SA515360190B1 - مركبات ترابطية rig-i جديدة وطرق إنتاجها - Google Patents

مركبات ترابطية rig-i جديدة وطرق إنتاجها Download PDF

Info

Publication number
SA515360190B1
SA515360190B1 SA515360190A SA515360190A SA515360190B1 SA 515360190 B1 SA515360190 B1 SA 515360190B1 SA 515360190 A SA515360190 A SA 515360190A SA 515360190 A SA515360190 A SA 515360190A SA 515360190 B1 SA515360190 B1 SA 515360190B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
tva
oligonucleotide
nen
eee
nucleotide
Prior art date
Application number
SA515360190A
Other languages
English (en)
Inventor
فان دين بورن جاسبير
لودويج جانوس
شوبيرث- واجنير كريستيان
جولديك ماريون
Original Assignee
راينيشه فريدريش- فيلهلمز- اونيفيسيتيت بون
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by راينيشه فريدريش- فيلهلمز- اونيفيسيتيت بون filed Critical راينيشه فريدريش- فيلهلمز- اونيفيسيتيت بون
Publication of SA515360190B1 publication Critical patent/SA515360190B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A61K9/0021—Intradermal administration, e.g. through microneedle arrays or needleless injectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/02—Phosphorylation
    • C07H1/04—Introducing polyphosphoric acid radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/315—Phosphorothioates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3513—Protein; Peptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3517—Marker; Tag
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/352—Nature of the modification linked to the nucleic acid via a carbon atom
    • C12N2310/3527—Other alkyl chain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/353—Nature of the modification linked to the nucleic acid via an atom other than carbon
    • C12N2310/3533—Halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Organic Insulating Materials (AREA)
  • Electric Propulsion And Braking For Vehicles (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي مع اوليجونيكلوتيدات oligonucleotides معدلة مع triphosphate جديدة التي قد تعمل كمركبات ترابطية RIG-I جين قابل للحث بحمض ريتانيلي الشكل I retinoid acid-inducible gene I بالإضافة إلى طرق جديدة تتيح التخليق والتنقية بإنتاجية عالية ونقاء مناسبين للتطبيقات الدوائية .

