WO2007046489A1 - 心疾患治療剤 - Google Patents

心疾患治療剤 Download PDF

Info

Publication number
WO2007046489A1
WO2007046489A1 PCT/JP2006/320905 JP2006320905W WO2007046489A1 WO 2007046489 A1 WO2007046489 A1 WO 2007046489A1 JP 2006320905 W JP2006320905 W JP 2006320905W WO 2007046489 A1 WO2007046489 A1 WO 2007046489A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
antibody
myocardial infarction
inhibitor
receptor
human
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2006/320905
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Miyuki Kobara
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to CA2626688A priority Critical patent/CA2626688C/en
Priority to AU2006305119A priority patent/AU2006305119B2/en
Priority to JP2007541050A priority patent/JP5191235B2/ja
Priority to EP06812073.2A priority patent/EP1941908B1/en
Priority to CN2006800475324A priority patent/CN101330930B/zh
Priority to BRPI0617664A priority patent/BRPI0617664B8/pt
Priority to KR1020087011972A priority patent/KR101239051B1/ko
Priority to HK09102183.4A priority patent/HK1124534B/xx
Application filed by Chugai Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority to US12/090,676 priority patent/US8945558B2/en
Publication of WO2007046489A1 publication Critical patent/WO2007046489A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Priority to IL190991A priority patent/IL190991A/en
Priority to NO20082311A priority patent/NO20082311L/no
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/248—IL-6
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/14—Lymphokine; related peptides
    • Y10S930/141—Interleukin

Definitions

  • Non-Patent Document 4 Taga, T. et al "J. Exp. Med. (1987) 166, 967-981
  • Patent Document 1 International Patent Application Publication Number WO 95-09873
  • the present invention provides the following [1] to [31].
  • a therapeutic agent for myocardial infarction comprising an IL-6 inhibitor as an active ingredient.
  • An inhibitor of left ventricular remodeling after myocardial infarction comprising an IL-6 inhibitor as an active ingredient.
  • a method for suppressing left ventricular remodeling after myocardial infarction in a subject comprising a step of administering an IL-6 inhibitor to the subject who has developed myocardial infarction.
  • [30] Use according to [26] or [27], wherein the antibody is a recombinant antibody.
  • the antibody is a chimeric antibody, a humanized antibody or a human antibody.
  • the present inventors can improve the state of the infarct region in myocardial infarction and suppress left ventricular remodeling after myocardial infarction. I found out.
  • the present invention is based on these findings.
  • the present invention relates to a therapeutic agent for myocardial infarction and an inhibitor of left ventricular remodeling after myocardial infarction, which contains an IL-6 inhibitor as an active ingredient.
  • IL-6 inhibitor refers to an IL-6 organism that blocks IL-6 signal transduction. It is a substance that inhibits biological activity.
  • the IL-6 inhibitor is preferably a substance having an inhibitory action on binding of any of IL-6, IL-6 receptor and gpl30.
  • Examples of the IL-6 inhibitor of the present invention include an anti-IL-6 antibody, an anti-IL-6 receptor antibody, an anti-gpl30 antibody, an IL-6 variant, a soluble IL-6 receptor variant or an IL. -6 or IL-6 receptor partial peptides and low molecular weight substances exhibiting the same activity as these, but are not particularly limited.
  • the IL-6 inhibitor of the present invention is preferably an antibody that recognizes IL-6 receptor.
  • the origin of the antibody in the present invention is not particularly limited, but is preferably derived from a mammal, more preferably a human-derived antibody.
  • the anti-IL-6 antibody used in the present invention can be obtained as a polyclonal or monoclonal antibody using known means.
  • a mammal-derived monoclonal antibody is particularly preferable.
  • Mammal-derived monoclonal antibodies include those produced by hyperpridoma and those produced by a host transformed with an expression vector containing an antibody gene by genetic engineering techniques. This antibody binds to IL-6, thereby inhibiting the binding of IL-6 to the IL-6 receptor and blocking the intracellular transmission of IL-6 biological activity.
  • An anti-IL-6 antibody-producing hyperpridoma can be basically produced using a known technique as follows. That is, using IL-6 as a sensitizing antigen and immunizing it according to the usual immunization method, the obtained immune cells are fused with known parental cells by the usual cell fusion method, and by the usual screening method, It can be produced by screening monoclonal antibody-producing cells.
  • the anti-IL-6 antibody can be prepared as follows.
  • HI-6 used as a sensitizing antigen for antibody acquisition is Eur. J. Biochem (1987) 168, 543-550, J. Im munol. (1988) 140, 1534-1541, or Agr. Biol It is obtained by using the IL-6 gene Z amino acid sequence disclosed in Chem. (1990) 54, 2685-2688.
  • the target IL-6 protein is known from the host cell or culture supernatant.
  • the purified IL-6 protein can be used as a sensitizing antigen.
  • a fusion protein of IL-6 protein and other proteins may be used as a sensitizing antigen!
  • the anti-IL-6 receptor antibody used in the present invention can be obtained as a polyclonal or monoclonal antibody using known means.
  • a monoclonal antibody derived from a mammal is particularly preferable.
  • Monoclonal antibodies derived from mammals include those produced by hyperpridoma and those produced by a host transformed with an expression vector containing an antibody gene by genetic engineering techniques. This antibody binds to the IL-6 receptor, thereby blocking the binding of IL-6 to the IL-6 receptor and blocking the transmission of IL-6 biological activity into the cell.
  • Examples of such antibodies include MR16-1 antibody (Tamura, T. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 90, 11924—11928), PM-1 antibody (Hirata, Y et al "J. Immunol. (1989) 143, 2 900-2906), AUK12-20 antibody, AUK64-7 antibody or AUK146-15 antibody (International Patent Application Publication No. WO 92-19759).
  • PM-1 antibody is exemplified as a preferred monoclonal antibody against HL-6 receptor
  • MR16-1 antibody is exemplified as a preferred monoclonal antibody against mouse IL-6 receptor. It is done.
  • Anti-IL-6 receptor monoclonal antibody-producing hybridomas and hybridomas can basically be prepared as follows using known techniques. That is, IL-6 receptor is used as a sensitizing antigen and immunized according to a normal immunization method, and the resulting immune cells are fused with a known parent cell by a normal cell fusion method. Thus, a monoclonal antibody-producing cell can be screened.
  • the anti-IL-6 receptor antibody can be prepared as follows.
  • the human HL-6 receptor used as a sensitizing antigen for obtaining an antibody is disclosed in European Patent Application Publication No. EP 3 25474, and the mouse IL-6 receptor is disclosed in Japanese Patent Application Publication No. JP-A 3-155795.
  • the obtained IL-6 receptor gene Z amino acid sequence is used.
  • IL-6 receptor protein is expressed on the cell membrane and detached from the cell membrane
  • Soluble IL-6 receptor (Yasukawa, K. et al., J. Biochem. (1990) 108, 673-676)
  • Soluble IL-6 receptor binds to the cell membrane and is composed essentially of the extracellular region of IL-6 receptor, lacking the transmembrane region or the transmembrane region and the intracellular region. It differs from membrane-bound IL-6 receptor in that respect.
  • the IL-6 receptor protein can be used as a sensitizing antigen for the production of the anti-IL-6 receptor antibody used in the present invention, V, a misaligned IL-6 receptor may be used.
  • An IL-6 receptor gene sequence is inserted into a known expression vector system to transform an appropriate host cell, and then the target IL-6 receptor is obtained from the host cell or culture supernatant.
  • the protein may be purified by a known method, and this purified IL-6 receptor protein may be used as a sensitizing antigen. Further, cells expressing IL-6 receptor or a fusion protein of IL-6 receptor protein and other proteins may be used as the sensitizing antigen.
  • the anti-gpl30 antibody used in the present invention can be obtained as a polyclonal or monoclonal antibody using known means.
  • a monoclonal antibody derived from a mammal is particularly preferable.
  • Mammal-derived monoclonal antibodies include those produced by hyperpridoma and those produced by a host transformed with an expression vector containing an antibody gene by genetic engineering techniques. This antibody binds to gpl30, thereby inhibiting the binding of IL-6ZIL-6 receptor complex to gpl30 and blocking the transmission of IL-6 biological activity into the cell.
  • Examples of such antibodies include the ⁇ 164 antibody (Japanese Patent Laid-open No. 3-219894), 4811 antibody chobi 21 "[4 antibody (US 5571513) B-S12 antibody and B-P8 antibody (Japanese Patent Laid-Open No. 8-291199). Can be mentioned.
  • the anti-gpl30 monoclonal antibody-producing hybridoma ibridoma
  • gpl30 is used as a sensitizing antigen and immunized according to the usual immunization method.
  • the obtained immune cells are fused with known parental cells by the usual cell fusion method, and then monoclonal by the usual screening method. It can be produced by screening antibody-producing cells.
  • a monoclonal antibody can be prepared as follows.
  • gpl30 used as a sensitizing antigen for obtaining an antibody can be obtained by using the gpl30 gene Z amino acid sequence disclosed in European Patent Application Publication No. EP 411946.
  • the mammal to be immunized with the sensitizing antigen is not particularly limited, but it is generally preferable to select in consideration of compatibility with the parent cell used for cell fusion.
  • Rodent animals such as mice, rats, hamsters and the like are used.
  • the animal is immunized with the sensitizing antigen according to a known method.
  • a sensitizing antigen is injected intraperitoneally or subcutaneously into a mammal.
  • the sensitized antigen is diluted to an appropriate amount with PBS (Phosphate-Buffered Saline), physiological saline, etc., and suspended, and then mixed with an appropriate amount of a normal adjuvant, for example, Freund's complete adjuvant, if necessary.
  • a normal adjuvant for example, Freund's complete adjuvant
  • an appropriate carrier can be used during immunization with the sensitizing antigen.
  • immune cells are removed from the mammal and subjected to cell fusion.
  • Preferred immune cells that are subjected to cell fusion include spleen cells.
  • Mammalian myeloma cells as other parental cells to be fused with the immune cells have already been known in various cell lines such as P3X63Ag8.653 (Kearney, JF et al. J. Imm nol. 1979) 123, 1548-1550), P3X63Ag8U.l (Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7), NS-1 (Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol. 19 76) 6, 511-519), MPC-11 (Margulies.DH et al "Cell (1976) 8, 405-415), SP2 / 0 (Shulman, M.
  • the cell fusion between the immunocytes and myeloma cells is basically performed by a known method, for example, the method of Milsteina et al. (Kohler. G. and Milstein, C., Methods Enzymol. (1981) 73, 3 -46 ) And the like. [0040] More specifically, the cell fusion is performed, for example, in a normal culture medium in the presence of a cell fusion promoter. For example, polyethylene glycol (PEG), Sendai virus (HVJ) or the like is used as a fusion promoter, and an auxiliary agent such as dimethyl sulfoxide may be added and used to increase the fusion efficiency as desired.
  • PEG polyethylene glycol
  • HVJ Sendai virus
  • an auxiliary agent such as dimethyl sulfoxide may be added and used to increase the fusion efficiency as desired.
  • the use ratio of immune cells and myeloma cells is preferably 1 to 10 times the number of immune cells relative to myeloma cells, for example.
  • the culture medium used for the cell fusion for example, RPMI1640 culture medium suitable for the growth of the myeloma cell line, MEM culture medium, and other normal culture liquids used for this type of cell culture can be used.
  • serum supplements such as fetal calf serum (FCS) can be used in combination.
  • a predetermined amount of the immune cells and myeloma cells are mixed well in the culture solution and pre-warmed to about 37 ° C, for example, an average molecular weight of about 1000 to 6000.
  • PEG solution is usually added at a concentration of 30 to 60% (w / v) and mixed to form the desired fused cell (hybridoma).
  • cell fusion agents and the like unfavorable for the growth of hypridoma can be removed by repeating the operation of adding an appropriate culture solution successively, centrifuging and removing the supernatant.
  • the above-mentioned ibridoma is selected by culturing in a normal selective culture solution, for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT medium is continued for a period of time, usually several days to several weeks, sufficient for the cells (non-fusion cells) other than the target hyperpridoma to die. The usual limiting dilution method is then performed to screen and clone the hyperidoma that produces the desired antibody.
  • a normal selective culture solution for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT medium is continued for a period of time, usually several days to several weeks, sufficient for the cells (non-fusion cells) other than the target hyperpridoma to die.
  • the usual limiting dilution method is then performed to screen and clone the hyperidoma that produces the desired antibody
  • human lymphocytes are sensitized with a desired antigen protein or antigen-expressing cells in vitro, and sensitized B lymphocytes are human myeloma. It is also possible to obtain a desired human antibody having a binding activity to a desired antigen or antigen-expressing cell by fusing with a cell such as U266 (see Japanese Patent Publication No. 59878). Furthermore, an antigen or an antigen-expressing cell may be administered to a transgenic animal having a repertoire of human antibody genes, and a desired human antibody may be obtained according to the method described above. (International Patent Application Publication Number) WO 93/12227, WO 92/03918, WO 94/02602, WO 94/25585, WO 96/34096, WO 96 / 33735).
  • the thus-produced monoclonal antibody-producing hybridoma can be subcultured in a normal culture solution and can be stored for a long time in liquid nitrogen.
  • the hybridoma is obtained by culturing the hyperidoma according to a normal method and obtaining it as a culture supernatant, or administering the hyperidoma to a mammal compatible therewith. Then, it can be proliferated and used as its ascites.
  • the former method is suitable for obtaining high-purity antibodies, while the latter method is suitable for mass production of antibodies.
  • the production of anti-IL-6 receptor antibody-producing ibridoma can be carried out by the method disclosed in JP-A-3-139293.
  • PM-1 antibody-producing hybridoma is injected into the peritoneal cavity of BALB / c mice to obtain ascites, and PM-1 antibody is purified from this ascites, or this hybridoma is treated with an appropriate medium, for example, 10% Serum, cultured in RPMI1640 medium containing 5% BM-Condimed HI (Boehringer Mannheim), Hypridoma SFM medium (GIBCO-BRL), PF ⁇ - ⁇ medium (GIBCO-BRL), etc. From the culture supernatant It can be performed by a method of purifying PM-1 antibody.
  • an appropriate medium for example, 10% Serum, cultured in RPMI1640 medium containing 5% BM-Condimed HI (Boehringer Mannheim), Hypridoma SFM medium (GIBCO-BRL), PF ⁇ - ⁇ medium (GIBCO-BR
  • a monoclonal antibody a recombinant form in which an antibody gene is cloned in a hybridoma, inserted into an appropriate vector, introduced into a host, and produced using a gene recombination technique.
  • Antibodies can be used (see, for example, Borrebaeck CAK and Larrick JW THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990).
  • mRNA encoding the variable (V) region of an antibody is isolated from a cell that produces the target antibody, for example, a hyperidoma. Isolation of mRNA is performed by a known method such as guanidine ultracentrifugation (Chirgwin, JM et al "Biochemistry (1979) 18, 5294-5299), AGPC (Chomczynski, P. et al., Anal. Biochem (1987) 162, 156-159), etc., and prepare mRNA using mRNA Purification Kit (Pharmacia) etc. Also, use QuickPrep mRNA Purification Kit (Pharmacia) mRNA can be prepared directly.
  • cDNA of the antibody V region is synthesized from the obtained mRNA using reverse transcriptase.
  • cDNA synthesis can be performed using AMV Reverse Transcriptase First-strand cDNA Synthesis Kit or the like.
  • AMV Reverse Transcriptase First-strand cDNA Synthesis Kit or the like.
  • 5'-Ampli FINDER RACE Kit (Clontech) and 5'-RACE method using PCR (Frohman, MA et al., Proc. Natl. A cad. Sci. USA (1988) 85, 8998-9002; Belyavsky, A. et al "Nucleic Acids Res. (1989) l 7, 2919-2932).
  • the desired DNA fragment can be obtained from the obtained PCR product.
  • DNA encoding the V region of the target antibody is obtained, it is ligated to DNA encoding the desired antibody constant region (C region) and incorporated into an expression vector.
  • DNA encoding the V region of the antibody is ligated to DNA encoding the desired antibody constant region (C region) and incorporated into an expression vector.
  • incorporate the DNA encoding the V region of the antibody into an expression vector containing the DNA of the antibody C region.
  • the antibody gene is incorporated into an expression vector so as to be expressed under the control of an expression control region such as an enhancer or promoter as described below.
  • an expression control region such as an enhancer or promoter as described below.
  • host cells can be transformed with this expression vector to express the antibody.
  • a genetically engineered antibody such as a chimeric antibody, a humanized antibody, a human (human) antibodies can be used. These modified antibodies can be produced using known methods.
  • the chimeric antibody is produced by ligating the DNA encoding the antibody V region obtained as described above with the DNA encoding the human antibody C region, incorporating it into an expression vector, introducing it into a host, and producing it.
  • EP 125023 European patent application publication number
  • W 0 92-19759 European patent application publication number W 0 92-19759
  • a humanized antibody is also referred to as a reshaped human antibody or a humanized antibody, and the complementarity determining region (CDR) of a non-human mammal such as a mouse antibody is used as the complementarity determining region of a human antibody.
  • CDR complementarity determining region
  • a general genetic recombination technique is also known (see European Patent Application Publication No. EP 125023, International Patent Application Publication No. WO 92-19759).
  • a DNA sequence designed to link the CDR of a mouse antibody and the framework region (FR) of a human antibody has a portion that overlaps the terminal portion.
  • Several prepared oligonucleotide forces are also synthesized by PCR.
  • the obtained DNA is obtained by ligating with the DNA encoding the human antibody C region, then incorporating it into an expression vector, introducing it into a host and producing it (European Patent Application Publication Number EP 239400, International Patent Application Publication Number). WO 92-19759).
  • the complementarity determining region forms a favorable antigen binding site is selected. If necessary, the amino acid in the framework region of the variable region of the antibody may be substituted so that the complementarity-determining region of the reshaped human antibody forms an appropriate antigen-binding site (Sato, K. et al., Cancer Res. (1993) 53, 851-856).
  • the human antibody C region is used for the chimeric antibody and the humanized antibody.
  • Examples of the human antibody C region include Cy, and for example, C ⁇ 1, C ⁇ 2, C ⁇ 3, or Cy4 can be used.
  • the human antibody C region may be modified in order to improve the stability of the antibody or its production.
  • the chimeric antibody is composed of a variable region of a non-human mammal-derived antibody and a C region derived from a human antibody, and the humanized antibody is a complementarity determining region of a non-human mammal-derived antibody and a frame derived from a human antibody. Since the antigenicity in the human body is reduced, these are useful as antibodies used in the present invention.
  • humanized antibody used in the present invention include the human rabbit PM-1 antibody (see International Patent Application Publication No. WO 92-19759).
  • a technique for obtaining human antibodies by panning using a human antibody library is also known.
  • a variable region of a human antibody can be expressed as a single chain antibody (scFv) on the surface of the phage by the phage display method, and a phage that binds to the antigen can be selected.
  • the DNA sequence encoding the variable region of the human antibody that binds to the antigen can be determined. If the DNA sequence of scFv that binds to the antigen is clarified, an appropriate expression vector containing the sequence can be prepared, and a human antibody can be obtained.
  • WO 92/01047, WO 92/20791, WO 93/06213, WO 93/11236, WO 93/19172, WO 95/01438, and WO 95/15388 can be referred to.
  • the antibody gene constructed as described above can be expressed by a known method. When mammalian cells are used, they can be expressed by commonly used useful promoters, expressed antibody genes, DNA 3 functionally linked to the 3 'downstream, or vectors containing them. it can.
  • the promoter Zenhansa can be a human cytomegalovirus immediate promoter / enhancer.
  • promoters that can be used for the expression of the antibodies used in the present invention, such as retrovirus, poliovirus, adenovirus, simian virus 40 (SV40), etc.
  • retrovirus poliovirus
  • adenovirus adenovirus
  • simian virus 40 SV40
  • a mammalian cell-derived promoter such as human longon factor 1 ⁇ (HEFla) may be used.
  • the method of Mulligan et al. (Mulligan, RC et al., Nature (1979) 277, 108-114) and the HEF1 ⁇ -mouth motor Z enhancer are used.
  • it can be easily carried out according to the method of Mizushima et al. (Mizushima, S. and Nagata, S. Nucleic Acids Res. (1990) 18, 5322).
  • E. coli In the case of E. coli, it can be expressed by functionally binding a useful promoter commonly used, a signal sequence for antibody secretion, and an antibody gene to be expressed.
  • promoters include lacZ promoter and & 8 promoter.
  • Ward et al. Ward, ES et al., Nature (1989) 341, 5 44-546; Ward, ES et al. FASEB J. (1992) 6, 2422- 2427
  • the method of Better et al. (Better, M. et al. Science (1988) 240, 1041-1043) may be followed.
  • a pelB signal sequence (Lei, S. P. et al J. Bacteriol. (1987) 169, 4379-4383) may be used in the case of producing it in the periplasm of E. coli. After separating the antibody produced in the periplasm, the structure of the antibody is appropriately refolded and used (see, for example, WO96 / 30394).
  • the expression vector can be used as a selectable marker for selection of aminoglycoside phosphotransferase (APH) gene, thymidine kinase (TK) gene.
  • APH aminoglycoside phosphotransferase
  • TK thymidine kinase
  • any production system can be used.
  • Production systems for antibody production include in vitro and in vivo production systems.
  • In vitro production systems include production systems that use eukaryotic cells and production systems that use prokaryotic cells.
  • Animal cells include (1) mammalian cells such as CHO, COS, myeloma, BHK (baby hamster kidney), HeLa, Vero, etc., (2) amphibian cells such as Xenopus oocytes, or ( 3) Insect cells such as s! 9, s! 21, and Tn5 are known.
  • mammalian cells such as CHO, COS, myeloma, BHK (baby hamster kidney), HeLa, Vero, etc.
  • amphibian cells such as Xenopus oocytes, or ( 3) Insect cells such as s! 9, s! 21, and Tn5 are known.
  • plant cells cells derived from Nicotiana tabacum are known, and these may be cultured in callus.
  • fungal cells include yeasts such as Saccharomyces birds, row f Saccharomyces cerevisiae, filamentous fungi such as Aspergillus, such as Aspergill us niger, etc. Are known
  • prokaryotic cells When prokaryotic cells are used, there are production systems using bacterial cells.
  • bacterial cells include E. coli and Bacillus subtilis.
  • An antibody can be obtained by introducing a desired antibody gene into these cells by transformation, and culturing the transformed cells in vitro. Culture is performed according to a known method. For example, DMEM, MEM, RPMI1640, IMDM can be used as the culture medium, and serum supplements such as fetal calf serum (FCS) can be used in combination. Alternatively, antibodies may be produced in vivo by transferring cells into which the antibody gene has been introduced to the abdominal cavity of animals.
  • FCS fetal calf serum
  • examples of in vivo production systems include production systems using animals and production systems using plants.
  • animals When animals are used, there are production systems using mammals and insects.
  • mammals As mammals, goats, pigs, hidges, mice, tusks, etc. can be used (Vic ki Glaser, SPECTRUM Biotechnology Applications, 1993).
  • silkworms can be used as insects.
  • tobacco When using a plant, for example, tobacco can be used.
  • An antibody gene is introduced into these animals or plants to produce and recover the antibodies in the body of the animals or plants.
  • an antibody gene is inserted in the middle of a gene encoding a protein produced specifically in milk such as goat j8 casein to prepare a fusion gene.
  • a DNA fragment containing the fusion gene into which the antibody gene is inserted is injected into a goat embryo, and the embryo is introduced into a female goat.
  • hormones may be used as appropriate in the transgenic dog. (Ebert, K.M. et al., Bio / Technology (1994) 12, 699-702;).
  • a silkworm When a silkworm is used, a silkworm is infected with a baculovirus into which the target antibody gene is inserted, and a desired antibody is obtained from the body fluid of this silkworm (Maeda, S. et al., Nature (1985) 315, 592-594) o Further, when tobacco is used, the target antibody gene is inserted into a plant expression vector such as pMON530, and this vector is introduced into a bacterium such as Agrobacterium tumefaciens. This bacterium is infected with tobacco, for example Nicotiana tabacum, and the desired antibody is obtained from the leaves of this tobacco (Julian, K.-C. Ma et al., Eur. J. Immunol. (1994) 24, 131-138) .
  • DNAs encoding the antibody heavy chain (H chain) or light chain (L chain) are separately incorporated into an expression vector. May be transformed simultaneously, or the host may be transformed by incorporating DNA encoding the H and L chains into a single expression vector (see International Patent Application Publication No. WO 94-11523). ).
  • the antibody used in the present invention may be an antibody fragment or a modified product thereof as long as it can be suitably used in the present invention.
  • antibody fragments include Fab, F (ab ′) 2, Fv, or single chain Fv (scFv) in which H chain and L chain Fv are linked by an appropriate linker.
  • the antibody is treated with an enzyme such as papain or pepsin to generate antibody fragments, or genes encoding these antibody fragments are constructed and introduced into an expression vector.
  • an enzyme such as papain or pepsin to generate antibody fragments, or genes encoding these antibody fragments are constructed and introduced into an expression vector.
  • a suitable host cell eg, Co, MS et al, J. Immunol. (19 94) 152, 2968-2976, Better, M. & Horwitz, AH Methods in Enzymology (1989) 17 8, 476-496, Plueckthun, A. & Skerra, A. Methods in Enzymology (1989) 178, 497-515, Lamoyi, E., Methods in Enzymology (1989) 121, 652-663, Rousseaux, J. et al., Methods in Enzymology (1989) 121, 663-66, Bird, RE et al., TIBTECH (1991) 9, 132-137).
  • scFv is obtained by linking the H chain V region and L chain V region of an antibody.
  • the H chain V region and the L chain V region are linked via a linker, preferably a peptide linker (Huston, JS et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1988). ) 85, 5879—5883).
  • a linker preferably a peptide linker (Huston, JS et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1988). ) 85, 5879—5883).
  • the H chain V region and the L chain V region in scFv are described as the above-mentioned antibody, they may be derived from a deviation.
  • the peptide linker that links the V regions for example, any single chain peptide consisting of amino acid residues 12-19 is used.
  • the DNA encoding scFv is in the shape of a DNA encoding the H chain or H chain V region of the antibody and the DNA encoding the L chain or L chain V region.
  • a portion of the DNA encoding the desired amino acid sequence is amplified by PCR using a primer pair that defines both ends of the DNA, and then a DNA encoding a portion of the peptide linker and both ends thereof are respectively H chain, Obtained by combining and amplifying primer pairs that are defined so as to be linked to the L chain.
  • DNA encoding scFv is prepared, an expression vector containing them and a host transformed with the expression vector can be obtained according to a conventional method.
  • ScFv can be obtained according to a conventional method.
  • antibody fragments can be produced by the host by obtaining and expressing the gene in the same manner as described above.
  • antibody as used in the present invention encompasses these antibody fragments.
  • a modified antibody an antibody conjugated with various molecules such as polyethylene glycol (PEG) can also be used.
  • PEG polyethylene glycol
  • the “antibody” referred to in the present invention includes these modified antibodies. In order to obtain such a modified antibody, it can be obtained by chemically modifying the obtained antibody. These methods are already established in this field.
  • the antibody produced and expressed as described above can be isolated from the inside and outside of the cell and from the host and purified to homogeneity. Separation and purification of the antibody used in the present invention is performed by affinity chromatography. It can be done with a luffy. Examples of the column used for the affinity chromatography include a protein A column and a protein G column. Examples of the carrier used for the protein A column include HyperD, POROS, Sepharose F.F. In addition, the separation and purification methods used for ordinary proteins are not limited in any way.
  • the antibodies used in the present invention can be separated and purified by appropriately selecting and combining chromatography, filters, ultrafiltration, salting out, dialysis and the like other than the above-mentioned affinity chromatography.
  • chromatography include ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, gel filtration, and the like. These chromatograms ⁇ are applied to HPL (High performance liquid chromatography) and protected. You can also use reverse phase HPLC!
  • the concentration of the antibody obtained above can be measured by measuring absorbance or ELISA.
  • absorbance when measuring absorbance, after appropriately diluting with PBS (-), measure absorbance at 280 nm and calculate lmg / ml as 1.350D.
  • ELISA it can be measured as follows. That is, 100 ⁇ l of goat anti-HgG (manufactured by TAG) diluted to 1 g / ml with 0.1 M bicarbonate buffer (pH 9.6) was placed in a 96-well plate (manufactured by Nunc) and placed at 4 ° C. -Incubate to immobilize antibody. After blocking, add appropriately diluted antibody to be used in the present invention or a sample containing the antibody, or 100 ⁇ l of HgG (manufactured by CAPPEL) as a sample, and incubate at room temperature for 1 hour.
  • the IL-6 variant used in the present invention is a substance that has a binding activity to the IL-6 receptor and does not transmit the biological activity of IL-6. That is, the IL-6 variant does not transmit IL-6 biological activity to the IL-6 receptor competitively with IL-6, and therefore blocks signal transmission by IL-6.
  • IL-6 variants were introduced by substitution of amino acid residues in the amino acid sequence of IL-6 Is produced.
  • the origin of IL-6, which is a variant of IL-6, is not limited, but human IL-6 is preferable in consideration of antigenicity.
  • the amino acid sequence of IL-6 can be determined using a known molecular modeling program such as W HATIF (Vriend et al., J. Mol. Graphics (1990) 8, 52-56). This is done by predicting the next structure and evaluating the effect on the total number of amino acid residues to be substituted. After determining the appropriate replacement amino acid residue, by introducing a mutation that replaces the amino acid by the usual PCR method, using a vector containing the base sequence encoding the HL-6 gene as a saddle type, A gene encoding the IL-6 variant is obtained. This can be incorporated into an appropriate expression vector as necessary, and an IL-6 variant can be obtained according to the expression, production and purification methods of the recombinant antibody.
  • W HATIF Wide et al., J. Mol. Graphics (1990) 8, 52-56
  • IL-6 variants include Brakenhoff et al., J. Biol. Chem. (1994) 269, 86-93, and Savino et al, EMBO J. (1994) 13, 1357-1367. WO 96-18648, W096-17869.
  • the IL-6 partial peptide or IL-6 receptor partial peptide used in the present invention has a binding activity to IL-6 receptor or IL-6, respectively, and transmits the biological activity of IL-6.
  • Shina is a substance. That is, IL-6 partial peptide or IL-6 receptor partial peptide binds to IL-6 receptor or IL-6, and captures these to specifically bind IL-6 to IL-6 receptor. Obstruct it. As a result, IL-6 does not transmit the biological activity of IL-6, thus blocking IL-6 signaling.
  • IL-6 partial peptide or IL-6 receptor partial peptide is a part of the region involved in the binding of IL-6 to IL-6 receptor in the amino acid sequence of IL-6 or IL-6 receptor Alternatively, it is a peptide consisting of the entire amino acid sequence. Such peptides usually consist of 10 to 80, preferably 20 to 50, more preferably 20 to 40 amino acid residues.
  • IL-6 partial peptide or IL-6 receptor partial peptide specifies the region involved in the binding between IL-6 and IL-6 receptor in the amino acid sequence of IL-6 or IL-6 receptor Based on the amino acid sequence of a part or all of the specified region, it can be prepared by a generally known method such as a genetic engineering method or a peptide synthesis method.
  • IL-6 partial peptide or IL-6 receptor partial peptide is prepared by genetic engineering techniques For example, a DNA sequence encoding a desired peptide can be incorporated into an expression vector and obtained according to the expression, production and purification methods of the recombinant antibody.
  • a method generally used in peptide synthesis for example, a solid phase synthesis method or a liquid phase synthesis method may be used. it can.
  • a deprotection reaction and a cleavage reaction from the peptide chain support are performed.
  • hydrogen fluoride or trifluoromethanesulfonic acid can usually be used for the Boc method
  • TFA can be used for the Fmoc method.
  • Boc method for example, the protected peptide resin is treated in hydrogen fluoride in the presence of carsol. The peptide is then recovered by removing the protecting group and cleaving the support force. This is freeze-dried to obtain a crude peptide.
  • the deprotection reaction and the cleavage reaction from the peptide chain support can be performed in TFA by the same operation as described above.
  • the obtained crude peptide can be separated and purified by application to HPLC. For elution, use water-acetonitrile solvent usually used for protein purification under optimal conditions. The fraction corresponding to the peak of the obtained chromatographic profile is collected and lyophilized. The peptide fraction thus purified is identified by molecular weight analysis by mass spectrum analysis, amino acid composition analysis, amino acid sequence analysis, or the like.
  • IL-6 partial peptide and IL-6 receptor partial peptide are described in JP-A-2-188600. It is disclosed in Kaihei 7-324097, JP-A-8-311098 and US Pat. No. 5,521,0075.
  • the antibody used in the present invention may be a conjugated antibody bound to various molecules such as polyethylene glycol (PEG), radioactive substances, and toxins. Such a conjugated antibody can be obtained by chemically modifying the obtained antibody. Antibody modification methods have already been established in this field.
  • the “antibody” in the present invention includes these conjugated antibodies.
  • the therapeutic agent for myocardial infarction and the inhibitor of left ventricular remodeling after myocardial infarction of the present invention can be used in the treatment of myocardial infarction.
  • treatment of myocardial infarction means suppression or prevention of symptoms of myocardial infarction, heart failure caused by myocardial infarction, and severe arrhythmia due to ischemia.
  • Symptoms associated with myocardial infarction include arrhythmia (premature contraction, ventricular fibrillation, atrioventricular block), heart failure, papillary muscle rupture, cardiac rupture, ventricular aneurysm (left anterior descending coronary artery infarction) As a result of this, the post-myocardial infarction syndrome, etc. occurring at the apex of the heart) can be mentioned, but the “cardiac infarction therapeutic agent” of the present invention can also suppress and prevent these symptoms.
  • suppression of left ventricular remodeling after myocardial infarction means suppression or prognosis of myocardial hypertrophy (expansion of the entire left ventricle) to compensate for a decrease in function of the infarct region after myocardial infarction. It means to prevent.
  • This myocardial hypertrophy is caused by the myocardial cells in the infarct region being replaced by fibrous tissue such as collagen fibers due to necrosis and dropping, and the fibrous tissue is thinly stretched.
  • fibrous tissue such as collagen fibers due to necrosis and dropping
  • fibrous tissue is thinly stretched.
  • “suppressing left ventricular remodeling after myocardial infarction” can also be achieved by suppressing and preventing “replacement of infarcted area with collagen fibers” and “stretching of fibrous tissue”, that is, improving the state of infarcted area.
  • MPO myelin peroxidase
  • Suppressing MPO activity and inhibiting MCP-1 expression also mean “improving the state of the infarct region” described above.
  • IL-6 inhibitory activity of an IL-6 inhibitor can be evaluated by setting a negative control group that does not contain an IL-6 inhibitor in addition to the group in which the harmful agent is present, and comparing the results obtained with both. .
  • the subject to which the therapeutic agent for myocardial infarction of the present invention and the inhibitor of left ventricular remodeling after myocardial infarction are administered is a mammal.
  • the mammal is preferably a human.
  • an effective dosage is an amount that is free to the extent that free antibody is present in the blood.
  • Per month (4 weeks) 0.5mg to 40mg, preferably lmg to 20mg divided into several times, eg 2 times Z week, 1 time Z week, 1 time Z2 week, 1 time Z4 week
  • Intravenous injection such as infusion, subcutaneous injection, etc., etc. in the administration schedule such as.
  • the administration schedule is as follows: 2 times Z week or 1 time Z week to 1 time Z2 week, 1 time Z3 week, 1 time Z4 week while observing the state after transplantation and observing the trend of blood test values It is also possible to adjust by increasing the interval.
  • myocardial MPO activity was not significantly different between sham group myocardium and non-myocardial infarction area, but was significantly increased about 4-fold in myocardial infarction area (controcon non risk 0.037 ⁇ 0.006). , control—risk 0.122 ⁇ 0.035, p ⁇ 0.01). Furthermore, in the MR16-1 administration group, this increase in MPO activity in the myocardial infarction region was significantly suppressed (MR16-l-risk 0.034 ⁇ 0.008, p ⁇ 0.05 vs. contro risk).

