы в расчете на мл инкубационной смеси.
Биопревращение проводили при температуре 25°С. Трансформация в десглюкодесрамнорусцин завершалась за 72 часа при использовании десглюкорусцина в качестве исходного вещества и за 96 часов при использовании рускозида в качестве исходного материала.
После этого инкубационную смесь центрифугировали с нагрузкой в 12100 г в течение 30 минут при 4°С. Осадок промывали метанолом и снова центрифугировали при указанных выше условиях. Указанную стадию повторяли пять раз и супернатанты сливали. Затем метанольный раствор выпаривали в вакууме и полученный в результате продукт растирали в порошок с получением тонкоизмельченного темно-желтого порошка, содержащего 20% десглюкодесрамнорусцина (анализ методом ВЭЖХ).
Claims (6)
1. Способ получения десглюкодесрамнорусцина, включающий ферментативный гидролиз стероидных гликозидов Ruscus aculeatus (рускосапонинов) с помощью неочищенных гидролаз из Aspergillus niger.
2. Способ по п.1, в котором неочищенная гидролаза представляет собой препарат Cytolase PCL5.
3. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором гидролиз осуществляют в водном растворе с рН 5, или в водно-этанольной смеси, содержащей до 30 об.% этанола.
4. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором концентрация рускосапонина составляет 5-40% мас./об.
5. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором гидролиз проводят при температурах в интервале 20-40°С в течение времени от 3 до 7 дней.
6. Способ по любому из предыдущих пунктов, в котором конечный продукт выделяют центрифугированием и промывкой метанолом.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITMI99A001222 | 1999-06-01 | ||
| IT1999MI001222A ITMI991222A1 (it) | 1999-06-01 | 1999-06-01 | Processo per la preparazione di derivati di glicosidi steroidei di ruscus aculeatus mediante idrolisi enzimatica |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2001132330A RU2001132330A (ru) | 2003-10-10 |
| RU2249042C2 true RU2249042C2 (ru) | 2005-03-27 |
Family
ID=11383096
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2001132330/13A RU2249042C2 (ru) | 1999-06-01 | 2000-05-29 | Способ получения производных стероидных гликозидов ruscus aculeatus методом ферментативного гидролиза |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6911325B1 (ru) |
| EP (1) | EP1180161B1 (ru) |
| JP (1) | JP4603220B2 (ru) |
| KR (1) | KR100685529B1 (ru) |
| CN (1) | CN1198941C (ru) |
| AT (1) | ATE339513T1 (ru) |
| AU (1) | AU773232B2 (ru) |
| CA (1) | CA2375090C (ru) |
| CZ (1) | CZ301179B6 (ru) |
| DE (1) | DE60030711T2 (ru) |
| DK (1) | DK1180161T3 (ru) |
| ES (1) | ES2272286T3 (ru) |
| HK (1) | HK1048338B (ru) |
| HU (1) | HUP0201379A3 (ru) |
| IL (1) | IL146826A0 (ru) |
| IT (1) | ITMI991222A1 (ru) |
| NO (1) | NO326846B1 (ru) |
| PL (1) | PL200909B1 (ru) |
| PT (1) | PT1180161E (ru) |
| RU (1) | RU2249042C2 (ru) |
| SK (1) | SK286062B6 (ru) |
| WO (1) | WO2000073483A2 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2484839C1 (ru) * | 2012-02-06 | 2013-06-20 | Михаил Михайлович Шашурин | Способ получения экстракта рододендрона золотистого с пониженным содержанием стероидных (сердечных) гликозидов |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013516963A (ja) | 2010-01-19 | 2013-05-16 | ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． | ステビオシドからステビオールを酵素的に調製する方法 |
| CN102205071B (zh) * | 2011-05-28 | 2012-07-04 | 吴汉利 | 一种治疗甲状腺囊肿的中药组合物 |
| CN103588852B (zh) * | 2013-11-26 | 2016-03-30 | 陕西嘉禾生物科技股份有限公司 | 从假叶树中提取分离鲁斯可皂苷元的方法 |
| MX2023006769A (es) * | 2020-12-09 | 2023-08-18 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modificacion de saponinas. |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2104911B1 (ru) * | 1970-09-03 | 1974-08-30 | Investigations Scient Pharmace |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1380253A (en) | 1971-01-21 | 1975-01-08 | Inverni Della Beffa Spa | Prosapogenins |
| JPS59192075A (ja) * | 1983-04-12 | 1984-10-31 | Dainippon Ink & Chem Inc | アロエ抽出物の苦味改良法 |
-
1999
- 1999-06-01 IT IT1999MI001222A patent/ITMI991222A1/it unknown
-
2000
