BE503555A - - Google Patents

Description

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  PROCEDE DE RECUPERATION DE CONJUGATS OESTROGENIQUES AU DEPART DE LIQUIDES 
URINAIRES. 



   La présente invention est relative à un nouveau procédé pour la récupération de conjugats oestrogéniques au départ d'urine ou de liquides uri- naires. 



   On sait qu'on peut extraire de matières urinaires non hydrolysées de cheval des substances oestrogéniques hydrosolubles, qui constituent des agents thérapeutiques précieux. Ces substances oestrogéniques sont insolu- bles dans les solvants ordinaires, tels que benzène, chloroforme, bichlorure d'éthylène et autres solvants des mêmes classes. 



   La présente invention concerne un procédé, grâce auquel les sol- vants ordinaires peuvent être utilisés pour préparer un extrait des conjugats oestrogéniques, à savoir les substances oestrogéniques hydrosolubles, des ma- tières urinaires non hydrolysées de cheval. 



   Suivant la présente invention, les substances oestrogéniques hydro- solubles contenues dans une solution urinaire non hydrolysée de cheval, qui sont normalement insolubles dans les solvants organiques choisis dans le grou - pe comprenant les hydrocarbures aromatiques liquides et les hydrocarbures chlo- rés liquides, peuvent être rendues soluble dans ces solvants. Ceci se fait en transformant ces substances en leurs sels basiques organiques. 



   Conformément à l'invention, on prépare un extrait thérapeutique- ment actif des substances oestrogéniques hydrosolubles provenant de matière urinaire non hydrolysée de cheval., en faisant réagir, à un pH inférieur à 9, de manière à former les sels basiques organiques correspondants, une solution de matière urinaire non hydrolysée de cheval, avec une base organique azotée capable de réagir avec les substances oestrogéniques hydrosolubles. Le mélan- 

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 ge réactionnel est alors extrait à l'aide d'un solvant organique choisi dans le groupe comprenant les hydrocarbures aromatiques liquides et les hydrocar- bures chlorés liquides. La phase organique est un extrait des substances oes- trogéniques hydrosolubles provenant d'urine de cheval., sous forme de leurs sels basiques organiques. 



   Si on le désire., le résidu obtenu par évaporation de la phase or- ganique peut être   mis   en suspension dans l'eau et la solution aqueuse peut être ajustée à un pH suffisamment élevé., pour libérer la base libre et former les sels alcalins des conjugats oestrogéniques. La séparation de la base li- bre des sels alcalins des conjugats oestrogéniques est obtenue par extraction à l'aide d'un solvant organique non miscible à l'eau et capable d'extraire la base libre, tel que la benzène ou l'éther. 



  La phase organique contenant les sels basiques organiques des conjugats oestro- géniques peut aussi être lavée à l'aide d'un hydroxyde alcalin, de manière à donner une phase aqueuse contenant les sels alcalins correspondants des conju- gats oestrogéniques. 



   Les solutions aqueuses, qui contiennent les conjugats oestrogéni- ques à l'état naturel   sontg   de préférence, constituées par de l'urine de ju- ments gravides,ou des concentrats de cette urine. 



   Les bases organiques azotées et leurs sels, qui sontutilisés con- formément à la présenteinvention, sont, de préférence, des bases azotées ali- phatiques, telles que la diméthylamine, des bases azotées aliphatiques cycli- ques, telles que la dicyclohexylamine, des bases azotées aromatiques, telles que   l'aniline,   la p-amino-acétophénone, la   diméthylamine,   le diméthyl-aminoto- luène, des bases azotées hétérocycliques, telles que la pyridine, et des bases azotées hétérocycliques substituées, telles que la   2-amino-pyridine.   



   Les solvants organiques non miscibles à l'eau, dans lesquels les sels basiques organiques des conjugats oestrogéniques sont solubles sont, de préférence, des hydrocarbures aromatiques liquides, tels que le benzène et des hydrocarbures chlorés liquides, tels que le bichlorure d'éthylène, le chloroforme le chlorure de méthylène. 



