BE529315A

BE529315A -

Info

Publication number: BE529315A
Authority: BE

Description


   <Desc/Clms Page number 1> 
 



   On connaît les préparations injectables d'insuline qui contien- nent comme constituant actif de l'insuline zinc-protamine précipitée amor- phe en suspension aqueuse (pH voisin de 7). Les préparations de ce genre, qui sont sur le marché, contiennent environ 2 mg de zinc et ou bien 8,5 ou   12,5   mg de protamine par mille unités d'insuline. Etant donné que la quan- tité de protamine nécessaire pour la précipitation de l'insuline est géné- ralement d'environ 6 à 7 mg par 1000 unités d'insuline, on voit que les préparations auxquelles il est fait allusion contiennent un excès substan- tiel de protamine. Cet excès a été considéré nécessaire jusqu'ici afin d'être certain qu'il n'y ait pas des quantités variables d'insuline pré- sentes à l'état dissout, vu que ceci aboutirait à une variation de l'effet biologique des préparations. 



   Bien que ces préparations ayant un effet s'étendant sur plus de 24 heures aient été utilisées de façon intensive et qu'il ait été pos- sible de réaliser un réglage utile dans de nombreux cas de diabète, on a constaté souvent que l'effet est plus prolongé qu'on le désire, si bien que le niveau de sucre dans le sang des diabétiques devient trop élevé pendant le jour et trop faible pendant la nuit. Dans des cas pareils, on a essayé de modifier l'effet des préparations en y adjoignant de l'insuline à l'état dissous.

   Cette adjonction: a été pratiquée industriellement de façon à ce que les ampoules ou fioles contenant la suspension d'insuline zinc-protamine amorphe contiennent également de l'insuline à l'état dissous, ou encore on introduit l'insuline dissoute dans des ampoules séparées de   façonna   l'administrer avec la seringue d'injection conjointement avec la suspension d'insuline zinc-protamine. Le rapport de mélange le plus communément en usage était de 2 volumes d'insuline dissoute pour un volume d'insuline zinc-protamine, obtenant dans ces conditions un effet allant de 18 à 24 heures. 



   Toutefois, les préparations produites par mélange industriel ne montrent pas la stabilité chimique et biologique nécessaire lorsqu'elles sont entreposées pendant une durée prolongée, tandis que l'adjonction de l'insuline dissoute à la suspension d'insuline zinc-protamine dans la seringue d'injection est trop facilement la cause d'erreurs dans le dosage quand cette opération est exécutée par les patients eux-mêmes. 



   On a alors essayé d'obtenir l'effet modifié souhaité en produisant des suspensions d'insuline zinc-protamine précipitée amorphe sans un excès de protamine mais, de cette fagon, il n'était pas possible d'obtenir des préparations qui demeurent stables pendant une durée suffisante. 



   En d'autres mots, en conformité avec la façon connue de pratiquer dans le domaine de l'insuline, on ne peut utiliser en pratique des préparations d'insuline à base d'insuline précipitée amorphe que lorsqu'elles contiennent en excès de protamine, et ces préparations ont un effet trop prolongé dans de nombreux cas. 



   La présente invention s'appuie sur l'observation que le manque de stabilité des suspensions d'insuline zinc-protamine précipitée amorphe sasans excès de protamine qui ont été produites jusqu'ici est dû au tampon utilisé, à savoir le tampon phosphate, qui a un pouvoir de fixation élevé pour les ions zinc en réaction neutre, et qu'il est décisif pour la stabilité des suspensions que des ions zinc libres soient   présent s,   étant donné que ces ions suppriment la solubilité de l'insuline en réaction neutre.

   Si l'obtention des préparations se fait en l'absence de substances qui, dans les conditions de réaction, sont capables de prévenir la réaction entre l'insuline et le zinc, par exemple en formant des composés de zinc légèrement solubles et/ou complexes, on obtient des préparations tout   à   fait stables sans faire usage d'un excès de protamine, pour autant que la quantité de zinc employée soit suffisante pour supprimer la solubilité de l'insuline, ce qui veut dire numériquement que la quantité de zinc doit dépasser 1/4 de mg par 1000 unités internationales d'insuline. 