- 2000-05-29 SK SK1747-2001A patent/SK286062B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-05-29 DE DE60030711T patent/DE60030711T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-05-29 US US09/979,106 patent/US6911325B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-05-29 PL PL352148A patent/PL200909B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-05-29 KR KR1020017015366A patent/KR100685529B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2000-05-29 IL IL14682600A patent/IL146826A0/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-05-29 AT AT00935137T patent/ATE339513T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-05-29 CZ CZ20014282A patent/CZ301179B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-05-29 RU RU2001132330/13A patent/RU2249042C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-05-29 PT PT00935137T patent/PT1180161E/pt unknown
- 2000-05-29 JP JP2001500795A patent/JP4603220B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-05-29 CA CA2375090A patent/CA2375090C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-05-29 HK HK03100588.5A patent/HK1048338B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-05-29 AU AU50732/00A patent/AU773232B2/en not_active Ceased
- 2000-05-29 EP EP00935137A patent/EP1180161B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-05-29 CN CNB008082448A patent/CN1198941C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-05-29 HU HU0201379A patent/HUP0201379A3/hu unknown
- 2000-05-29 DK DK00935137T patent/DK1180161T3/da active
- 2000-05-29 ES ES00935137T patent/ES2272286T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-05-29 WO PCT/EP2000/004873 patent/WO2000073483A2/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-11-29 NO NO20015823A patent/NO326846B1/no not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2104911B1 (ru) * | 1970-09-03 | 1974-08-30 | Investigations Scient Pharmace |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ПЕРЕПЕЛИЦА Э.Д., и др., Условия расщепления ферментным препаратом Aspergillus niger BKMt-33 протодиосцина - основного гликозида из Tribulus terrestris. 1. Прикладная биохимия и микробиология, №11, 1975, с.901-905. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2484839C1 (ru) * | 2012-02-06 | 2013-06-20 | Михаил Михайлович Шашурин | Способ получения экстракта рододендрона золотистого с пониженным содержанием стероидных (сердечных) гликозидов |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE1931098A1 (de) | Verfahren zur Reinigung von L-Asparaginase | |
| CA2375090C (en) | A process for the preparation of derivatives of ruscus aculeatus steroid glycosides by enzymatic hydrolysis | |
| JP2003501044A6 (ja) | 酵素的加水分解によるＲｕｓｃｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓステロイド配糖体の誘導体の製造方法 | |
| Cui et al. | Purification and characterization of an intracellular carboxylesterase from Arthrobacter viscosus NRRL B-1973 | |
| JP5317828B2 (ja) | 植物組織の可溶化方法及び混合酵素製剤 | |
| DE3147947C2 (de) | Verfahren zur Herstellung halbsynthetischer Enzyme | |
| RU2001132330A (ru) | Способ получения производных стероидных гликозидов RUSCUS ACULEATUS методом ферментативного гидролиза | |
| PL200908B1 (pl) | Sposób otrzymywania desglukodesramnoruscyny | |
| US3070512A (en) | Process of splititing steroids | |
| McConnell et al. | The Proteolytic Enzymes of Microorganisms: V. Extracellular Peptidases Produced by Fungi Grown in Submerged Culture | |
| FR2509749A1 (fr) | Procede d'hydrolyse d'un substrat cellulosique et preparation cellulolytique | |
| Bilen et al. | The effect of crosslinking on thermal inactivation of cellulases | |
| TSURU et al. | Inactivation of Rhizopus chinensis acid protease by some diazo compounds | |
| JPH06284897A (ja) | β型ポリフェノール配糖体の製法 | |
| WO2002098824A2 (en) | Improvements in enzyme stability | |
| US20090142809A1 (en) | Method for Cleaving Cervimycin Monoesters | |
| OHYAMA et al. | Studies on amylase inhibitor (S-AI) from Streptomyces diastaticus subsp. amylostaticus No. 2476. II. Purification and some properties of amylase inhibitor (S-AI). | |
| JPS6034198A (ja) | リボフラビンテトラブチレ−トの製造方法 | |
| JP2013198505A (ja) | 植物組織の可溶化方法及び混合酵素製剤 | |
| JPH01101883A (ja) | エステラーゼ活性物質及びその製造方法 | |
| JPH03266994A (ja) | Ｌ‐チロシンの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110530 |