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

　本発明者らは抗IL-6受容体抗体の心筋梗塞における梗塞領域の状態を改善する効果、および心筋梗塞後の左室リモデリングを抑制する効果について検討を行った。その結果、抗IL-6受容体抗体を投与することにより、心筋梗塞領域においてMPO活性の増加が有意に抑制された。また、心筋MCP-1の発現が、心筋梗塞領域および非梗塞領域において抑制された。さらに、心臓超音波検査、組織学検査により心臓の肥大が抑制されることを明らかにした。

Description

明 細 書
心疾患治療剤
技術分野
[0001] 本発明は、 IL-6阻害剤を有効成分として含有する心筋梗塞治療剤、およびその利 用に関する。また、本発明は、 IL-6阻害剤を有効成分として含有する、心筋梗塞後の 左室リモデリングの抑制剤、およびその利用に関する。
背景技術
[0002] 心筋梗塞は、虚血性心疾患の一つで、心臓の冠動脈において動脈硬化等により 狭窄が起こり、冠動脈の血流量が極端に減少する、または停止することにより心筋が 壊死を起こす疾患である。梗塞領域が拡大'悪化すると心不全や、虚血による重度 の不整脈を合併して生命への危険が高まる。
[0003] 心筋梗塞が進行すると、梗塞領域の心筋細胞が壊死 '脱落し、コラーゲン線維など の線維組織に置換される。この梗塞領域は収縮力を欠き、心収縮に伴い上昇する心 内圧に耐え切れず、線維壁が薄く伸展していく。その結果、機能低下を補うため非梗 塞領域において心内腔の肥大が起こり、左室全体が拡張する。この現象は左室リモ デリングと呼ばれ、心機能をさらに低下させ、その後の罹患率および死亡率を増加さ せることが知られている。そのため心筋梗塞症の予後改善のためには、できる限り早 く力 進行中の左室リモデリングを抑制することが重要とされており、有効な治療方法 の構築が望まれている。
[0004] IL- 6は B細胞刺激因子 2(BSF2)あるいはインターフェロン β 2とも呼称されたサイト力 インである。 IL-6は、 Βリンパ球系細胞の活性化に関与する分化因子として発見され（ 非特許文献 1)、その後、種々の細胞の機能に影響を及ぼす多機能サイト力インであ ることが明らかになった (非特許文献 2)。 IL-6は、 Τリンパ球系細胞の成熟化を誘導 することが報告されて 、る (非特許文献 3)。
[0005] IL-6は、細胞上で二種の蛋白質を介してその生物学的活性を伝達する。一つは、 I L-6が結合する分子量約 80kDのリガンド結合性蛋白質の IL-6受容体である (非特許 文献 4、 5)。 IL-6受容体は、細胞膜を貫通して細胞膜上に発現する膜結合型の他に 、主にその細胞外領域からなる可溶性 IL-6受容体としても存在する。
[0006] もう一つは、非リガンド結合性のシグナル伝達に係わる分子量約 130kDの膜蛋白質 gpl30である。 IL-6と IL-6受容体は IL-6ZIL-6受容体複合体を形成し、次いで gpl30 と結合することにより、 IL-6の生物学的活性が細胞内に伝達される（非特許文献 6)。
[0007] IL-6阻害剤は、 IL-6の生物学的活性の伝達を阻害する物質である。これまでに、 IL -6に対する抗体 (抗 IL-6抗体)、 IL-6受容体に対する抗体 (抗 IL-6受容体抗体)、 gpl 30に対する抗体 (抗 gpl30抗体）、 IL-6改変体、 IL-6又は IL-6受容体部分ペプチド等 が知られている。
[0008] 抗 IL-6受容体抗体に関しては、いくつかの報告がある（非特許文献 7、 8、特許文 献 1〜3)。その一つであるマウス抗体 PM-1 (非特許文献 9)の相捕性決定領域 (CDR ； complementarity determining region )をヒト f几体へ移植することにより得られたヒトイ匕 PM-1抗体が知られて 、る（特許文献 4)。
[0009] これまで、 IL-6は、筋収縮性機能に負の影響を与えること（非特許文献 10)、または 、 IL-6および IL-6受容体の過剰発現により gpl30が恒常的に活性ィ匕したマウスで心 臓肥大が発達すること (非特許文献 11)などから、心臓機能および構造に影響するこ とが示唆されてきた。 IL-6は心筋梗塞の後に左室、特に再灌流した心筋梗塞の境界 部分で発現し (非特許文献 12)、その発現レベルは心筋梗塞後の左室 (LV)の大きさ に関与する（非特許文献 13)。また低酸素ストレス下で心筋細胞は IL-6を生成するこ と (非特許文献 14)、梗塞後リモデリングの際、非筋細胞でのサイト力イン発現が細胞 外マトリックス変化にぉ 、て制御的な役割を果たすことが報告されて 、る（非特許文 献 15)。また、心筋梗塞と IL-6の関係については、 IL-6を介して活性ィ匕される JAK/S TAT系が心筋梗塞において保護的に作用しているという報告がある（非特許文献 16
) o
[0010] 一方で、 IL-6ノックアウトマウスを用いた実験では、 IL-6の欠損は心筋梗塞における 梗塞領域のサイズや左室リモデリング等には影響がな力つたことが報告されている（ 非特許文献 17)。このように、心筋梗塞及び心筋梗塞後の左室リモデリングにおける I L-6の役割は解明されて 、なかった。
[0011] なお、本出願の発明に関連する先行技術文献情報を以下に示す。 非特許文献 l:Hirano, T. et al, Nature (1986) 324, 73-76
非特許文献 2:Akira, S. et al., Adv. in Immunology (1993) 54, 1-78
非特許文献 3:Lotz, M. et al" J. Exp. Med. (1988)167, 1253-1258
非特許文献 4:Taga, T. et al" J. Exp. Med. (1987) 166, 967-981
非特許文献 5:Yamasaki, K. et al., Science (1988) 241, 825-828
非特許文献 6:Taga, T. et al" Cell (1989) 58, 573-581
非特許文献 7:Novick, D. et al., Hybridoma (1991) 10, 137-146
非特許文献 8: Huang, Y. W. et al., Hybridoma (1993) 12, 621-630
非特許文献 9:Hirata, Y. et al., J. Immunol. (1989) 143, 2900-2906
非特許文献 10:Finkel, M. S. et al., Science (1992) 257, 387-389
非特許文献 ll:Hirota, H. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92, 4862-4866 非特許文献 12:Gwechenberger, M. et al., Circulation (1999) 99, 546-551 非特許文献 13:Ono, K. et al., Circulation (1998) 98, 149-156
非特許文献 14:Yamauchi- Takihara, K. et al., Circulation (1995) 91, 1520-1524 非特許文献 15:Yue, P. et al., Am. J. Physiol. (1998) 275.H250-H258
非特許文献 16:Negoro, S. et al., Cardiovasc. Res. (2000) 47, 797-805
非特許文献 17:Fuchs M. et al., FASEB J. (2003) 17, 2118-2120
特許文献 1：国際特許出願公開番号 WO 95-09873
特許文献 2：フランス特許出願公開番号 FR 2694767
特許文献 3:米国特許番号 US 5216128
特許文献 4:国際特許出願公開番号 WO 92-19759
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0012] これまで、心筋梗塞及び心筋梗塞後の左室リモデリングにおいて IL-6が関与するこ とが示唆されていた力 その詳細な役割については明らかにされていな力つた。また
、 IL-6阻害剤の投与が、心筋梗塞及び心筋梗塞後の左室リモデリングにおいて、ど のような効果を示すか明らかにされていな力つた。
[0013] 本発明はこのような状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、 IL-6阻害剤を 有効成分として含有する心筋梗塞治療剤を提供することにある。また、本発明は、 IL -6阻害剤を有効成分として含有する、心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制剤を提 供すること〖こある。さらに本発明は、 IL-6阻害剤を、心筋梗塞を発症した対象に投与 する工程を含む、心筋梗塞を治療する方法、および、心筋梗塞後の左室リモデリング を抑制する方法の提供も課題とする。
課題を解決するための手段
[0014] 本発明者らは、上記の課題を解決するために、抗 IL-6受容体抗体の心筋梗塞にお ける梗塞領域の状態を改善する効果、および心筋梗塞後の左室リモデリングを抑制 する効果にっ 、て検討を行った。
[0015] まず、本発明者らは、雄性 Balb/cマウスの左前下行枝を結紮し、心筋梗塞モデル マウスを作成した。続いて、該心筋梗塞モデルマウスに対し、抗 IL-6受容体抗体 (MR
16-1) 500 μ gを腹腔内投与した。
その結果、心筋梗塞領域にお！、てミエ口ペルォキシダーゼ (MPO)活性の増加が有 意に抑制されることが明らかとなった。また、抗 IL-6受容体抗体投与マウスでは、心 筋 MCP- 1 (monocyte chemoattractant protein- 1)の発現力 心筋梗塞領域および非 梗塞領域において抑制された。さら〖こ、心臓超音波検査、組織学検査のどちらにお
Vヽても、抗 IL-6受容体抗体投与マウスでは心臓の肥大が抑制されて 、ることが明ら カゝとなった。
[0016] 即ち、本発明者らは、抗 IL-6受容体抗体を投与することにより、心筋梗塞における 梗塞領域の状態を改善し、心筋梗塞後の左室リモデリングを抑制することが可能で あることを初めて見出し、これにより本発明を完成するに至った。
[0017] 本発明は、より具体的には以下の〔1〕〜〔31〕を提供するものである。
〔1〕 IL-6阻害剤を有効成分として含有する、心筋梗塞治療剤。
〔2〕 IL-6阻害剤が IL-6を認識する抗体であることを特徴とする〔1〕に記載の心筋梗塞 治療剤。
〔3〕 IL-6阻害剤が IL-6受容体を認識する抗体であることを特徴とする〔1〕に記載の心 筋梗塞治療剤。
〔4〕抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする〔2〕または〔3〕に記載の心筋梗 塞治療剤。
〔5〕抗体がヒ HL-6に対する抗体またはヒ HL-6受容体に対する抗体であることを特徴 とする〔2〕または〔3〕に記載の心筋梗塞治療剤。
〔6〕抗体が組換え型抗体であることを特徴とする〔2〕または〔3〕に記載の心筋梗塞治 療剤。
〔7〕抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であることを特徴とする〔6〕に記載の 心筋梗塞治療剤。
〔8〕 IL-6阻害剤を有効成分として含有する、心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制 剤。
〔9〕 IL-6阻害剤が IL-6を認識する抗体であることを特徴とする〔8〕に記載の抑制剤。 〔10〕 IL-6阻害剤が IL-6受容体を認識する抗体であることを特徴とする〔8〕に記載の 抑制剤。
〔11〕抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする〔9〕または〔10〕に記載の抑 制剤。
〔12〕抗体がヒ HL-6に対する抗体またはヒ HL-6受容体に対する抗体であることを特 徴とする〔9〕または〔10〕に記載の抑制剤。
〔13〕抗体が組換え型抗体であることを特徴とする〔9〕または〔10〕に記載の抑制剤。 〔14〕抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であることを特徴とする〔13〕に記 載の抑制剤。
〔15〕心筋梗塞の治療に用いられる、〔8〕から〔14〕のいずれかに記載の抑制剤。 〔16〕IL-6阻害剤を、心筋梗塞を発症した対象に投与する工程を含む、対象におい て心筋梗塞を治療する方法。
〔17〕IL-6阻害剤を、心筋梗塞を発症した対象に投与する工程を含む、対象におい て心筋梗塞後の左室リモデリングを抑制する方法。
〔18〕 IL-6阻害剤が IL-6を認識する抗体であることを特徴とする〔16〕または〔17〕に 記載の方法。
〔19〕 IL-6阻害剤が IL-6受容体を認識する抗体であることを特徴とする〔16〕または〔 17]に記載の方法。 〔20〕抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする〔 18〕または〔 19〕に記載の方 法。
〔21〕抗体がヒ HL-6に対する抗体またはヒ HL-6受容体に対する抗体であることを特 徴とする〔 18〕または〔 19〕に記載の方法。
[22]抗体が組換え型抗体であることを特徴とする〔18〕または〔19〕に記載の方法。 〔23〕抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であることを特徴とする〔22〕に記 載の方法。
〔24〕心筋梗塞治療剤を製造するための、 IL— 6阻害剤の使用。
〔25〕心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制剤を製造するための、 IL 6阻害剤の使 用。
〔26〕 IL-6阻害剤が IL-6を認識する抗体であることを特徴とする〔24〕または〔25〕に 記載の使用。
[27] IL-6阻害剤が IL-6受容体を認識する抗体であることを特徴とする〔24〕または〔 25〕に記載の使用。
〔28〕抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする〔26〕または〔27〕に記載の使 用。
〔29〕抗体がヒ HL-6に対する抗体またはヒ HL-6受容体に対する抗体であることを特 徴とする〔26〕または〔27〕に記載の使用。
〔30〕抗体が組換え型抗体であることを特徴とする〔26〕または〔27〕に記載の使用。 〔31〕抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であることを特徴とする〔30〕に記 載の使用。
発明を実施するための最良の形態
[0018] 本発明者らは、抗 IL-6受容体抗体を投与することにより、心筋梗塞における梗塞領 域の状態を改善し、心筋梗塞後の左室リモデリングを抑制することが可能であること を見出した。本発明は、これらの知見に基づくものである。
[0019] 本発明は、 IL-6阻害剤を有効成分として含有する、心筋梗塞治療剤および心筋梗 塞後の左室リモデリングの抑制剤に関する。
本発明において「IL-6阻害剤」とは、 IL-6によるシグナル伝達を遮断し、 IL-6の生物 学的活性を阻害する物質である。 IL-6阻害剤は、好ましくは IL-6、 IL-6受容体及び g pl30のいずれかの結合に対する阻害作用を有する物質である。
[0020] 本発明の IL-6阻害剤としては、例えば抗 IL-6抗体、抗 IL-6受容体抗体、抗 gpl30抗 体、 IL-6改変体、可溶性 IL-6受容体改変体あるいは IL-6又は IL-6受容体の部分べ プチドおよび、これらと同様の活性を示す低分子物質が挙げられるが、特に限定され るものではない。本発明の IL-6阻害剤としては、好ましくは IL-6受容体を認識する抗 体を挙げることが出来る。
本発明における抗体の由来は特に限定されるものではな 、が、好ましくは哺乳動 物由来であり、より好ましくはヒト由来の抗体を挙げることが出来る。
[0021] 本発明で使用される抗 IL-6抗体は、公知の手段を用いてポリクローナル又はモノク ローナル抗体として得ることができる。本発明で使用される抗 IL-6抗体として、特に哺 乳動物由来のモノクローナル抗体が好まし 、。哺乳動物由来のモノクローナル抗体 としては、ハイプリドーマに産生されるもの、および遺伝子工学的手法により抗体遺 伝子を含む発現ベクターで形質転換した宿主に産生されるものがある。この抗体は I L-6と結合することにより、 IL-6の IL-6受容体への結合を阻害して IL-6の生物学的活 性の細胞内への伝達を遮断する。
このような抗体としては、 MH166(Matsuda, T. et al.， Eur. J. Immunol. (1988) 18, 95 1-956)や SK2抗体 (Sato, K. et al,第 21回 日本免疫学会総会、学術記録 (1991)21, 166)等が挙げられる。
[0022] 抗 IL-6抗体産生ハイプリドーマは、基本的には公知技術を使用し、以下のようにし て作製できる。すなわち、 IL-6を感作抗原として使用して、これを通常の免疫方法に したがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と 融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体産生細胞をスクリー ユングすることによって作製できる。
[0023] 具体的には、抗 IL-6抗体を作製するには次のようにすればよい。例えば、抗体取得 の感作抗原として使用されるヒ HL- 6は、 Eur. J. Biochem (1987) 168, 543-550、 J. Im munol.(1988)140, 1534-1541、あるいは Agr. Biol. Chem.(1990)54, 2685- 2688に開 示された IL-6遺伝子 Zアミノ酸配列を用いることによって得られる。 [0024] IL-6の遺伝子配列を公知の発現ベクター系に挿入して適当な宿主細胞を形質転 換させた後、その宿主細胞中又は、培養上清中から目的の IL-6蛋白質を公知の方 法で精製し、この精製 IL-6蛋白質を感作抗原として用いればよい。また、 IL-6蛋白質 と他の蛋白質との融合蛋白質を感作抗原として用いてもよ!、。
[0025] 本発明で使用される抗 IL-6受容体抗体は、公知の手段を用いてポリクローナル又 はモノクローナル抗体として得ることができる。本発明で使用される抗 IL-6受容体抗 体として、特に哺乳動物由来のモノクローナル抗体が好ましい。哺乳動物由来のモノ クローナル抗体としては、ハイプリドーマに産生されるもの、および遺伝子工学的手 法により抗体遺伝子を含む発現ベクターで形質転換した宿主に産生されるものがあ る。この抗体は IL-6受容体と結合することにより、 IL-6の IL-6受容体への結合を阻害 して IL-6の生物学的活性の細胞内への伝達を遮断する。
[0026] このような抗体としては、 MR16- 1抗体（Tamura, T. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. US A (1993) 90, 11924—11928)、 PM— 1抗体 (Hirata, Y. et al" J. Immunol. (1989) 143, 2 900-2906)、 AUK12-20抗体、 AUK64-7抗体あるいは AUK146-15抗体（国際特許出 願公開番号 WO 92-19759)などが挙げられる。これらのうちで、ヒ HL-6受容体に対す る好まし!/、モノクローナル抗体としては PM-1抗体が例示され、またマウス IL-6受容体 に対する好ましいモノクローナル抗体としては MR16-1抗体が挙げられる。
[0027] 抗 IL-6受容体モノクローナル抗体産生ノ、イブリドーマは、基本的には公知技術を 使用し、以下のようにして作製できる。すなわち、 IL-6受容体を感作抗原として使用し て、これを通常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融 合法によって公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナ ルな抗体産生細胞をスクリーニングすることによって作製できる。
[0028] 具体的には、抗 IL-6受容体抗体を作製するには次のようにすればよい。例えば、抗 体取得の感作抗原として使用されるヒ HL-6受容体は、欧州特許出願公開番号 EP 3 25474に、マウス IL-6受容体は日本特許出願公開番号特開平 3-155795に開示され た IL-6受容体遺伝子 Zアミノ酸配列を用いることによって得られる。
[0029] IL-6受容体蛋白質は、細胞膜上に発現しているものと細胞膜より離脱しているもの