Description

_ \ —_ ‏جديدة وطرق إنتاجها‎ 86-١ ‏مركبات ترابطية‎
Novel ‏احون‎ Ligands and Methods for Producing Them ‏الوصف الكامل‎ خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي باوليجونيوكليودات ‎oligonucleotides‏ معدلة مع ‎triphosphate‏ جديدة قد تعمل كمركبات ترابطية ‎46-١‏ جين ‎Gall LE‏ بحمض ريتانيلي الشكل ‎retinoid acid-inducible gene |‏ بالإضافة إلى تركيبة دوائية تشتمل نفس الشيء؛ على ‎o‏ النحو المحدد في عناصر الحماية. ‏إن 25-34 ,31 ,2009 ‎Schlee et al., Immunity,‏ يصف ‎RNAs‏ (أحماض ‎5'-O-triphosphate ‏تحمل جزء‎ (blunt-ended) ‏مزدوجة الجديلة ممسوحة‎ (ribonucleic ‏على واحدة من الجدائل التي تعمل كمثيرات فعالية للجهاز المناعي بربط ‎.RIG-I helicase‏ ‏بالتالي» هناك حاجة لتوفير طريقة بسيطة وفعالة لتحضير ‎oligonucleotides‏ معدلة مع ‎triphosphate | ٠‏ بإنتاجية عالية؛ مناسبة للتطبيقات الدوائية. ‏يعرف جيدا في ‎call‏ اقتران مجموعات ‎triphosphate‏ أو مماثلاتها مع مجموعة ‎5-0١‏ من ‎Ludwig J. et al., J. Org. Chem., 1989, 54, 631 - ‏اكتشف‎ .nucleosidic ‏مركبات‎ ‏635 طريقة ‎triphosphorylation‏ محلول لتحضير ‎5'-O-triphosphates‏ من ‎2—chloro—4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin—4— ‏ومماثلاته باستخدام‎ nucleosides
Gaur R.K. et al.,1992, Tetrahedron ‏يصف‎ .phosphitylating ‏كعامل‎ one ١٠ ‎Letters, 33, 3301-3304‏ استخدام الطريقة المذكورة على طور صلب لتخليق -2-0 ‎methylribonucleoside 5'-O-triphosphates‏ ومماثلاته 00-1010. تكشف براءة ‏الاختراع الأمريكية رقم 1960764 ‎You‏ عن تخليق طور صلب من -0-'5 ‎nucleoside‏ ‎Alas triphosphates‏ كمركبات مضادة فيروسيا محتملة وتكشف براءات الاختراع الأمريكية ‎٠‏ أرقام ‎1077٠0 (VYACTOA‏ دلا و 807لا 8ل عن مماثلات ‎nucleosides triphosphate‏ ‏مع تعديلات في السكرء قاعدة نيتروجينية ‎(nucleobase)‏ وفي كيان ‎triphosphate‏ ‎TVA
د يصف الطلب الدولي رقم 96/401949 طريقة لإنتاج ‎RNA‏ مغطى ‎J‏ جزيئات مماتئل ‎(RNA‏ ‏حيث يتفاعل ‎RNA‏ أو ‎oligonucleotide‏ مثيل ‎RNA‏ مع عامل ‎phosphitylating‏ مثل -2 ‎chloro—4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin—-4-one‏ أو مشتق مستبدل مع حلقة من هذا. يتفاعل المركب الوسطي الناتج مع ‎phosphate‏ أو ‎pyrophosphate‏ أو ملح من ‎«lly‏ ‏© يتأكسد أو ينحل مائيا. يغطى ‎J triphosphorylated RNA J diosphorylated RNA‏ مماثل ‎RNA‏ بالتفاعل مع ‎triphosphate‏ 76ص ‎m7G diphosphate‏ أو ‎m7G‏ ‎monophosphate‏ منشط أو مماثل. يصف الطلب ‎YAY Jal‏ 009/060 مماثلات ‎oligoribonucleotide‏ مثيرة للمناعة تحتوي على أجزاء ‎oligophosphate‏ معدلة وطرق تحضير هذه المركبات. هذه ‎٠‏ الطريقة تتضمن تخليق ‎oligonucleotide‏ على ‎Ala Ades‏ تفاعل النيكلوتيد ‎(nucleotide)‏ عند الطرف "3 من ‎oligonucleotide‏ مع عامل ‎phosphitylating‏ مثل ‎2—chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin-4-one‏ في مذيب مناسب وفي وجود ‎acl‏ تفاعل ‎phosphitylated oligonucleotide‏ مع ‎pyrophosphate‏ أو مماثل ‎(pyrophosphate‏ أكسدة 011600000606 مع عامل أكسدة وإزالة حماية ‎oligonucleotide‏ ‎١‏ لإعطاء ‎Oligonucleotide‏ معدل مع ‎triphosphate il.
J triphosphate‏ إن الارتحال الكهربي بهلام ‎WS Polyacrylamide‏ هو مستعمل في الطلب الدولي رقم 4 _يكون ‎JB‏ للتطبيق فقط لعمليات فصل صغيرة النطاق. تكون قوة انحلال التحليل الكروماتوجرافي ‎Jalal‏ الأيون لمنتجات ‎«5'-monophosphorylated‏ ‎5'-triphosphorylated (5'-diphosphorylated‏ من ‎oligoribonucleotides‏ أطول ‎٠‏ محدودة. إن شروط تغيير الطبيعة المطلوبة تجعل الفصل مهمة شاقة ) ‎Sproat, 1999; Zlatev,‏ ‎dsl lhl cet al.
Organic Letters 12(10): 2190-2193 (2010)‏ رقم ‎(Yee 5/0107‏ علاوة ‎da Je‏ تتلوث المنتجات عادة ‎ae‏ ترتيبات ‎«n-1‏ 0-2 و ‎diphosphates ymonophosphates‏ الخاصة بهم تتسبب في نقاء غير كافي. بتحديد حساسية البناءات الطرفية الدقيقة للمركبات الترابطية ا-416؛ تكون طرق التنقية هذه غير ‎Yo‏ مُثلى للتطبيقات الدوائية. ‎TVA‏
— ¢ — تكشف ‎WO 2011/02818 Al‏ و 2012/130886 ‎WO‏ و ‎EP 2508530 Al‏ عن ‎«wlSps S'-triphosphorylated oligonucleotides‏ دوائية ‎Jad‏ على ‎oligonucleotides‏ إلى جانب تخليق ‎—triphosphorylated oligonucleotides‏ 5° المذكور. هكذاء هناك ‎dala‏ كبيرة إلى ‎triphosphorylated oligonucleotides‏ جديدة ومماثلاتها؛ © تحديدا لها انتقائية ‎RIGHT‏ بالإضافة إلى طرق لتحضير هذه المركبات. الوصف العام للاختراع يتعلق الاختراع الحالي بمركبات ‎S'-triphosphorylated oligonucleotides‏ جديدة التي يمكن إنتاجها على نطاقات واسعة للاستخدام الإكلينيكي المحتمل. يتعلق الاختراع الحالي ب ‎oligonucleotide‏ يشتمل على جديلة إحساس وجديلة مضادة ‎٠‏ اللإحساس؛ ‎dua‏ يشتمل ‎oligonucleotide‏ على جديلة إحساس تشتمل على ترتيب نيكلوتيد ‎nucleotide‏ ‎GACGCUGFACCCUGAAMGUUCAUCPTOUfPTOU 3’‏ ام 5 جديلة مضادة للإحساس تشتمل على ترتيب نيكلوتيد ‎nucleotide‏ ‎CUGMCGACUGGGACFUUCAAGUAGPTOAPTOA 5°‏ (3؛ أو ‎١‏ جديلة إحساس تشتمل على ترتيب نيكلوتيد ‎nucleotide‏ ‎GPTOAPTOCGCUGFACCCUGAAMGUUCAUCPTOUfPTOU 3°‏ (5؛ و جديلة مضادة للإحساس تشتمل على ترتيب نيكلوتيد ‎nucleotide‏ ‎CUGMCGACUGGGACFUUCAAGUAGPTOAPTOA 5°‏ (3؛ أو ‎٠‏ النيكلوتيد ‎nucleotide‏ المشار إليه بالحرف ‎Mm‏ يكون عبارة عن ‎¢2’—O-methylated‏ ‏النيكلوتيد ‎nucleotide‏ المشار إليه بالحرف آ يكون ‎¢2’—fluoro‏ ‏د
El ‏تشير إلى اتصال النيكلوتيدين‎ nucleotides ‏بين اثنين من النيكلوتيدات‎ PTO ‏وتشير الدلالة‎ ‏المذكورين بواسطة رابطة فسفوثيوات ©011031م005(؛ و‎ nucleotides triphosphate ‏حيث تشتمل جديلة الإحساس عند الطرف 5° على‎ ‏عبارة عن مركب ترابطي ل‎ oligonucleotide ‏في نموذج مفضل وثقا للاختراع الحالي؛ يكون‎ ه ‎RIG-I‏ ‏في جانب آخرء يتعلق الاختراع الحالي بتركيبة دوائية تشتمل على ‎oligonucleotide‏ وفقا للاختراع الحالي. وقد تعطى التركيبة ‎clea Ail)‏ مثلا في الغشاء البريتوني» في العضل؛ أو في الوريد أو موضعيا مثلا في الأنف؛ تحت الجلد؛ في الأدمة أو داخل القراب. في نموذج مفضل؛ تُعطى التركيبة الدوائية في الأدمة مثلا بواسطة التوشيم؛ الوخز بإبر دقيقة و/أو رقع الإبر الدقيقة.
Jaa ‏علاوة على‎ oligonucleotides ‏لهذه‎ dade ‏ويتم كذلك الكشف عن طريقة تحضير‎ ٠ ‏لأجل‎ 16-١ dls) ‏التي تشكل؛ تحافظ على و/أو تحسن‎ oligonucleotides ‏توصف تعديلات‎ ‎oligonucleotides‏ أو تعزز ثباتهم الكيميائي. هكذاء الكشف الحالي بمركب ‎oligonucleotide‏ معدل من الصيغة ‎:)١(‏ ‏ال ‎hE‏ 5 ‎zZ—Y—X—— P —W;— P —W;— P —W:—ON‏ ‎Vi Vv, A‏ ‎Vo‏ حيث كل من ‎V5, V3 VI‏ على حدة في كل حالة ينتقى من 0؛ 5 و58؛ كل من ‎١/4 V2‏ و6/ا على حدة في كل حالة ينتقى من ‎SR] SH (OR1 OH‏ ل ‎«NH2‏ ‏تن>طلا ‎N(R1)2‏ و ‎«BH3-M+‏ ‎W1‏ هو 0 أو 58 ‎(NR2 J NH ‏مر 0 ي‎ 2 ‎«C(Hal)2 4 CHHal (CH2 (NR2 (NH ‏مر ف ي‎ W3 ٠ ‎TAA
— أ — ينتقى ‎R35 R2 (Rl‏ من ‎acyl .C2-6 alkynyl . 62-6 alkenyl 61-6 alkyl‏ 62-6 أو ‎ic gana‏ دائرية؛ كل منهم يستبدل اختياريا ‘ أو حيث اثنين من 1+ قد يشكلان حلقة معا مع ذرةٍ ‎N‏ المرتبطة معهما؛ ‎M+‏ هو كاتيون ‎«(cation)‏ ‎X 5‏ هو ‎(NR3 (NH‏ 0 أو 5 ‎Gale Jin Z‏ التقاط ‎HJ‏ ‎Y‏ يمثل رابطة أو وصلة تصل ملحق الالتقاط مع ‎ON X‏ يمثل ‎oligonucleotide‏ يشمل ¢ كتل على الأقل لبناء نيكلوتيد أو مماثل نيكلوتيد. يشتمل المصطلح "0110006160108" في سياق الكشف الحالي على مركبات تشمل عدد ‎Oily‏ ‎٠‏ على سبيل المثال ؛ كتل على الأقل لبناء نيكلوتيد أو مماثل نيكلوتيد. بصورة مفضلة؛ يشتمل ‎oligonucleotide‏ على ‎٠٠0١-١‏ مثلا ‎6-7١‏ ؛ ‎ABS‏ بناء. قد تشتمل كتل بناء النيكلوتيد أو مماثل النيكلوتيد على وحدات فرعية ‎nucleoside‏ أو ‎nucleoside Jil‏ متصلة بواسطة وصلات وحدة فرعية داخلية. إن وحدات ‎nucleoside‏ الفرجية تتضمن وحدات ‎deoxyribonucleoside‏ فرعية وحدات ‎dey ribonucleoside‏ و/أو مماثلات من ‎A‏ ‎١‏ تحديدا مماثلات ‎nucleoside‏ معدلة مع ‎Su‏ و/أو قاعدة نيتروجينية. إضافياء قد تشتمل ‎oligonucleotides‏ على تعديلات ‎JK‏ بناء غير نيكلوتيدية و/أو تعديلات طرفية إضافية و/أو تعديلات سلسلة جانبية. في الوحدات الفرعية المعدلة مع سكر المفضلة يستبدل 2-011 _من_الوحدة الفرعية ‎ribonucleoside‏ بواسطة مجموعة تنتقى من ‎(R (OR‏ مال ‎«(NHR (NH2 (SR (SH‏ ‎(CN J NR2 0‏ حيث ‎R‏ هر ‎alkenyl <C1-6 alkyl‏ 62-6 أو ‎alkynyl‏ 62-6 وهالو هو ا ‎Br Cl‏ أو ‎A‏ ‏في وحدات ‎dey‏ معدلة مع سكر مفضلة ‎Alia)‏ قد يستبدل ‎ribose‏ مثلا مع سكر آخرء على سبيل المثال ‎pentose‏ مثل ‎arabinose‏ قد يتحد تعديل السكر هذا مع تعديلات 2-011 كما د
—y— .2-fluoroarabinonucleoside ‏هو موصوف أعلاه؛ كما في الوحدات الفرعية‎ ‏محتبسة‎ nucleosides ‏مفضلة إضافية‎ Su ‏تتضمن وحدات فرعية معدلة مع‎ La ‏(ظلالا). في كتل بناء‎ 2,3-5600- nucleosides ‏أو‎ (LNA) (locked nucleosides)
De ‏معدلة مع قاعدة نيتروجينية مفضلة؛ تستخدم قاعدة نيتروجينية غير معيارية؛‎ NUcleosidic ‏غير طبيعية الوجود؛ بدلا من قاعدة نيتروجينية معيارية. إن الأمتلة على قواعد نيتروجينية غير‎ 5 5—(2-amino)propyl ‏معدلة عند الموضع 0« مثلا‎ cytosines ‏أو‎ uracils ‏معيارية هي‎ ‏أو‎ adenines ¢2,6-diaminopurine hypoxanthine ¢5—bromouracil ‏أى‎ uracil
Mis «deazanucleosides ¢8-bromoguanine ‏مثلا‎ (A ‏معدلة عند الموضع‎ 5 ‏أو‎ 7-deazaguanine «N-alkylated ‏وقواعد نيتروجينية‎ O-alkylated ‏أو قواعد نيتروجينية‎ ¢7-deazaadenine ٠ ‏مثلا‎ ‏إن مماثلات القاعدة النيتروجينية‎ .NG,N6-dimethyladenine ‏أو‎ (N6-methyladenine ‏6ا5-01001000.‎ Ji ‏المناسبة الإضافية قد تنتقى من مماثلات قاعدة نيتروجينية عامة‎ ‏أو‎ phosphodiester ‏إن الوصلة داخل الوحدة الفرعية بين الوحدات الفرعية قد تكون وصلة‎ «methylphosphonate (phosphorodithioate (phosphorothioate ‏مقاد‎ (dae ‏وصلة‎ Vo ‏أو وصلة معدلة أخرى معروفة للماهر في الفن.‎ (boranophosphate (phosphoramidate ‏ومماثلات‎ ribonucleotides (deoxyribonucleotides (oligonucleotide ‏قد ينتقى‎ ‏و/أو‎ ribonucleotides (deoxyribonucleotides ‏قد تعدل كيميائيا‎ .oligonucleotide ‏من المماثل؛‎ ribose ‏و/أو‎ nucleoside ‏عند الوحدة الفرعية‎ oligonucleotide ‏مماثلات‎ ‏قد تشتمل مماثلات‎ oligonucleotide ‏و/أو‎ ribonucleotide (deoxyribonucleotide ٠٠ ‏على واحدة على الأقل من الوحدة الفرعية‎ ribonucleotides ‏أو‎ desoxyribonucleotides ‏معدلة واحدة على‎ nucleosidic ‏ووحدة فرعية‎ ribonucleoside ‏أو‎ desoxyribonucleoside ‏كما هو موصوف أعلاه. قد‎ Mie ‏الأقل و/أو وصلة داخل الوحدة الفرعية معدلة واحدة على الأقل؛‎ ‏المعدلة.‎ nucleosidic ‏بالكامل من الوحدات الفرعية‎ Oligonucleotide ‏تتكون مماثلات‎ ‏د‎
—A— ‏الجديلة أو جزيء مزدوج الجديلة. قد تشتمل‎ gap ‏جزيء‎ oligonucleotide ‏قد يكون‎ ‏مزدوجة الجديلة على جدائل تكميلية بالكامل أو جزئيا. قد تكون الجزيئات‎ oligonucleotides .3' ‏مزدوجة الجديلة ممسوحة أو تشتمل على جزء متدلي واحد على الأقل؛ مثلا جزء متدلي '5 أو‎ ‏يفضل أن تقع الأجزاء المتدلية؛ إذا وجدت؛ عند الطرف البعيد من الجزيء (بالنسبة لمجموعة‎ ‏مزدوجة الجديلة على‎ oligonucleotides ‏تشتمل‎ 8. (triphosphate ‏مماثل‎ triphosphate © ‏بواسطة حلقة عند الطرف البعيد‎ (duplex) ‏حيث يغلق المضاعف‎ «pd ‏بناء على شكل دبوس‎
JS ‏قد تشتمل الحلقة على‎ (triphosphate ‏مماثل‎ [triphosphate ‏منها (بالنسبة لمجموعة‎ ‏أجزاء‎ Jie diol ‏تعتمد على‎ oly ‏كتل‎ JB ‏نيكلوتيد و/أو غير نيكلوتيد. على سبيل‎ oly propane- thexa(ethylene)glycol ‏أو‎ tri(ethylene)glycol ‏مقاد‎ «ethylene glycol 3,12-dioxa-7,8—dithiatetradecane—-1,14- ‏أو‎ ¢«dodecane-1,12—diol ¢1,3-diol ٠ diol ‏في تجسيد مفضل؛ تكون الجزيئات مزدوجة الجديلة ممسوحة؛ تحديدا عند الطرف الأدنى من ذلك‎ .(triphosphate (Jil [triphosphate ‏(بالنسبة لمجموعة‎ ‏وسائل تنفيذ الاختراع‎ ‏مزدوج الجديلة؛ حيث يكون لكل‎ oligonucleotide ‏طبقا لتجسيد مفضل بصفة خاصة يكون‎ Vo ‏نيكلوتيد على الأقل. يفضل بصفة خاصة‎ ١5 ‏جديلة من الجديلة المزدوجة طول بمقدار‎ ‏مزدوج الجديلة الممسوح بهذا الطول. طبقا لتجسيد مفضل إضافي يكون لكل‎ oligonucleotide
Yo ‏إلى‎ ١9 ase 5٠ ‏إلى‎ ١9 ‏طول بمقدار على الأقل‎ oligonucleotide ‏جديلة من‎ ‏نيكلوتيد.‎ YT ‏إلى‎ YY ‏يفضل بصفة خاصة‎ as JK YA ‏إلى‎ YY ‏نيكلوتيد؛‎ Te ‏إلى‎ ٠١ ‏نيكلوتيد؛‎ ‏هذا على تعديلات طرفية و/أو سلسلة جانبية إضافية؛ مثلا كيانات‎ oligonucleotide ‏.قد يشتمل‎ ٠ ‏قد تعزز تلك الكيانات الامتصاص الخلوي‎ ane ‏مستهدفة تخص لخلية مرتبطة تساهميا‎ ‏فيتامينات‎ (lipids) ‏ليبيدات‎ JE Jie ‏وتتضمن؛ على‎ all ‏الخاص‎ ala, ‏ومماثلات لذلك. قد ترتبط‎ oligosaccharides ‏هرمونات؛ ببتيدات (0601085)؛‎ ¢ (Vitamins) ‏د‎
— q —
الكيانات المستهدفة مثلا مع كتل بناء قواعد نيتروجينية أو غير 710160100 معدلة بواسطة طرق
معروفة للماهر في الفن.
طبقا لتجسيد مفضل فإن التعديلات تعمل على إنشاء و/أو تعزيز انتقائية ‎oligonucleotide‏ تجاه
هدف محدد. في تجسيد مفضل تحديدا ‎Lan‏ أو تعزز انتقائية ‎16-١‏ لأجل ‎.oligonucleotide‏ ‏© توصف هنا بالتفصيل طرق لتحديد انثقائية ‎RIGHT‏ لأجل ‎oligonucleotide‏ محدد (انظر
الأمثلة) و/أو تكون معروفة للماهر في الفن.
طبقا لتجسيد مفضل آخر تعمل التعديلات الكيميائية على الحفاظ على أو تعزيز الثبات الكيميائي
لأجل ‎oligonucleotide‏ يعرف الشخص الماهر في الفن طرق تحديد الثبات الكيميائي لأجل
‎oligonucleotide‏ محدد. توصف تلك الطرق؛ على سبيل المثال؛ في الأمثلة.
‎٠‏ طبقا لتجسيد مفضل تنتقى التعديلات الكيميائية لأجل ‎oligonucleotide‏ على حدة من المجموعة المشتملة على هلجنة ‎¢(halogenation)‏ تحديدا هلجنة ‎F‏ 2-0-80/18100؛ تحديدا ‎«2'-O-methylation‏ و/أو تعديلات ‎phosphorothioate‏ للوصلات داخل النيكلوتيد. إن هلجنة ‎F‏ وتعديلات ‎phosphorothioate‏ تحديدا تزيد من ثبات ‎«oligonucleotide‏ بينما ‎2'-O-methylation‏ ينشئ أو يزيد انتقائية ‎86-١‏ لأجل ‎.oligonucleotide‏ تكون
‎methylations ١‏ -2-0 قادرة ‎Lay‏ على تعديل التولد المناعي لأجل ‎RNA‏ في تجسيد مفضل فإن ‎oligonucleotide‏ يشتمل فقط على واحدة أو اثنتين من ‎2'-O-methylations‏ لكل ‎dls‏ يفضل أكثر ‎2'-O-methylation‏ واحدة لكل ‎Alaa‏ ‏يفضل تحديدا استبدال +-2. عند الموضع '2 من ‎ribose‏ تستبدل مجموعة ‎hydroxyl‏ مع ‎fluoro‏ إن استبدالات ‎2'-F‏ في ‎RNAs‏ تنتج تحديدا ثبات معزز ضد هضم ‎nuclease‏ في
‎RIG ‏تجسيد إضافي؛ قد يزيد استبدال 2-1100 تحديدا الإثارة المناعية المعتمدة على‎ Yo ‏للوصلات‎ phosphorothioate ‏عامة بتعديلات‎ phosphorothioate ‏تتعلق مركبات‎ (lia ‏داخل النيكلوتيد.‎ ‏التي لها تعديل عند النهاية‎ phosphorothioate ‏تفضل بصفة خاصة المركبات المعدلة مع‎ ‏تستبدل ذرة الأكسجين غير‎ phosphorothioate ‏الطرفية من 600606ا01100010. أثناء تعديل‎
‏د
‎-١ «=‏ المرتبطة من الفوسفات المجسر مع ذرة كبريت في هيكل الحمض النووي. إن هذا الاستبدال يخفض انشقاقية بواسطة ‎nucleases‏ عند هذا الموضع بدرجة كبيرة وينتج ثابت ‎Je‏ لجديلة في تجسيد مفضل بصفة خاصة يوضح ‎oligonucleotide‏ طبقا للاختراع الحالي هلجنة-!؛ © 8100ال/ا0161؛ تحديدا ‎(2'-O—methylation‏ بالإضافة إلى تعديلات ‎«phosphorothioate‏ ‏تحديدا عند النهاية الطرفية من ‎.oligonucleotide‏ ‏إن أنماط التحديد لأجل ‎oligonucleotide‏ تعتمد على ترتيب وطول ‎oligonucleotide‏ ويمكن تحديدها لكل ‎oligonucleotide‏ محدد. سوف يدرك الشخص الماهر في الفن جيدا كيفية ‎sha)‏ ‏هذا التحديد. ‎٠‏ كما هو مشروح بالفعل أعلاه؛ توصف بالتفصيل في الكشف الحالي طرق تحديد انتقائية ‎١6-١‏ ‎Jif‏ ثبات ‎oligonucleotide‏ محدد. يشتمل ‎oligonucleotide‏ من الصيغة ‎(I)‏ أو ‎(IV)‏ على مجموعة ‎[triphosphate‏ مماثل ‎triphosphate‏ في هذه المجموعة؛ ينتقى كل من ‎١/3 VI‏ و5 على حدة من 0؛ 5 و58. بصورة مفضلة؛ يكون ‎V1‏ 3/ و5/ عبارة عن 0. ينتقى كل من ‎V2‏ 4/ا و6/ في كل حالة ‎Vo‏ على حدة من ‎SR] «SH OR] (OH‏ ل ‎N(RI)2 (NHRI1 (NH2‏ و ‎.BH3 -M+‏ بصورة مفضلة؛ يكون ‎V6 3 V4 V2‏ عبارة عن ‎OH‏ .قد يكون 1 هو ‎C2-6 1-6 alkyl‏ ‎acyl »062-6 alkynyl alkenyl‏ 62-6 أو مجموعة دائرية؛ ‎Mie‏ مجموعة 63-8 ‎ccyclo(hetero)alkyl‏ مجموعة ‎phenyl ic sas 03-8 cyclo(hetero)alkenyl‏ أو ‎C5-‏ ‎heteroaryl‏ 6< حيث تنتقى الذرات المغايرة من لا © و5. إضافة لهذاء قد يشكل اثنين من 41 ‎٠‏ حلقة؛ مثلا حلقة ذات © أو 1 أعضاء معا مع ذرة لا المرتبطة معهما. قد يشتمل ‎RT‏ أيضا على بدائل ‎«gla Jie‏ مثلا "]» ‎Br «Cl‏ أو اء ‎O(halo)C1-2 alkyl‏ وفي ‎Ala‏ المجموعات الدائرية - ‎.(halo)C1 -2 alkyl‏ قد يكون ‎M+‏ كاتيون غير عضوي أو عضوي؛ مثلا كاتيون ‎Bit‏ قلوي أو كاتيون أمونيوم أو أمين. د
-١١-
1 قد تكون © أو 5. بصورة مفضلة؛ يكون ‎WI‏ هو 0. 0/2 قد يكون ‎SO‏ لال أو 2. بصورة مفضلة؛ يكون ‎W2‏ هو 0. 3//ا قد يكون و ي ‎CHHal (CH2 (NR2 (NH‏ أو ‎.C(Hal)2‏ بصورة مفضلة؛ يكون ‎W3‏ هو 0؛ ‎CH2‏ أو ‎.CF2‏ قد ينتقى ‎R2‏ من مجموعات كما هو موصوف لأجل ‎RI‏ أعلاه. قد يكون ‎Hal‏ هو ‎F‏ ا©» 8+2 أو ‎.١‏
© طبقا لتجسيد مفضل بصفة خاصة يكون 1/ا ‎V3 V2‏ 4لا 5لا ‎WIL V6‏ 1/0/2 و 1/0/3 هم 0. يفضل أن ترتبط مجموعة ‎[triphosphate‏ ممائل ‎triphosphate‏ مع أطراف من 1000101606ا0. بصورة مفضلة؛ ترتبط المجموعة مع أطراف '5 من ‎«oligonucleotide‏ ‏تحديدا مع مجموعة 5-01 من سكر الطرف "5 من ذلك.
‎٠‏ كما تحدد هناء ‎Z‏ يمثل ملحق التقاط ‎JH‏ يمكن تحديد ملحق الالتقاط ‎Z‏ وظيفيا بواسطة سلسلة من أمثلة معقولة كما هو متمثل أدناه. قد تتمثل القاعدة العامة في: 2 يجب أن يتيح تنقية ملائمة ويجب أن يكون قابل للإزالة تحت شروط متوافقة مع متطلبات ثبات ‎PPPRNA‏ سوف يكون الشخص الماهر في الفن قادرا على تحديد بدون حمل مفرط سواء كان الملحق المحدد يحقق التحديد الوظيفي أم لا. هكذاء يدرك الشخص الماهر في الفن ملحقات الالتقاط تلك؛ تحديدا فيما
‎Vo‏ يتعلق بالأمثلة التفصيلية المعطاة في التطبيق الحالي. طبقا لتجسيد مفضل ينتقى ‎Gale‏ الالتقاط 2 من متخلف أليفاتي طويل السلسلة؛ شريك من زوج ‎Je Lis)‏ الانجذابية غير تساهمي؛ حاصل كيميائي متفاعل. ‎(NHC2-C24alkyl § Q‏ يكون © منتقى بصورة مفضلة من ‎(H‏ أحماض أمينية؛ مماثلات حمض أميني؛ ‎«C1-C2dalkyl‏ ‏يفضل ‎(C12-C24alkyl‏ ببتيدات ‎(peptides)‏ وليبيدات. مع هذاء طبقا لتجسيد مفضل بصفة
‎.C10 alkyl ‏أي‎ decyl ‏هو‎ Z ‏خاصة يكون‎ ٠ ‏هو جزءٍ قادر على التفاعل بينيا بصورة تساهمي وغير تساهمية مع عامل‎ Z ‏يكون ملحق الالتقاط‎ oligonucleotide ia ‏ملحق الالتقاط‎ Jodi ‏كاشف للالتقاط تحت شروط تسمح بفصل مركبات‎ ‏التي لا تحتوي على ملحق التقاط. بصورة مفضلة؛ يكون العامل الكاشف‎ (gal Glial ‏(ا) من‎ ‏للالتقاط هو عامل كاشف مثبت أو عامل كاشف قادر على أن يكون مثبت.‎
‎TVA
