TR201909156T4 - Kan beyin bariyeri mekiği. - Google Patents

Kan beyin bariyeri mekiği. Download PDF

Info

Publication number
TR201909156T4
TR201909156T4 TR2019/09156T TR201909156T TR201909156T4 TR 201909156 T4 TR201909156 T4 TR 201909156T4 TR 2019/09156 T TR2019/09156 T TR 2019/09156T TR 201909156 T TR201909156 T TR 201909156T TR 201909156 T4 TR201909156 T4 TR 201909156T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
antibody
brain
mab3l
binding
blood
Prior art date
Application number
TR2019/09156T
Other languages
English (en)
Inventor
Bohrmann Bernd
Freskgard Per-Ola
Maier Peter
Niewoehner Jens
Tissot-Daguette Alain
Urich Eduard
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of TR201909156T4 publication Critical patent/TR201909156T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2881—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/35—Valency
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Mevcut buluş, kan beyin bariyeri (R/BBB) üzerine bağlanan kan beyin bariyeri mekikleri ve bunların kullanım yöntemleri ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME KAN BEYIN BARIYERI MEKIGI Mevcut bulus, kan beyin bariyeri (R/BBB) üzerine baglanan bir kan beyin bariyeri mekigi ve bunlarin kullanim yöntemleri ile BULUSUN ARKA PLANI Örnegin nörolojik bozukluk ilaçlarinin beyin penetrasyonu, düsük beyin penetrasyonuna sahip büyük biyoterapötik ilaçlar veya küçük moleküllü ilaçlar, nörovasküler birimdeki (NVU) diger hücre bileseni ile birlikte kapsamli ve geçirgen olmayan kan-beyin bariyeri (BBB) ile siki sekilde sinirlidir. Bu engelin üstesinden gelmek için birçok strateji test edilmistir ve bunlardan biri, beyin kapiller endotelyumunda eksprese edilen endojen reseptörlerin aracilik ettigi transsitoz yolaklarini kullanmaktir. Rekombinant proteinler örnegin monoklonal antikorlar veya peptidler reseptör aracili biyoterapötiklerin beyne iletilmesini saglamak için bu reseptörlere karsi tasarlanmistir. Ancak, beyin alimini maksimize ederken beyin endotel hücreleri içerisinde (BEC'ler) yanlis tasniflemeyi ve BEC içinde belirli organellerde birikme derecesini (özellikle biyoterapötigin bozunmasina yol açan organeller) minimize etmek için stratejiler, halen kesfedilmemistir. Monoklonal antikorlar ve diger biyoterapötikler, merkezi sinir sisteminde (MSS) patoloji tedavisi için büyük terapötik potansiyele sahiptir. Ancak, beyin içerisine dogru yollari, BBB tarafindan önlenir. Önceki çalismalar, kan dolasimina enjekte edilen bir IgG'nin çok küçük bir yüzdesi (yaklasik kesinlikle antikorun MSS'sindeki düsük konsantrasyon nedeniyle farmakolojik etkileri sinirlayacaktir. transferrin reseptörü Fab fragmani ihtiva eden bir bispesifik tam uzunluklu antikoru açiklamaktadir. Bu bispesifik antikor, bir kan beyin bariyeri mekigi olarak görev görür. uzunluklu antikoru ve bir anti-Abetar tam› uzunluklur antikoru veya bir anti-transferrin Fab fragmani ve bir anti-abeta Fab fragmani ihtiva eden bispesifik antikorlari açiklamaktadir. Her iki yapi da kan beyin bariyeri mekigi olarak görev yapar. Dolayisiyla, nörolojik bozukluk yüklerini BBB boyunca mekik yüklerine beyine etkili sekilde aktarim sistemleri için bir ihtiyaç bulunmaktadir. BULUSUN ÖZETI Bir birinci görünümde, mevcut bulus, bir baglayici ve bir transferrin reseptörüne baglanan bir tek degerli baglama varligi içeren bir kan beyin bariyeri mekigi sunar, burada baglayici, efektör varligini, transferrin reseptörüne baglanan tek degerli baglama varligina kenetler, burada transferrin reseptörüne baglanan tek degerli baglama varligi Seg. Id. No. 14, 15 veya l6'in amino asit sekansinda bulunan transferrin reseptöründeki bir epitopu taniyan transferrin reseptörüne yönelmis bir scFab içerir ve burada beyin efektör varligi, nörolojik bozukluk ilaçlari, nörotrofik faktörler ve ß- sekretaz l, Aß, epidermal büyüme faktörü, Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü 2, Tau, fosforilize Tau, apolipoprotein E4, alfa sinüklein, alfa sinükleinin oligomerik fragmanlari, CD20, huntingtin, prion proteini, lösince zengin tekrarli kinaz 2, parkin, presenilin 2, gama sekretaz, ölüm reseptörü 6, amiloid prekürsör proteini, p75 nörotrofin reseptörü ve kaspaz 6'dan olusan gruptan seçilen bir beyin hedefine yönelmis antikorlardan olusan gruptan seçilir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, beyin efektör varligi proteinler, polipeptidler ve peptidlerden olusan gruptan seçilir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, beyin efektör varligi, bir beyin hedefine yönelmis bir tam uzunluklu antikor, tercihen bir tam uzunluklu IgG içerir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, kan beyin bariyeri mekigi, bir tam uzunluklu IgG antikoru olarak beyin efektör varligi, baglayici ve Seg. Id. No. 14, 15 veya l6'nin amino asit sekansinda bulunan transferrin reseptöründeki bir epitopu taniyan transferrin reseptörüne baglanan bir scFab içerir, burada scFab, baglayici tarafindan IgG antikorunun agir zincirlerinin birinin FC parçasinin C terminali ucuna kenetlenir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, efektör varligi, Aß'ye yönelmis bir tam uzunluklu antikordur. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, söz konusu Aß'ye yönelen antikor, sunlari içerir: (a) Seg. Id. No. 'in amino asit sekansini içeren H-CDRl, (b) Seg. Id. No. 6'nin amino asit sekansini içeren H-CDRZ, (c) Seg. Id. No. 7'nin amino asit sekansini içeren H-CDR3, (d) Seg. Id. No. 8'in amino asit sekansini içeren L-CDRl, (e) Seg. Id. No. 9'un amino asit sekansini içeren L-CDR2 ve (f) Seg. Id. No. lO'un amino asit sekansini içeren L-CDR3. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, Abeta'ya yönelen antikor, Seg. Id. No. ll'in amino asit sekansini içeren bir VH domeni ve Seg. Id. No. 12'in amino asit sekansini içeren bir V1 domeni içerir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, bir beyin hedefine yönelmis kan beyin bariyeri mekiginin antikorunun birinci agir zinciri, bir birinci dimerizasyon modülü içerir ve bir beyin hedefine yönelmis kan beyin bariyeri mekiginin antikorunun ikinci agir zinciri, iki agir zincirin heterodimerizasyonuna imkan veren bir ikinci dimerizasyon modülü içerir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, beyin hedefine yönelmis kan beyin bariyeri mekiginin antikorunun birinci agir zincirinin birinci dimerizasyon modülü topuzlar içerir ve beyin hedefine yönelmis kan beyin bariyeri mekiginin antikorunun ikinci agir zincirinin dimerizasyon modülü, delikler içine topuzlar stratejisine göre delikler içerir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, efektör varligi, fosforile Tau'ya yönelmis bir tam uzunluklu antikordur. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, efektör varligi, alfa sinükleine yönelmis bir tam uzunluklu antikordur. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, baglayici, tercihen, en az 25 amino asit uzunluklu bir amino asit sekansi, daha tercihen 30 ila 50 amino asit uzunluklu bir peptid olan bir peptid baglayicidir, özellikle bahsedilen baglayici, (G4S)6G2 veya (G4S)4'tür. Mevcut bulusun asagidaki üç uygulamasi, bir kan beyin bariyeri mekigi ile ilgili olup, burada beyin efektör varligi, beyin efektör varliginin bir tam 'uzunluklu antikor, özellikle bir tam uzunluklu IgG olmamasi kosuluyla bir protein, polipeptid veya peptiddir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, baglanan transferrin reseptörüne tek degerli baglama varligi bir CH2- CH3 lg varligi ve Seq. Id. No. 14, 15 veya 16'in amino asit sekansinda bulunan transferrin reseptöründeki bir epitopu taniyan transferrin reseptörüne baglanan bir scFab içerir, burada scFab, bir ikinci baglayici tarafindan CH2-CH3 Ig varliginin bir C terminali ucuna kenetlenir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, kan beyin bariyeri mekigi beyin efektör varligi içerir, baglayici, CH2- CH3 Ig domeni, ikinci baglayici ve Seq. Id. No. 14, 15 veya l6'nin amino asit sekansinda bulunan transferrin reseptöründeki bir epitopu taniyan transferrin reseptörüne baglanan bir scFab içerir, burada beyin efektör varligi, birinci baglayici tarafindan GHZ-CH3 Ig domeninin bir N terminali ucuna kenetlenir ve scFab, ikinci baglayici tarafindan CHZ-CH3 Ig domeninin bir C terminali ucuna kenetlenir. Kan beyin bariyeri mekiginin özel bir uygulamasinda, CH2-CH3 lg varligi, bir CH2-CH3 IgG varligidir. Mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi bir ilaç olarak kullanilabilir, özellikle bir nörolojik bozuklugun, örnegin Alzheimer's hastaliginin tedavisi için kullanilabilir. Mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi beyin efektör varligini kan beyin bariyeri boyunca tasimak için kullanilabilir. Özel bir uygulamada, FC parçasinin. C terminali ucundan kan beyin bariyeri reseptörüne baglanan tek degerli baglama varligi olarak scFab'a kenetlenmis mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekiginin IgG antikorunun agir zinciri asagidaki yapiya sahiptir: ° IgG agir zinciri, ° IgG agir zincirinin Fc kisminin C-terminal ucunun, scFab'in VL bölgesinin N-terminal ucuna baglayici kenetlemesi, zincir domeni, scFab'in VH bölgesinin N-terminal ucuna baglayici kenetlemesi, ° scFab antikorunun degisken agir zincir domeni (VH) ve IgG CH3 agir zincir domeni. Bir ikinci görünümde mevcut bulus, bir beyin efektör varligini kan beyin bariyeri boyunca tasimak için bir CH2-CH3 Ig varligi, bir baglayici ve Seq. Id. No. 14, 15 veya l6'in amino asit sekansinda bulunan transferrin reseptöründeki bir epitopu taniyan bir transferrin reseptörüne yönlendirilmis bir scFab ihtiva eden bir füzyon proteini sunmaktadir, burada scFab, baglayici tarafindan CH2-CH3 Ig varliginin bir C terminali ucuna kenetlenmistir ve burada beyin efektör varligi nörolojik bozukluk ilaçlar, nörotrofik faktörler ve bir beyin hedefine yönelmis scFv, Fv, scFab, Fab, VHH, F(ab')2'den olusan gruptan seçilen antikor fragmanlarindan veya bir beyin hedefine yönelmis peptidlerden seçilir ve burada beyin hedefi, ß- sekretaz l, Aß, epidermal büyüme faktörü, Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü 2, Tau, fosforilize Tau, apolipoprotein E4, alfa sinüklein, alfa sinükleinin oligomerik fragmanlari, CD20, huntingtin, prion proteini, lösince zengin tekrarli kinaz 2, parkin, presenilin 2, gama sekretaz, ölüm reseptörü 6, amiloid prekürsör` protein, p75 nörotrofin reseptörü ve kaspaz 6'dan olusan gruptan seçilir. Mevcut bulusun füzyon proteininin özel bir uygulamasinda, mevcut bulusun füzyon proteini ayrica, beyin efektör varligini CHZ-CH3 Ig varliginin N terminali ucuna kenetlemek için CHZ- CH3 lg varliginin N terminali ucunda bir baglayici içerir. Mevcut bulusun füzyon proteininin özel bir uygulamasinda, baglayici, bir peptid› baglayici, özellikle, en az 15 amino asit uzunluklu, daha özel olarak 20 ila 50 amino asit uzunluklu bir amino asit sekansi olan bir peptid olup, en özellikle bahsedilen baglayici, amino asit sekansi (G4S)'ye sahiptir. Mevcut bulusun füzyon proteininin özel bir uygulamasinda, CH2- CH3 Ig varligi, bir CH2-CH3 IgG varligidir. Bir üçüncü görünümde mevcut bulus mevcut bulusun bir füzyon proteini ve mevcut bulusun füzyon proteininin CH2-CH3 lg varliginin bir N terminali ucuna bir baglayici ile kenetlenen bir beyin efektör varligini ihtiva eden bir konjügat sunar. Mevcut bulusun konjügatinin özel bir uygulamasinda, beyin efektör varligi, bir nörotrofik faktördür ve burada nörotrofik faktörü CHZ-CH3 Ig varliginin N terminali ucuna kenetleyen baglayici, bir peptid baglayicidir. Ayrica, mevcut bulus, mevcut bulusun konjügatini ihtiva eden bir farmasötik formülasyon ve bir farmasötik tasiyiciyi, konjügatin bir ilaç olarak kullanimini, özellikle konjügatin bir nörodejeneratif bozuklugun, özellikle Alzheimer hastaliginin tedavisi için kullanimini sunmaktadir. SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1: Kan beyin bariyeri mekiklerinin (füzyon proteinleri) farkli biçimi örneklerde kullanilmistir. 1A: Aß (mAb3l)'e yönelen IgG. IB: Aß (mAb3l)'e yönelen bir IgG'nin Fc parçasina kenetlenen TfR'ye yönelmis tek Fab (sFab = tek scFab). lC: Aß (mAb3l)'e yönelen bir IgG'nin Fc parçasina kenetlenen TfR'ye yönelmis çift Fab (dFab = çift scFab). scFab yapisi, IgG antikorunun agir zincirinin C terminal ucuna kaynastirilir. Sekil 2: Füzyon proteinlerinin Aß yapilarina baglanma özellikleri. Baglanma afinitesi bir ELISA. kurulumu kullanilarak ölçülmüs olup, Fab yapilarinin Aß baglanma özelliklerini muhafaza ettiklerini göstermistir. mAb31-8D3 yapilarinin Abeta fibrillerine baglanmasi. 8D3 (bos kareler) immobilize edilmis Abeta fibrillerine baglanmazken, mAb3l-8D3- dFab (dolu kareler), mAb3l-8D3-sFab (bos üçgenler) ve mAb31 (dolu üçgenler) karsilastirilabilir afinitelerle baglanir. Sekil 3: Yapilarin transferrin reseptörüne (TfR) baglanma özellikleri. Baglanma afinitesi bir ELISA kurulumu kullanilarak ölçülmüs, bu ölçüm, sadece Fab yapilarinin transferrin reseptörünü (TfR) bagladigini ve çiftli Fab yapisinin bivalent. baglanw. modu nedeniyle biraz daha yüksek görünür afiniteye sahip oldugunu göstermektedir. MAb31-8D3 yapilarinin mTfR'ye baglanmasi. mAb31 (dolu üçgenler) immobilize edilmis mTfR'ye baglanmazken, mAb3l-8D3-dFab (dolu kareler) 8D3 ana antikoruninkine (bos kareler) karsilastirilabilir bir afinite ile baglanir. Tek degerli mAb3l-8D3-8Fab yapisi (bos üçgenler) bir ara baglanma afinitesi göstermektedir. Sekil 4: Anti-Aß monoklonal antikoru mAb3l (Sekil 4A), tekli Fab mAb3l (mAbBl'in C terminal ucuna kaynastirilmis tekli scFab) (Sekil 4B) ve çift Fab mAb3l'in plak dekorasyonu (mAb3l'in C terminal ucuna kaynastirilmis çift scFab'lar) (Sekil 4C). PSZAPP farelerine (n:3/yapisi) enjekte edilen yapi, tek intravenöz lO mg/kg dozu ve ardindan dozdan 8 saat sonra beyin perfüzyonu. Analiz, plak baglanmasi için immünohistokimya ve konfokal mikroskopiyi kapsamistir. Veriler, sadece tek Fab-mAb3l yapisinin BBB'yi geçip plakalara baglanabilecegini göstermektedir. Sekil, tüm hayvanlardan beynin bir temsili alanini göstermektedir. Sekil 5: Çiftli Fab-mAb3l yapisinin kantifikasyonunu gösterir. Plak ve kilcal boyama, üç farkli bölgede tedavi edilen üç hayvanin hepsinde ölçülmüstür (her yapi için toplam 9 alan). Veriler, çift Fab-mAb3l yapisi için mAb3l'e kiyasla sadece kilcallarda bir artis oldugunu göstermektedir. Plakta (beynin içinde) çift Fab-mAb3l düzeylerinde artis saptanmamistir. mab3l (HEK kontrolü) karsisinda çift Fab-mab3'ün, 10 mg/kg, dozdan 8 saat sonra kantifikasyonu. Sekil 6: Tekli Fab-mAb3l yapisinin kantifikasyonunu gösterir. Plak ve kilcal boyama, üç farkli bölgede tedavi edilen üç hayvanin hepsinde ölçülmüstür (her yapi için toplam 9 alan). Veriler, tek Fab-mAbBl yapisi için plaklarda mAb31'e kiyasla büyük bir artis oldugunu göstermektedir. Floresans sinyalinin kantifikasyonu, tek Fab-mAb3l'in mAb3l yapisina kiyasla 50 kattan fazla artis sagladigini göstermektedir. Kilcal damarlarda, BBB üzerinden geçisi gösteren mAb3l ile karsilastirildiginda tekli Fab-mAb3l yapisi için geçici bir boyama vardir. Doz sonrasi 8 saat ve 25 mg/kg, dozdan 24 saat sonra mab3l (HEK kontrolü) karsisinda tekli Fab-mab3l lO mg/kg'nin kantifikasyonu. Sekil 7: Iki farkli dozda anti-AB monoklonal antikoru mAb3l'in ve çok bir düsük dozda tekli Fab mAb3l'in (mAb3l'in C terminal ucuna tek scFab kaynastirilmis) plak dekorasyonu. PSZAPP farelerine (n=3/yapi) enjekte edilmis yapi, tek intravenöz doz ve ardindan dozdan sonra çesitli zaman noktalarinda beyin perfüzyonu. Analiz, plak baglanmasi için immünohistokimya ve konfokal mikroskopiyi kapsamistir. Veriler, sadece tek Fab- mAb3l yapisinin BBB'yi geçip plakalara baglanabilecegini göstermektedir. Beyin maruziyeti, tekli Fab-mAb3l yapisi için çok hizlidir ve plak dekorasyonu en az bir hafta boyunca tek bir uygulama tarafindan sürdürülebilir. Sekil 8: Tekli Fab-mab3l veya çiftli Fab-mAb3l ile islenen TfR'nin hücre yüzeyi ekspresyonunun kantifikasyonu. Çiftli Fab-mAb3l yapisi ile transferrin reseptörü (TfR) hücre yüzeyinin asagi regülasyonu. TfR'yi ekprese eden beyin endotel hücreleri, ya tekli Fab-mAb3l yapisi (Sekil 8A) ya da çift Fab-mAb3l yapisi (Sekil 8B) ile 24 saat süreyle enkübe edilmistir. Sadece çift Fab-mAb3l yapisi, TfR, eksprese eden hücre yüzeyi seviyesini düsürmüstür. Sekil 9: Tekli Fab-mab3l veya çiftli Fab-mAb3l ile muamele edilmis TfR'nin in Vivo hücre trafigi. Erken zaman noktalari, in Vivo kapiler ve plak boyamalarini incelemektedir. Hem sFab- MAb3l (Sekil 9A) hem de dFab-MAb3l (Sekil 9B), beyin damarlarini, enjeksiyondan 15 dakika sonra dagilimlarinda bir fark olmadan dekore etmektedir. Enjeksiyondan 8 saat sonra, sFab-MAb3l, parankime ulasir ve amiloid plaklarini dekore ederken (Sekil 9C oklar), dFab-MAb3l 15 dakika zaman noktasina benzer sekilde beyin damarlarinda kalir (Sekil 9D). Parankimde, dFab-MAb3l için herhangi bir amiloid plagi tespit edilememistir. Sekil 10: Tekli Fab-mab3l veya çiftli Fab-mAb3l ile Hmamele edilmis TfR'nin in vivo hücre trafigi. Arastirmada kullanilan tüm. yapilarin bütünlügünü kontrol etmek için, 18 aylik. fare APP transgenik beyin kriyokesitlerinin boyanmasi MAb31 (Sekil lOA), sFab-MAb3l (Sekil lOB) veya dFab-MAB3l (Sekil lOC) kullanilarak yapilmistir. Sekil lOD, kontrol sonuçlarini göstermektedir. Sonuçlar, 3 yapinin da transgenik farelerin beyninde amiloid plaklari teSpit ettigini göstermistir. Sekil 11: Tekli Fab-mab3l ile muamele edilmis TfR'nin in Vivo hücre trafigi. In Vivo tedavi edilmis örnekler üstünde yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi sFab-MAb31'in beyin kilcallarin luminal yanini dekore etmedigini ancak endotel hücrelerinin luminal membranini geçen vezikül benzeri yapilar içerisinde ve endotel hücresi sitozolü içerisinde bulundugunu göstermektedir. Sekil ll'deki oklar, endotel hücre çekirdeklerinin abluminal tarafinda sFab-MAb3l yapilarini içeren vezikülleri gösterir. Bu veriler, her iki sFab-MAb3l'in beyin endotel hücresinin girebildigini ve vaskülatürü geçebildigini ve beyinin (Sekil 9A ve C ile karsilastiriniz) parankim boslugu amiloid plaklarina ulasabildigini göstermektedir. Sekil 12: Çiftli Fab-mab3l ile muamele edilmis TfR'nin in vivo hücre trafigi. In vivo tedavi edilmis örnekler üstündeki yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi dFab-MAb3l'in beyin kilcallarinin luminal yanini dekore etmedigini ancak endotel hücrelerinin luminal membranini geçen vezikül benzeri yapilar içerisinde ve endotel hücresi sitozolü içerisinde bulundugunu göstermektedir. Sekil lZ'deki oklar, endotel hücre çekirdeklerinin abluminal tarafinda dFab-MAb3l yapilarini içeren vezikülleri gösterir. Bu veriler, dFab-MAb3l'in, beyin endotel hücreleri girebilecegini ancak, vaskülatürü geçemeyerek takildiklarini ve bu yüzden beyinin parankim boslugundaki amiloid plaklarina ulasamadiklarini göstermektedir (Sekil 9B ve D ile karsilastiriniz). Sekil l3: i.v. uygulamadan sonra beyin maruziyeti ve plak dekorasyonu. Sekil 13A: mAb3l, dFab ve sFab yapilari, PSZAPP transgenik hayvanlarina lO mg/kg'de intravenöz olarak enjekte edilmis, hayvanlara perfüzyon yapilmis ve enjeksiyondan 8 saat sonra sakrifiye edilmistir. dFab için plak dekorasyonunda mAb31 ile karsilastirildiginda anlamli bir artis saptanmamistir. Saptama antikorundan 555 nm'de floresans yogunluguna dayali olarak, SFab yapisi için ana mAb3l'den 55 kat daha yüksek bir plak dekorasyonu teSpit edilmistir. Enjeksiyondan 8 saat sonra mAb3l (Sekil lBB), dFab (Sekil l3C) ve sFab'in (Sekil l3D) korteksinde temsili immünohistokimya boyamasi. dFab sadece mikrodamar boyamasini gösterirken, sFab yogun sekilde amiloid-ß plaklarini dekore eder. Sekil l3E: Düsük bir dozda sFab yapisinin (2,66 mg/kg) hem 2 mg/kg hem de mg/kg mAb31 ile karsilastirildiginda hizla ve anlamli ölçüde beyindeki plaklara ulastiginin gösterilmesi. SFab yapisinin hedef baglantisi, enjeksiyondan en az bir hafta sonra sürdürülebilir olur. Immünohistokimya boyamasi, mAb3l için 2 mg/kg'da (Sekil l3F) ve sFab için enjeksiyondan 7 gün sonra 2,66 mg/kg'da (Sekil l3G) plak dekorasyonunu gösterir. Sekil 14: 14 haftalik. i.V. enjeksiyonlar ile tedavi edilen plak. tasiyan PS2APP farelerindeki bir kronik çalismadaki in ViVO etkililik. Çalismanin sonunda rezidüel plaklara bagli uygulanan› yapilarini sirasiyla düsük dozda mAb31, orta dozda mAb3l, düsük dozda sFab ve orta dozda sFab (Sekil l4A-D) için hedef plak baglanmasi gösterilmistir. Plaklarin immünohistokimyasal boyamasi sonrasi kantitatif morfometrik analizi, korteks ve hipokampüs için gösterilmistir (Sekil 14 E). 