UA128202C2 - Стабільна композиція антитіла до рецептора програмованої загибелі 1 (pd-1) і спосіб її застосування - Google Patents

Стабільна композиція антитіла до рецептора програмованої загибелі 1 (pd-1) і спосіб її застосування Download PDF

Info

Publication number
UA128202C2
UA128202C2 UAA201911493A UAA201911493A UA128202C2 UA 128202 C2 UA128202 C2 UA 128202C2 UA A201911493 A UAA201911493 A UA A201911493A UA A201911493 A UAA201911493 A UA A201911493A UA 128202 C2 UA128202 C2 UA 128202C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
composition
antibody
human
compositions
pembrolizumab
Prior art date
Application number
UAA201911493A
Other languages
English (en)
Inventor
Манодж К. ШАРМА
Уенді Бенджамін
Уенди Бенджамин
Саріта Міттал
Сарита Миттал
Ашвін Басаркар
Ашвин Басаркар
Чакраварті Начу Нарасімган
Чакраварти Начу Нарасимган
Рамеш С. Каші
Рамеш С. Каши
Мохаммед Шамім
Мохаммед Шамим
Суменду Бгаттачарья
Уільям П. мол. Форрест
Уильям П. Мл. Форрест
Йоґіта Крішнамачарі
Йогита Кришнамачари
Original Assignee
Мерк Шарп & Доме Елелсі
Мерк Шарп & Доме Елелси
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=64016286&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA128202(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Мерк Шарп & Доме Елелсі, Мерк Шарп & Доме Елелси filed Critical Мерк Шарп & Доме Елелсі
Publication of UA128202C2 publication Critical patent/UA128202C2/uk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/40—Cyclodextrins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Винахід стосується стабільної композиції антитіла до людського рецептору програмованої загибелі PD-1, що містить від приблизно 100 мг/мл до приблизно 200 мг/мл анти-PD-1 антитіла або його антигензв'язувальний фрагмент, від приблизно 5 до 20 мМ гістидинового буфера, стабілізатор, який становить від приблизно 6 % до приблизно 8 % мас./об. сахарози, від приблизно 0,01 % до приблизно 0,10 % неіонної поверхнево-активної речовини, яка являє собою полісорбат-80; і від приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ антиоксиданту, який являє собою L-метіонін або його фармацевтично прийнятну сіль, де антитіло до людського PD-1 або його антигензв'язувальний фрагмент містить три CDR легкого ланцюга, що включають CDRL1 SEQ ID NO: 1, CDRL2 SEQ ID NO: 2 і CDRL3 SEQ ID NO: 3, і три CDR важкого ланцюга CDRH1 SEQ ID NO: 6, CDRH2 SEQ ID NO: 7 і CDRH3 SEQ ID NO: 8.