-١١7- alkyl ‏تكون ملحقات الالتقاط المناسبة على سبيل المثال سلسلة طويلة؛ على سبيل المثال متخلفات‎ ‏أو متخلفات‎ octadecyl ‏أليفاتية 08-24؛ يفضل 013-24؛ يفضل أكثر 613-614 مثل‎ ‏ومشتقات من ذلك. مع هذاء طبقا‎ trityl ‏أو‎ tocopheryl «cholesteryl (Jie all ‏ليبيدية/ محبة‎ ‏في هذه الحالة؛ يمكن التقاط وتنقية‎ decyl ‏لتجسيد مفضل بصفة خاصة يكون >2 هو متخلف‎ ‏الملحق على طور صلب بواسطة تحليل كروماتوجرافي طور معكوس‎ triphosphate ‏كيان‎ © (hydrophobic ‏أو تحليل كروماتوجرافي بالتفاعل البيني الكاره للماء‎ «(RP-HPLC ‏قياسي؛ مثلا‎ ‏أيضا كيان‎ LE Gale ‏قد يكون‎ .(HIC) interaction chromatography) 3- ‏أو متخلف‎ 4-(1H,1H,2H,2H-perfluorodecyl)benzyl ‏مثاد‎ perfluoroalkyl ‏المعدل على دعامة‎ oligo-triphosphate ‏للالتقاط الخاص لأجل‎ (perfluorooctyl)propyl .Fluorous Technologies, Inc. ‏مثلما متاح تجاريا من‎ Fluorous Affinity | ٠ ‏51000؛ أو‎ Jie ‏الالتقاط شريك أول لزوج ارتباط عالي الانجذابية غير تساهمي؛‎ Gale ‏وقد يكون‎ ‏أو مولد مضاد؛ الذي له انجذابية عالية (على‎ hapten (desthiobiotin ‏مثل‎ biotin ‏مماثل‎ ‏الكاشف للالتقاط؛‎ Jalal) ‏جزيء جرامي أو أقل) مع‎ [A 1-٠١ ‏سبيل المثال ثابت ارتباط بمقدار‎ ‏أو‎ avidin streptavidin ‏الذي يكون شريك تكميلي ثاني لزوج الارتباط العالي الانجذابية؛ مثلا‎ ‏جسم مضاد.‎ ‏الالتقاط شريك أول لزوج ارتباط تساهمي؛ الذي قد يشكل رابطة تساهمية مع‎ Gale ‏وقد يكون‎ ‏العامل الكاشف للالتقاط» التي قد تكون شريك تكميلي ثاني لزوج الارتباط التساهمي؛ حيث قد‎ ‏تكون الرابطة التساهمية رابطة قابلة للانعكاس أو غير قابلة للانعكاس. في هذا التجسيد؛ قد يكون‎ ‏تتيح التفاعل‎ alkynyl ‏أو‎ azide ‏مجموعة‎ (io ‏الالتقاط 2 كيان كيميائي متفاعل‎ Gale ‏مكون‎ ‏أو‎ alkynyl ‏مثلا جزء‎ (Aulus ‏متفاعلة‎ de gene ‏التساهمي مع عامل كاشف للالتقاط يحتوي على‎ ٠ ‏(ما يسمى 'تفاعل طقطقة‎ Husigen 3+2 ‏على التوالي؛ في حالة تفاعل إضافة دائرية‎ .5060 ‏أو شكل متباين من ذلك يتم تنفيذه بدون أيونات‎ CU(l) ‏الذي يكون محفز مع‎ '(click—reaction) 2-7 - ‏إن مثال‎ .(cyclooctyne ‏من خلال إطلاق ضغط حلقة عنيف في مثلا مشتقات‎ Cu(l) .propargylamino ‏الخاص في هذه الحالة هو‎ X ‏د‎
— \ — وقد يكون مكون ‎Gale‏ الالتقاط هو كيان كيميائي يحتوي على مجموعة محبة للنواة إضافية؛ على سبيل المثال ‎de gene‏ أمينية ثانية في عامل كاشف من نوع 0112-7-14. قد يستخدم فيما بعد نطاق واسع من العوامل الكاشفة 2 المحبة للإلكترونات ‎niall‏ مثل الكوليسترول؛ 1001011036 أو 5 نشطة ‎biotin N-hydroxy succinimide‏ لإدخال المجموعة © الملحقة بينما يرتبط ‎oligonucleotide‏ مع الطور الصلب؛ بالتالي تتسع دائرة تفاعل الإلحاق. في تجسيد مفضل يكون ملحق الالتقاط هو متخلف ‎alkyl‏ طويل السلسلة؛ كيان ‎«perfluoroalkyl‏ ‏مجموعة ‎alkynyl J azide‏ وقد يحمل ‎oligonucleotide‏ ملحق التقاط ثاني عند موقع مختلف؛ مثلا عند الطرف '3. يفضل انتقاء ملحق الالتقاط الأول والثاني بحيث يسمحان بالتنقية بواسطة طريقتين متعامدتين للتمكن من ‎٠‏ استعادة ‎sald)‏ عالية النقاء بصورة قصوى. على سبيل المثال قد يكون ‎Gale‏ الالتقاط الأول مجموعة محبة للدهن؛ التي تتفاعل بينيا مع دعامة كروماتوجرافية مناسبة وقد يكون ملحق الالتقاط الثاني ‎«biotin»‏ الذي يتفاعل ‎Lin‏ مع ‎streptavidin‏ ‏قد يتم إدخال ‎Gale‏ الالتقاط الثاني بصورة تقليدية بإجراء التخليق باستخدام ‎Aled) CPG‏ زجاجية مضبوطة ‎((controlled glass support)‏ معدلة لتخليق ‎.oligoribonucleotide‏ ‎Jig Y ١‏ رابطة كيميائية أو وصلة؛ مثلا ‎alkylene‏ تفضل ‎(Cl1-6-alkylene ila;‏ تفضل أكثر وصلة ‎«C2-S5-alkylene‏ أو وصلة ‎caralkylene‏ تشمل اختياريا ذرات مغايرة أو مجموعات تحتوي على ذرة مغايرة؛ ‎(O a‏ يي ‎C=0 (NH‏ أو وحن و/أو تشمل اختياريا روابط ‎C=C‏ أو 026. طبقا لتجسيد مفضل بصفة خاصة يكون ‎١7‏ هو رابطة. في تجسيد مفضل آخر تكون الوصلة هي ‎«polyalkylene oxide‏ يفضل ‎poly-C2-C6-‏ ‎calkylene oxide ٠‏ يفضل أكثر ‎.poly-C2-C3-alkylene oxide‏ قد يكون الرقم المتوسط للوزن الجزيئي للوصلة في حدود من ‎1800-7٠‏ جم/ جزيء جرامي؛ يفضل من 450-40 جم/ جزيء جرامي 3 يفضل أكثر من ‎[ox You—¢‏ جزيء جرامي + قد تكون الوصلة -] ‎CH2CHR4-0-]n‏ مع كون ‎٠١-١ =n‏ يفضل ‎7-١ =n‏ يفضل أكثر ‎=n‏ 0-7؛ ويفضل د
‎-١ ¢—‏ أكثر أيضا ‎=n‏ ©. قد يكون ‎R4‏ هو ‎١‏ أو ‎.Cl-6-alkyl‏ توضح تجسيدات مفضلة إضافية لأجل 7 في الشكل ؛. في تجسيد مفضل يكون ‎RA‏ هو ‎H‏ ‏طبقا لتجسيد مفضل بصفة ‎ald‏ ‏هو !الا أو 0؛ لاهو ‎«—K=((CHR1)m-CH2-O)n-R-‏ أو ‎(O-(CHR3)m3-CH2)n1-(0O—(CHR2)m2-CH2)n2-(O-(CHR1)m1-‏ ‏-0112(03؛ و ا هو ‎(NH JO‏ كل من ‎aml am‏ 12 و03 على حدة ‎١‏ إلى ‎OY‏ يفضل ‎١‏ إلى ‎A‏ يفضل أكثر ‎١‏ إلى 0 ‎٠‏ ويفضل أكثر أيضا ‎١‏ إلى ‎.٠‏ ‏كل من ‎n2 «nl «n‏ و3 0 على حدة من صفر إلى ‎Yo‏ يفضل صفر إلى ‎AK‏ يفضل أكثر صفر إلى ©؛ ويفضل أكثر أيضا صفر إلى ؟؛ و يكون كل من ‎R35 2 (Rl‏ على حدة هو ‎alkenyl 61-6 alkyl (H‏ 02-6 62-6 ‎C6-acyl alkynyl‏ -62 أو مجموعة دائرية؛ كل منهم يستبدل اختياريا و م © هى ‎alkynyl 62-6 alkenyl 61-6 alkyl‏ 62-6؛ ‎C2- C6-acyl‏ أو مجموعة دائرية؛ يستبدل كل منها اختياريا . بصورة مفضلة يكون ‎R‏ هو 2 . ‎ih‏ لتجسيد مفضل بصفة خاصة مع كون 7 كما تحدد أعلاه؛ يكون 41 و42 هما ا 71 هو © و02 و03 هما ‎.١‏ يمكن أخذ تجسيد مفضل إضافيا من شكل 4. طبقا لتجسيد مفضل آخر بما أن 7 كما تحدد أعلاه؛ يكون ‎(RT‏ 2 و43 هم ‎١‏ و01 02 ‎Yo.‏ و3٠‏ هم ‎A‏ ‎TVA‏
-م١-‏ طبقا لتجسيد مفضل يكون ‎X‏ هو ‎K (NH‏ هو ‎NH‏ وا هو ‎(CH2CH20)N‏ مع كون ‎WN‏ ‏تحدد أعلاه؛. حيث يستبدل ‎K‏ إضافيا مع ‎trityl «cholesterol-C(O)=‏ أو مشتقات من ذلك. طبقا لتجسيد مفضل بصفة خاصة لأجل ‎oligonucleotide‏ طبقا للصيغة )1( يكون ‎X‏ هو ‎NH‏ ‏أو 0؛ يكون ‎١7‏ هو رابطة» و27 هو ‎C1-Cl2alkyl‏ أو ‎H‏ يفضل ‎«C10‏ © أو ‎NHC2-‏ ‎(C24alkyl ©‏ حيث ينتقى © من ‎(H‏ أحماض أمينية؛ مماثلات حمض أميني ‎«C1-C2dalkyl‏ ‏يفضل ‎«C12-C24alkyl‏ ببتيدات وليبيدات» ويكون ‎V6 V5 V4 V3 V2 V1‏ [/لاء 2 و 3//ا هم 0. طبقا لتجسيد مفضل إضافي لأجل ‎Oligonucleotide‏ من الصيغة ‎(I)‏ يكون ‎X‏ هو !ال أو ‎O‏ ‏يكون ‎١‏ هو ‎day‏ و27 هو ‎decyl‏ لا ريكرن 1/ا ‎W2 (W1 V6 V5 V4 V3 V2‏ ‎٠‏ و3//ا هم بصورة مفضلة 0. يتعلق جانب إضافي من الاختراع الحالي بتركيبة دوائية تشمل ‎oligonucleotide‏ معدل كما تحدد في عناصر الحماية. قد تشتمل التركيبة الدوائية طبقا للاختراع إضافيا على مواد حاملة؛ مواد تخفيف؛ و/أو مواد مساعدة مقبولة دوائيا. إن المصطلح 'مادة حاملة ‎(carrier)‏ عند الاستخدام هنا يتضمن مواد حاملة؛ مواد ‎VO‏ مسوغة و/أو مواد مثبتة تكون غير سامة للخلية أو الكائن الثديي الخاضع له بالجرعات والتركيزات المستخدمة. غالبا ما تكون المواد الحاملة المقبولة فسيولوجيا عبارة عن محاليل مثبتة الأس الهيدروجيني أو جسيمات شحمية. تتضمن أمثلة المواد الحاملة المقبولة فسيولوجيا مثبتات للأس الهيدروجيني مثل ‎citrate (lind)‏ وأحماض عضوية أخرى (مع هذاء بالنسبة للصياغة من الاختراع الحالي؛ يفضل مثبت الأس الهيدروجيني فوسفات)؛ مضادات أكسدة تتضمن ‎ascorbic‏ ‎acid Yo‏ عديد ببتيدات منخفضة الوزن الجزيئي (أقل من حوالي ‎٠١‏ متخلفات)؛ بروتينات ‎Jie‏ ‏ألبومين ‎(serum albumin) Jas‏ جيلاتين أو جلوبيولينات مناعية ‎(immunoglobulins)‏ ‏بوليمرات محبة للماء ‎tpolyvinyl pyrrolidone (Jie (hydrophilic polymers)‏ أحماض أمينية ‎arginine «asparagine (glutamine (glycine (i.‏ أ ‎dysine‏ ‎«disaccharides «monosaccharides‏ وكربوهيدراتات أخرى تتضمن ‎mannose « 3S sla‏ ‎TAA‏
-١- ‏أيونات‎ sorbitol mannitol ‏سكرء كحولات مثل‎ (EDTA Jie ‏عوامل تهليم‎ cdextrins ‏أو‎ ‎TWEEN (ic ‏الصوديوم؛ و/أو منشطات سطح غير أيونية‎ Jie ‏معاكسة تشكل ملح‎ ‏©60ا/ا7610ا00. طبقا لتجسيد مفضل بصفة خاصة يذاب المركب‎ glycol ‏أو‎ polyethylene ‏من الاختراع في ماء مزال التأين معقم.‎ ‏تحديدا مريض‎ dell ‏يمكن إعطاء هذه التركيبة و/أو الصياغة طبقا للاختراع إلى كائن بحاجة‎ ©
‎oo‏ بجرعة كافية ‎dalled‏ الحالات الخاصة بوسائل مناسبة. على سبيل ‎(JB‏ قد تصاغ التركيبة و/أو الصياغة كتركيبة دوائية مع مواد حاملة؛ مواد مخففة و/أو مواد مساعدة مقبولة دوائيا. قد تتحدد الفعالية والسمية العلاجية طبقا لبروتوكولات قياسية. قد تعطى التركيبة الدوائية ‎lea‏ مثلا في الغشاء البريتوني؛ في العضل؛ أو في الوريد أو موضعيا مثلا في الأنف؛ تحت
‎٠‏ الجلدء في الأدمة أو داخل القراب. سوف تعتمد جرعة التركيبة و/أو الصياغة المعطاة؛ بالطبع؛ على الكائن المراد معالجته وعلى حالته مثل وزن الكائن؛ عمر الكائن ونوع وحدة المرض أو الإصابة المراد معالجتهاء أسلوب الإعطاء وحكم الطبيب المعالج. في تجسيد مفضل تعطى التركيبة الدوائية في الأدمة. يفضل بصفة خاصة إعطاء التركيبة داخل الجلد من خلال التوشيم؛ الوخز بالإبر الميكرونية و/أو اللصوقات دقيقة الإبرة.
‎Vo‏ يفضل إذابة ‎oligonucleotide‏ طبقا للاختراع الحالي ويخفف إلى التركيز المرغوب في ماء معقم مزال التأين (ماء منقى) ثم يطبق على ‎ala‏ محلوق معقم مع ‎ethanol‏ باستخدام أداة ماصة؛ ثم يتم وشمه على الجلد. للتوشيم؛ على سبيل المثال؛ تحقن التركيبة الدوائية المعتمدة على ماء طبقا للاختراع في الأدمة في الجلد؛ باستخدام أداة وشم (طبية) مزودة بإبر متعددة (فردية الاستخدام)؛ طرف ‎Sp‏ مستدق (مثلا
‎Yo‏ 4- إبرء طرف مستدق فردي الاستخدام). يكون إجراء التوشيم النموذجي كما يلي: بعد نقل التركيبة الدوائية المعتمدة على ماء بواسطة ماصة على الجلد المحلوق المنظف مع ‎cethanol‏ يتم إدخالها في الطرف المستدق لإبرة آلة الوشم بوضع طرف الإبرة المستدق الحالي (يعمل عند سرعة بمقدارء على سبيل ‎١0-٠٠١ JB‏ ‎Gig‏ تحديدا ‎٠٠١‏ هرتز) برفق على قمة قطيرة التركيبة الدوائية المعتمدة على الماء. بمجرد
‎TVA
امتزاز قطيرة التركيبة الدوائية المعتمدة على الماء بالكامل في طرف الإبرة المستدق الحالي؛ وبالتالي بقائها بين الإبر الحالية؛ يتحرك الطرف المستدق الحالي برفق جيئة وذهابا على الجلد؛ بإمساك طرف الإبرة المستدق المملوءة الحالي بزاوية 9960 بالضبط مع الجلد. باستخدام هذه الطريقة؛ يتم وشم التركيبة الدوائية المعتمدة على الماء بالكامل في الجلد. لمقدار ‎-5٠‏ ‎٠. fo]‏ ١ميكرولتر‏ من التركيبة الدوائية المعتمدة على ماء فإن هذا يستغرق ‎aul ١٠-٠‏ على مساحة ‎ala‏ بمقدار 7-؛ سنتيمتر مربع. إن المنفعة من هذه المعالجة التي تفوق حقن بلعة في الجلد فردي قياسي؛ تتمثل في حقن التركيبة الدوائية المعتمدة على الماء بالتساوي على مساحة كبيرة من الجلد؛ وبصورة أكثر تساويا وبتقسيم أكثر دقة على النسيج المستهدف: باستخدام طرف مستدق لتسعة إبرة عند ‎٠٠١‏ هرتز لمدة ‎٠١‏ ثواني ¢ تتضمن هذه الطريقة ‎Gee‏ حقنة داخل ‎٠‏ الأدمة منتشرة بالتساوي في الجلد المعالج. بالطبع؛ قد ينحرف الشخص الماهر في الفن عن ويعدل الإجراء؛ اعتمادا على المريض أو جزء الجسم المراد معالجته. قد يجرى إجراء الوخز بالإبر بصورة مماثلة تقريبا لإجراء الوشم. مع هذاء مع الوخز بالإبر يستبدل الطرف المستدق لإبرة الوشم بطرف مستدق لإبر دقيقة؛ مما يضمن إعطاء داخل الأدمة أكثر سطحية. تنقل التركيبة الدوائية المعتمدة على ماء مبدئيا على جلد محلوق ‎١٠‏ منظف مع ‎ethanol‏ ثم تعطى داخل الجلد باستخدام الطرف المستدق الميكروني؛ بالتماتل مع إجراء الوشم. لا تحتاج جرعة الوخز الميكروني لامتزاز مسبق للتركيبة الدوائية بين إبر الوخز الميكروني. بصورة إضافية؛ يكون من المتصور أنه يمكن استخدام رقع الإبر الدقيقة المغلفة مع؛ أو المخفية بطريقة ‎AT‏ التركيبة الدوائية للتوصيل عبر الأدمة/ داخل الأدمة. يكون لهذا ميزة أن التوصيل ‎٠‏ داخل الأدمة للتركيبة الدوائية يمكن إجراؤه بأمان بواسطة المتلقي/ المتلقية بذاتهم بدون الحاجة لزيارة المشفى و/أو تدخل التوشيم/ الوخز بالإبر من قبل الطبيب المختص. إن هذا يضفي مرونة بدرجة كبيرة على برامج المعالجة؛ متيحا أنظمة معالجة عالية الخصوصية؛ ألم منخفض مصاحب للمعالجة؛ وتكلفة معالجة منخفضة. يمكن أن تتكون تلك اللصوقات من؛ لكن بدون تحديد؛ لصوقات )3 دقيقة مذابة أو غير مذابة لتوصيل ‎dal‏ عبر الأدمة في أوقات محددة أو بصورة ‎VO‏ مستمرة من التركيبة الدوائية. ‎TVA‏
م \ — يتعلق جانب آخر من الكشف الحالي بطريقة لتحضير ‎oligonucleotide‏ مشتملة على الخطوات التالية: 0 تفاعل مركب من الصيغة ‎ila)‏ ‏ولام رلا وا لاا 1 دولا اا ل ‎a‏ ‏© حيث ‎ON; (W3 0/2 (W1 V6 V4 V5 V3 V1‏ كما تحدد أعلاه. حيث يحمى ‎ON‏ ‏بواسطة مجموعة حماية واحدة على الأقل؛ مع عامل أكسدة للحصول على مركب من الصيغة (اا): ‎ps‏ رلا ‎We TW,‏ ‎Ves I‏ ‎od ~‏ ~ صا ‎VT WON lb‏ صلا ‎ON, JW3 W2 W1 V6 V4 V2 V5 V3 V1 Cua‏ كما تحدد ‎coed‏ حيث يحمى ‎٠‏ ل١0‏ بواسطة مجموعة حماية واحدة على ‎JN‏ ‏(ب) تفاعل مركب من الصيغة ‎(IIb)‏ مع عامل ‎Gals‏ التقاط من الصيغة ‎(I)‏ ‎Z-Y - XH (1)‏ حيث رد م ولا كما تحدد ‎Sel‏ حيث يكون ‎X‏ بصورة مفضلة ‎O‏ للحصول على منتج تفاعل يشمل ‎oligonucleotide‏ من الصيغة (ا)؛ و ‎٠‏ (ج) إزالة حماية مجموعة حماية ‎ON‏ واحدة على الأقل؛ و (د) توصيل منتج التفاعل من الخطوة (ج) مع عامل كاشف للالتقاط قادر على التفاعل ‎bin‏ مع ملحق الالتقاط؛ حيث يجرى الاتصال تحت شروط تتيح فصل ‎oligonucleotide‏ (ا) من أصناف أخرى تحتوي على منتج التفاعل المذكور. د
‎q —_‏ \ _ يفضل بصفة خاصة تجسيد؛ حيث يكون ‎X‏ هو 0. خلال الطريقة يشتمل ‎ON oligonucleotide‏ على مجموعة حماية واحدة على الأقل. يستهدف استخدام المجموعات الحامية طبقا للاختراع تحديدا عند حماية مجموعات 2-0 الوحدة الفرعية ©1505 من ‎Oligonucleotide‏ المطبق. يعرف الشخص الماهر في الفن © أي من مجموعات الحماية تكون مناسبة للتخليق؛ خاصة الشخص العامل في مجال تخليق النيكلوتيد. تفضل المجموعات الحامية عند الموقع 2-01 من الوحدة الفرعية ‎ribose‏ من 06 ا0190000. في تجسيد مفضل من الاختراع الحالي عند الموضع '2 من وحدة ‎ribose‏ ‏تستخدم مجموعات حامية قابلة للتغير - ‎fluoride‏ ‏تفضل بصفة خاصة المجموعات الحامية 2-0-1801/5 أو /2-0-104. في تجسيد مفضل ‎٠‏ تحديدا يتم تطبيق المجموعات الحامية ‎.TBDMS‏ ‏تحديدا خلال تخليق المركبات مع ‎X‏ = 0؛ التي لها ثبات ارتباط 2-7-7-0 محسن؛ قد يؤدي طيف واسع من شروط إزالة الحماية إلى انشقاق المجموعات الحامية ‎2'-OH‏ ‏إن كل العوامل الكاشفة لإزالة الحماية المعروفة تكون مناسبة لانشقاق المجموعة الحامية ).. تحديداء قد تطبق العوامل الكاشفة التالية: ‎yo‏ 0 0016لا 0-©180010/ا11610 اختياريا في اتحاد مع مذيب قطبي؛ (ب) ‎triethylamine—trihydrofluoride rialklylamine‏ ومذيب قطبي؛ ‎pyridine—HF (=)‏ ومواد مجمعة أخرى من ‎hydrofluoride‏ من قواعد النيتروجين العضوية؛ ‎«ammonium fluoride (J)‏ ‎«tetra—n—butyl-ammonium fluoride (a)‏ ‎٠‏ و) ‎«tetramethyl-ammonium fluoride‏ و ‎tetraalkyl-ammonium fluorides‏ أخرى واتحادات من ذلك. ‎TVA‏
١ ‏مثلا كما هو‎ ctriphosphate ‏يفضل إجراء الخطوة (ج) تحت شروط لا تتسبب في انحلال جزء‎ ‏موصوف بالتفصيل أدناه.‎ ‏من الصيغة‎ cyclic P(V)=P(V)-P(lIl) ‏تشتمل الخطوة 0 من الطريقة على تفاعل أصناف‎ ‏طبقا للطرق القياسية كما هو‎ (lla) ‏مع عامل مؤكسد. قد نحصل على المركب من الصيغة‎ (113) ‏أعلاه؛ أي‎ (Ludwig et al, 1989, supra and Gaur et al., 1992 ‏موصوف بواسطة‎ © ‏ثلاني‎ phosphitylating ‏مع عامل‎ oligonucleotide ‏الطرفية '3 من‎ OH ‏بتفاعل مجموعة‎ ‏تحت شروط‎ 2—chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin—4-one ‏الوظيفة؛ مثلا‎ ‏مناسب‎ cule ‏في‎ (diisopropylmethylamine ‏أو‎ pyridine) ‏مناسبة؛ مثلا في وجود قاعدة‎ ‏أو‎ (W3=0) pyrophosphate ‏وتفاعل لاحق مع‎ «dichloromethane ‏أو‎ dioxane (i ‏أو 06]2). بصورة‎ NH (CCI2 (CH2 ‏يختلف عن ©0؛ مثلا‎ W3) ‏معدل‎ pyrophosphate ٠ pyrophosphate ‏أى‎ pyrophosphate ‏مفضلة؛ يستخدم ملح 0ن 31100 لزأ نا ط-0-أ1 من‎ ‏الناتج تحت‎ cyclic ©)1/1(-5)/( ‏الوسطي‎ (lla) ‏المركب‎ ashy Xa .DMF ‏المعدل في‎ cumene t-butyl hydroperoxide ‏بيروكسيد؛ مثل‎ ae ‏شروط الامائية؛ مثلا‎ ‏يمكن أيضا استخدام‎ Aly ‏بطريقة‎ . (10-camphorsulfonyl)joxaziridine hydroperoxide borane—diisopropylethylamine ‏أى معقد‎ «(V2=S) phenylacetyldisulfide Yo ‏المقابل من الصيغة‎ cyclic 5'-triphosphate triphosphate ‏لإعطاء مماثل‎ «(V2=BH3) ‏إلى الطلب الدولي رقم 97/401549 أو الطلب الدولي رقم‎ lead ‏يشار في هذا السياق‎ (lb)
Now af YAN ‏مرتبط‎ oligonucleotide ‏قد تجرى خطوة التفاعل )1( مع 011901010160006 في محلول أو مع‎
Lila) oligonucleotide ‏قد يشتمل‎ .CPG ‏مع طور صلب؛ مثل راتتج أو زجاج عضوي؛ مثل‎ Yo ‏على مجموعات حماية؛ مثلا مجموعات حماية سكر أو قاعدة نيتروجينية معروفة جيدا للشخص‎ nucleoside ‏لأجل‎ 2-cyanoethyl ‏الماهر. عن الأمثلة المفضلة على مجموعات الحماية هي‎ «tert-butyldimethylsilyl phosphorothioate ‏_الداخلي أى‎ phosphodiester ribose 2'- ‏لمجموعة‎ bis(acetoxyethoxy)methyl ‏أو‎ triisopropylsilyloxymethyl «isobutyryl acetyl (phenoxyacetyl J 4-t-butylphenoxyacetyl hydroxyl Yo
TVA
— \ \ — ‎benzoyl‏ لمجموعات ‎€Xocyclic amino‏ من قواعد نيتروجينية. بصورة مفضلة ‎SiS)‏ ¢ تجرى الخطوة (أ) مع ‎Oligonucleotide‏ مرتبط مع طور صلب. طبقا للخطوة (ب) من طريقة الاختراع؛ يتفاعل المركب ‎(IIb)‏ مع عامل ‎Gale‏ التقاط من الصيغة (١!ا):‏ ‎Z=Y=-XH(III) ©‏ حيث ‎X‏ هو مجموعة تنتقى من ‎(NR3 (NH‏ © ويكون ‎X‏ و7 كما تحدد أعلاه. يحدد ‎R3‏ كما هو موصوف ‎Del‏ لأجل ‎R1‏ ‏تحديداء في حالة كون ‎X‏ هو ‎O‏ يمكن استخدام عامل ذو حب للنواة محدود مثل ‎decanol‏ لفتح الحلقة (انظر شكل ١؛‏ الخطوة 4). يمكن إجراء هذه الخطوة عند درجة حرارة الغرفة؛ ‎Dia‏ لمدة ‎£A‏ ‎٠‏ ساعة؛ ويتاح تحول ‎cyclotriphosphate‏ إلى ‎triphosphate y-ester‏ المرغوب. طبقا للخطوة (ج) تنشق مجموعات الحماية ‎ON‏ ‏أثناء الخطوة (ج)؛ على سبيل ‎JB)‏ فإن العوامل الكاشف لإزالة الحماية (أ) و(ب) المحددة أعلاه قد تليها ‎Alla‏ إزالة حماية مع © = ‎X‏ خلال فترة ‎٠١‏ دقيقة إلى ‎YAY‏ دقيقة؛ يفضل أكثر ‎٠١0‏ دقيقة إلى حوالي ‎Yoo‏ دقيقة تحديدا حوالي ‎YY.‏ دقيقة عند ‎=e‏ ااأمثوية تحديدا حوالي 10 ‎J eC‏ ‎١‏ إذا كان ‎X= NH‏ تستثنى تلك التفاعلات نتيجة لثبات الارتباط المختلف أو يمكن إجرائها فقط تحت معايير تفاعل ‎Tend‏ بدرجة كبيرة» ‎Die‏ خلال ‎٠‏ ؛ ساعة عند درجة حرارة الغرفة. تشتمل الخطوة (د) من الطريقة على اتصال منتج التفاعل من الخطوة (ب)؛ مع عامل كاشف للالتقاط قادر على التفاعل بينيا مع ملحق الالتقاط 2 تحت شروط تتيح فصل ملحق الالتقاط المحتوي على ‎oligonucleotide‏ )1( من أصناف أخرى موجودة في منتج التفاعل. قبل الخطوة ‎٠٠‏ (د)؛ ينشق ‎oligonucleotide‏ (ا) المرتبط مع الطور الصلب من الطور الصلب وتزال حمايته؛ أي تزال مجموعات الحماية جزئيا أو بصورة كاملة. يثبت بصورة مفضلة العامل الكاشف للالتقاط على دعامة مناسبة؛ مثلا دعامة كروماتوجرافية. لتوفيرر فصل لملحق الالتقاط المحتوي على ‎oligonucleotide‏ )1( من أصناف تحتوي على ملحق عدم التقاط؛ تتشق منتجات التفاعل من ‎TAA‏
— \ \ — الخطوة (ب) من الطور ‎ball‏ وتزال حمايتها إذا كان ضروريا وتخضع لإجراء فصل يفضل إجراء فصل كروماتوجرافي اعتمادا على التفاعل البيني لملحق الالتقاط 2 مع العامل الكاشف للالتقاط. أثناء خطوة الفصل؛ قد يزداد نقاء ‎oligonucleotide‏ (ا)؛ الذي يكون عامة في حدود 7-7 للمادة الخام اعتمادا على طول وتعقيد الترتيب؛ إلى كال لكك أبكال أحقال لكل 0 ©2595 أو أكثر. لدراسات السمية يكون النقاء بنسبة > 785 مطلوباء حيث في محاولات إكلينيكية متأخرة المرحلة يجب أن يكون النقاء في حدود 7190-6 على الأقل. هكذاء توفر الطريقة مسار للحصول على نقاء ‎pppRNA‏ عالي كما هو مطلوب للمحاولات الإكلينيكية الآدمية. في الخطوة (د)؛ يفضل انتقاء ‎Gale‏ الالتقاط والعامل الكاشف للالتقاط القادر على التفاعل بينيا معه من ‎)١(‏ مجموعة كارهة للماء أو ‎fluorinated‏ ومادة كروماتوجرافية مع انجذابية للمجموعات ‎٠‏ الكارهة للماء أو ‎fluorinated‏ مثلا مادة طور معكوس أو دعامة انجذابية 05ا110030؛ ‎(Y)‏ شريك أول لزوج ارتباط عالي الانجذابية غير تساهمي وشريك تكميلي ثاني لزوج ارتباط عالي الانجذابية غير تساهمي؛ ‎(F)‏ شريك أول من زوج ارتباط تساهمي وشريك تكميلي ثاني من زوج ارتباط تساهمي؛ حيث يكون الشريك الأول والثاني من روابط تساهمية. يتحدد ملحق الالتقاط وظيفيا أدناه بسلسلة من الأمثلة المقبولة. قد تكون القاعدة العامة: ‎Vo‏ يجب أن يتيح 2 تنقية ملائمة؛ ويجب أن يكون قابل للإزالة تحت شروط متوافقة مع متطلبات ثبات ‎.pPPpRNA‏ ‏بصورة إضافية؛ قد تشتمل الطريقة ‎Lila)‏ على الخطوة )2( إزالة ‎LEN Gale‏ للحصول على 0160000006 من الصيغة ‎(IV)‏ . طبقا لتجسيد مفضل» نظرا لأن ‎X=0‏ نحصل على مركب من الصيغة ‎(IV)a‏ أو ‎(IV)b‏ ‏ال ‎hE hE‏ ‎HO— P —W;— P —W;— P —W—ON‏ ‎(Va) ٠‏ ولا ‎vs Va‏ أو ‎TIAA‏