 <Desc/Clms Page number 2> 

 



   Le procédé de l'invention est du type dans lequel la protamine, l'insuline et un composé de zinc, de même qu'éventuellement des substances auxiliaires telles que des substances tampons, un composé isotonique, un agent de conservation et des substances correctrices de pH, sont mises ensemble dans un milieux aqueux pour former une suspension stérile d'insuline zinc-protamine précipitée amorphe, suspension qui a une valeur de pH de 6 à 8, de préférence voisine de 7.

   Le trait caractéristique de l'invention réside dans le fait qu'on emploie de la protamine dans une proportion qui ne dépasse pas la quantité nécessaire   à   la précipitation de l'insuline de préférence 2 à 5 mg par 1000 unités internationales d'insuline, et dans le fait qu'on utilise des substances auxiliaires qui, dans les conditions de réaction employées,ne sont pas capables de former des composés de zinc légèrement solubles et/ou complexes empêchant la suppression de la solubilité de l'insuline en réaction neutre, la quantité de zinc employée étant supérieure à 1/4 mg par 1000 unités internationales d'insuline. 



   Suivant l'invention, il convient d'utiliser une addition de zinc de 1 à 5 mg par 1000 unités internationales d'insuline, mais on peut toutefois utiliser également des additions de zinc beaucoup plus considérables. Ainsi, on peut très bien employer une addition de zinc de 20 mg ou plus par 1000 unités internationales d'insuline pourvu que la quantité de zinc ajoutée ne soit pas grande au point de déterminer des réactions indésirables, notamment des douleurs à l'emplacement de l'injection. 



   Les tampons acétate, barbital, borate et maléate conviennent bien au cas où on effectue une addition de substances tampons. D'autre part, le tampon citrate ne convient pas étant donné que les ions citrate forment des composés complexes avec le zinc. 



   Grâce à la présente invention, il devient possible non seulement, partant d'insuline zinc-protamine précipitée amorphe, de produire des préparations avec l'effet de 18 à 24 heures qui ont fait l'objet de recherches pendant de si nombreuses années, mais il devient également possible de graduer l'effet vers le bas à volonté en réduisant la teneur en protamine des préparations, sans affecter leur stabilité vu que le zinc présent assurera la stabilité. Rien que pour cette raison, la présente invention implique un progrès considérable parce qu'elle offre la possibilité de réaliser une application clinique plus étendue des préparations d'insuline basées sur l'insuline zinc-protamine précipitée amorphe, recherchée vainement depuis si longtemps. 



   Le procédé selon l'invention peut s'exécuter en mélangeant ensemble les matières premières utilisées (insuline amorphe, protamine, composé de zinc, eau distillée et, au besoin, tampon, composé isotonique et agent de conservation) dans un ordre ou une suite quelconque et, si c'est nécessaire, en ajustant alors la valeur du pH du mélange résultant à   6-8,   de préférence au voisinage de 7, en opérant dans des conditions aseptiques lorsque les matières premières se présentent sous une forme stérile, par exemple sous la forme de solutions stériles, tandis qu'on   s'apure,   au cas où en exécutant le procédé on obtient un mélange non stérile contenant de l'insuline, que l'insuline se trouve à l'état dissous, en introduisant un processus de stérilisation, par exemple une filtration de germes,

   avant de précipiter l'insuline dans des conditions aseptiques, et en faisant usage par la suite de substances additionnelles quelconques sous une forme stérile. 



   Comme composé de zinc on peut utiliser un sel minéral ou organique comme le chlorure, le sulfate, le nitrate ou l'acétate, l'hydroxyde ou l'oxyde. 



   Comme exemples de protamines appropriées on a la salmidrine, la   clupéine,   la scombrine, la sturine, la thymine, la cyprinine et la cycloptérine, qui sont utilisées de préférence sous la forme de solutions 

 <Desc/Clms Page number 3> 

 aqueuses de sels avec des acides minéraux ou organiques. 



   Au lieu d'insuline amorphe, on peut utiliser de l'insuline cristalline comme matière première, mais une condition absolue en l'oc- curence est que l'insuline cristalline soit mise en solution dans une des phases du procédé. 



   D'autre part, il est des plus approprié d'employer l'insuline sous la forme d'une solution acide d'insuline amorphe ou cristalline pour que la précipitation de l'insuline amorphe se produise au cours de la pré- paration elle-même, créant ainsi les propriétés physiques les plus favora- bles de précipitation. 