Description

(54) СТАБІЛЬНА КОМПОЗИЦІЯ АНТИТІЛА ДО РЕЦЕПТОРА ПРОГРАМОВАНОЇ ЗАГИБЕЛІ 1 (РО-1) І
СПОСІБ ІІ ЗАСТОСУВАННЯ
(57) Реферат:
Винахід стосується стабільної композиції антитіла до людського рецептору програмованої загибелі РО-1, що містить від приблизно 100 мг/мл до приблизно 200 мг/мл анти-РО-1 антитіла або його антигензв'язувальний фрагмент, від приблизно 5 до 20 мМ гістидинового буфера, стабілізатор, який становить від приблизно б 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози, від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,10 95 неіонної поверхнево-активної речовини, яка являє собою полісорбат-80; і від приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ антиоксиданту, який являє собою І -метіонін або його фармацевтично прийнятну сіль, де антитіло до людського РО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент містить три СОК легкого ланцюга, що включають СОКІ 1
ЗЕО ІЮ МО: 1, СОКІ 2 5ЕО ІЮ МО: 2 і СОКІЗ ЗЕО ІО МО: 3, і три СОК важкого ланцюга СОКНІ1
ЗЕО ІЮ МО: 6, СОКН2 5ЕО ІЮ МО: 7 і СОКНЗ 5ЕО І МО: 8.
Окиснення Ме-105 за даними НООНІС (4020) 18 я Я Кампазншя
В 1 х титає є Компознція 2 о» | шт 00 ж Кампнознція З зе о 154 маш: я Е - В ни - ж -Композиця 4
БО 13. А ка --ж 2 Композиція 5 -боонк ! ших шій 7 о Ф ! я вд
КОМ т о 4 8 12
Тижні
Фіг. 1С
ГАЛУЗЬ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД
Даний винахід стосується стабільних композицій, що включають антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які зв'язуються з людським рецептором програмованої загибелі 1 (РО-1). Винахід також стосується способів лікування різних видів раку і хронічних інфекцій композиціями за даним винаходом.
ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ
По даній заявці заявляється пріоритет заявки на патент США з серійним номером 62/500238, поданої 2 травня 2017 року, яка включена в дану заявку за допомогою посилання в повному об'ємі.
ПОСИЛАННЯ НА СПИСОК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ, ПРЕДСТАВЛЕНИЙ В ЕЛЕКТРОННОМУ
ВИГЛЯДІ
Список послідовностей даної заявки представлений в електронному вигляді через ЕЕ5З-Мер у вигляді списку послідовностей в форматі АЗСІЇ з ім'ям файлу "24439УМОРСТ-5ЕО І5Т-26
АРКІІ2018.ТХТ", з датою створення 26 квітня 2018 року і розміром 33,3 КБ. Цей перелік послідовностей, представлений через ЕЕ5-Меб, є частиною опису і включений в дану заявку за допомогою посилання в повному об'ємі.
ПЕРЕДУМОВИ ДО СТВОРЕННЯ ВИНАХОДУ
Терапії на основі імунних контрольних точок, що цілеспрямовано впливають на вісь рецептора-1 програмованої загибелі (РО-1), привели до принципово нових поліпшень клінічної відповіді при множинних ракових захворюваннях людини |Вгаптег еї а!., М Епаді У Меа 2012, з66: 2455-65; Сагоп єї а). М Епоі ) Меса 2015, 372: 2018-28; Натіа єї аї., М Еподі ) Мей 2013, 369: 134- 44; Нобеї еї а!., І апсеї 2014, 384: 1109-17; Вобет! єї аї., М Епаї У Мей 2015, 372: 2521-32; Вобрей еїа!., М Епаї У Меа 2015, 372: 320-30; Тораїїап еї а!., М Еподі У Меа 2012, 366: 2443-54; Тораїйап єї а!., У Сіїп Опсої 2014, 32: 1020-30; М/оЇсНоК еї аї., М Епді У Мей 2013, 369: 122-33). Взаємодія рецептора РО-1 на Т-клітинах з його лігандами, РО-Ї1 і РО-І2, на пухлинних і імунних інфільтруючих клітинах регулює опосередковані Т-клітинами імунні відповіді і може відігравати роль у вислизанні клітин пухлин людини від імунного нагляду (Рагіої! ОМ. Маї Рем Сапсег 201212: 252-64|. Зв'язування РО-1 з будь-яким з його лігандів приводить до доставки інгібувального стимулу до Т-клітини. Імунотерагпії, які цілеспрямовано впливають на вісь РО-1,
Зо включають моноклональні антитіла, направлені на рецептор РО-1 (КЕУТКООАтМ (пембролізумаб), МегсК і Со., Іпс., Кепім'огій, МУ апа ОРОІМО М (ніволумаб), ВгізіоІ-Муег5 зачірб, Ргіпсефоп, МУ), а також ті, які зв'язуються з лігандом РО-Ї1 (МРОЇІ 3280А; ТЕСЕМТКІО тм (атезолізумаб), сепепіесії, Зап Егапсізсо, СА). Обидва терапевтичні підходи продемонстрували протипухлинні ефекти в різних типах раку.
Антитіла для застосування у людини повинні зберігатися перед використанням і транспортуватися до місця введення. Для відтворюваного досягнення бажаного рівня лікарського засобу на основі антитіл у пацієнта потрібно, щоб лікарський засіб зберігався в композиції, яка підтримує біологічну активність лікарського засобу. Існує потреба в стабільних композиціях антитіл проти людського РО-1 для фармацевтичного застосування, наприклад, для лікування різних ракових і інфекційних захворювань. Переважно, такі композиції повинні мати тривалий терміном придатності, бути стабільними при зберіганні і транспортуванні і бути придатними для введення у високих концентраціях, наприклад для застосування при підшкірному введенні, а також в низьких концентраціях, наприклад для внутрішньовенного введення.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; Б) від приблизно 5 мМ до приблизно 20 мМ буфера; с) стабілізатор, вибраний з групи, яка складається з: (і) від приблизно б 95 до приблизно 8 95 маса/об'єм (мас./06б.) сахарози, трегалози або (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину; (ії) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. маніту, сорбіту, І -аргініну, фармацевтично прийнятної солі І -аргініну, І-проліну або фармацевтично прийнятної солі І -проліну; і (ії) від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі; а) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,10 95 неіонної поверхнево-активної речовини; і е) приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ антиоксиданта.
У варіантах здійснення даного винаходу буфер забезпечує рН між5,0 і 6,0.
У конкретних варіантах здійснення стабілізатор композиції антитіла до людського РО-1 вибраний з групи, яка складається з: (ї) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози, трегалози або (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину; (її) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 маніту, сорбіту або І - проліну або фармацевтично прийнятної солі І -проліну; і (ії) від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./0об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі.
У деяких варіантах здійснення композиція антитіла до людського РО-1 додатково включає від приблизно 1 956 до приблизно З 95 мас./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
Даний винахід також стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: а) від приблизно 25 мг/мл до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; Б) від приблизно 5 мМ до приблизно 20 мМ гістидинового буфера; с) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози; а) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 мас./0б. полісорбату 80; і е) від приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ І- метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У конкретних варіантах здійснення композиція антитіла до людського РО-1 додатково включає від приблизно 195 до приблизно З 95 мас./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
Даний винахід також стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: а) від приблизно 75 до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; Б) приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; с) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ метіоніну; 4) приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози; і е) 0,01 95 до приблизно 0,04 95 мас./об. полісорбату 80.
Даний винахід також стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: а) приблизно 3125 до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; Б) приблизно 10 мМ гістидинового буфера; с) приблизно 10
ММ -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі; 4) приблизно 7 мас./об. сахарози; і є) приблизно 0,02 95 мас./0об. полісорбату 80.
У деяких варіантах здійснення композиція антитіла до людського РО-1 додатково включає від приблизно 1,2595 до приблизно 2,595 мабс./0б. І-аргініну або його фармацевтично прийнятної солі. У деяких варіантах здійснення аргінін являє собою І -аргінін. У інших варіантах здійснення аргінін являє собою І -аргінін НОСІ.
Даний винахід також стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: а) від
Зо приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; Б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; с) стабілізатор, вибраний з групи, яка складається з: (Ї) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./0б. сахарози, трегалози або (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину; (ії) від приблизно З 95 до приблизно 595 мабс./0б. маніту, сорбіту, І-проліну або фармацевтично прийнятної солі І -проліну; і (ії) від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі; 4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80; і е) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У деяких варіантах здійснення композиція антитіла до людського РО-1 додатково включає металохелатор. У конкретних варіантах здійснення металохелатор являє собою ОТРА. У деяких варіантах здійснення ОТРА присутній в концентрації від приблизно 10 мкМ до приблизно 30
МКМ.
Даний винахід також стосується рідкої композиції антитіла до людського РО-1, яка відновлена з ліофілізованої композиції, де відновлений розчин включає: а) від приблизно 125 мг/мл до приблизно 175 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; Б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; с) стабілізатор, вибраний з групи, яка складається з: (ї) від приблизно З 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози; (і) від приблизно 2 95 до приблизно 5 95 мабс./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі; (ії) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 маніту і від приблизно 1 95 до приблизно 2 95 сахарози; і (ім) комбінації і) і ії); і 4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80.
У конкретних варіантах здійснення даного винаходу анти-?РО-1 антитіло являє собою пембролізумаб або антигензв'язувальний фрагмент пембролізумабу.
Даний винахід також стосується способів лікування раку і способів лікування хронічної інфекції у пацієнта-людини, що включають: введення пацієнту ефективної кількості композицій антитіл до людського РО-1 за даним винаходом.
КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ
Фіг ТА-1С показують результати дослідження методом НР-НІС, в якому вимірюють окиснення Меї-105, для композицій з високою концентрацією пембролізумабу протягом 12- тижневого періоду часу. Результати представлені для тестованих композицій (див. Приклад 2), що зберігаються при 5 "С (фіг. 1А), 25 "С (фіг. 1В) і 40 "С (Фіг. 1С).
Фіг. 2А-2С показують результати дослідження методом НР-НІС композицій в Прикладі 3.
Результати представлені тестованих композицій, що зберігаються при 5 "С (Фіг. 2А), 25 "С (фіг. 2В) і 40 "С (Фіг. 23) протягом 9 місяців.
Фіг. ЗА-3С показують результати аналізу НР-5ЕС (виміряні як 95 тАб) композицій, описаних в Прикладі 4. Результати представлені для композицій, що зберігаються при 5 "С (Фіг. ЗА), 257 (Фіг. ЗВ) і 40 "С (Фіг. 3С).
Фіг. 4А-4С показують результати НР-НІС аналізу композицій, описаних в Прикладі 4.
Представлені результати показують 95 піка перед головним піком 1-2 (окиснені види) для композицій, що зберігаються при 5 "С (Фіг. ЗА), 25 С (Фіг. ЗВ) і 40 "С (Фіг. ЗС) протягом 12 тижнів. Пунктирні лінії на Фіг. 4В і Фіг. 4С показують результати для Композиції 1, Прикладу 3, як порівняльної композиції.
Фіг. 5 показує кількість агрегації кожної з композицій в Прикладі 5 за в-тижневий період зберігання при 40 "С, як виміряно за допомогою НР-5ЕС.
Фіг. б показує окиснення Меї-105 в композиціях в Прикладі 6, Дослідженні 2, при 407 протягом 8-тижнів, як виміряно за допомогою НР-НІС.
Фіг. 7 показує окиснення Меї-105 в композиціях в Прикладі 6, Дослідженні З, при 40 С протягом 8-тижнів, як виміряно за допомогою НР-НІС.
ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ
Даний винахід стосується стабільних композицій, що включають анти-РО-1 антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, яке зв'язується з людським РО-1, які можуть бути використані для способів лікування раку або імунного розладу або імунного стану, які включають внутрішньовенне або підшкірне введення пацієнту. У конкретних варіантах здійснення даного винаходу анти-РО-1 антитіло являє собою пембролізумаб або антигензв'язувальний фрагмент пембролізумабу. Композиції за винаходом спрямовані на розв'язання проблем високої в'язкості і підвищеної агрегації, пов'язаних з композиціями антитіл, що включають високу концентрацію анти-РО-1 антитіл. Даний винахід також стосується композицій, що включають пембролізумаб або його антигензв'язувальний фрагмент зі зниженим окисненням метіоніну, в тому числі зі зниженим окисненням метіоніну-105, який розташований в
СОКЗ важких ланцюгів пембролізумабу.
Зо Композиції за даним винаходом можуть бути використані для підшкірної доставки пацієнту.
Щоб забезпечити максимальну терапевтичну користь для пацієнтів, бажано, щоб композиції для підшкірної (п/ш) доставки включали високу концентрацію антитіл (75-200 мг/мл). Висока концентрація АРІ часто потрібна для п/ш композицій через історичну біодоступність 50-60 95 для п/ш ін'єкцій і очікуваного діапазону доз продукту антитіла. Однак висока концентрація антитіла або його антигензв'язувального фрагмента може сприяти іншим властивостям продукту, які можуть бути небажаними, наприклад, низька ін'єкційна здатність в результаті підвищеної в'язкості і вища фізіологічної осмоляльності і підвищеної агрегації. Отже, переважно, щоб продукт антитіла, призначений для п/ш введення, врівноважував ефекти концентрації, підтримуючи рівень лікарського засобу, який забезпечить найвищу терапевтичну користь.
Ідеальний продукт включає високу концентрацію білка, низьку в'язкість, осмоляльність, схожу з фізіологічними умовами, і низький рівень агрегації в типових умовах зберігання. Підвищена в'язкість при високій концентрації білка може не тільки утруднять витягання продукту з його контейнера за допомогою шприца, але і введення необхідної дози пацієнту через шприц (шприцованість). Переважно варіанти здійснення винаходу забезпечують композиції, які включають високу концентрацію антитіла або його антигензв'язувального фрагмента і рівень в'язкості, прийнятний для підшкірної доставки. Крім того, композиції за даним винаходом не приводять до високих рівнів агрегації, як більш детально показано в Прикладах.
Попередні дослідження з примусовим розкладанням виконували на лікарській речовині (05) пембролізумабі, щоб дослідити шляхи розкладання продукту і виділити і охарактеризувати домішки. У цих дослідженнях ОЗ пембролізумаб піддавали різним стресовим станам, і аналіз зразків, підданих стресовим впливам, показав, що у використовуваних стресових умовах 05 пембролізумаб чутливий до світла, пероксиду і високого рН. Основні шляхи розкладання пембролізумабу включали окиснення метіоніну 105 (Меї105) в СОК важкому ланцюгу при пероксид-індукованому стресі і окиснення Мей105 і Ес метіонінових залишків при впливі світла.
Пембролізумаб зберігав свою біологічну активність в більшості стресових умов для тестованих рівнів розкладання. Однак зниження афінності до РО-1 спостерігали для зразків в умовах пероксид-індукованого стресу методом поверхневого плазмонного резонансу (5РК).
Метіоніновий залишок, який піддається впливу, або метіоніновий залишок в СОК антитіла має потенціал впливу на біологічну активність антитіла за допомогою окиснення. У даній заявці показано, що композиції за даним винаходом здатні зменшувати окиснення Мемпо5 в СОК важкому ланцюгу пембролізумабу.
І. Визначення і абревіатур
У описі і прикладеній формулі винаходу використовуються наступні абревіатури: імуноглобулінів програмованої загибелі клітин-1 і рецептор програмованої загибелі 1
Щоб винахід був легше зрозуміти, нижче визначені конкретні технічні і наукові терміни. Якщо спеціально не визначено де-небудь ще в даній заявці, всі інші технічні і наукові терміни, що використовуються в даній заявці, мають значення, загальновідоме фахівцям в галузі техніки, до якої належить даний винахід.
У описі і прикладеній формулі винаходу, форми однини включають посилання на множину, якщо контекст явно не наказує інше.
Посилання на або" вказує одну або обидві можливості, якщо контекст явно не диктує одну з вказаних можливостей. У деяких випадках і/або" використовували, щоб особливо виділити яку- небудь одну або обидві можливості. "Лікувати" або лікування" раку, в рамках винаходу, означає введення композиції за даним винаходом пацієнту, що має імунний стан або раковий стан, або у якого діагностований рак або патогенна інфекція (наприклад, вірусна, бактеріальна, грибкова), для досягнення щонайменше одного позитивного терапевтичного ефекту, такого як, наприклад, зменшення кількості ракових клітин, зменшення розміру пухлини, зменшення швидкості інфільтрації ракових клітин до периферичних органів або зниження швидкості метастазування або росту пухлини. Лікування" може включати одне або декілька з наступного: індукцію/посилення протипухлинної імунної відповіді, стимуляцію імунної відповіді на патоген, токсин і/або аутоантиген, стимуляцію імунної відповіді на вірусну інфекцію, зменшення кількості одного або декількох пухлинних маркерів, зупинку або затримку росту пухлини або раку крові або прогресування захворювання, асоційованого зі зв'язуванням РО-1 з його лігандами РО-Ї1 і/або РО-12 ("РО-1-зв'язаного захворювання"), такого як рак, стабілізацію РО-1-зв'язаного захворювання, інгібування росту або виживання пухлинних клітин, усунення або зменшення розміру одного або декількох ракових уражень або пухлин, зменшення рівня одного або декількох пухлинних маркерів, поліпшення, усунення клінічних виявів РО-1-зв'язаного захворювання, зменшення тяжкості або тривалості клінічних симптомів РО-1-зв'язаного захворювання, такого як рак, продовження виживаності пацієнта відносно очікуваної виживаності у аналогічного пацієнта без лікування, індукування повної або часткової ремісії ракового стану або іншого РО-1-зв'язаного захворювання. "Імунний стан" або "імунний розлад" охоплює, наприклад, патологічне запалення, запальний розлад і аутоїмунний розлад або захворювання. "Імунний стан" також стосується інфекцій, персистуючих інфекцій і проліферативних станів, таких як рак, пухлини і ангіогенез, включаючи інфекції, пухлини і ракові захворювання, які резистентні до ерадикації імунною системою. "Раковий стан" включає, наприклад, раки, ракові клітини, пухлини, ангіогенез і передракові стани, такі як дисплазія.
Позитивні терапевтичні ефекти при раку можуть бути виміряні декількома способами Ідив.,
МУ. А. Мерег, у. Мисі. Мей. 50:15-105 (2009)). Наприклад, що стосується інгібування росту пухлини, згідно зі стандартами МС, Т/Сх42 95 є мінімальним рівнем протипухлинної активності.
Т/С«10 96 вважають високим рівнем протипухлинної активності, при цьому Т/С (90) - Середній об'єм пухлини при лікуванні/бередній об'єм пухлини контролю х 100. У деяких варіантах здійснення лікування, що досягається шляхом введення композиції за даним винаходом, являє собою будь-яке з виживаності без прогресування (РЕ5), виживаності без ознак захворювання (ОЕ5) або загальної виживаності (05). РЕ5, яка також називається "год. до прогресування
Зо пухлини" вказує тривалість часу, під год. і після лікування, протягом якого рак не розвивається, і включає кількість часу, протягом якого пацієнти зазнавали повну або часткову відповідь, а також кількість часу, протягом якого пацієнти мали стабільне захворювання. ОЕ5 стосується проміжку часу під год. і після лікування, коли у пацієнта відсутнє захворювання. ОС стосується збільшення тривалості життя порівняно з індивідуумами або пацієнтами, що раніше не отримували препарат або що не проходять лікування. Хоча варіант здійснення композицій, способів лікування і застосувань за даним винаходом може бути неефективним для досягнення позитивного терапевтичного ефекту у кожного пацієнта, він повинен приводити до цього у статистично значущого числа пацієнтів, що визначається будь-яким статистичним тестом, відомим в даній галузі техніки, таким як І-критерій Стьюдента, критерій хі-квадрат, О-критерій
Уїтні, критерій Краскела-Уолліса (Н-тест), Критерій Джонкхієра- Терпстра і критерій Уїлкоксона.
Термін "пацієнт" (який альтернативно називається в даній заявці "особою" або "Індивідуумом") стосуються ссавця (наприклад, щура, миші, собаки, кішки, кролика), здатного отримувати лікування композиціями за даним винаходом, найбільш переважно людини. У деяких варіантах здійснення пацієнт є дорослим пацієнтом. У інших варіантах здійснення пацієнт є педіатричним пацієнтом. Ті з пацієнтів, які "потребують лікування", включають пацієнтів, яким може бути корисне лікування композиціями за даним винаходом, наприклад, пацієнта, який страждає на рак або імунний стан.
Термін ,антитіло" стосується будь-якої форми антитіла, яка виявляє бажану біологічну активність. Таким чином, він використовується в найширшому значенні і конкретно охоплює, але не обмежується цим, моноклональні антитіла (включаючи повнорозмірні моноклональні антитіла), поліклональні антитіла, гуманізовані, повністю людські антитіла і химерні антитіла.
Як правило, основна структурна одиниця антитіла включає тетрамер. Кожний тетрамер включає дві ідентичні пари поліпептидних ланцюгів, кожна пара має один ,легкий" (приблизно 25 кДа) і один у'важкий" ланцюг (приблизно 50-70 кДа). Аміно-кінцева частина кожного ланцюга включає варіабельну ділянку приблизно від 100 до 110 або більше амінокислот, яка насамперед відповідає за розпізнавання антигена. Варіабельні ділянки кожної пари легкого/важкого ланцюга утворюють сайт зв'язування антитіла. Таким чином, як правило, інтактне антитіло має два сайти зв'язування. Карбокси-кінцева частина важкого ланцюга може визначати константну ділянку, яка насамперед відповідає за ефекторну функцію. Звичайно людські легкі ланцюги класифікуються бо як каппа і лямбда легкі ланцюги. Крім того, людські важкі ланцюги звичайно класифікуються як мю, дельта, гамма, альфа або епсилон і визначають ізотип антитіла як І9М, дО, Ід, ІдА, і ІдЧЕ, відповідно. У легкому і важкому ланцюгах варіабельні і константні ділянки з'єднані ,)" ділянкою з приблизно 12 або більше амінокислот, причому важкий ланцюг також включає ,О0" ділянку з ще приблизно 10 амінокислот. Див., головним чином, Еипдатепіа! Іттипоіоау Сп. 7 (Раші, МУ., ед., гпа єд. Намеп Ргевз5,
Як правило, варіабельні домени як важкого, так і легкого ланцюгів включають три гіперваріабельні ділянки, які також називаються ділянками, що визначають комплементарність (СОК5), які розташовані у відносно консервативних каркасних ділянках (ЕК). СОК звичайно вирівняні по каркасних ділянках, що дозволяє зв'язуватися з конкретним епітопом. Як правило, від М-кінця до С-кінця варіабельні домени як легкого, так і важкого ланцюгів включають ЕК,
СОВІ, ЕК2, СОК2, ЕКЗ, СОКЗ їі ЕК4. Присвоєння амінокислот кожному домену, як правило відповідно до визначень |(бедиепсез ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодіса! Іпіегеві, Кабаї, єї аї.; Майопа!
Іпбійше5 ої Неанй, ВешШезаа, Ма.; 5 ей. МІН Рибрі. Мо 91-3242 (1991); Кабаї (1978) Аду. Ргої.
Спет. 32:1-75; Кабаї, єї а1ї., (1977) 9. Вісі. Спет. 252:6609-6616; Споїпіа, єї а!., (1987) У Мої. Віо). 196:901-917 або Спойіа, еї а1., (1989) Майшге 342:878-8831І.
Антитіло або антигензв'язувальний фрагмент, який "специфічно зв'язується 3" вказаним білком-мішенню, являє собою антитіло, яке демонструє переважно зв'язування з цією мішенню порівняно з іншими білками, але ця специфічність не вимагає абсолютної специфічності зв'язування. Антитіло вважають ,;специфічним" для його цільової мішені, якщо його зв'язування
Є таким, що визначає для присутності цільового білка в зразку, наприклад, без отримання небажаних результатів, таких як помилкові позитивні результати. Антитіла або фрагменти, які їх зв'язують, корисні в даного винаході, повинні зв'язуватися з цільовим білком зі спорідненістю, яка щонайменше в два рази більша, переважно щонайменше в десять разів більша, більш переважно щонайменше в 20 разів більша і найбільш переважно щонайменше в 100 разів більша, ніж спорідненість з нецільовими білками. У рамках винаходу, вважається, що антитіло специфічно зв'язується 3з поліпептидом, що включає дану амінокислотну послідовність, наприклад амінокислотну послідовність зрілої молекули РО-1 людини або РО-ІЇ 1 людини, якщо воно зв'язується з поліпептидами, що включають цю послідовність, але не зв'язується з білками, в яких ця послідовність відсутня.
Зо »«"Химерне антитіло" стосується антитіла, в якому частина важкого і/або легкого ланцюга ідентична або гомологічна відповідним послідовностям в антитілі, яке походить з певного виду (наприклад, людини) або що належить до певного класу або підкласу антитіл, тоді як залишок ланцюгай(ів) ідентичний або гомологічний відповідним послідовностям в антитілі, які походять з іншого виду (наприклад, миші) або що належить до іншого класу або підкласу антитіл, а також фрагментів таких антитіл, за умови, що вони виявляють бажану біологічну активність.
Термін ,фармацевтично ефективна кількість" або "ефективна кількість" означає кількість, за допомогою якої пацієнту вводять достатню кількість терапевтичної композиції або складу для лікування захворювання або стану. Фахівцям в даній галузі техніки повинно бути зрозумілим, що цей рівень може варіювати залежно від характеристик пацієнта, таких як вік, маса тіла і т.д.
Термін ,приблизно", при модифікації кількості (наприклад, мМ або М) речовини або композиції, процентного вмісту (06.06. або мас./0б.) компонента композиції, рн розчину/композиції або значення параметра, що характеризує стадію в способі, або тому подібного, стосується зміни числової кількості, яка може мати місце, наприклад, через типові процедури вимірювання, обробки і відбору проб, пов'язані з отриманням, дослідженням і/або використанням речовини або композиції; через ненавмисну помилку в цих процедурах; через відмінності у виготовленні, джерелах або чистоті інгредієнтів, що використовується для виготовлення або використання композицій або виконання процедур; і т.п. В деяких варіантах здійснення "приблизно" може означати варіації 4 0,1 95, 0,5 У, 1 У, 2 Уо, З У, 4 У, 5 У» або 10 95.
Терміни ,рак", ,ьраковий" або злоякісний" вказує або описують фізіологічний стан у ссавців, який звичайно характеризується нерегульованим ростом клітин. Приклади раку включають, але не обмежуються цим, карциному, лімфому, лейкоз, бластому і саркому. Більш конкретні приклади таких видів раку включають плоскоклітинний рак, мієлому, дрібноклітинний рак легень, недрібноклітинний рак легень, гліому, лімфому Ходжкіна, неходжкінську лімфому, рак шлунково-кишкового тракту, рак нирки, рак яєчників, рак печінки, лімфобластний лейкоз, лімфоцитарний лейкоз, колоректальний рак, рак ендометрія, рак нирки, рак передміхурової залози, рак щитовидної залози, меланому, хондросаркому, нейробластому, рак підшлункової залози, мультиформну гліобластому, рак шийки матки, рак головного мозку, рак шлунка, рак сечового міхура, рак печінки, рак товстої кишки і рак голови і шиї. "Хіміотерапевтичний засіб" являє собою хімічну сполуку, корисну в лікуванні раку. Анті-РО-1 60 антитіла можна використовувати з будь-яким одним або декількома відповідними хіміотерапевтичними засобами. Приклади таких хіміотерапевтичних засобів включають алкілуючі засоби, такі як тіотепа і циклосфосфамід; алкілсульфонати, такі як бусульфан, імпросульфан і піпосульфан; азиридини, такі як бензодопа, карбоквон, метуредопа і уредопа; етиленіміни і метиламеламіни, включаючи алтретамін, триетиленмеламін, триетиленфосфорамід, триетилентіофосфорамід і триметилоломеламін; ацетогеніни (особливо булатацин і булатацинон); камптотецин (в тому числі синтетичний аналог топотекан); бріостатин; калістатин; СС-1065 (в тому числі його синтетичні аналоги адозелезин, карзелезин і бізелезин); криптофіцини (зокрема криптофіцин 1 і криптофіцин 8); доластатин; дуокарміцин (в тому числі синтетичні аналоги, КМ/-2189 і СВ1-ТМІ1); елеутеробин; панкратистатин; саркодиктиїн; спонгістатин; аналоги азотистого іприту, такі як хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамід, естрамустин, іфосфамід, мехлоретамін, гідрохлорид мехлоретаміноксиду, мелфалан; новембіхін, фенестерин, преднімустин, трофосфамід, аналог урациліприту; нітрозосечовини, такі як кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, німустин і ранімустин; антибіотики, такі як енедіїнові антибіотики (наприклад, каліхеаміцин, особливо, каліхеаміцин гамма 11 і каліхеаміцин фі І1, див., наприклад, Адпем/, Спет. Іпії. Ед. Епаді., 33:183- 186 (1994); динеміцин, включаючи динеміцин А; біфосфонати, такі як клодронат; еспераміцин; а також неокарциностатиновий хромофор і споріднені хромофори хромопротеїнових енедіїнових антибіотиків), алкациномізини, актиноміцин, аутраміцин, азасерин, блеоміцини, кактиноміцин, карабіцин, карміноміцин, карцинофілін, хромоміцини, дактиноміцин, даунорубіцин, деторубіцин, б-діазо-5-оксо-І -норлейцин, доксорубіцин (включаючи морфоліно-доксорубіцин, ціаноморфоліно-доксорубіцин, 2-піроліно-доксорубіцин і дезоксидоксорубіцин), епірубіцин, езорубіцин, ідарубіцин, марселоміцин, мітоміцини, такі як мітоміцин С, мікофенолову кислоту, ногаламіцин, оливоміцини, пепломіцин, порфіроміцин, пуроміцин, квеламіцин, родорубіцин, стрептонігрин, стрептозоцин, туберцидин, убенімекс, зиностатин, зорубіцин; антиметаболіти, такі як метотрексат і 5-фторурацил (5-БО); аналоги фолієвої кислоти, такі як деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуринові аналоги, такі як флударабин, 6- меркаптопурин, тіаміприн, тіогуанін; піримідинові аналоги, такі як анцитабін, азацитидин, 6- азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксіуридин, доксифлуридин, еноцитабін, флоксуридин; андрогени, такі як калустерон, дромостанолону пропіонат, епітіостанол, мепітіостан,
Зо тестолактон; засоби, які пригнічують функції надниркових залоз, такі як аміноглутетимід, мітотан, трилостан; речовина, що є джерелом заповнення фолієвої кислоти, така як фролінова кислота; ацеглатон; альдофосфамідглікозид; амінолевулінову кислоту; енілурацил; амсакрин; бестрабуцил; бісантрен; едатраксат; дефофамін; демеколцин; діазиквон; елфорнітин; еліптинію ацетат; оепотилон; етоглуцид; галію нітрат; гідроксисечовину; лентинан; лонидаїнін; майтансиноїди, такі як майтансин і ансамітоцини; мітогуазон; мітоксантрон; мопіданмол; нітраерин; пентостатин; фенамет; пірарубіцин; лозоксантрон; подофилінову кислоту; 2- етилгідразид; прокарбазин; разоксан; ризоксин; сизофиран; спірогерманій; тенуазонову кислоту; триазиквон; 2,2,2"-трихлортриетиламін; трихотецени (особливо, токсин Т-2, веракурин А, роридин А і ангуїдин); уретан; віндезин; дакарбазин; маномустин; мітобронітол; мітолактол; піпоброман; гацитозин; арабінозид (,Ага-С"; циклофосфамід; тіотепа; таксоїди, наприклад, паклітаксел і доксетаксел; хлорамбуцил; гемцитабін; б-тіогуанін; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платини, такі як цисплатин і карбоплатин; вінбластин; препарати платини; етопозид (МР-16); іфосфамід; мітоксантрон; вінкристин; вінорелбін; новантрон; теніпозид; едатрексат; дауноміцин; аміноптерин; кселода; ібандронат; СРТ-11; інгібітор топоїзомерази КЕ 2000; дифторметилорнитин (ОМЕО); ретиноїди, такі як ретиноєва кислота; капецитабін; і фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь-якого з вищеперелічених. Також включені антигормональні засоби, дія яких полягає в регуляції або інгібуванні впливу гормонів на пухлини, як наприклад, антиестрогени і селективні модулятори рецептора естрогену (ЗЕКМ), включаючи, наприклад, тамоксифен, ралоксифен, дролоксифен, 4-гідрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, І 117018, онапристон, і тореміфен (Рагевіоп); інгібітори ароматази, які інгібують фермент ароматазу, яка регулює продукування естрогенів в надниркових залозах, такі як, наприклад, 4(5)-імідазоли, аміноглутетимід, мегестрола ацетат, ексеместан, форместан, фадрозол, ворозол, летрозол і анастрозол; і антиандрогени, такі як флутамід, нілутамід, бікалутамід, лейпролід і гозерелін; і фармацевтично прийнятні солі, кислоти або похідні будь- кого з вищепереліченого. "Споїйіа" означає систему нумерації антитіл, описану в А!-І агіКапі єї аї., МВ 273:927-948 (1997). "Каваї" в контексті даної заявки означає систему вирівнювання і нумерації імуноглобулінів, уперше розроблену (Е|міп А. Кабаї ((1991) Зедиепсез ої Ргоївіп5 ої Іттипоїодісаї Іпіегеві, 5Ій Ед. 60 Рибіїс Неацй Зегуісе, Маїйопаї Іпвійшев ої Неацй, Веїпезаа, ма.)
"Засіб, який інгібує ріст" в контексті даної заявки стосується сполуки або композиції, яка інгібує ріст клітини, особливо ракової клітини, яка надекспресує будь-який з генів, ідентифікованих в даній заявці, або іп мійго, або іп мімо. Таким чином, засіб, який інгібує є засобом, який значно знижує процент клітин, які надекспресують такі гени в 5 фазі. Приклади
Б засобу, який інгібує, включають засоби, які блокують прогресування клітинного циклу (в місці, відмінному від 5-фази), такі як засоби, які викликають зупинку 1 і зупинку М-фази. Класичні блокатори М-фази включають алкалоїди барвінку (вінкристин і вінбластин), таксани і інгібітори топо ЇЇ, такі як доксорубіцин, епірубіцин, даунорубіцин і етопозид. Ті агенти, які зупиняють С1, також поширюються на зупинку 5-фази, наприклад, ДНК-алкілуючі агенти, такі як дакарбазин, мехлоретамін і цисплатин. Додаткову інформацію можна знайти в ТПпе МоїІесшіаг Вавів ої Сапсег,
Мепавє!зонп апа Ізгаєї, єдв., Спарієг 1, епіШей "Сеї!| сусіє геашацйоп, опсодепв, апа апііпеоріавіїс диде" Бу Мигакаті еї а. (М/В Зашйпаегв: РНіаае!рніа, 19951.
Терміни "РО-1 зв'язувальний фрагмент, " "його антигензв'язувальний фрагмент, " "його зв'язувальний фрагмент" або "його фрагмент" охоплюють фрагмент або похідне антитіла, яке ще по суті зберігає біологічну активність зв'язування з антигеном (РО-1 людини) і інгібування його активності (наприклад, блокування зв'язування РО-1 з РОЇ1 ії РОІ2). Отже, термін "фрагмент антитіла" або РО-1 зв'язувальний фрагмент стосуються частини повнорозмірного антитіла, звичайно його антигензв'язувальної або варіабельної ділянки. Приклади фрагментів антитіл включають Габ, Раб", К(аб)2 і Ем фрагменти. Як правило, зв'язувальний фрагмент або похідне зберігає щонайменше 10 95 активність, яка інгібує РО-1. У деяких варіантах здійснення зв'язувальний фрагмент або похідне зберігає щонайменше 25 95, 50 95, 60 Фо, 70 95, 80 Фо, 90 Об, 9595, 9995 або 10095 (або більш) інгібуючої активності відносно РО-1, хоча будь-який зв'язувальний фрагмент з достатньою афінністю для вияву бажаного біологічного ефекту буде корисним. У деяких варіантах здійснення антигензв'язувальний фрагмент зв'язується зі своїм антигеном зі спорідненістю, яка щонайменше в два рази більша, переважно щонайменше в десять разів більша, більш переважно щонайменше в 20 разів і найбільш переважно щонайменше в 100 разів більша, ніж спорідненість з неспорідненими антигенами. У одному варіанті здійснення антитіло має спорідненість, яка більша ніж приблизно 107 літрів/моля, як визначено, наприклад, аналізом Скетчарда. Мипзеп еї аї. (1980) Апа/|мі. Віоспет. 107:220-23981.
Зо Передбачають також, що РО-1-зв'язувальний фрагмент може включати варіанти, що мають консервативні амінокислотні заміни, які істотно не змінюють його біологічну активність. »«"Гуманізоване антитіло" стосується форм антитіл, які містять послідовності з нелюдських антитіл (наприклад, мишачих), а також людських антитіл. Такі антитіла містять мінімальну послідовність, які походять з нелюдського імуноглобуліну. Як правило, гуманізоване антитіло буде включати, по суті всі з щонайменше одного, і типово двох варіабельних доменів, в яких всі, або по суті всі, гіперваріабельні петлі відповідають петлям нелюдського імуноглобуліну, і всі або, по суті всі, ЕК ділянки являють собою ділянки людського імуноглобуліну. Гуманізоване антитіло необов'язково також буде включати щонайменше частину константної ділянки імуноглобуліну (Бс), типово людського імуноглобуліну. Гуманізовані форми антитіл гризунів звичайно містять однакові послідовності СОМ батьківських антитіл гризунів, хоча деякі амінокислотні заміни можуть бути включені для підвищення афінності, підвищення стабільності гуманізованого антитіла або з інших причин.
Антитіла за даним винаходом також включають антитіла з модифікованими (або блокованими) ділянками Ес для забезпечення змінених ефекторних функцій. Див., наприклад, (патент США Мо 5624821; М/О2003/086310; УММО2005/120571; УМО2006/0057702; Ргевіа (2006)
Аду. Огиа Оєїїмегу Нем. 58:640-656|. Така модифікація може використовуватися для посилення або придушення різних реакцій імунної системи з можливими корисними ефектами при діагностиці і терапії. Зміни в Ес ділянки включають амінокислотні заміни (заміни, делеції і вставки), глікозилування або деглікозилування і додавання декількох Ес. Зміни в Ес також можуть змінювати період напівжиття антитіл в терапевтичних антитілах, і більш тривалий період напівжиття може привести до менш частого дозування з супутньою підвищеною зручністю і зменшенням використання матеріалу. ДИВ., (Ргевіа (2005) У. АйПегду Сіїп. Іттипої, 116:731 аї 734-351. "Повністю людське антитіло" стосується антитіла, яке містить тільки послідовності білка людського імуноглобуліну. Повністю людське антитіло може містити мишачі вуглеводні ланцюги, якщо воно продукується у миші, в клітині миші або в гібридомі, отриманій з клітини миші.
Подібним чином, "мишаче антитіло" стосується антитіла, яке містить тільки послідовності мишачого імуноглобуліну. Повністю людське антитіло може бути вироблятися в організмі людини, трансгенної тварини, що має послідовності зародкової лінії людського імуноглобуліну, 60 методом фагового дисплея або інших молекулярно-біологічних методів.
"Гіперваріабельна ділянка" стосується амінокислотних залишків антитіла, які відповідають за зв'язування антигена. Гіперваріабельна ділянка включає амінокислотні залишки з "ділянки, яка визначає комплементарність" або "СОК" (наприклад, залишки 24-34 (СОВІ1), 50-56 (СОКІ 2) і 89-97 (СОКІ 3) у варіабельному домені легкого ланцюга і залишки 31-35 (СОВНТІ), 50- 65 (СОКН2г) і 95-102 (СОКНЗ) у варіабельному домені важкого ланцюга, як визначено з використанням системи нумерації ІКараї (Караї еї аІ. (1991) Зедиепсе5 ої Ргоїеїп5 ої
Іттипоіодіса! Іпіегевзі, Бій Еа. Рибіїс Неайцй 5егуісе, Маїйопаї! Іпвійшевз ої Неапцй, Веїйезаа, ма.), або залишки з уіперваріабельної петлі" (тобто залишки 26-32 (11), 50-52 (12) і 91-96 (13) у варіабельному домені легкого ланцюга і 26-32 (НІ), 53-55 (Н2) і 96-101 (НЗ) у варіабельному домені важкого ланцюга (Споїйпіа апа І езк (1987) У. Мої. ВіоїЇ. 196: 901-917). У контексті даної заявки термін каркасні" або "РК" залишки стосується тих залишків варіабельного домена, які не є залишками гіперваріабельної ділянки, визначеними в даній заявці як залишки СОК. Залишки
СОК ї ЕК визначають відповідно до стандартних визначень послідовності Кабаї. Кабаї еї аї. (1987) Зедиепсез ої Ргоївєїп5 ої Іттипоіодісаї Іпіегеві, Маїййопаї! Іпвійшез ої Неайй, Вешезаа Ма. "Консервативно модифіковані варіанти" або "консервативна заміна" стосується замін амінокислот, відомих фахівців в даній галузі техніки, і вони можуть бути зроблені, як правило, без зміни біологічної активності отриманої молекули, навіть в основних ділянках поліпептиду.
Такі типові заміни переважно виконують відповідно до викладених в Таблиці 1 таким чином:
Таблиця 1
Типові консервативні амінокислотні заміни еф 11 Пешма7///////1111111111111
Крім того, фахівцям в даній галузі повинно бути зрозумілим, що, як правило, одиничні амінокислотні заміни в неістотних ділянках поліпептиду істотно не змінюють біологічну активність. Див., наприклад, (МУаївоп єї аї. (1987) МоїІесшаг Віооду ої Ше Сепе, Пе
Вепіатіп/Ситтіпод5 Риб. Со., р. 224 (АП Еайоп)|.
Фраза "складається по суті з" або варіанти, такі як "складаються по суті з" або "складається по суті з", що використовуються повсюдно в описі і формулі винаходу, вказують на включення будь-яких перерахованих елементів або груп елементів і необов'язкове включення інших елементів, аналогічних або відмінних від перерахованих елементів, які істотно не змінюють основні або нові властивості вказаного режиму дозування, способу або композиції. Як
Зо необмежувальний приклад, зв'язувальна сполука, яка складається по суті з вказаної амінокислотної послідовності, може також включати одну або декілька амінокислот, включаючи заміни одного або декількох амінокислотних залишків, які не впливають істотним чином на властивості зв'язувальної сполуки.
"Який включає" або варіанти, такі як "включають", "включає" або "складається з", використовуються в описі і формулі винаходу в значенні "що включає ", тобто, для вказівки наявності заявлених ознак, але не виключення присутності або додавання додаткових ознак, які можуть істотно поліпшити роботу або корисність будь-якого з варіантів здійснення винаходу, якщо контекст не вимагає іншого через явну вказівку або необхідне значення. "Виділене антитіло" і "виділений фрагмент антитіла" стосується статусу очищення, і в такому контексті означає, що вказана молекула по суті не містить інших біологічних молекул, таких як нуклеїнові кислоти, білки, ліпіди, вуглеводи або інший матеріал, такий як клітинний дебрис і середовище для росту. Як правило, термін "виділений" не призначений для позначення повної відсутності такого матеріалу або відсутності води, буферів або солей, якщо вони не присутні в кількостях, які по суті заважають експериментальному або терапевтичному застосуванню зв'язувальної сполуки, як описано в даній заявці. "Моноклональне антитіло" або "тАБ" або "Мар" в контексті даної заявки стосується популяції по суті гомогенних антитіл, тобто молекули антитіл, що складають цю популяцію, ідентичні по амінокислотній послідовності, за винятком можливих мутацій, що зустрічаються в природі, які можуть бути присутніми в незначних кількостях. Навпаки, препарати звичайних (поліклональних) антитіл звичайно включають множину різних антитіл, що мають різні амінокислотні послідовності в своїх варіабельних доменах, особливо їх СОК, які часто специфічні для різних епітопів. Модифікатор ,моноклональний" вказує на характер антитіла, що отримується з по суті гомогенної популяції антитіл, і його не треба тлумачити як такий, що вимагає отримання антитіла яким-небудь конкретним способом. Наприклад, моноклональні антитіла, що використовуються відповідно до винаходу, можуть бути отримані гібридомним методом, уперше описаним КоПіег еї аїЇ. (1975) Маїшге 256: 495, або можуть бути отримані методами рекомбінантної ДНК ГІдив., наприклад, патент США Мо 4816567). Моноклональне антитіла" також можуть бути виділені з фагових бібліотек антитіл з використанням методик, описаних в |Сіаскзоп еї аї. (1991) Маїиге 352: 624-628 і Магкз еї аї. (1991) 9. Мої. Віої. 222: 581- 597, наприклад. Див., також Ргевіа (2005) У). АПегду Сіїп. Іттипої. 116:7 311. "Пухлина" в тому значенні, як це застосовно до пацієнта, у якого діагностований або ймовірно є рак, стосується злоякісного або потенційно злоякісного новоутворення або маси
Зо тканини будь-якого розміру і включає первинні пухлини і вторинні новоутворення. Солідна пухлина являє собою аномальний ріст або масу тканини, яка звичайно не містить кіст або рідких ділянок. Різні типи солідних пухлин названі по типу клітин, які їх формують. Прикладами солідних пухлин є саркоми, карциноми і лімфоми. Лейкоз (рак крові) звичайно не утворює солідних пухлин ІМаїйопа! Сапсег Іпзійше, Оісіопагу ої Сапсег Тептзві.
Термін "розмір пухлини" стосується загального розміру пухлини, який може бути виміряний як довжина, так і ширина пухлини. Розмір пухлини може бути визначений різними способами, відомими в даній галузі, такими як, наприклад, шляхом вимірювання розмірів пухлини (пухлин) при видаленні у пацієнта, наприклад, за допомогою штангенциркуля, або при знаходженні в тілі, використовуючи методи візуалізації, наприклад, сканування кістки, ультразвук, комп'ютерну томографію або МРТ. "Варіабельні ділянки" або "М-ділянка" в контексті даної заявки означає сегмент ланцюгів дос, який є варіабельним по послідовності між різними антитілами. Він простягається до залишку 109, по Кабаї, в легкому ланцюгу і 113 у важкому ланцюгу.
Термін "буфер" охоплює ті агенти, які підтримують рН розчину композицій за даним винаходом в прийнятному діапазоні або, для ліофілізованих композицій винаходу, забезпечують прийнятний рН розчину до ліофілізації.
Терміни "ліофілізація", "ліофілізований" і "сублімований" стосуються процесу, за допомогою якого матеріал, який підлягає сушінню, спочатку заморожують, а потім лід або заморожений розчинник видаляють сублімацією у вакуумному середовищі. Ексципієнт може бути включений в попередньо ліофілізовані композиції для підвищення стабільності ліофілізованого продукту при зберіганні.
Термін "фармацевтична композиція" стосується препаратів, які знаходяться в такій формі, яка дозволяє активним інгредієнтам бути ефективними, і які не містять додаткових компонентів, які є токсичними для пацієнтів, яким препарат буде введень. Терміни "композиція" і "фармацевтична композиція" використовують взаємозамінно по всьому тексту заявки. "Фармацевтично прийнятний" стосується ексципієнтів (носіїв, добавок) і композицій, які можуть бути розумно введені пацієнту для забезпечення ефективної дози використовуваного активного інгредієнта і які "звичайно вважаються безпечними", наприклад, які є фізіологічно переносимими і звичайно не викликають алергічну або подібну несприятливу реакцію, таку як бо розлад шлунка і тому подібне, при введенні людині. У іншому варіанті здійснення цей термін стосується хімічних сполук і композицій, затверджених регулюючим органом федерального уряду або уряду штату або перерахованих в Фармакопеї США або іншій загальновизнаній фармакопеї для застосування для тварин і, зокрема, для людини. "Відновлена" композиція являє собою композицію, яка була отримана шляхом розчинення ліофілізованої білкової композиції в розріджувачі так, щоб білок був диспергованим у відновленій композиції. Відновлена композиція є прийнятною для введення, наприклад, парентерального введення), і необов'язково може бути прийнятною для підшкірного введення. "Час відновлення" являє собою год., необхідний для регідратації ліофілізованої композиції розчином до отримання очищеного розчину, який не містить частинок. "Стабільна" композиція являє собою композицію, в якій білок в ній по суті зберігає свою фізичну стабільність і/або хімічну стабільність і/або біологічну активність при зберіганні. Різні аналітичні методи для вимірювання стабільності білка доступні в даній галузі і описані в (Рерііде апа Ргоїєїп Огид Оевєїїмегу, 247-301, Міпсепі ее Еа., Магсе! ОеккКег, Іпс., Мем/ МоїКк, М.М., Рибв. (1991) апа допез, А. Адм. Огид Оеєїїмегу Вем. 10:29-90 (1993)). Стабільність можна виміряти при вибраній температурі протягом вибраного періоду часу. "Стабільна" композиція являє собою композицію, в якій білок в ній по суті зберігає свою фізичну стабільність і/або хімічну стабільність і/або біологічну активність при зберіганні. Різні аналітичні методи для вимірювання стабільності білка доступні в даній галузі і описані в (Рерііде апа Ргоїєїп Огид Оевєїїмегу, 247-301, Міпсепі ее Еа., Магсе! ОеккКег, Іпс., Мем/ МоїКк, М.М., Рибв. (1991) апа допез, А. Аду. Огид Оеєїїмегу Нем. 10:29-90 (1993)). Стабільність можна виміряти при вибраній температурі протягом вибраного періоду часу. Наприклад, в одному варіанті здійснення, стабільна композиція являє собою композицію без істотних змін, що спостерігаються при температурі охолоджування (2-8 "С) протягом щонайменше 12 місяців. У іншому варіанті здійснення стабільна композиція являє собою композицію без істотних змін, що спостерігаються при температурі охолоджування (2-8 "С) протягом щонайменше 18 місяців. У іншому варіанті здійснення стабільна композиція являє собою композицію без істотних змін, що спостерігаються при кімнатній температурі (23-27 "С) протягом щонайменше З місяців. У іншому варіанті здійснення стабільна композиція являє собою композицію без істотних змін, що спостерігаються при кімнатній температурі (23-27 "С) протягом щонайменше 6 місяців. У іншому
Зо варіанті здійснення стабільна композиція являє собою композицію без істотних змін, що спостерігаються при кімнатній температурі (23-27 "С) протягом щонайменше 12 місяців. У іншому варіанті здійснення стабільна композиція являє собою композицію без істотних змін, що спостерігаються при кімнатній температурі (23-27 "С) протягом щонайменше 18 місяців. Критерії стабільності для композиції антитіл наступні. Як правило, не більше 10 95, переважно 595 мономера антитіла розкладається, як виміряне за допомогою 5ЕС-ВЕРХ. Як правило, композиція є безбарвною або прозорою або злегка опалесцентної при візуальному аналізі. Як правило, концентрація, рН і осмоляльність композиції мають зміну не більше ж/-10 95.
Ефективність звичайно знаходиться в межах 60-140 95, переважно 80-120 95 від контролю або еталона. Звичайно спостерігають не більше 10 95, переважно 5 95 скорочення антитіла, тобто 95 низькомолекулярних частинок, як визначено, наприклад, за допомогою НР-5ЕС. Як правило, спостерігають не більше 1095, переважно не більше 595 агрегації антитіла, тобто 95 високомолекулярних частинок, як визначено, наприклад, за допомогою НР-5ЕС.
Антитіло "зберігає свою фізичну стабільність" в фармацевтичній композиції, якщо воно не показує значного збільшення агрегації осадження і/або денатурації при візуальному дослідженні кольору і/або прозорості, або при вимірюванні методом розсіювання Уф-світла, ексклюзійної хроматографії (ЗЕС) і динамічного розсіювання світла. Зміни конформації білка можна оцінити за допомогою флуоресцентної спектроскопії, яка визначає третинну структуру білка, і за допомогою ЕТІК-спектроскопії, яка визначає вторинну структуру білка.
Антитіло "зберігає свою хімічну стабільність" в фармацевтичній композиції, якщо воно не демонструє значних хімічних змін. Хімічна стабільність може бути оцінена шляхом виявлення і кількісного визначення хімічно змінених форм білка. Процеси розпаду, які часто змінюють хімічну структуру білка, включають гідроліз або скорочення (оцінюється такими методами, як ексклюзійна хроматографія і 5ЄО5-РАСЕ), окиснення (оцінюється такими методами, як пептидне картування в поєднанні з мас-спектроскопією або МАСОМТОРБ/М5), деамідування (оцінюється такими методами, як іонообмінна хроматографія, капілярне ізоелектричне фокусування, пептидне картування, вимірювання ізоаспарагінової кислоти) і ізомеризацію (оцінюється шляхом вимірювання вмісту ізоаспарагінової кислоти, пептидного картування і т.д.).
Антитіло "зберігає свою біологічну активність" в фармацевтичній композиції, якщо біологічна активність антитіла в даний момент часу знаходиться в межах попередньо визначеного бо діапазону біологічної активності, продемонстрованої, коли була отримана фармацевтична композиція. Біологічну активність антитіла можна визначити, наприклад, з використанням аналізу зв'язування антигена. Композиції за винаходом включають антитіла і їх фрагменти, які є біологічно активними при відновленні або в рідкій формі.
Термін "ізотонічний" означає, що композиція, яка представляє інтерес, має по суті такий же осмотичний тиск, що і кров людини. Ізотонічні склади звичайно мають осмотичний тиск від 270 до 328 мОсм. Злегка гіпотонічний тиск становить 250-269, а злегка гіпертонічний тиск становить 328-350 моОсм. Осмотичний тиск можна виміряти, наприклад, за допомогою парового осмометра або осмометра по точці замерзання. "Невідновлювальний цукор" являє собою цукор, не здатний діяти як відновник, оскільки він не містить або не може бути перетворений у вільну альдегідну групу або вільну кетонову групу.
Приклади невідновлювальних цукрів включають, але не обмежуються цим, диссахариди, такі як сахароза і трегалоза. "Пембролізумаб" (раніше відомий як МК-3475, СН 900475 і ламбролізумаб), який альтернативно називається в даній заявці "пембро", являє собою гуманізоване тАбр Ідс4 зі структурою, описаною в (МУНО Огид Іптогтайоп, МоЇ. 27, Ме 2, раде5 161-162 (2013)| ї яка включає амінокислотні послідовності важкого і легкого ланцюгів і СОК, описані в Таблиці 2.
Пембролізумаб був схвалений ЕОА (Управління по контролю якості харчових продуктів і лікарських препаратів) США для лікування пацієнтів з неоперабельною або метастатичною меланомою і для лікування деяких пацієнтів з рецидивуючим або метастатичним плоскоклітинним раком голови і шиї (НМ5СС), класичною лімфомою Ходжкіна (СНІ), уротеліальним раком, раком шлунка, раком з високочастотною мікросателітною нестабільністю (М5І-Н) і недрібноклітинним раком легень, як описано в (Ргезсгібіпд Іптогтайоп ог КЕУТКОБА тм (Метгск а Со., Іпс., М/ппенпоизе 5іайоп, МУ ОБА; іпйіа! 0.5. арргома! 2014, ирдаїєд Зеріетрег 2017).
ІЇ. Композиції за даним винаходом
Композиції за даним винаходом мінімізують утворення агрегатів і макрочастинок антитіл, високомолекулярних і низькомолекулярних частинок, мінімізують окиснення метіонінових залишків і, зокрема, МемМ105 пембролізумабу, і гарантують, що антитіло зберігає біологічну активність з плином часу.