4,5 aylikken sakrifiye edilen tedavi edilmemis hayvanlarin plak yükü, çalismanin baslangicinda referans hatti amiloidoz düzeyi olarak gösterilmektedir. Plak sayisinda önemli bir azalma, araçla tedavi edilen hayvanlarda görülen ilerleyici plak olusumu ile karsilastirildiginda orta doz sFab ile tedaviden sonra belirgindir; düsük doz sFab'da bile plak olusumunda azalma egilimi görülmektedir. Dolayisiyla, sFab yapisi hem korteks hem de hipokampüsteki plak sayilarini önemli ölçüde azaltir. Plak boyutlarinin analizi, küçük plak boyutlari için en belirgin plak numaralarinin azaldigini ortaya koymustur. *pS0,05, **pS0,0l, ***pS0,00l. Sekil 15: PC C-terminaline kaynasik. TfR. scFab fragmanlarina sahip olan antikor multimerik ADCC'yi indüklemez. NK92 aracili BA/F3 fare eritrolösemi hücrelerinin öldürülmesi, LDH saliminin kantifiye edilmesiyle ölçülmüstür. Sadece kismina sahip multimerik yapilar, anlamli ölçüde ADCC indüklerken, ters yönelimli beyin mekigi yapilari sessizdir. Sekil 16: transferrin reseptörüne yönelmis scFab 8D3, fare transferrin reseptörünün hücre disi domenindeki üç ayri peptidi baglar. Üç amino asit ile örtüsen antikor 8D3 ila 15 mer peptitlerin baglanmasi, immobilize mTfR peptidlerini tasiyan bir CelluSpot lambasinda enkübe edilmis antikorun kemilüminesan tespiti ile açiga çikarilmistir. Kutu: 8D3 16 ve 17). Bulus Tanimlarinin Uygulamalarinin Ayrintili Açiklamasi plazma zarlari içindeki siki baglantilarla Olusan, moleküllerin, üre gibi çok küçük moleküllerin bile (60 Dalton) beyine tasinmasini kisitlayan siki bir bariyer olusturan periferik dolasim ve beyin ve omurilik arasindaki fizyolojik bariyer anlamina gelir. Beyin içindeki BBB, omurilik içindeki kan omurilik bariyeri ve retina içindeki kan-retinal bariyeri, MSS içindeki bitisik kilcal bariyerlerdir ve burada toplu olarak kan-beyin bariyeri veya BBB olarak adlandirilir. BBB ayrica, kan-GSF bariyerini (koroid pleksus) kapsar, burada bariyer kapiler endotel hücrelerinden ziyade ependimal hücrelerden olusur. Delikler içine topuzlar dimerizasyon modülleri ve antikor tasariminda kullanimlari, Carter P.; Ridgway J.B.B.; Presta L.G.: Immunotechnology, Cilt 2, Sayi 1, Subat 1996, sf. 73- 73(l) yayininda tarif edilmektedir. eden sinir dokusu kompleksi anlamina gelir ve beyin ve omuriligi kapsar. Bir "kan-beyin bariyeri reseptörü" ("R/BBB" olarak kisaltilir), molekülleri BBB boyunca tasiyabilen veya eksojen olarak verilen nmlekülleri tasimak için kullanilabilen beyin endotel hücreleri üzerinde eksprese edilen bir ekstraselüler membran ile baglantili reseptör proteinidir. Buradaki R/BBB örnekleri sunlari içerir: transferrin reseptörü (TfR), insülin reseptörü, insülin benzeri büyüme faktörü reseptörü (IGF-R), düsük yogunluklu lipoprotein reseptörleri, örnegin, sinirlayici olmaksizin düsük yogunluklu lipoprotein reseptörü, ile ilgili protein 1 ile ilgili (LRPl) ve düsük yogunluklu lipoprotein reseptörü, protein 8 ile ilgili (LRP8), ve heparin-baglayici epidermal büyüme faktörü benzeri büyüme faktörü (HB-EGP). Burada R/BBB'nin bir örnegi, transferrin reseptörüdür (TfR). molekül anlamina gelir. Efektör varlik tipik olarak beyne verilmesi istenen karakteristik bir terapötik aktiviteye sahiptir. Efektör varligi, nörolojik bozukluk ilaçlari ve sitotoksik maddeleri örnegin peptidler, proteinler ve antikorlar, özellikle bir beyin hedefine yönelmis monoklonal antikorlar veya bunlarin fragmanlarini içerir. monovalent baglanma modunda bir R/BBB'ye baglanabilen bir molekül anlamina gelir. Mevcut bulusun kan beyin mekigi ve/Veya konjügati, bir tek degerlikli baglanma varliginin bir biriminin bulunmasi ile, baska bir deyisle mevcut bulusun kan beyin mekigi ve/veya konjügatinin tek degerlikli baglanma varliginin bir birimini içermesiyle karakterize edilir. Mevcut beyanin tek degerlikli baglanma varligi, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla proteinler, polipeptidler, peptidler ve antikor fragmanlarini, örnegin Fab, Fab', FV fragmanlari, tek Zincirli antikor moleküllerini, örnegin tek Zincirli Fab, scFv'yi kapsar. Tek degerlikli baglanma varligi, örnegin faj gösterimi veya immünizasyon gibi son teknolojiler kullanilarak gelistirilmis bir iskele proteini olabilir. Tek degerli baglama varligi bir peptid. de olabilir. Mevcut bulusun tek degerli baglama varligi bir tek Zincirli Fab (scFab)'i içerir. Belirli uygulamalarda, tek degerli baglama varligi bir CH2-CH3 tek zincirli Fab (scFab)'i içerir. scFab, CH2-CH3 lg domeninin C terminal ucuna bir baglayici ile kenetlenir. Belirli uygulamalarda, scFab transferrin reseptörüne yönelmistir. anlamina gelir, burada tek degerli baglama varligi ve R/BBB arasindaki etkilesim bir tek epitop yoluyla meydana gelir. Tek degerlikli baglanma modu, tekli bir epitop etkilesim noktasi nedeniyle R/BBB'nin herhangi bir dimerizasyonu/multimerizasyonunu önler. Tek degerlikli baglanma modu, R/BBB'nin hücre içi siralamasinin degistirilmesini önler. herhangi bir polipeptit belirleyicisini içerir. Belirli uygulamalarda, epitop belirleyicisi, örnegin amino asitler, seker yan zincirleri, fosforil veya sülfonil gibi kimyasal olarak aktif yüzey molekül gruplanmalari ve belirli uygulamalarda, üç boyutlu yapisal özelliklere ve spesifik yük özelliklerine sahip olabilir. Bir epitop, bir antijenin, bir antikor tarafindan baglanan bir bölgesidir. rol oynayan iki disülfid baglantili alt biriminden (her biri yaklasik 90.000 görünür molekül agirlikli) olusan bir transmembran glikoproteinidir (yaklasik 180-000'lik bir molekül agirligi). Bir uygulamada, burada TfR, örnegin, gibi insan TfR'i ihtiva eden amino asit sekansidir. Bir "nörolojik bozukluk" burada kullanildigi sekilde, MSS'yi etkileyen ve/Veya MSS'de bir etiyolojiye sahip olan bir hastalik veya bozukluk anlamina gelir. Örnek MSS hastaliklari veya bozukluklari arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, nöropati, amiloidoz, kanser, bir oküler hastalik veya bozukluk, viral veya mikrobiyal enfeksiyon, enflamasyon, iskemi, nörodejeneratif hastalik, nöbet, davranis bozukluklari ve bir lizozomal depolama hastaligi bulunur. Mevcut basvurunun amaci dogrultusunda, MSS'in, normalde vücudun geri kalanindan kan-retina bariyeri ile ayrisan gözü de içerdigi anlasilacaktir. Spesifik nörolojik bozukluk örnekleri arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, nörodejeneratif hastaliklar (örnegin bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, Lewy cisimcigi hastaligi, postpoliomiyelit sendromu, Shy-Draeger sendromu, olivopontoserebellar atrofi, Parkinson hastaligi, çoklu sistem atrofisi, striatonigral dejenerasyon, tauopatiler (örnegin bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, Alzheimer hastaligi ve supranükleer palsi), prion hastaliklari (örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, sigir spongiform ensefalopatisi, skrapi, Creutzfeldt-Jakob sendromu, kuru, Gerstmann-Stravssler-Scheinker hastaligi, kronik harabiyet hastaligi, ve ölümcül familyal uykusuzluk), bulbar palsi, motor nöron hastaligi ve sinir sistemi heterodejeneratif bozukluklari (örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, Canavan hastaligi, Huntington hastaligi, nöronal seroitlipofuskinoz, Alexander hastaligi, Tourette's sendromu, Menkes sendromu, Cockayne sendromu, Halervorden-Spatz sendromu, Lafora hastaligi, Rett sendromu, hepatolentiküler dejenerasyon, Lesch-Nyhan sendromu ve Unverrikht-Lundborg sendromu), demans (örnegin bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, Pick hastaligi ve spinoserebellar ataksi), kanser (örnegin MSS ve/veya beyin kanseri, örnegin vücudun herhangi bir yerindeki kanserden kaynaklanan beyin metastazi dahil) bulunur. Bir "nörolojik bozukluk ilaci", bir veya daha fazla nörolojik bozuklugu tedavi eden bir ilaç veya terapötik maddedir. Mevcut bulusun nörolojik bozukluk ilaçlari arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, küçük moleküllü bilesikler, antikorlar, peptidler, proteinler, bir veya daha fazla MSS hedefinin dogal ligantlari, bir veya daha fazla MSS hedefinin dogal ligantlarinin modifiye edilmis versiyonlari, aptamerler, inhibe edici nükleik asitler (baska bir deyisle, küçük inhibe edici RNA'lar (siRNA) ve kisa tokali RNA'lar (shRNA)), ribozimler ve yukaridakilerin küçük molekülleri veya aktif fragmanlari bulunur. Mevcut bulusun Örnek nörolojik bozukluk ilaçlari burada tarif edilmektedir ve bunlar arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla: antikorlar, aptamerler, proteinler, peptidler, inhibe edici nükleik asitler ve yukaridakilerin, ya kendileri ya da spesifik olarak bir MSS antijeni veya hedef molekül üzerine taniyan ve/Veya etkiyen (baska bir deyisle, inhibe eden, aktive eden veya saptayan) küçük molekülleri ve aktif fragmanlari, örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, amiloid prekürsör proteini veya kismlari, amiloid beta, beta-sekretaz, gama-sekretaz, tau, alfa-sinüklein, parkin, huntingtin, DR6, presenilin, ApoE, gliyom veya diger MSS kanser markörleri, ve nörotrofinler bulunur. Sinirlayici olmayan nörolojik bozukluk ilaçlari ve tedavilerinde kullanilabilecekleri karsilik gelen bozukluklara örnekler: Beyin kaynakli nörotrofik faktör (BDNF), kronik beyin hasari (nörogenez), fibroblast büyüme faktörü 2 (FGF-Z), Anti-Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü Beyin Kanseri, (EGFR)- antikoru, Glial Hücre Hattindan Türetilen Nöral Faktör Parkinson hastaligi, (GDNF), Beyin Kaynakli Nörotrofik Faktör (BDNF) Amyotrofik lateral skleroz, depresyon, beyinin lizozomal enzim lizozomal depolama bozuklugu, Siliyer nörotrofik faktör (CNTF) Amyotrofik lateral skleroz, Neuregulin-l sizofreni, anti-HERZ antikoru (örnegin trastuzumab) HERZ-pozitif kanserinin beyin metastazi. An "görüntüleme maddesi", varliginin ve/veya konumunun dogrudan veya dolayli olarak tespit edilmesine imkan veren bir veya daha fazla özellige sahip olan bilesiktir. Bu tür görüntüleme maddelerinin örnekleri, proteinleri ve tespit edilmesine imkan veren etiketli bir ögeyi içeren küçük moleküllü bilesikleri içerir. Bir "MSS antijeni" veya "beyin hedefi", MSS'de, örnegin, beyinde eksprese edilen, bir antikor veya küçük molekül ile hedeflenebilen bir antijen ve/veya moleküldür. Bu tür antijen ve/veya moleküllerin örnekleri arasinda, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla: beta-sekretaz l (BACEl), amiloid beta (Abeta), Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü (EGFR), insan Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü 2 (HERZ), Tau, apolipoprotein E4 (ApoE4), alfa-sinüklein, CD20, huntingtin, priyon protein (PrP), lösince zengin tekrarli kinaz 2 (LRRKZ), parkin, presenilin l, presenilin 2, gama sekretaz, ölüm reseptörü 6 (DR6), amiloid prekürsör proteini (AFP), p75 nörotrofin reseptörü (p75NTR), ve kaspaz 6 bulunur. Bir uygulamada, antijen, BACEI'dir. Buradaki "dogal sekans" bir protein, dogal olarak ortaya çikan proteinin varyantlari dahil olmak üzere, dogada bulunan bir proteinin amino asit sekansini içeren bir proteini belirtir. Burada kullanilan terim, dogal bir kaynaktan izole edilmis veya rekombinant olarak üretilmis olan proteini kapsar. spesifik olarak monoklonal antikorlari, poliklonal antikorlari, en az iki adet eksiksiz/intakt antikordan olusan multispesifik antikorlari (ör. bispesifik antikorlar) ve istenen biyolojik aktiviteyi göstermeleri kaydiyla antikor fragmanlarini kapsar. Buradaki "antikor fragmanlari", antijene baglanma özelligini koruyan bir intakt antikorun bir kismini içerir. Antikor fragmanlarinin örnekleri arasinda Fab, Fab', F(ab')2, ve FV fragmanlari; diyakorlar; dogrusal antikorlar; tek-Zincirli antikor molekülleri, örnegin tek Zincirli Fab (scFab), scFv ve antikor fragmanlarindan olusan multispesifik antikorlar bulunur. "Tek Zincirli Fab" formati, örnegin Hust M. et al. BMC Biotechnol. 2007 Mar 8;7:l4 referansli yayinda tarif edilmektedir. monoklonal antikorun üretimi sirasinda ortaya çikabilecek olan ve genellikle küçük miktarlarda olan olasi varyantlar haricinde büyük ölçüde homojen bir antikor popülasyonundan, yani popülasyonu içeren her bir antikorun özdes oldugu ve/veya ayni epitopa baglandigi bir antikor popülasyonundan elde edilen bir antikoru belirtir. Farkli determinantlara/belirleyicilere (epitoplar) yöneltilen farkli antikorlar içeren poliklonal antikor preparatlarinin aksine, her bir monoklonal antikor tipik olarak antijen üzerindeki tek bir belirleyiciye yöneltilir. Spesifik olmalarinin yani sira, monoklonal antikorlar, diger immünoglobülinler tarafindan kirletilmemis olmalari bakimindan da avantajlidir. antikor popülasyonundan elde edilmis özellikte oldugunu belirtir ve antikorun, herhangi bir belirli metotla üretimini gerektirecek sekilde sinirlandirilmamalidir. Örnegin mevcut bulusa uygun olarak kullanilacak monoklonal antikorlar, ilk edilen hibridom yöntemiyle yapilabilir ya da rekombinant DNA yöntemleriyle yapilabilir (bakiniz, örnegin U.S. Patent No 4,816,567). "Monoklonal antikorlar" ayrica, Clackson ve edilen teknikler kullanilarak faj antikor kütüphanelerinden izole edilebilir. Buradaki monoklonal antikorlarin spesifik örnekleri arasinda kimerik antikorlar, hümanize antikorlar ve insan antikorlari, Örnegin antijen baglayici fragmanlari bulunur. Burada bahsi geçen monoklonal antikorlar arasinda özellikle, agir ve/Veya hafif zincirin bir kisminin özel bir antikor sinifi veya alt sinifina ait veya özel bir türden köken alan antikorlardaki ilgili sekanslarla özdes veya bu sekanslarin homologu oldugu "kimerik" antikorlari (immünoglobülinleri) içerirken, zincir(ler)in geri kalani, istenen biyolojik etkinligi sergilemek kosuluyla, bir baska antikor sinifina veya alt sinifina ait veya bir baska türden köken alan antikorlardaki ilgili sekanslarin yani sira bu tür antikorlarin fragmanlariyla özdes veya bunlarin homologudur (U.S. Patent No. 4,816,567; Morrison ve digerleri, Proc. Natl. burada bir insan disi primattan (örnegin Eski Dünya Maymunu, örnegin babun, al yanakli maymun veya sinomolgus maymunu) türetilen degisken domen antijen baglanma sekanslari ve insan sabit bölge sekanslari (ABD Pat. No 5,693,780) içeren Insan disi (örn., murin) antikorlarin "insanlastirilmis" biçimleri, minimuni düzeyde insan disi immünoglobülinden türetilen dizi içeren kimerik antikorlardir. Insanlastirilmis antikorlar çogu zaman insan immünoglobülinleridir (alici antikor), burada alicinin bir asiri degisken bölgesine ait kalintilar, insan olmayan bir türün (verici antikor), örnegin fare, siçan, tavsan ya da istenen antikor spesifikligine, afinitesine ve kapasitesine sahip olan insan olmayan primatin bir asiri degisken bölgesinden elde edilen kalintilarla degistirilir. Bazi durumlarda, insan immünoglobülinin çerçeve bölge (FR) kalintilari, iliskin insan olmayan kalintilarla degistirilir. Ayrica, insanlastirilmis antikorlar, alici antikorda veya verici antikorda bulunmayan kalintilar içerebilir. Bu nwdifikasyonlar antikor performansini daha da iyilestirmek için yapilir. Genellikle, insanlastirilmis antikor, en az bir ve tipik olarak iki degisken domenin büyük ölçüde tamamini içerecek olup, bunlarin içinden asiri degisken bölgelerin tamami veya büyük ölçüde tamami, insan olmayan bir immünoglobülininkilere denk düser ve yukarida belirtildigi gibi FR ornatimlari disinda FR'lerin tamami veya büyük ölçüde tamami bir insan immünoglobülin sekansina aittir. Insanlastirilmis antikor, istege bagli olarak ayrica, immünoglobülin sabit bölgesinin, tipik olarak bir insan immünoglobülinin en az bir kismini içerir. Daha fazla ayrinti Buradaki bir "insan antikoru", bir insan B hücresinden elde edilebilen bir antikorun amino asit sekansi yapisina karsilik gelen ve insan antikorlarinin antijen baglayici fragmanlarini içeren bir amino asit sekans yapisi içeren bir antikordur. Bu tür antikorlar çesitli tekniklerle tanimlanabilir veya hazirlanabilir, bunlar arasinda, bunlarla sinirli olmamak üzere sunlar bulunur: immünizasyondan sonra, endojen immünoglobülin üretimi yoklugunda insan antikorlari üretebilen transgenik hayvanlarla (örnegin fareler) üretim (bakiniz, örnegin, Jakobovits et al, Proc. Natl Acad. Sci. USA, 90:2551 Bruggermann et al, Year in Immuno., 7:33 (1993); ve US Patent antikorlarini veya insan antikor fragmanlarini eksprese eden faj gösterim kütüphanelerinden seçim (bakiniz, örnegin, aktif B hücreleri yoluyla üretim (bakiniz, ABD Patentleri hibridomlardan izolasyon. Buradaki "multispesifik bir antikor", en az iki farkli epitop için baglayici özelliklere sahip bir antikordur. Örnek multispesifik. antikorlar* heni bir R/BBB'yi hem. de bir beyin antijenini baglayabilir. Multispesifik antikorlar, tam uzunluktaki antikorlar veya antikor fragmanlari (örnegin F(ab')2 bispesifik antikorlari) olarak hazirlanabilmektedir. Iki, üç veya daha fazla (örnegin dört) fonksiyonel antijen baglanma yerine sahip tasarlanmis antikorlar da tasarlanmistir al.). Multispesifik antikorlar, tam uzunluklu antikorlar veya antikor fragmanlari seklinde hazirlanabilir. Buradaki antikorlar, degistirilmis antijen baglama veya biyolojik aktiviteye sahip "amino asit sekansi varyantlarini" içerir. Bu tür amino asit degisikliklerinin örnekleri arasinda, antijen için arttirilmis afiniteye sahip antikorlar (örnegin, "afinitesi olgunlastirilmis" antikorlar) ve Pc bölgesi degismis antikorlar, varsa, örnegin degistirilmis (arttirilmis veya azalmis) antikora bagli hücresel sitotoksisite (ADCC) ve/veya kompleman bagimli sitotoksisiteye (CDC) sahip olan (bkz, örnegin, WO 00/42072, Presta, L. ve WO 99/51642, Iduosogie et al): ve/Veya artmis veya azalmis serum yari ömrüne sahip olan (bkz, örnegin, WOOO/42072, Presta, L.) FC bölgesi degismis antikorlar. Bir "afinitesi modifiye edilmis varyant", afiniteyi (artis veya azalma) degistiren, bir ana antikorun (örnegin bir ana kimerik, hümanize veya insan antikorunun) bir veya daha fazla ornatilmis hiperdegisken bölgesi veya çerçeve kalintilarina sahiptir. Bir uygulamada, ilave gelistirme için seçilen ortaya çikan varyant(lar) mevcut bulusa göre R/BBB için düsük afiniteye sahip olacaktir. Bu tür ikame varyantlarini üretmenin. uygun bir yolu faj göstergesini kullanir. Özetle, her bölgede tüm olasi amino ornatimlarini üretmek için çok sayida asiri degisken bölge alanlari (örnegin 6-7 bölge) mutasyona ugratilir. Bu sekilde üretilen antikor varyantlari, filamentöz faj parçaciklarindan, her bir parçacigin içine paketlenen MI 3'ün gen III ürününe füzyonlar olarak tek degerlikli bir biçimde sunulur. Faj görüntüleme varyantlari, daha sonra, kendi biyolojik aktivitesi (örn. baglanma afinitesi) için taranir/incelenir. Modifikasyon için aday asiri degisken bölge alanlarinin tanimlanmasi için, antijen baglanmasina belirgin ölçüde katkida bulunan asiri degisken bölge kalintilarinin tanimlanmasi amaciyla alanin tarama mutagenezi gerçeklestirilebilir. Alternatif veya ek olarak, antikor' ve hedefi arasindaki temas noktalarinin tanimlanmasi için, antijen-antikor kompleksinin bir kristal yapisini incelemek yararli olabilir. Bu gibi temas kalintilari ve komsu kalintilar, burada ayrintilari verilen tekniklere göre ornatim için adaydirlar. Bu tür degiskenler üretildikten sonra, degiskenlerin paneli, taramaya tabi tutulur ve degismis afiniteye sahip antikorlar ilave gelistirme için seçilebilir. Buradaki