TWI242561B

TWI242561B - Composition for preparing nucleotide analog and synthesis method thereof

Info

Publication number: TWI242561B
Application number: TW093112403A
Authority: TW
Inventors: John D Munger Jr; John C Rohloff; Lisa M Schultze
Original assignee: Gilead Sciences Inc
Priority date: 1997-07-25
Filing date: 1998-07-24
Publication date: 2005-11-01
Also published as: AU8582798A; HK1051360B; SG106657A1; KR100617608B1; JP2015199773A; JP2013213071A; JP5398662B2; DK0998480T3; HK1051360A1; KR100661153B1; IN190780B; TWI224103B; JP2018016645A; CA2298059C; KR20060038452A; SG106656A1; KR100707505B1; JP2017057233A; KR20060038451A; JP4173202B2

Description

1242561 (1) 玖、發明說明【發明所屬之技術領域】本發明關於9一〔2-（R) - 〔〔雙（異丙氧基羰基 )氧基〕甲氧基〕膦醯〕甲氧基〕丙基〕腺嘌呤（、、雙（ POC) PMPA〃），以及適合在人類或動物體內以口服方式遞送（R) - 9一〔2-（膦酸基甲氧基）丙基〕腺嘿u令 ('VPMPA〃）的組成物，這類組成物的用途是做爲抗病毒劑。【先前技術】膦酸基甲氧基核苷酸類似物爲已知的化合物且目前也已知有許多不同的技術可用於口服遞送此化合物。見，如 :美國專利申請序號〇 8 / 6 8 6，8 3 8，美國 5，208，221，5，124，051，WO 91/19721， WO 94 / 03 467，WO 94/ 03466’ WO 92/ 1 3 8 69’ DE 4 1 3 8 5 84 Al，WO 94 / 1 0 5 3 9， WO 94/ 10467’ W Ο 96/ 18605’ W Ο 95/ 07920’ WO 9579/07919，WO 92/09611 ’WO 92/ 01698’ WO 91/19721，WO 88/05438 ’EP 0 63 2 048’ EP 〇 48 1 214，ΕΡ Ο 3 69 409，ΕΡ Ο 269 947 ，美國專利號3，524，826及5，386，030，、'英格爾化學回顧12_:349〜367’]997〃 ’ '法奎爾等人所著’藥學科學期刊: 3 2 4〜3 2 5，1 9 8 3 〃，、'史塔瑞等人著抗病毒硏究: 2 6 7〜2 7 3，] 9 9 2 〃，、、沙瓦迪等Λ著，藥 (2) 1242561 托等人，及、' 442 9，學硏究 1 Ο ( 9J_ : 1 3 5 0 〜1 3 5 5，1 9 93 "，'' 沙卡馬著，化學藥學干ij物 3 2 ( 6 ) : 2241〜2248， 1984夕大衞森等人著，醫學化學期刊3 7 ( 2 6 ) : 4 4 2 3〜 1994" 〇【發明內容】本發明的總論含了 9 甲氧基本發明提供一種式（1 )所示的組成物，它包一〔2(R) —〔〔雙〔〔（異丙氧基羰基）氧基〕〕膦醯〕甲氧基〕丙基〕一腺嘌呤·富馬酸（1 : 1 雙（POC) PMPA 富馬酸酯"或 ''BPPF")，〇

ch3

⑴ 其中B是腺嘌玲一 9 -基且R係獨立地爲一 Η或一 CH2 - Ο - C ( 0 ) — 〇 — CH ( CH3 ) 2，但至少有爲一ch2—〇 — c(o) —〇 — 甲氧基（CH3)广本發明的其它體系包括；以口服方式給予一個感染的病人或有病毒感染之危險的病人一治療上有式（1 )所示之組成物。另一個體系中包含了一種製備式（1)所示之的方法，它包含了將富馬酸與雙（P0C) PMPA接羯其匕體系包括將醇鋰與〜種9 — ( 2 一經丙基呤溶液接觸。一個R 受病毒效量的化合物 ρα i 0 )腺嘌 -6 - (3) 1242561

還有一種特殊體系，它包含了一種pH値約爲2.7〜 3.5的（R，S ) — PMPA溶液，其中該溶液含有少於約克/笔升的（R，S) — PMPA且其中約90〜94%的PMPA 是屬於（R )的結構。本發明的詳細說明此處所用的、院基〃，除非另外指出，是指一·個含有 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11 或個 JE 常，二級、三級或環狀構造的碳氫化合物，可做爲實施例的有： —ch3、— ch2ch3、— ch2ch2ch3、— ch(ch3) 2、 —CH2CH2CH2CH3、— ch2ch ( ch3) 2、 -C H ( C H 3 ) CH2CH3、— C ( CH3 ) 3、 —CH2CH2CH2CH2CH3、一 CH ( ch3) ch2ch2ch3、 —ch ( ch2ch3) 2、— c ( ch3) 2ch2ch3、 -C H ( C H 3 ) CH ( CH3 ) 2、一 CH2CH2CH ( CH3 ) 2、 -ch2ch ( ch3 ) ch2ch3、一 ch2ch2ch2ch2ch2ch3、 -CH ( CH3 ) CH2CH2CH2CH3、 -CH ( CH2CH3 ) ( CH2CH2CH3 )、 -C ( CH3 ) 2CH2CH2CH3 . -C H ( C H 3 ) CH ( CH3 ) C H 2 c H 3 , C：H ( ch3 ) CH2CH ( CH3 ) 2 > — C(CH3) ( CH2CH3 ) 2 、 CH ( CH2CH3 ) CH ( CH3 ) 2、 —c ( ch3) 2ch ( ch3) 2、 — CH ( ch3) c ( ch3 ) 3、環丙基、環丁基、環丙基甲基、環戊基、環丁基甲基、1一 -7- (4) 1242561 環丙基—1—乙基、2 —環丙基—1—乙基、環己基、環戊基甲基、1—環丁基—1 一乙基、2 —環丁基一 1—乙基、1 一環丙基—1—丙、2 -環丙基—1 一丙基、3 -環丙基—1 一丙基、2 —環丙基—2 -丙基、及1—環丙基—2 —丙基〇此處所使用的 ''醇鹽〃，除非另外指出，是指一個碳氫化合物連接至一個氧原子上，此碳氫化合物就如此處所定義的烷基，含有1、2、3、4、5或6碳原子，其實施例有：-0 C Η 3 . 一 och2ch3、一 och2ch2ch3、 —OCH ( CH3) 2、— 〇CH2CH2CH2CH3、一 OCH2CH ( CH3 ) 2、— OCH ( ch3) ch2ch3、 —oc ( ch3) 3、— OCH2CH2CH2CH2CH3、 —OCH ( CH3) CH2CH2CH3、— OCH ( CH2CH3) 2、 —OC ( CH3) 2CH2CH3、— OCH ( CH3) C H ( C H 3 ) 2、 -OCH2CH2CH ( CH3 ) 2、- OCH2CH ( CH3 ) CH2CH3、 -OCH2C ( CH3 ) 3、- OCH ( ch3 ) ( CH2 ) 3ch3、 —OC (CH3) 2 ( CH2 ) 2CH3、 -OCH ( C2H5 ) ( CH2 ) 2CH3、一〇（ch2) 3ch(ch3) 2、- o(ch2) 2C(CH3) 3、 -OCH2CH ( ch3) (ch2)2ch3、及 OCH2CH2CH2CH2CH2CH3。除非另外特別指出或是由上下文判斷，我們以％表示的百分比量是以重量計算（W / W )。因此，一種含有少於1 %水的BPPF製品是指一種含有少於1% w/w水的 -8- (5) 1242561 製品。如此處所使用的，除非另外指出，每當我們提供取代基的目錄（如：甲醇鹽、乙醇鹽、正一丙醇鹽、異一丙醇鹽或特丁-醇鹽）以定義一種可變物或成分時（如：一種醇鹽）’該可變物或成分顯然是意指包括所列舉的取代基之任何及所有可能的組合，如：醇鹽意指甲醇鹽.、乙醇鹽或正一丙醇鹽且醇鹽也意指異一丙醇鹽或特一丁醇鹽。類似地’有機溶液的目錄其定義是包括：1 一甲基一 2 - d比η各院酮’ 一種三烷基胺（c】—3烷基）、醋酸甲酯、醋酸乙 _、醋酸丙酯、醋酸異丙酯、一種C】—6烷醇、D比啶、丙酮、甲苯、CHaCh、二甲基甲醯胺、二甲基亞硕、四氫呋喃、乙腈或一種不包括丙酮的二甲苯、二甲苯類或二者。因此’如果不是所有的取代基都被略去且所定義的可變物被除去時’我們明確地指出：所給予之用來定義一種可變物或成分的取代基目錄將會包括或排除在目錄中之取代基的任何組合，除非所給予的定義申明了一種可變物或成分可能會不存在。本發明的化合物係隨意地在碳原子手性型中心（* ) 根據先前的發現加以濃化或解析，而那些先前發現是與此處之（R )構型的理想抗病毒活性有關。在碳原子處之手怍型中心（以（* )表示）係隨意地爲（R)或（S )構型几川‘以以實質上相等的比例加以濃化或被發現。通常在 PMPA及雙（P0C) pmpa中連接在手性中心（* )之甲基團是屬於（R )構型。不論它們是以何種型式被記錄下來 (6) !242561 ^本發明的複合物包括了構造成分之互變異構型。式（1 )所示之化合物可包含帶有少量一（POM ) PMPA的BPPF，一般是少於3%，通常是少於1 %，即：式（1)所示之化合物中，一個R是一 Η，且另一個R是 -CH2-〇-C ( 0) —o-ch(ch3)2。雙（POC ) PMPA富馬酸酯的物理和化學性質結晶型BPPF與自由鹼和其他鹽類相比較下，具有令 φ 人意外之優越的物理一化學性質組合。結晶型BPPF具有高熔點，爲非收濕性的，且具有優秀的固體狀態穩定性及好的溶液溶解性和穩定性。這些性質在用於大量製造上很有用，且在人類和動物體中有利於良好的口服生物可利用性質。這些性質可使B P P F或Ρ Μ P A在生物體液（如：血漿或細胞質）中有效地遞送。例如··每日給予一次7 5毫克結晶型BPPF時，它在人體中的口服生物可利用性約爲 3 0 〜4 0 % ° _ B P P F可以是也可以不是結晶型。我們取得一種 BPPF的結晶型（''C:BPPF〃）並且以幾種方法來定出其特徵；包括·· X 一光粉末繞射及熔點。工作人員通常使用 X -光粉末繞射法來特徵化或鑑定結晶組成物（見，如：，園藥典，第23冊，1995，方法941，1843〜1845頁， U . S . P .藥典會議公司，洛克維爾，M D ;史道特等人著，X 一光構造的決定；實用導引，麥克米蘭公司，紐約， N . Υ . 1 9 6 8 )。得自一種結晶型化合物的繞射型式通常可做 -10 - (7) 1242561 爲一種指定之結晶形式的特徵，雖然，在由結晶之連續分批中所得到的重覆繞射型式中，弱的或非常弱的繞射尖峰可能不會一直出現，而且，如果其它種結晶組成物在樣本中的存在量相當大時則是特殊情形。光帶的相對強度，特別是在低角度的X光入射値（低2 Θ )可因較佳的定向效應、結晶生長方向、顆粒大小及其它測量情況而有不同。因此’繞射峰的相對強度並不能絕對用來鑑定結晶的形式。取而代之的是必須觀察尖峰的位置，這隨意地包括了它們的相對空間及一般型式，而不是用它們精確的振幅來做 B P P F結晶的鑑定。還有，不需要依賴所有在高度純化之參考樣品中所觀察到的光帶來進行鑑定；甚至，只要一個單一的光帶即可用來鑑別一個給予的結晶型，如：25.0可用來鑑定CBPPF。