   Suivant une forme préférée du procédé, on mélange une solution acide d'insuline à une solution des autres matières premières, la substance tampon exceptée, après quoi on effectua une filtration de germes et ensuite, dans des conditions aseptiques, on ajoute une solution stérilisée de la sub- stance tampon conjointement avec des substances régulatrices de pH, lorsqu'il y en a, en vue d'obtenir une valeur de pH entre 6 et 8, de préférence au voisinage de 7. 



   L'insuline amorphe est à même de se combiner avec des quantités variables de zinc. Par conséquent, il est également possible lorsqu'on exécute le procédé suivant l'invention d'employer de l'insuline amorphe avec une teneur en zinc telle que la teneur en zinc de la suspension finale provienne entièrement ou partiellement de l'insuline amorphe employée. 



   Au lieu d'insuline amorphe, ayant une teneur en zinc telle que la teneur en zinc de la suspension finale provienne entièrement ou partiellement de l'insuline amorphe utilisée, on peut utiliser de l'insuline cristalline avec une teneur correspondante en zinc mais, en l'occurence, l'insuline cristalline doit se présenter à l'état dissous ou être mise en solution au cours de la préparation en vue de la précipiter par la suite à l'état amorphe. 



   En vue de produire l'isotonicité, on peut employer des substances telles que le glucose, le chlorure de sodium et le glycérol. Comme exemples d'agents de conservation appropriés on a le p-oxybenzoate de méthyle, le p-oxybenzoate de propyle et le phényl-mercuri-acétate. 



   En vue d'expliquer plus en détail le procédé selon l'invention on se réfère aux exemples ci-dessous montrant différents modes de réalisation, ceux-ci ne limitant toutefois pas l'invention. 



   Dans l'exécution de l'invention, on peut utiliser les stocksolutions stériles suivantes : Stock-solution 1 : On dissout 2,2g d'insuline recristallisée dans 25 cm3 d'acide chlorhydrique 0,In et on ajoute de l'eau distillée pour obtenir un volume de 125 cm3. 



    Stock-solution  2 : 
On dissout 500 mg de sulfate de protamine dans de l'eau jusqu'à un volume de 100 on?. 



  Stock-solution 3 : 
On dissout 100 mg de chlorhydrate de   surf eu   dans de l'eau jusqu'à un volume de 100 cm3, Stock-solution 4 :
A 20 cm3 d'une solution aqueuse de chlorure de zinc contenant 1% de zinc on ajoute de l'eau distillée pour obtenir un volume de 125 cm3. 

 <Desc/Clms Page number 4> 

 



  Stock-solution   5   
A 10 cm3 d'une solution aqueuse de chlorure de nickel contenant 1% de nickel on ajoute de l'eau distillée pour obtenir un volume de 100 cm3, Stock-solution 6 : 
On dissout 1,36 g d'acétate de sodium, cristallisé avec 3 molé- cules d'eau, dans de l'eau distillée pour obtenir un volume de 100 cm3. 



    Stock-solution   7 : 
On dissout 1, 16 g d'acide maléique dans de l'eau distillée pour obtenir un volume de 100 cm3. 



  Stock-solution 8 : 
On dissout   2,06   g de barbital de sodium dans de l'eau distillée pour obtenir un volume de 100 cm3. 



  Stock-solution 9 : 
On dissout 0,96 g de borax dans de l'eau distillée pour obtenir un volume de 100 cm3. exemple 1. 



   On mélange 1,3 cm3 de glycérol avec 0,5 cm3   d'une   solution à 25% de p-oxybenzoate de méthyle dans de l'éthanol, puis on ajoute une quantité d'eau distillée de 50 cm3. Au mélange ainsi obtenu on ajoute, après filtration stérile, 10 cm3 de stock-solution   (1),   1 cm3 de stock- solution (2), 2,5 cm3 de stock-solution   (4)   et 10 cm3 de stock-solution (6), après quoi on ajoute   3,0   cm3 de NaOH 0,In stérile et on complète le mélange avec de l'eau distillée stérile jusqu'à un volume de 100 cm3. 



   Par l'addition de NaOH, l'insuline zinc-protamine est précipitée à l'état amorphe et la suspension obtenue montrera une valeur de PH de 7. 



  Elle contient environ 1 mg de zinc et 1,25 mg de protamine par 1000 unités internationales d'insuline. 