— \ — ‎Ys hE hy‏ ‎HY——0— P —W;— P — W;— P —W:—ON‏ ‎Vi Vv, Vv, (IVb)‏ ونظرا لأن ‎X=NH‏ نحصل على مركب من الصيغة ‎:(IV)a‏ ‏ال ‎hE‏ 5 ‎HO— P —W;— P —W;— P —W—ON‏ ‎Vi Vv, A (IVa)‏ يجب أن تتوافق الخطوة )2( مع متطلبات ثبات المنتج النهائي ‎triphosphate‏ ومع متطلبات ‎oo‏ ثشات الرابطة داخل ‎ribonucleotide‏ .قد تشتمل على انشقاق بواسطة شروط حمضية معتدلة حيث يكون ‎X‏ هو ‎(NH‏ انشقاق مع أيونات فضة عندما يكون ‎X‏ هو 5؛ انشقاق بواسطة ‎110١‏ مثل ‎dithiothreitol‏ يؤدي إلى ‎Laie 1111806 Jj‏ يحتوي ‎Y-X-P‏ على -5- ‎.S-CH2-CH2-0-P‏ ‏في تجسيدات إضافية يُزال أو لا يُنال ‎Gale‏ الالتقاط 2 بالكامل. في تلك التجسيدات قد يكون ‎oligonucleotide | ٠‏ الملحق له منفعة؛ مثلا منفعة كعامل دوائي. في تلك التجسيدات؛ يجب انتقاء العامل الكاشف ‎ZY XH‏ من مجموعة فرعية من متخلفات ‎Z‏ ‏التي تتوافق وظيفيا مع المتطلبات البنائية لحساس ‎(RIGA‏ على سبيل ‎decyl- = 2 Ji)‏ ‎١ (octadecyl‏ = وصلة ‎X=NH‏ أو يعرف اتحاد © بتحقيقه لهذه المتطلبات. تكون ‎oligonucleotides‏ المعدلة مع ‎[triphosphate‏ مماثل ‎triphosphate‏ المنتجة طبقا ‎١‏ للطريقة مناسبة تحديدا للتطبيقات الدوائية نتيجة لنقائها العالي. في تجسيد مفضل بصفة خاصة؛ يكون ‎(I) oligonucleotide‏ أو ‎(IV)‏ عبارة عن منشط ‎.416-١ helicase‏ يتم الكشف عن أمثلة خاصة لمنشطات ‎RIGHT‏ مناسبة في ‎Schlee‏ وآخرين» ‎Yaad‏ أعلاه. شرح مختصر للرسومات د
— ¢ \ — شكل ‎١‏ يوضح نظرة شاملة تخطيطية لطريقة تخليق مشتقات ‎oligonucleotide triphosphate‏ ‎.ester‏ ‏شكل ¥ يوضح تحليل ‎ESI-LC/MS j RP-HPLC‏ لتخليق ‎Y¢‏ رحدة ‎decyl-O-pppRNA‏ ‏(ترتيب ‎(5’~GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU RNA‏ 2 0 هيئات ‎RP-HPLC‏ من ‎(I‏ خليط تفاعل خام يحتوي على 4/8 7 ‎decyl-O-pppRNA‏ (زمن الاستبقاء = ‎١6‏ دقيقة) ب) ‎decyl-O-pppRNA‏ نقي العمود: ‎٠١ (You x 4,١ Hamilton PRP—1‏ ميكرومتر المستوى المتدرج: صفر- ‎7٠00‏ (ب) في ‎YA‏ دقيقة؛ (أ) = ‎Ale ٠٠١‏ جزيئي جرامي ‎TEAB‏ ‎٠‏ (ب) = 780 8800 ‎٠٠١‏ مللي جزيئي جرامي ‎TEAB‏ ‏(ب) هيئة ‎ESI-MS‏ لأجل ‎decyl-O-pppRNA‏ نقي مسجل باستخدام ‎RP-LC/MS‏ (الوزن ‎ad)‏ المحسوب: ‎YAAY‏ الموجود: ‎(Va TA‏ شكل ؟ يوضح تنقية ‎RP-HPLC‏ لمقياس شبه تحضيرية لتفاعل مقياس ‎١‏ ميكروجزيء جرامي من ‎:decyl-O-pppRNA‏ إلحاق ‎Decyl‏ يتيح فصل فعال للمنتج المرغوب (كسر ‎)١‏ من ‎١‏ المنتجات الجانبية غير الملحقة متضمنا ترتيبات فشل التخليق ؛ ‎OH-RNA‏ غير ‎phosphorylated‏ كامل الطول ‎ppPRNA;‏ غير مشتق. العمود: ‎Yoo XV Hamilton PRP-1‏ مم؛ ‎٠١‏ ميكرومتر المستوى المتدرج: صفر ‎A=‏ (ب) في ‎Cu‏ دقيقة 0 = ‎Yeu‏ مللي جزيني جرامي ‎¢TEAB‏ (ب) = ‎٠٠١ amethanol ZA.‏ مللي جزيئي جرامي ‎.TEAB‏ ‎Ye.‏ شكل ‎Ed‏ تجسيدات مفضلة ‎Adin,‏ خاصة لأجل ‎Y‏ ‏شكل ‎to‏ فحص لمواضع انحلال ‎2°-O-methylations‏ لإدخال انتقائية ‎RIG-I‏ ‏د
اج \ —
شكل +: ‎Methylations‏ تجعل ‎RIG‏ المضاعف خاص ونشط بدرجة عالية.
شكل ‎phosphorothioates :١‏ طرفية تزيد التولد المناعي للمضاعف الانتقائي.
شكل ‎tA‏ استبدالات 27-1100 منتقاة تزيد احتمالية تنشيط ‎RIGHT‏ المضاعف.
شكل 4: نمط التعديل المتعدد لأجل 011-6702 ‎OH ds—-RNA‏ يؤدي إلى تحسين قوي
هه لاحتمالية تتنشيط ١-6اي.‏
شكل ‎:٠١‏ تعزيز التولد المناعي بواسطة تعديلات أساسية يكون قابلا للتحويل إلى مضاعف
0 01718م05م11.
شكل ‎:١١‏ يوضح ‎phd‏ شاملة تخطيطية لطريقة الاختراع باستخدام
‎diethylenglycolmonobutylether‏ كمثال لأجل ‎alkylpolyethylenglycols‏ كعامل كاشف ‎٠‏ لفتح حلقة محبة للنواة.
‏شكل ‎VY‏ تنقية ‎RP-HPLC‏ من خليط تفاعل خام يحتوي على 45 7 ‎C4-DEG-pppRNA‏
‏(ذروة عند ‎AAS‏ ملليلتر حجم متدرج) و ‎pppRNA Jon‏ )5959 عند ‎YV,o‏ ملليلتر)؛ العمود:
‎YOu XV Hamilton PRP-1‏ مم؛ ‎٠١‏ ميكرومتر؛ معدل التدفق ؟ ملليلتر/ الدقيقة.
‏المستوى المتدرج: ‎ZA)‏ (ب) في ‎Cu‏ دقيقة 0 = ‎OY)‏ جزيثي جرامي تح 1؛ (ب) = ‎AA‏ ‎١,١ Methanol ٠‏ جزيئي جرامي ‎.TEAB‏
‏شكل ‎VY‏ أطياف ‎MALDI-TOF‏ تقابل ‎C4-DEG-pppRNA‏ بعد تنقية © 101. تلاحظ
‏ذروة الكتلة الصحيحة عند 00/2 ‎VAYY,1‏ )0(
‏شكل ‎VE‏ يوضح برنامج تخليق 0001408 باستخدام ملحق مركب ‎polyether‏ محب للدهن.
‎(RNA ‏(ترتيب‎ ١4 ‏المتعلقة بالشكل‎ MALDE ‏وبيانات‎ HPLC ‏يوضح تنقية‎ Yo ‏شكل‎ ‎(5’-GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU Y.
‏(أ) تنقية ‎RP-HPLC‏ لأجل:
‎TVA
-؟- ‎C11-CONH-CH2CH2CH2-(0O-CH2CH2)2-0-CH2CH2CH2-NHpppRNA‏ ‏العمود: ‎You x 4.1 Hamilton PRP-1‏ مم؛ ‎٠١‏ ميكرومتر المستوى المتدرج: ‎FA hea‏ (ب) في ‎٠٠‏ دقيقة؛ 0 = ‎٠٠١‏ مللي ‎Aa‏ جرامي ‎TEAB‏ ‏(ب) = 7860 ‎٠٠١ methanol‏ مللي جزيئي ‎ha‏ 1-8. © (ب) أطياف ‎MALDI‏ المسجلة من خليط التفاعل الخام بعد إزالة الملح توضح وجود ‎C11-CONH-CH2CH2CH2~(0-CH2CH2)2-0-CH2CH2CH2NHpppRNA‏ ‏(الوزن الجزيئي الجرامي ‎(AVVEA‏ ‏)=( أطياف ‎MALDI‏ لمنتج التحلل ‎Sd‏ بأس هيدروجيني = 7,48 من ‎C11-CONH-CH2CH2CH2~(0-CH2CH2)2-0-CH2CH2CH2NHpppRNA‏ ‎٠‏ المنقى (الوزن الجزيئي 7,7 787). شكل ‎V1‏ يوضح البرنامج التخليقي لأجل ‎PPPRNA‏ ملحق مع ‎cholesteryl‏ مع انشقاق اختياري لأجل ‎pppRNA‏ المقابل. ‎١١7 JSS‏ يوضح تتقية وتحليل ‎pppRNA‏ ملحق مع ‎cholesteryl‏ (ترتيب خلال : ‎:(5’-GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU‏ ‎١٠‏ () تنقية ‎RP-HPLC‏ لأجل: ‎Cholesteryl -CONH-CH2CH2~(O-CH2CH2)2-NH-ppp-RNA‏ العمود: ‎You x 4.1 Hamilton PRP-1‏ مم؛ ‎٠١‏ ميكرومتر المستوى المتدرج: ‎em jhe‏ )4 (ب) في ‎7٠ (Eo‏ (ب) ‎Asad‏ دقائق؛ ‎71٠0-٠١‏ 8 في ‎YY‏ دقيقة؛ 0 = 50 مللي جزيئي جرامي 18/88؛ (ب) = 795 ‎٠١ methanol‏ مللي ‎sun‏ ‎٠٠‏ جرامي ‎.TEAB‏ ‎TAA‏
(ب) تحليلن ‎RP-HPLC‏ لأجل ‎Cholesteryl ~-CONH-CH2CH2~(O-CH2CH2)2~‏ ‎NH-ppp—-RNA‏ نقي. العمود: ‎You x 4.١ Hamilton PRP-1‏ مم؛ ‎٠١‏ ميكرومتر المستوى المتدرج: صفر ‎A AE‏ (ب) في ‎YA‏ دقيقة ‎A ٠١‏ (ب) لمدة ¢ دقائق؛ 0 = .54 مللي © جزيئي جرامي ‎(TEAB‏ (ب) = 745 ‎٠٠ methanol‏ مللي جزيئي جرامي 1-8. )=( أطياف ‎MALDI‏ لأجل -11ل-0-01120112(2)-11-01120112ل0- ‎Cholesteryl‏ ‎ppp-RNA‏ النقي. ذروة ‎YAYY,T) pppRNA‏ دالتون) نتيجة لانشقاق ‎PN‏ أثناء عملية التأين. الوصف ‎١‏ لتفصيلي: ‎٠‏ مثال ‎:١‏ تحضير ‎5’-Decyl-O-triphosphate RNA‏ كما هو موضح في النظرة الشاملة (شكل ‎)١‏ فإن عملية تخليق ‎decyl-O-triphosphate‏ ‎RNA‏ تتضمن خطوات التخليق التالية: ‎5’-Decyl-O-triphosphate RNA ) 4-١‏ يجفف ‎STOH-RNA‏ المحمي بالكامل؛ المرتبط بدعامة ‎١(‏ ميكروجزيء جرامي) لمدة ؟ ساعات ‎Vo‏ بالشفط داخل عمود تخليق ويغسل على ‎Mal‏ مع ‎dioxane [pyridine‏ لامائي (١:7؛‏ حجم/ حجم 2 ملليلتر) ‎٠.‏ تحت جو ‎@rgon‏ يحقن ‎١‏ جزيثي جرامي محلول محضر طازجا من -2 ‎chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin—-4-one‏ في ‎dioxane‏ جاف ‎٠٠١(‏ ‎٠٠١ ily Sia‏ ميكروجزيئي جرامي) في دورق يحتوي على ؟ ملليلتر من ‎dioxane [pyridine‏ لامائي (١:7؛‏ حجم/ حجم). يسحب ‎5٠‏ مللي جزيئي جرامي من محلول ‎phosphitylating‏ ‎Yo‏ الناتج في عمود التخليق ويتحرك ببطء جيئة وذهابا خلال زمن تفاعل بمقدار ‎٠‏ ؟ دقيقة. فيما بعد ؛ يحضر محلول ‎Llsstetra(tri-n-butylammonium) pyrophosphate‏ 0+ جزيئي جرامي من محلول ‎bis(tri-n—-butylammonium) pyrophosphate‏ في ‎١( DMF‏ ملليلترء ‎٠,8‏ ‎TVA‏
—YA— ‏مللي جزيء جرامي). يتم دفع‎ ١ ‏ميكرولتر؛‎ YYA) tri-n—butylamine ‏مللي جزيئي جرامي) و‎ phosphitylating ‏خلال العمود وبعد قذف وتفريغ العامل الكاشف‎ pyrophosphate ‏محلول‎ ‏المتبقي جيئة وذهابا باستخدام محقنين. بعد‎ pyrophosphate ‏الفائض من العمود يدفع محلول‎ ‏لامائي (؟ ملليلتر). يذاب 0,0 جزيئي جرامي من‎ acetonitrile ‏دقائق يغسل العمود مع‎ ٠ ‏لامائي‎ acetonitrile ‏ميكرولتر) في‎ Vv +) decane tert-butyl hydroperoxide ‏محلول‎ © 1) ‏لامائي‎ acetonitrile ‏دقيقة يغسل العمود مع‎ ١١ ‏ملليلتر) ويتصل مع دعامة التخليق. بعد‎ Y) ‏ميكرولتر؛ ؟‎ Yeo) N-methylimidazole ‏ملليلتر). على التوالي؛ يدفع محلول متجانس من‎
N= (ha ‏مللي جزيء‎ ١١١ ils Su You) tri-n—butylamine «(pa ‏جزيء‎ Ak ‏مللي جزيء جرامي) بصورة متكررة جيئة وذهابا خلال العمود‎ ٠٠١,8 ‏ملليلترء‎ Y) decyl alcohol .decyl-O-triphosphate ‏إلى‎ cyclotriphosphate ‏ساعة لتحويل‎ 578 sad ‏ويترك ليتفاعل‎ ٠ ‏لامائي‎ acetonitrile ‏يغسل العمود مع‎ «TEAB) triethylammonium bicarbonate ‏من‎ ha ‏جزيني‎ ١.١ ‏ملليلتر) ويعالج مع‎ 7) ‏مع تجنب الاشتقاق‎ (Wile ‏غير المتفاعل‎ cyclotriphosphate ‏دقيقة لتحلل‎ Yo ‏ملليلتر) لمدة‎ ¥ ‏لامائي‎ acetonitrile ‏غير الخاص أثناء إجراء إزالة الحماية التالي. بعد خطوة غسل إضافية مع‎ argon ‏ملليلتر) تجفف دعامة التخليق في تيار من‎ 4( ١ ‏إزالة الحماية والتنقية‎ (1-0 7 560 ‏مع محلول محضر طازجا من‎ 5’—decyl-O-triphosphate oligonucleotide Jai, ‏حجم/ حجم؛ ¥ ملليلتر) باستخدام‎ ٠:١ (AMA) ‏مائي وأمونيا مائية مركزة‎ methylamine ‏المحلول إلى قارورة ذات غطاء ملولب نظيفة‎ Jig ‏محقنين. بعد زمن انشقاق بمقدار 70 دقيقة‎ ‏دقائق‎ ٠١ ‏ملليلتر). يسخن المحلول المتحد والمادة المغسولة لمدة‎ ١( AMA ‏وتشطف الدعامة مع‎ ٠ ‏عند 75 "مثوية. بعد التبريد على ثلج يتبخر المحلول حتى الجفاف وتجفف المادة المتخلفة بالتبخير‎ ‏مطلق. لإزالة مجموعات حماية 27-0-18101/5 يمكن استخدام المعالجة‎ ethanol ‏المشترك مع‎ triphosphate ‏بدون فقد كبير لجزء‎ (TEA.3HF) triethylamine trinydrofluoride ‏مع‎ ‏في محلول محضر طازجا‎ decyl-O-triphosphate oligonucleotide ‏المعدل. تعاد إذابة‎ «TEA.3HF [TEA /NMP) TEA.3HF /triethylamine /N-methylpyrrolidone ‏من‎ Yo
TVA
‎q —‏ \ — 01“ حجم/ حجم؛ ‎YYo‏ ميكرولتر) ويسخن المحلول عند 5 ‎YEP‏ لمدة ساعتين. بطريقة ‎cali‏ يمكن استخدام إزالة حماية محلول من ‎TEA.3HF‏ في ‎AER ) DMSO‏ حجم/ حجم؛ ‎Tee‏ ‏ميكرولتر). يترسب ‎decyl-O-triphosphate oligonucleotide‏ المزال الحماية بالكامل من محلول ‎all)‏ الحماية باستخدام ‎n-butanol‏ وينقى بواسطة ‎{HPLC‏ إن ملحق ‎decyl‏ المحب © للدهن يتيح فصل ‎decyl-O-triphosphate‏ من الشوائب التي لا تحتوي على الملحق بواسطة تحليل كروماتوجرافي طور معكوس. يطبق ‎mite‏ التفاعل على عمود ‎You XV PRP-1‏ مم ويفصل في مستوى متدرج خطي من صفر إلى ‎7٠٠0‏ من مثبت الأس الهيدروجيني (ب) في ‎5٠0‏ ‏دقيقة بمعدل تدفق © ملليلتر/ الدقيقة. يكون مثبت الأس الهيدروجيني (أ) ‎٠٠١‏ مللي ‎Son‏ ‏جرامي ‎TEAB‏ ومثبت الأس الهيدروجيني (ب) ‎٠٠١‏ مللي جزيئي جرامي 1588 في ‎Ihe‏ ‎.methanol Ye‏ تجمع كسور المنتج؛ تتبخر ويزال منها الملح بالتبخير المشترك المتكرر مع ‎methanol‏ تذاب المادة المتخلفة في ماء وتتحول إلى شكل الصوديوم بواسطة ترسيب ‎ethanol‏ ‏في وجود ‎١,7‏ جزيئي جرامي من كلوريد الصوديوم. مثال ‎Y‏ ‏تحضير ‎5'-pppRNA gamma 2-(2-Butoxyethoxy)ethyl-ester‏ ‎(C4-DEG-pppRNA) ١٠‏ تتضح في شكل ‎١١‏ نظرة شامل لبرنامج التفاعل الموصوف في ‎YJB‏ ‏خطوة )2 يذاب ‎9.١‏ مجم ) ‎١‏ مللي جزيء جرامي) من —3,2, ‎2—chloro—4H-1‏ ‎benzodioxaphosphorin—4-one‏ في ‎١‏ ملليلتر من ‎dioxane‏ جاف في قارورة ذات غشاء سعة ‎٠١‏ ملليلتر تحت جو ‎argon‏ ‎٠‏ خطوة ؟: يجفف عمود التخليق المحتوي على ‎RNA‏ المحمي بالكامل المزال 1117/18160 والمغسول جيدا مع ‎cacetonitrile‏ بالشفط لمدة ‎VY‏ ساعة. تغسل مكونات العمود جيدا بالسحب المتكرر وقذف ؟ ملليلتر من محلول ‎٠:7 (SLY dioxane [pyridine‏ (حجم/ حجم) في جو ‎argon‏ ‏د
=« اذ خطوة ؟: يضاف في قارورة ‎YN‏ ملليلتر من ‎٠:7 dioxane Jpyridine‏ حجم/ حجم ثم ‎٠٠١‏ ‏ميكرولتر من محلول ‎١‏ جزيئي جرامي ‎2—chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin—‏ ‏4-6 .في ‎dioxane‏ جاف لإعطاء ‎ov‏ مللي جزيئي جرامي من_العامل الكاشف 00059 مثلا ‎ «2—chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin-2-one‏ ‎٠:7 pyridine [dioxane ©‏ (حجم/ حجم). يتجانس المحلول بالرج برفق. يبدأ التفاعل مع سحب محلول ‎2-chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin—4-one‏ خلال عمود التخليق من القارورة. إثناء ‎dell‏ فإن السحب المتكرر لأجل وقذف المحلول المحتوي ‏ على ‎2-chloro-4H-1,3,2-benzodioxaphosphorin—-4-one‏ من عمود التخليق؛ للسماح ‎٠‏ بالاتصال الكامل والخلط الجيد مع ‎RNA‏ المدعم بالطور الصلب. إن التفاعل ‎Vo sad‏ دقيقة ‎sale‏ ‏يعطي تفاعل قريب من الكمي لمجموعة 5-011 الحرة من ‎oligomer‏ المرتبط مع الدعامة في ‎4-٠٠‏ نطاق صافي. خطوة ‎of‏ بعد التفاعل لمدة ‎Ve‏ دقيقة يتم قذف محلول ‎dioxane [pyridine‏ المحتوي على عامل ‎phosphitylating‏ الفائض في حاوية نفايات؛ يملا حاقن جديد مع خليط مدوم من ‎١‏ ملليلتر من ‎Yo‏ *,. جزيثي جرامي ‎(Bu3NH)2 pyrophosphate‏ في ‎DMF‏ جاف 5 ‎YYA‏ ميكرولتر ‎١(‏ مللي جزيء جرامي) من ‎Bu3N‏ جاف لإعطا ءِِ ب جزيثي جرامي محلول ‎pyrophosphate‏ 4(ل8030)._يدفع هذا المحلول خلال العمود بذلك يستبدل محلول 01080©/0/106. إن الفائض الكبير من ‎pyrophosphate‏ يضمن التحول الكمي للمركب الوسطي إلى ‎P(II=P(V) cyclic anhydride lla‏ ‎٠‏ خطوة 10 يغسل العمود مع ¥ ملليلتر من ‎CH3CN‏ لإزالة ‎DMF‏ وفائض ‎«PPI‏ ويملاً مفاعل العمود مع ‎CH3CN‏ جاف. خطوة ‎:١‏ يذاب ‎٠٠٠0‏ ميكرولتر من 1-8000 (محلول 0,0 جزيثي جرامي في ‎«decane‏ ‎(Sigma-Aldrich‏ في ‎Y‏ ملليلتر من ‎CH3CN‏ لامائي لإعطاء ‎١,7‏ جزيئي جرامي تقريبا من د
“yy ‏دقيقة للحصول على‎ ١5 ‏محلول متجانس. تتصل دعامة التخليق مع هذا المحلول لمدة‎ ‏المؤكسد.‎ P(V) cyclic anhydride lib ‏مع‎ Sars ‏الجاف لإزالة فائض البيروكسيد‎ CH3CN ‏يغسل العمود مع ؟ ملليلتر من‎ :١ ‏خطوة‎ ‏جاف.‎ CH3CN 2-(2-Butoxyethoxy)ethanol (Diethylene glycol ‏يتصل ؟ ملليلتر من‎ :A ‏خطوة‎ © ١و‎ N-methylimidazole ‏من‎ ha ‏جاف يحتوي على )+ جزيئي‎ monobutyl ether)
CPG ‏مع الدعامة في العمود. يجب أن يكون زمن اتصال‎ tri-n—butylamine ‏جزيئي جرامي‎ ‏ساعة عند درجة حرارة الغرفة.‎ $A ‏مع الكحول على الأقل‎ ‏خطوة 19 يغسل العمود جيدا مع 4 ملليلتر 80810010116؛ ثم يتصل العمود مع ؟ ملليلتر من‎ ‏120010000/ا11610)؛ محلول في ماء لمدة ساعة‎ bicarbonate) ‏جرامي‎ Jus +, TEAB ٠ ‏غير المتفاعل مائيا.‎ cyclotriphosphate ‏واحدة لحل‎ methylamine) ‏ملليلتر من محلول إزالة الحماية‎ ١ ‏مرحلة أولي لإزالة الحماية: يمرر‎ : ٠١ ‏خطوة‎ ‏خلال الدعامة مرتين - ؟‎ (AMA ‏حجم/ حجم عامل كاشف‎ 1:١ ‏مائي 60 74/ أمونيا مائية مركزة‎ ‏؟ دقيقة ينقل المحلول إلى قارورة جديدة. تغسل الدعامة مع نفس حجم‎ ٠ ‏مرات. بعد الاتصال لمدة‎ ٠١ ‏وتتحد المواد المغسولة. يسخن المحلول المتحد والمواد المغسولة لمدة‎ AMA ‏إزالة الحماية‎ Vo ‏ميكرولتر» ثم‎ ٠00-7٠١0 ‏دقائق عند 15>”مثوية. بعد التبريد على ثلج؛ يركز المحلول إلى حجم‎ ‏يتبخر حتى الجفاف.‎ ‏تجفف المادة المتخلفة بإضافة‎ :2'-O-TBDMS ‏مجموعات الحماية‎ all :١١ ‏خطوة‎ ‎TBAF ‏مليلتر من‎ ١ ‏يضاف‎ coils EtOH ‏ميكرولتر من‎ Yoo ‏والتبخير المشترك لأجل‎ ‏يحكم الإغلاق‎ (THF ‏جزيئي جرامي جاف في‎ ١ (tetra—n-butylammonium fluoride) ٠
TEAB ‏ملليلتر من‎ ١ ‏ساعة. يخمد التفاعل مع‎ NT ‏جيدا وتوضع على رجاج لمدة‎ ‏معقم» ويزال الملح منه على‎ Sb ‏جزيثي جرامي‎ ١ (triethylammonium bicarbonate) ‏(تنقية حمض نووي) باستخدام ماء معقم كمادة تصفية. قد يكون الترشيح‎ NAPTM-25 ‏عمود‎ ‏ميكرومتر معقم ضروريا عند هذه الخطوة. يتم توحيد وتبخير الكسور‎ ١ ‏خلال مرشح بمقاس‎ ‏د‎
— \ اذ
الممتصة بالأشعة فوق البنفسجية إلى حجم بمقدار ‎ily Sie ١5٠١‏ يضاف ‎٠٠١‏ ملليلتر من ‎١‏
جزيئي جرامي ‎TEAB‏ بأس هيدرورجيني ‎A‏ ويخزن المحلول المجمد عند = ‎The‏ حتى يمكن
إجراء تنقية ‎HPLC‏
خطوة ‎Y‏ )2 تنقية ©-ا10ا: يحمل منتج التفاعل من خليط تفاعل بمقياس ‎١‏ ميكروجزيء جرامي من
© الخطوة ‎١١‏ في عمود ‎Yo x ١7 PRP-1‏ مم (18001100). تجرى التنقية باستخدام مثبت للأس
الهيدروجيني متدرج خطي (ب) من صفر إلى 2780 في ‎٠٠‏ دقيقة بمعدل تدفق 7 ملليلتر/ الدقيقة.
يكون مثبت الأس الهيدروجيني (أ) هو ‎je Sle ٠٠١‏ جرامي ‎TEAB‏ ومثبت الأس
الهيدروجيني (ب) هو ‎٠٠١‏ مللي جزيئي جرامي ‎TEAB‏ في ‎/methanol‏ ماء ‎Y:A‏ حجم/ حجم.
يوضح في شكل ؟ مثال نموذجي لتنقية +24-108. يكون اتحاد ؛ ملحقات ‎alkyl‏ ذرة ومتخلف ‎٠‏ للاا60©9/ا01610 ‎LK‏ لفصل خط قاعدة قريب من مل[ةامم0. يتحد الكسر المقابل للذروة عند
‎«pbk 4‏ يتبخر على مبخر دوار ويزال الملح بواسطة تبخيرات مشتركة متعددة مع
‎methanol‏ جاف.
‎Jb‏ ؟
‏اشتقاق ‎pppRNA‏ باستخدام ملحقات مركب ‎aaspolyether‏ للدهن مع ‎polyether amines‏ ‎VO‏ محبة للدهن مسبقة التشكل
‏مثال ؟: استعمال ‎polyetheramines‏ محبة للدهن من البناء ‎ZY-H‏ لتوليد ‎ZYNHpppRNA‏
‏الجزء (أ): تحضير واسع النطاق اقتصادي لأجل ‎polyether amine‏ محب للدهن
‏يمكن إجراء هذا الإجراء بدون تحليل كروماتوجرافي عمود وميضي ويكون قابل للتطبيق عامة
‏لتخليق ‎monoamides‏ من ‎diamines‏ قابلة للذوبان في الماء و ‎methyl esters‏ من ‎carboxylic acids ٠‏ محبة للدهن.
‎(VE ‏شكل‎ «F ‏(مركب‎ N-Lauryl-4,7,10-trioxa-1,13-tridecanediamine ‏تخليق‎
‏يذاب ‎4,7,10~trioxa—1,13~tridecanediamine‏ (7,8؟ ملليلترء ‎٠٠١‏ مللي جزيء جرامي)
‏في ‎¥Y,0‏ ملليلتر ‎.Methanol‏ يضاف ‎٠١ «jbl ¢,4Y) Lauric acid methyl ester‏ مللي
‎TAA py ‏جزيء جرامي) ببطء مع التقليب ويحفظ الدورق المغلق عند درجة حرارة الغرفة لمدة © أيام. يزال‎ ‏ملليلتر‎ ٠٠١ ‏_من خليط التفاعل على مبخر دوار وتذاب المادة المتخلفة في‎ Methanol .Ethylacetate ‏ملليلتر) ثم بواسطة كلوريد صوديوم مركز‎ ١8١ XY) ‏بالاستخلاص مع ماء‎ diamine ‏يزال فائض‎ - ‏ويتبلور الزيت المتخلف عند الاستقرار عند‎ ethylacetate ‏ملليلتر). يتبخر طور‎ ٠٠١ XY) 0
N-Lauryl 4,7,10-170*8-1,13- ‏مللي جزيء جرامي) من‎ VY) ‏جم‎ TA ‏لإعطاء‎ 43807 ‏نقي.‎ tridecanediamine ‏مع -لا‎ CPG ‏مرتبط مع‎ RNA cyclotriphosphate ‏الجزء (ب): تفاعلات فتح حلق على‎
Lauryl-4,7,10-trioxa-1,13-tridecanediamine =) ‏طبقا للخطوات‎ (VE ‏(مركب 4؛ شكل‎ CPG ‏المرتبط مع‎ RNA cyclotriphosphate ‏يخلق‎ ٠ ‏ثابت الطور‎ RNA cyclotriphosphate ‏يجرى تفاعل فتح الحلقة من‎ .١ ‏في المثال السابق‎ V ‏من محلول -4,7,10-110«*8-1,13- الا1ن21ا-لا‎ ha ‏الصلب مع 0,08 جزيئي‎ ‏لمدة ؟‎ CPG ‏مع‎ acetonitrile ‏يتصل محلول‎ acetonitrile ‏في‎ tridecanediamine ‏ويغمر‎ ala acetonitrile ‏ملليلتر من‎ ٠١ ‏تغسل الدعامة مع‎ (Adal ‏ساعات عند درجة حرارة‎ ‏الإضافية بدقة طبقا‎ HPLC ‏يجرى الانشقاق من الدعامة؛ إزالة الحماية ومعالجة‎ .@rgon ‏مع‎ lla Vo ‏إن‎ .))(١١ ‏(شكل‎ Methanol 7975 ‏من مثال 7. يصفى المنتج 0 عند تركيز‎ ١-٠١ ‏للخطوات‎ ‎AYYEA ‏لخليط التفاعل يؤكد بناء المركب © (وزن جزيئي جرامي‎ MALDE ‏التحليل الطيفي‎ ‏(ب)).‎ Yo ‏دالتون؛ شكل‎ ‏المقابل: يذاب‎ triphosphate oligonucleotide ‏اختياريا» قد يزال ملحق التنقية للحصول على‎ gov ‏في‎ )١4 ‏(مركب ©؛ شكل‎ n-lauryl ‏مستبدل مع‎ 9807118 amid ‏نانوجزيء جرامي‎ ٠١١ Yo ‏من مثبت الأس الهيدروجيني لإزالة الحماية بأس هيدروجيني 7,8 في أنبوب‎ il Sue ‏دقيقة. تنتج‎ Ve ‏لمدة‎ eT ‏ملليلتر ويسخن الأنبوب المغلق بإحكام عند‎ Y ‏سعة‎ Eppendorf ‏من المركب © بدون انحلال جزء‎ phosphoramidate ‏تلك الشروط انشقاق كمي لرابطة‎ ‏جزيئي جرامي‎ © NaCl ‏ميكرولتر من محلول‎ ١ ‏يبرد خليط التفاعل على ثلج و؛‎ triphosphate ‏د‎