(可溶性 IL- 6受容体） (Yasukawa, K. et al., J. Biochem. (1990) 108, 673- 676)との二 種類がある。可溶性 IL-6受容体は細胞膜に結合して 、る IL-6受容体の実質的に細 胞外領域から構成されており、細胞膜貫通領域あるいは細胞膜貫通領域と細胞内領 域が欠損している点で膜結合型 IL-6受容体と異なっている。 IL-6受容体蛋白質は、 本発明で用いられる抗 IL-6受容体抗体の作製の感作抗原として使用されうる限り、 V、ずれの IL-6受容体を使用してもょ 、。
[0030] IL-6受容体の遺伝子配列を公知の発現ベクター系に挿入して適当な宿主細胞を 形質転換させた後、その宿主細胞中又は、培養上清中から目的の IL-6受容体蛋白 質を公知の方法で精製し、この精製 IL-6受容体蛋白質を感作抗原として用いればよ い。また、 IL-6受容体を発現している細胞や IL-6受容体蛋白質と他の蛋白質との融 合蛋白質を感作抗原として用いてもよい。
[0031] 本発明で使用される抗 gpl30抗体は、公知の手段を用いてポリクローナル又はモノ クローナル抗体として得ることができる。本発明で使用される抗 gP130抗体として、特 に哺乳動物由来のモノクローナル抗体が好まし 、。哺乳動物由来のモノクローナル 抗体としては、ハイプリドーマに産生されるもの、および遺伝子工学的手法により抗 体遺伝子を含む発現ベクターで形質転換した宿主に産生されるものがある。この抗 体は gpl30と結合することにより、 IL-6ZIL-6受容体複合体の gpl30への結合を阻害 して IL-6の生物学的活性の細胞内への伝達を遮断する。
このような抗体としては、 \164抗体（特開平3-219894)、4811抗体ぉょび21"[4抗体（ US 5571513) B-S12抗体および B-P8抗体（特開平 8-291199)などが挙げられる。
[0032] 抗 gpl30モノクローナル抗体産生ノ、イブリドーマは、基本的には公知技術を使用し 、以下のようにして作製できる。すなわち、 gpl30を感作抗原として使用して、これを通 常の免疫方法にしたがって免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって 公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナル抗体産生 細胞をスクリーニングすることによって作製できる。
[0033] 具体的には、モノクローナル抗体を作製するには次のようにすればよい。例えば、 抗体取得の感作抗原として使用される gpl30は、欧州特許出願公開番号 EP 411946 に開示された gpl30遺伝子 Zアミノ酸配列を用いることによって得られる。
[0034] gpl30の遺伝子配列を公知の発現ベクター系に挿入して適当な宿主細胞を形質転 換させた後、その宿主細胞中又は、培養上清中から目的の gpl30蛋白質を公知の方 法で精製し、この精製 gpl30蛋白質を感作抗原として用いればよい。また、 gpl30を発 現している細胞や gpl30蛋白質と他の蛋白質との融合蛋白質を感作抗原として用い てもよい。
[0035] 感作抗原で免疫される哺乳動物としては、特に限定されるものではないが、細胞融 合に使用する親細胞との適合性を考慮して選択するのが好ましぐ一般的にはげつ 歯類の動物、例えば、マウス、ラット、ハムスター等が使用される。
[0036] 感作抗原を動物に免疫するには、公知の方法にしたがって行われる。例えば、一 般的方法として、感作抗原を哺乳動物の腹腔内又は、皮下に注射することにより行 われる。具体的には、感作抗原を PBS (Phosphate-Buffered Saline )や生理食塩水等 で適当量に希釈、懸濁したものを所望により通常のアジュバント、例えば、フロイント 完全アジュバントを適量混合し、乳化後、哺乳動物に 4-21日毎に数回投与するのが 好ましい。また、感作抗原免疫時に適当な担体を使用することができる。
[0037] このように免疫し、血清中に所望の抗体レベルが上昇するのを確認した後に、哺乳 動物から免疫細胞が取り出され、細胞融合に付される。細胞融合に付される好ましい 免疫細胞としては、特に脾細胞が挙げられる。
[0038] 前記免疫細胞と融合される他方の親細胞としての哺乳動物のミエローマ細胞は、 すでに、公知の種々の細胞株、例えば、 P3X63Ag8.653 (Kearney, J. F. et al. J. Imm nol. (1979) 123, 1548- 1550)、 P3X63Ag8U.l (Current Topics in Microbiology and I mmunology (1978) 81, 1—7) 、 NS- 1 (Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol.(19 76) 6, 511-519 )、 MPC- 11 (Margulies. D. H. et al" Cell (1976) 8, 405-415 )、 SP2/ 0 (Shulman, M. et al., Nature (1978) 276, 269—270 )、 FO (de St. Groth, S. F. et al ., J. Immunol. Methods (1980) 35, 1—21 )、 S194 (Trowbridge, I. S. J. Exp. Med. (197 8) 148, 313- 323)、 R210 (Galfre, G. et al" Nature (1979) 277, 131-133 )等が適宜 使用される。
[0039] 前記免疫細胞とミエローマ細胞の細胞融合は基本的には公知の方法、たとえば、ミ ルシユタインらの方法（Kohler. G. and Milstein, C. 、 Methods Enzymol. (1981) 73, 3 -46)等に準じて行うことができる。 [0040] より具体的には、前記細胞融合は例えば、細胞融合促進剤の存在下に通常の栄 養培養液中で実施される。融合促進剤としては例えば、ポリエチレングリコール (PEG )、センダイウィルス (HVJ)等が使用され、更に所望により融合効率を高めるためにジ メチルスルホキシド等の補助剤を添加使用することもできる。
[0041] 免疫細胞とミエローマ細胞との使用割合は、例えば、ミエローマ細胞に対して免疫 細胞を 1〜10倍とするのが好ましい。前記細胞融合に用いる培養液としては、例えば 、前記ミエローマ細胞株の増殖に好適な RPMI1640培養液、 MEM培養液、その他、こ の種の細胞培養に用いられる通常の培養液が使用可能であり、さらに、牛胎児血清 (FCS)等の血清補液を併用することもできる。
[0042] 細胞融合は、前記免疫細胞とミエローマ細胞との所定量を前記培養液中でよく混 合し、予め、 37°C程度に加温した PEG溶液、例えば、平均分子量 1000〜6000程度の PEG溶液を通常、 30〜60% (w/v)の濃度で添加し、混合することによって目的とする 融合細胞 (ハイブリドーマ）が形成される。続いて、適当な培養液を逐次添加し、遠心 して上清を除去する操作を繰り返すことによりハイプリドーマの生育に好ましくない細 胞融合剤等を除去できる。
[0043] 当該ノ、イブリドーマは、通常の選択培養液、例えば、 HAT培養液 (ヒポキサンチン、 アミノプテリンおよびチミジンを含む培養液)で培養することにより選択される。当該 H AT培養液での培養は、 目的とするハイプリドーマ以外の細胞 (非融合細胞）が死滅 するのに十分な時間、通常数日〜数週間継続する。ついで、通常の限界希釈法を 実施し、 目的とする抗体を産生するハイプリドーマのスクリーニングおよびクローニン グが行われる。
[0044] また、ヒト以外の動物に抗原を免疫して上記ハイプリドーマを得る他に、ヒトリンパ球 を in vitroで所望の抗原蛋白質又は抗原発現細胞で感作し、感作 Bリンパ球をヒトミエ ローマ細胞、例えば U266と融合させ、所望の抗原又は抗原発現細胞への結合活性 を有する所望のヒト抗体を得ることもできる（特公平ト 59878参照)。さらに、ヒト抗体遺 伝子のレパートリーを有するトランスジエニック動物に抗原又は抗原発現細胞を投与 し、前述の方法に従!ヽ所望のヒト抗体を取得してもよ!、（国際特許出願公開番号 WO 93/12227、 WO 92/03918、 WO 94/02602、 WO 94/25585、 WO 96/34096、 WO 96/ 33735参照）。
このようにして作製されるモノクローナル抗体を産生するノ、イブリドーマは、通常の 培養液中で継代培養することが可能であり、また、液体窒素中で長期保存することが 可能である。
[0045] 当該ノ、イブリドーマ力 モノクローナル抗体を取得するには、当該ハイプリドーマを 通常の方法にしたがい培養し、その培養上清として得る方法、あるいはハイプリドー マをこれと適合性がある哺乳動物に投与して増殖させ、その腹水として得る方法など が採用される。前者の方法は、高純度の抗体を得るのに適しており、一方、後者の方 法は、抗体の大量生産に適している。
[0046] 例えば、抗 IL-6受容体抗体産生ノ、イブリドーマの作製は、特開平 3-139293に開示 された方法により行うことができる。 PM-1抗体産生ハイブリドーマを BALB/cマウスの 腹腔内に注入して腹水を得、この腹水から PM-1抗体を精製する方法や、本ハイプリ ドーマを適当な培地、例えば、 10%ゥシ胎児血清、 5%BM-Condimed HI (Boehringe r Mannheim製）含有 RPMI1640培地、ハイプリドーマ SFM培地（GIBCO- BRL製）、 PF ΗΜ-Π培地 (GIBCO-BRL製)等で培養し、その培養上清から PM-1抗体を精製する 方法で行うことができる。
[0047] 本発明には、モノクローナル抗体として、抗体遺伝子をノヽイブリドーマ力 クロー- ングし、適当なベクターに組み込んで、これを宿主に導入し、遺伝子組換え技術を用 いて産生させた組換え型抗体を用いることができる（例えば、 Borrebaeck C. A. K. an d Larrick J. W. THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the U nited Kingdom by MACMILLAN PUBLISHERS LTD, 1990参照）。
[0048] 具体的には、目的とする抗体を産生する細胞、例えばハイプリドーマから、抗体の 可変（V)領域をコードする mRNAを単離する。 mRNAの単離は、公知の方法、例えば 、グァ-ジン超遠心法（Chirgwin, J. M. et al" Biochemistry (1979) 18, 5294-5299 ) 、 AGPC法（Chomczynski, P. et al., Anal. Biochem. (1987)162, 156- 159)等により全 R NAを調製し、 mRNA Purification Kit (Pharmacia製）等を使用して mRNAを調製する。 また、 QuickPrep mRNA Purification Kit (Pharmacia製）を用いることにより mRNAを直 接調製することができる。 [0049] 得られた mRNAから逆転写酵素を用いて抗体 V領域の cDNAを合成する。 cDNAの 合成は、 AMV Reverse Transcriptase First-strand cDNA Synthesis Kit等を用いて行 うことができる。また、 cDNAの合成および増幅を行うには 5'-Ampli FINDER RACE Ki t (Clontech製）および PCRを用いた 5'- RACE法（Frohman, M. A. et al., Proc. Natl. A cad. Sci. USA(1988)85, 8998-9002 ; Belyavsky, A. et al" Nucleic Acids Res.(1989)l 7, 2919-2932)を使用することができる。得られた PCR産物から目的とする DNA断片を 精製し、ベクター DNAと連結する。さらに、これより組換えベクターを作成し、大腸菌 等に導入してコロニーを選択して所望の組換えベクターを調製する。 目的とする DNA の塩基配列を公知の方法、例えば、デォキシ法により確認する。
[0050] 目的とする抗体の V領域をコードする DNAが得られれば、これを所望の抗体定常領 域 (C領域)をコードする DNAと連結し、これを発現ベクターへ組み込む。又は、抗体 の V領域をコードする DNAを、抗体 C領域の DNAを含む発現ベクターへ組み込んで ちょい。
[0051] 本発明で使用される抗体を製造するには、後述のように抗体遺伝子を発現制御領 域、例えば、ェンハンサー、プロモーターの制御のもとで発現するよう発現ベクターに 組み込む。次に、この発現ベクターにより宿主細胞を形質転換し、抗体を発現させる ことができる。
[0052] 本発明では、ヒトに対する異種抗原性を低下させること等を目的として人為的に改 変した遺伝子組換え型抗体、例えば、キメラ (Chimeric)抗体、ヒトイ匕 (Humanized)抗 体、ヒト (human)抗体を使用できる。これらの改変抗体は、既知の方法を用いて製造 することができる。
[0053] キメラ抗体は、前記のようにして得た抗体 V領域をコードする DNAをヒト抗体 C領域 をコードする DNAと連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させ ることにより得られる（欧州特許出願公開番号 EP 125023、国際特許出願公開番号 W 0 92-19759参照)。この既知の方法を用いて、本発明に有用なキメラ抗体を得ること ができる。
[0054] ヒト化抗体は、再構成 (reshaped)ヒト抗体またはヒト型化抗体とも称され、ヒト以外の 哺乳動物、例えばマウス抗体の相補性決定領域 (CDR)をヒト抗体の相補性決定領域 へ移植したものであり、その一般的な遺伝子組換え手法も知られている（欧州特許出 願公開番号 EP 125023、国際特許出願公開番号 WO 92-19759参照)。
[0055] 具体的には、マウス抗体の CDRとヒト抗体のフレームワーク領域（FR; framework reg ion)を連結するように設計した DNA配列を、末端部にオーバーラップする部分を有す るように作製した数個のオリゴヌクレオチド力も PCR法により合成する。得られた DNA をヒト抗体 C領域をコードする DNAと連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これ を宿主に導入し産生させることにより得られる（欧州特許出願公開番号 EP 239400、 国際特許出願公開番号 WO 92-19759参照)。
[0056] CDRを介して連結されるヒト抗体の FRは、相補性決定領域が良好な抗原結合部位 を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適 切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域のフレームワーク領域のァミノ 酸を置換してもよい（Sato, K.et al.， Cancer Res. (1993) 53, 851-856)。
[0057] キメラ抗体、ヒト化抗体には、ヒト抗体 C領域が使用される。ヒト抗体 C領域としては、 C yが挙げられ、例えば、 C γ 1、 C γ 2、 C γ 3又は C y 4を使用することができる。また 、抗体又はその産生の安定性を改善するために、ヒト抗体 C領域を修飾してもよい。
[0058] キメラ抗体はヒト以外の哺乳動物由来抗体の可変領域とヒト抗体由来の C領域から なり、またヒト化抗体はヒト以外の哺乳動物由来抗体の相補性決定領域とヒト抗体由 来のフレームワーク領域および C領域力 なり、これらはヒト体内における抗原性が低 下して 、るため、本発明に使用される抗体として有用である。
[0059] 本発明に使用されるヒト化抗体の好ましい具体例としては、ヒトイ匕 PM-1抗体が挙げ られる（国際特許出願公開番号 WO 92-19759参照)。
また、ヒト抗体の取得方法としては先に述べた方法のほか、ヒト抗体ライブラリーを用 いて、パンユングによりヒト抗体を取得する技術も知られている。例えば、ヒト抗体の可 変領域を一本鎖抗体 (scFv)としてファージディスプレイ法によりファージの表面に発 現させ、抗原に結合するファージを選択することもできる。選択されたファージの遺伝 子を解析すれば、抗原に結合するヒト抗体の可変領域をコードする DNA配列を決定 することができる。抗原に結合する scFvの DNA配列が明らかになれば、当該配列を 含む適当な発現ベクターを作製し、ヒト抗体を取得することができる。これらの方法は 既に周知であり、 WO 92/01047, WO 92/20791, WO 93/06213, WO 93/11236, WO 93/19172, WO 95/01438, WO 95/15388を参考にすることができる。
[0060] 前記のように構築した抗体遺伝子は、公知の方法により発現させることができる。哺 乳類細胞を用いた場合、常用される有用なプロモーター、発現される抗体遺伝子、 その 3'側下流にポリ Aシグナルを機能的に結合させた DNAあるいはそれを含むベクタ 一により発現させることができる。例えばプロモーター Zェンハンサ一としては、ヒトサ イトメガロウイノレス前期プロモーター Zェンノヽンサ一 (human cytomegalovirus immedia te early promoter/ enhancer) 举げ こと力できる。
[0061] また、その他に本発明で使用される抗体発現に使用できるプロモーター Zェンノヽン サ一として、レトロウイルス、ポリオ一マウィルス、アデノウイルス、シミアンウィルス 40 (S V40)等のウイノレスプロモーター Zェンハンサーゃヒトェロンゲーシヨンファクター 1 α ( HEFl a )などの哺乳類細胞由来のプロモーター Ζェンハンサーを用いればよい。
[0062] 例えば、 SV40プロモーター Zェンハンサーを使用する場合、 Mulliganらの方法（Mu lligan, R. C. et al.， Nature (1979) 277, 108-114)、また、 HEF1 α口モーター Zェン ハンサーを使用する場合、 Mizushimaらの方法（Mizushima, S. and Nagata, S. Nuclei c Acids Res. (1990) 18, 5322 )に従えば容易に実施することができる。
[0063] 大腸菌の場合、常用される有用なプロモーター、抗体分泌のためのシグナル配列 、発現させる抗体遺伝子を機能的に結合させて発現させることができる。例えばプロ モーターとしては、 lacZプロモーター、 &8プロモーターを挙げることができる。 lacZプ 口モーターを使用する場合、 Wardらの方法（Ward, E. S. et al.， Nature (1989) 341, 5 44-546 ; Ward, E. S. et al. FASEB J. (1992) 6, 2422- 2427 )、 araBプロモーターを使 用する場合、 Betterらの方法（Better, M. et al. Science (1988) 240, 1041-1043 )に 従えばよい。
[0064] 抗体分泌のためのシグナル配列としては、大腸菌のペリブラズムに産生させる場合 、 pelBシグナル配列（Lei, S. P. et al J. Bacteriol. (1987) 169, 4379- 4383)を使用す ればよい。ペリブラズムに産生された抗体を分離した後、抗体の構造を適切にリフォ 一ルド (refold)して使用する（例えば、 WO96/30394を参照）。
[0065] 複製起源としては、 SV40、ポリオ一マウィルス、アデノウイルス、ゥシパピローマウイ ルス（BPV)等の由来のものを用いることができ、さらに、宿主細胞系で遺伝子コピー 数増幅のため、発現ベクターは選択マーカーとして、アミノグリコシドホスホトランスフ エラーゼ (APH)遺伝子、チミジンキナーゼ (TK)遺伝子、大腸菌キサンチングァニン ホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ecogpt)遺伝子、ジヒドロ葉酸還元酵素（dhfr)遺伝 子等を含むことができる。
[0066] 本発明で使用される抗体の製造のために、任意の産生系を使用することができる。
抗体製造のための産生系は、 in vitroおよび in vivoの産生系がある。 in vitroの産生 系としては、真核細胞を使用する産生系や原核細胞を使用する産生系が挙げられる