  Exemple 2. 



   Le procédé est le même que dans l'exemple 1, mais toutefois on utilise une quantité double des stock-solutions (2) et   (4),   le résultat étant que la suspension produite contiendra environ 2 mg de zinc et 2,5 mg de protamine par 1000 unités internationales d'insuline. 



  Exemple 3. 



   Le procédé est le même que dans l'exemple 2, mais on emploie toutefois le double de la quantité (4 cm3) de stock-solution (2), le ré- sultat étant que la suspension finale contiendra environ 2 mg de zinc et 5 mg de protamine par 1000 unités internationales d'insuline. 



  Exemple 4.    



  Le procédé est le même que dans l'exemple 3, sauf qu'on emploie 10 cm3 de stock-solution (5) à la place des 5 cm3 de stock-solution (4). La   suspension finale contiendra alors 2,5 mg de nickel et 5 mg de protamine par 1000 unités internationales d'insuline.    



  Exemple 5. 



  Le procédé est le même que dans l'exemple 3, sauf qu'on emploie 20 cm3 au lieu de 5 cm3 de stock-solution (4). La suspension finale contien-   dra alors 8 mg de zinc et 5 mg de protamine par 1000 unités internationales d'insuline. 



  Exemple 6. 



   Le procédé est le même que dans l'exemple 3, sauf qu'on emploie 6 cm3 de stock-solution (2). La suspension finale contiendra alors 2 mg 

 <Desc/Clms Page number 5> 

 de zinc et 7,5 mg de protamine par 1000 unités internationales d'insuline. 



   Exemple   7.   



   Le procédé est le même que dans l'exemple 6, sauf qu'on emploie 
20 cm3 de stock-solution (3) au lieu de 6 cm3 de stock-solution   (2).  La suspension finale contiendra alors environ 2mg de zinc st 5 mg de surfen par 1000 unités internationales d'insuline   Exemple   8. 



   On mélange 1,3 cm3 de glycérol avec 0,5 cm3 d'une solution à 
25% de   p-oxybenzoate   de méthyle dans de l'éthanol, puis on ajoute 50 cm3 d'eau distillée. Au mélange ainsi obtenu on ajoute, après filtration sté- rile,10 cm3 de   stock-solution   (1), 5 cm3 de stock-solution (4), 4 cm3 de stock-solution (2) et 10 cm3 de stock-solution (7) après quoi on ajoute   21,5   cm3 de NaOH 0,In stérile, puis on ctilue le mélange avec de l'eau jus- qu'à un volume de 100 cm3 La suspension obtenue d'insuline zinc-protamine amorphe à une valeur de pH de 7 et elle contient environ 2 mg de zinc et 5 mg de protamine par 1000 unités internationales d'insuline. 



    Exemple 9.    



   Le procédé est le même que dans l'exemple   8,   sauf qu'on utilise   10 cm3 de stock-solution (8) au lieu de 10 cm3 de sock-solutio (7), en outre on utilise 4,5 cm de HCI 0,1n stérile au lieu de 21,4 cm3 de NaOH   0,1N. La suspension obtenue contiendra 2 mg de zinc et 5 mg de protamine par 1000 unités internationales d'insuline. 



  Exemple 10. 



   Le procédé est le même que dans l'exemple 9, sauf qu'on em- ploie 10 cm3 de stock-solution (9) au lieu de 10 cm3 de stock-solution (8) et qu'en outre on utilise 0,9 cm3 de HCI 0,1N stérile au lieu de 4,5 cm3 
Le principe de la présente invention pour obtenir la stabili- sation des préparations d'insuline et la suppression de la solubilité de l'insuline en réaction neutre au moyen de zinc peut s'employer également avec les préparations d'insuline dans la production desquelles on a rem- placé la protamine par des substances ayant un effet similaire à celui de la protamine.

   Par conséquent, il rentre dans le cadre de l'invention d'u- tiliser des substances comme l'histone, le surfen   (bis-2-méthyl-4-aminoqui-   nolyl-6-carbaide) ou le rivanol   (2-éthoxy-6,9-diamino-acridine)   au lieu de protamine ou conjointement avec cette dernière. 



   Finalement, il y a lieu de noter que suivant l'invention on peut employer un composé de cadmium ou de cobalt, nickel, cuivre, manganè- se ou fer sous la forme bivalente, ou un mélange de ces composés, à la place du composé de zinc ou conjointement avec ce dernier. 