— اذ معقم ويضاف ‎٠,١‏ ملليلتر من ‎ethanol‏ مطلق. تجمع المادة المترسبة بالطرد المركزي؛ تغسل مع ‎610800١‏ مبرد؛ تجفف على ‎(Speed Vac‏ تذاب في ماء معقم وتخزن مجمدة عند = ‎Ag BP‏ التحليل الطيفي ‎MALDI‏ يؤكد الوزن الجزيئي المتوقع لمنتج ‎PPPRNA‏ (الوزن الجزيئي 1877 ‎sala‏ شكل ‎١٠١‏ (ج)). © مثال ؛ أسلوب على عمود لاشتقاق ‎PPPRNA‏ مع ملحقات مركب ‎polyether‏ محب للدهن مثال ؛ هو ‎sla)‏ من خطوتين يستعمل اشتقاق على عمود لأجل ‎HYNHpppRNA‏ ‎oligonucleotide‏ المتبت لتوليد ‎ZYNHpppRNA‏ ‏تحضير ‎triphosphate RNA‏ ملحق مع ‎Cholesteryl‏ ‎«ChI-=CONH-CH2CH2~(O-CH2CH2)2-NH-ppp-RNA) ٠‏ مركب 4؛ شكل ‎(V1‏ ‏إن اقتران ملحق ‎cholesteryl‏ محب للدهن مع ‎triphosphate RNA‏ يتيح الفصل الفعال لمنتج ‎pppRNA‏ الملحق من شوائب غير ملحقة بواسطة ‎[RP-HPLC‏ تتضح في شكل 11 نظرة شاملة لبرنامج التفاعل لتحضير ‎triphosphate RNA‏ ملحق مع ‎.cholesteryl‏ ‏في خطوة أولى تتحول رابطة الدعامة المحمية بالكامل ‎STOH-RNA‏ إلى المركب الوسطي ‎cyclic triphosphate Yo‏ (مركب 7؛ شكل ‎(VT‏ كما هو موصوف في الخطوات ‎-١‏ 7 من المثال ا على التوالي؛ يغسل العمود مع ‎SLY acetonitrile‏ (؟ ملليلتر). يذاب ‎١76‏ ميكرولتر من ©0010 8/ا06007/(0161©الا61)-”2,2 (مركب ‎٠,7 OT JRE)‏ مللي جزيء جرامي) في 1586 لامائي ‎١(‏ ملليلتر) ويتصل المحلول مع الدعامة في العمود. بعد ؟ دقائق يغسل ‎Yo‏ العمود مع ‎acetonitrile‏ لامائي (؟ ملليلتر) ‎dichloromethane‏ لامائي )1 ملليلتر). على ‎(igh‏ يعالج ‎Jal triphosphate‏ مع ‎amino‏ (أي مركب ‎oF‏ شكل ‎)٠١‏ ‏مع محلول مخلوط مسبقا من ‎YT) cholesteryl chloroformate‏ مجم؛ ‎Av‏ ميكروجزيء د
—yvo- ‏6؛ ميكروجزيء جرامي)‎ .»رتلوركيم_١,5(‎ N,N-diisopropylethylamine «(lx dichloromethane ‏ميكروجزيء جرامي) في‎ t+ ‏مجم»‎ 4,9( 4-dimethylaminopyridine ‏و‎ ‏لامائي (؟ ملليلتر)‎ dichloromethane ‏دقيقة. يغسل العمود مع‎ V0 ‏لامائي )0 ملليلتر) لمدة‎ ads ‏للانشقاق من الدعامة‎ argon ‏ملليلتر) ويجفف في تيار من‎ ١( ‏لامائي‎ acetonitrile ‏مائي‎ methylamine ‏المشتق مع محلول محضر طازجا من‎ oligonucleotide ‏الحماية؛ يتصل‎ © ‏ملليلتر) باستخدام محقنين. بعد الانشقاق‎ Y ‏حجم/ حجم؛‎ 1:١ AMA) ‏وأمونيا مائية مركز‎ ‏دقائق عند 5+””مثوية‎ ٠١ ‏المحلول إلى قارورة ذات غطاء ملولب؛ يسخن لمدة‎ Jan ‏دقيقة‎ Ve ‏لمدة‎ ‎١ ‏مطلق وتعالج مع‎ ethanol ‏ويتبخر حتى الجفاف. تجفف المادة المتخلفة بالتبخير المشترك مع‎ ‏مللي جزيء‎ ١ ‏ملليلترء‎ ١( THF ‏في‎ tetra—n-butylammonium fluoride ‏جزيئي جرامي‎ triphosphate ‏ينقى‎ NAP-25 ‏على عمود‎ all ‏ساعة. بعد إزالة‎ ١١ ‏جرامي) مع الرج لمدة‎ ٠ ‏باستخدام‎ HPLC ‏المزال الحماية بالكامل بواسطة‎ cholesteryl ‏الملحق مع‎ oligonucleotide ‏يصفى المركب ؛‎ (IY ‏الشكل‎ cae You x ؛,١‎ (Hamilton PRP=1) ‏عمود طور معكوس‎ ‏(الوزن الجزيئي‎ MALDI ‏بنسبة 795 ويتأكد البناء المتوقع بواسطة تحليل‎ methanol ‏عند تركيز‎ ‏(ج)).‎ ٠١7 ‏7ه دالتون؛ الشكل‎
‎Vo‏ اختيارياء يزال محلق ‎cholesteryl‏ بواسطة التحلل ‎SW)‏ بحمض عند أس هيدروجيني 7,8 عند ٠مثوية‏ للحصول على ‎triphosphate oligonucleotide‏ المقابل (مركب ©؛ شكل ‎(V1‏ ‏باتباع نفس الإجراء كما هو موصوف في ‎Fle‏ ‏مثال ©: إدخال تنظيمي لأجل ‎2'-O-methylations‏ ينتج مضاعف ‎RNA‏ انتقائي ‎RIG-I‏ ‏قد توجد قائمة بالاختصارات ومعانيها في نهاية نص التطبيق.
‎٠‏ إن الجسم الممتلك ‎RNA‏ يتميز بمجموعة من التعديلات التي قد يكون لها تأثير على وظائف ‎(RNAs; tRNAs) RNA‏ هكذا تكون ‎2'-O-methylations‏ قادرة على تعديل التولد المناعي لأجل 8لا. لا يجب أن يشتمل المركب الترابطي ‎RIGHT‏ الانتقائي على أكثر من 2-0-0107 واحد لكل جديلة. تدخل تلك الخصائص في مضاعف ‎RNA‏ باتحاد جدائل إحساس ومضادة للإحساس ‎methylated‏ بصورة مناسبة.
‏د
1+ ‎ands‏ مواقع ‏ انحلال ‎aaa 2'-O-methylations‏ انتقائية ‎46-١‏ (شكل 0( لجديلة الإحساس (أ) والمضادة للإحساس (ب) من ‎OH-GFP2‏ يجرى فحص 27-0-0007 كامل. يعدل كل موضع بصورة فردية بواسطة ‎2’-O-methylation‏ ‏ويستخدم لإثارة ‎(RIG‏ 117 أو 1188. لإثارة ١-6ل؛‏ تعاق خلايا أحادية الخلية لدم طرفي ‎(PBMCs) (peripheral blood mononuclear cells) ©‏ مع ‎Chloroquine‏ وتثار بالحقن الدهني للمضاعف. يقاس ‎IFNa‏ لمدة ‎٠١‏ ساعة بعد الإثارة بواسطة ‎ELISA‏ لأجل 1147 و1148 تفحص فقط جديلة فردية ذات ‎dla‏ لتحديد قدرتها المثيرة وتفحص على ‎PBMCs‏ غير معاقة. ينقل حامل الجين من العائل للجدائل الفردية بواسطة تعقيد ‎poly-L-Arginine‏ وبعد ‎٠١‏ ‏ساعة من نقل حامل الجين إلى العائل لأجل 1147 يقاس تنشيط 17/18 لأجل ‎TLRS‏ يقاس
‎٠‏ تنشيط ‎IL12p70‏ بواسطة ‎(ELISA‏ يتم الحث بنسبة ‎79٠٠‏ مع 6702 لجديلة الإحساس التي تقابل ‎Yo Ao‏ بيكوجرام/ ملليلتر ‎IFNa‏ لأجل ‎16-١‏ 7758 بيكوجرامي/ ملليلتر لأجل ‎TLR7‏ ‏و76١١‏ بيكوجرام/ ملليلتر 112070 لأجل 1148. إن تضاد الإحساس بنسبة ‎7٠08‏ لأجل 602 يقابل 47 ؟ 7 بيكوجرام/ ملليلتر ‎IFNa‏ لأجل ‎٠87١ (RIG‏ بيكوجرام/ ‎IFNa slik‏ لأجل 1147 و8٠١7‏ بيكوجرام/ ملليلتر ‎IL12p70‏ لأجل 1148. يعطى ملخص لتأثير إدخال
‎2°-O-methylation ٠‏ المعتمد على الموقع في شكل جدول (شكل 0( ‎Jabs‏ التأثيرات مع الجديلة غير المعدلة كمرجع. أبيض = لا يوجد تغير؛ أصفر = انخفاض للإثارة المناعية؛ أحمر = لا توجد إثارة مناعية؛ أخضر = ‎Lelie HE‏ زائدة. علاوة على هذاء يمكن أن يتضح أن ‎methylations‏ معينة تجعل المضاعف ‎RIG‏ خاص ونشط بدرجة عالية.
‎٠‏ - شكل ‎:١‏ 0 تتحد ‎Methylations‏ خاملة لتنشيط ا-416 في الجديلة المضادة للإحساس ويستخدم المضاعف الناتج لإثارة ‎PBMCs‏ معاقة مع ‎chloroquine‏ عند تركيز ‎A‏ + ميكروجرام/ ملليلتر. يقاس ‎IFNa‏ بواسطة ‎ELISA‏ بعد ‎Yo‏ ساعة من الإثارة. إن ‎7٠٠١8‏ من ‎OH-GFP2‏ ‏يتشابه .مع 77795 بيكوجرام/. ملليلتر 8ل78!.. (ب) تهجن اتحادات مختلفة من ‎2°-O-methylations‏ .في جديلة الإحساس والجديلة المضادة للإحساس وتستخدم لإثارة
‎.PBMCs ~~ Yo‏ لإثارة ‎6-١‏ اجا تتم إعاقتهم مع ‎Chloroquine‏ وينقل إليها حامل الجين من ‎Bilal‏ مع
‏د
— 7 اذ
‎(Lipofectamine‏ لأجل 1147 و1148 تستخدم ‎PBMCs‏ غير معاقة مع مضاعفات معقدة
‏مع ‎poly-L-Arginine‏ إن ‎79٠١‏ لأجل ‎IVT-2‏ تقابل ‎585١1‏ بيكوجرام/ ملليلتر ‎IFNa‏ لأجل
‎29٠00 16-١‏ عند 9.25 تقابل ‎١9975‏ بيكوجرام/ ملليلتر ‎IFNa‏ لأجل 11467 و الالا
‏بيكوجرام/ ملليلتر 112070 لأجل ‎TLRS‏ إن )( و(ب) يوضحان ‎SEM + luge‏
‎(standard error of the mean) 2‏ لثلاثة مانحين.
‏مثال 6: زيادة تنشيط ‎RIG]‏ بإقحام تعديلات تثبت ‎RNA‏
‏أثنا ‎siRNA ze s‏ يتم إقحام كسور ‎dsRNA‏ قصيرة في جسم؛ ‎Li Cua‏ تكوين بروثين خاص
‏في الخلايا المستهدفة. تتمثل مشكل هذا الشكل من العلاج في عدم الثبات الكبير للمضاعفات
‎.sIRNA‏ قد ينحل ‎RNA‏ بسهولة بواسطة ‎nucleases‏ خارجية و ‎nucleases‏ داخلية في ‎Vs‏ المصل أثناء النقل إلى الخلية المستهدفة.
‏قد يكون من المحتمل انحلال ‎sia‏ كبير من ‎RNA‏ خارجي ‎Lad)‏ المستخدم لأغراض علاجية في
‏المصل والعصارة الخلوية ‎GIN‏ المعطى ‎Al‏
‏يمكن أن يتضح أن لكل تعديل ‎5'-PTO‏ تأثير إيجابي على النشاط المناعي للمضاعف وأن اتحاد
‏5010 في جديلة الإحساس والجديلة المضادة للإحساس يؤدي إلى زيادة قصوى في النشاط ‎PTO Jia 515/853( ١‏ 10/853 515؛ شكل 7(ب)). لذلك ‎(Say‏ اعتبار استخدام هذه
‏التعديلات لأجل ‎RNA‏ الأساسي في المركبات الترابطية الانتقائية ‎RIG‏ نفعي.
‏تحديداء يمكن أن يتضح أن ‎5'-phosphorothioates‏ تزيد من التولد ‎eld)‏ لمضاعف
‏انتقائي.
‏شكل ‎iv‏ )1( تعاق ‎PBMCs‏ مع ‎Chloroquine‏ وتثار مع مضاعفات عند تركيز بمقدار ‎VA‏ ‎٠‏ ميكروجرام/ ملليلتر. بعد ‎Yo‏ ساعة من الإثارة يقاس ‎IFNa‏ بواسطة 58ااع. إن ‎7٠٠٠0‏ من
‏2 تقابل ‎1١78‏ بيكوجرام/ ملليلتر ‏ 17118. (ب) تعاير المضاعفات المشار إليها وتستخدم
‏لإثارة ‎.RIG-|‏ تعاق ‎PBMCs‏ مع ‎Chloroquine‏ وينقل حامل الجين من العاثل للمضاعفات
‏باستخدام ‎Lipofectamine‏ بعد ‎٠١‏ ساعة من الإثارة يتحدد ‎IFNa‏ في المادة الطافية بواسطة
‏د
م اذ
‎ELISA‏ إن ‎2٠00‏ من 0 نانوجزيئي جرامي 30-6702 تقابل ‎٠6044‏ بيكوجرام/ ملليلتر
‎.IFNa‏ توضح النتائج متوسط + ‎SEM‏ لأربعة مانحين.
‏في تطوير ‎SIRNAS‏ العلاجية يتم حل مشكلة ثبات المصل بواسطة نوع آخر من التعديل: إذا تم
‏دمج استبدالات 2-7000 في ‎(RNA‏ تكون ‎RNAs‏ الناتجة أكثر استقرارا بالنسبة لهضم © ©01001688. مع هذاء يلاحظ أنه في ‎Alla‏ الإثارة المناعية المعتمدة على ‎RIGHT‏ فإن استبدال -'2
‏100 يمكنه تنشيط الإثارة المناعية.
‏تحديداء يمكن أن يتضح أن ‎5'-phosphorothioates‏ تزيد من التولد ‎eld)‏ لمضاعف
‏انتقائي.
‏مع هذاء طبقا للاختراع الحالي وجد أن استبدالات ‎2'-fluoro‏ المنتقاة تزيد تنشيط ‎16-١‏ ‎٠‏ المحتمل للمضاعف.
‏لجديلة الإحساس (أ) والجديلة المضادة للإحساس (ب) من المضاعف يعدل كل موضع باستبدال
‏27-5000 بصورة فردية (شكل ‎(A‏ تستخدم المضاعفات الناتجة لإثارة ‎PBMCs‏ عند تركيز
‏بمقدار ‎A‏ ,+ ميكروجرام/ ملليلتر. لتقييم تنشيط ا١-6ا»‏ تعاق ‎PBMCs‏ وينقل إليها ‎dela‏ الجين
‏من العاثل بواسطة ‎(Lipofectamine‏ لإثارة 47ااآ و1148 تستخدم ‎PBMCs‏ غير معاقة ‎٠‏ ويتقل إليها حامل الجين من العائل مع مضاعفات معقدة مع ‎.poly-L-Arginine‏ بعد الإثارة
‎٠١ sad‏ ساعة تقاس ‎cytokines‏ بواسطة ‎ELISA‏ إن ‎72٠00‏ لأجل ‎GFP2‏ في جديلة
‏الإحساس تشبه 5097 7 بيكوجرام/ ملليلتر ‎IFNa‏ لأجل ‎16-١‏ 7780 بيكوجرام/ ملليلتر لأجل
‏117 و0٠‏ بيكوجرام/ ملليلتر لأجل 1148. للجديلة المضادة للإحساس ‎GFP2 79٠٠0‏
‏تقابل ‎40٠7‏ بيكوجرام/ ملليلتر ‎IFNa‏ لأجل ‎(RIG‏ )£19 بيكوجرام/ ملليلتر ‎IFNa‏ لأجل ‎١١7 1147 ٠‏ بيكوجرام/ ملليلتر 112070 لأجل 1148. يوضح متوسط + ‎SEM‏ لأربعة
‏مانحين.
‏هكذاء يكون من الهام جدا إيجاد مضاعف نشط قدر الإمكان يمكنه تعويض فقد ‎RNA‏ بواسطة
‏نشاطه القوي. في الفقرة السابقة وصفت إمكانية تحديد تعديلات ‎RNA‏ بواسطة ارتباطات ‎PTO‏
‏انتقائية واستبدالات ‎«2'-fluoro‏ التي تؤدي إلى زيادة نشاط المضاعف.
‎TVA
‎q —‏ اذ
‏مثال 7: اتحاد كل التعديلات مما ينتج مركب ترابطي ‎RIG‏ مولد للمناعة بقوة
‏لاختبار ما إذا كانت ارتباطات ‎PTO‏ أو استبدالات ‎2-fluoro‏ يمكن أن تتحد مع
‎2'-O-methylations‏ لزيادة الانتقائية؛ فإنها تتحد في مضاعف خطوة بخطوة.
‏تعاق ‎PBMCs‏ مع ‎Chloroquine‏ وتستخدم لإثارة ١-416ا.‏ تستخدم المضاعفات المعدلة بصورة
‏© متباينة اعتمادا على ‎OH-GFP2‏ ويقاس تنشيط ‎RIG]‏ عند ‎٠١‏ ساعة بعد ‎HEY‏ بواسطة
‎OH- ‏(شكل 4( إن المضاعفات المعدلة بصورة متعددة إما أن تقارن مع‎ IFNa ‏على‎ ELISA
‎7١١١ ‏تقابل‎ IVT 4 ‏من‎ 7٠٠١ ‏(ب). إن‎ triphosphorylated 30-2 ‏أو‎ 0 GFP2
‏بيكوجرام/ ملليلتر من ‎LINFa‏ يوضح متوسط + ‎SEM‏ لمانحين.
‏تضاف 515/853 ‎methylations‏ 2-0 إلى 011-6702 ‎RNA‏ البادئ أولا ‎«OH-GFP2 oMetl 5s/oMet3as) ٠‏ شكل ‎(ha‏ ثم تقارن مع تعديل 5-10 في جدائل
‏الإحساس والجدائل المضادة للإحساس )"5 ‎«OH-GFP2 PTO‏ شكل ‏ )(( على التوالي؛ يتحد
‏كلا النوعين من التعديل مع مضاعف ‎(OH-GFP2oMet] 5/oMet3 PTO)‏ شكل 0 في
‏النهاية؛ يتولد مضاعف يشتمل إضافيا على ثلاثة استبدالات 2-1100 عند المواضع ‎١‏ و" في
‎dls‏ الإحساس وعند الموضع | ‎١“‏ في الجديلة المضادة للإحساس ‎«OH-GFP2oMet15/3-F23/13-PTO) ١٠٠‏ شكل :00 إن المعايرة المقارنة للجدائل مزدوجة
‎RNA‏ هذه توضح أن ‎oligo OH-GFP2oMet15/3-F23/13-PTO‏ المتعدد التعديل يفوق
‏بدرجة كبيرة نشاط مضاعفات أخرى. لتقييم نشاطه بصورة أفضل؛ يعاير المضاعف ويقارن مع
‏مضاعف ‎triphosphate‏ غير المعدل الخاص به (شكل 4(ب)). وجد أن إقحام تعديل يجعل من
‏الممكن تغيير ‎oligonucleotide‏ بحيث يقارن نشاطه المناعي مع ذلك الخاص بمكافئ ‎triphosphate ٠‏ الخاص به ‎3P-GFP2)‏ شكل ؟(ب)).
‏مثال ‎0A‏ تكون العناصر قابلة للتحويل إلى نظام ‎3P-dsRNA‏
‏يجرى تطوير كامل للمركب الترابطي الانتقائي ‎46-١‏ على مستوى ‎OH‏ للترتيب 6712. على
‏الرغم من إمكانية زيادة النشاط بشكل كبير بواسطة تعديلات مناسبة؛ فإن ‎triphosphorylation‏
‏من مركب ترابطي قد يزيد من نشاطه إضافيا.
‏د
=« ¢ — حتى الآن لم يتضح سواء أن التعديلات ومواضعها الخاصة يمكنها فقط التحول إلى نظام ‎3P—‏ ‎.GFP2‏ ‏لإيجاد إجابة على هذا التساؤل تنتج مضاعفات؛ التي لها جميعا التعديل الذي يزيد النشاط/ 2-0 ‎methylation‏ عند القاعدة ‎Vo‏ في جديلة الإحساس؛ استبدال ‎2'-fluoro‏ عند القاعدة ‎YY ١‏ © واثنين من ارتباطات ‎PTO‏ عند الطرف 5 و3 (2521؛ شكل ‎.)٠١‏ في الجديلة المضادة للإحساس يتحد ‎methylation‏ 2-0 عند القاعدة ؟؛ استبدال 2-1100 عند القاعدة ‎VY‏ واثنين من ارتباطات 5-210. لتجنب توقف اثنين من ارتباطات 5-10 عند جديلة الإحساس بقربها من ‎ctriphosphate‏ تنتج جديلة إحساس متعددة التعديل بدون 3-0105 إضافيا ‎(1S2F)‏ شكل ‎NE‏ ‎٠‏ لللتمكن من تقدير الزيادة في النشاط بواسطة ‎ctriphosphorylation‏ تنتج المضاعفات مع -'5 ‎OH) 5'-triphosphate shydroxyl‏ مقابل ‎3P‏ شكل ‎)٠١‏ وتقارن مع بعضها البعض بمعايرة الإثارة على ‎.PBMCs‏ ‏شكل ‎:٠١‏ (أ) تخلق مضاعفات متعددة التعديل مع وبدون ©181م10100050. تجرى معايرة للجرعة على ‎PBMCs‏ معاقة مع ‎Chloroquine‏ بعد ‎٠١‏ ساعة من الإثارة يقاس التنشيط بواسطة ‎ELISA ١٠‏ على ‎JIFNa‏ يوضح متوسط + ‎SEM‏ لأربعة مانحين. (ب) اعتمادا على منحنيات المعايرة تحسب قيم ‎ECS0‏ البيولوجية. لقد ‎aay‏ أن مضاعفات ‎OH‏ متعددة ‎(deal‏ بغض النظر عن وجود واحد أو اثنين من أطراف ‎PTO‏ يمكن أن تصل إلى حدود نشاط الشكل غير المعدل من 011-6762 ‎«OH-GFP2 (OH Multi 2527 «OH Multi 1S2F)‏ _شكل ‎.)٠١‏ إن إضافة -5 ‎triphosphate | ٠‏ الإضافية عند جديلة الإحساس تنتج زيادة إضافية في النشاط بواسطة العامل 0 مقارنة مع معقدات ‎3P-Multi 2527 3P-Multi 1S2F) hydroxyl‏ شكل ‎.)٠١‏ ‎daa‏ يلاحظ أن التأثيرات التي تزيد النشاط للتعديلات المتنوعة يمكن اتحادها مع ‎triphosphorylation‏ من ‎oligonucleotide‏ وتظهر تأثيرها الموجب أيضا هناك. ‎TIAA‏
— \ ¢ — بالزيادة الكبيرة للمضاعف الأصلي ‎OH-GFP2‏ على ‎ama‏ الانتقائية ‎methylation)‏ 2-0)؛ الزيادة في النشاط بتثبيت التعديلات (ارتباطات ‎PTO‏ واستبدالات ‎(2'-fluoro‏ والانجذابية إلى جيب الارتباط ‎¢(triphosphate)‏ يصبح من الممكن تحديد مركب ترابطي ‎RIG‏ فعال؛ انتقائي ‎(3P-Multi 1S2F)‏ © في ‎dled‏ يمكن تطوير ‎3P-dsRNA‏ الذي يزداد فيه النشاط المثير للمناعة إلى أقصى حد بالإقحام الخاص للتعديلات. إن هذه الزيادة في التولد المناعي تجعل من الممكن الإبقاء على جرعة الدواء عند مستوى أدنى» ولتعويض الفقد في ‎RNA‏ الناتج في الفتزة الواقعة بين تطبيق الدواء حتى دخوله إلى الخلية. ‎RNA oligonucleotide‏ ‎GFP2s GmACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU‏ ‎oMetl]‏ ‎C UGCGACUGGGACUUCAAGUAGAA‏ ‎GFP2s GAmMCGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU‏ ‎oMet2‏ ‎CU GCGACUGGGACUUCAAGUAGAA‏ ‎Nm=2'‏ ‎—OCH3‏ ‎GFP2s GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUmMU‏ ‎oMet23‏ ‎CUGCGACUGGGACUUCAAGUAGA A‏ ‎GFP2s GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUUmM‏ ‎oMet24‏ ‎CUGCGACUGGGACUUCAAGUAGA A‏ ‎TAA‏
GFP2as © ACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU oMetl
CmUGCGACUGGGACUUCAAGUAGAA
Nm=2' —OCH3
GFP2as GA CGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU oMet?2
CUMGCGACUGGGACUUCAAGUAGAA
GFP2as GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCU ‏نا‎ ‎oMet23 ‎CUGCGACUGGGACUUCAAGUAGAMA ‎GFP2as GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU oMet24
CUGCGACUGGGACUUCAAGUAGAAM
OH- G AC G CUGAC C ‏نان‎ GAAGUUCA UCUU | Nm=2'
GFP2 —OCH3
CmUGMCmMGACUGMGMGMAMCUUCAAGUMAGAA multi m oMet s20/asl GACGCUGACCCU GAAGUUCAMUCUU | Nm=2' 2 —OCH3
CUGCGACUGGGAMCUUCAAGUAGAA
_ ".- s20/asl GACGCUGACCCUGAAGUUC AmUCUU | Nm=2' 9 - 003
CUGCGACUGGGACUUCAAGMUAGAA
1/81 GACGCUGACCCU GAAMGUUCAUCUU ١ Nm=2' 2 - 003
CUGCGACUGGGAMCUU CAAGUAGAA
1/81 GACGCUGACCCUGAAMGUUC ‏لالانانام‎ ١ Nm=2' 9 - 003
CUGCGACUGGGACUU CAAGmMmUAGAA s20/as3 GAC GCUGACCCUGAAGUUCAMUCUU | Nm=2' - 003
CUGMCGACUGGGACUUCAAGU AGAA
3 GAC Nm=2'-
GCUGACCCUGAAMGUUCAUCUU OCH3
CUGmMCGACUGGGACUU
CAAGUAGAA s3/asl2 GACmGCUGACCCU Nm=2'-
GAAGUUCAUCUU OCH3
CUG
CGACUGGGAMCUUCAAGUAGAA s3/as 19 GACmGCUGACCCUGAAGUUC Nm=2'-
AUCUU OCH3
CUG
‏غناي‎
CGACUGGGACUUCAAGMUAGAA ‏و‎ ‎Fs1| GFACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU
C UGCGACUGGGACUUCAAGUAGAA
‏دوع‎ GAFCGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU
CU GCGACUGGGACUUCAAGUAGAA he ١ j ] j 1 j
Fs23| GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUFU
CUGCGACUGGGACUUCAAGUAGA A
Fs24| GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUUF
CUGCGACUGGGACUUCAAGUAGAA
Fasl| G ACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU
CFUGCGACUGGGACUUCAAGUAGAA
GA CGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU ‏ع‎ ااي
_ ‏اج‎ ‎CUFGCGACUGGGACUUCAAGUAGAA ‏و‎ ‏ا‎ ١ j ] i 1 j
Fas23| GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCU ‏نا‎ ‎CUGCGACUGGGACUUCAAGUAGAFA ‎Fas24| GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU
CUGCGACUGGGACUUCAAGUAGAAF
3P-GFP2 pPpPp-
GACGCUGACCCUGAAGUUCAUCUU
CUGCGACUGGGACUUCAAGUAGAA s15/as3 PTO | GAC GCUGACCCUGAAMGUUCAUC U| * =PTO 1
Nm=2'-
CUGMCGACUGGGACUU OCH3
CAAGUAG*A*A s15 PTO/as3 G*A*C| * =PTO
GCUGACCCUGAAMGUUCAUCUU
Nm=2'-
C U GmCGACUGGGACUU OCH3
CAAGUAGAA
‏ااي‎
515 3 G*A*C| * =PTO
PTO| GCUGACCCUGAAMGUUCAUC ‏مي أن نا‎ m= ‏ب_‎ ‎C U GmCGACUGGGACUU| 3
CAAGUAG*A*A
OH-GFP2 | G*A*CGCUGACCCUGAAGUUCAUC U| * = PTO
PTO 5' U cu
GCGACUGGGACUUCAAGUAG*A*A
OH-GFP2 G*A*C| * = PTO
GCUGACCCUGAAMGUUCAUC ‏نا نا‎
OMet15/oMet3 Nm=2'-
PTO C U GmCGACUGGGACUU| 3
CAAGUAG*A*A
OH-GFP2 GACGCUGACCCUG | NF = 2-
AAGUUCAUCUFU F
F23s/13as
CUGCGACUGGGACFUUCAAGUAGA
A
OH- G*A*C GCUGFACCCUG| NF = 2'-
GFP20oMet15/3 AAMGUUCAUC UF U F
F23/13 PTO © U GmCGAC UGGGACFUU| * =PTO
CAAGUAG*A *A
Nm=2'-
OCH3
TVA
30-62 ppp—-GAC GCUGFACCCUG | NF - 2- 1S2F AAMGUUCAUC*U *U F
CUGMCGAC UGGGACFUU | * =PTO
CAAGUAG*A *A
Nm=2'-
OCH3
OH-GFP2 GAC GCUGFACCCUG | NF =2'- 1S2F AAMGUUCAUC*UF *U F
CUGMCGAC UGGGACFUU | * =PTO
CAAGUAG*A *A
Nm=2'-
OCH3
IP-GFP2 ppp-G*A*C GCUGFACCCUG | NF = 2'- 2S2F AAMGUUCAUC*UF *U F
C U GmCGAC UGGGACFUU| * =PTO
CAAGUAG*A *A
Nm=2'-
OCH3
OH-GFP2 G*A*C GCUGFACCCUG | NF =2'- 2S2F AAMGUUCAUC*UF *U F
C U GmCGAC UGGGACFUU| * =PTO
CAAGUAG*A *A
Nm=2'-
OCH3