[0067] 真核細胞を使用する場合、動物細胞、植物細胞、又は真菌細胞を用いる産生系が ある。動物細胞としては、（1)哺乳類細胞、例えば、 CHO、 COS,ミエローマ、 BHK(bab y hamster kidney), HeLa、 Veroなど、（2)両生類細胞、例えば、アフリカッメガエル卵 母細胞、あるいは (3)昆虫細胞、例えば、 s!9、 s!21、 Tn5などが知られている。植物細 胞としては、ニコチアナ 'タパクム (Nicotiana tabacum)由来の細胞が知られており、こ れをカルス培養すればよい。真菌細胞としては、酵母、例えば、サッカロミセス（Sacch aromyces)鳥、 f列 ばサッカロミセス'セレビシェ (Saccharomyces cerevisiaeリ、糸状菌 、例えばァスペルギルス属（Aspergillus)属、例えばァスペルギルス' -ガー（Aspergill us niger)などが知られている。
原核細胞を使用する場合、細菌細胞を用いる産生系がある。細菌細胞としては、大 腸菌（E.coli)、枯草菌が知られている。
[0068] これらの細胞に、目的とする抗体遺伝子を形質転換により導入し、形質転換された 細胞を in vitroで培養することにより抗体が得られる。培養は、公知の方法に従い行う 。例えば、培養液として、 DMEM、 MEM, RPMI1640, IMDMを使用することができ、牛 胎児血清 (FCS)等の血清補液を併用することもできる。また、抗体遺伝子を導入した 細胞を動物の腹腔等へ移すことにより、 in vivoにて抗体を産生してもよい。
[0069] 一方、 in vivoの産生系としては、動物を使用する産生系や植物を使用する産生系 が挙げられる。動物を使用する場合、哺乳類動物、昆虫を用いる産生系などがある。 哺乳類動物としては、ャギ、ブタ、ヒッジ、マウス、ゥシなどを用いることができる (Vic ki Glaser, SPECTRUM Biotechnology Applications, 1993)。また、昆虫としては、カイ コを用いることができる。植物を使用する場合、例えばタバコを用いることができる。
[0070] これらの動物又は植物に抗体遺伝子を導入し、動物又は植物の体内で抗体を産 生させ、回収する。例えば、抗体遺伝子をャギ j8カゼインのような乳汁中に固有に産 生される蛋白質をコードする遺伝子の途中に挿入して融合遺伝子として調製する。 抗体遺伝子が挿入された融合遺伝子を含む DNA断片をャギの胚へ注入し、この胚 を雌のャギへ導入する。胚を受容したャギから生まれるトランスジエニックャギ又はそ の子孫が産生する乳汁力 所望の抗体を得る。トランスジエニックャギカ 産生される 所望の抗体を含む乳汁量を増加させるために、適宜ホルモンをトランスジエニックャ ギに使用してもよい。 (Ebert, K.M. et al., Bio/Technology (1994) 12, 699-702；)。
[0071] また、カイコを用いる場合、目的の抗体遺伝子を挿入したバキュロウィルスをカイコ に感染させ、このカイコの体液より所望の抗体を得る（Maeda, S. et al., Nature (1985) 315, 592-594) oさらに、タバコを用いる場合、目的の抗体遺伝子を植物発現用べク ター、例えば pMON530に挿入し、このベクターを Agrobacterium tumefaciensのような バクテリアに導入する。このバクテリアをタバコ、例えば Nicotiana tabacumに感染させ 、本タバコの葉より所望の抗体を得る（Julian, K.-C. Ma et al., Eur. J. Immunol.(1994 )24, 131—138)。
[0072] 上述のように in vitro又は in vivoの産生系にて抗体を産生する場合、抗体重鎖（H 鎖)又は軽鎖 (L鎖）をコードする DNAを別々に発現ベクターに組み込んで宿主を同 時形質転換させてもよいし、あるいは H鎖および L鎖をコードする DNAを単一の発現 ベクターに組み込んで、宿主を形質転換させてもよい（国際特許出願公開番号 WO 94-11523参照）。
[0073] 本発明で使用される抗体は、本発明に好適に使用され得るかぎり、抗体の断片や その修飾物であってよい。例えば、抗体の断片としては、 Fab、 F(ab')2、 Fv又は H鎖と L鎖の Fvを適当なリンカ一で連結させたシングルチェイン Fv (scFv)が挙げられる。
[0074] 具体的には、抗体を酵素、例えば、パパイン、ペプシンで処理し抗体断片を生成さ せるか、又は、これら抗体断片をコードする遺伝子を構築し、これを発現ベクターに 導入した後、適当な宿主細胞で発現させる（例えば、 Co, M.S. et al, J. Immunol. (19 94) 152, 2968-2976、 Better, M. & Horwitz, A. H. Methods in Enzymology (1989) 17 8, 476-496、 Plueckthun, A. & Skerra, A. Methods in Enzymology (1989) 178, 497- 515、 Lamoyi, E., Methods in Enzymology (1989) 121, 652-663、 Rousseaux, J. et al ., Methods in Enzymology (1989) 121, 663—66、 Bird, R. E. et al., TIBTECH (1991) 9, 132-137参照）。
[0075] scFvは、抗体の H鎖 V領域と L鎖 V領域を連結することにより得られる。この scFvにお いて、 H鎖 V領域と L鎖 V領域はリンカ一、好ましくは、ペプチドリンカ一を介して連結 される（Huston, J. S. et al.、 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1988) 85, 5879—5883)。 s cFvにおける H鎖 V領域および L鎖 V領域は、上記抗体として記載されたものの 、ずれ の由来であってもよい。 V領域を連結するペプチドリンカ一としては、例えばアミノ酸 1 2-19残基からなる任意の一本鎖ペプチドが用いられる。
[0076] scFvをコードする DNAは、前記抗体の H鎖又は、 H鎖 V領域をコードする DNA、およ び L鎖又は、 L鎖 V領域をコードする DNAを铸型とし、それらの配列のうちの所望のァ ミノ酸配列をコードする DNA部分を、その両端を規定するプライマー対を用いて PCR 法により増幅し、次いで、さらにペプチドリンカ一部分をコードする DNAおよびその両 端を各々 H鎖、 L鎖と連結されるように規定するプライマー対を組み合せて増幅するこ とにより得られる。
[0077] また、ー且 scFvをコードする DNAが作製されれば、それらを含有する発現ベクター 、および該発現べクタ一により形質転換された宿主を常法に従って得ることができ、 また、その宿主を用いて常法に従って、 scFvを得ることができる。
これら抗体の断片は、前記と同様にしてその遺伝子を取得し発現させ、宿主により 産生させることができる。本発明でいう「抗体」にはこれらの抗体の断片も包含される。
[0078] 抗体の修飾物として、ポリエチレングリコール (PEG)等の各種分子と結合した抗体を 使用することもできる。本発明でいう「抗体」にはこれらの抗体修飾物も包含される。こ のような抗体修飾物を得るには、得られた抗体に化学的な修飾を施すことによって得 ることができる。これらの方法はこの分野にぉ 、てすでに確立されて 、る。
[0079] 前記のように産生、発現された抗体は、細胞内外、宿主から分離し均一にまで精製 することができる。本発明で使用される抗体の分離、精製はァフィユティークロマトグ ラフィ一により行うことができる。ァフィユティークロマトグラフィーに用いるカラムとして は、例えば、プロテイン Aカラム、プロテイン Gカラムが挙げられる。プロテイン Aカラム に用いる担体として、例えば、 HyperD、 POROS、 SepharoseF.F.等が挙げられる。そ の他、通常のタンパク質で使用されている分離、精製方法を使用すればよぐ何ら限 定されるものではない。
[0080] 例えば、上記ァフィ二ティークロマトグラフィー以外のクロマトグラフィー、フィルター 、限外濾過、塩析、透析等を適宜選択、組み合わせれば、本発明で使用される抗体 を分離、精製することができる。クロマトグラフィーとしては、例えば、イオン交換クロマ トグラフィー、疎水クロマトグラフィー、ゲルろ過等が挙げられる。これらのクロマトダラ フィ ~~は HPLし (High performance liquid chromatography)に適用しネ守る。ま 7こ、；ι ^ネ目 HPLC (reverse phase HPLC)を用いてもよ!ヽ。
[0081] 上記で得られた抗体の濃度測定は吸光度の測定又は ELISA等により行うことができ る。すなわち、吸光度の測定による場合には、 PBS (-)で適当に希釈した後、 280nmの 吸光度を測定し、 lmg/mlを 1.350Dとして算出する。また、 ELISAによる場合は以下の ように測定することができる。すなわち、 0.1M重炭酸緩衝液 (pH9.6)で 1 g/mlに希 釈したャギ抗ヒ HgG(TAG製） 100 μ 1を 96穴プレート（Nunc製）にカロえ、 4°Cでー晚イン キュベーシヨンし、抗体を固相化する。ブロッキングの後、適宜希釈した本発明で使 用される抗体又は抗体を含むサンプル、あるいは標品としてヒ HgG (CAPPEL製) 100 μ 1を添カ卩し、室温にて 1時間インキュベーションする。
[0082] 洗浄後、 5000倍希釈したアルカリフォスファターゼ標識抗ヒ HgG (BIO SOURCE製） 100 /z lをカ卩え、室温にて 1時間インキュベートする。洗浄後、基質溶液をカ卩ぇインキュ ベーシヨンの後、 MICROPLATE READER Model 3550 (Bio- Rad製）を用いて 405nm での吸光度を測定し、 目的の抗体の濃度を算出する。
[0083] 本発明で使用される IL-6改変体は、 IL-6受容体との結合活性を有し、且つ IL-6の 生物学的活性を伝達しない物質である。即ち、 IL-6改変体は IL-6受容体に対し IL-6 と競合的に結合する力 IL-6の生物学的活性を伝達しないため、 IL-6によるシグナ ル伝達を遮断する。
[0084] IL-6改変体は、 IL-6のアミノ酸配列のアミノ酸残基を置換することにより変異を導入 して作製される。 IL-6改変体のもととなる IL-6はその由来を問わないが、抗原性等を 考慮すれば、好ましくはヒト IL-6である。
[0085] 具体的には、 IL-6のアミノ酸配列を公知の分子モデリングプログラム、たとえば、 W HATIF (Vriend et al.， J. Mol. Graphics (1990) 8, 52- 56 )を用いてその二次構造を 予測し、さらに置換されるアミノ酸残基の全体に及ぼす影響を評価することにより行わ れる。適切な置換アミノ酸残基を決定した後、ヒ HL-6遺伝子をコードする塩基配列を 含むベクターを铸型として、通常行われる PCR法によりアミノ酸が置換されるように変 異を導入することにより、 IL-6改変体をコードする遺伝子が得られる。これを必要に応 じて適当な発現ベクターに組み込み、前記組換え型抗体の発現、産生及び精製方 法に準じて IL-6改変体を得ることができる。
[0086] IL- 6改変体の具体例としては、 Brakenhoff et al.， J. Biol. Chem. (1994) 269, 86-93 、及び Savino et al, EMBO J. (1994) 13, 1357-1367、 WO 96-18648、 W096- 1786 9に開示されている。
本発明で使用される IL-6部分ペプチド又は IL-6受容体部分ペプチドは、各々 IL-6 受容体あるいは IL-6との結合活性を有し、且つ IL-6の生物学的活性を伝達しな 、物 質である。即ち、 IL-6部分ペプチド又は IL-6受容体部分ペプチドは IL-6受容体又は I L-6に結合し、これらを捕捉することにより IL-6の IL-6受容体への結合を特異的に阻 害する。その結果、 IL-6の生物学的活性を伝達しないため、 IL-6によるシグナル伝達 を遮断する。
[0087] IL-6部分ペプチド又は IL-6受容体部分ペプチドは、 IL-6又は IL-6受容体のアミノ 酸配列において IL-6と IL-6受容体との結合に係わる領域の一部又は全部のアミノ酸 配列からなるペプチドである。このようなペプチドは、通常 10〜80、好ましくは 20〜5 0、より好ましくは 20〜40個のアミノ酸残基からなる。
[0088] IL-6部分ペプチド又は IL-6受容体部分ペプチドは、 IL-6又は IL-6受容体のアミノ 酸配列において、 IL-6と IL-6受容体との結合に係わる領域を特定し、その特定した 領域の一部又は全部のアミノ酸配列に基づ 、て通常知られる方法、例えば遺伝子 工学的手法又はペプチド合成法により作製することができる。
[0089] IL-6部分ペプチド又は IL-6受容体部分ペプチドを遺伝子工学的手法により作製す るには、所望のペプチドをコードする DNA配列を発現ベクターに組み込み、前記組 換え型抗体の発現、産生及び精製方法に準じて得ることができる。
[0090] IL-6部分ペプチド又は IL-6受容体部分ペプチドをペプチド合成法により作製する には、ペプチド合成において通常用いられている方法、例えば固相合成法又は液相 合成法を用いることができる。
[0091] 具体的には、続医薬品の開発第 14卷ペプチド合成 監修矢島治明廣川書店 1991 年に記載の方法に準じて行えばよい。固相合成法としては、例えば有機溶媒に不溶 性である支持体に合成しょうとするペプチドの C末端に対応するアミノ酸を結合させ、 α -アミノ基及び側鎖官能基を適切な保護基で保護したアミノ酸を C末端カゝら N末端 方向の順番に 1アミノ酸ずつ縮合させる反応と榭脂上に結合したアミノ酸又はぺプチ ドの α -アミノ基の該保護基を脱離させる反応を交互に繰り返すことにより、ペプチド 鎖を伸長させる方法が用いられる。固相ペプチド合成法は、用いられる保護基の種 類により Boc法と Fmoc法に大別される。
[0092] このようにして目的とするペプチドを合成した後、脱保護反応及びペプチド鎖の支 持体からの切断反応をする。ペプチド鎖との切断反応には、 Boc法ではフッ化水素又 はトリフルォロメタンスルホン酸を、又 Fmoc法では TFAを通常用いることができる。 Boc 法では、例えばフッ化水素中で上記保護ペプチド榭脂をァ-ソール存在下で処理す る。次いで、保護基の脱離と支持体力 の切断をしペプチドを回収する。これを凍結 乾燥することにより、粗ペプチドが得られる。一方、 Fmoc法では、例えば TFA中で上 記と同様の操作で脱保護反応及びペプチド鎖の支持体からの切断反応を行うことが できる。
[0093] 得られた粗ペプチドは、 HPLCに適用することにより分離、精製することができる。そ の溶出にあたり、蛋白質の精製に通常用いられる水-ァセトニトリル系溶媒を使用して 最適条件下で行えばょ 、。得られたクロマトグラフィーのプロファイルのピークに該当 する画分を分取し、これを凍結乾燥する。このようにして精製したペプチド画分につ いて、マススペクトル分析による分子量解析、アミノ酸組成分析、又はアミノ酸配列解 析等により同定する。
IL-6部分ペプチド及び IL-6受容体部分ペプチドの具体例は、特開平 2-188600、特 開平 7-324097、特開平 8-311098及び米国特許公報 US5210075に開示されている。
[0094] 本発明に使用する抗体は、ポリエチレングリコール (PEG)、放射性物質、トキシン等 の各種分子と結合したコンジュゲート抗体でもよ 、。このようなコンジュゲート抗体は、 得られた抗体に化学的な修飾を施すことによって得ることができる。なお、抗体の修 飾方法はこの分野においてすでに確立されている。本発明における「抗体」にはこれ らのコンジュゲート抗体も包含される。
[0095] 本発明の心筋梗塞治療剤および心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制剤は、心筋 梗塞の治療において使用することが可能である。
本発明において「心筋梗塞治療」とは、心筋梗塞の症状および、心筋梗塞におい て合併しておこる心不全、虚血による重度の不整脈を、抑制または予防することを意 味する。
[0096] 心筋梗塞にお 、て合併しておこる症状としては、不整脈 (期外収縮、心室細動、房 室ブロック)、心不全、乳頭筋断裂、心破裂、心室瘤 (左冠動脈前下行枝梗塞の結果 として心尖部に生じる）、心筋梗塞後症候群等を挙げることができるが、本発明の「心 筋梗塞治療剤」はこれらの症状を抑制 ·予防することも出来る。
[0097] また、本発明において「心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制」とは、心筋梗塞後に 、梗塞領域の機能低下を補うための心筋肥大 (左室全体の拡張)を、抑制または予 防することを意味する。
この心筋肥大は、梗塞領域の心筋細胞が壊死'脱落により、コラーゲン線維などの 線維組織に置換され、線維組織が薄く伸展することにより引き起こされるものである。 そのため「梗塞領域のコラーゲン線維への置換」、および「線維組織の伸展」を抑制 · 予防する、すなわち梗塞領域の状態を改善することも、上記の「心筋梗塞後の左室リ モデリングの抑制」の意味に含まれる。
[0098] 心筋梗塞の症状および心筋梗塞後の左室リモデリングが抑制された力否かの確認 は、心筋の梗塞領域および非梗塞領域におけるミエ口ペルォキシダーゼ (MPO)活 性を指標に判断することができる。ミエ口ペルォキシダーゼ (MPO)は、好中球の細胞 内顆粒中に存在する酵素で、冠動脈疾患があると活性が有意に上昇することが知ら れている。梗塞領域の拡大'および悪化 (壊死等）により、 MPO活性は増加する。す なわち、本発明の薬剤を投与することにより、 MPO活性が抑制された場合に心筋梗 塞の症状および、心筋梗塞後の左室リモデリングが抑制されたとみなすことが出来る 。 MPO活性は、公知の方法により測定することが可能であり、例えば実施例に記載の 測定方法が挙げられる。
[0099] また、心筋梗塞の症状および心筋梗塞後の左室リモデリングが抑制された力否か の確認は、心筋の梗塞領域および非梗塞領域における MCP-1 (monocyte chemoatt ractant protein- 1)の発現を指標に判断することもできる。 MCP- 1は、心筋内にマクロ ファージを誘導し、炎症性サイト力インの発現亢進を介して心不全発症の原因となる とされるケモカインで、炎症を活性化させ、血管周囲や心筋の繊維化を引き起こすこ とが知られている。梗塞領域の拡大'および悪化 (壊死等）により、 MCP-1の発現は 増大する。すなわち、 MCP-1の発現が抑制された場合には、心筋梗塞の症状および 心筋梗塞後の左室リモデリングが抑制されたとみなすことが出来る。 MCP-1の発現は 公知のタンパク質発現測定方法により測定することが可能であり、例えばウェスタンブ ロッテイング法や、 ELISA法などが挙げられる。
MPO活性を抑制すること、 MCP-1の発現を抑制することも、上記の「梗塞領域の状 態を改善する」ことを意味するものである。
[0100] さらに、心臓超音波検査により左心室拡張末期径および駆出率の測定や、心臓組 織の組織学検査による、心筋繊維化の程度や心筋細胞肥大の定量評価によっても、 心筋梗塞の症状および心筋梗塞後の左室リモデリングが抑制されたカゝ否かを判断す ることが出来る。これらは、公知の方法により実施することが可能である。例えば、実 施例に記載の方法が挙げられる。
[0101] 本発明で使用される IL-6阻害剤の IL-6シグナル伝達阻害活性は、通常用いられる 方法により評価することができる。具体的には、 IL-6依存性ヒト骨髄腫株 (S6B45,KPM M2)、ヒトレンネルト Tリンパ腫細胞株 KT3、あるいは IL-6依存性細胞 MH60.BSF2を培 養し、これに IL-6を添加し、同時に IL-6阻害剤を共存させることにより IL-6依存性細 胞の 3H-チミジン取込みを測定すればよい。また、 IL-6受容体発現細胞である U266 を培養し、 1251標識 IL-6を添カ卩し、同時に IL-6阻害剤を加えることにより、 IL-6受容 体発現細胞に結合した 1251標識 IL-6を測定する。上記アツセィ系において、 IL-6阻 害剤を存在させる群に加え IL-6阻害剤を含まな 、陰性コントロール群をおき、両者で 得られた結果を比較すれば IL-6阻害剤の IL-6阻害活性を評価することができる。
[0102] 後述の実施例に示されるように、抗 IL-6受容体抗体の投与により、心筋梗塞におけ る症状および心筋梗塞後の左室リモデリングを抑制することが認められたことから、抗 IL-6受容体抗体等の IL-6阻害剤は心筋梗塞治療剤および心筋梗塞後の左室リモデ リングの抑制剤として有用であることが示唆された。
本発明の心筋梗塞治療剤および心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制剤が投与さ れる対象は哺乳動物である。哺乳動物は、好ましくはヒトである。