   Les exemples suivants, qui ne sont qu'illustratifs permettront de mieux comprendre l'invention. 



     EXEMPLE   1   488   gallons d'urine de juments gravides filtrée contenant des sul- fates oestrogéniques en proportion correspondant à 750 mg de sulfate sodique d'oestrone par gallon, ainsi que le révèle un essai de   Marrian-Kober.,   sont traités à l'aide de 11,25 kg de chlorhydrate de procaïne et 35 litres d'acide nitrique (20  Bé) de manière à régler le pH à 5 et sont alors extraits à l'ai- de de 800 litres de chloroforme dans un extracteur centrifuge à contre-courant Podbielnak, en utilisant un rapport d'urine de juments gravides au chloroforme de 4 :1, et une vitesse de 1750 tours par minute. 



   L'urine de juments gravides épuisée contenait des sulfates oestro- géniques en proportion correspondant à 8,5 mg de sulfate sodique d'oestrone par gallon. 



   L'extrait chloroformique contenant les sulfates oestrogéniques de procaïne est distillé sous vide ,pour éliminer tout le. chloroforme. On obtient ainsi 10 litres de sirop. Ce sirop est traité à l'aide   d'eau   et son pH est établi à 11 à l'aide d'une solution d'hydroxyde sodique à 50%, ce qui transfor- me les sulfates oestrogéniques de procaïne en sulfates oestrogéniques de so- dium et libère la   procaïnebase   La solution aqueuse à pH = 11 est traitée par 20 litres de benzène, pour éliminer la procaïne-base libre et autres impu- retés.

   Le pH de la solution est alors ajusté à   7,   la teneur en sulfate-oestro- génique correspondant à 223 gr de sulfate sodique   d'oestrone,   ainsi que le ré- vèle l'essai de   Marrian-Kober.   La récupération de sulfates oestrogéniques à 

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 partir d'urine de juments gravides atteint, dès lors, 61 %. 



   Dans cet exemple, le chloroforme peut être remplacé par d'autres solvants, tes que le bichlorure d'éthylène et le chlorure de méthylène. 



   EXEMPLE 2. 



   100 mg de 2-aminopyridine dans 1 ml d'eau sont ajoutés à 100 ml d'urine de juments gravides non hydrolysée, contenant 18 mg d'oestrogènes con- jugés, calculés sous forme de sulfate sodique d'oestrone et déterminés par 1' essai colorométrique de   Marrian-Kober.   Le pH de la solution est alors ajusté à 6,0 à l'aide d'acide chlorhydrique, puis la solution est soumise à une ex- traction à l'aide de 100 ml de bichlorure d'éthylène. L'extrait de   bichloru-   re d'éthylène contient   4,9   mg d'oestrogènes conjugués (calculés sous forme de sulfate sodique d'oestrone).   27%   des substances oestrogéniques originellement présentes dans l'urine sont ainsi extraits. 



   EXEMPLE 3. 



   200 mg de chlorhydrate de   diméthylamine,   dissous dans 1 ml   d'eau,   sont ajoutés à 100 ml d'urine de juments gravides non hydrolysée, contenant 18 mg d'oestrogènes conjugués., calculés sous forme de sulfate sodique d'oes- trone et déterminés par l'essai colorimétrique de Marrian-Kober. Le pH de la solution est ajusté à 6,0 à l'aide d'acide chlorhydrique, puis la solution est soumise à une seule extraction à l'aide de 100 ml de bichlorure d'éthylène. 



  L'extrait au bichlorure d'éthylène contient   2,7   mg d'oestrogènes conjugués (cal- culés sous forme de sulfate sodique   d'oestrone).   25% de la quantité de substan- ces oestrogéniques originellement présentes dans l'urine sont ainsi récupérées. 