其它可隨意地用來鑑定結晶B P P F的診斷技術包括：差別掃描量熱學（D S C )及紅外線吸收光譜（I R ) 。D S C 測量熱吸收轉變溫度，在此溫度時結晶會吸收熱以改變其結晶構造。D S C提供一種替代的方法使硏究者可根據不同的結晶組成物之不同吸收溫度來分辨它們。IR測量的是紅外光的吸收，這種吸收是由於特殊化學鍵的存在與分子中的基團一同對光反應而產生振動所造成的。因此’ DSC及/或IR可以提供說明BPPF結晶的資料。 CBPPF X-光粉末繞射型式通常在約25.0處會有尖峰出現，典型情況是在約2 5.0及約2 0.0，或更常有的是在約2 5 · 0、約2 0.0及約3 0 . 1，而一般是至少在約2 5 . 〇、 -11 - (8) 1242561 約2 Ο · Ο、約3 Ο . 1及約2 1 . 9處出現° c B P P F光譜通常在約 4.9、約 1 〇 · 2、約 1 Ο · 5、約 1 8.2、約 2 Ο . Ο、約 2 1 · 9、約 2 4 . Ο、約 2 5 . Ο、約 2 5.5、約 2 7.8、約 3 Ο ‘ 1 及約 3 Ο · 4 處有尖峰。C B P P F X —光粉末繞射型式通常在約2 0 . 0及/或 21.9及或25.0及/或30.1之任一'處（或其組合）有尖峰〇 C B P P F結晶在約1 1 8。(：處會有一個D s c的吸收峰，其起始點約爲1 1 6 °C而1尺光譜以倒公分來表示，在約鲁 3224、 3107〜3052、 2986〜2939、 1759、 1678、 1620、 1 2 6 9及1 1 0 2處會有特定光帶出現。不同的C B P P F結晶製品的體積密度約爲〇·1 5〜〇·30克/毫升’通常約0.2〜 0.2 5克/毫升。典型的情況是：它們基本上沒有溶劑，如果是經由適當地步驟自結晶浴中回收則含有少於1 %的溶劑，且一般不含有可偵測到的晶格輸送的溶劑分子。 B P P F結晶一般是無水及非收濕性的’而僅含有很少或偵測不到的水。一般而言，B P P F平常含有少於約1 % · ，的水，典型情況是少於約〇 . 5 %的水。還有，B PPF平常含有少於約1 〇 %，一般爲少於約5 % ’較常少於約1 %，且通常含有少於約0.5%的無定形BPpF ° B P P F結晶在乾燥時通常爲一種不透明’白色的或蒼 ΙΊ色的結晶粉末。得自一種指定製品的結晶通常在大小上爲多分散式式的，且其形狀範圍包括：針、盤、不規則錠片及針狀物物盤類或錠片的集結。在指定製品中’大部分單獨的B P P F結晶，其長寬、高中最長的尺寸範圍一般是 -12- (9) 1242561 約爲Μ至5 00 # Μ，典型情況約爲5〜170// Μ，通常爲1 〇〜1 1 0 // Μ。這些結晶可能具有破裂或角度。在第4 〜7圖中的照片顯示出CBPPF具有不同的形狀’包括：錠片、棒狀、針狀、盤狀和凝聚物等不同形狀。用途已知：ΡΜΡΑ及雙（POC) ΡΜΡΑ可用來治療或緩解在人類或動物體內之一或多種病毒感染，特別是包括：逆轉錄病毒，HIV、SIV 及 GALV，和 hepadnaviruses (肝炎病毒）如：HBV。其它可用PMPA治療的感染包括：MSV 、RSV、FIV、MuLV、及其它屬於齧齒類和其它動物的逆轉錄病毒感染。先前技藝說明了 PMPA抗病毒的特性，而本發明化合物也共有此特性。最適於用來攻擊感染處的劑量和合適的給予途徑在 PMPA的領域中早已爲人所熟知。對醫師來說，決定 B P P F的適當劑量是一個直接的問題，考量的因素有：本發明之複合物的分子量及，當口服給予時，這些複合物在動物體內的生物可利用性或者，當以人類做臨床試驗時的推論以及本領域中內行人士所熟知的其它因素。含BPPF的本發明組成物是以能適合所要治療之疾病的任一途徑來給予的，適合途徑包括：經口、肛門、鼻、肺、局部（包括經皮膚、眼睛、口腔及舌下途徑）、陰道及腸胃道外（包括皮下、肌肉內、血管內、皮內、椎管內及硬膜上的途徑）。一般而言，本發明之組成物是以口 -13- (10) 1242561 服方式給予，但含BPPF的組成物可以上述之任何一種途徑來給予。用來抗病毒之本發明化合物，其在人體中的口服劑量範圍約從0.01至20毫克/公斤/天，典型情況是約從0.3至5毫克/公斤/天。以口服給予的方式，每天給予人類一次含有75毫克 CBPPF之錠片所能產生的 Ρ Μ P A 口服生物可利用性，在空腹病人體中，第1天約爲 17〜38%，在飽食病人體中約爲27〜60%。雖然，BPPF可以以一種純化合物的形式給予病人，但較佳的情況是該此化合物以一種藥學配方的形式存在。本發明之配方包括B P P F以及一或多種藥學上可接受的賦形劑或載媒劑可接受的賦形劑〃）並隨意地含有其它治療成分。載媒劑必須爲★可接受的〃，亦即可與配方中的其它成分相容並且不會對病人有害。這些配方包括那些適用於局部或系統給予的配方，包括經口服、肛門、經皮膚、肺部、鼻部、口腔、舌下、陰道或胃腸道外（包括：皮下的、肌肉內的、血管內的、經皮膚的、經椎管內及硬膜上）等方式給予。這些配方是製成單一劑量的型式並且可以用任何其它藥學領域中所熟知的方法來製備。此種方法包括：將活性成分與載媒劑或賦形劑結合在一起的步驟（這些賦形劑及載媒劑可構成一或多種輔助成分）。一般而言、這些配方是經由將活性成分完金II --致地與液體載媒劑或精密分割的固體載媒劑或是以上二者結合在一起，然後，視情況需要再將產物乾燥或成形而製備得到的。 - 14 - (11) 1242561 適合用於口服給予的本發明配方可以下列各種形式存在：①個別的單位形式（如：小藥束、藥包、或錠片），且其中含有一事先決定好量的活性成分；②粉末或顆粒； ③在水溶性或非水溶性液體中的溶液或懸浮液；@油-中一水之液態乳液或水一中一油的液態乳液。活性成分也可以大九藥、黏劑或藥膏等形式存在。錠片可以經由壓製或製模的方法製成，典型的情況是與一或多種輔助成分或賦形劑一起製劑。一般每片錠片約含10〜300毫克BPPF，通常含10〜100毫克（如：約75 毫克）。通常BPPF是以CBPPF的形式存於固體配方中。壓製的錠片通常是經由將自由流動形式的BPPF (如：粉末或顆粒形式）在適合的機器上壓製而製備的，這些粉未和顆粒還可隨意地與連結劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、界面活性劑或分散劑一起混合。模製錠片可經由將一種以液體稀釋劑（通常是一種惰性稀釋劑）潤濕的粉末BP PF混合物在一個合適的機器中壓模而製得。該錠片可以隨意地加以包膜、塗色、加浮雕、或做記號，並且可以製劑成可以提供慢性或控制釋出其中之活性成分的劑型。典型的旋片成分包括一或多種連結劑、稀釋劑、崩解劑或潤滑劑，這些試劑可促進錠片的大量生產或是在消化後，使錠片崩解。這些錠片可隨意地經由一或多種賦形劑與BPPF進行濕顆粒化後，再乾燥並硏磨來製備。連結劑（如：事先凝膠化的澱粉）可以隨意地以約]〜1 〇 %的濃度存在。崩解劑 (如：交叉連結的纖維素）可隨意地以約0.5〜5 的濃度 -15- (12) 1242561 存在以促進錠片的溶解。稀釋劑（如：單糖或雙糖）可隨意地以約50〜60%的濃度存在以隱藏BPPF的物理性質來促進錠片的溶解。潤滑劑可隨意地以約0.2 5〜5 %的濃度存在以促進在生產過程中之錠片射出。本發明的體系包將一種含BPPF和可接受之賦形劑的混合物進行壓製後所製得的產品。在眼睛或其它外組織的感染方面（如：口及皮膚），所使用的配方是以含有活性成分之局部敷用的油膏或乳膏等形式較佳，其中之活性成分爲，例如0.0 1至1 0 % w / w (包括在0 · 1 %及5 %範圍間的活性成分，增加過程爲每次增加 0.1% w/w，如 0.6% w/w、0.7% w/w ，等等），以0 · 2至3 % w / w較佳而以〇 . 5至2 % w / w最佳。當配方爲一種油膏時，活性成分可與石蠟或易溶於水的油膏基質一起使用。或者，活性成分可與一種油一中-水的乳膏基質一起製劑。如需要時，乳膏基質的水溶液相可包括：如：至少 3 0 % w / w的多元醇，βρ : —種帶有二或多個羥基團的醇’如：丙二醇、丁 1，3 —二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘露醇 '及聚乙—醇（包括PEG400)及其混合物。局部敷用的配方可依需要而含有可加強活性成分在皮膚或其它受影響區域之吸收或滲透力的化合物。此種皮膚滲透加強劑的货施例包括：二甲基亞硕及相關之類似物。本發明之乳液的油性相可利用已知方法自已知成分中建構。此油性相可能僅含有一種乳化劑（促液動劑），但 -16- (13) 1242561 本發明的乳液最好含有一種由至少一種乳化劑和一種脂肪或油或此二者的混合物所組成的混合物。乳化劑可與或不與安定劑一起形成乳化鱲，且蠟可與油和脂肪一起製成乳化的油膏基質，而此基質則形成了乳膏配方的油性分散相〇適合用於本發明之配方中的促流動劑和乳液的穩定劑包括：、' 吐溫 ® 6 0 ’’ ( Tween 6 Ο )，、、史潘⑧ 8 Ο "( S p an 8 Ο )，鱈脂蠟醇、苄醇、肉豆蔻醇、一硬脂酸甘油 · 酯及月桂基硫酸鈉。選擇適合用於配方中的油或脂肪是根據所要得到的美容性質來決定的。因此，乳膏是以一種非-油腻、非染色性及可淸洗的產品較佳，此產品並且需具有合適的稠度以避免自管中或其它容器中漏出。可使用的直鏈型或側鏈型的一元或二元烷基基酯有，如：二異己二酯、硬脂酸異鱈繼醋、椰子脂肪酸之丙一醇二醋、丙蔻酸異丙酉旨、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸2 -乙基己醋 · 或一種側鏈型酯類的摻拌物（稱爲 ''克羅達摩C A P 〃