[0103] 本発明の心筋梗塞治療剤および心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制剤は、医薬 品の形態で投与することが可能であり、経口的または非経口的に全身ある 、は局所 的に投与することができる。例えば、点滴などの静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注 射、皮下注射、坐薬、注腸、経口性腸溶剤などを選択することができ、患者の年齢、 症状により適宜投与方法を選択することができる。有効投与量は、一回につき体重 1 kgあたり O.Olmgから lOOmgの範囲で選ばれる。あるいは、患者あたり l〜1000mg、好ま しくは 5〜50mgの投与量を選ぶことができる。好ましい投与量、投与方法は、たとえば 抗 IL-6受容体抗体の場合には、血中にフリーの抗体が存在する程度の量が有効投 与量であり、具体的な例としては、体重 lkgあたり 1ヶ月（4週間）に 0.5mgから 40mg、好 ましくは lmgから 20mgを 1回力も数回に分けて、例えば 2回 Z週、 1回 Z週、 1回 Z2 週、 1回 Z4週などの投与スケジュールで点滴などの静脈内注射、皮下注射などの 方法で、投与する方法などである。投与スケジュールは、移植後の状態の観察およ び血液検査値の動向を観察しながら 2回 Z週あるいは 1回 Z週から 1回 Z2週、 1回 Z3週、 1回 Z4週のように投与間隔を延ばしていくなど調整することも可能である。
[0104] 本発明において心筋梗塞治療剤および心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制剤 には、保存剤や安定剤等の製剤上許容しうる担体が添加されていてもよい。製剤上 許容しうる担体とは、それ自体は上記の心筋梗塞における症状および心筋梗塞後の 左室リモデリングの抑制効果を有する材料であってもよいし、当該抑制効果を有さな い材料であってもよぐ上記の薬剤とともに投与可能な材料を意味する。また、心筋 梗塞における症状および心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制効果を有さない材料 であって、 IL-6阻害剤と併用することによって相乗的もしくは相加的な安定ィ匕効果を 有する材料であってもよ 、。
製剤上許容される材料としては、例えば、滅菌水や生理食塩水、安定剤、賦形剤、 緩衝剤、防腐剤、界面活性剤、キレート剤 (EDTA等)、結合剤等を挙げることができる 本発明にお 、て、界面活性剤としては非イオン界面活性剤を挙げることができ、例 えばソルビタンモノカプリレート、ソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート 等のソルビタン脂肪酸エステル;グリセリンモノカプリレート、グリセリンモノミリステート 、グリセリンモノステアレート等のグリセリン脂肪酸エステル；デカグリセリルモノステア レート、デカグリセリルジステアレート、デカグリセリルモノリノレート等のポリグリセリン 脂肪酸エステル；ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソ ルビタンモノォレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、ポリオキシェ チレンソルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビタントリオレエート、ポリ ォキシエチレンソルビタントリステアレート等のポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸ェ ステル；ポリオキシエチレンソルビットテトラステアレート、ポリオキシエチレンソルビット テトラオレエート等のポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル；ポリオキシェチレ ングリセリルモノステアレート等のポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル；ポリエ チレングリコールジステアレート等のポリエチレングリコール脂肪酸エステル；ポリオキ シエチレンラウリルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルエーテル；ポリオキシェ チレンポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンプロ ピルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンセチルエーテル等のポリオキ シエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル；ポリオキシエチレンノニルフエ二 ルエーテル等のポリオキシエチレンアルキルフエニルエーテル；ポリオキシエチレンヒ マシ油、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ポリオキシエチレン水素ヒマシ油）等のポリ ォキシエチレン硬化ヒマシ油；ポリオキシエチレンソルビットミツロウ等のポリオキシェ チレンミツロウ誘導体；ポリオキシエチレンラノリン等のポリオキシエチレンラノリン誘導 体;ポリオキシエチレンステアリン酸アミド等のポリオキシエチレン脂肪酸アミド等の H LB6〜18を有するもの、等を典型的例として挙げることができる。 [0106] また、界面活性剤としては陰イオン界面活性剤も挙げることができ、例えばセチル 硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ォレイル硫酸ナトリウム等の炭素原子数 10〜 18のアルキル基を有するアルキル硫酸塩；ポリオキシエチレンラウリル硫酸ナトリウム 等の、エチレンォキシドの平均付加モル数が 2〜4でアルキル基の炭素原子数が 10 〜 18であるポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩；ラウリルスルホコハク酸エス テルナトリウム等の、アルキル基の炭素原子数が 8〜18のアルキルスルホコハク酸ェ ステル塩;天然系の界面活性剤、例えばレシチン、グリセ口リン脂質;スフインゴミエリ ン等のフィンゴリン脂質;炭素原子数 12〜18の脂肪酸のショ糖脂肪酸エステル等を 典型的例として挙げることができる。
[0107] 本発明の薬剤には、これらの界面活性剤の 1種または 2種以上を組み合わせて添 加することができる。本発明の製剤で使用する好ましい界面活性剤は、ポリソルベー ト 20, 40, 60又は 80などのポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルであり、ポリ ソルベート 20及び 80力 S特に好ましい。また、ポロキサマー（プル口ニック F— 68 (登録 商標）など）に代表されるポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールも好まし い。
[0108] 界面活性剤の添加量は使用する界面活性剤の種類により異なる力 ポリソルベート 20又はポリソルベート 80の場合では、一般には 0. 001〜100mgZmLであり、好ま しくは 0. 003〜50mg/mLであり、さらに好ましくは 0. 005〜2mg/mLである。
[0109] 本発明にお 、て緩衝剤としては、リン酸、クェン酸緩衝液、酢酸、リンゴ酸、酒石酸 、コハク酸、乳酸、リン酸カリウム、ダルコン酸、力プリル酸、デォキシコール酸、サリチ ル酸、トリエタノールァミン、フマル酸等 他の有機酸等、あるいは、炭酸緩衝液、トリ ス緩衝液、ヒスチジン緩衝液、イミダゾール緩衝液等を挙げることが出来る。
[0110] また溶液製剤の分野で公知の水性緩衝液に溶解することによって溶液製剤を調製 してもよい。緩衝液の濃度は一般には l〜500mMであり、好ましくは 5〜100mMで あり、さらに好ましくは 10〜20mMである。
[0111] また、本発明の薬剤は、その他の低分子量のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチ ンゃ免疫グロブリン等の蛋白質、アミノ酸、多糖及び単糖等の糖類や炭水化物、糖ァ ルコールを含んで 、てもよ 、。 [0112] 本発明においてアミノ酸としては、塩基性アミノ酸、例えばアルギニン、リジン、ヒス チジン、オル-チン等、またはこれらのアミノ酸の無機塩 (好ましくは、塩酸塩、リン酸 塩の形、すなわちリン酸アミノ酸)を挙げることが出来る。遊離アミノ酸が使用される場 合、好ましい pH値は、適当な生理的に許容される緩衝物質、例えば無機酸、特に塩 酸、リン酸、硫酸、酢酸、蟻酸又はこれらの塩の添カ卩により調整される。この場合、リン 酸塩の使用は、特に安定な凍結乾燥物が得られる点で特に有利である。調製物が 有機酸、例えばリンゴ酸、酒石酸、クェン酸、コハク酸、フマル酸等を実質的に含有し ない場合あるいは対応する陰イオン (リンゴ酸イオン、酒石酸イオン、クェン酸イオン、 コハク酸イオン、フマル酸イオン等）が存在しない場合に、特に有利である。好ましい アミノ酸はアルギニン、リジン、ヒスチジン、またはオル-チンである。さらに、酸性アミ ノ酸、例えばグルタミン酸及びァスパラギン酸、及びその塩の形 (好ましくはナトリウム 塩）あるいは中性アミノ酸、例えばイソロイシン、ロイシン、グリシン、セリン、スレオニン 、パリン、メチォニン、システィン、またはァラニン、あるいは芳香族アミノ酸、例えばフ ェ-ルァラニン、チロシン、トリプトファン、または誘導体の N-ァセチルトリプトファンを 使用することちできる。
[0113] 本発明において、多糖及び単糖等の糖類や炭水化物としては、例えばデキストラン 、グノレコース、フラクトース、ラタトース、キシロース、マンノース、マノレトース、スクロー ス，トレハロース、ラフイノース等を挙げることができる。
本発明において、糖アルコールとしては、例えばマン-トール、ソルビトール、イノシ トール等を挙げることができる。
[0114] 本発明の薬剤を注射用の水溶液とする場合には、例えば生理食塩水、ブドウ糖や その他の補助薬（例えば、 D-ソルビトール、 D-マンノース、 D-マン-トール、塩化ナト リウム)を含む等張液と混合することができる、また該水溶液は、適当な溶解補助剤（ 例えばアルコール (エタノール等)、ポリアルコール (プロピレングリコール、 PEG等)、非 イオン性界面活性剤 (ポリソルベート 80、 HCO- 50)等）と併用してもよい。
所望によりさらに希釈剤、溶解補助剤、 pH調整剤、無痛化剤、含硫還元剤、酸ィ匕 防止剤等を含有してもよい。
[0115] 本発明において、含硫還元剤としては、例えば、 N—ァセチルシスティン、 N—ァセ チルホモシスティン、チォタト酸、チォジグリコール、チォエタノールァミン、チォグリ セロール、チォソルビトール、チォグリコール酸及びその塩、チォ硫酸ナトリウム、グ ルタチオン、並びに炭素原子数 1〜7のチオアルカン酸等のスルフヒドリル基を有す るもの等を挙げることができる。
[0116] また、本発明にお 、て酸ィ匕防止剤としては、例えば、エリソルビン酸、ジブチルヒド ロキシトルエン、ブチルヒドロキシァ-ソール、 —トコフエロール、酢酸トコフエロール 、 L—ァスコルビン酸及びその塩、 L—ァスコルビン酸パルミテート、 L—ァスコルビン 酸ステアレート、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、没食子酸トリァミル、没食 子酸プロピルあるいはエチレンジァミン四酢酸ニナトリウム（EDTA)、ピロリン酸ナトリ ゥム、メタリン酸ナトリウム等のキレート剤を挙げることが出来る。
[0117] また、必要に応じ、マイクロカプセル (ヒドロキシメチルセルロース、ゼラチン、ポリ^ チルメタクリル酸]等のマイクロカプセル)に封入したり、コロイドドラッグデリバリーシス テム (リボソーム、アルブミンミクロスフエア、マイクロエマルジヨン、ナノ粒子及びナノ力 プセノレ等)とすることもできる ( Remington s Pharmaceutical Science 1り edition , Osl o Ed., 1980等参照)。さらに、薬剤を徐放性の薬剤とする方法も公知であり、本発明 に適用し得る (Langer et al., J.Biomed.Mater.Res. 1981, 15: 167—277; Langer, Chem . Tech. 1982, 12: 98-105;米国特許第 3,773,919号;欧州特許出願公開 (EP)第 58,481 号； Sidman et al., Biopolymers 1983, 22: 547-556;EP^133,988^-)0
使用される製剤上許容しうる担体は、剤型に応じて上記の中から適宜あるいは組合 せて選択されるが、これらに限定されるものではな 、。
[0118] 本発明は、 IL-6阻害剤を、心筋梗塞を発症した対象に投与する工程を含む、対象 において心筋梗塞を治療する方法、および、心筋梗塞後の左室リモデリングを抑制 する方法に関する。
本発明において、「対象」とは、本発明の心筋梗塞治療剤および心筋梗塞後の左 室リモデリングの抑制剤を投与する生物体、該生物体の体内の一部分をいう。生物 体は、特に限定されるものではないが、動物（例えば、ヒト、家畜動物種、野生動物） を含む。
また、「生物体の体内の一部分」については特に限定されないが、好ましくは心臓、 心筋、心筋梗塞の梗塞領域または非梗塞領域などを挙げることが出来る。
[0119] 本発明において、「投与する」とは、経口的、あるいは非経口的に投与することが含 まれる。経口的な投与としては、経口剤という形での投与を挙げることができ、経口剤 としては、顆粒剤、散剤、錠剤、カプセル剤、溶剤、乳剤、あるいは懸濁剤等の剤型 を選択することができる。
[0120] 非経口的な投与としては、注射剤と!/、う形での投与を挙げることができ、注射剤とし ては、皮下注射剤、筋肉注射剤、あるいは腹腔内注射剤等を挙げることができる。ま た、投与すべきオリゴヌクレオチドを含む遺伝子を遺伝子治療の手法を用いて生体 に導入することにより、本発明の方法の効果を達成することができる。また、本発明の 薬剤を、処置を施したい領域に局所的に投与することもできる。例えば、手術中の局 所注入、カテーテルの使用、または本発明のペプチドをコードする DNAの標的化遺 伝子送達により投与することも可能である。心筋梗塞発症時の処方、例えば、カテー テル手術法 (PTCA、 PCI)、血栓溶解療法 (PTCR)、冠動脈バイパス増設法 (CABG) 等、と同時平行的に本発明の薬剤が投与されてもよい。
[0121] 本発明の方法を実践する際に、本発明の薬剤は、少なくとも 1つの既知の化学療法 剤と共に薬学的組成物の一部として投与されてもよい。または、本発明の薬剤は、少 なくとも 1つの既知の免疫抑制剤と同時に投与されてもよい。一つの態様において、 本発明の薬剤および既知の化学療法剤は、実質的に同時に投与されてもよい。 なお本明細書において引用された全ての先行技術文献は、参照として本明細書に 組み入れられる。
実施例
[0122] 以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが本発明はこれら実施例に 制限されるものではない。
[0123] 〔実施例 1〕心筋梗塞モデルマウス作製
雄性 Balb/cマウス (25〜30 g)に気管揷管を行い、人口呼吸器を装着し、イソフルラ ン 0.5〜1.0%の条件で吸入麻酔を行った。左側より開胸し、左前下行枝を結紮の後、 閉胸した。マウスは、 MR16-1投与群（MR16-1 group)と非投与群（control group)に 分け、 MR16-1投与群には 500 μ g/bodyの MR16-1を腹腔内投与した。 [0124] 〔実施例 2〕MPO活性測定
心筋梗塞作成 (冠動脈結紮) 2日後にマウスの心臓を摘出し、梗塞領域と非梗塞領 域に分けミンスを行った。続いて、 10倍量の 0.5%hexadecyltrimethylammonium bromid eを含んだ 50mM KPO buffer(pH6.0)をミンスした心筋に加え、ホモジネートした後（P
4
OLYTRON、 KINEMATICAAG, Luzern、 Switzerland),超音波破砕を行った。抽出液 を 13,000rpm、 4°C、 10分間遠心分離した。得られた上清 50 μ 1を基質溶液 1.45 ml (5 0 mM KPO (pH6.0)、 0.167 mg/ml o— dianisidine dihydrochlorideゝ 0.005% H O )と混
4 2 2 合した後、基質溶液の色の変化を 460 nmの吸光度で測定した（Extinction Coefficien t =2.655)。
その結果、心筋 MPO活性は、 sham群心筋と心筋非梗塞領域における差は認めな かったが、心筋梗塞領域においては約 4倍に有意に増加していた (contro卜 non risk 0 .037±0.006, control—risk 0.122±0.035, p〈0.01)。さらに MR16- 1投与群において は、この心筋梗塞領域における MPO活性の増加が有意に抑制された (MR16-l-risk 0.034±0.008, p〈0.05 vs. controト risk)。
[0125] 〔実施例 3〕MCP-1発現測定
心筋梗塞作成 2日後にマウスの心臓を摘出し、梗塞領域と非梗塞領域に分けミンス を行った。ミンスした心室筋に Lysis buffer(2 X PBS、 1% NP- 40、 0.5% sodium deoxych olate、 0.1% sodium dodecylsulphate、 1 mM PMSF、 1% protease inhibitor cocktail(/ナ 力ライテスタ))をカ卩ぇホモジネートした。これら抽出液を 13,000 rpm、 4°C、 10分間遠心 分離した上清 otal cell lysateとし、 Lowry法でタンパク定量をおこなった。等量のタ ンパク溶液を 12%ポリアクリルアミドゲルで分離し、 Immun-BlotTMPVDF膜に転写し た。その後、一次抗体として抗 MCP-1抗体 (1:30; IBL Co.)を用い 4°Cで overnight、さ らに二次抗体として goat anti-rabbit IgG (1:400; Cell Signaling)を使用し室温で 2時 間反)心 せ、 ECL(Amarsham Bioscience^ Buckinghamshire、 U.K.)によるィ匕ギ発光法 で MCP-1発現を検出した。写真の画像解析にはコンピューターソフト (Scion Image Fr ame uraboer Status)を使用し 7こ。
その結果、心筋 MCP-1発現は、 control groupにおいて心筋梗塞領域、非梗塞領域 ともに増加していたが、梗塞領域においてより顕著であった。さらに、 MR16-1投与群 にお 、てはこの MCP-1増加が両領域にお!、て抑制されて!、た。
[0126] 〔実施例 4〕心臓超音波検査
心筋梗塞作成 4週間後に、心臓を麻酔下で心臓超音波検査を行い、左心室拡張 末期径および左室径短縮率 (FS)を測定した。
その結果、心筋梗塞作成 4週間後の心臓超音波検査において、左室拡張末期径 は control groupにおいて sham群に比し有意に増加していた。この左室径の増加は M R16-1投与により有意に抑制された。さらに FSは心筋梗塞作成により減少した力 MR 16- 1投与により有意に改善した (control group 18.5±2.9% vs. MR16-1- group 28.5士 1.8%, p〈0.05)。
[0127] 〔実施例 5〕組織学的評価
心筋梗塞作成 4週間後に心臓を摘出し、 4%パラホルムアルデヒドりん酸緩衝液に て固定し、パラフィン包埋を行った。薄切の後、 Masson' s trichrome染色を行い、非 梗塞領域の心筋繊維化の程度、及び心筋短軸断面における心筋細胞肥大の定量 評価を行った。
その結果、心筋非梗塞領域において、 control群では心筋細胞の肥大、間質の線 維化が認められたのに対し、 MR16-1投与群においてはこれらの症状が抑制された。 産業上の利用可能性
[0128] 心筋梗塞は、梗塞領域が拡大 '悪化すると心不全や、虚血による重度の不整脈を 合併する場合があり、生命への危険が高まる。本発明の心筋梗塞治療剤、心筋梗塞 後の左室リモデリングの抑制剤、および心筋梗塞を治療または予防する方法により、 心筋梗塞において合併する症状を抑制し、効率的に治療を行うことができるものと考 えられる。
[0129] 心筋梗塞後の左室リモデリングの発症率は、梗塞領域の大きさに関与するとも考え られており、心筋梗塞発症初期から、梗塞領域の状態を改善し拡大を防ぐことが重 要であるとされて ヽる。本発明の IL-6阻害剤を有効成分とする薬剤を心筋梗塞初期 力 患者に投与することにより、心筋梗塞において合併する症状と併せて、左室リモ デリングを抑制することが出来るものと考えられる。