    REVENDICATIONS.   

**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.

Claims

1. Procédé de production de préparations injectables d'insuli- ne avec effet prolongé, contenant comme constituant actif principal de l'in- suline zinc-protamine précipitée amorphe en suspension aqueuse, procédé dans lequel la protamine, l'insuline et un composé de zinc, conjointement éventuellement avec des substances auxiliaires telles qu'une substance tam- pon, un composé isotonique, un agent de conservation et:

des substances correctrices de pH, sont introduites ensebbs dans an milieu aqueux en vue de former une suspension stérile d'insuline zinc-protamine précipitée amor- phe ayant une valeur de pH de 6 à 8, de préférence voisine de 7, caractérisé en ce qu'on emploie la protamine en quantité ne dépassant pas la quantité nécessaire pour précipiter l'insuline, de préférence 2 à 5 mg par 1000 uni- tés internationales d'insuline, et en ce qu'on fait usage de substances auxiliaires qui, dans les conditions de réaction employées,

ne sont pas ca- pables de former des composés de zinc légèrement solubles et/ou complexes <Desc/Clms Page number 6> empêchant la suppression par le zinc de la solubilité de l'insuline en réaction neutre la quanti Lé de zinc employée étant supérieure à 1/4 de mg par 1000 unités internationales d'insuline.

2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce quela quantité de zinc employée est de là 5 mg, de préférence 1 à 2 mg de zinc par 1000 unités internationales d'insuline.

3. Procèdè suivant les revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'on mélange entre elles les matières premières. employées (insuline amorphe, protamine, composé de zinc.- eau distillée et, au besoin, substance tampon, composé isotonique et agent de conservation) dans- un ordre ou une suite quelconque et en ce que si c'est nécessaire, on ajuste- la. valeur du pH du mélange résultant à 6-8, de préférence au.

voisinage de 7, en ce qu'on opère dans des conditions- aseptiques lorsque les mnatières premières se présentent sous la forme stérile, par exemple sous la forme-de solutions stériles, tandis que l'on s'assure,, au cas où en. exécutant le procédé on obtient un mélange non stérile d'insuline, que l'insuline est présente à l'état dissous, en ce qu'on introduit une opération de stérilisation, par exemple une filtration de germes,- avant précipitation de l'insuline dans des conditions aseptiques, et en ce qu'on utilise par la suite des substances additionnelles quelconques à l'état stérile.

4. Procédé-suivant la revendication 3, caractérisé en ce qu'au lieu d'insuline amorphe, on emploie de l'insuline :cristalline qui a été mise en solution dans une des phases du procédé.

5. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce qu'on utilise une solution acide d'insuline amorphe ou cristalline.

6. Procédé suivant les revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'on mélange une solution acide d'insuline avec une solution des autres matières premières, la substance tampon exceptée, $près- quoi on entreprend une filtration des germes et, dans des conditions aseptiques, on ajoute alors une solution stérilisée de la substance tampon conjointement avec des substances correctrices de pH, si c'est nécessaire, en vue d'obtenir une valeur de pH entre 6 et 8, de préférence au voisinage de 7.

7. Procédé suivant les revendications 1 à6, caractérisé par l'emploi d'insuline amorphe ayant une teneur telle en métaux mentionnés que la teneur en ces derniers de la suspension finale provient entièrement ou partiellement de l'insuline amorphe employée.

8. Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce qu'au lieu d'insuline amorphe, on emploie de l'insuline cristalline qui a été convertie à l'état amorphe par dissolution et précipitation subséquente.

9. Procédé suivant les revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'on utilise, au lieu de protamine- ou conjointement avec celle-ci, des substances telles que l'histone, le- surfen ou le rivanol, qui ont.un effet similaire à celui de la protamine.

10. Procédé suivant les revendications 1 à 9, caractérisé en ce qu'au lieu du composé de zinc ou conjointement avec celui-ci on utilise un composé de cadmium ou de cobalt,nickel, cuivre, manganèse ou fer sous la forme bivalente, ou un mélange de ces composés.

11. Procédé pour produire des préparations injectables d'insuline avec effet prolongé, principalement comme décrit dans le mémoire descriptif en se référant particulièrement aux exemples.