antikor, eger varsa FC bölgesine bagli herhangi bir karbonhidratin degisecegi sekilde bir "glikosilasyon varyanti" olabilir. Örnegin, antikorun bir FC bölgesine tutturulmus, fukozdan yoksun olgun bir karbonhidrat yapisina sahip antikorlar ABD Pat. Basvuru No. US 2003/ belgesinde anlatilmistir. Ayrica bakiniz, U.S. 2004/. Antikorun bir PC bölgesine bagli karbonhidrati bisekte eden N-asetilglukosamin (GlcNAc) içeren Mairet et al. ve US Patent No. 6,602,684, Umana et al. Antikorun bir Fc bölgesine bagli oligosakaritte en az bir galaktoz artigina sahip antikorlar, WO 1997/30087, Patel et al yayininda bildirilmektedir. FC bölgesine bagli olarak degistirilmis karbonhidratli antikorlarla ilgili olarak, bakiniz, ayrica, WO ve WO . Ayrica, modifiye edilmis glikosilasyonlu antikorlari tarif eden US 2005/ yayinini inceleyiniz. "Asiri degisken bölge" terimi, burada kullanildiginda, bir antikorun antijen baglanmasindan sorumlu olan amino asit kalintilarini belirtir. Asiri degisken bölge, bir "tamamlayicilik belirleme bölgesi" veya "CDR"'den elde edilen amino asit kalintilarini (örnegin, hafif zincir degisken domenindeki 24-34 ve kalintilarini ve agir zincir degisken domenindeki kalintilarini; Kabat ve dig., Sequences of Polypeptides of Immunological Interest, 5'inci Baski, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) ve/veya bir "asiri degisken ilmekten" olan kalintilari (örnegin, hafif zincir degisken domenindeki kalintilarini ve agir zincir degisken domenindeki ve kalintilarini; Chothia ve Lesk J. Mol. Biol- l96:901-9l7 (1987)) içerir. "Çerçeve" veya "FR" kalintilari, burada tarif edilen sekilde asiri degisken bölge kalintilarinin disinda kalan degisken domen kalintilaridir. Bir "tam uzunluklu antikor", bir antijen baglama degisken bölgesini, ayni zamanda bir hafif zincir sabit alanini (CL) ve CHI, CH2 ve CH3 agir zincir sabit alanlarini içeren bir antikordur. Sabit domenler, dogal sekans sabit domenleri (örnegin, insan dogal sekansi sabit domenleri) veya bunlarin amino asit sekansi varyanti olabilir. radyoaktif isaret gibi heterolog bir moleküle konjuge edilmemis bir antikordur (burada tanimlandigi gibi). Antikor "efektör fonksiyonlari" ifadesi, bir antikorun Fc bölgesine (bir natif sekans Fc bölgesi ya da amino asit sekansi varyanti Fc bölgesi) atfedilebilen biyolojik aktiviteleri belirtir. Antikor efektör islevleri örnekleri arasinda, Clq baglanmasi, kompleman bagimli sitotoksisite (CDC), Fc reseptör baglanmasi, antikor-bagimli hücre aracili sitotoksisite (ADCC), ve benzerleri bulunur. Bir uygulamada, söz konusu antikor, burada aslen efektör islevden yoksundur. hedef hücrelerinin, efektör hücrelerin varliginda bir antikorla lizisi anlamina gelir. "Tamamlayici bagimli sitotoksisite (CDC)" terimi, kompleman faktörü Clq'nin IgG antikoru alt siniflarinin çogunun Fc parçasina baglanmasiyla baslatilan bir süreç anlamina gelir. Clq'in bir antikora baglanmasina, ilgili baglanma alanindaki tanimlanmis protein- protein etkilesimleri neden olur. Böyle Fc parçasi baglanma alanlari teknigin mevcut durumunca bilinmektedir. Bu tür Fc edilir (Rabat'in AB endeksine göre numaralandirma). lgGl, IgGZ ve IgG3 alt sinifi antikorlar genellikle tamamlayici aktivasyonu, örnegin Clq ve C3 baglanmasi gösterirken IgG4, tamamlayici sistemi aktive etmez ve Clq ve/veya C3'ü baglamaz. Tam uzunluklu antikorlar agir zincirlerinin sabit domeninin amino asit sekansina bagli olarak farkli "siniflara" ayrilabilir. Bes ana tam uzunluklu antikor sinifi bulunmaktadir: IgA, IgD, IgE, IgG ve IgM ve bunlarin birkaçi ayrica alt siniflara (izotipler) ayrilabilir; örn. IgGl, IgG2, gelen agir zincir sabit domenleri bu sirasiyla. alfa, delta, epsilon, gamma ve mu olarak adlandirilir. Farkli immünoglobülin siniflarinin alt birim yapilari ve üç boyutlu konfigürasyonlari iyi bilinmektedir. "Rekombinant antikor" terimi, burada kullanildigi sekilde, antikoru kodlayan nükleik asidi ihtiva eden bir rekombinant konakçi hücre tarafindan eksprese edilen bir antikor (örnegin bir kimerik, hümanize veya insan antikoru veya antijen baglayici fragmani) anlamina gelir. Rekombinant antikorlari üretmek için "konak hücrelerin" örnekleri sunlari içerir: (1) memeli hücreleri, örnegin, Çin hamster yumurtaligi (CHO), COS, miyelom hücreleri (YO cg NSO hücreleri dahil), bebek hamster böbregi (BHK), Hela ve Vero hücreleri; (2) böcek hücreleri, örnegin, sf9, sf21 ve Tn5; (3) bitki hücreleri, örnegin Nikotiana cinsine ait bitkiler (örnegin Nicotiana tabacum); (4) maya hücreleri, örnegin, Sakkaromises cinsine ait olanlar (örnegin Sakkaromyces cerevisiae) veya Aspergillus cinsi (örnegin Aspergillus Niger); (5) bakteriyel hücreler, örnegin Escherichia, coli hücreleri veya Bacillus subtilis hücreleri ve benzeri bulunur. Burada kullanildigi sekilde, "spesifik olarak baglanma" veya antijene baglanan bir antikora karsilik gelir. Baglanma afinitesi genel olarak Scatchard analizi veya yüzey plazmon rezonans teknigi gibi standart bir test kullanilarak belirlenir (örnegin BIACORE® kullanilarak). Bir referans antikoru olarak "ayni epitopa baglanan bir antikor", bir rekabet deneyinde referans antikorunun antijenine olan bagini % 50 veya daha fazla engelleyen bir antikora karsilik gelir ve tersi sekilde, bir rekabet deneyinde referans antikoru, antikorun antijenine olan bagini Burada kullanildigi haliyle "sitotoksik ajan" terimi, hücresel bir fonksiyonu inhibe eden veya önleyen ve/Veya hücrelerin ölümüne veya imhasina neden olan bir maddeyi ifade eder. Sitotoksik maddeler kapsami dahilinde, fakat bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, radyoaktif izotoplar (örn., At211, 1131, radyoaktif izotoplari); kemoterapötik ajanlar, (örn., metotreksat, adriamisin, vinka alkaloidler (vinkristin, vinblastin, etopozit), doksorubisin, melfalan, mitomisin C, klorambusil, daunorubisin ya da diger araya sokulan ajanlar); büyüme inhibitörü ajanlar; enzimler ve bunlarin fragmanlari, örnegin nükleolitik enzimler; antibiyotikler; toksinler, örnegin küçük' moleküllü toksinler ya da bakteriyel, fungal, bitkisel ya da hayvansal kökenli enzimatik olarak aktif toksinler ve bunlarin fragmanlari bulunur. Bir ajanin, örnegin bir farmasötik formülasyonun "etkili bir miktari", istenen terapötik veya profilaktik sonucu elde etmek için gereken dozajlai` ve sürelerde etkili olan bir miktari ifade eder. sabit bölgenin en azindan bir kismini barindiran bir C- terminal bölgesini tanimlamak için kullanilir. Fc bölgesi, bir immünoglobülinin CH2 ve CH3 domenlerini içerir. Bu terim natif sekansin FC bölgelerini ve varyant Fc bölgelerini içerir. Bir uygulamada bir insan IgG agir zincir Fc bölgesi, Cy8226'dan veya Pr0230'dan, agir zincirin karboksil ucuna uzanir. Ancak, FC bölgesinin C terminal lizini (Lys447) mevcut olabilir veya olmayabilir. Burada aksi belirtilmedigi sürece, Fc bölgesinde veya sabit bölgedeki amino asit kalintilarinin numaralandirilmasi AB numaralandirma sistemine veya diger adiyla AB indeksine göre olup, Kabat ve dig. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. basim. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991 referansli yayinda tarif edilen sekildedir. haricindeki degisken domen kalintilarini ifade eder. Bir degisken domenin FR'si genellikle dört FR domeninden olusmaktadir: FRl, FR2, FR3 ve FR4. Buna göre, HVR ve FR sekanslari genellikle VH (veya VL) içinde asagidaki sekansla immünoglobülin CH2 veya CH3 domenlerinden elde edilen bir protein varligi anlamina gelir. "CHZ-CH3 Ig varligi", bir dimer olusturan iki "CH2-CH3" polipeptidi içerir. immünoglobülin IgG, IgA, IgD, IgE veya IgM olabilir. Bir uygulamada, CH2-CH3 Ig varligi bir IgG immünoglobülin den elde edilir` ve burada "CH2-CH3 IgG varligi" olarak. adlandirilir. Terim, dogal CH2-CH3 sekansinin domenlerini ve varyant CH2-CH3 domenlerini içerir. Bir uygulamada, "CHZ-CH3 Ig varligi", Cys226 veya Pr023O ila agir zincirin karboksil-ucu arasinda uzanan insan agir zinciri CH2-CH3 IgG bölgesinden elde edilir. Ancak, Fc bölgesinin C terminal lizini (Lys447) mevcut olabilir veya olmayabilir. Burada aksi belirtilmedigi sürece, CH2-CH3 domeni bölgesi veya sabit bölgesindeki amino asit kalintilarinin numaralandirilmasi AB numaralandirma sistemine veya diger adiyla AB endeksine göre olup, Kabat ve dig. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. basim. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991 referansli yayinda tarif edilen sekildedir. Bir "konjügat", bir veya daha fazla heterolog molekülüne, örnegin bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, bir etiket, nörolojik bozukluk ilaci veya sitotoksik maddeye konjüge edilmis mevcut bulusun füzyon proteinidir. Burada kullanilan bir "baglayici", kan beyin bariyeri mekiginin ve/veya füzyon proteininin ve/veya bu bulusun konjugatinin farkli varliklarini kovalent olarak baglayan bir kimyasal baglayiciya veya tek zincirli bir peptit baglayiciya karsilik gelir. Baglayici, örnegin beyin efektör varligini tek degerlikli baglanma varligina baglar. Örnegin, tek degerli baglama varligi, bir CH2-CH3 Ig varligi ve kan beyin bariyeri reseptörüne yönelmis bir scFab'a yönelmisse, baglayici, scFab'i CH3-CH2 Ig varliginin C terminali ucuna baglar. Beyin efektör varligini tek degerlikli baglanma varligina (birinci baglayici) baglayan baglayici ve scFab'i CH2-CH3 Ig domeninin C terminali ucuna (ikinci baglayici) baglayan baglayici ayni veya farkli olabilir. Peptit baglariyla birlestirilen bir ila yirmi amino asitten olusan tek zincirli peptit baglayicilari kullanilabilir. Belirli uygulamalarda, amino asitler yirmi dogal olarak olusan amino asitten seçilir. Baska belirli uygulamalarda, bir veya daha fazla amino asit, glisin, alanin, prolin, asparagin, glutamin ve lizin arasindan seçilir. Baska uygulamalarda, baglayici, bir kimyasal baglayicidir. Belirli uygulamalarda, bahsedilen baglayici, en az 25 amino asit uzunluklu, tercihen ile bir 32 ila 50 amino asit uzunluklu bir amino asit sekansina sahip olan tek bir Zincirli peptiddir. Bir uygulamada bahsedilen baglayici, G : glisin, S : serin ile, (x 7 veya 8 ve m= 0, l, 2 veya 3), tercihen x = 4, n= 6 veya 7 ve m: 0, l, 2 veya 3 ile, daha tercihen x = 4, n= 7 ve m: 2 ile (GxS)n'dir. Bir uygulamada bahsedilen baglayici, (G4S)4 (Seg. (Seq. Id. No. 13)'tür. Konjügasyon, çesitli kimyasal baglayicilar kullanilarak gerçeklestirilebilir. Örnegin, tek degerli baglama varligi veya füzyon proteini ve beyin efektör varligi, çesitli bifonksiyonel protein kenetleyici ajanlar kullanilarak konjüge edilebilecek olup, bunlarin arasinda örnegin N-süksinimidil-3- (2-piridiltiyo) propiyonat (SPDP), süksinimidil-4-(N- maleimidometil) siklohekzan-l-karboksilat (SMCC), iminotiyoloan (IT), bifonksiyonel imidoester türevleri (örnegin dimetil adipimidat HCl), aktif esterler (örnegin disüksinimidil suberat), aldehitler (örnegin glutaraldehit), bis-azido bilesikler (örnegin bis (p-azidobenzoil) hekzandiamin), bis-diazonyum türevleri (örnegin bis-(p- diazonyumbenzoil)-etilendiamin), diizosiyanatlar (örnegin tolüen 2,6-diizosiyanat) ve bis-aktif flor bilesikleri (örnegin 1,5-difloro-2,4-dinitrobenzen) bulunur. Baglayici, efektör varliginin beyne iletimi üzerine salimini kolaylastiran bir "ayrilabilir baglayici" olabilir. Örnegin, bir aside dayaniksiz baglayici, peptidaza duyarli baglayici, isiga dayaniksiz baglayici, dimetil baglayici ya da disülfit içeren baglayici (Chari ve digerleri, Cancer Res. 52: 127-131 Kovalent konjügasyon dogrudan veya bir baglayici araciligiyla olabilir. Belirli uygulamalarda, dogrudan konjügasyon, bir protein füzyonunun olusturulmasi ile (baska bir deyisle, tek degerlikli baglanma varligini bir R/BBB ve efektör varligina kodlayan iki genin genetik füzyonu ve tek bir protein seklinde eksprese edilmesi) olur. Belirli uygulamalarda, dogrudan konjügasyon, R/BBB'ye karsi tek degerlikli baglanma varliginin iki kisminin biri üzerindeki bir reaktif grubu ve beyin efektör varligi üzerindeki karsilik gelen bir grup veya akseptör arasinda bir kovalent bag olusturulmasi ile olur. Belirli uygulamalarda, dogrudan konjugasyon, uygun kosullar altinda konjüge edilecek diger moleküle kovalent bir bag olusturan reaktif bir grup içerecek sekilde konjüge edilecek iki molekülden birinin (sinirlayici olmayan örnekler olarak, bir sülfhidril grubu veya bir karboksil grubu) modifikasyonu yoluyladir (baska bir deyisle, genetik modifikasyon). Sinirlayici olmayan bir örnek olarak, bir arzu edilen reaktif gruplu (baska bir deyisle, bir sistein kalintisi) bir molekül (baska bir deyisle, bir amino asit), örnegin, R/BBB antikoruna karsi monovalent baglanma varligina ve nörolojik ilaçla olusturulmus bir disülfit bagina dahil edilebilir. Nükleik asitlerin proteinlere kovalent konjügasyonu için yöntemler de teknikte bilinmektedir (baska bir deyisle, foto çapraz baglantilama, bakiniz, örnegin, Zatsepin et al. Russ. Chem. kullanilarak da yapilabilir. Örnegin, bir tek degerli baglama varligi ve bir beyin efektör varligi, çesitli bifonksiyonel protein kenetleyici ajanlar kullanilarak konjüge edilebilecek olup, bunlarin arasinda örnegin N-süksinimidil-3-(2- piridiltiyo) propiyonat (SPDP), süksinimidil-4-(N- maleimidometil) siklohekzan-l-karboksilat (SMCC), iminotiyoloan (IT), bifonksiyonel imidoester türevleri (örnegin dimetil adipimidat HCl), aktif esterler (örnegin disüksinimidil suberat), aldehitler (örnegin glutaraldehit), bis-azido bilesikler (örnegin bis (p-azidobenzoil) hekzandiamin), bis-diazonyum türevleri (örnegin bis-(p- diazonyumbenzoil)-etilendiamin), diizosiyanatlar (örnegin tolüen 2,6-diizosiyanat) ve bis-aktif flor bilesikleri (örnegin l,5-difloro-2,4-dinitrobenzen) bulunur. Peptit baglariyla. birlestirilen bir ila yirmi amino asitten olusan peptit baglayicilari da kullanilabilir. Belirli bu gibi uygulamalarda, amino asitler yirmi dogal olarak olusan amino asitten seçilir. Baska belirli böyle uygulamalarda, bir veya daha fazla amino asit, glisin, alanin, prolin, asparagin, glutamin ve lizin arasindan seçilir. Baglayici, efektör varliginin beyne iletimi üzerine salimini kolaylastiran. bir dayaniksiz baglayici, peptidaza duyarli baglayici, isiga dayaniksiz baglayici, dimetil baglayici ya da disülfit içeren U.S. Patent No. 5,208,020) kullanilabilir. Bir "etiket", buradaki füzyon proteini ile birlestirilmis ve tespit veya görüntüleme için kullanilan bir markördür. Bu gibi etiketlerin örnekleri arasinda radyo etiket, bir florofor, bir kromofor veya bir afinite etiketi bulunur. Bir uygulamada, etiket, medikal görüntüleme için kullanilan. bir radyoetiket, örnegin tc99m veya 1123'tür veya nükleer manyetik rezonans (nmr) görüntüleme için bir döner etiket (manyetik rezonans görüntüleme, mri olarak da bilinen), örnegin iyot-123 tekrar, iyot-131, indiyum-lll, flor-19, karbon-13, nitrojen-15, oksijen-17, gadolinyum, manganez, demir ve benzeridir. Bir sinirli olmamak üzere, ehlilestirilmis hayvanlar (örnegin inekler, koyun, kediler, köpekler' ve atlar), primatlar (örnegin insanlar ve insan harici primatlar, örnegin maymunlar), tavsanlar ve kemirgenleri (örnegin fareler ve siçanlar) kapsar. Belirli uygulamalarda, birey veya hasta bir insandir. Bir "izole edilmis" antikor, dogal ortamindaki bir bilesenden ayrilmis bir antikordur. Bazi uygulamalarda, bir antikor, örnegin elektroforetik (örnegin SBS-PAGE, izoelektrik odaklama (IEF), kapiler elektroforezi) veya kromatografi (örnegin iyon degisimi veya ters faz HPLC) ile belirlendigi sekilde %95 veya degerlendirmeye yönelik yöntemler için bakiniz, örn. Flatman alisildigi üzere dahil edilen ve endikasyonlar, kullanim, dozaj, uygulama, kombinasyon terapisi, kontraendikasyonlar ve/veya bu gibi terapötik ürünlerin kullanimina yönelik uyarilarla ilgili bilgiler içeren talimatlari ifade eder. bilesenin biyolojik aktivitesinin etkili olmasina olanak taniyacak bir biçimde bulunan ve formülasyonun uygulanacagi bir hasta için kabul edilemeyecek düzeyde toksik olan hiçbir ilave bilesen içermeyen bir preparati ifade eder. Bir "farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici", bir kisi için toksik olmayan, etken madde disindaki bir farmasötik formülasyondaki bir terkip maddesi anlamina gelir. Farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici, bir tampon, yardimci madde, stabilizatör veya koruyucu içerir, ancak bunlarla sinirli degildir. Burada kullanildigi sekliyle, "tedavi" ifadesi (ve bunun varyasyonlari), tedavi edilen bireyin dogal seyrini degistirmek amaciyla yapilan klinik bir girisimi belirtir ve profilaksi amaciyla ya da klinik patolojinin seyri sirasinda gerçeklestirilebilir. Tedavinin istenen etkileri, bunlarla sinirli olmamak üzere, hastaligin ortaya çikisinin veya nüksetmesinin önlenmesi, semptomlarin hafifletilmesi, hastaligin dogrudan veya dolayli herhangi bir patolojik sonucunun azaltilmasi, metastazin önlenmesi, hastaligin ilerleme hizinin azaltilmasi, hastalik durumunun iyilestirilmesi ya da palyasyonu ve iyilestirilmis prognozu kapsar. Bazi uygulamalarda, mevcut bulusun antikorlari, bir hastaligin gelisimini geciktirmek veya bir hastaligin ilerleyisini yavaslatmak için kullanilir. Bilesimler ve yöntemler Mevcut beyanin yöntemleri ve bir imalat ürünleri, bir R/BBB'ye baglanan bir kan beyin bariyeri mekigi ve/veya füzyon proteinini kullanir veya dahil eder. Tek degerlikli baglanma varliginin üretimi veya taramasi için kullanilacak olan R/BBB antijeni, örnegin, bir çözünür veya bunlarin arzu edilen epitopu içeren bir kismi biçiminde (örnegin ekstraselüler domen) olabilir. Alternatif olarak veya ayrica, BBB-R'i hücre yüzeylerinde eksprese eden hücreler monovalent baglanma varligi üretmek veya taramak için kullanilabilir. Monovalent baglanma varligi üretmek için yararli olan diger R/BBB formlari, teknikte uzman kisilerce açikça görülecektir. Buradaki R/BBB örnekleri arasinda, transferrin reseptörü (TfR), insülin reseptörü, insülin benzeri büyüme faktörü reseptörü (IGF-R), düsük yogunluk lipoprotein reseptörü, protein l (LRPl) ile ilgili ve LRP8 ve heparin baglayici epidermal büyüme faktörü benzeri büyüme faktörü (HB-EGF). Mevcut bulusa göre, bir "tek degerli baglanma" varligi, burada, böyle tek degerlikli baglanma varligi gösteriminin, MSS (örnegin, beyin) alimini arttiracagini gösteren verilere dayali olarak TfR'ye karsi seçilir. Bu tür bir baglanma varligini tanimlamak için, bunlarla sinirli olmamak üzere, monovalent baglanma modunu ölçmek için çesitli testler mevcuttur: Scatchard deneyi ve yüzey plazmon rezonans teknigi (örnegin BIACORE® kullanilarak) ve burada açiklanan. in vivo incelemeler. Mevcut beyan, bir beyin efektör varliginin, örnegin bir nörolojik bozukluk ilacinin, kan-beyin bariyeri boyunca tasinmasi için yararli bir tek degerlikli baglanma varligini yapma yöntemi saglamakta olup, yöntem, bir tek degerlikli baglanma varliginin, R/BBB için monovalent bir baglanma moduna sahip olmasindan ötürü bir R/BBB'ye karsi bir tek degerli baglanma parçalari paneli arasindan seçilmesini içerir. Tek degerlikli baglanma modu, reseptörlerin normal hücre içi siralamalarini engellemeyerek belirli R/BBB'lert için verimli BBB geçisi saglar. Bir nöropati bozukluk için, seçilebilecek olan bir nörolojik ilaç, bir analjeziktir, örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, bir narkotik/opioit analjezik (baska bir deyisle, morfin, fentanil, hidrokodon, neperidin, metadon, oksimorfon, pentazosin, propoksifen, tramadol, kodein› ve oksikodon), bir nonsteroidal antienflamatuvar ilaç (NSAID) (baska bir deyisle, ibuprofen, naproksen, diklofenak, diflunisal, etodolak, fenoprofen, flurbiprofen, indometasin, ketorolak, mefenamik asit, meloksikam, nabumeton, oksaprozin, piroksikam, sulindak ve tolmetin), bir kortikosteroit (baska bir deyisle, kortizon, prednizon, prednisolon, deksametazon, netilprednisolon ve triamsinolon), bir antimigren maddesi (baska bir