Зо Даний винахід включає різні композиції антитіла до РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента, як описаний більш детально, нижче. Наприклад, даний винахід включає композиції, що включають (ї) анти-?РО-1 антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, (ії) буфер (наприклад, гістидин або ацетат), (ії) стабілізатор (наприклад, невідновлювальний цукор, такий як сахароза або трегалоза або сорбітол, маніт, (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрин, аргінін, пролін або гліцин); (ім) неіонну поверхнево-активну речовину (наприклад, полісорбат 80); і (м) антиоксидант (наприклад, метіонін). У інших варіантах здійснення композиції за даним винаходом включають агент для зменшення в'язкості (наприклад, аргінін або його фармацевтично прийнятну сіль) і/або металохелатор (наприклад, ОТРА).
Анті-РО-1 антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти
Даний винахід забезпечує стабільні біологічні композиції що включають антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти, які специфічно зв'язуються з людським РО-1 (наприклад, людське антитіло або гуманізоване анти-РО-1 антитіло) як активний фармацевтичний інгредієнт (АРІ), а також способи для використання композицій за даним винаходом. Будь-яке анти-РО-1 антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент можна використовувати в композиціях і способах за даним винаходом. У конкретних варіантах здійснення АРІ являє собою анти-РО-1 антитіло, яке вибране з пембролізумабу і ніволумабу. У конкретних варіантах здійснення анти-
РО-1 антитіло являє собою пембролізумаб. У альтернативних варіантах здійснення анти-РО-1 антитіло являє собою ніволумаб. У Таблиці 2 представлені амінокислотні послідовності типових антитіл до людського РО-1 - пембролізумабу і ніволумабу. Альтернативні РО-1 антитіла і антигензв'язувальні фрагменти, які корисні в композиціях і способах за даним винаходом, показані в Таблиці 3.
У деяких варіантах здійснення антитіло до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагменту для використання в композиціях за даним винаходом включає три СОК легкого ланцюга СОКІ1, СОКІ 2 ії СОКІ З і/або три СОК важкого ланцюга СОКНІ, СОКН?2 і СОКНЗ.
У одному варіанті здійснення даного винаходу СОМКІ 1 являє собою 5ЕО ІЮ МО: 1 або варіант 5ЕО ІЮО МО: 1, СОКІ2 являє собою 5ЕО ІЮО МО: 2 або варіант 5ЕО ІЮ МО: 2, і СОКІ З являє собою 5ЕО ІЮ МО: З або варіант 5ЕО ІО МО: 3.
У одному варіанті здійснення СОКНІ являє собою 5ЕО ІЮ МО: 6 або варіант ЗЕО ІО МО: 6,
СОКНЕІ2 являє собою 5ЕО ІЮ МО: 7 або варіант ЗЕО ІО МО: 7, і СОКНЗ являє собою 5ЕО ІЮ МО: 60 8 або варіант 5ЕО ІО МО: 8.
У одному варіанті здійснення три СОК легкого ланцюга являють собою ЗЕО ІЮ МО: 1, ЗЕО
ІО МО: 2, і ЗЕО ІЮ МО: 3, а три СОК важкого ланцюга являють собою 5ЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮ МО: 7і5ЕОІЮ МО: 8.
У альтернативному варіанті здійснення даного винаходу СОКІ 1 являє собою 5ЕО ІЮ МО: 11 або варіант БЕО ІЮ МО: 11, СОКІ2 являє собою 5ЕО ІЮО МО: 12 або варіант ЗЕО ІО МО: 12, і
СОРІЗ являє собою ЗЕО ІО МО: 13 або варіант ЗЕО ІЮ МО: 13.
У одному варіанті здійснення СОКНІ являє собою 5ЕО ІЮ МО: 16 або варіант ЗЕО ІЮ МО: 16, СОКН2 являє собою 5ЕО ІЮ МО: 17 або варіант 5ЕО ІО МО: 17, і СОКНЗ являє собою 5ЕО
ІО МО: 18 або варіант ЗЕО ІЮ МО: 18.
У одному варіанті здійснення три СОК легкого ланцюга являють собою 5ЕО ІО МО: 1, ЗЕО
ІО МО: 2 і 5ЕО ІЮ МО: 3, а три СОК важкого ланцюга являють собою 5ЕО ІЮ МО: 6, 5ЕО ІЮО МО: 7і5ЕОІО МО: 8.
У альтернативному варіанті здійснення три СОМ легкого ланцюга являють собою 5ЕО ІЮ
МО: 11, 5БЕО ІЮ МО: 12 і 5БЕО ІЮ МО: 13, а три СОК важкого ланцюга являють собою 5ЕО ІО МО: 16, ЗЕО ІО МО: 17 ії БЕО І МО: 18.
У наступному варіанті здійснення даного винаходу СОКІ 1 являє собою ЗЕО ІЮО МО: 21 або варіант ЗЕО ІЮ МО: 21, СОМКІ 2 являє собою ЗЕО ІЮ МО: 22 або варіант ЗЕО ІЮ МО: 22, і СОВІ З являє собою 5ЕО ІЮО МО: 23 або варіант ЗЕО ІЮ МО: 23.
Ще в одному варіанті здійснення СОКНІ являє собою 5ЕО ІЮО МО: 24 або варіант 5ЕО ІЮ
МО: 24, СОКН2 являє собою 5ЕО ІЮ МО: 25 або варіант 5ЗЕО ІЮ МО: 25, і СОРКНЗ являє собою
ЗЕО ІЮ МО: 26 або варіант ЗЕО ІЮ МО: 26.
У іншому варіанті здійснення три СОЄ. легкого ланцюга являють собою 5ЕО ІЮ МО: 21, ЗЕО
ІО МО: 22 їі 5ЕО ІО МО: 23, а три СОК важкого ланцюга являють собою 5ЕО ІЮ МО: 24, 5ЕО ІЮ
МО: 25 і 5ЕО ІЮ МО: 26.
Деякі антитіла і антигензв'язувальні фрагменти композицій за даним винаходом включають варіабельну ділянку легкого ланцюга і варіабельну ділянку важкого ланцюга. У деяких варіантах здійснення варіабельна ділянка легкого ланцюга включає 5ЕО ІЮО МО: 4 або варіант 5ЕО ІЮ МО: 4, і варіабельна ділянка важкого ланцюга включає 5ЕО ІЮ МО: 9 або варіант ЗЕО ІЮ МО: 9. У інших варіантах здійснення варіабельна ділянка легкого ланцюга включає ЗЕО ІО МО: 14 або
Зо варіант 5ЕО ІЮО МО: 14, і варіабельна ділянка важкого ланцюга включає ЗЕО ІЮ МО: 19 або варіант 5ЕО ІЮ МО: 19. У інших варіантах здійснення варіабельна ділянка важкого ланцюга включає ЗЕО ІЮ МО: 27 або варіант ЗЕО ІЮ МО: 27 і варіабельна ділянка легкого ланцюга включає 5ЕО ІЮО МО: 28 або варіант ЗЕО ІО МО: 28, 5ЕО ІЮ МО: 29 або варіант 5ЕО ІЮ МО: 29, або ЗЕО ІО МО: 30 або варіант 5ЗЕО ІЮО МО: 30. У таких варіантах здійснення варіант послідовності варіабельної ділянки легкого ланцюга або важкого ланцюга ідентичний референсній послідовності, за винятком того, що має одну, дві, три, чотири або п'ять амінокислотних замін. У деяких варіантах здійснення заміни знаходяться в каркасній ділянці (тобто поза СОМ). У деяких варіантах здійснення одна, дві, три, чотири або п'ять амінокислотних замін є консервативними замінами.
У одному варіанті здійснення композицій за даним винаходом антитіло або антигензв'язувальний фрагмент включає варіабельну ділянку легкого ланцюга, який включає або складається з 5ЕО ІЮ МО: 4, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, який включає або складається з ЗЕБЕО ОО МО: 9. У додатковому варіанті здійснення антитіло або антигензв'язувальний фрагмент включає варіабельну ділянку легкого ланцюга, який включає або складається з ЗЕО ІЮ МО: 14, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, який включає або складається з БЕО ІЮ МО: 19. У одному варіанті здійснення композицій за даним винаходом антитіло або антигензв'язувальний фрагмент включає варіабельну ділянку легкого ланцюга, який включає або складається з 5ЕО ІЮ МО: 28, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, який включає або складається з 5ЕО ІЮ МО: 27. Ще в одному варіанті здійснення антитіло або антигензв'язувальний фрагмент включає варіабельну ділянку легкого ланцюга, який включає або складається з ЗЕО ІЮ МО: 29, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, який включає або складається з ЗЕО ІЮ МО: 27. У іншому варіанті здійснення антитіло або антигензв'язувальний фрагмент включає варіабельну ділянку легкого ланцюга, який включає або складається з ЗЕО
ІО МО: 30, і варіабельну ділянку важкого ланцюга, який включає або складається з 5ЕО ІЮ МО: 27.
У іншому варіанті здійснення композиції за даним винаходом включають антитіло або антигензв'язувальний білок, який має домен Мі домен і/або Мн домен з гомологією послідовності щонайменше 95 95, 90 95, 85 95, 80 95, 75 95 або 50 95 з одним з Мі доменів або Мн доменів, описаних вище, і демонструє специфічне зв'язування з РО-1. У іншому варіанті здійснення 60 антитіло або антигензв'язувальний білок композицій за даним винаходом включає Мі і Мн домени, які мають до 1, 2, 3, 4 або 5 або більше амінокислотних замін, і демонструє специфічне зв'язування з РО-1.
У будь-якому з наведених вище варіантів здійснення АРІ може являти собою повнорозмірне анти-РО-1 антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, яке специфічно зв'язується з людським РО-1. У деяких варіантах здійснення АРІ являє собою повнорозмірне анти-РО-1 антитіло, вибране з будь-якого класу імуноглобулінів, включаючи ДМ, Ідс, дО, ІдА і І9Е.
Переважно, антитіло являє собою дО антитіло. Можна використовувати будь-який ізотип до, включаючи Ідс1, Ідса2, доз і Ідес4. Різні константні домени можуть бути приєднані до ділянок Мі і Мн, представлених в даній заявці. Наприклад, якщо конкретне передбачуване використання антитіла (або фрагмента) за винаходом повинно викликати змінені ефекторні функції, можна використовувати константний домен важкого ланцюга, відмінний від Іде1. Хоча Ідо1 антитіла забезпечують тривалий період напівжиття і ефекторні функції, такий як активація комплемента і антитіло-залежна клітинна цитотоксичність, такі активність може бути небажаною для всіх застосувань антитіла. У таких випадках, наприклад, можна використовувати константний домен
Іа.
У варіантах здійснення даного винаходу АРІ являє собою анти-РО-1 антитіло, що містить легкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в 5ХЕО ІЮ МО: 5, і важкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в 5ЕБО ІО МО: 10. У альтернативних варіантах здійснення АРІ являє собою анти-РО-1 антитіло, що містить легкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в ЗЕО ІО МО: 15, і важкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в ЗЕО ІЮ МО: 20. У інших варіантах здійснення АРІ являє собою анти-РО-1 антитіло, що містить легкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в 5ЕО ІЮ МО: 32, і важкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в ЗЕО ІЮО МО: 31. У додаткових варіантах здійснення
АРІ являє собою анти-РО-1 антитіло, що містить легкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в ЗЕО ІО МО: 33, і важкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в 5ХЕО ІЮ МО: 31. У інших додаткових варіантах здійснення АРІ являє собою анти-РО-1 антитіло, що містить легкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в 5ЕО ІЮ МО: 34, і важкий ланцюг, який включає або складається з послідовності амінокислотних залишків, представленої в ЗЕО І МО: 31. У деяких композиціях за даним винаходом АРІ являє собою пембролізумаб або біоаналог пембролізумабу. У деяких композиціях за даним винаходом АРІ являє собою ніволумаб або біоаналог ніволумабу.
Звичайно варіанти амінокислотних послідовностей анти-РО-1 антитіл і антигензв'язувальних фрагментів за даним винаходом будуть мати амінокислотні послідовності, що мають ідентичність амінокислотної послідовності щонайменше 75 905 з амінокислотною послідовністю еталонного антитіла або антигензв'язувального фрагмента (наприклад, важкий ланцюг, легкий ланцюг, Мн, Мі, або гуманізована послідовність), більш переважно щонайменше 80 95, більш переважно щонайменше 8595, білош переважно щонайменше 90 95 і найбільш переважно щонайменше 95, 98 або 99 95. Ідентичність або гомологія відносно послідовності визначається в даній заявці як процент амінокислотних залишків в послідовності-кандидатові, які ідентичні анти-РО-1 залишкам, після вирівнювання послідовностей і введення гепів, якщо необхідно, для досягнення максимального процента ідентичності послідовності, і не розглядаючи які-небудь консервативні заміни як частину ідентичності послідовності. Жодне з М-кінцевих, С-кінцевих або внутрішніх видалень, делецій або вставок в послідовності антитіла не повинне розглядатися як таке, що впливає на ідентичність або гомологію послідовності.
Ідентичність послідовності стосується ступеню, в якому амінокислоти двох поліпептидів є однаковими в еквівалентних положеннях, коли дві послідовності оптимально вирівняні.
Ідентичність послідовності може бути визначена з використанням алгоритму ВІА5Т, де параметри алгоритму вибрані так, щоб забезпечити найбільший збіг між відповідними послідовностями по всій довжині відповідних порівнюваних послідовностей. Наступні посилання стосуються алгоритмів ВГА5Т, що часто використовується для аналізу послідовності: (ВАТ
А СОВІТНМ5: АЇїЇївениї, 5.Р., еї аї!., (1990) 9. Мої. Вісі. 215:403-410; Сзівй, МУ., єї а!., (1993) Маїшге
Сепеї. 3:266-272; Мадаеп, Т.І., еї аіІ., (1996) Меїй. Епгутої. 266:131-141; АйвсНиї, 5.Р., еї аї., (1997) Мисівєїс Асіаз Рез. 25:3389-3402; 7Напо, 9., євї а!., (1997) Сепоте Везв. 7:649-656; Моойоп,
У.б., еї аї., (1993) Сотриї. Спет. 17:149-163; НапсоскК, ..М. еї а!., (1994) Сотриї. Аррі. Віозсі. 10:67-70; АГІСММЕМТ ЗСОКІМО 5У5ТЕМ5: баупоїї, М.О., еї аї., "А тодеї ої емоїшщіопагу спапде 60 іп ргоївіп5. " іп АЙавз ої Ргоївіп Зедиєпсе апа Бігисішиге, (1978) мої. 5, виррі. 3. М.О. Ббаупної (єд.),
рр. 345-352, Май. Віотейд. Нев5. Рошпа., ММавзпіпдіоп, ОС; Зспулан, В.М., єї аї., "Маїйгісе5 ог деїесіїпд аівтапі геїаййопепірв. " іп АНав ої Ргоїєїп Зедиепсе апа зігисішге, (1978) мої. 5, виррі. 3."
М.О. баупоїї (ед.), рр. 353-358, Маї!. Віотед. Вевз. Рошипа., УМазпіпоїоп, ОС; АПвспиї, 5.Р., (1991) У.
МОЇ. ВіоІ. 219:555-565; іаіев, О.)., єї а!., (1991) Меїнодз» 3:66-70; Непікоїй, 5., єї а!., (1992) Ргос.
Май. Асай. осі. ОБА 89:10915-10919; Айвспші, 5.Р., єї аЇ., (1993) 9. Мої. Емої. 36:290-300;
АПОММЕМТ 5ТАТІЗТІСО: Капіп, 5., єї а!., (1990) Ргос. Маї!. Асад. 5сі. ОБА 87:2264-2268; Капіп,
З., Її аі., (1993) Ргос. Май). Асад. 5сі. ОБА 90:5873-5877; Юетрбо, А., еї аї., (1994) Апп. Ргоб. 22:2022-2039; і Ай5сопиІ, 5.Е. "ЕмаїЇнайпуд їйе завіса! зідпіїсапсе ої типПіріє аївіпсі Іосаї аїїдптепів. " іп Тпеогеїїса! апа Сотршайопаї! Способи іп зЗепоте Кезеагсі (5. 5ипПаї, еа.), (1997) рр. 1-14, Ріеєпит, Мем МогКі.
Аналогічно, будь-який клас легкого ланцюга можна використовувати в композиціях і способах за даним винаходом. Зокрема, каппа, лямбда або їх варіанти корисні в композиціях і способах за даним винаходом.
Таблиця 2
Ілюстративні послідовності антитіл до РО-1
Характерна ФЕОІЮ особливість Амінокислотні послідовності Мо антитіла
Варіабельна ЕІММГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБКОаУЗТОИаУМУІ НУМООКРИаОАРВІ. ділянка ПМ АЗМІ ЕБМРАНЕЗаЗазатОвТІ ІЗ ЕРЕОРАУУУСОНЗНАОІ РІ ТЕ 4 аастКкУєїКк
ЕІМГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАЗКОаУЗТЗИаУМУІ НУМООКРИаОАРА
Легкий ГОМ АБМІ ЕБСМРАНЕЗОЗИаЗаИтТОгЕТІ ТЗІ ЕРЕОЕАМУМСОНЗАОІ РІ ланцюг ТЕВаСТКУБІКАТМААРБЗМУРІЕРРБЗОЕОЇ КИ ТАБУМСІ І ММЕМРАЕАКМ 5
ОМУКМОМАГ ОБаМЗОЕЗМТЕООЗКОБЗТУБІ З5ТІ ТІ ЗКАОМЕКНКУМАС
ЕУТНОВІ 55Р УТКЗЕМАСЕС сові 00 (ЇМЖУМУ 11111116 сову 000 ІВОУВРОМОаРоМ //777771111111111111111111111111111111111111118
Варіабельна ОМОЇ МОБОМЕУККРОАБУКУЗСКАБЗОМУ ТЕМУ УМИУМУУВОАРООІ Е ділянка МУмМасіМя Мас т МЕМЕКЕКМАМУТТТО5ЗГТТАММЕЇ КІ ОБВОТАМУ
УСсАННОУвВєОМСагрумаосатУТУзо
ОМОЇ МОБОМЕУККРЕАБУКУЗСКАЗИОУ ТЕМУ УМИУМУУВОАРООСІ
ЕУМаСсІМРОМОас ТМЕМЕКЕКМА МТ ТТО55317Т ТАММЕЇ КІ ОБООТ
АУУУСАВВОМВЕОМагБруУМУаОстТТуУТуУ55АЗТКОаРБЗМУЕРІ АРСЗА
ЗТЗЕЗТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБМУМЗИаАІ Т5ИОМНТЕРАМІ О55О1
Важкий У5І 5БУМТУРБЗБЗІІ ТК ИТОММОНКРУЬМТКУОКАМЕЗКУСИРРОРРСО 10 ланцюг РАРЕБ ааРБЗМУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗВТРЕМТСУУМОМБОБЕОРЕМОБЕМ
М УУрамЕУМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗТУВУУМІ ТМ НООУЛІ МОКЕУКО
КУЗМКаї РОБІЕКТІЗКАКИОРАВЕРОММУТІ РРОЗОБЕМТКМОМБІ ТО.
УКагуРБОІАМЕМЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ ОБрОаЗЕРІ УВІ ТУОК
ВУМОБсММЕЗСЗУМНЕАЇІ НМНУТОКБІ БІ Бі ак
Варіабельна ЕІММГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБЗУЗБЗМУ АМУУООКРООАРАЦІ ділянка УрАБМААТаІРАНЕЗОаБИаБОаТОЕТІ ТІЗ5І ЕРЕОБЕАУУУСООББММ Р 14
АтТРаОатКкМєїКк
Легкий ЕІМГТО5РАТІ 5І 5РОЕВАТІ БСВАБОБЗУБЗЗМІ АМУУООКРООАРНІ І. ланцюг ІМОАЗ5МВАТаІ РАНЕЗаЗОаБОаИ ТО ТІ ЕРЕОЕАУУУСООББМУУ 15
РАТРаОС,ТКМУЄІКАТМААРЗУРІЕРРЗОЕОЇ Ка ТАЗУМСТП ММЕМР
ОБЖ 1
АЮМЕКНКУМАСЕМТНОСІ 55РМТКЗЕМАСаЕС
Варіабельна ОМОЇ МЕЗО СУМОРИВБІ ВІ ОСКАБИа ТТ ЕЗМЗаМНУМУВОАРа . КагеЕУМАМмУмуУравкАУУАрЗУКавВЕТІЗАОМ5КМТІ РОМБ. 19 ділянка ВАЕОТАУУУСАТМОСУМУСОСТІ УТУЗО
ОМОЇ МЕЗО СУМОРИВБІ ВІ ОСКАБИа ТТ ЕЗМЗаМНУМУВОАРа
КагеЕУМАМмУмуУравкАУуАрЗУКавВЕТІЗВОМ5КМТІ РГОММ5І
ВАЕОТАУУУСАТМОВСУМУСОСТІ УТУ55АЗТКОаРЗМУЕРІ АРСЗА
ЗТЗЕЗТААІ СІ МКОМЕРЕРУТУБУМУМЗИаАІ Т5аМНТЕРАМІ О55
Важкий Сі 5 55УМТУРЗБІІ ЕТКТУТСОММОНКРОЬМТКМОКАМЕЗКМИа Р ланцюг РСРРОРАРЕБІ ааРБЗМУРІ ЕРРКРКОТІ МІЗАТРЕМТСУУУРСУБО 20
ЕОРЕМОЕМУ УМрамЕМНМАКТКРАЕЄОЕЄМЗТУАМММІ ТМ НО
РМ МакЕУКСКУЗМКИаї РОБІЕКТІЗКАКСОРАЕРОММТІ РРБЗОЕ
ЕМТКМОМ5І ТС УКИЕМРЗОІАМЕМ ЕЗМСОРЕММУКТТРРМІ 0 зразеЕг зв тМОоКкЗАМОБаММЕ5СЗУМНЕАЇНМНУТОКБІ.
ЗІ БК
Таблиця З
Додаткові антитіла до РО-1 і антигензвязувальні фрагменти, корисні в композиціях, способах і застосуваннях за даним винаходом
СОК легкого і важкого ланцюгів ПРО-1.08А в МУО2008/156712
С. Антитіла і антигензвязувальні фрагменти, які включають варіабельну ділянку важкого ланцюга зрілого П109А і одну з варіабельних ділянок легкого ланцюга зрілого КОЗА в УМО 2008/156712 легких ланцюгів зрілого КОЗА в УМО 2008/156712
У деяких варіантах здійснення композицій за даним винаходом, АРІ (тобто анти-РО-1 антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент) присутній в концентрації від приблизно 25 мг/мл до приблизно 200 мг/мл. У додаткових варіантах здійснення АРІ присутній в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 25 мг/мл. У деяких варіантах здійснення композицій за даним винаходом АРІ (тобто анти-?РО-1 антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент) присутній в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 200 мг/мл. У альтернативних варіантах здійснення АРІ присутній в концентрації приблизно 5 мг/мл, приблизно 10 мг/мл, приблизно 25 мг/мл, приблизно 50 мг/мл, приблизно 75 мг/мл, приблизно 100 мг/мл, приблизно 125 мг/мл, приблизно 130 мг/мл приблизно 150 мг/мл, приблизно 165 мг/мл, приблизно 167 мг/мл приблизно 175 мг/мл, приблизно 200 мг/мл.
У одному варіанті здійснення АРІ присутній в концентрації від приблизно 165 до приблизно 170 мг/мл.
У одному варіанті здійснення АРІ присутній в концентрації приблизно 167 мг/мл.
У одному варіанті здійснення АРІ присутній в концентрації приблизно 130 мг/мл.
У додаткових варіантах здійснення АРІ присутній в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл, від приблизно 50 мг/мл до приблизно 200 мг/мл; від приблизно 75 мг/мл до приблизно 200 мг/мл; від приблизно 100 мг/мл до приблизно 200 мг/мл; від приблизно 25 мг/мл до приблизно 175 мг/мл; від приблизно 50 мг/мл до приблизно 175 мг/мл; від приблизно 75 мг/мл до приблизно 175 мг/мл; від приблизно 100 мг/мл до приблизно 175 мг/мл; від приблизно 25 мг/мл до приблизно 150 мг/мл; від приблизно 50 мг/мл до приблизно 150 мг/мл; від приблизно 75 мг/мл до приблизно 150 мг/мл; від приблизно 100 мг/мл до приблизно 150 мг/мл; від приблизно 25 мг/мл до приблизно 125 мг/мл; від приблизно 50 мг/мл до приблизно 125 мг/мл; від приблизно 75 мг/мл до приблизно 125 мг/мл; від приблизно 25 мг/мл до приблизно 100 мг/мл, від приблизно 125 мг/мл до приблизно 175 мг/мл, від приблизно 125 мг/мл до приблизно 200 мг/мл або від приблизно 5 мг/мл до 200 мг/мл.
Ексципієнти для отримання композицій
Композиції за даним винаходом включають щонайменше один ексципієнт, який стабілізує композицію. У деяких варіантах здійснення композиція включає більше одного стабілізатора.
У деяких варіантах здійснення композицій за даним винаходом стабілізатором є невідновлювальний цукор. У варіантах здійснення даного винаходу невідновлювальний цукор являє собою глюкозу. У інших варіантах здійснення невідновлювальний цукор являє собою сахарозу. У додаткових варіантах здійснення невідновлювальний цукор являє собою трегалозу.
У інших додаткових варіантах здійснення невідновлювальний цукор являє собою лактозу. У інших варіантах здійснення невідновлювальний цукор являє собою рафінозу.
У деяких варіантах здійснення композиції антитіл до людського РО-1 за даним винаходом включають стабілізатор, вибраний з групи, яка складається з: від приблизно 6 95 до приблизно 895 маса/об'єм (мас./06б.) сахарози, трегалози або (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину; від приблизно З 95 до приблизно 595 мабс./0б. маніту, сорбіту, І-аргініну або фармацевтично прийнятної солі І -аргініну, або І-проліну або фармацевтично прийнятної солі І -проліну; і від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор включає від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор включає від приблизно 6 95 до приблизно 8 95
Зо мас./об. трегалози.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор включає від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор являє собою сахарозу, трегалозу або (2- гідроксипропіл)-В-циклодекстрин, який присутній в кількості від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. У інших варіантах здійснення сахароза, трегалоза або (2-гідроксипропіл)-р- циклодекстрин присутній в кількості від приблизно 6,5 95 до приблизно 7,5 95 мас./об. У інших додаткових варіантах здійснення сахароза, трегалоза або (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрин присутній в кількості від приблизно 6 95 мас./об., приблизно 6,25 95 мас./об., приблизно 6,5 95 мас./об., приблизно 6,75 95 мас./0б., приблизно 795 мас./об., приблизно 7,2595 маб./об., приблизно 7,5 95 мас./об., приблизно 7,75 95 мас./0б. або приблизно 8 95 мас./об.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. маніту.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. сорбітолу.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
У деяких варіантах здійснення композиція за даним винаходом включає аргінін, наприклад,
І-аргінін або його фармацевтично прийнятну сіль. У додаткових варіантах здійснення композиції за даним винаходом включають аргінін гідрохлорид (тобто аргінін НОСІ). У інших варіантах здійснення композиції включають аргінін сукцинат. У інших варіантах здійснення аргінін являє собою І -аргінін.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. проліну, наприклад І-проліну або його фармацевтично прийнятної солі. У додаткових варіантах здійснення композиції за даним винаходом включають пролін гідрохлорид (тобто пролін НОСІ). У інших варіантах здійснення композиції включають ГІ -пролін.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор являє собою маніт, сорбіт, І -аргінін, фармацевтично прийнятну сіль І -аргініну, І-пролін або фармацевтично прийнятну сіль І- проліну, який присутній в кількості від приблизно 3 95 до приблизно 595 мас./0б. У інших варіантах здійснення маніт, сорбіт, І -аргінін, фармацевтично прийнятна сіль І -аргініну, І-пролін бо або фармацевтично прийнятна сіль І-проліну присутній в кількості від приблизно 3,595 до приблизно 4,595 мас./0б. У інших додаткових варіантах здійснення маніт, сорбіт, І -аргінін, фармацевтично прийнятна сіль І -аргініну, І-пролін або фармацевтично прийнятна сіль І- проліну присутній в кількості приблизно З 95 мас./0б., приблизно 3,25 95 мас./об., приблизно 3,5 95 мас./об., приблизно 3,75 95 мас./об., приблизно 4 95 мас./0б., приблизно 4,25 95 мас./об., приблизно 4,5 95 мас./об., приблизно 4,75 95 мас./0об. або приблизно 5 95 мас./об.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор включає від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі.
У деяких варіантах здійснення композиція за даним винаходом включає гліцин або його фармацевтично прийнятну сіль. У додаткових варіантах здійснення композиції за даним винаходом включають гліцинат натрію.
У конкретних варіантах здійснення стабілізатор являє собою гліцин, який присутній в кількості від приблизно 150 мМ до приблизно 200 мМ, або приблизно 150 мм, приблизно 160
ММ, приблизно 170 мМ, приблизно 175 мМ, приблизно 180 мМ, приблизно 190 мМ або приблизно 200 мМ.
У деяких варіантах здійснення стабілізатор являє собою гліцин, який присутній в кількості від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об., від приблизно 1,5 до приблизно 2,5 95, або від приблизно 1,8 до приблизно 2,5 95, або від приблизно 1,5 до приблизно 2,2 95. У конкретних варіантах здійснення гліцин присутній в кількості приблизно 1,8 95, приблизно 2,0 95 приблизно 2,2 Уо або приблизно 2,5 9.
У деяких варіантах здійснення композиції антитіл до людського РО-1 за даним винаходом включають стабілізатор, вибраний з групи, яка складається з (1) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози, трегалози або (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину; (2) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 маніту, сорбіту, І -проліну або фармацевтично прийнятної солі
І -проліну; і (3) від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі.
Композиції за даним винаходом необов'язково включають аргінін, наприклад І -аргінін або його фармацевтично прийнятну сіль, який може забезпечити додаткову стабільність для композиції, а також контролювати в'язкість, що дозволяє отримати композицію з високою концентрацією АРІ. У деяких варіантах здійснення даного винаходу Іі -аргінін або
Зо фармацевтично прийнятна сіль присутній в композиціях в кількості від 0,25 95 до приблизно З 95 маса/об'єм. У додаткових варіантах здійснення І -аргінін або фармацевтично прийнятна сіль присутній в кількості приблизно 0,25 95 мас./об., приблизно 0,50 95 мас./об., приблизно 0,75 95 мас./об., приблизно 1,095 мас./об., приблизно 1,25 95 мас./0б., приблизно 1,595 маб./об., приблизно 1,75 95 мас./об., приблизно 2,0 95 мас./об., приблизно 2,25 95 мас./об., приблизно 2,5 95 мас./о0б., приблизно 2,75 95 мас./об. або приблизно 3,095 мас./об. У інших варіантах здійснення І -аргінін або фармацевтично прийнятна сіль присутній в кількості від приблизно 0 до приблизно 2,75 95 мас./об., від 0 до приблизно 2,595 мас./об., від 0 до приблизно 2,25 95 мас./об., від О до приблизно 2 95 мас./об., від О до приблизно 1,75 95 мас./об., від 0 до приблизно 1,595 мас./об., від 0 до приблизно 1,25 95 мас./об., від 0 до приблизно 1,0 95 мас./об., від приблизно 0,595 до приблизно 3,095 мас./об., від приблизно 0,595 до приблизно 2,75 95 мас./об., від приблизно 0,5 95 до приблизно 2,5 95 мас./об., від приблизно 0,5 95 до приблизно 2,25 95 мас./об., від приблизно 0,595 до приблизно 2 95 мас./об., від приблизно 0,595 до приблизно 1,75 95 мас./об., від приблизно 0,595 до приблизно 1,5 95 мас./об., від приблизно 0,596 до приблизно 1,25 95 мас./об., від приблизно 0,595 до приблизно 1,0 95 мас./об., від приблизно 1,095 до приблизно 3,095 мас./об., від приблизно 1,095 до приблизно 2,75 95 мас./об., від приблизно 1,0 95 до приблизно 2,5 95 мас./об., від приблизно 1,0 95 до приблизно 2,25 95 мас./об., от приблизно 1,095 до приблизно 2 95 мас./о0б., от приблизно 1,095 до приблизно 1,75 95 мас./об., от приблизно 1,0 95 до приблизно 1,5 95 мас./об., від приблизно 1,595 до приблизно 3,095 мас./об., від приблизно 1,595 до приблизно 2,75 95 мабс./об., від
БО приблизно 1,595 до приблизно 2,595 мас./об., від приблизно 1,595 до приблизно 2,25 95 мас./об., від приблизно 1,5 95 до приблизно 2 95 мас./об. або приблизно 2 95 до приблизно 3 95 мас./об.
У деяких варіантах здійснення даного винаходу стабілізатор вибраний з групи, яка складається з: від приблизно б 95 до приблизно 8 95 мас./о0б. сахарози, трегалози або (2- гідроксипропіл)-В-циклодекстрину; від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./0об6. маніту, сорбіту або проліну або його фармацевтично прийнятної солі; і від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі, і композиція додатково включає І - аргінін або його фармацевтично прийнятну сіль, який можна додавати в будь-кому з вказаних вище кількостей для зниження в'язкості композиції, особливо коли АРІ присутній у високій бо концентрації (наприклад, 75 мг/мл - 200 мг/мл). Зрозуміло, що хоча І-аргінін або його фармацевтично прийнятна сіль можуть бути додані для зниження в'язкості в таких варіантах здійснення, І -аргінін або фармацевтично прийнятна сіль також може служити для стабілізації композиції і може додавати додаткову стабільність відносно композиції без І -аргініну або фармацевтично прийнятної солі.
Як вказано вище, в конкретних варіантах здійснення композиції за даним винаходом включають високу концентрацію АРІ (наприклад, від приблизно 75 мг/мл до приблизно 200 мг/мл). У конкретних варіантах здійснення, де використана висока концентрація АРІ, композиції за винаходом також містять аргінін, наприклад І-аргінін або його фармацевтично прийнятну сіль, наприклад, кількість І -аргініну від приблизно 0,25 95 до приблизно 3,0 95 мас./об.
У доповнення до анти-РО-1ї антитіла або його антигензв'язувального фрагмента і стабілізатора в кількостях/концентрації, вказаних вище, композиції за даним винаходом також включають буфер. У деяких варіантах здійснення буфер присутній в кількості від приблизно 5
ММ до приблизно 20 мМ, яке забезпечує рН в діапазоні приблизно 4,5-6,4.
У деяких варіантах здійснення даного винаходу буфер забезпечує рН композиції в діапазоні від приблизно 4,5 до приблизно 6,5. У інших варіантах здійснення буфер має рн в діапазоні від приблизно 5,0 до приблизно 6,0. У інших додаткових варіантах здійснення рН знаходиться на рівні від приблизно 5,3 до приблизно 5,85. У інших варіантах рН знаходиться на рівні від приблизно 6,0 до приблизно 6,4.
У конкретних варіантах здійснення буфер має рН приблизно 5,0, приблизно 5,1, приблизно 5,2, приблизно 5,3, приблизно 5,4, приблизно 5,5, приблизно 5,6, приблизно 5,7, приблизно 5,8, приблизно 5,9, приблизно 6,0, приблизно 6,2 або приблизно 6,4. Приклади буферів, які будуть контролювати рівень рН в цьому діапазоні, включають сукцинат (натрію або калію), гістидин, ацетат натрію, фосфат (натрію або калію), Тгі5 (тріс(гідроксиметил)амінометан), діетаноламін, цитрат (натрію) і інші органічні кислотні буфери.
У конкретних варіантах здійснення даного винаходу буфер являє собою гістидин або ацетат при рН від приблизно 5,0 до приблизно 6,0. У деяких варіантах здійснення буфер являє собою
І -гістидиновий буфер. У деяких переважних варіантах здійснення буфер являє собою ацетат. У варіантах здійснення, де композиція є ліофілізованою, переважно, щоб буфер не був ацетатним, оскільки ацетатні буферні системи не сумісні з процесом ліофілізації.
Коли вказаний діапазон значень рН, наприклад "рН від 5,5 до 6,0," цей діапазон повинен включати вказані значення. Якщо не вказане інше, для ліофілізованої формули рН стосується рН після відновлення ліофілізованих композицій за даним винаходом. Рівень рН звичайно вимірюють при 25 "С з використанням стандартного рН-метра зі скляною колбою. У контексті даної заявки розчин, що містить "гістидиновий буфер при рН Х" стосується розчину при рНХ і включає гістидиновий буфер, тобто передбачається, що рН стосується рН розчину.
У доповнення до анти-РО-1 антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, стабілізатора і буфера в кількостях/концентрації, вказаних вище, композиції за даним винаходом також включають антиоксидант. У варіантах здійснення даного винаходу антиоксидант являє собою метіонін. У варіантах здійснення даного винаходу антиоксидант являє собою І -метіонін або його фармацевтично прийнятну сіль. У інших варіантах здійснення метіонін являє собою І -метіонін. У інших варіантах здійснення антиоксидант являє собою | - метіонін НС. У інших варіантах здійснення антиоксидант являє собою гістидин.
У деяких варіантах здійснення антиоксидант (наприклад, І -метіонін) присутній в композиціях за даним винаходом в кількості від приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ. У інших варіантах здійснення антиоксидант присутній в кількості від приблизно 5 мМ до приблизно 20 мМ, від приблизно 5 мМ до приблизно 15 мМ, від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ. У додаткових варіантах здійснення антиоксидант присутній в кількості приблизно 1 мМ, приблизно 2 мМ, приблизно З мМ, приблизно 4 мМ, приблизно 5 мМ, приблизно б мМ, приблизно 7 мМ, приблизно 8 мМ, приблизно 9 мМ, приблизно 10 мМ, приблизно 11 мМ, приблизно 12 мМ,
БО приблизно 13 мМ, приблизно 14 мМ, приблизно 15 мМ, приблизно 16 мМ, приблизно 17 мМ, приблизно 18 мМ, приблизно 19 мм або приблизно 20 мМ.
У варіантах здійснення, де антиоксидант являє собою гістидин, гістидин може бути присутнім в кількостях до 100 мМ. У таких варіантах здійснення гістидин може діяти як буфер і як антиоксиданта в композиціях за даним винаходом.
У доповнення до анти-РО-1 антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, стабілізатора і буфера в кількостях/концентрації, вказаних вище, композиції за даним винаходом також включають поверхнево-активну речовину. Поверхнево-активні речовини звичайно додають в композиції для забезпечення стабільності, зменшення і/або запобігання агрегації або для запобігання і/або інгібування пошкодження білка в умовах обробки, таких як бо очищення, фільтрація, ліофілізація, транспортування, зберігання і доставка. У деяких варіантах здійснення винаходу поверхнево-активна речовина корисна для забезпечення додаткової стабільності активного інгредієнта(ів), тобто анти-РО-1 антитіла або його антигензв'язувального фрагмента.
Поверхнево-активні речовини, які можуть бути використані в композиціях за даним винаходом, включають, але не обмежуються цим: неіїонні поверхнево-активні речовини, такі як поліоксіетиленові складні ефіри сорбітану і жирних кислот (полісорбати, що продаються під торговим найменуванням ТмжеепФ (Опідсета Атегісаз ЇЇ С, УмМітіпдіоп, ОЕ), включаючи
Полісорбат-20 (поліоксіетиленсорбітанмонолаурат), Полісорбат-40 (поліоксіетиленсорбітанмонопальмітат), Полісорбат-60 (поліоксіетиленсорбітанмоностеарат) і
Полісорбат-80 (поліоксіетиленсорбітанмоноолеат); поліоксіетиленалкілові ефіри, такі як Вгіхю 58 (Опідчета Атегісаз ГІ С, Умітіпдюп, ОЕ) і Вгі)Ф 35; полоксамери (наприклад, полоксамер 188);
ТтйопФ Х-100 (Опіоп Сагбіде Согр., Ноивіоп, ТХ) і ТійопФ Х-114; МР40; брап 20, брап 40, брап 60, 5рап 65, 5рап 80 і Зрап 85; сополімери етилену і пропіленгліколю (наприклад, серії неїонних поверхнево-активних речовин плюронікФ), такі як плюронік? Е68, плюронік? 10К5, плюронікФ
Е108, плюронікю Е127, плюронік» ЕЗ38, плюронік?» 144, плюронік» 162 (ВАБЕ Согр.,
І иджідзпатеп, Септапу); і додецилсульфат натрію (505).
Кількість поверхнево-активної речовини, яка повинна бути включена в композиції за даним винаходом, являє собою кількість, достатню для здійснення бажаної функції, тобто мінімальна кількість, необхідна для стабілізації активного фармацевтичного інгредієнта (тобто анти-РО-1 антитіла або його антигензв'язувального фрагмента) в композиції. Як правило, поверхнево- активна речовина присутня в концентрації від приблизно 0,008 95 до приблизно 0,1 95 маси/об 95 мас./об. У деяких варіантах здійснення цього аспекту за даним винаходом, поверхнево-активна речовина присутня в композиції в кількості від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95; від приблизно 0,0195 до приблизно 0,03 95, від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,02 95, від приблизно 0,015 95 до приблизно 0,04 95; від приблизно 0,01595 до приблизно 0,03 95, від приблизно 0,01595 до приблизно 0,02 95, від приблизно 0,02 95 до приблизно 0,04 95, від приблизно 0,02 95 до приблизно 0,035 95 або від приблизно 0,02 95 до приблизно 0,03 95. У конкретних варіантах здійснення поверхнево-активна речовина присутня в кількості приблизно 0,02 95. У альтернативних варіантах здійснення поверхнево-активна речовина присутня в
Зо кількості приблизно 0,01 95, приблизно 0,015 95, приблизно 0,02595, приблизно 0,03 95, приблизно 0,035 95 або приблизно 0,04 95.
У ілюстративних варіантах здійснення даного винаходу поверхнево-активна речовина являє собою неіонну поверхнево-активну речовину, вибрану з групи, що включає: Полісорбат 20,
Полісорбат 80 і Е127. У переважних варіантах здійснення поверхнево-активна речовина являє собою Полісорбат 80.
У конкретних варіантах здійснення РО-1 композиції за даним винаходом включають від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 РБЗ80О. У інших варіантах здійснення композиції за даним винаходом включають РБЗ80О в кількості приблизно 0,008 95, приблизно 0,01 95, приблизно 0,01595, приблизно 0,02 95, приблизно 0,025 95, приблизно 0,03 95, приблизно 0,035 95, приблизно 0,04 95 або приблизно 0,045 95. У конкретних варіантах здійснення композиції за даним винаходом включають приблизно 0,02 95 РБО8О.
Даний винахід також стосується композиції антитіла до людського РО-1, як описано в даній заявці, де композиція міститься в скляному флаконі або ін'єкційному пристрої (наприклад, шприці).
У варіантах здійснення композицій за даним винаходом композиція антитіла до людського
РО-1 має одну або декілька з наступних характеристик після зберігання при 2-8 "С протягом 12 місяців: а) Уо важкого ланцюга і легкого ланцюга, як виміряно методом СЕ-505 в відновлювальних умовах, складає 2 90,0 95,
БД) 9о інтактного дО, як виміряно методом СЕ-505 в невідновлювальних умовах, складає 2 90,0 9б, і с) о мономера, як виміряно методом НР-5ЕС, становить 295 95.
У інших варіантах здійснення даний винахід стосується композицій антитіл до людського РО- 1, як описано в даній заявці, де після зберігання композиції при 2-8 "С протягом 12 місяців, 90 важкого ланцюга і легкого ланцюга, виміряний методом СЕ-505 в відновлювальних умовах, становить » 96 95.
У інших варіантах здійснення даний винахід стосується композицій антитіла до людського
РО-1, як описано в даній заявці, де після зберігання композиції при 2-8 "С протягом 12 місяців 95 інтактного дО, виміряний методом СЕ-505 в невідновлювальних умовах, становить » 97 95.
У інших варіантах здійснення даний винахід стосується композицій антитіла до людського
РО-1, як описано в даній заявці, де після зберігання композиції при 2-8 "С протягом 12 місяців, до мономера, як виміряно методом НР-5ЕС, становить 298,5.
У додаткових варіантах здійснення даний винахід стосується композицій антитіла до людського РО-1, як описано в даній заявці, де після зберігання композиції при 2-8 "С протягом 12 місяців, 96 високомолекулярних сполук, як виміряно методом НР-5ЕС, складає х 1,5 95.
У інших варіантах здійснення даний винахід стосується композицій антитіла до людського
РО-1, як описано в даній заявці, де після зберігання композиції при 25 "С протягом 12 місяців, 90 мономера, як виміряно методом НР-5ЕС, становить » 98,0 95.
У додаткових варіантах здійснення даний винахід стосується композицій антитіла до людського РО-1, як описано в даній заявці, де після зберігання композиції при 25 "С протягом 6 місяців, 9о високомолекулярних сполук, як виміряно методом НР-5ЕС, складає х 2 965.
У інших варіантах здійснення даний винахід стосується композицій антитіла до людського
РО-1, як описано в даній заявці, де після зберігання композиції при 40 "С протягом З місяців, 90 мономера, як виміряно методом НР-5ЕС, становить 294,0 95, 294,5 95 або 295,0 95.
У додаткових варіантах здійснення даний винахід стосується композицій антитіла до людського РО-1, як описано в даній заявці, де після зберігання композиції при 40 "С протягом З місяців, 96 високомолекулярних сполук, як виміряно методом НР-ЗЕС, складає «5,5 905,5:5,0 95 або х4 4
Конкретні аспекти і варіанти здійснення даного винаходу
У одному аспекті (Ат), даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (Б) від приблизно 5 мМ до приблизно 20 мм буфера; (с) стабілізатор, вибраний з групи, яка складається з: (і) від приблизно б 95 до приблизно 8 95 маса/об'єм (мас./06б.) сахарози, трегалози або (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину; (ії) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. маніту, сорбіту, І -аргініну, фармацевтично прийнятної солі І -аргініну, І-проліну або фармацевтично прийнятної солі І -проліну; і (ії) від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі; (4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,10 95 неіонної поверхнево-активної речовини; і (е) приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ антиоксиданта.
У одному варіанті здійснення аспекту (Ат) композиція має рН від 4,5 до 6,4.
У одному варіанті здійснення аспекту (Ат) композиція має рН від 5,0 до 6,0.
У одному варіанті здійснення аспекту (Ат) композиція має рН від 5,3 до 5,8.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) композиція має рН приблизно 5,5.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) буфер являє собою гістидин або ацетат.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) буфер включає приблизно 10 мМ гістидину.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) буфер включає приблизно 10 мМ І -гістидину.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) буфер включає приблизно 10 мМ ацетати.
У одному варіанті здійснення аспекту (Ат) стабілізатор включає від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози.
У одному варіанті здійснення аспекту (Ат) стабілізатор включає від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. трегалози.
У одному варіанті здійснення аспекту (Ат) стабілізатор включає від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину.
У одному варіанті здійснення аспекту (А!) стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. маніту.
У одному варіанті здійснення аспекту (А1) стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. сорбітолу.
У одному варіанті здійснення аспекту (А1) стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (А1) стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мабс./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі, і рН композиції знаходиться на рівні від приблизно 6,0 до приблизно 6,4.
У одному варіанті здійснення аспекту (А1) стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. І -аргініну.
У одному варіанті здійснення аспекту (А1) стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. аргінін-НОЇ.
У одному варіанті здійснення аспекту (А!) стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. І - проліну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (А1) стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. І -проліну.
У одному варіанті здійснення аспекту (А1) стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. І -пролін НОЇ.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) стабілізатор включає від приблизно 160 мМ до приблизно 200 мМ гліцину або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) стабілізатор включає від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (Ат!) неіонна поверхнево-активна речовина включає від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80.
У одному варіанті здійснення аспекту (Ат!) неіонна поверхнево-активна речовина включає приблизно 0,02 95 полісорбату 80.
У одному варіанті здійснення аспекту (А!) антиоксидант включає від приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ І--метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) антиоксидант включає від приблизно 5 мМ до приблизно 15 мМ І--метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) антиоксидант включає приблизно 10 мМ І1- метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТ) антиоксидант являє собою І -метіонін.
У одному аспекті (Аг) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (Б) від приблизно 5 мМ до приблизно 20 мМ буфера; (с) стабілізатор, вибраний з групи, яка складається з: (і) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 маса/об'єм (мас./06б.) сахарози, трегалози або (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину; (ії) від приблизно З 95 до приблизно 595 мабс./0б. маніту, сорбіту, І-проліну або фармацевтично прийнятної солі І -проліну; і (ії) від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі; (4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,10 95 неїіонної поверхнево-активної речовини; і (е) приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ антиоксиданта.
У одному варіанті здійснення аспекту (Аг) композиція додатково включає від приблизно 1 95 до приблизно З 95 мас./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному аспекті (АЗ) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 25 мг/мл до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (Б) від приблизно 5 мМ до приблизно 20 мМ гістидинового буфера; (с) приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози; (4) приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 мас./об. полісорбату 80; і (е) приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ
І -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (АЗ) композиція додатково включає від приблизно 1 95 до приблизно З 95 мабс./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (АЗ) композиція додатково включає від приблизно 1,25 95 до приблизно 2,5 95 мабс./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (АЗ) гістидиновий буфер присутній в концентрації від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ.
У одному варіанті здійснення аспекту (АЗ) гістидиновий буфер являє собою І -гістидин.
У одному варіанті здійснення аспекту (АЗ) І -метіонін або фармацевтично прийнятна сіль присутній в концентрації від приблизно 5 мМ до приблизно 15 мМ.
У одному варіанті здійснення аспекту (АЗ) полісорбат 80 присутній в масовому співвідношенні приблизно 0,02 95 мас./об.
У одному варіанті здійснення аспекту (АЗ) сахароза присутня в масовому співвідношенні приблизно 7 95 мас./об.
У одному аспекті (А4) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 75 до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; (с) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ І-метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі; (а) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози; і (є) від 0,01 95 до приблизно 0,04 95 мас./о6. полісорбату 80.
У одному аспекті (А5) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 125 до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (б) приблизно 10 мМ гістидинового буфера; (с) приблизно 10
ММ -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі; (4) приблизно 7 95 мас./об. сахарози; і 60 (є) приблизно 0,02 95 мас./об. полісорбату 80.
У одному варіанті здійснення аспекту (А5) композиція додатково включає від приблизно 1,25 95 до приблизно 2,5 95 мабс./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (А5) композиція додатково включає від приблизно 1,25 95 до приблизно 2,5 95 мас./об. І -аргініну.
У одному варіанті здійснення аспекту (А5) композиція додатково включає від приблизно 1,25 95 до приблизно 2,5 95 мас./об. І -аргінін- НОСІ.
У одному варіанті здійснення аспекту (А5) композиція має рН від 5,0 до 6,0.
У одному варіанті здійснення аспекту (А5) композиція має рН від 5,3 до 5,8.
У одному аспекті (Аб) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; (с) стабілізатор, вибраний з групи, яка складається з: (Ї) від приблизно 6 95 до приблизно 8595 маса/об'єм (мас./о0б.) сахарози, трегалози або (2-гідроксипропіл)-рД- циклодекстрину; (ії) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мабс./об. маніту, сорбіту, І -аргініну, фармацевтично прийнятної солі І -аргініну, Ї-проліну або фармацевтично прийнятної солі І- проліну; і (ії) від приблизно 1,8 до приблизно 2,2 95 мас./об. гліцину або його фармацевтично прийнятної солі; (4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80; і (е) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ І -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (Аб) антитіло до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагменту присутній в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно мг/мл.
У одному аспекті (А7) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового 25 буфера; (с) приблизно 6 95 до приблизно 8 95 маса/об'єм мас./об. сахарози; (4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80; і (е) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ І - метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (А7) антитіло до людського РО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент присутнє в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 25
Зо мг/мл.
У одному варіанті здійснення аспекту (А7) І-метіонін або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою І -метіонін-НОЇ.
У одному аспекті (Ав) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (б) приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; (с) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. трегалози; (4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80; і (є) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (А8) антитіло до людського РО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент присутнє в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 25 мг/мл.
У одному аспекті (АЗ9) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (Б) приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; (с) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. (2-гідроксипропіл)-В-циклодекстрину; (4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80; і (е) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ І--метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (ААУ) антитіло до людського РО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент присутнє в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 25 мг/мл.
У одному аспекті (А10) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; (с) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./0б. маніту; (4) приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80; і (є) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ І -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (АТО) антитіло до людського РЮО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент присутнє в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 25 мг/мл.
У одному аспекті (А11), даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1 що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (Б) приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; (с) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. сорбітолу; (4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80; і (е) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ І -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (А171) антитіло до людського РО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент присутнє в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 25 мг/мл.
У одному аспекті (А12) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; (с) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. | -проліну або його фармацевтично прийнятної солі; (4) приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 905 полісорбату 80; і (є) від приблизно 5
ММ до приблизно 10 мМ І -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (А12) антитіло до людського РО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент присутнє в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 25 мг/мл.
У одному варіанті здійснення аспекту (А12) І-пролін або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою І -пролін.
У одному варіанті здійснення аспекту (А12) І-пролін або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою І -пролін НОСІ.
У одному аспекті (А13) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (Б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; (с) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 мас./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі; (4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80; і (е) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ І -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (А13) антитіло до людського РЮО-1 або його
Зо антигензв'язувальний фрагмент присутнє в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 25 мг/мл.
У одному варіанті здійснення аспекту (А13) композиція має рН від приблизно 6,0 до приблизно 6,4.
У одному варіанті здійснення аспекту (А13) І -аргінін або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою І -аргінін.
У одному варіанті здійснення аспекту (А13) І -аргінін або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою І -аргінін НС.
У одному аспекті (А14) даний винахід стосується композиції антитіла до людського РО-1, що включає: (а) від приблизно 5 мг/мл до приблизно 75 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; (Б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; (с) приблизно 160 мМ до приблизно 200 мМ гліцину або його фармацевтично прийнятної солі; (4) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80; і (е) від приблизно 5 мМ до приблизно 10 мМ І -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
У одному варіанті здійснення аспекту (А14) антитіло до людського РЮО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент присутнє в концентрації від приблизно 5 мг/мл до приблизно 25 мг/мл.
У одному варіанті здійснення аспекту (А14) гліцин або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою гліцин.
У одному варіанті здійснення аспекту (А14) гліцин або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою гліцин НОЇ.
У одному варіанті здійснення аспекту (А14) гліцин або його фармацевтично прийнятна сіль являє собою гліцин сукцинат.
У одному варіанті здійснення будь-якого з аспектів (Аб) - (А14) композиція додатково включає металохелатор.
У одному варіанті здійснення будь-якого з аспектів (Аб) - (А14) композиція додатково включає ОТРА, який присутній в концентрації від приблизно 10 мкМ до приблизно 30 мкМ.
У деяких варіантах здійснення будь-якого з аспектів (А1) - (А14) композиція являє собою рідину.
У деяких варіантах здійснення будь-якого з аспектів (А1) - (А14) композиція являє собою бо відновлений розчин з ліофілізованої композиції.
У будь-якому з конкретних аспектів і варіантів здійснення, описаних в даній заявці, можна використовувати будь-яке анти-РО-1 антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент (тобто антитіло або антигензв'язувальний фрагмент, яке специфічно зв'язується з людським РО-1, наприклад, пембролізумаб або його антигензв'язувальний фрагмент). У конкретних варіантах здійснення використовують одне з анти-РО-1 антитіл або їх антигензв'язувальних фрагментів, описаних в даній заявці, наприклад, описаних в розділі, озаглавленому Анти-РО-1 антитіла і їх антигензв'язувальні фрагменти.
У деяких варіантах здійснення даного винаходу будь-яка з композицій, описаних в даній заявці, знаходиться у водному розчині. У альтернативному варіанті здійснення даний винахід забезпечує ліофілізовані композиції, отримані шляхом ліофілізації водної композиції з отриманням відновленої композиції за даним винаходом, як більш детально обговорюється нижче.