Cro dam 〇1 CAP )，而最後三種爲較佳的醋類。這些化合物可依所需要的性質單獨使用或合倂使用。或者，也可使用高熔點的脂類如：白色軟石蠛及/或液態石蠊或其它礦物油。適合眼部局部給予的配方也包括眼藥水，其中之活性成分是溶於或懸浮於一種合適的載媒劑中，尤其是一種活性成分用的水溶性溶劑。存在於此種配方中的活性成分， -17- (14) 1242561 其較合適的濃度爲0·01至20%，在某些體系中爲〇.]至 10%，而在其它體系中約爲1.0% w/w。適合嘴部局部給予的配方包括：①喉糖，其中所含的活性成分是在一種有味道的基質中，此種基質通常爲蔗糖及金合歡膠或黃耆膠；②錠劑，其中包含的活性成分是在一種惰性基質（如；凝膠體、及甘油、或蔗糖及金合歡膠 );及③嗽口水，其中所含有的活性成分是在一種合適的液態載媒劑中。泰用於肛門給予的配方可以以一栓劑的型式存在，此種栓劑帶有一種合適的’包含了如：椰子奶油或水楊酸酯的基質。適合用於鼻部或吸入給予的配方，其中該載媒劑爲一種固體，此種固體包含了一種粉末’其顆粒大小是在1至 5 0 0微米的範圍中（包括在2 0至5 0 0微米範圍中的顆粒大小並以5微米的大小逐漸增加，如：3 0微米、3 5微米、等等）。其中載媒劑爲液體之適合給予的配方（如：鼻部噴霧或鼻部滴液）包括：活性成分的水溶性或油性溶液。適合噴霧給予的配方可根據傳統方法來製備並且可以其它治療劑來遞送。吸入治療可以很容易地以計量的劑量吸入器來給予。適合用於陰道給予的配方可以以子官套’棉塞、乳膏、凝膠、糊狀物、泡沬或噴霧配方的型式存在，其中除了含有活性成分外還含有在該領域中所已知之合適的載媒劑。適合用於腸胃道外給予之配方爲無菌的配方並且包含了 - 18~ (15) 1242561 ①冰溶性和非水溶性注射溶液，這些溶液中可含有抗氧化劑、緩衝液、抗菌增生劑及使配方與接受治療者之血液成爲等張液的溶質；②水溶性及非水溶性無菌懸浮液（其中可包含懸浮劑及濃稠劑）。此種配方可以存於單一劑量或多劑量的容器中，如：帶有橡膠質封口之密封的安瓶及小瓶子，並且可以冷凍乾燥的狀況存在，此種冷凍乾燥物質僅需在使用前加入無菌液態載媒劑即可使用（如：加入水以用於注射）。臨時性的注射溶液和懸浮液可以從先前描述的無菌粉末、顆粒及錠片來製備。較佳之單一劑量配方爲那些含有上述之BPPF每日劑量或單一每日次劑量或其適合之分液的配方。除了上述特別提到的成分外，本發明之配方也包括其它本領域中之傳統試劑，這些試劑是參考所需之配方種類來決定的，如：用於口服給予的配方中可包含調味劑。本發明還提供獸用組成物，它們包含了至少一種上述所定義的活性成分及一種其獸用載媒劑。獸用載媒劑是用於給予貓、狗、馬、兔子和其它動物用之組成物的物質並且爲獸類領域中之惰性的可接受的固態、液態或氣態物質，還必須與活性物質能夠相容。這些獸用組成物可經口、腸胃道或任何其它所需要的途徑給予个、發明之化合物可用來提供經控制釋出之藥學配方，此種配方中含有一種母質或吸附物質及做爲活性成分之一或多種本發明之化合物，此活性物質的釋出速率可以經控 -19- (16) 1242561 制並調節成低頻率的劑量給予以改良化合物之藥物動力或毒性的情況。適用於口服之經控制釋出配方中，含 BPPF之個別單位可根據傳統方法來製備。合成方法 BPPF是經由形成一種介於富馬酸和pMpA之間的複合物或鹽來製備的。pMPA是利用已知方法或下列步驟製備的已知方法或下列步驟製備的已知化合物。