Claims

請求の範囲
[I] IL-6阻害剤を有効成分として含有する、心筋梗塞治療剤。
[2] IL-6阻害剤が IL-6を認識する抗体であることを特徴とする請求項 1に記載の心筋梗 塞治療剤。
[3] IL-6阻害剤が IL-6受容体を認識する抗体であることを特徴とする請求項 1に記載の 心筋梗塞治療剤。
[4] 抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項 2または 3に記載の心筋梗 塞治療剤。
[5] 抗体がヒ HL-6に対する抗体またはヒ HL-6受容体に対する抗体であることを特徴と する請求項 2または 3に記載の心筋梗塞治療剤。
[6] 抗体が組換え型抗体であることを特徴とする請求項 2または 3に記載の心筋梗塞治 療剤。
[7] 抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であることを特徴とする請求項 6に記載 の心筋梗塞治療剤。
[8] IL-6阻害剤を有効成分として含有する、心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制剤。
[9] IL-6阻害剤が IL-6を認識する抗体であることを特徴とする請求項 8に記載の抑制剤。
[10] IL-6阻害剤が IL-6受容体を認識する抗体であることを特徴とする請求項 8に記載の 抑制剤。
[II] 抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項 9または 10に記載の抑制剤
[12] 抗体がヒ HL-6に対する抗体またはヒ HL-6受容体に対する抗体であることを特徴と する請求項 9または 10に記載の抑制剤。
[13] 抗体が組換え型抗体であることを特徴とする請求項 9または 10に記載の抑制剤。
[14] 抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であることを特徴とする請求項 13に記載 の抑制剤。
[15] 心筋梗塞の治療に用いられる、請求項 8から 14のいずれかに記載の抑制剤。
[16] IL-6阻害剤を、心筋梗塞を発症した対象に投与する工程を含む、対象において心 筋梗塞を治療する方法。
[17] IL-6阻害剤を、心筋梗塞を発症した対象に投与する工程を含む、対象において心 筋梗塞後の左室リモデリングを抑制する方法。
[18] IL-6阻害剤が IL-6を認識する抗体であることを特徴とする請求項 16または 17に記載 の方法。
[19] IL-6阻害剤が IL-6受容体を認識する抗体であることを特徴とする請求項 16または 17 に記載の方法。
[20] 抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項 18または 19に記載の方法
[21] 抗体がヒ HL-6に対する抗体またはヒ HL-6受容体に対する抗体であることを特徴と する請求項 18または 19に記載の方法。
[22] 抗体が組換え型抗体であることを特徴とする請求項 18または 19に記載の方法。
[23] 抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であることを特徴とする請求項 22に記載 の方法。
[24] 心筋梗塞治療剤を製造するための、 IL- 6阻害剤の使用。
[25] 心筋梗塞後の左室リモデリングの抑制剤を製造するための、 IL-6阻害剤の使用。
[26] IL-6阻害剤が IL-6を認識する抗体であることを特徴とする請求項 24または 25に記載 の使用。
[27] IL-6阻害剤が IL-6受容体を認識する抗体であることを特徴とする請求項 24または 25 に記載の使用。
[28] 抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項 26または 27に記載の使用
[29] 抗体がヒ HL-6に対する抗体またはヒ HL-6受容体に対する抗体であることを特徴と する請求項 26または 27に記載の使用。
[30] 抗体が組換え型抗体であることを特徴とする請求項 26または 27に記載の使用。
[31] 抗体がキメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体であることを特徴とする請求項 30に記載 の使用。
PCT/JP2006/320905 2005-10-21 2006-10-20 心疾患治療剤 Ceased WO2007046489A1 (ja)

Priority Applications (11)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020087011972A KR101239051B1 (ko) 2005-10-21 2006-10-20 심장질환 치료제
JP2007541050A JP5191235B2 (ja) 2005-10-21 2006-10-20 心疾患治療剤
EP06812073.2A EP1941908B1 (en) 2005-10-21 2006-10-20 Therapeutic agent for heart disease
CN2006800475324A CN101330930B (zh) 2005-10-21 2006-10-20 心脏病治疗剂
BRPI0617664A BRPI0617664B8 (pt) 2005-10-21 2006-10-20 uso de um anticorpo que reconhece a il-6 para a produção de uma composição farmacêutica para tratar o enfarte do miocárdio ou suprimir a remodelagem ventricular esquerda depois do enfarte do miocárdio
CA2626688A CA2626688C (en) 2005-10-21 2006-10-20 Agents for treating cardiopathy
AU2006305119A AU2006305119B2 (en) 2005-10-21 2006-10-20 Agents for treating cardiopathy
HK09102183.4A HK1124534B (en) 2005-10-21 2006-10-20 Therapeutic agent for heart disease
US12/090,676 US8945558B2 (en) 2005-10-21 2006-10-20 Methods for treating myocardial infarction comprising administering an IL-6 inhibitor
IL190991A IL190991A (en) 2005-10-21 2008-04-27 Causes of cardiac infarction and delay of left ventricular remodeling after cardiac infarction containing antibody that identifies IL-6 receptor as active substance
NO20082311A NO20082311L (no) 2005-10-21 2008-05-20 Terapeutisk middel for hjertesykdom

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005-307349 2005-10-21
JP2005307349 2005-10-21

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2007046489A1 true WO2007046489A1 (ja) 2007-04-26

Family

ID=37962581

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2006/320905 Ceased WO2007046489A1 (ja) 2005-10-21 2006-10-20 心疾患治療剤

Country Status (14)

Country Link
US (1) US8945558B2 (ja)
EP (1) EP1941908B1 (ja)
JP (1) JP5191235B2 (ja)
KR (1) KR101239051B1 (ja)
CN (1) CN101330930B (ja)
AR (1) AR058135A1 (ja)
AU (1) AU2006305119B2 (ja)
BR (1) BRPI0617664B8 (ja)
CA (1) CA2626688C (ja)
IL (1) IL190991A (ja)
NO (1) NO20082311L (ja)
RU (1) RU2450830C2 (ja)
WO (1) WO2007046489A1 (ja)
ZA (1) ZA200804238B (ja)