Ліофілізовані фармацевтичні композиції
Ліофілізовані композиції терапевтичних білків забезпечують деякі переваги. Ліофілізовані композиції звичайно забезпечують кращу хімічну стабільність, ніж розчини композицій, і отже, збільшують період напівжиття. Ліофілізована композиція також може бути відновлена в різних концентраціях залежно від клінічних факторів, таких як шлях введення або дозування.
Наприклад, ліофілізована композиція може бути відновлена при високій концентрації (тобто в невеликому об'ємі), якщо це необхідно для підшкірного введення, або при нижчій концентрації, якщо вводять внутрішньовенно. Високі концентрації також можуть бути необхідні, якщо високе дозування потрібно для конкретного пацієнта, особливо якщо вводять підшкірно, де об'єм ін'єкції повинен бути мінімізований. Одна така ліофілізована композиція антитіла розкрита в патенті США Мо 6267958, який включений в дану заявку за допомогою посилання в повному об'ємі. Ліофілізовані композиції іншого терапевтичного білка розкриті в патенті США Мо 7247707, який включений в дану заявку за допомогою посилання в повному об'ємі.
Як правило, ліофілізовану композицію отримують, передбачаючи відновлення при високій концентрації лікарського продукту (ОР, в типовому варіанті здійснення гуманізованого анти-РО-1 антитіла пембролізумабу або його антигензв'язувального фрагмента), тобто передбачаючи відновлення в невеликому об'ємі води. Потім можна легко використати подальше розбавлення
Зо водою або ізотонічним буфером для розбавлення ЮР до нижчої концентрації. Як правило, ексципієнти включають в ліофілізовану композицію за даним винаходом на рівнях, які приводять до приблизно ізотонічної композиції при відновленні при високій концентрації ОР, наприклад для підшкірного введення. Відновлення в більшому об'ємі води, з отриманням нижчої концентрації ОР, обов'язково зменшить тонічність відновленого розчину, але таке зниження не має важливого значення для не-підшкірного, наприклад внутрішньовенного введення. Якщо ізотонічність бажана при нижчій концентрації ОР, ліофілізований порошок може бути відновлений в стандартному невеликому об'ємі води і потім додатково розбавлений ізотонічним розріджувачем, таким як 0,9 95 хлорид натрію.
У одному варіанті здійснення даного винаходу гуманізоване анти-РО-1 антитіло (або його антигензв'язувальний фрагмент) сформульоване у вигляді ліофілізованого порошку для відновлення і застосування для внутрішньовенного введення. У деяких варіантах здійснення антитіло (або його антигензв'язувальний фрагмент) забезпечують в кількості приблизно 50 мг/флакон і відновлюють стерильною водою для ін'єкцій перед використанням. При бажанні, відновлене антитіло може бути асептично розбавлене 0,9 95 ін'єкцією ОБР хлориду натрію в стерильному контейнері для внутрішньовенних вливань. У деяких варіантах здійснення цільової рН відновленої композиції становить 5,520,5. У різних варіантах здійснення ліофілізована композиція за винаходом забезпечує відновлення анти-РО-1 антитіла до високих концентрацій, таких як приблизно 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 100, 125, 150, 175 або більше мг/мл.
Ліофілізовані композиції за визначенням є по суті сухими, і, отже, концепція концентрації не є корисною для їх опису. Опис ліофілізованої композиції в перерахунку на масу компонентів у флаконі з одиничною дозою є більш корисним, але проблематичним, оскільки він варіюється для різних доз або розмірів флакона. При описі ліофілізованих композицій за даним винаходом корисно виразити кількість компонента як відношення маси компонента до маси лікарської речовини (05) в тому ж зразку (наприклад, флаконі). Це співвідношення може бути виражене в процентах. Такі співвідношення відображають внутрішню властивість ліофілізованих композицій за винаходом, незалежно від розміру флакона, дозування і протоколу відновлення.
У інших варіантах здійснення ліофілізовану композицію антитіла до людського РО-1 або антигензв'язувального фрагмента, визначають на основі розчину до ліофілізації, що використовується для приготування ліофілізованої композиції, такого як розчин до ліофілізації. бо У одному варіанті здійснення розчин до ліофілізації містить антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент в концентрації від приблизно 10 мг/мл приблизно 25 мг/мл або приблизно 50 мг/мл. Такі розчини до ліофілізації можуть мати рН 4,4-5,2 (включаючи приблизно 44, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, 5,0, 5,1 і 5,2), наприклад, переважно рН приблизно 4,8 або рн приблизно 5,5.
У інших варіантах здійснення ліофілізовану композицію антитіла до людського РО-1 або антигензв'язувального фрагмента визначають в контексті відновленого розчину, отриманого з ліофілізованої композиції.
Відновлені розчини можуть включати антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент в концентрації приблизно 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 80, 90 або 100 мг/мл або в більш високих концентраціях, таких як 150 мг/мл, 167 мг/мл, 200 мг/мл або аж до приблизно 250 мг/мл.
Такі відновлені розчини можуть мати рН приблизно 5,5 або рН від приблизно 5,0 до приблизно 6,0
Ліофілізовані композиції за даним винаходом отримують шляхом ліофілізації (ліофільного сушіння) попереднього розчину для ліофілізації. Ліофільне сушіння досягається шляхом заморожування композиції і подальшої сублімації води при температурі, прийнятній для первинного сушіння. У цих умовах температура продукту нижче точки евтектики або температури руйнування композиції. Як правило, температура полиці для первинного сушіння буде знаходитися в діапазоні приблизно від -30 до 25 "С (за умови, що продукт залишається замороженим під год. первинного сушіння) при відповідному тиску, звичайне в діапазоні від приблизно 50 до 250 мТорр. Форма, розмір і тип контейнера, що містить зразок (наприклад, скляний флакон), і об'єм рідини будуть визначати год., необхідний для сушіння, який може варіювати від декількох годин до декількох днів (наприклад, 40-60 годин). Вторинна стадія сушіння може проводитися при температурі приблизно 0-40 "С, залежно, головним чином, від типу і розміру контейнера і типу використовуваного білка. Час вторинного сушіння визначається бажаним рівнем залишкової вологи в продукті і звичайно складає щонайменше приблизно 5 годин. Як правило, вміст вологи в ліофілізованої композиції складає менше приблизно 5 95, і переважний менше приблизно З 95. Тиск може бути таким же, як і на етапі первинного сушіння.
Умови сублімаційного сушіння можуть варіювати залежно від композиції і розміру флакона.
У деяких випадках може бути бажаним ліофілізувати білкову композицію в контейнері, в
Зо якому повинне бути здійснене відновлення білка, щоб уникнути стадії перенесення.
Контейнером в цьому випадку може служити, наприклад, флакон об'ємом 3, 5, 10, 20, 50 або 100 см3.
Ліофілізовані композиції за даним винаходом відновлюють перед введенням. Білок може бути відновлений при концентрації приблизно 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 75, 80, 90 або 100 мг/мл або при більше високих концентраціях, таких як 150 мг/мл, 200 мг/мл, 250 мг/мл або 300 мг/мл аж до приблизно 500 мг/мл. Високі концентрації білка особливо корисні, коли передбачається підшкірна доставка відновленої композиції. Однак для інших шляхів введення, таких як внутрішньовенне введення, можуть бути бажані нижчі концентрації білка (наприклад, приблизно 5-50 мг/мл).
Відновлення звичайно відбувається при температурі приблизно 25 "С для забезпечення повної гідратації, хоча при бажанні можна використовувати і інші температури. Час, необхідний для відновлення, буде залежати, наприклад, від типу розріджувача, кількості ексципієнтаків) і білка. Типові розріджувачі включають стерильну воду, бактеріостатичну воду для ін'єкцій (ВУУЕЇ), рН буферний розчин (наприклад, фосфатно-сольовий буферний розчин), стерильний фізіологічний розчин, розчин Рінгера або розчин декстрози.
Даний винахід стосується рідкої композиції антитіла до людського РО-1, яка відновлена з ліофілізованої композиції, де відновлений розчин включає: а) від приблизно 125 мг/мл до приблизно 175 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; б) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; с) стабілізатор, вибраний з групи, яка складається з: (ї) від приблизно З 95 до приблизно 8 95 маса/об'єм (мас./об6.) сахарози; (і) від приблизно 2 95 до приблизно 5 95 мабс./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі; (ії) від приблизно З 95 до приблизно 5 95 маніту і приблизно 195 до приблизно 2 95 сахарози, і (ім) комбінації і) і її); і 4)приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 полісорбату 80.
У варіантах здійснення даного винаходу стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 8 95 маса/об'єм (мас./о6.) сахарози.
У варіантах здійснення даного винаходу стабілізатор включає приблизно 2 95 до приблизно 5 95 мас./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
У варіантах здійснення даного винаходу стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 5 95 маніту і приблизно 1 95 до приблизно 2 95 сахарози.
У варіантах здійснення даного винаходу стабілізатор включає приблизно 4 95 до приблизно 4,5 95 маніту і приблизно 1 95 до приблизно 2 95 сахарози.
У варіантах здійснення даного винаходу стабілізатор включає від приблизно З 95 до приблизно 8 95 маса/об'єм (мас./об.) сахарози і приблизно 2 95 до приблизно 5 95 мабс./об. І- аргініну або його фармацевтично прийнятної солі. У конкретних варіантах здійснення стабілізатор включає сахарозу і І -аргінін. У інших варіантах здійснення стабілізатор включає сахарозу і І -аргінін-НОЇ.
У конкретних варіантах здійснення стабілізатор включає комбінації 2-4 95 мас./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятній солі і 3,5-6 95 мас./о0б. сахарози. У інших варіантах здійснення стабілізатор включає комбінацію приблизно З 95 І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі і приблизно 5,5 95 сахарози. У інших варіантах здійснення стабілізатор включає комбінацію приблизно 2 95 І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі і приблизно 5 95 сахарози. У інших варіантах здійснення стабілізатор включає комбінацію приблизно 2 95 1- аргініну або його фармацевтично прийнятної солі і приблизно 3,7 95 сахарози.
Рідкі фармацевтичні композиції
Рідку композицію антитіл можна отримати, взявши лікарську речовину (наприклад, гуманізоване анти-РО-1), яка знаходиться в рідкій формі (наприклад, пембролізумаб у водній фармацевтичній композиції), і буфер, замінивши його на бажаний буфер як останню стадію процесу очищення. У цьому варіанті здійснення стадія ліофілізації відсутня. Лікарську речовину в кінцевому буфері концентрують до бажаної концентрації. Ексципієнти, такі як сахароза, метіонін і полісорбат 80, додають до лікарської речовини і її розбавляють, використовуючи відповідний буфер, до кінцевої концентрації білка. Кінцеву сформульовану лікарську речовину фільтрують, наприклад, використовуючи фільтри 0,22 мкм, і вміщують в кінцевий контейнер (наприклад, скляні флакони або шприци). Така рідка композиція служить прикладом кінцевої рідкої композиції, що містить 10 мМ гістидину рН 5,5, 7 95 сахарози, 0,02 95 полісорбату 80, 25- 200 мг/мл пембролізумабу і 1,5-2,5 95 аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
І. Способи застосування
Даний винахід також стосується способу лікування раку у пацієнта, який включає введення пацієнту ефективної кількості будь-кого з композицій за даним винаходом; тобто, будь-якої композиції, описаної в даній заявці (включаючи композиції за даним винаходом, визначені як аспекти (А1)-(А14) в розділі даної заявки Конкретні аспекти і варіанти здійснення даного винаходу (що далі іменуються як "аспекти (А1)-(А14)3". У деяких варіантах здійснення цього способу композицію вводять пацієнту за допомогою внутрішньовенного введення. У інших варіантах здійснення композицію вводять пацієнту шляхом підшкірного введення.
У будь-якому зі способів за даним винаходом рак може бути вибраний з групи, що включає: меланому, рак легень, рак голови і шиї, рак сечового міхура, рак молочної залози, рак шлунково-кишкового тракту, множинна мієлому, гепатоцелюлярний рак, лімфому, рак нирки, мезотеліому, рак яєчників, рак стравоходу, анальний рак, рак жовчних шляхів, колоректальний рак, рак шийки матки, рак щитовидної залози, рак слинних залоз, рак передміхурової залози (наприклад, гормонорефрактерна аденокарцинома передміхурової залози), рак підшлункової залози, рак товстої кишки, рак стравоходу, рак печінки, рак щитовидної залози, гліобластому, гліому і інші злоякісні новоутворення.
У деяких варіантах здійснення рак легень являє собою недрібноклітинний рак легень.
У альтернайивних варіантах здійснення рак легень являє собою дрібноклітинний рак легень.
У деяких варіантах здійснення лімфома являє собою лімфому Ходжкіна.
У інших варіантах здійснення лімфома являє собою неходжкінську лімфому. У конкретних варіантах здійснення лімфома являє собою медіастинальну великоклітинну В-клітинну лімфому. У деяких варіантах здійснення лімфома являє собою дифузну великоклітинну В- клітинну лімфому (І ВСІ.
У деяких варіантах здійснення рак молочної залози являє собою потрійний негативний рак молочної залози.
У інших варіантах здійснення рак молочної залози являє собою ЕКЗ/НЕК2- раку молочної залози.
У деяких варіантах здійснення рак сечового міхура являє собою уротеліальний рак.
У деяких варіантах здійснення рак голови і шиї являє собою раку носоглотки. У деяких варіантах здійснення рак являє собою раку щитовидної залози. У інших варіантах здійснення рак являє собою раку слинних залоз. У інших варіантах здійснення рак являє собою плоскоклітинний рак голови і шиї.
У деяких варіантах здійснення рак являє собою метастатичний колоректальний рак з 60 високим рівнем мікросателітної нестабільності (М5І-Н).
У деяких варіантах здійснення рак являє собою солідну пухлину з високим рівнем мікросателітної нестабільності (М5І-Н).
У деяких варіантах здійснення рак являє собою солідну пухлину з високим мутаційним навантаженням.
У деяких варіантах здійснення рак вибраний з групи, що включає: меланому, недрібноклітинний рак легень, рецидивуючу або рефрактерну класичну лімфому Ходжкіна, плоскоклітинний рак голови і шиї, уротеліальний рак, рак стравоходу, рак шлунка, ОРІ ВСІ і гепатоцелюлярний рак.
У інших варіантах здійснення вищезгаданих способів лікування рак являє собою злоякісну пухлину Гема. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина Гема являє собою гострий лімфобластний лейкоз (АГ), гострий мієлоїдний лейкоз (АМІ), хронічний лімфолейкоз (СІ |), хронічний мієлоїдний лейкоз (СМІ), СІ ВСІ, ЕВМ-позитивний ОІ ВСІ, первинна медіастинальну великоклітинну В-клітинну лімфому; великоклітинну В-клітинну лімфому, багату Т-клітинами і/або гістіоцитами; фолікулярну лімфому, лімфому Ходжкіна (НІ), лімфому з мантійних клітин (МС), множинну мієлому (ММ), мієлоїдний лейкоз 1 (МсІ-1), мієлодиспластичний синдром (МО5), неходжкінську лімфому (МНІ) або дрібноклітинну лімфоцитарну лімфому (5 |).
Злоякісні новоутворення, які демонструють поліпшену безрецидивну і загальну виживаність відносно присутності інфільтруючих пухлину лімфоцитів в біопсії або хірургічному матеріалі, наприклад, меланомі, кишечнику, печінці, нирках, шлунку/стравоході, молочній залозі, підшлунковій залозі і яєчнику, охоплені в способах лікування, описаних в даній заявці. Відомо, що такі підтипи раку схильні до імунного контролю з боку Т-лімфоцитів. Крім того, включені рефрактерні або рецидивуючі злоякісні новоутворення, ріст яких можна інгібувати з використанням антитіл, описаних в даній заявці.
У деяких варіантах здійснення композиції за даним винаходом (наприклад, аспекти (АТ1)- (А14) вводять пацієнту, що має рак, який характеризується підвищеною експресією РО-1 1 і/або
РО-І2 в тестованих зразках тканини включаючи: рак яєчника, нирок, кишечнику, підшлункової залози, молочної залози, печінки, шлунка, стравоходу і меланому. Додаткові види раку, для яких може бути корисно лікування анти-РО-1 антитілами, такими як гуманізоване анти-РО-1 антитіло пембролізумаб, включають ракові захворювання, пов'язані з персистуючою інфекцією
Зо вірусами, такими як віруси імунодефіциту людини, віруси гепатиту класу А, В і С, вірус
Епштейна-Барра, віруси папіломи людини, про які відомо, що вони причинно пов'язані, наприклад, з саркомою Капоші, раком печінки, раком носоглотки, лімфомою, раком шийки матки, вульви, анальним раком, раком статевого члена і раком порожнини рота.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування раку у пацієнта- людини, що включає введення пацієнту будь-якої композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14).
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування неоперабельний або метастатичної меланоми у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту будь-якої композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14).
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування метастатичного недрібноклітинного раку легень (М5СІ С) у пацієнта-людини, що включають введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14). У конкретних варіантах здійснення пацієнт має пухлину з високою експресією РО-Ї1 Кбал пропорції пухлини (ТРБ)250 9б6)| і раніше не отримував лікування платина-вмісною хіміотерапією. У інших варіантах здійснення пацієнт має пухлину з експресією РО-І1 (ТР521 95) і раніше отримував лікування платина-вмісною хіміотерапією. У ще одних варіантах здійснення пацієнт має пухлину з експресією РО-І 1 (ТР521 905) і раніше не отримував лікування платина-вмісною хіміотерапією. У конкретних варіантах здійснення пацієнт мав прогресування захворювання на момент або після отримання платина-вмісної хіміотерапії.
У деяких варіантах здійснення РО-Ї1 ТР5 визначають за допомогою випробуваного ЕОА тесту.
У деяких варіантах здійснення пухлина пацієнта не має ЕСЕРЕ або АЇ К геномних аберацій.
У деяких варіантах здійснення пухлина пацієнта має ЕСЕК або АГК геномну аберацію і мала прогресування захворювання під год. або після отримання лікування ЕСЕК або АЇК аберації (аберацій) перед отриманням анти-?РО-1 антитіла або його антигензв'язувального фрагмента.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування метастатичного недрібноклітинного раку легень (М5СІ С) у пацієнта-людини, що включають: (1) введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14), і (2) введення бо пеметрекседу і карбоплатину пацієнту. У конкретних варіантах здійснення пацієнт раніше не лікувався протираковим терапевтичним засобом до початку схеми комбінованого лікування з використанням композиції за даним винаходом, пеметрекседу і карбоплатину.
У деяких варіантах здійснення пацієнт має неплоскоклітинний недрібноклітинний рак легень.
У деяких варіантах здійснення пеметрексед вводять пацієнту в кількості 500 мг/м?. У підваріантах здійснення пеметрексед вводять пацієнту за допомогою внутрішньовенної інфузії кожні 21 день. У конкретних варіантах здійснення год. інфузії складає приблизно 10 хвилин.
У варіантах здійснення даного винаходу, де пацієнта лікують композицією за винаходом в комбінації з пеметрекседом, винахід додатково включає введення пацієнту від приблизно 400 мкг до приблизно 1000 мкг фолієвої кислоти один раз на день, починаючи приблизно за 7 днів до введення пеметрекседу пацієнту і продовжуючи приблизно до 21 дня після того, як пацієнту вводять останню дозу пеметрекседу. У деяких варіантах здійснення фолієву кислоту вводять перорально. У деяких варіантах здійснення даний винахід додатково включає введення пацієнту приблизно 1 мг вітаміни Ві2 приблизно за 1 тиждень до першого введення пеметрекседу і приблизно кожні три цикли введення пеметрекседу (тобто приблизно кожні 9 тижнів). У деяких варіантах здійснення вітамін Ві2 вводять внутрішньом'язово. У деяких варіантах здійснення даний винахід додатково включає введення приблизно 4 мг дексаметазону пацієнту два рази на день за день до, на день і на наступний день після введення пеметрекседу. У деяких варіантах здійснення дексаметазон вводять перорально.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування рецидивуючого або метастатичного плоскоклітинного раку голови і шиї (НМЗСС) у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту будь-якої композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14).
У деяких варіантах здійснення пацієнт раніше отримував лікування платина-вмісною хіміотерапією. У деяких варіантах здійснення пацієнт мав прогресування захворювання на момент або після отримання платина-вмісної хіміотерапії.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування рефрактерної класичної лімфоми Ходжкіна (СНІ) у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14). У деяких варіантах здійснення у пацієнта рецидив після З або більше ліній терапії для лікування СНІ. У конкретних варіантах здійснення пацієнт є дорослим пацієнтом. У альтернативних варіантах здійснення
Зо пацієнт є педіатричним пацієнтом.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування місцево-поширеної або метастатичної уротеліальної карциноми у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14). У деяких варіантах здійснення пацієнту не показана цисплатин-вмісна хіміотерапія. У деяких варіантах здійснення пацієнт має прогресування захворювання під год. або після платина-вмісної хіміотерапії або протягом 12 місяців після неоад'ювантного або ад'ювантного лікування платина-вмісною хіміотерапією.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування неоперабельний або метастатичних, з високою мікросателітною нестабільністю (М5І-Н) або з дефіцитом репарації неспарених основ солідних пухлин у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14). У конкретних варіантах здійснення пацієнт мав прогресування захворювання після попереднього протиракового лікування.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування неоперабельний або метастатичного, з високою мікросателітною нестабільністю (МЗІ-Н) або з дефіцитом репарації неспарених основ колоректального раку у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14). У конкретних варіантах здійснення пацієнт мав прогресування захворювання після попереднього лікування фторпіримідином, оксаліплатином і іринотеканом.
У одному варіанті здійснення, даний винахід включає спосіб лікування рецидивуючого локально поширеного або метастатичного раку шлунка у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14).
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування рецидивуючого локально поширеної або метастатичної аденокарциноми гастроезофагеального переходу у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(АТ14). У конкретних варіантах здійснення пухлина пацієнта експресує РО-І1
Ікомбінований позитивний бал (СР) 2 1|. У конкретних варіантах здійснення пацієнт має прогресування захворювання при або після двох або більше попередніх ліній терапії, включаючи фторпіримідин- і платина-вмісну хіміотерапію. У конкретних варіантах здійснення пацієнт має прогресування захворювання при або після двох або більше попередніх ліній терапії, включаючи НЕК2г/пеи-направлену терапію.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування раку у пацієнта- людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1Т)-(А14), де пацієнт має рак, вибраний з групи, що включає: меланому, рак легень, рак голови і шиї, рак сечового міхура, рак молочної залози, рак шлунково-кишкового тракту, множинна мієлому, гепатоцелюлярний рак, лімфому, рак нирки, мезотеліому, рак яєчників, рак стравоходу, анальний рак, рак жовчних шляхів, колоректальний рак, рак шийки матки, рак щитовидної залози і рак слинних залоз.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування дрібноклітинного раку легень у пацієнта-людини, що включають введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14).
У одному варіанті здійснення, даний винахід включає спосіб лікування неходжкінської лімфоми у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14). У конкретних варіантах здійснення неходжкінська лімфома являє собою медіастинальну великоклітинну В-клітинну лімфому. У конкретних варіантах здійснення неходжкінська лімфома являє собою дифузну великоклітинну В-клітинну лімфому.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування раку молочної залози у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14). У деяких варіантах здійснення рак молочної залози являє собою потрійний негативний рак молочної залози. У деяких варіантах здійснення рак молочної залози являє собою ЕК-/НЕН2-рак молочної залози.
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування раку носоглотки у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14).
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування раку щитовидної залози у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14).
У одному варіанті здійснення даний винахід включає спосіб лікування раку слинних залоз у пацієнта-людини, що включає введення пацієнту композиції за даним винаходом (наприклад, по аспектах (А1)-(А14).
Антагоністичні анти-РО-1 антитіла або фрагменти антитіл також можна використовувати для запобігання або лікуванню інфекцій і інфекційних захворювань. Таким чином, винахід стосується способу лікування хронічної інфекції у пацієнта-ссавця, який включає введення пацієнта ефективної кількості композиції за даним винаходом. У деяких конкретних варіантах здійснення цього способу композицію вводять пацієнту за допомогою внутрішньовенного введення. У інших варіантах здійснення композицію вводять пацієнту шляхом підшкірного введення.
Ці засоби можна використовувати окремо або в комбінації з вакцинами для стимуляції імунної відповіді на патогени, токсини і аутоантигени. Антитіла або їх антигензв'язувальні фрагменти можна використовувати для стимуляції імунної відповіді на віруси, інфекційні для людини, включаючи, але не обмежуючись цим: віруси імунодефіциту людини, віруси гепатиту класу А, В і С, вірус Епштейна-Барра, цитомегаловірус людини, віруси папіломи людини і віруси герпеса. Антагоністичні анти-РО-1 антитіла або фрагменти антитіл можна використовувати для стимуляції імунної відповіді на інфекцію бактеріальними або грибковими паразитами і іншими патогенними мікроорганізмами. Вірусні інфекції гепатит В 'ї С і ВІЛ стосуються тих, які вважаються хронічними вірусними інфекціями.
Композиції за даним винаходом можна вводити пацієнту в комбінації з одним або декількома "додатковими терапевтичними засобами". Додатковий терапевтичний засіб може являти собою
БО біотерапевтичний засіб (включаючи, але не обмежуючись цим, антитіла до МЕСЕ, ЕСЕК,
Негг/пеи, рецептори МЕСБЕ, інші рецептори фактора росту, СО20, 040, СО-401, ОХ-40, 4А-1ВВ і
ІСО5); засіб, який інгібує ріст; імуногенний засіб (наприклад, атенуйовані ракові клітини, пухлинні антигени, антиген-презентуючі клітини, такі як дендритні клітини з введеним в них виділеним з пухлини антигеном або нуклеїновими кислотами, імуностимулюючі цитокіни (наприклад, 1-2, ІЕМа2 М-С5БЕ) і клітини, трансфіковані генами, що кодують імуностимулюючі цитокіни, такі як, але не обмежуючись цим ЗМ-С5БЕ).
Як відмічено вище, в деяких варіантах здійснення способів за даним винаходом спосіб додатково включає введення додаткового терапевтичного засобу. У конкретних варіантах здійснення додатковий терапевтичний засіб являє собою анти-ЇАСЗ антитіло або його бо антигензв'язувальний фрагмент, анти-СІТК антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент,
Зо анти-ТІСІТ антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, анти-СО27 антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент. У одному варіанті здійснення додатковий терапевтичний засіб являє собою вектор на основі вірусу хвороби Ньюкасла, які експресують 1-12. У додатковому варіанті здійснення додатковий терапевтичний засіб являє собою динацикліб. У інших додаткових варіантах здійснення додатковий терапевтичний засіб являє собою агоніст 5ТІМО.
Прийнятні шляхи введення можуть, наприклад, включати парентеральну доставку, включаючи внутрішньом'язову, підшкірну, а також інтратекальну, пряму внутрішньошлуночкову, внутрішньовенну, внутрішньоочеревинну. Лікарські засоби можна вводити різними загальноприйнятими способами, такими як внутрішньоочеревинні, парентеральні, внутрішньоартеріальні або внутрішньовенні ін'єкції. Способи введення, в яких об'єм розчину повинен бути обмежений (наприклад, підшкірне введення), вимагають ліофілізованої композиції, що дозволяє здійснювати відновлення при високій концентрації.
Вибір дозування додаткового терапевтичного засобу залежить від декількох факторів, включаючи швидкість обороту сполуки в сироватці або тканині, рівень симптомів, імуногенність сполуки і доступність клітин-мішеней, тканини або органу у індивідуума, який одержує лікування.
Дозування додаткового терапевтичного засобу повинне складати таку кількість, яка забезпечує прийнятний рівень побічних ефектів. Відповідно, величина дози і частота введення кожного додаткового терапевтичного засобу (наприклад, біотерапевтичного або хіміотерапевтичного засобу) будуть частково залежати від конкретного терапевтичного засобу, тяжкості раку, що підлягає лікуванню, і характеристик пацієнта. Посібник по вибору відповідних доз антитіл, цитокінів і малих молекул є доступним. Див., наприклад, (М/амлтгупсгак (1996) Апіїбоду ТНегару,
Віо5 Зсієпійіс Риб. ца, Охіогазніге, ОК; Ктєзіпа (єд.) (1991) Мопосіопа! Апіїбодієз, СуюкКіпез апа
АпПтйй5, Магсе! ЮОекККег, Мем Моїк, ММ; Васі (є4а.) (1993) Мопосіопа! Апіїбодієє апі Рерііде
ТНегару іп Ашоіттипе Оізеазев, Магсе! ОекКег, Мем МоїКк, МУ; Ваеп еї аї. (2003) Мем Епаї. У.
Меа. 348:601-608; Міїдтот еї а. (1999) Мем Еподі. У. Мед. 341:1966-1973; бБіатоп вї а)ї. (2001) Мем
Епо)!. У. Мед. 344:783-792; Вепіатіпомії? єї а. (2000) Мем Епаді. У. Мед. 342:613-619; Сіповни еї аї. (2003) Мем Еподі. У. Меа. 348:24-32; ІіреКу еї а. (2000) Мем Еподі. У. Меа. 343:1594-1602;
РПпузісіапе" Ое5К Неїегепсе 2003 (РНувзісіапеї Ое5К Неїегепсе, 5/1 Ед); Медіса! Есопотіс5
Сотрапу; ІЗВМ: 1563634457; 57 єдйоп (Мометрбрег 2002))|. Прийнятний режим дозування може
Зо визначити клініцист, наприклад, з використанням параметрів або факторів, відомих або передбачуваних в даній галузі як такі, що впливають на лікування, або прогнозуються як такі, що впливають на лікування, і він буде залежати, наприклад, від історії хвороби пацієнта (наприклад, попередньої терапії), типу і стадії раку, що підлягає лікуванню, і біомаркерів відповіді на один або декілька терапевтичних засобів в комбінованій терапії.
Різні літературні посилання доступні для полегшення вибору фармацевтично прийнятних носіїв або ексципієнтів для додаткового терапевтичного засобу. Див., наприклад, (Ветіпаїоп'5
Рпагтасецшіїйса! 5сіеєпсез апа 0.5. Рнпаптасорвїа: Маїйопа! Роптиїагу, Маск Рибіїзпіпд Сотрапу,
Еазюп, РА (1984); Нагатап еї аї. (2001) Соодтап апа Сітап'є Те РНаптасоіодіса! Вавів ої
ТНегарешісв, МеСтгам/-НІЇЇ, Мем МоїКк, МУ; Ссеппаго (2000) Ветіпдюп: Тне бсієпсе апа Ргасіїсе ої
Рпаптасу, ГПірріпсой, УМіПатв апа УМіІКіп5, Мем Моїк, МУ; Амів евї аї. (вд5.) (1993) Рпаптасешіісаї! розаде Боптв: Рагепієга!І Медісайоп5, Магсе! ОекКег, ММ; Іерептап, єї аї. (єа5.) (1990)
РПпаптасешіса! Юоб5аде Богптв: Тарієї5, МагсеІ ОекККег, ММ; Ііерептап еї аї. (єдв.) (1990)
Рпаптасешіса! Созаде Еопт:5: Оізрегзе Зузіет5, Магсе! ЮОекККег, МУ; УМеїіпег ії Коїко5Кіе (2000)
Ехсіріепі Тохіспу апа Заїеїу, Магсеї! Оеккег", Іпс., Мем Моїк, ММ.
Фармацевтичну композицію антитіл можна вводити шляхом безперервної інфузії або дозами з інтервалами, наприклад один день, 1-7 разів на тиждень, один тиждень, два тижні, три тижні, щомісяця, раз на два місяці і т.д. Переважним протоколом введення є протокол з максимальною дозою або частотою введення, який дозволяє уникнути значних небажаних побічних ефектів. Загальна тижнева доза звичайно складає щонайменше 0,05 мкг/кг, 0,2 мкг/кг, 0,5 мкг/кг, 1 мкг/кг, 10 мкг/кг, 100 мкг/кг, 0,2 мг/кг, 1,0 мг/кг, 2,0 мг/кг, 10 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг маси тіла або більш. Див., наприклад, (Мапа еї а. (2003) Мем Епді. У. Мед. 349:427-434; Негоїй єї а!. (2002) Мем Епаді. У. Мед. 346:1692-1698; іш еї аї. (1999) У. Мешгої. Меигов5ига. Рвзусп. 67:451- 456; Ропієїї еї аї. (20003) Сапсег ІттипоЇї. Іттипоїйег. 52:133-144|, Необхідна доза низькомолекулярного терапевтичного засобу, наприклад пептидного міметика, натурального продукту або органічної хімічної речовини, приблизно така ж, як для антитіла або поліпептида, в перерахунку на моль/кг.
У деяких варіантах здійснення дозування буде включати введення пацієнту збільшуваних доз 1,0, 3,0 і 10 мг/кг фармацевтичної композиції, тобто композиції, що включає пембролізумаб, під год. курсу лікування. Композиція, що включає пембролізумаб, може бути відновленою бо рідкою композицією або може бути рідкою композицією, раніше не ліофілізованою. Тривалість курсу може варіювати і може продовжуватися доти, поки не будуть отримані бажані ефекти. У деяких варіантах здійснення підвищення дози буде продовжуватися до дози приблизно 10 мг/кг.
У певних варіантах здійснення у пацієнта буде гістологічний або цитологічний діагноз меланоми або іншої форми солідної пухлини, і в деяких випадках пацієнт може мати невимірюване захворювання. У деяких варіантах здійснення пацієнт буде лікуватися іншими хіміотерапевтичними засобами, тоді як в інших варіантах здійснення пацієнт буде являти собою раніше не лікованого пацієнта.
У інших додаткових варіантах здійснення режим дозування буде включати введення дози 1,
З або 10 мг/кг будь-якої з фармацевтичних композицій, описаних в даній заявці (тобто, композиції, що включає пембролізумаб), протягом всього курсу лікування. Для такого постійного режиму дозування інтервал між дозами буде приблизно 14 днів (ж 2 дні). У деяких варіантах здійснення інтервал між дозами буде складати приблизно 21 дні (5 2 дні).
У деяких варіантах здійснення режим дозування буде включати введення дози від приблизно 0,005 мг/кг до приблизно 10 мг/кг, з підвищенням дози для індивідуального пацієнта.
У деяких варіантах здійснення дозу 5 мг/кг або 10 мг/кг будуть вводити з інтервалами кожні З тижні або кожні 2 тижні. У ще одних додаткових варіантах здійснення дозу З мг/кг будуть вводити з тритижневими інтервалами для пацієнтів з меланомою або пацієнтів з іншими солідними пухлинами. У цих варіантах здійснення пацієнти повинні мати неоперабельне захворювання; однак, пацієнти могли мати попередню операцію.
У деяких варіантах здійснення пацієнту протягом 30 хвилин вводять внутрішньовенну інфузію будь-якої з фармацевтичних композицій, описаних в даній заявці. У деяких варіантах здійснення для підвищення дози інтервал між введеннями першої і другої дози буде складати приблизно 28 днів (ж 1 день). У деяких варіантах здійснення інтервал між другою і третьою дозами буде складати приблизно 14 днів (5 2 дні). У деяких варіантах здійснення інтервал буде складати приблизно 14 днів (5 2 дні) для доз, наступних за другою дозою.
У деяких варіантах здійснення використання клітинно-поверхневих маркерів і/або цитокінових маркерів, як описано в М/02012/018538 або УМО2008/156712, будуть використовувати в біоаналізах для моніторингу, діагностики, відбору пацієнтів і/або схем лікування, що включає блокаду шляху РО-1.
Зо Підшкірне введення можна здійснити шляхом ін'єкції з використанням шприца або з використанням інших ін'єкційних пристроїв (наприклад, пристрої Іпіесі-еазеф); ручок-шприців; або безголкових пристроїв (наприклад, Меайїдесіог і Віоуесіогф)).
Варіанти здійснення даного винаходу також включають одну або декілька біологічних композицій, описаних в даній заявці (ї) для застосування в, (ії) для використання як лікарського засобу або композиції для, або (ії) для застосування в отриманні лікарського засобу для: (а) терапії (наприклад, організму людини); (б) медицина; (с) індукції або посилення протипухлинної імунної відповіді; (4) зменшення кількості одного або декількох пухлинних маркерів у пацієнта; (є) зупинки або затримки росту пухлини або раку крові; (Ї) зупинки або затримки прогресування захворювання, пов'язаного з РО-1; (д) зупинки або затримки прогресування раку; (п) стабілізації захворювання, пов'язаного з РО-1; (і) інгібування росту або виживання пухлинних клітин; (Її) усунення або зменшення розміру одного або декількох ракових уражень або пухлин; (К) зменшення прогресування, вияву або тяжкості захворювання, пов'язаного з РО-1; (І) зменшення тяжкості або тривалості клінічних симптомів захворювання, пов'язаного з РО-1, такого як рак; (т) продовження виживаності пацієнта відносно очікуваної виживаності у пацієнта, що аналогічного не отримував лікування; п) індукції повної або часткової ремісії ракового стану або іншого захворювання, пов'язаного з РО-1, або о) лікування раку.
ЗАГАЛЬНІ СПОСОБИ
Стандартні методи в молекулярній біології описані в (ЗатьгоокК, Егйвсй апа Мапіаїіз (1982 8 1989 2па Еайіоп, 2001 Зга Едйіоп) МоїІесшаг Сіопіпу, А Гарогаїгу Мапиаї, Соїй 5ргіпд Нагрог
Гарогаїогу Ргез5, Соїй 5ргіпд Нагброг, МУ; ЗатбргоокК апа Вивзеї! (2001) Моїесшаг Сіопіпод, Зга єд.,
Соіа бріїпуд Нагбог І арогаюгу Ргев5, Соїд брігіпа Натог, МУ; Ми (1993) Весотбіпапі ОМА, Мої. 217, Асадетіс Ргезв, Зап Оієдо, СА)). Стандартні методи також описані в (А!йзбБеї, єї аї. (2001) бСитепі Ргоїосої5 іп МоІесшціаг Віоіоду, Моїв, 1-4, допп Уміеу апа Зопв, Іпс. Мем МогК, ММ, в якому описане клонування в бактеріальних клітинах і ДНК мутагенез (том 1), клонування в клітинах ссавців і дріжджах (том 2), глікокон'югати і експресія білків (том 3) і біоїнформатика (том 4).
Способи очищення білка, включаючи імунопреципітацію, хроматографію, електрофорез, центрифугування і кристалізацію описані в ІСоїїдап, еї аіІ. (2000) Сигтепі Ргоїосої5 іп Ргоїеїп
Зсіепсе, Мої. 1, доп УМУйПеу апа бопв5, Іпс., Мем Мої). Хімічний аналіз, хімічна модифікація, посттрансляційнна модифікація, продукція злитих білків, глікозилування білків описані (див., 60 наприклад, Соїїдап, еї аї. (2000) Сиггепі Ргоїосої5 іп Ргоївіп Зсіепсе, Мої. 2, хуУопп УмМіеу апа оп»,
Іпс., Мем Моїк; А!Мзибеї, еї аї. (2001) Ситепі Ргоюосої5 іп МоіІєсціаг Віоіоду, Мої. 3, доп Уміеу апа
Зоп5, Іпс., ММ, ММ, рр. 16,0,5-16,22,17; БЗідта-Аїагісн, Со. (2001) Ргодисів їог Пе бсіепсе
Везеагси, 51. І оців, МО; рр. 45-89; Атегзнат РНаптасіа Віоїєсн (2001) Віобігесіогу, Різсаїамлау,
М.)У., рр. 384-391Ї. Описане отримання, очищення і фрагментація поліклональних і моноклональних антитіл |Соїїдап, єї аї. (2001) Ситепі Ргоюсої!в5 іп Іттипоіоау, Мої. 1, доп У/ієу апа 5бопв, Іпс., Мем МогКк; Напоуу апа І апе (1999) Овіпд Апіїбодіев, Соїд бргіпд Нагброг І арогаюгу
Ргез5, Соїй Зргіпд Нагбог, МУ; Напом апа ІГапе, 5зирга|Ї. Доступні стандартні методи для характеристики взаємодій ліганд/рецептор |див., наприклад, Соїїдап, еї а). (2001) Сшитепі
Ргоїосо!5 іп Іттипоіоду, Мої. 4, дУопп УМіїеу, Іпс., Мем МогК|.
Моноклональні, поліклональні і гуманізовані антитіла можна отримати як описано |(див., наприклад, Зперега апа Овап (єдвз.) (2000) Мопосіопа! Апііродіез, Охота Опім. Ргезв5, Мем Могк,
МУ; Копіептапп апа Оибеї! (еавз.) (2001) Апіїбоду Епдіпеегіпо, Зрііпдег-Мепад, Мем Моїк; Напом/ апа Гапе (1988) Апіібодіеєз А І арогаїогу Мапиаї, Соїд Зргіпу Нагрог І арогаїогу Рге55, Соїд 5ргіпа
Натбог, МУ, рр. 139-243; Сагрепівг, єї аї. (2000) 9. Іттипої. 165:6205; Не, вї а!. (1998) У. ІттипоЇ. 160:1029; Тапд єї аї. (1999) 9. Віої. Сет. 274:27371-27378; Васа еї аї. (1997) у. ВіоЇ. Спет. 272:10678-10684; СпоїШпіа єї аї!. (1989) Маїште 342:877-883; Рооїє апа Уміпієг (1992) 9. Мої. Віо1. 224:487-499; Патент США Мо 63295111.
Альтернативою гуманізації є використання бібліотек людських антитіл, представлених на бібліотеках фагів або людських антитіл, у трансгенних мишей (Мацднпап еї аї. (1996) Маїшге
Віотесппої. 14:309-314; Ваграз (1995) Маїцге Меадісіпе 1:837-839; Мепае? сеї аї. (1997) Машге
Сепеїїсв 15:146-156; Ноодепроот апа Спатез (2000) Іттипої. Тодау 21:371-377; Вагбраз еї аї. (2001) Рпаде Оізріау: А І арогаїогу Мапиаї, Соїй Зргіпд Нагбог І абогаїгу Ргев5, Соїд 5ргіпд
Нагбог, Мем МогК; Кау еї аї. (1996) Рпаде бізріау ої Рерііде5 апа Ргоїеїп5: А І абогаїогу МапаиаїЇ,
Асадетіс Ргез5, Зап Оієдо, СА; де Вгиїп еї а. (1999) Майшге Віотеснпої. 17:397-3991|.
Очищення антигена не є необхідним для генерації антитіл. Тварин можна імунізувати клітинами, які несуть антиген, який цікавить. Спленоцити можуть бути потім виділені у імунізованих тварин, і спленоцити можуть бути злиті з клітинною лінією мієломи для створення гібридоми |див., наприклад, Меуаага еї аї. (1997) Іттипійу 7:283-290; МУпДдНі еї аї. (2000)
Іттипйу 13:233-242; Ргевіоп еї а!., зирга; Кайпатапа сеї а!. (1999) 9. Іттипої. 163:5157-5164).
Зо Антитіла можуть бути кон'юговані, наприклад, з невеликими молекулами лікарського засобу, ферментами, ліпосомами, поліетиленгліколем (ПЕГ). Антитіла корисні для терапевтичних, діагностичних, в наборах або для інших цілей і включають антитіла, пов'язані, наприклад, з барвниками, радіоїзотоп, ферментами або металами, наприклад, колоїдним золотом |див., наприклад, Ге Юоиззаї єї аї. (1991) У. Іттипої. 146:169-175; СіреїІпі еї а. (1998) 9. Іттипої. 160:3891-3898; Н5іпд апа Візпор (1999) У. Іттипої. 162:2804-2811; Емепв еї аї. (2002) 9. Іттипої. 168:883-8891|.
Відомі методи проточної цитометрії, включаючи флуоресцентне сортування клітин (ЕАС5)
Ідив., наприклад, Омепв, еї аї. (1994) Ріом Суотеїйгу Ргіпсіріе5 ог Сіїпіса! ІГарогайогу Ргасіїсе,
Уонп Умійеу апа 5оп5, НороКеп, МУ; Сімап (2001) Ріом/ Суїотеїгу, 2па єд.; УМіІеу-І ів, НобоКеп, М;
ЗПНарію (2003) Ргасіїсаї Ріомж/ Сутеймйу, Чщойпп МУпПйеу апа 5оп5, НороКеп, М). Доступні флуоресцентні реагенти, прийнятні для модифікації нуклеїнових кислот, включаючи нуклеїновокислотні праймери і зонди, поліпептиди і антитіла, для використання, наприклад, як діагностичні реагенти (Моїіесшіаг Ргобезу (2003) Саїаіодиє, Моїесшціаг Ргобез, Іпс., Еидепе, ОВ;
Зідта-Аїагісн (2003) Саїаіодиє, 5. І оців, МОЇ.
Описані стандартні методи гістології імунної системи Ідив., наприклад, МиїПег-Нагтеїнк (еа.) (1986) Нитап Тнутив: Нізіораїпоіоаду апа Раїпоіоду, Зргіпдег Мепйад, Мем Могк, МУ; Ніай, еї аї. (2000) Соїог Айавз ої Нівіоіоду, І ірріпсой, УМПШіат5 апа УміїКіпв, Ра, РА; І оців, еї а!. (2002) Вавіс
Нівіоіоау: Техі апа Айаз, МесСтам-НІЇЇ, Мем мок, ММ.
Доступні пакети програм і бази даних для визначення, наприклад, антигенних Фрагментів, лідерних послідовностей, укладання білків, функціональних доменів, сайтів глікозилування і вирівнювань послідовностей |див., наприклад, бепВапК, Месіог МТ! Зийе (Іп'оптах, пс,
ВеїШезаа, МО); абс М/івсопвзіп РасКаде (Ассеїгув, Іпс., Зап Оіедо, СА); ОеСурпего (Тітеї одіс
Согр., Стузіа! Вау, Мемада); Меппе, евї аї. (2000) Віоіптоптаїйсв 16: 741-742; Меппе, евї аї. (2000)
Віоіптоптаїййсв Арріїсайопе Моїе 16:741-742; Мугеп, еї аІ. (2002) Сотриї. Способи Ргодгат5
Віотеа. 68:177-181; моп Неї)пе (1983) Єиг. у. Віоспет. 133:17-21; моп Неї|пе (1986) Мисівїс Асідв5
Вев. 14:4683-46901.
Аналітичні методи
Аналітичні методи, прийнятні для оцінки стабільності продукту, включають ексклюзійну хроматографію (ЗЕС), метод динамічного розсіювання світла (0 5), диференціальну скануючу бо калориметрію (055), кількісне визначення ізо-азр, ефективність, УФ при 340 нм, УФф-
спектроскопію і ЕТІК. 5ЕС |. Рнагт. бсієп., 83:1645-1650, (1994); Рнагт. Нез., 11:485 (1994); )).
Ріпатпт. Віо. Апаї., 15:1928 (1997); 9. Рнагт. Віо. Апаї., 14:1133-1140 (1986)| вимірює процентний вміст мономера в продукті і дає інформацію про кількість розчинних агрегатів. О5С (|РНагт.
Вев., 15:200 (1998); Рпагт. Нез., 9:109 (1982)| дає інформацію про температуру денатурації білка і температуру склування. БІ З |Атегісап Гар., Мометбег (1991)|) вимірює середній коефіцієнт дифузії і дає інформацію про кількість розчинних і нерозчинних агрегатів. УФ при 340 нм вимірює інтенсивність неуважного світла при 340 нм і дає інформацію про кількість розчинних і нерозчинних агрегатів. УФ-спектроскопія вимірює поглинання при 278 нм і дає інформацію про концентрацію білка. ЕТІК (Єишг. У. Ріапт. Віорпапт., 45:231 (1998); Ріапт. Везв., 1211250 (1995); У. Рпапт. 5сівп., 85:1290 (1996); 9. Рпапт. Зсіеп., 87:1069 (1998)| вимірює ІЧ- спектр в ділянці амід 1 і дає інформацію про вторинну структуру білка.
Вміст ізо-азр в зразках вимірюють з використанням іІзодчапі Ізоазрагіаєеє Оеїесіоп Зухет (Рготеда). У наборі використовують фермент протеїн-ізоаспартилметилтрансферазу (РІМТ) для специфічної детекції присутності залишків ізоаспарагінової кислоти в цільовому білку. РІМТ каталізує перенесення метильної групи з 5-аденозил-їі -метіоніну в ізоаспарагінову кислоту в положенні а-карбоксилу, генеруючи 5-аденозил-І! --гомоцистеїн (ЗАН) в цьому способі. Це відносно невелика молекула, і її звичайно можна виділити і кількісно визначити методом зворотно-фазової ВЕРХ з використанням БАН-ВЕРХ стандартів, представлених в наборі.
Ефективність або біоідентичність антитіла можна виміряти по його здатності зв'язуватися з його антигеном. Специфічне зв'язування антитіла з його антигеном може бути визначене кількісно будь-яким способом, відомим фахівцям в даній галузі, наприклад імуноаналізом, таким як ЕГІЗА (твердофазний імуноферментний аналіз).
Всі публікації, вказані в даній заявці, включені як посилання з метою опису і розкриття методологій і матеріалів, які можуть бути використані в зв'язку з даним винаходом.
Хоча різні варіанти здійснення даного винаходу описані в даній заявці з посиланням на прикладені креслення, потрібно розуміти, що винахід не обмежується цими точними варіантами здійснення, і що фахівці в даній галузі техніки можуть здійснити різні зміни і модифікації без відступу від об'єму або суті винаходу, визначеного в прикладеній формулі винаходу.
Приклад 1
Матеріали і методи
СЕ-5ЮО5: зразки аналізували методом СЕ-5О5, в якому білок денатурували додецилсульфатом натрію (505) в відновлювальних і невідновлювальних умовах і розділяли за допомогою капілярного електрофорезу (СЕ) (система Весктап-СошиКег Ргоїеотеї! ар РА8ОО СЕ і
Набір для аналізу чистоти/гетерогенності ІдС). Метод розділяє білки на основі їх уявної молекулярної маси. У невідновлювальних умовах всі види, крім основного піка Ідс, були класифіковані як домішки. У відновлювальних умовах ІдсС був розділений на важкі і легкі ланцюги. Всі інші види були класифіковані як домішки. У обох випадках результат був представлений як процент скоректованої площі кожного піка, розрахований із загального процента скоректованої площі піків.
НР-ІЕХ: Високоефективну іонообмінну хроматографію (НР-ІЕХ) використовували для оцінки профілю заряду. Метод іонообмінної ВЕРХ здійснювали з використанням колонки біопех біопех
РгоРас М/СХ-10 і УФ-детектора при 280 нм. Зразки розбавляли в очищеній воді і для аналізу вводили 80 мкг. Рухома фаза, що використовується для аналізу ІЕХ, являла собою градієнт наступних рухомих фаз (рухома фаза А: 24 мМ МЕЗ5, рн 6,4 95 ацетонітрилу (об./06.); рухома фаза В: 20 мМ фосфату, 95 мм Масі, рН 8,4 95 ацетонітрилу (об./06.). Основний пік є головним компонентом хроматограми і служить як контроль для характеристики кислотних і лужних варіантів. Кислотні варіанти елююють раніше, ніж головний пік, і основна причина утворення кислотних варіантів пов'язана з дезамідуванням А5п в головному піку і присутністю сіалової кислоти порівняно з головним піком. Лужні варіанти елююють пізніше, ніж головний пік, і основна причина утворення лужних варіантів пов'язана з неповним видаленням С-кінцевого Гуз з головного піка. Іншими причинами є неповна циклізація М-кінцевого глутаміну (Сіп) в піросіи легкому ланцюгу або важкому ланцюгу або обох, а також через ізомеризацію Ар в головному піку до ізоА5р.
НР-БЕС: Чистоту зразка оцінювали за допомогою ексклюзійної хроматографії (ЕС), в якій визначали процентний вміст мономера, а також процентний вміст високомолекулярних частинок (НМУ) і пізно елююючих піків (І МУМ види). Присутність НМУМ видів вказує на агрегати білка, а присутність І ММУМ видів вказує на фрагменти білка. Високоефективну - ексклюзійну хроматографію (НР-5БЕС) здійснювали шляхом розбавлення зразків водою до 1,0 мг/мл.
Розбавлені зразки впорскували (10 мкл) в систему ВЕРХ, забезпечену колонкою УМС -раск-Оіо!
200 і УФ-детектором. Білки в зразку розділяли по розміру і определляли по УФ-поглинанню при 280 нм.
НР-БЕС Агд: Чистоту зразка оцінювали за допомогою ексклюзійної хроматографії (ЗЕС), в якій визначали процентний вміст мономера, а також процентний вміст високомолекулярних частинок (НММУМ) і пізно елююючих піків (види ІГМУМ) Високоефективну - ексклюзійну хроматографію (НР-5ЗЕС) здійснювали шляхом розбавлення зразків до 5,0 мг/мл в рухомій фазі (50 мМ фосфату натрію, 450 мМ аргінін моногідрохлориду, рН 7,0). Температуру колонки встановлювали при 25 "С і швидкість потоку підтримували при 0,5 мл/хв. з використанням ізократичного елююювання. Розбавлені зразки впорскували (30 мкл) в систему ВЕРХ, забезпечену колонкою УМС-РАСК біоІ-200 і УФ-детектором. Білки в зразку розділяли по розміру і визначали по УФ-поглинанню при 280 нм.
АЗ50: УФ-поглинання при 350 нм вимірювали з використанням 96-ямкового планшет-рідера
Зресігатах як показник каламутності. Показники абсорбції співвідносило з показниками пустого планшета і нормалізували по довжині шляху проходження зразка.
НР-НІС: Високоефективну хроматографію гідрофобної взаємодії (НР-НІС) використовували для оцінки окиснених продуктів 3 не окисненої молекули. Визначали процент піків перед головним піком, визначених як окиснені частинки, що включають окиснення Мей105 важкого ланцюга на одному важкому ланцюгу згідно з попередньою аналітичною характеристикою, а також визначали процент головного і процент піків після головного піка. НР-НІС метод здійснювали шляхом розбавлення зразка до 5,0 мг/мл в очищеній воді. Потім зразок впорскували (10 мкл) в систему ВЕРХ, забезпечену колонкою То5ойпй РНепуІ-5РУМ і УФ- детектором при 280 нм. Для НІС аналізу використовували рухому фазу, що містить градієнт наступних компонентів (рухома фаза А: 5 мМ фосфату натрію в 2 95 ацетонітрилі, рН 7,0; рухома фаза В: 400 мМ сульфату амонію, 5 мМ фосфату натрію в 2 95 ацетонітрилі, рН 6,9).
МР-О5С: Диференціальну скануючу калориметрію Валеріана Плотникова (МР-0О5С) можна використовувати для визначення термічної і конформаційної стабільності моноклональних антитіл. О5С визначає теплоємність (Ср) розчину білка порівняно з теплоємністю розчину плацебо для температур, що підвищуються, створюючи тепловий перехід при розгортанні білка.
Для моноклональних антитіл на термограмі О5С (Топзеї, Тт1, Тт2) звичайно видні множинні
Зо переходи розгортань (Топзеї, Тт1, Тт2), відповідні розгортанню окремих доменів.
Приклад 2
Оцінка стабільності композицій з високою концентрацією пембролізумабу
Первинне дослідження було виконане для оцінки стабільності композицій, що містять високу (160 мг/мл) концентрацію пембролізумабу, і для оцінки впливу різних ексципієнтів композицій.
Вихідні розчини лікарської речовини пембролізумабу отримували в 10 мМ ацетату рН 5,0 (189 мг/мл) і 10 мМ гістидину рН 5,5 (187 мг/мл) шляхом фільтрації в тангенційному потоці.
Композиції пембролізумабу отримували до цільової концентрації 160 мг/мл шляхом додавання у вихідний розчин білка вихідних розчинів ексципієнта і відповідного буфера. Тестовані композиції, які містять високу концентрацію пембролізумабу (див. Таблицю 4), отримували в 6 скляних флаконах в об'ємі від З до 4 мл. Ексципієнти вводили в розчин білка для досягнення цільових рівнів кожного ексципієнта і доводили до кінцевого об'єму з використанням ацетатного або гістидинового буфера. Композицію 2 отримували в концентрації 125 мг/мл (без поверхнево- активної речовини) і концентрували до більше ніж 160 мг/мл, використовуючи пристрій МіПіроге сепігісоп (10000 ММСО). РБ58О додавали після того, як концентрація була доведена до 160 мг/мл з допомогою плацебо (тобто сформульованої матриці з всіма компонентами, крім АБ і поверхнево-активної речовини). Зразки зберігали при 2-8"С опісля отримання до їх завантаження в флакони.
Таблиця 4
Композиції з високою концентрацією пембролізумабу сини ЕХ, вен сненнне ВО, | линенн
Композиція : Буфер Стабілізатор активна Антиоксидант пембролізумабу речовина 111 | бомгимл |Гістидин, | 79всахарози | 00296РБВО | - 72 | бОмгмл |Гістидин | бБОссорбту | 00295РБВО | - 73 | їбОмгимл |Гістидин, | 79всахарози | б96РІ27 |-/- 15 | вбОмомл |Ацетат | 7/96сахарози | 002956РБВО | -
Сформульовані розчини пембролізумабу фільтрували з використанням фільтра Мійех СМ 0,22 мкМ РМОЕ 33 мм і завантажували в скляні флакони для ВЕРХ з низьким об'ємом (УмМаїег5 й1860003843, 12х32 мм скляний флакон з загвинчуваною кришкою 200 мкл на флакон). Флакони закривали кришками і кришки обмотували парафільмом, щоб мінімізувати можливе випаровування. Зразки розміщували в камери для дослідження стабільності при 2-8 С, 25"С і 40 С. Кожну ємність для проб двічі упаковували в мішки перед вміщенням в камеру для дослідження стабільності на дванадцять тижнів.