-20- (17)1242561 PMPA的合成方法〇

ch2oh (S)-縮水甘油

Pd/CH2/ EtOH 1 OH OH (EtO)2C(0) 〇 V/ NaOEt/EtOH 〇A〇 •\ -- \ / CH3 2 CH 腺嘌呤 DMF, NaOH 4a v 1) (CH2〇)n/Et3N/ 甲苯

PMPA · H2〇 (18) 1242561 BPPF的合成方法 PMPA是利用下列方法以 (CH3 ) 2CH2OC ( 0 ) CH2C1進行酯化並與富馬酸加以複合。 PMPA · H20 1) (ch3)2ch〇c(〇)och2ci, 1-甲基-2-吡咯烷酮

Et3N

2) 富馬酸 iPrOH

力法總論在Ρ Μ P A的製備方法中：（S )—縮水甘油是以催化的氫化作用還原成（R ) — 1，2 -丙二醇，然後此化合物再與碳酸二乙酯反應以提供（R ) — 1，2 —丙烯碳酸酯。該碳酸醋與腺嘌哈及一種催化量的驗（如：氫氧化鈉）進行反應以產生（R ) - 9 一〔 2 — （二乙基膦酸基甲氧基丙坫）腺嘌呤，此化合物不經過分離再與醇鋰及對一甲苯磺醯-氣甲基磷酸二乙酯（將亞磷酸二乙酯與對甲醛進行反應並在原位將產物甲苯磺醯化後而製得）進行反應。所產生的（R ) - 9 一 2 -二乙基膦酸基甲氧丙基〕腺嘌呤再以溴三甲基矽烷去酯化以產生粗PMPA，然後調整 pH値使 -22 - (19) 1242561 產生自水中沈澱下來而加以純物。該產物以水進再結晶以 it行進一步的純化來提供PMPA—水合物。此方法在步驟1中使用一種少量的鹼，此種鹸可使反應速度增加約1 〇倍（與缺少鹼之相同反應比較）。步驟 1中也使用氫氣而不使用如：hco2nh4的試劑，以便在原涖產生氫氣。在步驟4 b中使用醇鋰會在加入反應混合物畤有輕微的放熱。使用高度反應鹼（如：NAH )會導致一種放熱反應，此反應中所產生的氫氣很難控制。因此，使用NAH會比使用醇鋰需要較多的勞力和注意。使用醇鋰鹼所產生的產物在與使用NAH所得到之產品相比時，可得到改良過的副產品種類，如：較低量的起始物質或過烷化產物通常是由於使用醇鹽而來的。圖表和方法中的步驟說明了（ R ) — Ρ Μ P A和（1〇 — 雙（POC ) PMPA的合成方法。應用該方法時，可使用手相性還純的起始物質（如：（R，S ) -縮水甘油）以得到手相性的中間產物混合物，如：1，2 -丙撐碳酸酯的手相性混合物，PMPA或雙（POC) PMPA。步驟1 . ( R ) — 1，2 -丙二醇：將（S )—縮水甘油 (1 . 〇公斤，1 3 . 5莫耳）加入一個含下列物質的反應器中 :(I ) 一種惰性氣體，如：氮、大氣及（11 ) 一攪拌過的含有5 %活性碳上鈀催化劑（1 00克）的懸浮液’此懸浮液中之碳上鈀是溶於含有2莫耳％氫氧化鈉的變性乙醇中（7. 85公斤EtOH和54克的1 6.7% NA0H镕液）。含催化劑和乙醇溶液之惰性反應器的內容物通常在加入（ -23- (20) 1242561 S )—縮水甘油前冷却至約0 °C (通常約一 5至5 °c )。然後，將氫氣在不超過20pSI的情況下加入含反應物的惰性反應瓶中，而反應溫度則控制在不超過2 5 t。將混合物攪動約4 - 5小時直至不再消耗氫氣。以TLC來偵測反應是否完全（當僅餘少量或沒有（S )—縮水甘油時即表示反應完全）。然後，將混合物加以過濾，如：矽藻土（約 1 5 0克）以移除固體，並在不超過5 0°C下，將過濾液在真空瓶中加以濃縮直至揮發物的收集已經停止或變得非常慢以得到一種含粗產物的油。將此粗產物在下一個步驟中直接使用。標題化合物的產量約1 〇〇 %。步驟2. (R) -1，2-丙撐碳酸酯：將含有碳酸二乙酷（1 · 7 8公斤，1 5 · i莫耳）和乙氧化鈉的變性乙醇（2】 % w/ w乙氧化鈉之乙醇溶液，2 1 〇克）加入（R ) — 1 ’ 2 —丙二醇中（1公斤，此理論値是以上述步驟1中所使用的（S )-縮水甘油量爲根據），並將溶液加熱至8 0 至1 5 〇°C以蒸去乙醇。爲使反應完全，如需要時，可再將碳酸~乙酯（0 · 1 6公斤）加入反應混合物中再以蒸餾法移除乙醇。藉著TLC來偵測是否僅有或沒有可測得的（r ) 〜1 ’ 2 -丙二醇以知反應是否完全.將剩餘物在 1 2(rc及 1 0 — 1 7微米汞柱下進行分餾以產生一種爲無色液體的標趣' 化合物。通常，此產物的純度若以GC分析時是96 %或更純。步驟3 ·對一甲苯磺醯氧基甲基磷酸二乙酯：在一個含有惰性氣體（如：氮氣）的反應器中，將由亞磷酸二乙 -24- (21) 1242561 酯（0.80公斤），對甲醛（022公斤）及含於甲苯（〇1 ! A斤）中的二乙1女（0 · 0 6公斤）所組成的混合物在8 7 °C 下’加熱2小時’然後回流約1小時直至以τ l c倬測時顯示只有微量或沒有亞磷酸二乙酯可測得即表示反應已完全。在反應中需維持著惰性氣體。甲苯可用來緩和此反應 ’否則反應可能會失去控制。反應是否已完成可隨意地以 1 HN MR來確認（即：在5 8.4〜8.6 p p Μ無法再測得亞磷酸二乙酯的尖峰）。將此溶液冷却至約KC (通常約—2 φ 至4 °C )並加入對一甲苯磺醯氯（1 · 〇公斤）。然後，在約5°C下慢慢加入三乙胺（0.82公斤）（此爲放熱反應） ’但溫度則維持在不超過1 0 °c ( —般爲〇〜1 〇 °c )的情況下。將所產生的混合物加溫至2 2 °c並攪拌至少約5小時 (通常約4.5至6.0小時），直至由TLC顯示出反應完全 (即：沒有或僅微量的對-甲苯磺醯氯可偵測到），也可隨意地以】Η N M R來確認（即··在5 7 _ 9 ρ ρ Μ處無法再測得對-甲苯磺醯氯的雙峰）。藉過濾法移除固體並以甲苯 _ (0.3 4公斤）淸洗之。將合倂的淸洗液及過濾液以水（每次淸洗用1 . 1 5公斤）淸洗二次或者是隨意地先依序以水 (1 . 1 5公斤），5 %碳酸鈉水溶液（3 . 3 8公斤）淸洗，再以水淸洗二次（每次1 . 1 5公斤）。每次淸洗完畢後，將反應器內含物簡單地攪動，使它穩定後，再將下層水溶液層丟棄。如果反應產生的爲一種乳液，則可將鹽水（0.23 公斤水內含0.08公斤NAC1 )加入第一個有機/水混合物 ’接著再攪動反應器內含物，使固體沈下後，將下層之水 -25- (22) 1242561 溶液層丟棄，再加入1 . 1 5公斤水攪動，使固體沈下然後再次丟棄下層的水溶液層。將有機相（不超過5 0 °C )在真空器中加以蒸餾（直至LOD在110 °C下超過10%，且水含量以KF滴定時不超過0.3% )以提供約60〜70%產量的標題化合物，此爲一種約 8 5〜9 5 %純度的油，但甲苯除外。步驟4· (R) — 9— 〔2—(二乙基膦酸基甲氧基）丙基〕腺嘌呤：此化合物是以一種含醇鋰及9 一（ 2 -羥丙基）腺嘌呤的組成物來製備的。在合成反應中，一般約在 0〜5 0 °C的溫度下（通常約 2 0〜4 5 °C )，將9 — ( 2 — 羥丙基）腺嘌呤與醇鋰進行接觸。在這些組成物及方法中的 9 - ( 2 -羥丙基）腺嘌呤通常是存於一種有機溶液中。該有機溶液通常含有一種有機溶劑，如：二甲基甲醯胺、四氫呋喃、甲苯、乙腈、CH2C12或一種（：卜6烷醇，通常爲二甲基甲醯胺或甲苯。這些組成物可隨意地含有對-甲苯磺醯氧基甲基磷酸酯或腺嘌呤，而當這些物質是以低濃度存在時，其含量與9 一（ 2 —羥丙基）腺嘌呤相比較下一般是少於約1 5 %通常是少於約1 0 %。一般來說，這些組成物及方法是用特-丁氧化鋰或異-丙氧化鋰。一般而言，約使用0.9〜3.0莫耳克當量通常約爲1.2 — 1.8莫耳）之對-甲苯磺醯氧基甲基磷酸酯（相對於在步驟4A 中所使用的腺嘌呤鹼）的上述物質來做爲反應物’以與醇鋰和9 一（ 2 -羥丙基）腺嘌呤進行反應。本發明的體系包括由下述步驟所製備的產品：將9 - （ 2 —經丙基）腺 >26- (23) 1242561 口票呤及醇鋰進行接觸’在這些體系中’反應物通常是存在方A也含有對一甲苯擴醯氧基甲基磷酸酯的有機溶液中。在另一個體系中，（R ) — 9 — 〔 2 - （二乙基膦酸基甲氧基）-丙基〕腺嘌啥（如上述步驟4所顯不的）的合成方法說明如下。在一個含有惰性氣體（如：氮氣）的反應器中，將由腺嘌呤（1 · 〇公斤）、氫氧化鈉（1 1.8克）、（R) -1，2 —丙撐碳酸酯（0.83公斤）及N，N-二甲基甲醯胺（6 · 5公斤）所組成的混合物加熱至約1 3 0 °C (通常約1 2 5〜1 3 8 °C )約1 8〜3 0小時，直至隨意地以區域正常化的HPLC偵測時不再有超過0.5%的腺_呤剩餘便知反應已經完全。將所產生的混合物冷却至約 25 t ( 通常約20〜30Ϊ：)而混合物中所含有的第I階段的中間產物（R ) — 9 - （ 2 —羥丙基）腺嘌呤。在此溫度時會產生沈澱。冷却後，將含特一丁氧化鋰（3.62公斤）的四氫呋喃（2.0M )加入第I階段的中間產物中以產生（R ) - 9 一（2 —羥丙基）腺嘌呤的鋰鹽，加入時會有輕微的放熱作用。將此泥狀物以對一甲苯磺醯氧基甲基磷酸二乙酯（ 1 . 1 9公斤）加以處理並將混合物加熱至約3 2 °C (通常是約3 0〜4 5 °C )並攪拌約至少2小時（通常約2 — 3小時） 1在此時間中該混合物會變成均勻狀。在混合物中再加入 W义的對-甲苯磺醯氧基甲基磷酸二乙酯（1·43公斤）並在約3 2 °C下（通常是約3 0。(：〜4 5 °C )攪拌至少約2小時 (通常是約2 — 3小時）。加入額外的特—丁氧化鋰〇 . 6 6 公斤（2.0 Μ，含於四氫呋喃中）並將對一甲苯磺醯氧基甲 -27- (24) 1242561 基磷酸二乙酯（每次加〇·4 8公斤）加入其中且重覆加入超過二次，每次加入後需在3 2 °C下，將混合物搜拌約至少2小時，再隨意地以區域正常化的Η P L C偵測逭至顯示出沒有超約1 〇 %之第I階段的中間混合物剩餘Τ來即表示反應完全。如果反應不完全時可再額外加入含特—丁氧化鋰（0.3 3 k G )的2 · Ο Μ四氫呋喃及對—甲苯磺醯氧基甲基磷酸二乙酯（0.24公斤）並將反應混合物維持在約32 °C至少約2小時以使反應完全。將混合物冷却至約2 51 (通常約20〜40°C )，然後加入冰醋酸（0.5公斤）。在真空器中，將最後混合物的最高溫度控制在約 8 Ot，於約2 9的HG真空下將混合物加以濃縮。將剩餘物冷却至約5 0 °C (通常約4 〇〜6 0 °C )並加入水（1 . 8公斤），再以額外的水（1 . 8公斤）將反應物進一步淸洗。以二氯甲烷 (約3 5公斤）將溶液持續萃取1 2 — 4 8小時，並且在經過 5小時後將額外的冰醋酸（0 · 2公斤）加入水溶液層中，經過1 0小時後再一·次加入冰醋酸（〇 . 2公斤）。隨意地以區域正常化的HPLC進行偵測直至顯示出沒有超過7%之 (R ) — 9 一〔 2 - （二乙基膦酸基甲氧基）丙基〕腺嘌呤剩餘在水溶液層中即表示萃取已經完成。將合倂的二氯甲烷萃取液先在大氣壓下加以濃縮，然後在萃取溫度不超過 « 〇 °C的情況下於真空器中進行濃縮以產生一種黏稠橘色油狀的標題化合物。以重量正常化的HP LC測定，該標題化合物的產量約爲40〜45 %，且其純度以區域正常化的 Η P L C來測定時通常6 0〜6 5 %。濃縮後之標題化合物的確 (25) 1242561 實重量約爲理論値重量的]· 6倍。多餘的重量可與因於其不純度及/或在連續萃取和濃縮後所剩餘的溶劑。步驟5. (R) — 9— 〔2— （膦酸基甲氧基）丙基〕腺嘌呤，未純化的：未純化的（R ) — P MP A是經由將（R )一 PMPA二乙酯轉化成游離酸而製得的。