deyisle, sumatriptin, almotriptan, frovatriptan, sumatriptan, rizatriptan, eletriptan, zolmitriptan, dihidroergotamin, eletriptan ve ergotamin), asetaminofen, bir salisilat (baska bir deyisle, aspirin, kolin salisilat, magnezyum salisilat, diflunisal, ve salsalat), bir anti-konvulsan (baska bir deyisle, karbamazepin, klonazepam, gabapentin, lamotrigin, pregabalin, tiagabin, ve topiramat), bir anestetik (baska bir deyisle, izofluran, trikloroetilen, halothan, sevofluran, benzokain, kloroprokain, kokain, siklometikain, dimetokain, propoksikain, prokain, novokain, proparakain, tetrakain, artikain, bupivakain, kartikain, sinkokain, etidokain, levobupiva-kain, lidokain, nepivakain, piperokain, prilokain, ropivakain, trimekain, saksitoksin ve tetrodotoksin), ve bir koks-2 inhibitörüdür (baska bir deyisle, selesoksib, rofesoksib, ve valdesoksib). Vertigonun dahil oldugu bir nöropati bozukluk için, seçilebilecek olan bir nörolojik ilaç, bir anti-vertigo maddesi, örnegin bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, meklizin, difenhidramin, prometazin ve diazepamdir. Bulantinin dahil oldugu bir nöropati bozukluk için seçilebilecek olan bir nörolojik ilaç, bir anti-bulanti maddesi, örnegin bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, prometazin, klorpromazin, proklorperazin, trimetobenzamit ve metoklopramit bulunur. Bir nörodejeneratif hastalik için seçilebilecek olan bir nörolojik ilaç, bir büyüme hormonu veya nörotrofik faktördür; örnekleri arasinda bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla beyin kaynakli nörotrofik faktör (BDNF), sinir büyüme faktörü (NGF), nörotrofin-4/5, fibroblast büyüme faktörü (FGF)-2 ve diger FGF'ler, nörotrofin (NT)-3, eritropoietin (EPO), hepatosit büyüme faktörü (HGF), epidermal büyüme faktörü (EGF), dönüstürücü büyüme faktörü (TGF)-alfa, TGF-beta, vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF), interlökin-l reseptör antagonisti (IL-lra), siliyer nörotrofik faktör (CNTF), gliyal-türevli nörotrofik faktör (GDNF), nörturin, trombosit türevli büyüme faktörü (PDGF), heregülin, nöregülin, artemin, persefin, interlökinler, gliyal hücre hatti türevli nörotrofik faktör (GFR), granülosit-koloni uyarici faktör (CSF), granülosit-makrofaj-CSF, netrinler, kardiyotrofin-l, dikenliler, lösemi inhibe edici faktör (LIF), midkin, pleiotrofin, kemik morfogenetik proteinler (BMP'ler), netrinler, sapozinler, semaforinler ve kök hücre faktörü (SCF) bulunur. Kanser için, seçilebilecek olan bir nörolojik ilaç, bir kemoterapötik maddedir. Örnekleri kemoterapötik maddeler arasinda, alkilleyici maddeler örnegin tiyotepa ve CYTOXAN® siklosfosfamid; alkil sülfonatlar örnegin busülfan, improsülfan ve piposülfan; aziridinler örnegin benzodopa, karbokuon, metüredopa, ve uredopa; etileniminler ve metilamelaminler örnegin, altretamin, trietilenmelamin, trietilenfosforamit, trietiylentiyofosfor-amit ve trimetilolomelamin; asetojeninler (özellikle bullatasin ve bullatasinon); delta -9-tetrahidrokannabinol (dronabinol, MARINOL®); beta-lapakon; lapakol; kolsisinler; betulinik asit; bir kamptotesin (örnegin sentetik analog topotekan (HYCAMTIN®), CPT-ll (irinotekan, CAMPTOSAR®), asetilkamptotesin, skopolektin, ve 9-aminokamptotesin); briyostatin; kalistatin; CC-1065 (örnegin adozelesin, karzelesin ve bizelesin sentetik analoglari): podofillotoksin; podofillinik asit; tenipozid; kriptofisinler (özellikle kriptofisin 1 ve kriptofisin 8); dolastatin; düokarmisin (örnegin sentetik analoglari, KW-2189 ve CBl-TM1); eleuterobin; pankratistatin; bir sarkodiktin; spongistatin; nitrojen hardallari örnegin klorambusil, klornafazin, kolofosfamid, estramustin, ifosfamit, mekloretam, mekloretam oksit hidroklorür, melfalan, novembikhin, fensterin, prednimustin, trofosfamit, urasil hardal; nitrozüreler örnegin karmustin, klorozotosin, fotemustin, lomustin, nimustin, ve ranimnustin; antibiyotikler örnegin enedin antibiyotikleri (örnegin, kalikeamisin, özellikle kalikeamisin gammal ve kalikeamisin omegal (bakiniz, örnegin, Agnew, Chem Inti. Ed. bir esperamisin; ve neokarzinostatin kromofor ve ilgili kromoprotein enedin antiobiyotik kromoforlari), aklasinomisinler, aktinomisin, autramisin, azaserin, bleomisinler, kaktinomisin, karabisin, karminomisin, karzinofilin, kromomisinler, daktinomisin, daunorubisin, detorubisin, 6-diazo-5-okso-L-norlösin, ADRIAMYCIN® doksorubisin (örnegin, morfolino-doksorubisin, siyanomorfolino-doksorubisin, 2-pirrolino-doksorubisin ve deoksidoksorubisin), epirubisin, esorubisin, idarubisin, marsellomisin, mitomisinler örnegin mitomisin C, mikofenolik asit, nogalamisin, olivomisinler, peplomisin, potfiromisin, puromisin, kelamisin, rkokuubisin, streptonigrin, streptozosin, tübersitin, ubenimeks, zinostatin, zorubisin; anti-metabolitler örnegin metotreksat ve 5-florourasil (5-FU); folik asit analoglari örnegin denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat; purin analoglari örnegin fludarabin, 6-merkaptopurin, tiyamiprin, tiyoguanin; pirimidin analoglari örnegin ansitabin, azasitidin, 6-azauridin, karmofur, sitarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enositabin, floksuridin; androjenler örnegin kalusteron, droenanolon propiyonat, epitiostanol, mepitiostan, testolakton; anti-adrenaller örnegin aminoglutetimit, mitotan, trilostan; folik asit tazeleyici örnegin frolinik asit; aseglaton aldofosfamid glikosid; aminolevulinik asit; enilurasil; amsakrin; bestrabusil; bisantren; edatraksat; defofamin; demekolsin; diazikuon; elfomitin; elliptinyum asetat; bir epotilon; etoglusid; galyum nitrat; hidroksiüre; lentinan; lonidainin; maytansinoidler örnegin maytansin ve ansamitosinler; mitoguazon; mitoksantron; mopidanmol; nitraerin; pentostatin; fenamet; pirarubisin; losoksantron; 2- etilhidrazit; prokarbazin; PSK® polisakkarit kompleksi (JHS Natural Products, Eugen, OR); razoksan; rizoksin; sizofiran; spirogermanyum; tenuazonik asit; triazikuon; 2,2',2"- triklorotrietilamin; trikotekenler (özellikle T-2 toksin, verrakurin A, roridin A ve anguidin); uretan; vindesin (ELDISINE®, FILDESIN®); dakarbazin; mannomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gasitozin; arabinozid ("Ara-C"); tiyotepa; taksoidler, örnegin, Taxol® paklitaksel (Bristol- Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANETM Kremoforsuz, paklitakselin albümin ile gelistirilmis nanoparçacik formülasyonu (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois), ve Taxotere® doksetaksel (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, Fransa); kloranbusil; gemsitabin (GEMZAR®); 6- tiyoguanin; merkaptopurin; metotreksat; platin analoglari örnegin cis-platin ve karboplatin; vinblastin (VELBAN®); platin; etopozid (VP-16); ifosfamit; mitoksantron; Vinkristin (ONCOVIN®); oksaliplatin; lökovovin; Vinorelbin. (NAVELBINE®); novantron; edatreksat; daunomisin; aminopterin; ibantronat; topoisomeraz inhibitörü RFS ; retinoidler örnegin retinoik asit; kapesitabin (XELODA®); yukaridakilerin herhangi birinin farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, asitleri veya türevleri; ve yukaridakilerin iki veya daha fazlasinin kombinasyonu örnegin CHOP, bir siklofosfamid, doksorubisin, Vinkristin ve prednizolonun birlesik tedavisi için bir kisaltma ve 5-FU ve lökovovin ile birlestirilmis oksaliplatin (ELOXATINTM) ile tedavi rejiminin kisaltmasi olan FOLFOX bulunur. Kemoterapötik ajanlarin bu taniminda ayrica, kanser büyümesini kolaylastirabilecek hormonlarin etkilerini düzenleyici, azaltici, bloke edici ya da inhibe edici etki gösteren ve genellikle sistemik ya da tüm Vücut tedavisi biçiminde olan anti-hormonal ajanlar da bulunmaktadir. Bunlarin kendileri de hormon olabilir. Örnekler arasinda anti-östrojenler ve seçici östrojen reseptör modülatörleri (SERM'ler), örnegin tamoksifen (NOLVADEX® tamoksifen de dahil), EVISTA® raloksifen, droloksifen, 4-hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY 117018, onapriston ve FARESTON® toremifen; anti- progesteronlar; östrojen reseptörü asagi-düzenleyicileri (ERD'ler); yumurtaliklari bastirma ya da kapatma fonksiyonu gösteren ajanlar, örnegin lötinize edici hormon salan hormon (LHRH) agonistleri, örnegin LUPRON® ve ELIGARD® löprolit asetat, goserelin asetat, buserelin asetat ve tripterelin; diger anti-androjenler, örnegin flutamid, nilutamit ve bikalutamit; ve böbreküstü bezinde östrojen üretimini düzenleyen aromataz enzimini inhibe eden aromataz inhibitörleri, örnegin 4(5)-imidazoller, aminoglutetimit, MEGASE® megestrol asetat, AROMASIN® eksemestan, formestan, fadrozol, RIVISOR® vorozol, FEMARA® letrozol ve ARIMIDEX® anastrozol bulunur. Ayrica, kemoterapötik maddelerin bu tür tanimlari arasinda, bisfosfonatlar örnegin klodronat (örnegin, BONEFOS® veya OSTAC®), DIDROCAL® etidronat, NE-58095, ZOMETA® zoldronik asit/zoldronat, FOSAMAX® alendronat, AREDIA® pamidronat, SKELID® tiludronat veya ACTONEL® risedronat; ve troksasitabin (bir 1,3-dioksolan nükleosid sitozin analogu): antisens oligonükleotidleri, özellikle anormal hücre proliferasyonunda belirtilen sinyal yollarinda genlerin ekspresyonunu› inhibe edenler, örnegin, PKC-alfa, Raf, H-Ras, ve Epidermal Büyüme Faktörü Reseptörü (EGF-R); asilar örnegin THERATOPE® asi ve gen terapisi asilari, örnegin, ALLOVECTIN® asisi, LEUVECTIN® asisi, ve VAXID® asisi; LURTOTECAN® topoizomeraz l inhibitörü; ABARELLX® rmRH; lapatinib ditosilat (bir ErbB-Z ve EGFR dual tirozin kinaz küçük-moleküllü inhibitör, GW572016 olarak da bilinir); ve yukaridakilerin herhangi birinin farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, asitleri veya türevleri bulunur. Kanser tedavisi veya önlenmesi için nörolojik ilaçlar olarak seçilebilecek baska bir bilesik grubu, anti-kanser immünoglobülinleri (örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, trastuzumab, bevacizumab, alemtuksumab, setuksimab, gemtuzumab ozogamisin, ibritumomab tiuksetan, panitumumab ve rituksimab)'dir. Bazi durumlarda, antikorlar, örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, bir radyoetiketli tositumomab, toksik bir etiketle birlikte arzu edilen hücreleri (baska bir deyisle, kanser hücreleri) hedeflemek ve öldürmek için kullanilabilir. Bir oküler hastalik veya bozukluk için seçilebilir olan bir nörolojik ilaç, bir anti-anjiyojenik oftalmik madde (baska bir deyisle, bevacizumab, ranibizumab ve pegaptanib), bir oftalmik glakom maddesi (baska bir deyisle, karbakol, epinefrin, demekaryum bromür, apraslonidin, brimonidin, brinzolamit, levobunolol, timolol, betaxolol, dorzolamit, bimatoprost, karteolol, metipranolol, dipivefrin, travoprost ve latanoprost), bir karbonik anhidraz inhibitörü (baska bir deyisle, metazolamit ve asetazolamit), bir oftalmik antihistamin (baska bir deyisle, nafazolin, fenilefrin ve tetrahidrozolin), bir oküler kaydirici madde, bir oftalmik steroit (baska bir deyisle, florometolon, prednisolon, loteprednol, deksametazon, difluprednat, rimeksolon, fluosinolon, mekuruzon ve triamsinolon), bir oftalmik anestetik (baska bir deyisle, lidokain, proparakain ve tetrakain), bir oftalmik anti-enfektif (baska bir deyisle, levofloksasin, gatifloksasin, ciprofloksasin, moksif oksasin, kloramfenikol, basitrasin/polimiksin b, sülfasetamit, tobramisin, azitromisin, besifloksasin, norfloksasin, sülfizoksazol, gentamisin, idoksuridin, eritromisin, natamisin, gramisitin, neomisin, ofloksasin, trif uridin, gansiklovir, vidarabin), bir oftalmik antienflamatuvar madde (baska bir deyisle, nepafenak, ketorolak, flurbiprofen, suprofen, siklosporin, triamsinolon, diklofenak ve bromfenak), ve bir oftalmik antihistamin veya dekonjestan (baska bir deyisle, ketotifen, olopatadin, epinastin, nafazolin, kromolin, tetrahidrozolin, pemirolast, bepotastin, nafazolin, fenilefrin, nedokromil, lodoksamit, fenilefrin, emedastin ve azelastin) olabilir; Bir nöbet bozuklugu için nörolojik. bir ilaç seçilebilir, bunlar arasinda, bir antikonvulzan veya antiepileptik örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, barbiturat antikonvulzanlar (baska bir deyisle, primidon, metarbital, mefobarbital, allobarbital, amobarbital, aprobarbital, alfenal, barbital, brallobarbital ve fenobarbital), benzodiazepin antikonvulzanlar (baska bir deyisle, diazepam, klonazepam, ve lorazepam), karbamat antikonvulzanlar (baska bir deyisle felbamat), karbonik anhidraz inhibitör antikonvulzanlar (baska bir deyisle, asetazolamit, topiramat ve zonisamit), dibenzazepin antikonvulzanlar (baska bir deyisle, rufinamit, karbamazepin, ve okskarbazepin), yag asidi türevli antikonvulzanlar (baska bir deyisle, divalproeks ve valproik asit), gama-aminobutirik asit analoglari (baska bir deyisle, pregabalin, gabapentin ve vigabatrin), gama-aminobutirik asit alim inhibitörleri (baska bir deyisle, tiagabin), gama-aminobutirik asit transaminaz inhibitörleri (baska bir deyisle, vigabatrin), hidantoin antikonvulzanlar (baska bir deyisle fenitoin, etotoin, fosfenitoin ve mefenitoin), çesitli antikonvulzanlar (baska bir deyisle, lakosamit ve magnezyum sülfat), progestinler (baska bir deyisle, progesteron), oksazolidindiyon antikonvulzanlar (baska bir deyisle, parametadiyon ve trimetadiyon), pirrolidin antikonvulzanlar (baska bir deyisle, levetirasetam), süksinimit antikonvulzanlar (baska bir deyisle, etosuksimit ve metsuksimit), triazin antikonvulzanlar (baska bir deyisle, lamotrigin), ve üre antikonvulzanlar (baska bir deyisle, fenasemid ve fenturid) bulunur. Bir lizozomal depolama hastaligi için seçilebilecek bir nörolojik ilaç, kendisi veya baska türlü, hastalikta bozulmus olan enzimin aktivitesini taklit eden bir ilaçtir. Lizozomal depo bozukluklarinin tedavisi için örnek rekombinant enzimler arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, örnegin, U.S. bir deyisle, alfa-L-iduronidaz, iduronat-Z-sülfhataz, N- sülfataz, alfa-N-asetilglukosaminidaz, N-asetil-galaktosamin- 6-sülfataz, beta-galaktosidaz, arilsülfataz B, beta- glukuronidaz, asit alfa-glukosidaz, glukoserebrosidaz, alfa- galaktosidaz A, heksosaminidaz A, asit sfingomyelinaz, beta- galaktoserebrosidaz, beta-galaktosidaz, arilsülfataz A, asit seramidaz, aspartoasilaz, palmitoil-protein tiyoesteraz 1 ve trip eptidil amino peptidaz l) bulunur. Amiloidoz için seçilebilecek olan bir nörolojik ilaç, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, özellikle asagidakilerden seçilen bir hedefe baglanan bir antikor veya diger baglayici molekül (örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, küçük bir molekül, bir peptid, bir aptamer veya diger protein baglayici) olabilir: beta sekretaz, tau, presenilin, amiloid, prekürsör proteini veya kisimlari, amiloid beta peptidi veya oligomerleri veya fibrilleri, ölüm reseptörü 6 (DR6), gelismis glikasyon son ürünleri için reseptör (RAGE), parkin ve huntingtin; bir kolinesteraz inhibitörü (baska bir deyisle, galantamin, donepezil, rivastigmin ve takrin); bir NMDA reseptör antagonisti (baska bir deyisle, memantin), bir monoamin depletörü (baska bir deyisle, tetrabenazin); bir ergoloit mesilat; bir antikolinerjik antiparkinsonizm maddesi (baska bir deyisle, prosiklidin, difenhidramin, triheksilfenidil, benztropin, biperiden ve triheksifenidil); bir dopaminerjik antiparkinsonizm maddesi (baska bir deyisle, entakapon, selegilin, pramipeksol, bromokriptin, rotigotin, selegilin, ropinirol, rasagilin, apomorfin, karbidopa, levodopa, pergolit, tolkapon ve amantadin); bir tetrabenazin; bir antienflamatuvar (örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, bir nonsteroidal antienflamatuvar ilaç (baska bir deyisle, indometisin› ve yukarida sayilan diger bilesikler); bir hormon (baska bir deyisle, östrojen, progesteron ve löprolit); bir Vitamin (baska bir deyisle, folat ve nikotinamit); dimebolin; bir homotaurin (baska bir deyisle, 3- aminopropansülfonik asit; 3 APS); bir serotonin reseptör etkinlik modülatörü (baska bir deyisle, ksaliproden); bir interferon ve bir glukokortikoid. Viral veya mikrobiyal bir hastalik için seçilebilecek olan bir nörolojik ilaç, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, bir antiviral bilesik (örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, bir adamantan antiviral (baska bir deyisle, rimantadin ve amantadin), bir antiviral interferon (baska bir deyisle, peginterferon alfa-Zb), bir kemokin reseptör antagonisti (baska bir deyisle, maravirok), bir integraz iplikçik transfer inhibitörü (baska bir deyisle, raltegravir), bir nöraminidaz inhibitörü (baska bir deyisle, oseltamivir ve zanamivir), bir non-nükleosid ters transkriptaz inhibitörü (baska bir deyisle, efavirenz, etravirin, delavirdin ve nevirapin), bir nükleosid ters transkriptaz inhibitörleri (tenofovir, abakavir, lamivudin, zidovudin, stavudin, entekavir, emtrisitabin, adefovir, zalsitabin, telbivudin ve didanozin), bir proteaz inhibitörü (baska bir deyisle, darunavir, atazanavir, fosamprenavir, tipranavir, ritonavir, nelfmavir, amprenavir, indinavir ve sakinavir), bir purin nükleosid (baska bir deyisle, valasiklovir, famsiklovir, asiklovir, ribavirin, gansiklovir, valgansiklovir ve sitofovir), ve bir çesitli antiviraller (baska bir deyisle, enfuvirtid, foskarnet, palivizumab ve fomivirsen)), bir antibiyotik (örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, bir aminopenisillin (baska bir deyisle, amoksisillin, ampisillin, oksasillin, nafsillin, kloksasillin, dikloksasillin, flukoksasillin, temosillin, azlosillin, karbenisillin, tikarsillin, mezlosillin, piperasillin ve bakampisillin), bir sefalosporin (baska bir deyisle, sefazolin, sefaleksin, sefalotin, sefamandol, seftriakson, sefotaksim, sefpodoksime, seftazidim, sefadroksil, sefradin, lorasarbef, sefotetan, sefuroksim, sefprozil, sefaklor, ve sefoksitin), bir karbapenem/penem (baska bir deyisle, imipenem, meropenem, ertapenem, faropenem ve doripenem), bir Hwnobaktam (baska bir deyisle, aztreonam, tigemonam, norkardikin A ve tabtoksinin-beta-laktam, bir betalaktamaz inhibitörü (baska bir deyisle, klavulanik asit, tazobaktam ve sulbaktam) baska bir beta-laktam antibiyotik ile birlikte, bir aminoglikosid (baska bir deyisle, amikasin, gentamisin, kanamisin, neomisin, netilmisin, streptomisin, tobramisin, ve paromomisin), bir ansamisin (baska bir deyisle, geldanamisin ve herbimisin), bir karbasefem (baska bir deyisle, lorasarbef), bir glikopeptidler (baska bir deyisle, teikoplanin ve vankomisin), bir makrolid (baska bir deyisle, azitromisin, klaritromisin, diritromisin, eritromisin, roksitromisin, trolandomisin, telitromisin ve spektinomisin), bir monobaktam (baska bir deyisle, aztreonam), bir kinolon (baska bir deyisle, siprofloksasin, enoksasin, gatifloksasin, levofloksasin, lomefloksasin, moksifloksasin, norfloksasin, ofloksasin, trovafloksasin, grepafloksasin, sparfloksasin ve temafloksasin), bir sülfonamit (baska bir deyisle, mafenid, sülfonamidokrisoidin, sülfasetamit, sülfadiazin, sülfametizol, sülfanilamit, sülfasalazin, sülfizoksazol, trimetoprim, trimetoprim ve sülfametoksazol), bir tetrasiklin (baska bir deyisle, tetrasiklin, demeklosiklin, doksisiklin, minosiklin ve oksitetrasiklin), bir antineo-plastik veya sitotoksik antibiyotik (baska bir deyisle, doksorubisin, mitoksantron, bleomisin, daunorubisin, daktinomisin, epirubisin, idarubisin, plikamisin, mitomisin, pentostatin ve valrubisin) ve çesitli antibakteriyel bilesikler (baska bir deyisle, bakitrasin, kolistein ve polimiksin B)), bir antifungal (baska bir deyisle, metronidazol, nitazoksanid, imidazol, klorokin, iyodokinol ve paromomisin), ve bir antiparasitik (örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, kinin, klorokin, amodiakin, pirimetamin, sülfhadoksin, proguanil, meflokin, atovakuon, primakin, artemesinin, halofantrin, doksisiklin, klindamisin, mebendazol, pirantel pamoat, tiyabendazol, dietilkarbamazin, ivermektin, rifampin, amfoterisin B, melarsoprol, efornitin ve albendazol) olabilir. Iskemi için seçilebilecek bir nörolojik ilaçlar arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, bir