Стабільність композицій оцінювали з використанням НР-5ЕС (для оцінки чистоти) і НР-ІЕХ (профіль заряду) протягом дванадцяти тижнів. Результати демонструють, що не було ніяких змін для жодної з композицій, які зберігалися при 5 "С (як використовується в описі і у всіх прикладах, термін "5 "С" використовується взаємозамінно з "2-8 "С", що означає 5"Сч/-3"С (стандартне відхилення) протягом 12-тижневого періоду часу. Тому всі композиції вважалися стабільними в умовах зберігання 5 "С. При 25 "С зміни спостерігали за допомогою НР-БЕС (невелике зниження 96 тАбБ) і НР-ІЕХ (невелике зниження о головного піка) для кожної з композицій протягом періоду проведення випробування. Не було виявлено відмінностей між результатами для п'яти композицій при 25 С з використанням будь-кого з цих двох методів (дані не показані). Більш виражені зміни спостерігалися для всіх композицій, що зберігалися при 40 "С, оцінених по обох методиках, порівняно з тими ж композиціями, що зберігалися при 25 76.
Найменше зниження 96 тАБб по даних НР-5ЕС через 12 тижнів спостерігали для композиції 4 при 40 "С порівняно з іншими композиціями, що зберігалися при 40 "С протягом 12 тижнів, що дозволяє передбачити, що ця композиція може мати поліпшену стабільність (дані не показані).
Не було відмінностей в профілі заряду між п'ятьма композиціями при будь-якій з температур протягом періоду випробування (тобто дані через кожні 4 тижні були однаковими для п'яти композицій). Дані не показані.
Окиснення метіоніну-105 (Меї-105) також контролювали за допомогою НР-НІС для кожної з тестованих композицій протягом 12-тижневого періоду. Ніяких змін в окисненні Меї-105 не спостерігали для жодної з композицій при 5 "С (Фіг. 1А). При 25"С спостерігали тенденцію невеликого збільшення 96 загального піка перед головним піком 1-2 (представляючого
Зо приблизно 50 95 окисненого Меї-105 або один окиснений Меї-105 на молекулу) для всіх п'яти композицій (Фіг. 18), яке було більш вираженим при 40 "С (Фіг. 1С). Найменша кількість 95 загального піка перед головним піком 1-2 спостерігали для композиції 4 протягом 12-тижневого періоду, передбачаючи, що ця композиція може мати поліпшену стабільність.
Приклад З
Оцінка стабільності композицій з високою концентрацією пембролізумабу, що містять аргінін як агент, який знижує в'язкість
Подальше дослідження здійснювали для оцінки стабільності композицій, що містять ще більш високу концентрацію пембролізумабу (200 мг/мл порівняно з 160 мг/мл, що використовується в Прикладі 2). У цьому дослідженні аргінін (З о, 2 о) використовували як агент, який знижує в'язкість, окремо або в комбінації з сахарозою, і оцінювали вплив пембролізумабу на стабільність при зберіганні.
Для цього дослідження концентровану лікарську речовину пембролізумаб отримували в концентрації 234 мг/мл в 10 мМ гістидину рН 5,4 шляхом концентрування і діафільтрації.
Композиції лікарського засобу пембролізумабу (21 - Ж3) отримували до цільової концентрації 200 мг/мл в 200-мл мірних колбах шляхом введення у вихідний розчин білка вихідних розчинів ексципієнта і 10 мМ гістидинового буфера (див. Таблицю 5). Кожний з сформульованих розчинів фільтрували з використанням 0,22 мкМ РМОЕЄ мембранних пристроїв Зіегісир 250 мл і заповнювали ними 1-мл шприци (Нурак 5СЕ 1 мл з пробками ВО Нурак ЗСРЕ) і 2-мл флакони (Миома Отрі 0612090.5657) з об'ємом лікарського продукту 1 мл. Зразки розділяли, захищали від світла і вміщували в камеру для дослідження стабільності при температурі 2-8 "С на 12 місяців, камеру для дослідження стабільності при 25 "С на 9 місяців і камеру для дослідження стабільності при 40 "С на 5 місяців. Тестовані композиції для цього дослідження не містили ніякого антиоксиданта.
Таблиця 5
Композиції з високою концентрацією пембролізумабу для Прикладу З кино вен зе | тло | стаайннновт | кто пон активна речовина| (наповнення)
СТА 73 Сахари | 0: | О026РБВО | мл скляні юммі АТ 07:11 ЗЗварінну | 00296880 | флакони (1 мл) 200 мг/мл дів он
Пеморо Р |В 796Сахарози | 0-0 | О0296РБВО ЇЇ МЛВО шприци
М Т2вї! - | Зоваргінну | 0б0б295рРБВО | (1 мл) Рич
Композиції оцінювали шляхом візуального спостереження, за допомогою АЗ50, НР-БЕС (чистота), НР-ІЕХ (профіль заряду), НР-НІС (Меї-105 окиснення) і СЕ-505. Ніяких змін не спостерігалося між різними композиціями при зберіганні при 5 С протягом до 12 місяців, незалежно від того, чи зберігалися вони в флаконах або шприцах, при візуальному спостереженні, по даних АЗ5О, НР-5ЕС, НР-ІЕХ, НР-НІС і СЕ-505 (МК). Тому всі композиції вважали стабільними в умовах зберігання при 5 "С.
Кожну з тестованих композицій візуально перевіряли на зміни забарвлення або утворення осаду (дані не показані). Всі композиції показали деякий ступінь жовтого кольору при 25 "С при візуальній оцінці. Композиції, що містять сахарозу без аргініну (композиції ТА і 18), почали виявляти злегка жовтий колір через З місяці. До 9 місяців у всіх зразках спостерігалися осади або частинки. Композиція, що містить 2 95 сахарози і 2 95 аргініну, утворила гель в флаконі (композиція ЗА), що було помітно в деяких флаконах вже через 1 місяць, але не в шприці (композиція 38). Швидкі зміни спостерігали для всіх композицій при 40 "С протягом 9-місячного періоду тестування. Жовте забарвлення спостерігали тільки для сахарози (ТА і 18) через 1 місяць як в флаконі, так і в шприці.
Значення АЗ5О вимірювали як показник каламутності (дані не показані). При 25 "С протягом б-місячного періоду тестування спостерігалася тенденція збільшення каламутності для зразків, що містять сахарозу (композиції ТА і 18), ї зразків, що містять комбінацію сахароза-аргінін в флаконі (композиція ЗА). Збільшення АЗ50 значення для зразків з сахарозою за б-місячний період корелювало зі спостереженням жовтого забарвлення. Крім того, було виявлено, що АЗ5О0 зразків з сахарозою-аргініном атипічно вище, ніж зразків, що містять таку ж комбінацію в шприці.
При 40 С спостерігали більш виражену тенденцію збільшення каламутності з плином часу.
Зразки, що містять сахарозу (композиції ТА і 18), стали бурштиновими і, отже, АЗ5О не вимірювали через 6 місяців. Композицію з сахарозою-аргініном в флаконі (композиція ЗА) також не вимірювали за допомогою АЗ50 через 6 місяців через утворення гелю. Результати АЗ5О для композицій, що містять аргінін (без сахарози, композиції 2А і 28) як в флаконах, так і в шприцах, і композицій з сахарозою-аргініном в шприцах (композиція ЗВ) були порівнянні.
Зо Чистоту композицій визначали за допомогою НР-5ЕС протягом 9 місяців (дані не показані).
При 25"С тенденцію невеликого зниження 9 ІтАбБ, з відповідним збільшенням 95НММУ, спостерігали для всіх 5 композицій з плином часу. Сахароза-вмісні композиції в флаконах і шприцах (композиція ТА і 18) показали найбільшу зміну порівняно з іншими композиціями.
Дані 95 | МУУ вказували на значну варіабельність в проміжні моменти часу (ЗМ, 6М) і не були остаточними. При 40 "С тенденцію зниження 95 тАб, з відповідним збільшенням 96 НМУМ іо
ММ, спостерігали для всіх композицій протягом 9 місяців. За год. випробування не було чітких відмінностей між різними композиціями.
Профіль заряду визначали за допомогою НР-рЕХ (дані не показані). При 25 "С, тенденцію невеликого зниження 96 головного піка і9о загальної кількості лужних видів, з відповідним збільшенням 95 кислотних видів, спостерігали для всіх 5 композицій протягом 9 місяців.
Найбільшу зміну спостерігали для сахарози-вмісних композицій (композиції 1А і 18) в флаконах або шприцах порівняно з тими, що аргінін-містять (композиції 2А їі 2В) їі сахарозажаргінін- вмісними композиціями (композиції ЗА і ЗВ). При 40 "С спостерігали більш виражену тенденцію зниження 95 головного піка і 9о загальної кількості лужних видів, з відповідним збільшенням 95 кислотних видів. Не було чітких відмінностей між різними композиціями через З місяці. Крім того, не було чітких відмінностей в профілях стабільності для композицій в флаконах порівняно з шприцами.
Окиснення Меї-105 вимірювали за допомогою НР-НІС. Мінімальні зміни в окисненні Меї-105 спостерігали для будь-якої з композицій при 5 С протягом 9 місяців (Фіг. 2А). При 25" спостерігали тенденцію невеликого збільшення в 95 загального піка перед головним піком 12 серед всіх композицій в флаконах, що не спостерігали для відповідних композицій в шприцах (Фіг. 28). Більш високе збільшення окиснення через 9 місяців спостерігали для сахароза-вмісних композицій (без аргініну) в флаконах порівняно з композиціями, що містять аргінін (з або без сахарози). При 40 "С через З місяці спостерігали різке збільшення швидкості окиснення для аргінін-вмісних композицій (флакон і шприц) і композиції з сахарозою в шприці (Фіг. 2С). Інші композиції не були перевірені через З місяці через утворення гелю або бурштинового забарвлення (див. обговорення вище)).
Приклад 4
Оцінка композицій, що містять високу концентрацію пембролізумабу з альтернативними агентами, які знижують в'язкість
Додаткове дослідження здійснювали для перевірки використання альтернативних ексципієнтів як агенти, які знижують в'язкість, в композиціях з високою концентрацією пембролізумабу. Серії композицій отримували (Таблиця б) в мікрофлаконах для ВЕРХ з об'ємом заповнення 400 мкл. Композиції в цьому дослідженні не включали ніякого антиоксиданта. Зразки вміщували в камери для дослідження стабільності при температурах 5"С, 25 С і 40 "С на 12 тижнів. Тестовані композиції для цього дослідження не містили ніякого антиоксиданта.
Таблиця 6
Композиції з високою концентрацією пембролізумабу для Прикладу 4 активна речовина о 2г96Гістидинчу | -- - | 0,0295РЗВО 290 мг/МП 10 ММ зумабу 5,5 . фонової кислоти шиї сен гідрохлориду
Ніяких змін в чистоті не спостерігали в НР-5ЕС аналізі (виміряної як 95 тАБ) для композицій, що зберігаються при 5 "С протягом 12 тижнів (Фіг. ЗА). Для зразків, що зберігаються при 25 "С, серед всіх п'яти композицій спостерігали тенденцію, яка демонструвала невелике зниження 95 тАр, причому композиція 4 (150 мМ камфорсульфонової кислоти) показала максимальне зниження (-5 95) серед 5 композицій (Фіг. ЗВ). Тенденцію зниження 95 тАБб також спостерігали для композицій, що зберігаються при 40 "С, без чітких відмінностей між цими 5 тестованими композиціями (Фіг. 30).
Зо Аналогічно результатам, отриманим в аналізі НР-5ЕС, не було виявлено відмінностей в профілі заряду серед 5 композицій при 5 "С протягом 12 тижнів, як оцінювали за допомогою НеР-
ІЕХ. І знов при 25 "С спостерігали тенденцію, яка демонструвала зниження в 95 головного піка для всіх п'яти композицій протягом 12 тижнів, причому найбільш виражене зниження показали композиції З і 4 (150 мМ камфорсульфонової кислоти і 150 мМ гуанідину НСІ). При 40 "С більш виражене зниження 96 головного піка спостерігали за допомогою НР-ІЕХ для кожної з п'яти композицій протягом періоду випробування, без чітких відмінностей між цими п'ятьма тестованими композиціями (дані не показані).
Ніяких відмінностей в 96 окиснення Меї-105 (пік перед основним піком 1-2) не спостерігали для жодної з п'яти композицій через 12 тижнів в умовах зберігання при 5 "С, як виміряно за допомогою НР-НІС (Фіг. 4А). Однак, для композиції 4, спостерігали збільшення 95 піка перед головним піком (відмінного від піка перед головним піком 1-2) (дані не показані). Піки перед головним піком, які відрізняються від 1-2, містять внески молекул, в яких обидва метіонінові залишки на молекулу окиснені. Невелике збільшення 9о загального піка перед головним піком 182, яке вказує на окиснені види, спостерігали для композицій З (2 95 гістидину, 2 90 сахарози) і 4 (150 мМ камфорсульфонової кислоти) при 25 "С (Фіг. 48), а також збільшення 95 піка перед головним піком для піків, відмінних від 1-2 (дані не показані). Мінімальні зміни 9о загального піка перед головним піком 142 виявлені для композицій 1, 2 і 5 (Фіг. 48). Однак композиція 1 і композиція 2 не показали значне збільшення 95 піків пред головним піком, відмінних від 1-42 (дані не показані).
Більш виражене збільшення спостерігали в 956 загального піка перед головним піком 1-2 серед всіх 5 композицій в умовах зберігання при 40 "С протягом 12 тижнів, при цьому композиції
З ії 4 знов показали найбільші зміни 95 загального піка перед головним піком 1-42 (Фіг. 4С) і 95 піків перед головним піком, відмінних від 1-2 (дані не показані). Композиції 1, 2 і 5 демонстрували найменші зміни 96 піка перед головним піком 1-2 (Фіг. 4С), але спостерігали значні зміни 95 піків перед головним піком, відмінних від 1-2, які вказують на окиснення обох
Меї-105 залишків (дані не показані).
Приклад 5
Аналіз композицій, що містять аргінін в комбінації з глутаміном
Попередні дослідження показали, що еквімолярна суміш аргініну і глутаміну може придушувати індуковану температурою агрегацію моноклональних антитіл в біологічних композиціях (Кпеадо еї аї., пі. У. Рпаппасешіісв 473: 126-33(2014)). РиКида еї аї. (Рпапт. Незв. 31:992-1001 (2014)) показали, що Агд-НСІ може придушувати агрегацію антитіл при майже нейтральному рН, але сприяє агрегації і розкладанню при кислотному рН або високих температурах. У цьому дослідженні вплив Аго-НСІ при високій температурі можна пом'якшити, додавши еквімолярну суміш аргініну і аспарагінової кислоти або глутамінової кислоти, що приводило до придушення агрегації (Рикиада еї аї.).
Щоб дослідити вплив еквімолярної суміші глутаміну і аргініну на композиції пембролізумабу, був складений і перевірений ряд композицій, як описано нижче. Концентровану лікарську речовину пембролізумаб отримували в концентрації 252,3 мг/мл в 10 мМ гістидину, рН 5,5 шляхом концентрування і діафільтрації. Композиції Сі-Сє отримували шляхом введення в вихідних розчинів наступних ексципієнтів: І-аргінін гідрохлориду (475 мМ вихідний розчин), І - глутаміновий кислоти (170 мМ вихідний розчин), Полісорбату-80 (2 95 мас./мас. вихідний розчин) і сахарози (40 95 мас./об. вихідний розчин) в лікарську речовину пембролізумаб для отримання цільових композицій, перерахованих в Таблиці 7. Сформульовані партії лікарської речовини фільтрували з використанням шприцевого фільтра РМОЕ 0,22 мкм і завантажували в 2-мл
Зо скляні флакони (об'єм наповнення: 0,5 мл). Флакони закривали кришками з використанням 13 мм гумових медичних пробок і герметизували за допомогою 13 мм відривних ковпачків. Флакони інкубували в інкубаторі кімнатного типу при 40 "С з 75 95 відносною вологістю (КН). Флакони тестували в моменти часу ТО, 1 тиждень, 2 тижні, 4 тижні і 8 тижнів.
Термічне розгортання тестували за допомогою ЮЗС (Таблиця 7) і вимірювали в'язкість кожної композиції (Таблиця 7). Результати показують, що не спостерігали поліпшення поведінки термічного розгортання в присутності еквімолярної суміші Агуд і Сім. Зниження в'язкості спостерігали для всіх композицій, що містять Агоу, Сіш або Ага: Сім (1:1) порівняно з С1, яка не містила аргінін або глутамін (Таблиця 7). Кількість агрегації кожної з цих композицій протягом 12-тижневого періоду зберігання при 40 С також вимірювали за допомогою НР-5ЕС.
Результати вказують на відсутність зниження агрегації для композицій, що містять еквімолярну суміш Ага: (Фіг. 5).
Таблиця 7
Композиції з високою концентрацією пембролізумабу для Прикладу 5 -ГО0жни 00 рвнневннняї ють 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95
С Сахарози, 0,02 95 РБ-80, 10ММ 63,9 78,2 21,9
Гістидинового буфера, рН 5,5 167 мг/мл пембролізумабу, 0,02 95
ССЗ РБ-80, 10мМ Гістидинового буфера, 62,3 64,7 75,9 16,0 рН 5,540 мМ Агдї40 мМ сін 167 мг/мл пембролізумабу, 0,02 95
С4 РБ-80, 10мМ Гістидинового буфера, 61,8 65,2 76,0 16,8 рН 5,5420 мМ Агд20 мМ сін
Продовження таблиці 7 167 мг/мл пембролізумабу, 0,02 95
С5 РБ-80, 10мМ Гістидинового буфера, 61,8 64,7 76,0 15,5 рН 5,5-40 мм Ага 167 мг/мл пембролізумабу, 0,02 95
Сб РБ-80, 10мМ Гістидинового буфера, 62,8 64,8 75,8 17,9 рН 5,540 мМ си
Приклад 6
Вплив антиоксидантів і хелаторів на стабільність в присутності іонів металів
Дослідження 1:
Їони металів можна вводити в процесі отримання біологічних композицій, наприклад з стальних резервуарів, що звичайно використовуються для обробки продуктів моноклональних антитіл і відповідних буферів. Щоб визначити вплив антиоксидантів і хелаторів на стабільність композиції в присутності іонів металів, серії тестованих композицій оцінювали за допомогою НР-
ЗЕС (Таблиця 8). Концентровану лікарську речовину пембролізумаб отримували в концентрації 252,3 мг/мл в 10 мМ гістидину, рН 5,5 шляхом концентрування і діафільтрації. Композиції 01-05 отримували шляхом уприскування вихідних розчинів наступних ексципієнтів: метіоніну (100 мМ вихідний розчин), хлориду заліза (0,0227 95 мас./об. вихідний розчин), полісорбату-80 (2 95 мас./мас. вихідний розчин) і сахарози (40 95 мас./об. вихідний розчин) в лікарську речовину пембролізумаб для отримання цільових композицій, перерахованих в Таблиці 8.
Сформульовані партії лікарської речовини фільтрували з використанням 0,22 шприцевого фільтра РМОЕ 0,22 мкм і завантажували в 2-мл скляні флакони (об'єм наповнення: 0,5 мл).
Флакони закривали кришками з використанням 13 мм гумових медичних пробок і герметизували за допомогою 13 мм відривних ковпачків. Флакони інкубували в інкубаторі кімнатного типу при 40 "С/75 95 КН. Флакони тестували в моменти часу ТО, 1 тиждень, 2 тижні, 4 тижні і 8 тижнів.
Базова композиція, протестована в цьому дослідженні, (Композиція 1) містила високу концентрацію пембролізумабу з сахарозою і РБЗ80 в гістидиновому буфері (див. Таблицю 8, Мо р), в той год. як Композиція ОЗ містила базову композиціюжіони металів з антиоксидантом (метіонін), а Композиція Ю5 містила базову композиціютіони металів і хелатор (ОТРА).
Таблиця 8
Композиції, які використовуються в Прикладі 6, Дослідження 1 11111111 бАгрегатів(НР-БЕС).//-/:// ( 77111111 Композиція | ТО |ітиждень| отижні | 4тижні | 8тижнів 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 ро Сахарози, 0,02 55 РО-80,10мМ | 00,8 11,1 11,4 221 33,1
Гістидинового буфера, рН 5,5
Результати показали, що метіонін не запобігав агрегацію в присутності іонів металів (Таблиця 8, Композиція 03). У композиції, що містить ЮТРА в присутності іонів металів (Композиція 05), спостерігали зниження 95 агрегатів порівняно з базовою композицією в
Зо присутності іонів металів без хелатора/антиоксиданта (Композиція 04) або з композицією з метіоніном (Композиція 03) в присутності іонів металів через 8 тижнів.
Композиції також оцінювали при 40 "С через 8 тижнів за допомогою НР-НІС для визначення впливу метіоніну і ОТРА на окиснення в присутності іонів металів (дані не показані). Невелике зниження окиснення спостерігали в композиції, що містить метіонін, і композиції, що містить
ОТРА в присутності Рег, відносно контролів.
Дослідження 2:
Вплив додаткових антиоксидантів і хелаторів (Композиції Е1-Е9, Таблиця 9) на стабільність і окиснення в присутності іонів металів при 40 "С оцінювали за допомогою НР-ЗЕС і НР-НІС.
Таблиця 9
Композиції, які використовуються в Прикладі 6, Дослідження 2 нин пн дь Агрегатів (НР-ЗЕС 11111110 то | Єтиждень| отижні | 4тижні | Втижнів о |Базова композиція (О1)" р1я5ММ Метіоніну р1-1омМ Метіоніну 09 | 13 | 15 | 21 | 24
Метіоніну
Б1-41ч/млн Бежк, 250мкМ
Б1-41ч/млн Бежк, 250мкМ
Б1-41ч/млн Бежк, 20мММ лутатіону "Представлені дані взяті з дослідження, представленого в Таблиці 8.
НР-5ЕС результати (див. Таблиця 9) показують, що композиції, які містять 5ММ і 10 мМ метіоніну (Композиції ЕТ і Е2), демонстрували невелике збільшення агрегатів без іонів металів.
Композиції, що містять метіонін ії ОТРА (Композиції ЕЗ і Е7), демонстрували нижче збільшення рівнів агрегатів в присутності іонів металів порівняно з ЕЮТА (Композиція Еб). Найвище збільшення агрегатів спостерігали в композиції, що містить глутатіон в присутності іонів металів (Композиція Е9).
Окиснення композицій при 40 "С також тестували протягом 8-тижнів за допомогою НР-НІС (див. Фіг. 6). Зниження рівнів окиснення протягом 8-тижнів спостерігали за допомогою аналізу
НР-НІС для композицій, що містять 5 мМ і 10 мМ метіоніну (Композиції Е1 ї Е2), порівняно з іншими тестованими композиціями. Композиції, що містять 10 мМ метіоніну (Композиція ЕЗ) і 250 мкМ ОТРА (Композиція Еб), демонстрували низький рівень окиснення протягом 8-тижнів в присутності іонів металів. Результати також показують, що ЮОТРА був більш ефективним, ніж
ЕОТА, в запобіганні окисненню з плином часу. Цитрат натрію і глутатіон, мабуть, не так ефективні для контролю окиснення в присутності іонів металів, як метіонін, ОТРА або ЕОТА.
Дослідження 3:
Було проведене додаткове дослідження для оцінки впливу антиоксидантів і хелаторів окремо і в комбінації (з іонами металів або без них) для подальшої оптимізації рівнів ексципієнтів. Після формулювання зразки зберігали при 40 "С протягом 8 тижнів і оцінювали за допомогою НР-5ЕС при Т-0, 4 тижні і 8 тижнів (див. Таблицю 10).
Таблиця 10
НМУМУ (ЗЕС) для композицій, які використовуються в Прикладі 6, Дослідження З . 4 тижні/ 8 тижнів/
Гоян 1» 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози,
НІ 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового 1,01 2,01 2,81 буфера, рН 5,5 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози, нг 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового 1,01 2,07 2,84 буфера, рН 5,5, 100 мкМ СТРА 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози, 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового
НЗ | буфера, рн 55, 1ч/млн Беч-к, 100 МКМ 1,01 2,10 2,88
ОТРА
167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози, на 0,02 бо РБ-80, 10мМ Гістидинового 1,63 2,18 буфера, рН 5,5, 100 мкМ ЕОТА 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози, 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового
Но | буфера, рн 55, 1ч/млн Беч-к, 100 МКМ 0,92 1,98 313
ЕОТА
167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози, 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового
НЄ | буфера, рн 5,5, 10 мМ Метіоніну, 100МмКМ 1,00 2.07 2,80
ОТРА
167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози, 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового
НУ | буфера, рн 5,5, 1ч/млн Беч-к, 10 ММ 2,07 2,81
Метіоніну, 100иМ ЮОТРА 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози, 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового
НВ | буфера, рн 5 5, 10 мМ Метіоніну, 100мкмМ 0,91 1,65 217
ЕОТА
167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози, 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового
НЯ | буфера, рн 5,5, 1ч/млн Беч-к, 10 мМ 0,91 1,83 2,67
Метіоніну, 100мкМ ЕОТА 167 мг/мл пембролізумабу, З 95 Сахарози,
НІО | 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового 0,89 1,57 2,06 буфера, рН 5,5, 40мМ Аго, 40 мМ сСіи 167 мг/мл пембролізумабу, З 95 Сахарози, 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового
НІ | буфера, рн 5 5, 10 мМ Метіоніну, 40ММ 0,89 1,68 212
Аго, 40 мМ сім, 100 мкМ ОТРА 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози,
НІ2 | 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового 1,06 1,99 2,70 буфера, рН 5,5, 10 мМ Метіоніну 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози,
НІЗ | 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового 1,06 2,00 2,70 буфера, рН 5,5, 10 мМ Метіоніну 167 мг/мл пембролізумабу, 7 95 Сахарози,
НІ4 | 0,02 95 РБ-80, 10мМ Гістидинового 1,06 2,05 2,719 буфера, рН 5,5
У цьому дослідженні присутність аргініну і глутамату (композиції НІТО і НІ11) очевидно мала вплив на швидкість агрегації.
Окиснення вищезгаданих зразків при 40 С також вимірювали за допомогою НР-НІС протягом 8 тижнів. Результати вказують, що присутність 10 мМ метіоніну привела до зниження швидкості агрегації протягом 8-тижнів порівняно з іншими композиціями (див. Фіг. 7).
Загалом, дослідження 1-3 продемонстрували, що присутність І -метіоніну в композиціях пембролізумабу здатний знижувати швидкість окиснення залежно від концентрації. Ніякої додаткової переваги від додавання ОТРА і ЕОТА разом з метіоніном не спостерігали.
Приклад 7
В'язкість композицій з високою концентрацією анти-РО-1 антитіл
Дослідження 1 - В'язкість як функція концентрації білка
Дослідження 14А:
У одному експерименті вимірювали в'язкість несформульованого пембролізумабу (пембролізумаб в 10 мМ гістидинового буфера) як функцію концентрації білка. Зразки отримували шляхом ультрафільтрації/діафільтрації пембролізумабу в 10 мМ гістидинового буфера рн 5,4. Значення концентрації вимірювали за допомогою ЗоЇ0МРЕ, а в'язкість вимірювали з використанням пристрою МУКОС. Значення представлені в Таблиці 11 нижче.
Таблиця 11
В'язкість несформульованого пембролізумабу (в 10 мМ Гістидинового буфера рнН 5,5) як функція концентрації білка (мг/мл)
Дослідження 18:
У іншому експерименті також вимірювали в'язкість пембролізумабу, сформульованого в 10
ММ сгістидину рН 5,5, в присутності З 95 (мас./об.) аргініну як функцію концентрації пембролізумабу. Зразки для цього експеримента отримували шляхом ультрафільтрації- діафільтрації пембролізумабу в 10 мМ гістидинового буфера рн 5,4 в присутності З 95 (мас./об.) аргініну. Зразки збирали на різних стадіях ШУ/ОЕ процесу і вимірювали значення концентрації і в'язкості. Значення концентрації вимірювали за допомогою ЗОЇОМУРЕ, і в'язкість вимірювали з використанням пристрою МУКОС. Значення представлені в Таблиці 12.
Таблиця 12
В'язкість пембролізумабу, формульованого в 10 мМ
Гістидину рН 5,5, в присутності З 95 (мас./об.) аргініну 10021573 11111111111117111111111111111111119901
Дослідження 1сС:
У іншому експерименті вимірювали в'язкість формульованих зразків пембролізумабу.
Зо Композиції пембролізумабу отримували при різних концентраціях в діапазоні 100-200 мг/мл з 7 Ус (мас./об.) сахарози, 0,02 95 (мас./0б.) полісорбату 80, 10 мМ Метіоніну в 10 мМ гістидинового буфера рн 5,5. Композиції отримували змішуванням наступних вихідних розчинів:
(1) лікарська речовина пембролізумаб при 236 мг/мл в 10 мМ гістидинового буфера рн 5,5; (2) 49 95 (мас./мас.) сахарози, 0,14 95 (мас./мас.) полісорбату 80, 85 мМ метіоніну в 10 мМ гістидину рН 5,4; ї (3) 10 мМ гістидину рН 5,5. Вимірювання в'язкості виконували з використанням віскозиметра МУКОС (див. Таблицю 13).
Таблиця 13
В'язкість повністю формульованого пембролізумабу як функція концентрації білка 1 Значення концентрації зразків вимірювали в трьох повторах методом Уф-абсорбції А280 розбавлених зразків і представляли як середнє значення зі стандартним відхиленням. 2 Значення в'язкості вимірювали в трьох повторах і представляли як середнє значення зі стандартним відхиленням.
Дослідження 2: Ефект різних ексципієнтів на в'язкість розчинів з високою концентрацією пембролізумабу
У цьому дослідженні отримували вихідні розчини різних ексципієнтів в 10 мМ гістидинового буфера рН 5,5. Далі, зразки лікарської речовини пембролізумабу в 10 мМ гістидину, рН 5,5, вводили з цими вихідними розчинами ексципієнтів для досягнення цільовою концентрацію ексципієнта. Значення концентрації пембролізумабу вимірювали за допомогою ЗоЇоМРЕ і в'язкість вимірювали з використанням пристрої МУКОС (Таблиця 14). Також вимірювали рн зразка.
Таблиця 14
Ефект відмінних ексципієнтів на в'язкість розчинів пембролізумабу в 10 мМ Гістидину рн 5,5 (цільовий рН)
Цільова Виміряна . Концентрація Концентрація й . В'язкість? (сПз
Ексципієнт Кицен рань пембролізумабу Виміряний рН! при 20 їх ) (одиниця) (мг/мл) -глутамн. | ббмМ | 77771937 | 7771756 | 53825
Продовження таблиці 14
Гуанідин дно ож | оновн сульфонова 200 мМ 191 5,64 15,698 кислота кислота 1 Цільовий рН всіх зразків складав 5,5; однак в деяких випадках рН розчину, що вводиться, впливав на рН введенних зразків пембролізумабу 2 В'язкість контрольного розчину пембролізумабу тільки в 10 мМ Гістидинового буфера (без введення Ексципієнтів) в цьому експерименті не вимірювали; однак, виходячи з інших експериментів, очікували значення «50 сПз
Дослідження 3: Ефект концентрації аргініну, гістидину і метіоніну на в'язкість розчинів пембролізумабу
У цьому дослідженні вивчали ефект концентрації аргініну, гістидину, ацетату натрію і метіоніну на в'язкість розчинів пембролізумабу. Лікарську речовину пембролізумаб (2200 мг/мл) в 10 мМ гістидину рН 5,4 змішували з різними кількостями вихідних розчинів аргініну, гістидину і метіоніну для досягнення різних концентрацій ексципієнтів в розчинах, що містять цільові концентрації пембролізумабу 200 мг/мл або 167 мг/мл. Результати підсумовані в Таблиці 15.
Таблиця 15
Ефект концентрації Ексципієнта на в'язкість 1. 1«НЕШИЖн ендтутюн пембролізумабу - 200 мг/мл пембролізумабу - 167 мг/мл
Цільова Виміряна В'язкі
Концентрація | Концентрація | В'язкість при| Виміряна Концентрація яЗКІСТь
Ексципієнта | пембролізумабу| 20 "С (сПз) | пембролізумабу (мг/мл) 20 «о (сПз) (ММ) (мг/мл)
Екоципієнт Д-- 05-51 -3ТЬ й 5 0117111 2025 | 5 | /-77117 111 - 60177 1912 | 28615 | 1618 | 12951 і аргінін
Не 711935 ЇЇ 271 11111111 ля 12018 |в ЇЇ 21361711 2035.. | 267 | (БК - ЇЇ - ев 172057. | 268 | ЖК - ЇЇ - 85611121 | 256 | 7/7 -111111 11 - 4271711 2055 | 253 | ::БЙК- 6 ЮДЩщ ЇЇ -
І -Гістидин
Гідрохлоридіі 35 | 1901 | 30337 | 1664 - | 16,877 моногідрат
Продовження таблиці 15 і метіонін 1їЗначення представляє дані окремого експерименту, в якому оцінювали концентрації аргінін. НСІ до 9 95 (мас./об.) (еквівалентно 427 мМ)
Дані вищенаведених досліджень демонструють, що в'язкість пембролізумабу в 10 мМ гістидинового буфера рН 5,5 експонентно збільшується зі збільшенням концентрації білка (таблиця 11). Дані також показують, що присутність З 95 (мас./06.) аргініну знижує в'язкість пембролізумабу в 10 мМ розчині гістидину рН 5,5; однак, все ще спостерігається експонентне збільшення в'язкості зі збільшенням концентрації пембролізумабу (Таблиця 12). Значення в'язкості пембролізумабу, формульованого в 10 мМ гістидину рН 5,5, разом з 7 95 (мас./об.) сахарози, 0,02 95 полісорбату 80, 10 мМ метіоніну, в діапазоні концентрації білка 100-200 мг/мл аналогічні відповідним значенням, виміряним в 10 мМ буфері рН 5,5 тільки. В'язкість формульованого пембролізумабу показує значне збільшення приблизно 150 мг/мл і більш високі концентрації (Таблиця 13).
Різні ексципієнти впливали на в'язкість розчинів з високою концентрацією пембролізумабу в різній мірі (Таблиця 14). Ексципієнти, які мали саме великий вплив на в'язкість пембролізумабу, включають І -аргінін, ІГ-гістидин, гуанідин гідрохлорид, ОМ5БО і камфорсульфонову кислоту (Таблиця 14). Крім цього, Таблиця 15 показує, що І -аргінін і І-гістидин знижують в'язкість розчину пембролізумабу залежним від концентрації чином і що додавання І -метіоніну до 40 мМ не знижує в'язкість пембролізумабу.
Приклад 8
Довгострокова стабільність композицій з високою концентрацією анти-РО-1 антитіл
Додаткові дослідження виконували для визначення довгострокової стабільності композицій з високою концентрацією пембролізумабу в присутності і при відсутності метіоніну. Це дослідження вивчало вплив концентрації і присутності антиоксиданта (наприклад, метіоніну) на стабільність пембролізумабу. Вихідні розчини ексципієнтів отримували і вводили в лікарську речовину пембролізумаб для отримання кінцевої композиції, представленої в Таблиці 16.
Композиції розподіляли в камери для дослідження стабільності при температурах 5 "С/-3 "С, 257бч4/-3 "С/ з відносною вологістю 60 9025 95 і 40 "С-/-2 "С/ з відносною вологістю 75 905 Фо.
Композиції К2 ії КЗ розподіляли по обмеженій стабільності порівняно з композиціями КІ і КА.
Запланована тривалість дослідження становила 36 місяців, при цьому дослідження при 25"
Зо завершувалося через шість місяців, а при 40 "С завершувалося через три місяці. Результати за 12 місяців представлені нижче.
Таблиця 16
Довгострокова стабільність композицій, які містять пембролізумаб 11111111 (Цільова Фактична.//////7777/71771111111111Ї1111111С1С 10 ММ Гістидину рн 5, 7 сь сахарози, 0,02 Фо
РБВО-1ОММ Мей 14 мл 2К флакон - 12 мМ пробка гумова 10 мМ Гістидину | (етикетка) о медична сахарози, 0,02 95
РБЗВО
Всі тестовані композиції були перевірені візуально і було виявлено, що вони практично не містять видимих частинок аж до 12 місяців при 5 "С. Композиції також оцінювали за допомогою
НР-БЕС, НР-НІС і НР-ЕХ, і результати представлені в Таблицях 17-19 і підсумовані нижче: рн:
Всі композиції мали однакове початкове значення рнН 5,7. Ніяких змін рН не спостерігалося для жодної з композицій при будь-яких умовах зберігання.
Ефективність в аналізі зв'язування ЕГІБЗА:
Ніяких змін в ефективності не спостерігали в аналізі скріпленні ЕГІБА для будь-якої з композицій, незалежно від тривалості і стану зберігання. Всі значення ефективності були в межах прийнятних критеріїв 60-140 9о від референсних значень (значення варіювалися від 85- 106 протягом 12-місячного періоду зберігання для зразків, що зберігалися при 5 "С, дані не показані).
Відновлювальні і невідновлювальні умови СЕ-505:
Чистоту вимірювали методом СЕ-505 в відновлювальних і невідновлювальних умовах. Не було ніякої вимірної зміни в 95 чистоту або 95 інтактного Їдс як функції часу при 5 "С аж до 12 місяців для будь-якої з композицій. При 5 "С 95 чистоти в відновлювальних умовах СЕ-505 (важкий ланцюг і легкий ланцюг) становив 296,5 95 для композицій КІ і К4 через 12 місяців і »97,0 95 для композицій Ка2 і КЗ протягом аналогічного періоду. При 25 "С спостерігали невелике зниження чистоти для всіх композицій. При 40 "С очікуване зниження чистоти спостерігали через З місяці для всіх композицій. 96 Чистоту при 5 "С при невідновлювальних умовах СЕ-505 (інтактний Ід) складав 2 98,2 для композицій КІ і К2, 2 97,1 для композиції К2 і 2 97,2 для композиції КА протягом 12 місяців в точках часу, коли здійснювали оцінку. Всі результати були в межах клінічних критеріїв прийнятності 2 90,095 як для відновлювальних, так і невідновлювальних умов СЕ-505.
Чистота по НР-5ЕС:
При рекомендованих умовах зберігання при 5 "С не було виявлено помітних змін в 95 НМУУ для будь-якої з композицій аж до 12 місяців від вихідних рівнів. При 25 "С протягом 6 місяців Фо
НМУМ збільшувався, з відповідним зменшенням мономера. Жоден вид І МУМ не міг бути виявлений в жодній з умов зберігання для будь-якої з композицій. При 40 С протягом З місяців 95 НМУМ збільшувався для різних композицій з відповідним зменшенням мономера. Для композицій К1-КЗ, збільшення НМУУ спостерігали зі збільшенням концентрації. ГМУМ вид спостерігали для всіх композицій при 40 "С в точці часу З місяці.
Окиснення по даних НР-НІС:
Зо Окиснення по Метіоніну 105 визначали кількісно шляхом моніторингу піка перед головним піком 142 методом НР-НІС. Композиції К1-К4 не показали змін окиснення при 5 "С протягом 12 місяців. При 25 "С протягом 6 місяців рівні піка перед головним піком 1-2 злегка зростали, тоді як при температурі 40 "С протягом З місяців збільшення було більш явним. При 25 "С і 40"с зміна окиснення була більш вираженою для композиції К4. Оскільки К4 є єдиною композицією, яка не містить І -метіонін, ці результати демонструють, що включення І -метіоніну приводило до значного зниження швидкості окиснення.
Гетерогенність заряду по даних НР-ІЕХ:
Гетерогенність заряду оцінювали шляхом моніторингу головного піка разом з різними кислотними і лужними видами. При температурі 5 "С аж до 12 місяців не було виявлено ніяких вимірних змін в жодному з окремих піків, включаючи головний пік, для будь-якої з композицій.
При 25 "С протягом 6 місяців головний пік зменшився. Спостерігали збільшення всіх кислотних видів (кислотні варіанти, кислотний 1 і пік перед головним піком) і піка лужних варіантів.
Спостерігали зниження видів Лужного 1 і Лужного 2. При 40 "С протягом З місяців головний пік демонстрував ще більш круте зниження. Подібно 25 "С, збільшення спостерігали для кислотних варіантів, Кислотного 1, спис перед головним піком і спис лужних варіантів і зниження спостерігали в піках Лужно 1 і Лужно 2.
Каламутність:
Каламутність партій продукту лікарського засобу визначали по стабільності шляхом вимірювання оптичної густини при 350 нм. Не було помітних змін каламутності при 5 "С для будь-якої з композицій. Зразки, які зберігали при 25 "С, показали невелике збільшення, тоді як ті, які зберігали при 40 "С, демонстрували ще більше збільшення каламутності. Збільшення каламутності при 25 "С і 40 С узгоджується зі збільшенням кількості високомолекулярних частинок, що спостерігаються у випробуванні на стабільність.
Загалом, основуючись на даних стабільності за дванадцять місяців, композиції К1-К4 були стабільними при 5"С протягом аж до 12 місяців без яких-небудь відчутних змін в характеристиках якості продукту. Деяка деградація спостерігалася при моніторингу ознак при 25 "С протягом 6 місяців і при 40 "С протягом З місяців. Стабільність продуктів при 5 "С буде додатково оцінена протягом аж до 36 місяців.
Таблиця 17
Дані стабільності для композицій К1-КА при 5 С о Часовийінтервал| | Початкю. | міс. | Зміс. | бміс. | Уміс. | 12міс.
ВисокомолекулярніК2 | 15 МА МА. | 15 |МА | 15 сполуки (96) во мономера кі 71777770 10 1 0 кв | «ВС ве
НизькомолекулярніК2 | 0 МА ОМА. о «АСОЇМА «ВО сполуки (96) Кз | 0 |МА МА. «ВО |МА | «Ве к4 ЇЇ 0 10 10 |в | «ВС ве
Пік перед оловниміюми 23333172 628 МА МА | 638 (МА 5/5 2 (95)
Кислотні варіанти (бе) головний пік (95)
Лужні варіанти (96)
Каламутність (АЗ50) 14: Нижче межі звітності
Таблиця 18
Дані стабільності для композицій К1-КА при 257 77171711 | Випробування | Комп.| Випробування настабільність,год.д 1111 Часовийінтервал.ї/ | | Початк. | їмісяць | Змісяці | б місяців
ВисокомолекулярнаК2 | 15 МА. | 18 | 19 ( сполука (96) даних. 95 мономера
ФС
Кк 10 11 0 1 0 | «во
НизькомолекулярнаК2 | 0 2 МА. | 0 | «ВС сполука (96) Кк 1710 |МА | 0 | «ВО
Кк. 1770 1 0 1 0 | «в плани | Пік перед головним
НР-НІС | піком 1 8.2 (96)
Кислотні варіанти (де) варіанти авівнти уп зав головний пік (95)
НечЕХ Р-
ТЕХ
: каламутність (Де50) 14ВЇ: Нижче межі звітності, М.А.: не встановлено
Таблиця 19
Дані стабільності для композицій К1-КА4 при40 "С 71111111 | Випробування | Комп. | (Випробування на стабільність, год.:Ч 11111111 Часовийїнтервал.//////// | | Початкео | /місяць| Змісяці
ВисокомолекулярнасполукаК2 | 15 |МА | 52 (оо)
Чистотапо |; мономера даних НР-ЗЕС
Кк Її 0 11 0 11 02
НизькомолекулярнасполуааК2 | 0 |МА | 02 (оо) кз | 0 |МА | 02
Кк | 0 1 0 1 02
Окиснення по |Пік перед головним піком 1 даних НР-НІС |82(96) кислотні варіанти (95) варіанти заряду групподаних Головний пік (95)
Не-ВЕХ НРЕХ пужні варіанти (9) : каламутність (АОЗО) 14ВІ: Нижче межі звітності, М.А.: не встановлено
Приклади (9-13) освітлюють отримання композицій, які використовують меншу кількість антитіл і ексципієнтів, ніж передбачалося в кінцевих композиціях. Однак, ці композиції зберігають молярне співвідношення пембролізумаб/стабілізатор і пембролізумаб/поверхнево- активна речовина кінцевих передбачуваних композицій. Концентрації антиоксиданта, буфера і металохелатора тестували при кінцевих передбачуваних концентраціях. Концентрації пембролізумабу (5 мг/мл), РБ8О (0,0016 95) і стабілізатора (наприклад, 1,4 95 сахарози) були зменшені в 5 разів і досліджені як сурогатні композиції для більш концентрованих, кінцевих передбачуваних композицій. Наприклад, Композиція ТА в Таблиці 20 має ті ж молярні співвідношення, що і композиція, яка містить 25 мг/мл пембролізумабу, 7 95 сахарози і 0,02 95
РБЗ8ВО. Очікують, що композиції, розкриті в Прикладах 9-12, є репрезентативними для передбачуваних кінцевих композицій і що розкриті результати показують, як будуть поводитися кінцеві композиції з вищою концентрацією. Зрозуміло, що деякі параметри вивчаються, наприклад, на агрегацію може впливати зниження концентрації внаслідок зниженої імовірності міжмолекулярних взаємодій; однак, щоб компенсувати це, був застосований більш агресивний режим оцінки стабільності (50 С протягом 10 днів) для індукції ії ідентифікації ризику стабільності.
Концентрації антиоксиданта (наприклад, метіоніну), буфера (наприклад, гістидину) і металохелатора (наприклад, ОТРА і ЕОТА) не знижувалися аналогічно іншим ексципієнтам.
Метіонін є функціональним ексципієнтом, який використовується для зменшення окиснення
Меї-105 шляхом видалення окисників (таких як розчинений кисень), таким чином підтримуючи хімічну стабільність пембролізумабу. Аналогічним чином, ОТРА є функціональним ексципієнтом, який використовують для утворення комплексних домішок іонів металів, які в іншому випадку можуть викликати небажане розкладання білка. Оскільки більш складно підтримувати хімічну стабільність при нижчих концентраціях пембролізумабу, концентрації метіоніну і ОТРА підтримували постійними при 10 мМ їі 20 мкМ, відповідно. Очікують, що, якщо певна кількість метіоніну буде ефективною в композиціях з низькою концентрацією, вона, швидше усього, буде так само ефективною для запобігання окисненню в композиціях з вищою концентрацією.
Очікують, що І-гістидин і/або І-гістидин гідрохлорид при 10 мМ збереже буферну здатність при цільовому рН тестованих композицій.
Приклад 9
Оцінка стабільності композицій з низькою концентрацією пембролізумабу в комбінації з метіоніном
Початкове дослідження композиції здійснювали для оцінки стабільності композицій, що містять низьку (5 мг/мл) концентрацію пембролізумабу, і для оцінки впливу різних ексципієнтів композицій. У Прикладах 9-12 використовуваний аргінін являв собою І -аргінін або І -аргінін" НСІ, використовуваний гліцин являв собою гліцин, і використовуваний пролін являв собою І -пролін.
Лікарську речовину рембролізумаб в 10 мМ Гістидину рН 5,5 (41,2 мг/мл) об'єднували з розчином полісорбату-80 (РБВ8О) (70,36 мг/мл), потім ОЗ до кінцевого об'єму з буфером з отриманням вихідного розчину білка (20 мг/мл)/Р580 (0,16 мг/мл) в 10мМ гістидину рН 5,5.
Композиції пембролізумабу отримували до цільової концентрації 5 мг/мл шляхом введення у вихідний розчин білка/Р580 вихідних розчинів ексципієнтів і відповідного буфера. Всі вихідні розчини, що використовуються для композицій, перед використанням фільтрували через РЕ5 фільтри МіПТароге Ехргез5Ф РІГ ОБ 5(егісирФ 0,22 мкМ. Тестовані композиції, що містять низьку концентрацію пембролізумабу, отримували в 96-ямковому планшеті об'ємом 1 мл. Ексципієнти впорскували у вихідний розчин білка/Р580 для досягнення цільових рівнів кожного ексципієнта і
Зо доводили до кінцевого об'єму з використанням гістидинового буфера рнН 5,5 (див. Таблиця 20). (2- Гідроксипропіл)-В-дциклодекстрин (продається під торговою маркою САМІТКОМ"М, і (сульфобутилефір)-В-циклодекстрин (продається під торговою маркою САРТІЗОЇ 7М) позначаються як НРВС і ВЕС, відповідно. Планшет з ямками закривали силіконовою ущільнювальною матою для 9б-ямкових планшетів, а потім герметизували у вакуумі (2х) в мішках для захисту від вологи, щоб мінімізувати можливе випаровування. Зразки розміщували в камерах для дослідження стабільності при 2-8 "С (як він використовується в описі і в прикладах, термін "5 "С" використовується взаємозамінно з "2-8 "С", що означає 5"С т 3 "С (стандартне відхилення)) і 50 "С.
Таблиця 20
Композиції з низькою концентрацією пембролізумабу
ЛА | Т4ббсахарози | -: - | 58 | О4бгліцияну, | ї0ммМе! в | ї4всахарози | ї0ммМег | бА | Т49НРВС | - 2А | 08беманту | -( - | 68 | 1495 НРВС | ї0ммМе 2в | 08беманту | їОммМег | 7А | О8оварінну | -
ЗА | Т4Обтрегалом | - - | 7УВ | О8Оваргінну | 10ммМе!
ЗВ | 14бтрегалози | ї0мм Ме | 8А | Оовепролну | - .Я4А | О8обсорботу | - - | 88 | ООспролну | ї0ммМе! 48 | 08обсороту | їОмммМег | 9А | 08958ЕС | -
І БА | Од4обгліцинуї | - - | 988 | 089558ЕС | ї10ммМе
Всі композиції містили 5 мг/мл пембролізумабу, 10 мМ Гістидинового буфера і 0,004 95 РБЗВО, на додаток до перерахованих Ексципієнтів.
Кожну з тестованих композицій перевіряли візуально на зміну забарвлення або утворення осаду (дані не показані). Додатково, стабільність композицій оцінювали з використанням аналізу на каламутність (АЗ50), ОР-БЕС (для оцінки чистоти) і НР-ІЕХ (профіль заряду) після 10-денного стабільного періоду. Композиції 9А і 9В, що містять 5ВЕС, були помітно каламутними після витягання з камери для дослідження стабільності. Навпаки, композиції бА і 6В, що містять
НРВС, не показали яких-небудь видимих ознак помутніння. Композиції УА і 9В не були додатково перевірені методом ОР-5ЕС і НР-ІЕХ, тільки на каламутність, як показано в Таблиці 21. Результати ОР-5ЕС показують, що не було ніяких змін для жодної з композицій, які зберігали при 5 "С протягом 10-денного періоду часу, за винятком композицій, тих, що містять аргінін (з або без метіоніну), де спостерігали невелике зниження 96 тАБ по даних ОР-5БЕС («0,5 95). Всі інші композиції вважалися стабільними в умовах зберігання при 5 "С. При 50 "С, по даних ОР-БЕС, спостерігалися більш виражені зміни (зниження 95 тАбБ) і по даних НР-ІЕХ (зниження 95 головного піка і значне збільшення 95 піка, що передує головному піку, дані не показані) для кожної з композицій протягом періоду проведення випробування. Дивно, але найвище зниження 95 тАБ (з відповідним збільшенням 95 агрегатів) спостерігали за допомогою
ОР-БЕС через 10 днів з композиціями 7А і 7В при 50 "С порівняно з іншими композиціями, що зберігалися при 50 "С протягом 10 днів, що свідчить про те, що ці композиції мають знижену стабільність. Результати аналізу на каламутність (АЗ50) для композицій 7А і 7В через 10 днів при 50 С підтверджували результати ИОР-ЗЕС, які вказують на зниження стабільності композицій 7А і 78.
У літературі було показано, що циклодекстрини стабілізують білкові композиції шляхом максимізації як конформаційної, так і колоїдної стабільності; однак циклодекстрини були в основному вивчені з білками ІдсС1. Механізм, за допомогою якого циклодекстрини додають цю стабілізацію, є предметом численних дискусій. Як показано в Таблиці 21, вимірювання каламутності і ОР-5ЕС композицій бА і 68 (утримуючих НРВС) продемонстрували стабільність, яка була такою ж, як з іншими перевіреними стабілізаторами протягом 10 днів при 50 "С, на відміну від інших протестованих композицій циклодекстрину (9А і 9В, що містять З5ВЕС), які мали високу каламутність через 10 днів при 50 "С.
Не було помітних відмінностей в профілі заряду між якими-небудь з композицій (за винятком
ТА/В і 9А/В, які не тестували) при 50 "С протягом 10-денного періоду випробувань (дані не показані). Додавання метіоніну (10 мМ) до тестованих композицій впливало незначним чином на запобігання агрегації протягом всьому періоду тестування.
Таблиця 21
Композиції, які використовуються в Прикладі 9
Комп. Стабілізатор Антиоксидант
ЛА 1 14ббсахарози | -:/- | 991 1 960 | 2 щ 0017 2А 1 08беманту,ї/ | 7777-7777 | 991 1 960 | 2 щЦ 0014
ЗА 0 14Обтрегалозм | -://- | 991 | 960 | 2 щ 0015 .4А 1 О8Обсорбту, | -:( - | 991 | 959 | 0017 ЗМ
БА 1 б4бгліцинуЇ | 7-77 | 990 | 961 | 2 щ-( 0018 .6бА | 149НРВС | -: - | 991 | 957 | 0019 Ж КпсСНІ 68 | 149НРВС | їбммМег | 991 / 958 | 0015 7А 1 08барінну | - - | 987 | 603 | 0091 /8А | 08ббпролну.ї | -( - | 991 | 952 | 0016 Й.С .9А | 0895ВЕС | - - (ОМ' ом | 034
І ев | 089558ЕС | їбмммМмеє |омт омт | 04 Су
Всі композиції містили 5 мг/мл пембролізумабу, 10 мМ Гістидинового буфера і 0,004 95 РБЗВО, на додаток до перерахованих Ексципієнтів.
Приклад 10
Аналіз композицій з низькою концентрацією пембролізумабу, що включають метіонін в комбінації з металохелаторами
Для дослідження впливу металохелаторів (ТРА і ЕОТА) на композиції з низькою концентрацією пембролізумабу, був сформульований і протестований ряд композицій, як описано нижче. Вихідний розчин пембролізумабу (20 мг/мл)/Р580 (0,16 мг/мл) в 10мМ гістидину рН 5,5 отримували як описано вище в Прикладі 9. Композиції 1-8 (С-Е) отримували в 96- ямковому планшеті шляхом введення вихідних розчинів наступних ексципієнтів: сахарози (5 95 мас./об.), маніту (5 95 мас./об.), трегалози (5 95 мас./об.), сорбітолу (5 95 мабс./об.), гліцину (5 95 мас./об.), НРВС (5 95 мас./об.), аргініну (5 95 мас./об.), проліну (5 95 мабс./об.), метіоніну (2 95 мас./об.), ЮОТРА (0,0195 мас./об.) і ЕЮОТА (0,0195 мас./об.) у вихідний розчин пембролізумабу/Р580 для отримання цільових композицій (05 до 1 мл з гістидиновим буфером рН 5,5), перерахованої в Таблиці 22. Всі вихідні розчини, що використовуються для композицій, фільтрували через РЕБ5 фільтри МіПароге Ехргез5Ф РІО Біегісирб 0,22 мкМ перед використанням. Планшет з ямками закривали закривали силіконовою ущільнювальною матою для 96-ямкових планшетів, а потім герметизували у вакуумі (2х) в мішках для захисту від вологи, щоб мінімізувати можливе випаровування. Зразки вміщували в камери для дослідження стабільності при 5 "С і 50 "С на 10 днів.
Таблиця 22
Композиції з низькою концентрацією пембролізумабу, які включають метіонін в комбінації з ОТРА і ЕОТА хелатор хелатор 1,4 95 туш сахарози 1,4 95 о 10 мМ Меї |ЕОТА во 1,4 395 НРВС| 10 мМ Меї |ОТРА сахарози 0,896 маніту| - (ОТРА 1496НРВСЇ --- С ЕОТА 0,8 95 маніту | 10 мМ Меї |ОТРА 1,495 НРВС| 10 мМ Меї |ЕОТА аргінін 0,8 95 маніту | 10 мМ Меї | ЕОТА 10 мМ Меї |ОТРА аргініну трегалози аргініну 1,495 0,8 до зо 10 мМ Меї |ОТРА 7Е :. 10 мМ Меї |ЕОТА трегалози аргініну трегалози проліну трегалози проліну . 0,8 до о, з 0,8 96 сорбіту | 10 мМ Меї |ОТРА проліну 10 ММ Меї | ЕОТА 0,896 сорбіту| - ЕОТА 0,896 5ВЕСЇ - ОО ТРА 0,8 95 сорбіту 10 мМ Меї |ЕОТА 90 10,8955ВЕС| 10 мМ Меї |ОТРА 0,496гліцину| - / ЇОТРА 0,896 5ВЕСЇ - С ЕОТА 0,4 95 гліцину| 10 мМ Меї |ОТРА 0,8 95 ВЕС | 10 мМ Меї |ЕОТА
Всі композиції містили 5 мг/мл пембролізумабу, 10 мМ Гістидинового буфера і 0,004 95 РБВО, на додаток до перерахованих Ексципієнтів.
Кожну з тестованих композицій перевіряли візуально на будь-які зміни в забарвленні або утворення осаду протягом 10-денного періоду випробування (дані не показані). Подібно до результатів Прикладі 9, композиції, що містять 5ВЕС, були помітно каламутними в момент витягання з камери для дослідження стабільності через 10 днів при 50 С. Знову ж, вимірювання каламутності (дані не показані) підтверджують зниження стабільності цих композицій порівняно з іншими протестованими композиціями. У результаті, композиції 9С-9Е не піддавали подальшим випробуванням. Для інших композицій результати вимірювань каламутності і ЮР-5ЕС були дуже схожі з результатами, наведеними в Таблиці 21 (за винятком композицій, що містять аргінін (7С-7Е)), що вказує на те, що додавання металохелатора практично не впливає на стабільність протягом 10 днів при 50 "С. ДИВ. Таблицю 23. І знов, композиції, що містять аргінін (7С-7Е), демонстрували найбільшу зміну 95 тАб (мономер) і найвищі показники каламутності (дані не показані) протягом періоду оцінки стабільності.
Незважаючи на те, що композиції 7/С-7/Е демонстрували дуже помітну різницю во тАБбБ, результати ОР-5ЕС для 70 і 7Е показали додаткову перевагу від включення металохелатора в комбінації з метіоніном для інгібування агрегації. Комбінація метіоніну і ЕОТА (7Е) привела до трохи вищого 95 ІтАб, ніж комбінація метіоніну і ОТРА (70). Не було помітних відмінностей в профілі заряду між якими-небудь з композицій (за винятком 7С-7РЕ, які не тестували) при 50 С протягом 10-денного періоду випробувань (дані не показані).
Таблиця 23
Композиції з низькою концентрацією пембролізумабу, які включають метіонін в комбінації з ОТРА і ЕОТА хелатор 16 | 14ббсахарози | - // |ЇОТРА | 991 | юррюоюо5шщ 70 | ї46сахарози | ї0мММеї |ОТРА | 991 / 960
ЛЕ | ї4Обсахарози | -:/- |ЇЕОТА | 991 | юЮрюрьюжю959 З
ЛЕ | ї46сахарози | ї0мММеї |ЕОТА | 991 / 960 2б 1 0896манту | -( - |ОТРА | 991 | (ХМ 959 Ж 2Е | 0896манту | -( - |ЕОТА | 990 | (Хк О959
Зб | Т4Обтрегалози |: - |ОТРА | 991 | -( 958 щ
ЗО | Т4Обтрегалози | ї0мММеї |ОТРА | 991 / 960
ЗЕ | Т4Обтрегалози | -- |ЕОТА | 991 | - 960 ЖФфЩщЗФІ
ЗЕ | Тї4Обтрегалози | ї0мММеї |ЕОТА | 991 / 960 | 0896сорбпу | - - |ОТРА | 991 | -((хБ 959
Я4Е | 0896сорбту | - - |ЕОТА | 991 | - 960 г ((Ф 4 1 0896сорбпу | ї0мМмМег |ЕОТА (| - / - 5С 1 баЗвгліцияну | - 1 |ЇОТРА | 991 | юфщ-:хБЙ 959 Ж | б496гліцяіну | їо0мММеї |ОТРА | 991 / 960
БЕ | б4гліцину | - //// |ЇЕОТА | 991 | щ-(х 960 щЖщЖ Ят"(Ф 6 1 14 НРВС | -//- // |ОТРА | 991 | ю.юлясшщ 60 | л149НРВС | ломМмМег |ОТРА | 991 / 950 бЕ | 4А9НРВС | -( - |ЇЕОТА | 991 | юЮющр:ЦЮ949 Ж ЮКи 76 1 089варгінну | ---//- /// |ЇОТРА | 987 | -- 6698 г 7Е | 08Уваргнну | ---/- |ЕОТА | 987 | 666 8С 1 08Обпролнуї | -//// - 0 |ЇОТРА | 991 | оС 80 | 0,8Убпролну | ї0ммММеї |ОТРА | 991 / 952 8Е | 0Овпролну | -: - |ЕОТА | 991 | 950 ШЩ/ вра им вм 90 | 089558ЕС | ї0мММе: |ОТРА
Продовження таблиці 23 0895 5ВЕС | -( - |ЕОТА 0,8 965 5ВЕС 10 мм Меї ЕОТА 1 Не тестували
Приклад 11
Оцінка ефекту рН на стабільність композицій з низькою концентрацією пембролізумабу в комбінації з метіоніном
Подальше дослідження здійснювали для оцінки стабільності композицій в гістидиновому буфері при різних значеннях рН. У цьому дослідженні оцінювали гістидинові буфери при значеннях рнН 4,5, 6,0 і 6,4 і оцінювали вплив на стабільність пембролізумабу.
Для цього дослідження композиції лікарського засобу пембролізумабу отримували в концентрації 5 мг/мл в 96-ямковому планшеті. Вихідні розчини пембролізумабу (20 мг/мл)/РЗ80 (0,16 мг/мл) в 1ОмМ гістидину при рН 4,5, 6,0 і 6,4 отримували з вихідного розчину пембролізумабу/Р580 рН 5,5 шляхом доведення рН розбавленим розчином НСІ або Маон до цільового рівня рН. Вихідні розчини ексципієнтів доводили до цільового рН аналогічним способом і фільтрували через РЕ5 фільтри МіПароге Ехрге555 РІ 5 БіегісирФ 0,22 мкМ перед використанням. Наступні вихідні розчини ексципієнтів вводили в вихідні розчини пембролізумабу (20 мг/мл)уР58О0 (0,16 мг/мл) для досягнення цільових концентрацій, перерахованих в Таблиці 24: сахароза (5 95 мас./об.), маніт (5 95 мас./об.), трегалоза (595 мас./об.), сорбіт (5 95 мас./об.), гліцин (5 95 мас./об.), НРВС (5 95 мас./об.), аргінін (5 95 мас./об.), пролін (595 мас./06б.) і метіонін (2 95 мас./0б.). Планшет з ямками закривали силіконовою ущільнювальною матою для 9б-ямкових планшетів, а потім герметизували у вакуумі (2х) в мішках для захисту від вологи, щоб мінімізувати можливе випаровування. Зразки вміщували в камери для дослідження стабільності при 5 "С і 50 "С на 10 днів.
Таблиця 24