在一個（R ) 一異構物的混合物中，其所含有之約 90〜94 % ( R)- PMPA和約6〜10% ( S ) — PMPA的比例可以增加成約 97〜99% (R) - PMPA。（ R )異構物的增加是經由下列步驟來完成的：在pH約爲 2.7〜3.5的情況下，將 Ρ Μ P A自一個含有（r，s ) - ρ Μ P A的組成物中沈澱下來 ’其中該溶液具有少於約0. 1克/毫升的（R，S ) - PMPA ( ·—般是少於約〇·〇8克/毫升，通常是少於約〇〇7 克/毫升），而其中該（r，S ) — PMPA溶液的溫度約爲 10〜25C ，通常約爲15〜22。(：。在（R，S) — PMPA溶液中增加（R ) — Ρ Μ P A異構物是在約4 0〜5 5 °C的溫度下，知p Η値g周整爲2.4 - 3 · 5，再隨意地將溶液ρ η値調整爲2.4〜3 . 5，然後再隨意地將溶液溫度調爲1 〇〜2 5 t，然後再將pH値調爲約2.7〜3.5。在另一體系中，如上述步驟5中之未純化的（R ) 一 PMPA的合成方法說明於下。將溴三甲基矽烷（1 ·56公斤 )加入含有由粗（R) — 9— 〔2一（二乙基膦酸基甲氧基 )内基〕一腺嘌呤（1 . 〇公斤，以上述步驟4中之腺嘌呤輸入爲D十算的根據）和乙腈（〇 . 9公斤）所組成之混合物 I.1J名器中，一邊將谷器冷却以使溫度維持在不高於5 〇艺 -29 - (26) 1242561 的情況下。以乙腈（Ο · 3公斤）將反應物進一步淸洗並將混合物在約60〜75 °C下回流2 - 4小時，並一邊加以中度攪拌以避免反應器的內容物噴出。以區域正常化的HpLC 來進订偵測直至顯不出殘餘的一乙基ρ μ p a和-乙基 PMPA不超過全部的3%即表示反應完全。如果反應尙未完成則再將額外的溴三甲基矽烷（0.04公斤）灌A反應器中並將反應物回流至少約1小時且一邊加以中度攪拌。將內容物首先在大氣壓下於不高於7 Ot的溫度下加熱，然 φ 後，在不咼於7 0 °C的真空器中（約24〜2 7录柱）繼續加熱以移去揮發物。然後，將反應器內容物冷却至約20 °C (一般約1 5〜2 5 °C )並將（1 . 9公斤）加入剩餘物中（爲散熱的作用），此時該內容物的溫度是維持在不超過5 0 °C的情況下。將反應物冷却至2 0 °C並以二氯甲烷（1 .7公斤）一邊攪拌一邊淸洗約3 0分鐘。將分離出的水溶相經由一個1 // Μ的過濾筒過濾並以水（3.2公斤）稀釋之再加熱至約4(TC (通常約35〜50°C )並將pH値以ΝΑΟΗ ( φ 約0.15公斤之ΝΑΟΗ，爲50%的溶液）調爲1·1 (通常爲 0.9〜1.3 )，而溫度則維持在約45°C。將ΡΜΡΑ種子結晶加入混合物中並將p Η値以5 0 % Ν Α Ο Η水溶液（約〇 . 1 5 公斤Ν Α Ο Η )調至約2.8 (通常約2 · 6〜3 . 〇 )，而溫度則維持在約4 5 t (通常爲3 5〜5 0 t：)。將溶液在約3〜2 0 小時中冷却至約2 2。(：（通常約1 5〜2 5 °C )並一邊加以慢速至中度攪拌以避免內容物噴出，在此期間中產物應會沈澱，開始沈澱的時間約爲3 5 °C。將該泥狀物的P H値調至 -30- (27) 1242561 約3 · 2 (通常約爲3 . 1〜3 · 3 )，如需要時，通常是使用5 〇 %氫氧化鈉或鹽酸來調整。將泥狀物冷却至約5 °C，通常約爲〇〜1 0 °C，並在該溫度範圍下慢慢攪拌至少約3小時。經由過濾法來收集固體，並依序以冷水（0.3 5公斤）及丙酮（0.3公斤）淸洗之以得到粗PMPA，此爲一種通常純度約爲9 7 %的濕固體。將產物加熱至約5 0 °C並於真空器中加以乾燥直至水含量少於1 〇 %二乙基Ρ Μ P A的量是由前述合成步驟中腺嘌呤之使用量計算而得的（假設產量爲100%)而不是由粗的二乙基PMPA的淨重來計算，因爲該物質中可能含有其它化合物。步驟6. (R) — 9一〔2—（膦酸基甲氧基）丙基〕腺嘌呤，純：將步驟5之產物粗Ρ Μ P A ( 1 .0 0公斤，經過水含量的修正）的水懸浮液加熱至約1 00°C (通常約95〜 110。(：），並一邊加以中度至高度攪拌直至全部固體都已溶解，並將所產生的溶液趁熱時經由過濾加以澄淸’然後再進一步以熱水（1公斤，約95〜110 °C)淸洗。在冷却前，先將過濾液加熱至1 〇〇°C °首先’約在3〜5小時內一邊慢速攪拌，一邊冷却至3 0 °c (通常約2 0〜3 5 ) ’然後，繼續冷却至約10°C (通常約5〜15°c )。在l〇°C下置於,約至少3小日寺後：，經由過濾法收集固體並依序以冷却 (1 .5公斤，約0〜1 〇 °C )及丙酮（1公斤）淸洗之。在真空器中，5 〇 C下（通常約4 0〜6 0 °C )將濕的團塊加以乾燥直至水含量約爲5 · 9 % (通常約3.9〜7.9 % )，以提供純Ρ Μ Ρ A -水合物。此產物的純度以區域正常化及重量正 -31 - (28) 1242561 常化的Η P L C來偵測通常均爲9 8 %或更高。如果不滿意其化學純度則可將此產物藉此步驟再重新純化一次。隨意的再結晶作用：將懸浮液加熱至9 5〜1 〇〇它以將 PMPA(0.75克）自Η^〇(11·3毫升，重量比15: 1)中再結晶。當冷却至室溫時，將結晶化的ΡΜΡΑ在一個冷凍庫中加以冷却。3小時後，將結晶在一個帶有 '、泰威克TM (Tyvek ™ )的粗玻璃器上加以過濾，再以冰冷的水和丙酮淸洗過濾出的團塊並在空氣下加以乾燥至固定重量以產生一種鬆散的白色固體（製備方法B )。回收量約爲〇. 5 4 克（85.3% )。通常以HP LC測試可顯示出純度爲98.5〜 9 8.9% 的 PMPA 〇製備方法B的Ρ Μ P A係隨意地自加熱至9 5〜1 0 〇 °C的 ΙΟ ( 9.6毫升）中再結晶。當冷却至室溫時，該結晶化的PMPA是在一個冷凍庫中冷却一整夜。將PMPA經由一個帶有、'泰威克TM 〃的粗玻璃器中加以過濾且該過濾團塊是以冷Η 2 0和丙酮淸洗然後真空乾燥至固定重量以產生一種鬆散的白色固體（製備方法C )。通常Ρ Μ Ρ Α的回收量約爲〇·53克（81.3% )且其純度約爲99.3〜99.5%。將製備方法C的Ρ Μ Ρ A ( 0 · 5 0克）隨意地自約7.5毫升之沸水（重量比1 5 : 1 )中再結晶。當冷却至室溫時，將Ρ Μ Ρ A在一個帶有 ''泰威克^ 〃的粗玻璃器上加以過濾，並以冰水和丙_淸洗該過濾團塊。然後，再抽真空至乾每以產生一種鬆散的白色固體。自一或二次再結晶作用所製備出的PMPA可隨意地用來製備pMPa衍生物。 (29) 1242561 步驟7.雙（P〇C) PMPA富馬酸酯：在一種合適的溶劑C如：NMP )中，將PMPA與一種鹼（如，三烷胺： TEA，二異丙基乙胺）及氯甲基一 2 一丙基羰酸酯行反應以產生雙（POC ) PMPA。在約55〜80 t的反應溫度下，將反應物加以中度攪拌約1〜6小時，如此可得到不錯的雙（POC ) PMPA產量。在這些時間和溫度範圍內的不同情況下’該雙（P 0 C ) Ρ Μ P A的合成反應都會有好的反應結果。例如：當先使用高反應溫度（約70〜8〇。(：，但不超過8 0 °C )再使用較低的反應溫度時，在低溫下（約5 5 〜6 5 °C )來進行一段短時間的反應（約3 0〜1 2 0分鐘）可以有好的反應結果。反應範例有：（1 )在8 0 °C下，反應 3〇分鐘，再於60〜65°C下，反應2小時，（2)在6(TC 下，反應4小時及（3 )在7 0〜7 2 °C下，反應2小時。當雙（POC ) PMPA合成反應已經完成後，便可以隨意地使用過濾法自反應混合物中去除固體，再以一種醋酸烷基酯（通常使用一種C ! - 4烷基部分的醋酸酯，如：醋酸正一丁酯、醋酸正-丙酯、醋酸異丙酯或醋酸乙酯。然後’在真空器中進行蒸餾以移去約原有反應體積之3 〇 % 的有機溶劑。加入富馬酸以形成固體BPPF，此物質通常以CBPPF的形式沈澱。該BPPF或CBPPF可含少量（通常少於1 %，約〇. 2〜0.4 % )之水或有機溶劑，如：1 — 甲基-2 --毗咯烷酮，一種三烷基胺（如：C卜3烷基’如 :三乙胺、甲基—二乙胺、二異丙基乙胺、或丙基—二乙胺），醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯、醋酸異丙酯’一 -33- (30) 1242561 種C ! — 6院醇、批D定、二甲基甲酿胺、一甲基亞硕、丙酮、ch2ci2、四氫呋喃、乙腈、甲苯’一種二甲苯、甲基乙基甲酮、1，2 —二氯乙院或C H C 13 °通常該富馬酸是溶於一種C6院醇中，如：正—己醇、正—戊醇、正—丁醇、異丙醇、正一丙醇、乙醇或甲醇。用來製備B p P F或C B P P F的方法和組成物是使用雙（ P〇C) PMPA和富馬酸來做爲反應劑。一般而言，所使用的溶液中含有約3〜430毫克/毫升之雙（POC) PMPA( 通常爲約4〜100毫克/毫升）° 一般所使用之雙（POC )Ρ Μ P A與富馬酸之莫耳比約爲0 · 6 : 1〜1.4 : 1，通常約爲0.9 : 1 . 1或1 : 1，而所使用的溶液中通常含有一種有機溶劑，如：一種醋酸烷基酯、1 —甲基一 2 —吡咯烷酮，一種三烷基胺，一 C ] - 6烷醇、吡啶、二甲基甲醯胺、二甲基亞硕、丙酮、CH2C12、四氫呋喃、乙腈、甲苯，一種二甲苯、甲基乙基甲酮、1，2 —二氯乙烷或CHC13。在另一個體系中，雙（POC ) PMPA的合成方法以及與富馬酸進行結晶化以形成BPPF係如上述步驟7中所顯示的並說明如下。在一個帶有惰性氣體（如：氮氣）的反應器中，將一種由 1 一甲基一2—吡咯烷酮（4.12公斤），PMPA -水合物（1.00公斤）及三乙胺（0.996公斤）所組成的混合物攪拌約1 5〜4 5分鐘，通常約3 0分，然後加入氯甲基-2 -丙基碳酸酯（2.5 0公斤），再將混合物加熱至約55〜65t，通常約60°C並在不噴出內含物的情況下攪拌約3〜6小時，通常約4小時，直至反應完全， -34- (31) 1242561 並隨意地以 HPLC來指示（—（p〇c) PMPA的存超過1 5 % )。以醋酸異丙酯（1 〇 . 7 2公斤）加以稀却至約15〜30°C，通常約25T：，冷却速度儘可能使反應器的內容物維持在約1 5〜3 0 t：，通常是約一邊攪拌該混合物約2 0〜6 0分鐘，通常約3 0分鐘濾法移出固體並以醋酸異丙酯（4.4 4公斤）淸洗 15〜3(TC (通常約25t )下將合倂的有機相以水次（每次3.2 8公斤），一邊拌以中度攪動約1 0分免形成一種乳液，接著再使用二種相分開。將合倂液層以醋酸異丙酯（每次3 . 5 6公斤）反萃取二次〜3 0 °C，通常約 2 5 °C )。將所有的有機相加以合水（2 · 2 0公斤）淸洗（約1 5〜3 0 °C，通常約2 5 °C 洗時以中度攪拌約〗-1 0分鐘以避免形成一種乳液倂的有機相（約2 5〜4 3 °C，但不超過4 5 °C )在真 (約2 6.5〜2 8 〃 H G )加以濃縮至約爲厚體積（約升/公斤Ρ Μ P A —水合物）的3 〇 %。利用一種線 in-line)之1微米的過濾器進行磨光過濾後，將有濃縮物在真空下（約28〃 HG )，於20〜38°C (不: °C )溫度中回復直至剩下一種淡黃色油。將此油镕含富馬酸（〇 · 3 8公斤）的2 -丙醇（6 · 2 4公斤）溫 (約4 5〜5 5 °C，通常約5 0 °C )並一邊劇烈攪拌值溶解，約需〇 . 5〜2.0小時。然後’將溫溶液隨意 —種線一內（i η -1 i n e ) 1微米過濃益加以過清、’但不使溶液冷却。將過濾液維持在3 4〜5 0 °C (通常弃