trombolitik (baska bir deyisle, urokinaz, alteplaz, reteplaz ve tenekteplaz), bir trombosit agregasyon inhibitörü (baska bir deyisle, aspirin, silostazol, klopidogrel, prasugrel ve dipiridamol), bir statin (baska bir deyisle, lovastatin, pravastatin, fiuvastatin, rosuvastatin, atorvastatin, simvastatin, serivastatin ve pitavastatin), ve kan akisini veya vasküler esnekligi gelistirmek için bir bilesik, örnegin, sinirlayici olmamak kaydiyla kan basinç ilaçlari bulunur. Bir davranissal bozukluk için seçilebilecek bir nörolojik ilaç, davranis degistirici bilesik, Örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, bir atipik antipsikotik (baska bir deyisle, risperidon, olanzapin, apripiprazol, quetiapin, paliperidon, asenapin, klozapin, iloperidon ve ziprasidon), bir fenotiyazin antipsikotik (baska bir deyisle, proklorperazin, klorpromazin, flufenazin, perfenazin, trifluoperazin, tiyoridazin ve mezoridazin), bir tiyoksanten (baska bir deyisle, tiyotiksene), bir muhtelif antipsikotik (baska bir deyisle, pimozid, lityum, molindon, haloperidol ve loksapin), bir selektif serotonin alimi inhibitörü (baska bir deyisle, sitalopram, essitalopram, paroksetin, fluoksetin ve sertralin), bir serotonin-norepinefrin alimi inhibitörü (baska bir deyisle, duloksetin, venlafaksin, desvenlafaksin, bir trisiklik antidepresan (baska bir deyisle, doksepin, klomipramin, amoksapin, nortriptilin, amitriptilin, tri- mipramin, imipramin, protriptilin ve desipramin), bir tetrasiklik antidepresan (baska bir deyisle, mirtazapin ve maprotilin), bir fenilpiperazin antidepresan (baska bir deyisle, trazodon ve nefazodon), bir monoamin oksidaz inhibitörü (baska bir deyisle, izokarboksazid, fenelzin, selegilin ve tranilsipromin), bir benzodiazepin (baska bir deyisle, alprazolam, estazolam, flurazeptam, klonazepam, lorazepam› ve diazepam), bir norepinefrin-dopamin alimi inhibitörü (baska. bir* deyisle, bupropiyon), bir` MSS uyarici (baska bir deyisle, fentermin, dietilpropiyon, metamfetamin, dekstroamfetamin, amfetamin, metilfenidat, deksmetilfenidat, lisdeksamfetamin, modafmil, pemolin, fendimetrazm, benzfetamin, fendimetrazm, armodafmil, dietilpropiyon, kafein, atomoksetin, doksapram, ve mazindol), bir anksiyolitik/sedatif/hipnotik (Örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, bir barbiturat (baska bir deyisle, sekobarbital, fenobarbital ve mefobarbital), bir benzodiazepin (yukarida tarif edilen sekilde) ve bir muhtelif anksiyolitik/sedatif/hipnotik (baska bir deyisle difenhidramin, sodyuni oksibat, zaleplon, hidroksizin, kloral hidrat, aolpidem, buspiron, doksepin, eszopiklon, ramelteon, meprobamat ve etklorvinol)), bir sekretin (bakiniz, Örnegin, opioit peptidi (bakiniz, örnegin, Cowen et al, J. Neurochem. olabilir. MSS enflamasyonu için, enflamasyonun kendisine hitap eden (baska bir deyisle, bir non-steroidal antienflamatuvar madde, örnegin ibuprofen veya naproksen) veya enflamasyonun altinda yatan nedeni tedavi eden (baska bir deyisle, bir anti-viral veya anti-kanser madde) bir nörolojik ilaç seçilebilir. Baska bir uygulamada beyin efektör varligi, saglam veya tam uzunlukta bir antikordur. Intakt antikorlar agir zincirlerinin sabit domeninin amino asit sekansina bagli olarak farkli siniflara ayrilabilir. Bes ana intakt antikor sinifi vardir: siniflara (izotipler) ayrilabilir; örn. IgGl, IgG2, IgG3, agir zincir sabit domenleri, sirasiyla d, 6, 8, V ve u olarak adlandirilir. Farkli immünoglobülin siniflarinin alt birim yapilari ve üç boyutlu konfigürasyonlari iyi bilinmektedir. Bir uygulamada, intakt antikor efektör fonksiyondan yoksundur. Antikor üretme teknikleri bilinmektedir ve bu dokümanin tanim bölümünde yukarida örnekler verilmistir. Bir uygulamada, söz konusu antikor, bir kimerik, hümanize veya insan antikorudur veya antijen baglayici fragmanlaridir. Monovalent baglanma varliginin R/BBB'ye baglanmasinin saptanmasi için çesitli teknikler mevcuttur. Böyle bir test, insan R/BBB (beyin antijen) baglanmasi bakimindan kabiliyet için bir enzime bagli immünosorbent testidir (ELISA). Bu teste göre, antijen ile kaplanmis plakalar (örnegin rekombinant sR/BBB), R/BBB'ye dogru tek degerlikli baglanma varligini içeren bir örnek ile enkübe edilir ve tek degerlikli baglama varliginin ilgi duyulan antijene baglanmasi belirlenir. Bir görünümde mevcut bulusun tek degerli baglanma varligi, antijen baglanma aktivitesi bakimindan, örnegin ELISA, Western blot vb. bilinen metotlarla test edilir. Bir görünümde, mevcut bulusun tek degerlikli baglanma varligi, X isini yapi saptamasinin epitop eslestirmesi kullanilarak bir R/BBB'ye dogru tekli antijen baglanma etkinligi bakimindan test edilmistir. Sistemik olarak verilen kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügatinin alimi ve kan beyin bariyeri mekiginin ve/veya konjügatinin diger biyolojik aktivitelerini degerlendirmek için testler, örneklerde açiklanan sekilde veya ilgi duyulan kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügati için bilinen sekilde gerçeklestirilebilir. MSS'nin parankim boslugu içinde konsantrasyonunu ölçmek, örnegin etiketli kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügatin ELISA veya radyoaktivite ölçümleriyle birlikte mikrodiyaliz veya kapiler tükenme metodu kullanilarak da kullanilabilir. Farmasötik formülasyonlar Mevcut bulusa uygun kullanilan kan beyin bariyeri mekiginin ve/veya konjügatinin terapötik formülasyonlari, opsiyonel farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilar, eksipiyanlar veya stabilizatörler ile karistirilarak (Remington's Pharmaceutical Sciences l6'nci baski, Osol, A. Ed. (1980)), liyofilize edilmis formülasyonlar veya sulu çözeltiler biçiminde depolama için hazirlanirlar. Kabul edilebilir tasiyicilar, eksipiyanlar veya stabilizatörler, uygulanan dozajlarda ve konsantrasyonlarda alicilar için toksik degildir Ve bunlarin arasinda tamponlar, örnegin fosfat, sitrat ve diger organik asitler; askorbik asit ve metiyonin dahil antioksidanlar; koruyucular (örnegin oktadesildimetilbenzil amonyum klorür; heksametonyum klorür; benzalkonyum klorür, benzetonyum klorür; fenol, bütil veya benzil alkol; alkil parabenler, örnegin metil veya propil paraben; katekol; resorsinol; sikloheksanol; 3-pentanol; ve m-kresol); düsük molekül agirlikli (yaklasik 10 rezidünün altinda) polipeptidler; proteinler, Örnegin serum albümin, jelatin veya immünoglobülinler; hidrofilik polimerler, örnegin polivinilpirolidon; amino asitler, örnegin glisin, glutamin, asparagin, histidin, arginin veya lizin; monosakaritler, disakaritler ve diger karbonhidratlar, örnegin glukoz, mannoz veya dekstrinler; selatlama maddeleri, örnegin EDTA; sekerler, örnegin sukroz, manitol, trehaloz veya sorbitol; tuz olusturan karsi iyonlar, örnegin sodyum; metal kompleksleri (örn. Zn- protein kompleksleri); ve/veya iyonik olmayan yüzey aktif maddeler, örnegin TWEENM, PLURONICSW veya polietilen glikol (PEG) bulunur. Buradaki formülasyon ayrica, tercihe göre, birbirini olumsuz yönde etkilemeyen tamamlayici aktiviteleri olanlarda, gerektigi kadar birden fazla aktif bilesik içerebilir. Bu tür ilaçlarin tipi ve etkili miktarlari, örnegin formülasyonda bulunan kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjugat nüktarina ve deneklerin klinik parametrelerine baglidir. Bu tür örnek ilaçlar asagida tartisilmistir. Aktif bilesenler ayrica, örnegin koaservasyon teknikleriyle ya da interfasiyel polimerizasyonla hazirlanan mikrokapsüller, örnegin, sirasiyla hidroksimetilselüloz ya da jelatin mikrokapsüller ve poli-(metilmetasilat) mikrokapsüller içinde, kolloidal ilaç dagitim sistemleri (örnegin, lipozomar, albümin mikrokürecikleri, mikroemülsiyonlar, nano-parçaciklar ve nanokapsüller) ya da nmkroemülsiyonlar içinde hapsedilebilir. Bu gibi teknikler, Remington's Pharmaceutical Sciences l6'nci baski, 0501, A. Ed. (1980) yayininda açiklanmistir. Sürekli salimli preparatlar hazirlanabilir. Sürekli salimli preparasyonlarin uygun örnekleri arasinda, antikoru içeren kati hidrofobik polimerlerin yari geçirgen matrisleri bulunabilir ve bu matrisler, sekilli malzemeler, örn. filmler veya mikrokapsüller biçiminde olur. Sürekli salimli matrislerin örnekleri arasinda polyesterler, hidrojeller (örnegin, poli(2-hidroksietil-metakrilat) ya da poli(vinilalkol)), polilaktitler (U.S. Pat. No. 3,773,919), L- glutamik asit ve y etil-L-glutamat kopolimerleri, bozunmaz etilen-Vinil asetat, bozunur laktik asit-glikolik asit kopolimerleri, örnegin LUPRON DEPOTTM (laktik asit-glikolik asit kopolimeri ve löprolit asetattan olusan enjekte edilebilir mikrokürecikler) ve poli-D-(-)-3-hidroksibütirik asit bulunur. In vivo uygulamada kullanilacak olan formülasyonlarin steril olmasi gerekir. Sterillik, steril filtrasyon membranlari içerisinden filtrasyon yoluyla kolaylikla saglanir. Bir uygulamada, formülasyon izotoniktir. Kan beyin bariyeri mekigi ve/veya bulusun konjügati, çesitli in vivo yöntemlerde kullanilabilir. Örnegin, mevcut beyan, BBB boyunca terapötik bir bilesigin tasinmasi için bir yöntem saglar, bu yöntem, kan beyin bariyeri mekigi ve/Veya konjügatinin, tek degerli baglama varliginin buraya kenetlenmis terapötik bilesigi BBB boyunca tasiyacagi sekilde BBB'ye maruz birakilmasini içerir. Baska bir örnekte, mevcut beyan, bir nörolojik bozukluk ilacin BBB boyunca tasinmasi yöntemini saglamakta olup, yöntem, kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügatinin, tek degerli baglama varliginin buraya kenetlenmis nörolojik bozukluk ilacini BBB boyunca tasiyacagi sekilde BBB'ye maruz birakilmasini içerir. Bir uygulamada, buradaki BBB, bir memelide (örnegin bir insanda), bunlarla sinirli olmamak üzere, asagidaki bir nörolojik bozuklugu olan bir memelide bulunur: Alzheimer hastaligi (AD), inme, demans, kas distrofisi (MD), multipl skleroz (MS), amiyotrofik lateral skleroz (ALS), kistik fibroz, Angelman's sendromu, Liddle sendromu, Parkinson hastaligi, Pick hastaligi, Paget hastaligi, kanser, travmatik beyin hasari ve benzeri. Bir uygulamada, nörolojik bozukluk asagidakilerden seçilir: bir nöropati, amiloidoz, kanser (örnegin MSS veya beyini içeren), bir oküler hastalikr veya bozukluk, bir Viral veya mikrobiyal enfeksiyon, enflamasyon (örnegin MSS veya beyinin), iskemi, nörodejeneratif hastalik, kasilma, davranissal bozukluk, lizozomal depolama hastaligi ve benzeri. Nöropati bozukluklari, uygunsuz veya kontrolsüz sinir sinyallesmesi veya eksikligi ile karakterize sinir sistemi hastaliklari veya anomalileri olup, bunlar arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, kronik agri (örnegin nosiseptif agri), Vücut dokularinin zarar` görmesinden kaynaklanan agri, örnegin, kanser ile ilgili agri, nöropatik agri (sinirlerdeki, omurilikteki veya beyindeki anormalliklerin neden oldugu agri), ve psikogenik agri (tamamen veya çogunlukla bir psikolojik bozuklukla ilgili), genellikle vertigo veya mide bulantisi gibi nöropati bozukluklarina eslik eden bas agrisi, migren, nöropati ve semptomlar ve sendromlari bulunur. Amiloidozlar, MSS'deki hücre disi proteinli birikintilerle iliskili bir hastalik ve bozukluk grubu olup, örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, ikincil amiloidoz, yasa bagli amiloidoz, Alzheimer's hastaligi (AD), Hafif bilissel bozukluk (MCI), Lewy cisimcikli demans, Down sendromu, herediter serebral hemoraji ile amiloidoz (Dutch tipi); Guam Parkinson-demans kompleksi, Beyin amiloid anjiyopatisi, Huntington hastaligi, progresif supranükleer palsi, multipl skleroz; Creutzfeld Jacob hastaligi, Parkinson hastaligi, bulasici süngerimsi ensefalopati, HIV ile ilgili demans, amiyotrofik lateral skleroz (ALS), inklüzyon-vücut miyozidi (IBM), ve beta-amiloid birikimi ile ilgili oküler hastaliklar (baska. bir deyisle, maküler dejenerasyon, drusen ile ilgili optik nöropati ve katarakt) bulunur. MSS kanserleri, bir veya daha fazla MSS hücresinin (baska bir deyisle, bir sinir hücresi) anormal proliferasyonu ile karakterizedir ve bunlar arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, gliyom, glioblastoma multiforme, menenjiyom, astrositom, akustik nöroma, kondroma, oligodendrogliyom, medulloblastomus, ganglioglioma, Schwannoma, nörofibrom, nöroblastom, ve ekstradural, intrameduller veya intradural tümörler bulunur. MSS'nin viral veya mikrobiyal enfeksiyonlari arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, virüslerin (yani, influenza, HIV, poliovirus, rubella), bakterilerin (yani, Neisseria sp., Streptococcus sp., Pseudomonas sp., Proteus sp., E. coli, S. aureus, Pneumococcus sp., Meningococcus sp., Haemophilus sp., ve Mycobacterium tuberculosis) ve diger mikroorganizmalarin örnegin, mantarlar (yani, maya, Cryptococcus neoformans), bulunur, MSS patofizyolojileri ile sonuçlanan parazitler (yani, toxoplasma gondii) veya amipler arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, menenjit, ensefalit, myelit, vaskulit ve akut veya kronik olabilen apse bulunur. MSS enflamasyonu, MSS'ne verilen bir hasarinin neden oldugu enflamasyondur, bu bir fiziksel hasar (baska bir deyisle, bir kaza, cerrahi, beyin travmasi, omurilik yaralanmasi, sarsinti) veya MSS'nin baska bir veya daha fazla hastalik veya bozukluklari ile ilgili bir hasar (baska bir deyisle, apse, kanser, viral veya mikrobiyal enfeksiyon) olabilir. MSS'nin iskemisi, burada kullanildigi sekilde, beyinde anormal kan akisi veya vasküler davranisla veya bunun nedenleriyle ilgili bir grup bozuklugu ifade eder ve bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla sunlari içerir: fokal beyin iskemisi, global beyin iskemisi, inme (baska bir deyisle, subaraknoid hemoraji ve intraserebral hemoraji), ve anevrizma. Nörodejeneratif hastaliklar, MSS'de nöral hücre fonksiyon kaybi veya ölümle iliskili bir hastalik ve bozukluk grubudur ve bunlar arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla: adrenolökodistrofi, Alexander's hastaligi, Alper's hastaligi, Amyotrofik lateral skleroz, Ataksi telenjiektazi, Batten hastaligi, cockayne sendromu, kortiküsobazik dejenerasyon, bir amiloidozun neden oldugu veya iliskili dejenerasyon, Friedreich ataksisi, frontotemporal lop dejenerasyonu, Kennedy's hastaligi, çoklu sistem atrofisi, multipl skleroz, birincil lateral skleroz, progresif supranükleer palsi, spinal musküler atrofi, transvers miyelit, Refsum's hastaligi ve spinoserebellar ataksi bulunur. MSS'nin nöbet hastaliklari ve bozukluklari, MSS'deki uygunsuz ve/Veya anormal elektrik iletimini içerir ve bunlar arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla: epilepsi (baska bir deyisle, yoksunluk nöbetleri, atonik nöbetler, iyi huylu Rolandik epilepsi, Çocukluk yoksunlugu, klonik nöbetler, kompleks kismi nöbetler, frontal lob epilepsisi, atesli nöbetler, infantil spazmlar, juvenil miyoklonik epilepsi, genç yoksunluk epilepsisi, Lennox-Gastaut sendromu, Landau-Kleffner sendromu, Dravet's sendromu, Otahara sendromu, West sendromu, miyoklonik nöbetler, mitokondril bozukluklar, progresif miyoklonik epilepsiler, psikogenik nöbetler, refleks epilepsi, Rasmussen sendromu, basit kismi nöbetler, sekonder genel nöbetler, temporal lob epilepsisi, toniklonik nöbetler, tonik nöbetler, psikomotor nöbetler, limbik epilepsi, kismi- baslangiç nöbetleri, genel-baslangiç nöbetleri, status epileptikus, abdominal epilepsi, akinetik nöbetler, otonomik nöbetler, masif bilateral miyoklonus, katamenial epilepsi, damla nöbetleri, emosyonel nöbetler, fokal nöbetler, gelastik nöbetler, Jacksonian March, Lafora hastaligi, motor nöbetler, multifokal nöbetler, noktürnal nöbetler, isik duyarli nöbet, psödo nöbetler, duyusal nöbetler, gizli nöbetler, silvan nöbetleri, çekilme nöbetleri ve görsel refleks nöbetleri) Davranis bozukluklari, MSS'nin etkilenen kisinin anormal davranisi ile karakterize olan bozukluklar olup, bunlar arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla: uyku bozukluklari (baska bir deyisle, insomnia, parasomnias, kabuslar, sirkadyen ritm uyku bozukluklari, ve narkolepsi), duygudurum bozukluklari (baska bir deyisle, depresyon, suisidal depresyon, anksiyete, kronik efektif bozukluklar, fobiler, panik ataklar, obsesif-kompulsif bozukluk, dikkat eksikligi hiperaktivite bozuklugu (ADHD), dikkat eksikligi bozuklugu (ADD), kronik yorgunluk sendromu, agorafobi, travma sonrasi stres bozuklugu, bipolar bozukluk), yeme bozukluklari (baska bir deyisle, anoreksi veya bulimia), psikozlar, gelisimsel davranis bozukluklari (baska bir deyisle, otizm, Rett's sendromu, Aspberger sendromu), kisilik bozukluklari ve psikotik bozukluklar (baska bir deyisle, sizofreni, sanrili bozukluk ve benzerleri) bulunur. Lizozomal depolama bozukluklari, bazi durumlarda CNS ile iliskili veya MSS-spesifik semptomlari bulunan metabolik bozukluklar olup; bu tür bozukluklar arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla asagidakiler bulunur: Tay-Sachs hastaligi, Gaucher's hastaligi, Fabry hastaligi, Mukopolisakkaridoz (tipler I, II, III, IV, V, VI ve VII), glikojen depolama hastaligi, GMl-Gangliosidoz, metakromatik lökodistrofi, Farber hastaligi, Canavan lökodistrofisi ve nöronal seroit lipofuskinoz tipleri 1 ve 2, Niemann-Pick hastaligi, Pompe hastaligi ve Krabbe's hastaligi bulunur. Bir görünümde, bir ilaç olarak kullanilmak üzere mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügati sunulmaktadir. Ayri görünümlerde, bir nörolojik hastaligi veya bozuklugu tedavi etmede kullanim için mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügati sunulmaktadir (örnegin, Alzheimer's hastaligi). Belirli uygulamalarda, bir tedavi yönteminde kullanima yönelik mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügati sunulmaktadir. Belirli uygulamalarda, mevcut bulus, bireye etkili bir miktardaki mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügatinin uygulanmasini içeren uygulanmasini içeren bir nörolojik hastalik veya bozuklugun bir bireyin tedavi edilmesinin bir yönteminde kullanim için mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügatini saglamaktadir. Yukaridaki uygulamalardan herhangi birine göre bir "birey" tercihe göre bir insandir. Mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügati ya tek basina ya da bir terapideki diger maddeler ile kombinasyon halinde kullanilabilir. Örnegin, mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügati, en az bir ilave terapötik madde ile birlikte verilebilir. Belirli uygulamalarda, ilave bir terapötik madde, mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügati, tedavi için kullanilirken ayni veya farkli bir nörolojik bozuklugu tedavi etmek için etkili olan bir terapötik maddedir. Örnek ilave terapötik maddeler arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla sunlar bulunur: yukarida tarif edilen çesitli nörolojik ilaçlar, kolinesteraz inhibitörleri (örnegin donepezil, galantamin, rovastigmin 've takrin), NMDA reseptör antagonistleri (örnegin memantin), amiloid beta peptid agregasyon inhibitörleri, antioksidanlar, v-sekretaz modülatörleri, sinir büyüme faktörü (NGF) mimikleri veya NGF gen terapisi, PPARy agonistleri, HMS-COA redüktaz inhibitörleri (statinler), ampakinler, kalsiyum kanal blokörleri, GABA reseptör antagonistleri, glikojen sentaz kinaz inhibitörleri, intravenöz immünoglobülin, muskarinik reseptör agonistleri, nikrotinik reseptör modülatörleri, aktif veya pasif amiloid beta peptid immünizasyonu, fosfodiesteraz inhibitörleri, serotonin reseptör antagonistleri ve anti- amiloid beta peptid antikorlari. Bazi uygulamalarda, en az bir ilave terapötik madde, nörolojik ilacin bir veya daha fazla yan etkisini hafifletme kabiliyeti nedeniyle seçilir. Bu gibi yukarida belirtilen kombinasyon terapileri birlikte uygulamayi (burada iki veya daha fazla terapötik ajan, ayni ya da farkli formülasyonlara dahil edilir) ve ayri uygulamayi içermekte olup, ayri uygulama durumunda, mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügati uygulanmasi, ilave