Cited By (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8470316B2 (en) 2005-10-14 2013-06-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agents for suppressing damage to transplanted islets after islet transplantation
US8623355B2 (en) 2005-11-15 2014-01-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for suppressing acute rejection of a heart transplant
US8771686B2 (en) 2006-01-27 2014-07-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for treating a disease involving choroidal neovascularization by administering an IL-6 receptor antibody
JP2014516939A (ja) * 2011-04-29 2014-07-17 コリアナ リサーチ インスティテュート オブ バイオサイエンス アンド バイオテクノロジー オレアノール酸アセテートを有効成分として含むｔｌｒ及びｉｌ−６媒介性疾患の予防又は治療用の薬学的組成物
US8945558B2 (en) 2005-10-21 2015-02-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for treating myocardial infarction comprising administering an IL-6 inhibitor
US9260516B2 (en) 2006-04-07 2016-02-16 Osaka University Method for promoting muscle regeneration by administering an antibody to the IL-6 receptor
US9539322B2 (en) 2010-05-28 2017-01-10 National University Corporation Hokkaido University Method of enhancing an antitumor T cell response by administering an anti-IL-6 receptor antibody
US9725514B2 (en) 2007-01-23 2017-08-08 Shinshu University Chronic rejection inhibitor
US10662245B2 (en) 2008-09-26 2020-05-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of reducing IL-6 activity for disease treatment
US10697883B2 (en) 2015-05-19 2020-06-30 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for determining application of therapy to multiple sclerosis (MS) patient
US10717781B2 (en) 2008-06-05 2020-07-21 National Cancer Center Neuroinvasion inhibitor
US10774148B2 (en) 2015-02-27 2020-09-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for treating IL-6-related diseases
US10782290B2 (en) 2013-06-11 2020-09-22 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting post-therapy prognosis of relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS) patient, and method for determining applicability of novel therapy
US11046784B2 (en) 2006-03-31 2021-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US11248053B2 (en) 2007-09-26 2022-02-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
JP2022033925A (ja) * 2015-07-31 2022-03-02 メディミューン リミテッド ヘプシジン媒介性障害を治療するための方法
US11332533B2 (en) 2007-09-26 2022-05-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
US11359194B2 (en) 2008-04-11 2022-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding two or more antigen molecules repeatedly
US11692037B2 (en) 2017-10-20 2023-07-04 Hyogo College Of Medicine Anti-IL-6 receptor antibody-containing medicinal composition for preventing post-surgical adhesion
KR20230113306A (ko) 2020-10-30 2023-07-28 고쿠리츠켄큐카이하츠호진 고쿠리츠쥰칸키뵤 겐큐센터 주산기 심근증 치료제
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
US11891434B2 (en) 2010-11-30 2024-02-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
US12583918B2 (en) 2019-04-17 2026-03-24 Tokyo Women's Medical University Therapeutic agent for urological cancer which is characterized by being administered with IL-6 inhibitor and CCR2 inhibitor in combination
US12600772B2 (en) 2018-01-31 2026-04-14 Motokazu Kato Therapeutic agent for asthma containing IL-6 inhibitor
US12600773B2 (en) 2017-02-01 2026-04-14 Novo Nordisk A/S Treatment of diuretic resistant heart failure patients having at least one copy of the TMPRSS6 rs855791 allele
US12617847B2 (en) 2010-11-30 2026-05-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2322216A1 (en) 1997-03-21 2011-05-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A preventive or therapeutic agent for sensitized T cell-mediated diseases comprising IL-6 antagonist as an active ingredient
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
CN101721362B (zh) * 2002-02-14 2018-07-03 中外制药株式会社 包含抗体的溶液制剂
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
WO2005090405A1 (ja) * 2004-03-24 2005-09-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha インターロイキン－６受容体に対するヒト型化抗体のサブタイプ
US11660317B2 (en) 2004-11-08 2023-05-30 The Johns Hopkins University Compositions comprising cardiosphere-derived cells for use in cell therapy
AU2006232287B2 (en) 2005-03-31 2011-10-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for producing polypeptides by regulating polypeptide association
TW200803894A (en) * 2005-11-25 2008-01-16 Univ Keio Prostate cancer therapeutic agents
EP2009101B1 (en) 2006-03-31 2017-10-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody modification method for purifying bispecific antibody
TW201634479A (zh) 2007-12-05 2016-10-01 中外製藥股份有限公司 抗ｎｒ１０抗體及其應用
PE20091174A1 (es) 2007-12-27 2009-08-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Formulacion liquida con contenido de alta concentracion de anticuerpo
EP2826789A1 (en) 2009-03-19 2015-01-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
JP5717624B2 (ja) 2009-03-19 2015-05-13 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
KR20120024763A (ko) 2009-05-15 2012-03-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ａｘｌ 항체
US10150808B2 (en) 2009-09-24 2018-12-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant regions
SI2493922T1 (sl) 2009-10-26 2017-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Postopek za proizvodnjo glikoziliranega imunoglobulina
WO2011108714A1 (ja) 2010-03-04 2011-09-09 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
CA2795053A1 (en) * 2010-03-31 2011-10-06 The Hospital For Sick Children Use of remote ischemic conditioning to improve outcome after myocardial infarction
KR20190120439A (ko) 2010-11-08 2019-10-23 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
US11286463B2 (en) 2012-03-08 2022-03-29 Advanced ReGen Medical Technologies, LLC Reprogramming of aged adult stem cells
EP3563859B1 (en) 2012-08-13 2021-10-13 Cedars-Sinai Medical Center Cardiosphere-derived exosomes for tissue regeneration
BR112015032960B1 (pt) 2013-07-04 2021-01-05 F. Hoffmann-La Roche Ag imunoensaio suprimido por interferência para detectar anticorpos anti-fármaco em amostras de soro
ES2881306T3 (es) 2013-09-27 2021-11-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Método para la producción de heteromultímeros de polipéptidos
US20150174166A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Advanced ReGen Medical Technologies, LLC Compositions for Cellular Restoration and Methods of Making and Using Same
US10772911B2 (en) 2013-12-20 2020-09-15 Advanced ReGen Medical Technologies, LLC Cell free compositions for cellular restoration and methods of making and using same
EP4494699A3 (en) 2014-10-03 2025-04-30 Cedars-Sinai Medical Center Cardiosphere-derived cells and exosomes secreted by such cells in the treatment of muscular dystrophy
JP7082484B2 (ja) 2015-04-01 2022-06-08 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
AU2016381992B2 (en) 2015-12-28 2024-01-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method for promoting efficiency of purification of Fc region-containing polypeptide
WO2017123662A1 (en) 2016-01-11 2017-07-20 Cedars-Sinai Medical Center Cardiosphere-derived cells and exosomes secreted by such cells in the treatment of heart failure with preserved ejection fraction
WO2017147169A1 (en) 2016-02-22 2017-08-31 Ohio State Innovation Foundation Chemoprevention using controlled-release formulations of anti-interleukin 6 agents, synthetic vitamin a analogues or metabolites, and estradiol metabolites
US11203754B2 (en) 2016-04-29 2021-12-21 Advanced ReGen Medical Technologies, LLC Microrna compositions and methods of making and using same
WO2017210652A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Cedars-Sinai Medical Center Cdc-derived exosomes for treatment of ventricular tachyarrythmias
SG10201607778XA (en) 2016-09-16 2018-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-Dengue Virus Antibodies, Polypeptides Containing Variant Fc Regions, And Methods Of Use
US11541078B2 (en) 2016-09-20 2023-01-03 Cedars-Sinai Medical Center Cardiosphere-derived cells and their extracellular vesicles to retard or reverse aging and age-related disorders
CN110603057A (zh) 2017-03-17 2019-12-20 俄亥俄州创新基金会 用于递送化学预防剂的纳米颗粒
JP7336769B2 (ja) 2017-04-19 2023-09-01 シーダーズ―シナイ メディカル センター 骨格筋ジストロフィーを治療する方法及び組成物
WO2019126068A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Cedars-Sinai Medical Center Engineered extracellular vesicles for enhanced tissue delivery
EP3740576A4 (en) 2018-01-18 2021-10-20 Advanced Regen Medical Technologies, LLC THERAPEUTIC COMPOSITIONS AND THEIR PREPARATION AND USE METHODS
EP3749344A4 (en) 2018-02-05 2022-01-26 Cedars-Sinai Medical Center METHODS OF THERAPEUTIC USE OF EXOSOMES AND Y-RNAS
CN112119090B (zh) 2018-03-15 2023-01-13 中外制药株式会社 对寨卡病毒具有交叉反应性的抗登革热病毒抗体及使用方法
EP3947737A2 (en) 2019-04-02 2022-02-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods of predicting and preventing cancer in patients having premalignant lesions
EP4159236A4 (en) 2020-05-29 2024-08-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody-containing formulation

Citations (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
EP0058481A1 (en) 1981-02-16 1982-08-25 Zeneca Limited Continuous release pharmaceutical compositions
EP0125023A1 (en) 1983-04-08 1984-11-14 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobulin preparations, methods for their preparation, DNA sequences, expression vectors and recombinant host cells therefor
EP0133988A2 (de) 1983-08-02 1985-03-13 Hoechst Aktiengesellschaft Regulatorische Peptide enthaltende pharmazeutische Präparate mit protrahierter Freisetzung und Verfahren zu deren Herstellung
EP0239400A2 (en) 1986-03-27 1987-09-30 Medical Research Council Recombinant antibodies and methods for their production
EP0325474A2 (en) 1988-01-22 1989-07-26 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human B cell stimulating factor-2
JPH02188600A (ja) 1989-01-17 1990-07-24 Chugai Pharmaceut Co Ltd Ｂｓｆ↓２アンタゴニスト
EP0411946A2 (en) 1989-08-03 1991-02-06 Tadamitsu Kishimoto DNA encoding human GP130 protein
JPH03139293A (ja) 1989-07-20 1991-06-13 Chuzo Kishimoto ヒトインタ―ロイキン―６レセプターに対する抗体
JPH03219894A (ja) 1990-01-26 1991-09-27 Chuzo Kishimoto ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体
WO1992001047A1 (en) 1990-07-10 1992-01-23 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
WO1992003918A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992019759A1 (fr) 1991-04-25 1992-11-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anticorps humains reconstitues diriges contre un recepteur de l'interleukine 6 humaine
WO1992020791A1 (en) 1990-07-10 1992-11-26 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
WO1993006213A1 (en) 1991-09-23 1993-04-01 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5210075A (en) 1990-02-16 1993-05-11 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Interleukin 6 antagonist peptides
US5216128A (en) 1989-06-01 1993-06-01 Yeda Research And Development Co., Ltd. IFN-β2/IL-6 receptor its preparation and pharmaceutical compositions containing it
WO1993011236A1 (en) 1991-12-02 1993-06-10 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
WO1993012227A1 (en) 1991-12-17 1993-06-24 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1993019172A1 (en) 1992-03-24 1993-09-30 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
WO1994002602A1 (en) 1992-07-24 1994-02-03 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
FR2694767A1 (fr) 1992-08-13 1994-02-18 Innotherapie Lab Sa Anticorps monoclonaux anti-IL6R, et leurs applications.
WO1994011523A2 (en) 1992-11-13 1994-05-26 Idec Pharmaceuticals Corporation Fully impaired consensus kozac sequences for mammalian expression
WO1994025585A1 (en) 1993-04-26 1994-11-10 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1995001438A1 (en) 1993-06-30 1995-01-12 Medical Research Council Sbp members with a chemical moiety covalently bound within the binding site; production and selection thereof
JPH0746998A (ja) * 1993-05-31 1995-02-21 Chugai Pharmaceut Co Ltd ヒトインターロイキン−６に対する再構成ヒト抗体
WO1995009873A1 (en) 1993-10-06 1995-04-13 Board Of Regents, The University Of Texas System A monoclonal anti-human il-6 receptor antibody
WO1995015388A1 (en) 1993-12-03 1995-06-08 Medical Research Council Recombinant binding proteins and peptides
JPH07324097A (ja) 1994-05-30 1995-12-12 Daicel Chem Ind Ltd インターロイキン６拮抗剤、及びペプチド類または医薬として許容されるその塩類
WO1996017869A2 (en) 1994-12-06 1996-06-13 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Interleukin-6 (il-6) antagonists
WO1996018648A1 (en) 1994-12-14 1996-06-20 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Superagonists and antagonists of h il-6, and 3d modelling method for their selection
WO1996030394A1 (en) 1995-03-31 1996-10-03 Jakob Bohr Method for protein folding
WO1996033735A1 (en) 1995-04-27 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
WO1996034096A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5571513A (en) 1995-05-31 1996-11-05 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Anti-gp130 monoclonal antibodies
JPH08291199A (ja) 1995-04-21 1996-11-05 Diaclone Sa A Directoire & Conseil De Surveillance 抗ｇｐ１３０モノクローナル抗体及びその使用
JPH08311098A (ja) 1995-05-22 1996-11-26 Daicel Chem Ind Ltd 新規ペプチド類およびそれを含有するインターロイキン６拮抗剤

Family Cites Families (74)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5670373A (en) 1988-01-22 1997-09-23 Kishimoto; Tadamitsu Antibody to human interleukin-6 receptor
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
AU673985B2 (en) 1991-11-08 1996-12-05 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University CD8 binding domain peptides
JP3525221B2 (ja) 1993-02-17 2004-05-10 味の素株式会社 免疫抑制剤
US5468772A (en) 1993-03-10 1995-11-21 Pharmagenesis, Inc. Tripterinin compound and method
AU6808194A (en) 1993-05-31 1994-12-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstructed human antibody against human interleukin-6
US5888510A (en) 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
US6074643A (en) 1993-09-09 2000-06-13 Cli Oncology, Inc. Site-directed chemotherapy of metastases
DE69534075T2 (de) * 1994-06-07 2005-07-21 Chugai Seiyaku K.K. Vorbeugungs- und heilmittel für erkrankungen, die durch fibrin- oder thrombusbildung hervorgerufen werden
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
ES2384222T3 (es) 1994-10-07 2012-07-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Inhibición del crecimiento anómalo de células sinoviales utilizando un antagonista de IL-6 como principio activo
CN1306963C (zh) 1994-10-21 2007-03-28 岸本忠三 用于治疗il－6产生所致疾病的药物组合物
EP0811384B1 (en) 1995-02-13 2006-06-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Muscle protein decomposition inhibitor containing il-6 receptor antibody
RU2127117C1 (ru) 1996-06-26 1999-03-10 Филиппова Ольга Всеволодовна Способ лечения ишемической болезни сердца
GB9702944D0 (en) * 1997-02-13 1997-04-02 Univ Manchester Reducing fibrosis
EP2322216A1 (en) 1997-03-21 2011-05-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A preventive or therapeutic agent for sensitized T cell-mediated diseases comprising IL-6 antagonist as an active ingredient
BR9809641A (pt) 1997-05-17 2000-07-11 Biogen Inc Uso de um interruptor de ligação cd40:cd154 para evitar respostas imunes inadaptadas, particularmente rejeição a enxerto
US20020187150A1 (en) 1997-08-15 2002-12-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventive and/or therapeutic agent for systemic lupus erythematosus comprising anti-IL-6 receptor antibody as an active ingredient
JPH11180873A (ja) 1997-12-22 1999-07-06 Kaken Shoyaku Kk ＮＦ−κＢ活性阻害剤
CN100374159C (zh) 1998-03-17 2008-03-12 中外制药株式会社 一种包含il-6拮抗剂活性成分的炎性肠道疾病的预防或治疗剂
JP4698652B2 (ja) 1998-03-17 2011-06-08 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防又は治療剤
JP4799516B2 (ja) 1998-08-24 2011-10-26 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する膵炎の予防又は治療剤
ES2276525T3 (es) 1998-08-24 2007-06-16 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Preventivos o remedios para la pancreatitis que contienen anticuerpos anti-receptor il-6 como ingrediente activo.
US20030130212A1 (en) 1999-01-14 2003-07-10 Rossignol Daniel P. Administration of an anti-endotoxin drug by intravenous infusion
ES2250154T3 (es) 1999-07-16 2006-04-16 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. Agentes que inhiben las reacciones de rechazo cronico despues de un transplante de organo.
WO2001045678A2 (de) 1999-12-21 2001-06-28 Id Pharma Gmbh Arzneimittel, verfahren zu dessen herstellung und dessen verwendung
US6413663B1 (en) 2000-06-29 2002-07-02 Graftech Inc. Fluid permeable flexible graphite fuel cell electrode
CN1259973C (zh) 2000-10-25 2006-06-21 中外制药株式会社 含有il－6拮抗剂作为有效成分的牛皮癣的预防或治疗剂
JP4889187B2 (ja) 2000-10-27 2012-03-07 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分として含有する血中ｍｍｐ−３濃度低下剤
UA80091C2 (en) 2001-04-02 2007-08-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Remedies for infant chronic arthritis-relating diseases and still's disease which contain an interleukin-6 (il-6) antagonist
PT2308888T (pt) 2001-11-14 2017-05-03 Janssen Biotech Inc Anticorpos anti-il-6, composições, métodos e utilizações
FR2833011B1 (fr) 2001-12-04 2004-10-29 Univ Claude Bernard Lyon Nouvelle proteine a activite inhibitrice de l'il-6
DE10231655A1 (de) 2002-07-12 2004-02-26 Blasticon Biotechnologische Forschung Gmbh Transplantat-Akzeptanz induzierende Zellen monozytären Ursprungs, sowie deren Herstellung und Verwendung
US7438907B2 (en) 2002-11-15 2008-10-21 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against CD25
EP1572103A4 (en) 2002-11-15 2008-02-13 Centocor Inc ANTI-ANGIOGENIC USES OF IL-6 ANTAGONISTS
WO2004071404A2 (en) 2003-02-04 2004-08-26 Centocor Inc. Use of il-6 antagonists in combination with steroids to enhance apoptosis
WO2004073741A1 (ja) 2003-02-24 2004-09-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha インターロイキン－６アンタゴニストを含有する脊髄損傷治療剤
US20040208876A1 (en) 2003-04-18 2004-10-21 Kim Kyung Jin Monoclonal antibodies to hepatocyte growth factor
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
NZ592039A (en) 2003-08-27 2013-03-28 Ophthotech Corp Combination therapy for the treatment of ocular neovascular disorders
US7825109B2 (en) 2003-08-29 2010-11-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Compound capable of binding S1P receptor and pharmaceutical use thereof
JP4960096B2 (ja) * 2003-09-22 2012-06-27 ペントラコール ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｉｌ−６の生物学的効果を減じる化合物の使用
JPWO2005027970A1 (ja) 2003-09-24 2007-11-15 協和醗酵工業株式会社 癌治療用医薬
MXPA06003768A (es) 2003-10-17 2006-06-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agente terapeutico para el mesotelioma.
KR100556660B1 (ko) 2003-11-11 2006-03-10 국립암센터 Ｈｇｆ의 중화가능 에피토프 및 이에 결합하는 중화 항체
AR048210A1 (es) * 2003-12-19 2006-04-12 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Un agente preventivo para la vasculitis.
JP4609877B2 (ja) 2004-03-30 2011-01-12 塩野義製薬株式会社 慢性拒絶反応抑制剤
US7781617B2 (en) 2004-07-16 2010-08-24 Kyorin Pharmaceutical Co., Ltd Effective use method of medicaments and method of preventing expression of side effect
RU2007102287A (ru) 2004-08-05 2008-09-10 Вайет (Us) Антагонисты активности рецептора интерлейкина-21
US7884196B2 (en) 2004-10-06 2011-02-08 Oliver Lawless Vaccine composition comprising methylated DNA and immunomodulatory motifs
PT1831258E (pt) 2004-12-28 2016-01-07 Univ Genova Anticorpos monoclonais contra nkg2a
JO3058B1 (ar) 2005-04-29 2017-03-15 Applied Molecular Evolution Inc الاجسام المضادة لمضادات -اي ال-6,تركيباتها طرقها واستعمالاتها
WO2007043641A1 (ja) 2005-10-14 2007-04-19 Fukuoka University 膵島移植における移植膵島障害抑制剤
AR058135A1 (es) 2005-10-21 2008-01-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes para el tratamiento de cardiopatias
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
TW200803894A (en) 2005-11-25 2008-01-16 Univ Keio Prostate cancer therapeutic agents
AR057227A1 (es) 2005-12-09 2007-11-21 Centocor Inc Metodo para usar antagonistas de il6 con inhibidores del proteasoma
ATE550353T1 (de) 2005-12-30 2012-04-15 Merck Patent Gmbh Die bindung von mit il-6ralpha komplexiertem il-6 an gp130 verhindernde anti-il-6-antikörper
AU2007208678B2 (en) 2006-01-27 2013-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agents for diseases involving choroidal neovascularization
JP5754875B2 (ja) 2006-04-07 2015-07-29 国立大学法人大阪大学 筋再生促進剤
JP5307708B2 (ja) 2006-06-02 2013-10-02 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ヒトｉｌ−６受容体に対する高親和性抗体
WO2008020079A1 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against il-6r and polypeptides comprising the same for the treatment of deseases and disorders associated with il-6-mediated signalling
WO2008042611A2 (en) 2006-09-29 2008-04-10 Centocor, Inc. Method of using il6 antagonists with mitoxantrone for prostate cancer
TWI438208B (zh) 2007-01-23 2014-05-21 中外製藥股份有限公司 抑制慢性排斥反應之藥劑
DK2164514T3 (en) 2007-05-21 2017-02-27 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and its use
WO2009010539A2 (en) 2007-07-19 2009-01-22 Ablynx. N.V. Receptor for interleukin-6 (il-6) from macaca fascicularis
KR101680906B1 (ko) 2007-09-26 2016-11-30 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항체 정상영역 개변체
MX2010003329A (es) 2007-09-26 2010-04-27 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticuerpo anti-receptor de il-6.
KR102057826B1 (ko) 2008-04-11 2019-12-20 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 복수 분자의 항원에 반복 결합하는 항원 결합 분자
CA2728243C (en) 2008-06-05 2020-03-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Il-6 inhibitor for suppressing neuroinvasion in pancreatic cancer
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
WO2011013786A1 (ja) 2009-07-31 2011-02-03 Maeda Shin 癌の転移抑制剤
WO2011149051A1 (ja) 2010-05-28 2011-12-01 中外製薬株式会社 抗腫瘍t細胞応答増強剤
WO2011149046A1 (ja) 2010-05-28 2011-12-01 独立行政法人国立がん研究センター 膵癌治療剤

Patent Citations (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
EP0058481A1 (en) 1981-02-16 1982-08-25 Zeneca Limited Continuous release pharmaceutical compositions
EP0125023A1 (en) 1983-04-08 1984-11-14 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobulin preparations, methods for their preparation, DNA sequences, expression vectors and recombinant host cells therefor
EP0133988A2 (de) 1983-08-02 1985-03-13 Hoechst Aktiengesellschaft Regulatorische Peptide enthaltende pharmazeutische Präparate mit protrahierter Freisetzung und Verfahren zu deren Herstellung
EP0239400A2 (en) 1986-03-27 1987-09-30 Medical Research Council Recombinant antibodies and methods for their production
EP0325474A2 (en) 1988-01-22 1989-07-26 Tadamitsu Kishimoto Receptor protein for human B cell stimulating factor-2
JPH02188600A (ja) 1989-01-17 1990-07-24 Chugai Pharmaceut Co Ltd Ｂｓｆ↓２アンタゴニスト
US5216128A (en) 1989-06-01 1993-06-01 Yeda Research And Development Co., Ltd. IFN-β2/IL-6 receptor its preparation and pharmaceutical compositions containing it
JPH03139293A (ja) 1989-07-20 1991-06-13 Chuzo Kishimoto ヒトインタ―ロイキン―６レセプターに対する抗体
EP0411946A2 (en) 1989-08-03 1991-02-06 Tadamitsu Kishimoto DNA encoding human GP130 protein
JPH03219894A (ja) 1990-01-26 1991-09-27 Chuzo Kishimoto ｇｐ１３０蛋白質に対する抗体
US5210075A (en) 1990-02-16 1993-05-11 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Interleukin 6 antagonist peptides
WO1992001047A1 (en) 1990-07-10 1992-01-23 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
WO1992020791A1 (en) 1990-07-10 1992-11-26 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
WO1992003918A1 (en) 1990-08-29 1992-03-19 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992019759A1 (fr) 1991-04-25 1992-11-12 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anticorps humains reconstitues diriges contre un recepteur de l'interleukine 6 humaine
WO1993006213A1 (en) 1991-09-23 1993-04-01 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
WO1993011236A1 (en) 1991-12-02 1993-06-10 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
WO1993012227A1 (en) 1991-12-17 1993-06-24 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1993019172A1 (en) 1992-03-24 1993-09-30 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
WO1994002602A1 (en) 1992-07-24 1994-02-03 Cell Genesys, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
FR2694767A1 (fr) 1992-08-13 1994-02-18 Innotherapie Lab Sa Anticorps monoclonaux anti-IL6R, et leurs applications.
WO1994011523A2 (en) 1992-11-13 1994-05-26 Idec Pharmaceuticals Corporation Fully impaired consensus kozac sequences for mammalian expression
WO1994025585A1 (en) 1993-04-26 1994-11-10 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
JPH0746998A (ja) * 1993-05-31 1995-02-21 Chugai Pharmaceut Co Ltd ヒトインターロイキン−６に対する再構成ヒト抗体
WO1995001438A1 (en) 1993-06-30 1995-01-12 Medical Research Council Sbp members with a chemical moiety covalently bound within the binding site; production and selection thereof
WO1995009873A1 (en) 1993-10-06 1995-04-13 Board Of Regents, The University Of Texas System A monoclonal anti-human il-6 receptor antibody
WO1995015388A1 (en) 1993-12-03 1995-06-08 Medical Research Council Recombinant binding proteins and peptides
JPH07324097A (ja) 1994-05-30 1995-12-12 Daicel Chem Ind Ltd インターロイキン６拮抗剤、及びペプチド類または医薬として許容されるその塩類
WO1996017869A2 (en) 1994-12-06 1996-06-13 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Interleukin-6 (il-6) antagonists
WO1996018648A1 (en) 1994-12-14 1996-06-20 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. Superagonists and antagonists of h il-6, and 3d modelling method for their selection
WO1996030394A1 (en) 1995-03-31 1996-10-03 Jakob Bohr Method for protein folding
JPH08291199A (ja) 1995-04-21 1996-11-05 Diaclone Sa A Directoire & Conseil De Surveillance 抗ｇｐ１３０モノクローナル抗体及びその使用
WO1996033735A1 (en) 1995-04-27 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
WO1996034096A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
JPH08311098A (ja) 1995-05-22 1996-11-26 Daicel Chem Ind Ltd 新規ペプチド類およびそれを含有するインターロイキン６拮抗剤
US5571513A (en) 1995-05-31 1996-11-05 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Anti-gp130 monoclonal antibodies

Non-Patent Citations (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Peptide Synthesis", vol. 14, 1991, HIROKAWA SHOTEN, article "Continuation of Development of Pharmaceuticals"
"Remington's Pharmaceutical Science", 1980
AGR. BIOL. CHEM., vol. 54, 1990, pages 2685 - 2688
AKIRA, S. ET AL., ADV. IN IMMUNOLOGY, vol. 54, 1993, pages 1 - 78
BELYAVSKY, A. ET AL., NUCLEIC ACIDS RES., vol. 17, 1989, pages 2919 - 2932
BETTER, M. ET AL., SCIENCE, vol. 240, 1988, pages 1041 - 1043
BETTER, M.; HORWITZ, A. H., METHODS IN ENZYMOLOGY, vol. 178, 1989, pages 476 - 496
BIRD, R. E. ET AL., TIBTECH, vol. 9, 1991, pages 132 - 137
BORREBAECK, C. A. K.; LARRICK, J. W.: "THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES", 1990, MACMILLAN PUBLISHERS LTD.
BRAKENHOFF ET AL., J. BIOL. CHEM., vol. 269, 1994, pages 86 - 93
CHIRGWIN, J. M. ET AL., BIOCHEMISTRY, vol. 18, 1979, pages 5294 - 5299
CHOMCZYNSKI, P. ET AL., ANAL. BIOCHEM., vol. 162, 1987, pages 156 - 159
CO, M. S. ET AL., J. IMMUNOL., vol. 152, 1994, pages 2968 - 2976
CURRENT TOPICS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY, vol. 81, 1978, pages 1 - 7
DE ST GROTH, S. F. ET AL., J. IMMUNOL. METHODS, vol. 35, 1980, pages 1 - 21
DING W.: "The change of plasma interleukin-6 level and cardiac protective effect of monoclonal antibody to IL-6 during myocardial infarction reperfusion", CHINESE JOURNAL OF CARDIOLOGY, vol. 27, no. 1, 1999, pages 29 - 32, XP003012036 *
EBERT, K. M. ET AL., BIO/TECHNOLOGY, vol. 12, 1994, pages 699 - 702
EUR. J. BIOCHEM., vol. 168, 1987, pages 543 - 550
FINKEL, M. S. ET AL., SCIENCE, vol. 257, 1992, pages 387 - 389
FROHMAN, M. A. ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 85, 1988, pages 8998 - 9002
FUCHS M. ET AL., FASEB J., vol. 17, 2003, pages 2118 - 2120
GALFRE, G. ET AL., NATURE, vol. 277, 1979, pages 131 - 133
GWECHENBERGER M.: "Cardiac myocytes produce interleukin-6 in culture and in viable border zone of reperfused infarctions", CIRCULATION, vol. 99, no. 4, 1999, pages 546 - 551, XP003012037 *
GWECHENBERGER, M. ET AL., CIRCULATION, vol. 99, 1999, pages 546 - 551
HIRANO, T. ET AL., NATURE, vol. 324, 1986, pages 73 - 76
HIRATA, Y ET AL., J. IMMUNOL., vol. 143, 1989, pages 2900 - 2906
HIRATA, Y. ET AL., J. IMMUNOL., vol. 143, 1989, pages 2900 - 2906
HIROTA, H. ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 92, 1995, pages 4862 - 4866
HUANG, Y W. ET AL., HYBRIDOMA, vol. 12, 1993, pages 621 - 630
HUSTON, J. S., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 85, 1988, pages 5879 - 5883
J. IMMUNOL., vol. 140, 1988, pages 1534 - 1541
JULIAN, K. -C. MA ET AL., EUR. J. IMMUNOL., vol. 24, 1994, pages 131 - 138
KEARNEY, J. F. ET AL., J. IMMUNOL, vol. 123, 1979, pages 1548 - 1550
KOHLER, G.; MILSTEIN, C., EUR. J. IMMUNOL., vol. 6, 1976, pages 511 - 519
KOHLER, G.; MILSTEIN, C., METHODS ENZYMOL., vol. 73, 1981, pages 3 - 46
LAMOYI, E., METHODS IN ENZYMOLOGY, vol. 121, 1989, pages 652 - 663
LANGER ET AL., J. BIOMED, MATER. RES., vol. 15, 1981, pages 167 - 277
LANGER, CHEM. TECH, vol. 12, 1982, pages 98 - 105
LEI, S. P. ET AL., J. BACTERIOL., vol. 169, 1987, pages 4379 - 4383
LOTZ, M. ET AL., J. EXP. MED., vol. 167, 1988, pages 1253 - 1258
MAEDA, S. ET AL., NATURE, vol. 315, 1985, pages 592 - 594
MARGULIES, D. H. ET AL., CELL, vol. 8, 1976, pages 405 - 415
MATSUDA, T. ET AL., EUR. J. IMMUNOL., vol. 18, 1988, pages 951 - 956
MIZUSHIMA, S; NAGATA S., NUCLEIC ACIDS RES, vol. 18, 1990, pages 5322
MULLIGAN, R. C. ET AL., NATURE, vol. 277, 1979, pages 108 - 114
NEGORO, S. ET AL., CARDIOVASC. RES, vol. 47, 2000, pages 797 - 805
NOVICK, D. ET AL., HYBRIDOMA, vol. 10, 1991, pages 137 - 146
ONO K.: "Cytokine gene expression after myocardial infarction in rat hearts: possible implication in left ventricular remodeling", CIRCULATION, vol. 98, no. 2, 1998, pages 149 - 156, XP002961890 *
ONO, K. ET AL., CIRCULATION, vol. 98, 1998, pages 149 - 156
PLUECKTHUN, A.; SKERRA, A., METHODS IN ENZYMOLOGY, vol. 178, 1989, pages 497 - 515
ROUSSEAUX, J. ET AL., METHODS IN ENZYMOLOGY, vol. 121, 1989, pages 663 - 666
SATO, K. ET AL., 21ST ANNUAL MEETING OF THE JAPANESE SOCIETY FOR IMMUNOLOGY, vol. 21, 1991, pages 166
SATO, K. ET AL., CANCER RES., vol. 53, 1993, pages 851 - 856
SAVINOER, EMBO J., vol. 13, 1994, pages 1357 - 1367
See also references of EP1941908A4
SHULMAN, M. ET AL., NATURE, vol. 276, 1978, pages 269 - 270
SIDMAN ET AL., BIOPOLYMERS, vol. 22, 1983, pages 547 - 556
TAGA, T. ET AL., CELL, vol. 58, 1989, pages 573 - 581
TAGA, T. ET AL., J. EXP. MED., vol. 166, 1987, pages 967 - 981
TAMURA, T. ET AL., PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 90, 1993, pages 11924 - 11928
TROWBRIDGE, I. S., J. EXP. MED., vol. 148, 1978, pages 313 - 323
VRIEND ET AL., J. MOL. GRAPHICS, vol. 8, 1990, pages 52 - 56
WARD, E, S. ET AL., FASEB J., vol. 6, 1992, pages 2422 - 2427
WARD, E. S. ET AL., NATURE, vol. 341, 1989, pages 544 - 546
YAMASAKI, K. ET AL., SCIENCE, vol. 241, 1988, pages 825 - 828
YAMAUCHI-TAKIHARA; K. ET AL., CIRCULATION, vol. 91, 1995, pages 1520 - 1524
YASUKAWA, K, J. BIOEHEM, vol. 108, 1990, pages 673 - 676
YUE, P. ET AL., AM. J. PHYSIOL., vol. 275, 1998, pages H250 - H258

Cited By (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8470316B2 (en) 2005-10-14 2013-06-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Agents for suppressing damage to transplanted islets after islet transplantation
US8945558B2 (en) 2005-10-21 2015-02-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for treating myocardial infarction comprising administering an IL-6 inhibitor
US8623355B2 (en) 2005-11-15 2014-01-07 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for suppressing acute rejection of a heart transplant
US8771686B2 (en) 2006-01-27 2014-07-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for treating a disease involving choroidal neovascularization by administering an IL-6 receptor antibody
US11046784B2 (en) 2006-03-31 2021-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US12473375B2 (en) 2006-03-31 2025-11-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US9260516B2 (en) 2006-04-07 2016-02-16 Osaka University Method for promoting muscle regeneration by administering an antibody to the IL-6 receptor
US9725514B2 (en) 2007-01-23 2017-08-08 Shinshu University Chronic rejection inhibitor
US12116414B2 (en) 2007-09-26 2024-10-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
US12122840B2 (en) 2007-09-26 2024-10-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
US12600789B2 (en) 2007-09-26 2026-04-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
US11248053B2 (en) 2007-09-26 2022-02-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Method of modifying isoelectric point of antibody via amino acid substitution in CDR
US11332533B2 (en) 2007-09-26 2022-05-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant region
US11371039B2 (en) 2008-04-11 2022-06-28 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to two or more antigen molecules repeatedly
US11359194B2 (en) 2008-04-11 2022-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding two or more antigen molecules repeatedly
US10717781B2 (en) 2008-06-05 2020-07-21 National Cancer Center Neuroinvasion inhibitor
US10662245B2 (en) 2008-09-26 2020-05-26 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods of reducing IL-6 activity for disease treatment
US9539322B2 (en) 2010-05-28 2017-01-10 National University Corporation Hokkaido University Method of enhancing an antitumor T cell response by administering an anti-IL-6 receptor antibody
US12617847B2 (en) 2010-11-30 2026-05-05 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
US11891434B2 (en) 2010-11-30 2024-02-06 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
JP2014516939A (ja) * 2011-04-29 2014-07-17 コリアナ リサーチ インスティテュート オブ バイオサイエンス アンド バイオテクノロジー オレアノール酸アセテートを有効成分として含むｔｌｒ及びｉｌ−６媒介性疾患の予防又は治療用の薬学的組成物
US10782290B2 (en) 2013-06-11 2020-09-22 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting post-therapy prognosis of relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS) patient, and method for determining applicability of novel therapy
US10774148B2 (en) 2015-02-27 2020-09-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for treating IL-6-related diseases
US10697883B2 (en) 2015-05-19 2020-06-30 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for determining application of therapy to multiple sclerosis (MS) patient
JP7386838B2 (ja) 2015-07-31 2023-11-27 メディミューン リミテッド ヘプシジン媒介性障害を治療するための方法
JP2022033925A (ja) * 2015-07-31 2022-03-02 メディミューン リミテッド ヘプシジン媒介性障害を治療するための方法
US12600773B2 (en) 2017-02-01 2026-04-14 Novo Nordisk A/S Treatment of diuretic resistant heart failure patients having at least one copy of the TMPRSS6 rs855791 allele
US11851486B2 (en) 2017-05-02 2023-12-26 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
US12509511B2 (en) 2017-05-02 2025-12-30 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting and evaluating therapeutic effect in diseases related to IL-6 and neutrophils
US11692037B2 (en) 2017-10-20 2023-07-04 Hyogo College Of Medicine Anti-IL-6 receptor antibody-containing medicinal composition for preventing post-surgical adhesion
US12600772B2 (en) 2018-01-31 2026-04-14 Motokazu Kato Therapeutic agent for asthma containing IL-6 inhibitor
US12583918B2 (en) 2019-04-17 2026-03-24 Tokyo Women's Medical University Therapeutic agent for urological cancer which is characterized by being administered with IL-6 inhibitor and CCR2 inhibitor in combination
KR20230113306A (ko) 2020-10-30 2023-07-28 고쿠리츠켄큐카이하츠호진 고쿠리츠쥰칸키뵤 겐큐센터 주산기 심근증 치료제

Also Published As

Publication number Publication date
ZA200804238B (en) 2009-03-25
HK1124534A1 (en) 2009-07-17
US8945558B2 (en) 2015-02-03
BRPI0617664B8 (pt) 2021-05-25
US20090220500A1 (en) 2009-09-03
BRPI0617664A2 (pt) 2011-08-02
AR058135A1 (es) 2008-01-23
IL190991A0 (en) 2008-12-29
IL190991A (en) 2013-09-30
RU2008120019A (ru) 2009-11-27
EP1941908A1 (en) 2008-07-09
JPWO2007046489A1 (ja) 2009-04-23
CA2626688A1 (en) 2007-04-26
EP1941908B1 (en) 2015-08-19
AU2006305119A1 (en) 2007-04-26
CN101330930A (zh) 2008-12-24
BRPI0617664B1 (pt) 2021-04-13
KR101239051B1 (ko) 2013-03-04
EP1941908A4 (en) 2010-01-06
AU2006305119B2 (en) 2012-12-20
JP5191235B2 (ja) 2013-05-08
NO20082311L (no) 2008-07-16
CA2626688C (en) 2017-10-03
CN101330930B (zh) 2011-11-23
RU2450830C2 (ru) 2012-05-20
KR20080064172A (ko) 2008-07-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5191235B2 (ja) 心疾患治療剤
JP5014143B2 (ja) 膵島移植における移植膵島障害抑制剤
JP5264752B2 (ja) インターロイキン６受容体阻害剤を有効成分とする移植片対宿主病治療剤
JP5754875B2 (ja) 筋再生促進剤
JP5189366B2 (ja) 細胞傷害性ｔ細胞の誘導抑制剤
JP5254807B2 (ja) 慢性拒絶反応抑制剤
JP5904552B2 (ja) 膵癌治療剤
WO2007061029A1 (ja) 前立腺癌治療剤
WO2007086490A1 (ja) 脈絡膜血管新生を伴う疾患の治療剤
KR20200074160A (ko) 항il-6 수용체 항체를 함유하는 수술 후의 유착을 억제하기 위한 의약 조성물
JP2010095445A (ja) Ｉｌ−６アンタゴニストを有効成分とする炎症性筋疾患治療剤
HK1124534B (en) Therapeutic agent for heart disease
HK1140134B (en) Chronic rejection inhibitor
MX2008005138A (en) Therapeutic agent for heart disease

Legal Events

Date Code Title Description
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200680047532.4

Country of ref document: CN

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2007541050

Country of ref document: JP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2006812073

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2626688

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/a/2008/005138

Country of ref document: MX

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12008500941

Country of ref document: PH

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 190991

Country of ref document: IL

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 3473/DELNP/2008

Country of ref document: IN

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2006305119

Country of ref document: AU

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 1020087011972

Country of ref document: KR

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2008120019

Country of ref document: RU

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2006305119

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20061020

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12090676

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: PI0617664

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20080418