Claims (1)

  1. A ‏عناصر الحماية‎ ‏يشمل جديلة إحساس وجديلة مضادة للإحساس؛‎ oligonucleotides ‏أوليجو نيوكليوتيدات‎ -١ :oligonucleotides ‏حيث يشمل أوليجو نيوكليورتيدات‎ ‏جديلة إحساس تشمل ترتيب نيكلوتيد 17110160116 من‎ 5¢5" GACGCUGFACCCUGAAMGUUCAUCPTOUfPTOU 3° nucleotide ‏جديلة مضادة للإحساس تشمل ترتيب نيوكليوتيد‎ 0 ‏(3؛ أو‎ CUGMCGACUGGGACFUUCAAGUAGPTOAPTOA 5° nucleotide ‏جديلة إحساس تشمل ترتيب نيوكليوتيد‎ ‏(5؛ و‎ GPTOAPTOCGCUGfACCCUGAAMGUUCAUCPTOUfPTOU 3’ nucleotide ‏جديلة مضادة للإحساس تشمل ترتيب نيوكليوتيد‎ ‏(3؛ أو‎ CUGMCGACUGGGACFUUCAAGUAGPTOAPTOA 55 ٠٠ ¢2’—O-methylated ‏المشار إليه بالحرف 77 يكون عبارة عن‎ nucleotide ‏حيث النيوكليوتيد‎ ‏المشار إليه بالحرف آ يكون 27-10010؛‎ nucleotide ‏النيكلوتيد‎ ‏تشير إلى اتصال النيكلوتيدين‎ nucleotides ‏بين اثنين من النيوكليوتيدات‎ PTO ‏وتشير الدلالة‎ s¢phosphothioate ‏المذكورين بواسطة رابطة فسفوثيوات‎ nucleotides triphosphate ‏حيث تشتمل جديلة الإحساس عند الطرف 5° على‎ ١ ‏لعنصر الحماية )0 حيث يكون أوليجونيوكليوتيد‎ oligonucleotide ‏أوليجونيوكليوتيد‎ — ‏ا4ا.‎ 6-١ ‏عبارة عن مركب ترابطي ل‎ oligonucleotide ‏أو ؟.‎ ١ ‏تركيبة دوائية تشمل أوليجونيوكليوتيد 0110000160108 وفقاً لعنصر الحماية‎ -#* - ٠ ‏حيث تعطى التركيبة الدوائية في الغشاء البريتوني‎ oF ‏؛- التركيبة الدوائية وفقاً لعنصر الحماية‎ ‏؛ في‎ Intravenously ‏أو في الوريد‎ «intramuscularly ‏في العضل‎ » intraperitpneally Jala ‏في الأدمة 1008080008 أو‎ « subcutaneously ‏تحت الجلد‎ cintranasally ‏الأنف‎
    ‎.intrathecally ‏القراب‎ Yo TAA
    ‎q —‏ ¢ — ‎—o‏ التركيبة الدوائية وفقاً لعنصر الحماية ‎of‏ حيث تُعطى التركيبة الدوائية تحديدا بالتوشيم ‎tattooing‏ الوخز بالإبر الميكرونية ‎microneedling‏ و/أو اللصوقات بإبرة ميكرونية
    ‎.microneedle patches‏ ‎TAA‏
    _ Qo = 2 2 ‏اااي‎ p ER ‏ركد‎ ‎5 ‏اذى‎ ‎8 A He RE a SER Uo fal BR Laie EA ST 5 3 sO yee Vo - ‏قات‎ Ff , 5 NN i ‏و‎ Be Ne NA 0 ‏ي‎ ‎goed Se > ‏ن‎ 8 Ea] ‏بع اننا‎ . { Fd = ‏ل‎ ‎8 ‏برضا‎ = 0 A 1 0 2 2 4 8 8 8 ‏الاج ا‎ ia 3 ‏اعد ا ا‎ Fd ‏ل‎ wd Be TVET ‏اع‎ ‎& ew ‏م‎ oy 3 = A i , Tog dn 2 ‏اا‎ ‏ا ا‎ Rt ‏ا © اج‎ ‏ب‎ ci ER ‏بو 0 كب‎ 2 o Fada owl ‏نو ا‎
    A. Ea 3 a ove Yang 3 = EAN ‏ب‎ H By 5 : G7 0 " Lag, F = = 1 i . : ‏لذ‎ ‏ع‎ B geet 8 ‏"م‎ Gx § 3 ‏من‎ ‎> Eg El 3%) o Wo fe] oa io bi v= 4 ‏حي‎ G3 CIES She ‏ار‎ 98 84 ‏نج‎ YE 3, & To 4 So ‏و و يا 0 اوج‎ a? 0 1 ‏قود‎ ‎i 3 Pod ERE) +, } 2 4 aft, i gud ag A. ST al gm co 3 ‏فد‎ ‏ريا‎ : = 4 Re ; MRS Fae TH RC BT ? JRE LP go vi = Zo ‏ب" ل ل‎ 8 8 1 1 ‏ب‎ = 1 oe : : & She mim FO Loo Bo, # TRE 2 ‏اناج‎ ‏رع ذا‎ = HE IT = Som te Ea ‏ب أ‎ oa 2 & oa Rade Te ge RES SORT TR ES ‏ا‎ F i wa yA TVA
    _— \ جم ‎Buk 3‏ امتسامي ‎Jan‏
    : 0 ا
    ‎I $‏ : أ
    ‎ea po ae‏ م 2 ‎omer Foros rt be em‏ ب وود مد صل ‎al‏ ؟؟ ‎LY‏ : م ‎a H‏ :
    ‎Ve > * ! Hille‏ ل ‎redial Bang‏ بالعتنياش
    ‎(oa)‏ 1ب
    ‏1 لد دك
    ‏, 58 مجبو جا 7 ١ب‏ بإ ل ةهللإارو7#ج”ج”ماالإو]واست9“آ أذ مسر
    ‎ET SE i 3 A Y SE SE ‏الكت‎ ‏شكل ؟*أ‎
    ‎ews‏ ا إ ‎EARE‏ ‎i: 1‏ ب ‎Noy Rt 1‏ [ الا
    ‎EAN SUR SILI WLI SA ‏ميمه‎ JEL ‏بذ عدم‎ 2 ‏ات‎ IO ‏ته‎ 4 Pe pi. ~ ‏جل ا ع‎ Joa YE WE ‏شكل ؟ ب‎ » TVA
    اج ‎i‏ ‏1 2 2 11 13 شكل؟ ‎TVA‏
    ارج ‎CH, - CH, ~‏ ~ (ن- ‎CH,‏ »وكاب )صن ‎CH, 0} ~ CH, - CH,‏ م(و0))-0-- ‎=O {{CHR}p,~ CH, =O), ~CH,~CH,~‏ ‎=O (CH, CHa ~ CH, ~ 0), CH ~ CH‏ حورا ‎—Q—{CHakn CH 3 CH 0 In" CHa‏ ‎{CHR} CH=CH OCH CHa‏ شكل £ ‎TAA‏
    _ جم ‎TELS Sy‏ بطق ‎Ey‏ ‏1 42 ‎FA‏ 2 الح ‎Gly Ered $23 $4‏ 8 1 1 8 8 ا ا 1 ‎eg‏ ‏ا لا و ا : اب ‎RENE \ ¥ 8] 8‏ أ ا ‎Nal RRR een RL NR} ARE) NEN :‏ داقر ‎Fon‏ ‎Ge i B 1‏ : 0 لح 1 § الا ا ‎TERS PEAY IN 0 1 1 oN‏ ‎I ERT 3 me +N § da ) 3‏ ‎i 85 8 RE‏ م ‎mer SN} 01 : $38‏ ‎NNR 1 11!‏ ~~ ‎cae DAL Na NR RR‏ ل لاط
    ‎ET.‏ ‏© إٍْ اسك ‎ed 1 1 0 E‏ ‎vod‏ ! و ‎pa‏ ‎Cor 8# § 3‏ 3 الا ‎IR:‏ ‎TERR OVS NRE 1 Y &‏ ‎N‏ : © ب 083 | 00 ‎iE‏ ‎SEE NN NE IF‏ ‎NARRNS, RENEE EEE‏ جر اام اح الي قرا اضر لج لحم ايد : : 1 اج ا ‎RRR‏ د ا ل ‎Rr EE RE dri heh oR Sh‏ ل ‎JuSuizascrra ards a dS S Sd EegdSs‏ ‎RIBS‏ وه جا مات وجي ا الع ا ذا ا را 8 ا اي اي ا ع ‎Wana‏ لا مك ا ل ل حا ا الال لس اد هاي ‎Ea‏ اا ورد اي كي لدي زب ‎SE‏ ا ‎be‏ ‏م جلا م لا لل لوج حر احج جا حاجن 4 حون اانا تايط لاي ‎Rv on‏ ‎OIE EERGY‏ ا قات تي ‎oud in‏ التق تتا املس ‎SE BE NNER IEEE NEN I DERE‏ 0 ب ‎re a 2 EE NN N NNER N : EEN cb oad HN‏ ‎i aa + MRR ei 8 [ERE Ga 0‏ ‎OM Dek‏ ال ير اا ا در ‎aicicle NAC ele‏ ‎N SANDRA 1 NR = 2 nN RN He A ety z LA‏ نا 8
    ‎NN. 1 1 Se]‏ ال : 1 ‎AN i ; nk aay‏ ‎NY i‏ تاس جاه الاج ‎CT‏ ‏بي ابناج 0" ‎c oii sia N65 RW bi‏ قا الودج ‎TEs loi‏ اا ‎EE CR a ENN CRE‏ ‎JEP‏ لوا سل !<<د! ‎EE‏ سن ا ‎Ne Pe Sh Voor dm bow bogged on TT SEL IE‏ ‎pel BY bd Ec of Pel‏ اا ننه اننا ا اند ا ا ا ا شكل م أ
    حنيتة مطنادة ‎Lhe‏ تق تن ‎Ly Te Ta‏ — 4 ‎Don ow +‏ ا ‎Yad \ 0 ¥‏ = د ‎FICE‏ ‎oe 1 8 { roy 1 RENN‏ ب ال« 0ب 6 ‎Waal H N‏ ‎a H ; N NY 8 RRC 1‏
    ‎i . N a N 3 = INNES -‏ ‎Bie bare X TTF. 8 SNRs J AN \ 11 NL‏ : صقر © وك 0 1 ‎en, H H‏ ‎Ls‏ بالج ‎Is‏ ‎Ll {| 1‏ راق ‎TLRT‏ ‎ad H 8 ¥ 3 pe i‏ ل 7 ‎TE.‏ ‎i Yd ES‏ ا ‎FT‏ ‎i‏ ٍ ل ا ‎EE nN‏ م اللي ‎POE ELE TTI‏
    عقة._ ‎EEE EEE EEN EEE EEE‏ ‎Toy‏ ‎i 1‏ & ‎i‏ إ :1 ‎i‏ 4 3 ‎TRESS ol to | Ld Eo iY io‏ § § ا ‎LE‏ ل ‎FRAG SE‏ 8 8 © خ للج ‎for } TaN Ter‏ ‎Hrs i CARRE IEY Nid N N‏ ‎HIRT :‏ ل اج سا ل 3 ‎NANA. LN Say, NANA a‏ ميا ‎[P-L‏ ‎RR‏ روا ارك جمد يج دو ‎TE‏ لاضع خم ‎WEE‏ 3 ‎SRNR NSLENEARAS‏ ا كه مها جام مداتية جر بو لبن كر كين كيم بجا ذه بح ال ام ‎TR‏ اج ع ا بر لد بر يه ب لد لد لع لاا ب ل لا ته ل ل ا ا الم اب اد اي بك حم ‎ACH i Se‏ لواح جه حك حم اح اد عد جم كدي صا ‎FE‏ ‎hs‏ ب ا ار ده ور واج ووايم كا ما را ا ا ‎ERIE‏ اليا ل الا ا ل اع ارد ادا ار ‎EE‏ لايجا ع ‎a nut tenns‏ 8 ‎Ee Th‏ دك لت ير يك يحم يروما لد ب امول ‎a‏ تجا مج ا ااي اا ‎a a OR SCE BR ORR‏ لس ا ‎RRR‏ ‏جا نا جنا جد نا ‎de HB Hea Be LR LL BIT NOE BW GE‏ ‎EGE OVINE EGE‏ ران ‎MSL IR‏ جليلة مطنادة ‎FREER laa‏ ‎TT ppp nN‏ اودر لو تح م ا ‎oo oo a _ a‏ ‎Be‏ يي كرا يبعا ‎RNR NN Siot@imidivivliols‏ ا ‎Ents apo AED i RRA \\‏ ‎ERE Rt a a‏ م و ‎LN re ve bo‏ | الج ‎EE‏ اراي الما ‎Dba EE SRR OLA ARR Ba SE EN RC: BTR A Al Rar‏ داف ا حت ‎ated NN iY‏ \ ل ‎i‏ ‎AE‏ الت ا ا ع أ ااا ات 0 ألا ‎XN CERT ATO RR CATR Kini 1‏ أ ‎Ste‏ يت اا اا ل ‎AN‏ ا ات 5 ‎EN th aE a fou ee pie SER HEE Eo pn‏ مي زجي ا صل 1 احا ا« لور ال ا اب حار انحط ناا راف لد الا ‎DE EE‏ او يو ا غيل ا ‎IE‏ ‎i‏ 9% لا ل اا أ ا ‎RE ict‏ لاا انا قي يي ا ‎Sl‏ ‎i Pr 0‏ تنكل + ب
    ‎h —_‏ جم ‎Aw 3 4‏ ‎Sy‏ ‏ص ‏لج ا ‎ve‏ : ‎x SN ey on‏ ‎ra‏ = ‎be vom‏ ال ~ ‎Li 5‏ تر مم نما ‎Veg‏ = ‎N Coma‏ أجل ‎N Fons‏ 55 ‎For‏ اي“ ا 8 لين ا 8 0 تح ‎NN‏ ‎NN‏ ‎LTRS A‏ ببح 1 ‎yet‏ ‎od f=‏ 1 0 ‎no 5 NN SE JN‏ بس ‎NN FR‏ 8 يسم ‎N R Ea‏ ب +[ ‎YB YR Ns‏ 1ن وجي 8 ‎RN 3 BS AN 8 NS N‏ تعب ‎li‏ 8 دازي للش ابي رت اير اجن 3 اد ‎pi Wi‏ جر تجو ‎J‏ لد ارا ‎i‏ ا ‎nw‏ @ أي لل لان ‎AG E oc BL WWE‏ الام ‎Bos‏ ل لك عش ا ‎Woes‏ ‎R‏ اج رض اح ‎2a‏ افير لح ‎FE‏ ‎WNT‏ اجن اج ا ا : ب 1111111 3 ‎a‏ ‎ww‏ + * 8 ا ‎NX‏ ‏ب 0 0 51 0 ‎gs‏ ا اك ‎ee‏ 0 ‎SEN IE SOR I‏ 083 — ب" ف 8# دا م اا ‎i oy fi GRY =‏ 3 0 بر ‎hy‏ ‏اا ات ‎i‏ > ا ‎xT 5 A‏ ‎a ; 5‏ ل = ‎fail‏ ‏حل ]| 3 ‎Ne‏ ‏رك اج« شكا ‎bog‏ ‎TVA‏
    — 7 جم ‎Soy Sh 4:‏ حم ا ‎NES,‏ ‎Ny Sy 2‏ ‎a ey rd‏ ‎Rx‏ ‏5 الا [ ‎TR ns‏ ب 5 ا ا ‎AY,‏ الح لحي 4 را ا ا ل ,3 ليا ‎rn RNY oT‏ ‎EN & at‏ = ب ‎ay Me‏ ب 4 > م ا ا ل ‎x Ed 0 8‏ 1 ‎wid‏ ازا ‎PE rrr‏ ‎RE £3 i‏ ل إلى آل ‎CC cata e‏ ‎TI‏ ِ 8 ار الت ‎Te‏ ‎ET 0 : Fad‏ ال الخد : وب ]000000000000000 جا ل بل الأ ا ا لبي ‎A E32 3‏ + . . يا ‎Ee ad‏ ‎ox = @‏ % 4 ا ‎ot E 2 ©‏ © ال ‎wo‏ ]5 2 ال انا 5 ا ل ا ‎aE‏ انما اا 1 ‎vi vs Peay‏ ‎wa BL‏ 8 م منج ا ‎ES 4 CI‏ : ا 3 ‎oe‏ ‎PTL‏ ار ا م ‎omen neg mmm ymin nnn mmm nnn fag:‏ ‎ry x 0 >‏ يي ‎ES‏ + > ‎are a i Hou :‏ عابو ب . جو ‎a ' iF 3 3‏ - ‎TEE Ge 7 : 28 AF‏ 38 1 يعي ‎cp DEERE‏ ‎Sh ER EA Ei 1 * 3‏ : ¥ ج ال ا - + ‎ct‏ ‎ENA EEE ay HI :‏ جه & تبي 1 7 = + 0 ,= : 1 تع نقح ‎od‏ ؟ 7+ ل .> 8 ‎i gn 0‏ 3 8 « # ج ‎CEN i PEAT‏ ‎ug‏ ا ا ; ‎vo‏ ‎ER ol © ©‏ ا ‎ER‏ ‏الخ ‎ER‏ 3 ‎OF »‏ ¥ 1 5 ‎BRR BL RR RGR peng”‏ متيام ‎ER WEE STN Sey By MWY‏ م ال أ ‎Sh‏ 0ل ؟ كاج <> لخ ابد ‎oe‏ را ‎Aen od‏ ‎JR‏ ا ‎Sul‏ كح ابت اليد ادا ال بم ال 7 ‎a 4 i ff my OW mow‏ ‎wm ow‏ ا 4-6 ‎k‏ ‎i SUE SERS IPR Eft‏ ‎es‏ يج ‎i‏ : 8 > & ‎a | | | | | | | | n‏ ‎Sw 3 Ads pew Lag 3‏ ‎VJs‏
    ‎A —‏ جم يدجي ‎SS‏ اج ل" بقع ا 55 ا : 225 الت ص 0 2 للد ‎ho‏ 88 ‎NY 8 054‏ 8 ‎ES ~ ES 55‏ £8 ‎bs ERY & 3154‏ ‎FREE:‏ ا لش 5 ‎INS 15‏ ل 8 ‎ANNE 5154‏ 3 5ح ‎ENE‏ اا 8 £184 الت ‎FI‏ 5 15ح ‎HRY —N‏ 8 ال ا 8 كج ‎NSS‏ == ~~ كج الأ ‎AN ES‏ ‎SE NN 954‏ 8 ردي ‎ERNE SRE USS‏ ‎aN ETE NN 95‏ ‎Fe TY RN gd‏ = رد ‎SY ENS‏ + ‎i NEN — ES sy‏ تج ‎NN‏ 1 8 ‎Ss‏ ل ‎١‏ ‎[ER rs 50/5‏ 8 8328 لفسا ا اي ‎SS Sh Ph‏ المي ا ا يي ‎Matin WN‏ ااه سبد 4 ل 23254 4 ة.ةنءمةء ‎y}‏ 1و )7 مول ال ل ‎ws 01‏ ا الل ب ‎[hE i‏ = ‎a = =‏ شكل + أ علا
    ‎q —_‏ جم ‎Es i 8 bused‏ اكت 8 = حا ا تمع - 3 ا ‎EE NE‏ ‎ES SN 5 (7504‏ ‎a fn ED “ESSN fs‏ 8154 ا ‎RR‏ انع ‎fg SE i.
    LITERS‏ ‎ES EE 3155‏ دم بكي تر -_- ‎a‏ ‏15ج ‎re Ss REE‏ ‎ES i EE‏ ب داوق ال اا ‎i a‏ 164 الس 1 8 ‎eee SY re ETEES 0155‏ 0 ‎i NEE BEd‏ — ‎SL SEES Gee‏ 88 ‎o HE SS EE‏ ‎SUN ANY gsi‏ .7 ‎a EE PR ee =‏ ‎ss = EE peg‏ ‎Fa — RRR ESE‏ ‎on FH Srey‏ ‎HE ATES TsRy‏ = ‎a SH EEE SESEZdN‏ ‎92d‏ : إْ ‎Pal x : EA SAE Sa ii‏ ليم ةدقعم ‎coo id iomeed‏ ال موا ا ا لمم ‎(eda rn‏ دضع ايا ‎see‏ > اصن ‎Fee‏ ‎By ®‏ تِ ‎E oe‏ & شكل ‎A‏ ب ‎TVA‏
    _ h «= 1 aN 3 ‏د‎ 3 od Ee ١ 1 ْ i EEE SEE £0 J ‏مع‎ ‎1 Sa 5 a go he ow ee EFS > = Jd oo PE ‏ل‎ EE SN Fad 8 0 Sl ‏مي‎ a Wn = or 5 x ES ¥ ~ = 7 ‏اجو الب اب‎ ‏ا‎ 3 >. fa x — bad po Ee © & Zo Wom ‏له ووم‎ © BE a N R 3 8 8 8 ‏نا‎ EX ORE gm [4 ‏ا نما ا‎ pia [0 ug hi 5 ‏ال ل ل‎ 1 = Lr En ‏حك‎ 5 = op it ‏كاب لمك كانا 0 ا ات‎ = x =x nN ‏خخ‎ p> - 0 ‏م‎ ‏ب‎ ‎& ‎0 8 1 8 ] = +H : Fut] if 0 : : ‏يا‎ ‎5 : 8 vs Ne : i 8 - K EN : 3 5 ‏حا ا ا‎ EN 0 88 3 5 <7 TE 88 8 RS ] 1h INN 8 N : 8 1 + 8 88 ‏ل‎ 3 RS 1 : ~ ! Ne NYE 3 A 1 5 N RE : BN: 3 § 1 2 ri ® £4 NA SI: 5 0 § 1 : ‏ا‎ 0 ‏ا : 1 5 8 أ الع‎ NEN NEN: NE RS : : 8 0. 9 NEN: Ned RR :1 : 8 : 8 INNES REY: NEY 3 1 8 Af a AE IRENE REY: NEY RS 1 2 SHEE B® RN NS 88 51 8 : 8 3 ‏ب‎ ‏ا‎ SNE RN REY: Na 5 i : AE 1: 1 ‏الم‎ NEN 8 5 1 : ‏ل‎ ‎5 RN NE NN 8: NE 8 : 8 3 pis SER EN BEC 3 1 2 NET pis AER SE pay : 1 : 2 fos HEN 8 NEN : REY 8 : 8 2] fos SNE EN 8: BREE ES 8 8 pis ‏التي‎ NEE RENCE : : : 8 3 RAE LN N : 1 id 8 ERNE RRR: ‏ا : 1 : ل‎ 3 ‏لي الاج اا‎ \ | : ia 1 ‏اي التي‎ NEN AR 8 : 3 SRN NE SRN 8: RARER FRR INS 8 3 5 BREN SERN 8: RNR 8 ‏ا > ا ا‎ 8 5 ‏المي‎ SRE: RN 3 ER XN Tad 8 B AN NEN NAR ER BN OLR] I BE 1 ERNE . ‏الال الا ال‎ NP ERE i 3 5 ‏ب 1 و‎ ‏ا‎ > . w LN) LC) BE ‏ب‎ ‎3 on * = 8 » 0 i = 3 8 - ik - ‏حي‎ ‎wi 4 > a er 5 a A i gent ‏لا‎ ‎3 WAY ‏ز ال رع قد كرجا‎ Pq ‏شكل‎
    _ h \ —_ [fe] BE ‎ol »‏ ب ‎EN ‎eh oe > ‎Mg = ‎So ‎a bE “FE ‏أل | 38 ليج ‎iN = -‏ ا 7 ا الصسسسس ‎Ea ‏بم‎ ‎TD 4 ‎a 8 : ‎io ‎8 i 33 ‏م 9 ‏ذه 41 ‏: : 0 ا الئل
    ‎8 . ‎٠ i‏ ب ‎5 re NNN G 1 ‎Pe LE SS i ‎Ee &‏ ا 4 ‎we!‏ ‏ ‎MEE 0٠ -‏ 1 : 1 1 ا ا ليم شكل 4 ب ‎TVA‏
    -؟١7-‎ ‏متتل‎ ‎go ‎Lo % ‏حب‎ 3 Ea § 2 ‏ليسا الح‎ *# ‏أ | !9 ٠خ اك‎ " Ae “ ‏ب " ا‎ TF Re : > ٍ | ES 1 of WN : : : : ٍ 6 . : > J 5 i gE 3 g 4 x § 8 ¥ 8 oo T = x on. ‏علد‎ ‎: a & © & © a © iL ‏ملا‎ ‎kaa iL, : © 0 ~ BE ¥ 8 fF 5 ‏م‎ & 8 ‏ب ري ب 8 ائبع‎ El T | T a. x & © & © = © ٠١ ‏شكل‎ ‎TVA
    ا اد 7 ‎AN 0‏ = ب سي لل ل ‎EN Ue.‏ ‎nd‏ ل ‎a * 5 S “a he Ne‏ ‎a‏ \ \ ال د ‎Fe‏ امل سه ل ‎ENC 5. ve WEN q !‏ ب ‎ANG AW N a‏ ود ل ‎hy ESA‏ > الخ ‎jg‏ ال ‎Ne pax‏ ‎NON‏ ‏4 ) % 2 \ أ + ‎BY‏ ‎Ww So‏ ‎I!‏ ‎N‏ ‎I ha‏ ‎Sb‏ -1 ‎Lda TR he. od od N :‏ لا خ © ل 2 2 5 ‎a | .‏ | ما 5 له 4 \ 0 00 ا © © ”© ‎١ + + * | 0‏ + ‎ENT (565017 pind) "‏ شكل ‎ye‏
    ‎BE.‏ ا
    ‎Ee.‏ ا مدي ‎lc:‏ ‏#ودويوج ج4125 مدي ‎BE cs:‏ ‎ZddD-de‏ 4257 - : صو ‎x Rig‏ 4 00 ‎SE a Sy‏ :الع تي ا ا 2 ‎a a‏ = ‎{nf (75 +p)‏ 0503 شكل ‎٠١‏ ب علا
    — ‏اج أ‎ 2 Bn B 4 2 0 = & bet 8 ‏ب ليد‎ bad =] 0 ‏به ا ينا‎ ‏اا م ال“ اااي‎
    J. 6 oe En} A = 0 1 = 2 : ‏اا‎ ‎7 ona ‏ا‎ ‏:ير يح‎ a SR = LJ ‏مدا اننا‎ - a Sheil ‏مح‎ i ‏ل اله لالد + ااه‎ a a : : ‏ليا ل‎ Pa rt Dd Sad Pray Seat al, . 8 0 : 40 ‏ب‎ ‏الع‎ 4: ‏يبا‎ EE Na 0 0 ‏حر ب‎ Ww ¥ ; 3 ; i 3 we & = . ‏ا‎ IL mens ey = = 3 1 0 ‏يع‎ ‎8 =~ BB ew & a = 8 ‏ا‎ = 2 RE ad 48 ‏مد ا‎ Ve 2 ‏لين تسد‎ a “5 ‏ل دع ا‎ ‏ل‎ ~~ ke dl yn Oo 7 ‏لحا اد أن كل‎ LF 5 fey ad 0 3 ics im ae OF ¥ PRR oy 3 3 Nod EY Tver “oi 5 2 ‏ال ل اا‎ 2 4, A mle I = % & > Ras nN Cad nd fou Sabian ‏ليا‎ ‎9 : : 8 ‏لعي‎ G x 3 BN ‏بم‎ % } i 2 a 0 = ~~ 3 2 > oT 5 b) = : 0 ‏نال‎ 5 8 ‏ب ب‎ i : i 2 ‏ا‎ > = 0 i 5 ES > ‏عدا الاي‎ i RE A = = 8 1 ‏دان‎ hy aa Ry 23 Se ‏المح‎ ‎= ‎٠١ ‏شكل‎
    -؟١؟-‎ = — — jv po { j La be ERT comet - PEC a . RET rs 0 2 ١ ‏ال وات اح الحا ااا‎ ‏ل‎ ‎1 ‏جر‎ ‎to ‏و‎ ‎: M = } 3 ie a 2 JL TVA
    —1V- Te = ‏ا‎ N AK iY i ‏م دا هج‎ 1 ‏ا 1 وا« بن‎ ‏خا«‎ * 1 + RE 5 1 Le ‏اع«‎ 1 4 & A “i & b A ‏الما‎ SRR ‏ب ل‎ ‏ا ا‎ iN AAU ‏سس وا لأ‎ 0 Cea x i SEY 1% ‏شكل‎ ‎TVA
    = B 1 wl Fa - 2 zl Ss at ‏ب‎ 2 2 ‏ته يد ميخ‎ i = 7 x = P| = Pe i Rf =U EN wo 3 NO eS Tom J ‏متحت له‎ 0 ‏امب‎ T ‏اا‎ EN : 5 3 - | 2 :! 1 Ca aa Ey ‏سو ا(‎ 0 1 = § = - i p= ; ! a & 2 fo ١ = . ( - ¢ Led mn ‏ا‎ ‎| ‏ا ب‎ ‏ض إٍ]‎ ٠4 ‏شكل‎ ‎TVA
    _ h q —_
    or
    E : ٍ : | 5 A
    = ” I UR > a
    اهب ب
    AN ' > ‏الي‎ ٍ | id
    Nn)
    0 ْ Ny a io 4
    شكل ‎Tye‏ ‏ااي
    ١ hr be + pu 0 hy ee, ’ 4 1 ‏ماف َ ا‎ 0 + z tio = = $f ‏ا‎ ‏اط‎ 3 a : 4 - — - Lys les ‏شكل & ا ب‎ TVA
    دالا ا : 5 آ ب ‎TE,‏ ‎ESE 2 |‏ ‎y‏ = ص 4 : ' ا 0 : 4 35 :ِ 1 3 ‎i, BC‏ ‎Sd‏ ‏1 + ‎i=‏ ‏: ا 1 5 ‎a Id‏ ْ { =
    ا 0 3 شكل داج غناي
    را ‎fa)‏ .م ‎NA 0:‏ ما 0 ٍ 0 ‎i 1 Paget TR WH‏ مضي ٍ ‎١ 8‏ ْ و ل لا إل لاسو ‎AE HEE OPO Pa‏ يحص 1 ; 3 لفاس حلا لل ‎PE‏ ‎om‏ ب ‎on‏ 8 اس 2 : ‎i‏ ‎med =‏ اسل ادا ; ٍ ا 2 9 0 9 » ضر لس ا ‎hs‏ ل اا ب" وال 8 ‎Ok‏ 011 4 ©
    3
    3.3% ل لأسو ‎Pas Ere‏ سودت ‎HO‏ ‎Sn‏ و ‎GH‏ ‏© ‏شكل ؟؟ ‎TWA‏
    اا 0 وجدة انتماضص ‎abies AE‏ ‎lle Hadi .‏ ‎AFI it‏ ‎Vee | |‏ ‎Ras 8 ¢ \‏ ‎J JN‏ سس ‎TT‏ د دسا ا ا امد اا ميلم } ‎Te Te fe EN‏ 8 ب وحدة امتساض ‎AE‏ ‏رضن ٍُ ا ‎wi |‏ ‎Tf |‏ ; إ ‎BEY‏ ‎AA‏ ّ ‎IE‏ ب ‎fal‏ ‎Bl SEES SE EES deere vee rencontre A OR SURE res‏ ‎Le 58 4 ve x oe gldle‏ ‎x 3 Li ’ Xa ae‏ تعر الك 3 اد الا حي ‎Se‏ ‎EY = ap‏ ‎I To we‏ ‎x we FE‏ 1 ‎te od Hi =k‏ ‎i, 11‏ إٍْ 1 3 ‎H‏ ‎You kh g‏ ‎i‏ ‎Son ad §‏ د 3 ‎H i] 1 8‏ : ‎SU‏ سا ايا ‎E : 5 . : je : . 8 aE‏ ‎bord 1 8 : — E & + - = - : ot‏ شكل ‎٠‏ ‎TVA‏
    مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏
SA515360190A 2012-09-27 2015-03-25 مركبات ترابطية rig-i جديدة وطرق إنتاجها SA515360190B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP12186444.1A EP2712870A1 (en) 2012-09-27 2012-09-27 Novel RIG-I ligands and methods for producing them
PCT/EP2013/070117 WO2014049079A1 (en) 2012-09-27 2013-09-26 Novel rig-i ligands and methods for producing them

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA515360190B1 true SA515360190B1 (ar) 2018-09-26

Family

ID=46940404

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA517380700A SA517380700B1 (ar) 2012-09-27 2015-03-25 مركبات ترابطية rig-i جديدة وطرق إنتاجها
SA515360190A SA515360190B1 (ar) 2012-09-27 2015-03-25 مركبات ترابطية rig-i جديدة وطرق إنتاجها

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA517380700A SA517380700B1 (ar) 2012-09-27 2015-03-25 مركبات ترابطية rig-i جديدة وطرق إنتاجها

Country Status (32)

Country Link
US (3) US10059943B2 (ar)
EP (5) EP2712870A1 (ar)
JP (1) JP6313768B2 (ar)
KR (1) KR102182479B1 (ar)
CN (2) CN104703996B (ar)
AU (2) AU2013322620C1 (ar)
BR (2) BR122019023887B1 (ar)
CA (1) CA2885564C (ar)
CL (1) CL2015000752A1 (ar)
CY (1) CY1120660T1 (ar)
DK (1) DK2903997T3 (ar)
EA (2) EA034605B1 (ar)
ES (1) ES2679373T3 (ar)
HK (1) HK1214602A1 (ar)
HR (1) HRP20181114T1 (ar)
HU (1) HUE038811T2 (ar)
IL (1) IL237794B (ar)
LT (1) LT2903997T (ar)
MX (1) MX2015003787A (ar)
NZ (2) NZ736108A (ar)
PH (1) PH12015500644B1 (ar)
PL (1) PL2903997T3 (ar)
PT (1) PT2903997T (ar)
RS (1) RS57609B1 (ar)
SA (2) SA517380700B1 (ar)
SG (3) SG10201702028YA (ar)
SI (1) SI2903997T1 (ar)
TN (1) TN2015000104A1 (ar)
TR (1) TR201810231T4 (ar)
UA (1) UA117565C2 (ar)
WO (1) WO2014049079A1 (ar)
ZA (1) ZA201501718B (ar)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2911034T3 (es) 2006-08-08 2022-05-17 Univ Bonn Rheinische Friedrich Wilhelms Estructura y uso de oligonucleótidos 5' fosfato
WO2009141146A1 (en) 2008-05-21 2009-11-26 Gunther Hartmann 5' triphosphate oligonucleotide with blunt end and uses thereof
EP2508530A1 (en) 2011-03-28 2012-10-10 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Purification of triphosphorylated oligonucleotides using capture tags
EP2712870A1 (en) 2012-09-27 2014-04-02 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Novel RIG-I ligands and methods for producing them
WO2014169049A1 (en) 2013-04-09 2014-10-16 Duke University 2' fluoro-modified rnas as immunostimulators
DE102015008536A1 (de) 2015-07-02 2017-01-05 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Diskontinuierliche Oligonukleotid-Liganden
US11382966B2 (en) 2017-03-24 2022-07-12 Rigontec Gmbh Method for designing RIG-I ligands
CN110709515A (zh) 2017-04-03 2020-01-17 杜克大学 用于差异性诱导细胞死亡和干扰素表达的组合物和方法
JP7366057B2 (ja) 2018-04-19 2023-10-20 チェックメイト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 合成ｒｉｇ－ｉ様受容体アゴニスト
EP3781687A4 (en) * 2018-04-20 2022-02-09 Merck Sharp & Dohme Corp. NEW RIG-I SUBSTITUTED AGONISTS: COMPOSITIONS AND METHODS THEREOF
MX2020011570A (es) 2018-05-07 2020-11-24 Alnylam Pharmaceuticals Inc Administracion extrahepatica.
EP3936118A4 (en) * 2019-02-22 2022-12-14 Lemonex Inc. PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR IMMUNACTIVITY OR PREVENTION OR TREATMENT OF CANCER
EP3990635A1 (en) 2019-06-27 2022-05-04 Rigontec GmbH Design method for optimized rig-i ligands
US20230242918A1 (en) * 2020-05-22 2023-08-03 President And Fellows Of Harvard College Interferon- inducing oligonucleotide duplexes and methods of use
AU2022302143A1 (en) 2021-07-02 2024-01-18 Yale University Compositions and methods for treating cancers
EP4395832A1 (en) 2021-08-31 2024-07-10 Yale University Compositions and methods for treating cancers
US20230303719A1 (en) 2022-03-03 2023-09-28 Yale University Humanized 3e10 antibodies, variants, and antigen binding fragments thereof
WO2025088117A1 (en) * 2023-10-25 2025-05-01 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Ribonucleic acid construct capable of inducing an immune response, as well as pharmaceutical composition and kit comprising same
WO2025158069A1 (en) 2024-01-25 2025-07-31 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn CONSTRUCT COMPRISING mRNA-STRAND AND RETINOIC ACID-INDUCIBLE GENE I (RIG-I)-LIGAND(S), PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND KIT COMPRISING THE SAME
WO2026039779A1 (en) 2024-08-15 2026-02-19 Yale University Humanized 3e10 antibodies and antigen binding fragments optimized for rad51 binding
WO2026047025A1 (en) 2024-08-27 2026-03-05 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Photocontrollable conjugate, pharmaceutical composition and kit comprising the same, and uses thereof

Family Cites Families (220)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3534017A (en) 1967-03-14 1970-10-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk Process for the preparation of nucleoside-5'-diphosphates and triphosphates and mono- and oligo-nucleotidyl-nucleoside-5'-diphosphates and triphosphates
US4210746A (en) 1978-08-10 1980-07-01 National Research Development Corporation Nucleotide inhibitor of protein synthesis
US4285605A (en) 1979-07-02 1981-08-25 International Business Machines Corporation Escapement mechanism and backspace mechanism for a moving paper carriage typewriter having dual pitch capability
FR2471785A1 (fr) 1979-12-21 1981-06-26 Fabre Sa Pierre Preparations immunostimulantes a base d'arn ribosomaux et procede de preparation des arn
DE3023787A1 (de) 1980-06-25 1982-01-21 Studiengesellschaft Kohle mbH, 4330 Mülheim Verfahren zur erhoehung der inkorporation und der expression von genetischem material in die kerne von intakten zellen mit hilfe von liposomen
EP0081099A3 (en) 1981-12-04 1983-08-10 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Capped oligonucleotide anti-viral agents
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US5194428A (en) 1986-05-23 1993-03-16 Worcester Foundation For Experimental Biology Inhibition of influenza virus replication by oligonucleotide phosphorothioates
US5264423A (en) 1987-03-25 1993-11-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Inhibitors for replication of retroviruses and for the expression of oncogene products
JPH04501052A (ja) 1988-02-26 1992-02-27 ザ・ウスター・フアウンデーシヨン・フオー・バイオメデイカル・リサーチ 外来性オリゴヌクレオチドによるｈｔｌｖ―３の抑制
DE68927417T2 (de) 1988-04-27 1997-03-20 Isis Pharmaceutical Inc Oligoribonukleotid-Derivate und ihre Anwendung als antivirale Mittel
JP2976436B2 (ja) 1988-04-27 1999-11-10 味の素株式会社 新規オリゴリボヌクレオチド誘導体及び抗ウイルス剤への使用
DE3907562A1 (de) 1989-03-09 1990-09-13 Bayer Ag Antisense-oligonukleotide zur inhibierung der transaktivatorzielsequenz (tar) und der synthese des transaktivatorproteins (tat) aus hiv-1 und deren verwendung
EP0472648A4 (en) 1989-05-18 1992-09-16 Microprobe Corporation Crosslinking oligonucleotides
US5134066A (en) 1989-08-29 1992-07-28 Monsanto Company Improved probes using nucleosides containing 3-dezauracil analogs
EP0452457B1 (en) 1989-11-03 1997-08-20 Vanderbilt University Method of in vivo delivery of functioning foreign genes
US5149797A (en) 1990-02-15 1992-09-22 The Worcester Foundation For Experimental Biology Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides
JPH05501060A (ja) 1990-03-21 1993-03-04 アイシス・ファーマシューティカルス・インコーポレーテッド Ｒｎａ模倣による遺伝子発現活性変調のための試薬および方法
US5292875A (en) 1990-04-20 1994-03-08 Lynx Therapeutics, Inc. Method of synthesizing sulfurized oligonucleotide analogs
US5166195A (en) 1990-05-11 1992-11-24 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibitors of the human immunodeficiency virus phosphorothioate oligonucleotides
NZ239252A (en) 1990-08-09 1997-07-27 Genta Inc Reagent for attaching a psoralen-containing moiety to an oligonucleotide(derivative); oligonucleotide(derivative)-psoralen conjugates
HUT69956A (en) 1990-08-14 1995-09-28 Isis Pharmaceuticals Inc Methode for inhibition of influenza virus by antiseuse oligonucleotides
US5271941A (en) 1990-11-02 1993-12-21 Cho Chung Yoon S Antisense oligonucleotides of human regulatory subunit RI.sub.α of cAMP-dependent protein kinases
WO1992017484A1 (en) 1991-03-27 1992-10-15 Research Corporation Technologies, Inc. Single-stranded circular oligonucleotides
DE4110085A1 (de) 1991-03-27 1992-10-01 Boehringer Ingelheim Int 2'-o-alkyl-oligoribonukleotide, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung als antisense-oligonukleotide
US5646267A (en) 1991-08-05 1997-07-08 Polish Academy Of Sciences Method of making oligonucleotides and oligonucleotide analogs using phospholanes and enantiomerically resolved phospholane analogues
US6369209B1 (en) 1999-05-03 2002-04-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having A-DNA form and B-DNA form conformational geometry
US7119184B2 (en) 1991-08-12 2006-10-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides having A-DNA form and B-DNA form conformational geometry
DE69232699T2 (de) 1991-10-15 2003-02-06 Isis Pharmaceutical, Inc. Über chirale phosphoratome gebundene oligonukleotide
NZ244820A (en) 1991-10-25 1994-01-26 Isis Pharmaceuticals Inc Oligonucleotide inhibitor of epstein-barr virus.
FR2685346B1 (fr) 1991-12-18 1994-02-11 Cis Bio International Procede de preparation d'arn double-brin, et ses applications.
US5644048A (en) 1992-01-10 1997-07-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for preparing phosphorothioate oligonucleotides
EP0642589A4 (en) 1992-05-11 1997-05-21 Ribozyme Pharm Inc METHOD AND REAGENT TO INHIBIT VIRAL REPLICATION.
US5606049A (en) 1992-06-03 1997-02-25 Genta Incorporated Method of preparing 2'-O-methyl cytidine monomers useful in oligomer synthesis
TW244371B (ar) 1992-07-23 1995-04-01 Tri Clover Inc
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
US6346614B1 (en) 1992-07-23 2002-02-12 Hybridon, Inc. Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
ATE299509T1 (de) 1992-07-23 2005-07-15 Isis Pharmaceuticals Inc Neue 2'-o-alkyl-nukleoside und -phosphoramidite, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendungen
IL108206A0 (en) 1993-01-06 1994-04-12 Univ Johns Hopkins Oligomers having improved stability at acid ph
ATE138384T1 (de) 1993-01-25 1996-06-15 Hybridon Inc Olionukleotidalkylphosphonate und - phosphonothioate
EP0695306A1 (en) 1993-04-19 1996-02-07 Gilead Sciences, Inc. Enhanced triple-helix and double-helix formation with oligomers containing modified purines
FR2705099B1 (fr) 1993-05-12 1995-08-04 Centre Nat Rech Scient Oligonucléotides phosphorothioates triesters et procédé de préparation.
JPH09500787A (ja) 1993-07-19 1997-01-28 ジェン−プローブ・インコーポレイテッド 蛋白生産、細胞増殖および／または感染症病原体の増殖に対するオリゴヌクレオチド阻害の促進
JPH0799976A (ja) 1993-09-30 1995-04-18 Takeda Chem Ind Ltd 修飾オリゴヌクレオチド
US5801235A (en) 1994-05-25 1998-09-01 Hybridon, Inc. Oligonucleotides with anti-cytomegalovirus activity
CA2191192A1 (en) 1994-05-27 1995-12-07 Wayne M. Galbraith Use of oligonucleotide phosphorothioate for depleting complement and for reducing blood pressure
US5866699A (en) 1994-07-18 1999-02-02 Hybridon, Inc. Oligonucleotides with anti-MDR-1 gene activity
AU3675195A (en) 1994-09-07 1996-03-27 Hybridon, Inc. Oligonucleotide prodrugs
US5591721A (en) 1994-10-25 1997-01-07 Hybridon, Inc. Method of down-regulating gene expression
JPH08154687A (ja) 1994-12-12 1996-06-18 Yamanouchi Pharmaceut Co Ltd アンチセンスオリゴヌクレオチド及び抗ウイルス剤
CA2207593A1 (en) 1994-12-13 1996-06-20 John Gustofson Method and reagent for treatment of arthritic conditions, induction of graft tolerance and reversal of immune responses
CN1175281A (zh) 1994-12-22 1998-03-04 海布里登公司 立体特异性硫代磷酸寡核苷酸的合成
US6111095A (en) 1995-06-07 2000-08-29 Merck & Co., Inc. Capped synthetic RNA, analogs, and aptamers
GB9511720D0 (en) 1995-06-09 1995-08-02 Isis Innovation Oligonucleotide phosphorylation method and products
US20040234999A1 (en) 1996-04-02 2004-11-25 Farrar Gwenyth Jane Genetic suppression and replacement
US6127535A (en) 1997-11-05 2000-10-03 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleoside triphosphates and their incorporation into oligonucleotides
EP1626086A2 (en) 1998-04-20 2006-02-15 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression
CA2330574A1 (en) 1998-04-29 1999-11-04 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleoside triphosphates and their incorporation into ribozymes
EP1493818A3 (en) 1998-04-29 2006-02-15 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleoside triphosphates and their incorporation into ribozymes
US6562798B1 (en) 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
US6344323B1 (en) 1998-09-16 2002-02-05 Vitagenix, Inc. Compositions and methods for inhibiting cox-2 expression and treating cox-2 associated disorders by using cox-2 antisense oligonucleotides
EP1212416A2 (en) 1999-08-31 2002-06-12 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid based modulators of gene expression
AU783118B2 (en) 1999-09-27 2005-09-29 Coley Pharmaceutical Gmbh Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon
US20020028784A1 (en) 2000-03-10 2002-03-07 Nest Gary Van Methods of preventing and treating viral infections using immunomodulatory polynucleotide sequences
DE10013600A1 (de) 2000-03-18 2002-01-10 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Reaktive Monomere für die Oligonucleotid- und Polynucleotidsynthese, modifizierte Oligonucleotide und Polynucleotiden und ein Verfahren zu deren Herstellung
US6686461B1 (en) 2000-03-22 2004-02-03 Solulink Bioscience, Inc. Triphosphate oligonucleotide modification reagents and uses thereof
US20030077609A1 (en) 2001-03-25 2003-04-24 Jakobsen Mogens Havsteen Modified oligonucleotides and uses thereof
WO2003008432A1 (en) 2001-07-16 2003-01-30 Isis Pharmaceuticals, Inc. Process for the preparation of alpha modified nucleoside triphosphates and compounds therefrom
WO2003012052A2 (en) 2001-07-30 2003-02-13 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Specific inhibition of gene expression by small double stranded rnas
FR2832154B1 (fr) 2001-11-09 2007-03-16 Centre Nat Rech Scient Oligonucleotides inhibiteurs et leur utilisation pour reprimer specifiquement un gene
US20030203868A1 (en) 2002-02-06 2003-10-30 Bushman Frederic D. Inhibition of pathogen replication by RNA interference
WO2003072757A2 (en) 2002-02-28 2003-09-04 Biota, Inc. Nucleotide mimics and their prodrugs
WO2003078595A2 (en) 2002-03-15 2003-09-25 Astral, Inc. Immunostimulatory double stranded rna and methods of inducing, enhancing or modulating the immune response
EP3006043B1 (en) 2002-04-04 2019-05-29 Zoetis Belgium S.A. Immunostimulatory g,u-containing oligoribonucleotides
EP1495120B1 (en) 2002-04-18 2012-10-10 Acuity Pharmaceuticals, Inc Means and methods for the specific modulation of target genes in the eye
KR20050026384A (ko) 2002-04-26 2005-03-15 내셔날 인스티튜트 오브 어드밴스드 인더스트리얼 사이언스 앤드 테크놀로지 ＲＮＡｉ효과를 가지는 스템 루프 형 ＲＮＡ 분자 발현 시스템
CA2388049A1 (en) 2002-05-30 2003-11-30 Immunotech S.A. Immunostimulatory oligonucleotides and uses thereof
WO2004015062A2 (en) 2002-08-12 2004-02-19 New England Biolabs, Inc. Methods and compositions relating to gene silencing
US7109316B2 (en) 2002-08-23 2006-09-19 Ce Healthcare Bio-Sciences Corp. Oligonucleotide tagged nucleoside triphosphates (OTNTPs) for genetic analysis
JP2005537015A (ja) 2002-09-04 2005-12-08 ジョンソン アンド ジョンソン リサーチ プロプライアトリー リミテッド ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を媒介するためにｄｓＤＮＡを使用する方法
WO2004024063A2 (en) 2002-09-11 2004-03-25 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
AU2003295600A1 (en) 2002-11-14 2004-06-15 Dharmacon, Inc. Functional and hyperfunctional sirna
US7250496B2 (en) 2002-11-14 2007-07-31 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
US7696334B1 (en) 2002-12-05 2010-04-13 Rosetta Genomics, Ltd. Bioinformatically detectable human herpesvirus 5 regulatory gene
US20130130231A1 (en) 2002-11-26 2013-05-23 Isaac Bentwich Bioinformatically detectable group of novel viral regulatory genes and uses thereof
US7217807B2 (en) 2002-11-26 2007-05-15 Rosetta Genomics Ltd Bioinformatically detectable group of novel HIV regulatory genes and uses thereof
DE602004015064D1 (de) 2003-01-06 2008-08-28 Wyeth Corp Zusammensetzungen und verfahren zur diagnose und behandlung von kolonkrebs
WO2004074441A2 (en) 2003-02-19 2004-09-02 Government Of The United States Of America Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Amplification or overexpression of mll septin-like fusion (msf) and septin9 and methods related thereto
CN1176937C (zh) 2003-02-21 2004-11-24 复旦大学附属中山医院 一种双链rna及其用途
US20040261149A1 (en) 2003-02-24 2004-12-23 Fauquet Claude M. siRNA-mediated inhibition of gene expression in plant cells
US7381410B2 (en) 2003-03-12 2008-06-03 Vasgene Therapeutics, Inc. Polypeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth
EP1606305A4 (en) 2003-03-12 2009-06-24 Vasgene Therapeutics Inc NUCLEIC ACID COMPOUNDS FOR THE INHIBITION OF ANGIOGENESIS AND TUMOR GROWTH
ATE443765T1 (de) 2003-03-21 2009-10-15 Santaris Pharma As Analoga kurzer interferierender rna (sirna)
US20040220130A1 (en) 2003-03-24 2004-11-04 Robbins Paul D. Compact synthetic expression vector comprising double-stranded DNA molecules and methods of use thereof
US8969543B2 (en) 2003-04-03 2015-03-03 Bioneer Corporation SiRNA-hydrophilic polymer conjugates for intracellular delivery of siRNA and method thereof
US20050042641A1 (en) 2003-05-27 2005-02-24 Cold Spring Harbor Laboratory In vivo high throughput selection of RNAi probes
JP2006526394A (ja) 2003-06-03 2006-11-24 ベニテック オーストラリア リミテッド 二本鎖核酸
WO2004108921A1 (ja) 2003-06-06 2004-12-16 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 核酸導入法
MXPA05013658A (es) 2003-06-11 2006-03-02 Hybridon Inc Oligonucleotidos inmunomoduladores estabilizados.
FR2857013B1 (fr) 2003-07-02 2005-09-30 Commissariat Energie Atomique Petits arn interferents specifiques des sous-unites alpha, alpha prime et beta de la proteine kinase ck2 et leurs applications
US8372966B2 (en) 2003-12-19 2013-02-12 University Of Cincinnati Oligonucleotide decoys and methods of use
CA2555145A1 (en) 2004-02-06 2005-08-25 Wyeth Diagnosis and therapeutics for cancer
US20050182005A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Tuschl Thomas H. Anti-microRNA oligonucleotide molecules
US20070265220A1 (en) 2004-03-15 2007-11-15 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
CA2559955C (en) 2004-03-15 2016-02-16 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded rna
JP2007536253A (ja) 2004-05-04 2007-12-13 ナステック・ファーマシューティカル・カンパニー・インコーポレーテッド 細胞内への核酸の送達を増強し、細胞中の標的遺伝子の発現を修飾するための組成物及び方法
US20060035815A1 (en) 2004-05-04 2006-02-16 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Pharmaceutical compositions for delivery of ribonucleic acid to a cell
WO2005108573A2 (en) 2004-05-12 2005-11-17 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Method to induce rnai in prokaryotic organisms
EP1773857A4 (en) 2004-07-02 2009-05-13 Protiva Biotherapeutics Inc THE IMMUNE SYSTEM STIMULATING SIRNA MOLECULES AND APPLICATIONS THEREOF
JPWO2006016574A1 (ja) 2004-08-12 2008-05-01 国立大学法人 熊本大学 ＲＮＡｉを利用した抗腫瘍剤
EP1657306B1 (en) 2004-11-16 2011-04-13 QIAGEN GmbH Gene silencing using sense DNA and antisense RNA hybrid constructs coupled to peptides facilitating the uptake into cells
US8003619B2 (en) 2004-12-09 2011-08-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method of stimulating an immune response and inhibiting expression of a gene using an oligonucleotide
US8030473B2 (en) 2005-01-07 2011-10-04 State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon State University Method to trigger RNA interference
WO2006078646A2 (en) 2005-01-18 2006-07-27 Caltagirone Gaetano T A class of supramolecular drug molecules and methods of identification and use thereof
US20060178334A1 (en) 2005-02-04 2006-08-10 City Of Hope Double-stranded and single-stranded RNA molecules with 5 ' triphosphates and their use for inducing interferon
EP1857119B1 (en) 2005-02-07 2011-11-23 Takeda Pharmaceutical Company Limited Screening for a compound promoting binding between fbl2 and amyloid precursor protein or its c-terminal fragments alpha and beta
JP4645234B2 (ja) 2005-03-03 2011-03-09 和光純薬工業株式会社 架橋剤、それを用いた架橋方法、遺伝子発現調節方法および遺伝子機能調査方法
JP2008537551A (ja) 2005-03-31 2008-09-18 カランド ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド リボヌクレオチドレダクターゼサブユニット２の阻害剤およびその使用
CN101277704A (zh) 2005-04-12 2008-10-01 因特拉迪格姆公司 用于治疗癌症及其它新血管生成疾病的RNAi治疗剂的组合物和方法
US7893244B2 (en) 2005-04-12 2011-02-22 Intradigm Corporation Composition and methods of RNAi therapeutics for treatment of cancer and other neovascularization diseases
US20070066521A1 (en) 2005-04-13 2007-03-22 Fauquet Claude M Short RNA-binding proteins
WO2006119643A1 (en) 2005-05-12 2006-11-16 Replicor Inc. Anti-ocular angiogenesis molecules and their uses
WO2006122409A1 (en) 2005-05-16 2006-11-23 Replicor Inc. Antimicrobial molecules and their uses
JP5371424B2 (ja) 2005-06-01 2013-12-18 ポリプラス トランスフェクション エスアー Ｒｎａ干渉のためのオリゴヌクレオチドおよびその生物学的適用
WO2006130949A1 (en) 2005-06-08 2006-12-14 Replicor Inc. Anti amyloid-related disease molecules and their uses
ES2435774T3 (es) 2005-07-07 2013-12-23 Yissum Research Development Company, Of The Hebrew University Of Jerusalem Agentes de ácido nucleico para la regulación negativa de H19, y métodos de uso del mismo
CA2619533C (en) 2005-08-17 2014-02-04 Bioneer Corporation Sirna-hydrophilic polymer conjugates for intracellular delivery of sirna and method thereof
JP2009507852A (ja) 2005-09-08 2009-02-26 エムディーアールエヌエー，インコーポレイテッド リボ核酸の細胞への送達用医薬組成物
EP1764107A1 (en) 2005-09-14 2007-03-21 Gunther Hartmann Compositions comprising immunostimulatory RNA oligonucleotides and methods for producing said RNA oligonucleotides
EP1924284A1 (en) 2005-09-14 2008-05-28 Hartmann, Gunther Compositions comprising immunostimulatory rna oligonucleotides and methods for producing said rna oligonucleotides
WO2007038788A2 (en) 2005-09-29 2007-04-05 The Cleveland Clinic Foundation Small interfering rnas as non-specific drugs
CN101346393B (zh) 2005-11-02 2015-07-22 普洛体维生物治疗公司 修饰的siRNA分子及其应用
WO2007086990A2 (en) 2005-11-17 2007-08-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Modulation of gene expression by oligomers targeted to chromosomal dna
KR101485071B1 (ko) 2005-12-12 2015-01-26 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 마이크로 ｒｎａ를 이용한 근육 세포 증식 및 분화 조절방법과 근육 세포 치료방법 및 유전자 발현 억제방법그리고 마이크로 ｒｎａ 분자의 발현용 벡터와 이를 이용한키트 및 미오사이트
EP1973574B1 (en) 2005-12-30 2014-04-02 Institut Gustave Roussy Use of inhibitors of scinderin and/or of ephrin-a1 for treating tumors
EP2004141A2 (en) 2006-03-17 2008-12-24 Novosom AG An efficient method for loading amphoteric liposomes with nucleic acid active substances
KR101221589B1 (ko) 2006-04-07 2013-01-15 이데라 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 Ｔｌｒ７ 및 ｔｌｒ８에 대한 안정화된 면역 조절성 ｒｎａ〔ｓｉｍｒａ〕 화합물
ATE502122T1 (de) 2006-06-01 2011-04-15 Trilink Biotechnologies Chemisch modifizierte oligonukleotidprimer zur nukleinsäureamplifikation
US20080091005A1 (en) 2006-07-20 2008-04-17 Visigen Biotechnologies, Inc. Modified nucleotides, methods for making and using same
EP2046954A2 (en) 2006-07-31 2009-04-15 Curevac GmbH NUCLEIC ACID OF FORMULA (I): GIXmGn, OR (II): CIXmCn, IN PARTICULAR AS AN IMMUNE-STIMULATING AGENT/ADJUVANT
EP1920775B1 (en) 2006-10-10 2012-12-19 Gunther Prof. Dr. Hartmann 5'Triphosphate oligonucleotide induces anti-viral response
ES2911034T3 (es) 2006-08-08 2022-05-17 Univ Bonn Rheinische Friedrich Wilhelms Estructura y uso de oligonucleótidos 5' fosfato
EP2069500B1 (en) 2006-10-04 2014-09-24 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Compositions comprising a sirna and lipidic 4,5-disubstituted 2-deoxystreptamine ring aminoglycoside derivatives and uses thereof
WO2008045576A2 (en) 2006-10-12 2008-04-17 Yijia Liu Compositions and methods of rnai therapeutics for treatment of cancer and other neovascularization diseases
US20120142759A1 (en) 2006-11-10 2012-06-07 Sazani Peter L Soluble thf receptors and their use in treatment of disease
CN101190944A (zh) 2006-12-01 2008-06-04 北京诺赛基因组研究中心有限公司 人类新细胞因子及其用途
WO2008080091A2 (en) 2006-12-21 2008-07-03 Vical Incorporated Activation of rig-i pathway
JP2010512786A (ja) 2006-12-21 2010-04-30 イントラダイム コーポレイション ガンを処置するための抑制性ポリヌクレオチドの組成物および方法
US7858772B2 (en) 2006-12-22 2010-12-28 Roche Molecular Systems, Inc. Compounds and methods for synthesis and purification of oligonucleotides
WO2008087641A2 (en) 2007-01-16 2008-07-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem H19 silencing nucleic acid agents for treating rheumatoid arthritis
US9249423B2 (en) 2007-02-02 2016-02-02 Yale University Method of de-differentiating and re-differentiating somatic cells using RNA
WO2008099396A1 (en) 2007-02-15 2008-08-21 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Use of h19-silencing nucleic acid agents for treating restenosis
WO2008102728A1 (ja) 2007-02-19 2008-08-28 Kyoto University 核酸導入用導電性基板および核酸導入方法
MY173854A (en) 2007-03-13 2020-02-25 Malaysian Palm Oil Board Expression regulatory elements
CA2683063A1 (en) 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
CN101088565A (zh) 2007-04-17 2007-12-19 华东师范大学 miRNA－34a的用途
CN101289486B (zh) * 2007-04-18 2012-05-30 上海吉凯基因化学技术有限公司 一种合成rna单体的方法
WO2008134593A1 (en) 2007-04-25 2008-11-06 President And Fellows Of Harvard College Molecular circuits
EP2333091B1 (en) 2007-05-29 2017-06-21 Nature Technology Corporation Vectors and methods for genetic immunization
RU2010107199A (ru) 2007-07-31 2011-09-10 Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити (Us) Конъюгат полипептид-нуклеиновая кислота для иммунопрофилактики или иммунотерапии для неопластических или инфекционных нарушений
US8367815B2 (en) 2007-08-28 2013-02-05 California Institute Of Technology Modular polynucleotides for ligand-controlled regulatory systems
WO2009038707A2 (en) 2007-09-17 2009-03-26 Ludwig Institute For Cancer Research , Ltd. Cancer-testis gene silencing agents and uses thereof
EP2573112A1 (en) 2007-10-11 2013-03-27 The Hospital For Sick Children Modulation of sirpa - cd47 interaction for increasing human hematopoietic stem cell engraftment and compounds therefor
CA2702039A1 (en) 2007-10-12 2009-04-23 Intradigm Corporation Therapeutic sirna molecules for reducing vegfr1 expression in vitro and in vivo
DE102007052114B4 (de) 2007-10-30 2011-01-05 T2Cure Gmbh Verfahren zur Modulation der Funktion, des Wachstums oder der Differenzierung einer Zelle
WO2009060124A2 (en) 2007-11-05 2009-05-14 Baltic Technology Development, Ltd. Use of oligonucleotides with modified bases in hybridization of nucleic acids
JP2011504170A (ja) 2007-11-06 2011-02-03 サーナオミクス、インク． 皮膚の中で平癒している瘢痕のない損傷のためのマルチ目標とされたＲＮＡｉ治療学
CA2704853C (en) 2007-11-06 2017-08-15 Eugen Uhlmann Immune stimulatory oligoribonucleotide analogs containing modified oligophosphate moieties
WO2009064590A2 (en) 2007-11-12 2009-05-22 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Therapeutic applications of p53 isoforms in regenerative medicine, aging and cancer
US8357501B2 (en) 2007-11-29 2013-01-22 Molecular Health Gmbh Tissue protective erythropoietin receptor (NEPOR) and methods of use
ES2386495T3 (es) 2007-11-29 2012-08-21 Molecular Health Gmbh siARN específico de EPH-B4 para reducir el crecimiento de células neoplásicas inducidas por EPO durante el tratamiento de anemia en pacientes con cáncer, receptor de eritropoyetina protector de tejido (NEPOR) y métodos de uso
GB0725321D0 (en) 2007-12-31 2008-02-06 Syntaxin Ltd Delivery vehicles
DK2176408T5 (en) 2008-01-31 2015-12-14 Curevac Gmbh Nucleic acids comprising FORMULA (NuGiXmGnNv) a AND DERIVATIVES AS IMMUNE STIMULATING AGENTS / ADJUVANTS.
HUE026153T2 (en) 2008-05-21 2016-05-30 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn 5'Triphosphate oligonucleotide with blunt end and uses thereof
WO2009141146A1 (en) 2008-05-21 2009-11-26 Gunther Hartmann 5' triphosphate oligonucleotide with blunt end and uses thereof
CA2635187A1 (en) 2008-06-05 2009-12-05 The Royal Institution For The Advancement Of Learning/Mcgill University Oligonucleotide duplexes and uses thereof
WO2009151600A2 (en) 2008-06-10 2009-12-17 Tufts University Smad proteins control drosha-mediated mirna maturation
CN101632833B (zh) 2008-07-25 2013-11-06 上海市计划生育科学研究所 一种前列腺癌相关的基因及其用途
WO2011028218A1 (en) * 2009-09-02 2011-03-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Process for triphosphate oligonucleotide synthesis
CA2735860A1 (en) * 2008-09-02 2010-03-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Synthetic methods and derivatives of triphosphate oligonucleotides
WO2010042751A2 (en) 2008-10-08 2010-04-15 Chimeros Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
WO2010042755A2 (en) 2008-10-08 2010-04-15 Chimeros Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
WO2010042742A2 (en) 2008-10-08 2010-04-15 Chimeros Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
WO2010042749A2 (en) 2008-10-08 2010-04-15 Chimeros Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
CN102264898B (zh) 2008-10-23 2013-10-16 国立大学法人东京大学 微小rna的功能抑制方法
WO2010062502A1 (en) 2008-11-03 2010-06-03 University Of Utah Research Foundation Carriers for the delivery of nucleic acids to cells and methods of use thereof
US20120027753A1 (en) 2009-02-26 2012-02-02 The Ohio State University MicroRNAs in Never-Smokers and Related Materials and Methods
WO2010118263A1 (en) 2009-04-08 2010-10-14 University Of Massachusetts Single-nucleotide polymorphism (snp) targeting therapies for the treatment of huntington's disease
WO2010120874A2 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Chimeros, Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
US20100323018A1 (en) 2009-06-17 2010-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Branched DNA/RNA monomers and uses thereof
ATE554749T1 (de) 2009-07-09 2012-05-15 Marina Biotech Inc Nachahmung von lipoproteinstrukturen
WO2011008857A1 (en) 2009-07-14 2011-01-20 Northeastern University SiRNA PHOSPHOLIPID CONJUGATE
US20140018354A9 (en) 2009-07-23 2014-01-16 Nathaniel Moorman Inhibitors of mtor kinase as anti-viral agents
WO2011028128A1 (en) * 2009-09-01 2011-03-10 Askim Frukt- Og Bærpresseri As Method to prevent oxidation of components in oil, and method to reduce the use of ethoxyquin to prevent oxidation of components in oil
EP2327783A1 (en) 2009-11-27 2011-06-01 Universitätsklinikum Freiburg Pharmaceutical composition comprising miRNA-100 and its use in the modulation of blood vessel growth
DE202009015670U1 (de) 2009-11-30 2011-04-14 Mcairlaid's Vliesstoffe Gmbh & Co. Kg Absorptionskörper zur Auflage auf Wunden
US20110247091A1 (en) 2010-03-26 2011-10-06 The Governors Of The University Of Alberta Transgenic Cells and Chickens Expressing RIG-I
WO2011133559A2 (en) 2010-04-19 2011-10-27 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Alpha tubulin acetyltransferase
EP2385120A1 (en) 2010-05-04 2011-11-09 Justus-Liebig- Universitat Giessen Use of anti-miRNA antisense oligonucleotides for the treatment of pulmonary hypertension
WO2011140285A2 (en) 2010-05-04 2011-11-10 Sirnaomics, Inc. Combinations of tgfbeta and cox-2 inhibitors and methods for their therapeutic application
CN101974529B (zh) 2010-09-21 2013-04-03 南京大学（苏州）高新技术研究院 含自由三磷酸基团的TGF-β特异性siRNA及其应用
WO2012056441A1 (en) 2010-10-28 2012-05-03 Nanodoc Ltd. Compositions and methods for specific cleavage of exogenous rna in a cell
WO2012056440A1 (en) 2010-10-28 2012-05-03 Nanodoc Ltd. COMPOSITIONS AND METHODS FOR ACTIVATING EXPRESSION BY A SPECIFIC ENDOGENOUS miRNA
CN102475892A (zh) 2010-11-22 2012-05-30 大连创达技术交易市场有限公司 作为制备抗癌药物的反义miRNA-210的用途
KR101308591B1 (ko) 2010-12-30 2013-09-13 주식회사 삼양바이오팜 양이온성 지질을 포함하는 음이온성 약물 전달체 및 그 제조방법
US8461224B2 (en) 2011-03-04 2013-06-11 National Health Research Institutes Single monomer derived linear-like copolymer comprising polyethylenimine and poly(ethylene glycol) for nucleic acid delivery
WO2012125987A2 (en) 2011-03-17 2012-09-20 Massachusetts Institute Of Technology Delivery system
EP2508530A1 (en) * 2011-03-28 2012-10-10 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Purification of triphosphorylated oligonucleotides using capture tags
WO2013003887A1 (en) 2011-07-04 2013-01-10 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Nucleic acid complex
EP2551354A1 (en) 2011-07-25 2013-01-30 Universität Heidelberg Functionalization of RNA oligonucleotides
US20130189367A1 (en) 2011-07-29 2013-07-25 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Nanovectors for targeted gene silencing and cytotoxic effect in cancer cells
EP2741783B1 (de) 2011-08-08 2017-03-22 Universität Regensburg Polyanion-nanokomplexe für therapeutische anwendungen
EP2765983A1 (de) 2011-10-11 2014-08-20 Hans Kosak Zusammensetzung zur einbringung von nukleinsäuren in zellen
WO2013053481A1 (de) 2011-10-11 2013-04-18 Secutech International Pte. Ltd. Dimethylsulfoxid als lösungsmittel für nukleinsäuren
WO2013064584A1 (en) 2011-10-31 2013-05-10 Riboxx Gmbh Double-stranded RNA for immunostimulation
US9631192B2 (en) 2011-11-17 2017-04-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Auto-recognizing therapeutic RNA/DNA chimeric nanoparticles (NP)
JP2015518475A (ja) 2012-04-10 2015-07-02 インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラルシェルシェ メディカル）Ｉｎｓｅｒｍ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｅｌａ Ｓａｎｔｅ Ｅｔｄｅ Ｌａ Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ Ｍｅｄｉｃａｌｅ） 非アルコール性脂肪性肝炎の治療方法
US20130302252A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 University Of Washington Through Its Center For Commercialization Polyarginine-coated magnetic nanovector and methods of use thereof
EP2712870A1 (en) 2012-09-27 2014-04-02 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Novel RIG-I ligands and methods for producing them
US20140287023A1 (en) 2013-02-11 2014-09-25 Mcgill University 5'-triphosphate oligoribonucleotides

Also Published As

Publication number Publication date
CA2885564C (en) 2019-08-20
SG11201501961PA (en) 2015-04-29
MX2015003787A (es) 2015-11-09
SA517380700B1 (ar) 2019-04-04
EP3398956B1 (en) 2021-11-03
HK1214602A1 (en) 2016-07-29
EP2903997B1 (en) 2018-06-06
NZ706443A (en) 2018-04-27
SG10201702028YA (en) 2017-04-27
TR201810231T4 (tr) 2018-08-27
EP2712870A1 (en) 2014-04-02
EA201590629A1 (ru) 2016-02-29
NZ736108A (en) 2018-12-21
PH12015500644A1 (en) 2015-05-11
PT2903997T (pt) 2018-07-26
AU2013322620C1 (en) 2017-12-14
HK1209128A1 (en) 2016-03-24
SI2903997T1 (sl) 2018-11-30
EA034605B1 (ru) 2020-02-25
EP3398956A1 (en) 2018-11-07
CN104703996B (zh) 2018-01-12
TN2015000104A1 (en) 2016-06-29
CY1120660T1 (el) 2019-12-11
LT2903997T (lt) 2018-10-10
US10059943B2 (en) 2018-08-28
CN104703996A (zh) 2015-06-10
HRP20181114T1 (hr) 2018-10-19
PL2903997T3 (pl) 2018-11-30
UA117565C2 (uk) 2018-08-27
JP6313768B2 (ja) 2018-04-18
ZA201501718B (en) 2015-12-23
KR20150059792A (ko) 2015-06-02
IL237794B (en) 2018-12-31
AU2013322620B2 (en) 2017-08-31
HUE038811T2 (hu) 2018-11-28
EA201790916A1 (ru) 2017-08-31
AU2013322620A1 (en) 2015-04-02
US20150275217A1 (en) 2015-10-01
CA2885564A1 (en) 2014-04-03
EP2903997A1 (en) 2015-08-12
BR122019023887B1 (pt) 2023-03-14
WO2014049079A1 (en) 2014-04-03
AU2013322620A2 (en) 2015-04-09
KR102182479B1 (ko) 2020-11-24
AU2017213455A1 (en) 2017-08-24
US20180312841A1 (en) 2018-11-01
US20160152983A1 (en) 2016-06-02
JP2015532270A (ja) 2015-11-09
EA028707B1 (ru) 2017-12-29
CL2015000752A1 (es) 2015-12-04
CN106279300A (zh) 2017-01-04
SG10201912308SA (en) 2020-02-27
BR112015006874A2 (pt) 2017-07-04
RS57609B1 (sr) 2018-11-30
EP2963050A1 (en) 2016-01-06
ES2679373T3 (es) 2018-08-24
CN106279300B (zh) 2020-07-10
DK2903997T3 (en) 2018-07-30
BR112015006874B1 (pt) 2023-04-18
US11142763B2 (en) 2021-10-12
US10072262B2 (en) 2018-09-11
AU2017213455B2 (en) 2019-02-14
PH12015500644B1 (en) 2015-05-11
EP4008722A1 (en) 2022-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA515360190B1 (ar) مركبات ترابطية rig-i جديدة وطرق إنتاجها
AU2016202354B2 (en) Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
JP2023524812A (ja) リンカー化合物
AU2024258620A1 (en) Oligomeric nucleic acid, and preparation method therefore and use thereof
EP4719437A1 (en) Connector modified synthetic rig-i agonists and methods of using the same
CN121752721A (zh) 用于多聚体RNAi剂缀合物的肝脏递送平台及其使用方法
HK1209128B (en) Novel rig-i ligands and methods for producing them