Композиції пембролізумабу, які включають Метіонін, при різних значеннях рн оксидант оксидант 1,4 95 туш 1,4 95 0/ спі 1,4 95 туш сахарози 1,4 95 туш 1,4 95 туш 0,896 маніту| /- /45| 60 |149НРВС - | 45 0,8 95 маніту | 10 мМ Меї 1,4 95 НРВС | 10 мМ Меї 0,896 маніту| /- 60 | 6) |149НРВС - | 60 0,895 маніту| ї0мМ Мей | 60 1 6К 11,95 НРВС 1О0мМ Мен 60 ( 0,896 маніту| - 64 | 6 |149НРВС - | 64 0,8 95 маніту | 10 мМ Меї 1,4 95 НРВС | 10 мМ Меї 1,4 95 о ще 1,4 95 о ще 1,4 95 о ще
Продовження таблиці 24 ко роли тен 5ок ееженнюроним| во трегалози 1,4 95 о, гц коні 030011 лежав аа 0896сорбіту| //- 45 | 80 |0ббпролну/ - | 45 4) |08Обсорбіту| //- 60 | 8 |Оббпролну/ - | 60
Ак 0,896сорбіту| їОмМ Ме 60 | 8К (0бпролну їомМмМец 60 4 0896сорбіту| // - 64 | 8 (О8ббпролну. - | 64 1 Всі композиції містили 5 мг/мл пембролізумабу, 10 мм Гістидинового буфера і 0,004 95
РБЗВО, на додаток до Ексципієнтів композицій, перерахованих в Таблиці
Композиції оцінювали візуально на каламутність (АЗ50), ОР-БЕС (чистоту) і НР-ІЕХ (профіль заряду). Через 10 днів при 50 "С композиції, що містять аргінін при рН 4,5 (705 8 7Н), були помітно каламутними. Всі інші композиції, перераховані в Таблиці 24, не показали візуальних ознак агрегації. Показники каламутності (АЗ50) вимірювали через 10 днів, і вони показані в
Таблиці 25. Виміряні значення каламутності для композицій при рН 6,0 були незмінно нижчими тих, які вимірювали при рН 4,5 і 6,4, що свідчить про підвищення стабільності при рН 6,0.
Тенденцію збільшення каламутності спостерігали для всіх композицій при рН 6,4. Чистоту композицій тестували через 10 днів при 50 "С за допомогою ОР-5ЕС. Всі композиції при рН 4,5 демонстрували значне зниження 95 ІтАбБ (дані не показані) з відповідним збільшенням 95 агрегатів (НММУ). Для всіх композицій, протестованих при різних значеннях рН, додавання метіоніну до композиції приводило до меншої агрегації через 10 днів при 50 "С, з найбільшими змінами, що спостерігаються у всіх композиціях при рН 4,5. Дивно, що композиції 55 і 5Н були значно кращими, ніж базова композиція і демонстрували найменший 95 зміни 95 тА (їі найменша подальше збільшення 95 агрегатів) протягом періоду оцінки стабільності, що свідчить про відносне підвищення стабільності цих композицій порівняно з іншими композиціями при рН 4,5.
Профіль заряду композицій через 10 днів при 50 "С визначали за допомогою НР-ГІЕХ (дані не показані). Всі композиції при відповідному рівні РН демонстрували схожі профілі заряду для кожного протестованого стабілізатора. Композиції при рН 4,5 демонстрували найменший 95 кислотних і 95 піків, попередніх головному піку, після періоду стабільності, хоч і з відповідним значним збільшенням 95 основних варіантів (» 30 95). Профілі зарядів композицій при рН 6,0 були порівнянні з такими в Прикладі 9 (Гістидин рН 5,5). Композиції при рН 6,4 демонстрували профілі заряду, протилежні профілям при рН 4,5, де спостерігали значну зміну 956 кислотних варіантів (» 30 95) тільки з невеликим збільшенням 95 піка, що передує головному піку. 90
Головного піка у всіх композиціях був дуже схожим для всіх композицій, незалежно від рН (41- 43 95). Додавання метіоніну до композицій не приводило до якої-небудь значної зміни профілю заряду.
Таблиця 25
Композиції з низькою концентрацією пембролізумабу, які включають метіонін, при різних значеннях рн
Комп. Стабілізатор Антиоксидант рн Ман "с 50 ла | ї496сахарози | -: - | 45 | 276 | 5457 | 0021 49 Б 19 | ї496сахарози | - | 60 | 099 | 369 | 0017 Ж ко | 1496сахарози | їО0ммМе: |60 | 090 | 321 | 0015 ї496сахарози | -: - | 64 | 409 | 6ла4 | 0029 щЩ га | 08З9манту | - - | 45 | 278 | 5549 | 0021 4: 2) | О8Зманту | - - | 60 | 102 | 338 | 0014 Щ ак | 0,89манту | їОбммМеї /|60 | 099 | 326 | 0014 2 | О8Зманту | - - | 64 | 388 | 580 | 0025
За | ї4обтрегалози| -/- | 45 | 275 | 5487 | 0028
З) | ї4бтрегалози| - - | 60 | 091 | 337 | 0014 Щ
ЗК | ї4оетрегалози| їО0ммМмМеї |60 | 089 | 320 | 0014
З | ї4обтрегалозм| -: - | 64 | 379 | 579 | 0022 аа | 0896сорбіту | -: - | 45 | 277 | 5548 | 0023 4 | 089всорбіту | - - | 60 | 089 | 339 | 0018 щ ак | 0,896сорбіту | ї0ммМе! /|60 | 098 | 325 | 0015 4 | 0896сорбіту | - - | 64 | 371 | 564 | 0023
Ба | Об49гліцину | - 7 | 45 | 283 | 2706 | 0017.ЮЖщ ЖФІФ | О49бгліцину | и - 160 | 700 | 353 | 0016 2 щЩ " 5К | б496гліцяну | їОммМе /|60 | 102 | 331 | 0014
БІ | О49бгліцияну | и - | 64 | 366 | 582 | 0022 ба | лазНРВС | -:.- | 45 | 273 | 6052 | 0024 щЩ("( 6 | лазНРВС | -- | 60 | 099 | 353 | 0017 вк | лазНРВС | ломмМмег |60 | 097 | 3936 | 0016 6 | лазНРВС | -- | 64 | 382 | 590 | 0029 79 | О8оваргінну | -//- | 45 ОМ" ом" | тобі 77 | О8Оваргінну | - - | 60 | 094 | 636 | 009 7к | 08Оваргінну | лОммМег /|60 | 089 | 60оз | 0020 7- | О8варінну | -- - | 64 | 405 | 6б2з | 0098 щ ва | Обобпролну | - - | 45 | 280 | 3598 | 0019 Ж 8 | Обобпролну | - - | 60 | 700 | 350 | 0016 8к | ООбпролну | їбммМе /|60 | 090 | 332 | 0015 8 | Обобпролну | - - | 64 | 373 | 586 | 0026
Не тестували
Приклад 12
Оцінка композицій пембролізумабу, що містять метіонін і ОТРА в різних концентраціях
Попередні дослідження передбачали, що додавання метіоніну (антиоксиданта) і металохелатора може мати перевагу в зниженні агрегації (див. Приклад 10). Щоб дослідити вплив концентрації антиоксиданта і металохелатора на придушення схильності до агрегації, був сформульований і перевірений ряд композицій, як описано нижче. Вихідний розчин пембролізумабу (20 мг/мл)/Р58О (0,16 мг/мл) в гістидиновому буфері рН 5,5 отримували як раніше описано в Прикладі 9. Вихідні розчини (20 мг/мл) різних стабілізаторів (сахарози, маніту, трегалози, сорбіту, гліцину, НРВС, аргініну і проліну) вводили у вихідний розчин пембро/?580.
Метіонін використовували як антиоксидант, а ОТРА використовували як металохелатор. Як відмічено раніше, всі вихідні розчини, що використовуються для композицій, фільтрували через
РЕБЗ фільтри Мійароге Ехрге55Ф РІО е(егісирб 0,22 мкМ перед використанням. Кінцеві композиції для перерахованих в Таблиці 26 композицій отримували шляхом введення вихідних розчинів метіоніну (20 мг/мл) Її ОТРА (0,1 мг/мл) в розчин пембро/РЗвО/стабілізатор в 96- ямковому планшеті і потім доводили до кінцевого об'єму 1 мл гістидиновим буфером рн 5,5.
Планшет з ямками закривали силіконовою ущільнювальною матою для 96-ямкових планшетів, а потім герметизували у вакуумі (2х) в мішках для захисту від вологи, щоб мінімізувати можливе випаровування. Зразки вміщували в камери для дослідження стабільності при 5 "С і 50 "С на 10 днів.
Таблиця 26
Композиції пембролізумабу, які включають метіонін і ОТРА в різних концентраціях
ЯМ о |ї4бсахарози) - | - | 48 | О8Обсоропу | 710 | 20 / 18 |Т4бсахарози) 10 | 20 | 5М | О4обгліцину | - | - 1 | Т4бсахарози) 5 | - | 58 | О4Обгліцину | 70 | 20 / 1М | Т4бсахарози) 10 | - | 55 | О4бгліцину | 5 | 30 /
ЯМ | 4бсахарози) 15 | - | 57 | О4бгліцину | 15 | 30 / їх |Т4бвсахарози) - | 10 | 6М | 149НРВС | - | - /
М | Т4бсахарози) - | 20 | 6Р | 149НРВС | 5 | то / 17 |Т4Овсахарзи) - | 30 | 60 | 149НРВС | 15 | 0 / 2М | Обоеманту | - | - | 68 | 149НРВС | 70 | 20 2 | О08бОбманту | 10 | 20 | 7М | Обоваргінну| - | -
ЗМ |ї4бтрегалози! - | - | 78 | О0бОваргнну | 70 | 20
ЗА |14бтрегалози) 10 | 20 | 7М | Обобпролну | - | - 4М | 0бобсорбту | - | - | 78 | Оббпролну | 70 | 20
Всі композиції містили 5 мг/мл пембролізумабу, 10 мМ Гістидинового буфера, рН 5,5 0,004 95 РБЗВ8О на додаток до перерахованих Ексципієнтів. гМетіонін
Композиції оцінювали візуально на каламутність (АЗ50), ОР-БЕС (чистоту), НР-ІЕХ (профіль заряду). Після 10-денного періоду випробування при 50 "С жодна з композицій не була помітно каламутною і не мала зміни кольору. Показники каламутності для всіх композиції (за винятком композицій з аргініном 7М-7Т) були дуже схожими для різних протестованих композицій і близько нагадували значення, показані в Прикладі 9 (дані не показані). З даних каламутності ефект додавання різних концентрацій метіоніну окремо або в поєднанні з різними концентраціями ОРТА не був очевидний. Подібно до результатів, показаних в Прикладах 9 і 10, композиції, що містять аргінін, демонстрували найбільше збільшення 95 НМУМ (Таблиця 27) протягом періоду випробування стабільності, хоча композиції 70) і 7 (15 мМ метіоніну) демонстрували найбільше збільшення 95 НІММУУ, що свідчить про потенційне збільшення стабільності цих композицій порівняно з іншими з більш низькими концентраціями метіоніну.
Схожу тенденцію спостерігали для всіх інших композицій, де найменший 95 НМУМУ спостерігали в композиціях, що містять 15 мМ метіоніну і щонайменше 10 мкМ ОТРА, хоч різниця була дуже невеликою.
Не було помітних відмінностей в профілі заряду між якими-небудь з композицій (за винятком 7С-7Е, які не тестували) при 50 "С протягом 10-денного періоду випробувань. Однак, було значне зниження 95 головного піка (753 90241 95) і збільшення 95 кислотних варіантів і 9о піка, що передує головному піку, для всіх композицій порівняно з композиціями, що зберігаються при 5 "С протягом 10 днів (дані не показані).
Таблиця 27
Композиції пембролізумабу, які включають метіонін і ОТРА в різних концентраціях (мМ) (мкм) 1117 1М | ЛаЗвсахарози |. - | - | 092 2 Щ | 5 11110 | Т4Зсахарози | 5 | - | 086 | 464 11171 1М | ЛаЗвсахарози | 10 | - | 092 2 Щ | 455 1111 | ЛаЗвсахарози | 15 | - | 092 2 щЩ | 448 1111 1Х | Та4Звсахарози | -.- | 10 | 092 2 Щ | 48 111711М | ТаЗвсахарози | -.- | 20 | 091 | 479 11171124 | Т4Убсахарози | -- | 30 | 087 | 482 72мМ' | О89манту | - | - | 086 | 597 111 3ЗМ 0 | Таббтрегалом | - | - | 086 | 503 174М | 089всороту | -- | - | 077 | 53 1175М 0 | О4бгліцину | - ЇЇ 7-09 2 2 | Бл
Продовження таблиці 27 6 | лажнНРВС | - | - | 091 2 | 503 .6Р | лЯ4жНРВС | 5 | 710 | 091 | 508 7609 | лажнНРВС | 15 | 710 | 092 2 Щ | 485 68 | лажнНРВС | 10 | 20 | 092 2 Щ | 498 1177М | О8оварінну | -/- | 7 - | 132 | 3089 11177М | О8бобпролну | -/- | - | 093 2 | 5
НР-НІС аналіз здійснювали на вибраних композиціях, показаних в Таблиці 27, для оцінки впливу концентрацій метіоніну і ОТРА на стабільність і окиснення через 10 днів при 50 "с.
Результати для композицій 1М, 10) ії 17 вказують, що присутність 15 мМ метіоніну приводила до найменшої зміни окиснення протягом періоду оцінки стабільності. Загалом, результати, показані в Таблиці 28, продемонстрували, що додавання метіоніну до композицій приводило до зниження швидкості окиснення залежним від концентрації чином (композиції 1О0-1М/). Ніякої додаткової переваги не спостерігалося при додаванні ОТРА (композиції 1Х-17) як хелатор навіть в поєднанні з доданням метіоніну (композиції 1-1).
Таблиця 28
Композиції пембролізумабу, які включають метіонін і ОТРА в різних концентраціях (мМ) (мкм) 1117171 1М | Та4бвсахарози | - 77177171 -111845 | 2 щ 23,50 2щ Є( 11711710 | Т4овсахарози | 15 | 70о0 17669 | 2 щ 1756 ( 7111718 0 | Т4ббсахарози | 10172017 16.90 | 2 щ99382щ КІ 11111311 | Табвсахарози, | 5 171717 - 11711691 10 11717171 М 11111 | Табвсахарози | 10177777 - 11711676 | 888 щЩщ РМ 1117110 | Табвсахарози | 15 1777-1167 1118957 щЩ 111711 1Х 11110 | Таббсахарози, | -777771717117о 178.00 | 2 ющ--25052щ 11117111 | Табвсахарози, | -777771717112017 843 | 2 щ 2494щЩ-о 11117712 | Та4бвсахарози | - | 30 1 86 | 25537ШЩГ-
Приклад 13
Оцінка ефекту рН на стабільність композицій з низькою концентрацією пембролізумабу в комбінації з метіоніном
Проводили додаткове дослідження для оцінки впливу гістидинового буфера на стабільність композицій пембролізумабу. Для цього композиції, показані в Прикладі 9, отримували у воді для ін'єкцій (без доведення рн) замість 10 мМ гістидину рН 5,5. Лікарську речовину пембролізумаб (45 мг/мл) в 10 мМ гістидинового буфера рн 5,5 піддавали діалізу водою для ін'єкцій (М/РІ) до кінцевої концентрації 15,5 мг/мл. Вихідний розчин пембролізумабу (15,5 мг/мл)/Р580 (0,16 мг/мл) отримували шляхом додавання РБЗ8О до розчину пембролізумабу (15,5 мг/мл) в УМРІ з подальшою фільтрацією через РМЕ фільтруючий елемент 5(егігірФ 0,22 мкМ. Тестовані композиції отримували шляхом введення вихідних розчинів ексципієнтів (отриманих в МУРІ і відфільтровувати через 0,22 мкМ РМЕ фільтр) в вихідні розчини пембролізумабу/Р580 з отриманням концентрацій, показаних в Таблиці 29. Аналогічно дослідженню в Прикладах 9 і 10, додавали 10 мМ метіоніну і 20 мкМ ОТРА або 50 мкм ЕОТА для оцінки здатності знижувати агрегацію протягом періоду випробування стабільності. Композиції отримували в 96-ямковому планшеті з кінцевим об'ємом лікарського продукту 1 мл. Планшет з ямками закривали силіконовою ущільнювальною матою, а потім герметизували у вакуумі в мішках для захисту від вологи (2х). Композиції вміщували в умови 5 "С і 50 "С на 10 днів.
Таблиця 29
Композиції з низькою концентрацією пембролізумабу, отримані в М/РІ і Стабі- Антиоксиданті Метало- Стабі- |Антиоксидант Метало-
Комп. ; Комп.1 : лізатор (10 мМ) хелатор лізатор (10 мМ) хелатор з 1 4 Чо з 0,4 о
Ж шаюи | 71 А шу | 1 сааюм |ми | | 8 шу ми сахарози гліцину сахарози гліцину сахарози гліцину сахарози гліцину сахарози гліцину 0,896 манітуЇ //- | 77 - | вА Я НРВСЇЇ//-/17777- 0,896 маніту|Меї | - | 6В' ПА НРВСЇМА /-/:: 5 | - 0,896 маніту| - |ОТРА | 6 049 НРВСЇ /-- / ОТРА 0,8 95 маніту ОТРА | 60 (1495 НРВС|ЇМЕ: /- (ОТРА 0,896 маніту| - |ЕОТА | 6Е 496 НРВСЇ -- ОО ЄЕОТА 0,8 95 маніту ЕОТА | б (1496 нНРВС|ЇМЕ; / Г(ЕОТА іме! | о 1 ж || 1 1 трегалози аргініну ее | 1 1 трегалози аргініну трегалози аргініну трегалози аргініну трегалози аргінін з 1 4 Чо з 0,8 о . 0,8 до з Ге) з з . 0,8 до з Ге) з з . 0,8 до з Ге) з з проліну
Продовження таблиці 29 жорен, (ек 12103 " проліну проліну 1 Всі композиції містили 5 мг/мл пембролізумабу і 0,004 95 РЗ8О на додаток до перерахованих
Ексципієнтів
Отримані композиції тестували шляхом оцінки зовнішнього вигляду, методом диференціальної скануючої флуориметрії (термічне розгортання), шляхом оцінки каламутності,
ОР-БЕС (чистота) і НР-ІЕХ (профіль заряду). Жодна з композицій не показала зміни кольору і не була помітно каламутною при витяганні з умов оцінки стабільності. Виміряні значення каламутності були дуже схожі у всіх протестованих композиціях. На відміну від результатів вимірювання каламутності для композицій аргініну, отриманих в 10 мМ гістидинового буфера рн 5,5 (7А-7Е, приклади 1 і 2), композиції, отримані в М/РІ (7А"-7Е"), показали значно нижчі значення каламутності після періоду випробування на стабільність (дані не показані).
Порівняно з композиціями, отриманими в Прикладах 9 і 10, аналогічні композиції, отримані в
МІРІ, показали помірне поліпшення поведінки термічного розгортання за рахунок зсуву Тт1 до більш високої температури (таблиця 30). Винятком цього твердження є композиції з манітом 2Е!' (ЕОТА) і 2Е (МенЕОТА), які показали практично ідентичні значення Тт!1 з тими композиціями, які були отримані в Прикладах 9 і 10 (дані не показані). Композиції бА"-6Е" не показали теплових переходів, приблизно, внаслідок переважного зв'язування барвника ЗУРКО"М з кишенею циклодекстрину. Для всіх протестованих композицій, присутність тільки ЕОТА (50 мкМ) як металохелатор приводила до нижчих значень Тті!, ніж відповідні композиції з Меї, Мен-ОТРА,
ОТРА або МенЕОТА.
Зміну в рН незабуферених композицій вимірювали протягом періоду випробування стабільності, щоб оцінити здібність до самобуферизації композиції пембролізумабу (див.
Таблицю 30). Композиції 1-5Е" (Ме--ЕОТА) демонстрували найменшу зміну в рН протягом 10 днів при 50 "С. Що стосується СамігопФ (НРВС) композицій (бА" - 6Е), найменшу зміну в рн спостерігали в композиції 6В', в якій використовували метіонін, в той год. як найменшу зміну в рН, що спостерігається для композицій аргініну (7А"- 7Р"), спостерігали в композиції 7А' (без метіоніну або металохелатора).
Таблиця 30
Композиції пембролізумабу, отримані в УМЕЇ
Комп Стабілізатор Антиоксидант Металохелатор розгортання) г пи 5'С 50 , 1,4 95
Ж садом | 70107160 вл о садом (МИ | 0011606 в в сахарози " " " 6 садом | 700 ДОРА 1ввя ово вв сахарози " " , 1,4 95 ; 1,4 95 6 садом | 700 ЗА 1606 овал , 1,4 95 2А, |0896манту! //- | -- | 668 | 6блб6 | 542 28 Щ|0896мантуЇМеї | /- | 656 | 65 | 561 20 Ц|0896манту| /- І(ОТРА | 652 | 606 | 552 2 |0896манту| //- З(ЕОТА | 7586 | 545 | 5/7
Продовження таблиці 30 , 1,4 95
А ван 0вмо вв ; 1,4 95 ше 01101591 55 | зв , 1,4 95 во вали 700 ДОРА вБя0воївх , 1,4 95 , 1,4 95
БО арали0700ДВОТА вм в , 1,4 95 4А |08Обсорбту| //- | 7777-7171 654 1 601 | 585 48 Щ|08ОбсорбтуЇМеї | /- (| 654 | 629 | 585 4с Щ|08Обсорбту| - |ОТРА | 660 | 604 | 566 4Е |08Обсорбту| - |ЕОТА | 612 7 | 578 | 580
БА |б4ббгліцину! //- 77/77 - 77177111 666771 625 | 591 о 5В' |б4егліцинуЇМеї | 777-777 17771652 | 633 | 51 о 5с (О4оегліцийну| ///- / ФЇОТРА | 652 | 6ЛО | 576
БЕ |б4Оегліцину| /- ЇЕОТА | 654 | 604 | 590 вА |149НРВСЇ /- 7777-7177 - 11111711 67 | 582 вв |т149нНРВСЇМЕ; | 777-777 17717171 -1111171116б2го | 590 вс |149НРВСЇ /- (ОТРА | 7777-7777 1 67 | 568 60 | 149НРВС|Ме; // ОТРА 7777-7717 604 | 566 в6Е |149НРВСЇ /- (ЕОТА | 7777-7777 1 623 | 587 в |л149НРВСЇМеє// (ЇЕОТА// | /777/- 7777/1624 | 587
ТА |08обаргінну| //- | 777-771 642 | 602 | 592 78 (089баріннуїМеї | /- | 588 | 621 | 555 7 (|08обарінну| /- (ОТРА | 586 2 | 6бЛО | 581 о 7Е |089баргінну| /- |ЕОТА | 642 | 624 | 585 8А |О8обспролну| //- | -/- | 616 | 629 | 5587 88 Щ|0О8оспролнуЇМеї | /- | 592 2 2 щ | 628 | 590 вс Щ|О8обспролну| - |ОТРА | 658 | 624 | 578 80 Щ|08оспролнуїМеї ///// (ОТРА | 590 2 7щ- | бі | 573 8Е (08Оспролну| - |ЕОТА | 590 2 2 щ- | 630 | 593
Кількість агрегації кожної з композицій протягом 10-денного періоду при 50" також вимірювали за допомогою ШОР-БЕС.95 тАБ і9б агрегатів (НММУУ) для всіх протестованих композицій були дуже схожими, за винятком композицій 7А"-7Е" (композиції аргініну), які 5 демонстрували збільшення в 95 НММУ (54 95). З даних ОР-5ЕС не було чітких доказів того, що додавання метіоніну (10 мМ), ЮОТРА (20 мкМ), ЕОТА (50 мкМ) або його комбінацій значно знижувало агрегацію.
Профілі зарядів композицій через 10 днів при 50 "С визначали за допомогою НР-ГІЕХ (дані не показані). Всі композиції демонстрували схожі профілі заряду для кожного протестованого стабілізатора. Значне зниження 95 головного піка (753 Уо»41 95) і збільшення 95 кислотних варіантів і 96 піка, що передує головному піку, для всіх композицій спостерігали порівняно з композиціями, що зберігаються при 5 "С протягом 10 днів (дані не показані). Композиції, отримані в М/РІ, демонстрували вищий 95 кислотних піків (728 905) з порівнянними 9о піка, що передує головному піку, і 96 лужних варіантів з аналогічними композиціями в Прикладах 9 і 10 через 10 днів при 50 "С. Додавання метіоніну, ОТРА, ЕОТА або їх комбінацій, до композицій не приводило до якої-небудь значної зміни профілю заряду.
Приклад 14
Розробка висококонцентрированої композиції ліофілізованого лікарського продукту, яка включає пембролізумаб
Короткий опис плану експериментів і результатів для всіх партій лікарського продукту представлений в Таблиці 32. Всі композиції містили гістидиновий буфер (рН 5,5) і полісорбат 80 (Р5 80) як поверхнево-активну речовину. Різні тестовані композиції виготовляли з використанням різних кріопротекторів, стабілізаторів і т.д. з різними концентраціями пембролізумабу і ексципієнтів. Наступні партії лікарської речовини пембролізумабу використовували для формулювання тестованих композицій для досліджень: 204 мг/мл пембролізумабу в 10 мМ гістидинового буфера, рН 5,5 288 мг/мл пембролізумабу в З 95 аргінін. НСІ, 10 мМ гістидинового буфера, рН 5,5
Процеси ліофілізації для досліджень здійснювали з використанням моделі І МО5ТАК З (5Р
Зсіепійіс), як описано в Таблиці 31.
Партія 0021: Партію 0021 отримували, виходячи з 103 мг/мл пембролізумабу, формульованого в сахарозі. Об'єм 2,30 мл заповнювали в 2К флакони, б флакони і 10К флакони. Використовували 55-годиний цикл ліофілізації ("ліо цикл А, " див., Таблицю 31). Після ліофілізації вимірювали залишкову вологість, шприцьований об'єм і об'єм розширення.
Звичайно спостерігали діапазон часу відновлення 17-28 хвилин.
Партія 0022: Партію 0022 отримували, виходячи з 448-103 мг/мл пембролізумабу, сформульованого в різних комбінаціях сахарози, маніту і аргінін гідрохлориду (Аг9.НСЇ). Об'єм 2,30-4,97 мл заповнювали в 2К флакони, б6К флакони, ТОК флакони і ТОК флакони. Була використана більш тривала е первинне сушіння, збільшене на 5 годин. Таким чином, використаний цикл ліофілізації був аналогічний циклу ліофілізації А, продовженому до 60 годин (ліо цикл В" див., Таблицю 31). Звичайно год. відновлення складав від 4 до 23 хвилин.
Залишкова вологість складала від 0,24 до 0,26 95.
Партія 0024: Партію 0024 отримували, виходячи з 104-200 мг/мл пембролізумабу, сформульованого в різних комбінаціях сахарози і аргінін гідрохлориду (Аго.НСЇЇ). Як лікарську
Зо речовину використовували 288 мг/мл пембролізумабу в З 95 Аго, 10 мМ Ні рнН 5,5. Об'єм 1,24- 2,30 мл заповнювали в 2К флакони. Для процесу ліофілізації одну полицю повністю завантажували 7 9о-ними флаконами сахарози. Час вторинного сушіння був скорочений з 8 до 6 годин. Таким чином, використаний цикл ліофілізації мав год. вторинного сушіння на 2 години коротший порівняно з циклом ліофілізації А ("ліо цикл С" див., Таблицю 31). Як правило, год. відновлення складав від 37 до 42 хвилин. Були деякі труднощі з розчиненням ліофілізаційного коржика, які не зменшувалися з введенням стадії центрифугування. Виміряна залишкова вологість становила 0,27 95.
Партія 0025: Партію 0025 отримували з 25 мг/мл пембролізумабу, сформульованого в сахарозі. Об'єм 10,66 мл заповнювали в 15К флакони. Був прийнятий консервативний варіант циклу ліофілізації А (приблизно 136 годин, ("ліо цикл Ю" див., Таблицю 31). Серед інших змін використовували більш тривалу стадію первинного сушіння. Звичайно год. відновлення складав від 2 хвилин 20 секунд до 4 хвилин 40 секунд. Залишкова вологість становила 0,4-0,5 Уо.)
Партія 0027: Партію 0027 отримували з 25 мг/мл і 35 мг/мл пембролізумабу в сахарозі.
Об'єм 6,8-9,ж5 мл заповнювали в 15К флакони. Був прийнятий консервативний варіант циклу ліофілізації А (-- 136 годин, "ліо цикл Е" див., Таблицю 31) з більш тривалою первинною стадією сушіння, що складається з двостадійного процесу сушіння (- 20 "С ії -10 72). Вміст флаконів відновлювали з меншим об'ємом (1,0 мл) води. Звичайно год. відновлення складав від 4 хвилин 20 секунд до 6 хвилин 15 секунд. Залишкова вологість складала від 0,14 до 0,17 95. Швидкість витягання відновленого розчину через шприц була надзвичайно повільною і складною при використанні 3-мл шприца, забезпеченого голкою 2705 и".
Партія 0028: Партію 0028 отримували з (1) 25 мг/мл або 35 мг/мл пембролізумабу в сахарозі, (об'єм 6,78-9,6 мл, заповнений в 15К або 20К флакони) або (2) 35 мг/мл пембролізумабу в аргініні (об'єм 6,78 мл, заповнений в 15К флакони). Цикл ліофілізації А використовували без зміни (приблизно 55 годин). Вміст флаконів розводили 1,2 мл води. Як правило, год. відновлення складав від 5 хвилин 10 секунд до 6 хвилин 15 секунд. Залишкова вологість складала від 0,60 до 0,8595. З-мл шприци, забезпечені голками 27575, ,легше заповнювати і спорожняти аргініновмісним відновленим розчином порівняно з композиціями з сахарозою, що, як передбачалося, є результатом в'язкості.
У цьому Прикладі оцінювали ліофілізовані композиції, які були приготовані з вихідними бо розчинами, що містять 200 мг пембролізумабу, при концентраціях білка від 48 до 200 мг/мл. Всі композиції ліофілізували з отриманням білого коржика. Після ліофілізації, коржики відновлювали за допомогою ЗМУРІ і відновлені розчини оцінювали на тонічність, в'язкість і год. відновлення. Ліофілізовані коржики відновлювали з меншою кількістю води, ніж об'єм заповнення, щоб отримати приблизну концентрацію 167 мг/мл (тобто 200 мг/флакон).
Ліофілізовані коржики, виготовлені з висококонцентрованими перед-ліо розчинами (2100 мг/мл), як правило, за природою були більш компактними.
Час відновлення для різних композицій варіювався від 2 до 42 хвилин (див. Таблицю 32).
Загалом, год. відновлення був більше при збільшенні концентрації білка в пред-ліо розчині.
Результати аналізу відновленого розчину вказують, що аргінін гідрохлорид мав такий же ефект для зменшення часу відновлення, що і протестовані ексципієнти, але міг сприяти зниженню в'язкості відновленого розчину. Вплив інших ексципієнтів (наприклад, сахарози, маніту) і параметрів процесу ліофілізації на год. відновлення виявилося незначним.
Таблиця 31
Цикли ліофілізації, які використовуються для Прикладу 14
Партія Ме/цикл Заморожування Первинне сушіння Вторинне сушіння ліофілізації рожу Р У Р У
Завантаження 5 "С
Лінійна зміна до -10 "С, хв.
Підтримка при -10 "С, 1 год. Встановлення тиску на Встановлення тиску на
Лінійна зміна до -50 "С, У 113 мТорр 113 мТорр п . о 2 години 40 хв. п , о Лінійна зміна до 30 "С, 1 . о Лінійна зміна до -15 С, 0021 Підтримка при -50 "С, 1 45 ХВ год. 10 хв. год. п о Підтримка при 30 "С, 8
Цикл А явне . о Підтримка при -15 "С, 24
Лінійна зміна до -10 С, ГОДИНИ годин 1 год. 20 хв. ди . о Лінійна зміна до 5 "С, 30 . о Лінійна зміна до -5 С, 5
Підтримка при -10 "С, 3 ГОДИН хв. години д Заповнення азотом
Лінійна зміна до -50 "С, 2 години 40 хв.
Підтримка при -50 "С, 1 год.
Завантаження 5 "С
Лінійна зміна до -10 "С, 20 хв.
Підтримка при -10 "С, 1 год. Встановлення тиску на Встановлення тиску на
Лінійна зміна до -50 "С, У 113 мТорр 113 мТорр п . о 2 години 40 хв. п , о Лінійна зміна до 30 "С, 1 й о Лінійна зміна до -157С, 0022 Підтримка при -50 "С, 1 45 ХВ год. 10 хв.
Цикл В год. Підт имка при -157С,29 Підтримка при 30 "С, 8
Лінійна зміна до -10 "С, голи р ' годин 1 год. 20 хв. ди . о Лінійна зміна до 5 "С, 30 . о Лінійна зміна до -5 С, 5
Підтримка при -10 "С, 3 ХВ. годин години Заповнення азотом
Лінійна зміна до -50 "С, 2 години 40 хв.
Підтримка при -50 "С, 1 год.
Продовження таблиці 31
Завантаження 5 С
Лінійна зміна до -10 "С, хв.
Підтримка при -10 "С, 1
Лінійна зміна до -50 С Встановлення тиску на Встановлення тиску на д "1113 мТорр 113 мТорр 2 години 40 хв. Ліній . 1526 Ліній , 302.1
Підтримка при -50 "С, 1 інійна зміна до -15 С, інійна зміна до ; 0024 год ' 45 хв. год. 10 хв.
Цикл С явне . здо Підтримка при -15 "С, 29 | Підтримка при 30 "С, бч
Лінійна зміна до -10 "С, годин Лінійна зміна до 5 "С, 30 1 год. 20 хв. о . о . о Лінійна зміна до -527С,5 |хв.
Підтримка при -10 "С, 3 годин Заповнення азотом години
Лінійна зміна до -50 "С, 2 години 40 хв.
Підтримка при -50 "С, 1 год.
Завантаження 5 70
Лінійна зміна до -10 "С, 20 хв.
Підтримка при -10 "С, 1 год. Встановлення тиску на Встановлення тиску на
Лінійна зміна до -50 "С, У 113 мТорр 2 113 мТорр пе . о години 40 хв. п , о Лінійна зміна до 30 "С, 1
Пі о Лінійна зміна до -207С,2 0025 ідтримка при -50 "С, 1 години год. 10 хв.
ЦиклО год. Підтримка при -20 "С, 103) Підтримка при 30 "С, 8
Лінійна зміна до -10 "С, дтр р ' годин години пд . е 1 год. 20 хв. у . о Лінійна зміна до 5 "С, 30 . о Лінійна зміна до -5 С, 7
Підтримка при -10 "С, 3 ХВ. год. 30 хв. години Заповнення азотом
Лінійна зміна до -50 "С, 2 години 40 хв.
Підтримка при -50 "С, 1 год.
Завантаження 5 С
Лінійна зміна до -10 "С, 20 хв.
Підтримка при -10 "С, 1 | Встановлення тиску на год. 113 мТорр Встановлення тиску на
Лінійна зміна до -50 "С, | Лінійна зміна до -20 "С, 5 | 113 мТорр 2 години 40 хв. годин Лінійна зміна до 30 "С, 6 0027 Підтримка при -50 "С, 1 |Підтримка при -20 "С, 60) год.
ЦиклЕ год. Лінійна зміна до -15 "С, З | Підтримка при 30 "С, 8
Лінійна зміна до -10 "С, | години годин 1 год. 20 хв. Підтримка при -15 "С, 31 | Лінійна зміна до 5 "С, 30
Підтримка при -10 "С, З | год. ХВ. години Лінійна зміна до -57С,9 |Заповнення азотом
Лінійна зміна до -50 "С, | годин 2 години 40 хв.
Підтримка при -50 "С, 1 год.
Продовження таблиці 31
Завантаження 5 С
Лінійна зміна до -10 "С, хв.
Підтримка при -10 "С, 1 год. . Встановлення тиску на Встановлення тиску на
Лінійна зміна до -50 "С, 113 МТО 113 мТорр 2 години 40 хв. "з мторр о Лінійна зміна до 30 "С, 1
Підтримка при -50 "С, 1 Лінійна зміна до 15 7С, год. 10 хв. ро28 45 хв. . о
Цикл А Лінійна зміна до -10 «с, | Підтримка при -15 "С, 24 ди при 1 "години пд . е год. 20 хв. у . о Лінійна зміна до 5 "С, 30
Підтримка при -10 "С, З Лінійна зміна до 75 С, 5 ХВ. годин години Заповнення азотом
Лінійна зміна до -50 "С, 2 години 40 хв.
Підтримка при -50 "С, 1 год.
Таблиця 32
Результати експериментів ліофілізації
Мо римент | (перед-ліо)| (мл)/у/флакон(и)| композиція дані відновлення і т.д) 6.18 ММ пів 166,7 мг/мл 68: 103 мг/мл! рН 5,5, | Заповнення пембро, ЩІ ме | овгомт 96; 28:03 96; 0021 З 4,32 9 сах., 2,3 мл/2Е, б, 557 М води 24 1,О0мл води - |1,Омл води - сахарозою шк РБ | ТОК флакони сах. 0,02 95| мин (170 17 хв. 28 хв. р 80 мг/мл) 166,7 мг/мл 6,2 мМ Нів, пембро, 1,04 95 сах., 42 90
ОЗ момл! ово | 23млвоті | маніту, 2 ХВ. З 0022А |з манітом/ . о 11 мл сахарозой маніту, 6К флаконах /1,68 90 сах., води 0,12 95 10 мМ Ні,
РБВО 0,02 о
РБВО
4 5 ММ Нів 166,7 мг/мл 75 мг/мл 33,15 95 сах, З.2млвовВ, | еморо, 10) 15 хв. з 00228 сахарозою 0,014 95 РО| 108. флаконах мМ Ні, 77в| 1 мл " 80 сах.,0,03 96| води
РБ5 80 166,7 мг/мл 2,32 У сах., пембро, |4хв.31,1 . о022с 7,5 МмпмлззаММ 4,34 мл в 108, 77 95 сах., 10) мл води ооо 5 що сахарозою Нів, 0,01 95|15К флаконах| мМ Ні, (131,6 флакон) рБ5 80 0,03 95 РБ-| мг/мл) 80 166,7 мг/мл Бхв. 311 1 9 Аго, пембро, МЛ води В хв. 311 МЛ Вологість 48,33 1,83 Фо сах., 497 мп в 1086 З Уо АгО, 10В води В 156 0,24 Фо (10 00220) мг/млз 3,32 ММ й "| 5,5 бо сах., . : мл флакон), сах/Агу | Нів, 0,01 95| 17 флаконах 15 ММ Нів, | флаконі флаконі (158,81 д 26 9; (15
РЗ-80 0,03 95 РБ- лит) мг/мл) |мл флаконм) 80
Продовження таблиці 32 166,7 мг/мл 1 о Ага, пембро, 10 хв. з 0022 55,3 мг/млі 3,ж32мММ /|4,34 млв15К 13595 Аг9, 10| 1,1 мл з Ага Ніб5, 0,01 95| флаконах ММ Ні, води (173 рБ5 80 0,03 95 РБ-| мг/мл) 80 хв. з 3,13 96 сах. 166,7 мг/мл| 1,2 мл )/Відновлення 1,25 75 в осях тва це фузі: ІН " о сах., ; центрифузі: е може 0024А 104 мг/мл лго. НС, 2,3млв2К 2 Чо Аго, мг/мл; з |45 хв., без розчинятися з сах./Ага 10,01 96 РО-| флаконах 25 Ра о : . 80 в 6.26 0,02 95 РБ-| 0,995 | піноутворення в метанолі " 80 в 10 мм | сольовим | (х 1000-3000
ММ Ні .
Ні5 розчином | 9) » 50 хв. 232 95 сах. 166,7 мг/мл Відновлення пембро 37 хв. з |на 1,25 75 3,7 96 сах.,| 1,2 мл | центрифузі: 104 мг/мл! А.НСЇ, 23 мл вок ; " ' |Вологість 002481 сах/Агу|0,01 95 РУ- флаконах | 25, | води, З5хв.без 027, 9 ВО в в 26 0,0295 РУ | 165,3 |піноутворення 707 " 80, 10 мМ мг/мл |/(х1000-3000
ММ Ні й
Ні о 166,7 мг/мл . о, , з пвх. пембро, 42 хв. з Відновлення
Н о о, 200 мг/мл! Аг.НСЇ, 1,24 мл в 2К 3,7 ж сах,) Т2 мл центрифузі: Не може 0о24с 2 Уо Аго, води, розчинятися з сах./Ага 0,02 96 РО-| флаконах 45 хв., без . 0,02 б5 Р5 173,7 : в метанолі 80 в 10 мМ піноутворення . 80, 8,3 ММ мг/мл
Нів Ні (х 3000 9) із 166,7 мг/мл 1,05 Фь сах., пембро, 4 хв. 40 0025А 25 мг/мл з!1,5 мМ Ніз,!10,66 мл в 15К| 7 95 сах., | сек. з 1,2 | Вологість сахарозою! 0,003 95 флаконі 0,02 95 РБ | мл води; | 0,5 95
РБ-80 80,10 мМ /183 мг/мл
Ні 166,7 мг/мл 2,10 9 сах., пембро, 2 хв. 20 00258 25 мг/мл 311,5 мМ Ні, 10,66 мл в 15К| 14 95 сах., | сек з 1,2 | Вологість сахарозою! 0,003 95 флаконі 0,02 95 РБ | мл води; | 0,4 95
РБ-80 80, 10 мМ /173 мг/мл
Ні 11 мл забраного 166,7 мг/мл б хв. 15 "розчин Я 1.47 ть сах. пембро, сек з 1,0 Шви яву; - 0027А 35 мг/мл 3з3І2,1 мМ Ніх,! б,вмлв15К | 7 95 сах., мл во Й Вологість може сахарозою| 0,004 95 флаконах |0,02 95 РБ5 д 0,17 95 ДУ (189 повільна з 3-
РБ-80 80,10 мМ
Нів мг/мл) мл шприцем, оснащеним голкою 2705 15"
Продовження таблиці 32 11 мл забраного 166,7 мг/мл | через шприц о 4 хв. 20 |Вологість розчину; 1,05 55 сах, пембро, | сек. 31,0001695(158 | швидкість - 00278 25 мг/мл з!1,5 мМ Ніх,! 9,5 млв15Кі | 7 95 сах., мл во Й флакон); може сах. 0,00395 |202 флаконах | 0,02 95 Р5 д ! ДУ (194 10,1495(208 |повільна с 3-
РБ-80 80,10 мМ
Нів мг/мл) | флакон) мл шприцем, оснащеним голкою 2705 1"
Об'єм забраного через шприц 1,454 95 166,7 мг/мл) 5 хв, 20 ОР, З-мл сах., 2,07 пембро, | сек, 31,2 шприця27С 35 мг/мл з п 6б,вмлв15К| 7 95 сах., І "7 |Вологість " 0028А ММ Нів, мл води 0,5" голка сах. флаконах 0,02 95 Р5- 0,60 95 с 0,004 95 (166 (мл) - 1,3 80 в 10 мМ
РБ5-80 Ні мг/мл) мл (Помічений об'єм-1,2 мл
Об'єм забраного через шприц 1,04. 95 сах., ембро 6 хв. 15 ОР, З-мл мг/мл з 1,48 ММ 960 млв20Е) 7 95 сах., сек. з 1,2 Вологість шприц ч215 ро2гвв Нів, мл води 0,5" голка сах. флаконах 0,02 95 Р5- 0,85 95 с 0,003 95 (165 (мл) - 1,3 80 в 10 мМ
РБ-80 Ні мг/мл) мл (Помічений об'єм-1,2 мл)
Об'єм забраного через шприц
ОР, З-мл 0,623 95 166,7 мг/мл) 5 хв, 10 шприц х276
Агд, 2,07 пембро, / сек, 31,2 0,5" голка мг/мл з 1 б, /вмлв15К| З 95Аго, І "7 |Вологість чн ро2гвс ММ Нів, мл води (мл) - 1,3
Ага.НСЇ флаконах |/|0,02 95 Р5- 0,81 95 0,0042 Фо (169 мл 80 в 10 мМ . -
РБ-80 Ні мг/мл) (Помічений об'єм-1,2 мл); легше заповнити шприц
І
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» МехсЕ 5Зпахр 5 БбБопште Сохр.
Впатгшта, Мапої Кк.
Веплаштій, Мету
Містві, Захієв
Ваваткат, Авідчіх завасткЕат, БМ
Мажкавішрапй, Спактахтуах:нву Маса
Казнпі, Кашевн 8.
Зпатестмй, Мой ситаєсі
Впаєсаспахуа, Войтепоаий
Бокхав'ї, Мі1ііїіат р. «1202 СТАБІЛЬНІ КОМПОЗИЦІЇ АНТИТІЛ ДО РЕЦЕПТОРА ПРОГРАМОВАНОЇ
ЗАГИБЕЛІ 1 (8-1 І СЛОСОБИ ЇХ ЗАСТОСУВАННЯ «1302 2а438-М0-ВСт «1502 ПВ Б5РИ5О,СІВ «1515 2017-05-07 «150» за «70» Раїевсїп Уузхвіовп 3.5 «гі» 1 «2115 15 «вір» Білок «2137 Штвтучна послідовність «ух «223» сСІщ1і лешккого ланцюга пемеролізумаву «4005 1
Ахч Аїа беї Був сіу Чаї бек ТПпхт бпеї б1у Тух бЗех Тук ГПем Нів і 5 10 15 «гі» «112 7 «вій» Білок «віз» Штучна послідовність «Ох «23» СОКо леткого ланиюга пеморолізумабу «3005 2 їеа Аіа бек ТУужк їТви біц бек ї 5 «2105 3 «11» 9 «812» Білок «із» Штучна послідовність «202 «вах СрВ3 лЕєгкого ланкцюра пембролізумабу «800 З з дк бів Нів бех Акад Аво Бей Рхо Бей ТВкх 1 5 «-2105 4 «в11з 111 «212» Білок «213» Штучна послідовність «се» «222» варіабельна ділянка легкого ланцюга пеморолізумабу «по» 4 біб Тіз Уді Се ТБ о біп обЗек Рко Аза ТБ о беб бак оїей бек о рро сіу 1 З 16 15 спін Ах Аза ТВх бей Бех Сув Аку діа Бех Буз зіу Маї БВех ТВх 52 29 25 30 сСіу Тук Беї Тук Бей Ніз ТІр Тух бЗіп біп був Рто сіу співр; Азїа Рто 35 40 45
Аку Тец Гей Тіє Тук тей діда бек ТУух Гм о біц беї б5іУу Уаії Ркро Аїд 50 55 о
Ак Впе бек сіу бек б1іу бек біу Тйх Авр Ре Тбх Тез Ту їІ16е бек то 75 ВО бех Бец бій Рхо 21 Агро оББбе А1а Заії Тух Тух Суд біп Нів бах Ах5 зо 5
Авропей Ркбо Пец Тк Ре сіу піу біу ТВх Пул УМаї сій ТІзле Гуз 100 105 115 «ш13» 5 «2115 8218 «2129 Білок «2132 Штучна послідовність «220» «2Е3» Леркий ланцюг пембролізумабу «400» У 5165 тів Уві Сер о ТПк біб бек Рко діа ТБбкоїєбв бек о Теюй бех Рко бі1у 1 а 18 15 січ Ату Аза ТВжх Бпец о бет Сув Ак Аів бет Бул біу Уві Зежх Тіх Бак 2 25 30
Шк біу Тук Веїг Тук Ген Ні Тур Тухк сб1п сіп Був Рто 51у сб1п Аа Рго з5 40 45
Аха їец бе ї1е ТУж Тецп Аіва Бек тую Бе сСіп бЗех бі Уді Рко лід ай 55 во
Ах РрПе бет с1у бек Ту бек б51іу РБК о АзрорРпе Тих Бей Тк її Зех
То 75 во
Зак бе бій Рхо бій Авр о Райз ваза уві Ту Тух Сузв с10 Нів беж Аха 5 за 5
Азр о гей Бко без ТбБу Рпе біу бБіу Сіу ТП був Уаї 515 11з Буз Ах ї1пба 1052 119
Тих о Маі Аїа Аза рРго Бак Уаї Раз тТ1єе РБе Рко Бко бек Азр о сій піп 115 129 125 ів о гйув бек О1у Тих Аа Бех Уа! Уві Суд Тер Бей Аво Авп опе Тук 135 135 149 хо Ака сій АтТа пув уві сій тжропуз Уві вар Ав о Аївя опей бів важ 145 159 155 1650 сіу АвпоЗек сіп обі Бек Уві Тк Сі 515 АвроЗех Бу Азр о бек Тих 165 170 175
Тух Ззж Гей беї Бек ТВх Бези Тйх Пец бек Гуз Аза АзротУЮ 010 Буз ї15о 155 ї7ва
Нів їуз Маі1і Тух Аіа Сув біб Хаї Твх Нів іп біу вий бдехї беї Ро 155 200 235 таї Тих бук о Веї Впе Авв о Ака біу біз був 210 215 «210» в 112 5 св12з Білок «13 Штучна послідовність «вах «23» срВі важкосго ланцюга пембролізумабу «ОО» 6
Аза) отУух Тук Меї Тух
1 5 «210 7 «2115 1ї17 «212» Білок «13» Штучна послідовність «ау» «223» сСЮрво важкорго ланцюга пембролізумаву «4005 7 зіУу Т1іє Азп о Рко бек Авп о піу 51У ТЬБЕ АзпоРБе Авп осі Бев РБе Буз ї 5 15 15
Ав «2105 85 «2115 11 «Бк1Х» Білок «12» Штучна послідовність «32» ат «2225 сСрв2 важкого ланцюга пеморопізумаву «а» 8
Акач Азр оТук Аку ББпе Азр Мехї о1у Ріє Азоротух 1 В 10 «100» а «7112 150 «212 Білок «2132 Штучма послідовність «раО» «223» Варіабельна ділянка вазжкоїто ланцюга пембролізумабу «айох о біп Уаі сіп бец ба1 б1п беж с1уУу Уві бій Уаії був Був Ро біу Аїа ї 5 19 15 пеї Чаї йув Уді Беж сСув Був А1а бек біу Тух Тпх Рлпе Тпжх АвпоТуУук 25 Зо
Тух Меї Тух Тжр о Уаї Ах бів Аза Ро біу зів біу їеи біз Ткр Меб бі сіу Ті АвпоБкКо Бек Авіпобзіу біу Тих Авп о Ре Авв обід Гуз Рпе
БО 5 о
Туз АвпоАка Маії ТВт Тец Тахо Тахо Азробет бет Таж ТПЕ ТВжх Ата Тук 55 78 78 во
Ммеї сів Тем був Бех цес йіп Ре АзроАзр Так Азїва ді Тух Тук Суд 55 Зо зу
Азїа Аку Ак Аво Тук Ака РАпз Авр о Меї бі Ре Авр Тут Ткр біу сіп 109 105 119 піу тах Тих Уві ТБк оУді Бех бах 115 т2о «2105 10 «а1ї1х 447 «2122 Білок «Рі1З» Штучна послідовність «ро» «23» Важкого ланцюга пеморолізумабу «400» 10 сіп Уаї бід Тед баї біб о бех бЗіу Уаї бій Уві Гу Був Рко бБіу Аів 1 З 19 15 бек Маї Був Уаї бек Сув ПЦув Аза бек сіу Тух Тлпх Рпе ТВх Азп о Тук о 25 30 тук Мес Тух Ткр Уафї Ахко сів Атїа Рто б1у біп біу Бе біз Ткр Меє сіу сіу 11е Авп о Рго бех АвпобіуУу біУу Ту Ап оВпе Ави сій Був Ре 5 5О
Гуз Авп о Ага Уаії ТВБх Гео Тс Тв вар о бех бетк ТЕ Таж ТІ Аза Туг 7 78 Во
Меї б5іц пем Ппув беї Пед сій Ре Вар Авр ТБх від Маї Тух Тух Сув 55 зо зу
Ара Аг Ако АвБротук АкЯа Рае Адр о Меї бі Рпе Авр о ТтТуг Тер біу с1п 100 105 119 51у Тах Тих Уаї Тис Уві Бех Бех Аіа Бех Тпх Пув біу Рко Бех Чаї 115 189 125
Ре Рхо Тен Аіа Рхо Сув бек Ага Зежк ТАх бех Сі бех Тву Аза дів е 139 135 140 їв Бі Сув Ме Заї Був АвроТук Рпе Рко спів Ржо Уа1ї твх о баі Бех 145 153 155 165
Ткр Ап о бек о сї1у Аіа пейп Тахо Зех біу хаї нія тах Бе вхо Аза Уаї1ї їе5 170 175 їз бій ех бек піу Ппез о Тук беж ей Бех бек Уді Маї тах чаї Бо їво 185 155
Зетк бег Бех бий сім Тахо Був ТБЕ Тухк Тр о Сув АвнпоУаї Авр о Ній Гу 135 290 205
Рко Бех Азо Тахо Ббуз Уа1ї Авр опув ка уві бічш бек був Тук бОіу РКО 218 215 220
Ро сСув рго Рто був Рко Аза Рто біз Ре ГБец спіу біу Рко Бех Уді 225 230 238 249 впге пбем Рпе гко Рхо Буш ВРхо Буд Азор Тк Бей Меї Ті Зек Акоа ТОПх 2дь 250 255
Ехо біз Уві Тих Сув УМаі Уві Уаї Авр Маії Бех бів бій Авр о Рко сій ба 265 270 чаї біп Бе Азо Ткротух Уві Авр обі 7аї біц уві Ніз Аво Аза Ту 215 Во Я
ТЕ Був Рко Ака спів бій О1п РБе Азп одеї Трпг о Тух Ака Уві баі Бех ва ха 00
УМаї Печ Тих Уві Гей Нів бів Ар оТІр о Бем Авпобіу ТКув Офіц Ту ПУ 305 310 315 329
Сув ув Уа1ї Вех Ав о пбуз сіу Бейпобко Бех бек Ії біз ТУв Те ї1їе 325 330 335 ек ув Аза Буз БіУу біб Рко Аха сій Рхо бід Заї ТтТух ТВЕ Бей ко
За 345 355
Рго Зек ств бій бід Меє ТБк був Азпобіп Уві бЗеїх ГПей ТБЕ Сув Гей 335 350 зп5 чУаі Був Б01у Рпе Тух Рко Бех Азр І12е Аїа Уві біз Тхр» біз бек Ава ато 375 80 сіу бів Бко бій Ав оАвиа Тух Був ТБх ТБх о Бко Рко Уа1і їТец Авр Бех 385 зо зах або
Авросіу Бек Ре РНе ГБГез Тут беїт Аку Бей Тл Уві Аяр Гуля бех Ага 495 410 415 їхр зіп біз біу Авв баї Бе бек Сув бех уаї Меї Піз сій Аза Бец 42 4325 439
Нів Азп о Нівз Тух ТБж Сів Ппуз бЗех ТГецй бек Гц бЗеб пец с1у Був 435 440 345 «107 1 «ві 11 «2122 Білож «92137 Ноюто варієпа «по» 11
Ак дів бек біп бех Уаії Бех Зек Тук цей Аіїа 1 З 15 «10 012 «21125 7 «812» Білок «2135 Ното зарієпв «а00з 18
Авр Аза Бек Авп АкаЯЧ Аза Тпх чл с, -- - «210» 13 «11 З «Р12» Білок «213» Ното зарівпа «4002 13 біп бій дех Яеї АвпотТкр о рко Ак ТЕ 1 З «10 14 «и» 107 «8129 Білож «віз» Ново зарієцпв «4007 14 -ій Ті Уві Гез Тих біп бек Рхо Аза Тих Пец бех Пей бек Рто сбіу
1 в 16 15 лів Аху Аза Тих о їмчх Бех Су Аг Аза Беж п1й бок Маї бех Беж ТуУух ів Аїа Ткр Тух бів біп був Рго пб1іу біп іа Ркго Ах Пец гей 11е
Тух Авр Аза Бех Авп о Акоа Атїа топос б1у 11 Рко Віз АкЗ Рпе бек б1у
Зо 55 50
Бех біу деї сіу Трх авр Ріпа Тпх Бей Тіжх ї12е бек деїх Ппейп бій Рко 55 70 78 ВО січ Аво Ре Аїа чаї Тук Тук Сув біп о біп бек Бех Авп о тТЕр вхо АКЕЗ 35 зо з5
ТВх вБбе сіу сіп б1іу Тбх пув Мал спі) Т1іе Ппуз 160 165 «210» 15 «2115 714 «вій» Білок «2132 Ното варівцпв «400 5 шщів їїе 7аі бзи ТВх сів Бех Рко Аза Тпх бей оба Бей бЗех рко щіуУ 1 5 10 15 січ Ахз Аза Ти оїей бек о Сув Ахо АЗїа бек бів Беб Уаї Бек Зек Тух 20 25 36 іївв Аза Ткр Тук біп о біп Туя Ртго пі бій Аза Рго Ак Пцев о бе т1в з 40 45
ТуУук Авр Аа бак Авп о Аку Віа ТВхт піУ Т1іе гко діа Аха пе бек щіУу
БО
Бех 51іУу ех сіу ТИХ Авр о РБе тлх Тео Тк ї11їе беж Бех пев оба Бко 55 то 75 Во піц Ар о Ре Аїа Уві Тух тую Су5 спів бій Бех Бех Ав Тер Рко Акс 25 зо з5
ТЕ о вВбе с1у сіп біу ТВх пуз Маї сій Ті уз Ака тож Уві Аза Аїа 109 105 110
З
Рхо бек Уді Бпе Т1ів Рре Рко Рко Ве Азробіз бій Гей Зуз бек біх 115 1950 125
Тех Аіїа бек Уві Уві Сув Тед Бей Азп о Авп о Ра Тух Рто Ако січ Аїд 130 135 140
ТГув Ууді сіп Тгр обу Уаі Азр Азп о Афа Бецп сіп бек 51у Азп бех сіп 145 150 155 160 бі Бех Уві Тк обі біп Авробек Тув Авр бех Тіпжх Ту бек Гей бек 155 170 175
Бех Тк Без ТБЕ Тейп о бех ТУ Аїа АзвроТух бій Бу Нія Ппувз За1ї Тук 189 185 195
Азїа сСув сій баї ТВжЖ ня сів сіу Тео йдех Вех Рко Маї Так оБув Бех їз 280 205
Ре Аза Ако біуУу бій Сув 219 «дрій» 16 «й1із 5 «вір БіножЖ «віз» Ното варієнпа «400з 16
АзпоБех С1іу Меї нів 1 З чій» 17 «й11х 17 «12» Білок «9518 Нощо зарієпз «або» 17
УуУа1ї ї1і2з Ткр Тухк АвробіУу бах пув Ака ТУК Тух Аза Азр бек Уві Пуз 1 5 15 15 сту «2102 15 «1ї» 4 «ВІ» Білок «813» Ново зарівпа
«400» 18
АвпоАво Авр о ТУух
ТЕ й «210» 15 «211» 113 «вій» Білок че13» Бошжо заріепв «об» 18 віп Уві спіл їжи Уаї бій бек біуУу біу б5іуУу Маї УУаї бів ко пі1у Ако і 5 10 ї5 век пса АкЧЯ Бей АвроСув Бу Аза Бех бі1У Т1е ТПпк Ре Бек Авап бек го 25 зо сС1у Мет Нів Тхтр Уві Ака біп Аза Рхо спіу рух біу Бей бій Ткр Чаї ді ЧУаї ті1є Т ТУ да піч Бех пу Ахоа Тух ту А1вй де Зехк Ууді еїа ча хїе їкхр ут авр слу зех пух ва лук стеух вів двроекуи о 5У бо
ТУв бі Аку Рбпе Так ї16є бехт Ажу АзроАвп беж Був Ай о тТВк Бей Рпе ва 70 ть 59
Гевцдобпів Меї Ап обех Геч Ака А1Зїа біб Аво Тк Аза Уаі ТУЮ ТуУую Суд 85 за з5 ла тТвх Авп о Авзр о Авр о Тук Тгр б5іу б1іп бі Тпх їеч Уві Тк оООві бех
Аїа Тву Ак зр Авр Тук Тер У в) У ТПжЕх Бец У ПЕ У Бе 109 105 119 вак «2105 529 «211 440 «2122 Білок «2135 Ното зарієпв «4005 щ г0 сіп Уві сбіп Бей уві бій бек біу Б1у біу Уаї Уві бів Рхо б1у АкФ 1 5 10 15 зек пе Ак Ппейп Азр о Сув Ппув Аза ех спіу Те Тпх Ре бек Ано о Бех о 25 30 и сіУу Меб Нів Ткр ба) Аку бів Аїва Рко бі Був бім Без сім Тр оуавї
Аза чаї ї1їе Тур Тух Авр о сіу ек був АкчЧ ТУух Тух Аза зво баг Уаї 5О 55 БО їуз сіУу Ак Рбе ТП 118 Бех АК АЗр о Авп обех Був Авпп Твж Гей Рвпе 70 75 86 їесп бій Мет Авх Бех івц Аха Аза бів АвротТахс Аза Чаї Тух Тук Сув 55 за 55
Аза Так Авп о АвроАвроТує Ткрозіу біб піу Ту Твиз Уаї Тк Улі ех та9 195 110 зек Аїз бек Тк о ГПуз СТУ Рко Бех Уаї Бпе Рго Пец Аза Рко Суз Бех 115 120 125
Ах Бех ТБбх бЗех 5Бій бек ТЬБх Аза Аза Кеп обіу Сув Без Уаї був Адр 130 135 148
ТУЮ Рпе Рго 01 Рго Ууаї Ту мМмаї бех Тхр АвпобБах сіу Аа ей ТЕ 145 150 155 150
Зек б51у Ма1ї Ні ТВу Рпе Рекс Аза баї Без бір бВех бех біу цей Тук 155 1709 175
Зак Те бег бек Уаі Уаі Ту Уді Ржхо беї бетїх бек Без біу ТІ Був 189 155 150
ТВЕ Тук Тк Сув Авп оУуаї АвроНів Був Рхо Бех Авп о Типх був Уді Авр 185 оо 28
Туз Аху Заї бій бек Був Тую біу Рео Ро Суз Рхо Рхо Сух Рго діа 216 215 229
Рхо сів Ре цер» 51 019 рхо Бех Уві Ре фев бе Рко Ро Буз РЖо да 230 235 кВ їУув Авр ТЕ Пец Меї Т1є бек бку3у8 Тахо Бго січ таї Ту Сувз Уаї Уаї 245 250 255
Уаї йзр Уаї Бек 510 014 АвроВко бід баї сіп РБе Аво ТКюЮ о ТУух Уа во пбО 270
Авообіу уаї біз баії Ніз Азп Аза був ТВх о Пбуз Рхто Аха сіб 01: бів 2 НО 28
Ре Ап обеїх ТБу Тут Ака Узі Уа! беж Уві Тецп Так Уві Пец Нів бів 2 50 235 300
Авр о Ткр їем Ав о біу Ппуз 11 Тук Був Су Пух Уаї Бек Ап Ту біш зо 310 315 320 іви Рко бек беж ї1е 51) Був ТПх Ті Бех Муз Аза Пув б1у біп Ко 325 Зо зз5
Ажса зій Рго сів Уаї Тую Ту ГПпец Рко Рко бек біз зі сім Меб ТпЕ 340 345 350 їПузв Авпобіп Уа1) бек Пец Ту Сув їецй Узі пу СІ1у РБе Тух Рко век 355 360 365
Ар тів Аза Уаї бід Тер біш бах Авп обіуУу сіп Рко біз Авп о Авп о Тукх аа 375 380
Буз ТБті Тих Рко Рко чаї Гей Авор бех Авросіу Бех Рпе Рпе їТецй Тук 385 за з85 300
Бех Аха йем Тк оУав Авр Пуз бек Ака Тгросій сів ша.у Азп Уві РБре 425 410 315
Зег Сув Бех Уаї Меєс Нів бій АТїа пец Нів Ап о Ній Тук Твж сів Гув да 425 4539
Бек Бей Чех Пец Бех їец бі Буз аз 440 «віз 1 «гії» 18 «2152 Білок «813» Штучна послідовність «20 «ва» спі легкого ланцюга ПРОТ. ОВА «4005 21
Ака Аза бек Був Бех Уді бек ТЕпк бек 51у РБе бех Тухк бїецй Нів 1 З 13 15 «2105 28 «х117У 7
І
«8512» Білок «13» Штучна послідовність «вгах «23? СсОво легкого ланцюга ВРЕЮ-1.О05А «ад» 29
Іва Аіва Бех Авп Пец біц бек 1 тк 1 5 «вій» 95 «211 З «122 Білок «213» Штучна послідовність сего» «83» сСОвЗ легкоїго ланнюга пПРО-1. ОА «ап» 23 біп Бі бек Ткр Сб10б їеб Рко Бец ТЕ з в сій» 24 «лі» 5 «212» Білок «2і13М Штучна послідовність туги бювет ит сжкг3» ПОКАІЇ важкого ланцюга пРЕО-1, ПА «400» га зех Тук ТУух Гецй Тух 1 З «рій» 25 «21» 17 «122» Білок «213» Шетузна послідовність «ВО» «й23» СрВо важкого ланнюга ВПРЕО-1.08А «4005 25 сЗіу Маі Авпобхо Бех Аза о сіу б1У Тпх Аза Рпе бек бі Ббуз Рре був 1 5 19 15 зех «210» 25 «12 11 «212» Білок «213» Штучна послідовність
«Ех сийЗих СПО важкого ланиюра прРІ-1,0О8А «400х 96
Аксч Авр обеж Аж Тух Азр о о1у пі Ре Азр о Тух 1 З о «і 87 «ії» 170 «Кі» Білок «сті» Штучна послідовність «ки «223» Взріздельна ділянка важкоро ланцюта БПІ1ОЗА «ох 27 біп "аї біп Без баї бі Бех біу Уаїі б5зій Майї ПУ Був Рко щБіу Аід 1 З 10 15
Бак туаї Буг ЧЧаі1і Веж Суя Був дія Вед зіу Ту ТВк РЕ Так АвпоТтТух 2 25 19
Тух Майї ТУк Тер Уві дкуо сів дів Рко 519 бів 515 без біс Ткрр о Мес 35 40 45 біу бі іє Авп о РКО век Ай бі б1Уу ТпЕ Ази овлпе Авпо бій Буш Епе 50 55 БО
Був Авп оАху Заї Трек овен Тпх Трх о АвробБех беж Тк Тв ТйЕ Аїа Тук 70 75 о
Ммеє сій рей Був Зек Белз бій вне бзр оАяр ТВ діва Уві Тух ТУух Сув ва зо З5
АЗїа Ака4 Аа АвроТУукю Ажа Рів Ар Меб спіу Ре АвроТух Тр сту пій 100 105 115 сіу ТБ ТпЕ Уаї ТВпх Уві беж Бех 120 «10» 8 «115 1 «ій» Білок «вії» Шоучна послідовність «йо» «223» ВБарізбельная ділявка легкото ланцюга КОЗА ів «4100 8 сі їі Уві Бей ТВ бій дек Рхо Аза ТВ Геац бек Бей бек Рго б1Уу 1 З 15 15 бі Актч А1а ТВ Пел бект Сув Ахо Аза бех їув піу Маї Бех ТЬх Бек піу Тую Вег Тук бе Нія ТЕжр о Тук бів бів пуд ро бі піп Азв Рго
АхЧч Бей оїйез Т16 Тух Тецч Аїа бек Тух Бей січ Зег бі Уаї Рго Аїа
Зо 55 БО
Ах вне бек о сіу Бех сіу бежю біу ТО о Азвр Ре Тр о бе ТВ Ті ех 70 75 50 бЗех Бей біц Рго 5010 Аво Ре А1іа уаі ТУук Тух Суз бір) Нів Бетї Ак 85 зо з5
Авр Бей Рхо Те ТтТпк Рпе біу бсіу Сіу ТОпх Пух баі бі Тіє Був 100 105 110 «і10х 25 «211» 1 «812» Білок «213з Штучна послідовність «ср «223» Варіабельная ділянка легкого ланцюга КОЗА «400» 25 сі Тіз Уві бен Тахо сій беїх Рко ївп Бех Тецч Ро Уаї ТБІі Рко бі 1 5 10 15 сій Рхо Аза Бек ї1в бех Суз Агу Аіз бех Гуг біу За1ї бек ТпЕ Бех 2 25 30 с1іу Тук бек Тук Гео Нів Ткр Тух їви о сбіп Пуз Ро біУу біп Бех РЕго 35 40 45 біпобей цей Ї1їе тує Пец А1Зіа бех ТУух Без бів бек о сіу Уві БКго дво зо 55 ГІ
Акоа Бпе бех сі дек біУу бек сіУу Твх о АкроБпе ТБк о Пец Був Т1іє бек 55 то та Що ко оЗаї піз Азта бі Авор ові біу уві ТуУую Тк Сув Сіп Нів бек Ака 85 за 5
Авзр реч Роб Пе ТП Бе с01у сів б1Уу Тк Був Ппей бін ті Був 1059 155 110 «21005 30 «2115 1311 «212» Білок «2139 Штучна послідовність «22О» «2232 Варіабельная ділянка легкого ланцюга КОЗА «430» 30 ввр тів Уві Меї Тато біп Тс Рхо КГеч бек Тез Рто Уаї ТВх Рко б5іУ 1 5 10 15 іч Еко Аза Бех ІТіє Бек Су Ако АЗіа Бек Ппуз біу Уаії Зекх ТрЕ Бех го 25 зо сіУу Тухк Бех Тух Гей Нів Ткр Тух Гевц бів пув Рго 51у бій) Бек РкЕо біпобец Пей Ге Тук Пед Аза Бех Тух Пейп сі Бех біУу Уді Рко зр о 55 5
Ах Рпе бехї сіу бек сі бек обіу ТпбК Аза Ре Тих Бей Буб5 Т1е Ббег 7а 75 по
Ага Уаї біз Атїа біп АзвоУді бі Пец Тухк Тух Суз Зіп Нів Бек Аху
З ЗИ З
Авробем Рхко Гезч Тпх Ра біу біп 51у ТБк Муз їй Зі Т1е Пув 1050 105 110 «2105 31 ч«шіїз 447 «2812» Білов «213» Штучна послідовність «220 чо23» леккого ланцюга зрілого 409 «Зо» 21 сіп Уаїі біп цеб Уві сіп бек біу уа1ї біз Уаї Ппуз Буд Рко сіуУу вів 1 5 19 15 зек Уа пу Уаії Бек сСув Був Аза дек сіу Тух Тк вПпе Тах АвпоТук
Зо
Тук Меї Тух Ткір Уаі Акоа біп Аза Рко біу біп осбіУу Бей бій Тхр Мех 1у 51у жів Ап Ко Бех Авп осі б1у ТБЖ Азп Ре Авпобін пух РБе
Зо 55 50 їУув Авп о Аку Уві ТВ Тева ТБж о ТтТпк Авробех бек ТП ТБ о ТвК Аа Тук 65 79 75 Во
Меї сій бе) був Вет БГевиа бір Ре Авєр о АвроТвт Акта ві Тух Тухк Суд 85 зо З
Аїа Аха Ага Ав Тут Ако Рів Авр о Мак о б5іУу Ре АзроТук Ткр сі бій 100 105 116 сіу ТВх Тпх Маї ТП о Ууді Бех Бех Аза бек Тйхк Пув біу Рго Бех Уві 115 120 1275
Рпе хо Пе Аза Ркро Сув Бех Ахко бек Ти беж бій Бех Тих Аіа А1а 1390 135 140 іви 5іу був Гей Таї Був АвротТук Ре Ро біч Бхо Уві ТБт Уаі Бек 145 155 155 155
Тер о Азп одех б51у А1яа Тец Тих Бех п1у Ма1і Нів ТЬБу Ріє Рхо Аза Уаї1 165 179 175 іти бів бек бах п1у їевем о Тук Бех Теп Зег Веж Уві Уві ТОВ Чаї Рко 150 185 120
Зек бат Явт Іец бі Тип оБух Тпж Тут ТВу Суз Авп оМаї Авр о Нія Буд 1935 200 205
Рко Бек Авп Тпх Сув Ма1ї Авробуз Ака Уві Сів бек Гуз Тух ШІ1Уу РКО 21 215 о
Еко Сув Рго Рхо пув ко Аза Рко біз РБе тец обіУу Зі Рго бех Уді ши 230 235 240
Епе пед Рпе Рхо Ріо Був Рко Був АвроТвах Тен Меб І1е Беж Ах ТЕХ 245 250 255
Рго сів Уаі Тк Сув Уаї Уві сві Авр Чаї бех сіп сій АвроБбкго 01
Бо 255 та
Чаї біп Ре Ах Тур ТУук Уві Авр о біу Маї сіц Уві Нів АвпоАзїа Був 275 28 ся тах був Рхо Ак бід біз біп РБе Ап обеї ТІ туї Ак УУа1ї Маї Бех 239 285 390
Уаї Пев Так оУді пеа Чі бів ар оТкробец Авпосіу Ббуз спів Тук ПСув за5 319 315 зай
Суд пув Маї Вежк Авп о ПУ біу їбей ро бЗех бех Ті сій Був Тк тів 325 350 335
Зах пув Аза Був сіу біб Ро Аг біо Ро сіп Уа) Ту ТВ Пец рко 340 з45 за
Рхо бек бій бій біб Ме Ту Був Авпобів баї бех Бей ТртІ Сув ГБец 355 360 365
Уа пув біУу Ве Тук Рко Зех Авр Ті Аіа Уаії сій ТЕкр о сій бек Аза 370 27 ЗВО біУу сіп о Бко бід Азова тТУхХ БПув Тк Тих Рхо Рко Уаї Те йвр о бек 385 330 395 дай
Азросіу Бех Рпе Рпе їез Тух бек Ак Гей ТІ Уді Авр о ГБуз бек АкКоа 405 415 415
Теросів бій біУу АвпоУаії Ве бек Сув Вех Уві Меїб Нівз спі) Ата Гей 42 455 аз
Ніаз АзпоНія Туї Тк обі Був Бек їзи деїх ев беж Ге сіу Буд 455 440 445 «2105 35 «2112» 218 «212» Білок «213» Штучна послідовність «дО «223» ПЛегкий ланцюг зріпово КОЗА «ай» 32 бій тТіе Уаї Бай о ТБт сів бах Рхо Афа ТпПк обей бех Бей бек о Бго Біу 1 З 10 15
1 Ак Аза ТІ Бел обех Сув Аку Аід йдеї ув біу Уаї Бех ТПк бек й 25 30
ЗіуУу Тухк Бек Тух Бем Ніз Ткр Тух Сіп біп уз Рго сіу бій Аїа Рко
Ага Ппей ої ф1ісе Тук їемд Аза Бех ТУхХ Гей бі) Зех біу Уз1Ї Ро Аза во з 50
Ахо Впе о бех сіу бек бБіу Бех біу ТвжЖ АвороББе ТБх Пец ТБх тів Бех 05 то 75 30 бек їен о біц Рго біз Авр оба Лів тЗаї Туг Тут Сувз СсСіп Нія Ббег Ахо 85 Зо За
Авропеиз Бо Бей ТО вве о сіу піу сіу Тахо їув Уайї піб ТїфТе Пув Акд
Е З У У у у З іп 125 119
Тих Уві Аза від Рхто бек Уві Різ ТІ1їе БПпПе Рхо Рхо бдеї Авр обіц Біб
ТІ 120 125 іїіви Був бек С1у ТВБк Аза дек о Уаї Уаї Сув Бей Бей АвпоАвпоБНе Туг 1595 1535 149
Різ АкЯч сів діа пуз Узі бів Тхо Був Уаї АВвр Ап Аза Гезч бів бер 145 150 55 159 біу Авзп обех піп 5іц бек Уаї ТВх бСіп пів Авробех Був Азр обет ТЕХ 155 170 175
ТУук Бех Пец Бех бек Тпх Тен Ті Те Бех ГПУув Аза АзроТуюк сів Був 180 185 18
Нів Пуз Уаі Тух Аза Суз біц Уа1ї ТВі Нів біп о біу Бей бек бек Рхо 195 2па 295
Ууаї Тех о Гув бек Ре Ап о Ага бі бі Сув 210 215 «10» 33 «211» 218 «212» Білок «піз» Штучна послідовність «йо
«ВЗ» Легкий ланцюг зрілого КОЗА «поз 33 піп Т1іе Маї їео ТБтІ бій бех Рхо їец бек ву ро Уаїф ТБх Рко б51у 1 5 10 15 бій Ро Аза беї ї116 бек Су АкФ Аїд ех Ццув піу уаї Бей Тпж Бех го 25 39 сіу Тук Бех Тук Пец Нів Ттр Тух Гей біп Був Бкго біу с21в бек РКО йо 45 біп Бей пец ІіФ Тух Тер Аза бек Тук БГец сій бек бі» Уаі1і Рко Авр
БО 55 во
Аква Епе бБеї сіу бек б1Уу Бек бі ТБжЖ Азо Ре ТпПтгоїбей Туз біс Бех то 75 во
Ака Уві сзічз Аза бів Авр оуа1і бі Уаії Тух Тух Сув біб Ні Бех Ако 85 зо з5
Авр о Ббец рРхто йец Тв пе б1Уу біп біУу ТВхІ Тїув ви 512 Те Був Ако 190 105 119
ТпІ Маі Аза Аіа Рко Бех Заіїі РБе Іїіе РБе Рко Рхо Бех Авр о біц бід 115 т7о 175
Бай ув ех спіу ТВх Аза бЗзеж Уа1ї Уві Суз лей цей Аво Ав о рле ТУух 150 135 140
Рко Ака бій Аза Ппув Уаі Стів Ттр о пуз Заї Авр о Авпп о АТа пец біп Бек 145 150 155 ї5о 519 Авг бех біп обід бек Узі Так о біч біп Азр обех Був Авкр беж ТЕХ 1655 170 175
Тук Бех Бей бех Бек Тк оїйецй ТК оБец бех Ццувз діа Авр оТут бій Був 159 185 159 нів ув Уві Туїх Аїа Суз Біб Уа1ї ТЕ Ніз біп сСіу Гей; бежї бек Рхто 135 209 285
Ууаї тах йпуз Бех РКБе Азоп Ак бі бій був 510 215
«Рій» 38 «211» 218 к«Рі1р» Білок «213» Шесучна послідовність «Ох «223» Легкий ланцюг зрілого КОЗА «4002» 54
Авр'тіїів ді Ме ТПпк о біп Тпх Рго Бей о беї Бец Ро Уаї Тпх Рхто б5іу 1 5 18 15 сіп Рго Аза бек І1іе 5ег Суз Ак Аіда бер Бух біу Уаї Мек Тау Бак го 28 зо сіу ТУук беж Тухкх Бйец Нів Тгр оТух без бів уз ро сіу бід бех рРхо бік гей ви Т1їе ТУуЄ Бей Аіва Бех ТУук Пе біч бех б5іУу таї Рко Авр
Зо 55 аб
Ака РБпе бек біу бек б5іу Бек біу Тпх АтТа Рпе Тпх Пец бук Ті Бек 7 ту о
Аха чаї Бі Аїа сій Авнр о уві б1іу Гец Тує Тух Сув сів Нік бех Ак 85 зо ав
Азр о їви Рхо Гей Тр Рів обіу сів БіУу Тахо був Тейп бід тів пу Аха 100 105 110
Тих Уаї Аза А1а Рко бБех Уаії Ре ІїТ1є Рпе Рго Рхо Бех Авр о сій біз 115 1830 155
Тева бСуз бек б5БІ1У Тк Ака бек Уві Уаії Сув Гей Тїец Авц! дай Ре Тук 132 135 140
Рхо Ага 513 Аїа Був Уаї сів ТхроБбув Уві Авр о Ав діа Тео бір бек 125 159 155 165 сіу Авоп оЗех бів біз бех Маї ТВх о БіЗ о лів Авробех ТУ Авр беж ТВх 165 170 175
ТУух Вех Пцезб Зеж Бек ТВ лей ТБ о їецп бек пув Афіа АвроТУухк бій був 1850 185 130
Мівз Гуз Уві Тук Аза Сув бій Узі Тахо Пів бій сіу Ппей бек ВЗех Рез 135 200 205
Уаї тах пуб Бех РНе Азп о Ака сіу біб був