   EXEMPLE 4. 



   100 ml de chlorhydrate de dicyclohexylamine dissous dans 5 ml d'eau sont ajoutés à 100 ml d'urine de juments gravides non hydrolysée, contenant 18 mg d'oestrogènes conjugués, calculés sous forme de sulfate sodique d'oestro- ne et déterminés par l'essai colorimétrique de Marrian-Kober. Le pH de la so- lution est ajusté à 6,0, puis   la- solution   est soumise à une seule extraction à l'aide de 100 ml de bichlorure d'éthylène. L'extrait au bichlorure d'éthy- lène contient 18 mg d'oestrogènes conjugués (calculés sous forme de sulfate sodique d'oestrone)o 100 % de la quantité de substances oestrogéniques origi- nellement présentes dans l'urine sont ainsi récupérés. 



   EXEMPLE   5.   



   1 ml d'aniline est ajouté à 100 ml d'urine de juments gravides non hydrolysée, contenant 18 mg d'oestrogènes conjugués, calculés sous forme de sul- fate sodique d'oestrone et déterminés par l'essai colorimétrique de Marrian- Kober. Le pH de la solution est ajusté à 6,0 à l'aide d'acide chlorhydrique concentré et la solution est soumise à une seule extraction à l'aide de 100 ml de bichlorure d'éthylène. L'extrait au bichlorure d'éthylène contient 1,8 mg d'oestrogènes conjugués (calculés sous forme de sulfate sodique   d'oestrone) .   



  10% de la teneur originelle en substances oestrogéniques de l'urine sont ainsi récupérés 
EXEMPLE 6. 



   20 ml de pyridine sont ajoutés à 100 ml d'urine de juments gravi- des non hydrolysée, contenant 18 mg d'oestrogènes conjugués, calculés sous forme de sulfate sodique d'oestrone et déterminés par l'essai colorimétrique de Marrian-Kober. Le pH de la solution est ajusté à 6,0 à l'aide d'acide chlorhydrique concentré, puis la solution est soumise à une extration à l'ai- de de 100 ml de bichlorure d'éthylène. L'extrait au bichlorure d'éthylène con- tient 9,0 gr d'oestrogènes conjugués (calculés sous forme de sulfate sodique d'oestrone). 

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  Ceci représente une récupération de   50%   de la quantité d'oestrogènes présents dans l'urine. 



   EXEMPLE?. 



   100 mg de chlorhydrate de   procaine   dans 1 ml d'eau sont ajoutés à 100 ml d'urine de juments gravides non hydrolysée, contenant 18 mg d'oestro- gènes conjugués, calculés sous forme de sulfate sodique d'oestrone et déter- minés par l'essai colorimétrique de Marrian-Kober. Le pH de la solution est ajusté à 6,0, puis la solution est soumise à une seule extraction à l'aide de 100 ml de chlorure de méthylène. L'extrait au chlorure de méthylène contient 11,3 mg d'oestrogènes conjugués (calculés sous forme de sulfate d'oestrone). 



  63 % de la quantité   dôestrogènes   de départ sont ainsi récupérés. 



   EXEMPLE 8. 



   1 gr de chlorhydrate de procaïne dans 10   ml   d'eau est ajouté à 1 litre d'urine de juments gravides non hydrolysée, contenant 180 mg d'oestro- gènes conjugués, calculés sous forme de sulfate sodique d'oestrone et déter- minés par l'essai colorimétrique de Marrian-Kober. Le pH de la solution est ajusté à 6,0 à l'aide d'acide chlorhydrique concentré, puis la solution est soumise à une extraction à l'aide d' 1 litre de chlorure de méthylène. L'ex- trait au chlorure'de méthylène contient 120 mg d'oestrogènes conjugués (calcu- lés sous forme de sulfate sodique   d'oestrone).   Le rendement atteint, dès lors, 67 %. 



   EXEMPLE 9. 