terapötik ajan ve/veya adjuvanin uygulanmasindan önce, eszamanli olarak ve/veya ardindan gerçeklestirilebilir. Mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekikleri ve/veya konjügatlari ayrica, diger girisimsel tedavilerle, örnegin, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, radyasyon terapisi, davranissal terapi veya teknikte bilinen ve tedavi edilecek veya önlenecek nörolojik bozukluk için uygun olan diger terapilerle birlikte de kullanilabilirx Mevcut bulusun kan beyin. bariyeri mekigi ve/veya konjügati (ve herhangi bir ilave terapötik madde) herhangi bir uygun yolla uygulanabilir, örnegin parenteral, intrapulmoner ve intranazal ve, arzu edilirse lokal tedavi için, intralezyonal uygulama ile verilebilir. Parenteral infüzyonlar arasinda intramusküler, intravenöz, intraarteriyal, intraperitoneal ya da subkütanöz uygulama Doz uygulamasi herhangi bir uygun yolla, örnegin kismen uygulamanin kisa süreli ya da sürekli olmasina bagli olarak enjeksiyon yoluyla, örnegin intravenöz ya da subkütanöz enjeksiyonlarla yapilabilir. Çesitli doz uygulama planlari, örnegin bunlarla sinirli kalmamak üzere, çesitli zaman noktalarinda tek degerlikli ya da çoklu uygulamalar, bolus uygulama ve atimli infüzyon burada düsünülmüstür. Mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/Veya konjügatlari, iyi tibbi uygulamalarla uyumlu bir sekilde formüle edilir, dozlanir ve uygulanir; Bu. baglamda dikkate alinmasi gereken faktörler arasinda, tedavi edilen belirli bozukluk, tedavi edilen memeli, hasta bireyin klinik durumu, bozuklugun nedeni, ajanin uygulanma alani, uygulama yöntemi, uygulama plani ve tip doktorlari tarafindan bilinen diger faktörler bulunur. Mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügatlari, zorunlu olmamak kaydiyla, ancak istege bagli olarak, ilgili bozuklugun önlenmesi ya da tedavi edilmesinde güncel olarak kullanilan bir veya daha fazla madde ile birlikte formüle edilir. Bu gibi diger maddelerin etkili miktari, formülasyonda mevcut bulunan kan beyin bariyeri mekigi ve/Veya konjügati miktarina, bozukluk ya da tedavi türüne ve yukarida ele alinan diger faktörlere baglidir. Bunlar genellikle ayni dozajlarda ve burada tarif edilen uygulama yollariyla ya da burada tarif edilen dozajlarin yaklasik %1 ila %99'u arasinda ya da deneysel olarak/klinik olarak uygun oldugu belirlenmis olan herhangi bir dozaj ve herhangi bir yolla kullanilir. Hastalik. önlenmesi ya da tedavisi için, mevcut bulusun kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügatinin uygun dozaji (tek basina ya da bir veya daha fazla baska ilave terapötik ajanla birlikte kullanildiginda), tedavi edilecek olan hastaligin türüne, kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügatinin türüne, hastaligin ciddiyetine ve seyrine, antikorun önleyici ya da terapötik amaçla uygulanmasina, terapi geçmisine, hastanin klinik geçmisine ve kan beyin bariyeri mekigi ve/Veya konjügatina yanitina ve hastaya bakan doktorun takdirine bagli olarak degisir. Söz konusu kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügati, hastaya bir kerede ya da bir dizi tedavi halinde uygun sekilde tatbik edilir. Hastaligin türüne ve ciddiyetine bagli olarak, bir veya daha fazla ayri uygulama biçiminde ya da sürekli inmultimerik biçiminde hastaya uygulanacak olan ilk dozaj, yaklasik l ug/kg ile 15 mg/kg (örnegin 0,l mg/kg - lO mg/kg) kan beyin bariyeri mekiginin ve/veya konjügati düzeyi arasinda olabilir. Tipik bir günlük dozaj, yukarida bahsedilen faktörlere dayali olarak yaklasik 1 ug/kg ila 100 mg/kg veya daha fazlasi arasinda degisebilir. Birkaç gün veya daha uzun süreler boyunca tekrarlanan uygulamalarda, duruma bagli olarak, tedavi genellikle, hastalik semptomlarinin istenen süpresyonu meydana gelene kadar sürdürülür. Örnek niteligindeki bir antikor dozaji, yaklasik 0,05 mg/kg ile yaklasik 10 mg/kg arasinda degisebilir. Bu nedenle, yaklasik 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg ya da 10 mg/kg'lik bir veya daha fazla doz (ya da bunlarin herhangi bir kombinasyonu) hastaya uygulanabilir. Bu gibi dozlar aralikli olarak, örnegin her hafta ya da her üç haftada bir uygulanabilir (örnegin hastaya yaklasik iki ile yaklasik yirmi doz arasinda, örnegin yaklasik alti doz antikor uygulanir). Yüksek bir baslangiç yükleme dozu ve ardindan bir veya birçok düsük doz uygulanabilir. Ancak, diger dozaj rejimleri de yararli olabilir. Bu terapinin ilerleyisi, geleneksel teknikler ve analizler yardimiyla kolaylikla izlenebilir. Imalat ürünleri Mevcut bulusun baska. bir* görünümünde, yukarida tarif edilen bozukluklarin tedavisi ve/veya önlenmesi için yararli malzemeler içeren bir ürün saglanir. Bu imalat ürünü, bir kap ve kabin üzerinde ya da kapla ilintili olarak bir etiket ya da prospektüs içerir. Uygun kaplar arasinda, örnegin, siseler, viyaller, siringalar, IV çözelti torbalari Vb. bulunur. Kaplar, Örnegin cam ya da plastik gibi çesitli malzemelerden olusabilir. Kabin içinde, bozuklugun tedavi edilmesi, önlenmesi ve/veya teshis edilmesi için tek basina ya da baska bir bilesimle birlikte etkili olan bir bilesim bulunur ve steril bir erisim agzina sahip olabilir (örnegin kap, bir derialti enjeksiyon ignesiyle delinebilen bir tikaci bulunan bir intravenöz solüsyon torbasi ya da bir flakon olabilir). Bilesimdeki en az bir aktif madde, mevcut bulusun bir kan beyin mekigi ve/veya konjügatidir. Etiket ya da prospektüs, bilesimin seçilen durumun tedavisi için kullanildigini belirtir. Ayrica, imalat ürünü, (a) içerisinde mevcut bulusun bir kan beyin bariyeri mekigi ve/veya konjügatini içeren bir bilesim bulunan bir birinci kaba ve (b) içerisinde baska bir sitotoksik ya da terapötik ajan içeren bir bilesim bulunan bir ikinci kaba sahip olabilir. Mevcut bulusun bu uygulamasinda imalat ürünü ayrica bilesimlerin belirli bir durumun tedavisinde kullanilabilecegini belirtilen bir prospektüs içerebilir. Alternatif› veya ek olarak, imalat ürünü ayrica, farmasötik olarak kabul edilebilir bir tampon, örnegin enjeksiyon için bakteriyostatik su (BWFI), fosfat tamponlu salin, Ringer solüsyonu ve dekstroz solüsyonu içeren ikinci (ya da üçüncü) bir kap içerebilir. Imalat ürünü ayrica. bir ticari son kullanici açisindan istenebilecek olan baska malzemeler, örnegin baska tamponlar, seyrelticiler, filtreler, igneler ve siringalar içerebilir. Imalat ürünü tercihe göre ayrica bir kisideki bir nörolojik bozukluk tedavi etmek için talimatlar bulunan bir prospektüs içerir, burada talimatlar, burada açiklanan sekildeki kan beyin bariyeri mekigi ve/Veya konjügatin nörolojik bozuklugu tedavi ettigini göstermektedir ve tercihe göre kan beyin bariyeri mekigi ve/Veya konjügatin R/BBB'ye monovalent baglanma modu nedeniyle BBB boyuncar alimi arttirdigini göstermektedir. Örnekler Örnek 1: Ekspresyon plazmidlerinin üretimi Bazik/standart memeli ekspresyon plazmidi Arzu edilen proteinler, insan embriyonik böbrek hücrelerinin (HEK 293) geçici transfeksiyonu ile eksprese edilmistir. Bir arzu edilen gen/proteinin (örnegin antikor-Fab multimerik protein) ekspresyonu için asagidaki fonksiyonel elementleri ihtiva eden bir transkripsiyon birimi kullanilmistir: ° intron A'yi içeren insan sitomegalo Virüsünden (P-CMV) yakin erken arttirici ve promotör, bölgesi (5'UTR), ° eksprese edilecek bir gen/protein (örnegin tam uzunluklu antikor agir zinciri), ve ° sigir büyüme hormonu poliadenilasyon sekansi (BGH pA). Temel/standart memeli ekspresyon plazmidi, eksprese edilmesi istenen geni içeren ekspresyon biriminin/kasetinin yaninda sunlari içerir: vektöründen bir replikasyon kaynagi, ve ° E. coli'de ampisilin direnci kazandiran bir beta-laktamaz Asagidaki antikor-scFab füzyon polipeptitlerini/proteinlerini kodlayan ekspresyon plazmitleri olusturulmustur: Tetravalan Mab31-scFab(8D3) (Sekil lC) (Mab31 = insan monoklonal antikorunu taniyan Abeta. Mab 31'in INN'si = Gantenerumab) Agir zincir (-(Gnn4-VL-Ck-(Gnn6-GG-VH- CHl) (Seq. Id. No. 1) Mab3l-scFab(8D3) agir zincir füzyon proteini bilesimi: ° C ucu Lys olmayan Mab31 insan IgGl agir zinciri domeni (VL) varyanti (L596V ve L5981) (Boado, R.J. Zhang, Y. Wang, Y ve Pardridge, W.M., Biotechnology and Bioengineering ° Insan C-kappa hafif zinciri ° GlisinSerin-baglayici - Fare 8D3 anti-transferrin antikorunun degisken agir zincir domeni (VH) (Boado, R.J. Zhang, Y. Wang, Y ve Pardridge, W.M., ° Insan IgGl CH3 agir zincir domeni Hafif zincir ( (Seq. Id. No. Mab3l hafif zincirinin bilesimi - Mab31 insan Ckappa hafif zinciri Üç degerlikli Mab3l-scfab(8D3) (Sekil lB) VL-Ck-(G4S)6-GG-VH-CH1) (Seq. Id. No. 3) Topuz Mab31-scFab(8D3) agir zincir füzyon proteininin bilesimi ° CH3 topuzu nmtasyonu T366W içeren C-terminal Lys olmadan Mab3l insan IgGl agir zinciri ve ilave bir disülfid köprüsünün olusumu için S354C mutasyonu ° GlisinSerin-baglayici ° Fare 8D3 anti-transferrin antikorunun degisken hafif zincir domeni (VL) varyanti (L596V ve L5981) (Boado, R.J. Zhang, Y. Wang, Y ve Pardridge, W.M., Biotechnology and Bioengineering ° Insan C-kappa hafif zinciri domeni (VH) (Boado, R.J. Zhang, Y. Wang, Y ve Pardridge, ° Insan IgGl CH3 agir zincir domeni Delik agir zinciri ( (Seq. Delik Mab31 agir zincir füzyon proteininin bilesimi insan IgGl agir zinciri ve ilave bir disülfid köprüsünün olusumu için Y349C mutasyonu Hafif zincir ( (Seq. Id. No. Mab31 hafif zincirinin bilesimi - Mab31 insan Ckappa hafif zinciri Örnek 2: Tek ve çift Mab31-scFab yapilari sFab ve dFab'in saflastirilmasi Antikor zincirleri, F17 ortami içinde (Invitrogen Corp.) kültürlenen HEK293 hücrelerinin (insan embriyonik böbrek hücre hatti 293 türevli) geçici transfeksiyonuyla üretilmistir. Transfeksiyon için "293-Fektin" transfeksiyon ayiraci (lnvitrogen) kullanilmistir. Antikor zincirleri, tetravalan Mab31-scFab(8D3) agir zinciri ve sirasiyla, Mab31 için karsilik gelen hafif zincir veya topuz ve delik trivalan Mab31-scFab(8D3) agir zincirleri ve Mab3l için karsilik gelen hafif zincir için kodlama yapan iki (tetravalan Mab31- scFab(8D3)) veya üç (trivalan Mab31-scFab(8D3)) farkli plazmidden eksprese edilmistir. Iki veya üç plazmit, transfeksiyon üzerine esmolar bir plazmid oraninda kullanilmistir. Transfeksiyonlar, üreticinin talimatlarinda belirtilen sekilde gerçeklestirilmistir. Transfeksiyondan yedi gün sonra antikor füzyon proteinleri içeren hücre kültürü üst fazlari toplanmistir. Üst fazlar saflastirmaya kadar dondurulmus olarak saklanmistir. Proteinler, süzülmüs hücre kültürü üst fazlarindan saflastirilmistir. Üst fazlar, bir protein A Sepharose kolonuna (GE Healthcare) uygulanmis ve PES pH 7.4 ile yikanmistir. Antikorlarin elüsyonu, pH 3.0'da 100 mM Citate tamponu ile gerçeklestirilmistir, ardindan pH 6.5'e hizli nötrlestirme yapilmistir. Konsantrasyon agregat olusturduktan sonra, protein ve diger yan ürünler, monomerik antikorlardan mM histidin, 140 mM NaCl içinde, pH 6.0 boyut dislama kromatografisiyle (Superdex 200; GE Healthcare) ayrilmistir. Her bir fraksiyon, tamamiyle birlestirilmemis moleküllerin ve diger yan ürünlerin miktarinin belirlenmesi için analitik SEC (TSK G ve çip bazli kilcal elektroforez sistemi (CE- SDS, LabChipGX, Caliper) üzerinde analiz edilmistir. Yan ürünler içermeyen monomerik antikor fraksiyonlari toplanmistir. Bir MILLIPOREAmicon Ultra (30 moleküler agirlik kesiti) santrifüj yogunlastirici kullanilarak konsantrasyondan sonra, protein -80 °C'de saklanmistir. Son ürünün analitik karakterizasyonu UV protein tayini, CE-SDS, boyut dislama kromatografisi, kütle spektrometrisi ve ayrica endotoksin tayini ile gerçeklestirilmistir. Örnek 3: Tekli scFab (sFab) ve çiftli scFab (dFab) yapilarinin ELISA baglanma verileri MAb31-8D3 yapilarinin fare transferrin reseptörüne (mTfR) baglanmasi, indirekt ELISA ile degerlendirilmistir. Bu amaçla, rekombinant mTfR (ekstraselüler domen; Sino Biological) Maxisorb mikrotitre plakasina (Nunc) l ug/mL'de PBS içinde 4 °C'de gece boyunca kaplanmistir. Oda sicakliginda 1 saat süreyle %1 Crotein-C/PBS (bloklama tamponu; Roche) içinde bloke ettikten ve % ile 4 yikamadan sonra, mAb3l-8D3 yapilari kuyucuklara bloke edici tamponda 0,01 ila 150 nM arasindaki konsantrasyonlarda ilave edilmis ve 1 saat süreyle oda sicakliginda enkübe edilmistir. 4 yikama adimindan sonra, yapilar, 1:10,000 dilüsyonda blokaj tamponu (1 RT) içinde anti-insan-IgG-HRP (Jackson lmmunoresearch) ilavesiyle tespit edilmistir, daha sonra 6 yikama ve TMB içinde (Sigma) enkübasyon yapilmistir. Absorbans, 1 N HCl ile renk gelisimini durdurduktan sonra 450 nm'de okunmustur. Sekil 3, iki degerlikli mAb31-8D3-dFab'in mTfR'ye baglanmasinin, 8D3 IgG'un, baglanmasi ile karsilastirilabilir olurken tek degerli mAb31-8D3-sFab yapisinin. indirgenmis bir afinite gösterdigini ortaya koymaktadir. MAb31'in islevselligi ELISA ile dogrulanmistir. Kisaca, Abeta (1-40), fibriller Abeta üretmek için 37°C'de 3 gün süreyle PBS içinde 7 ug/mL'de Maxisorp plakalari üzerine kaplanmis, sonra oda sicakliginda 3 saat kurutulmustur. Plaka, oda sicakliginda 1 saat boyunca PBS'de (bloklama tamponu) %1 Crotein C ve %0,1 RSA ile bloke edilmis, daha sonra bir kez yikama tamponu ile yikanmistir. mAb31 yapilari, bloke edici tampon içerisinde 100 nM'ye kadar konsantrasyonlarda ilave edilmis ve gece boyunca 4 °C'de enkübe edilmistir; 4 yikama. asamasindan sonra yapilar yukarida belirtildigi gibi tespit edilmistir. Sekil 4, her iki mAb3l-8D3 yapisinin (sFab ve dFab) Abeta fibrillerinin immobilize edilmis mAbBl'dekine benzer bir afinite ile baglandigini göstermektedir. Örnek 4: Sadece tekli scFab BBB'yi geçiyor ve plaklari boyuyor Beyin kesitleme ve immünohistokimyasal boyama: PBS perfüzyonundan sonra beyinler hazirlanmis ve sagittal kriyokesitler, lateral ~ 1,92 ve 1,68 millimeter arasinda Paxinos ve Franklin beyin atlasina göre gerçeklestirilmistir. Beyinler, -15 °C'de 20 mikronluk nominal bir kalinliga bir Leica CM3050 S kriyostat kullanilarak kesitlenmis ve önceden sogutulmus cam lameller üzerine yerlestirilmistir (Superfrost plus, Menzel, Almanya). Her beyin için, ayni lamele 80 mikron aralikli üç kesit yerlestirilmistir. Kesitler, 5 dakika boyunca PBS içerisinde yeniden hidratlanmis ve ardindan 2 dakika boyunca -20 °C'ye önceden sogutulmus %100 asetona daldirilmistir. Diger tüm adimlar oda sicakliginda yapilmistir. Beyin kesitlerinin oldugu lameller PBS ile yikanmis, pH 7.4 ve spesifik olmayan baglanma bölgeleri Ultra V blogunda (LabVision) 5 dakika boyunca sirali enkübasyonla bloke edilmis, daha sonra PBS yikamasi ve PES içinde %2 normal keçi serumlu güç blok çözeltisi (BioGenex) içinde 20 dakika süreyle enkübasyon gerçeklestirilmistir. Lameller direkt olarak ikincil antikor, (agir ve hafif zinciri için spesifik) Probes) konjüge edilmis bir afinitesi aritilmis keçi anti- insan lgG'si ile PBS içinde %2 normal keçi serumu içinde, pH 7.4'te 1 saat süreyle bir 20 mikrog/ml konsantrasyonunda enkübe edilmistir. PBS ile yogun yikamadan sonra, plak lokalizasyonu, Alexa Fluor 488 boyasina 0,5 Hücrog /ml'de 1 saat süreyle güç blok çözeltili (BioGenex) ve %10 normal koyun serumlu PBS içinde Abeta'ya karsi konjüge edilmis bir Roche kurum içi murin monoklonal antikoru olan BAP-2 ile enkübasyon yapilarak Abeta plaklari bakimindan bir çift etiketleme ile degerlendirilmistir. PBS yikamasindan sonra, lipofusinin otofloresansi, 4 mM CuSO4 içinde 50 mM amonyum asetat, pH 5 içinde 30 dakika süreyle enkübasyon yoluyla baskilanarak indirgenmistir. Lameller iki kez damitilmis suyla durulandiktan sonra, lameller Confocal Matrix'e (Micro Tech Lab, Avusturya) gömülmüstür- Konfokal mikroskopi Her bir PSZAPP-farenin beyninin her birinden, ön kortekste plak içeren bölgelere (birincil motor korteksin bölgesi) sahip üç görüntü alinmistir. Görüntüler, l Airy igne deligi ayarina sahip bir Leica TCS SP5 konfokal sistemi ile kaydedilmistir. Alexa Fluor 488 boyalari ile immünoisaretlenmis plaklar, ayni spektral sartlarda (488nm'lik bir eksitasyon ve bir 500-554nm bant. geçis emisyonu) foto çogaltini kazanci ve offset (tipik olarak, sirasiyla 770 V ve %-0) bir %30 lazer gücüne ayarlanmis halde yakalanmistir. Doku kesitlerinin erisilebilir yüzeyindeki bagli ikincil Alexa Fluor 555 antikorlari uygulanmis saptama antikorunun emisyon dalgaboyu araligini kapsayan bir 570 ila 725 nm arasinda degisen bir penceredeki 561 nm'deki eksitasyon lazer hattinda kaydedilmistir. Cihaz ayarlari; özellikle, lazer gücü, tarama sürati, kazanç ve offset gibi ayarlar, test edilen insan anti- Aß antikorlarinin kiyaslamali yogunluk ölçümlerine imkan vermek amaciyla görüntü alimlari sabit tutulmustur. Lazer gücü 850 V ve %O'lik bir nominal ofset olmustur. Bu, ayni ayarda hem soluk hem de çok lekeli plaklarin görsellestirilmesini saglamistir. Toplama frekansi 400 Hz olmustur. Konfokal taramalar su içinde bir HCX PL APO 20x 0,7 IMM UV objektifli tek optik katmanlar olarak, bir 512 x 512-piksel çözünürlügünde kaydedilmis ve düsey eksende bir optik ölçme derinligi doku kesitinde görüntüleme saglamak için etkilesimli olarak kontrol edilmistir. Frontal korteksin 2-5 katmanlarinda bulunan amiloid plaklari görüntülenmis ve flüoresan yogunluklari ölçülmüstür. Istatistiksel analiz Immünopozitif bölgeler TIFF görüntüsü olarak görsellestirilmis ve ImageJ versiyonu ile floresan yogunlugu ve alanin (piksel olarak ölçülen) miktarinin belirlenmesi için islenir. Kantifikasyon için 5 zemindeger yogunlugu, her görüntüden çikarilmis ve 5 kare pikselden küçük pozitif bölgeler filtrelenmistir. Seçilmis izoyüzeylerin toplam floresans yogunlugu tekli pozitif bölgelerin yogunluklarinin toplami olarak belirlenmis ve ortalama piksel yogunlugu toplam yogunlugun analiz edilen piksel sayisina bölünmesiyle hesaplanmistir. Ortalama ve standart sapma degerleri her bir hayvan için üç farkli bölümden çekilmis dokuz fotograftan elde edilen tüm ölçülen izoyüzeylerinden Microsoft Excel (Redmond // WA, ABD) ile hesaplanmistir. Grup karsilastirmasi için istatistiksel analiz Student's t test veya bir Mann-Whitney testi kullanilarak gerçeklestirilmistir. mg/ml mAb3l (Sekil 1A'nin yapisi), 13,3 mg/kg sFab-mAbBl 1 (Sekil lB'nin yapisi) ve 16,7 mg/kg dFAb-mAb3l (Sekil 1C'nin yapisi) i.V. olarak farelerde kuyruga enjekte edilmis ve 8 saat sonra beyine PBS püskürtülmüstür. Bölümler yukarida tarif edilen sekilde hazirlanmis ve keçi anti-insan IgG'si ile lekelenmistir. MAb3l yapisi için neredeyse hiçbir spesifik sinyal tespit edilmemistir (Sekil 4A). Hem plak hem de kilcallarin sFab-mAbBl kapsamli boyamasi, tespit edilirken (Sekil 4B), dFab-mAb3l'in sadece kilcal damarlari boyadigi tespit edilmistir (Sekil 4C). Bu, transferrin reseptörüne yönelik tek degerlikli bir baglanma modunun (sFab-mAb3l), yapiyi beyin endotel hücreleri üzerinden BBB'ye getirmede çok daha etkilidir. Iki degerlikli baglayici molekülün (dFab- mAb3l) kantifikasyonu, Sekil 5'te gösterilmektedir. Veriler, dFab-mAb3l yapisi için plak dekorasyonunda artis olmadigini göstermektedir, yapinin kilcal birikmesinden dolayi sadece toplam yogunlukta bir artis söz konusudur. Örnek 5: Tekli bir scFab yapisi ile beyin maruziyet miktarinin belirlenmesi Deneysel prosedür Örnek 4'te tarif edilmektedir. sFab-mAb3l beyin maruziyetinin kantifikasyonu, Sekil 6'da 10 mg/ml mAb3l (Sekil lA'nin yapisi) ve 13,3 mg/kg sFab-mAb3l (Sekil lB'nin yapisi) kullanilarak gösterilmistir. sFab-mAb3l yapisinin enjeksiyonundan henüz 8 saat sonra mAb3l'e kiyasla çok fazla alim bulunmaktadir (yaklasik 55 kat artis). Benzer veriler, 25 mg/ml mAb3l (Sekil lA'nin yapisi) ve 33,3 mg/kg sFab-mAb3l (Sekil lB'nin yapisi) kullanilarak dozdan 24 saat sonra elde edilmistir. Sekil 6 ayrica, sFab-mAb3l'in geçici kapiler boyama göstermekte olup, bu, zaman içinde hedefleme etkisi ve BBB'nin geçilmesini ortaya koymaktadir. Bütün bu veriler, Sekil 6'da belirtildigi gibi oldukça anlamlidir. Sekil 7, düsük bir dozdaki mAb3l (yapisi Sekil lA'in) ve sFab- mAb3l (yapisi Sekil lB'in) yapisinin verilerini göstermektedir. Yine, sadece sFab-mAb31 yapisi, beyin endotel hücrelerini geçebilir ve beyindeki plagi dekore eder. Maksimum etkiye dozdan 8 saat sonra zaten ulasilmistir. mAb3l yapisi için sadece daha yüksek bir dozda (10 mg/kg) ve nispi uzun sürede (7 gün), beyindeki Abeta plaklarina baglanma sinyalinde artis trendi olmustur (Sekil 7). Bütün bu veriler, Sekil 7'da belirtildigi gibi oldukça anlamlidir. Örnek 6: Çiftli bir scFab yapisi ile hücre yüzeyi TfR'sinin spesifik asagi regülasyonu Deneysel detaylar: 6 kuyucuklu bir plaka formatinda kültürlenmis bEnd3 hücreleri. dFab-mAb3l, sFab-mAbBl ile ortak tedaviden 2-3 gün sonra veya 24 saat süreyle tedavi edilmemis ctr. Ardindan ortam çikarilmis/aspire edilmis ve hücreler buz soguklugundaki PBS (-MgCl)(-CaCl) (Gibco 14190-094), 5 ml/kuyu ile iki kez yikanmistir. 