Claims (19)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Композиція антитіла до людського рецептора програмованої загибелі 1 (РО-1), яка містить: а) від приблизно 100 мг/мл до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; р) від приблизно 5 до 20 мМ гістидинового буфера; с) стабілізатор, який становить від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./0об. сахарози; а) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,10 95 неіонної поверхнево-активної речовини, де неіонна поверхнево-активна речовина являє собою полісорбат-80; і е) від приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ антиоксиданту, де антиоксидант являє собою |І- метіонін або його фармацевтично прийнятну сіль, де антитіло до людського РО-1 або його антигензв'язувальний фрагмент містить три СОК легкого ланцюга, що включають СОКІ 1 5ЕО ІЮ МО: 1, СОКІ2 5ЕО ІЮ МО: 2 і СОКІ З 5ЕО І МО: 3, і три СОК важкого ланцюга СОКНІ 5ЕО ІЮ МО: 6, СОКН2 5ЕО ІО МО: 7 ії СОКНЗ 5ЕО ІЮ МО: 8.
2. Композиція антитіла до людського РО-1 за п. 1, де композиція має рН від 5,0 до 6,0.
3. Композиція антитіла до людського РО-1 за будь-яким з пп. 1-2, де композиція містить: а) від приблизно 100 мг/мл до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; р) від приблизно 5 мМ до приблизно 20 мМ гістидинового буфера; с) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози; а) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 мас./об. полісорбату-80; і е) від приблизно 1 мМ до приблизно 20 мМ І-метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі.
4. Композиція антитіла до людського РО-1 за будь-яким з пп. 1-3, де концентрація антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента становить від приблизно 125 мг/мл до приблизно 200 мг/мл.
5. Композиція антитіла до людського РО-1 за п. 1, де стабілізатор являє собою сахарозу, неіонна поверхнево-активна речовина являє собою полісорбат-80, і де композиція містить: а) від приблизно 100 мг/мл до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; р) від приблизно 8 мМ до приблизно 12 мМ гістидинового буфера; с) від приблизно 5 до 10 мМ І -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі; а) від приблизно 6 95 до приблизно 8 95 мас./об. сахарози; і е) від приблизно 0,01 95 до приблизно 0,04 95 мас./об. полісорбату-80.
6. Композиція антитіла до людського РО-1 за п. 5, що містить: а) від приблизно 125 мг/мл до приблизно 200 мг/мл антитіла до людського РО-1 або його антигензв'язувального фрагмента; р) приблизно 10 мМ гістидинового буфера; с) приблизно 10 мМ І-метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі; а) приблизно 7 мас./об. сахарози; і е) приблизно 0,02 95 мас./об. полісорбату-80.
7. Композиція антитіла до людського РО-1 за пп. 1-6, де антиоксидант являє собою І -метіонін
НОЇ.
8. Композиція антитіла до людського РО-1 за будь-яким з пп. 1-7, яка додатково містить від приблизно 1,25 95 до приблизно 2,5 95 мабс./об. І -аргініну або його фармацевтично прийнятної солі.
9. Композиція антитіла до людського РО-1 за будь-яким з пп. 1-8, яка являє собою відновлений розчин з ліофілізованої композиції.
10. Композиція антитіла до людського РО-1 за будь-яким з пп. 1-9, де антитіло до людського РО- 1 або його антигензв'язувальний фрагмент містить ділянку Мі, яка складається з амінокислотної послідовності, представленої в 5ЕО ІЮ МО: 4, і ділянку Мн, яка складається з амінокислотної послідовності, представленої в ЗЕО ІЮ МО: 9.
11. Композиція антитіла до людського РО-1 за будь-яким з пп. 1-10, де композиція містить легкий ланцюг, який складається з послідовності амінокислот, представленої в ЗЕО ІО МО: 5, і важкий ланцюг, який складається з послідовності амінокислот, представленої в 5ЕО ІЮО МО: 10.
12. Композиція антитіла до людського РО-1 за будь-яким з пп. 1-11, де композиція містить антитіло до людського РО-1, яке являє собою пембролізумаб.
13. Спосіб лікування хронічної інфекції у пацієнта-людини, який потребує цього, що включає введення пацієнту ефективної кількості композиції антитіла до людського РО-1 за будь-яким з пп. 1-12.
14. Спосіб лікування раку у пацієнта-людини, який потребує цього, що включає введення пацієнту ефективної кількості композиції антитіла до людського РО-1 за будь-яким з пп. 1-13.
15. Спосіб за п. 13 або 14, де композицію антитіла до людського РО-ї вводять шляхом підшкірного введення.
16. Композиція антитіла до РО-1 людини, яка містить: а) приблизно 130 мг/мл антитіла до РО-1 людини; р) приблизно 10 мМ гістидинового буфера; с) приблизно 7 95 мас./0об6. сахарози; а) приблизно 0,02 95 полісорбату-80; і е) приблизно 10 мМ І-метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі; де антитіло до РО-1 людини містить легкий ланцюг, який складається з послідовності амінокислот, представленої в 5ЕО ІЮО МО: 5, і важкий ланцюг, який складається з послідовності амінокислот, представленої в ЗЕО ІЮ МО: 10.
17. Композиція антитіла до РО-1 людини за п. 16, де антитіло до РО-1 людини являє собою пембролізумаб.
18. Композиція антитіла до РО-1 людини, яка містить: а) приблизно 165 мг/мл антитіла до РО-1 людини; р) приблизно 10 мМ гістидинового буфера; с) приблизно 7 95 мас./0об6. сахарози; а) приблизно 0,02 95 полісорбату-80; і е) приблизно 10 мМ І -метіоніну або його фармацевтично прийнятної солі; де антитіло до РО-1 людини містить легкий ланцюг, який містить або складається з послідовності амінокислот, представленої в ЗЕО ІЮ МО: 5, і важкий ланцюг, який містить або складається з послідовності амінокислот, представленої в 5ЕО ІЮО МО: 10.
19. Композиція антитіла до РО-1 людини за п. 18, де антитіло до РО-1 людини являє собою пембролізумаб.
Окиснення Ме 105 заданими НРАНІС БУС хе М тер» Компознійя З дО ж «ох в - птн: Композиція 2 ще х ж - їй во М пев» Композиція 3 хх сен в ня Композиція З до т . . - й -ж-- Композиція 5 ж в ен в тов НЕ светр о 4 8 2 Тнжні
Фіг. ЛА Окиснення Мебідйз заданими НРАНІС ТО 18 с М. Ж Компазиція х х | есе сКампази ція 2 в та с Композния 4 що ! , ж х щ ек Композиція З я 12 -Ж-- Компознця 5 У В ех як 1 1 ! дути Я й і о з ут 0 Я В 12 Тижні
Фіг. 18
UAA201911493A 2017-05-02 2018-05-01 Стабільна композиція антитіла до рецептора програмованої загибелі 1 (pd-1) і спосіб її застосування UA128202C2 (uk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762500238P 2017-05-02 2017-05-02
PCT/US2018/030459 WO2018204368A1 (en) 2017-05-02 2018-05-01 Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA128202C2 true UA128202C2 (uk) 2024-05-08