   2,5 gr d'acétate de dicyclohexylamine dans 25   ml   d'eau sont ajou- tés à 1 litre d'urine de juments gravides non hydrolysée (pH = 8,2), contenant 250 mg d'oestrogènes conjugués, calculés sous forme de sulfate sodique d'oes - trone et déterminés par l'essai colorimétrique de Marrian-Kober. La solution est extraite à l'aide de 500 ml de benzène. L'extrait benzénique contient 210 mg d'oestrogènes conjugués (calculés sous forme de sulfate sodique d'oestrone). 



  Le rendement atteint   84   %. 



   EXEMPLE 10. 



   2,5 gr d'acétate de dicyclohexylamine dans 25 ml d'eau sont ajoutés à 1 litre d'urine de juments gravides non hydrolysée (pH = 8,2), contenant 250 mg d'oestrogènes conjugués, calculés sous forme de sulfate sodique d'oestrone et déterminés par l'essai colorimétrique de   Marrian-Kober.   La solution est soumise à une extraction à l'aide de 500 ml de- chloroforme. L'extrait chloro- formique contient 285 mg d'oestrogènes conjugués (calculés sous forme de sul- fate sodique d'oestrone), soit   94%   de la quantité d'oestrogène contenue dans l'urine de départ. 



   Il va de soi que divers changements'et modifications peuvent être apportés aux détails opératoires indiqués ci-dessus, sans que l'on s'écarte de la portée de   l'invention.   

**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.

Claims (1)

1. REVENDICATIONS 1. Procédé pour la préparation d'un extrait thérapeutiquement ac- tif de matière urinaire de cheval daxas lequel on fait réagir une solution aqueuse d'une matière urinaire non hydrolysée de cheval contenant des sub- stances hydrosolubles, mais normalement insolubles dans un solvant organique choisi dans le groupe comprenant les hydrocarbures aromatiques liquides et les hydrocarbures chlorés liquides, avec une base organique azotée capable de réagir avec les oestrogènes conjugués de la matière urinaire,, de façon à for- mer un produit de réaction,, qui est constitué par des sels basiques organiques solubles dans ledit solvant organique, et dans lequel on soumet le mélange de réaction à une extraction à l'aide dudit solvant organique,

   de manière à obte- nir une phase organique contenant les sels basiques organiques de l'extrait, <Desc/Clms Page number 5> ce dernier contenant les sels basiques organiques des conjugats oestrogéni- ques.

   2. Procédé suivant la revendication 1, dans lequel la phase or- ganique contenant l'extrait est séchée, de façon à obtenir un résidu des sels basiques organiques des conjugats oestrogéniques.

   3. Procédé suivant la revendication 1, dans lequel la matière uri- naire non hydrolysée de cheval est celle de juments gravides.

   4. Procédé suivant la revendication 1, dans lequel la réaction est exécutée à un pH inférieur à 9.

   5. Procédé pour la préparation d'un extrait thérapeutiquement ac- tif de matière urinaire de cheval suivant la revendication 1.,-dans lequel le base organique azotée est une base azotée aliphatique.

   6. Procédé pour la préparation d'un extrait thérapeutiquement ac- tif de matière urinaire de cheval suivant la revendication 1, dans lequel la base organique azotée est une base azotée aliphatique cyclique.

   7. Procédé pour la préparation d'un extrait thérapeutiquement ac- tif de matière urinaire de cheval suivant la revendication 1, dans lequel la base organique azotée est une base azotée aromatique.

   8. Procédé pour la préparation d'un extrait thérapeutiquement ac- tif de matière urinaire de cheval suivant la revendication 1, dans lequel la base organique azotée est une base azotée hétérocyclique.

   9. Procédé pour la préparation d'un extrait thérapeutiquement ac- tif de matière urinaire de cheval suivant la revendication 1, dans lequel la base organique azotée est une base azotée hétérocyclique substituée.