1 ml Tripsin/EDTA (Lonza CC- 5012)/küyü ilave edilmis, tüm. hücreler` ayrilincaya kadar 15 dakika süreyle 37°C'de enkübe edilmistir. 1 ml tripsin nötrlestirme çözeltisi (buz soguklugunda) (Lonza CC-5002) ile tepkime durdurmustur. 2 ml tripsin/EDTA -+ nötrlestirme çözeltisi bir 50ml Falkon tüpünde toplanmis ve buz üzerinde muhafaza edilmistir. Hücrelerin 4 °C'de 1400 rpm'de 10 dakika santrifüjlenmesi. Peletler, 50 ml buz soguklugundaki bEnd3 ortami (DMEM-lZ (Gibco içinde yeniden süspanse edilmistir. Hücrelerin 4 °C'de 1400 rpm ile 10 dakika santrifüjlenmesi. Pelet, 3 ml buz soguklugunda FACS-Tampon (BD 554656) içinde tekrar süspansiyon haline getirilmistir. Hücre sayilari: a) sFab tüpü (2,5x105 hücre/ml) canlilik: %47, b) dFab tüpü (3,18x105 hücre/ml) canlilik: %55, c) ctr. tüpü (4,6x105 hücre/ml) canlilik: %57. FACS boyamasi lxlO5 hücre/eppendorf tüpü dagitilmis ve santrifüje edilmistir (4 °C, 10 dakika, 1500rpm). Üst faz aspire edilmistir; a) 100 mikroL'e kadar buz sogüklügündaki FACS-tamponü (BD 554656) ile dolu CD71-PE (klon R17217-IgG2a. monoklonal) (Santa cruz sc- 100 mikroL'ye kadar buz soguklugündaki FACS-tamponu (BD (siçan anti fare IgGZa (200 mikrog/ml)) 5 mikrog antikoru/peleti (boyama hacmi 100 mikroL), c) buz soguklügundaki FACS-tamponü (BD 554656) içinde Alexa için izotip ctr. 1 saat boyunca buzda karanlikta enkübasyon. Buz soguklugunda FACS-Tampon ile 1,5 ml'ye kadar doldurulur ve santrifüjlenir (4 °C, 10 dak, 1500rpm). Topak, 1,5 ml buz soguklugunda FACS-Tampon ile iki kez yikanmis ve topak, son olarak 500 mikroL PBS içinde tekrar askiya alinmistir. FACS ölçümü, Guava Flow Cytometry cihazi kullanilarak yapilmistir. Veriler, çift (dFab) yapisinin (Sekil 88), hücre yüzeyindeki Transferrin reseptörünü asagi düzenliyor göründügünü göstermektedir. Bu, mevcut test kurulumundaki tekli (sFab) yapi ile tespit edilemez (Sekil 8A), bu da, tek degerlikli bir baglanma modunun hücre trafigi ve beyin endotel hücrelerinde hücre yüzeyindeki Transferrin reseptörünün miktarini belirleyen geri dönüsüm üzerinde dogrudan etkiye sahip olmadigini göstermektedir. Örnek 7: Tekli ve çiftli scFab yapisinin in vivo hücre içi siniflandirilmasi APPswe/PSZ transgenik farelerine, i.v (kuyruk enjeksiyonu) olarak asagidaki MAb31 (10 mg/kg), sFab-MAb31 (13,3 mg/kg) veya dFab-MAb31 (17,44 mg/kg) yapilari enjekte edilmistir. Enjekte edilen doz, referans olarak kullanilan MAb31 ile molekül boyutunu yansitmaktadir. Enjeksiyondan 15 dk veya 8 saat sonra, fareler COz ile ötenazi edilmis ve asagidaki sekilde muamele edilmistir. Kalbin sag kalp atriyumu kesilerek kan ve perfüzyon çözeltisinin disari akabilmesi saglanmistir. Sol kalp ventrikül kesilmis ve 10 numarali gavaj probu aort içine sokulmustur. Yaklasik 20 ml PBS (~10 ml/dak, oda sicakligi), ardindan PBS içinde 30 ml %2 PFA enjekte edilmistir. Beyinler çikarilmis ve ayni perfüzat içinde 7saat00 süreyle daha enkübe edilmistir. Immünofloresan boyama için kullanilan 100 mikron beyin serbest yüzer kesitleri olusturmak için Vibratome kullanilmistir. Kesitler önce geçirgenlestirilmis ve PBS-%O,3 Triton X-100-%1O esek serumü kullanilarak bloke edilmistir. Ardindan, kesitler gece boyunca PES-5 esek serumunda seyreltilmis belirtilen primer antikorlarla enkübe edilmistir. Üretici önerilerini takip ederek moleküler problar ikincil antikorlar kullanilmistir. Görüntüler bir Leica SP5 konfokal mikroskobu kullanilarak elde edilmistir, görüntü isleme ve 3D rekonstrüksiyon için Imaris yazilimi kullanilmistir. Bu veriler, periferik olarak uygulanan sFab-MAb3l ve dFab- MAb31'in beyin endotel hücreleri tarafindan alimini göstermektediru MAb31, sFab-MAb31 ve dFab-MAbBl, Alexa 555'e baglanmis bir keçi anti-insan antikoru kullanilarak tespit edilmistir. Sekil 9'da gösterilen sekilde, hem sFab-MAb31 (Sekil 9A) hem de dFab-MAb3l'in (Sekil 9B), beyin damarlarini, enjeksiyondan 15 dakika sonra dagilimlarinda bir fark olmadan dekore etmektedir. Enjeksiyondan 8saat00 sonra, sFab-MAb31, parankime ulasir ve amiloid plaklarini dekore ederken (Sekil 9C oklar), dFab-MAbBl (Sekil 9D) 15 dakika zaman noktasina benzer sekilde beyin damarlarinda kalir. Parankimde, dFab- MAb3l ile herhangi bir amiloid plagi tespit edilememistir. Sekil 10: Arastirmada kullanilan tüm yapilarin bütünlügünü kontrol etmek için, 18 aylik beyin kriyokesitlerinin boyanmasi MAb3l (Sekil lOA), sFab-MAb3l (Sekil 10B) veya dFab-MAB31 (Sekil 10C) kullanilarak yapilmistir. Sonuçlar, 3 yapinin da transgenik farelerin beyninde amiloid plaklari tespit ettigini göstermistir. Sekil 11-12: Yüksek çözünürlüklü konfokal mikroskopi, sFab (Sekil 11) ve dFab-MAb31'in (Sekil 12) beyin kilcallarinin luminal yanini dekore etmedigini ancak, endotel hücrelerinin luminal membranini geçen vezikül benzeri yapilar içerisinde ve endotel hücresi sitozolü içerisinde bulundugunu göstermektedir. Sekil 11 ve Sekil 12'deki oklar, endotel hücre çekirdeklerinin abluminal tarafinda sFab veya dFab-MAb31 yapilarini içeren 'vezikülleri gösterir. Birlikte kul veriler, hem sFab-MAb31 hem de dFab-MAb31'in endotel hücrelerine girebildigini ama sadece sFab-MAb31'in vaskülatürü geçebildigini ve amiloid plaklarina ulasabildigini göstermektedir. Mevcut bulusun yöntemleri ve bilesimleri MSS'ye dagilan antikor kisminin büyük. ölçüde iyilestirilmesi ve böylelikle MSS'de terapötik bir konsantrasyona daha kolay ulasmasi için bir yol saglar. Mevcut bulusun yöntemleri ve bilesimleri, yenidir ve abluminal bölgeye ulasmak için optimal ve bozulmamis bir hücre içi yol/tasnifleme kullanilarak BEC'ler içindeki farkli organellerden geçme etkinligini önemli ölçüde Örnek 8: BBB'yi geçmek için monovalent reseptör baglama modu çok önemlidir Anti-Aß monoklonal antikor mAb31, çok spesifik ve güçlü bir Aß plak baglayici olup, beyin parankimi içindeki hedef bagliligini ölçmek için bize güçlü bir okuma saglar. PSZAPP çift transgenik amiloidoz modelini, iki Beyin Mekigi yapisinin mAb3l ebeveyn antikoruna kiyasla beyin maruziyetinin miktarini arastirmak için kullandik. Üç varyant intravenöz olarak 10 mg/kg'de enjekte edilmis ve beyine maruziyeti derecesi enjeksiyondan 8 saat sonra plaklardaki mevcut antikor miktari ölçülerek belirlenmistir. dFab yapisi için, mAb31'e kiyasla plak dekorasyonunda anlamli bir artis tespit edilmemistir (Sekil 13A). Bununla birlikte, sFab yapisi için, ana mAbEl antikoru ile karsilastirildiginda plak dekorasyonunda büyük bir artis olmustur. Amiloid plaklarda hedef baglanti, etiketli bir ikincil antikor kullanilarak floresans yogunlugu miktarina dayali olarak sFab yapisi için 50 kattan fazla artmistir. sFab yapisi, genis bir plak dekorasyonu göstermis olma da (Sekil l3D), dFab yalnizca mikrodamarlarda tespit edilmistir (Sekil l3C), bu, dFab yapisinin beyin mikrodamarlarini hedefledigini ve girdigini, ancak abluminal taraftan kaçamadigini göstermistir. sFab yapisinin 2,66 mg/kg'lik düsük bir dozdaki hedef angajman kapasitesi ve 7 güne kadar uzun süreli in vivo maruziyet süresini incelemis bulunmaktayiz. Maksimal plak dekorasyonuna 8 saat içerisinde ulasilmis, daha sonra tek bir enjeksiyondan en az bir hafta sonra kalici plak baglanmasi söz konusu olmustur (Sekil 13E). Önceki bir çalismada, ana mAb3l'in enjeksiyondan 7 gün sonra maksimum plak baglanmasina ulastigi gösterilmistir. Mikrodamar yapilarinda lekelenmenin kantifikasyonu, sFab yapisinin lokalizasyonunun BBB'de çok geçici oldugunu göstermis, bu da, yapinin bariyeri geçtigi nispeten hizli orani ortaya koymustur. Enjeksiyondan 7 saat sonra 2 nq/kg'de ana antikor mAb3l için (Sekil lBF) ve sFab yapisi için ekimolar konsantrasyondaki (Sekil 13G) temsili plak boyama görüntüleri, sFab beyin mekik yapisi ile elde edilen plak baglamasindaki artisi göstermektedir. sFab yapisi, sadece lizozomal kompartmanla küçük bir kolokalizasyon göstermekte, bu, muhtemelen TfR'nin normal esas trafigini lizozoma yansitmaktadir. In vitro çalismalarimiz sFab yapisinin geri dönüsüm ve transitozunu da göstermistir. Birlikte ele alindiginda, bu bulgular sFab yapisinin TfR'nin normal trafigini engellemedigini göstermektedir. Tersine, dFab yapisi lizozomal kompartimanla kuvvetli bir kolokalizasyon gösterir, ancak ne in vitro ne de in 'vivo olarak transitoz aktivitesi yoktur. Örnek 9: BBB boyunca artan antikor iletimi, gelismis in vivo potansina çevirilir Bir sonraki deney grubunda, bir monovalent baglanma modu kullanarak beyin Haruziyetindeki önemli artisin, uzun süreli bir tedavi çalismasinda anti-AB antikorunun in vivo potansiyelini arttirip arttirmadigini sorduk. sFab yapisini ve kontrol ana antikoru mAbBl'i üç ay boyunca haftalik olarak enjekte ettik. Önceki 5 aylik bir çalismada, terapötik antikor mAb31'in 20 mg/kg'da plak yükünü azalttigi gösterilmistir. Sekil 14'te gösterilen verilere dayanarak, gelismis beyin maruziyetinin in vivo potensin artmasina neden olup olmayacagini arastirmak için iki düsük doz seçtik. Sondaki hedef plak baglanmasi, her iki dozda da sFab yapisina ana mAb3l antikorundan daha güçlü bir hedef angajmani oldugunu göstermistir (Sekil 14 A-D). APPPSZ çift transgenik farelerde amiloidozun derecesi, referans hattinda nicellestirilmis ve araç, düsük doz ana mAb3l ve düsük dozda sFab yapisi tedavisine devam edilmistir. Bu düsük dozlarda, ana monoklonal mAb3l ile in vivo etki saptanmamistir (Sekil l4E), bu, 5 aydan uzun süren uzun süreli bir çalismaya dayanarak beklenen bir durum olmustur. Tersine, 2,67 mg/kg düsük dozda sFab yapisi ile hem korteks hem de hipokampüsteki plak sayisinda anlamli bir azalma gözlenmistir. Çok› daha düsük 0,53 mg/kg dozunda dahi (Sekil 14E), istatistiksel anlamliliga erismis olmasa da, özellikle kortekste sFab yapisi lehine bir egilim görülmüstür. Plak boyutlarinin ikincil analizi, mAb31 için eylem sekliyle uyumlu olarak, küçük plakalar için plak sayisinin daha belirgin bir sekilde azaldigini ortaya çikarmistir. Bu veriler, monovalent bir TfR baglanma modu ile saglanan beyin penetrasyonunda artisin, Alzheimer hastaligi patolojisinin kronik bir hayvan modelinde terapötik bir antikorun potansinda önemli bir iyilesme sagladigini göstermektedir. Örnek 10: Farkli antikor füzyon proteinlerinin TfR+ BaF3 hücreleri üzerindeki in vitro (ADCC) efektör fonksiyonu BaF3 hücrelerini eksprese eden transferrin reseptörü (DSMZ, # CLPZ04004) (TfR+) farkli antikor-füzyon molekülleri tarafindan uyarilan antikor-bagimli hücre toksisite (ADCC) deneyleri için hedef hücreler olarak kullanilmistir. Kisaca, yuvarlak tabanli 96 kuyucuk içerisine ekilmis 1x104 BaF3 hücresi ve tercihe göre insan NK92 efektör hücreleri (yüksek afiniteli CD16 klonu 7A2F3; Roche GlycArt) ile bir 3:1 efektör/hedef› oraninda antikor füzyon proteinleri varliginda ya da yoklugunda birlikte kültürlenmistir. Dört saatlik enkübasyondan sonra (37 °C, %5CO2), sitotoksisite, ölü/ölen hücrelerden laktat dehidrojenazin (LDH) salinimi ile ölçülen sekilde degerlendirilmistir. Bunun için, hücreler 5 dakika 250xg'de santrifüjlenmis ve SOul süpernatan düz tabanli bir plakaya aktarilmistir. 50ul LDH tepkime karisimi (Roche LDH GmbH) ilave edilmis ve tepkime, 20 dakika boyunca 37 ° C, 5% COz'de enkübe edilmistir. Daha sonra, absorbans, 492/620nm dalga boyunda bir Tecan Sunrise Reader'da ölçülmüstür. Tüm örnekler üç kopya halinde test edilmis ve sonuçlar asagidaki kontrollere dayanarak hesaplanmistir: Sadece hedef hücreler (+ ortam) - Maksimal LDH salimi: hedef hücreler + %3 Triton-X Kendiliginden salim: hedef hücreler` + NK hücreleri (E:T spesifik ADCC/lizisi, asagidaki terimle hesaplanmistir: Örnek - spontansahni Maksimalsalim - spontan salim Sekil 15: Fc C-terminaline kaynasik TfR scFab fragmanlarina sahip olan antikor füzyon ADCC'yi indüklemez. NK92 aracili BA/F3 fare eritrolösemi hücrelerinin Öldürülmesi, FDH saliminin kantifiye edilmesiyle ölçülmüstür. Sadece kismina sahip füzyon yapilari, anlamli ölçüde ADCC indüklerken, ters yönelimli beyin nekigi yapilari sessizdir. Yapilar: 8D3-IgG (tam uzunluklu 8D3 IgG), OA - 8D3 (8D3 IgG tek agir zinciri), mAb3l (Sekil lA'nin antikoru), mAb3l-8D3- sFab (Sekil lB'nin yapisi), mAb31-8D3-dFab (Sekil lC'in Örnek 11: mTfR antikoru 8D3'ün epitop eslestirmesi Monoklonal antikor 8D3'ün epitop eslestirmesi, murin transferrin reseptörü l'in ekstraselüler domeninin karsilik gelen sekansinin (90-763) örtüsen, hareketsizlestirilmis peptit parçalarinin (uzunluk: 15 amino asit, kayma: 3 amino asit) bir kütüphanesi vasitasiyla gerçeklestirilmistir. Peptit dizisinin hazirlanmasi için Intavis CelluSpotsTM teknolojisi kullanilmistir. Bu yaklasimda, peptitler, modifiye edilmis selüloz disklerinde otomatiklestirilmis bir sentezleyici (Intavis MultiPep RS) ile sentezlenir, bu diskler sentezden sonra çözünür. Makromoleküler selüloza kovalent olarak bagli kalan ayri ayri peptitlerin çözeltileri, ardindan daha sonra kaplanmis mikroskop lamlari üzerine yerlestirilir. CelluSpotsTM sentezi, bir 384 kuyucuklu sentez plakasindaki amino ile modifiye edilmis selüloz diskleri üstünde 9- florenilmetoksikarbonil (Fmoc) kimyasi kullanilarak adim adim gerçeklestirilmistir. Her bir kenetleme döngüsünde, karsilik gelen amino asitler, DMF içindeki bir DIC/HOBt çözeltisi ile aktive edilmistir. Kenetleme adimlari arasinda, reaksiyona girmemis amino gruplari, bir asetik anhidrür, diizopropiletil amin. ve l-hidroksibenzotriazol karisimi ile basliklanmistir. Sentez tamamlaninca, selüloz diskleri 96 kuyucuklu bir plakaya transfer edilmistir ve bir trifloroasetik asit (TFA), diklorometan, triizoproilsilan (TIS) ve su karisimi ile yan zinciri korumasinin kaldirilmasi için muamele edilmistir. Yarilma çözeltisinin çikarilmasindan sonra, selüloza bagli peptidler bir TFA, TFMSA, TIS ve su karisimi ile çözülür, diizopropil eter ile çökeltilir ve DMSO içinde yeniden süspanse edilmistir. Bu peptit çözeltileri daha sonra bir lamellerine lekelenmistir. Epitop analizi için, hazirlanmis lameller etanol ve ardindan Tris tamponlu salin (TBS; 50 mM Tris, 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, pH 8) ile yikanmis, sonra, bir bloklama adimi 4°C'de 16 saat süreyle TBS, %O,l Tween 20 içinde 5 mL 10x Western Blocking Reagent (Roche Applied Science), 2,5 g sükroz ile gerçeklestirilmistir. Yikamadan sonra (TBS -+ %O,l Tween 20), lameller bir antikor 8D3 TBS + %0,1 Tween 20 içindeki çözelti (l ug/mL) ile ortam sicakliginda 2 saat süreyle enkübe edilmistir. Yikamadan sonra, lameller saptanmasi için bir anti-fare ikincil HRP-antikoru ( ile enkübe edilmistir, daha sonra, kimyasal isildama substrat luminolü ile enkübasyon yapilmis ve bir LumiImager (Roche Applied Science) ile görsellestirilmistir. ELISA-pozitif SPOT'lar ölçülmüs ve ilgili peptid sekanslarinin atanmasi yoluyla antikor baglanma epitoplari tespit edilmistir. Sekil 16: 8D3, fare transferrin reseptörünün hücre disi domenindeki üç ayri peptidi baglar. Üç amino asit ile örtüsen antikor 8D3 ila 15 mer peptitlerin baglanmasi, immobilize mTfR peptidlerini tasiyan bir CelluSpot lambasinda enkübe edilmis antikorun kemilüminesan tespiti ile açiga çikarilmistir. Kutu: Peptid Sekans Seq. Id. No. l-G-Q-N-M-V-T-I-V-Q-S-N-G-N-L l 4 Seq. Id. No. 374N-M-V-T-l-V-Q-S-N-G-N-L-D-P-V Seq. Id. No. Q-S-N-G-N-L-D-P-V-E-S-P-E-G-Y 1 6 Tablo 1: peptit eslestirme deneyinde 8D3 ile baglanan mTfR hücre disi domeni peptit dizileri. Burada, bir kan beyin bariyeri reseptörüne karsi biyoterapötik yapilar grubu tarif edilmekte olup, özellikle transferrin reseptörü (TfR), antikorlar, proteinler, peptidler ve küçük moleküller dahil olmak üzere terapötikleri BBB boyunca terapötik olarak ilgili dozlarda iletebilir. Belirli gelistirilmis biyoterapötik yapilarin dagilimi, enjeksiyondan birkaç saat sonra serebrovasküler alandan parankün bosluguna dogru degisim göstermistir, bu, bu özel yapilarin, parankime ulasmak için BEC'ler üzerinden önemli miktardaki biyoterapötigin transitözlestirilmesinin mümkün kilinmasi için BEC'ler boyunca optimal bir tasima yolu kullandigini göstermektedir. MSS'deki biyoterapötik yapilarin derecesi ve dagilimi, tamamiyla kan beyin bariyeri reseptörüne, özellikle TfR'ye tek degerlikli baglanma moduna bagimli olmustur. TfR, biyoterapötik yapinin R/BBB'ye baglanmasiyla dimerize oldugunda, parankim boslugu içerisinde saptanabilir bir seviye saptanmamistir. Bulusun metodolojisi kullanilarak gelistirilmis bir tekli Fab anti-Abetar monoklonal yapisinin tek. bir sistemik dozu, hem. beyinde önemli antikor alimiyla sonuçlanmis, hem. de patolojik amiloid. plaklarina anti-Abeta monoklonal baglanmasinin dekorasyonunu çarpici bir sekilde arttirmistir. Bununla birlikte, R/BBB'ye karsi bir çift Fab baglanma yapisi kullanilarak, CNS içinde saptanabilir seviyeler tespit edilmemistir. Bu basvuruda tasvir edilen gerçekler ve deneyler, bir R/BBB'ye karsi bir monovalent baglanma modu kullanilarak MSS'ye biyo terapötiklerin (antikorlar gibi) aliminin artmasinin ardindaki esas katki saglayici mekanizmalari gösterir. Ilk olarak, ikili (veya multimerik) bir anti-R/BBB baglanma modu, lümen tarafindaki hücre yüzeyindeki R/BBB'yi hizlica asagi dogru düzenleyerek beyin alimini sinirlandirir, böylelikle, damar içine alinabilecek toplam anti-R/BBB miktarini azaltir, bu, verimli BBB geçisinin ilk adimidir. Ikinci olarak, ikili (veya multimerik) bir anti-R/BBB baglanma modu, BEC'lerde hücre içi olarak yapinin abluminal tarafa ulasmasini önleyen, belirgin bir yanlis tasniflemesini indüklemektedir. Ilginç bir sekilde, R/BBB'ye tek degerli baglanma, vasküler plazmadan MSS içindeki amiloid plaklarina lokalizasyonda tam bir degisim ile birlikte, beyin alimi ve dagilimini gelistirmektedir. Ikincisi, R/BBB için biyoterapötik yapilarin gelistirilmis monovalent baglanma modu, ilave füzyon polipeptid yapisinin alimina ve abluminal tarafa ve parankim içine tasinmasina imkan vermek amaciyla R/BBB'nin geri dönüsünü lümen tarafina sabitlemektir. Üçüncü olarak, tek degerli baglanma modu biyoterapötik yapisi, çogu durumda in vivo etkinlik için kritik olan terapötik bir monoklonal antikor için orijinal formati koruyan bir IgG'nin FC parçasinin C terminali ucunda gelistirilir. Bu, bu basvuruda açiklanan bir IgG'nin diger kismina baglanarak da gerçeklestirilebilir. Bu avantajlidir, çünkü, önceden belirlenmis klinik öncesi ve klinik etkinligi olan halihazirda gelistirilmis IgG monoklonalleri, yerlesik islev ve etkinlikten ödün vermeden bu tasima sistemine dahil edilebilir. Ayrica, reseptör aracili tasima (RMT) bazli tek degerli hedefleyici R/BBB teknolojisi, MSS hastaliklarina yönelik çok çesitli potansiyel terapötikler için kapiyi açmaktadir. Mevcut bulus, BBB ve MSS dagiliminin terapötik olarak tasinmasini büyük ölçüde artiran kanitlanmis terapötik nüfuz edici terapötiklerin saglamaktadir. TR TR TR TR TR TR TR
TR2019/09156T 2012-08-29 2013-08-26 Kan beyin bariyeri mekiği. TR201909156T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP12182181 2012-08-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201909156T4 true TR201909156T4 (tr) 2019-07-22

Family

ID=46963437

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2019/09156T TR201909156T4 (tr) 2012-08-29 2013-08-26 Kan beyin bariyeri mekiği.