Family

ID=64016286

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201911493A UA128202C2 (uk) 2017-05-02 2018-05-01 Стабільна композиція антитіла до рецептора програмованої загибелі 1 (pd-1) і спосіб її застосування

Country Status (25)

Country Link
US (6) US11633476B2 (uk)
EP (1) EP3618808A4 (uk)
JP (2) JP7483376B2 (uk)
KR (2) KR20250126869A (uk)
CN (1) CN110869002A (uk)
AU (2) AU2018263862B2 (uk)
BR (1) BR112019022972A2 (uk)
CL (1) CL2019003142A1 (uk)
CO (1) CO2019012151A2 (uk)
CR (1) CR20190497A (uk)
DO (1) DOP2019000280A (uk)
EA (1) EA201992590A1 (uk)
EC (1) ECSP19078502A (uk)
GE (2) GEP20247693B (uk)
IL (2) IL317348A (uk)
JO (1) JOP20190260A1 (uk)
MA (1) MA50663A (uk)
MX (3) MX2019013028A (uk)
MY (1) MY202279A (uk)
NI (1) NI201900112A (uk)
PE (3) PE20240813A1 (uk)
PH (1) PH12019502484A1 (uk)
SG (1) SG11201910182RA (uk)
UA (1) UA128202C2 (uk)
WO (1) WO2018204368A1 (uk)

Families Citing this family (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2170959E (pt) 2007-06-18 2014-01-07 Merck Sharp & Dohme Anticorpos para o receptor humano de morte programada pd-1
WO2014066744A2 (en) 2012-10-25 2014-05-01 True North Therapeutics, Inc. Anti-complement c1s antibodies and uses thereof
ES2912396T3 (es) 2012-11-02 2022-05-25 Bioverativ Usa Inc Anticuerpos anti-C1s del complemento y uso de los mismos
PT3199552T (pt) 2012-11-20 2020-03-25 Sanofi Sa Anticorpos anti-ceacam5 e suas utilizações
UA117466C2 (uk) 2012-12-13 2018-08-10 Мерк Шарп Енд Доме Корп. СТАБІЛЬНИЙ СКЛАД У ВИГЛЯДІ РОЗЧИНУ АНТИТІЛА ДО IL-23p19
MX392711B (es) 2015-08-11 2025-03-24 Wuxi Biologics Ireland Ltd Anticuerpos anti-pd-1 novedosos.
US10994011B2 (en) 2015-12-18 2021-05-04 Astellas Pharma Inc. Pharmaceutical composition comprising anti-human TSLP receptor antibody
IL326479A (en) 2016-10-12 2026-04-01 Bioverativ Usa Inc Anti-c1s antibodies and methods of use thereof
JOP20190260A1 (ar) * 2017-05-02 2019-10-31 Merck Sharp & Dohme صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها
CN110913906A (zh) 2017-05-02 2020-03-24 默沙东公司 抗lag3抗体的制剂和抗lag3抗体与抗pd-1抗体的共制剂
US12668635B1 (en) 2017-11-21 2026-06-30 Arcus Biosciences, Inc. Methods of treating solid tumors using an anti-PD-1 antibody or a fragment thereof
CN112512561A (zh) * 2018-05-25 2021-03-16 雷迪博士实验室有限公司 稳定的融合蛋白制剂
MX2020009824A (es) 2018-07-25 2021-01-15 Alteogen Inc Nuevas variantes de hialuronidasa y composicion farmaceutica que comprende la misma.
MX2021004356A (es) 2018-10-18 2021-05-31 Merck Sharp & Dohme Llc Formulaciones de anticuerpos anti-rsv y metodos de uso de las mismas.
MA54089A (fr) 2018-10-31 2022-02-09 Merck Sharp & Dohme Anticorps anti-pd-1 humain et procédés d'utilisation associés
US20210380694A1 (en) * 2018-11-07 2021-12-09 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof
JP7503056B6 (ja) 2018-11-07 2024-07-16 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー 抗ｌａｇ３抗体および抗ｐｄ－１抗体の共－製剤
US12703762B2 (en) 2018-12-18 2026-08-11 Novartis Ag Reversal binding agents for anti-factor XI/XIa antibodies and uses thereof
PE20212185A1 (es) 2019-02-18 2021-11-11 Lilly Co Eli Formulacion de anticuerpos terapeuticos
CN112203642B (zh) * 2019-03-25 2025-03-07 阿特根公司 用于皮下注射的包含人透明质酸酶ph20变体和药物的药物组合物
JP7641908B2 (ja) * 2019-03-29 2025-03-07 ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッド Ｉｌ－５に対する抗体を含有する医薬組成物及びその使用
GB201906835D0 (en) * 2019-05-15 2019-06-26 Ucb Biopharma Sprl Dry microparticles
CA3156812A1 (en) * 2019-10-02 2021-04-08 Alamab Therapeutics, Inc. Anti-connexin antibody formulations
TW202138006A (zh) * 2019-12-13 2021-10-16 韓商三星Ｂｉｏｅｐｉｓ股份有限公司 穩定之抗-pd1抗體醫藥調配物
EP4077388A1 (en) * 2019-12-18 2022-10-26 Tesaro, Inc. Biopharmaceutical compositions and related methods
JP2023507795A (ja) * 2019-12-20 2023-02-27 アントス セラピューティクス， インコーポレイテッド 第ＸＩ／ＸＩａ因子抗体の医薬製剤および投薬レジメン
US20230355757A1 (en) 2019-12-20 2023-11-09 Formycon Ag Formulations of anti-pd1 antibodies
TW202615652A (zh) 2020-01-23 2026-04-16 南韓商阿特根公司 新穎的具有改善的穩定性的玻尿酸酶變異體及含有其的醫藥組合物
IL294800A (en) * 2020-01-27 2022-09-01 Genentech Inc Methods of treating cancer with an antibody to an anti-ti antagonist
KR20210097882A (ko) * 2020-01-30 2021-08-10 삼성바이오에피스 주식회사 안정한 항-pd-1 항체 약제학적 제제
JP7713950B2 (ja) * 2020-03-04 2025-07-28 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 ベバシズマブを含む薬物製剤
JP2023525898A (ja) * 2020-05-19 2023-06-19 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 非経口タンパク質溶液における可視粒子の形成を防止するためのキレート剤の使用
CA3181776A1 (en) 2020-05-26 2021-12-02 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti-pd-1 antibodies
AU2021279035A1 (en) * 2020-05-29 2023-02-02 Aduro Biotech Holding, Europe B.V. Methods of treating IgA nephropathy with an APRIL binding antibody
MX2022015733A (es) * 2020-06-19 2023-01-18 Sinocelltech Ltd Formulacion estable para el anticuerpo monoclonal anti-pd-1 recombinante.
US20230295329A1 (en) * 2020-07-31 2023-09-21 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Anti-pd-1 antibody pharmaceutical composition and use thereof
IL300245A (en) * 2020-07-31 2023-03-01 Alamab Therapeutics Inc Anti-connexin antibody formulations
WO2022031093A1 (ko) 2020-08-07 2022-02-10 (주)알테오젠 재조합 히알루로니다제의 생산 방법
CN112285224A (zh) * 2020-10-02 2021-01-29 朱吉安 一种抗pd-1单克隆抗体药物的质量标准检测方法
JP7849358B2 (ja) * 2020-11-10 2026-04-21 サノフイ Ｃｅａｃａｍ５抗体－薬物コンジュゲート製剤
EP4008345A1 (en) * 2020-12-03 2022-06-08 Hexal AG Novel formulations for antibodies
PT4267105T (pt) * 2020-12-28 2025-04-30 Bristol Myers Squibb Co Composições de anticorpos e métodos de utilização das mesmas
AU2021416156A1 (en) 2020-12-28 2023-06-22 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumors
AU2022212007A1 (en) * 2021-01-29 2023-09-07 Merck Sharp & Dohme Llc Compositions of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of obtaining the compositions thereof
TW202305009A (zh) 2021-04-08 2023-02-01 美商默沙東有限責任公司 以皮下投予抗pd1抗體治療癌症之方法
TW202308692A (zh) * 2021-04-27 2023-03-01 俄羅斯聯邦商拜奧卡德聯合股份公司 包含帕博利珠單抗（ｐｅｍｂｒｏｌｉｚｕｍａｂ）的藥學組成物及其用途
EP4359438A1 (en) * 2021-06-21 2024-05-01 Bristol-Myers Squibb Company Use of sucrose, mannitol and glycine to reduce reconstitution time of high concentration lyophilized biologics drug products
US20240287185A1 (en) 2021-06-23 2024-08-29 Formycon Ag Formulations of anti-pd1 antibodies
CA3224640A1 (en) * 2021-07-09 2023-01-12 Krishnan SAMPATHKUMAR Pharmaceutical compositions of a pd-1 antibody and use of the same
MX2024009994A (es) 2022-03-07 2024-08-22 Mabxience Res S L Formulaciones estables para anticuerpos.
TW202345902A (zh) * 2022-04-14 2023-12-01 瑞士商百濟神州瑞士有限責任公司 含有ｐｄ－１抗體的穩定高濃度精胺酸配製物及其使用方法
JP2025512031A (ja) * 2022-04-14 2025-04-16 ベイジーン スウィッツァーランド ゲーエムベーハー Ｐｄ－１抗体を含有する安定した高濃度塩化ナトリウム製剤及びその使用方法
IL317666A (en) * 2022-06-15 2025-02-01 Bioverativ Usa Inc Anti-complement formulation for C1S antibody
MA71249A (fr) 2022-06-24 2025-04-30 Bioverativ Usa Inc. Méthodes de traitement de maladies médiées par complément
AU2023298155A1 (en) * 2022-07-01 2025-02-13 Amgen Inc. Anti-pd-1 antibody formulations
TW202409078A (zh) * 2022-07-18 2024-03-01 中國大陸商蘇州創勝醫藥集團有限公司 穩定之包含抗gremlin1抗體的藥物製劑
WO2024025986A1 (en) * 2022-07-28 2024-02-01 Merck Sharp & Dohme Llc Pharmaceutical compositions of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and ph20 variants or fragments thereof
EP4615502A1 (en) 2022-11-07 2025-09-17 Upstream Bio, Inc. Pharmaceutical compositions comprising anti-human tslp receptor antibodies and methods of using the same
US20260207493A1 (en) 2022-12-21 2026-07-23 Formycon Ag Formulations of anti-pd1 antibodies
WO2024171082A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Sun Pharmaceutical Industries Limited Stable protein compositions of anti-pd1 antibody
CN122422358A (zh) * 2023-11-17 2026-07-17 奥里尼斯生物科学有限公司 基于pd-l1的嵌合蛋白制剂
TW202541843A (zh) * 2023-12-28 2025-11-01 大陸商齊魯製藥有限公司 穩定的抗pd-1抗體的藥物組合物
KR20250106231A (ko) * 2023-12-29 2025-07-09 (주)셀트리온 안정한 약제학적 제제
SE548163C2 (en) * 2024-02-16 2026-04-13 Xbrane Biopharma Ab Stable antibody formulation comprising nivolumab, histidine, sucrose, polysorbate and methionine
WO2025174319A1 (en) * 2024-02-16 2025-08-21 Xbrane Biopharma Ab Stable antibody formulation for intravenous use comprising nivolumab, histidine, sucrose, polysorbate and methionine
WO2025191489A1 (en) * 2024-03-15 2025-09-18 Lupin Limited Pharmaceutical formulation of anti-pd-1 antibody
KR20260116273A (ko) 2024-09-20 2026-07-28 파라곤 테라퓨틱스, 인크. Pd-1 결합 단백질, vegf 및 pd-1 이중특이적 결합 단백질, 조성물 및 사용 방법
WO2026130530A1 (en) * 2024-12-19 2026-06-25 Akeso Biopharma Co., Ltd. Antibody formulations with reduced aggregation

Family Cites Families (223)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4401820A (en) 1981-01-23 1983-08-30 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Process for racemizing optically active α-amino acids or a salt thereof
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
DE68920693T2 (de) 1988-03-30 1995-05-24 Toray Industries Gefriergetrocknete Zusammensetzung, die ein mit Meerrettichperoxydase markiertes Fab'-Fragment eines gegen menschliches Beta-Interferon gerichteten Antikörpers und Trehalose enthält; EIA Kit, der diese Zusammensetzung enthält.
JPH03504605A (ja) 1988-05-27 1991-10-09 セントカー・インコーポレーテツド 抗体産生物の凍結乾燥した配合物
AU686113B2 (en) 1992-09-16 1998-02-05 Scripps Research Institute, The Human neutralizing monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus
CA2226575C (en) 1995-07-27 2011-10-18 Genentech, Inc. Stabile isotonic lyophilized protein formulation
ZA966075B (en) 1995-07-27 1998-01-19 Genentech Inc Protein formulation.
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
ES2148799T3 (es) 1995-09-18 2000-10-16 Intracel Corp Anticuerpos monoclonales neutralizantes contra virus sincitial respiratorio.
US20070059302A1 (en) 1997-04-07 2007-03-15 Genentech, Inc. Anti-vegf antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
WO2000032634A1 (en) 1998-12-01 2000-06-08 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies to gamma-interferon
EP1820516B1 (en) 1999-02-22 2013-07-24 University of Connecticut Novel albumin-free factor VIII formulations
DE60041393D1 (de) 1999-03-11 2009-03-05 Schering Corp Cytokine aus säugetieren, verwandte reagenzien und verfahren
US7090847B1 (en) 1999-09-09 2006-08-15 Schering Corporation Mammalian cytokines; related reagents and methods
DE60038304T3 (de) 1999-09-09 2017-04-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Interleukin-12 p40 und interleukin-b30. kombinationen davon. antikörper. verwendungen in pharmazeutische zusammensetzungen
WO2001030393A2 (en) 1999-10-22 2001-05-03 Ludwig Institute For Cancer Research Methods for reducing the effects of cancers that express a33 antigen using a33 antigen specific immunoglobulin products
US8703126B2 (en) 2000-10-12 2014-04-22 Genentech, Inc. Reduced-viscosity concentrated protein formulations
DE60139944D1 (de) 2000-10-12 2009-10-29 Genentech Inc Niederviskose konzentrierte proteinformulierungen
US6818216B2 (en) 2000-11-28 2004-11-16 Medimmune, Inc. Anti-RSV antibodies
EP1801123A3 (en) 2000-12-28 2007-11-21 Altus Pharmaceuticals Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
EP1345968A2 (en) 2000-12-28 2003-09-24 Altus Biologics Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
WO2002102303A2 (en) 2001-05-01 2002-12-27 Medimmune, Inc. Crystals and structure of synagis fab
GB0113179D0 (en) 2001-05-31 2001-07-25 Novartis Ag Organic compounds
JP2005500304A (ja) 2001-06-21 2005-01-06 アルタス バイオロジックス インコーポレイテッド 球状タンパク質粒子およびそれらの作製方法および使用方法
TR201809678T4 (tr) 2001-06-26 2018-07-23 Amgen Fremont Inc Opgl ye karşi antikorlar.
ATE454137T1 (de) 2001-07-25 2010-01-15 Facet Biotech Corp Stabile lyophilisierte pharmazeutische formulierung des igg-antikörpers daclizumab
US20030138417A1 (en) 2001-11-08 2003-07-24 Kaisheva Elizabet A. Stable liquid pharmaceutical formulation of IgG antibodies
DE10207178A1 (de) 2002-02-19 2003-09-04 Novosom Ag Komponenten für die Herstellung amphoterer Liposomen
CA2476934C (en) 2002-02-27 2009-06-16 Immunex Corporation Stabilized tnfr-fc composition comprising arginine
US20070134247A9 (en) 2002-04-12 2007-06-14 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Prevention of brain inflammation as a result of induced autoimmune response
US7132100B2 (en) 2002-06-14 2006-11-07 Medimmune, Inc. Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations
DE60334303D1 (de) 2002-07-03 2010-11-04 Tasuku Honjo Immunpotenzierende zusammensetzungen
US20040033228A1 (en) 2002-08-16 2004-02-19 Hans-Juergen Krause Formulation of human antibodies for treating TNF-alpha associated disorders
US20040091490A1 (en) 2002-08-28 2004-05-13 Robert Johnson Stable pH optimized formulation of a modified antibody
EP2277532A1 (en) 2002-09-11 2011-01-26 Genentech, Inc. Novel composition and methods for the treatment of immune related diseases
AU2003293543A1 (en) 2002-12-13 2004-07-09 Abgenix, Inc. System and method for stabilizing antibodies with histidine
ES2367430T3 (es) 2002-12-23 2011-11-03 Wyeth Llc Anticuerpos contra pd-1 y sus usos.
US7563869B2 (en) 2003-01-23 2009-07-21 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Substance specific to human PD-1
US20040219150A1 (en) 2003-02-06 2004-11-04 Cua Daniel J. Uses of mammalian cytokine; related reagents
CN103040732B (zh) 2003-02-10 2015-04-01 伊兰药品公司 免疫球蛋白制剂及其制备方法
ATE440864T1 (de) 2003-03-10 2009-09-15 Schering Corp Verwendung von il-23-antagonisten; verwandte reagenzien
PT1610820E (pt) 2003-04-04 2010-12-16 Novartis Ag Formulações de elevada concentração de anticorpos e proteínas
KR20060080535A (ko) 2003-05-14 2006-07-10 이뮤노젠 아이엔씨 약물 콘쥬게이트 조성물
EP1498123A1 (en) 2003-07-18 2005-01-19 Aventis Pharma S.A. Emulsifying systems containing azetidine derivatives
WO2005035574A1 (ja) 2003-10-09 2005-04-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha IgM高濃度安定化溶液
US8277810B2 (en) 2003-11-04 2012-10-02 Novartis Vaccines & Diagnostics, Inc. Antagonist anti-CD40 antibodies
PE20090047A1 (es) 2003-11-10 2009-01-26 Schering Corp Anticuerpo recombinante humanizado anti-interleuquina 10
DE10355904A1 (de) 2003-11-29 2005-06-30 Merck Patent Gmbh Feste Formen von anti-EGFR-Antikörpern
WO2005063291A1 (ja) 2003-12-25 2005-07-14 Kirin Beer Kabushiki Kaisha 抗体を含有する安定な水性医薬製剤
ES2689328T3 (es) 2004-01-07 2018-11-13 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Anticuerpo monoclonal M-CSF-específico y usos del mismo
EP1713502A1 (de) 2004-02-12 2006-10-25 MERCK PATENT GmbH Hochkonzentrierte, flüssige formulierungen von anti-egfr-antikörpern
CN1942201B (zh) 2004-02-17 2012-06-20 先灵公司 调节il-23活性的方法；相关试剂
ATE531388T1 (de) 2004-03-24 2011-11-15 Abbott Biotherapeutics Corp Verwendung von anti-alpha5beta1-antikörpern zur hemmung der krebszellproliferation
AU2005249360B2 (en) 2004-04-12 2011-07-21 Medimmune, Llc Anti-IL-9 antibody formulations and uses thereof
WO2005120571A2 (en) 2004-06-07 2005-12-22 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Method of passive immunization against disease or disorder characterized by amyloid aggregation with diminished risk of neuroinflammation
AR049390A1 (es) 2004-06-09 2006-07-26 Wyeth Corp Anticuerpos contra la interleuquina-13 humana y usos de los mismos
AU2005290250A1 (en) 2004-07-30 2006-04-06 Rinat Neuroscience Corp. Antibodies directed against amyloid-beta peptide and methods using same
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US20080057070A1 (en) 2004-11-04 2008-03-06 Chiron Corporation Antagonist Anti-Cd40 Monoclonal Antibodies and Methods for Their Use
GT200600031A (es) 2005-01-28 2006-08-29 Formulacion anticuerpo anti a beta
PA8661401A1 (es) 2005-01-28 2006-09-08 Wyeth Corp Formulaciones del liquido polipeptido estabilizado
DOP2006000029A (es) 2005-02-07 2006-08-15 Genentech Inc Antibody variants and uses thereof. (variantes de un anticuerpo y usos de las mismas)
EP1865986B1 (en) 2005-03-08 2016-02-17 Pfizer Products Inc. Anti-ctla-4 antibody compositions
ES2407468T3 (es) 2005-04-18 2013-06-12 Yeda Research And Development Company Limited Formulaciones de anticuerpos anti-hepatitis B (HBV) estabilizadas
PL1874818T3 (pl) 2005-04-22 2011-09-30 Lilly Co Eli Przeciwciała swoiste wobec TGF-beta 1
EP3530736A3 (en) 2005-05-09 2019-11-06 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
EP1891110A2 (en) 2005-06-07 2008-02-27 Esbatech AG STABLE AND SOLUBLE ANTIBODIES INHIBITING TNF-alpha
BRPI0611800A2 (pt) 2005-06-15 2008-12-09 Schering Corp formulaÇço estÁvel de anticorpo
CA2613818C (en) 2005-06-30 2013-08-27 Centocor, Inc. Anti-il-23 antibodies, compositions, methods and uses
CA2615731A1 (en) 2005-07-29 2007-02-08 Amgen Inc. Formulations that inhibit protein aggregation
WO2007019232A2 (en) 2005-08-03 2007-02-15 Immunogen, Inc. Immunoconjugate formulations
SI1937721T1 (sl) 2005-08-25 2010-11-30 Lilly Co Eli Anti il protitelesa
ME02705B (me) 2005-08-31 2017-10-20 Merck Sharp & Dohme Inženjerisana anti-il-23 antitela
AU2006291005A1 (en) 2005-09-12 2007-03-22 Novimmune S.A. Anti-CD3 antibody formulations
KR101363777B1 (ko) 2005-09-30 2014-02-14 메디뮨 리미티드 인터루킨―１３ 항체 조성물
JP5231810B2 (ja) 2005-12-28 2013-07-10 中外製薬株式会社 抗体含有安定化製剤
SI3219328T1 (sl) 2005-12-29 2020-10-30 Janssen Biotech, Inc. Človeška protitelesa proti-IL-23, sestavki, postopki in uporabe
JP2009525986A (ja) 2006-02-03 2009-07-16 メディミューン，エルエルシー タンパク質製剤
CA2647111A1 (en) 2006-03-28 2007-10-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-igf-1r human monoclonal antibody formulation
SMP200800064B (it) 2006-04-21 2009-11-06 Novartis Ag Composizioni farmaceutiche di anticorpi anti-cd40 antagonista
CA2649538C (en) 2006-04-21 2014-06-03 Yatin Gokarn Buffering agents for biopharmaceutical formulations
JP2009540018A (ja) 2006-06-13 2009-11-19 ザイモジェネティクス， インコーポレイテッド Ｉｌ−１７およびｉｌ−２３アンタゴニストならびにその使用方法
CA2665567C (en) 2006-10-06 2012-07-03 Amgen Inc. Stable formulations
US7705132B2 (en) 2006-10-20 2010-04-27 Amgen Inc. Stable polypeptide formulations
EP2684895A1 (en) 2006-10-27 2014-01-15 AbbVie Biotechnology Ltd Crystalline anti-hTNFalpha antibodies
WO2008068246A1 (en) 2006-12-05 2008-06-12 Crucell Holland B.V. Liquid anti-rabies antibody formulations
AR064333A1 (es) 2006-12-14 2009-04-01 Schering Corp Anticuerpo anti-tslp de diseno
EP2129401B8 (en) 2006-12-21 2020-01-15 Amgen Inc. Stable buffered formulations containing polypeptides
JP5419709B2 (ja) 2007-01-09 2014-02-19 ワイス・エルエルシー 抗ｉｌ−１３抗体製剤およびその使用
TWI426918B (zh) 2007-02-12 2014-02-21 Merck Sharp & Dohme Ｉｌ-２３拮抗劑於治療感染之用途
US20100055111A1 (en) 2007-02-14 2010-03-04 Med. College Of Georgia Research Institute, Inc. Indoleamine 2,3-dioxygenase, pd-1/pd-l pathways, and ctla4 pathways in the activation of regulatory t cells
HUE042172T2 (hu) 2007-02-23 2019-06-28 Merck Sharp & Dohme Genetikailag elõállított anti-il-23P19 antitestek
CN103396489A (zh) 2007-02-23 2013-11-20 默沙东公司 工程改造的抗IL-23p19抗体
CA2681752A1 (en) 2007-03-29 2008-10-09 Abbott Laboratories Crystalline anti-human 1l-12 antibodies
KR101540823B1 (ko) 2007-03-30 2015-07-30 메디뮨 엘엘씨 항체 제제
CA2690382A1 (en) 2007-06-14 2008-12-24 Biogen Idec Ma Inc. Antibody formulations
US20090208492A1 (en) 2007-06-14 2009-08-20 Elan Pharmaceuticals, Inc. Lyophilized Immunoglobulin Formulations and Methods of Preparation
PT2170959E (pt) 2007-06-18 2014-01-07 Merck Sharp & Dohme Anticorpos para o receptor humano de morte programada pd-1
AU2008269086B2 (en) 2007-06-25 2014-06-12 Amgen Inc. Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor
UA107557C2 (xx) 2007-07-06 2015-01-26 Композиція антитіла офатумумабу
US20100286038A1 (en) 2007-09-21 2010-11-11 Valentyn Antochshuk Formulation containing cyclin-dependent kinase inhibiting compound and method of treating tumors using the same
EP2205276A4 (en) 2007-09-28 2012-08-15 Janssen Biotech Inc ANTI-IL-12 / 23P40 ANTIBODIES, EPITOPES, FORMULATIONS, COMPOSITIONS, METHODS AND USES
AR068723A1 (es) 2007-10-05 2009-12-02 Glaxo Group Ltd Proteina que se une a antigenos que se une a il-23 humana y sus usos
EP2225275A4 (en) 2007-11-28 2013-04-03 Medimmune Llc PROTEIN FORMULATION
WO2009080541A1 (en) 2007-12-21 2009-07-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody formulation
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
EP2240156A2 (en) 2007-12-28 2010-10-20 BioInvent International AB Antibody-containing formulation for the use for treating cardiovascular diseases associated with atherosclerosis
EP2249801A2 (en) 2008-02-07 2010-11-17 Amgen Inc. Stabilized protein compositions
PT2242773T (pt) 2008-02-11 2017-09-15 Cure Tech Ltd Anticorpos monoclonais para o tratamento de tumores
WO2009120684A1 (en) 2008-03-25 2009-10-01 Medimmune, Llc Antibody formulation
WO2009126688A2 (en) 2008-04-09 2009-10-15 Genentech, Inc. Novel compositions and methods for the treatment of immune related diseases
EP2297209A4 (en) 2008-06-03 2012-08-01 Abbott Lab IMMUNOGLOBULINS WITH TWO VARIABLE DOMAINS AND USES THEREOF
US8460886B2 (en) 2008-07-04 2013-06-11 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Use of an efficacy marker for optimizing therapeutic efficacy of an anti-human PD-1 antibody on cancers
WO2010027766A1 (en) 2008-08-27 2010-03-11 Schering Corporation Lyophilized formulatons of engineered anti-il-23p19 antibodies
SI2331090T1 (en) 2008-09-19 2018-04-30 Pfizer Inc. Stable liquid antibody formulation
WO2010042705A1 (en) * 2008-10-09 2010-04-15 Medimmune, Llc Antibody formulation
RU2481824C2 (ru) 2008-10-29 2013-05-20 Аблинкс Н.В Препараты однодоменных антигенсвязывающих молекул
WO2010062372A2 (en) 2008-11-03 2010-06-03 President And Fellows Of Harvard College Methods for modulating nf-kb using gibberellins
KR20110097772A (ko) 2008-11-17 2011-08-31 제넨테크, 인크. 생리적 조건하에 거대분자의 응집을 감소시키는 방법 및 제제
WO2010069858A1 (en) 2008-12-19 2010-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical composition
PE20120359A1 (es) 2009-03-06 2012-04-13 Genentech Inc Formulacion con anticuerpo
CN102413839A (zh) * 2009-03-06 2012-04-11 医学免疫有限责任公司 人源化抗cd19抗体制剂
EP2230312A1 (en) 2009-03-19 2010-09-22 Helmholtz-Zentrum für Infektionsforschung GmbH Probe compound for detecting and isolating enzymes and means and methods using the same
US20100278822A1 (en) 2009-05-04 2010-11-04 Abbott Biotechnology, Ltd. Stable high protein concentration formulations of human anti-tnf-alpha-antibodies
US9155745B2 (en) 2009-06-16 2015-10-13 Universite De Geneve Bevacizumab formulations with lower aggregation propensity, comprising corticosteroid anti-inflammatory drugs
WO2011008770A2 (en) 2009-07-14 2011-01-20 Biogen Idec Ma Inc. Methods for inhibiting yellow color and peroxide formation in a composition
WO2011017070A1 (en) 2009-07-28 2011-02-10 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for producing high concentration lyophilized pharmaceutical formulations
US9345661B2 (en) 2009-07-31 2016-05-24 Genentech, Inc. Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof
WO2011024862A1 (ja) 2009-08-31 2011-03-03 三洋化成工業株式会社 タンパク質水溶液の安定化剤、この安定化剤を含有するタンパク質水溶液及び液体洗剤組成物、並びに、この安定化剤を用いるタンパク質の安定化方法
IN2015DN02826A (uk) 2009-09-03 2015-09-11 Merck Sharp & Dohme
WO2011028962A1 (en) 2009-09-04 2011-03-10 Xoma Technology Ltd. Antibody coformulations
DK2478005T3 (en) 2009-09-15 2015-02-16 Ajinomoto Althea Inc Protein a crystals and cross bound crystals and methods of use thereof
EP3594356A1 (en) 2009-11-04 2020-01-15 Merck Sharp & Dohme Corp. Engineered anti-tslp antibody
CN107095846A (zh) 2009-12-21 2017-08-29 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗体配制剂
AR080428A1 (es) 2010-01-20 2012-04-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulaciones liquidas estabilizadas contentivas de anticuerpos
US8513236B2 (en) 2010-02-03 2013-08-20 Laurus Labs Private Limited Pterostilbene cocrystals
KR20130031247A (ko) 2010-03-17 2013-03-28 애보트 리서치 비.브이. 항―신경 성장 인자（ｎｇｆ） 항체 조성물
BR112012027828A2 (pt) 2010-05-03 2016-08-09 Genentech Inc composição de matéria, artigo de fabricação e método de redução da viscosidade de uma formulação contendo proteína e de preparação de uma formulação aquosa contendo proteína
EP2590971A4 (en) 2010-06-17 2014-12-10 Fuzians Biomedicals Inc COMPOUNDS SUITABLE FOR ANTIVIRAL ACTIVE SUBSTANCES, COMPOSITIONS AND METHOD OF USE THEREOF
EP2399604A1 (en) 2010-06-25 2011-12-28 F. Hoffmann-La Roche AG Novel antibody formulation
FR2962908A1 (fr) 2010-07-20 2012-01-27 Lfb Biotechnologies Formulation d'anticorps anti-cd20
WO2012018538A2 (en) 2010-07-26 2012-02-09 Schering Corporation Bioassays for determining pd-1 modulation
MX366337B (es) * 2010-10-06 2019-07-05 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-receptor de interleucina-4 (il-4r).
US9145457B2 (en) 2011-03-25 2015-09-29 Amgen Inc. Sclerostin antibody crystals and formulations thereof
WO2012135408A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of antibodies to human programmed death receptor pd-1 and related treatments
BR112013025845A2 (pt) 2011-04-07 2018-09-04 Glaxosmithkline Llc formulações com viscosidade reduzida
UY34105A (es) 2011-06-03 2012-07-31 Lg Life Sciences Ltd Formulación líquida estable de etanercept
JP6176849B2 (ja) 2011-07-19 2017-08-09 中外製薬株式会社 アルギニンアミドまたはその類似化合物を含む安定なタンパク質含有製剤
US9512073B2 (en) 2011-10-27 2016-12-06 Massachusetts Institute Of Technology Amino acid-, peptide-and polypeptide-lipids, isomers, compositions, and uses thereof
KR102063028B1 (ko) 2012-01-23 2020-01-07 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 항-ａｎｇ2 항체를 함유하는 안정화된 제형
KR20160105535A (ko) 2012-03-07 2016-09-06 카딜라 핼쓰캐어 리미티드 TNF-α 항체의 약제학적 제형
WO2013151999A1 (en) 2012-04-02 2013-10-10 President And Fellows Of Harvard College Cancer treatment and immune system regulation through fat10 pathway inhibition
CN109206516A (zh) 2012-05-03 2019-01-15 勃林格殷格翰国际有限公司 抗IL-23p19抗体
US20140004131A1 (en) 2012-05-04 2014-01-02 Novartis Ag Antibody formulation
US9216219B2 (en) * 2012-06-12 2015-12-22 Novartis Ag Anti-BAFFR antibody formulation
US9803010B2 (en) 2012-06-27 2017-10-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Crystalline anti-human IL-23p19 antibodies
SG11201407420RA (en) 2012-07-04 2015-02-27 Hoffmann La Roche Covalently linked antigen-antibody conjugates
FR2994390B1 (fr) 2012-08-10 2014-08-15 Adocia Procede d'abaissement de la viscosite de solutions de proteines a concentration elevee
WO2014031718A1 (en) 2012-08-23 2014-02-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of antibodies to tslp
US9592297B2 (en) 2012-08-31 2017-03-14 Bayer Healthcare Llc Antibody and protein formulations
US8883979B2 (en) 2012-08-31 2014-11-11 Bayer Healthcare Llc Anti-prolactin receptor antibody formulations
WO2014078627A1 (en) 2012-11-19 2014-05-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Liquid formulations for tnfr:fc fusion proteins
WO2014093206A1 (en) 2012-12-13 2014-06-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Lyophilized spherical pellets of anti-il-23 antibodies
US9700633B2 (en) 2013-01-28 2017-07-11 Jenkem Technology Co., Ltd., Tianjin Branch Conjugates of water soluble polymer-amino acid oligopeptide-drug, preparation method and use thereof
HK1220698A1 (zh) * 2013-03-13 2017-05-12 Seattle Genetics, Inc. 环糊精和抗体药物偶联物制剂
WO2014193898A1 (en) * 2013-05-31 2014-12-04 Merck Sharp & Dohme Corp. Combination therapies for cancer
TWI888366B (zh) 2013-07-16 2025-07-01 美商建南德克公司 利用pd-1軸結合拮抗劑及tigit抑制劑治療癌症之方法
DK3024484T3 (en) 2013-07-23 2018-10-08 Novaliq Gmbh STABILIZED ANTIBODY COMPOSITIONS
TWI649308B (zh) 2013-07-24 2019-02-01 小野藥品工業股份有限公司 喹啉衍生物
IL312865B2 (en) 2013-09-11 2025-06-01 Eagle Biologics Inc Liquid protein formulations containing viscosity-lowering agents
RS64268B1 (sr) 2013-09-20 2023-07-31 Bristol Myers Squibb Co Kombinacija anti-lag-3 antitela i anti-pd-1 antitela za lečenje tumora
DK3049441T3 (da) * 2013-09-27 2020-02-03 Hoffmann La Roche Anti-PDL1-antistofformuleringer
WO2015057541A1 (en) 2013-10-16 2015-04-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Method of obtaining thermostable dried vaccine formulations
WO2015143343A2 (en) 2014-03-21 2015-09-24 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Methods and compositions for treatment of immune-related diseases or disorders and/or therapy monitoring
RU2589691C2 (ru) 2014-06-16 2016-07-10 Общество с ограниченной ответственностью "Промоген-МАТ" Стабильная композиция антитела, специфически связывающегося с her2 рецепторами, и способ ее получения
WO2015196091A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 Reform Biologics, Llc Viscosity-reducing excipient compounds for protein formulations
WO2016011357A1 (en) * 2014-07-18 2016-01-21 Advaxis, Inc. Combination of a pd-1 antagonist and a listeria-based vaccine for treating prostate cancer
CN105296433B (zh) 2014-08-01 2018-02-09 中山康方生物医药有限公司 一种ctla4抗体、其药物组合物及其用途
RS63364B1 (sr) 2014-08-11 2022-07-29 Acerta Pharma Bv Terapeutske kombinacije btk inhibitora, pd-1 inhibitora i/ili pd-l1 inhibitora
CA2957722C (en) 2014-08-19 2022-05-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Anti-tigit antibodies
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
EP3212233B1 (en) 2014-10-31 2020-06-24 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treatment of disease
CN106999583A (zh) 2014-11-17 2017-08-01 豪夫迈·罗氏有限公司 包含ox40结合激动剂和pd‑1轴结合拮抗剂的组合疗法
EP3233918A1 (en) 2014-12-19 2017-10-25 Novartis AG Combination therapies
AR103268A1 (es) 2014-12-23 2017-04-26 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra tigit
US20170360929A1 (en) 2014-12-23 2017-12-21 Pfizer Inc. Stable aqueous antibody formulation for anti tnf alpha antibodies
JP2018502123A (ja) 2015-01-20 2018-01-25 イミューンエクサイト， インコーポレイテッド 癌免疫療法のための組成物及び方法
IL254039B2 (en) 2015-02-19 2023-12-01 Compugen Ltd Anti-pvrig antibodies and methods of use
AR103726A1 (es) 2015-02-27 2017-05-31 Merck Sharp & Dohme Cristales de anticuerpos monoclonales anti-pd-1 humanos
KR20240064733A (ko) 2015-03-04 2024-05-13 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제 및 vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제의 조합
ES2820768T3 (es) * 2015-04-03 2021-04-22 Xoma Technology Ltd Tratamiento del cáncer usando inhibidores de TGF-beta y PD-1
HRP20201334T1 (hr) * 2015-04-17 2020-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Kompozicije koje sadrže kombinaciju ipilimumaba i nivolumaba
EP3288980B1 (en) 2015-04-28 2021-03-10 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of pd-l1-positive melanoma using an anti-pd-1 antibody
TWI773646B (zh) 2015-06-08 2022-08-11 美商宏觀基因股份有限公司 結合lag-3的分子和其使用方法
WO2017009813A1 (en) 2015-07-16 2017-01-19 Laurus Labs Private Limited Novel caffeine cocrystals and their polymorphic forms
JO3620B1 (ar) 2015-08-05 2020-08-27 Amgen Res Munich Gmbh مثبطات نقطة فحص مناعية للاستخدام في علاج سرطانات محمولة عبر الدم
CN115925931A (zh) 2015-08-14 2023-04-07 默沙东公司 抗tigit抗体
UA125747C2 (uk) 2015-09-01 2022-06-01 Фьост Вейв Байо, Інк. Способи та композиції для лікування станів, пов'язаних із аномальною запальною відповіддю
RU2760582C2 (ru) 2015-09-02 2021-11-29 Иммутеп С.А.С. Анти-LAG-3 антитела
CA2998589A1 (en) 2015-09-14 2017-03-23 Compass Therapeutics Llc Compositions and methods for treating cancer via antagonism of the cd155/tigit pathway and tgf-.beta.
SG10202007764TA (en) 2015-09-25 2020-09-29 Genentech Inc Anti-tigit antibodies and methods of use
US20170097333A1 (en) 2015-09-28 2017-04-06 Merck Sharp & Dohme Corp. Cell based assay to measure the t-cell stimulating capacity of anti-lag3 antibodies and other agents
EP3357508A4 (en) 2015-09-28 2019-04-24 Suzhou Suncadia Biopharmaceuticals Co., Ltd. STABLE PHARMACEUTICAL ANTI-PD-1 ANTIBODY PREPARATION AND APPLICATION THEREOF IN MEDICINE
PT3356413T (pt) 2015-10-01 2022-04-04 Potenza Therapeutics Inc Proteínas de ligação a antigénio anti-tigit e métodos de utilização das mesmas
JO3555B1 (ar) 2015-10-29 2020-07-05 Merck Sharp & Dohme جسم مضاد يبطل فعالية فيروس الالتهاب الرئوي البشري
CN107847605B (zh) 2015-11-25 2021-12-24 乐高化学生物科学股份有限公司 包含分支接头的抗体-药物缀合物及其相关方法
EP3394099A4 (en) 2015-12-22 2019-11-27 Merck Sharp & Dohme Corp. Formulations of Manipulated Anti- IL-10 Antibodies
ES2904593T3 (es) 2016-01-21 2022-04-05 Pfizer Anticuerpos monoespecíficos y biespecíficos para la variante III del receptor del factor de crecimiento epidérmico y CD3 y sus usos
EP3848393A1 (en) 2016-05-18 2021-07-14 Boehringer Ingelheim International GmbH Antibody molecules for cancer treatment
CA3026151A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
MX2019004327A (es) 2016-10-14 2019-10-14 Xencor Inc Proteinas de fusion heterodimericas biespecificas que contienen proteinas de fusion fc il-15/il-15ra y fragmentos de anticuerpo pd-1.
EP3541413A2 (en) 2016-11-21 2019-09-25 Polpharma Biologics S.A. Aqueous pharmaceutical formulations
JP2020509025A (ja) 2017-03-01 2020-03-26 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ モノクローナル抗体製剤
TWI911431B (zh) 2017-03-01 2026-01-11 英商梅迪繆思有限公司 抗rsv單株抗體配製物
US11603407B2 (en) 2017-04-06 2023-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable antibody formulation
JOP20190260A1 (ar) * 2017-05-02 2019-10-31 Merck Sharp & Dohme صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها
CN110913906A (zh) 2017-05-02 2020-03-24 默沙东公司 抗lag3抗体的制剂和抗lag3抗体与抗pd-1抗体的共制剂
CA3060695A1 (en) 2017-05-02 2018-11-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Stable formulations of anti-ctla4 antibodies alone and in combination with programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof
EP3678700B1 (en) 2017-09-05 2024-06-19 Merck Sharp & Dohme LLC Compounds for reducing the viscosity of biological formulations
JP7503056B6 (ja) 2018-11-07 2024-07-16 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー 抗ｌａｇ３抗体および抗ｐｄ－１抗体の共－製剤

Also Published As

Publication number Publication date
NI201900112A (es) 2020-02-04
AU2018263862B2 (en) 2025-04-10
EA201992590A1 (ru) 2020-04-08
PE20240814A1 (es) 2024-04-18
CL2019003142A1 (es) 2020-07-10
US20200147213A1 (en) 2020-05-14
US11633476B2 (en) 2023-04-25
IL270253B2 (en) 2025-05-01
JP2020518599A (ja) 2020-06-25
IL270253B1 (en) 2025-01-01
MX2024007356A (es) 2024-06-28
EP3618808A4 (en) 2021-05-26
CN110869002A (zh) 2020-03-06
JP2024102215A (ja) 2024-07-30
US20260027205A1 (en) 2026-01-29
US20260027204A1 (en) 2026-01-29
MX2019013028A (es) 2020-02-05
MA50663A (fr) 2021-05-26
AU2025205140A1 (en) 2025-07-24
IL270253A (uk) 2019-12-31
JOP20190260A1 (ar) 2019-10-31
US20230321234A1 (en) 2023-10-12
GEP20247693B (en) 2024-11-11
AU2018263862A1 (en) 2019-11-21
CO2019012151A2 (es) 2020-02-07
US20230263887A1 (en) 2023-08-24
IL317348A (en) 2025-01-01
SG11201910182RA (en) 2019-11-28
CA3062160A1 (en) 2018-11-08
KR102847571B1 (ko) 2025-08-21
GEAP202415222A (en) 2024-07-10
DOP2019000280A (es) 2019-12-15
MY202279A (en) 2024-04-22
US20260027206A1 (en) 2026-01-29
WO2018204368A1 (en) 2018-11-08
KR20250126869A (ko) 2025-08-25
BR112019022972A2 (pt) 2020-05-26
PE20200513A1 (es) 2020-03-05
JP7483376B2 (ja) 2024-05-15
ECSP19078502A (es) 2019-12-27
PH12019502484A1 (en) 2020-07-20
CR20190497A (es) 2020-01-20
KR20190142392A (ko) 2019-12-26
PE20240813A1 (es) 2024-04-18
MX2024007358A (es) 2024-06-28
EP3618808A1 (en) 2020-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20260027206A1 (en) Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof
AU2021202416B2 (en) Use of plinabulin in combination with immune checkpoint inhibitors
US20260109768A1 (en) Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof
CN110678199B (zh) 单独的和与程序性死亡受体1(pd-1)抗体组合的抗ctla4抗体的稳定制剂及其使用方法
RU2633509C2 (ru) Стабильные составы антител против рецептора программируемой смерти pd-1 человека и относящиеся к ним способы лечения
US20250073230A1 (en) Use of plinabulin in combination with immune checkpoint inhibitors
KR20200078483A (ko) 간암 치료를 위한 조성물 및 방법
KR20240024941A (ko) 항-pd1 항체의 제제
JP2024505128A (ja) 抗ｃｄ７３抗体の製剤
US20250025553A1 (en) Combination therapy for cancer
CA3062160C (en) Stable formulations of programmed death receptor 1 (pd-1) antibodies and methods of use thereof
EA051511B1 (ru) Стабильные композиции антител к рецептору программируемой гибели 1 (pd–1) и способы их применения
HK1257781B (en) Aqueous pharmaceutical formulation comprising anti-pd-l1 antibody avelumab
HK1257781A1 (zh) 含抗-pd-l1抗体avelumab的水性药物制剂
NZ750444B2 (en) Use of plinabulin in combination with immune checkpoint inhibitors