在量不釋並冷快，且 2 5。。，。以過之。在萃取二鐘以避的水溶 (約].5 倂並以 )，淸。將合空器中 1 0 〜1 2 -內（機相的超過40 於一種溶液中至固體地利用儘可能 ;勺 4 0 cC (32) 1242561 )下，如此，可用最少的攪動來得到所要的均勻溶液。在 3 0分鐘的期間中，以最少的攪動將所產生的溶液冷却至約3 0〜3 3 °C (通常約3 2 °C )，並隨意地以一小量的雙（ P〇C ) PMPA富馬酸酯（約100毫克）來做爲晶種，且在約超過1 1〜2小時的期間（通常約超過1小時）將溶液冷却至1 2 — 1 8 °C (通常約1 5 °C )。如果在晶種置Λ前即開始形成結晶時，則可不必加入晶種。當溶液冷却時，結晶形成的溫度範圍約爲1 2〜3 3 °C。當結晶開始形成時便不必再繼續攪動。使混合物在1 5 t：下置放約1 2小時，通常約1 2 — 3 0小時。將所產生的鬆散物加以過濾（泰威克tm )並以事先混合好的含醋酸異丙酯（〇 · 7 〇公斤）的丁醚（ 2 · 4 4公斤）溶液（1 : 4 v / v )淸洗該過濾塊。將該過濾塊（不超過4 0 °C )在真空器中乾燥約1至1 〇天並將乾燥產物隨意地硏磨（利用配備以一個〇.05〇篩孔的、、費茲米爾Μ 5 A 〃硏磨器）以產生雙（p〇c) PMPA富馬酸酯，此爲白色、ira細、粉狀結晶’其純度約爲9 7.0至99.5% 。如需要時’將B P p F隨意地依此處之說明進行結晶化以增加產物的純度。體系中還包含了過渡性組成物，它們是在—個方法的步驟中或操作進行中出現的。例如，當醇鋰與 9 -（ 2 — 羥丙基）腺嘌呤溶液混合時，此組成物在混合開始時會含有很少量的醇鋰。〜般而言，此組成物在充分攪動以混合溶液之前會以一種非均勻混合物的形態存在。通筲，此種組成物會含有很少量的反應物並且主要是包含了反應物。 -36- (33) 1242561 類似地，當反應進行時，反應物、產物和副產物的比例會依彼此情況而有改變。這些過渡組成物爲中間產物，它們是當步驟進行時產生的，且它們也包含在發明的體系中。所有此處所找到的引用文均倂入作爲參考資料。下列實施例進一步說明但不用來限制本發明。【實施方式】實施例1 雙（POC ) PMPA富馬酸酯的物理件質〇根據已發表的步驟（美國藥典，第23冊，1995，方法941，U.S.P 藥典會議公司，洛克維爾，M D )，利用一種通用電器模型XRD — 5 X —光繞射器及一種西門子軟體系統界面，於掃描速度爲2度2 Θ /分鐘的情況下來決定CB PPF的X 一光粉末繞射型式。將BPPF結晶暴露於一個X —光發生器（於40kV和一 20ΜΑ下操作）前，利用一個帶有石墨單色儀（ES工業）的標準聚焦銅X —光管（威利肯CA 一 8 〃（ V a r i c a n C A - 8 ))及一個閃燦偵測器，於4及3 5 度2 β之間來進行掃描。所測得之用來計算的X —光波長平均値爲CuKa 1.5 4 1 8 3 8 Α。BPPF所顯示出之特定的Χ -光粉末繞射尖峰以度2 0來表示時，約在4 · 9、1 0 · 2、 10.5、18.2、20.0、21.9、24.0、25.0、25.5、27.8、30·1 及3 (). 4處。下述爲一個X -光粉末繞射型之實施例。 B P P F結晶也可以差別掃描量熱學來分析並顯示出$ 韵1〗8 · 3處有一個特定尖峰，其起始處約爲Η 6 · 1 °C °該 -37- (34) 1242561 溫度紀錄圖是在氮氣下以每分鐘i 〇〇c的掃描速得到的，而量熱學的掃描圖是利用差別掃描量熱器（TA儀器，模型D S C 2 9 1 0 ’帶有一個模型2 2 0 0的控制器）得到的。約需5 M G的B P P F結晶以用來取得溫度紀錄圖。差別掃描量熱學在如：美國藥典，第23冊，1995，方法891，（ U .S.P.藥典會議公司，洛克維爾，md )中已有說明。 B P P F的熔點（測試樣本在此溫度時會全部變成液體 )是利用一種配備有一個F Ρ90中央製造器的邁特勒 FP81 測量細胞（Mettler FP81 measuring cell)根據已發表的步驟（美國藥典第22冊，1994，方法741，方法ΙΑ ，U . S · Ρ .藥典會議公司，洛克維爾，MD )來決定的。在毛細玻璃管的底部塡滿精細硏磨的BPPF。將毛細管在一個硬表面上輕拍以將B P P F壓至4〜6毫米。將此毛細管置入樣品機中並使溫度以每分鐘 KC的速度上升。該熔點是以樣品全部熔解的溫度爲根據，BPPF的熔點是114.2 至 1 1 4.6 °c。以卡爾費雪滴定法（Karl Fischer)利用一種、'馬崔姆 684KF 電量計 '、（Metrohm 684KF Coulometer)根據已發表的步驟（美國藥典，第 23冊，1995，方法 921， U.S.P·藥典會議公司，洛克維爾，MD )及製造商之電量計的指示來測定B P P F的水含量。在此分析中所使用的 BPPF量（約50〜100毫克）是以一種5方分析平衡方法 (沙特利斯（S a r t ο 1. i u s )，模型R C 2 1 0 D ’或相等物）來測量的。通常一組含有少於1 . 〇 % w / w的水。 - 38- (35) 1242561 BPPF結晶以紅外線分光光度測定來進行分析時是利用一種帕金—艾瑪"模型 1650FT — IR( Perkin- Elmer model 1 6 5 0FT-IR)分光光度計根據製造商的指示來進行的。將K B R ( 阿特利’ A 1 d 1· i c h，I R級）在使用前先於 6 0°C，真空下加以乾燥一整夜。將BPPF結晶（重約5毫克，約佔總重之1 〇 % )與乾KB R (重約5 0毫克，約佔總重之9 0 % )二種粉末一起硏磨以得到較微細的粉末來製備含此二種粉末之半透明小九。IR分光術在下列資料中已有說明：如：U.S·藥典，第22冊，1994，方法197， U · S · P ·藥典會議公司，洛克維爾，M D ;莫利森，R . T .等人者，有機化學第3版，艾林及貝肯公司，波士頓，第405 〜4 1 2頁，1 9 7 3。在掃描樣品之前，先以高純度之氮氣在約6 ρ · S . I下，將分光光度計樣品室洗滌至少5分鐘以減少在背景掃描中之二氧化碳的吸收干擾至$3%。BPPF顯示出具有一個紅外線的吸收光譜在溴化碘處，其特定暗帶是以倒公分來表示，約在下列幾處：3 224 ( Ο - Η )，3107 -305 2 (N-H^ C-C-H) ，2986-2939 (月旨族的 C-H )，1759(烷基酯 C=0) ，1678(芳香族的 C=N)， 162〇(芳香族的C二C) ，1269(磷酸酯P=〇)及1102 (C 一〇 — c )。檢查B P P F在不同溶劑中的溶解度。B P P F在極性溶劑中的溶解度最高。B P P F在二甲基甲醯胺中的溶解度爲 42 8毫克/毫升而BPPF在下列溶劑中的溶解度約爲15〜 ]0 0毫克/毫升··醋酸異丙酯：水（1 : ] v / v )、甲醇 -39- (36) 1242561 、乙醇、異丙醇、0.INHC1及丙酮。BPPF的溶解度在乙腈、醋酸異丙酯及去離子水（p Η 3 . 3 )中爲約1 5毫克/毫升。BPPF在CH2C]2，二乙醚及己烷中的溶解度低。以紫外線分光光度測定來分析B P P F結晶是利用一種惠普模型842 5 A二極真空管排列分光光度計，依照製公司的指示進行分析。在分析中使用的B P P F量（約2 5毫克）是以一種5方分析平衡法（沙特利斯，模型 R c 2 1 0 D ’或相等物）及HP LC或分光光度計的分級溶液來測量。在0.0 1M磷酸鉀緩衝液中的BPPF於pH6.0時，10 // G/ J BPPF在0·1 NHC1中的莫耳吸收率爲14930M— kM-1 ，且在 ρΗ2.0時，15//G/m£2 BPPF的莫耳吸收率爲 15010M — 】CM-1。甲醇中之 BPPFClO/zG/J)在約 2 6 0NM處有一個入λ MAX。當置於92%之相對濕度及室溫中長達37天時，BPPF 爲非收濕性。BPPF以電位滴定法測定時，其ρκA爲3.8 實施例2 丄-R )_— PMP厶的手性型濃化（Chiral enrichement) ° 將（R，S ) — Ρ Μ P A · Η 2 Ο ( 2 · 5 G，約 9 3 % R 異構物 )懸浮於含水（100毫升）之錐瓶中，並依需要以HC1或 NAOH將pH値調爲7.12。將溶液暖至4(TC並將pH値調爲約5 · 〇。然後，將ρ η値調整爲3 · 1，再以（R ) - ΡΜΡΑ 爲溶液加種。將溶液冷却至室溫並置放約2小時。在一個 -40- (37) 1242561 粗玻璃料之燒結玻璃漏斗上收集固體並以冰水（〇毫升）淸洗，然後再以丙_( 1 0毫升）淸洗。所產生之PMP A 含有98.3%之（R)異構物。當利用2·5克之（r，s) _ PMPA (約93% (R) -異構物）及25毫升水依類似的實驗計劃來操作時，不會有手性之（R )羁構物的增加。當使用 0.766 克之（r，S) — PMPA (約 93% (r)— 異構物）及1 0毫升水時，若依類似的實驗計劃操作則可觀察到手性的（R )異構物增多而成爲99.6% (R)- 異構物。實施例3 CBPPF和雙（POC ) PMPA ·檸檬酸鹽之固體狀態的化學穩定性是利用分析各化合物在不同情況下貯存一段時間的情形來進行比較的。結果顯示 :BPPF粉末令人意外的在提高的溫度和相對濕度下較爲穩定。 -(POC)PMPA 雙(POC)PMPA -(POC)PMPA 狀況時間Ψ BPPF% 富馬酸鹽％檸檬酸鹽％棒檬酸鹽％ 40〇C?75%** 0 99.0 1.0 99.0 1.0 14 98.3 1.7 96.9 3.1 30 98.1 1.9 92.9 7.1 60 97.1 2.9 ΊΊ.6 22.4 60〇C?75% 0 99.0 1.0 99.0 1.0 -41 - (38)1242561 3 96.9 3.1 24.0 58.9*** 7 — — 6.7 76.2*** 11 90.4 9.6 — — 15 81.3 18.7 — — ，，， * * 、、相對濕度〃， (PO C ) P MPA檸檬酸鹽外其它產物也會生長出來。

-42 > (39) Ϊ242561 實施例4 雙富馬酸一（P 0 C ) PMP A 富馬酸醋的配方。依下1 可將BPPF與數種賦形劑一起製劑見分 % w / w 每單位含量（毫克/錠片） BPPF 34.0 75 乳糖-水合物 •顆粒內部分 54.0 119.2 •顆粒外部分 2.0 4.4 事先凝膠化的澱粉，NF 5.0 11.0 ，NF •顆粒內部分 2.0 4.4 •顆粒外部分 2.0 4.4 硬酯酸鎂，NF 1.0 2.2 在此配方中，事先凝膠化的澱粉NF是用來做爲連結劑及適合錠片壓縮時之崩解劑。Croscarmellose Na，NF ( 此爲內在交叉相接之羧甲基纖維素鈉）是用來促進錠片之崩解及溶解。乳糖-水合物N F是用來做爲一種稀釋劑以幫助製造並促進錠片的溶解。硬脂酸鎂NF是用來做爲一種潤滑劑以促進錠片自錠片壓縮過程中射出。含 BPPF 的錠片是將事先凝膠化的澱粉（ C r 〇 s c a r m e】1 〇 s e N a，及乳糖一水合物置於—個攪拌器中加以攪拌來製備。將水加入其中直至形成合適的濕顆粒。將 -43- 1242561 (40) 濕顆粒在一個流體床乾燥器中加以硏磨、乾燥直至濕度含量在乾燥過程中不會損失超過3 %並將乾燥的顆粒通過一個硏磨機。將硏磨好的顆粒與顆粒外的陚形劑’ C. r 〇 s c a r m e 11 〇 s e N a，及乳糖—水合物合倂在一起在一個混合器中拌勻以得到一種粉末摻拌物。然後，將此粉末摻拌物與硬脂酸鎂摻拌在一起並壓製成錠片。將錠片塡入高密度聚乙烯或玻璃瓶中並伴以聚酯纖維包裝物質以及隨意地帶有一矽膠乾燥劑。【圖式簡單說明】第1圖所顯示的爲一種BPPF結晶的X-光粉末繞射型式。第2圖所顯示的爲一個經由BPPF結晶之差別掃描量熱學所得到的溫度記錄圖。第 3圖所顯示的爲一種 BPPF結晶之 ''傅立葉〃（Fourier)轉換紅外線吸收光譜。第4圖爲一張照片的圖形，它所顯示的是經由光學顯微鏡將B P P F結晶放大1 0 〇倍後的體系。第5圖是一張照片的圖形，它顯示出的是BPPF結晶經由光學顯微鏡放大 1 〇〇倍的體系。第6圖是一張照片的圖形’它顯示出經由光學顯微鏡將BPPF結晶放大200倍時的體系。第7圖是一張照片的圖形，它顯示出經由光學顯微鏡將BPPF結晶放大4 0倍時的體系。第4〜7圖是放大1 3 2 %的照片複本

Claims

1242561 ^ G vl> 拾、丰請專利範圍附'件2Α :第93 1 1 2403號專利申請案中文申請專利範圍替換本臼修正 1 · 一種用於製備如式（民國94年6月23 Ε 1 )所示之化合物的方法〇 Β II

、〇R · ΗΟ

OH ⑴ 其中B是腺嘌呤一 9 一基且各R分別爲一 η或 _ -CH2- 〇- c ( 〇)—〇一CH ( CH3 ) 2，但其中至少一個 R 是一CH2 — 〇一c(〇）一〇一CH(CH3) 2，其中該方法提供一含有一種醇鋰及一種9 一（ 2 —經丙基）腺嘌呤溶液之組成物。 2.如申請專利範圍第1項的方法，其中二個r均爲― CH2 — 〇一c(〇）一〇一CH(CH3) 2。 3·如申請專利範圍第丨項的方法，其中該化合物是一種結晶型固體。 _ 4·如申請專利範圍第1項的方法，其中具有碳原子對掌中心（* )之構型的化合物被提升濃度或解析。 5 ·如申請專利範圍第1項的方法，其中該化合物當使用Cu — Κ α輻射時會有一個X 一光粉末繞射波譜尖峰，此尖峰以2Θ度表示時在25.0處。 6.如申請專利範圍第1項的方法，其包含將一種醇鋰與一種9 一（ 2〜羥丙基）腺嘌呤溶液加以混合，其中該醇鋰是一種選自如下之群體的醇鹽：甲醇鹽、乙醇鹽、正一丙 1242561 醇鹽、異一丙醇鹽、IE〜丁醇鹽、異一丁醇鹽、特—丁醇鹽、新戊醇鹽、正-戊醇鹽、異一戊醇鹽或正—己醇鹽、正— 庚醇鹽、2-庚醇鹽、正一辛醇鹽、2 一辛醇鹽，通常爲特一丁醇鹽或異-丙醇鹽。 7 ·如申請專利範圍第6項的方法，其中該醇鋰爲特一丁醇鋰或異-丙醇鋰。 8· —種組成物，其含有一種pH値爲2.7〜3.5之（R ，S ) — PMPA (9—〔2_ (膦醯基甲氧基）丙基〕腺嘌呤）溶液，其中該溶液含有至多0.1克/毫升的（R’s) -PMPA，及其中90〜94%之PMPA是屬於（R )構型。

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