Country Status (27)

Country Link
US (2) US20150322149A1 (tr)
EP (2) EP3315514B1 (tr)
JP (3) JP6219956B2 (tr)
KR (4) KR101885044B1 (tr)
CN (2) CN109053901A (tr)
AU (3) AU2013307406B2 (tr)
BR (1) BR112015004512B1 (tr)
CA (1) CA2879496C (tr)
DK (1) DK2890712T3 (tr)
ES (1) ES2733324T3 (tr)
HK (1) HK1205521A1 (tr)
HR (1) HRP20191153T1 (tr)
HU (1) HUE045144T2 (tr)
IL (2) IL237064A0 (tr)
LT (1) LT2890712T (tr)
MX (2) MX367126B (tr)
MY (1) MY178542A (tr)
NZ (1) NZ703585A (tr)
PL (1) PL2890712T3 (tr)
PT (1) PT2890712T (tr)
RS (1) RS58928B1 (tr)
RU (3) RU2663120C2 (tr)
SG (2) SG10201702702VA (tr)
SI (1) SI2890712T1 (tr)
TR (1) TR201909156T4 (tr)
WO (1) WO2014033074A1 (tr)
ZA (1) ZA201500346B (tr)

Families Citing this family (98)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2771031B1 (en) 2011-10-28 2018-04-18 Prothena Biosciences Limited Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein
EP2807188B1 (en) 2012-01-27 2019-09-11 Prothena Biosciences Limited Humanized antibodies that recognize alpha-synuclein
SG10201704846VA (en) 2012-03-14 2017-07-28 Regeneron Pharma Multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
MX367126B (es) * 2012-08-29 2019-08-06 Hoffmann La Roche Transporte para atravesar la barrera hematoencefálica.
UA118441C2 (uk) 2012-10-08 2019-01-25 Протена Біосаєнсиз Лімітед Антитіло, що розпізнає альфа-синуклеїн
US10513555B2 (en) 2013-07-04 2019-12-24 Prothena Biosciences Limited Antibody formulations and methods
LT3071597T (lt) 2013-11-21 2020-10-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Antikūnai prieš alfa-sunukleiną ir jų naudojimo būdai
CR20160270A (es) 2013-12-20 2016-09-05 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS ANTI-TAU (pS422) HUMANIZADOS Y MÉTODOS DE UTILIZACIÓN
EP3083977B1 (en) 2013-12-20 2018-02-28 F. Hoffmann-La Roche AG Improved recombinant polypeptide production methods
WO2015101586A1 (en) 2014-01-03 2015-07-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles
PL3092251T3 (pl) * 2014-01-06 2021-08-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Jednowartościowe moduły transportera wahadłowego przez barierę krew-mózg
US10562973B2 (en) 2014-04-08 2020-02-18 Prothena Bioscience Limited Blood-brain barrier shuttles containing antibodies recognizing alpha-synuclein
AR100978A1 (es) * 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
TWI787796B (zh) 2015-05-04 2022-12-21 美商Ｃｙｔｏｍｘ生物製藥公司 抗ｃｄ７１抗體類、可活化之抗ｃｄ７１抗體類及使用彼等之方法
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
EP3795591B1 (en) * 2015-06-19 2023-09-27 Eisai R&D Management Co., Ltd. Cys80 conjugated immunoglobulins
JP7021955B2 (ja) * 2015-06-24 2022-03-03 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｈｅｒ２及び血液脳関門受容体に特異的な三重特異性抗体及び使用方法
ES2809728T3 (es) 2015-06-24 2021-03-05 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-tau(pS422) humanizados y procedimientos de uso
AU2016282334B2 (en) 2015-06-24 2022-07-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-transferrin receptor antibodies with tailored affinity
MX2018003822A (es) 2015-10-02 2018-06-22 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecificos contra el cd20 humano y el receptor de transferrina humano y metodos de uso.
AR106189A1 (es) * 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
MY207684A (en) * 2015-12-08 2025-03-12 Regeneron Pharma Compositions and methods for internalizing enzymes
CA3028035A1 (en) 2016-07-14 2018-01-18 Bioarctic Ab Brain delivery protein
US10702589B2 (en) 2016-10-04 2020-07-07 Ann And Robert H. Lurie Children's Hospital Of Chicago Compositions and methods of treating neurological disorder and stress-induced conditions
WO2018102657A1 (en) * 2016-12-02 2018-06-07 Weiner David B Dna antibody constructs for use against ebola virus
RU2711912C2 (ru) * 2016-12-15 2020-01-23 Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ФИЦ КНЦ СО РАН) Аптамер, проходящий через гематоэнцефалический барьер головного мозга мыши
EP3556399A1 (en) * 2016-12-19 2019-10-23 Hanmi Pharm. Co., Ltd. Brain targeting long-acting protein conjugate
TWI833178B (zh) 2016-12-26 2024-02-21 日商Ｊｃｒ製藥股份有限公司 通過血腦障壁之新穎抗人類運鐵蛋白受體抗體
EP3560955A4 (en) 2016-12-26 2020-12-23 Kyowa Kirin Co., Ltd. ANTIBODIES CAPABLE OF BINDING TO MYELIN OLIGODENDROCYTE GLYCOPROTEIN
TWI791006B (zh) 2016-12-26 2023-02-01 日商Ｊｃｒ製藥股份有限公司 包含bdnf之融合蛋白質
US12049493B2 (en) 2017-01-06 2024-07-30 Abl Bio Inc. Anti-alpha-synuclein antibodies and uses thereof
JP7449092B2 (ja) * 2017-01-30 2024-03-13 ナショナル リサーチ カウンシル オブ カナダ 血液脳関門移動化合物及びその使用
CA3053381A1 (en) 2017-02-17 2018-08-23 Denali Therapeutics Inc. Engineered polypeptides
EP4628586A3 (en) 2017-02-17 2026-01-14 Denali Therapeutics Inc. Transferrin receptor transgenic models
RS63818B1 (sr) * 2017-02-17 2023-01-31 Denali Therapeutics Inc Konstruisani polipeptidi za vezivanje za receptor transferina
WO2018210898A1 (en) * 2017-05-18 2018-11-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Reduction of application-related side reaction of a therapeutic antibody
AU2018281280B2 (en) 2017-06-07 2024-12-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for internalizing enzymes
WO2019032955A1 (en) * 2017-08-10 2019-02-14 Denali Therapeutics Inc. MODIFIED TRANSFERRIN RECEPTOR BINDING POLYPEPTIDES
CA3073062A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Adrx, Inc. Tau aggregation peptide inhibitors
CN107412747B (zh) * 2017-08-24 2018-05-22 北京亦贝安生物医药科技有限公司 一种含有乳铁蛋白和唾液酸的复方制剂
CN107410495B (zh) * 2017-08-24 2018-06-01 北京亦贝安生物医药科技有限公司 一种酸性乳糖酶和锌的复方制剂及其制备方法
WO2019055841A1 (en) * 2017-09-14 2019-03-21 Denali Therapeutics Inc. ANTI-TREM2 ANTIBODIES AND METHODS OF USE
BR112020005271A2 (pt) 2017-10-02 2020-09-15 Denali Therapeutics Inc. proteína, polipeptídeo, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, método para produção de um polipeptídeo, métodos de tratamento de um distúrbio, de diminuição do acúmulo, de monitoramento, de transporte de um agente e de tratamento de um lsd e composição farmacêutica
US11780932B2 (en) 2017-10-09 2023-10-10 Wisconsin Alumni Research Foundation Antibodies targeting glioblastoma stem-like cells and methods of use thereof
CA3080351A1 (en) 2017-11-02 2019-05-09 Ossianix, Inc. Improved tfr-selective binding peptides capable of crossing the blood brain barrier
BR112020011875A2 (pt) 2017-12-14 2020-11-24 Abl Bio Inc. anticorpo biespecífico ao a-syn/igf1r e uso do mesmo
US10688191B2 (en) 2018-01-19 2020-06-23 Hr Biomed, Llc Delivery of a chemotherapy agent across the blood-brain barrier
KR102012448B1 (ko) * 2018-02-01 2019-08-20 (주)프론트바이오 트리메토벤자미드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 신경병증 통증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN112040985A (zh) 2018-02-07 2020-12-04 瑞泽恩制药公司 用于递送治疗性蛋白质的方法和组合物
WO2019190293A1 (ko) * 2018-03-30 2019-10-03 한미약품 주식회사 뇌 표적 지속성 단백질 결합체, 이의 제조 방법, 및 이를 포함하는 조성물
EP3793591A1 (en) 2018-05-17 2021-03-24 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-cd63 antibodies, conjugates, and uses thereof
CN112312922B (zh) 2018-06-21 2025-04-11 诺和诺德股份有限公司 用于治疗肥胖症的新型化合物
CA3104997A1 (en) 2018-06-26 2020-01-02 Kyowa Kirin Co., Ltd. Antibody binding to chondroitin sulfate proteoglycan 5
CN112424358B (zh) 2018-06-26 2025-07-01 协和麒麟株式会社 与细胞粘附分子3结合的抗体
EP3840781A1 (en) * 2018-08-22 2021-06-30 Denali Therapeutics Inc. Anti-her2 polypeptides and methods of use thereof
US20210332363A1 (en) * 2018-08-30 2021-10-28 NEXMOS Co.,Ltd Blood-brain barrier permeable aptamer and application thereof
US12351642B2 (en) 2018-09-14 2025-07-08 Ossianix, Inc. TFR-specific binding moieties and transcytosis method to select VNARs that cross cellular barriers
KR102559149B1 (ko) 2018-10-26 2023-07-24 에프. 호프만-라 로슈 아게 재조합효소 매개 카세트 교환을 이용한 다중특이적 항체 스크리닝 방법
KR102692543B1 (ko) 2018-10-26 2024-08-07 재단법인 목암생명과학연구소 Ids를 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도
CN113661173B (zh) 2019-03-29 2024-10-01 豪夫迈·罗氏有限公司 通过以限定的组织形式靶向整合多个表达盒来产生表达FcRn的细胞的方法
CN113801219A (zh) * 2019-05-23 2021-12-17 江苏豪思睦可生物科技有限公司 一种转铁蛋白的制备方法及包含转铁蛋白的组合物和应用
KR20220024637A (ko) 2019-06-19 2022-03-03 에프. 호프만-라 로슈 아게 정의된 조직의 다수 발현 카세트들의 표적화 통합에 의한 3가 항체 발현 세포의 생성 방법
WO2020254351A1 (en) 2019-06-19 2020-12-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for the generation of a multivalent, multispecific antibody expressing cell by targeted integration of multiple expression cassettes in a defined organization
WO2021020618A1 (ko) * 2019-07-30 2021-02-04 (주)프론트바이오 트리메토벤자미드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 신경병증 통증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
US20220325265A1 (en) * 2019-09-09 2022-10-13 Hoffmann-La Roche Inc. Glucocerebrosidase mutants
KR102247568B1 (ko) 2019-10-11 2021-05-04 재단법인 대구경북첨단의료산업진흥재단 집속초음파 조사 시스템 및 집속초음파를 이용한 혈액뇌장벽 개방 조절 방법
BR112022012230A2 (pt) 2019-12-23 2022-08-30 Denali Therapeutics Inc Variantes de progranulina
IL295797A (en) 2020-02-22 2022-10-01 Japan Chem Res Human transfer receptor binding peptide
CA3173090A1 (en) 2020-02-25 2021-09-02 Vib Vzw Leucine-rich repeat kinase 2 allosteric modulators
CR20230178A (es) 2020-10-14 2023-07-26 Denali Therapeutics Inc Proteínas de fusión que comprenden enzimas sulfoglucosamina sulfohidrolasa y métodos de estas
CA3220572A1 (en) * 2021-06-11 2022-12-15 Bioarctic Ab Bispecific binding molecule
EP4373853A4 (en) * 2021-07-21 2025-07-02 Icahn School Med Mount Sinai ANTI-FSH ANTIBODIES AGAINST NEURODEGENERATIVE DISEASES
JPWO2023022234A1 (tr) 2021-08-19 2023-02-23
US20240366775A1 (en) 2021-08-24 2024-11-07 Peptidream Inc. Human transferrin receptor binding antibody-peptide conjugate
IL311003A (en) 2021-08-25 2024-04-01 Denali Therapeutics Inc Anti-2HER antibodies and methods of using them
CA3230796A1 (en) 2021-09-01 2023-03-09 Biogen Ma Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and uses thereof
KR102934033B1 (ko) * 2021-10-01 2026-03-06 서울대학교산학협력단 혈액 뇌장벽 투과용 펩타이드 및 이의 용도
US20250066449A1 (en) * 2021-12-31 2025-02-27 Imnewrun, Inc. Blood-brain barrier permeable fusion protein and uses thereof
KR102575322B1 (ko) * 2021-12-31 2023-09-08 주식회사 아임뉴런 뇌혈관장벽 투과성 융합 단백질 및 이의 용도
WO2023198661A1 (en) 2022-04-12 2023-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Fusion proteins targeted to the central nervous system
US20250304677A1 (en) 2022-07-04 2025-10-02 Vib Vzw Blood-Cerebrospinal Fluid Barrier Crossing Antibodies
KR20250048566A (ko) * 2022-08-08 2025-04-09 일라이 릴리 앤드 캄파니 트랜스페린 수용체 결합 단백질 및 접합체
WO2024080843A1 (ko) * 2022-10-14 2024-04-18 주식회사 아임뉴런 뇌혈관장벽 투과성 융합 단백질 및 이의 용도
KR20240067001A (ko) * 2022-10-28 2024-05-16 주식회사 아임뉴런 뇌혈관장벽 투과성 융합 단백질 및 이의 용도
JP2026505005A (ja) 2023-01-30 2026-02-10 イーエスアーエル バイオサイエンス ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 神経変性障害を治療するためのヒト抗ｔｒｅｍ２抗体
TW202434613A (zh) 2023-02-17 2024-09-01 日商肽夢想股份有限公司 人類運鐵蛋白受體結合肽
KR20250160363A (ko) 2023-03-24 2025-11-12 바이오악틱 에이비 인간 트랜스페린 수용체 htfr1의 프로테아제-유사 도메인에 결합하는 항체
CN121548587A (zh) 2023-07-24 2026-02-17 豪夫迈·罗氏有限公司 多特异性抗体
CR20260043A (es) 2023-08-09 2026-03-26 Hoffmann La Roche Anticuerpos anti-proteína a-beta, métodos y usos de estos
WO2025054461A1 (en) * 2023-09-08 2025-03-13 California Institute Of Technology Ester derivatives of binders targeting ca-iv
AU2024400671A1 (en) 2023-12-15 2026-07-16 Kyowa Kirin Co., Ltd. Divalent bet decomposition agent and targeting molecule-drug complex
TW202542190A (zh) 2023-12-20 2025-11-01 美商戴納立製藥公司 包含酸性α—葡萄糖苷酶之融合蛋白及其方法
US20260035475A1 (en) 2024-06-20 2026-02-05 Bioarctic Ab Stabilized binding molecule
WO2025262228A1 (en) 2024-06-20 2025-12-26 Bioarctic Ab Bispecific binding molecule
WO2026068519A1 (en) 2024-09-24 2026-04-02 Bioarctic Ab Ph sensitive binding molecule
WO2026068513A1 (en) 2024-09-24 2026-04-02 Bioarctic Ab Bispecific binding molecule
WO2026068532A1 (en) 2024-09-24 2026-04-02 Bioarctic Ab Bispecific binding molecule

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
IE922437A1 (en) 1991-07-25 1993-01-27 Idec Pharma Corp Recombinant antibodies for human therapy
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
EP0626012B1 (en) 1992-02-11 2003-07-09 Cell Genesys, Inc. Homogenotization of gene-targeting events
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
JP2002506353A (ja) 1997-06-24 2002-02-26 ジェネンテック・インコーポレーテッド ガラクトシル化糖タンパク質の方法及び組成物
CA2307166A1 (en) 1997-10-31 1999-05-14 Genentech, Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
CA2323757C (en) 1998-04-02 2011-08-02 Genentech, Inc. Antibody variants and fragments thereof
JP4334141B2 (ja) 1998-04-20 2009-09-30 グリカート バイオテクノロジー アクチェンゲゼルシャフト 抗体依存性細胞傷害性を改善するための抗体のグリコシル化操作
HUP0104865A3 (en) 1999-01-15 2004-07-28 Genentech Inc Polypeptide variants with altered effector function
JP5249482B2 (ja) * 1999-06-16 2013-07-31 ボストン・バイオメデイカル・リサーチ・インステイテユート インビボのβ−アミロイドレベルの免疫学的制御
PT2857516T (pt) 2000-04-11 2017-08-28 Genentech Inc Anticorpos multivalentes e utilizações dos mesmos
EP1423510A4 (en) 2001-08-03 2005-06-01 Glycart Biotechnology Ag ANTIBODY GLYCOSYLATION VARIANTS WITH INCREASED ANTIBODY-DEPENDENT CELLULAR CYTOTOXICITY
PL213948B1 (pl) 2001-10-25 2013-05-31 Genentech Inc Kompozycje zawierajace glikoproteine, czasteczka kwasu nukleinowego kodujaca te glikoproteine, komórka gospodarza, sposób wytwarzania glikoproteiny, kompozycja do zastosowania do leczenia, zastosowanie kompozycji i zestaw zawierajacy kompozycje
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US6849032B2 (en) * 2002-11-20 2005-02-01 Fitness Botics, Inc. Exercise apparatus simulating skating motions
US20050142141A1 (en) 2002-11-27 2005-06-30 Pardridge William M. Delivery of enzymes to the brain
HUE038955T2 (hu) 2003-11-05 2018-12-28 Roche Glycart Ag Antigén-kötõ molekulák fokozott Fc receptor-kötõ affinitással és effektor funkcióval
CA2632828C (en) * 2005-12-12 2012-07-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibodies against amyloid beta with glycosylation in the variable region
DE102006013531A1 (de) * 2006-03-24 2007-09-27 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Polylactid-Nanopartikel
KR20110047255A (ko) * 2008-09-26 2011-05-06 로슈 글리카트 아게 이중특이적 항-ｅｇｆｒ／항-ｉｇｆ-１ｒ 항체
BRPI1014089A2 (pt) * 2009-04-02 2016-04-19 Roche Glycart Ag anticorpos multiespecíficos que compreendem anticorpos de comprimento completo e fragmentos fab de cadeia simples
CN103443125B (zh) * 2010-11-30 2019-05-03 霍夫曼-拉罗奇有限公司 低亲和力血脑屏障受体抗体及其用途
MX367126B (es) * 2012-08-29 2019-08-06 Hoffmann La Roche Transporte para atravesar la barrera hematoencefálica.

Also Published As

Publication number Publication date
CA2879496A1 (en) 2014-03-06
KR101885044B1 (ko) 2018-08-02
MX380701B (es) 2025-03-12
KR20170041289A (ko) 2017-04-14
HRP20191153T1 (hr) 2019-10-04
ZA201500346B (en) 2016-01-27
JP6889218B2 (ja) 2021-06-18
EP2890712A1 (en) 2015-07-08
RU2663120C2 (ru) 2018-08-01
JP2018029602A (ja) 2018-03-01
KR20150039798A (ko) 2015-04-13
MY178542A (en) 2020-10-15
SG10201702702VA (en) 2017-06-29
BR112015004512B1 (pt) 2021-08-24
RU2711552C2 (ru) 2020-01-17
KR20180088492A (ko) 2018-08-03
EP2890712B1 (en) 2019-05-01
CN104520329A (zh) 2015-04-15
ES2733324T3 (es) 2019-11-28
LT2890712T (lt) 2019-07-25
KR20190121874A (ko) 2019-10-28
DK2890712T3 (da) 2019-07-08
RU2019142838A3 (tr) 2021-06-21
SI2890712T1 (sl) 2019-08-30
US20190276530A1 (en) 2019-09-12
RS58928B1 (sr) 2019-08-30
WO2014033074A1 (en) 2014-03-06
EP3315514B1 (en) 2025-06-18
IL278872A (en) 2021-01-31
AU2013307406B2 (en) 2018-03-15
MX367126B (es) 2019-08-06
EP3315514C0 (en) 2025-06-18
AU2020210286A1 (en) 2020-08-20
HUE045144T2 (hu) 2019-12-30
PL2890712T3 (pl) 2019-09-30
MX2019006259A (es) 2019-09-23
AU2013307406A1 (en) 2015-01-29
JP2020007352A (ja) 2020-01-16
HK1205521A1 (en) 2015-12-18
CA2879496C (en) 2024-01-09
JP2015528452A (ja) 2015-09-28
US20150322149A1 (en) 2015-11-12
RU2018127006A3 (tr) 2019-03-14
PT2890712T (pt) 2019-06-28
RU2019142838A (ru) 2021-06-21
RU2754794C2 (ru) 2021-09-07
NZ703585A (en) 2018-03-23
IL237064A0 (en) 2015-03-31
AU2018203400B2 (en) 2020-05-28
EP3315514A1 (en) 2018-05-02
RU2015111093A (ru) 2016-10-20
CN109053901A (zh) 2018-12-21
AU2018203400A1 (en) 2018-06-07
RU2018127006A (ru) 2019-03-14
KR102036262B1 (ko) 2019-10-24
SG11201500583PA (en) 2015-04-29
BR112015004512A2 (pt) 2017-11-07
JP6219956B2 (ja) 2017-10-25
MX2015002215A (es) 2015-05-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2754794C2 (ru) Шаттл для гематоэнцефалического барьера
KR102188544B1 (ko) 저친화도 혈액-뇌 장벽 수용체 항체 및 그의 용도
KR102115438B1 (ko) 혈액-뇌 장벽 수송의 안전성을 개선하는 방법
HK1191341A (en) Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor